KR20150126673A - 오토탁신 억제제로서의 디히드로피리도 피리미딘 화합물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 본 발명의 화합물은 골관절염과 연관된 통증의 치료에 유용한 오토탁신 억제제이다.
<화학식 I>

Description

오토탁신 억제제로서의 디히드로피리도 피리미딘 화합물 {DIHYDROPYRIDO PYRIMIDINE COMPOUNDS AS AUTOTAXIN INHIBITORS}
본 발명은 디히드로피리도 피리미딘 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 그의 치료 용도에 관한 것이다. 본 발명의 화합물은 오토탁신 억제제이다.
오토탁신은, 세포외 리소포스파티드산 (LPA)의 주요 공급원인 것으로 보고된 효소이며, LPA의 동족 수용체들 중 하나인 LPA1을 통해 통증-관련 단백질을 상향조절한다. LPA는 생물학적 및 생화학적 과정의 다중성에 영향을 미치는 세포내 지질 매개체이다. 오토탁신 매개 LPA 생합성의 표적화 억제는 통증을 예방하는 신규의 메카니즘을 제공할 수 있다. 오토탁신을 억제하는 화합물이 요망된다.
골관절염 (OA)과 연관된 통증은 OA 환자에서 하지 불능을 초래하는 주요 증상인 것으로 보고되었다. 2천만명이 넘는 미국인이 관절병증 중 가장 흔한 OA로 진단받았다. OA와 연관된 통증을 앓고 있는 환자를 위한 치료 선택사항이 요구되고 있다.
미국 특허 제7,524,852호 ('852)는 항염증제로서의 특정의 치환된 이환식 피리미딘 유도체를 개시한다.
오토탁신 활성을 갖는 특정 인돌 화합물은 PCT/US2011/048477에 개시되어 있다.
본 발명은 오토탁신 억제제인 신규 화합물을 제공한다. 본 발명은 LPA의 오토탁신 매개 생산을 억제하는 특정 신규 화합물을 제공한다. 오토탁신 억제제 화합물은 OA와 연관된 통증과 같은 오토탁신 매개 질병에 대한 치료를 제공하도록 요망된다.
본 발명은 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
<화학식 I>
Figure pct00001
상기 식에서,
A는
Figure pct00002
으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
L은 결합 또는 C1-C3 알킬이고;
B는 H,
Figure pct00003
으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
B가
Figure pct00004
으로 이루어진 군으로부터 선택된 것이 바람직하다.
B가
인 본 발명의 화합물이 더욱 바람직하다.
본 발명의 바람직한 측면에서, A는
Figure pct00006
으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
A가
으로 이루어진 군으로부터 선택된 것이 바람직하다.
A가
Figure pct00008
인 것이 바람직하다.
또 다른 실시양태에서는, A가
Figure pct00009
이다.
L이 결합 및 CH2로 이루어진 군으로부터 선택된 것이 본 발명의 바람직한 측면이다. L이 결합인 것이 바람직하다. L이 CH2인 것이 바람직하다.
본 발명은 하기 화학식 II의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
<화학식 II>
Figure pct00010
본 발명은 하기 화학식 III의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
<화학식 III>
Figure pct00011
본 발명의 화합물은 호변이성질체 형태로 존재할 수 있는 것으로 이해된다. 호변이성질체 형태가 존재하는 경우에, 각각의 형태 및 그의 혼합물이 본 발명에서 고려된다.
본 발명은 또한 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 OA와 연관된 통증의 치료가 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자의 OA와 연관된 통증을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명은 치료에 사용하기 위한, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
본 발명은 OA와 연관된 통증의 치료에 사용하기 위한, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 더욱 추가로, 본 발명은 OA와 연관된 통증의 치료를 위한 의약을 제조하기 위한, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도를 제공한다.
본 발명은 추가로 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 한 실시양태에서, 본 조성물은 하나 이상의 다른 치료제를 추가로 포함한다. 본 발명은 또한 화학식 I의 화합물의 합성을 위한 신규 중간체 및 방법을 포함한다.
용어 "제약상 허용되는 염"은 임상학적 및/또는 수의학적 용도로 허용가능한 것으로 간주되는 본 발명의 화합물의 염을 말한다. 제약상 허용되는 염 및 이들을 제조하기 위한 일반적인 방법론은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [P. Stahl, et al., Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use, (VCHA/Wiley-VCH, 2002); S.M. Berge, et al., "Pharmaceutical Salts," Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol. 66, No. 1, January 1977]을 참조한다.
본원에 사용된 용어 "치료하는" (또는 "치료하다" 또는 "치료")은 기존의 증상, 상태 또는 장애의 진행 또는 심각성의 억제, 완화, 중지 또는 반전을 말한다. 증상, 상태 또는 장애는 "급성" 또는 "만성" 사건으로 나타날 수 있다. 급성 사건에서 화합물은 증상, 상태 또는 장애의 개시시에 투여되고 사건이 사라질 때 중단된다. 만성 사건은 증상 또는 사건과 관련된 장애 또는 상태의 과정 동안에 치료되고, 여기서 만성 치료는 증상 또는 사건의 특정 징후에 의존하지 않는다. 본 발명은 급성 및 만성 치료를 모두 의도한다.
본 발명의 화합물은 오토탁신을 억제하고, 오토탁신의 증가와 관련된 질환 또는 상태를 치료하는데 유용하다. 본 발명의 화합물은 LPA의 오토탁신 매개 생산을 억제하고 LPA의 증가가 수반되는 질환 또는 상태를 치료하는데 유용하다. 본 발명의 화합물은 다른 LPA 지질 매개체와 비교했을 때 오토탁신 매개 LPA 생합성을 억제한다. 본 발명의 화합물은 LPA의 증가와 관련된 질환 또는 상태를 치료하는데 유용하다.
본원에서 사용된 "환자"는 치료가 필요한 동물을 말한다. 바람직한 실시양태는 포유동물, 바람직하게는 인간인 환자이다. 또 다른 바람직한 실시양태는 개, 고양이 또는 가금과 같은 반려 동물인 환자이다.
본원에서 사용된 용어 "유효량"은 환자에게 단일 또는 다중 용량 투여시에 진단 또는 치료 하에 있는 환자에서 원하는 효과를 제공하는 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 양 또는 용량을 말한다. 실제로 투여되는 활성 약제의 양은 치료되어야 하는 상태, 선택된 투여 경로, 투여되는 실제 활성 약제, 개별 환자의 연령, 체중과 반응, 및 환자 증상의 심각성을 포함하는 관련 상황 및 다른 관련 상황에 비추어 의사에 의해 결정될 것임을 이해하게 될 것이다.
본 발명의 화합물은 바람직하게는 화합물을 생체이용가능하게 만드는 임의의 경로에 의해 투여되는 제약 조성물로 제제화된다. 가장 바람직하게는, 상기 조성물은 경구 투여용이다. 이러한 제약 조성물 및 그의 제조 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Remington: The Science and Practice of Pharmacy (D.B. Troy, Editor, 21st Edition, Lippincott, Williams & Wilkins, 2006]을 참조한다.
일반적으로, 화학식 I의 화합물은 화학식 IV의 화합물로부터 제조될 수 있다. 보다 구체적으로 반응식 A에서, 화학식 IV의 화합물은 O-벤조트리아졸-1-일-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트 및 염기, 예를 들어 디이소프로필에틸아민의 존재 하에 화학식 VII의 화합물과 커플링되어 화학식 I의 화합물을 제공한다. 적합한 용매는 디메틸 술폭시드를 포함한다.
다르게는 반응식 A에서, 화학식 I의 화합물은 화학식 V의 화합물로부터 제조될 수 있다. 보다 구체적으로, 화학식 IV의 화합물은 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 및 염기, 예를 들어 N,N-디메틸-4-피리딘아민의 존재하에 화학식 VIII (여기서, Pc는 B 기에 대한 적합한 전구체임)의 화합물과 커플링되어 화학식 V의 화합물을 제공한다. 적합한 용매는 디클로로메탄을 포함한다. 화학식 V (여기서, Pc는 B 기에 대한 적합한 전구체임)의 화합물은 실시예 및 제조예에 기재된 바와 같은 조건 하에서 반응하여 화학식 I의 화합물을 제공한다. 숙련된 의약 화학자가 B 기로의 전환에 적절한 Pc의 값을 선택할 것이다. 화학식 VIII (여기서, Pc는 B 기에 대한 적합한 전구체임)의 화합물은 실시예 및 제조예에서 설명된 바와 같이 제조될 수 있다.
<반응식 A>
Figure pct00012
반응식 B에 나타낸 바와 같이, 화학식 IV의 화합물은 화학식 VI (여기서, Pg는 아민 보호기임)의 화합물로부터 제조될 수 있다. 보다 구체적으로, 화학식 VI (여기서, Pg는 tert-부톡시카르보닐임)의 화합물은 테트라히드로푸란과 같은 용매에서 염산과 같은 산과 반응하여 화학식 IV의 화합물을 제공한다.
<반응식 B>
Figure pct00013
반응식 C에서, 화학식 VI (여기서, Pg는 tert-부톡시카르보닐임)의 화합물은 화학식 IX의 화합물로부터 제조될 수 있다. 보다 구체적으로, N-tert-부톡시카르보닐-4-피페리돈은 순차적으로 디메틸포름아미드와 같은 용매 중에서 (CH3)2NCH(OCH3)2와 반응한 다음 에탄올과 같은 보조용매 중에서 탄산칼륨과 같은 염기, 화학식 IX의 화합물과 반응하여 화학식 VI (여기서, Pg는 tert-부톡시카르보닐임)의 화합물을 제공한다. 화학식 IX의 화합물은 아세토니트릴과 같은 용매 중에서 디이소프로필에틸아민과 같은 염기와 2,3-디히드로-1H-인덴-2-아민 히드로클로라이드 및 1H-피라졸-1-카르복스이미다미드 히드로클로라이드를 반응시켜 제조될 수 있다.
