KR20150141940A - 접촉 경로를 저해하는 첨가제를 함유한 채혈 기구 - Google Patents

Abstract

본 발명은 항응고제와 트롬빈을 생성시키는 접촉 경로를 저해함으로써 응고를 지연시키는 첨가제를 함유한 채혈 기구를 개시한다. 첨가제는 팩터 XI 저해제, 팩터 XII 저해제, 칼리크레인 저해제 및 이들의 조합 중 1종 이상의 접촉 응고 경로 저해용 첨가제이며, 이들 각각은 트롬빈을 생성시키는 접촉 경로를 조정 또는 억제하는데 효과적인 양으로 존재한다. 또한, 기구의 제조 및 이용 방법과 상기 기구를 포함하는 키트도 제공된다.

Description

접촉 경로를 저해하는 첨가제를 함유한 채혈 기구 {BLOOD COLLECTION DEVICES CONTAINING CONTACT PATHWAY INHIBITION ADDITIVES}

본 출원은 2013년 2월 1일자 미국 가출원 번호　61/759,742에 대해 우선권을 주장하며, 이 문헌의 개시 내용은 원용에 의해 본 명세서에 포함된다.

혈액과 혈장이, 응고 경로를 활성화시켜 궁극적으로 피브린을 형성시키는 환경에 노출되면, 응고된다는 것은 잘 알려져 있다. 피브린 자체는, 트롬빈의 활성에 의해 형성되는 것이므로, 트롬빈 생성의 결과이다. 트롬빈 생성은 수종의 여러 인자 (펩티다제)들이 관련되어 있으며, 궁극적으로는 활성 트롬빈을 합성하는 공통 경로로 수렴되는, 2가지 효소적 케스케이드에 의해 개시된다. 트롬빈을 합성하는 2가지 케스케이드는 조직 인자 (TF) 응고 경로 (외인성 경로라고도 함)와 접촉 응고 경로 (내인성 경로라고도 함)이다. TF 경로는, 혈관 손상 (즉, 혈관 천공)에 의해, 내피와 내피 아래(subendothelial)에서 발현된 TF에 순환하는 팩터 VII가 노출됨으로써 개시된다. 이후 팩터 VII이 팩터 VIIa로 변환되어, TF-VIIa 복합체를 형성하게 되며, 이것은, 직접적으로 팩터 X의 팩터 Xa (팩터 X의 활성 형태)로의 변환을 촉진하거나, 또는 팩터 IX의 팩터 IXa (활성화된 IXa)로의 변환을 경유하여 팩터 X를 Xa로 변환시킨다. 팩터 Xa의 생성은 프로트롬빈의 트롬빈으로의 변환을 촉진한다. 트롬빈은 이후 피브리노겐을 피브린으로 변환시킬 수 있다.

또한, 트롬빈은, 혈액이 외래 표면, 특히 음전하를 띄는 표면과 접촉하였을 때 발생하는, 접촉 응고 경로 또는 내인성 응고 경로를 통해서도 생성된다. 접촉 경로를 활성화시키는 생체외 인자의 예로는 유리, 실리카, 카올린 및 소수의 플라스틱을 포함한다. 접촉 경로는 팩터 XII, 팩터 XI, 고분자량 키니노겐 (HMK) 및 프리칼리크레인을 포함하는 한 세트의 효소들에 의해 개시되며, 이들은 활성화 표면에서 조직화되어 팩터 XIIa (팩터 XII의 활성형)를 생성시킨다. 칼리크레인은, 프리칼리크레인의 활성형으로서, 단백질 분해를 통해 팩터 XIIa를 형성시킬 수 있으며, 이것은 프리칼리크레인을 단백질 분해를 통해 칼리크레인으로 변환시킬 수 있다. 이러한 상호작용으로 인한 총체적인 작용으로 혈중에서의 팩터 XIIa의 증폭과 축적을 통해, 접촉 응고 경로의 개시와 후속적인 팩터 XI의 팩터 XIa로의 변환이 이루어진다. 팩터 XIa는 이후 팩터 IX의 팩터 IXa로의 변환을 촉진한다. 그 이후로는 접촉 경로는 TF 경로에 대해 전술한 과정과 동일한 과정 (공통 경로)을 통해 진행된다.

채혈 과정에서, 혈액은 캐뉼러, 관 (tubing) 및 혈액 수용 기구 (containment device) (즉, 진공 채혈관)의 벽 등의 외래 표면에 노출된다. 이러한 접촉은 내인성 (접촉) 응고 경로를 활성화시켜, 전술한 바와 같이 팩터 XII은 활성형 팩터 XII (FXIIa)로 변환된다. 주의를 기울이지 않고 방치하게 되면, FXIIa는 FXI를 FXIa로 변환시키고, FXIa는 FIX를 FIXa로 변환시키게 된다. 이러한 케스케이드는 궁극적으로 활성형 트롬빈의 생성과 피브린 응괴로 이어진다.

혈액 샘플을 채혈할 때 응고가 발생되지 않게 억제하는 것이 바람직하다. 트롬빈 생성과 피브린 응괴 발생을 낮추기 위한 일환으로, 소듐 사이트레이트와 같은 킬레이트제가 채혈관에 첨가된다. 혈액이 소듐 사이트레이트와 혼합되면, 팩터 XIa, 팩터 IXa 및 팩터 Xa의 칼슘 의존적인 활성들이 정지되어, 트롬빈의 생성이 억제되며, 따라서 응괴 형성이 억제되게 된다.

접촉 응고 경로를 통한 트롬빈의 생성을 억제하기 위한 다른 방법들도 당해 기술 분야에 공지되어 있다. 이러한 방법의 한가지는 팩터 XIIa의 활성을 저해하여, 팩터 XIIa에 의해 매개되는 팩터 XI의 팩터 XIa로의 변환을 직접 저해하는 방법이다. 옥수수 트립신 저해제 (CTI)는 팩터 XIIa에 의해 매개되는 팩터 XI의 팩터 XIa로의 변환을 저해하는 것으로, 당해 기술 분야에 공지된 한가지 저해제이다. 그러나, 접촉 응고 경로를 통한 트롬빈의 생성을 억제하기 위해 CTI를 이용하는 경우 몇가지 문제들이 존재한다. 한가지 문제는 칼리크레인-키닌 시스템에 의해 축적되는 팩터 XIIa의 증폭이다. 다른 문제는 CTI가 들어 있는 채혈관을 멸균할 수 없어, 특정 임상적인 용도에서는 사용할 수 없다는 것이다.

트롬빈 생성과 응괴 형성을 모니터링하기 위해 사용되는 방법 2가지는 혈전탄성측정법 (TEG: thrombelastography)과 보정된 자동 트롬보그램 (CAT: Calibrated Automated Thrombogram)이다. TEG는, 혈소판 기능, 응괴의 강도 및 aPPT 등의 다른 검사로는 측정할 수 없는 피브린 분해 (fibrinolysis)를 분석하는, 수술 및 마취학에서 사용되는 중요한 분석법이다. TEG는 환자의 혈액을 취하여, 4^o - 45^o의 각도로 천천히 (예, 분 당 6회) 회전시켜, 응고를 측정한다. TEG에 사용되는 채혈 장치 안에 장착된 가느다란 와이어로, 트롬빈 생성을 통한 응괴 형성을 측정한다. 접촉 경로를 통한 트롬빈의 생성은 테스트에 사용되는 관 또는 용기에 따라 TEG 결과를 왜곡시킬 수 있다.

