KR20150083604A - 모루신을 포함하는 전립선암 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents

모루신을 포함하는 전립선암 예방 또는 치료용 조성물 Download PDF

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KR20150083604A
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경희대학교 산학협력단
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Abstract

본 발명은 모루신을 포함하는 전립선암 예방 또는 치료용 약학적 조성물 또는 전립선암 예방 또는 개선용 건강기능식품에 관한 것이다. 본 발명의 모루신은 전립선암 세포에서 암세포의 세포자멸사를 효과적으로 유도할 수 있으므로, 새로운 전립선암 치료제 및 전립선암 개선 건강기능식품 등으로 유용하게 이용될 수 있다.

Description

모루신을 포함하는 전립선암 예방 또는 치료용 조성물{A Composition for prevention and treatment of prostate cancer comprising Morusin}
본 발명은 모루신을 포함하는 전립선암 예방 또는 치료용 약학적 조성물 또는 전립선암 예방 또는 개선용 건강기능식품에 관한 것이다.
전립선암은 남성에게 가장 흔한 악성질환의 하나로 2006년 유럽에서 346,000명의 환자가 발생하여 87,000명이 사망했다고 보고되었다. 이것은 미국에서 가장 일반적으로 진단되는 암으로 남성의 암 관련 사망 원인 중 두 번째이다. 또한 우리나라에서도 전립선 암의 발생이 점차 증가되는 추세이며 각종 암 중에서 발병률 5위, 증가율 1위인 것으로 보고된 바 있다. 전립선 특이 항원(PSA) 모니터링 검사법(monitoring assay)의 민감도 향상으로 인해 전립선암은 조기 발견이 가능하나, 이들 환자들은 아무 증상 없이 10년 이내에 PSA가 증가(생화학적 재발로 알려짐)할 확률이 10 내지 60%나 된다. 생화학적 재발은 국소적으로 재발한 암이 숨어 있거나 아직 발견되지는 않았지만 전이가 시작됨을 나타내는 경우가 대부분이다.
이러한 경우 치료 옵션으로는 외부 방사선 치료와 안드로겐 차단술(호르몬 절제라고도 함)이 있다. 그러나 어떠한 치료 접근법도 효과가 없는 것으로 증명되었으며 특히 환자의 장기 생존율을 늘이는 부분에서 그러하다. 더욱이 두 치료법 모두 많은 부작용(심혈관 질환의 위험성 증가, 골다공증, 체중 증가, 뇌인식 저하, 요도협착 발병, 성욕 상실 및 불임, 골다공증과 관련한 골격 칼슘염의 감소 위험성 및 병적 골절의 위험성의 현저한 증가)에 의해 제한을 받는다. 또한 안드로겐 차단은 안드로겐과 무관한 신 생물 클론이 조기에 발생하게 하여 이후 장기 종양 진행이 더욱 가속화할 우려가 일부 있다. 더욱이 안드로겐 차단 요법의 적절한 개시 시기가 논란이 되고 있는데 특히 낮은 PSA 수치나 장기 평균 배가 시간(DT)을 특징으로 하는 생화학적 재발에 대해 그러하다. 이러한 위험들을 고려하면 안드로겐 차단 요법과 외부 방사선 요법은 초기 생화학적 재발을 보이는 환자의 경우 치료적 가치가 의문시되고 있어 새로운 전립선암 치료제의 개발에 대한 강한 필요성이 있다.
최근 식물체에서 유래된 물질로서 일반적으로 영양소로 작용하지는 않으나 생리활성을 나타내는 화합물들을 그들의 생리활성에 기초하여 의약품 등의 개발에 사용하고자하는 시도가 있다. 이와 같은 성분들을 식물화학물질(phytochemicals)이라고 하며 플라보노이드, 폴리페놀, 테르펜, 황 함유 화합물군 등으로 분류할 수 있다. 식물화학물질에 속하는 사포닌, 제니스테인, 퀘르세틴 등은 혈행개선, 항산화, 콜레스테롤 저하, 항균, 항암, 항바이러스 등의 효과를 갖는 것으로 알려진 대표적인 물질이다.
