KR20150110867A - 육신국을 유효성분으로 포함하는 지방간 질환의 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents

육신국을 유효성분으로 포함하는 지방간 질환의 예방 또는 치료용 조성물 Download PDF

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KR20150110867A KR1020140032743A KR20140032743A KR20150110867A KR 20150110867 A KR20150110867 A KR 20150110867A KR 1020140032743 A KR1020140032743 A KR 1020140032743A KR 20140032743 A KR20140032743 A KR 20140032743A KR 20150110867 A KR20150110867 A KR 20150110867A
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Abstract

본 발명은 육신국을 유효성분으로 포함하는 지방간 질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 육신국은 고지방 식이로 유도한 지방간 동물모델에서 간 독성을 일으키지 않으며, 체중 증가를 억제하고, 간 조직 내의 지방 축적을 현저하게 감소시키며, 혈중 총 콜레스테롤 및 중성지방의 농도를 감소시키는 우수한 효과를 가지고 있어, 지방간 질환의 예방 또는 치료, 및 간기능 개선에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

육신국을 유효성분으로 포함하는 지방간 질환의 예방 또는 치료용 조성물 {Composition comprising massa medicata fermentata for preventing or treating fatty liver disease}
본 발명은 육신국을 유효성분으로 포함하는 지방간 질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
지방간은 간 세포 속에 지방이 축적된 상태를 의미하며, 의학적으로 지방이 전체 간 무게의 5% 이상을 초과하는 병적 상태를 의미하는데, 이를 포함하는 간질환은 선진국 40-50대 성인 인구의 사망 원인에서 암 다음으로 심각한 질환으로 인정된다. 선진국을 포함한 주요 국가의 인구 중 30%는 지방간 증상을 보이고 있으며, 이들 중 20%는 간경변증으로 진행하게 되며, 간경변증 환자의 약 절반은 진단 후 10년 이내에 간질환으로 사망한다.
지방간은 크게 과음으로 인한 알코올성 지방간 질환(alcoholic fatty liver disease)과 비만, 당뇨병, 고지혈증, 약물 등으로 인한 비알코올성 지방간 질환(nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD)으로 나눌 수 있다.
비알콜성 지방간질환은 간에 유해할 정도로 인정되는 알콜 섭취 병력이 없음에도 불구하고 간 조직 검사에서 알콜성 간염의 특징적인 소견인 지방성 변화(fatty change, steatosis)와 소엽성간염(lobular hepatitis, steatohepatitis)등을 나타내는 경우를 말한다. 비알코올성 지방간 질환은 원인에 따라 원발성과 속발성으로 나뉘는데 원발성은 대사 증후군의 특징인 고지혈, 당뇨 또는 비만 등에 의해 발생되며, 속발성은 영양적 원인(급격한 체중 감소, 기아, 장 우회술), 다양한 약물, 독성 물질(독버섯, 세균 독소), 대사성 원인 및 기타 요인에 의해 발생하는 것으로 알려져 있다. 원발성 요인인 대사증후군의 중요한 특징인 당뇨 및 비만과 관련된 비알코올성 지방간 질환의 발생률은 당뇨 환자의 약 50%, 비만 환자의 약 76%, 비만한 당뇨 환자에서 거의 대부분 발생하는 것으로 알려져 있다(Gupte P et al., 2004). 또한 알라닌 아미노트랜스퍼라제(Alanine aminotransferase, ALT)의 수준이 증가된 당뇨 및 비만 환자에서 생검을 실시한 결과 지방간염의 발생율은 18-36%로 나타내고 있다(Braillon A et al., 1985).
현재까지 비알코올성 지방간 질환에 대한 확립된 치료법은 없는데 이는 비알코올성 지방간 질환이 당뇨병, 비만, 관상동맥 질환, 생활 습관 등의 다양한 요소와 연관되어 나타나기 때문이다. 몇 가지 당뇨 또는 비만 치료 약제 투여에 의한 지방간 질환에 대한 효과가 보고되었는데 경구용 비만치료제로 사용되고 있는 올리스탓(Orlistat)의 경우 지방간염 환자에서 간의 조직학적 향상을 유도했다는 보고(Hussein et al., 2007)가 있으며, 메트포민(Metformin)은 당뇨를 동반하지 않는 비알코올성 지방간 환자에서 혈중 간 효소 수치 및 간의 괴사성 염증 및 섬유화가 감소시켰다는 보고가 있다(Bugianesi et al., 2005). 또한 PPAR(peroxisome proliferator-activated receptor)의 작용물질(agonist)인 티아졸리딘디온(Thiazolidinedione, TZD) 계열의 약물은 간과 근육에서의 지방 축척을 억제하고, 비알코올성 지방간 질환의 동물 모델에서 간에 대해 직접적인 항 섬유화 작용을 나타내는 것으로 보고된 바 있다(Galli A et al., 2002). 그러나 현재 지방간을 약물학적으로 치료하는데 유용한 약제는 거의 없는 상태이며 운동과 식이요법만이 권장되고 있기 때문에 지방간 치료제의 개발이 요구된다.
