KR20160003117A - 산화 스트레스 치료를 위한 킬레이트 나노세리아 - Google Patents

산화 스트레스 치료를 위한 킬레이트 나노세리아 Download PDF

Info

Publication number
KR20160003117A
KR20160003117A KR1020157033653A KR20157033653A KR20160003117A KR 20160003117 A KR20160003117 A KR 20160003117A KR 1020157033653 A KR1020157033653 A KR 1020157033653A KR 20157033653 A KR20157033653 A KR 20157033653A KR 20160003117 A KR20160003117 A KR 20160003117A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
cerium
nanoparticles
acid
reaction mixture
containing nanoparticles
Prior art date
Application number
KR1020157033653A
Other languages
English (en)
Inventor
데이비드 월리스 샌포드
브래드퍼드 미쉘 스타들러
Original Assignee
세리온, 엘엘씨
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 세리온, 엘엘씨 filed Critical 세리온, 엘엘씨
Publication of KR20160003117A publication Critical patent/KR20160003117A/ko

Links

Classifications

    • C01F17/0043—
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/244—Lanthanides; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/5123—Organic compounds, e.g. fats, sugars
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5192—Processes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/02—Muscle relaxants, e.g. for tetanus or cramps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y30/00—Nanotechnology for materials or surface science, e.g. nanocomposites
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C01—INORGANIC CHEMISTRY
    • C01F—COMPOUNDS OF THE METALS BERYLLIUM, MAGNESIUM, ALUMINIUM, CALCIUM, STRONTIUM, BARIUM, RADIUM, THORIUM, OR OF THE RARE-EARTH METALS
    • C01F17/00—Compounds of rare earth metals
    • C01F17/20—Compounds containing only rare earth metals as the metal element
    • C01F17/206—Compounds containing only rare earth metals as the metal element oxide or hydroxide being the only anion
    • C01F17/224—Oxides or hydroxides of lanthanides
    • C01F17/235—Cerium oxides or hydroxides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C01—INORGANIC CHEMISTRY
    • C01P—INDEXING SCHEME RELATING TO STRUCTURAL AND PHYSICAL ASPECTS OF SOLID INORGANIC COMPOUNDS
    • C01P2002/00—Crystal-structural characteristics
    • C01P2002/30—Three-dimensional structures
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C01—INORGANIC CHEMISTRY
    • C01P—INDEXING SCHEME RELATING TO STRUCTURAL AND PHYSICAL ASPECTS OF SOLID INORGANIC COMPOUNDS
    • C01P2002/00—Crystal-structural characteristics
    • C01P2002/60—Compounds characterised by their crystallite size
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C01—INORGANIC CHEMISTRY
    • C01P—INDEXING SCHEME RELATING TO STRUCTURAL AND PHYSICAL ASPECTS OF SOLID INORGANIC COMPOUNDS
    • C01P2002/00—Crystal-structural characteristics
    • C01P2002/70—Crystal-structural characteristics defined by measured X-ray, neutron or electron diffraction data
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C01—INORGANIC CHEMISTRY
    • C01P—INDEXING SCHEME RELATING TO STRUCTURAL AND PHYSICAL ASPECTS OF SOLID INORGANIC COMPOUNDS
    • C01P2002/00—Crystal-structural characteristics
    • C01P2002/70—Crystal-structural characteristics defined by measured X-ray, neutron or electron diffraction data
    • C01P2002/76—Crystal-structural characteristics defined by measured X-ray, neutron or electron diffraction data by a space-group or by other symmetry indications
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C01—INORGANIC CHEMISTRY
    • C01P—INDEXING SCHEME RELATING TO STRUCTURAL AND PHYSICAL ASPECTS OF SOLID INORGANIC COMPOUNDS
    • C01P2004/00—Particle morphology
    • C01P2004/51—Particles with a specific particle size distribution
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C01—INORGANIC CHEMISTRY
    • C01P—INDEXING SCHEME RELATING TO STRUCTURAL AND PHYSICAL ASPECTS OF SOLID INORGANIC COMPOUNDS
    • C01P2004/00—Particle morphology
    • C01P2004/60—Particles characterised by their size
    • C01P2004/64—Nanometer sized, i.e. from 1-100 nanometer
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C01—INORGANIC CHEMISTRY
    • C01P—INDEXING SCHEME RELATING TO STRUCTURAL AND PHYSICAL ASPECTS OF SOLID INORGANIC COMPOUNDS
    • C01P2006/00—Physical properties of inorganic compounds
    • C01P2006/40—Electric properties

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Composite Materials (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Condensed Matter Physics & Semiconductors (AREA)
  • Geology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

생체적합성 안정화제를 갖는 세륨-함유 나노입자를 제조하는 방법으로서, 니트릴로트리아세트산, 에틸렌 글리콜 테트라아세트산 및 디에틸렌트리아민펜타아세트산으로 구성된 군으로부터 선택된 안정화제 (킬레이터), 시트르산, 세륨 이온 및 산화제를 포함하는 수성 반응 혼합물을 제공하고, 이어서 나노입자를 효과적으로 형성하기 위한 가열 단계가 제공되는 방법이 기술된다. 이러한 생체적합성 나노입자는 산화 스트레스 관련 질병 및 사건 예컨대, 허혈성 뇌졸증을 치료하는데 사용될 수 있다.

