KR20150043342A

KR20150043342A - 단일 가변 도메인 및 카모스타트 메실레이트 (cm)를 포함하는 조성물

Info

Publication number: KR20150043342A
Application number: KR20157004323A
Authority: KR
Inventors: 션 매튜 클리블랜드; 스테판 살로몬; 카산드라 밴 크린크스
Original assignee: 글락소 그룹 리미티드
Priority date: 2012-08-21
Filing date: 2013-08-21
Publication date: 2015-04-22
Also published as: CN104884089A; BR112015003851A2; WO2014030049A3; RU2015110027A; WO2014030049A2; AU2013304627A1; JP2015527357A; EP2887960A2; US20150306058A1; CA2882684A1; IN2015DN01147A

Abstract

본 개시내용은 단일 가변 도메인을, 특히 위 및 장과 같은 프로테아제-풍부 환경 중에서 안정화시키는 수단을 제공한다. 단일 가변 도메인 및 카모스타트 메실레이트를 포함하는 조성물, 특히 제약 조성물이 제공되며, 이와 함께 상기 조성물의 의약으로서의 용도 및 치료 방법에서의 용도가 제공된다. 본 개시내용의 조성물은 위장 병태, 예컨대 크론병 또는 궤양성 결장염의 국소 치료에, 또는 소화관 점막 면역계에서의 직접 활성을 위해 특히 유용하다.

Description

단일 가변 도메인 및 카모스타트 메실레이트 (CM)를 포함하는 조성물 {COMPOSITIONS COMPRISING A SINGLE VARIABLE DOMAIN AND CAMOSTAT MESYLATE (CM)}

대부분의 생물제약, 특히 치료 항체 및 그의 단편은 비경구 경로에 의해, 예를 들어 정맥내 또는 피하 주사에 의해 투여된다. 이들 투여 경로는 종종, 특히 하루에 수회의 주사가 필요한 경우에 불편하고 고통스러워 환자의 순응도를 감소시킬 수 있다. 이는 또한 건강 관리 제공자에게 스태프의 시간, 보관 및 장비 측면에서 비용이 많이 들게 할 수 있다.

생물제약의 경구 투여는 이들 단점 중 많은 것들을 극복할 것이지만, 그 자체의 도전과제를 갖는다. 특히, 이러한 분자는 위 및 장의 프로테아제-풍부 환경에서 단백질분해적 분해를 겪는다.

중요하게는, 위장 (GI) 관의 질환을 치료하는 경구 치료제에 대한 필요성이 존재한다. 특히 전신 독성의 위험을 낮추는데 사용되기 위한 보다 낮은 용량의 약물에 대한 필요성이 존재한다.

따라서, 단백질이 위장관의 프로테아제-풍부 환경을 극복하여 생물제약의 성공적인 경구 투여를 가능하도록 하기 위해 단백질을 안정화시키는 것에 대한 강력한 필요성이 존재한다.

본 개시내용은 카모스타트 메실레이트 및 단일 가변 도메인을 포함하는 조성물, 임의로 제약 조성물을 제공한다.

의약으로서 사용하기 위한 본 개시내용의 조성물이 제공된다. 의약의 제조를 위한 본 개시내용의 조성물의 용도가 또한 제공된다. 특히 조성물은 경구로 투여된다.

본 개시내용은 본 개시내용의 조성물을 위장 병태의 치료를 필요로 하는 환자에게 임의로 경구로 투여하는 단계를 포함하는 위장 병태를 치료하는 방법을 제공한다.

본 개시내용은 단일 가변 도메인을 카모스타트 메실레이트를 포함하는 조성물로 제제화한 후 상기 조성물을 프로테아제-풍부 용액에 노출시키는 것을 포함하는, 프로테아제-풍부 용액 중에서 단일 가변 도메인을 안정화시키는 방법을 추가로 제공한다.

도 1은 인공 장액 (SIF) 중에서의 인큐베이션 시, 상이한 전이 중간점 (Tm)을 갖는 dAb⁽ ^TM ⁾ 패널의 반감기를 나타낸다.
도 2는 SIF 중에서의 인큐베이션 시, 높은 Tm dAb⁽ ^TM ⁾ 패널의 반감기를 나타낸다.
도 3은 CM의 존재 및 부재 하에 인공 장액 (SIF) 중에서의 인큐베이션 시, 상이한 전이 중간점 (Tm)을 갖는 dAb⁽ ^TM ⁾ 패널의 반감기를 나타낸다.
도 4는 CM의 존재 및 부재 하에 SIF 중에서의 인큐베이션 시, 높은 Tm dAb^(TM) 패널의 반감기를 나타낸다.
도 5는 예측 트립신 절단 부위가 동일하지만 Tm이 상이한 2종의 dAb⁽ ^TM ⁾ 의 반감기를 나타낸다. dAb^(TM)는 CM의 존재 및 부재 하에 트립신과 함께 인큐베이션되었다.
도 6은 CM의 부재 (a) 및 존재 (b) 하에 십이지장내 투여 이후의 다양한 시점에서 소화관 조직으로부터 회수된 dAb⁽ ^TM ⁾ DOM101의 양을 나타낸다. 결과는 조직 그램당 나노그램으로 표현된다.
도 7은 CM의 존재 및 부재 하에 결장내 투여 이후에 대장으로부터 회수된 dAb^(TM) DOM101의 양을 나타낸다. 결과는 조직 그램당 나노그램으로 표현된다.

본 개시내용은 상기 논의된 과제에 대한 해결책을 제공한다. 본 개시내용은 단일 가변 도메인을 안정화시키는 수단을 제공한다. 단일 가변 도메인 및 카모스타트 메실레이트를 포함하는 조성물, 특히 제약 조성물이 제공되며, 이와 함께 상기 조성물의 의약으로서의 용도 및 치료 방법에서의 용도가 제공된다. 본원의 실시예는 카모스타트 메실레이트 (CM)가 공복상태 인공 장액 및 소장과 대장 모두에서 단일 가변 도메인 (예를 들어 도메인 항체⁽ ^TM ⁾ 또는 dAb⁽ ^TM ⁾)을 안정화시키는데 사용될 수 있음을 보여주며, 따라서 GI 병태, 예컨대 크론병 또는 궤양성 결장염의 국소 치료를 위해 또는 소화관 점막 면역계에서의 직접 활성을 위해 생물제약의 경구 전달을 위한 CM의 용도를 지지한다.