한편, 육신국은 도정하지 않은 통밀(밀가루와 밀기울)에 다른 한약재를 섞어서 발효시켜 말린 것으로서 각지에서 생산이 가능한 것이다. 육신국은 모양이 일정하지 않으며 황갈색 또는 갈색의 덩어리이다. 질(質)은 가루상태로서 가볍고 엉성하여 부서지기 쉽고 실질(實質) 중에 갈색을 띤 섬유상의 물질이 섞여 있다. 이 약은 약간의 쉰 냄새가 있고 맛은 조금 쓴 맛이 나며 뜬 냄새가 나지 않고 벌레가 먹지 않았으며 곰팡이가 피지 않은 황색이어야 한다.
육신국은 성질이 따뜻하고 맛이 달며 독이 없는 것으로, 비, 위에 작용하고, 족양명경으로 들어간다. 신국은 사약으로 쓰이는데, 식욕을 돋우고 비(脾)를 튼튼하게 하며 수곡을 소화시킨다. 곽란 설사, 적백하리(赤白下痢)를 멎게 하고 징가를 깨트리며, 담이 가슴으로 치고 올라와 가슴이 그득한 것과 장위(腸胃)가 막혀서 음식이 내려가지 못하는 것을 내리며, 낙태시키고 귀태(鬼胎)를 내린다. 장부가 풍사에 상한 것을 치료하고 속을 고르게 하며 기를 내리고 위기를 도와주며 음식에 체한 것을 삭힌다. 또한 징결을 헤치고 허한 것을 보하여 냉기를 없애고 장위 속이 막혀서 음식이 내려가지 않는 것을 소화시킨다. 비를 튼튼하게 하여 위를 따뜻하게 하고 얼굴 빛을 좋아지게 하며, 소아 간질과 치질에도 쓰이고 있다.
"천금방"에는 아랫배가 쟁반만하게 단단하고 가슴 속이 그득하여 음식을 먹어도 소화시키지 못하는데 누룩가루를 한 번에 네모로 각 1치인 숟가락 하나씩 하루 3번 복용하면 된다고 기재되어 있다. 또한, 홍국은 소화를 돕고 위의 습을 마르게 하며 적백리를 치료한다.
그러나 현재까지, 육신국의 지방간 치료 효과에 대해서는 보고된 바가 없으며, 이에 대한 연구도 전무한 상황이다.
이에 본 발명자들은 기존의 지방간 치료를 위해 개발된 약물들의 한계점을 극복하고, 지방간 억제 효과가 높으며, 부작용이 적은 새로운 약물을 개발하기 위해 연구를 수행한 결과, 육신국이 우수한 지방간 치료 효과가 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 육신국을 유효성분으로 포함하는 지방간 질환의 예방 또는 치료용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 육신국을 유효성분으로 포함하는 간 기능 개선용 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 육신국을 유효성분으로 포함하는 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 육신국을 유효성분으로 포함하는 지방간 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 육신국을 유효성분으로 포함하는 간 기능 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 육신국은 고지방 식이로 유도한 지방간 동물모델에서 간 독성을 일으키지 않으며, 체중 증가를 억제하고, 간 조직 내의 지방 축적을 현저하게 감소시키며, 혈중 총 콜레스테롤 및 중성지방의 농도를 감소시키는 우수한 효과를 가지고 있어, 지방간 질환의 예방 또는 치료 및, 간기능 개선에 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 지방간 동물모델에서 육신국이 체중 증가에 미치는 영향을 나타낸 도이다.
도 2는 지방간 동물모델에서 육신국이 혈중 AST 수치에 미치는 영향을 나타낸 도이다.
도 3은 지방간 동물모델에서 육신국이 혈중 ALT 수치에 미치는 영향을 나타낸 도이다.
도 4는 지방간 동물모델에서 육신국이 혈중 γ-GT 수치에 미치는 영향을 나타낸 도이다.
도 5는 지방간 동물모델에서 육신국이 혈중 HDL 콜레스테롤 수치에 미치는 영향을 나타낸 도이다.
도 6은 지방간 동물모델에서 육신국이 혈중 LDL 콜레스테롤 수치에 미치는 영향을 나타낸 도이다.
도 7은 지방간 동물모델에서 육신국이 혈중 총 콜레스테롤 수치에 미치는 영향을 나타낸 도이다.
도 8은 지방간 동물모델에서 육신국이 혈중 중성지방 수치에 미치는 영향을 나타낸 도이다.