Description

산화 스트레스 치료를 위한 킬레이트 나노세리아 {CHELATED NANOCERIA FOR THE TREATMENT OF OXIDATIVE STRESS}
관련 출원의 교차-참조
본 특허 출원은 2013년 4월 25일 출원된 가출원 일련 번호 61/854,507인 산화 스트레스의 치료를 위한 안정화된 나노세리아에 대한 우선권을 청구하고 있으며, 이의 기재내용은 그 전체가 본원에 참조로서 통합되었다.
기술분야
본 발명은 일반적으로 나노-의약 분야에서의 개선에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 생체적합성 물질로 제조된 세륨-함유 나노입자, 이러한 나노입자를 제조하는 방법 및 신경퇴행성 질환과 같은 질환을 치료하기 위한 또는 예를 들어, 허혈성 뇌졸증으로부터 발생하는 산화 스트레스로 인한 합병증을 치료하기 위한 이러한 나노입자의 용도에 관한 것이다.
산화 스트레스는 인간의 많은 질병 및 특히, 신경퇴행성 질환의 발병에서 주요 역할을 수행한다. 따라서, 특정 자유 라디칼 종을 감소시킬 수 있는 항산화제로의 처리는 이론적으로 조직 손상을 예방하고 생존 및 신경학적 예후 둘 모두를 개선시킬 수 있다. 생리학적 환경에서 자유 라디칼은 종종 반응성 산소 종 (ROS) 또는 반응성 질소 종 (RNS)으로서 분류될 수 있다. 자유 라디칼은 고도로 반응성인 화학 종이며, 세포하 수준에서 단백질, 지질 및 핵산과 용이하게 반응하여 산화 스트레스 예컨대, 허혈성 뇌졸증을 발생시키는 다양한 질병 및 사건의 진행에 기여한다.
나노-의약에서 나노세리아의 사용 기원은 베일리 (Bailey) 및 르지갈린스키 (Rzigalinski)의 주요 작업으로 거슬러 올라갈 수 있으며, 여기에서 배양물에서 뇌 세포로의 초미세 세륨 옥사이드의 적용은 문헌 [Nanoparticles and Cell Longevity, Technology in Cancer Research & Treatment 4(6), 651-659 (2005)]에 기술된 바와 같이 세포 생존력을 크게 향상시키는 것으로 관찰되었다. 더욱 특히, 시험관내에서 쥐의 뇌 세포 배양물은 르지갈린스키 등의 2003년 9월 4일 출원된 미국 특허 7,534,453에 기술된 바와 같이 역 마이셀 마이크로 에멀젼 기법에 의해 합성된 2-10 나노미터 (nm) 크기 세륨 옥사이드 나노입자로 처리되는 경우 대략 3-4배 더 길게 생존하는 것으로 입증되었다. 과산화수소 또는 자외선 노출에 의해 생성된 치사량의 자유 라디칼에 노출된 배양된 뇌 세포는 세륨 옥사이드 나노입자에 의해 상당히 보호된다. 또한, 세륨 옥사이드 나노입자는 저독성이며 쥐과동물 체내에서 비교적 불활성인 것으로 보고되었다 (예를 들어, 고리 정맥 주입이 독성 효과를 유발하지 않음). 생체내 의약 이점이 보고되지 않았으나, 상처, 이식, 관절염, 관절 질환, 혈관 질환, 조직 노화, 뇌졸증 및 외상 뇌 손상과 관련된 감소된 염증을 포함하여 이들 세리아 나노입자로의 치료에 대한 이점이 상정되었다.
그러나, 이들 특정 나노세리아 입자로 인한 숙주 문제점은 후에 르지갈린스키 등의 WO 2007/002662에 기록되었다. 이러한 역 마이셀 마이크로 에멀젼 기법에 의해 생성된 나노세리아는 여러 문제점을 겪었다: (1) 입자 크기는 보고된 2-10 나노미터 (nm) 범위내에서 잘 제어되지 않아 배치간의 변동성이 높았다; (2) 최종 생성물로의 과정에 사용된 또한, 도쿠세이트 소듐 또는 (AOT)로서 공지된 소듐 비스(에틸헥실)설포석시네이트와 같은 계면활성제의 테일링은 독성 반응을 초래하였다; (3) 계면활성제 테일링의 양의 제어 불능은 이들 나노입자가 생물학적 매질에 위치하는 경우 응집과 관련된 문제를 제기하며, 이는 효율 및 전달가능성 저하를 초래한다; (4) 시간이 지남에 따른 세륨의 원자가 상태 (+3/+4)의 불안정성. 따라서, 역 마이셀 마이크로 에멀젼 기법에 의해 생성된 세륨 옥사이드 나노입자는 배치에 따라 매우 가변성이며, 포유동물 세포에 대해 요망되는 독성보다 높다.
대안으로서, WO 2007/002662에서 르지갈린스키 등은 적어도 3개의 시중 공급원으로부터 수득되는, 고온 기법에 의해 합성된 나노세리아의 생물학적 효능을 기술한다. 세륨 옥사이드 나노입자의 이러한 새로운 공급원은 배치마다 활성의 탁월한 재현성을 제공하는 것으로 보고되었다. 공급원에 상관없이, 작은 크기, 좁은 크기 분포 및 낮은 응집율을 갖는 세륨 옥사이드 입자가 가장 유리한 것으로 추가로 보고되었다. 크기에 있어서, 이러한 기재내용은 입자가 세포 내부로 취해지는 구체예에서, 세포 내로 취해지는 입자의 바람직한 크기 범위는 약 11 nm 내지 약 50 nm, 예컨대, 약 20 nm임을 구체적으로 교시한다. 입자가 세포 외부로부터 세포에서 이들의 효과를 발휘하는 구체예에서, 이들 세포외 입자의 바람직한 크기 범위는 약 11 nm 내지 약 500 nm이다.
이들 발명자들 (르지갈린스키 등)은 또한, 전달을 위해 비-응집된 형태의 나노입자가 유리함을 보고한다. 이를 달성하기 위해, 이들은 약 10 중량%의 스톡액이 초고순도 물로 제조된 일반적 염수 또는 초고순도 물에서 초음파처리될 수 있음을 보고하였다. 그러나, 다른 사람들이 주지하고 있는 바와 같이, 본 발명자들은 고온 기법에 의해 합성된 (예를 들어, 시중의 공급원으로부터 수득된) 나노세리아의 초음파 처리된 수성 분산액은 고도로 불안정하며 빠르게 (즉, 수분 내에) 침전되어, 이들 공급원으로부터 유래된 나노세리아의 수용성 분산액 투여에서 상당한 변동성을 초래함을 관찰하였다.
문헌 [Hardas et al., Toxicological Sciences 116(2), 562-576 (2010)]은 소듐 시트레이트가 생체적합성 안정화제로서 포함되는 문헌 [Masui et al., J. Mater. Sci . Lett. 21, 489-491 (2002)]의 직접 2-단계 열수성 제법에 의해 제조된 나노세리아 수성 분산액의 생물분포 (biodistribution) 및 독성학에 대해 보고하고 있다. 고해상도 TEM은 이러한 형태의 나노세리아가 4-6 nm의 좁은 입자 분포 및 날카로운 모서리를 갖는 결정질 다면체 입자 형태를 지님을 보여줬다. 이러한 시트레이트 안정화된 세리아 나노입자 분산액은 7.35의 생리학적 pH에서 2개월 초과 동안 안정적인 것으로 보고되었다. 따라서, 투여 전에 초음파 처리가 요구되지 않았다.
그러나, 매우 뜻밖에도, 이들은 이전에 연구된 시중에서 공급된 나노세리아 (Aldrich Chemical Co. (Cat. #639648))와 비교하여, 이러한 형태의 시트레이트 안정화된 나노세리아는 더욱 독성이며, 뇌에서 관찰되지 않았으며, 해마 및 소뇌에 대한 산화 스트레스 효과를 거의 발생시키지 않았음을 보고하고 있다.
문헌 [DiFrancesco et al. in commonly assigned PCT/US2007/077545, METHOD OF PREPARING CERIUM DIOXIDE NANOPARTICLES, filed September, 4, 2007]은 생체적합성 안정화제 예컨대, 시트르산 (CA), 락트산, 타르타르산, 글루콘산, 에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA), 및 이들의 조합물의 존재하에 낮은 pH (< 4.5)에서 과산화수소에 의한 세륨 이온의 산화를 기술한다. 특히, 안정화제 락트산 및 락트산과 EDTA의 조합물은 3-8 nm 범위의 평균 입자 크기의 나노세리아의 안정한 분산액을 직접적으로 유도하는 것으로 입증되었다.
문헌 [Reed et al. in commonly assigned US2013/0337083, NANOCERIA FOR THE TREATMENT OF OXIDATIVE STRESS, filed March 15, 2013]은 시트르산 (CA)과 EDTA의 조합물로 제조된 나노세리아로 처리된 마우스에 있어서 해마 세포 스페어링 (sparing)의 공동상승적 증가를 기술하고 있으며, 여기에서 CA/EDTA의 몰비는 3.0 내지 0.1의 범위이다. 만성-진행성 다발성 경화증, 재발 완화형 다발성 경화증, 근육위축가쪽경화증 및 허혈성 재관류 손상의 쥐과 모델에서 질병 진행의 개선 및 운동행동 평가에서의 개선을 유도하였다.
종래에 기술된 바와 같이, 세륨-함유 나노입자의 생체적합성 분산물 및 특히, 시트르산 또는 시트레이트 이온으로 안정화된 생체적합성 분산물을 제조하기 위한 다양한 방법이 보고되었다. 그러나, 예를 들어, 산화 스트레스 관련 질병 및 사건 예컨대, 허혈성 뇌졸증의 영향을 치료하는데 사용된 시트르산 안정화된 세륨-함유 나노입자 분산물의 자유 라디칼 소거능력에 있어서 추가적 개선이 여전히 요구된다.
발명의 요약
본 발명의 일 양태에 따르면, 세륨 이온, 시트르산, 니트릴로트리아세트산, 에틸렌 글리콜 테트라아세트산 및 디에틸렌트리아민펜타아세트산으로 구성된 군으로부터 선택된 안정화제, 산화제 및 물을 포함하는 반응 혼합물을 형성하고; 선택적으로 반응 혼합물을 가열 또는 냉각하여 반응 혼합물 중의 세륨-함유 나노입자의 분산물을 형성시키는 것을 포함하여, 나노입자의 분산물을 제조하는 방법이 제공된다.