CAT 분석은 응고저하성 또는 응고항진성 표현형을 가진 환자를 조사하는데 사용되는 툴이다. 이 분석에서는, TF, 인지질 및 CaCl₂에 의해 트롬빈의 생성을 유도한다. 이 분석은 TF에 의한 트롬빈의 생성을 기초로 하는 방법이므로, 접촉 경로에 기인한 트롬빈의 생성은 CAT 분석 결과를 왜곡시킨다.

따라서, TEG 및 CAT 분석을 위해 채혈된 혈액 샘플에서, 트롬빈의 생성을 유발하는 접촉 응고 경로를 선택적으로 저해하는, 조성물과 방법이 여전히 요구되고 있다. 바람직하게는, 이러한 조성물과 방법은 채혈 검사에 사용되는 실험용 관 또는 용기와 무관하다.

본 발명의 일 측면은, 제1 단부, 제2 단부 및 혈액 또는 혈액 성분을 수용하기 위한 저장조 영역을 규정하는 하나 이상의 내벽을 가지는, 혈액 (예, 전혈 샘플) 또는 혈액의 성분을 함유한 조성물 (예, 혈장)의 채혈 기구에 관한 것이다. 저장조는, 접촉 응고 경로의 활성화를 저해하는, 첨가제 또는 첨가제들의 조합을, 각각 접촉 응고 경로의 활성화에 의해 매개되는 트롬빈의 생성을 혈중 또는 혈액 성분 중에 안정화하는데 효과적인 양으로 함유한다. 이들 첨가제는, 트롬빈의 생성을 유도하는 접촉 응고 케스케이드 경로를 저해하기 때문에, 접촉 경로 저해제로 지칭된다. 출원인은 특정 이론으로 결부시키고자 하는 것은 아니나, 본원에서 고려되는 첨가제들이 팩터 XIa (FXIa) 활성, 팩터 XIIa 활성, 칼리크레인 활성, 또는 이들의 임의 조합 중 하나 이상을 차단할 것으로 생각한다. FXIa의 활성 차단은, 동시에 FXII를 저해할 필요가 없는 매우 확실한 효과를 가진다. 일 구현예에서, 진공 채혈관에서 접촉 경로 저해제를 소듐 사이트레이트와 함께 사용하면, 상기 채혈관 안에서는 채혈된 혈액이 응고되는 시간이 현저하게 연장된다. 일부 구현예들에서, 채혈 기구에는 (예를 들어, 혈액을 저장조로 공급하기 위해) 바늘로 관통할 수 있는 밀봉부 (closure)가 장착되며, 살균 및 진공처리 (evacuation)된다.

본 발명의 다른 측면은, 혈액 또는 혈액의 성분을 포함하는 조성물을, 제1 단부, 제2 단부 및 혈액 또는 조성물을 수용하기 위한 저장조 영역을 규정하는 하나 이상의 내벽과, 사이트레이트와 더불어 저장조에 배치되는 접촉 경로 저해용 첨가제 (본원에서는 첨가제라 함)를 가진, 기구로 도입하는 단계를 포함하는, 접촉 응고 경로가 저해되는, 혈액 또는 혈액의 성분을 포함하는 조성물의 채혈 방법에 관한 것이다. 특정 구현예에서, 첨가제는 칼리크레인 저해제이다. 다른 구현예들에서, 첨가제는 하기 중 하나 이상을 포함한다: i) 팩터 XI 저해제, 비제한적인 예로, 항-인간 FXI 항체; ii) 팩터 XII 저해제; iii) 칼리크레인 저해제; 및 iv) i, ii 및 iii의 임의 조합. 팩터 XII 저해제의 예로는, 비제한적으로, 옥수수 트립신 저해제를 포함한다. 칼리크레인 저해제의 예로는, 비제한적으로, 아프로티닌 (aprotinin)을 포함한다. 아프로티닌은 접촉 응고 경로를 통한 트롬빈의 생성을 억제하는데 효과적인 양으로 제공된다. 이 양은 혈액이 채혈되고 보관되는 관에 매우 다양한 베이스 세린 프로테아제 저해제로서 사용될 때 존재하는 아프로티닌의 양 보다 많은 양이다. 이 관에는 전형적으로 본원에 기술된 관에는 존재하지 않는 [EDTA]와 그외 안정화제가 포함되어 있다. 채혈 및 보관 후, 혈액 또는 조성물은, 예를 들어, 진단 분석 또는 치료 목적으로 활용될 수 있다. 칼리크레인 저해제 (예, 아프로티닌)의 농도는 샘플 (예, 혈액)에서 약 500 칼리크레인 저해 단위 (KIU) - 약 5000 KIU/mL이다. 항-인간 팩터 XI 항체의 농도는, 존재하는 경우, 샘플 (예, 혈액)에서 약 2 ㎍/mL - 약 14 ㎍/mL이다.

본 발명의 다른 측면은 상기한 기구를 하나 이상 (바람직하게는 수개) 포함하는 패키지 또는 키트에 관한 것이다.

도 1은 본 발명의 첨가제가 든 통상적인 진공 채혈관의 개략도이다.
도　2A는 다양한 물질로 제조된 관에서 사이트레이트 처리된-네이티브 응고 시간을 비교한 표이다.
도 2B는 2A에 포함된 데이타 차트이다.
도　3A는 다양한 물질로 제조된 관에서 유래된 사이트레이트 처리된 혈장 샘플에 대해, TF 첨가 또는 무첨가시 트롬빈의 생성을 분석한 결과를 비교한 표이다.
도 3B는 도 3A의 수치로 작성된 트롬빈 생성 그래프 차트이다.
도 4A는 아프로티닌을 이용하여 접촉 응고 경로 상류에서의 용량-의존적인 팩터 XIIa 저해를 보여주는 그래프 세트이다.
도 4B는 보정된 자동 트롬보그램 (CAT) 분석을 이용하여 조직 인자 (Tf) 무첨가시 트롬빈의 생성 곡선을 나타낸 그래프로서, 본원에 언급된 첨가제에 의해 제공되는 감소와 유리 및 플라스틱 제품에 기인한 접촉 경로의 심각성을 보여준다.
도　5A는 사이트레이트 첨가된 유리 관에서 인큐베이션된 샘플들로부터 유래된 사이트레이트 처리된-네이티브 전혈의 응고 시간을 연장시키는 단일클론 항-FXI 항체의 용량-의존적인 연장력을 보여주는 그래프이다.
도 5B는 Tf 부재 조건에서 접촉 경로 활성화의 하류 팩터 XIIa가 항-팩터 XI 항체에 의해 감소됨을 보여주는 차트이다.
도 6은 Tf에 의해 유발된 트롬빈의 생성과 트롬빈 활성은 유지되지만, 접촉 응고 경로는 아프로티닌과 항-팩터 XI 항체에 의해 선택적으로 저해됨을 보여주는 그래프이다.
도 7은 아프로티닌을 이용한 칼리크레인의 선택적인 저해와 항-팩터 XI 항체를 이용한 팩터 XI의 저해가, 팩터 XIIa를 저해하기 위한 CTI를 이용한 접촉 경로의 감퇴와 등가의 수준으로 접촉 경로의 감퇴를 제공함을 보여주는 차트이다.