<반응식 C>
Figure pct00014
<제조예 및 실시예>
하기 제조예 및 실시예는 본 발명을 추가로 예시하고 본 발명의 화합물의 대표적인 합성을 나타낸다. 본 제조예 및 실시예는 제한이 아닌 예시의 방식으로 기재되었고, 통상의 기술자에 의해 다양한 변형이 이루어질 수 있음을 이해해야 한다. 시약 및 출발물질은 일반적으로 통상의 기술자가 입수가능하다. 다른 것들은 공지된 구조적으로 유사한 화합물의 합성과 유사한 유기 및 헤테로환 화학의 표준 기술 및 임의의 신규 절차를 포함하는 하기되는 제조예 및 실시예에서 기술된 절차에 의해 제조될 수 있다.
반대로 언급되지 않는 한, 본원에서 예시된 화합물들은 ACDLABS 또는 시믹스 드로우(Symyx Draw) 3.2를 사용하여 명명되고 번호매겨졌다.
<제조예 1>
1-인단-2-일구아니딘 히드로클로라이드의 합성.
Figure pct00015
아세토니트릴(2 L) 중 2,3-디히드로-1H-인덴-2-아민 히드로클로라이드(197 g; 1.08 당량; 1.16 몰), 1H-피라졸-1-카르복스이미다미드 히드로클로라이드(158 g; 1.00 당량; 1.08 몰) 및 디이소프로필에틸아민(400 g; 2.87 당량; 3.09 몰; 539.74 mL)의 용액을 62℃에서 2시간 동안 교반하면, 그 기간 동안에 백색 고체가 침전된다. 혼합물을 25℃로 냉각시킨 다음 여과시키고, 300 mL의 아세토니트릴 및 300 mL의 메틸tert-부틸 에테르로 세척하였다. 생성물을 공기 중에서 25℃에서 1시간 동안 건조시켜 표제 화합물(200 g, 87%)을 백색 고체로 얻었다. MS (m/z): 176 (M + 1).
<제조예 2>
tert-부틸 2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-카르복실레이트의 합성.
Figure pct00016
디메틸포름아미드(1.2 L) 중 1,1-디메톡시-N,N-디메틸-메탄아민(224 g; 2.15 당량; 1.88 몰; 250.98 mL) 및 N-t-부톡시카르보닐-4-피페리돈(250 g; 1.44 당량; 1.25 몰)의 용액을 109℃에서 N2 하에 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 25℃로 냉각시킨 다음 에탄올(700 mL; 12.02 몰; 553.91 g)을 첨가하였다. 1-인단-2-일구아니딘 히드로클로라이드(185 g; 1.00 당량; 873.90 mmol) 및 탄산칼륨(475 g; 3.44 몰)을 25℃에서 한번에 혼합물에 첨가하여 백색 현탁액을 형성하였다. 혼합물을 80-90℃에서 24시간 동안 교반시킨 다음 25℃로 냉각시키고 혼합물을 5 L 얼음/물에 부어 황색 현탁액을 얻었다. 에틸 아세테이트(3 x 3 L)로 추출하고, 유기층을 10% 염화리튬 용액(3 L), 물(3 L), 및 포화된 염화나트륨 용액(3 L)으로 세척하였다. 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축시켜 약 300 ml의 적색 용액을 얻었다. 용액을 실리카겔 플러그(10 cm 높이, 5 cm 직경)를 통해 여과시킨 다음 건조상태로 농축시켜 표제 화합물을 적색 겔(320 g, 100%)로서 얻었다. MS (m/z): 367 (M + 1).
<제조예 3>
N-인단-2-일-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리딘-2-아민의 합성.
Figure pct00017
염산(900 mL; 물 중 5 M; 5.17 당량; 4.50 몰; 1.08 kg)을 일부분씩 테트라히드로푸란(1.5 L) 중 tert-부틸 2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-카르복실레이트(319 g; 1.00 당량; 870.48 mmol)의 용액에 첨가하였다. 일단 첨가가 완료되면, 용액을 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 25℃로 냉각시킨 다음 3 L의 메틸tert-부틸 에테르 및 1 L의 물을 첨가하였다. 용액을 20℃에서 16시간 동안 정치시켰다. 상들을 분리시키고 수성 상을 디클로로메탄(2 L)으로 추출하였다. 유기 추출물을 버리고 수성 상을 4 M 수산화나트륨을 사용하여 pH 10으로 조정하였다. 에틸 아세테이트로 추출하고(3 x 3 L), 합친 유기 추출물들을 포화 염화나트륨(2 L)으로 세척하였다. 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고 건조상태로 농축시켜 적색 겔을 얻었다. 물질을 에틸 아세테이트(300 mL) 및 석유 에테르(200 mL) 중에 50℃에서 재용해시키고, 24시간에 걸쳐 침전시켰다. 여과시키고 건조하여 표제 화합물(85 g, 37%)을 얻었다. MS (m/z): 267 (M + 1).
<제조예 4>
에틸-1-(3-트리메틸실릴프로프-2-이닐)피라졸-4-카르복실레이트의 합성.
Figure pct00018
에틸-1H-피라졸-4-카르복실레이트(700.7 mg, 5 mmol)을 50 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고 디메틸포름아미드(11 mL)에 용해시켰다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 수소화나트륨(180.0 mg, 4.5 mmol)을 20분에 걸쳐 일부분씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 20분 동안 교반한 다음 3-브로모프로프-1-이닐(트리메틸)실란(0.92 mL, 6.5 mmol)을 첨가하고 추가로 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(20 mL)로 켄칭하고 에틸 아세테이트로 3회 추출하고 수성 상을 버렸다. 유기 층들을 합하고 염수로 1회 세척하였다. 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트/헥산과 함께 플래쉬 실리카겔 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(0.75 g, 60%)을 얻었다. LCMS (m/z): 251.0 (M+1).
<제조예 5>
에틸-1-(1H-트리아졸-4-일메틸)피라졸-4-카르복실레이트의 합성.
Figure pct00019
에틸-1-(3-트리메틸실릴프로프-2-이닐)피라졸-4-카르복실레이트(0.751 g, 3.00 mmol)을 마이크로웨이브 바이알에 넣고 디메틸포름아미드(12.00 mL) 및 물(18 mL)에 용해시켰다. 황산구리(II) 오수화물(149.79 mg, 0.6 mmol) 및 L-아스코르브산 나트륨염(1.19 g, 6.00 mmol) 및 디메틸포름아미드(2 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 3회 탈기시켰다. 아지도트리메틸실란(1.60 mL, 12.00 mmol)을 첨가하고 90℃에서 15시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트로 3회 추출하고 수성 상을 버렸다. 유기 층들을 합하고 염수로 1회 세척하였다. 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 메탄올/아세토니트릴과 함께 플래쉬 실리카겔 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(0.5 g, 75%)을 얻었다. LCMS (m/z): 222.0 (M+1).
<제조예 6>
1-(1H-트리아졸-4-일메틸)피라졸-4-카르복실산의 합성.
Figure pct00020
에틸 1-(1H-트리아졸-4-일메틸)피라졸-4-카르복실레이트(2.1 g, 7.16 mmol)을 100 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고 테트라히드로푸란(30 mL) 및 물(15 mL)에 용해시켰다. 수산화리튬(1.50 g, 35.79 mmol)을 첨가하고 55℃에서 18시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 5 N 염산으로 pH 1-2로 희석시켰다. 감압 하에 용매를 제거하였다. 에탄올을 첨가하고 고체를 여과시켜버렸다. 여액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물(3.01 g, 105%)을 얻었다. LCMS (m/z): 194.0 (M+1).
<실시예 1>
[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-[1-(1H-트리아졸-4일메틸)피라졸-4-일]메타논의 합성.
실시예 1의 화합물에 대한 대안의 화학명은 [2-(2,3-디히드로-1H-인덴-2-일아미노)-7,8-디히드로피리도[4,3-d]피리미딘-6(5H)-일][1-(1H-1,2,3-트리아졸-4일메틸)-1H-피라졸-4-일]메타논이다.
Figure pct00021
1-(1H-트리아졸-4-일메틸)피라졸-4-카르복실산(2.28 g, 5.70 mmol)을 100 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고 디메틸 술폭시드(28.5 mL)에 용해시켰다. 디이소프로필에틸아민(6.8 mL, 39.2 mmol) 및 O-벤조트리아졸-1-일-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트(3.5 g, 11.00 mmol)을 첨가하고, 10분 동안 교반하였다. N-인단-2-일-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-2-아민(1.52 g, 5.70 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 90분 동안 교반하였다. 반응을 물(40 mL)로 켄칭하고 10% 메탄올/에틸 아세테이트로 3회 추출하고 수성 상을 버렸다. 유기 층들을 합하고 염수로 1회 세척하였다. 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 역상 크로마토그래피로 정제하고 메탄올/에틸 아세테이트/헥산으로 결정화하여 표제 화합물(0.45 g, 18%)을 얻었다. LCMS (m/z): 442.2 (M+1).
<제조예 7>
[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-(1H-피라졸-4-일)메타논의 합성.
Figure pct00022
4-피라졸카르복실산(700.7 mg, 5 mmol), N-인단-2-일-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-2-아민(2.00 g, 7.51 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드(2.16 g, 11.26 mmol), 및 4-피리딘아민, N,N-디메틸(45.9 mg, 0.3 mmol)을 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고 디클로로메탄(60 mL)에 용해시켰다. 반응 혼합물을 25℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응을 포화 중탄산나트륨(50 mL)으로 켄칭하고 디클로로메탄으로 2회 추출하였다. 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 메탄올/에틸 아세테이트로부터 재결정화하여 표제 화합물(0.98 g, 28%)을 얻었다. LCMS (m/z): 361.2 (M+1).
<제조예 8>
1H-이미다졸-4-일-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논의 합성.
Figure pct00023
1H-이미다졸-4-카르복실산(1.26 g, 11.21 mmol), 1-히드록시벤조트리아졸 일수화물(1.14 g, 7.45 mmol), N-인단-2-일-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-2-아민(1.82 g, 6.83 mmol), 트리에틸아민(2.84 mL, 20.36 mmol), 및 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드(1.43 g, 7.45 mmol)을 둥근 바닥 플라스크에 넣었다. 디메틸포름아미드(22 mL)를 첨가하고 25℃에서 밤동안 교반하였다. 반응을 물로 켄칭하고 9:1 디클로로메탄/메탄올로 추출하였다. 물로 1회 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 메탄올/디클로로메탄을 사용하여 정상 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물(1.2 g, 49%)을 얻었다. LCMS (m/z): 361.2 (M+1).