본 발명의 제 2 양태에서, 니트릴로트리아세트산, 에틸렌 글리콜 테트라아세트산 및 디에틸렌트리아민펜타아세트산으로 구성된 군으로부터 선택된 안정화제와 시트르산의 혼합물의 존재하에 제조된 세륨-함유 나노입자를 질병 또는 사건의 발병 전, 동안 또는 후에 투여하는 것을 포함하여, 허혈성 뇌졸증과 같은 산화스트레스 관련 질병 또는 사건을 치료하는 방법이 제공된다.
본 발명의 제 3 양태에서, 니트릴로트리아세트산, 에틸렌 글리콜 테트라아세트산 및 디에틸렌트리아민펜타아세트산으로 구성된 군으로부터 선택된 안정화제, 세륨 및 시트르산을 포함하는 나노입자가 제공된다.
발명의 상세한 설명
특별하게 도시되거나 기술되지 않은 성분은 당업자에게 널리 공지된 다양한 형태를 취할 수 있음이 이해되어야 한다. 본 발명의 청구범위에 의해 규정된다.
본 출원에서, 용어 나노입자는 100 nm 미만의 평균 직경을 갖는 입자를 포함한다. 본 기재내용의 목적에 있어서, 달리 언급되지 않는 한, 나노입자의 직경은 이의 유체역학적 직경을 지칭하며, 이는 동적 광 산란 기법에 의해 측정된 직경이며, 입자의 분자 흡착질 및 수반되는 용매화 쉘을 포함한다. 대안적으로, 기하학적 입자 직경은 투과 전자 현미경사진 (TEM)의 분석에 의해 추정될 수 있다.
본 출원에서, 다양한 세륨-함유 물질은 명목상 "세륨 옥사이드" 또는 "세륨 디옥사이드"로 기술된다. 이들 물질에 존재하는 실질적인 산화물 음이온은 옥사이드 음이온 또는 하이드록사이드 음이온, 또는 이들의 혼합물 예컨대, 수화된 옥사이드 상 (예를 들어, 옥시하이드록사이드)를 포함할 수 있음이 화학 기술분야의 당업자에게 이해된다. 또한, 물질의 조성물은 다가 양이온의 고용체로 구성될 수 있으며, 비-화학량론적 고형물로 칭해짐이 공지되어 있다. 따라서, 다중 산화 상태의 금속 양이온으로 구성된 옥사이드 상에 있어서, 벌크 상에 존재하는 산화물 음이온의 총 양은 전하 중립성이 유지되도록 존재하는 특정 양의 다양한 산화 상태의 금속 양이온 (예를 들어, Ce3 + 및 Ce4 +)에 의해 결정될 것임이 이해된다. 금속 디옥사이드로서 명목상 기술된 비-화학량론적 상에 있어서, 화학식 MO2-δ으로 구체화되며, 여기에서 δ (델타)의 값은 변화될 수 있다. 세륨 옥사이드 CeO2 - δ에 있어서, δ (델타)의 값은 전형적으로 약 0.0 내지 약 0.5의 범위이며, 전자는 세륨 (IV) 옥사이드 CeO2를 의미하며, 후자는 세륨 (III) 옥사이드 CeO1 . 5 (대안적으로, Ce2O3를 의미함)를 의미한다. 대안적으로, δ (델타)의 값은 세륨 (IV) 옥사이드 (CeO2)에 비례하여 존재하는 산소 빈자리의 양을 의미한다. 존재하는 각 산소 이음이온 빈자리에 있어서, 2개의 세륨 이온 (Ce3+)이 존재하여 전하 중립성을 보존한다.
본 발명의 일 양태에서, 세륨 이온, 시트르산, 니트릴로트리아세트산, 에틸렌 글리콜 테트라아세트산 및 디에틸렌트리아민펜타아세트산으로 구성된 군으로부터 선택된 안정화제 (킬레이터), 산화제를 포함하는 반응 혼합물을 형성하고, 선택적으로 반응 혼합물을 가열하거나 냉각하여 반응 혼합물 중의 세륨-함유 나노입자의 분산물을 형성하는 것을 포함하여, 나노입자의 분산물을 제조하는 방법이 제공된다.
적어도 하나의 구체예에 따르면, 시트르산 대 안정화제의 몰비는 약 0.1:0.9 내지 약 0.9:0.1, 예컨대, 예를 들어, 약 0.25:0.75 내지 약 0.75:0.25, 또는 약 0.4:0.6 내지 약 0.6:0.4의 범위일 수 있다. 적어도 일 구체예에서, 시트르산 및 안정화제는 약 0.5:0.5의 몰 비로 존재한다.
본 발명의 일 구체예에서, 세륨 이온, 시트르산, 니트릴로트리아세트산, 에틸렌 글리콜 테트라아세트산 및 디에틸렌트리아민펜타아세트산으로 구성된 군으로부터 선택된 안정화제, 산화제 및 물을 포함하는 반응 혼합물을 형성하고; 선택적으로 반응 혼합물을 가열 또는 냉각하고, 나노 입자의 분리 없이 반응 혼합물 중의 세륨-함유 나노입자의 분산물을 직접적으로 형성시키는 것을 포함하여, 나노입자의 분산물을 제조하는 방법이 제공된다.
다양한 구체예에서, 산화제는 분자 산소 (또는 공기의 주위 대기)보다 더 많은 산화시키는 분자를 포함한다. 기타 구체예에서, 산화제는 표준 수소 전극에 비해 -0.13 볼트를 초과하는 수성 반전지 환원 전위를 갖는다. 적어도 일 구체예에서, 산화제는 알칼리 금속 또는 암모늄 퍼클로레이트, 클로레이트, 하이포클로라이트 또는 퍼설페이트; 오존, 퍼옥사이드 또는 이들의 조합물이다. 적어도 일 구체예에서, 2-전자 산화제 예컨대, 과산화수소가 사용된다. 적어도 일 구체예에 따르면, 과산화수소는 세륨 이온 몰량의 이분의 일을 초과하는 양으로 존재한다. 여전히 기타 구체예에서, 존재하는 산화제의 양은 세륨 이온 또는 존재하는 기타 금속 이온의 양과 관련하여 다양하게 변화된다.
적어도 일 구체예에서, 분자 산소는 반응 혼합물을 관통하여 통과한다.
다양한 구체예에서, 반응 혼합물의 온도는 주위 온도보다 높거나 낮다. 적어도 일 구체예에서, 반응 혼합물은 20℃를 초과하는 온도 또는 20℃ 또는 그 미만의 온도로 가열되거나 냉각된다. 다양한 구체예에서, 반응 혼합물은 약 30℃, 약 40℃, 약 50℃, 약 60℃, 약 70℃, 약 80℃ 또는 약 90℃를 초과하는 온도로 가열되거나 냉각된다. 또 다른 구체예에서, 반응 혼합물을 물의 끓는 온도 또는 그 미만의 온도로 가열되거나 냉각된다.
다양한 구체예에서, 형성된 나노입자는 무정형, 반-결정질 또는 결정질이다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "결정질"은 달리 명시되지 않는 한, 적어도 일부 경정질 구조를 갖는 즉, 반-결정질 또는 결정질의 나노입자를 기술하기 위해 사용된다. 적어도 일 구체예에서, 형성된 나노입자는 플루오라이트 입방 결정 구조를 특징으로 한다. 적어도 일 구체예에 따르면, 형성된 나노입자는 세륨 옥사이드 결정 구조를 특징으로 한다.
적어도 일 구체예에서, 형성된 나노입자의 결정도는 반응 혼합물의 가열에 의해 향상된다.
적어도 일 구체예에 따르면, 형성된 나노입자는 반응 혼합물의 가열에 의해 탈수화되거나 탈하이드록실화된다.
다양한 구체예에서, 세륨-함유 나노입자의 분산물은 실질적으로 비-응집된 나노입자, 90% 초과의 비-응집된 나노입자, 95% 초과의 비-응집된 나노입자, 98% 초과의 비-응집된 나노입자, 및 전체적으로 비-응집된 나노입자를 함유한다.
적어도 일 구체예에서, 비-응집된 나노입자는 결정질이며, 대안적으로 단일 입자로서 미결정 또는 개별 미결정으로서 지칭된다.
다양한 구체예에서, 형성된 나노입자는 100 nm 미만, 20 nm 미만, 10 nm 미만, 5.0 nm 미만, 3.0 nm 미만 또는 약 2.0 nm 미만의 유체역학적 직경을 갖는 반면, 약 1.0 nm 초과의 유체역학적 직경을 갖는다.
적어도 일 구체예에서, 세륨을 포함하는 나노입자가 제공된다. 기타 구체예에서, 세륨 옥사이드, 세륨 하이드록사이드 또는 세륨 옥시하이드록사이드를 포함하는 나노입자가 제공된다.
적어도 일 구체예에 따르면, 세륨, 시트르산, 및 니트릴로트리아세트산, 에틸렌 글리콜 테트라아세트산 및 디에틸렌트리아민펜타아세트산으로 구성된 군으로부터 선택된 안정화제를 포함하는 나노입자가 제공된다.
다양한 구체예에서, 형성된 나노입자 분산물은 약 -30 mV 내지 약 +30 mV 범위의 제타 전위를 특징으로 한다. 적어도 하나의 구체예에서, 나노입자 분산물의 제타 전위는 약 -15 mV 내지 약 -30 mV 범위이다.
기타 구체예에서, 나노입자의 제타 전위는 나노입자 분산물의 pH를 조절하거나, 안정화제 (예를 들어, 시트르산, 니트릴로트리아세트산, 에틸렌 글리콜 테트라아세트산 또는 디에틸렌트리아민펜타아세트산) 내용물의 유형 및 양을 포화 범위 미만으로 조절하거나 또는 이 둘 모두에 의해 변화된다.
적어도 일 구체예에서, 형성된 나노입자 분산물은 세척되어 과량의 이온 또는 부산물 염이 제거된다. 다양한 구체예에서, 나노입자 분산물은 이온 전도도가 센티미터당 약 15 밀리지멘스 (mS/cm) 미만, 약 10 mS/cm 미만, 약 5 mS/cm 미만 또는 약 3 mS/cm 미만으로 감소되도록 세척된다. 다양한 구체예에서, 형성된 나노입자 분산물은 투석 또는 투석여과에 의해 세척된다.
적어도 일 구체예에 따르면, 형성된 나노입자 분산물이 농축되어 과량의 용매 또는 과량의 물이 제거된다. 다양한 구체예에서, 나노입자 분산물은 투석여과 또는 원심분리에 의해 농축된다.
다양한 구체예에서, 분산물 중의 나노입자의 농도는 약 0.05 몰 초과, 약 0.5 몰 초과 또는 약 2.0 몰 초과 (해당 분산물 중의 대략 35% 고형물)이다.
다양한 구체예에서, 나노입자의 크기 분포는 실질적으로 단일모드이다. 기타 구체예에서, 나노입자 크기는 약 30% 미만, 약 25% 미만, 약 20% 미만, 약 15% 미만, 약 10% 미만 또는 약 5% 미만의 변동계수 (COV)를 가지며, COV는 평균에 의해 나눠진 평균 편차로서 정의된다.
다양한 구체예에서, 세륨-함유 나노입자의 분산물은 입증된 바와 같이 예를 들어, 투명 액체 외형을 유지함으로써 3개월 초과, 6개월 초과, 9개월 초과, 12개월 초과, 및 16개월 초과 동안 입자 응집 및 침전에 대해 안정적이다.
