KR20160016195A - 여주 추출물로부터 분획되는 에틸 아세테이트 분획물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 항노화용 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 여주 추출물을 헥산, 클로로포름, 에틸 아세테이트로 순차적으로 분획하여 얻은 분획물 중 에틸 아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항노화용 조성물에 관한 것으로, 여주 추출물로부터 분획된 에틸 아세테이트 분획물은 여주 에탄올 추출물 및 이의 다른 용매 분획물들 보다 폴리페놀 및 플라보노이드 함량이 높고, DPPH(2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl) 자유라디칼 소거, ABTS(2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonate)) 자유라디칼 소거, 수퍼옥사이드(Superoxide) 라디칼 소거, 및 제2철 감소(Ferric reducing/antioxidant power, FRAP)에서 높은 활성을 나타내므로 항산화 또는 항노화용 약학적 조성물, 화장료 조성물, 및 식품으로 유용하게 이용될 수 있다.

Description

여주 추출물로부터 분획되는 에틸 아세테이트 분획물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 항노화용 조성물{Antioxidant or anti-aging composition comprising the ethyl acetate fraction from Momordica charantia extract}
본 발명은 항산화 또는 항노화용 조성물에 관한 것으로, 여주(Momordica charantia) 추출물로부터 분획되는 에틸 아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항노화용 약학적 조성물, 화장료 조성물, 및 식품에 관한 것이다.
공기 중에 일반적으로 존재하는 안정한 분자상태인 기저 삼중항산소가 체내 효소계, 환원대사, 화학약품, 공해물질, 광화학 반응과 같은 환경 및 생화학적 요인 등에 의하여 반응성이 매우 큰 자유라디칼(free radical)인 활성산소(active oxygen)로 전환되어 세포의 구성성분을 비가역적으로 파괴한다.
활성산소는 체내 방어기구인 수퍼옥사이드 디스뮤타제(superoxide dismutase, SOD), 카탈라아제(catalase), 퍼옥시다아제(peroxidase), 글루타치온(glutathione) 등의 항산화성 효소 및 비티민 C(vitamin C, ascorbic acid), 비타민 E(tocopherol) 등의 항산화 물질의 작용에 의하여 최소화 될 수 있다. 하지만 과도한 활성산소에 노출되거나 생체 방어력에 이상이 생기게 될 경우 균형이 깨어져서 활성산소가 생체에 치명적인 산소독성을 일으키게 된다.
체내 과도한 활성산소는 세포구성 성분들인 지질, 단백질, 당, DNA 등과 반응하여 파괴작용을 함으로써 노화는 물론 암을 비롯하여 뇌졸중, 파킨슨씨병 등의 뇌질환과 심장질환, 허혈, 동맥경화, 피부손상, 염증, 류마티스, 자가면역질환 등의 각종 질병을 일으키는 원인이 되고 있다.
이와 같은 산화적 스트레스가 노화를 비롯하여 각종 질환을 일으키는 중요한 원인임이 밝혀지면서 생체 내 활성산소를 제거하는 항산화제를 개발하려는 연구가 활발히 진행되고 있다.
합성 항산화제로 널리 사용되고 있는 BHA(butylated hydroxy anisol)와 BHT(butylated hydroxy toluene)는 그 효과와 경제성 그리고 안전성 때문에 많이 사용해 왔지만 합성 첨가물의 일반적인 기피 현상뿐만 아니라 장기간 과량 복용 시 위장점막, 폐, 신장, 순환계 등에 심각한 독성작용을 일으키는 것으로 알려져 그 사용량이 법적으로 규제되어 있다.
또한 인체에 무해하고 항산화력이 우수한 천연 항산화제 관한 연구가 오래전부터 진행되어 왔으나 토코페롤과 같은 천연 항산화제는 인체에 대하여 안전하기는 하나 단독으로는 산화 연쇄반응 저지 능력이 있고, 가격이 비싼 단점이 있다.
따라서 보다 안전하고 항산화 효능이 탁월하면서도 경제성이 있는 새로운 항산화제 개발이 절실히 요구되어 진다.