<제조예 9>
[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-(1H-피롤-3-일)메타논의 합성.
Figure pct00024
N-인단-2-일-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-2-아민(1.08 g, 4.05 mmol), 1H-피롤-3-카르복실산(500.00 mg, 4.50 mmol)을 둥근 바닥 플라스크에 넣었다. 디메틸포름아미드(15 mL) 및 디이소프로필에틸아민(3.14 mL, 18.00 mmol; 3.14)을 첨가하였다. 0℃로 냉각시키고, 1-프로판포스폰산 시클릭 무수물(3.45 mL, 5.85 mmol)을 적가하였다. 0℃에서 교반하고 실온으로 가온하고 25℃에서 18시간 동안 교반하였다. 얼음물에 붓고 15분 동안 교반하였다. 고체를 여과하고, 물로 세척하고 고체를 진공 오븐에서 40℃에서 건조시켜 표제 화합물(1.62 g, 31%)을 얻었다. LCMS (m/z): 360.2 (M+1).
<제조예 10>
[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-(1-프로프-2-이닐피롤-3-일)메타논의 합성.
Figure pct00025
[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-(1H-피롤-3-일)메타논(500 mg, 1.39 mmol) 및 디메틸포름아미드(3 mL)를 둥근 바닥 플라스크에 넣고 ℃로 냉각시켰다. 소듐 비스(트리메틸실릴)아미드(1.81 mL, 1.81 mmol)를 첨가하고 40분 동안 교반하였다. 3-브로모프로프-1-이닐(트리메틸)실란(216.50 μL, 1.53 mmol)을 첨가하였다. 반응을 물로 켄칭하고 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 염수로 1회 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 메탄올/디클로로메탄을 사용하여 정상 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물(0.55 g, 25%)을 얻었다. LCMS (m/z): 398.0 (M+1).
<제조예 11>
메틸 1-(3-트리메틸실릴프로프-2-이닐)트리아졸-4-카르복실레이트의 합성.
Figure pct00026
메틸 1H-트리아졸-5-카르복실레이트(400.00 mg, 3.15 mmol) 및 디메틸포름아미드(6.84 mL)를 둥근 바닥 플라스크에 넣었다. 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 수소화나트륨(120.00 mg, 3.0 mmol)을 20분에 걸쳐 일부분씩 첨가한 다음 20분 동안 교반하였다. 3-브로모프로프-1-이닐(트리메틸)실란(578.83 μL, 4.09 mmol)을 첨가하였다. 반응을 물로 켄칭하고 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 염수로 1회 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트/헥산을 사용하여 정상 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물(0.25 g, 33%)을 얻었다. LCMS (m/z): 238.0 (M+1).
<제조예 12>
메틸 1-[(5-트리메틸실릴-1H-트리아졸-4-일)메틸]트리아졸-4-카르복실레이트의 합성.
Figure pct00027
메틸 1-(3-트리메틸실릴프로프-2-이닐)트리아졸-4-카르복실레이트(240 mg, 1.01 mmol)을 마이크로웨이브 반응 용기에 넣고 디메틸포름아미드(6 mL) 및 물(6 mL)을 첨가하였다. 황산구리(II) 오수화물(50.50 mg, 0.202 mmol) 및 L-아스코르브산 나트륨염(400.67 mg, 2.02 mmol)을 첨가하였다. 질소를 버블링하고 스파징하여 시스템을 3회 탈기시켰다. 아지도트리메틸실란(540.00 μL, 4.04 mmol)을 첨가하고 90℃에서 18시간 동안 가열하였다. 반응을 물로 켄칭하고, 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 염수로 1회 세척하고 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 메탄올/아세토니트릴을 사용하여 정상 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(0.28 g, 39%)을 얻었다. LCMS (m/z): 281.0 (M+1).
<제조예 13>
1-(1H-트리아졸-4-일메틸)트리아졸-4-카르복실산의 합성.
Figure pct00028
메틸 1-[(5-트리메틸실릴-1H-트리아졸-4-일)메틸]트리아졸-4-카르복실레이트(0.28 g, 1.00 mmol), 테트라히드로푸란(5.00 mL), 수산화리튬(209.55 mg, 4.99 mmol) 및 물(2.38 mL)을 둥근 바닥 플라스크에 넣고 55℃에서 3시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 1 N 염산으로 산성화시키고 건조시까지 감압 하에 농축시켜 표제 화합물을 백색 고체(0.47 g, > 100%)로 얻었다.
Figure pct00029
<제조예 14>
메틸 3-(3-트리메틸실릴프로프-2-이녹시)벤조에이트의 합성.
Figure pct00030
메틸 메틸 3-히드록시벤조에이트(502.10 mg, 3.3 mmol) 및 디메틸포름아미드(7.00 mL)를 둥근 바닥 플라스크에 넣었다. 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 수소화나트륨(171.58 mg, 4.29 mmol)을 일부분씩 첨가하고 15분 동안 교반하였다. 3-브로모프로프-1-이닐(트리메틸)실란(700.34 μL, 4.95 mmol)을 첨가하고 18시간 동안 교반하였다. 반응을 물로 켄칭하고 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 염수로 1회 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트/헥산을 사용하여 정상 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물(0.24 g, 28%)을 얻었다. LCMS (m/z): 263.0 (M+1).
<제조예 15>
메틸 3-[(5-트리메틸실릴-1H-트리아졸-4-일)메톡시]벤조에이트의 합성.
Figure pct00031
메틸 3-(3-트리메틸실릴프로프-2-이녹시)벤조에이트(234 mg, 0.89 mmol)을 둥근 바닥 플라스크에 넣고 디메틸포름아미드(5.6 mL) 및 물(5 mL)을 첨가하였다. 황산구리(II) 오수화물(44 mg, 0.18 mmol) 및 L-아스코르브산 나트륨염(353 mg, 1.78 mmol)을 첨가하였다. 질소를 버블링하고 스파징하여 시스템을 3회 탈기시켰다. 아지도트리메틸실란(0.475 mL, 3.57 mmol)을 첨가하고 90℃에서 18시간 동안 가열하였다. 반응을 물로 켄칭하고, 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 염수로 1회 세척하고 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 메탄올/아세토니트릴을 사용하여 정상 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(0.27 g, 55%)을 얻었다. LCMS (m/z): 306.0 (M+1).
<제조예 16>
3-(1H-트리아졸-4-일메톡시)벤조산의 합성.
Figure pct00032
메틸 3-[(4-트리메틸실릴-1H-트리아졸-5-일)메톡시]벤조에이트(0.15 g, 0.49 mmol), 테트라히드로푸란(2 mL), 수산화리튬(206 mg, 4.91 mmol) 및 물(1 mL)을 둥근 바닥 플라스크에 넣고 55℃에서 3시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 1 N 염산으로 산성화시키고 건조시까지 감압 하에 농축시켜 표제 화합물을 백색 고체(0.14 g, 70%)로 얻었다. LCMS (m/z): 220.0 (M+40).
<제조예 17>
메틸 3-(2-트리메틸실릴에티닐)벤조에이트의 합성.
Figure pct00033
둥근 바닥 플라스크에 메틸 3-브로모벤조에이트(1.88 g, 8.73 mmol), 트리에틸아민(10.00 mL, 71.74 mmol), (트리메틸실릴)아세틸렌(1.48 mL, 10.49 mmol), 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 클로라이드(0.146 g, 0.205 mmol) 및 아이오딘화구리(I)(23 mg, 0.121 mmol)를 넣었다. 반응 혼합물을 90℃에서 18시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 탈기시키고, 한번 더 (트리메틸실릴)아세틸렌(1.48 mL, 10.49 mmol), 메틸 3-브로모벤조에이트(1.88 g, 8.73 mmol) 및 아이오딘화구리(I)(23 mg, 0.121 mmol)를 첨가하고 혼합물을 90℃에서 18시간 동안 가열하였다. 반응을 75 mL 1 N 염산으로 켄칭하고, 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 염수로 1회 세척하고 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트/헥산을 사용하여 정상 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(1.4 g, 69%)을 얻었다. LCMS (m/z): 233.0 (M+1).
<제조예 18>
3-에티닐벤조산의 합성.
Figure pct00034
메틸 3-(2-트리메틸실릴에티닐)벤조에이트(0.399 g, 1.55 mmol) 및 테트라히드로푸란(3.68 mL)을 둥근 바닥 플라스크에 넣었다. 수산화리튬(0.162 g, 3.86 mmol) 및 물(3.68 mL)을 첨가하고 50℃에서 가열하였다. 반응을 1.3 mL 5 N 염산으로 켄칭하고 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 염수로 1회 세척하고 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고 감압 하에 농축시켜 표제 화합물(0.26 g, > 100%)을 얻었다.
Figure pct00035
<제조예 19>
(3-에티닐페닐)-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논의 합성.
Figure pct00036
3-에티닐벤조산(259 mg, 1.78 mmol), N-인단-2-일-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-2-아민(430 mg, 1.78 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드(464 mg, 2.42 mmol) 및 4-피리딘아민, N,N-디메틸(9.86 mg, 0.080 mmol)을 둥근 바닥 플라스크에 넣고 디클로로메탄(13 mL)에 용해시켰다. 반응 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 메탄올/디클로로메탄을 사용하여 정상 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(0.64 g, 91%)을 얻었다. LCMS (m/z): 395.2 (M+1).
<실시예 2>
[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-[1-(3-메틸이미다졸-4일)피라졸-4-일]메타논의 합성.