다양한 구체예에서, 반응 혼합물은 배치 반응기, 연속 반응기 또는 콜로이드 밀에서 형성된다. 적어도 일 구체예에서, 연속 반응기는 연속-교반-탱크 반응기 또는 플러그-흐름 반응기이다.
적어도 일 구체예에서, 혼합기는 반응물을 진탕시키고 혼합하는데 사용될 수 있다. 다양한 구체예에서, 교반 막대, 마린 블레이드 프로펠러 (marine blade propeller), 피치 블레이드 터빈 (pitch blade turbine) 또는 플랫 블레이드 터빈 (flat blade turbine)을 포함하는 혼합기가 사용된다. 적어도 일 구체예에서, 스크린을 통해 반응 혼합물이 통과되게 하는 고전단 혼합기로서, 밀리미터 내지 수 밀리미터의 분획 크기로 구멍이 다양한 혼합기가 사용된다.
생리학적 pH는 전형적으로 약 7.2 내지 약 7.4의 범위이다.
어떠한 이론에 의해 제한되지 않으면서, 염증 및 산화 스트레스 관련 질병 (예를 들어, ROS 매개된 질병)의 치료를 위한 세륨 옥사이드의 제안된 사용은 부분적으로, 세륨 옥사이드가 자유 라디칼의 촉매작용적 스캐빈저로서 작용할 수 있다는 생각에 기반을 두고 있다. Ce3 + 및 Ce4 + 원자가 상태의 혼합물에서 세륨의 존재 및 용이한 상호전환은 세륨 옥사이드가 자유 라디칼을 덜 해로운 종으로 촉매적 또는 자가-재생적 방식으로 환원 및/또는 산화시킬 수 있게 한다. 산화환원 반응은 조직-손상 자유 라디칼을 중화시키는 세륨 옥사이드 나노입자 (CeNP)의 표면 상에서 발생할 수 있다. 예를 들어, 슈퍼옥사이드 음이온 (O2-)을 분자 산소로 산화시키고, 퍼옥시니트라이트 음이온 (ONOO-)을 생리학적 양성 종으로 산화시키고, 하이드록실 라디칼 (ㆍOH)을 하이드록사이드 음이온으로 환원시키는 것이 바람직한 것으로 여겨진다. 이어서, 이는 예를 들어, 산화 스트레스 관련 질병 및 사건을 치료하기 위해 현재 이용가능한 희생 항산화제와 비교하여 현저하게 감소된 투약 요법을 가능하게 할 수 있다.
적어도 일 구체예에서, 본 발명의 투여된 나노세리아 입자는 세포 막을 통해 세포 내부에 취해지고 세포 세포질 또는 다양한 세포 기관 예컨대, 핵 및 미토콘드리아에 위치하게 된다. 기타 구체예에서, 본 발명의 나노세리아 입자는 혈관내 또는 간질 공간에 존재하게 되며, 여기에서 이들은 자유 라디칼을 제거하거나 자가면역 반응을 감소시킴으로써 산화 스트레스 및 염증을 감소시킬 수 있다. 적어도 일 구체예에서, 혈액-뇌 장벽 (BBB) 또는 혈액-뇌척수액 장벽 (BCFB) 또는 혈액-안구 장벽 (BOB)의 파괴로부터 발생한 중추신경계의 면역계 침범은 본 발명의 나노세리아 입자에 의해 조절된다.
또 다른 구체예에서, 본 발명의 나노세리아 입자는 포유동물 혈액 뇌 장벽을 가로지를 수 있는 입자이다. 다양한 구체예에서, 본 발명의 나노세리아 입자는 포유동물 핵액 뇌 장벽을 가로지르며 약 100 nm 미만, 약 50 nm 미만, 약 20 nm 미만, 약 10 nm 미만, 약 5 nm 미만 크기의 응집물 또는 덩어리로서 뇌 실질 조직에 위치하게 된다. 적어도 일 구체예에서, 본 발명의 나노세리아 입자는 포유동물 혈액 뇌 장벽을 가로지르며 약 3.5 nm 미만 크기의 독립된 비-응집 나노입자로서 뇌 실질 조직에 위치하게 된다.
적어도 일 구체예에서, 본 발명의 나노세리아 입자를 포함하는 약제 조성물이 산화 스트레스 관련 질병 및 사건, 예컨대, 비제한적으로, 특히, 알츠하이머병, 파킨슨병, 헌팅턴병, 근육위축가쪽경화증 (ALS), 실조, 프리이드라이히실조, 자폐증, 강박장애, 주의력결핍 과다활동장애, 편두통, 뇌졸증, 외상 뇌 손상, 암, 염증, 자가면역 질환, 루푸스, 다발성 경화증 (MS), 염증성 장 질환, 크론병, 궤양성 결장염, 협착증, 재협착, 죽상경화증, 대사 증후군, 내피 기능장애, 혈관연축, 당뇨병, 노화, 만성 피로, 관상동맥 심질환, 심장 섬유증, 심근 경색증, 고혈압, 협심증, 프리즈메탈 협심증, 허혈, 혈관성형, 저산소증, 케샨병, 글루코스-6-포스페이트 탈수소효소 결핍증, 잠두중독증, 허혈성 재관류 손상, 류마티스 및 골-관절염, 천식, 만성 폐쇄성 폐질환 (예를 들어, 폐기종 및 기관지염), 알레르기, 급성 호흡 곤란 증후군, 만성 신장병, 신장 이식, 신장염, 이온화 방사선 손상, 일광화상, 피부염, 흑색종, 건선, 황반변성, 망막 변성, 백내장발생증의 예방 및/또는 치료에 특별히 고려된다.
다양한 구체예에 따르면, 본 발명의 나노세리아 입자를 포함하는 약제 조성물은 산화 스트레스 관련 세포 병리 예컨대, 비제한적으로, 미토콘드리아 기능이상, 리소좀 및 프로테아좀 기능이상, 핵산 (예를 들어, RNA 및 DNA)의 산화, 티로신 질화, 인산화 매개된 시그널링 캐스케이드의 손실, 아폽토시스의 개시, 지질 과산화 및 막 지질 환경의 파괴의 예방 및/또는 치료에 특별히 고려된다.
다양한 구체예에서, 본 발명의 나노세리아 입자를 포함하는 약제 조성물은 인간 또는 비-인간 대상체 예컨대, 비제한적으로, 개, 고양이, 소, 말, 양, 돼지 또는 설치류를 포함하는 또 다른 포유동물에 투여된다. 대안적으로, 투여 대상체는 동물 예컨대, 조류, 곤충, 파충류, 양서류, 또는 임의의 반려 동물 또는 농업용 가축일 수 있다.
다양한 구체예에서, 본 발명의 나노세리아 입자는 국소, 장관, 또는 주사, 주입 또는 이식을 포함하는 비경구 방법에 의해 대상체에 생체내에서 투여된다. 더욱 특히, 임의의 하기 경로에 의해 본 발명의 나노세리아 입자를 투여하는 것히 특히 고려된다: 귀 (귀 (otic)), 구강, 결막, 피부, 치아, 전기-삼투, 자궁경내막, 동내막 (endosinusial), 기관내, 장관, 경막외, 양막외, 체외, 혈액투석, 침윤, 간질, 복강내, 양막내, 동맥내, 담즙내, 기관지내, 점액낭내, 심장내, 연골내, 꼬리내, 해면정맥동내, 강내, 뇌내, 수조내, 치관내, 치관-치아내, 심장내, 해면체내, 피부내, 층판내, 관내(intraductal), 십이지장내, 경막내, 표피내, 식도내, 위내, 잇몸내, 돌창자내, 병변내, 관내(intraluminal), 림프내, 골수내, 뇌막내, 근육내, 안구내, 난소내, 심막내, 복강내, 흉막내, 전립선내, 폐내, 인트라시날(intrasinal), 척수강내, 윤활막내, 건내, 고환내, 수막강내, 흉곽내, 관내(intratubular), 종양내, 고실내, 자궁내, 혈관내, 정맥내, 정맥내 대량, 정맥내 점적, 심실내, 방광내, 유리체내, 이온이동법, 관류(irrigation), 후두, 코, 코위, 밀봉붕대요법, 안구, 경구, 입인두, 비경구, 경피, 관절주위, 경막외, 신경주위, 치주, 직장, 호흡 (흡입), 안구후, 연조직, 거미막밑, 결막하, 피하, 설하, 점막밑, 국부, 경피, 유방경유(transmammary), 점막관통, 경태반, 경기관, 고실경유(transtympanic), 요관, 요도, 질 및 임의의 기타 또는 비할당된 경로.
기타 구체예에서, 본 발명의 나노세리아 입자는 의료 장치 또는 인공 기관 예컨대, 캐뉼라, 카테터 또는 스텐트의 내부 또는 상에 보유되어 단기간 또는 장기간에 걸쳐 염증을 국소적으로 또는 전신적으로 감소시킨다.
다양한 구체예에서, 본 발명의 나노세리아 입자는 비제한적으로, 현탁액, 겔, 정제, 장피복정, 로딩된 리포좀, 분말, 좌약, 주입물(infusible), 로젠지, 크림, 로션, 고안 또는 흡입제를 포함하는 당해분야에 공지된 임의의 적합한 형태로 전달된다.
다양한 구체예에서, 본 발명의 나노세리아 입자는 기타 약제학적으로 허용되는 물질 예컨대, 비제한적으로, 물, 염, 완충제, 인산염 완충된 염수 (PBS), 당, 인간 또는 소 혈청 알부민, 지질, 약물, 착색제, 향미료, 결합제, 검, 계면활성제, 충전제 또는 당업계에 공지된 임의의 부형제와 조합된다.
적어도 일 구체예에서, 본 발명의 나노세리아 입자를 포함하는 비히클은 투여 전에 멸균된다.
기타 구체예에서, 세포 또는 세포 배양물은 본 발명의 나노세리아 입자 또는 입자들과 접촉된다. 접촉은 시험관내 또는 생체외 방법에 의해 세포 또는 세포 배양물을 노출시킴으로써 실시될 수 있으며, 여기에서 후자 방법은 처리된 세포 또는 세포들을 대상체 예컨대, 세포 또는 세포들이 원래 수득되었던 대상체 내로 재도입시키는 것을 포함한다. 다양한 구체예에서, 세포는 천연의 원핵세포 또는 진핵세포이다. 적어도 일 구체예에서, 처리된 세포는 생물 예컨대, 비제한적으로, 항원, 항체 및 백신으로서 일반적으로 공지된 약제 산업에서 사용된 단백질의 생산에 사용된다. 또 다른 구체예에서, 처리된 세포는 발효 공정에 사용된다.
본 발명은 하기 실시예에 의해 추가로 설명되며, 이는 어떠한 방식으로든 본 발명을 제한하고자 하는 것은 아니다.
실험 단락
나노입자 산란 및 크기 평가
입자 분산물의 단순 정성적 특성결정은 순수 용매의 샘플로부터 산란되는 양과 비교하여, 적색 레이저 펜 라이트로 비출경우 분산물에 의해 나타나는 Tyndell 산란 정도를 평가함으로써 수행하였다. 나노입자 분산물의 입자 크기의 정량적 평가는 석영 큐벳이 장착된 Brookhaven 90Plus Particle Size Analyzer (Brookhaven Instruments Corp., Holtzville, New York, U.S.A.)를 이용한 동적 광 산란 (DLS)에 의해 수행되었다. 기록된 DLS 크기는 대수정규 수 가중 변수 (lognormal number weighted parameter)이다.