광의적으로, 본 발명의 채집 기구는 시험관 및 원심분리관 등의 관; 채집 백 등의 밀폐 시스템의 채혈 기구; 시린지, 특히 사전-충진된 주사기; 카테터; 마이크로타이터 및 그외 멀티웰 플레이트; 어레이; 관; 플라스크, 스피너 플라스크, 롤러 바틀, 바이얼, 현미경 슬라이드, 현미경 슬라이드 어셈블리, 커버슬립, 필름 및 다공성 기판과 어셈블리 등의 실험실 용기들; 파이펫과 파이펫 팁; 조직 및 그외 생물 샘플의 채집 용기; 및 생물 샘플을 수용하는데 적합한 임의의 기타 용기 뿐만 아니라 샘플 이동에 사용되는 용기 및 부재를 비롯하여 임의의 채집 기구를 포괄할 수 있다. 이러한 수종의 기구들에 대한 예와 예시는 Stevens 등이 공동 권리자인 미국 특허 7,309,468에 기술되어 있다. 기구는 진공 처리 및 살균될 수 있으며, 바늘이 관통가능한 밀봉부 (closure)를 포함한다. 다른 예로, 기구는 혈액을 채집하기 위한 부분-진공 시스템 (partially-evacuated system) 또는 비-진공 시스템 (non-evacuated system)일 수 있다. 진공 시스템에 대한 적합한 예는 폐관 (closed tube)이다. 수동적인 시린지 인출 (manual syringe draw)은 부분-진공 시스템과 비-진공 시스템의 적절한 예이다. 비-진공 시스템은 또한 자동 인출 시스템 (automatic draw system)을 포함할 수도 있다.

도 1은 미국 특허 7,309,468에도 예시된 것으로서, 내부 챔버 또는 저장조 (14)를 규정하는 용기 (12)를 포함하는 본 발명에 사용가능한 전형적인 채혈 기구 (10)를 나타낸 것이다. 예시된 구현예에서, 용기 (12)는 측벽부 (16), 밀폐된 하단부 (18) 및 개방된 상단부 (20)를 구비한, 중공 관이다. 선택적으로, 분리용 부재 (13)가 용기 챔버 (14) 내부에 제공된다. 분리용 부재 (13)는, 예를 들어, 원심분리에 의해 혈액 샘플의 성분들을 분리하는 것을 돕기 위해 제공된다. 용기 (12)는 적정 부피의 혈액을 채집할 수 있는 크기를 가진다. 멸균 제품이 필요한 경우, 개방된 상단부 (2)를 덮어 용기 (12)를 밀폐하기 위한 폐쇄 수단 (22)이 필수적이다. 일부 구현예들에서, 관은 스크류 캡에 맞게 구성된다. 바람직하게는, 밀봉부 (22)는 용기 (12)를 실질적으로 밀폐할 수 있으며 챔버 (14) 안에 생물 샘플을 보유할 수 있는, 실 (seal)을 형성한다. 밀봉부 (22)는, 비제한적인 예로, 고무 밀봉부, HEMOGUARD™ 밀봉부, 금속 실, 금속이 결합된 고무 실 및 여러가지 폴리머와 디자인의 실 등의 다양한 형태들 중 한 가지일 수 있다. 보호 쉴드 (24)가 밀봉부 (22) 위에 놓일 수 있다.

용기 (12)는, 예를 들어, 플라스틱 (예로, 폴리올레핀, 폴리아미드, 폴리에스테르, 실리콘, 폴리우레탄, 에폭시드, 아크릴, 폴리아크릴레이트, 폴리에스테르, 폴리설폰, 폴리메타크릴레이트, PEEK, 폴리이미드 및 플루오로폴리머) 및 실리카 유리 등의 유리 제품을 비롯하여, 실험실 용기에 적합한 임의 물질로 제조될 수 있다. 바람직하게는, 용기 (12)는 투명하다. 용기 (12)에 적합한 열가소성 투명 물질의 예로는 폴리카보네이트, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌 및 폴리에틸렌테레프탈레이트를 포함한다. 플라스틱 물질은 산소-비투과성 물질일 수 있거나, 또는 산소-비투과성 층 또는 산소 반투과성 층을 포함할 수 있다. 다른 예로, 용기 (12)는 물과 공기가 투과가능한 플라스틱 물질로 제작될 수 있다.

챔버 (14)내 압력은 기결정된 부피의 생물학적 샘플이 챔버 (14) 안으로 배액되도록 선택된다. 바람직하게는, 밀봉부 (22)는 대기압과 대기압 미만의 압력 간의 내부 압력 차이를 유지할 수 있는 탄력적인 물질로 제작된다. 밀봉부 (22)는 바늘 (26) 또는 그외 당해 기술 분야에 공지된 바와 같이 용기 (12)로 생물학적 샘플을 도입하기 위한 캐뉼러에 의해 관통될 수 있는 것이다. 바람직하게는, 밀봉부 (22)는 재밀봉가능하다. 밀봉부 (22)에 적합한 물질로는, 예를 들어, 실리콘 고무, 천연 고무, 스티렘 부타다이엔 고무, 에틸렌-프로필렌 코폴리머 및 폴리클로로프렌을 포함한다.

용기 (12)에 대한 적합한 예로는 단일벽 (single-wall) 튜브와 다층 튜브 (multi-layer tube)를 포함한다. 적정 용기 (12)에 대한 보다 구체적인 예는 미국 특허 5,860,937에 개시되어 있다.

또한, 용기 (12)는 겔, 기계적 분리기 또는 그외 타입의 분리용 부재 (예, 여과지 등)와 같은 분리기 (13)를 포함할 수 있다. 분리기는 전형적으로 혈장 제조에, 특히 인간 또는 동물의 전혈로부터 혈장을 분리하는데 유용하다. 일부 구현예에서, 분리기는, 전혈 샘플의 세포성 인자들로부터 PRP를 분리하는데 유용할 수 있는, 백혈구와 혈소판의 중간 밀도를 가진다. 겔은 요변성 폴리머 겔 제형이 적합하다. 겔은 호모폴리머 또는 코폴리머일 수 있으며, 예를 들어 폴리실록산과 같은 실리콘계 겔 또는 예를 들어 폴리아크릴, 폴리에스테르, 폴리올레핀, 산화된 시스 폴리부타다이엔, 폴리부텐, 에폭시화된 대두 오일과 염화된 탄화수소의 블랜드, 이산과 프로판다이올의 코폴리머, 수소첨가된 사이클로펜타다이엔, 알파-올레핀과 다이알킬말리에이트의 코폴리머와 같은 유기 탄화수소계 겔을 포함할 수 있다. 본 발명에 사용가능할 수 있는 기계적인 분리기의 예는 미국 특허 6,516,953; 6,406,671; 6,409,528; 및　6,497,325에 기술되어 있다.

또한, 용기 (12)는 전혈 샘플의 헤비 상으로부터 림프구와 단핵세포를 원심분리에 의해 분리하는데 적합할 수 있다. 이러한 구현예에서, 기구는 또한 액체 밀도 구배 매질 (liquid density gradient medium)과, 원심분리하기 전에 액체 밀도 구배 매질과 혈액 샘플이 혼합되는 것을 방지하기 위한 수단을 포함할 수 있다. 적합한 림프구/단핵세포 채집관에 대한 예는 미국 특허　5,053,134에 기술되어 있다.

다른 구현예들에서, 기구는 시험 카트리지 안에 내장된 저장조를 포함할 수 있으며, 저장조는 2 - 200 ㎕, 바람직하게는 50 - 150 ㎕ 범위의 전혈을 수용할 수 있다. 이러한 카트리지는 예를 들어 Abbott Laboratories (Abbott Park, Illinois)에서 상품명 i-STAT^® Point of Care System으로 판매되고 있으며, 이 카트리지와 인터페이스로 연결하여 사용될 수 있는 휴대용 분석기를 이용해 사용할 수 있다. 본 발명에서 사용가능한 이러한 카트리지와 휴대용 분석기에 대한 예로는 각각 i-STAT^® PT/INR cartridge 및 i-STAT^® 1 handheld analyzer를 포함한다.