모루신(Morusin)은 상백피 추출물로부터 유래된 플라보이드 성분이며, C25H24O6의 화학식을 갖는 물질이다. 최근 모루신이 항산화 및 항염증 효과를 갖는다는 것이 보고된 바 있으며, 인간 대장암 및 자궁경부암 줄기세포에서 항암 효과를 나타내었다는 보고가 있었다. 그러나 전립선과 관련된 치료 효과에 대해서는 전혀 밝혀진 바 없다.
본 발명자들은 새로운 전립선암 치료제를 연구하던 중, 상백피 추출물로부터 분리된 모루신이 STAT3 신호전달을 억제하고 전립선 암세포의 세포자멸사를 유도하여 전립선 암세포를 효과적으로 사멸할 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
따라서 본 발명의 목적은 모루신의 새로운 전립선암 치료, 개선 용도를 제공하는 것이다.
상기의 목적을 제공하기 위하여, 모루신(Morusin)을 포함하는 전립선암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 상기 모루신이 상백피 추출물로부터 분리된 것인, 전립선암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 상기 모루신이 전립선 암세포의 세포자멸사를 유도하는 것인, 전립선암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 상기 모루신이 전립선 암세포에서 STAT3(Signal transducer and activator of transcription 3) 신호전달을 억제하는 것인, 전립선암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 모루신을 포함하는 전립선암 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.
또한 본 발명은 상기 모루신이 상백피 추출물로부터 분리된 것인, 전립선암 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.
본 발명의 모루신은 전립선암 세포에서 암세포의 세포자멸사를 효과적으로 유도할 수 있으므로, 새로운 전립선암 치료제 및 전립선암 개선 건강기능식품 등으로 유용하게 이용될 수 있다.
도 1은 인간 전립선암 세포에서의 모루신이 세포 생존율에 미치는 효과를 MTT 분석을 통해 확인한 결과를 나타낸 도이다(평균± S.E.M.; *: 모루신 처리군과 비처리 대조군의 통계적으로 유의한 차이(*, P < 0.05; **, P < 0.01; ***, P < 0.001).
도 2는 모루신의 전립선암 세포 STAT3 인산화 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 3은 모루신의 STAT3의 핵축적 억제효과 및 DNA 결합 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 4는 모루신의 세포자멸사 및 분화조절 단백질의 mRNA, 단백질 발현 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 5는 모루신의 세포자멸사 유도 효과를 확인한 결과를 나타낸 도이다. (*, P < 0.05; **, P < 0.01; ***, P < 0.001).
본 발명은 모루신(Morusin)을 포함하는 전립선암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 모루신은 전립선암 세포에서 STAT-3(Signal transducer and activator of transcription 3) 의 신호전달을 억제하고, 암세포 자멸사를 유도함으로써 효과적으로 전립선 암을 치료하거나 개선할 수 있다.
상기 전립선암의 치료에 있어서, "전립선암"이란 전립선의 선세포가 암화(canceration)되는 것을 나타낸다.
본 발명에 있어서 "전립선암 치료"란, 전립선암의 증식 억제, 또는 타 부위로의 전이 억제 또는 예방, 또는 전립선암의 진행에 수반되는 악액질 등을 억제하는 것을 의미한다. 외과수술 후의 전립선암 재발을 억제하는 것도, 상기의 의미에 포함되는 것으로 한다.
전립선암의 증식이 억제되었는지 여부의 확인은, 화상 진단 등에 의해 전립선암의 원발소나 전이소의 크기(또는 체적)를 평가함으로써도 행할 수 있다. 본 발명의 약제를 투여함으로써, 전립선암의 체적이 감소하고 있는 경우에, 전립선암의 증식이 억제되었다고 불 수 있다. 전립선암의 체적의 측정은 공지의 방법에 의해 행할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 모루신은 모루신의 고유의 성질을 갖는 것이라면 제한 없이 사용될 수 있으나, 바람직하게는 상백피 추출물로부터 분리한 성분일 수 있다.
