KR20160026825A - 히스티딘 태그에 결합하는 dna 앱타머와 그것의 용도 - Google Patents

히스티딘 태그에 결합하는 dna 앱타머와 그것의 용도 Download PDF

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Abstract

His-태그에 대해 친화성을 가지며, SEQ ID No. 1 및 SEQ ID No. 2로부터 선택된 뉴클레오티드 서열을 함유하며, 분명한 용도를 가진, DNA 앱타머가 얻어졌다.

Description

히스티딘 태그에 결합하는 DNA 앱타머와 그것의 용도{DNA APTAMERS BINDING THE HISTIDINE TAG AND THEIR APPLICATION}
아래 설명된 발명은 히스티딘 태그에 결합하는 단일가닥 DNA 앱타머의 독특한 뉴클레오티드 서열과 그것의 용도를 포함한다.
원핵세포와 진핵세포는 재조합 단백질의 생산을 위한 효과적인 발현 시스템으로 주로 사용된다. 만족할만한 순도와 품질을 가진 단백질을 얻기 위해 친화성 크로마토그래피 방법이 아주 흔히 이용된다. 이러한 크로마토그래피의 예는 고정된 금속 친화성 크로마토그래피(IMAC)이다. 이 기술을 사용하기 위해 일반적으로 히스티딘 잔기의 6개 연속 반복부로 이루어진 짧은 히스티딘 태그(His-tag)가 표적 단백질과 융합되어야 한다. His-태그는 특정 금속 이온(예를 들어, 코발트, 구리, 니켈 및 아연)에 가역적으로 결합할 수 있다. 이들 이온 중 하나를 함유하는 적절한 캐리어를 사용하여 His-태그 단백질의 정제나 고정화가 가능하다. 재조합 단백질에 부착된 His-태그는 태그에 대해 지정된 단클론 또는 다중클론 항체를 사용하여 웨스턴 블롯팅 기술에 의해서 이들을 검출하는데 사용될 수 있다. 이런 단백질 검출 시스템은 풀다운, 동시-면역침전 또는 파 웨스턴 블롯팅과 같은 단백질들 간 상호작용을 연구하기 위해 사용되는 다른 시험관내 기술에서 사용될 수 있다. DNA 앱타머는 약 40-100 뉴클레오티드 길이의 단일가닥 데옥시리보핵산 분자로 정의되며, 이들은 높은 특이성 및 친화성으로 리간드와 결합하는 능력을 가진다. 앱타머의 풍부한 2차 및 3차 구조는 선택된 앱타머와 표적 분자의 매칭이 최적이라는 것을 의미한다.
본 발명의 목적은 특히 히스티딘 태그를 함유하는 분자 표적에 대해 강한 친화성을 가진 새로운 분자, 또는 히스티딘 헥사머를 함유하는 어떤 분자(예를 들어, 펩티드, 단백질, DNA 유도체)의 제공을 통한 히스티딘 태그를 함유하는 분자의 확인을 위한 새로운 방법을 제공하는 것이다.
상기 명시된 기술적 목표는 논의된 발명에 따라서 실시될 수 있다.
본 발명의 주제는 SEQ ID NO. 1:
5'-GTTTGCCGGTGGGCAGGTCTAGGGTCTGCTCGGGATTGCGGAGGAACATGCGTCGCAAAC-3'(여기서는 "앱타머 A1"이라고 칭한다)
의 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO. 2:
5'-GTTTGCCGGTGGGCAGGTTTAGGGTCTGCTCGGGATTGCGGAGGAACATGCGTCGCAAAC-3'(여기서는 "앱타머 B1"이라고 칭한다)
의 뉴클레오티드 서열을 가진, His-태그에 대해 친화성을 가진 DNA 앱타머이다.
본 발명은 His-태그를 함유하는 펩티드 또는 단백질에 대한 친화성이 보유된다는 조건하에 DNA 서열의 일부 변형을 허용하며, 몇 가지 단백질의 혼합물로부터 His-태그 단백질의 선택적 정제를 허락한다. 특히, 본 발명의 범위는 적어도 하나의 퓨린 또는 피리미딘 염기에 차이가 있는 상기 서열의 변이체를 아우른다.
본 발명의 다른 주제는 His-태그를 함유하는 분자 표적에 대해 친화성을 가진 분자의 제조를 위한 상기 정의된 서열 중 하나를 가진 올리고뉴클레오티드의 사용이다.
이 사용은 다음과 같을 수 있다:
- His-태그에 대해 지정된 항체에 대한 작동제로서의 사용,
- His-태그를 함유하는 분자 표적의 검출,
- His-태그를 함유하는 분자 표적의 정제,
- His-태그를 함유하는 분자 표적에 결합,
- His-태그를 함유하는 분자 표적의 농도의 분석
특히, 이들 올리고뉴클레오티드는 His-태그를 지닌 분자 표적을 표지하기 위해 태그, 예를 들어 형광 태그가 부착된 분자의 형태로 사용될 수 있다. 이런 종류의 분자는, 예를 들어 FRET(포스터 공명 에너지 전달) 또는 BiFC(이중-분자 형광 상쇄)와 같은 전문가에게 알려진 분광 기술을 사용하여 단백질들 간 상호작용을 모니터하기 위해 사용될 수 있다.
다음은 본 발명의 특징들을 더 명확히 할 수 있다:
도 1은 히스티딘 태그를 함유하는 단백질과 앱타머의 결합을 도시한다. 레인: 1) 단백질 마커, 2) B1 앱타머와 함께 인큐베이션된 His-PCNA 단백질, 3) B1 앱타머와 함께 인큐베이션된 PCNA 단백질, 4) 레퍼런스 앱타머와 함께 인큐베이션된 His-PCNA 단백질, 5) 레퍼런스 앱타머와 함께 인큐베이션된 PCNA 단백질. 샘플들에 SDS-PAGE를 행한 다음, 단백질이 Coomassie Brilliant Blue R-250로 염색되었다.
도 2는 E. coli 단백질 추출물로부터 His-태그 단백질의 정제를 도시한다. 1) 단백질 마커, 2) E. coli 단백질 추출물 40mg, 3) B1 앱타머의 도움으로 정제된 His-PCNA 단백질. 샘플들에 SDS-PAGE를 행한 다음, 단백질이 Coomassie Brilliant Blue R-250로 염색되었다.
도 3은 His-태그를 함유하는 재조합 단백질의 검출이 B1 앱타머를 사용하여 행해진 경우 ELISA 시험의 결과를 나타낸다. 이 데이터는 세 독립적 실험으로부터의 평균 결과를 도시한다.
본 설명은 아래 인용된 실시예들에 의해서 보충된다. 이들은 본 발명의 전 범위를 나타내는 것은 아니다.
실시예 1: His-태그에 대해 친화성을 가진 DNA 앱타머의 개발
His-태그를 함유하는 분자 표적에 대해 친화성을 가진 DNA 분자의 개발을 향한 연구는 다음 서열 중 하나를 함유하는 DNA 앱타머가 강한 친화성을 가진다는 것을 보였다:
5'-GTTTGCCGGTGGGCAGGTCTAGGGTCTGCTCGGGATTGCGGAGGAACATGCGTCGCAAAC-3' (SEQ ID. No. 1)
5'-GTTTGCCGGTGGGCAGGTTTAGGGTCTGCTCGGGATTGCGGAGGAACATGCGTCGCAAAC-3' (SEQ ID. No. 2)
본 발명은 전문가에게 공지된 어떤 통상적인 DNA 합성 방법에 의해서 DNA 분자가 얻어지는 것을 허용한다.
예를 제공하고자 고체상 화학 합성 기술을 사용하여 올리고뉴클레오티드 분자가 얻어졌다(Zlatev, I., Manoharan, M., Vasseur, J.-J. and Morvan, F. Solid-Phase Chemical Synthesis of 5'-Triphosphate DNA RNA, and Chemically Modified Oligonucleotides. Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry. 2012;50:1.28.1 -1.28.16.)
60 뉴클레오티드 길이이며, 각각 641 및 612 마이크로그램의 양으로 합성된, 상기 정의된 서열을 가지고 얻어진 앱타머 A1 및 B1 분자가 HPLC 방법으로 검증되었다.
이들 서열을 가진 DNA 분자는 추가적인 변형을 거칠 수 있다. 특히, 이들은 공지된 염료(예를 들어, 형광 염료) 또는 다른 분자(예를 들어, 바이오틴)과 커플링되어 사용될 수 있다.
예로서 바이오틴화된 앱타머 A1 및 B1이 477 및 459 마이크로그램의 양으로 5' 단부에서 바이오틴화된 올리고뉴클레오티드의 자동 합성에 의해 얻어졌다(Pon, R.T. A Long Chain Biotin Reagent for Phosphoramidite The Automated Synthesis of 5' - Biotinylated Oligonucleotides, Tetrahedron Lett.1991; 32: 1715-1718). 생성물은 HPLC 방법으로 검증되었다.
실시예 2: His-태그 단백질과 앱타머 결합된 크로마토그래피 수지의 결합
50% 아가로오스 커플링된 스트랩트아비딘 10L를 1.5mL 에펜드로프 튜브에 넣고 증류수로 세척했다. 다음에, 이것을 BW 버퍼(17.5g/L NaCl, 50mM 인산염 버퍼 NaH2PO4/Na2HPO4, 0.1%(v/v) Tween 20, pH 7.5)로 세 번 세척했다. 다음에, 이 수지를 20g의 5'-바이오틴화된 B1 또는 (ACTG)x10-GAGGAACATGCGTCGCAAAC 서열을 가진 레퍼런스 앱타머를 함유하는 BW 버퍼 300μl에 현탁했다. 샘플을 1h 동안 실온에서 인큐베이션했다. 인큐베이션 후 수지를 BW로 세 번 세척하고, 이어서 AS 버퍼(137mM NaCl, 12.7mM KCl, 10mM Na2HPO4, 2mM KH2PO4, 5mM MgCl2, 0.1%(v/v) Tween 20, pH 7.4)로 두 번 세척했다. 마지막 세척 후 앱타머가 결합된 수지를 AS 버퍼 300μl에 현탁하고, 재조합 사람 PCNA 단백질을 0.13mg/ml의 최종 농도로 첨가했다. 이 실험에서는 a) His-태그를 가진 변이체와 b) His-태그를 갖지 않은 변이체인 PCNA 단백질의 두 변이체가 사용되었다. 단백질을 가진 수지를 1h 동안 실온에서 인큐베이션했다. 인큐베이션 후에 AS 버퍼로 네 번 세척하고, GLB 버퍼(50mM Tris-HCl, 2% SDS(w/v) 브로모페놀 블루 2%(w/v), 10% 글리세롤, 200mM β-머캅토에탄올, pH 6.8)에 현탁하고, 95℃에서 5분 인큐베이션했다. 결과의 샘플에 SDS-PAGE(Laemmli법)를 행했다. 분리 후 단백질을 Coomassie Brilliant Blue R-250 염료를 사용하여 염색했다. 결과는 도 1에 도시된다.