일부 구현예들에서, 기구는 시린지이다. 시린지 어셈블리는 개방형 근위 단부, 원위 단부 및 원위 단부와 근위 단부 사이에 위치한 혈액을 수용하기 위한 살균된 중공 챔버를 가진 통 (barrel); 상기 근위 단부에 위치되는 플런저; 상기 통에 고정되는 바늘; 및 상기 챔버내에 배치되는 혈소판 안정화제를 포함할 수 있다.

본 발명의 기구는 당해 기술 분야에 공지된 물질, 시약 및 공정에 따라 제작 또는 어셈블링될 수 있다. 예를 들어, 이러한 방법 중 한가지 방법은 접촉 경로에 의해 매개되는 트롬빈의 형성을 안정화/저해하는데 효과적인 양으로 1종 이상의 접촉 경로 저해 물질 (본원에 기술된 바와 같이 건조 형태, 동결건조 형태 또는 액체 형태일 수 있음)을 첨가하는 단계, 선택적으로 기구에 분리용 부재를 부가하는 단계, 및 기구를 진공 처리 및/또는 살균하는 단계를 포함한다.

본원에서, 용어 "혈액" 및 "혈액 샘플"은 전혈 또는 이의 구성 성분 (예, 혈액의 성분을 함유한 다른 신체 조직 또는 체액 등의 조성물), 특히 이의 세포성 성분, 예를 들어 적혈구 농축물, 혈소판 농축물 (예, 혈소판 농축 혈장 (PRP)), 백혈구 농축물; 또는 혈장 및 혈청을 지칭한다. 즉, 다른 구현예에서, 샘플은 혈액 세포 또는 미숙성 혈액 세포, 예컨대 골수를 함유한 체액 또는 조직일 수 있다.

도 2A 및 2B는 다양한 물질로 제작된 관을 대상으로 Thrombelastograph^® (TEG) 5000 지혈 분석기를 이용하여 칼슘재첨가 응고 시간 (recalcified clotting time)을 비교하여 나타낸 표와 차트이다. 시판 사이트레이트 인간 전혈을 이용한 사이트레이트-천연 TEG의 경우, BD Vacutainer^® 369714 유리 사이트레이트 관이 363083 플라스틱 사이트레이트 관 보다 프로코어쿨런트 활성 (procoagulant activity)이 현저하게 높은 것으로 나타났다. 간략하게는, BD Vacutainer^® 369714 유리 사이트레이트 관과 363083 플라스틱 사이트레이트 관을 세척 및 건조하여 사이트레이트 첨가제를 제거하였다. 그런 다음, 이들 관에 시판되는 사이트레이트 처리된 인간 전혈 백을 이용하여 용량까지 넣었다. 관 벽부의 표면 물질에 혈액이 접촉하도록 샘플을 부드럽게 흔들면서 실온에서 15분간 인큐베이션하였다. 마지막으로, 전혈 응고 시간을 칼슘재첨가 및 TEG의 조합을 이용하여 측정하였다. 이들 결과, 플라스틱 사이트레이트 관이 유리 관에 비해 분석 전 응고 시간을 단축시키는데 미온적인 것으로 나타났다. 본 출원인은 특정 이론으로 결부시키고자 하는 것은 아니지만, 이러한 차이는 실리콘 처리된 유리 제품에서 접촉 경로의 활성화가 더 강하기 때문인 것으로 생각된다. 아울러, 강력한 접촉 경로 활성인자가 없는 상태에서 수행되는 고도로 민감한 응고 분석에서만, 이러한 차이에 더 민감할 것이라는 점에 주목하는 것이 중요하다.

도　3A 및 3B는 보정된 자동 트롬보그램 (CAT) 분석을 이용하여 다양한 물질로 제조된 관으로부터 수득되는 사이트레이트 처리된 혈장에서의 트롬빈 형성을 비교한 표와 차트이다. CAT 분석은, 응고를 측정하기 보다는, 트롬빈의 존재시 절단되는 형광발생 기질과 칼슘 재첨가된 혈장 샘플에서의 트롬빈 형성을 정량적으로 측정하기 위한 캘리브레이터의 사용을 겸비한다. 이러한 분석의 주된 용도는 임상 연구 샘플에서 조직 인자 (TF)에 대한 반응으로 인한 트롬빈의 생성 프로파일을 조사하는 것이다. 조직 인자는 트롬빈의 생성을 위해 접촉 경로를 이용하지 않기 때문에, 본 분석은 접촉 경로의 활성화에 매우 민감하다. 도 3A에 나타낸 바와 같이, 정체 시간 (lag time) 및 트롬빈 생성 최고 시간은, TF 1 pM 존재 및 부재시, 플라스틱 관의 샘플 보다는 실리콘 처리된 유리 관에서 수득되는 사이트레이트 처리된 혈장 샘플에서 현저히 단축된다. 이러한 결과는, 일반적인 혈액 채혈 기구에 사용되는 여러가지 표면 물질들이 트롬빈의 생성 속도에 변수가 될 수 있음을, 명확하게 보여준다. 아울러, 트롬빈 최대값 역시 플라스틱 관 유래 샘플 보다는 실리콘 처리된 유리에서 취한 사이트레이트 처리된 혈장 샘플에서 더 높으며, 이러한 트롬빈 생성 강도는 접촉 응고 경로의 활성화가 보다 용이하다는 것을 의미한다. 도 3B의 차트는 표 3A의 데이타 표를 작성하는데 사용된 시험에서의 트롬빈 생성 그래프를 보여준다.

도　4A는, 아프로티닌으로 지칭되는 공지의 칼리크레인 저해제가, 혈액에 소듐 사이트레이트 백그라운드와 함께 조합 첨가되었을 때, 접촉 경로 유발성 응고를 차단하는데 사용될 수 있음을 보여준다. 타이트레이션은 전혈 응고 시간 (TEG R 시간)을 평가함으로써 수행하였다. 최소 유효량은 혈액 1 mL 당 1000 칼리크레인 단위 (1000 KIU)로 결정되었는데, 그 이유는 이보다 낮은 농도에서는 실리콘 처리된 유리와 등가이거나 또는 그 보다 짧은 평균 응고 시간을 제공하기 때문이다. 농도 2000 KIU/mL은 무코팅 유리에 담긴 혈액에 제공되어, 실리콘 처리된 유리 또는 플라스틱에 보관된 혈액의 응고 시간 보다 응고 시간을 더 연장시켰다. 이러한 결과는, 분석 전에 유도되는 응고 시간 단축의 기저 메카니즘으로서 접촉 경로의 활성화를 명확하게 암시해줄 뿐 아니라, 표면 물질을 넘어서는 완화 전략 (mitigation strategy)을 제시해준다.

도 4B는 아프로티닌이 전혈 타이트레이션 결과에 의해 예측되는 바와 같이, 용량 의존적인 방식으로 트롬빈의 생성을 성공적으로 지연 및 저하시킴을 보여준다.

도 5A는 실리콘 처리된 관에서 인큐베이션된 전혈에 대한 항-팩터 IX 항체 (알파-FXI)의 타이트레이션을 도시한 것이다. 타이트레이션은 전혈 응고 시간 (TEG R 시간)을 평가함으로써 수행하였다. 데이타는, 5 ㎍/mL 보다 약간 높은 농도에서 안정기가 형성됨을 보여주며, 추가적인 분석에서는 농도 7.5 ㎍/mL을 선택하였다.