또한 상기 모루신은 전립선 암세포의 세포자멸사를 유도할 수 있으며 전립선 암세포에서 STAT3(Signal transducer and activator of transcription 3) 신호전달을 억제할 수 있다.
본 발명의 모루신은 조성물의 총 중량에 대하여 0.01 내지 50 중량%로 포함하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 조성물은 실제 임상 투여 시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제 및 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다.
경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제 및 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 본 발명의 약학적 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스, 락토오스 및 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘, 스티레이드, 탈크 같은 윤활제도 사용될 수 있다.
경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 및 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제 및 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제 및 좌제가 포함된다. 비수성용제와 현탁용제로는 프로필레글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤 및 젤라틴 등이 사용될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 비경구 투여시 피하주사, 정맥주사 또는 근육내 주사를 통하여 투여될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물의 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르며, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서 본 발명의 모루신은 60kg 정도의 일반 성인을 기준으로 1일 약 0.001 내지 1000mg/kg으로 투여할 수 있다. 투여는 하루에 한 번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 다만, 상기 투여량의 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 조성물은 전립선암의 예방 및 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
또한 상기 모루신은 전립선 암세포에서 STAT3의 DNA 결합을 저해할 수 있다.
또한 본 발명은 모루신을 포함하는 전립선암 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.
상기 모루신은 모루신의 고유의 성질을 갖는 것이라면 제한없이 사용될 수 있으나, 바람직하게는 상백피 추출물로부터 분리한 성분일 수 있다.
본 발명의 건강기능식품은 모루신을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 함량은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조 시에 본 발명의 모루신은 식품의 총중량에 대하여 0.001 내지 50 중량%로 가할 수 있다.
또한, 상기 식품의 종류에는 특별한 제한이 없다. 본 발명의 모루신을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 음료, 껌, 비타민 복합제, 드링크제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.
본 발명의 건강기능식품은 건강기능음료일 수 있으며, 상기 음료는 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 예로는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 수크로오스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트릴톨 등의 당알콜이다. 또한, 상술한 것 이외의 향미제(사카린, 아스파르탐 등)을 사용할 수 있다.
본 발명의 건강기능식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 증진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다.
이상 본 명세서에 기재된 수치값은 달리 명시되어 있지 않은 한 균등범위까지 포함하는 것으로 해석되어야 한다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 제조예 및 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 제조예 및 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 제조예 및 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
재료 및 시약
세포주
인간 전립선암 세포주(DU145, PC3 및 LNCaP) 및 정상 전립선 상피 세포주 RWPE-1 들을 ATCC(American Type Culture Collection)(Rockville, MD, USA) 로부터 구입하여 사용하였다. 그리고 M2182는 Dr. Paul B. Fisher (Virginia Commonwealth University School of Medicine, Richmond, VA, USA)로부터 제공받아 사용하였다. RWPE-1 은 각질세포 성장 배지(keratinocyte growth medium)-gold bullet 키트(Lonza, Inc., Allendale, NJ, USA)에서 배양하였다. DU145, PC3, M2182 및 LNCaP 들을 10% 우태아 혈청(Lonza) 및 100U/ml의 항생제, 항진균제(Lonza)를 보충한 배지에서 배양하였다. 모든 세포들을 37℃, 5% CO2를 갖는 가습화된 배양기에서 배양하였다.