나노입자 전하 평가
나노입자 전하의 정량적 평가는 Malvern Instruments로부터의 Zetasizer Nano ZS을 사용한 제타 전위를 측정함으로써 수행하였다.
실시예 1: 세륨 및 시트르산을 갖는 나노입자의 제조
자석 교반 막대를 함유하는 800ml 유리 비이커에 500 ml의 고순도 (HP) 물을 도입하였다. 이어서, 물을 약 70℃로 가열하고 여기에 4.83 그램의 시트르산 (CA)을 용해하였다. 암모늄 하이드록사이드 (28-30 %)를 첨가하여 용액의 pH를 약 8.5로 조절하였다. 반응 용기의 온도를 약 80℃로 증가시켰다. 10.0 gm 정량의 Ce(NO3)3 ㆍ6(H2O)를 30 ml의 HP 물에 용해시키고, 이 용액을 수분에 걸쳐 교반된 반응 혼합물에 서서히 첨가하였다. 이러한 방식으로, 등몰량의 CA 및 Ce를 반응 혼합물에 첨가하였다. 그 후, 4.8 ml의 50% H2O2 (세륨에 대한 H2O2의 몰비 3.0)를 함유하는 50 ml 용액을 세륨 이온과 시트르산의 등몰 반응 혼합물에 수분에 걸쳐 서서히 첨가하였다. 반응 생성물을 회수하고 이어서 추가적 시간 동안 가열시켜 투명한 황색 현탁액을 수득하였다. 교반하면서 냉각시킨 후, 바로 형성된 나노입자 분산액을 약 10 mS/cm 미만의 이온 전도도로 투석여과에 의해 세척하여 과량의 염을 제거하였다.
최종 생성물 분산액은 저밀도 LASER 빔으로 비출 경우 고수준의 Tyndall 산란을 나타내는 투명확 황색 액체였으며, 이는 이러한 액체가 잘 분산된 콜로이드 입자를 함유함을 나타낸다. 동적 광 산란에 의한 입자 크기 분석은 7.8 nm의 평균 유체역학적 직경을 나타내었다. X-선 회절 (XRD) 스펙트럼 분석은 플루오라이트 입방 구조를 특징으로 하는 CeO2 (PDF # 34-394, 세리아나이트)를 갖는 주요 결정질 상 이소-구조의 존재를 나타내었다. 2.0 nm의 평균 미결정 크기는 Scherrer 방법을 이용하여 (220) 피크 폭의 분석에 의해 결정되었다.
실시예 2: 세륨, 시트르산 및 DCTA를 갖는 나노입자의 제조
자석 교반 막대를 함유하는 600ml 유리 비이커에 500 ml의 고순도 (HP) 물을 도입하였다. 2.41 gm 정량의 시트르산 (CA)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 4.264 gm 정량의 1,2-디아미노사이클로헥산테트라아세트산 모노하이드레이트 (DCTA)를 용해를 돕기 위한 약 6 ml의 암모늄 하이드록사이드와 함께 물에 용해시키고 반응 혼합물에 첨가하였다. 암모늄 하이드록사이드 (28-30 %)를 첨가하여 용액의 pH를 약 8.5로 조절하였다. 10.0 gm 정량의 Ce(NO3)3ㆍ6(H2O)를 첨가하였다. CA/DCTA/Ce의 몰비는 0.5/0.5/1.0이다. 이어서, 4.8 gm의 50% H2O2 (세륨 이온에 대한 H2O2의 몰비 3.0)를 함유하는 10 ml의 용액을 세륨, 시트르산 및 DCTA 용액 혼합물에 서서히 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 1시간 동안 80℃에서 가열하였다. 교반하면서 냉각시킨 후, 바로 형성된 나노입자 분산액을 투석여과에 의해 약 10 mS/cm 미만의 이온 전도도로 세척하여 과량의 염을 제거하였다.
냉각 후, 최종 생성물 분산액은 저밀도 LASER 빔으로 비출 경우 고수준의 Tyndall 산란을 나타내는 투명한 밝은 오렌지색 액체였으며, 이는 이러한 액체가 잘 분산된 콜로이드 입자를 함유함을 나타낸다. 동적 광 산란에 의한 입자 크기 분석은 2.6 nm의 유체역학적 직경과 0.227의 다분산도를 나타내었다. X-선 회절 (XRD) 스펙트럼의 분석은 플루오라이트 입방 구조를 특징으로 하는 CeO2 (PDF # 34-394, 세리아나이트)를 갖는 주요 결정질 상 이소-구조의 존재를 나타내었다. 1.9 nm의 평균 미결정 크기는 Scherrer 방법을 이용하여 (220) 피크 폭의 분석에 의해 결정되었다.
실시예 3: 세륨, 시트르산 및 NTA를 갖는 나노입자의 제조
자석 교반 막대를 함유하는 600ml 유리 비이커에 500 ml의 고순도 (HP) 물을 도입하였다. 2.41 gm 정량의 시트르산 (CA)을 반응 혼합물에 첨가하였다. 3.129 gm 정량의 2,2',2"-니트릴로트리아세트산 (NTA, CAS No. 139-13-9)을 용해를 돕기 위한 암모늄 하이드록사이드와 함께 물 중에 용해시키고 반응 혼합물에 첨가하였다. 암모늄 하이드록사이드 (28-30 %)를 첨가하여 용액의 pH를 약 8.5로 조절하였다. 10.0 gm 정량의 Ce(NO3)3 ㆍ6(H2O)를 첨가하였다. CA/NTA/Ce의 몰비는 0.5/0.5/1.0이다. 이어서, 4.8 gm의 50% H2O2 (세륨 이온에 대한 H2O2의 몰비 3.0)를 함유하는 10 ml 용액을 세륨, 시트르산 및 NTA 용액 혼합물에 서서히 첨가하였다. 이어서, 반응 생성물을 1시간 동안 80℃에서 가열하였다. 교반하면서 냉각시킨 후, 바로 형성된 나노입자 분산액을 약 10 mS/cm 미만의 이온 전도도로 투석여과에 의해 세척하여 과량의 염을 제거하였다.
최종 생성물 분산액은 저밀도 LASER 빔으로 비출 경우 고수준의 Tyndall 산란을 나타내는 투명한 황색 액체였으며, 이는 이러한 액체가 잘 분산된 콜로이드 입자를 함유함을 나타낸다. 동적 광 산란에 의한 입자 크기 분석은 2.8 nm의 유체역학적 직경 및 0.264의 다분산도를 나타내었다.
실시예 4: 세륨, 시트르산 및 EGTA를 갖는 나노입자의 제조
자석 교반 막대를 함유하는 600ml 유리 비이커에 500 ml의 고순도 (HP) 물을 도입하였다. 2.41 gm 정량의 시트르산 (CA)을 반응 혼합물에 첨가하였다. 4.497 gm 정량의 에틸렌 글리콜 테트라아세트산 (EGTA, CAS No. 67-42-5)을 용해를 돕기 위한 암모늄 하이드록사이드와 함께 물 중에 용해시키고 반응 혼합물에 첨가하였다. 암모늄 하이드록사이드 (28-30 %)를 첨가하여 용액의 pH를 약 8.5로 조절하였다. 10.0 gm 정량의 Ce(NO3)3 ㆍ6(H2O)를 첨가하였다. CA/EGTA/Ce의 몰비는 0.5/0.5/1.0이다. 이어서, 4.8 gm의 50% H2O2 (세륨 이온에 대한 H2O2의 몰비 3.0)를 함유하는 10 ml 용액을 세륨, 시트르산 및 EGTA 용액 혼합물에 서서히 첨가하였다. 이어서, 반응 생성물을 1시간 동안 70℃에서 가열하였다. 교반하면서 냉각시킨 후, 바로 형성된 나노입자 분산액을 약 10 mS/cm 미만의 이온 전도도로 투석여과에 의해 세척하여 과량의 염을 제거하였다.
최종 생성물 분산액은 저밀도 LASER 빔으로 비출 경우 고수준의 Tyndall 산란을 나타내는 투명한 오렌지색 액체였으며, 이는 이러한 액체가 잘 분산된 콜로이드 입자를 함유함을 나타낸다. 동적 광 산란에 의한 입자 크기 분석은 8.5 nm의 유체역학적 직경 및 0.393의 다분산도를 나타내었다.
실시예 5: 세륨, 시트르산 및 DTPA를 갖는 나노입자의 제조
자석 교반 막대를 함유하는 600ml 유리 비이커에 500 ml의 고순도 (HP) 물을 도입하였다. 2.89 gm 정량의 시트르산 (CA)을 반응 혼합물에 첨가하였다. 3.606 gm 정량의 디에틸렌트리아민펜타아세트산 (DTPA, CAS No. 67-43-6)을 반응 혼합물에 첨가하였다. 암모늄 하이드록사이드 (28-30 %)를 첨가하여 용액의 pH를 약 8.5로 조절하였다. 10.0 gm 정량의 Ce(NO3)3 ㆍ6(H2O)를 첨가하였다. CA/DTPA/Ce의 몰비는 0.6/0.4/1.0이다. 이어서, 4.8 gm의 50% H2O2 (세륨 이온에 대한 H2O2의 몰비 3.0)를 함유하는 10 ml 용액을 세륨, 시트르산 및 DTPA 용액 혼합물에 서서히 첨가하였다. 이어서, 반응 생성물을 1시간 동안 80℃에서 가열하였다. 교반하면서 냉각시킨 후, 바로 형성된 나노입자 분산액을 약 10 mS/cm 미만의 이온 전도도로 투석여과에 의해 세척하여 과량의 염을 제거하였다.
최종 생성물 분산액은 저밀도 LASER 빔으로 비출 경우 고수준의 Tyndall 산란을 나타내는 투명한 적색 액체였으며, 이는 이러한 액체가 잘 분산된 콜로이드 입자를 함유함을 나타낸다. 동적 광 산란에 의한 입자 크기 분석은 2.4 nm의 유체역학적 직경 및 0.212의 다분산도를 나타내었다. X-선 회절 (XRD) 스펙트럼의 분석은 플루오라이트 입방 구조를 특징으로 하는 CeO2 (PDF # 34-394, 세리아나이트)를 갖는 주요 결정질 상 이소-구조의 존재를 나타내었다. 2.1 nm의 평균 미결정 크기는 Scherrer 방법을 이용하여 (220) 피크 폭의 분석에 의해 결정되었다.
최종 생성물 분산액의 샘플을 주위 온도 및 압력에서 16개월을 초과하는 장기간 동안 어둠하에서 저장하였으며, 액체 선명도에 있어서 변화는 없었으며 입자 유체역학적 직경 및 다분산도에 있어서 변화가 없었다.