Figure pct00037
[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-(1H-피라졸-4일)메타논(0.142 g, 0.40 mmol), 5-브로모-1-메틸-이미다졸(89 mg, 0.55 mmol), 탄산세슘(257 mg, 0.79 mmol), (1R,2R)-디아미노메틸시클로헥산(16 mg, 0.12 mmol), 및 아이오딘화구리(I)(7.50 mg, 0.039 mmol)을 마이크로웨이브 반응 용기에 넣었다. 톨루엔(2 mL) 및 디메틸포름아미드(2 mL)를 첨가하였다. 용기를 밀봉하고 3회 퍼징시키고 110℃에서 48시간 동안 가열하였다. 반응을 실온으로 냉각되도록 하고 물(2 mL)로 켄칭하였다. 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 역상 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(0.078 g, 0.42%)을 얻었다. LCMS (m/z): 441.2 (M+1).
<실시예 3>
[1-(3-이미다졸-1-일프로필)피라졸-4-일]-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논의 합성.
Figure pct00038
[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-(1H-피라졸-4일)메타논(180 mg, 0.50 mmol), 탄산세슘(507 mg, 1.56 mmol), 및 아이오딘화나트륨(12.5 mg, 0.083 mmol)을 둥근 바닥 플라스크에 넣었다. 디메틸포름아미드(2.5 mL)를 첨가하고 20분 동안 교반하였다. 2 mL의 디메틸포름아미드에 용해된 1-(3-브로모프로필)이미다졸 히드로브로마이드(150.00 mg, 0.56 mmol)를 첨가하였다. 반응을 물로 켄칭하고 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 메탄올/디클로로메탄을 사용하여 정상 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(0.073 g, 28%)을 얻었다. LCMS (m/z): 469.0 (M+1).
<실시예 4>
[1-(2-이미다졸-1-일에틸)이미다졸-4-일]-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논의 합성.
Figure pct00039
1H-이미다졸-4-일-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논(200 mg, 0.55 mmol) 및 탄산세슘(506 mg, 1.55 mmol)을 둥근 바닥 플라스크에 넣었다. 디메틸포름아미드(2.5 mL)를 첨가하고 20분 동안 교반하였다. (2-브로모에틸)-1H-이미다졸-1-이움 브로마이드(156 mg, 0.61 mmol)를 첨가하고 20분 동안 교반하였다. 반응을 물로 켄칭하고 9:1 디클로로메탄/메탄올로 3회 추출하였다. 염수로 1회 세척하고 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 역상 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(0.058 g, 23%)을 얻었다. LCMS (m/z): 455.2 (M+1).
<실시예 5>
[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-[1-(1H-트리아졸-4-일메틸)피롤-3-일]메타논의 합성.
Figure pct00040
[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-(1-프로프-2-이닐피롤-3-일)메타논(140 mg, 0.35 mmol)을 마이크로웨이브 반응 용기에 넣고 디메틸포름아미드(3 mL) 및 물(4 mL)을 첨가하였다. 황산구리(II) 오수화물(35 mg, 0.141 mmol) 및 L-아스코르브산 나트륨염(279 mg, 1.41 mmol)을 첨가하였다. 질소를 버블링하고 스파징하여 시스템을 3회 탈기시켰다. 아지도트리메틸실란(0.188 mL, 1.41 mmol)을 첨가하고 90℃에서 밤 동안 가열하였다. 반응을 물로 켄칭하고, 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 염수로 1회 세척하고 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 메탄올/디클로로메탄을 사용하여 정상 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(0.083 g, 53%)을 얻었다. LCMS (m/z): 441.2 (M+1).
<실시예 6>
[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-[1-(1H-트리아졸-4-일메틸)트리아졸-4-일]메타논의 합성.
Figure pct00041
1-(1H-트리아졸-4-일메틸)트리아졸-4-카르복실산(97 mg, 375 mmol) 및 디메틸 술폭시드(2 mL)를 둥근 바닥 플라스크에 넣었다. O-벤조트리아졸-1-일-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트(240 mg, 0.725 mmol) 및 디이소프로필에틸아민(450 μL, 2.58 mmol)을 첨가하고, 15분 동안 교반하였다. N-인단-2-일-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-2-아민(0.100 g, 0.375 mmol)을 첨가하고 25℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응을 물로 켄칭하고 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 염수로 1회 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 역상 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물(0.014 g, 8.4%)을 얻었다. LCMS (m/z): 443.2 (M+1).
<실시예 7>
[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-[3-(1H-트리아졸-5-일)페닐]메타논의 합성.
Figure pct00042
(3-에티닐페닐)-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논(243 mg, 0.616 mmol)을 마이크로웨이브 반응 용기에 넣고 디메틸포름아미드(1.2 mL) 및 물(3.7 mL)을 첨가하였다. 황산구리(II) 오수화물(31 mg, 0.123 mmol) 및 L-아스코르브산 나트륨염(244 mg, 1.23 mmol)을 첨가하였다. 질소를 버블링하고 스파징하여 시스템을 3회 탈기시켰다. 아지도트리메틸실란(0.33 mL, 2.46 mmol)을 첨가하고 90℃에서 2시간 동안 가열하였다. 반응을 물로 켄칭하고, 9:1 에틸 아세테이트/메탄올로 3회 추출하였다. 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 메탄올/에틸 아세테이트를 사용하여 정상 크로마토그래피한 다음 역상 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(0.27 g, 33.0%)을 얻었다. LCMS (m/z): 438.2 (M+1).
<제조예 20>
1-(1H-트리아졸-4-일메틸)피라졸-4-카르복실산의 합성.
Figure pct00043
에틸 1-(1H-트리아졸-4-일메틸)피라졸-4-카르복실레이트(2.1 g, 7.16 mmol)을 100 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고 테트라히드로푸란(30 mL) 및 물(15 mL)에 용해시켰다. 수산화리튬(1.50 g, 35.79 mmol)을 첨가하고 55℃에서 18시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 5 N 염산으로 pH 1-2로 희석시켰다. 감압 하에 용매를 제거하였다. 에탄올을 첨가하고 고체를 여과시켜버렸다. 여액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물(3.01 g, >100%)을 얻었다. LCMS (m/z): 194.0 (M+1).
<제조예 21>
에틸 1-(1H-트리아졸-4-일메틸)피라졸-4-카르복실레이트의 합성.
Figure pct00044
에틸 1-(3-트리메틸실릴프로프-2-이닐)피라졸-4-카르복실레이트(0.751 g, 3.00 mmol)을 마이크로웨이브 바이알에 넣고 디메틸포름아미드(12.00 mL) 및 물(18 mL)에 용해시켰다. 황산구리(II) 오수화물(150 mg, 0.6 mmol) 및 L-아스코르브산 나트륨염(1.19 g, 6.00 mmol) 및 디메틸포름아미드(2 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 3회 탈기시켰다. 아지도트리메틸실란(1.60 mL, 12.00 mmol)을 첨가하고 90℃에서 15시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트로 3회 추출하고 수성 상을 버렸다. 유기 층들을 합하고 염수로 1회 세척하였다. 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 메탄올/아세토니트릴과 함께 플래쉬 실리카겔 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(0.5 g, 75%)을 얻었다. LCMS (m/z): 222.0 (M+1).
<제조예 22>
에틸 1-(3-트리메틸실릴프로프-2-이닐)피라졸-4-카르복실레이트의 합성.
Figure pct00045
에틸 1H-피라졸-4-카르복실레이트(700.7 mg, 5 mmol)을 50 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고 디메틸포름아미드(11 mL)에 용해시켰다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 수소화나트륨(180 mg, 4.5 mmol)을 20분에 걸쳐 일부분씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 20분 동안 교반한 다음 3-브로모프로프-1-이닐(트리메틸)실란(0.92 mL, 6.5 mmol)을 첨가하고 추가로 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(20 mL)로 켄칭하고 에틸 아세테이트로 3회 추출하고 수성 상을 버렸다. 유기 층들을 합하고 염수로 1회 세척하였다. 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트/헥산과 함께 플래쉬 실리카겔 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(0.75 g, 60%)을 얻었다. LCMS (m/z): 251.0 (M+1).
<실시예 8>
[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-[1-(1H-트리아졸-4일메틸)피라졸-4-일]메타논의 합성.
실시예 8의 화합물에 대한 대안의 화학명은 [2-(2,3-디히드로-1H-인덴-2-일아미노)-7,8-디히드로피리도[4,3-d]피리미딘-6(5H)-일][1-(1H-1,2,3-트리아졸-4일메틸)-1H-피라졸-4-일]메타논이다.
Figure pct00046
1-(1H-트리아졸-4-일메틸)피라졸-4-카르복실산(2.28 g 5.70 mmol)을 100 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고 디메틸 술폭시드(28.5 mL)에 용해시켰다. 디이소프로필에틸아민(6.8 mL, 39.2 mmol) 및 O-벤조트리아졸-1-일-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트(3.5 g, 11.00 mmol)을 첨가하고, 10분 동안 교반하였다. N-인단-2-일-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-2-아민(1.52 g, 5.70 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 90분 동안 교반하였다. 반응을 물(40 mL)로 켄칭하고 10% 메탄올/에틸 아세테이트로 3회 추출하고 수성 상을 버렸다. 유기 층들을 합하고 염수로 1회 세척하였다. 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 역상 크로마토그래피로 정제하고 메탄올/에틸 아세테이트/헥산으로 결정화하여 표제 화합물(0.45 g, 18%)을 얻었다. LCMS (m/z): 442.2 (M+1).
<제조예 23>
(4-브로모-2-피리딜)-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논의 합성
Figure pct00047
N-인단-2-일-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-2-아민(2.66 g, 10 mmol), 4-브로모피리딘-2-카르복실산(2.24 g, 11.0 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드(2.88 g, 15.0 mmol), 및 4-피리딘아민, N,N-디메틸-(61 mg, 0.50 mmol)을 100 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣었다. 디클로로메탄(40 mL)에 용해시키고 실온에서 18시간 동안 교반시켰다. 농축시키고 잔류물을 아세토니트릴/디클로로메탄과 함께 플래쉬 실리카겔 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(2.9 g, 64%)을 얻었다. LCMS (m/z): 452.0 (M+2).
<제조예 24>
[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-[4-(2-트리메틸실릴에티닐)-2-피리딜]메타논의 합성.
