KR20160038144A - 우산나물을 함유하는 기능성 막걸리 - Google Patents

우산나물을 함유하는 기능성 막걸리 Download PDF

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유현희
조홍연
원영걸
권영택
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고려대학교 산학협력단
영양군
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Abstract

본 발명은 우산나물을 함유하는 기능성 막걸리에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 Rice koji를 이용하여 전통 누룩을 제조하고 우산나물 추출물을 막걸리 제조 과정 중 1차 담금 시 적용하여 막걸리의 항산화 활성을 증대시킨 기능성 막걸리에 관한 것이다.

Description

우산나물을 함유하는 기능성 막걸리{Functional Makgeolli added with Syneilesis Palmata Maxim}
본 발명은 우산나물을 함유하는 항산화 조성물 및 우산나물을 함유하는 기능성 막걸리에 관한 것이다.
막걸리는 한국의 역사 깊은 전통 술로, 빛깔이 쌀뜨물처럼 희고 탁하며, 알코올 도수가 적은 6~7도의 술이다. 탁주(濁酒), 농주(農酒), 재주, 회주라고도 한다. 그러나, 최근 막걸리의 국내 소비뿐만 아니라 해외 수출도 크게 늘어나고 있는 상황에서 우리 술인 막걸리 제조 방법이 한국적이지 않다는 지적이 제기되고 있다. 오늘날, 약·탁주 제조에 사용하는 발효제는 우리 고유의 전통 누룩임에도 불구하고 일본에서 개발한 입국과 양조용 종균을 수입하여 우리 술을 제조하고 있는 것이 오늘날의 현실이다.
일반적으로 입국으로 제조한 탁주는 독특한 향이 없고, 아미노산의 함량이 낮으며, 입국에서 오는 유기산의 신맛이 지나치게 강하여 전통 누룩으로 제조하였을 때와 같은 조화로운 향미를 나타내지는 못하는 것으로 평가되고 있다. 반면에 우리 전통 누룩은 밀을 주원료로 성형하여 저온에서 장기간에 걸쳐 다양한 미생물에 의해 발효 과정을 거치면, 각종 전분 분해효소가 풍부하여 효율적인 당화를 유도하는 효소제로서의 역할뿐 아니라 누룩에 존재하는 효모가 알코올 발효제의 역할을 수행하므로 주로 병행복 발효식 한국 전통 양조주에 향과 맛을 제공한다.
대부분의 생물은 생명 유지에 산소를 필요로 하며, 에너지 대사 과정 및 면역 반응 등 산소를 이용하는 반응에서 활성산소종(Reactive oxygen species, ROS)이 생성되며, 외부의 유해 환경에 의해서도 유발된다. 이 활성산소종은 반응성이 매우 크기 때문에 체내에서 DNA 변성, 세포막 지질의 과산화, 세포 구조를 이루는 단백질 및 효소 등의 단백질 변성, 신호전달 변화 등을 초래하여 건 강에 해로운 영향을 누적시키는 일련의 반응을 일으키게 된다. 또한, 내인성 노화에 따른 항산화 시스템의 노쇠와 지속적인 유해 자극에 의한 활성 산소의 집적은 이러한 균형을 깨뜨려 건강을 해치게 되며 노화를 촉진시키고, 각종 암, 피부질환, 피부암, 동맥경화 및 혈전과 같은 각종 질병을 유발하기도 한다. 그러나, 이러한 유해한 반응들은 생체 내에 존재하는 항산화 물질(uric acid, vit-C, vit-E 등) 또는 항산화 효소(Glutathione peroxidase, superoxide dismutase, catalase 등)에 의해 정교하게 그 항상성을 유지하도록 되어 있다. 따라서 근래에는 보다 인체에 안전하고, 항산화력이 뛰어난 항산화제를 개발하기 위한 많은 연구가 진행되고 있다.