카모스타트 메실레이트 (CAS 번호 59721-29-8)의 화학 명칭은 4-[[4-[(아미노이미노메틸)아미노]벤조일]옥시]벤젠아세트산 2-(디메틸아미노)-2-옥소에틸 에스테르 메탄술포네이트이고, 이는 예를 들어 세쿠오이아 리서치 프로덕츠(Sequoia Research Products)로부터 입수할 수 있다. 카모스타트 메실레이트 (CM)는 경구 활성 세린 프로테아제 억제제이고, 이는 일본 및 한국에서 췌장염 및 수술후 역류성 식도염의 치료에 대해 허가받았다 (Foipan Product information sheet; Takasugi et al., Digestion 1982, 24:36-41; Kono et al., Am J Surg. 2005 Sep, 190(3): 412-7). CM은 트립신, 트롬빈, 칼리크레인 및 플라스민을 비롯하여 넓은 억제 스펙트럼을 갖는다 (Tamura et al., 1977, Biochimica et Biophysica Acta 484, 417-422). 소화관 내에서의 CM의 대사는 분명하지는 않지만, CM의 대사물, GBPA는 그 자체가 활성이다 (Beckh et al., Res Exp Med, 1987, 187: 401-406).

용어 "단일 가변 도메인"은 항체 가변 도메인의 서열 특징을 포함하는 접힌 폴리펩티드 도메인을 지칭한다. 따라서, 이는 완전한 항체 가변 도메인, 예컨대 VH, VHH 및 VL, 및 예를 들어 하나 이상의 루프가 항체 가변 도메인의 특징이 아닌 서열로 대체된 변형된 항체 가변 도메인, 또는 말단절단되거나 N- 또는 C-말단 연장을 포함하는 항체 가변 도메인, 뿐만 아니라 적어도 전장 도메인의 결합 활성 및 특이성을 보유하는 가변 도메인의 단편을 포함한다. 단일 가변 도메인은 상이한 가변 영역 또는 도메인과 독립적으로 항원 또는 에피토프에 결합할 수 있다. "도메인 항체^TM" 또는 "dAb⁽ ^TM ⁾"는 "단일 가변 도메인"과 동일한 것으로 간주될 수 있다. 단일 가변 도메인은 인간 단일 가변 도메인일 수 있지만, 다른 종, 예컨대 설치류 (예를 들어 WO 00/29004에 개시된 바와 같음), 너스 상어 및 낙타류 VHH dAb^TM로부터의 단일 가변 도메인을 또한 포함한다. 낙타류 VHH는 낙타, 라마, 알파카, 단봉낙타 및 구아나코를 포함하는 종으로부터 유래된 이뮤노글로불린 단일 가변 도메인으로, 이는 자연적으로 경쇄가 결여된 중쇄 항체를 생산한다. 이러한 VHH 도메인은 관련 기술분야에서 이용가능한 표준 기술에 따라 인간화될 수 있고, 이러한 도메인은 "단일 가변 도메인"인 것으로 간주된다. 본원에 사용된 VH는 낙타류 VHH 도메인을 포함한다.

항-표적 단일 가변 도메인, 예를 들어 항-TNFα 단일 가변 도메인은 상기 표적, 예를 들어 TNFα에 결합하는 단일 가변 도메인을 지칭한다. 표적은 임의의 적합한 표적일 수 있다. 한 실시양태에서, 본 개시내용의 단일 가변 도메인은 다음 중 어느 하나를 표적으로 한다: TNFα, IL-23, LAG-3, IL-6, IL-13, IL-18, TSLP, CD3 또는 하기 중 어느 하나의 수용체, 예를 들어 TNFα 수용체, 예컨대 TNFRαRI 또는 TNFRαRII, IL-23 수용체, LAG-3 수용체, IL-6 수용체, IL-13 수용체, IL-18 수용체, TSLP 수용체 또는 CD3 수용체. 한 실시양태에서, 본 개시내용의 단일 가변 도메인은 케모카인 또는 케모카인 수용체, 예를 들어 글루탐산-류신-아르기닌 수용체, 즉 ELR 수용체, 예컨대 서열 12 및 19-22에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것을 표적으로 한다.

친화도는 하나의 분자, 예를 들어 본 개시내용의 단일 가변 도메인의 또 다른 것, 예를 들어 그의 표적에 대한 단일 결합 부위에서의 결합 강도이다. 단일 가변 도메인의 그의 표적에 대한 결합 친화도는 평형 방법 (예를 들어 효소-연결 면역흡착 검정 (ELISA) 또는 방사성면역검정 (RIA)) 또는 동역학 (예를 들어 비아코어(BIACORE)^TM 분석)에 의해 결정될 수 있다.

한 실시양태에서, 단일 가변 도메인-표적 상호작용의 평형 해리 상수 (KD)는 100 nM 이하, 10 nM 이하, 2 nM 이하 또는 1 nM 이하이다. 대안적으로, KD는 5 내지 10 nM; 또는 1 내지 2 nM일 수 있다. KD는 1 pM 내지 500 pM; 또는 500 pM 내지 1 nM일 수 있다. 통상의 기술자는 KD 수치가 더 작을수록 결합은 더 강하다는 것을 인식할 것이다. KD의 역수 (즉 1/KD)는 단위가 M^-1인 평형 회합 상수 (KA)이다. 통상의 기술자는 KA 수치가 더 클수록 결합은 더 강하다는 것을 인식할 것이다.

해리율 상수 (kd) 또는 "오프-레이트"는 단일 가변 도메인-표적 복합체의 안정성, 즉 초당 붕괴되는 복합체의 분획을 기재한다. 예를 들어, kd 0.01 s^- ¹는 초당 1%의 복합체 붕괴에 해당한다. 한 실시양태에서, 해리율 상수 (kd)는 1x10^-3 s^-1이하, 1x10^-4 s^-1 이하, 1x10^-5 s^-1 이하 또는 1x10^-6 s^-1 이하이다. kd는 1x10^-5s^-1 내지 1x10^-4 s^-1 또는 1x10^-4 s^-1 내지 1x10^-3 s^-1일 수 있다.

본 명세서 전반에 걸쳐 사용되는 용어 "중화시키다"는 표적의 생물학적 활성이 시험관내 또는 생체내에서 본원에 기재된 단일 가변 도메인의 부재 하의 표적의 활성과 비교하여 단일 가변 도메인의 존재 하에 감소됨을 의미한다. 중화는 표적의 그의 수용체에 대한 결합의 차단, 표적의 그의 수용체를 활성화하는 것의 방지, 표적 또는 그의 수용체의 하향 조절, 또는 이펙터 기능성에의 영향 중 하나 이상으로 인한 것일 수 있다. 한 실시양태에서, 본 개시내용의 단일 가변 도메인은 그의 표적을 중화시킨다.

"전이 중간점" 또는 "Tm"은 단일 가변 도메인의 50%가 그의 천연 입체형태로 존재하고, 다른 50%는 변성되는 온도이다. 한 실시양태에서, 단일 가변 도메인은 높은 Tm을 갖는다. 특히, Tm은 약 66℃ 이상이다. Tm을 비롯한 단일 가변 도메인의 열 안정성은 시차 주사 열량측정법 (DSC)을 사용하여 결정할 수 있다.

본원에 사용된 "경구 투여"는 본원에 개시된 조성물의 구강에 의한 투여를 지칭한다. 본 개시내용의 조성물은 전형적으로 삼켜져서 그것이 작용하는 위장 (GI) 관으로 전해진다. 소량은 장 점막을 가로질러 전신 작용을 위한 순환에 흡수될 수 있다. 흡수는 구강 (협강) 및 위에서 시작될 수 있지만, 통상적으로는 소장에서 일어난다.