Figure pct00048
(4-브로모-2-피리딜)-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논(2.9 g, 6.44 mmol), 트리메틸실릴-아세틸렌(1.1 mL, 7.73 mmol), 트리에틸아민(16 mL, 116 mmol), 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 클로라이드(219 mg, 0.31 mmol) 및 아이오딘화구리(I)(32 mg, 0.2 mmol)을 50 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣었다. 디메틸포름아미드(32 mL)에 용해시키고, 반응 혼합물을 3회 탈기시켰다. 반응 혼합물을 65℃에서 18시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고 물로 희석시키고 에틸 아세테이트로 3회 추출하고 수성 상을 버렸다. 유기 층들을 합하고 염수로 1회 세척하였다. 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트/헥산과 함께 플래쉬 실리카겔 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(1.3 g, 43%)을 얻었다. LCMS (m/z): 468.2 (M+1).
<제조예 25>
(4-에티닐-2-피리딜)-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논의 합성.
Figure pct00049
[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-[4-(2-트리메틸실릴에티닐)-2-피리딜]메타논(1.3 g, 2.78 mmol)을 50 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣었다. 테트라히드로푸란(18 mL)에 용해시키고, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 1 N 테트라부틸암모늄 플루오라이드(3.06 mL; 3.06 mmol)을 첨가하고 30분 동안 교반하였다. 반응을 물(40 mL)로 켄칭하고 에틸 아세테이트로 3회 추출하고 수성 상을 버렸다. 유기 층들을 합하고 염수로 1회 세척하였다. 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 메탄올/에틸 아세테이트와 함께 플래쉬 실리카겔 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(0.89 g, 81%)을 얻었다. LCMS (m/z): 396.0 (M+1).
<실시예 9>
[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-[4-(1H-트리아졸-5-일)-2-피리딜]메타논의 합성.
실시예 9의 화합물에 대한 대안의 화학명은 [2-(2,3-디히드로-1H-인덴-2-일아미노)-7,8-디히드로피리도[4,3-d]피리미딘-6(5H)-일][4-(1H-1,2,3-트리아졸-5일)피리딘-2-일]메타논이다.
Figure pct00050
(4-에티닐-2-피리딜)-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논(2.3 g, 4.92 mmol)을 마이크로웨이브 바이알에 넣고 디메틸포름아미드(29 mL) 및 물(29 mL)에 용해시켰다. 황산구리(II) 오수화물(246 mg, 1 mmol) 및 L-아스코르브산 나트륨염(1.9 g, 9.8 mmol) 및 디메틸포름아미드(15 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 3회 탈기시켰다. 아지도트리메틸실란(2.3 mL, 20 mmol)을 20분에 걸쳐 적가하였다. 90℃에서 15시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트로 3회 추출하고 수성 상을 버렸다. 유기 층들을 합하고 염수로 1회 세척하였다. 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 역상 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(0.47 g, 22%)을 얻었다. LCMS (m/z): 439.0 (M+1).
<제조예 26>
(6-클로로피리다진-3-일)-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논의 합성.
Figure pct00051
디클로로메탄(25 mL) 중 6-클로로피리다진-3-카르복실산(1.93 g; 1.20 당량; 12.17 mmol), N-인단-2-일-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-2-아민(2.70 g; 1.00 당량; 10.14 mmol), 및 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드(2.14 g; 1.10 당량; 11.16 mmol)의 현탁액을 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(0 내지 5% 메탄올/메틸렌 클로라이드)로 정제하여 표제 화합물(3.70 g; 90%)을 제공하였다. MS (m/z): 407 (M+1).
<제조예 27>
tert-부틸 2-시아노-2-[6-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-카르보닐]피리다진-3-일]아세테이트의 합성.
Figure pct00052
1,4-디옥산(6.5 mL) 중 수소화나트륨(0.12 g; 2.50 당량; 3.00 mmol)의 교반된 현탁액에 t-부틸 시아노아세테이트(0.27 mL; 1.52 당량; 1.83 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 1시간 후, (6-클로로피리다진-3-일)[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논(0.49 g; 1.00 당량; 1.20 mmol)을 첨가하고, 결과 얻어진 반응 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트와 0.5 M 염산 사이에 분배시키고 층들을 분리시켰다. 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물(0.61 g; 99%)을 제공하였다. MS (m/z): 512 (M+H).
<제조예 28>
2-[6-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-카르보닐]피리다진-3-일]아세토니트릴의 합성.
Figure pct00053
톨루엔(8 mL) 중 tert-부틸 2-시아노-2-[6-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-카르보닐]피리다진-3-일]아세테이트(0.61 g; 1.00 당량; 1.19 mmol)의 교반된 용액에 p-톨루엔술폰산 일수화물(0.025 g; 0.11 당량; 0.13 mmol)을 첨가하고 3시간 동안 가열 환류시킨 다음, 실온으로 냉각시키고 여과시켰다. 고체 잔류물을 메틸렌 클로라이드(30 mL) 중에 용해시키고, 포화 중탄산나트륨으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(50 내지 75% 아세톤/헥산)로 정제시켜 표제 화합물(0.255 g; 52%)을 제공하였다. MS (m/z): 412 (M+H).
<실시예 10>
[2-(2,3-디히드로-1H-인덴-2-일아미노)-7,8-디히드로-[4,3-d]피리미딘-6(5H)-일][6-(1H-테트라졸-5-일메틸)피리다진-3-일]메타논의 합성.
Figure pct00054
톨루엔(6 mL) 중 2-[6-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-카르보닐]피리다진-3-일]아세토니트릴(0.25 g; 1.00 당량; 0.61 mmol)의 교반된 현탁액에 아지도트리메틸실란(0.81 mL; 10 당량; 6.08 mmol) 및 디부틸옥소스타난(0.042 g; 0.28 당량; 0.17 mmol)을 첨가하고, 결과 얻어진 반응 혼합물을 110℃에서 16시간 동안 가열한 다음, 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축시켰다. 결과의 잔류물을 역상 컬럼 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(0.074 g; 27%)을 제공하였다. MS (m/z): 455 (M+H).
<제조예 29>
[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-[6-(2-트리메틸실릴에티닐)피리다진-3-일]메타논의 합성.
Figure pct00055
디메틸포름아미드(0.9 mL) 및 트리에틸아민(10 mL) 중 (6-클로로피리다진-3-일)-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논(0.505 g; 1.00 당량; 1.24 mmol), 아이오딘화구리(I)(0.014 g; 0.06 당량; 0.073 mmol), 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 클로라이드(0.043 g; 0.05 당량; 0.061 mmol) 및 트리메틸실릴아세틸렌(0.69 mL; 3.94 당량; 4.90 mmol)의 현탁액이 충전된 마이크로웨이브 바이알을 140℃에서 30분 동안 조사하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 0.1 N 염산 사이에 분배시키고 분리시켰다. 유기 층을 실리사이클(SiliCycle)(실리아MetS 티올(SiliaMetS Thiol))과 함께 30분 동안 교반하고, 여과하고 농축시켰다. 잔류물을 50% 아세톤/헥산에 용해시키고 실리카겔 플러그를 사용하여 정제하였다. 여액을 감압 하여 농축시켜 표제 화합물(0.44 g, 76%)을 얻었다. MS (m/z): 469 (M+H).
<제조예 30>
[6-(2,2-디메톡시에틸)피리다진-3-일]-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논의 합성.
제조예 30의 화합물에 대한 다른 화학명은 (6-에티닐피리다진-3-일)-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논이다.
Figure pct00056
메탄올(10 mL) 중 [2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-[6-(2-트리메틸실릴에티닐)피리다진-3-일]메타논(0.50 g; 1.00 당량; 1.07 mmol) 및 탄산칼륨(0.42 g; 2.8 당량; 3.01 mmol)의 현탁액을 15분 동안 교반하였다. 반응을 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 물과 메틸렌 클로라이드 사이에 분배하고 층들을 분리시킨 다음, 수성 층을 메틸렌 클로라이드(150 mL)로 추가로 추출하였다. 합친 유기 추출물들을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고 감압 하에 농축시켰다. 결과의 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(50% 아세톤/헥산)에 의해 정제시켜 표제 화합물(0.082 g; 16%)을 제공하였다. MS (m/z): 397 (M+H).
<실시예 11>
[2-(2,3-디히드로-1H-인덴-2-일아미노)-7,8-디히드로피리도[4,3-d]피리미딘-6(5H)-일][6-(1H-1,2,3-트리아졸-5-일)피리다진-3-일]메타논의 합성.
Figure pct00057
디메틸포름아미드(1 mL) 및 물(1 mL) 중 (6-에티닐피리다진-3-일)-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논(0.082 g; 1.00 당량; 0.21 mmol), 황산구리(II) 오수화물(0.005 g; 0.1 당량; 0.020 mmol) 및 L-아스코르브산 나트륨염(0.012 g; 0.3 당량; 0.061 mmol)의 교반된 현탁액을 탈기시키고 재충전시켰다(2x). 아지도트리메틸실란(0.05 mL; 1.8 당량; 0.375 mmol)을 첨가하고, 결과의 반응 혼합물을 90℃에서 1시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 상온으로 냉각시키고, 0.1 N 염산과 에틸 아세테이트 사이에 분배시키고 분리시켰다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 추가로 추출하였다(2 x 50 mL). 합친 유기 추출물들을 염수(2 x 50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 역상 컬럼 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(0.031 g; 35%)을 얻었다. MS (m/z): 440 (M+H).
<제조예 31>
(5-브로모-3-피리딜)-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논의 합성.
Figure pct00058
디클로로메탄(9 mL) 중 5-브로모니코틴산(0.91 g; 1.20 당량; 4.51 mmol), N-인단-2-일-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-2-아민(1.00 g; 1.00 당량; 3.75 mmol) 및 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드(0.791 g; 1.1 당량; 4.13 mmol)의 현탁액을 30분 동안 교반한 다음, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(0 내지 5% 메탄올/디클로로메탄)에 의해 정제시켜 표제 화합물(1.145 g; 68%)을 백색 고체로서 얻었다. MS (m/z): 450, 452 (M, M+2H).
<제조예 32>
[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-[5-(2-트리메틸실릴에티닐)-3-피리딜]메타논의 합성.
