KR20150050994A - 엔드리케리아 아노말라 추출물을 포함하는 항비만 조성물 - Google Patents
엔드리케리아 아노말라 추출물을 포함하는 항비만 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 엔드리케리아 아노말라 추출물을 포함하는 항비만 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 엔드리케리아 아노말라 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 상기 엔드리케리아 아노말라 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 개선용 건강기능 식품에 관한 것이다. 본 발명의 엔드리케리아 아노말라 추출물을 포함하는 조성물은 지방전구세포의 지방세포로의 분화를 억제하고, 췌장 리파아제의 효소활성을 억제시켜 섭취한 지방의 체내 흡수를 저해하여 배출을 촉진함은 물론, 세포 내에 축적된 중성지방을 분해하는 능력을 가지므로 항비만 조성물로 유용하게 사용될 수 있다. 나아가, 지방세포생성을 억제하므로 지방간, 또는 지질관련 심혈관 질환과 같은 불필요한 지방의 축적으로 유발되는 질환의 예방 또는 치료를 위한 약학적 조성물 또는 건강기능식품으로 이용될 수 있다.
Description
본 발명은 엔드리케리아 아노말라 추출물을 포함하는 항비만 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 엔드리케리아 아노말라 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 상기 엔드리케리아 아노말라 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 개선용 건강기능식품에 관한 것이다.
비만(obesity) 또는 비만증은 체내 과다한 체지방을 가진 상태를 의미하며, 몸무게가 지나치게 많이 나가는 현상을 통칭하는 말로서 병리학적으로는 세계보건기구(WHO)에서 정한 이른바 표준 몸무게 기준치(body mass index; BMI)가 30.1 이상인 경우를 일컫지만 보통 남자는 체지방이 체중의 25 %, 여자는 체중의 30 % 이상일 때 비만으로 진단한다. 또한 대부분의 경우 체중이 정상치보다 많이 나가는 것을 뜻하지만 체중이 그다지 많이 나가지 않더라도 몸의 구성성분 중 지방의 비율이 높은 경우 비만이라고 한다.
비만의 원인으로는 유전적 요인, 환경적 요인, 에너지 대사의 이상 등이 있으며, 비만의 종류에는 원인에 따라서 단순 비만과 증후성 비만으로 분류할 수 있다. 단순 비만은 과식과 운동 부족이 그 원인이며, 증후성 비만은 내분비, 시상하부성, 유전, 전두엽 및 대사성 등으로 발생한다. 비만은 그 자체로서는 문제가 되지 않을 수도 있으나, 이로 인해 야기되는 사회적 장애 및 과다한 지방으로 유발되는 2차 합병증이 심각하다. 예를 들어 비만은 고지혈증, 고혈압, 동맥경화, 당뇨병, 지방간, 관절이상 등의 발병 비율을 현저하게 증가시킬 수 있다
이와 같이 비만은 각종 성인병의 원인이 되며, 체중이 늘면 혈당처리 능력이 떨어져 당뇨병을 일으키기 쉬우며 고혈압도 발생할 수 있다. 체중이 정상체중보다 20 % 증가되면 당뇨병 발병 가능성은 정상인의 10배로 증가한다. 또한 심장 및 폐기능이 약해져서 수명이 단축될 수도 있다. 고혈압, 당뇨병, 고지혈증, 동맥 경화증 등의 복합적인 요인들이 심장기능에 압박을 주어 심부전증에 빠지고 돌연사를 유발하기도 한다. 나아가 여성의 경우는 자궁내막암의 발병률이 높아지며, 담석증이 생길 가능성도 높아지며, 남성의 경우는 대장암과 전립선암의 발병확률이 높아진다. 질병의 발병뿐만 아니라, 체중이 증가하면서 남들이 자신을 바라보는 시선을 과도하게 의식하여, 이에 대한 강박관념이 심해지면 사람들을 기피하거나 혼자만 지내려는 증상이 생긴다. 또 신체에서 오는 열등감이 삶에 대한 자신감을 잃게 하여 자아에까지 영향을 미친다.
이러한 비만을 예방하고 건강 체중을 유지하기 위해서는 균형 잡힌 식사와 규칙적인 운동으로 평생 동안 꾸준히 관리해야 한다. 특히 지방세포는 한번 만들어지면 소멸되지 않고, 자연적으로 제거하는 것은 불가능하여 영구적으로 인체에 남아있게 되므로 처음부터 비만이 되지 않도록 예방하는 것이 중요하다. 따라서, 일차적으로는 섭취하는 칼로리의 양을 줄이고 활동 및 운동량을 증가시키는 방법으로 체중을 줄이거나 조절할 수 있다.