여주(Momordica charantia)는 박과의 덩굴식물로 영어명으로 비터 멜론(bitter melon) 이라고 불리며, 줄기는 가늘고 길이 1 m까지 자라며 덩굴손으로 다른 물건을 감아서 올라간다. 열매는 박과이며 긴 타원형이고 양끝이 좁으며 혹 같은 돌기가 있고 황적색으로 익으면 불규칙하게 갈라져서 홍색 육질로 싸인 종자가 나온다. 열매가 여지와 비슷하므로 여주라고 불린다. 어린 열매와 홍색 종피(種皮), 종자는 약용으로 사용한다. 최근에는 당뇨병의 치료에도 사용될 수 있음이 보고된 바 있다(Miura T. et al., J. Nutr. Sci. Vitaminol., 47(5), 340-344, 2001; Grover JK. et al., J. Ethnopharmacol., 76(3), 233-238, 2001).
이처럼 여주에 대한 항당뇨 효과(대한민국 등록특허 제749,944호) 및 항비만 효과(대한민국 등록특허 제1,074,914호)가 알려져 있으며, 여주 에탄올 추출물의 항산화 효과(대한민국 공개특허 제2010-0034774호) 및 여주 추출물에 함유된 트리터페노이드계 성분인 쿠커비테인(cucurbitane)의 항노화 효과(대한민국 등록특허 제1,341,416호)가 알려져 있다.
본원 발명자들은 여주 추출물로부터 분획된 에틸 아세테이트 분획물이 여주 에탄올 추출물을 포함한 이의 다른 용매 분획물들 보다 월등한 항산화 효과를 나타낸다는 점을 최초로 규명하였다. 따라서 여주 추출물로부터 분획된 에틸 아세테이트 분획물은 천연물 유래로 안전하면서 용이한 추출방법으로, 알려진 여주 추출물 보다 현저히 뛰어난 항산화 활성 나타내어 높은 경제성을 갖는 항산화 조성물로 활용할 수 있는 바, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
대한민국 등록특허 제749,944호 대한민국 등록특허 제1,074,914호 대한민국 공개특허 제2010-0034774호 대한민국 등록특허 제1,341,416호
Miura T. et al., J. Nutr. Sci. Vitaminol., 47(5), 340-344, 2001. Grover JK. et al., J. Ethnopharmacol., 76(3), 233-238, 2001.
본 발명의 목적은 여주(Momordica charantia) 추출물 보다 높은 항산화 또는 항노화 활성을 나타내는 여주 추출물의 에틸 아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항노화용 약학적 조성물, 화장료 조성물, 및 식품을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 여주(Momordica charantia) 추출물 및 이의 다른 용매 분획물 보다 에틸 아세테이트 분획물이 페놀 및 폴리페놀의 함량이 높고, 자유라디칼(free radical) 제거 및 제2철 감소(Ferric reducing/antioxidant power, FRAP) 활성 또한 높다는 것을 비교 실험을 통해 확인함으로써 여주 추출물의 에틸 아세테이트 분획물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 항노화용 약학적 조성물, 화장료 조성물, 및 식품을 제공한다.
본 발명의 여주(Momordica charantia) 추출물로부터 분획된 에틸 아세테이트 분획물이 여주 에탄올 추출물 및 이의 다른 용매 분획물들 보다 폴리페놀 및 플라보노이드 함량이 높고, DPPH(2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl) 자유라디칼 소거, ABTS(2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonate)) 자유라디칼 소거, 수퍼옥사이드(Superoxide) 라디칼 소거, 및 제2철 감소(Ferric reducing/antioxidant power, FRAP)에서 높은 활성을 나타낸다는 것을 확인하였으므로 여주 추출물의 에틸 에세테이트 분획물은 항산화 또는 항노화용 약학적 조성물, 화장료 조성물, 및 식품의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 여주(Momordica charantia) 추출물과 분획물의 제조과정을 나타낸 것이다.