도 9는 지방간 동물모델에서 육신국이 혈중 유리지방산 수치에 미치는 영향을 나타낸 도이다.
도 10은 지방간 동물모델에서 육신국이 혈중 포도당 수치에 미치는 영향을 나타낸 도이다.
도 11은 지방간 동물모델에서 육신국이 혈중 인슐린 수치에 미치는 영향을 나타낸 도이다.
도 12는 지방간 동물모델에서 육신국이 간 조직 내 지방 축적에 미치는 영향을 나타낸 도이다.
도 13은 지방간 동물모델에서 육신국이 간 조직 내 비만세포 수치에 미치는 영향을 나타낸 도이다.
도 14는 지방간 동물모델에서 육신국이 간 조직 내 콜라겐 축적에 미치는 영향을 나타낸 도이다.
본 발명은 육신국을 유효성분으로 포함하는 지방간 질환의 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 육신국을 유효성분으로 포함하는 간 기능 개선용 조성물을 제공한다.
상기 조성물은 약학적 조성물 또는 식품 조성물을 포함한다.
이하, 본 발명에 대하여 보다 상세히 설명한다.
본 발명에서 육신국은 육신국 총 중량 대비 소맥 50~60중량%, 적소두 5~10중량%, 행인 1~5중량%, 창이경엽즙 5~15중량%, 청호경엽즙 5~15중량% 및 야료경엽즙 10~15중량%를 포함한다.
상기 소맥은 도정하지 않은 통밀을 말하며 도정하지 않은 국산 통밀을 롤러에 넣고 거칠게 분쇄하여 사용하는 것이 바람직하다.
상기 적소두는 건조한 것을 사용하며, 적소두를 물에 불린 다음 시루에 넣고 솥바닥에 물을 넣고 중탕하여 푹 익도록 삶은 후, 삶은 적소두를 롤러에 넣고 거칠게 분쇄하여 사용하는 것이 바람직하다.
상기 행인은 껍질을 벗기지 않은 유피행인을 끓는 물에 담근 다음 건져 내어 껍질을 벗기고 말린 후, 롤러에 넣고 거칠게 분쇄하여 사용하는 것이 바람직하다.
상기 창이경엽즙은 창이에 물이 한참 올랐을 때 이의 경엽을 채취하고 세척하여 물기를 빼주고 절단한 다음 즙을 내며, 즙을 냉장시설에 넣어두면 침전물과 맑은 액으로 분리되는데 이 침전물은 버리고 맑은 액을 사용하는 것이 바람직하다.
상기 청호는 동변에 7일 동안 담갔다가 볕에 말려서 사용하는 것이 바람직하다.
상기 청호경엽즙은 청호에 물이 한참 올랐을 때 이의 경엽을 채취하고 세척하여 물기를 빼주고 절단한 다음 즙을 내며, 즙을 냉장시설에 넣어두면 침전물과 맑은 액으로 분리되는데 이 침전물은 버리고 맑은 액을 사용하는 것이 바람직하다.
상기 야료경엽즙은 야료에 물이 한참 올랐을 때 이의 경엽을 채취하여 세척하고 물기를 빼준 후, 절단하여 즙을 내며, 즙을 냉장시설에 넣어두면 침전물과 맑은 액으로 분리되는데 이 침전물은 버리고 맑은 액을 사용하는 것이 바람직하다.
본 발명의 조성물에서 유효성분인 육신국은 하기와 같이 제조될 수 있다.
먼저, 소맥, 적소두 및 행인을 각각 물로 세척하여 이물질을 제거한 후 그늘에서 건조하고 분쇄하고, 창이, 청호 및 야료 각각의 경엽을 채취하여 세척하고 물기를 빼준 후, 절단하여 즙을 낸다. 상기 즙을 냉장 시설에 두면 침전물과 맑은 액으로 분리되는데, 이 침전물은 버리고 맑은 액을 사용한다. 소맥, 적소두, 행인 창이, 청호 및 야료는 재배한 것 또는 시판되는 것 등을 제한 없이 사용할 수 있다. 분쇄된 소맥, 적소두 및 행인의 분말 및 즙을 낸 창이경엽즙, 청호경엽즙 및 야료경엽즙을 혼합한 후, 혼합된 혼합물을 육신국 틀에 가득 넣고 천으로 덮은 후 단단해지도록 압축하여 성형한다. 성형된 재료를 발효하여 육신국을 수득하였다.
본 발명에 따른 조성물에 있어서, 상기 발효는 40~45℃에서 80~120일간 수행하는 것이 바람직하다.
본 발명에서 지방간 질환이란, 알코올성 지방간 질환(alcoholic fatty liver disease) 및 비알코올성 지방간 질환(nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD)을 포함하며, 바람직하게는 비알코올성 지방간 질환이다.