Figure pct00059
(5-브로모-3-피리딜)-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논(1.47 g; 1.00 당량; 2.45 mmol), 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 클로라이드(0.086 g; 0.05 당량; 0.12 mmol), 아이오딘화구리(I)(0.024 g; 0.05 당량; 0.12 mmol), 트리에틸아민(1.42 mL; 4.15 당량; 10.16 mmol), (트리메틸실릴)아세틸렌(2.42 mL; 7.0 당량; 17.1 mmol), 및 디메틸포름아미드(2.45 mL)를 함유하는 20 mL 마이크로웨이브 바이알을 120℃에서 50분 동안 조사하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(75 mL) 중에서 희석시키고 실리아MetS 티올(1.381 g)을 첨가한 다음, 반응 혼합물을 상온에서 16시간 동안 교반하도록 하였다. 혼합물을 여과시킨 다음 유기물을 염화리튬 용액(5%, 2x) 및 염수로 세척하였다. 유기물을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(30% 아세톤/헥산)로 정제하여 표제 화합물(0.852 g; 74%)을 오렌지-갈색 포옴으로 얻었다. MS (m/z): 468 (M+H).
<제조예 33>
(5-에티닐-3-피리딜)-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논의 합성.
Figure pct00060
메탄올(5 mL) 및 디클로로메탄(10 mL) 중 [2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-[5-(2-트리메틸실릴에티닐)-3-피리딜]메타논(0.852 g; 1.00 당량; 1.82 mmol) 및 탄산칼륨(0.76 g; 3.0 당량; 5.47 mmol)의 용액을 상온에서 15분 동안 교반한 다음, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트 중에 용해시키고 물로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축시켜 표제 화합물(0.753 g; >95%)을 고체로 얻었다. 이 물질은 추가의 정제없이 다음 단계에 사용된다. MS (m/z): 396 (M+H).
<실시예 12>
[2-(2,3-디히드로-1H-인덴-2-일아미노)-7,8-디히드로피리도[4,3-d]피리미딘-6(5H)-일][5-(1H-1,2,3-트리아졸-5-일)피리딘-3-일]메타논의 합성.
Figure pct00061
디메틸포름아미드(1.8 mL) 및 물(1.8 mL) 중 (5-에티닐-3-피리딜)-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논(0.72 g; 1.00 당량; 1.82 mmol), 황산구리(II) 오수화물(0.023 g; 0.05 당량; 0.091 mmol) 및 L-아스코르브산 나트륨염(0.072 g; 0.2 당량; 0.36 mmol)을 함유하는 용액을 2 번 탈기시키고 재충전시켰다(질소 가스). 아지도트리메틸실란(0.36 mL; 1.5 당량; 2.73 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 90℃에서 2시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트 및 50% 포화 염화나트륨으로 희석시켰다. 수성 층을 3:1 클로로포름:이소프로판올로 추출하였다. 합친 유기 층들을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔류물을 메탄올 및 에틸 아세테이트로 배산시켜 표제 화합물(0.173 g; 22%)을 회백색 고체로 얻었다. MS (m/z): 439 (M+H).
<제조예 34>
1H-이미다졸-4-일-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논의 합성.
Figure pct00062
디메틸포름아미드(12.5 mL) 중 N-인단-2-일-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-2-아민(1.00 g; 1.00 당량; 3.75 mmol), 1H-이미다졸-4-카르복실산(0.46 g; 1.10 당량; 4.10 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드(0.79 g; 1.10 당량; 4.12 mmol), 1-히드록시벤조트리아졸 수화물(0.63 g; 1.10 당량; 4.11 mmol) 및 트리에틸아민(1.6 mL; 3.1 당량; 11.48 mmol) 혼합물을 실온에서 밤 동안 교반하였다. 용액을 에틸 아세테이트와 5% 염화리튬 용액 사이에 분배시키고, 층들을 분리시킨 다음, 수성 층을 에틸 아세테이트로 추가로 추출하였다. 합친 유기 추출물들을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(0 내지 20% 메탄올/디클로로메탄)로 정제하여 표제 화합물(0.842 g; 62%)을 회백색 고체로 얻었다. MS (m/z): 361 (M+H).
<실시예 13>
[2-(2,3-디히드로-1H-인덴-2-일아미노)-7,8-디히드로피리도[4,3-d]피리미딘-6(5H)-일][1-(1H-1,2,3-트리아졸-5-일메틸)-1H-이미다졸-4-일]메타논의 합성.
Figure pct00063
테트라히드로푸란(10 mL) 중 1H-이미다졸-4-일-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논(1.00 g; 1.00 당량; 2.77 mmol)의 0℃ 용액에 수소화나트륨(0.22 g; 2.00 당량; 5.55 mmol)을 5분에 걸쳐 일부분씩 첨가하고 15분 동안 교반하였다. 혼합물을 상온으로 가온하고 프로파르길 브로마이드(0.46 mL; 1.5 당량; 4.16 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 상온에서 16시간 동안 교반하였다. 메탄올(1 mL)을 첨가하고 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(0 내지 5% 메탄올/디클로로메탄)로 정제시켜 중간체인 N-알킬 이미다졸을 N-프로파르길(0.697 g, 63%) 및 N-알렌 이성질체(0.123 g, 11%)의 혼합물로 얻었다.
이들 생성물을 합하여 디메틸포름아미드(16.4 mL) 및 물(4 mL) 중 황산구리(II) 오수화물(0.024 g; 0.05 당량; 0.096 mmol)의 용액에 첨가하였다. 시스템을 탈기시키고 질소로 3회 재충전시킨 다음, L-아스코르브산 나트륨염(0.090 mg; 0.23 당량; 0.45 mmol)을 첨가하였다. 아지도트리메틸실란(0.40 mL; 1.50 당량; 3.00 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 90℃에서 16시간 동안 가열하였다. 혼합물을 물과 3:1 클로로포름:이소프로필 알콜 사이에 분배시키고, 분리하였다. 수성 층을 3:1 클로로포름:이소프로필 알콜로 3회 추가로 추출하였다. 합친 유기물들을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 진공 하에 농축시켰다. 생성물을 역상 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(0.035 g; 5%)을 백색 고체로 얻었다. MS (m/z): 442 (M+H).
<제조예 35>
(4-브로모-2-피리딜)-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논의 합성.
Figure pct00064
N-인단-2-일-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-2-아민(2.66 g, 10 mmol), 4-브로모피리딘-2-카르복실산(2.24 g, 11.00 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드(2.88 g, 15.00 mmol), 및 4-피리딘아민, N,N-디메틸-(61.08 mg, 0.500 mmol)을 100 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣었다. 디클로로메탄(40.0 mL)에 용해시키고 실온에서 18시간 동안 교반시켰다. 농축시키고 잔류물을 아세토니트릴/디클로로메탄과 함께 플래쉬 실리카겔 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(2.9 g, 64%)을 얻었다. LCMS (m/z): 452.0 (M+2).
<제조예 36>
[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-[4-(2-트리메틸실릴에티닐)-2-피리딜]메타논의 합성.
Figure pct00065
(4-브로모-2-피리딜)-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논(2.9 g, 6.44 mmol), 트리메틸실릴-아세틸렌(1.1 mL, 7.73 mmol), 트리에틸아민(16 mL, 115.5 mmol), 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 클로라이드(219.15 mg, 0.31 mmol) 및 아이오딘화구리(I)(32 mg, 0.2 mmol)을 50 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣었다. 디메틸포름아미드(32 mL)에 용해시키고, 반응 혼합물을 3회 탈기시켰다. 반응 혼합물을 65℃에서 18시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고 물로 희석시키고 에틸 아세테이트로 3회 추출하고 수성 상을 버렸다. 유기 층들을 합하고 염수로 1회 세척하였다. 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트/헥산과 함께 플래쉬 실리카겔 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(1.3 g, 43%)을 얻었다. LCMS (m/z): 468.2 (M+1).
<제조예 37>
(4-에티닐-2-피리딜)-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논의 합성.
Figure pct00066
[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-[4-(2-트리메틸실릴에티닐)-2-피리딜]메타논(1.3 g, 2.78 mmol)을 50 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣었다. 테트라히드로푸란(18 mL; 15.89)에 용해시키고, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 1 M 테트라부틸암모늄 플루오라이드(3.06 mL; 3.06 mmol)을 첨가하고 30분 동안 교반하였다. 반응을 물(40 mL)로 켄칭하고 에틸 아세테이트로 3회 추출하고 수성 상을 버렸다. 유기 층들을 합하고 염수로 1회 세척하였다. 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 메탄올/에틸 아세테이트와 함께 플래쉬 실리카겔 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(0.89 g, 81%)을 얻었다. LCMS (m/z): 396.0 (M+1).
<실시예 14>
[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-[4-(1H-트리아졸-5-일)-2-피리딜]메타논의 합성.
실시예 14의 화합물에 대한 대안의 화학명은 [2-(2,3-디히드로-1H-인덴-2-일아미노)-7,8-디히드로피리도[4,3-d]피리미딘-6(5H)-일][4-(1H-1,2,3-트리아졸-5일)피리딘-2-일]메타논이다.
Figure pct00067
[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-[4-(2-트리메틸실릴에티닐)-2-피리딜]메타논(2.3 g, 4.92 mmol)을 마이크로웨이브 바이알에 넣고 디메틸포름아미드(29 mL) 및 물(29 mL)에 용해시켰다. 황산구리(II) 오수화물(246 mg, 1.0 mmol) 및 L-아스코르브산 나트륨염(1.9 g, 9.8 mmol) 및 디메틸포름아미드(15 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 3회 탈기시켰다. 아지도트리메틸실란(2.3 mL, 20 mmol)을 20분에 걸쳐 적가하였다. 혼합물을 90℃에서 15시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트로 3회 추출하고 수성 상을 버렸다. 유기 층들을 합하고 염수로 1회 세척하였다. 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 역상 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(0.47 g, 22%)을 얻었다. LCMS (m/z): 439.0 (M+1).
<제조예 38>
6-이미다졸-1-일피리딘-3-카르복실산의 합성.