본 발명은 여주(Momordica charantia) 추출물을 헥산, 클로로포름, 에틸 아세테이트로 순차적으로 분획하여 얻은 분획물 중 에틸 아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항노화용 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 여주(Momordica charantia) 추출물의 에틸 아세테이트 분획물은 하기 단계들을 포함하는 제조방법에 의해 제조될 수 있다.
a) 여주에 추출용매를 가하여 추출하는 단계;
b) 상기 a) 단계의 추출물을 여과하는 단계;
c) 상기 단계 b)의 여과한 추출물을 감압 농축한 후 건조하여 여주 추출물을 제조하는 단계; 및
d) 상기 c) 단계에서 수득된 여주 추출물에 헥산, 클로로포름, 에틸 아세테이트를 순차적으로 가해 용매의 극성에 따라 분별 분리를 진행하여 분리된 각각의 용매 추출물을 감압 농축하여 용매를 제거한 후 동결 건조시켜 분획물을 제조하는 단계.
본 발명의 일 양태에서, 상기 제조방법에 있어 a)단계의 여주는 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있으며, 열매, 잎, 줄기, 및 뿌리 등 모두 사용할 수 있으나 열매인 것이 바람직하다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 제조방법에 있어 a) 단계의 추출용매는 물, 알코올, 또는 이들이 혼합물을 사용하는 것이 바람직하다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 제조방법에 있어 알코올은 C1 내지 C2 저급 알코올일 수 있으며, 바람직하게 에탄올 또는 메탄올일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 보다 더 바람직하게는 70% 에탄올을 사용할 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 제조방법에 있어 추출온도는 50 내지 100 ℃인 것이 바람직하고, 추출시간은 5 내지 24 시간인 것이 바람직하며, 아울러 추출횟수는 1 내지 5회 반복 추출하는 것이 바람직하다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 약학적 조성물은 유해 활성산소(free radical) 제거 및 제2철염 감소(Ferric reducing/antioxidant power, FRAP) 중 적어도 하나 이상의 활성을 가진다.
발명의 일 양태에서, 상기 약학적 조성물은 DPPH(2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl) 자유라디칼 소거, ABTS(2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonate)) 자유라디칼 소거, 수퍼옥사이드(Superoxide) 라디칼 소거, 및 제2철 감소(Ferric reducing/antioxidant power, FRAP)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 활성을 가진다.
상기 본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 상기 조성물은 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌 글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween)61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
상기 약학적 조성물은 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제 및 좌제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가질 수 있다.
상기 본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다.
본 발명에서 용어 "약학적으로 유효한 양”은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 추출물은 1일 1 내지 100 mg/kg으로, 바람직하게는 1 내지 10 mg/kg으로 투여될 수 있다.
본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 항산화 효과 또는 항노화 효과를 나타내는 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명에서 용어 "개체”란 항산화 효과 또는 항노화 활성을 통해 예방 또는 치료할 수 있는 질환이 이미 발병되었거나, 발병될 수 있는 인간을 포함한 모든 동물을 의미하고 본 발명의 추출물을 포함하는 조성물을 개체에게 투여함으로써, 상기 질환을 효과적으로 예방 및 치료할 수 있다.
상기 약학적 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물은 목적하는 바에 따라 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 또한 상기 조성물은 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다.
본 발명은 여주(Momordica charantia) 추출물을 헥산, 클로로포름, 에틸 아세테이트로 순차적으로 분획하여 얻은 분획물 중 에틸 아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항노화용 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 화장료 조성물의 여주 추출물은 물, C1 내지 C2의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 사용하여 추출한 추출물일 수 있고, 보다 바람직하게는 물 및 에탄올의 혼합물을 용매로 사용하여 추출한 추출물일 수 있으며, 보다 더 바람직하게는 70% 에탄올을 사용하여 추출한 추출물일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 화장료 조성물은 유해 활성산소(free radical) 제거 및 제2철염 감소(Ferric reducing/antioxidant power, FRAP) 중 적어도 하나 이상의 활성을 가진다.
발명의 일 양태에서, 상기 화장료 조성물은 DPPH(2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl) 자유라디칼 소거, ABTS(2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonate)) 자유라디칼 소거, 수퍼옥사이드(Superoxide) 라디칼 소거, 및 제2철 감소(Ferric reducing/antioxidant power, FRAP)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 활성을 가진다.