도 5B는 TF 부재시의 트롬빈의 생성 그래프를 나타낸 것이다. 플라스틱 관 또는 실리콘 처리된 유리 관에 담긴 혈액의 경우 7.5 ㎍/mL 알파-FXI 존재시 트롬빈이 생성되지 않았다. 이러한 결과는, 유리 제품과 플라스틱 제품에서 기인한 접촉 경로 유발 심각성과, 7.5 ㎍/mL 단일클론 항-FXI 항체의 함유에 의해 제공되는 강력한 차단을 설명해준다.

도 6은 다양한 저해제가 포함된 혈장에서 aPTT, PT 및 TT 매칭 분석들을 수행하여 수득되었다. 이들 분석은 당해 기술 분야의 당업자들에게 널리 공지되어 있으므로, 본원에서는 매우 상세히 기재하지 않는다. aPTT 분석은 응고 유도를 위해 강력한 접촉 경로 활성화 화학물질을 이용하기 때문에, 예상되는 바와 같이, 아프로티닌은 aPTT에서 용량 의존적인 효과를 나타내었다. 항-FIX 항체 (7.5 ㎍/mL)는 aPTT 결과에서 상당히 지연시키는 것으로 나타났다. 옥수수 트립신 저해제 (CTI)는 현재 채혈관에 사용되는 팩터 XIIa 저해제이므로, 대조군으로서 포함시켰다. aPTT 분석에서 등가의 저해가 3종의 저해제 모두에서 달성되었다. 아울러, 응고 시간 결과를 구하기 위해, 고용량 조직 인자와 외인성 트롬빈을 각각 이용하는 PT 또는 TT 분석에서 연장시키는 결과를 나타낸 저해제는 없었다. 이 데이타는, 아프로티닌이 선택적으로 작용하여, 다른 채혈 어플리케이션에 사용되는 것과 같이 광범위한 세린 프로테아제 저해제로 거동하기 보다는 접촉 응고 경로의 활성화를 저해한다는 것을 보여준다.

도 7은 트롬빈의 생성에 있어 접촉 경로에 의한 유발을 줄이기 위한 목적으로, 칼리크레인, 팩터 XIIa 및 팩터 IX 저해를 비교하여 나타낸 것이다. 이 데이타는, 팩터 XIIa의 상류 또는 하류 접촉 경로 저해를 타겟팅하는 것이 직접적인 XIIa 차단으로서 효과적일 수 있다는 것을, 입증해준다. 그러나, 아프로티닌만 살균에 안정적이고, CTI는 그렇지 않다. CTI와 마찬가지로, 항-FIX 역시 살균에 불안정하다.

상기한 결과를 토대로, 본 발명은, 하기 중 하나 이상을 포함하는 첨가제의 사용을 고려한다: i) 팩터 XI 저해제, 비제한적인 예로, 항-인간 FXI 항체; ii) 팩터 XII 저해제; iii) 칼리크레인 저해제; 및 iv) i, ii 및 iii의 임의 조합. 팩터 XIIa 저해제의 예로는, 비제한적으로, 옥수수 트립신 저해제를 포함한다. 칼리크레인 저해제의 예로는, 비제한적으로, 아프로티닌을 포함한다.

바람직한 구현예에서, 관은 첨가제 외에도 항응고제로서 소듐 사이트레이트를 포함한다. 그러나, 과량의 칼슘 존재 시, 사이트레이트의 약한 킬레이트 효과는 제압되므로, 소듐 사이트레이트가 단독 항응고제인 경우 응고 케스케이드가 재가동될 수 있다. 케스케이드는 응고 활성인자의 존재 시 가속화된다. 전형적으로, 응고 분석에서는, 칼슘 재첨가 후 신속하고 강력한 응고 반응을 발생시키기 위해, 강력한 응고 (접촉 경로 또는 조직 인자 기반의) 활성인자를 이용한다.

트롬빈의 가속화된 생성은, 조직 인자를 이용한 트롬빈 생성 분석에서 함께 사용되는 BD Vacutainer 유리 사이트레이트 관으로 채혈하는 중에 현장에서 관찰된다. 유리는 고도의 응고촉진 표면으로서, 실리콘 코팅 공정으로 표면 활성화를 진정시키기 위한 제조 노력에도 불구하고, 플라스틱 사이트레이트 관에 비해 유리 사이트레이트 관에서 상당히 높은 수준의 접촉 경로 활성화가 이루어짐을 입증해주는 데이타가 존재하고 있다. 플라스틱 사이트레이트 관이 코팅된 유리 관에서 나타나는 접촉 경로 활성화를 일부 완화시킴에도 불구하고, 혈액 수용 기구에 축적될 수 있는 활성형 FXII 풀을 완전히 줄이지는 못한다. 옥수수 트립신 저해제 (CTI)는 트롬빈 형성 분석에서 접촉 경로에 기인한 활성을 줄이는 효과가 있는 널리 공지된 FXIIa 저해제이며, 일반적인 예는 Diagnostica Stago의 CAT 분석이다. 본원에서, 칼리크레인 또는 FXI를 각각 아프로티닌 또는 단일클론 항-FXI 항체를 사용하여 저해함으로써, 트롬빈 형성 프로파일에 있어 접촉 경로의 기여가 BD Vacutainer^® 유리 및 플라스틱 사이트레이트 관 둘다에서 상당히 감소됨을, 보여준다.

본원에 기술된 첨가제와 함께 본 발명에 사용하기 적합한 사이트레이트 관의 예로는, 비제한적으로, Becton, Dickinson and Company 사 (Franklin Lakes, NJ)에서 판매되는 사이트레이트 관을 포함한다 (카테고리 번호 366392, 366393, 366415, 367947, 369714의 플라스틱 관; 카테고리 번호 363080 및 363083의 유리 관).

일 구현예에서, 첨가제는 사이트레이트 처리된 채혈 진공관 안에 존재하는 다른 관련 저해제가 첨가 또는 무첨가된 항-FXI 항체이다. 항-FXI 항체의 양은 바람직한 유통 기간 동안 안정성 및 제조가능성을 제공하고 용혈 증거가 나타나지 않도록 정해진다.

다른 구현예들에서, 항-인간 FXI 항체는 옥수수 트립신 저해제 (팩터 XII 저해제), 아프로티닌 (칼리크레인 저해제) 또는 저해제들의 일부 조합과 조합된다. 첨가제는 접촉 경로의 차단을 개선시키고, 어쩌면 효과적인 차단을 달성하는데 필요한 FXIIa 저해제의 양을 낮추어준다. 다른 구현예들에서, 아프로티닌은 단독으로 약 1000 - 약 5000 KIU/mL의 농도에서 접촉 경로를 저해하는데 사용된다.

첨가제는 접촉 응고 경로에 의해 매개되는 트롬빈의 생성을 억제하는 유효량으로 채혈관내에 존재한다. 트롬빈의 생성은, 샘플의 응고 시간이 첨가제 무첨가시의 응고 시간 보다 길어지는 경우에, 억제된다. 기구에 포함시킬 구체적인 첨가제 및 양 또는 농도의 선택은, 샘플 특성, 각 물질의 효능 및 수용해성, 혈액 안정화가 바람직한 시간, 채혈 기구의 체적, 샘플에 물질 (예, 혈액내 혈청 알부민과 같은 다른 단백질의 존재로 인한) 첨가에 의해 유발되는 용혈 수준 및 비-특이적인 상호작용의 특성과 범위에 따라 결정된다. 따라서, 본 발명의 목적에서, 존재할 수 있는 첨가제(들)의 양은 농도 범위 (이로부터 물질의 실제량을 쉽게 계산할 수 있음)로 보다 쉽게 표시된다.