실시예 3: 단백질 세포 추출물로부터 His-태그 단백질의 정제
50% 아가로오스 커플링된 스트랩트아비딘 10μl를 1.5mL 에펜드로프 튜브에 넣고 증류수로 세척했다. 다음에, 이것을 BW 버퍼(0.3M NaCl, NaH2PO4/Na2HPO4 50mM 인산염 버퍼, 0.1%(v/v) Tween 20, pH 7.5)로 세 번 세척했다. 다음에, 이 수지를 20g의 5'-바이오틴화된 B1 앱타머를 함유하는 BW 버퍼 300μl에 현탁하고, 1h 동안 실온에서 인큐베이션하고, 이어서 BW 버퍼로 세 번, AS 버퍼(137mM NaCl, 12.3mM KCl, 10mM Na2HPO4, 2mM KH2PO4, 5mM MgCl2, 0.1%(v/v) Tween 20, pH 7.4)로 두 번 세척했다. 마지막 세척 후 앱타머가 결합된 수지를 AS 버퍼 300μl에 현탁했다. 다음에, 사람 재조합 His-PCNA 단백질을 과발현하는 E. coli로부터 제조된 총 단백질 추출물을 2.0mg/ml의 농도로 첨가했다. 이 수지를 1h 동안 실온에서 인큐베이션했다. 인큐베이션 후에 수지를 AS 버퍼로 네 번 세척했다. His-PCNA를 용출 버퍼(50mM Tris, pH 7.5)로 용출했다. 용출된 단백질을 GLB 버퍼(50mM Tris, 2% SDS (w/v) 브로모페놀 블루 2%(w/v), 10% 글리세롤, 200mM β-머캅토에탄올, pH 6.8)와 혼합하고, 95℃에서 5분 인큐베이션했다. 결과의 샘플에 SDS-PAGE(Laemmli법)를 행했다. 분리 후 단백질을 Coomassie Brilliant Blue R-250 염료를 사용하여 염색했다. 결과는 도 2에 도시된다.
실시예 4: ELISA 방법을 사용한 His-태그 단백질 검출
96-웰 ELISA 플레이트를 사람 PCNA 단백질(0.5g 단백질/웰)로 코팅했다. 이 실험에서는 a) His-태그를 가진 변이체와 b) His-태그를 갖지 않은 변이체인 PCNA 단백질의 두 변이체가 사용되었다. 단백질을 4℃에서 16h 동안 플레이트에 결합시켰다. 다음에, 플레이트를 PBST(0.5%(v/v) Tween 20를 함유하는 1xPBS) 버퍼로 세 번 세척했다. 다음에, 플레이트를 실온에서 2h 동안 2%(w/v) 소 혈청 알부민을 함유하는 1xPBS 버퍼로 차단했다. 다음 단계에서 플레이트를 PBST 버퍼로 세 번 세척하고, 실온에서 1시간 동안 AS 버퍼(137mM NaCl, 12.3mM KCl, 10mM Na2HPO4, 2mM KH2PO4, 5 mM MgCl2, pH 7.4, 0.1%(v/v) Tween 20) 중에서 5' 바이오틴화된 B1 또는 레퍼런스 앱타머와 함께 인큐베이션했다. 앱타머의 최종 농도는 0.01mg/ml였다. 인큐베이션 후에 플레이트를 PBST 버퍼를 사용하여 세 번 세척하고, 플레이트를 스트렙트아비딘 커플링된 양고추냉이 퍼옥시다아제(1:200 희석, PBS 버퍼)와 함께 실온에서 40분 인큐베이션했다. 플레이트를 PBST 버퍼로 다시 세 번 세척하고, 이어서 양고추냉이 퍼옥시다아제 기질을 웰에 첨가했다. 청색이 나타났을 때 1M H2SO4로 반응을 중단시키고, 450nm의 파장에서 흡광도를 측정했다. 결과는 도 3에 도시된다.
SEQUENCE LISTING <110> Uniwersytet Jagiello?ki <120> DNA aptamers binding the histidine tag and their application <130> PZ/1977/RW/PCT <150> P.403939 <151> 2013-05-17 <160> 2 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 60 <212> DNA <213> artificial <220> <223> aptamer A1 <400> 1 gtttgccggt gggcaggtct agggtctgct cgggattgcg gaggaacatg cgtcgcaaac 60 <210> 2 <211> 60 <212> DNA <213> artificial <220> <223> aptamer B1 <400> 2 gtttgccggt gggcaggttt agggtctgct cgggattgcg gaggaacatg cgtcgcaaac 60