상기 화장료 조성물은 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.
또한 상기 화장료 조성물은 여주 추출물을 헥산, 클로로포름, 에틸 아세테이트로 순차적으로 분획하여 얻은 분획물 중 에틸 아세테이트 분획물에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.
본 발명의 여주 추출물을 헥산, 클로로포름, 에틸 아세테이트로 순차적으로 분획하여 얻은 분획물 중 에틸 아세테이트 분획물을 함유하는 화장료 조성물에 있어서, 통상적으로 함유되는 화장료 조성물에 본 발명의 추출물이 0.1 내지 50 중량%, 바람직하게는 1 내지 10 중량%의 양으로 첨가될 수 있다.
본 발명의 여주 추출물을 헥산, 클로로포름, 에틸 아세테이트로 순차적으로 분획하여 얻은 분획물 중 에틸 아세테이트 분획물을 피부 외용제로 사용하는 경우, 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 피부용 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한, 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.
본 발명은 여주(Momordica charantia) 추출물을 헥산, 클로로포름, 에틸 아세테이트로 순차적으로 분획하여 얻은 분획물 중 에틸 아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항노화용 식품에 관한 것이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 식품의 여주 추출물은 물, C1 내지 C2의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 사용하여 추출한 추출물일 수 있고, 보다 바람직하게는 물 및 에탄올의 혼합물을 용매로 사용하여 추출한 추출물일 수 있으며, 보다 더 바람직하게는 70% 에탄올을 사용하여 추출한 추출물일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 식품은 유해 활성산소(free radical) 제거 및 제2철염 감소(Ferric reducing/antioxidant power, FRAP) 중 적어도 하나 이상의 활성을 가진다.
발명의 일 양태에서, 상기 식품은 DPPH(2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl) 자유라디칼 소거, ABTS(2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonate)) 자유라디칼 소거, 수퍼옥사이드(Superoxide) 라디칼 소거, 및 제2철 감소(Ferric reducing/antioxidant power, FRAP)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 활성을 가진다.
본 발명에 따른 식품은, 여주 추출물을 헥산, 클로로포름, 에틸 아세테이트로 순차적으로 분획하여 얻은 분획물 중 에틸 아세테이트 분획물을 포함하되 적절한 식품보조첨가제가 포함될 수 있다.
본 발명에서 용어 "식품보조첨가제”란 식품에 보조적으로 첨가될 수 있는 구성요소를 의미하며, 각 제형의 건강기능식품을 제조하는데 첨가되는 것으로서 당업자가 적절히 선택하여 사용할 수 있다. 식품보조첨가제의 예로는 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등이 포함되지만, 상기 예들에 의해 본 발명의 식품보조첨가제의 종류가 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 식품은 건강기능식품일 수 있다.
본 발명에서 용어 "건강기능식품”이란 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환 등의 형태로 제조 및 가공한 식품을 말한다. 여기서 기능성이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 본 발명의 건강기능식품은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조가능하며, 상기 제조 시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어나, 본 발명의 건강기능식품은 신생혈관형성 억제 효과를 증진시키기 위한 보조제로 섭취가 가능하다.
유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품의 제조 시에 본 발명에 따른 여주 추출물을 헥산, 클로로포름, 에틸 아세테이트로 순차적으로 분획하여 얻은 분획물 중 에틸 아세테이트 분획물은 원료 조성물 중 1 ~ 10 중량%, 바람직하게는 5 ~ 10 중량%의 양으로 첨가된다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
본 발명의 건강식품에는 통상의 식품과 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유될 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 수크로스와 같은 디사카라이드 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 g당 일반적으로 약 0.1 ~ 10 g, 바람직하게는 약 0.01 ~ 0.1 g 이다.
이하, 하기 실시예, 실험예, 및 제조예를 통하여 본 발명에 대하여 보다 상세히 설명하고자 한다. 다만 이는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위한 것이지, 본 발명의 권리범위를 이로 한정하려는 의도는 아니다.