앞서 기술한 바와 같이 한번 형성된 지방세포는 자연적으로 제거가 불가능하므로, 다이어트식이 섭취와 더불어 지방흡수를 감소시키는 등의 약물을 복용하는 경우가 있다. 그러나, 이러한 다이어트 약은 고혈압 등의 심혈관계 질환 및 뇌졸중과 같은 부작용을 유발할 수 있으며, 복용을 중단하는 경우 다시 체중이 증가하는 요요현상을 수반하기도 한다. 중증 비만의 경우, 약물요법뿐 아니라 수술요법을 시행하는 경우가 있는데, 지방을 제거하는 수술이나 몸이 소화할 수 있는 음식량을 제한하기 위한 위성형술 또는 위밴드 삽입술 등이 시행되고 있다.
이에 본 발명자들은 항비만 효과를 나타내면서 부작용이 적은 천연물을 찾고자 예의 연구 노력한 결과, 엔드리케리아 아노말라 추출물이, 지방전구세포가 지방세포로의 분화하는 것을 억제하여 중성지방 생성율을 감소시킬 뿐만 아니라, 췌장 리파아제 효소 활성을 억제시켜 지방의 체내 흡수를 저해하는 동시에, 세포 내 축적된 지방을 분해하여 배출시킬 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 하나의 목적은 엔드리케리아 아노말라 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 엔드리케리아 아노말라 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 엔드리케리아 아노말라 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 용어 "비만(obesity)"은 인체에 체지방이 과도한 상태를 말하는 것으로, 임상적으로 체질량지수(body mass index; BMI)가 한국의 경우 25, 세계보건기구(WHO)에 의하면 30.1 이상인 경우를 의미하며, 이때 체질량지수는 신장의 제곱에 대한 체중(kg/m2)으로 계산된다. 일반적으로 체중이 정상치보다 높은 경우를 의미하지만 체중이 많이 나가지 않더라도 몸의 구성성분 중 체지방의 비율이 높은 경우 비만이라고 진단하며, 성인과 어린이 모두에서 발병하는 질환이다. 비만은 생명을 단축시키며, 고혈압, 당뇨, 심장질환 및 일부 암과 같은 질환의 원인이 되기도 한다. 비만인 경우 건강에 문제가 생길 확률이 높으며 비만의 정도가 증가할수록 위험성 또한 높아진다. 비만이 생기는 이유는 매우 다양하며 여러 가지 원인이 복합적으로 작용하는 경우가 많다. 이 중 가장 빈번한 원인은 유전적 영향, 생리적 영향, 음식섭취 및 섭식장애, 생활방식, 체중력, 임신 또는 약물 등이다. 비만의 첫 번째 징후는 평균을 웃도는 체중 이상이며 증상은 하기와 같다; 수면문제, 수면무호흡, 호흡곤란, 정맥류, 피부문제, 담석 또는 체중부하로 인한 골관절염 등. 비만은 또한 고혈압을 비롯한 고혈당(당뇨), 고콜레스테롤혈증, 고중성지방혈증 등의 질환과 높은 관련이 있다. 한번 과체중이 되면 그 상태를 벗어나기가 쉽지 않으므로 비만은 대부분 평생 겪게 된다. 하지만 비만에 의해 생긴 질병이나 문제는 체중이 감소되면 호전될 수 있다.
이하 본 발명에서는 "항비만(anti-obesity)"라는 용어를 비만 예방, 치료 또는 개선을 모두 포함하는 의미로 사용한다. 이에 따라, 본 발명에서 사용되는 "항비만 조성물"이라는 용어는 비만 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 비만 예방 또는 개선용 식품 조성물을 포괄하는 의미이다.