Claims (2)

  1. SEQ ID No. 1 및 SEQ ID No. 2로부터 선택된 뉴클레오티드 서열을 함유하는, His-태그에 대한 친화성을 특징으로 하는 DNA 앱타머.
  2. His-태그를 포함하는 분자 표적에 대한 친화성을 특징으로 하는 분자의 제조를 위한 제 1 항에서 확인된 서열 중 하나를 포함하는 올리고뉴클레오티드의 사용으로서, 특히
    - His-태그에 대해 지정된 항체에 대한 작동제로서의 사용,
    - His-태그를 함유하는 분자 표적의 검출,
    - His-태그를 함유하는 분자 표적의 정제,
    - His-태그를 함유하는 분자 표적에 결합,
    - His-태그를 함유하는 분자 표적의 농도의 결정
    을 위한 사용.
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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PL226916B1 (pl) * 2014-12-16 2017-09-29 Univ Jagiellonski Aptamer DNA rozpoznajacy ludzkie białko PCNA oraz jego zastosowanie
US20190256853A1 (en) * 2016-07-28 2019-08-22 Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biot Echnologies Method for Obtaining Aptamers
CN109055382B (zh) * 2018-08-27 2022-04-12 温州医科大学附属第一医院 可特异性结合6x组氨酸标签的核酸适配体及其应用
PL441076A1 (pl) * 2022-04-30 2023-11-06 Uniwersytet Jagielloński Aptamer DNA wykazujący powinowactwo do białka PD-L1 i jego zastosowanie, funkcjonalny kompleks kowalencyjny oraz jego zastosowanie

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005024042A2 (en) * 2003-09-04 2005-03-17 The Regents Of The University Of California Aptamers and methods for their in vitro selection and uses thereof

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101178847B1 (ko) * 2008-12-08 2012-08-31 한국전자통신연구원 가상공간과 연계된 다중 로봇 제어 장치 및 방법
CN102229932B (zh) 2011-06-03 2013-02-27 湖南大学 可识别hcv e1e2蛋白的核酸适体、核酸适体的衍生物及其筛选方法和应用
KR101333158B1 (ko) * 2011-10-05 2013-11-27 경희대학교 산학협력단 히스티딘 태그를 가진 단백질의 정제를 위한 고형 지지체 및 이를 이용한 정제 방법
CN102719430B (zh) 2012-06-13 2013-06-12 湖南大学 一种检测组氨酸标签重组蛋白的核酸适配体分子信标探针及其检测方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005024042A2 (en) * 2003-09-04 2005-03-17 The Regents Of The University Of California Aptamers and methods for their in vitro selection and uses thereof

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