허혈성 뇌졸증 쥐과 모델에서 안정화된 나노세리아의 평가
산화 스트레스를 감소시키는 세륨-함유 나노입자 (예를 들어, 나노세리아)의 능력을 문헌 [Estevez, AY; et al., Neuroprotective mechanisms of cerium oxide nanoparticles in a mouse hippocampal brain slice model of ischemia, Free Radic . Biol . Med . (2011)51(6):1155-63 (doi:10.1016/j.radbiomed.2011.06.006)]에 기술된 허혈의 시험관내 마우스 해마 뇌 슬라이스 모델을 변형시켜 평가하였다.
성체 (2-5개월령) CD1 마우스를 신속한 단두를 통해 희생시키고 이들의 뇌를 신속하게 제거하고 24 mM 콜린 바이카보네이트, 135 mM 콜린 클로라이드, 1 mM 키누렌산, 0.5 mM CaCl2, 1.4 mM Na2PO4, 10 mM 글루코스, 1 mM KCl, 및 20 mM MgCl2 (315 mOsm)을 함유하는 냉각된 콜린-기반 슬라이싱 용액에 넣었다. 400㎛ 두께의 횡단 해마 슬라이스를 Leica VT1200 Vibratome (Leica Microsystems, Wetzlar, Germany)를 사용하여 두측 축에서 미측 축을 따라 절단하고 (-1.2 내지 -2.8 mm Bregma), 124 mM NaCl, 3 mM KCl, 2.4 mM CaCl2, 1.3 mM MgSO4, 1.24 mM K3PO4, 26 mM NaHCO3, 10 mM 글루코스를 함유하는 대조군 인공 뇌 척수액 (aCSF)에서 1hr 동안 회복시키고, 5% CO2, 95% O2 가스 (pH 7.4, 300 mOsm)로 버블링시켰다. 해마 슬라이스를 배양 디쉬에 넣고 37℃에서 5% CO2를 지닌 NuAire 습화된 인큐베이터 (NuAire, Plymouth, MN, USA)에서 48시간 이하 동안 저장하였다.
37℃에서 30분 동안 저혈당, 산성 및 저산소 aCSF (글루코스 및 pH는 각각 2mM 및 6.8로 저하시키고, 용액을 84% N2, 15% CO2, 및 1% O2로 버블링시킴)에 뇌 슬라이스에 넣어서 허혈로부터의 산화 스트레스를 유도하였다. 수크로스를 첨가하여 약 295 mOsm에서 용액의 삼투압몰농도를 유지시켰다.
상기 실시예 1-5에 기술된 바와 같이 제조된 세륨-함유 나노입자의 수성 분산액을 허혈성 사건의 발병시 1 ml aCSF 또는 배지 당 1㎍ (5.8μM에 등가량)의 전달 용적의 매칭된 정량으로 투여하고, 상기 분산액을 나머지 실험에 걸쳐 배지중에 유지시켰다. 대조군 슬라이스에 동일 용적의 비히클 대조군을 투여하였다. 다양한 전달 비히클을 사용하였으며, 증류수 단독, 염수액, Na-시트레이트 용액, PBS, 및 이들의 조합물을 포함하는 본원에 기술된 바와 같이 제조된 세륨 옥사이드 나노입자에 있어서 유사하게 성공적이었다.
산화 스트레스 (허혈성 조건)에 30분 노출시킨 후, 생 뇌 슬라이스 (평가 및 대조군)을 배양 배지 및 Millipore 불활성물 (Millipore, Billerica, MA, USA)을 함유하는 35 mm 배양 디쉬에 넣어서 기관형 배양에서 24hr 동안 인큐베이션하였다. 배양 배지는 50% 최소 필수 배지 (Hyclone Scientific, Logan UT, USA), 25% 말 혈청, 25% 행크의 평형염액 (28 mM 글루코스, 20 mM HEPES 및 4 mM NaHCO3이 보충됨), 50 U/ml 페니실린, 및 50 ㎕/ml 스트렙토마이신 (pH 7.2)을 함유하였다.
형광 이미징 기법을 사용하여 산화 상해 후 24시간에 세포 치사 정도를 측정하였다. 평가 조건 (즉, 세륨-함유 나노입자가 투여됨)에서 연구된 각 세트의 뇌 슬라이스를 비히클 단독 투여한 것을 제외하고는 모든 방식에 있어서 동일하게 처리된 유사한 세트의 대조군 뇌 슬라이스와 매칭시켰다. 따라서, 각 연구 일에, 연령 매칭되고 성별 매칭된 한배 새끼로부터 취해진 자동 매칭된 뇌 슬라이스 2 세트를 평가 조건 (세륨-함유 나노입자 투여) 또는 대조군 (비히클 단독)으로 처리하였다. 형광 이미징 측정 동안, 광세기, 이미지 캡쳐 기간 및 이미지 수집 타이밍은 평가 조건 및 비히클 대조군 뇌 슬라이스에 있어서 동일하였다. 결과는 실험 순서 상 동일한 시점에서 이미지화된 매칭된 대조군 슬라이스에서의 형광에 대한 평가 조건에서의 형광의 비로서 표현하였다.
산화 상해 후 24시간째에, 쌍을 이룬 (대조군 및 평가) 뇌 슬라이스를 0.81 μM 바이탈 배제 염료 SYTOX® Green (Invitrogen, Carlbad, CA, USA)를 함유하는 배양 배지에서 20분 동안 인큐베이션하고, 후속하여 배양 배지에서 15-20분 동안 세척하여 비혼입된 염료를 제거하였다. SYTOX® Green은 DNA 및 RNA에 결합하는 형광 염료이다. 그러나, 이는 온전한 생존가능한 세포에서 세포 막에 의해 세포 핵으로부터 배제된다. 따라서, 이는 바이탈 염료로서 작용하며, 세포 막이 투과가능하여 염료가 세포 내부에 접근가능하게 된 죽은 세포 및 죽어가는 세포만을 염색한다. 염색 및 세척 후, 뇌 슬라이스를 형광 부착물 (epifluoresence attachment) 및 150-W 제논 광원 (Optiquip, Highland Mills, NY, USA)이 장착된 Nikon TE 2000-U (Nikon Instruments, Melville, NY, USA) 현미경의 스테이지로 옮겼다. 95% O2/5% CO2로 평형화된 대조군 aCSF 용액을 60-ml 주사기 내로 로딩하고, 서보(servo)-제어된 주사기 히터 블록, 스테이지 히터 및 인-라인 관류 히터를 사용하여 37℃로 가열하였다 (Warner Instruments, Hamden, CT, USA). 뇌 단편을 가온되고 95% O2/5% CO2 평형화된 aCSF로 분당 1ml의 속도로 계속해서 관류시켰다. 5분 후, 각 대조군 및 평가 뇌 슬라이스의 해마 형성물의 이미지를 동일한 조건 (즉, 광세기, 노출 시간, 카메라 취득 변수) 하에 4x Plan Flour 대물렌즈(Nikon Instruments)를 사용하여 수집하였다. 480 ± 40 nm에서 조직을 간단히 (620 ms) 흥분시키고, 505 nm의 롱-패스 이색성 거울 (long-pass, dichroic mirror)(Chroma technology, Bennington, VT, USA)를 사용하여 프로브로부터 방사된 형광 (535 ± 50 nm)을 여과하고, 증폭시키고, 냉각된 CCD 게인 EM 카메라 (CCD gain EM camera) (Hamamatsu CCD EM C9100; Bridgewater, NJ, USA)를 사용하여 측정함으로써 SYTOX® Green 형광을 측정하였다. 디지탈 이미지를 Compix SimplePCI 6.5 소프트웨어 (C Imaging Systems, Cranberry Township, PA, USA)를 사용하여 획득하고 처리하였다.
SYTOX® Green 로딩으로부터 발생하는 광세기는 계산된 영역 내에서 죽거나 죽어가는 세포의 수를 반영하였다. 광세기 측정을 Compix SimplePCI 6.5 소프트웨어를 사용하여 자동으로 수행하여, 관심 영역 선택에서 실험자 편향을 제거하였다.
세포 치사 감소는, 슬라이싱되고 같은 날에 허혈성 산화 스트레스에 노출되고, 허혈성 발작 후 24 hr에 형과 이미지화된, 연령 매칭되고 성별 매칭된 한배새끼 뇌로부터 취해진 자동 매칭 해마 단편에 있어서, 대조군 (비처리됨)에 대한 시험 조건 (즉, 처리된 나노세리아)의 코르누 암모니 필드(지향층, 방사층 및 소강 분자)로부터의 SYTOX® Green 형광 광밀도의 비로서 보고하였다.
실시예 1-5에서 기술된 바와 같이 제조된 시트르산 및 DCTA, NTA, EGTA 또는 DTPA중 하나를 포함하는 생체적합성 안정화제의 혼합물로 제조된 세륨-함유 나노입자 및 시트르산 안정화제 단독으로 제조된 세륨-함유 나노입자를 5.8μM의 처리 농도를 이용하여 허혈성 뇌졸증의 마우스 해마 뇌 슬라이스 모델에서 평가하였다. 나노입자 안정화제에 따른, 스페어링으로서 보통 칭해지는 세포 치사 감소 결과 (대조군 대비 감소율)을 하기 표 1에 제시하였다.
나노입자 공급원 안정화제(들) DLS (nm) 스페어링 비고
실시예 1 CA 7.8 15.5% 비교
실시예 2 CA/ DCTA 2.6 14.2% 비교
실시예 3 CA/NTA 2.8 17.0% 본 발명
실시예 4 CA/EGTA 8.5 23.3% 본 발명
실시예 5 CA/DTPA 2.4 34.0% 본 발명
상기 표 1에 제시된 결과는 세륨-함유 나노입자가 시트르산 (CA)과 NTA, EGTA 또는 DPTA의 조합물로 제조되는 경우 스페어링에서의 개선 (즉, 세포 치사에서의 더 큰 감소)이 발생하였음을 나타낸다.
본 발명은 다양한 특정 구체예를 참조로 기술되었으나, 기술된 본 발명의 개념의 사상 및 범주 내에서 많은 변화가 이루어질 수 있음을 이해해야 한다. 따라서, 본 발명을 기술된 구체예로 제한하고자 하는 것이 아니며, 청구범위에 의해 규정되는 전체 범위를 지닐 것이다.