[실시예] 시료의 추출 및 분획
분쇄한 여주 중량의 10배인 70% 에탄올을 첨가하고 80 ℃에서 8시간 동안 3회 추출한 다음 뜨거운 상태에서 여과한 후 감압농축기를 사용하여 추출용매를 제거한 후 농축물을 얻어 여주 70% 에탄올 추출물을 제조하였다.
상기 여주 70% 에탄올 추출물을 헥산, 클로로포름, 에틸 아세테이트, 및 부탄올 용매의 극성에 따라 순차적으로 분별 분리를 행하여 헥산, 클로로포름, 에틸 아세테이트, 부탄올 및 물층으로 극성의 차이에 의해 다섯 가지 분획으로 조제하였다. 분리된 각각의 용매 분획물은 감압농축하여 용매를 제거한 후 동결건조기로 건조시켜 제조하였다(도 1).
[실험예]
○ 실험결과의 통계 처리
실험을 통해 얻어진 자료는 SPSS 21.0(statistical package for the social science, Chicago, IL, USA) PC 패키지(package)를 이용하여 분석하였다. 결과는 평균±표준편차로 나타내었으며 실험군 간의 평균 값 차이는 일원배치분산분석(one-way ANOVA)을 한 후 던컨의 다중검정(Duncan’s multiple range test)에 의해 p<0.05수준에서 각 실험군 평균치 간에 유의성을 검증하였다.
실험예 1: 폴리페놀 및 플라보노이드 함량 측정
총 폴리페놀 함량 측정을 위해 증류수로 용해한 시료 0.2 mL을 시험관에 넣고 증류수를 5 mL 첨가하여 혼합한 다음 실온에서 3분간 방치하였다. 그리고 10% Na2CO3 포화용액 1 mL 가하여 혼합하고 실온에서 1시간 반응 시킨 후 상등액을 700 nm에서 흡광도를 측정하였다. 표준물질은 카페인산(caffeic acid)을 0∼100 μg/mL의 농도로 제조하여 시료와 동일한 방법으로 분석하였으며, 표준검량곡선으로부터 추출물의 총 페놀함량을 계산하였다.
총 플라보노이드는 추출물 0.5 mL에 10% 질산알루미늄(aluminum nitrate) 0.1 mL, 1 M 아세트산칼륨(potassium acetate) 0.1 mL 및 80% 에탄올(ethanol) 4.3 mL를 차례로 가하여 혼합하고 실온에서 40분간 방치한 다음 415 nm에서 흡광도를 측정하였다. 표준물질은 케르세틴(quercetin)을 0∼100 μg/mL의 농도로 제조하여 시료와 동일한 방법으로 분석하였으며, 표준검량곡선으로부터 추출물의 총 플라보노이드 함량을 계산하였다.
그 결과, 여주 에틸아세테이트 분획물의 폴리페놀 함량은 234.04±4.82 mg/g으로 70% 에탄올 추출물의 폴리페놀 함량(34.65±0.80 mg/g)에 비해 약 6.7배 증가하였다. 또한 에틸아세테이트 분획물의 플라보노이드 함량은 104.87±0.01 mg/g으로 70% 에탄올 추출물(36.30±5.70 mg/g)에 비해 약 2.8배 증가하였다(표 1).
Figure pat00001
실험예 2: DPPH 자유라디칼 소거능
DPPH(2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl) 자유라디칼 소거활성을 확인하기 위해 시료 희석액 0.4 mL에 1×10-4 M DPPH용액 5.6 mL를 첨가한 후, 10분간 방치하여 525 nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때 활성비교를 위하여 표준물질은 아스코르브산(ascorbic acid)을 사용하며, 시료 무 첨가군에 대한 첨가군의 흡광도 비로 나타내었다.
그 결과, 70% 에탄올 추출물, 헥산 분획물, 클로로포름 분획물, 부탄올 분획물 및 물층은 5 mg/mL의 농도에서 각각 21.14±0.36%, 5.81±0.34%, 15.95±0.34%, 22.12±1.61% 및 11.48±0.34%의 소거능을 나타내었다. 반면 에틸아세테이트 분획물은 0.625, 1.25, 2.5, 5 mg/mL의 농도에서 각각 17.58±0.27%, 28.91±0.27%, 48.66±0.34% 및 77.09±0.07%로 다른 분획물에 비하여 높은 활성을 나타내었다(표 2).