우산나물(Syneilesis palmata Maxim.)은 우리나라에서 식용하고 있는 산채류 중 하나로, 국화과(Compositae) 의 다년생 초본으로 7~9월에 개화하며 10~11월에 종자가 결실된다. 한방에서는 우산나물과 애기우산나물의 전초를 토아산(兎兒傘)이라 하여 거풍(祛風), 활 혈(活血) 작용이 있어 사지마비, 관절염, 요통, 타박상, 월경불리와 월경통 및 종기 등의 치료제로 사용하였다. 우산나물 메탄올 추출물이 아스피린보다 1.5 배 높은 트롬빈(thrombin) 저해율을 나타낸다는 보고가 있고(비특허문헌 1), 우산나물로부터 분리 동정한 세스퀴테르펜(sesquiterpenes)의 항암 효과(비특허문헌 2) 등의 연구 보고와 함께 다양한 기능성 식품 소재로의 연구가 이루어지고 있다.
Kwon CS, Kwon YS, Kim YS, Kwon GS, Jin UG, Ryu GC, Sohn HY. 2004. Inhibitory activities of edible and medicinal herbs against human thrombin. J Life Sci 14: 509-513. Lee SO, Lee HJ, Hee MH, Im HG, Lee IS. 2005. Total polyphenol contents and antioxidant activities of methanol extracts from vegetables produced in Ullung island. Korean J Food Sci Technol 37: 233-240.
이에, 본 발명자들은 우리나라 막걸리의 전통을 지키면서 건강 증진을 도모하기 위한 새로운 기능성 막걸리를 연구하던 중, 우리나라에서 식용하고 있는 산채류 중 하나인 우산나물 추출물의 항산화 효과를 확인하였으며, 우산나물 추출물을 첨가하여 항산화 활성을 가지는 기능성 막걸리를 제조함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명은 우산나물 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 조성물 및 우산나물 추출물을 유효성분으로 포함하는 기능성 막걸리를 제공하는데 그 목적이 있다.
상기 과제를 해결하기 위한 수단으로서, 본 발명은 우산나물 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 조성물을 제공한다.
상기 과제를 해결하기 위한 다른 수단으로서, 본 발명은 우산나물 추출물을 포함하는 기능성 막걸리를 제공한다.
본 발명에 따른 항산화 조성물은 하기 시험예에서 확인할 수 있는 바와 같이, 우산나물 추출물은 DPPH 라디칼과 ABTS 라디칼 소거능 및 환원력과 세포 내 활성 산소 소거능에서 우수한 항산화능이 인정될 뿐만 아니라 예부터 식용으로 섭취해온 천연 소재이기 때문에 거부감과 부작용이 없고 안전성이 매우 높아 경제성과 안전성 측면에서 그 산업적 효과가 매우 크다 할 것이다.
또한, 우리나라 전통주인 막걸리에 자유라디칼의 소거제(항산화제)로서 우산나 물 추출물을 첨가하여 제조함으로써 건강 증진 및 노화 방지에 커다란 효과가 있는 식품을 개발할 수 있다.
도 1은 우산나물 첨가 막걸리의 제조 과정을 나타낸 것이다.
도 2는 우산나물 용매별 추출물의 DPPH 라디칼 소거능을 나타낸 것이다.
도 3은 우산나물 용매별 추출물의 ABTS 라디칼 소거능을 나타낸 것이다.
도 4는 우산나물 용매별 추출물의 환원력을 나타낸 것이다.
도 5는 우산나물 용매별 추출물의 HepG2 세포에서 H2O2 유도 세포 내 활성산소 소거능을 나타낸 것이다.
도 6은 우산나물 첨가 막걸리의 용매별 추출물의 DPPH 라디칼 소거능을 나타낸 것이다.
도 7은 우산나물 첨가 막걸리의 용매별 추출물의 ABTS 라디칼 소거능을 나타낸 것이다.
도 8은 우산나물 첨가 막걸리의 용매별 추출물의 환원력을 나타낸 것이다.
도 9는 우산나물 첨가 막걸리의 용매별 추출물의 HepG2 세포에서 H2O2 유도 세포 내 활성산소 소거능을 나타낸 것이다.
본 발명은 우산나물 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 구현예에서는 우산나물 추출물이 ABTS 라디칼 소거능, DPPH 라디칼 소거능에서 우수한 효과를 나타내었으며, FRAP 분석을 통해 우수한 환원력을 확인하였고, 세포 내 활성 산소 소거능 또한 우수함을 확인하였다.