상기 비알코올성 지방간 질환은 원발성과 속발성에 따른 비알코올성 지방간 질환을 모두 포함하나, 바람직하게는 원발성 고지혈증, 당뇨 또는 비만으로부터 발생되는 비알코올성 지방간 질환을 의미한다. 예를 들어, 비알코올성 지방간 질환은 단순 지방간(Simple steatosis) 질환, 영양성 지방간 질환, 기아성 지방간 질환, 비만성 지방간 질환, 당뇨병성 지방간 질환, 지방간염 및 이러한 질환의 전진에 의해 발생되는 간섬유화(Liver fibrosis)와 간경화(Liver cirrhosis)를 포함한다.
본 발명에 따른 육신국은 고지방 식이로 유도한 지방간 동물모델에서 간 독성을 일으키지 않으며, 체중 증가를 억제하고, 간 조직 내의 지방 축적을 현저하게 감소시키며, 혈중 총 콜레스테롤 및 중성지방의 농도를 감소시키는 우수한 효과를 가지고 있다.
상기한 바와 같이, 본 발명에 따른 육신국은 지방간 치료 효과가 우수하므로, 지방간 질환의 예방 또는 치료에 유용한 의약품 또는 건강기능식품으로 사용될 수 있으며, 간기능 개선에 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 육신국과 함께 지방간 치료 또는 간기능 개선 효과를 갖는 공지의 유효성분을 1종 이상 더 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 또한 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 당해 기술 분야에 알려진 적합한 제제는 문헌 (Remington's Pharmaceutical Science, 최근, Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 것을 사용하는 것이 바람직하다.
본 발명의 약학적 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 소르비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시 벤조에이트, 프로필히드록시 벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등이 있다. 상기 조성물을 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트, 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로골, 트윈 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.
본 발명의 조성물의 바람직한 투여량은 개체의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 예를 들어, 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 육신국은 1일 0.1 내지 10000 mg/kg(체중)의 양으로 투여할 수 있다. 상기 조성물의 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수 회 나누어 투여할 수도 있다.
본 발명의 조성물은 개체에게 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내 주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명의 조성물은 지방간 질환의 예방 및 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
본 발명에서, '건강기능식품'이란 질병의 예방 및 치료, 생체방어, 면역, 병후의 회복, 노화 억제 등 생체조절기능을 가지는 식품을 말하는 것으로, 장기적으로 복용하였을 때 인체에 무해하여야 한다.
본 발명의 육신국은 지방간 질환의 예방 또는 개선, 및 간기능 개선을 목적으로 건강기능식품에 첨가될 수 있다. 본 발명의 육신국을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 육신국을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합양은 사용 목적 (예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조 시에 본 발명의 육신국은 원료에 대하여 15중량 % 이하, 바람직하게는 10중량 % 이하의 양으로 첨가된다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물이 포함될 수 있는 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 본 발명의 육신국을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
본 발명의 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 포함할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토오스, 수크로오스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ml 당 일반적으로 약 0.01 내지 10 g, 바람직하게는 약 0.01 내지 0.1 g 이다.
상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 포함할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일주스, 과일주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 포함할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이하 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예 및 실험예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예 및 실험예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예 및 실험예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 육신국의 제조
육신국을 제조하기 위한 재료를 하기 표 1에 나타내었다.
표 1에 나타낸 바와 같이, 소맥(55.51g), 적소두(7.79g), 행인(4.08g)을 각각 롤로에 넣고 거칠게 분쇄하였으며, 창이경엽(10g), 청호경엽(9.64g), 야료경엽(12.98g)을 각각 녹즙기를 이용하여 즙을 내었다. 상기 6가지 재료를 각 4등분 하여 각 등분별로 골고루 혼합하여 광목천이 깔려 있는 육신국틀 안에 가득 넣고 광목천으로 덮은 후, 발로 밟아 단단해지도록 압축하였다. 압축하여 성형된 육신국을 밑바닥이 스텐 망사로 제작된 스테인레스 아미에 배치하였다. 성형된 육신국을 배치한 스테인리스 아미 바닥에 볏짚과 각목을 깔아 공기가 통할 수 있도록 하고, 육신국 재료 옆면의 빈 공간 및 윗면에도 공기가 통할 수 있도록 볏짚을 채우고 큰 타올을 덮어주었다. 상기 육신국 재료를 밀폐된 공간에서 가스난로를 피워 실내온도가 40~45℃로 일정하게 유지시킨 상태에서 100일간 자연 발효시켜 육신국을 완성하였다. 이를 200mesh로 분쇄하여 사용하였다.