Figure pat00002
실험예 3: ABTS 자유라디칼 소거능
ABTS(2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonate) 자유라디칼 소거능을 확인하기 위해 ABTS 양이온 탈색 분석법(cation decolorization assay)에 따라 7.4 mM ABTS용액에 2,4 mM 과황산칼륨(potassium persulfate)을 넣고 암실에서 12 내지 16시간 동안 반응시켰다. 반응액을 734 nm에서 흡광도가 0.7이 되도록 증류수로 희석을 시킨 후 용액 2 mL에 시료용액 1 mL를 가하여 실온에서 10분간 반응시킨 다음 734 nm에서 흡광도를 측정하였다. ABTS 자유라디칼 소거능은 시료 첨가구와 무 첨가구의 흡광도 비로 나타내었다.
그 결과, 1 mg/mL의 농도에서 70% 에탄올 추출물, 헥산 분획물, 클로로포름 분획물, 부탄올 분획물, 물층은 모두 30% 이하의 낮은 소거능을 나타내었다. 반면에 에틸아세테이트 분획물은 0.5 mg/mL의 농도에서 91.44±0.77%의 높은 소거능을 나타내었다(표 3).
Figure pat00003
실험예 4: 수퍼옥사이드(Superoxide) 라디칼 소거능
수퍼옥사이드(Superoxide) 라디칼 소거능을 확인하기 위해 시료를 농도별로 조제 후 24-웰 플레이트에 각각 0.5 mL씩 넣고, 30 mM 트리스-염화수소 완충액(tris-HCl buffer)(pH 8.0) 0.1 mL, 0.1 mM 페나진 메토설페이트(phenazine methosulfate, PMS) 0.2 mL, 0.5 mM 니트로테트라졸리움 블루 클로라이드(nitrotetrazolium blue chloride, NBT) 0.2 mL 및 0.5 mM 니코틴 아미드 아데닌 디뉴클레오티드(nicotinamide adenine dinucleotide, NADH) 0.4 mL를 넣었다. 실온에서 10분간 반응시킨 다음 560 nm에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 1 mg/mL의 농도에서 70% 에탄올 추출물의 경우 38.63±1.30%의 소거능을 나타낸 반면 에틸아세테이트 분획물은 같은 농도에서 77.75±0.78%의 높은 소거능을 나타내었다. 헥산 분획물, 클로로포름 분획물, 부탄올 분획물 및 물층은 30% 이하의 낮은 소거능을 나타내었다(표 4).
Figure pat00004
실험예 5: 제2철 감소(Ferric reducing/antioxidant power, FRAP) 활성(환원력)
제2철 감소 활성(Ferric reducing/antioxidant power, FRAP) 측정을 위해 제2철 감소 활성 시약(FRAP reagent)은 300 mM 아세트산 나트륨 완충액(sodium acetate buffer)(pH 3.6) 25 mL, 40 mM 염화수소(HCl)로 용해한 10 mM 2,4,6-트리스(2-피리딜)-s-트리아진(2,4,6-tris(2-pyridyl)-s-triazine, TPTZ) 2.5 mL, 20 mM 염화제이철(FeCl3) 2.5 mL, 및 증류수 3 mL를 섞은 혼합물로 제조하였다. 실험은 각각의 시료 0.05 mL에 상기 혼합물 1.5 mL를 가한 후 혼합하여 37 ℃에서 5분간 반응시킨 후 593 nm에서의 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 70% 에탄올 추출물, 헥산 분획물, 클로로포름 분획물, 부탄올 분획물 및 물층은 5 mg/mL의 농도에서 각각 0.346±0.001, 0.698±0.008, 0.393±0.008, 0.484±0.082 및 0.202±0.018의 흡광도를 나타내어 0.7 이하의 낮은 환원력을 나타내었다. 그러나 에틸아세테이트 분획물은 같은 농도에서 2.561±0.028의 높은 흡광도는 나타내어 70% 에탄올 추출물에 비해 약 7배 높은 환원력을 나타내었다(표 5).