"위장 (GI) 관"은 상부 GI 관: 구강, 인두, 식도 및 위; 하부 GI 관: 소장, 십이지장, 공장, 회장, 대장 (맹장, 결장 - 상행 결장, 횡행 결장, 하행 결장 및 S자 결장 포함), 직장 및 항문; 뿐만 아니라 담낭, 간 및 췌장을 포함한다. 본 개시내용의 조성물은 GI 관의 상기 언급된 영역 중 어느 하나 이상을 표적으로 할 수 있다. 한 실시양태에서, 조성물은 소장을 표적으로 한다. 한 실시양태에서, 조성물은 대장을 표적으로 한다.

본원에 개시된 제약 조성물은 본원에 기재된 인간 질환 중 어느 하나 이상의 치료를 위한 것일 수 있다. 한 실시양태에서, 제약 조성물은 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 및/또는 부형제와 임의로 조합된 단일 가변 도메인을 포함한다.

이러한 조성물은 허용되는 제약 실무에 의해 공지되고 요구되는 제약상 허용되는 담체를 포함하며, 예를 들어 문헌 [Remingtons Pharmaceutical Sciences, 16th edition (1980) Mack Publishing Co.]을 참조한다. 이러한 제약 조성물의 제조 방법은 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다.

한 실시양태에서, 본 개시내용의 제약 조성물은 경구로 투여되는 것이다. 액체 (용액, 현탁액 (수성 또는 유성) 및 에멀젼), 반고체 (페이스트), 필름 및 고체 (정제, 로젠지, 캡슐, 분말, 결정 및 과립)을 비롯한 다양한 투여 형태가 고려된다.

경구 투여를 위한 액체 분산액은 시럽, 에멀젼 및 현탁액일 수 있다. 시럽은 담체로서, 예를 들어 사카로스, 또는 글리세린 및/또는 만니톨 및/또는 소르비톨을 함유하는 사카로스를 함유할 수 있다.

현탁액 및 에멀젼은 담체로서, 예를 들어 천연 검, 한천, 알긴산나트륨, 펙틴, 메틸셀룰로스, 카르복시메틸셀룰로스 또는 폴리비닐 알콜을 함유할 수 있다.

제약 조성물, 특히 고체 조성물, 예컨대 정제 및 캡슐은 장용 코팅될 수 있다. 장용 코팅을 위해 사용되는 물질은 지방산, 왁스, 쉘락, 플라스틱 및 식물 섬유를 포함한다. 적합한 장용 코팅은 문헌 [EURDAGIT® Application Guidelines (11^th edition, 09/2009)]에 개시되어 있다.

단일 가변 도메인을 투여하는 것에 대한 유효 용량 및 치료 요법은 환자의 연령, 체중 및 건강 상태 및 치료할 질환과 같은 인자에 의존할 수 있다. 이러한 인자는 담당의의 권한 내에 있다. 적절한 용량을 선택하는데 있어서의 지침은 예를 들어 문헌 [Smith et al. (1977) Antibodies in human diagnosis and therapy, Raven Press, New York]에서 찾아볼 수 있다.

본 개시내용의 조성물에서 단일 가변 도메인 대 카모스타트 메실레이트의 비는 약 1:0.1, 1:1, 1:10, 1:25, 1:50 또는 1:100일 수 있다. 한 실시양태에서, 본 개시내용의 조성물에서 단일 가변 도메인 대 카모스타트 메실레이트의 비는 약 1:100이다. 한 실시양태에서, 본 개시내용의 조성물에서 단일 가변 도메인 대 카모스타트 메실레이트의 비는 약 1:10이다.

제약 조성물은 다른 의약과 함께, 임의로 사용 지침서와 함께, 단일 가변 도메인의 부분들의 키트를 포함할 수 있다. 편의상, 키트는 미리 결정된 양의 시약을 사용 지침서와 함께 포함할 수 있다.

본 개시내용은 본 개시내용의 조성물을 본원에 개시된 질환의 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 본원에 개시된 질환을 치료하는 방법을 제공한다.

본 개시내용은 본원에 열거된 질환 및 장애의 치료를 위한 의약의 제조에서의 본원에 기재된 바와 같은 본 개시내용의 조성물의 용도를 또한 제공한다. 본 개시내용의 조성물에 의해 치료될 수 있는 질환 및 장애는 위장 장애를 포함한다.

"위장 장애"는 GI 관에 영향을 미치는 장애이고, 장염, 직장염, 크론병을 비롯한 염증성 장 질환 (IBD), 궤양성 결장염을 비롯한 결장염, 복강 질환, 베체트 증후군 및 경구 점막염을 포함한다. 한 실시양태에서 위장 장애는 IBD이다. 한 실시양태에서 위장 장애는 크론병이다. 한 실시양태에서 위장 장애는 궤양성 결장염이다.

GI 관을 표적으로 하는 것에 의해 치료될 수 있는 임의의 다른 질환은 본 개시내용의 방법에 의해 치료되는 질환 내에 포함된다. 예를 들어, GI 관 내의 표적에 결합하는 본 개시내용의 단일 가변 도메인은 GI 관을 넘어서 효과를 발생시킬 수 있고, 전신 질환의 치료를 발생시킬 수 있다.

용어 "개체", "대상체" 및 "환자"는 본원에서 상호 교환가능하게 사용된다. 대상체는 전형적으로 인간이다. 대상체는 또한 포유동물, 예컨대 마우스, 래트 또는 영장류 (예를 들어 마모셋 또는 원숭이)일 수 있다. 대상체는 비-인간 동물일 수 있다.

치료는 치유적, 예방적 또는 방지적일 수 있다. 대상체는 치료를 필요로 하는 자일 것이다. 치료를 필요로 하는 자는 미래에 질환이 발생할 수 있는 개체에 더하여, 이미 특정한 의료 질환을 앓고 있는 개체를 포함할 수 있다. 본원에 기재된 치료 유효량의 단일 가변 도메인은 질환의 하나 이상의 증상을 개선 또는 감소시키거나, 또는 그러한 질환을 예방 또는 치유하는데 효과적인 양이다.

프로테아제-풍부 용액 중에서 단일 가변 도메인을 안정화시키는 방법이 제공된다. 상기 방법은 단일 가변 도메인을 카모스타트 메실레이트를 포함하는 조성물로 제제화한 후 상기 조성물을 프로테아제-풍부 용액에 노출시키는 것을 포함한다.