한약재명 성분 용량
소맥(小麥) 밀(Triticum aestivum L.) 25근
적소두(赤小豆) 소두(Phaseolus angularis) 1되
행인(杏仁) 시베리아살구(Prunus sibirica L.) 1되3홉
창이(蒼耳) 도꼬마리(Xanthium strumarium L.) 1되
청호(菁蒿) 개사철쑥(Artemisia apiacea Hance) 1되3홉
야료(野蓼) 지모(Anemarrhena asphodeloides) 1되
실험예 1. 동물모델에서 지방간 치료 효과를 검증하기 위한 실험 디자인
1-1. 실험 동물
㈜샘타코(샘타코바이오코리아 Inc., Korea)에서 공급한 7주령의 C57BL/6N 수컷 마우스 54 마리를 구입하여 1주 간 실험실 환경에 적응하도록 한 후 사용하였다. 실험 기간 동안 온도 21±3 ℃, 습도 55±5 %, 환기 횟수 15∼17 회/hour, 조도 150~300 lux, 및 조명에 12시간의 명암(점등: 06:00, 소등: 18:00) 주기가 있는 실험실 환경에서 고형사료(Harlan, USA)와 물을 자유롭게 공급하였다.
1-2. 실험군 및 약물 투여
각 군당 9마리를 체중에 따라 무작위로 군 분리를 실시하였다. 8주 동안 정상군(normal group)은 10 Kcal% 지방을 포함하는 일반 식이를 공급하고, 대조군(control), 양성대조군(Atorvastatin) 및 실험군 (MMF(1), MMF(2), MMF(3))은 45 Kcal% 지방을 포함하는 고지방식이를 공급하여 지방간을 유도하였다. 그 후, 대조군은 멸균수를, 양성대조군은 10mg/kg의 아토르바스타틴(atorvastatin)을, 실험군은 각각 62.5, 125, 250 mg/kg의 상기 실시예 1에서 수득한 육신국을 8주간 경구 투여하였다.
실험예 2. 체중 증가량 측정
본 발명에 따른 육신국(MMF)이 체중 증가에 미치는 영향을 알아보기 위해, 약물을 투여하는 8주 동안 매주 2회씩 체중을 측정하였다. 그 결과를 도 1 및 표 2에 나타내었다.
도 1 및 표 2에 나타낸 바와 같이, 정상군에 비해 대조군은 40일째부터 체중 증가량이 유의하게 증가하였다. 반면, 대조군에 비하여 육신국 투여군(MMF(1), MMF(2), MMF(3))은 8일째부터 마지막날인 57일째까지 감소폭의 변화는 있으나 통계적으로 유의하게 체중 증가량이 감소하였다. 양성대조군인 아토르바스타틴군은 4일째부터 통계적으로 유의하게 체중 증가량이 감소하였다. 대조군에 비하여 MMF 세 농도군과 아토르바스타틴군 모두 체중 감량에 통계적인 유의성이 있는 것으로 나타났다. 감량의 정도는 MMF군이 더 큰 것으로 나타났으며, MMF군의 세 농도 중 MMF(2)에서 그 정도가 더 컸으나, 모든 농도에서 통계적으로 매우 현저한 체중 감량효과가 있었고, 이를 통해 육신국의 체중 감량효과를 확인하였다.
Date 체중 증가량 (g)
정상 대조군 MMF(1) MMF(2) MMF(3) Atorvastatin
4 -0.900±0.515 -0.607±0.785 -1.472±0.906 -1.513±1.205 -1.884±0.529*** -1.581±0.641*
8 -0.553±0.648 0.477±1.403 -1.822±1.333** -2.591±1.216*** -2.567±1.236*** -1.544±1.635*
11 -0.409±0.852 -0.608±1.120 -2.297±1.424* -2.637±1.178** -2.900±1.484** -2.207±1.566*
15 0.054±0.792 0.138±1.824 -2.571±1.422** -2.052±1.267** -2.733±1.673** -1.993±1.432*
18 0.203±1.077 -0.884±1.767 -2.750±1.705* -2.263±0.977 -2.557±1.802 -2.430±1.212*
22 0.149±1.462 -0.692±1.525 -1.361±1.908 -1.780±0.990 -1.753±1.575 -2.134±1.401
25 -0.173±1.213 -0.826±1.411 -1.959±1.512 -2.404±1.110* -2.219±1.592 -2.571±1.605*
29 -0.071±1.246 0.766±1.512 -1.547±1.676** -1.942±1.175*** -1.628±1.274** -0.986±1.372*
32 0.109±1.609 1.273±1.551 -0.694±1.644* -1.384±1.027*** -0.738±1.111** -0.621±1.502*
36 0.326±1.828 2.223±1.659 0.056±1.462* -0.839±1.052*** -0.181±1.311** 0.008±1.395**