Figure pat00005
[제조예]
제조예 1. 여주 추출물을 헥산, 클로로포름, 에틸 아세테이트로 순차적으로 분획하여 얻은 분획물 중 에틸 아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항노화용 약학적 제제의 제조
1-1. 산제의 제조
여주 추출물의 에틸 아세테이트 분획물 2 g
수크로스 100 mg
탈크 10 mg
상기 성분들을 분말화하여 혼합한 후 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.
1-2. 정제의 제조
여주 추출물의 에틸 아세테이트 분획물 100 mg
유당 100 mg
전분 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg
상기의 성분을 혼합하고 통상의 정제의 제조 방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.
1-3. 캡슐의 제조
여주 추출물의 에틸 아세테이트 분획물 100 mg
유당 100 mg
전분 100 mg
탈크 2 mg
스테아린산마그네슘 적량
상기의 성분을 혼합하고 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.
1-4. 과립의 제조
여주 추출물의 에틸 아세테이트 분획물 150 mg
대두 추출물 50 mg
포도당 200 mg
전분 500 mg
상기 성분들을 혼합한 후 30% 에탄올 100 mL를 첨가하여 60 ℃에서 건조시켜 과립을 형성한 후 포에 충진하여 과립제를 제조한다.
1-5. 환제의 제조
여주 추출물의 에틸 아세테이트 분획물 20 mg
유당 1,500 mg
글리세린 1,500 mg
전분 980 mg
상기 성분들을 혼합한 후 통상의 환제의 제조방법에 따라 1환 당 4 g이 되도록 제조한다.
1-6. 액제의 제조
여주 추출물의 에틸 아세테이트 분획물 1 g
설탕 20 g
이성화당 20 g
레몬향 적량
정제수를 가하여 전체 100 ml
상기의 성분을 통상의 액제의 제조방법에 따라서 혼합하고 100 ml의 갈색병에 충전하고 멸균시켜서 액제를 제조한다.
1-7. 주사제의 제조
여주 추출물의 에틸 아세테이트 분획물 1.0 mg
소디움 메타비설파이트 0.5 mg
메틸파라벤 0.8 mg
프로필파라벤 0.1 mg
주사용 멸균증류수 적량
상기의 성분을 혼합하고 통상의 방법으로 3 ml로 한 후, 3 ml 용량의 앰플에 충전하고 멸균하여 주사제를 제조한다.
제조예 2. 여주 추출물을 헥산, 클로로포름, 에틸 아세테이트로 순차적으로 분획하여 얻은 분획물 중 에틸 아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항노화용 화장료의 제조
2-1. 유연 화장수의 제조
여주 추출물의 에틸 아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 유연 화장수는 하기 표 6과 같이 제조한다.
Figure pat00006
2-2. 영양 크림의 제조
여주 추출물의 에틸 아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 영양크림은 하기 표 7과 같이 제조한다.
Figure pat00007
제조예 3. 여주 추출물을 헥산, 클로로포름, 에틸 아세테이트로 순차적으로 분획하여 얻은 분획물 중 에틸 아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항노화용 식품의 제조
3-1. 밀가루 식품의 제조
여주 추출물의 에틸 아세테이트 분획물 0.5 내지 5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조한다.
3-2. 스프 및 육즙의 제조
여주 추출물의 에틸 아세테이트 분획물 0.1 내지 5.0 중량부를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조한다.