본원에 언급되는 첨가제는 접촉 응고 경로에 의해 매개되는 트롬빈의 생성이 시험관내 진단 절차를 위한 전형적인 채혈 기구에서의 채혈, 이송 및 보관의 가공물로서 발생되지 않게 저해한다. 이러한 저해는 본원의 접촉 경로 저해로서 기술된다.

몇몇 첨가제들은 다른 것에 비해 훨씬 강력하므로, 용도에 따라 샘플 1 ml 당 보다 적은 농도가 필요할 것이다.

숙련된 실무자라면, 용혈된 샘플은 혈액 샘플을 채혈, 이송 또는 보관하는 동안 혈액 세포에 손상이 발생했다는 명확한 가시적인 단서라는 것을 알 것이다. 용혈은 임의의 한가지 임상적인 분석에 반드시 유해한 것은 아니지만, 용혈이 유발되지 않게 하는 것이 바람직하다. 용혈은 가시적인 스케일 (예를 들어, 약한 또는 약간 분홍색, 중간 또는 인지가능한 정도의 적색, 또는 진한 또는 어두운 적색)로 측정할 수 있다. 또한, 용혈은 헤모글로빈 자체의 적색을 분광측정법으로 측정할 수 있으며, 혈청 또는 혈장으로 분비되는 헤모글로빈의 농도로 기록할 수 있다 (예, 분비되는 헤모글로빈 농도가 약 20mg/dL 미만이거나, 또는 헤모글로빈 농도를 가시적으로 또는 분광측정에 의해 측정할 수 없는 수준은 "미량 또는 경미한" 용혈로 표시하며, 약 20 - 약 100　mg/dL은 "약한" 용혈이고, 약 100 - 약 300은 "중간 수준의" 용혈이고, > 약 300 mg/dL은 "심각한" 용혈로 표시됨).

접촉 응고 경로에 의해 매개되는 트롬빈의 생성을 저해하는 저해제는 용액, 현탁액 또는 기타 액체, 펠렛, 정제, 캡슐, 분무-건조된 물질, 냉동-건조된 물질, 분말, 입자, 겔, 결정 또는 동결건조된 물질 등의 임의의 적정 형태를 취할 수 있다. 혈액 안정화제는 바람직하게는 물질의 유통 기간을 최적화하기 위해, 즉, 효능을 감소로 이어지는 혈액 안정화제의 분해를 방지하기 위해, 상기한 형태로 용기의 저장조내로 도입된다. 접촉 응고 경로에 의해 매개되는 트롬빈의 생성을 저해하는 저해제는, 저장조내로 배치될 뿐만 아니라, 기구의 임의 표면 상에 위치될 수 있다. 접촉 응고 경로에 의해 매개되는 트롬빈의 생성을 저해하는 저해제는 또한 내벽, 스톱퍼 및 상기한 기구를 밀폐하기 위한 실 (seal), 또는 기계 또는 이러한 기구 내부에 장착되는 다른 인서트 상에 배치될 수 있다.

첨가제 및 항응고제(들)는 기구내 저장조 및/또는 도처에 배치될 수 있으며, 단, 이는 의도한 효과를 제공하기 위해 샘플과 접촉된다. 예를 들어, 이들 성분은 내벽, 스톱퍼 및 상기한 기구를 밀폐하기 위한 실, 또는 기계 또는 상기한 기구 내부에 장착되는 다른 인서트 상에 배치될 수 있다.

본 발명의 방법은 혈액 또는 혈액 샘플을 혈액 안정화제가 든 기구에 도입하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 혈액 샘플은 임의의 개입 처리 단계 없이 환자로부터 용기로 직접 채집된다. 다른 구현예에서, 채집된 샘플은 PRP 등의 혈액 성분이 포함된 농화된 조성물과 같은 조성물로 제조하기 위해 추가로 처리된다.

본 발명의 사용을 용이하게 하기 위해, 하나 이상의 기구가 키트 형태로 포장될 수 있다. 일부 구현예들에서, 키트는, 예를 들어 개방형 랙 (open rack) 또는 밀폐된 포장으로 배치된 기구를 하나 또는 복수개로 포함할 것이다. 또한, 키트는 혈액을 채혈하는데 유용한 하나 이상의 부재, 예컨대 바늘, 지혈대, 붕대, 알코올 및 와이퍼, 및 랜싯 (lancet)을 포함할 수 있다. 또한, 키트는, 공지된 혈액 안정화제 및/또는 항응고제가 안에 배치된, 관 등의 다른 타입의 채혈 기구를 포함할 수 있으며, 그 예로는 EDTA 관 (예, 일상적인 혈액 카운트 (hematology count)), 헤파린 관 (임상 화학용), 사이트레이트 관 (응고 실험용) 및 그외 특수 관 (프로테오믹스, 게놈 등에 사용되는 관)을 포함한다. 본 발명의 키트는 또한 사용 설명서를 포함할 수 있다.

일부 다른 구현예에서, 키트는 1차 채집 기구, 예컨대 혈장 관과 내부에 분리용 부재를 가진 혈장 분리 관, 및 검사, 예컨대 채집한 혈장을 붓거나 또는 분배하기 위한 2차 관을 포함할 수 있다. 1차 관에서 분리용 부재는 혈액의 다른 세포성 내용물로부터 혈소판 농축 혈장을 분리할 수 있는 적절한 밀도일 수 있다. 2차 검사용 관은 바람직한 검사에 따라 1차 관과 동일하거나 다른 크기일 수 있다. 이들 2종의 관은 내부에 배치되는 혈소판 안정화제를 포함할 수 있다. 키트는 부어야 하거나 또는 그외 안전하지 않은 이송 절차가 요구되는 사태를 방지하기 위해 관에서 관으로 이동시키는 기구를 추가로 포함할 수 있으며, 이 경우 2차 관은 혈장을 흡입하기 위해 감압 상태일 것이다.

본 발명은 아래 비-제한적인 실시예를 들어 설명될 것이다.

실시예 1

TEG (thrombelastography)는 전혈 (WB)의 응고력을 검사하는데 유용하며, 수술 및 마취 시 중요한 용도를 가진다. 혈장에 대해 수행되는 CAT 분석을 이용하여, 응고저하병증 또는 응고항진증 환자를 조사한다. 이들 분석은 전통적인 응고 검사보다 민감성이 높으며, 사이트레이트 처리된 생검에서 축적되는 팩터 XIIa가 하류 트롬빈의 생성 (TG)을 크게 증가시킬 경우, 접촉 활성화에 노출되기 쉽다. 따라서, 여러가지 폴리머성 수용 물질로 구성된 채혈 관의 효과와 TEG 및 CAT 분석의 선택 결과에 대한 타겟화된 내인성 경로 저해제의 선별 사용을 조사한다.