39 0.757±1.676 2.922±1.877 -0.014±1.716** -1.110±1.396*** 0.326±1.189** 0.660±1.268**
43 0.921±1.773 3.634±2.080 0.679±1.585** -0.116±1.024*** 1.230±1.086** 1.427±1.209*
46 1.008±1.467 3.782±2.009 0.892±1.534** 0.039±0.935*** 1.503±0.999** 1.600±1.289*
50 1.531±1.637 4.124±2.123 1.703±1.435* 0.719±0.939*** 1.974±1.081* 2.024±1.058*
53 1.798±1.563 4.832±2.230 2.512±1.442* 1.338±1.251*** 2.786±1.005* 2.623±1.119*
57 2.196±1.879 5.554±2.406 2.079±1.738** 1.548±1.192*** 2.299±1.060** 3.116±1.095*
평균±SD. * p<0.05, ** p<0.01, *** p<0.001 (대조군과 비교)
실험예 3. 혈액 생화학 분석
실험 종료 후, 혈액 채취를 위해 각 마우스를 12시간동안 절식한 뒤 디에틸에테르로 마취한 다음, 심장에서 혈액 1 ml을 채취하였다. 상기 혈액을 30분 이상 실온에서 방치한 후, 고속원심분리기(Micro12, Hanil, Korea)를 이용하여 3,000 rpm에서 5분간 원심 분리하여 혈장을 분리하였다. 분리된 혈장은 냉동고(-20℃)에 보관하고 혈액생화학분석기(Modular analytics, Roche, Germany)를 사용하여 AST(aspartate aminotransferase), ALT(alanine aminotransferase), GGT(γ-glutamyltransferase), HDL-콜레스테롤(high density lipoprotein cholesterol), LDL-콜레스테롤(low density lipoprotein cholesterol), 총 콜레스테롤(TC; total cholesterol), 중성지방(TG; triglyceride), 유리지방산(FFA; free fatty acid), 포도당(glucose) 및 인슐린(insulin)의 혈중 농도를 각각 측정하였으며, 그 결과를 표 3 및 도 2 내지 도 11에 나타내었다.
Factors 정상 대조군 MMF(1) MMF(2) MMF(3) Atorvastatin
AST(U/L) 156.33
±42		 212.5610±3.50 178.11±57.97 174.11
±64.61		 166.78
±67.65		 178
±159.71
ALT(U/L) 28.89
±4.60		 95.224
±2.97		 80.67
±49.56		 75.44
±51.18		 57.89
±47.46		 60.67
±48.40
γ-GT(U/L) 0.43
±0.05		 0.44
±0.13		 0.38
±0.07		 0.41
±0.03		 0.42
±0.07		 0.38
±0.14
HDL(mg/㎗) 137.441±1.75 158.78±14.71 155
±16.55		 164
±21.74		 149.33
±15.44		 137.56±14.13**
LDL(mg/㎗) 20.67
±5.81		 40.11
±9.49		 35.33
±9.84		 38.78
±15.30		 31.89
±9.27		 24.78
±6.06***
TC(mg/㎗) 157.441±4.49 201.22±23.37 188.78±26.14 203.33
±39.23		 176.11
±21.23* 		160.78±17.19***
TG(mg/㎗) 78.671±3.15 90.33
±17.94		 84.56
±11.43		 88.11
±11.76		 77.56
±5.18		 72.67
±13.72*
FFA(μEq/L) 977.8916±3.58 879
±109.02		 970.44±114.58 1011
±75.69** 		977.11
±89.87		 868.89
±96.94
Glucose(mg/㎗) 177.222±0.27 213.67±44.40 201.44±32.64 204
±24.79		 176.67
±17.32* 		200.56
±32.17
Insulin(ng/㎗) 0.81
±0.47		 2.23
±0.87		 2.00
±0.92		 2.67
±1.49		 2.09
±1.15		 2.93
±1.47
평균±SD. * p<0.05, ** p<0.01, *** p<0.001 (대조군과 비교)
표 3 및 도 2 내지 도 11에 나타낸 바와 같이, 육신국 투여군은 간 손상의 지표인 AST 및 ALT 측정 결과에서는 대조군과 통계적으로 유의한 차이가 없었으나, 총 콜레스테롤 농도 및 포도당 농도는 대조군에 비해 통계적으로 유의하게 낮게 나타남을 확인하였다.