시약
모루신을 Biopurify Phytochemicals Ltd.(Chendu, Sichuan, China)로부터 구입하였으며, 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT), DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole) 및 DMS을 Sigma-Aldrich (St. Louis, Mo, USA)로부터 구입하였다. 프로피디움 요오드화물(Propidium Iodide) 및 알렉사 Flour 488 염소 항-토끼 항체를 인비트로젠(Carlsbad, CA, USA)으로부터 구입하였다. 아넥신 V 염색 키트 (ApoScan) 들을 BioBud (Seoul, Republic of Korea)로부터 구입하였다. 하기 각 성분에 대한 항체들도 다음과 같이 구입하여 사용하였다: STAT3, Phospho-STAT3, JAK2, SRC, Phospho-SRC, 절단된 CASP3, 절단된 CASP8, 절단된 CASP9, BCL-XL, Cyclin D1, 및 Cyclin E (Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA); Phospho-JAK2, CDK2, CDK4, MCL-1, 서바이빈, PARP 및 BCL-2 (Santa Cruz Biotech, Santa Cruz, CA, USA); 및 β-Actin (Sigma-Aldrich).
통계학적 분석
데이터는 평균 ± 표준오차(S.E.M) 및 통계적 유의도로 나타내었다(P<0.05: 유의함).
실시예 1. 전립선암 세포 생존율 분석
새포의 생존율을 MTT 분석에 의하여 분석하였다. 인간 전립선 암 세포주 DU145, M2182, PC3 및 LNCaP, 그리고 정상 불멸화 전립선 상피 세포주 RWPE-1(3-10×103cells/well)들을 96-웰 플레이트에 분주하고, 0 내지 30μM 농도의 모루신을 24시간 동안 처리하였다. 세포 생존율은 MTT 분석을 통하여 확인하였으며, 대조군과 비교한 퍼센트로 나타내었다.
결과를 도 1에 나타내었다.
도 1에서 확인할 수 있는 바와 같이, 모루신은 정상 불멸화 전립선 상피 세포주와 비교하여 모든 전립선암 세포주 DU145(A), M2182(B), PC3(C) 및 LNCaP(D)에서 용량의존적으로 세포 생존율을 뚜렷하게 감소시켰다. IC50 값 역시 모루신이 전립선암세포에서 세포독성 시약으로 사용될 수 있음을 보여주었다(F). 이러한 결과는 모루신이 전립선암 치료를 위한 새로운 식물화학물질로 이용될 수 있음을 나타낸다.
실시예 2. 모루신의 전립선암 세포 STAT3 인산화 억제 효과
STAT3는 유방암 및 전립선 암과 같은 많은 암에서 활성화되고 암 세포의 분화 및 생존에 중요한 역할을 한다. 모루신의 암세포 사멸 효과가 STAT3 신호와 관련있는지를 확인하기 위하여 모루신의 전립선암 세포 STAT3 인산화 억제 효과를 확인하였다. DU 145 및 M2182 세포들을 10, 20, 30μM 모루신으로 6시간 동안 처리하고 인산화 여부를 확인하였다. 전체 세포 용해물들에 항체를 처리하고 당분야의 공지된 방법을 이용하여 웨스턴 블랏 분석을 수행하였다. 항-β-액틴 항체를 내부 대조군으로 사용하였다. 1차 항체 STAT3 (1:1000), Phospho-STAT3 (1:1000), JAK2 (1:1000), Phospho-JAK2 (1:1000), SRC (1:1000), Phosopho-SRC (1:1000) 이차 항체인 HRP-접합된 항-마우스 IgG 또는 항-토끼 IgG (1:5000; Cell Signaling Biotechnology, Danvers, MA, USA)를 면역 염색에 사용하였다. 그 후 화학발광 시스템 (Corebio, Seoul, Republic of Korea)을 이용하여 검출하였다.
결과를 도 2에 나타내었다.
도 2에 나타낸 바와 같이, 모루신은 JAK2 및 SRC의 인산화 수준을 감소시켰으며, STAT3의 인산화 수준을 감소시켰다. 이러한 결과는 모루신이 전립선 암 세포에서 STAT3 신호전달 경로를 억제할 수 있다는 것을 보여준다.