사이트레이트 처리된 인간 WB는 채혈백으로부터, 코팅된 (실리콘 처리된) 유리 또는 플라스틱 채혈 관, 또는 코팅되지 않은 유리, 폴리프로필렌 (PP), 폴리스티렌 (PS), 또는 폴리에틸렌 테레프탈레이트 (PET) 코니칼 바닥 튜브 (conical bottom tube)로, 단독으로 또는 칼리크레인 (예, 아프로티닌) 또는 FXIa (예, 항-인간 팩터 XI 항체)의 존재 하에 이동시킨다. 15분간 인큐베이션한 후, 10mM CaCl₂를 첨가한 다음 그 직후 TEG R 값을 구한다. 매칭된 혈장 생검들은 1 피코몰의 조직 인자 (TF)의 존재 및 부재 하에 CAT와 활성화된 부분 트롬보플라스틴 시간 (APTT; Stago Compact)에 의해 분석한다. 데이타는 터키의 포스트-테스트를 이용한 ANOVA와 선형 회귀를 통해 분석한다.

플라스틱 채혈관은, 무코팅 유리 관 (6.3±0.73) 또는 코팅 유리 관 (9.9±0.58) p < 0.01에 비해, 현저하게 긴 WB 응고 "R" 시간 (CT) (15.0±1.02분)을 나타내며, 다른 모든 플라스틱 용기에 대한 결과는 15±1.0 내지 17.7 ±1.9분으로, p > 0.05 비슷하다. APTT 분석에서는 무코팅 유리 관 (29.5±1.6초)과 PP 관 (29.8 ± 0.6초) 간에 차이가 구분되지 않았다. 아울러, CAT 최고 트롬빈 수준은, 플라스틱 채혈관이 코팅 유리 관에 비해 TF의 존재 (16.7± 3.4 nM versus 127.3± 9 nM (p < 0.05) 또는 부재 (22.2 ± 4.4 nM versus 167.7± 2 nM, p < 0.05) 조건 둘다에서 현저하게 낮았다. TEG WB CT는 TF-개시된 CAT 정체 시간 (R² = 0.8116), 최대 TG 도달 시간 (R² = 0.8308) 및 내인성 저해제의 부재 조건에서의 최대 TG (R² = 0.8401)와 충분한 상관관계가 있었다. 타겟화된 칼리크레인 저해 역시 무코팅 유리 샘플에서 WB CT를 4.9±0.30에서 27.5±8.30으로 연장시켰으며, 이는 저해제 부재 조건에서의 코팅 유리 관 (9.4±0.40) 또는 플라스틱 관 (14.3±2.60)에서의 결과 보다 현저하게 연장되었다 (p< 0.001). 마찬가지로, 타겟화된 FXIa 저해는 코팅 유리관과 플라스틱 관에서 18분 이후로 WB TEG CT를 연장시켰으며, TF 부재 조건에서는 TG가 발생되지 않았다.

CAT 및 TEG에서는 플라스틱 혈액 채혈관이 코팅 유리 관을 능가하는 이점을 보이는 반면, APTT 분석에서는 이들 폴리머 차이에 둔감하였다. 칼리크레인의 저해는 무코팅 유리 관에서도 플라스틱 관에 비해 WB CT를 연장시켰으며, 이는 이들 폴리머-매개를 뛰어넘는 수준으로 접촉 경로를 저해하는 추가적인 효과가 있음을 의미한다. FXIa를 TF 존재 하에 저해시키면, TG가 발생되지 않았다.

실시예 2

도 4(A)에 나타낸 바와 같이, 검사에서 아프로티닌을 다양한 농도로 사용하여, TEG를 이용한 전혈 응고 시간에 대한 효과를 측정하였다. 무코팅 유리 관에서 인큐베이션한 사이트레이트 처리된 혈액 샘플에, KIU (칼리크레인 저해 단위)/mL로 측정된 여러가지 농도로 아프로티닌을 첨가하여, 실리콘 처리된 유리 관 또는 플라스틱 관에 담긴 아프로티닌이 첨가되지 않은 혈액 샘플과 비교하였다. 이러한 분석의 결과, 아프로티닌은 1000 KIU/mL 이상의 농도에서 무코팅 유리 관에서의 접촉 응고 경로를, 실리콘 처리된 유리 관 또는 플라스틱 관에 보관된 혈액 샘플에서 접촉 응고 경로가 저하되는 수준과 등가의 수준까지 저하시키는 것으로 보인다.

샘플에 아프로티닌을 여러가지 농도로 사용한 CAT 분석에서는, 아프로티닌의 양이 샘플에서 증가할수록, 트롬빈 형성이 CaCl₂와 TF의 존재 하에서도 감소 및 지연되는 것으로 확인된다. 이 결과는, 도 4 (B)에서 실리콘 처리된 유리 관 (상단 패널)과 플라스틱 관 (하단 패널)에 대해 나타낸다. 이들 검사에서 대조군은 동일한 사이트레이트 처리된 인간 전혈이 담겨있지만, 아프로티닌은 첨가되지 않은, 복수개의 관이다.

실시예 3

aPTT 분석을 이용하여, 아프로티닌이 CTI 및 항-팩터 XI 항체에 의해 저해되는 것과 동일한 방식으로 접촉 응고 경로를 저해하는 것을 확인하였다. 도 6에 나타낸 바와 같이, 아프로티닌의 양적 증가는 CTI 및 항-팩터 XI 항체가 존재하는 경우에 트롬빈이 생성되는 시간과 등가 또는 더 길게 트롬빈 생성 시간을 연장시킨다. 도 6 (하단 패널)은, 오직 TF 응고 경로만 모니터링하는 검사에서 동일한 샘플을 이용하여, 트롬빈 생성이 아프로티닌, CTI 또는 항-팩터 XI 항체에 의해 영향을 받지 않는다는 것을 보여준다. 이는, 아프로티닌이 TF 경로를 통해서가 아니라 접촉 응고 경로를 통해서만 트롬빈의 생성을 억제한다는 것을 입증해준다.

실시예 4

도 7은, CAT 분석을 이용하여, 적량의 아프로티닌으로, 접촉 응고 경로에 의한 트롬빈의 생성을, CTI 및 항-팩터 XI 항체에 의한 저해와 등가의 방식으로 저해할 수 있다는 것을 보여준다. CTI 또는 항-팩터 XI 항체 대비 아프로티닌의 이점은 이들 2종의 저해제는 살균되는 관에 존재할 수 없다는 점이다.

본 발명은 구체적인 구현예들을 들어 기술되지만, 이들 구현예들은 본원에 기술된 기본 원리 및 응용을 예시하기 위한 것으로 이해된다. 따라서, 다양한 변형들이 예시된 구현예에 행해질 수 있으며, 첨부된 청구항에 의해 정의되는 본원에 기술된 다양한 구현예들의 범위와 사상으로부터 이탈되지 않는 범위내에서 다른 배열도 고안될 수 있는 것으로 이해된다.