본 발명에서 사용된 우산나물 추출물의 제조를 위해 사용되는 추출 용매는 물, 유기용매 또는 이들의 혼합물로부터 선택되는 용매일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 유기용매는 탄소수 1 내지 5개의 알코올, 에틸아세테이트, 아세톤 등의 극성용매와 에테르, 클로로포름, 벤젠, 헥산, 디클로로메탄 등의 비극성용매 또는 이들의 혼합 용매일 수 있다. 예를 들어, 상기 탄소수 1 내지 5개의 알코올은 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 이소 프로판올 등으로부터 선택될 수 있다.
본 발명에서 사용된 우산나물은 우산나물의 지상부(줄기, 잎) 및/또는 뿌리를 포함한다.
하기 실시예에서 확인할 수 있는 바와 같이, 우산나물 추출물은 항산화 효과를 나타내므로 건강 증진 및/또는 노화 방지를 위한 의약품 또는 건강식품 등의 유효성분으로 사용할 수 있다.
또한, 우산나물 추출물을 항산화 약학 조성물로 사용할 경우 약학적으로 허용 가능한 담체를 더 포함할 수 있다.
약학적으로 허용되는 담체는 완충액, 주사용 멸균수, 일반 식염수 또는 인산염 완충 식염수, 슈크로스, 히스티딘, 또는 폴리솔베이트 등과 같은 여러 성분을 함유할 수 있다.
상기 약학 조성물은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있으며, 일반 의약품 제제의 형태, 예를 들어, 임상 투여 시 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제 또는 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다.
경구 투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제 또는 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 약학적 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(Calcium carbonate), 수크로스(Sucrose), 락토오스(Lactose) 또는 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다.
단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물 또는 리퀴드 파라핀 이외에 여러가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제 또는 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제 또는 좌제가 포함된다. 비수성용제 또는 현탁용제로는 프로필렌 글리콜(Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜 또는 올리브 오일과 같은 식물성 기름; 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지 또는 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
상기 약학 조성물은 유효량의 우산나물 추출물을 포함할 때 바람직한 항산화 효과를 제공할 수 있다. 본 발명에 있어서, '유효량'이라 함은 항산화 효과를 나타낼 수 있는 유효성분(우산나물 추출물)의 양을 의미한다. 본 발명의 조성물에 포함되는 우산나물 추출물의 유효량은 조성물이 제품화되는 형태, 상기 추출물이 피검체에 적용되는 방법 또는 적용되는 시간 등에 따라 달라질 것이다. 일일 투여량은 우산나물 추출물의 양을 기준으로 0.1 내지 100 ㎎/㎏이고, 바람직하게는 30 내지 80 ㎎/㎏이고, 더욱 바람직하게는 50 내지 60 mg/kg이며, 하루 1 ∼ 6 회 투여될 수 있다.
본 발명의 한 구체예에서, 상기 조성물은 우산나물 추출물을 전체 조성물 중량에 대하여 0.01 중량% 내지 30 중량%(바람직하게는 0.1 중량% 내지 20 중량%)로 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물이 우산나물 추출물을 0.01 중량% 미만으로 포함할 경우에는 충분한 항산화 효과를 기대할 수 없고, 30 중량%를 초과하여 포함할 경우에는 알러지 등 원치 않는 반응이 발생하거나 안전성에 문제가 있을 수 있으므로 이를 방지하기 위한 것이다.
본 발명은, 또한 우산나물 추출물을 포함하는 기능성 막걸리에 관한 것이다.
먼저, 막걸리의 제조 과정을 살펴보면, 1) 곡류를 증자하여 식히는 단계; 2) 배양 효모와 24∼60시간 배양시켜 rice koji를 제조하는 단계; 3) 곡류, 2)의 rice koji, 및 물을 혼합하여 10~20일간 배양하여 누룩을 제조하는 단계; 4) 곡류를 증자하여 식힌 후, 물, 누룩, 우산나물 추출물 및 효모를 5~10일간 발효시켜 1단 담금하는 단계; 및 5) 곡류를 증자하여 식힌 후, 물을 첨가하여 2차 발효시켜 2단 담금하는 단계를 포함한다.
상기 곡류는 소맥분, 쌀 및 옥수수가루 등을 사용할 수 있다.
상기 우산나물 추출물의 함량은 막걸리 전체 중량에 대하여 0.0001∼0.5 중량%이며, 바람직하게는 0.001∼0.01 중량%이다.
본 발명에서 사용하는 우산나물 추출물은 상기 항산화 조성물에서 사용된 우산나물 추출물과 동일하다.