실시예 3. 모루신의 핵 축적 억제 및 DNA 결합 억제 효과
인산된 STAT3는 이량체화되고 핵 내로 이동하여 전사 활성화제로 이용되는 것으로 알려져 있으므로, 모루신이 STAT3의 핵 내 축적을 억제할 수 있는 지 여부 및 STAT3의 DNA 결합 활성도에 영향을 주는지 여부를 확인하였다. 구체적으로 DU145 및 M2182 세포들은 8-챔버 슬라이드에 분주하고 6시간 동안 30μM 모루신으로 처리하였다. 세포들을 고정시키고 토끼 다클론 항-STAT3 항체 (1:100), 알렉사 Flour 488 항-토끼 항체 (1:1000) 및 DAPI로 염색하였다. 이미지들은 FluoView FV1000 공초점 현미경 (Olympus, Tokyo, Japan)로 관찰하였다.
DNA 결합을 분석하기 위하여, 핵 추출물을 TransAM STAT3 kit (Active Motif, #45196, Carlsbad, CA, USA)에서 제공되는 시약을 이용하여 제조사의 지시에 따라 준비하였다. 제조사의 프로토콜에 따른 키트를 이용하여 2μg의 핵 추출물에서 STAT3 DNA 결합 활성도에 대하여 분석하였다. 보다 구체적으로 DU145 세포들을 0, 10, 20, 30μM 24시간 동안 모루신으로 처리하고, 핵 추출물에서 STAT3 DNA 결합 활성도를 측정하기 위한 ELISA를 수행하였다.
결과를 도 3에 나타내었다.
도 3에 나타낸 바와 같이, 모루신은 전립선 암세포에서 STAT3의 핵 축적을 억제하였으며, DU145 세포에서 STAT3의 DNA 결합 활성을 감소시켰다. 이들 결과는 모루신이 전립선 암세포에서 STAT3 억제제가 될 수 있음을 나타내며, STAT3가 전립선 암 세포에서의 세포 생존율 감소의 타깃이 된다는 것을 보여준다.
실시예 4. STAT3 mRNA 발현 및 단백질 발현 억제 효과
모루신이 인간 전립선암 세포에서 STAT3의 전사 활성화 자체를 억제할 수 있는지 여부를 확인하게 위하여, 모루신이 STAT3 타깃 유전자의 발현을 조절하는지 여부를 확인하였다. DU145 및 M2182 세포들을 0, 10, 20, 30μM 모루신으로 6시간 동안 처리하고 STAT3 타깃 유전자를 나타내는 mRNA의 발현을 분석하였다. GAPDH를 내부 대조군으로 사용하였다. 총 RNA를 표준 방법에 따른 PureHelix™ Extraction Solution (Nanohelix, Seoul, Republic of Korea)을 이용하여 정제하였으며, 총 RNA의 1 마이크로그램을 Maxime™ RT PreMix Kit (iNtRON Biotechnology, Kyounggi, Republic of Korea) 및 HiPi Plus 5X PCR Master Mix (ELPIS Biotech, Daejeon, Republic of Korea)를 제조사의 프로토콜에 따라 이용하여 역전사-PCR에 사용하였다. 역전사 PCR에 사용한 프라이머의 서열정보는 다음과 같다.