Claims (15)

  1. a. 세륨 이온, 시트르산, 안정화제, 산화제 및 물을 포함하는 반응 혼합물을 형성시키는 단계로서, 안정화제가 니트릴로트리아세트산, 에틸렌 글리콜 테트라아세트산 및 디에틸렌트리아민펜타아세트산으로 구성된 군으로부터 선택되는 단계; 및
    b. 반응 혼합물 중의 세륨-함유 나노입자의 분산물을 형성시키는 단계를 포함하여, 나노입자의 분산물을 제조하는 방법.
  2. 제 1항에 있어서, 반응 혼합물을 가열하거나 냉각시키는 것을 추가로 포함하는 방법.
  3. 제 1항에 있어서, 상기 반응 혼합물의 온도가 물의 끓는 온도와 동일하거나 그 미만인, 방법.
  4. 제 1항에 있어서, 상기 세륨-함유 나노입자가 세륨의 옥사이드를 포함하는, 방법.
  5. 제 1항에 있어서, 상기 세륨-함유 나노입자가 결정질인, 방법.
  6. 제 5항에 있어서, 상기 나노입자가 플루오라이트 입방 결정 구조를 특징으로 하는, 방법.
  7. 제 1항에 있어서, 상기 산화제가 과산화수소를 포함하는, 방법.
  8. 제 1항에 있어서, 상기 세륨-함유 나노입자가 실질적으로 비-응집된, 방법.
  9. 제 1항에 있어서, 세륨-함유 나노입자의 상기 분산물이 약 12개월 초과 동안 입자 응집화 및 침전에 대해 안정한, 방법.
  10. 제 1항에 있어서, 세륨-함유 나노입자의 상기 분산물의 제타-전위가 약 -15 mV 내지 약 -30 mV 범위인, 방법.
  11. 제 1항에 있어서, 상기 세륨-함유 나노입자가 약 10 나노미터 미만의 유체역학적 직경을 특징으로 하는, 방법.
  12. 제 1항에 있어서, 세륨-함유 나노입자의 상기 분산물이 질병 또는 산화 스트레스 관련 사건의 예방 또는 치료를 위한 약제 조성물로서 사용되는, 방법.
  13. 제 12항에 있어서, 상기 질병 또는 산화 스트레스 관련 사건이 허혈성 뇌졸증, 다발성 경화증, 근육위축가쪽경화증 또는 허혈성 재관류 손상인, 방법.
  14. 제 1항의 방법에 의해 제조된 나노입자.
  15. 니트릴로트리아세트산, 에틸렌 글리콜 테트라아세트산 및 디에틸렌트리아민펜타아세트산으로 구성된 군으로부터 선택된 안정화제, 세륨, 및 시트르산을 포함하는 나노입자.
KR1020157033653A 2013-04-25 2014-04-25 산화 스트레스 치료를 위한 킬레이트 나노세리아 KR20160003117A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361854507P 2013-04-25 2013-04-25
US61/854,507 2013-04-25
PCT/US2014/035434 WO2014176487A2 (en) 2013-04-25 2014-04-25 Chelated nanoceria for the treatment of oxidative stress