본 발명에서는 전통적인 막걸리에 항산화 효과를 가지는 우산나물 추출물을 부가하여 막걸리 음용 시 우산나물 추출물에 함유된 약리성분을 함께 섭취할 수 있도록 하여 항산화 또는 노화 방지 효과를 가짐으로써 소비자의 건강 증진을 도모하고자 하였다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 우산나물 메탄올 100% 추출물 제조
우산나물(경북 영양군청) 지상부(줄기, 잎) 및/또는 뿌리를 포함하여 세척, Blanching 및 분쇄 후 50g 무게를 재어 둥근 플라스크에 메탄올 100% 500 ml와 함께 70℃에서 6시간 환류 추출하였다. 여과포로 여과하고 잔사를 감압 농축한 후 건조하여 추출물을 얻었다[도 1].
건조된 추출물을 0.1 mg/ml의 최종 농도로 하여 실험에 적용하였다.
실시예 2: 우산나물 메탄올 50% 추출물 제조
우산나물(경북 영양군청) 지상부(줄기, 잎) 및/또는 뿌리를 포함하여 세척, Blanching 및 분쇄 후 50g 무게를 재어 둥근 플라스크에 메탄올 50% 500 ml와 함께 70℃에서 6시간 환류 추출하였다. 여과포로 여과하고 잔사를 감압 농축한 후 건조하여 추출물을 얻었다[도 1].
건조된 추출물을 0.1 mg/ml의 최종 농도로 하여 실험에 적용하였다.
실시예 3: 우산나물 에탄올 100% 추출물 제조
우산나물(경북 영양군청) 지상부(줄기, 잎) 및/또는 뿌리를 포함하여 세척, Blanching 및 분쇄 후 50g 무게를 재어 둥근 플라스크에 에탄올 100% 500 ml와 함께 70℃에서 6시간 환류 추출하였다. 여과포로 여과하고 잔사를 감압 농축한 후 건조하여 추출물을 얻었다[도 1].
건조된 추출물을 0.1 mg/ml의 최종 농도로 하여 실험에 적용하였다.
실시예 4: 우산나물 에탄올 50% 추출물 제조
우산나물(경북 영양군청) 지상부(줄기, 잎) 및/또는 뿌리를 포함하여 세척, Blanching 및 분쇄 후 50g 무게를 재어 둥근 플라스크에 에탄올 50% 500 ml와 함께 70℃에서 6시간 환류 추출하였다. 여과포로 여과하고 잔사를 감압 농축한 후 건조하여 추출물을 얻었다[도 1].
건조된 추출물을 0.1 mg/ml의 최종 농도로 하여 실험에 적용하였다.
실시예 5: 우산나물 열수 추출물 제조
우산나물(경북 영양군청) 지상부(줄기, 잎) 및/또는 뿌리를 포함하여 세척, Blanching 및 분쇄 후 50g 무게를 재어 둥근 플라스크에 2차 증류수 500 ml와 함께 70℃에서 6시간 환류 추출하였다. 여과포로 여과하고 잔사를 감압 농축한 후 건조하여 추출물을 얻었다[도 1].
건조된 추출물을 0.1 mg/ml의 최종 농도로 하여 실험에 적용하였다.
실험예 1: 우산나물 추출물의 DPPH 라디칼 소거능 확인
2,2-디페닐-1-피크릴하이드라질(2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl, DPPH) 용액 900 ㎕와 0.1 mg/ml의 농도를 가지는 우산나물 추출물(실시예 1 내지 5) 100 ㎕을 혼합한 후 상온에서 10분간 반응시켜 495 nm에서 흡광도(Absorbance, A)를 측정하였다.
각 시료의 라디칼 소거능은 하기 수학식 1에 의해 계산하여 백분율로 나타내었다.
[수학식 1]
Figure pat00001
그 결과, 양성 대조군으로 사용된 vit-C는 0.005 mg/mL에서 51%의 DPPH 라디칼 소거능을 나타내었고, 우산나물 메탄올 100% 추출물, 우산나물 메탄올 50% 추출물, 우산나물 에탄올 100% 추출물, 우산나물 에탄올 50% 추출물, 우산나물 열수 추출물이 각각 0.1 mg/mL에서 7%, 37%, 47%, 25%, 22%의 DPPH 라디칼 소거능을 확인하였다[도 2 참조].