BCL2 센스: 5'-ATGGCGCACGCTGGGAGAAC-3'(서열번호1)
BCL2 안티센스: 5'-GGTGTGCAG GTG CCG GTT GA-3'(서열번호 2)
BCL - XL센스: 5'-TACCAGCCTGACCAATATGGC-3'(서열번호 3)
BCL - XL 안티센스: 5'-TGG GTT CAA GTG ATT CTC CTG-3'(서열번호 4)
서바이빈 센스, 5'-TTG GCC CAG TGT TTC TTC TGC TTC-3'(서열번호 5)
서바이빈 안티센스,5'-GCACTTTCT CCG CAG TTT CCT CAA-3'(서열번호 6)
CyclinD1센스: 5'-AGAAGCTGTGCATCTACACCG ACA-3'(서열번호 7)
CyclinD1안티센스: 5'-TGATCTGTTTGTTCTCCTCCGCCT-3'(서열번호 8)
GAPDH센스: 5'-ATG GGG AAG GTG AAG GTC GGA GTC-3'(서열번호 9)
GAPDH 안티센스: 5'-GCTGAT GAT CTT GAG GCT GTT GTC-3'(서열번호 10)
또한 DU145 및 M2182 세포들을 0, 10, 20, 30μM 로 6시간 동안 처리하고 STAT3 타깃 유전자를 나타내는 단백질의 발현을 분석하였다. BCL-XL (1:1000), BCL-2 (1:1000), MCL-1 (1:1000), CDK2 (1:1000), CDK4 (1:1000), Cyclin D1 (1:1000), Cyclin E (1:1000), 및 서바이빈 (1:1000) 항체를 사용하여 웨스턴 블랏을 수행하였으며, 항-β-액틴 항체를 내부 대조군으로 사용하였다.
결과를 도 4에 나타내었다.
도 4에 나타낸 바와 같이, 모루신은 세포자멸사 및 분화의 조절에 관여하는 BCL-XL, BCL-2, MCL-1, 서바이빈, Cyclin D1, 및 Cyclin E 타깃 유전자의 단백질 발현을 모두 감소시켰다. 또한, 모루신은 BCL-XL, BCL-2, 서바이빈 및 CyclinD의 mRNA의 발현도 저하시켰다. 이러한 결과는 모루신이 STAT3의 전사 활성의 억제를 통해 전립선암의 세포 생존율을 조절하여 전립선암 세포의 세포자멸사를 촉진한다는 것을 보여준다.
실시예 5. 세포자멸사 분석
모루신이 세포 자멸사에 미치는 영향을 분석하기 위하여 DU145 및 M2182 세포들을 24시 간동안 0, 10, 20, 30μM 농도로 처리하고, 프로피디움 요오드화물(PI) 염색 및 아넥신 V 염색을 수행하였으며 FACS Calibur (BD Biosciences, San Jose, CA, USA)를 이용한 유세포 분석을 수행하였다.
결과를 도 5에 나타내었다.
도 5의 A 및 B에 나타낸 바와 같이 모루신은 세포자멸사를 나타내는 sub-G1 기의 세포수를 증가시키고, 아넥신 B 양성 세포 집단을 증가시켰으며, 이는 모루신이 전립선 암 세포에서 세포 자멸사를 유도한다는 것을 보여주는 것이다.
추가적으로 항-β-액틴 항체를 내부 대조군으로 사용하여, 세포자멸사를 유도 및 실행하는 세포자멸사 관련 유전자인 CASPs(Caspases) 및 PARP의 활성도에 미치는 모루신의 영향을 C(cleaved)-CASP3 (1:1000), C-CASP8 (1:1000), C-CASP9 (1:1000), PARP (1:1000)를 이용한 웨스턴 블랏을 통해 확인하였다.
도 5의 C에 나타낸 바와 같이 모루신은 세포자멸사에 관여하는 절단형 카스파아제 C-CASP8, C-CASP-9, C-CASP-3들을 모두 증가시켰으며 세포자멸사 유도과정에서 중요한 작용을 하는 PARP(poly (ADP-ribose) polymerase)의 절단형 단백질을 농도의존적으로 증가시켰다. 이들 결과는 모루신이 PARP의 절단 등을 유도하여 전립선 암세포에서 세포 자멸사를 유도한다는 것을 더욱 분명하게 보여준다.
제제예 1. 의약품의 제조
1.1 산제의 제조
모루신 100mg
유당 100mg
탈 10mg
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.