"프로테아제-풍부" 용액은 프로테아제, 특히 GI 관에서 발견되는 프로테아제를 예를 들어 생리학적 양으로 포함하는 용액이다. 프로테아제는 폴리펩티드 쇄에서 하나 이상의 펩티드 결합을 가수분해함으로써 단백질분해를 수행하는 효소이다. 인간에서 트립신 상호간-소화와 관련하여 생리학적 양은 20-50 U/ml이다. 인간에서 조기 식후성 트립신의 생리학적 양은 60-100 U/ml이다. 인간에서 후기 식후성 트립신의 생리학적 양은 500-1500 U/ml이다 (McConnell et al., International Journal of Pharmaceutics 364: 213-226 (2008)). 한 실시양태에서, 프로테아제-풍부 용액 중의 트립신 양은 상기 언급된 범위 중 임의의 범위일 수 있다. 한 실시양태에서, 프로테아제-풍부 용액은 트립신을 하기 양 중 어느 하나보다 많은 양으로 포함한다: 20 U/ml, 30 U/ml, 40 U/ml, 50 U/ml, 60 U/ml, 70 U/ml, 80 U/ml, 90 U/ml, 100 U/ml, 200 U/ml, 300 U/ml, 400 U/ml, 500 U/ml, 600 U/ml, 700 U/ml, 800 U/ml, 900 U/ml, 1000 U/ml, 1100 U/ml, 1200 U/ml, 1300 U/ml, 1400 U/ml 또는 1500 U/ml. 한 실시양태에서, 프로테아제-풍부 용액은 키모트립신 및/또는 판크레아틴을 추가로 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 프로테아제-풍부 용액은 트립신, 키모트립신 및/또는 판크레아틴을 포함한다. 한 실시양태에서, 프로테아제-풍부 용액은 인공 장액 (SIF)이다. SIF는 담즙, 판크레아틴 및 트립신을 포함한다. SIF는 염화나트륨, 염화칼륨 및 염화칼슘을 또한 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, SIF는 실시예에 기재된 바와 같고, 예를 들어 프로테아제를 실시예 1에 명시된 양으로 포함한다.

본 명세서 내에서, 명확하고 간결한 명세서가 기록될 수 있도록 하는 방식으로 실시양태를 참조하여 본 개시내용이 기재되었다. 실시양태들은 본 개시내용으로부터 벗어나지 않으면서 다양하게 조합되거나 분리될 수 있는 것으로 의도되며, 그러한 것을 인지해야 한다.

실시예

실시예 1: 인공 장액 (SIF) 중 도메인 항체⁽ ^TM ⁾ 패널의 고유 안정성

인공 장액 (SIF)을 TNO-TIM⁽ ^TM ⁾ 소화관 모델 시스템에서 사용되는 레시피에 기초하여 제제화하되, 부피는 하기 상술되는 바와 같이 실질적으로 규모를 축소하였다.

인공 장액 (SIF) 제조:

투명한 용액이 수득될 때까지 2.0g (+/- 0.02g)의 담즙 분말을 250g (+/- 5g)의 정제수에 지속적으로 교반시키면서 서서히 첨가하여 담즙 용액을 제조하였다.

2.1g (+/- 0.2g)의 판크레아틴 분말을 150g (+/- 3g)의 정제수에 첨가하여 판크레아틴 용액을 제조하였다. 교반기를 사용하였고, 발포를 최소화하도록 주의하였다. 일단 균질 혼합물이 수득되면, 용액을 20분 동안 3500rpm에서 원심분리한 다음, 상청액을 얼음 상에서 저장하였다.

정제수를 250g (+/- 5g) 염화나트륨, 30g (+/- 0.5g) 염화칼륨 및 15g (+/- 0.3g) 염화칼슘 탈수화물에 첨가하여 총 2174g이 되도록 함으로써 소장 전해질 용액 (SIES) 25% (농축됨)를 제조하였다. 일단 염이 용해되면, 1M 수산화나트륨으로 pH를 pH7.0 (+/-0.5)으로 조정하였다.

이어서 43.5 (+/-1g) SIES 농축물을 정제수에 총 중량 1000g으로 첨가하여 SIES 희석액을 제조하였다.

200 mg (+/- 5mg)의 트립신을 100g (+/-2g)의 SIES 희석액에 용해시켜 트립신 용액을 제조하였다. 이어서, 이 용액을 1.5ml 에펜도르프 튜브 내로 피펫팅하고 (튜브당 1ml) -20℃에서 동결시켰다.

이어서 25g (+/-0.3g)의 담즙 용액, 12.5g (+/-0.3g) 판크레아틴 용액 및 12.5g (+/-0.5g)의 SIES 희석액을 혼합 (비 2:1:1 담즙/판크레아틴/SIES 희석액)하여 SIF를 제조하였다. 이어서 용액의 사용 직전에 1ml의 트립신 용액을 첨가하였다.

도메인 항체⁽ ^TM ⁾ 제조

조사 대상의 도메인 항체⁽ ^TM ⁾ (dAb⁽ ^TM ⁾)를 비바스핀(Vivaspin)⁽ ^TM ⁾ 500 3kD MWCO 칼럼을 사용하여 대략 20mg/ml로 농축시켰다. 샘플 회수를 최대화하기 위해 사용 전에 칼럼을 PBS로 미리 세정하였다. 몰 흡광 계수 및 분자량 옵션을 사용하여 나노드롭(Nanodrop)^(TM)에 의해 농도를 확인하였다.

반응 어셈블리

SIF 중 dAb^TM의 인큐베이션을 최종 부피 250μl로 수행하였다. 혼합물에 적용된 dAb^TM의 부피는 최종 농도 1mg/ml를 제공하였다.

25μl 분취액을 즉시 제거하고, 드라이 아이스 상에서 저장하였다 (0 시간 시점). 반응 혼합물을 37℃에서 진탕하면서 (100rpm) 인큐베이션하였다. 이어서 25μl 분취액을 0.25시간째, 0.5시간째, 1시간째, 2시간째, 4시간째, 6시간째 및 밤새 제거하였다. 샘플을 드라이 아이스 상에서 순간 동결시키고, 분석 전에 -80℃에서 저장하였다.

SDS-PAGE 분석

다양한 시점에서 SIF 중에 잔존하는 dAb^(TM)의 양을 SDS-PAGE 및 밀도측정법에 의해 측정하였다. 간략하게, 샘플을 물 및 샘플 로딩 완충 혼합물 중에 1/10으로 희석시키고, 5분 동안 80℃로 가열하였다. 샘플을 신속하게 냉각시킨 다음, 10μl를 제조된 표준 (물 중 dAb⁽ ^TM ⁾) 및 분자량 마커와 함께 4-12% 노벡스(Novex)⁽ ^TM ⁾비스-트리스 겔에 로딩하였다. 겔을 1x MES 완충제 중에서 45분 동안 150V 상수로 가동하고, 단백질 밴드를 인스턴트 블루(Instant Blue)^(TM)로 밤새 염색하여 가시화하였다. 생성된 밴드의 밀도측정법은 오디세이 리-코어(Odyssey Li-Cor)⁽ ^TM ⁾ 겔 영상화 시스템을 사용하여 수행하였고, 0h 시점 밴드 (출발 양)의 밀도와 비교하여 존재하는 dAb^(TM)의 양을 계산하였다. 시간 대 dAb^(TM)의 출발 양의 백분율의 지수 곡선을 제작하고, dAb^(TM)의 출발 양의 50%가 존재하는 시간을 반감기로 해석하였다.