실험예 2: 우산나물 추출물의 ABTS 라디칼 소거능 확인
2.5 mM ABTs2-[2,2’-azino-bis(3-ethylbenzthiazolin-6-sulfonicacid)diammonium salt]와 1.0 mM AAPH[2,2’-azobis-(2-amidinopropan)HCl]을 PBS에 첨가 후 70℃ 수조(water bath)에서 30분간 반응하고 여과하여 ABTs 용액을 제조하였다.
ABTs 용액 900 ㎕와 0.1 mg/ml의 농도를 가지는 우산나물 추출물 100 ㎕를 37℃에서 10분 반응한 후 734 nm에서 흡광도(Absorbance, A)를 측정하였다.
각 시료의 라디칼 소거능은 하기 수학식 2에 의하여 백분율로 나타내었다.
[수학식 2]
Figure pat00002
그 결과, 양성 대조군으로 사용된 vit-C는 0.005 mg/mL에서 56%의 DPPH 라디칼 소거능을 나타내었고, 우산나물 메탄올 100% 추출물, 우산나물 메탄올 50% 추출물, 우산나물 에탄올 100% 추출물, 우산나물 에탄올 50% 추출물, 우산나물 열수 추출물이 각각 0.1 mg/mL에서 51%, 52%, 55%, 44%, 29%의 DPPH 라디칼 소거능을 확인하였다[도 3 참조].
실험예 3: 우산나물 추출물의 환원력 확인
소듐 아세테이트 버퍼(pH 3.6), 10 mM TPTZ(2,4,6-tripyridyltriazine), 12 mM 염화제2철(ferric chloride)을 1:1:10(v/v)의 비율로 혼합하여 FRAP 용액을 제조하였다.
0.1 mg/ml의 농도를 가지는 우산나물 추출물 100 ㎕와 FRAP 용액 900 ㎕를 혼합하여 37℃에서 5분간 반응시킨 후 593 nm에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 양성대조군인 vit-C 0.005 mg/mL에서 0.309의 환원력을 나타내었고, 우산나물 메탄올 100%, 우산나물 메탄올 50%, 우산나물 에탄올 100%, 우산나물 에탄올 50%, 우산나물 열수 추출물이 0.1 mg/mL에서 각각 0.324, 0.48, 0.655, 0.365, 0.306의 환원력을 나타내었다[도 4 참조].
실험예 4: 우산나물 추출물의 H 2 O 2 로 유도된 세포 내 활성산소 소거능 확인
HepG2 세포를 96 웰 플레이트에 5x104 cell/well 농도로 seeding한 후 24시간 배양하였다. 100 ㎕의 새로운 배지로 교체한 후, 0.1 mg/ml의 농도를 가지는 우산나물 추출물 20 ㎕를 첨가하고 2시간 동안 배양하였다. 40 ㎕의 400 μM H2O2를 첨가하고 2시간 동안 배양한 후, 40 ㎕의 250 μM DCFH-DA(2',7'-dichlorofluorescin diacetate) 용액을 첨가하여 1시간 배양한 다음, 마이크로플레이트 리더(microplate reader)를 이용하여 excitation 488 nm, emission 530 nm에서 형광도(Fluorescence, F)를 측정하였다.
그 결과는 우산나물 추출물 대신 증류수를 첨가한 대조군(control)에 대한 백분율로 나타내었다.
[수학식 3]
Figure pat00003
그 결과, 양성 대조군으로 사용된 vit-C는 0.1 mg/mL 농도에서 세포 내 활성산소를 64% 감소시켰다. 우산나물 메탄올 100% 추출물, 우산나물 메탄올 50% 추출물, 우산나물 에탄올 100% 추출물, 우산나물 에탄올 50% 추출물, 우산나물 열수 추출물의 경우, 0.1 mg/mL 농도에서 각각 32%, 22%, 41%, 9%, 18%의 세포 내 활성산소 소거 활성을 나타내었다[도 5 참조].
제조예 1: Rice koji 제조
쌀(충남 부여군 규암면 합송리 1178-8) 150 g 무게를 재고 씻은 후 1시간 침수하고, 건져서 물을 빼고 찜기(Philips HD-9120)에 1시간 동안 증자하였다. 식힌 후에 무균적으로 1L 삼각 플라스크에 넣고 Aspergillus oryzae KCCM 11530을 0.375 g(원료 량의 0.25%) 접종한 후에 곰팡이의 증식을 균일하게 하기 위하여 배양물을 흔들어 고루 섞고 48시간 37℃ 인큐베이터에서 정치 배양하였다.