Figure pct00068
메틸 6-이미다졸-1-일피리딘-3-카르복실레이트(535 mg, 2.50 mmol), 테트라히드로푸란(12 mL), 수산화나트륨(780 mg, 3.75 mmol) 및 메탄올(10 mL)을 둥근 바닥 플라스크에 넣고 50℃에서 3시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 1 N 염산으로 산성화하고 건조할 때까지 감압 하에 농축시켰다. 메탄올/디클로로메탄 중에 현탁시키고, 여과시키고 및 농축시켜 표제 화합물(0.47 g, 68%)을 백색 고체로 얻었다. LCMS (m/z): 190.0 (M+1).
<실시예 15>
(6-이미다졸-1-일-3-피리딜)-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논의 합성.
Figure pct00069
6-이미다졸-1-일피리딘-3-카르복실산(125 mg, 0.66 mmol), N-인단-2-일-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-2-아민(160 mg, 0.60 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드(173 mg, 0.90 mmol), 및 4-피리딘아민, N,N-디메틸(3.7 mg, 0.03 mmol)을 둥근 바닥 플라스크에 넣고 디클로로메탄(5 mL)에 용해시켰다. 반응 혼합물을 25℃에서 18시간 동안 교반시켰다. 감압 하에 건조상태로 농축시켰다. 잔류물을 역상 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(0.049 g, 19%)을 얻었다. LCMS (m/z): 438.0 (M+1).
<실시예 16>
[4-(1H-이미다졸-4-일)페닐]-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논의 합성.
Figure pct00070
4-(1H-이미다졸-4-일)벤조산(124 mg, 0.66 mmol), N-인단-2-일-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-2-아민(160 mg, 0.60 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드(173 mg, 0.90 mmol), 및 4-피리딘아민, N,N-디메틸(3.7 mg, 0.03 mmol)을 둥근 바닥 플라스크에 넣고 디클로로메탄(5 mL)에 용해시켰다. 반응 혼합물을 25℃에서 18시간 동안 교반시켰다. 감압 하에 건조상태로 농축시켰다. 잔류물을 역상 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(0.106 g, 40%)을 얻었다. LCMS (m/z): 437.2 (M+1).
<제조예 39>
(6-브로모-3-피리딜)-[2-인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논의 합성.
Figure pct00071
6-브로모피리딘-3-카르복실산(224 mg, 1.10 mmol), N-인단-2-일-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-2-아민(266 mg, 1.00 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드(288 mg, 1.50 mmol), 및 4-피리딘아민, N,N-디메틸(6.1 mg, 0.05 mmol)을 둥근 바닥 플라스크에 넣고 디클로로메탄(4 mL)에 용해시켰다. 반응 혼합물을 25℃에서 18시간 동안 교반시켰다. 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 아세토니트릴/디클로로메탄을 사용하여 정상 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(0.25 g, 55%)을 얻었다. LCMS (m/z): 452.2 (M+1).
<제조예 40>
[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-[6-(2-트리메틸실릴에티닐)-3-피리딜]메타논의 합성.
Figure pct00072
둥근 바닥 플라스크에, 디메틸포름아미드(1.44 mL) 중 (6-브로모-3-피리딜)-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논(260 mg, 0.57 mmol), 트리에틸아민(1.44 mL, 10.36 mmol), (트리메틸실릴)아세틸렌(0.098 mL, 0.69 mmol), 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 클로라이드(9.8 mg, 0.014 mmol), 및 아이오딘화구리(I)(1.4 mg, 0.008 mmol)을 넣고, 65℃에서 가열하였다. 반응을 물로 켄칭하고 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 염수로 1회 세척하고 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 메탄올/아세토니트릴을 사용하여 정상 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(0.17 g, 63%)을 얻었다. LCMS (m/z): 468.2 (M+1).
<제조예 41>
(6-에티닐-3-피리딜)-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논의 합성.
Figure pct00073
[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-[6-(2-트리메틸실릴에티닐)-3-피리딜]메타논(170 mg, 0.36 mmol)을 둥근 바닥 플라스크에 넣었다. 테트라히드로푸란(1 mL)을 첨가하고 0℃로 냉각시켰다. 1 M 테트라-N-부틸 암모늄 플루오라이드(0.40 mL; 0.40 mmol)을 첨가하고 30분 동안 교반하였다. 반응을 물로 켄칭하고 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 염수로 1회 세척하고 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 메탄올/에틸 아세테이트와 함께 정상 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(0.087 g, 61%)을 얻었다. LCMS (m/z): 396.2 (M+1).
<실시예 17>
[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-[6-(1H-트리아졸-4-일)-3-피리딜]메타논의 합성.
Figure pct00074
(6-에티닐-3-피리딜)-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논(87 mg, 0.22 mmol)을 마이크로웨이브 반응 용기에 넣고 디메틸포름아미드(1.7 mL) 및 물(1.3 mL)를 첨가하였다. 황산구리(II) 오수화물(11 mg, 0.044 mmol) 및 L-아스코르브산 나트륨염(87 mg, 0.44 mmol)을 첨가하였다. 질소를 버블링 및 스파징하여 3회 시스템을 탈기시켰다. 아지도트리메틸실란(0.117 mL, 0.88 mmol)을 첨가하고, 90℃에서 2시간 동안 가열하였다. 반응을 물로 켄칭하고 9:1 에틸 아세테이트/메탄올로 3회 추출하였다. 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트/헥산을 사용하여 정상 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(0.043 g, 44%)을 얻었다. LCMS (m/z): 439.2 (M+1).
<제조예 42>
(5-브로모-2-피리딜)-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논의 합성
Figure pct00075
5-브로모피리딘-2-카르복실산(224 mg, 1.10 mmol), N-인단-2-일-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-2-아민(266 mg, 1.0 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드(288 mg, 1.50 mmol), 및 4-피리딘아민, N,N-디메틸(6.1 mg, 0.050 mmol)을 둥근 바닥 플라스크에 넣고 디클로로메탄(4 mL)에 용해시켰다. 반응 혼합물을 25℃에서 18시간 동안 교반시켰다. 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 아세토니트릴/디클로로메탄을 사용하여 정상 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(0.34 g, 75%)을 얻었다. LCMS (m/z): 452.2 (M+1).
<제조예 43>
[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-[5-(2-트리메틸실릴에티닐)-2-피리딜]메타논의 합성.
Figure pct00076
둥근 바닥 플라스크에, 디메틸포름아미드(2 mL) 중 (5-브로모-2-피리딜)-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논(0.34 g, 0.75 mmol), 트리에틸아민(1.89 mL, 13.54 mmol), (트리메틸실릴)아세틸렌(0.128 mL, 0.91 mmol), 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 클로라이드(13 mg, 0.018 mmol), 및 아이오딘화구리(I)(1.9 mg, 0.010 mmol)을 넣고, 90℃에서 가열하였다. 반응을 물로 켄칭하고 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 염수로 1회 세척하고 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트/헥산을 사용하여 정상 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(0.25 g, 71%)을 얻었다. LCMS (m/z): 468.2 (M+1).
<제조예 44>
(5-에티닐-2-피리딜)-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논의 합성.
Figure pct00077
[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-[5-(2-트리메틸실릴에티닐)-2-피리딜]메타논(300 mg, 642 mmol)을 둥근 바닥 플라스크에 넣었다. 테트라히드로푸란(1.5 mL)을 첨가하고 0℃로 냉각시켰다. 1 M 테트라-N-부틸 암모늄 플루오라이드(0.71 mL, 0.71 mmol)을 첨가하고 30분 동안 교반하였다. 반응을 물로 켄칭하고 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 염수로 1회 세척하고 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 메탄올/에틸 아세테이트/헥산을 사용하여 정상 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(0.18 g, 71%)을 얻었다. LCMS (m/z): 396.2 (M+1).
<실시예 18>
[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-[5-(1H-트리아졸-4-일)-2-피리딜]메타논의 합성.
Figure pct00078
(5-에티닐-2-피리딜)-[2-(인단-2-일아미노)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]메타논(162 mg, 0.41 mmol)을 마이크로웨이브 반응 용기에 넣고 디메틸포름아미드(0.7 mL) 및 물(2.4 mL)를 첨가하였다. 황산구리(II) 오수화물(20 mg, 0.082 mmol) 및 L-아스코르브산 나트륨염(162 mg, 0.82 mmol)을 첨가하였다. 질소를 버블링 및 스파징하여 3회 시스템을 탈기시켰다. 아지도트리메틸실란(0.218 mL, 1.64 mmol)을 첨가하고, 90℃에서 2시간 동안 가열하였다. 반응을 물로 켄칭하고 9:1 에틸 아세테이트/메탄올로 3회 추출하였다. 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 메탄올/에틸 아세테이트/헥산을 사용하여 정상 크로마토그래피한 다음 역상 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(0.014 g, 8.0%)을 얻었다. LCMS (m/z): 439.2 (M+1).
콜린 방출에 의해 측정시의 오토탁신의 억제
이 분석의 목적은 콜린 방출 분석을 사용하여 오토탁신 억제를 검출하는 것이다.