실험예 4. 간 조직 내 지방 축적 분석
실험 종료 후, 각 마우스를 부검하여 간 조직을 분리하고 이를 10% 인산-완충 포르말린(phosphate-buffered formalin)에서 하루 이상 고정한 후, 12시간 이상 흐르는 물에서 포르말린을 세척하였다. 이를 60% 에탄올, 70% 에탄올, 80% 에탄올, 90% 에탄올, 95% 에탄올 및 100% 에탄올에서 각각 1시간씩 탈수시켰다. 자일렌(Xylen)에서 1시간씩 3번의 투명과정 후, 파라핀에 1시간씩 2회 침투를 실시하였다. 포매과정(embedding)을 거쳐 약 3 ㎛의 두께로 박절(paraffin-section)하여 슬라이드에 조직을 얹고 건조시킨 다음, 헤마톡실린-에오신(H&E) 염색을 하였다. 염색된 슬라이드는 탈수과정을 거쳐 마운팅 시약(mounting medium, Sigma, MO, USA)을 떨어뜨린 후 커버 글래스를 덮어 분석하였다. 조직의 사진 촬영과 지방 세포의 크기 분석은 image analysis system(Image Pro-Plus, MD, USA)을 이용하였으며, 이의 결과를 도 12에 나타내었다.
도 12에 나타낸 바와 같이, 정상군에 비해 대조군은 간 조직 내 상당량의 지방이 축적되어 지방간이 유발된 것을 확인하였다. 대조군에 비하여 육신국 투여군(MMF(1), MMF(2), MMF(3))은 간 조직 내 지방 축적이 감소되었으며, MMF(2)에서 가장 효과적으로 감소함을 확인하였다.
실험예 5. 간 조직 내 비만 세포 분석
실험 종료 후, 각 마우스에서 분리한 간 조직을 약 5㎛로 자른 절편을 슬라이드에 부착시키고 슬라이드를 담은 트레이를 증류수에 5분간 담가두었다. 이를 꺼내어 톨루이딘 블루(toluidine blue) 용액에 3분간 담가두었다. 그 후 증류수, 95% 에탄올 및 100% 에탄올에 각각 차례대로 3회 담갔다 꺼내는 것을 반복하였으며, 조직에서 염색이 빠질 수 있기에 빠르게 실시하였다. 이후 파라핀 제거를 위해 자일렌에 3분간 2회 담아둔 후 상온에서 조직을 건조한 후 캐나다 발삼(canada balsam):자일렌을 3:1의 비율로 제작한 마운팅 시약(mounting medium, Sigma, MO, USA)을 떨어뜨린 후 커버 글래스를 덮어 분석하였다. 조직의 사진 촬영과 지방 세포의 크기 분석은 image analysis system(Image Pro-Plus, MD, USA)을 이용하였으며, 이의 결과를 도 13에 나타내었다.
도 13에 나타낸 바와 같이, 정상군에 비해 대조군은 간 조직 내 비만세포가 현저하게 증가하였다. 대조군에 비하여 육신국 투여군(MMF(1), MMF(2), MMF(3))은 간 조직 내 비만세포가 감소되었으며, MMF(2)에서 가장 효과적으로 감소함을 확인하였다. 양성대조군인 아토르바스타틴군도 간 조직 내 비만세포를 감소시켰으며, 효과정도는 MMF(2)와 유사하였다.
실험예 6. 간 조직 내 콜라겐 축적 분석
실험 종료 후, 각 마우스에서 분리한 간 조직을 약 5㎛로 자른 절편을 슬라이드에 부착시키고 슬라이드를 담은 트레이를 100% 에탄올, 95% 에탄올, 70% 에탄올에 각각 3분 동안 차례대로 담근 후 증류수로 56℃ 중탕시킨 부앙용액(bouin's solution)에 5분 동안 담가두었다. 그 후 흐르는 물에 2시간 동안 부앙용액이 없어질 때까지 세척하였다. 바이게르트 철 헤마톡실린(Weigert's iron hematoxylin) 용액에 10분간 담가둔 후 흐르는 물에 10분간 세척하고 증류수에 담갔다 꺼내는 것을 5회 반복하고, 비브리히 스칼렛산 푹신액(biebrich scarlet acid fuchsin solution)에 15분간 담가둔 후 증류수에 담갔다 꺼내는 것을 5회 반복하였다. 이를 포스포텅스텐산(phosphotungstic acid) 용액에 15분간 담가둔 후, 아닐린블루(aniline blue) 용액에 10분간 담가둔 후, 증류수에 담갔다 꺼내는 것을 3회 반복한 후 1% 아세트산 용액에 5분간 담가두었다. 그 후 95% 에탄올 및 100% 에탄올에 각각 3회씩 차례대로 담갔다 꺼내는 것을 반복한 후 파라핀 제거를 위해 자일렌에 3분간 2회 담아둔 후 상온에서 조직을 건조한 후 캐나다 발삼(canada balsam):자일렌을 3:1의 비율로 제작한 마운팅 시약(mounting medium, Sigma, MO, USA)을 떨어뜨린 후 커버 글래스를 덮어 분석하였다. 조직의 사진 촬영과 지방 세포의 크기 분석은 image analysis system(Image Pro-Plus, MD, USA)을 이용하였으며, 이의 결과를 도 14에 나타내었다.