제조예 2: Rice koji 이용한 전통 누룩 제조
통밀(미국산) 150 g을 깨끗이 씻어 건조하고 조곡과 분곡의 중간 형태로 파쇄 후, 제조예 1에서 배양한 Rice koji 150 g을 함께 섞어 81 ml(Rice koji와 통밀 대비 27%)의 멸균수를 살수하여 혼합하였다. 그리고 현대식으로 특수 제작한 누룩 성형기에 넣고 원형으로 성형하여 25℃ 인큐베이터에서 습도 80% 습도로 조절하여 15일간 배양한 후 건조시켜 누룩을 제조하였다.
실시예 6: 우산나물 첨가 막걸리 담금
1) 1단 담금
막걸리 담금 용기(5.0 L)를 뜨거운 물로 살균시킨 후에 사용하였다. 그리고 쌀 450 g을 1시간 동안 물에 침지한 후 물을 1시간 동안 빼고, 찜기(Philips HD-9120)를 이용하여 1시간 동안 증자하였다. 그리고 증자한 쌀을 넓게 펴서 1시간 동안 식힌 후에 사용하였다. 그리고 25℃에 물 1.275 L와 제조예 2에서 제조된 누룩 300 g, 실시예 1 내지 5에서 선택된 우산나물 추출물 12.75 g(물 1.275 L 대비 1.0%)과 분말 효모[Saccharomyces cerevisiae, 미도화학공업사]를 1.0 x 107 cfu/ml이 되도록(20 g) 물에 용해한 다음 막걸리 담금 용기에 넣고, 인큐베이터에서 25℃에서 6일간 발효하였다.
2) 2단 담금
1단 담금 후에 2단 담금을 실시하였다.
쌀 750 g을 1시간 동안 물에 침지한 후 물을 1시간 동안 빼고 찜기(Philips HD-9120)에서 1시간 동안 증자한 다음, 쌀을 넓게 펴서 1시간 동안 식힌 후 사용하였다. 그리고 25℃에 물 1.275 L을 넣고 2일간 2단 담금을 실시하였다.
비교예 1: 쌀 막걸리 담금
우산나물 추출물을 첨가하지 않은 것을 제외하고 상기 실시예 6과 같이 쌀 막걸리를 제조하였다.
실시예 7: 우산나물 첨가 막걸리 추출물의 제조
도 1에서와 같이 우산나물 첨가 막걸리에 포함된 항산화 활성 물질을 분리하고자 우산나물 첨가 막걸리를 건조한 후, 70℃에서 100% 메탄올, 100% 에탄올 또는 열수로 추출하고, 여과지로 여과하고 잔사를 감압 농축한 후 건조하여 막걸리 우산나물 첨가 추출물을 얻었다.
비교예 2: 쌀 막걸리 추출물 제조
비교예 1에서 제조된 쌀 막걸리를 건조한 후, 70℃에서 100% 메탄올, 100% 에탄올 또는 열수로 추출하고, 여과지로 여과하고 잔사를 감압 농축한 후 건조하여 쌀 막걸리 추출물을 얻었다.
실험예 5: 우산나물 첨가 막걸리의 DPPH 라디칼 소거능 확인
비교에 2의 쌀 막걸리 추출물과, 실시예 7에서 제조된 우산나물 첨가 막걸리 추출물의 DPPH 라디칼 소거능을 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 측정 및 계산하여 백분율로 나타내었다.
그 결과, 양성 대조군으로 사용된 vit-C는 0.005 mg/mL에서 65%의 DPPH 라디칼 소거능을 나타내었고, 비교예 2의 쌀 막걸리 메탄올 100% 추출물, 쌀 막걸리 에탄올 100% 추출물, 쌀 막걸리 열수 추출물은 0.1 mg/mL 각각 50%, 54%, 48%의 라디칼 소거능을 나타내었다.