본 발명에서, 용어 "예방"이란 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해비만의 발병을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미하고, "치료"란 상기 약학적조성물의 투여에 의해 비만의 의심 및 발병 개체의 증상이 호전되거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 용어 "엔드리케리아 아노말라(Endlicheria anomala)"는 녹나무과(Lauraceae family) 엔드리케리아속(Endlicheria genus) 식물이다. 상기 엔드리케리아는 신열대구 식물속(neotropical plant genus)으로, 약 60 여종으로 구성되며, 대부분의 종은 중간크기의 나무로 높이가 40 m에 달하기도 하나, 몇몇은 관목(shrubs)이다. DNA 분자 정보에 따르면 로도스테모노다프네(Rhodostemonodaphne) 및 오코테아(Ocotea)와 밀접한 것으로 보인다. 상기 엔드리케리아속은 목재산업에서 높은 상업적 가치를 갖는 종을 다수 포함하고 있으며, 대부분 남아메리카로부터 아마존 유역, 그레이터앤틸리스 제도, 기아나, 에콰도르, 콜롬비아, 베네주엘라, 페루, 볼리비아, 파라과이로부터 브라질 남부 낮은 해안 우림, 산악 열대림 및 열대 아메리카의 안데스 운무림에 존재한다. 이들 엔드리케리아의 종들은 안데스 및 기아나 고지의 해발 2500 m 고지로부터의 습한 산림 서식지에 존재한다. 잎은 가지 끝에 모여 있고, 꽃은 포도상 말단(racemose endings)을 갖는 원추꽃차례(panicles)인 자웅이체 식물이다. 바람직하게 상기 엔드리케리아 아노말라은 엔드리케리아 아노말라 메즈(Endlicheria anomala Mez)일 수 있다. 한편, 상기 엔드리케리아 아노말라에 대하여 상기와 같이 생육 특성에 대해서는 알려져 있으나, 그의 활성 특히, 항비만 활성에 대해서는 전혀 알려져 있지 않았다.
본 발명의 용어 "추출물(extract)"은 생약을 적절한 침출액으로 짜내고 침출액을 증발시켜 농축한 제제를 의미하는 것으로, 이에 제한되지는 않으나, 추출처리에 의해 얻어지는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 이들의 조정제물 또는 정제물일 수 있다. 상기 엔드리케리아 아노말라 추출물은 당업계에 공지된 일반적인 추출방법, 분리 및 정제방법을 이용하여 제조할 수 있다. 상기추출방법으로는, 이에 제한되지는 않으나, 바람직하게 열탕 추출, 열수 추출, 냉침추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 방법을 사용할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 추출물은 추출용매로 추출하거나 추출용매로 추출하여 제조한 추출물에 분획용매를 가하여 분획함으로써 제조할 수 있다. 상기 추출용매는 이에 제한되지는 않으나, 물, 유기용매 또는 이들의 혼합용매 등을 사용할 수 있으며, 상기 유기용매는 탄소수 1 내지 4의 알코올이나, 에틸아세테이트 또는 아세톤 등의 극성용매, 헥산 또는 디클로로메탄의 비극성용매 또는 이들의 혼합용매를 사용할 수 있다. 또한, 바람직하게는 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 이들의 혼합용매를 사용할 수 있으며, 보다 바람직하게는 메탄올을 사용할 수 있다. 본 발명의 일 실시예에서는 상기 용매로서 메탄올을 이용한 추출물을 제조하였다.
본 발명에서 상기 비만 예방 또는 치료는 지방전구세포의 지방세포로의 분화억제; 췌장 리파아제 활성 억제를 통한 체내 지방 흡수 감소; 또는 지방세포 내에 축적된 중성지방의 분해에 의해 달성되는 것일 수 있다. 본 발명의 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물은 지방전구세포의 분화를 억제하여, 지방세포 생성을 억제하는 활성을 나타낸다. 또한, 췌장 리파아제의 활성을 억제함으로써 체내 지방 흡수를 감소시키는 한편, 지방세포 내에 축적된 중성지방을 분해하여 배출시키는 활성을 나타낸다.
본 발명에서 용어 "췌장 리파아제(pancreatic lipase)"는 췌장에서 분비되는 중성지방(triglyceride)을 글리세롤과 지방산으로 가수분해하는 지방분해효소로, 췌장 트리아실글리세롤 리파아제(pancreatic triacylglycerol lipase)라고도 하며, 중성지방의 세포 내 흡수를 촉진하는 효소이다. 따라서, 상기 췌장 리파아제의 활성은 체내 지방 흡수도를 평가하는 지표로 사용될 수 있다.
본 발명의 항비만 조성물은 체내 지방 흡수율을 저하시키는 한편, 지방세포에 축적된 중성지방의 함량을 감소시킴으로써 비만의 예방, 개선 또는 치료효과를 달성할 수 있다. 본 발명의 구체적인 실시예에 의하면, 본 발명의 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물을 리파아제와 기질의 혼합물에 농도별로 처리하면, 상기 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물이 리파아제 활성을 농도 의존적으로 억제시킬 수 있음을 확인하였다(도 2).