상기 방법을 사용하여, 표 1에 제시된 바와 같은 다양한 전이 중간점 (Tm)을 갖는 dAb⁽ ^TM ⁾ 패널을 SIF 중에서 인큐베이션하고, SDS-PAGE 및 밀도측정법에 의해 분석하였다. 이들 실시예의 경우에, 높은 Tm dAb^(TM)는 Tm이 ≥ 66℃인 dAb^(TM)를 지칭하며, 낮은 Tm dAb^(TM)는 Tm이 ≤ 56℃인 dAb^(TM)를 지칭한다.

<표 1> 다양한 Tm을 갖는 dAb⁽ ^TM ⁾ 패널

결과를 도 1에 제시한다. 이 그래프는 3일의 별개의 날에 수행한 SIF 연구의 조합이다. Tm이 가장 높은 dAb^(TM)인 DOM4는 조사 대상인 다른 dAb^(TM)보다 분명하게 훨씬 더 안정적이었다. 이것이 경향인지 여부를 확인하기 위해, 표 2에 제시된 바와 같은 4종의 추가의 높은 Tm dAb^(TM)에 대해 상기 방법을 사용하여 연구하였다.

<표 2> 높은 Tm dAb⁽ ^TM ⁾ 패널

높은 Tm dAb⁽ ^TM ⁾ 패널에 대한 결과를 도 2에 제시한다.

1종의 다른 dAb⁽ ^TM ⁾, DOM8은 SIF 중에서 극히 안정하였다. 다른 3종의 dAb^(TM)는 안정하지 않았다. 그러나, 시험한 5종의 높은 Tm dAb⁽ ^TM ⁾ 중 4종은 Tm이 66℃ 미만인 dAb^(TM)보다 더 안정하였다. 2종의 가장 안정한 dAb⁽ ^TM ⁾ (DOM4 및 DOM8)는 둘 다 Vκ 프레임워크를 가졌다. 그러나, DOM11도 또한 Vκ 프레임워크를 가졌지만, 훨씬 덜 안정하므로, 프레임워크는 안정성에 있어서 그리 중요하지 않을 수 있다. DOM11을 여기서 시험된 다른 3종의 높은 Tm dAb^(TM)와 상이한 시점에 SIF 중에서 인큐베이션하였다.

실시예 2: 카모스타트 메실레이트를 사용한 시험관내 도메인 항체^TM의 안정화

실시예 1에서 연구된 dAb⁽ ^TM ⁾ 패널을 카모스타트 메실레이트 (CM, 세쿠오이아 리서치 프로덕츠)의 존재 하에 SIF 중에서 또한 인큐베이션하여 프로테아제의 억제가 dAb^(TM)를 추가로 안정화시키는데 도움이 되는지 여부를 결정하였다. CM을 상기 SIF 제조 섹션에서 언급된 전해질 용액에 350mg/ml의 농도로 첨가하고 (CM은 고도로 농축되었으나 포화점 미만임) 50℃로 가온하여 용해시켰다. CM을 SIF/dAb^(TM)에 최종 농도 10mg/ml로 첨가하였다. 사용된 시점 및 후속 분석은 실시예 1에서와 같이 수행하였다.

결과를 비교상 실시예 1로부터의 것과 나란히 도 3 및 4에 제시한다. SIF/dAb 혼합물에의 CM의 첨가는 연구된 dAb⁽ ^TM ⁾ 중 하나를 제외하고 모든 반감기를 증가시켰다. 반감기 연장은 시험된 모든 분자에 대해 동일하지 않았고, 이는 dAb^(TM)의 고유 특성이 그의 안정화 능력에 기여함을 시사한다. 또한, 시험된 모든 높은 Tm dAb^(TM)의 경우에 반감기가 24시간보다 더 연장되었으므로, 높은 Tm dAb^(TM)은 그의 다양한 반감기에도 불구하고 CM에 의한 안정화에 본질적으로 보다 적합한 것으로 보인다.

실시예 3: dAb⁽ ^TM ⁾ 안정성의 모델링 및 도메인 항체⁽ ^TM ⁾의 고유 안정성에 대한 Tm의 중요성

펄 스크립트를 기록하여 트립신 및 키모트립신 (판크레아틴 내에 존재함) 절단 부위에 대한 단백질 서열을 스캐닝하였다. 이어서 반감기를 예측 절단 부위 및 Tm과 상호관련시켰다.

약한 양성 상관관계가 Tm과 반감기 사이에 관찰되었다 (스피어맨(Spearman), 0.58; 피어슨(Pearson), 0.31). 그러나, CM의 존재 하에 상관관계 측정을 둘 다 사용한 경우에 Tm과 반감기 사이에 강한 양성 상관관계가 관찰되었다 (스피어맨, 0.78; 피어슨, 0.90). 이는 Tm이 높을수록 dAb^(TM)가 CM에 의한 안정화에 보다 적합함을 시사한다. CM의 존재 또는 부재 하에, 예측 절단 부위와 반감기 사이에는 어떠한 분명한 상관관계도 관찰되지 않았다.

모델링 과정 동안, 2종의 Vκ 프레임워크 dAb^(TM)가 동일한 예측 트립신 절단 부위를 갖지만, SIF 중에서 상이한 반감기 및 상이한 Tm을 갖는 것으로 관찰되었다. 이들은 DOM4 (반감기 6.1시간, Tm 72.8℃) 및 DOM1 (반감기 0.1시간, Tm 55℃)이다. 이들 2종의 dAb^(TM)를 트립신과 함께 SIF 중에서 동일한 농도를 사용하되 담즙 염 또는 판크레아틴 없이 인큐베이션하였다. 이어서 반감기에서 관찰되는 임의의 차이는 Tm으로 인한 것일 것이다. CM을 트립신/dAb⁽ ^TM ⁾ 혼합물에 또한 첨가하였다. 상기와 같이 반감기를 계산하고, 결과를 도 5에 제시한다.

트립신 단독의 존재 하에, DOM4의 반감기는 DOM1의 그것보다 상당히 더 길었다. 이러한 경우에, Tm에서의 차이는 아마도 분자의 증가된 안정성을 설명할 것이다.

실시예 4: 공복상태 한 위스타(Han Wistar) 래트의 십이지장에 직접 투여한 TNFR1 특이적 dAb⁽ ^TM ⁾ DOM101 (서열 6)을 안정화시키기 위한 카모스타트 메실레이트의 용도

한 위스타 래트에 100mg CM의 존재 또는 부재 하에 1mg DOM101을 투여하여 CM이 위장관 내에서 dAb^(TM)를 보존하는지 여부를 결정하였다. 래트를 이소플루란 마취제에 의해 간단히 마취시키고, 용량 제제의 직접 십이지장내 주사 (500μl)를 위한 십이지장의 위치설정을 용이하게 하기 위해 정중선 복부 절개하였다. 투여 후, 복부 절개를 닫고, 연구 케이지로 되돌려지기 전에 래트가 회복되게 하였다. 십이지장으로의 직접 투여는 위내 위액의 산성 조건을 우회하고, 장관에서의 약동학의 직접 분석을 가능하게 한다.