Claims (28)

1. 혈액 또는 혈액 성분의 채혈 및 안정화를 위한 기구로서,
   상기 기구는 제1 단부, 제2 단부, 및 혈액 샘플을 수용하기 위한 저장조 영역을 규정하는 하나 이상의 내벽을 가지며,
   상기 저장조는, 트롬빈을 생성시키는 접촉 경로를 저해하는데 효과적인 양으로 존재하는 첨가제와 항응고제를 포함하며, 상기 첨가제는 팩터 XI 저해제, 팩터 XII 저해제, 칼리크레인 (kallikrein) 저해제 및 이들의 조합 중 1종 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는, 혈액 또는 혈액 성분의 채혈 및 안정화를 위한 기구.
2. 제1항에 있어서, 상기 기구는 살균 및 진공처리 (evacuation)되며, 바늘로 관통가능한 밀봉부 (closure)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 혈액 또는 혈액 성분의 채혈 및 안정화를 위한 기구.
3. 제2항에 있어서, 상기 기구는 관 (tube)인 것을 특징으로 하는, 혈액 또는 혈액 성분의 채혈 및 안정화를 위한 기구.
4. 제3항에 있어서, 분리기 (separator)를 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 혈액 또는 혈액 성분의 채혈 및 안정화를 위한 기구.
5. 제1항에 있어서, 상기 첨가제는 팩터 XI 저해제를 포함하며, 상기 저해제는 항-인간 FXI 항체인 것을 특징으로 하는, 혈액 또는 혈액 성분의 채혈 및 안정화를 위한 기구.
6. 제1항에 있어서, 상기 첨가제는 칼리크레인 저해제를 포함하며, 상기 칼리그레인 저해제는 아프로티닌 (aprotinin)인 것을 특징으로 하는, 혈액 또는 혈액 성분의 채혈 및 안정화를 위한 기구.
7. 제6항에 있어서, 상기 첨가제는 팩터 XII 저해제를 포함하며, 상기 팩터 XII 저해제는 옥수수 트립신 저해제인 것을 특징으로 하는, 혈액 또는 혈액 성분의 채혈 및 안정화를 위한 기구.
8. 제1항에 있어서, 상기 첨가제는 아프로티닌을 항-인간 FXI 항체 및 옥수수 트립신 저해제로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 다른 저해제와 조합하여 포함하는 것을 특징으로 하는, 혈액 또는 혈액 성분의 채혈 및 안정화를 위한 기구.
9. 제1항에 있어서, 접촉 경로를 저해하는 상기 첨가제는 건조된 형태인 것을 특징으로 하는, 혈액 또는 혈액 성분의 채혈 및 안정화를 위한 기구.
10. 제1항에 있어서, 상기 항응고제는 소듐 사이트레이트인 것을 특징으로 하는, 혈액 또는 혈액 성분의 채혈 및 안정화를 위한 기구.
11. 혈액의 안정화 방법으로서,
    혈액 또는 혈액 성분을 포함하는 조성물을, 제1 단부, 제2 단부 및 상기 혈액 또는 상기 조성물을 수용하기 위한 저장조 영역을 규정하는 하나 이상의 내벽을 가진 기구레 도입하는 단계를 포함하며,
    상기 저장조는 트롬빈을 생성시키는 접촉 경로를 저해하는데 효과적인 양으로 존재하는 접촉 경로를 저해하는 첨가제와 항응고제를 포함하며, 상기 첨가제는 팩터 XI 저해제, 팩터 XII 저해제, 칼리크레인 (kallikrein) 저해제 및 이들의 조합 중 1종 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는, 혈액의 안정화 방법.
12. 제9항에 있어서, 상기 조성물은 채혈한 혈액 샘플인 것을 특징으로 하는, 혈액의 안정화 방법.
13. 제11항에 있어서, 상기 조성물은 혈소판 농축 혈장 (platelet-rich plasma: PRP)인 것을 특징으로 하는, 혈액의 안정화 방법.
14. 제11항에 있어서, 접촉 경로를 저해하는 상기 첨가제는 팩터 XI 저해제를 포함하며, 상기 팩터 XI 저해제는 인간 항-팩터 XI 항체인 것을 특징으로 하는, 혈액의 안정화 방법.
15. 제11항에 있어서, 접촉 경로를 저해하는 상기 첨가제는 팩터 XII 저해제를 포함하며, 상기 팩터 XII 저해제는 옥수수 트립신 저해제인 것을 특징으로 하는, 혈액의 안정화 방법.
16. 제11항에 있어서, 접촉 경로를 저해하는 상기 첨가제는 팩터 XI 저해제, 팩터 XII 저해제 및 칼리크레인 저해제를 조합하여 포함하며, 상기 칼리그레인 저해제는 팩터 XI 저해제 및 팩터 XII 저해제의 업스트림 (upstream)에서 상기 혈액 또는 혈액 조성물과 접촉하도록 위치되는 것을 특징으로 하는, 혈액의 안정화 방법.
17. 제16항에 있어서, 상기 칼리크레인 저해제는 아프로티닌인 것을 특징으로 하는, 혈액의 안정화 방법.
18. 시험관내 분석용 혈액의 처리 방법으로서,
    혈액 또는 혈액 성분을 포함하는 조성물을, 제1 단부, 제2 단부 및 상기 혈액 또는 상기 혈액 성분을 포함하는 조성물을 수용하기 위한 저장조 영역을 규정하는 하나 이상의 내벽을 가진 기구에 도입하는 단계를 포함하며,
    상기 저장조는 항응고제와, 팩터 XI 저해제, 팩터 XII 저해제, 칼리크레인 (kallikrein) 저해제 및 이들의 조합 중 1종 이상을 포함하는, 트롬빈을 생성시키는 접촉 경로를 저해하는 첨가제를 포함하며,
    상기 팩터 XI 저해제는 항-인간 FXI 항체이고,
    상기 칼리그레인 저해제는 아프로티닌이며,
    상기 첨가제는 트롬빈을 생성시키는 접촉 경로를 저해하는데 효과적인 농도로 존재하는 것을 특징으로 하는, 시험관내 분석용 혈액의 처리 방법.
19. 혈액 또는 혈액의 성분을 포함하는 조성물용 채혈 기구를 하나 이상 포함하는 키트로서,
    상기 기구는 제1 단부, 제2 단부 및 상기 혈액 또는 상기 조성물을 수용하기 위한 저장조 영역을 규정하는 하나 이상의 내벽을 가지며,
    상기 저장조는 항응고제와, 팩터 XI 저해제, 팩터 XII 저해제, 칼리크레인 (kallikrein) 저해제 및 이들의 조합 중 1종 이상을 포함하는, 트롬빈을 생성시키는 접촉 경로를 저해하는 첨가제를 포함하며,
    상기 팩터 XI 저해제는 항-인간 FXI 항체이고,
    상기 칼리그레인 저해제는 아프로티닌이며,
    상기 첨가제는 트롬빈을 생성시키는 접촉 경로를 저해하는데 효과적인 농도로 존재하는 것을 특징으로 하는, 키트.
20. 제19항에 있어서, 살균 및 진공 처리 (evacuation)되며, 바늘로 관통가능한 밀봉부를 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 키트.
21. 제20항에 있어서, 관인 것을 특징으로 하는, 키트.
22. 제21항에 있어서, 분리기를 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 키트.
23. 제19항에 있어서, 상기 첨가제는 팩터 XI 저해제를 포함하며, 상기 저해제는 항-인간 FXI 항체인 것을 특징으로 하는, 키트.
24. 제19항에 있어서, 상기 첨가제는 칼리크레인 저해제를 포함하며, 상기 칼리그레인 저해제는 아프로티닌인 것을 특징으로 하는, 키트.
25. 제19항에 있어서, 상기 첨가제는 팩터 XII 저해제를 포함하며, 상기 팩터 XII 저해제는 옥수수 트립신 저해제인 것을 특징으로 하는, 키트.
26. 제19항에 있어서, 상기 첨가제는 아프로티닌을 항-인간 FXI 항체 및 옥수수 트립신 저해제로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 다른 저해제와 조합하여 포함하는 것을 특징으로 하는, 키트.
27. 제19항에 있어서, 접촉 경로를 저해하는 상기 첨가제는 건조된 형태인 것을 특징으로 하는, 키트.
28. 제19항에 있어서, 상기 항응고제는 소듐 사이트레이트인 것을 특징으로 하는, 키트.

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