또한, 본 발명의 항비만 조성물은 체중감소, 체지방감소, 혈중 중성지방 함량 감소 및 혈중 콜레스테롤 함량 감소의 효과를 가진다. 본 발명의 구체적인 실시예에 의하면, IBMX(3-isobutyl-1-methylxanthine), 덱사메타손 및 인슐린을 포함하는 지방세포 분화배지(MDI)를 이용하여 3T3-L1 지방전구세포의 분화를 유도한 경우, 상기 본 발명의 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물을 첨가에 의해 지방세포 생성이 억제되며, 상기 추출물의 농도가 증가함에 따라 중성지방 함량이 감소하는 것을 확인할 수 있었다(도 3).
또한, 본 발명의 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물을 지방세포에 농도별로 처리하였을 때, 상기 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물이 농도의존적으로 지방세포에 축적된 중성지방을 분해하여 세포 밖으로 배출시킴으로써 중성지방 함량을 낮추는 동시에 분해산물인 글리세롤의 방출량은 증가하는 것을 확인하였다(도 4). 이는 본 발명의 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물이 췌장에서 분비되는 지방분해효소인 췌장 리파아제의 활성을 저해하여 체내 지방 흡수율을 저하시킬 수 있으므로, 비만 예방에 효과적임을 나타내는 바이다. 또한 본 발명의 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물을 지방세포에 처리하였을 때, 세포 내에 축적된 중성지방을 분해시켜 함량을 감소시킬 수 있으므로, 비만의 개선 또는 치료에 효과적임을 나타내는 바이다.
추가적으로 상기 본 발명의 항비만 조성물은 지방생성을 억제함으로써, 비만뿐만 아니라 비만과 직ㆍ간접으로 관련된 지방간 또는 지질관련 심혈관 질환에 대한 예방 또는 치료의 효과를 나타낼 수 있다.
본 발명의 용어 "지방간"은 정상 간의 경우 지방, 특히 중성지방이 차지하는 비율은 5% 정도인데, 이보다 많은 지방이 간에 축적된 상태를 지방간이라고 한다. 최근 영양상태가 좋아지고 성인병이 늘어감에 따라 지방간 환자가 늘어나는 추세에 있는데, 지방간의 발병원인으로는 크게 과음으로 인한 알코올성 지방간과 비만, 당뇨병, 고지혈증, 약물 등으로 인한 비알코올성 지방간으로 나눌 수 있다. 알코올성 지방간은 알코올을 많이 섭취하게 되면 간에서 지방 합성이 촉진되고 정상적인 에너지 대사가 이루어지지 않아 발생하게 된다. 비알콜성 지방간은 비만한 사람에게 빈번히 발생하며 그 외, 당뇨병, 갑상선 기능 항진증 등의 내분비질환, 스테로이드 호르몬의 과다 사용이나 심한 영양부족에 의해서도 발생할 수 있다. 지방간은 특별한 증상이 없으므로 증상만으로 진단할 수 없으며, 간 질환의 일반적인 증상인 피로감, 식욕부진, 무기력 등이 나타날 수 있고, 오른쪽 갈비뼈 아래쪽에 불쾌감이나 둔통을 느끼기도 한다.
본 발명의 용어 "지질관련 심혈관 질환"은 지방산이나 콜레스테롤 등을 과도하게 섭취하거나, 대사 장애로 인해 심장과 주요 동맥에 지방이 축적됨으로써 발생하는 질병이다. 특히 혈액 중의 중성지방의 농도가 비정상적으로 높아지는 고중성지방혈증은 미국 심장협회에 의해 심혈관 질환의 위험인자로 규정되어 있다. 혈중중성지방은 식후 급격히 증가하여 약 8시간 후에는 식전수준으로 돌아오는데, 당뇨병, 비만, 음주자 및 당분을 많이 섭취하는 사람에게서는 혈중중성지방의 급격한 증가 이후 감소하지 않는 현상을 보인다. 그 외 갑상선 기능저하, 신증후군, 신부전증, 피임약 및 대량의 이뇨제와 베타차단제도 혈중중성지방을 증가시킬 수 있다. 혈중중성지방이 증가할수록 LDL(low density lipoprotein)이 증가하며, 상기 LDL은 죽상경화의 원인이 된다. 상기 지질관련 심혈관 질환으로는 고지혈증, 심장병, 고혈압, 동맥경화증 등이 포함되나, 이에 제한되지 않는다.