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20160003117A true KR20160003117A (ko) 2016-01-08

Family

ID=50819979

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020157033653A KR20160003117A (ko) 2013-04-25 2014-04-25 산화 스트레스 치료를 위한 킬레이트 나노세리아

Country Status (8)

Country Link
US (2) US9549950B2 (ko)
EP (1) EP2989054A2 (ko)
JP (1) JP6382952B2 (ko)
KR (1) KR20160003117A (ko)
CN (1) CN105408257B (ko)
AU (1) AU2014256983B2 (ko)
CA (1) CA2910212A1 (ko)
WO (1) WO2014176487A2 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020022736A1 (ko) * 2018-07-26 2020-01-30 서울대학교산학협력단 방사선 보호 나노입자

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2910212A1 (en) * 2013-04-25 2014-10-30 Cerion Enterprises, Llc Chelated nanoceria for the treatment of oxidative stress
EP3042981A1 (en) * 2015-01-09 2016-07-13 Vito NV An electrochemical process for preparing a compound comprising a metal or metalloid and a peroxide, ionic or radical species
ES2757750T3 (es) 2015-01-20 2020-04-30 Cerion Llc Nanoceria quelada con EDDS con actividad de tipo catalasa
EP3081942A1 (en) * 2015-04-17 2016-10-19 Roche Diagniostics GmbH Pressure transmission liquid for cellular analyzer, cellular analyzer and method for analyzing a liquid cellular sample
FR3049465B1 (fr) * 2016-03-29 2018-04-27 Oxymo Technologies Inc. Composition pharmaceutique preventive et curative a base de peroxometallate
JP7328480B2 (ja) * 2018-09-14 2023-08-17 株式会社applause Pharma チロシン－チロシナーゼ反応阻害剤
WO2021251436A1 (ja) * 2020-06-10 2021-12-16 東レ株式会社 酸化セリウムナノ粒子、酸化セリウムナノ粒子を含む分散液、抗酸化剤、酸化剤および酸化セリウムナノ粒子の製造方法
CN112569253A (zh) * 2020-11-24 2021-03-30 深圳大学 一种用于急性肾损伤的纳米酶药物及其制备方法与应用
WO2023168056A2 (en) * 2022-03-04 2023-09-07 University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education Methods for using cerium oxide nanoparticles for macrophage-mediated efficacy in respiratory syncytial viral infection
CN115737678A (zh) * 2022-11-30 2023-03-07 浙江大学金华研究院 载三苯基膦修饰的氧化铈和全反式维甲酸的脂质体凝胶

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US954950A (en) * 1909-01-04 1910-04-12 Robert Henry Fowler Disk plow for steam cultivation.
JPS6034566A (ja) 1983-08-04 1985-02-22 Nippon Cable Syst Inc 内索の自動伸び吸収装置
US4778671A (en) 1986-07-14 1988-10-18 Corning Glass Works Preparation of unagglomerated metal oxide particles with uniform particle size
JPH08119631A (ja) * 1994-10-21 1996-05-14 Shin Etsu Chem Co Ltd 球状希土類元素酸化物およびその前駆体の製造方法
WO1998008934A1 (en) * 1996-08-30 1998-03-05 Life Technologies, Inc. Serum-free mammalian cell culture medium, and uses thereof
FR2803224B1 (fr) * 1999-12-30 2002-09-27 Rhodia Chimie Sa Dispersion colloidale aqueuse a base d'au moins un compose d'un metal et d'un complexant, procede de preparation et utilisation
KR100479804B1 (ko) * 2002-05-30 2005-03-30 동우 화인켐 주식회사 금속 ｃｍｐ용 연마 슬러리 조성물
JP4186529B2 (ja) * 2002-07-09 2008-11-26 昭栄化学工業株式会社 高結晶性複酸化物粉末の製造方法
US7534453B1 (en) 2002-09-05 2009-05-19 University Of Central Florida Research Foundation, Inc. Cerium oxide nanoparticles and use in enhancing cell survivability
ES2562407T3 (es) * 2005-01-07 2016-03-04 Rhodia Chimie Composiciones de pintura acuosas que comprenden una dispersión coloidal de cerio
EP1726688A1 (en) * 2005-05-23 2006-11-29 Shin-Etsu Chemical Co., Ltd. Cerium ion-containing solution and corrosion inhibitor
EP1904072A4 (en) 2005-06-27 2009-06-17 Edward Via Virginia College Of ANTI-INFLAMMATORY, RADIOPROTECTIVE CERTIFICATE OXIDE NANOPARTICLE CAPACITIES AND ENHANCING LONGEVITY
WO2008030805A1 (en) * 2006-09-05 2008-03-13 Cerion Technology, Inc. Cerium dioxide nanoparticle-containing fuel additive
US20100172994A1 (en) * 2006-11-22 2010-07-08 University Of Florida Research Foundation, Inc. Nanoparticles for Protection of Cells from Oxidative Stress
ES2384060B1 (es) * 2010-03-24 2013-09-23 Lipotec S.A. Cápsulas de nanopartículas lipídicas.
US20130089602A1 (en) * 2011-10-10 2013-04-11 International Business Machines Corporation Encapsulated chelator
KR101990070B1 (ko) 2012-06-13 2019-06-17 세리온, 엘엘씨 산화 스트레스 치료용 나노세리아
US9446070B2 (en) * 2012-06-13 2016-09-20 Cerion, Llc Nanoceria with citric acid additive
CA2910212A1 (en) * 2013-04-25 2014-10-30 Cerion Enterprises, Llc Chelated nanoceria for the treatment of oxidative stress

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020022736A1 (ko) * 2018-07-26 2020-01-30 서울대학교산학협력단 방사선 보호 나노입자

Also Published As

Publication number Publication date
JP6382952B2 (ja) 2018-08-29
AU2014256983A1 (en) 2015-11-12
EP2989054A2 (en) 2016-03-02
AU2014256983B2 (en) 2018-10-04
CN105408257B (zh) 2017-11-21
CA2910212A1 (en) 2014-10-30
WO2014176487A2 (en) 2014-10-30
JP2016525994A (ja) 2016-09-01
WO2014176487A3 (en) 2014-12-18
US20170128488A1 (en) 2017-05-11
US10751366B2 (en) 2020-08-25
CN105408257A (zh) 2016-03-16
US20140322333A1 (en) 2014-10-30
US9549950B2 (en) 2017-01-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10751366B2 (en) Chelated nanoceria for the treatment of oxidative stress
US10729717B2 (en) Nanoceria for neutralizing free radicals
US11771658B2 (en) Edds chelated nanoceria with catalase-like activity
US9446070B2 (en) Nanoceria with citric acid additive
US10143661B2 (en) Malic acid stabilized nanoceria particles

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right