실시예 7의 우산나물 첨가 막걸리 메탄올 100% 추출물, 우산나물 첨가 막걸리 에탄올 100% 추출물, 우산나물 첨가 막걸리 열수 추출물은 0.1 mg/mL 각각 60%, 64%, 57%의 DPPH 라디칼 소거능을 확인하였다[도 6 참조].
실험예 6: 우산나물 첨가 막걸리 추출물의 ABTS 라디칼 소거능 확인
비교에 2의 쌀 막걸리 추출물과, 실시예 7에서 제조된 우산나물 첨가 막걸리 추출물의 ABTS 라디칼 소거능을 상기 실시예 2와 동일한 방법으로 측정 및 계산하여 백분율로 나타내었다.
그 결과, 양성 대조군으로 사용된 vit-C는 0.005 mg/mL에서 60%의 DPPH 라디칼 소거능을 나타내었고, 비교예 2의 쌀 막걸리 메탄올 100% 추출물, 쌀 막걸리 에탄올 100% 추출물, 쌀 막걸리 열수 추출물은 0.1 mg/mL 농도에서 각각 47%, 50%, 43%의 라디칼 소거능을 나타내었다.
실시예 7의 우산나물 첨가 막걸리의 메탄올 100% 추출물, 우산나물 첨가 에탄올 100% 추출물, 우산나물 첨가 열수 추출물은 0.1 mg/mL 농도에서 각각 58%, 60%, 50%의 ABTS 라디칼 소거능을 확인하였다[도 7 참조].
실험예 7: 우산나물 첨가 막걸리 추출물의 환원력 확인
비교에 2의 쌀 막걸리 추출물과, 실시예 7에서 제조된 우산나물 첨가 막걸리 추출물의 환원력을 상기 실시예 3과 동일한 방법으로 측정 및 계산하여 나타내었다.
그 결과, 양성 대조군인 vit-C 0.005 mg/mL에서 0.405의 환원력을 나타내었고, 비교예 2의 쌀 막걸리 메탄올 100% 추출물, 쌀 막걸리 에탄올 100% 추출물, 쌀 막걸리 열수 추출물은 0.1 mg/mL 농도에서 각각 0.309, 0.315, 0.288의 환원력을 나타내었다. 실시예 7의 우산나물 첨가 막걸리의 메탄올 100% 추출물, 우산나물 첨가 막걸리의 에탄올 100% 추출물, 우산나물 첨가 막걸리의 열수 추출물은 0.1 mg/mL 농도에서 각각 0.400, 0.388, 0.320의 환원력을 확인하였다[도 8 참조].
실험예 8: 우산나물 첨가 막걸리의 H 2 O 2 로 유도된 세포 내 활성산소 소거능 확인
비교에 2의 쌀 막걸리 추출물과, 실시예 7에서 제조된 우산나물 첨가 막걸리 추출물의 H2O2로 유도된 세포 내 활성산소 소거능을 상기 실시예 4와 동일한 방법으로 측정 및 계산하여 백분율로 나타내었다.
그 결과, 양성 대조군으로 사용된 vit-C는 0.1 mg/mL 농도에서 세포 내 활성산소를 37.1% 감소시켰다. 비교예 2의 쌀 막걸리 메탄올 100% 추출물, 쌀 막걸리 에탄올 100% 추출물, 쌀 막걸리 열수 추출물은 0.1 mg/mL 농도에서 각각 63.8%, 67.4%, 51.5%의 활성산소 소거능을 나타내었다. 실시예 7의 우산나물 첨가 막걸리 메탄올 100% 추출물, 우산나물 첨가 막걸리 에탄올 100% 추출물, 우산나물 첨가 막걸리 열수 추출물은 0.1 mg/mL 농도에서 각각 43.3%, 45.1%, 50%의 활성산소 소거 활성을 나타내었다[도 9 참조].

Claims (5)

  1. 우산나물 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 조성물.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 우산나물 추출물은 우산나물을 물, 유기용매 또는 이들의 혼합물로 추출하여 얻은 추출물인 항산화 조성물.
  3. 제 1 항에 있어서,
    상기 우산나물 추출물은 DPPH, ABTS, FRAP 분석에서 전자 공여능과 세포 내 ROS 소거 활성을 나타내는 항산화 조성물.
  4. 우산나물 추출물을 포함하는 기능성 막걸리.
  5. 제 4 항에 있어서,
    상기 기능성은 항산화 활성인 기능성 막걸리.
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