상기 본 발명의 약학조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 용어 "약학적으로 허용 가능한"이란 상기 조성물에 노출되는 세포나 인간에게 독성이 없는 특성을 나타내는 것을 의미한다. 상기 담체는 완충제, 보존제, 무통화제, 가용화제, 등장제, 안정화제, 기제, 부형제, 윤활제 등 당업계에 공지된 것이라면 제한 없이 사용할 수 있다. 또한 본 발명의 약학조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 나아가, 연고제, 로션제, 스프레이제, 패취제, 크림제, 산제, 현탁제, 겔제 또는 젤의 형태의 피부 외용제의 형태로 사용될 수 있다. 본 발명의 조성물에 포함 될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는 데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
한편, 본 발명의 약학조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명의 용어 "투여"란, 적절한 방법으로 개체에게 소정의 물질을 도입하는 것을 의미하며 상기 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 국소 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
상기 용어 "약학적으로 유효한 양"이란 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분하며 부작용을 일으키지 않을 정도의 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 성별, 연령, 체중, 건강상태, 질병의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 방법, 투여 시간, 투여 경로, 및 배출 비율, 치료 기간, 배합 또는 동시에 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 바람직하게 본 발명의 엔드리케리아 아노말라 추출물은 고형분을 기준으로 1일 0.0001 내지 100 mg/체중 kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 100 mg/체중 kg으로 투여할 수 있다. 투여는 상기 권장 투여량을 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다.
따라서, 다른 하나의 양태로서 본 발명은 상기 엔드리케리아 아노말라 추출물을 유효성분으로 포함하는 약학 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 비만의 치료방법을 제공 할 수 있다.
본 발명에서, 용어 "개체"란 상기한 바와 같이 비만이 발병하였거나 발병할 수 있는 인간을 포함한 모든 동물을 의미하고, 본 발명의 약학적 조성물을 개체에게 투여함으로써 상기 비만을 효과적으로 예방 또는 치료할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 기존의 비만 치료제와 병행하여 투여될 수 있다.
다른 하나의 양태로서, 본 발명은 엔드리케리아 아노말라 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.
본 발명의 조성물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 엔드리케리아 아노말라 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상의 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다.
본 발명의 용어 "건강기능식품"은 건강보조의 목적으로 특정성분을 원료로 하거나, 식품 원료에 들어있는 특정성분을 추출, 농축, 정제, 혼합 등의 방법으로 제조, 가공한 식품을 말하며, 상기 성분에 의해 생체방어, 생체리듬의 조절, 질병의 방지와 회복 등 생체조절기능을 생체에 대하여 충분히 발휘할 수 있도록 설계되고 가공된 식품을 말하는 것으로서, 상기 건강기능식품용 조성물은 질병의 예방 및 질병의 회복 등과 관련된 기능을 수행할 수 있다.
또한, 본 발명의 조성물이 사용될 수 있는 건강기능식품의 종류에는 제한이 없다. 아울러 본 발명의 엔드리케리아 아노말라 추출물을 활성성분으로 포함하는 조성물은 당업자의 선택에 따라 건강기능식품에 함유될 수 있는 적절한 기타 보조 성분과 공지의 첨가제를 혼합하여 제조할 수 있다. 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림 류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 본 발명에 따른 추출물을 주성분으로 하여 제조한 즙, 차, 젤리 및 주스 등에 첨가하여 제조할 수 있다.
본 발명의 엔드리케리아 아노말라 추출물은 약학적 조성물 또는 식품 첨가물로 사용할 경우에도 일반적인 합성 화합물에 비하여 부작용이 덜할 수 있으므로, 안전하게 약학적 조성물 및 건강기능식품에 포함되어 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 엔드리케리아 아노말라 추출물을 포함하는 조성물은 지방전구세포의 지방세포로의 분화를 억제하고, 췌장 리파아제의 효소활성을 억제시켜 섭취한 지방의 체내 흡수를 저해하여 배출을 촉진함은 물론, 세포 내에 축적된 중성지방을 분해하는 능력을 가지므로 항비만 조성물로 유용하게 사용될 수 있다. 나아가, 지방세포생성을 억제하므로 지방간, 또는 지질관련 심혈관 질환과 같은 불필요한 지방의 축적으로 유발되는 질환의 예방 또는 치료를 위한 약학적 조성물 또는 건강기능식품으로 이용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물의 세포독성을 나타낸 도면이다.
도 2는 본 발명의 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물의 농도 의존적 췌장 리파아제 효소 활성 저해능을 나타낸 도면이다.
도 3는 본 발명의 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물의 농도 의존적 지방생성억제를 나타낸 도면이다. 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물을 각각 표기한 농도로 첨가하여 분화시킨 세포를 오일 레드 오 염색(oil red O staining)하여, (a) 탈색하여 정량함으로써 계산된 중성지방 함량을 도시한 결과 및 (b) 현미경으로 관찰한 결과를 나타낸 도면이다.