도 14에 나타낸 바와 같이, 정상군에 비해 대조군은 간 조직 내 콜라겐이 증가함을 확인하였다. 대조군에 비하여 육신국 투여군(MMF(1), MMF(2), MMF(3))은 간 조직 내 콜라겐이 감소되었으며, MMF(2)에서 가장 효과적으로 감소함을 확인하였다. 양성대조군인 아토르바스타틴군도 간 조직 내 콜라겐을 감소시켰으며, 효과정도는 MMF(2)와 유사하였다.
이상의 실험 결과를 통하여, 본 발명의 육신국은 간 독성이 없는 안전한 물질이면서도, 지방간 동물모델에서 체중 증가 및 간 조직 내 지방 축적을 억제하고, 혈중 총 콜레스테롤 및 중성지방의 농도를 감소시키는 등 지질 대사를 개선시켜, 지방간 질환에 대한 우수한 치료 효과를 가지고 있음을 확인하였다.
이하 본 발명의 약학적 조성물 및 식품 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
제제예 1. 약학적 제제의 제조
1. 산제의 제조
육신국 20 mg
유당 100 mg
탈크 10 mg
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.
2. 정제의 제조
육신국 10 mg
옥수수전분 100 mg
유당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg
상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.
3. 캡슐제의 제조
육신국 10 mg
결정성 셀룰로오스 3 mg
락토오스 14.8 mg
마그네슘 스테아레이트 0.2 mg
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.
4. 주사제의 제조
육신국 10 mg
만니톨 180 mg
주사용 멸균 증류수 2974 mg
Na2HPO42H2O 26 mg
통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당 (2 ml) 상기의 성분 함량으로 제조한다.
5. 액제의 제조
육신국 20 mg
이성화당 10 g
만니톨 5 g
정제수 적량
통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100 ml로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.
제제예 2. 식품 제제의 제조
1. 건강식품의 제조
육신국 100 mg
비타민 혼합물 적량
비타민 A 아세테이트 70 g
비타민 E 1.0 mg
비타민 B1 0.13 mg
비타민 B2 0.15 mg
비타민 B6 0.5 mg
비타민 B12 0.2 g
비타민 C 10 mg
비오틴 10 g
니코틴산아미드 1.7 mg
엽산 50 g
판토텐산 칼슘 0.5 mg
무기질 혼합물 적량
황산제1철 1.75 mg
산화아연 0.82 mg
탄산마그네슘 25.3 mg
제1인산칼륨 15 mg
제2인산칼슘 55 mg
구연산칼륨 90 mg
탄산칼슘 100 mg
염화마그네슘 24.8 mg
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
2. 건강음료의 제조
육신국 100 mg
비타민 C 15 g
비타민 E(분말) 100 g
젖산철 19.75 g
산화아연 3.5 g
니코틴산아미드 3.5 g
비타민 A 0.2 g
비타민 B1 0.25 g
비타민 B2 0.3 g
물 정량
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2L 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.
상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

Claims (7)

  1. 육신국을 유효성분으로 포함하는 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 육신국은 육신국 총 중량 대비 소맥 50~60중량%, 적소두 5~10중량%, 행인 1~5중량%, 창이경엽즙 5~15중량%, 청호경엽즙 5~15중량% 및 야료경영즙 10~15중량%를 포함하는 것을 특징으로 하는, 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 지방간 질환은 알코올성 지방간 질환 또는 비알코올성 지방간 질환인 것을 특징으로 하는, 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  4. 제3항에 있어서, 상기 비알코올성 지방간 질환은 단순 지방간 질환, 영양성 지방간 질환, 기아성 지방간 질환, 비만성 지방간 질환, 당뇨병성 지방간 질환, 지방간염, 간섬유화 및 간경화로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  5. 육신국을 유효성분으로 포함하는 지방간 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 상기 육신국은 육신국 총 중량 대비 소맥 50~60중량%, 적소두 5~10중량%, 행인 1~5중량%, 창이경엽즙 5~15중량%, 청호경엽즙 5~15중량%, 야료경영즙 10~15중량%를 포함하는 것을 특징으로 하는, 지방간 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
  7. 육신국을 유효성분으로 포함하는 간기능 개선용 식품 조성물.
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KR1020140032743A KR20150110867A (ko) 2014-03-20 2014-03-20 육신국을 유효성분으로 포함하는 지방간 질환의 예방 또는 치료용 조성물

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105250827A (zh) * 2015-11-11 2016-01-20 尹柱良 一种治疗急性无黄疸型肝炎的中药口服液及制备方法
KR20190003434A (ko) * 2017-06-30 2019-01-09 한국생명공학연구원 섬유화증 예방, 개선 또는 치료용 조성물

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