동물을 하기 시점에 추려내었다: 0.5, 1.5, 3, 5, 7 및 18시간째 (군당 3마리의 동물).

혈액 샘플을 채취하고, 장관을 해부해내고, 그의 구성 부분으로 나누었다: 십이지장 (x2), 공장 (x6), 회장, 맹장, 결장 (x2), 직장.

세제 및 프로테아제 억제제를 함유하는 용해 완충제 중에서 젠틀맥스(GentleMACS)^(TM)해리장치를 사용하여 장 샘플을 균질화하였다. TNFR1-특이적 MSD^(TM) 검정을 사용하여 샘플을 DOM101에 대해 스크리닝하였다. 간략하게, MSD 플레이트를 TNFR1-Fc로 코팅하였다. 플레이트를 세척하고, 소 혈청 알부민으로 차단시켰다. 조직 샘플을 희석시키고, dAb⁽ ^TM ⁾ 표준 곡선에 따라 플레이트에 첨가한 다음, 실온에서 인큐베이션하여 결합되게 하였다. 플레이트를 세척하고, 술포-태그-접합된 항-Vh 항체를 웰에 첨가하였다. 인큐베이션 후, 플레이트를 세척하고, MSD 판독 완충제와 함께 인큐베이션하였다. 생성된 전기화학발광 신호를 섹터 이미저(Sector Imager) 6000 상에서 판독하였다.

결과를 도 6에 조직 그램당 나노그램으로 표현한다.

CM 부재 하의 도 6a에서, dAb^(TM)는 공장에서 단지 0.5시간째에만 검출가능했고, 십이지장에서는 단지 최대 1.5시간까지 검출가능했다. 최대량은 공장에서 검출가능했고, 회장에서는 단지 소량만이 검출가능했다.

CM 존재 하의 도 6b에서, dAb^(TM)는 투여 후 7시간째에 GI 관 전체에 걸쳐서 검출가능했다. 그 이후 시점에 dAb^(TM)는 단지 회장, 맹장, 결장 및 직장에서만 검출가능했다. 상기한 바와 같이, 최대량의 dAb^(TM)는 공장으로부터 회수되었다. 소화관 통과의 가능성에도 불구하고, dAb^(TM)는 7시간째에 십이지장 및 공장에서도 또한 검출가능했고, 이는 dAb^(TM)가 소화관 조직을 관통함을 시사한다. 십이지장내 투여 이후에 DOM101은 혈장에서 낮은 수준으로 검출가능하였으며 (총 용량의 0.1% 미만) dAb^(TM)가 조직을 관통할 수 있음을 확인해 주었다 - 데이터는 제시되지 않음.

실시예 5: 공복상태 한 위스타 래트의 결장에 직접 투여한 TNFR1 특이적 dAb^(TM) DOM101 (서열 6)을 안정화시키기 위한 카모스타트 메실레이트의 용도

한 위스타 래트에 CM의 존재 또는 부재 하에 1mg DOM101을 투여하여 카모스타트 메실레이트가 대장관 내에서 dAb^(TM)를 또한 보존하는지 여부를 결정하였다. 간략하게, 래트를 이소플루란 마취제에 의해 마취시키고, 결장의 위치설정을 용이하게 하기 위해 정중선 복부 절개하고, 500ul 용량의 용량 제제를 결장에 직접 주사하였다. 투여 후 복부 절개를 느슨하게 닫고, 래트를 이소플루란 마취 하에 유지시키고, 실험 기간 동안 모니터링하였다. 본 실시예에서, 2종의 용량의 CM을 연구하였다 - 동물당 100mg (실시예 4에서와 같음) 및 10mg.

동물을 0.5 및 3시간째에 추려내었다 (시점당 3마리의 동물). 혈액 샘플을 채취하고, 장관을 해부해내고, 다음과 같이 구성 부분으로 나누었다: 맹장, 결장 (x2), 직장.

실시예 4에서 언급된 바와 같이 샘플을 균질화하고 스크리닝하였다. 결과를 도 7에 조직 그램당 나노그램으로 표현한다.

높은 수준의 dAb^(TM)가 CM의 존재 또는 부재 하에 0.5시간째에 맹장, 결장 및 직장 (10mg 카모스타트 군 제외)에서 검출가능했다. GI 관의 하부에서 소화 효소는 보다 낮은 수준으로 존재할 것이며, 이러한 결과를 설명할 수 있다. 10mg 카모스타트 군에서 0.5시간째에 직장에서의 dAb^(TM)의 결여는 이들 동물에서 맹장의 습윤 중량이 보다 높기 때문일 가능성이 있고 (데이터는 제시되지 않음) - 따라서 dAb^(TM)는 이 절편에 보유되어 있을 수 있다. 그러나, CM 부재 하의 3시간째의 dAb⁽ ^TM ⁾ 수준은 실질적으로, 특히 맹장 및 직장에서 감소되었고, 이들 관찰치를 2개의 CM 군에서 비교하였다. 보다 낮은 용량의 CM (10mg)은 대형 GI 관에서 dAb^(TM)를 보존하는데 있어서 보다 높은 용량만큼 효과적인 것으로 보인다.

실시예 1-5의 요약

이들 실시예는 카모스타트 메실레이트와 도메인 항체⁽ ^TM ⁾의 공-투여가 이들 분자의 경구 전달을 위한 신규 플랫폼으로서 사용될 수 있음을 입증한다. 시험관내에서 연구된 11종의 dAb⁽ ^TM ⁾ 중 10종이 CM의 첨가에 의해 다양한 정도로 안정화되었다. 인 실리코 모델링한 경우에 CM의 존재 하에서의 반감기와 Tm 사이에 강력한 상관관계가 관찰되었고, 이는 Tm이 높을수록 dAb^(TM)가 CM에 의한 안정화에 보다 적합함을 시사한다. 동일한 예측 트립신 절단 부위를 갖는 2종의 dAb^(TM)의 비교는 또한 SIF 중의 dAb^(TM)의 고유 안정성에 대한 Tm의 중요성을 또한 보여준다.

시험관내 결과는 생체내 연구에 의해 지지되며, 카모스타트 메실레이트와 DOM101의 공-투여는, 십이지장 또는 결장으로 전달되는지 여부에 관계없이, GI 관으로부터 회수가능한 dAb^(TM)의 양을 실질적으로 증가시킨다. 제제에의 CM의 첨가는 크론병 또는 궤양성 결장염과 같은 위장 병태의 치료를 위해 십이지장 또는 결장으로의 dAb^(TM)의 국소 전달을 가능하게 할 것이다.