3-3. 유제품의 제조
여주 추출물의 에틸 아세테이트 분획물 5 내지 10 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
3-4. 건강기능 식품의 제조
여주 추출물의 에틸 아세테이트 분획물 20 ㎎, 비타민 혼합물 적량, 비타민 A 아세테이트 70 ㎍, 비타민 E 1.0 ㎎, 비타민 B1 0.13 ㎎, 비타민 B2 0.15 ㎎, 비타민 B6 0.5 ㎎, 비타민 B12 0.2 ㎍, 비타민 C 10 ㎎, 비오틴 10 ㎍, 니코틴산아미드 1.7 ㎎, 엽산 50 ㎍, 판토텐산 칼슘 0.5 ㎎, 무기질 혼합물 적량, 황산제 1철 1.75 ㎎, 산화아연 0.82 ㎎, 탄산마그네슘 25.3 ㎎, 제1인산칼륨 15 ㎎, 제2인산칼슘 55 ㎎, 구연산칼륨 90 ㎎, 탄산칼슘 100 ㎎, 염화마그네슘 24.8 ㎎을 혼합하여 통상의 건강식품 제조방법에 따라 제조한다.
3-5. 건강 음료의 제조
여주 추출물의 에틸 아세테이트 분획물 20 ㎎, 구연산 1000 ㎎, 올리고당 100 g, 매실농축액 2 g, 타우린 1 g, 정제수 적량을 혼합하여 통상의 건강 음료의 제조방법에 따라 제조한다.

Claims (15)

  1. 여주 추출물을 헥산, 클로로포름, 에틸 아세테이트로 순차적으로 분획하여 얻은 분획물 중 에틸 아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항노화용 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    여주 추출물은 물, C1 내지 C2의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 사용하여 추출한 추출물인 것을 특징으로 하는, 항산화 또는 항노화용 약학적 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    여주 추출물은 물 및 에탄올의 혼합물을 용매로 사용하여 추출한 추출물인 것을 특징으로 하는, 항산화 또는 항노화용 약학적 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    여주 추출물은 70% 에탄올 추출물을 사용하여 추출한 추출물인 것을 특징으로 하는, 항산화 또는 항노화용 약학적 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 약학적 조성물은 유해 활성산소(free radical) 제거 및 제2철염 감소(Ferric reducing/antioxidant power, FRAP) 중 적어도 하나 이상의 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 항산화 또는 항노화용 약학적 조성물.
  6. 여주 추출물을 헥산, 클로로포름, 에틸 아세테이트로 순차적으로 분획하여 얻은 분획물 중 에틸 아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항노화용 화장료 조성물.
  7. 제6항에 있어서,
    여주 추출물은 물, C1 내지 C2의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 사용하여 추출한 추출물인 것을 특징으로 하는, 항산화 또는 항노화용 화장료 조성물.
  8. 제6항에 있어서,
    여주 추출물은 물 및 에탄올의 혼합물을 용매로 사용하여 추출한 추출물인 것을 특징으로 하는, 항산화 또는 항노화용 화장료 조성물.
  9. 제6항에 있어서,
    여주 추출물은 70% 에탄올 추출물을 사용하여 추출한 추출물인 것을 특징으로 하는, 항산화 또는 항노화용 화장료 조성물.
  10. 제6항에 있어서,
    상기 화장료 조성물은 유해 활성산소(free radical) 제거 및 제2철염 감소(Ferric reducing/antioxidant power, FRAP) 중 적어도 하나 이상의 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 항산화 또는 항노화용 화장료 조성물.
  11. 여주 추출물을 헥산, 클로로포름, 에틸 아세테이트로 순차적으로 분획하여 얻은 분획물 중 에틸 아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항노화용 식품.
  12. 제11항에 있어서,
    여주 추출물은 물, C1 내지 C2의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 사용하여 추출한 추출물인 것을 특징으로 하는, 항산화 또는 항노화용 식품.
  13. 제11항에 있어서,
    여주 추출물은 물 및 에탄올의 혼합물을 용매로 사용하여 추출한 추출물인 것을 특징으로 하는, 항산화 또는 항노화용 식품.
  14. 제11항에 있어서,
    여주 추출물은 70% 에탄올 추출물을 사용하여 추출한 추출물인 것을 특징으로 하는, 항산화 또는 항노화용 식품.
  15. 제11항에 있어서,
    상기 식품은 유해 활성산소(free radical) 제거 및 제2철염 감소(Ferric reducing/antioxidant power, FRAP) 중 적어도 하나 이상의 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 항산화 또는 항노화용 식품.
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