도 4는 본 발명의 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물의 농도 의존적 지방분해를 나타낸 도이다. 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물을 각각 표기한 농도로 첨가하여 분화시킨 지방세포로 부터 (a) 배양 배지로 분비된 글리세롤의 함량을 도시화한 결과, 상기 아노말라 메탄올 추출물을 각각 표기한 농도로 첨가하여 분화시킨 지방세포를 오일 레드 오 염색(oil red O staining)하여, (b) 현미경으로 관찰한 결과 및 (c) 탈색하여 정량함으로써 계산된 중성지방 함량을 도시한 결과를 나타낸 도면이다.
도 2는 본 발명의 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물의 농도 의존적 췌장 리파아제 효소 활성 저해능을 나타낸 도면이다.
도 3는 본 발명의 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물의 농도 의존적 지방생성억제를 나타낸 도면이다. 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물을 각각 표기한 농도로 첨가하여 분화시킨 세포를 오일 레드 오 염색(oil red O staining)하여, (a) 탈색하여 정량함으로써 계산된 중성지방 함량을 도시한 결과 및 (b) 현미경으로 관찰한 결과를 나타낸 도면이다.
도 4는 본 발명의 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물의 농도 의존적 지방분해를 나타낸 도이다. 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물을 각각 표기한 농도로 첨가하여 분화시킨 지방세포로 부터 (a) 배양 배지로 분비된 글리세롤의 함량을 도시화한 결과, 상기 아노말라 메탄올 추출물을 각각 표기한 농도로 첨가하여 분화시킨 지방세포를 오일 레드 오 염색(oil red O staining)하여, (b) 현미경으로 관찰한 결과 및 (c) 탈색하여 정량함으로써 계산된 중성지방 함량을 도시한 결과를 나타낸 도면이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명의 구성 및 효과를 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예
1:
엔드리케리아
아노말라
추출물의 제조
본 발명에서 사용한 엔드리케리아 아노말라 (Endlicheria anomala (Nees) Mez)는 남미 북부, 아마존, 및 미국 유래 식물로서 한국생명공학연구원의 해외생물소재 허브센터에서 구입하여 사용하였으며, 분양번호, 학명, 과명 등의 세부 정보는 표 1에 제시한 바와 같다.
분양번호 | 학명 | 과명 |
FBM117-033 | Endlicheria anomala (Nees) Mez | Lauraceae |
엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물(이하, EAME)은 분쇄한 시료를 메탄올을 이용하여 45℃에서 15분간 초음파 파쇄 후 2시간 동안 정치시키는 과정을 하루 10회 반복하여 3일간 수행 후 필터(filter)로 여과하고, 농축 및 건조시켜 제조하였으며, 각각의 실험에 사용 전까지 4℃에 보관하였다.
실시예 2: 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물의 세포독성 분석
본 발명의 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물의 세포독성을 확인하였다. 구체적으로 마우스 지방전구세포주인 3T3-L1(American Type Culture Collection; ATCC, USA)을 10 % 송아지혈청(bovine calf serum; BCS) 및 1 % 페니실린/스트렙토마이신(penicillin/streptomycin)이 포함된 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium) 배지에서 배양하였다. 24 웰 조직 배양 플레이트에 웰 당 105개의 세포를 분주하여 24 시간 동안 부착시키고 다양한 농도(10, 25, 50, 75, 100, 150, 200 ?/ml)의 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물 용액으로 각각 처리하였다. 72 시간 경과 후 시료를 포함하는 배지를 제거하고 WST(water-soluble tetrazolium salt) 시약을 포함하는 신선한 배지로 교체하여 37 ℃에서 1 시간 배양하고 멀티플레이트 리더(Paradigm, Beckman, USA)장치를 이용하여 480 nm에서의 흡광도를 측정하였다. 세포 생존율은 시료 비처리 대조군에 대한 백분율로 나타내었고, 측정값은 3회 반복 실험의 평균값으로 나타내었다.
상기 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물을 처리하여 배양한 3T3-L1 지방전구세포의 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물 용액 농도에 따른 생존율을 도 1에 나타내었다. 그 결과, 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물은 200 ㎍/㎖의 농도까지 농도가 증가함에 따라 세포 증식률은 다소 감소하였으나, 세포독성은 관찰되지 않음을 확인하였다. 따라서 세포의 증식률의 감소가 없는 아노말라 메탄올 추출물 100 ㎍/㎖의 이하의 농도에서 지방 생성 억제능을 분석을 수행하는 것이 적절함을 확인하였다.