서열 색인 (모든 서열은 아미노산 서열임)

SEQUENCE LISTING <110> CLEVELAND, Sean Matthew SALOMON, Stefan VAN KRINKS, Cassandra <120> COMPOSITION COMPRISING A SINGLE VARIABLE DOMAIN AND CAMOSTAT MESYLATE (CM) <130> PB65194 <150> PCT/IB2013/001814 <151> 2013-08-21 <150> 61/691,443 <151> 2012-08-21 <160> 22 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence identified using molecular biology techniques. <400> 1 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Tyr Leu Asn 20 25 30 Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Asn Phe Gly Ser Glu Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Pro Ser Phe Tyr Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 2 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence identified using molecular biology techniques. <400> 2 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asn Phe 20 25 30 Gly Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Trp Ile Ile Ser Ser Gly Thr Glu Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Ser Leu Gly Arg Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 3 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence identified using molecular biology techniques. <400> 3 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ala His Glu 20 25 30 Thr Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser His Ile Pro Pro Asp Gly Gln Asp Pro Phe Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr His Cys 85 90 95 Ala Leu Leu Pro Lys Arg Gly Pro Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 4 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence identified using molecular biology techniques. <400> 4 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Glu Gly 20 25 30 Thr Met Trp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Leu Ala Ala Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Lys Arg Gln Glu Arg Asp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 5 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence identified using molecular biology techniques. <400> 5 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Phe Thr Asp Asp 20 25 30 Arg Met Trp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Gln Pro Asp Gly His Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Glu Gln Asp Val Lys Gly Ser Ser Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 6 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence identified using molecular biology techniques. <400> 6 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ala His Glu 20 25 30 Thr Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser His Ile Pro Pro Asp Gly Gln Asp Pro Phe Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr His Cys 85 90 95 Ala Leu Leu Pro Lys Arg Gly Pro Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 7 <211> 233 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 7 Met Ser Thr Glu Ser Met Ile Arg Asp Val Glu Leu Ala Glu Glu Ala 1 5 10 15 Leu Pro Lys Lys Thr Gly Gly Pro Gln Gly Ser Arg Arg Cys Leu Phe 20 25 30 Leu Ser Leu Phe Ser Phe Leu Ile Val Ala Gly Ala Thr Thr Leu Phe 35 40 45 Cys Leu Leu His Phe Gly Val Ile Gly Pro Gln Arg Glu Glu Phe Pro 50 55 60 Arg Asp Leu Ser Leu Ile Ser Pro Leu Ala Gln Ala Val Arg Ser Ser 65 70 75 80 Ser Arg Thr Pro Ser Asp Lys Pro Val Ala His Val Val Ala Asn Pro 85 90 95 Gln Ala Glu Gly Gln Leu Gln Trp Leu Asn Arg Arg Ala Asn Ala Leu 100 105 110 Leu Ala Asn Gly Val Glu Leu Arg Asp Asn Gln Leu Val Val Pro Ser 115 120 125 Glu Gly Leu Tyr Leu Ile Tyr Ser Gln Val Leu Phe Lys Gly Gln Gly 130 135 140 Cys Pro Ser Thr His Val Leu Leu Thr His Thr Ile Ser Arg Ile Ala 145 150 155 160 Val Ser Tyr Gln Thr Lys Val Asn Leu Leu Ser Ala Ile Lys Ser Pro 165 170 175 Cys Gln Arg Glu Thr Pro Glu Gly Ala Glu Ala Lys Pro Trp Tyr Glu 180 185 190 Pro Ile Tyr Leu Gly Gly Val Phe Gln Leu Glu Lys Gly Asp Arg Leu 195 200 205 Ser Ala Glu Ile Asn Arg Pro Asp Tyr Leu Asp Phe Ala Glu Ser Gly 210 215 220 Gln Val Tyr Phe Gly Ile Ile Ala Leu 225 230 <210> 8 <211> 189 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 8 Met Leu Gly Ser Arg Ala Val Met Leu Leu Leu Leu Leu Pro Trp Thr 1 5 10 15 Ala Gln Gly Arg Ala Val Pro Gly Gly Ser Ser Pro Ala Trp Thr Gln 20 25 30 Cys Gln Gln Leu Ser Gln Lys Leu Cys Thr Leu Ala Trp Ser Ala His 35 40 45 Pro Leu Val Gly His Met Asp Leu Arg Glu Glu Gly Asp Glu Glu Thr 50 55 60 Thr Asn Asp Val Pro His Ile Gln Cys Gly Asp Gly Cys Asp Pro Gln 65 70 75 80 Gly Leu Arg Asp Asn Ser Gln Phe Cys Leu Gln Arg Ile His Gln Gly 85 90 95 Leu Ile Phe Tyr Glu Lys Leu Leu Gly Ser Asp Ile Phe Thr Gly Glu 100 105 110 Pro Ser Leu Leu Pro Asp Ser Pro Val Gly Gln Leu His Ala Ser Leu 115 120 125 Leu Gly Leu Ser Gln Leu Leu Gln Pro Glu Gly His His Trp Glu Thr 130 135 140 Gln Gln Ile Pro Ser Leu Ser Pro Ser Gln Pro Trp Gln Arg Leu Leu 145 150 155 160 Leu Arg Phe Lys Ile Leu Arg Ser Leu Gln Ala Phe Val Ala Val Ala 165 170 175 Ala Arg Val Phe Ala His Gly Ala Ala Thr Leu Ser Pro 180 185 <210> 9 <211> 525 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 9 Met Trp Glu Ala Gln Phe Leu Gly Leu Leu Phe Leu Gln Pro Leu Trp 1 5 10 15 Val Ala Pro Val Lys Pro Leu Gln Pro Gly Ala Glu Val Pro Val Val 20 25 30 Trp Ala Gln Glu Gly Ala Pro Ala Gln Leu Pro Cys Ser Pro Thr Ile 35 40 45 Pro Leu Gln Asp Leu Ser Leu Leu Arg Arg Ala Gly Val Thr Trp Gln 50 55 60 His Gln Pro Asp Ser Gly Pro Pro Ala Ala Ala Pro Gly His Pro Leu 65 70 75 80 Ala Pro Gly Pro His Pro Ala Ala Pro Ser Ser Trp Gly Pro Arg Pro 85 90 95 Arg Arg Tyr Thr Val Leu Ser Val Gly Pro Gly Gly Leu