1.2 정제의 제조
모루신 100mg
옥수수전분 100mg
유당 100mg
스테아린산 마그네슘 2mg
상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.
1.3 캡슐제의 제조
모루신 100mg
옥수수전분 100mg
유당 100mg
스테아린산 마그네슘 2mg
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 정제를 제조한다.
1.4 주사제의 제조
모루신 100mg
주사용 멸균 증류수 적량
pH 조절제 적량
통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2ml) 상기의 성분 함량으로 제조한다.
1.5 액제의 제조
모루신 100mg
설탕 20g
이성화당 20g
레몬향 적량
정제수를 가하여 전체 1,00ml로 맞추었다. 통상의 액제의 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 갈색병에 충전하고 멸균시켜 액제를 제조한다.
제제예 2. 건강기능식품의 제조
모루신 100mg
비타민 혼합물 적량
비타민 A 아세테이트 70 ㎍
비타민 E 1.0 ㎎
비타민 B1 0.13 ㎎
비타민 B2 0.15 ㎎
비타민 B6 0.5 ㎎
비타민 B12 0.2 ㎍
비타민 C 10 ㎎
비오틴 10 ㎍
니코틴산아미드 1.7 ㎎
엽산 50 ㎍
판토텐산 칼슘 0.5 ㎎
무기질 혼합물 적량
황산제1철 1.75 ㎎
산화아연 0.82 ㎎
탄산마그네슘 25.3 ㎎
제1인산칼륨 15 ㎎
제2인산칼슘 55 ㎎
구연산칼륨 90 ㎎
탄산칼슘 100 ㎎
염화마그네슘 24.8 ㎎
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강기능식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강기능식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 통상의 방법에 따라 건강기능식품 조성물 제조(예, 영양캔디 등)에 사용할 수 있다.
제제예 3. 건강기능성 음료의 제조
모루신 100mg
구연산 1000 ㎎
올리고당 100 g
매실농축액 2 g
타우린 1 g
정제수를 가하여 전체 900 ㎖
통상의 건강기능성 음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강기능성 음료 조성물 제조에 사용한다.
상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용 용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
<110> University-Industry Cooperation Group of Kyung Hee University <120> A Composition for prevention and treatment of prostate cancer comprising Morusin <130> P13-118-KHU <160> 10 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> BCL2 sense primer <400> 1 atggcgcacg ctgggagaac 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> BCL2 antisense primer <400> 2 ggtgtgcagg tgccggttga 20 <210> 3 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> BCL-XL sense primer <400> 3 taccagcctg accaatatgg c 21 <210> 4 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> BCL-XL antisense primer <400> 4 tgggttcaag tgattctcct g 21 <210> 5 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Survivin sense primer <400> 5 ttggcccagt gtttcttctg cttc 24 <210> 6 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Survivin antisense primer <400> 6 gcactttctc cgcagtttcc tcaa 24 <210> 7 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CyclinD1 sense primer <400> 7 agaagctgtg catctacacc gaca 24 <210> 8 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CyclinD1 antisense primer <400> 8 tgatctgttt gttctcctcc gcct 24 <210> 9 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GAPDH sense primer <400> 9 atggggaagg tgaaggtcgg agtc 24 <210> 10 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GAPDH antisense primer <400> 10 gctgatgatc ttgaggctgt tgtc 24

Claims (6)

  1. 모루신(Morusin)을 포함하는 전립선암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 모루신은 상백피 추출물로부터 분리된 것인, 전립선암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 모루신은 전립선 암세포의 세포자멸사를 유도하는 것인, 전립선암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 모루신은 전립선 암세포에서 STAT3(Signal transducer and activator of transcription 3) 신호전달을 억제하는 것인, 전립선암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  5. 모루신을 포함하는 전립선암 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  6. 제5항에 있어서, 상기 모루신은 상백피 추출물로부터 분리된 것인, 전립선암 예방 또는 개선용 건강기능식품.
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