실시예 3: 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물의 췌장 리파아제 (pancreatic lipase) 효소 활성 억제능 분석
본 발명의 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물의 리파아제 활성 억제능 보유 유무를 알아보기 위해, 추출물의 각각의 상이한 농도별 처리에 따른 리파아제의 활성 변화를 분석하였다. 리파아제는 주로 췌장에서 분비되어 중성지방인 트리글리세라이드(Triglyceride, TG)를 글리세롤(glycerol)과 지방산(fatty acid)으로 가수분해하는 효소로서, 지방소화효소인 췌장 리파아제의 활성 저해능은 시료가 보유한 항비만 활성을 예측하기에 매우 유용한 시험법이다. 본 실시예에서는 각 시료의 항비만 활성을 세포 실험계에서 분석하기에 앞서 시료가 보유한 리파아제 효소 활성 저해능을 다음과 같이 측정하였다. 먼저 1.5 ㎖ 튜브에 0.25 M Tris(pH 7.7), 250 mM CaCl2, 5 mM 4-니트로페닐도데카노에이트(4-nitrophenyldodecanoate; PNPD)로 구성된 효소액과 기질을 넣고 잘 혼합한 후 37 ℃에서 5 분간 예열하고, 0.25 M Tris(pH 7.7)에 녹인 리파아제와 시료를 넣어 37 ℃에서 10 분간 반응시킨 후 20 % SDS(sodium dodecyl sulfate)를 첨가하여 반응을 종료하였다. 반응액을 4 ℃, 15,000 rpm에서 20 분간 원심분리하여, 분리한 상층액을 96 웰 조직 배양 플레이트에 분주하고 멀티플레이트 리더(multiplate reader) 장치를 이용하여 412 nm에서 흡광도를 측정한 후, 반응시키지 않은 시료의 흡광도로부터 10 분 반응 시료의 흡광도를 뺀 값을 시료 비처리 대조군 대비 백분율로 나타내었다. 측정값은 3회 반복 실험의 평균값으로 나타내었다.
상기와 같은 방법으로 리파아제 활성 억제능을 확인한 결과, 도 2에 제시된 바와 같이 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물 처리 농도의 증가에 따라(0, 0.25, 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5, 5 ㎍/㎖) 시료 비처리 대조군 대비 리파아제 활성이 감소됨을 확인함으로써 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물이 리파아제 활성을 농도 의존적으로 억제시키는 것을 확인하였다(도 2). 이러한 결과는 시료가 리파아제 저해제(lipase inhibitor)로 작용하여 체내 지방 흡수율을 저하시켜 항비만 활성을 보유할 수 있다는 것을 의미한다.
실시예 4: 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물의 지방생성 억제능 분석
본 발명의 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물의 지방생성 억제효과를 확인하기 위하여, 지방세포로의 분화를 유도시, 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물의 첨가에 따른 지방생성 및 분화 억제효과를 확인하였다. 먼저, 3T3-L1 지방전구세포를 0.5 μM 3-이소부틸-1-메틸크산틴(3-isobuty1-IBMX; IBMX), 1 μM 덱사메타손(dexamethasone; DEX) 및 10 ㎍/㎖ 인슐린(insulin)을 포함하는 지방세포형성 분화배지(MDI)에 배양하여 지방세포로의 분화를 유도하였다. 12 웰 조직 배양 플레이트에 웰 당 105개의 세포를 분주하고 2 일 후 10 % 소태아혈청(fetal bovine serum; FBS)을 포함하는 배지로 교체하였다. 2 일 경과 후 IBMX, 덱사메타손 및 인슐린을 포함하는 배지(MDI)로 교환하면서 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물을 농도별로 처리하고 2 일 간격으로 총 4회 인슐린 및 상기 추출물을 처리하였다. 마지막 시료를 처리하고 2 일 후 지방생성 억제능을 관찰하였다.
상기와 같이 MDI로 분화를 유도한 3T3-L1의 지방생성에 대한 효과를 확인하기 위하여, 오일 레드 오(Oli-red-O) 염색을 이용하여 중성지방(triglyceride; TG) 생성을 측정하였다. 지방세포로의 분화 유도 및 시료 처리가 완료된 세포를 1X 인산완충염용액(phosphate buffered saline; PBS)으로 세척한 다음 10 % 포르말린(formalin)으로 고정하고 오일 레드 오 염색 용액으로 처리한 후 30 분간 배양하였다. 염색이 완료된 후 100 % 이소프로판올(isopropanol)을 이용하여 세포에 침착된 염료를 추출하고 500 nm에서 상기 염료 추출액의 흡광도를 측정하였다.