시험 화합물(100% DMSO 중 10 mM 모액)을 100% DMSO 중에 연속적으로 희석시켜 절반 면적의 96 웰 플레이트(코닝(Corning) 3992)에 100X 억제제의 10 개의 농도를 생성시켰다. 100% DMSO 중 이들 10개의 웰 각각을 둥근 바닥 96 웰 플레이트(피셔(Fisher) 12565502) 내 분석 완충제에서 1:33.33으로 희석시켜, 3% DMSO를 함유하는 웰 내 3X 농도를 생성시켰다. 분석 완충제는 50 mM 트리스(Tris) pH 8.0, 5 mM KCl, 1 mM CaCl2, 1 mM MgCl2, 0.01% 트리톤(TRITON)TM X-100(시그마(Sigma) T9284) 및 0.01% 지방산 무함유 소의 혈청 알부민(시그마 A8806)이다. 각 3X 시험 화합물의 20 ㎕ 분취액을 이어서 단일 시험편으로 검정 편평 바닥 96 웰 플레이트(코닝 3991)에 첨가하였다. 이어서 3X 재조합 인간 오토탁신(이철론(Echelon), E-4000)(293E 세포로 트랜스펙션되고 니켈 킬레이트 및 크기 배제 크로마토그래피를 통해 정제된 C-말단 His 태그를 갖는 전장 인간 오토탁신)의 웰당 20 ㎕ 분취액을 효소 불포함 대조군 웰을 제외한 모든 웰에 첨가하였다. 효소 불포함 대조군 웰에는 분석 완충제의 웰당 20 ㎕ 분취액을 첨가하였다. 콜린 옥시다제(시그마 C5896), 양고추냉이 퍼옥시다제(시그마 P8125), 암플렉스 울트라레드(amplex ultrared)(인비트로젠(Invitrogen) A36006) 및 오토탁신 기질 리소포스파티딜콜린 (LPC) 16:0(아반티 폴라 리피즈(Avanti Polar Lipids) 855675P)을 함유하는 3X 칵테일의 20 ㎕ 분취액을 빛에의 노출을 피하면서 각 웰에 첨가하였다. 콜린 옥시다제, 양고추냉이 퍼옥시다제, 암플렉스 울트라레드 및 LPC 16:0의 웰 내 최종 농도는 각각 0.4 단위/ml, 4 단위/ml, 40 μM 및 30 μM이다. 이어서 플레이트를 알루미늄 호일 시일로 밀봉하고 37℃에서 1시간 동안 라블린 임페리얼(Labline Imperial) III 인큐베이터에서 인큐베이션하였다. 이 인큐베이션 동안, LPC는 오토탁신에 의해 분해되어 리소포스파티드산(LPA) 16:0 및 콜린을 생성시켰다. 방출된 콜린은 콜린 옥시다제에 의해 산화되어 베타인 및 과산화수소를 생성시켰다. 과산화수소는 양고추냉이 퍼옥시다제 및 암플렉스 울트라레드와 반응하여 형광 분자 레조루핀(resorufin)을 생성시켰다. 플레이트 상의 레조루핀은 소프트맥스 프로(SoftMax Pro) 4.8 소프트웨어를 사용하여 530-590 nm의 여기-방출 파장에서 스펙트라맥스 제미니(SpectraMax Gemini) EM 형광계로 측정하였다. IC50은 4 파라미터 곡선 피팅을 사용하여 계산하였다. 본원에서의 실시예 1의 화합물을 본질적으로 상기한 바와 같이 시험하였다. IC50을 표 1에 나타낸다. 예시된 화합물은 30 nM 미만의 IC50을 갖는다.
<표 1>
오토탁신의 억제: 콜린 방출 분석
Figure pct00079
표 1의 데이터는 실시예 1의 화합물이 시험관내 콜린 방출 분석을 사용하여 오토탁신을 억제함을 예시한다.
인간 혈장 존재 하에서의 LPA의 오토탁신 매개 억제
다음의 분석은 LPA의 오토탁신 매개 억제를 측정하기 위한 것이다. 이 분석은 오토탁신 억제제로 동정된 화합물을 시험하기 위해 사용될 때 오토탁신 매개된 LPA 억제제 화합물을 동정하는데 사용될 수 있는 도구이다. 오토탁신을 통한 LPA 생합성은 LPA1 매개 신경병증 통증의 경우 LPA의 공급원인 것으로 여겨진다 (Makoto Inoue, et.al, "Autotaxin, a synthetic enzyme of lysophosphatidic acid (LPA), mediates the induction of nerve-injured neuropathic pain", Molecular Pain, 2008, 4:6). 오토탁신 매개 LPA 생합성의 억제는 이 분석의 결과에 의해 지지된다.
나트륨 헤파린(람파이어 바이오라지칼스(Lampire Biologicals))에 수집된 건강한 인간 여성 공여자로부터의 혈장 유닛을 한데 합하고, 분취하여 -80℃에서 저장하였다. 분석 당일에, 혈장의 분취액을 해동하고 원심분리기에서 4℃에서 10분 동안 3000 RPM에서 회전시켜 부스러기를 제거하였다. 혈장의 90 ㎕ 분취액을 96 웰 둥근 바닥 폴리프로필렌 플레이트의 각 웰에 첨가하였다. 분석 완충제(50 mM 트리스 pH 8.0, 5 mM KCl, 1 mM CaCl2 , 1 mM MgCl2) 중 10% DMSO를 함유하는 10X 시험 화합물의 10 ㎕ 분취액을 시험 화합물을 함유하지 않는 대조용 웰을 제외한 각 웰에 첨가하였다. 이것은 90% 혈장 중 1% DMSO의 최종 농도를 갖는 단일의 시험편의 시험 화합물 10 1X 농도를 생성시켰다. 시험 화합물이 없는 분석 완충제 중 10% DMSO의 10 ㎕ 분취액을 0시간 (n=8) 및 3시간 시험 화합물 불포함 대조군(n=8) 웰에 첨가하였다. 500 mM 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)의 10 ㎕ 분취액을 각 0시간 시험 화합물 불포함 대조군 웰에 첨가하여 내인성 오토탁신을 킬레이팅시켰다. 0시간 시험 화합물 불포함 대조군 웰의 전체 내용물을 새로운 96 웰 둥근 바닥 폴리프로필렌 플레이트로 옮기고 -80℃에서 냉동시켰다. 이어서 혈장 +/- 시험 화합물(마이너스 0시간 억제제 불포함 대조군 웰)을 함유하는 플레이트를 14,000 RPM에서 요동시키면서 로빈스 사이언티픽(Robbins Scientific)™ 모델 400 혼성화 인큐베이터에서 37℃에서 3시간 동안 인큐베이션하였다. 이 3시간 인큐베이션 동안, 혈장에 존재하는 레시틴 콜레스테롤 아실트랜스퍼라제가 포스파티딜콜린을 분해하여 오토탁신 기질 리소포스파티딜콜린(LPC)의 보다 높은 혈장 수준을 초래한다. 내인성 LPC의 증가된 수준은 내인성 오토탁신에 의해 분해되어 내인성 리소포스파티드산(LPA)의 보다 높은 혈장 농도를 야기시킨다(Nakamura et al, Clinical Biochemistry 40 (2007), 274-277). 3시간 인큐베이션에서의 이러한 LPA의 증가는 오토탁신 억제제에 의해 억제될 수 있다. 3시간 인큐베이션 후, 500 mM EDTA 10 ㎕를 남아있는 모든 웰(시험 화합물 함유 웰 및 3시간 시험 화합물 불포함 대조군 웰)에 첨가하여 내인성 오토탁신을 킬레이팅하였다. 이어서 이들 웰의 전체 내용물을 이전에 -80℃에서 저장된 0시간 시험 화합물 불포함 대조군 혈장(해동하지 않은 0시간 혈장)을 함유하는 플레이트에 첨가하였다. 이어서 플레이트를 알루미늄 호일 시일로 다시 덮고 질량 분석을 위해 추출될 때까지 다시 - 80℃에 두었다. 추출 당일에, 플레이트를 얼음 상에서 해동시키고, 각 웰로부터의 혈장 25 ㎕를 2 ml 트루테이퍼(TrueTaper)™ 사각형 96 딥 웰 플레이트(애널리티컬 세일즈 앤드 프로덕츠(Analytical Sales and Products) #968820)에 옮겼다. LPA 내부 표준(50 ng/ml D5 중수소 LPA 16:0 및 50 ng/ml D5 중수소 LPA 18:0)을 함유하는 추출 완충제(50% 메탄올, 49.9% 아세토니트릴, 0.1% 아세트산)의 400 ㎕ 분취액을 각 웰에 첨가하고 각 샘플의 총 LPA를 질량 분석에 의해 구하였다. LPA의 억제 퍼센트를 하기 식에 따라 계산하였다.
Figure pct00080
IC50 값은 4 파라미터 곡선 피팅을 사용하여 계산하였다. 결과는 산술 평균 +/- 표준 편차; n=x로 표현된다. 본 발명의 화합물을 사용한 본 분석의 결과는 투여량 의존적이고 통계적으로 유의한 LPA 억제를 나타낼 수 있다. 이 분석의 결과는 시험 화합물이 오토탁신 매개 LPA 생합성을 억제함을 지지할 수 있다.
IC50 값은 4 파라미터 곡선 피팅을 사용하여 계산하였다. 본 발명의 화합물을 사용한 이 분석의 결과는 투여량 의존적인 오토탁신 매개 LPA 억제를 보여준다.
<표 2>
인간 혈장에서의 오토탁신 매개 LPA 억제
Figure pct00081
표 2의 데이터는 실시예 1의 화합물이 인간 혈장의 존재하에 오토탁신 매개 LPA의 억제제임을 입증한다.

Claims (16)

  1. 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure pct00082

    상기 식에서,
    A는
    Figure pct00083

    으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    L은 결합 또는 C1-C3 알킬이고;
    B는
    Figure pct00084

    으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
  2. 제1항에 있어서, L이 결합 또는 CH2로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화합물 또는 그의 염.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, B가
    Figure pct00085

    으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화합물 또는 그의 염.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, A가
    Figure pct00086

    으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화합물 또는 그의 염.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, A가
    Figure pct00087

    으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화합물 또는 그의 염.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, B가
    Figure pct00088

    인 화합물 또는 그의 염.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, A가
    Figure pct00089

    인 화합물 또는 그의 염.
  8. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, L이 CH2인 화합물 또는 그의 염.
  9. 제1항 내지 제6항 및 제8항 중 어느 한 항에 있어서, A가
    Figure pct00090

    인 화합물 또는 그의 염.
  10. 제1항 내지 제7항 및 제9항 중 어느 한 항에 있어서, L이 결합인 화합물 또는 그의 염.
  11. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 화학식 II의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    <화학식 II>
    Figure pct00091
  12. 제1항 내지 제6항, 제9항 및 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 화학식 III의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    <화학식 III>
    Figure pct00092
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물.
  14. 유효량의 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 골관절염과 연관된 통증의 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자의 골관절염과 연관된 통증을 치료하는 방법.
  15. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 치료에 사용하기 위한 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  16. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 골관절염과 연관된 통증의 치료에 사용하기 위한 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
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