도 3은 (a) 상기 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물 각각 농도별로 처리하여 배양한 3T3-L1의 오일 레드 오 염색 후, 탈색하여 정량함으로써 계산된 중성지방 함량을 확인한 결과 및 (b) 위상차 현미경 상으로 확인한 결과이다.
도 3에 나타난 바와 같이, 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물 처리 농도의 증가에 따라(0, 10, 25, 50, 75, 100 ㎍/㎖) 중성지방(triglyceride;TG) 생성율을 각각 3.5, 16.2, 38.7, 71.9, 86.4 %로 감소시키는 것을 확인하였다. 또한, 저해능의 50% 억제농도(Inhibitory concentration 50, IC50)는 58.51 ㎍/㎖ 로 확인하였다. 이러한 결과는 상기 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물이 지방생성을 억제하는 효과가 매우 높음을 나타내는 결과이다.
실시예 5: 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물의 지방 분해능(lipolysis activity) 분석
본 발명의 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물의 세포 내 축적된 중성지방 분해능을 확인하기 위하여, 상기 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물을 처리한 지방세포의 중성지방 함량 변화를 분석하였다. 실시예 3에 기재된 지방세포로의 분화조건을 실험의 목적에 맞게 변형한 조건으로 3T3-L1 지방전구세포를 지방세포로 분화시켜 사용하였다. 분화배지로는 실시예 3과 동일한 0.5 μM IBMX, 1 μM 덱스메타손 및 10 ㎍/㎖ 인슐린을 포함하는 지방세포형성 분화배지(MDI)를 이용하였다. 구체적으로, 12 웰 조직 배양 접시에 웰당 105개의 세포를 분주하고 2 일 후 10 % 소태아혈청을 포함하는 배지로 교체하였다. 2 일 경과 후 IBMX, 덱스메타손 및 인슐린을 포함하는 배지(MDI)로 교체하고 2 일 간격으로 총 3회 인슐린을 처리하였고, 마지막 인슐린 처리시 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물을 함께 처리하였다. 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물을 처리하고 2 일이 경과한 후 배지 상층을 취하여 지방세포로부터 방출된 글리세롤의 양을 측정하였으며, 배양된 지방세포는 오일 레드 오 염색하여 잔존하는 중성지방(TG)의 양을 정량하였다. 염색 및 탈색하여 정량하는 방법은 실시예 3에 기재된 바와 동일하게 실시하였다.
상기와 같은 방법으로 중성지방 분해능을 확인한 결과, 도 4의 (a)에 제시된바와 같이 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물 처리 농도의 증가에 따라(0, 10, 25, 50, 75, 100 ㎍/㎖) 중성지방 분해 산물인 글리세롤의 배지 내 방출량이 농도 의존적으로 증가하는 것을 확인하였다. 뿐만 아니라 상기 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물을 처리 또는 비처리하여 배양한 지방세포를 오일 레드 오 염색하여 세포 내 잔존하는 지방함량이 감소하였음을 육안으로 확인하였고 이를 탈색하여 염료를 정량함으로써 잔존 지방함량의 감소를 수치로 기록하였다(도 4의 (b) 및 (c)). 이러한 결과는 본 발명의 엔드리케리아 아노말라 메탄올 추출물이 세포 내 축적된 지방을 분해하여 세포 밖으로 배출함으로써 세포 내 중성지방의 함량을 감소시킴으로써 항비만 활성을 보유할 수 있다는 것을 의미한다.
Claims (6)
- 엔드리케리아 아노말라 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 추출물은 물, 탄소수1 내지 탄소수4의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것인 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 알코올은 메탄올인 것인 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 비만 예방 또는 치료는 지방전구세포의 지방세포로의 분화 억제; 췌장리파아제 활성 억제를 통한 체내 지방 흡수 감소; 또는 지방세포 내에 축적된 중성지방의 분해에 의해 달성되는 것인 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 조성물은 체중감소, 체지방감소, 혈중 중성지방 함량 감소 및 혈중 콜레스테롤 함량 감소의 효과를 가지는 것이 특징인 조성물.
- 엔드리케리아 아노말라 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 개선용 건강기능식품.
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KR1020130132343A KR101557557B1 (ko) | 2013-11-01 | 2013-11-01 | 엔드리케리아 아노말라 추출물을 포함하는 항비만 조성물 |
Country Status (1)
Country | Link |
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KR (1) | KR101557557B1 (ko) |
-
2013
- 2013-11-01 KR KR1020130132343A patent/KR101557557B1/ko active IP Right Grant
Also Published As
Publication number | Publication date |
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KR101557557B1 (ko) | 2015-10-07 |
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