Arg Ser Gly 100 105 110 Arg Leu Pro Leu Gln Pro Arg Val Gln Leu Asp Glu Arg Gly Arg Gln 115 120 125 Arg Gly Asp Phe Ser Leu Trp Leu Arg Pro Ala Arg Arg Ala Asp Ala 130 135 140 Gly Glu Tyr Arg Ala Ala Val His Leu Arg Asp Arg Ala Leu Ser Cys 145 150 155 160 Arg Leu Arg Leu Arg Leu Gly Gln Ala Ser Met Thr Ala Ser Pro Pro 165 170 175 Gly Ser Leu Arg Ala Ser Asp Trp Val Ile Leu Asn Cys Ser Phe Ser 180 185 190 Arg Pro Asp Arg Pro Ala Ser Val His Trp Phe Arg Asn Arg Gly Gln 195 200 205 Gly Arg Val Pro Val Arg Glu Ser Pro His His His Leu Ala Glu Ser 210 215 220 Phe Leu Phe Leu Pro Gln Val Ser Pro Met Asp Ser Gly Pro Trp Gly 225 230 235 240 Cys Ile Leu Thr Tyr Arg Asp Gly Phe Asn Val Ser Ile Met Tyr Asn 245 250 255 Leu Thr Val Leu Gly Leu Glu Pro Pro Thr Pro Leu Thr Val Tyr Ala 260 265 270 Gly Ala Gly Ser Arg Val Gly Leu Pro Cys Arg Leu Pro Ala Gly Val 275 280 285 Gly Thr Arg Ser Phe Leu Thr Ala Lys Trp Thr Pro Pro Gly Gly Gly 290 295 300 Pro Asp Leu Leu Val Thr Gly Asp Asn Gly Asp Phe Thr Leu Arg Leu 305 310 315 320 Glu Asp Val Ser Gln Ala Gln Ala Gly Thr Tyr Thr Cys His Ile His 325 330 335 Leu Gln Glu Gln Gln Leu Asn Ala Thr Val Thr Leu Ala Ile Ile Thr 340 345 350 Val Thr Pro Lys Ser Phe Gly Ser Pro Gly Ser Leu Gly Lys Leu Leu 355 360 365 Cys Glu Val Thr Pro Val Ser Gly Gln Glu Arg Phe Val Trp Ser Ser 370 375 380 Leu Asp Thr Pro Ser Gln Arg Ser Phe Ser Gly Pro Trp Leu Glu Ala 385 390 395 400 Gln Glu Ala Gln Leu Leu Ser Gln Pro Trp Gln Cys Gln Leu Tyr Gln 405 410 415 Gly Glu Arg Leu Leu Gly Ala Ala Val Tyr Phe Thr Glu Leu Ser Ser 420 425 430 Pro Gly Ala Gln Arg Ser Gly Arg Ala Pro Gly Ala Leu Pro Ala Gly 435 440 445 His Leu Leu Leu Phe Leu Ile Leu Gly Val Leu Ser Leu Leu Leu Leu 450 455 460 Val Thr Gly Ala Phe Gly Phe His Leu Trp Arg Arg Gln Trp Arg Pro 465 470 475 480 Arg Arg Phe Ser Ala Leu Glu Gln Gly Ile His Pro Pro Gln Ala Gln 485 490 495 Ser Lys Ile Glu Glu Leu Glu Gln Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Pro 500 505 510 Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Gln Leu 515 520 525 <210> 10 <211> 212 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 10 Met Asn Ser Phe Ser Thr Ser Ala Phe Gly Pro Val Ala Phe Ser Leu 1 5 10 15 Gly Leu Leu Leu Val Leu Pro Ala Ala Phe Pro Ala Pro Val Pro Pro 20 25 30 Gly Glu Asp Ser Lys Asp Val Ala Ala Pro His Arg Gln Pro Leu Thr 35 40 45 Ser Ser Glu Arg Ile Asp Lys Gln Ile Arg Tyr Ile Leu Asp Gly Ile 50 55 60 Ser Ala Leu Arg Lys Glu Thr Cys Asn Lys Ser Asn Met Cys Glu Ser 65 70 75 80 Ser Lys Glu Ala Leu Ala Glu Asn Asn Leu Asn Leu Pro Lys Met Ala 85 90 95 Glu Lys Asp Gly Cys Phe Gln Ser Gly Phe Asn Glu Glu Thr Cys Leu 100 105 110 Val Lys Ile Ile Thr Gly Leu Leu Glu Phe Glu Val Tyr Leu Glu Tyr 115 120 125 Leu Gln Asn Arg Phe Glu Ser Ser Glu Glu Gln Ala Arg Ala Val Gln 130 135 140 Met Ser Thr Lys Val Leu Ile Gln Phe Leu Gln Lys Lys Ala Lys Asn 145 150 155 160 Leu Asp Ala Ile Thr Thr Pro Asp Pro Thr Thr Asn Ala Ser Leu Leu 165 170 175 Thr Lys Leu Gln Ala Gln Asn Gln Trp Leu Gln Asp Met Thr Thr His 180 185 190 Leu Ile Leu Arg Ser Phe Lys Glu Phe Leu Gln Ser Ser Leu Arg Ala 195 200 205 Leu Arg Gln Met 210 <210> 11 <211> 146 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 11 Met His Pro Leu Leu Asn Pro Leu Leu Leu Ala Leu Gly Leu Met Ala 1 5 10 15 Leu Leu Leu Thr Thr Val Ile Ala Leu Thr Cys Leu Gly Gly Phe Ala 20 25 30 Ser Pro Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg Glu Leu Ile Glu 35 40 45 Glu Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys Asn Gly 50 55 60 Ser Met Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met Tyr Cys Ala Ala 65 70 75 80 Leu Glu Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu Lys Thr 85 90 95 Gln Arg Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala Gly Gln 100 105 110 Phe Ser Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala Gln Phe 115 120 125 Val Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Arg 130 135 140 Phe Asn 145 <210> 12 <211> 193 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 12 Met Ala Ala Glu Pro Val Glu Asp Asn Cys Ile Asn Phe Val Ala Met 1 5 10 15 Lys Phe Ile Asp Asn Thr Leu Tyr Phe Ile Ala Glu Asp Asp Glu Asn 20 25 30 Leu Glu Ser Asp Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile 35 40 45 Arg Asn Leu Asn Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro 50 55 60 Leu Phe Glu Asp Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg 65 70 75 80 Thr Ile Phe Ile Ile Ser Met Tyr Lys Asp Ser Gln Pro Arg Gly Met 85 90 95 Ala Val Thr Ile Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys 100 105 110 Glu Asn Lys Ile Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile 115 120 125 Lys Asp Thr Lys Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Ser Val Pro Gly 130 135 140 His Asp Asn Lys Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe 145 150 155 160 Leu Ala Cys Glu Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys 165 170 175 Glu Asp Glu Leu Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu 180 185 190 Asp <210> 13 <211> 159 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 13 Met Phe Pro Phe Ala Leu Leu Tyr Val Leu Ser Val Ser Phe Arg Lys 1 5 10 15 Ile Phe Ile Leu Gln Leu Val Gly Leu Val Leu Thr Tyr Asp Phe Thr 20 25 30 Asn Cys Asp Phe Glu Lys Ile Lys Ala Ala Tyr Leu Ser Thr Ile Ser 35 40 45 Lys Asp Leu Ile Thr Tyr Met Ser Gly Thr Lys Ser Thr Glu Phe Asn 50 55 60 Asn Thr Val Ser Cys Ser Asn Arg Pro His Cys Leu Thr Glu Ile Gln 65 70 75 80 Ser Leu Thr Phe Asn Pro Thr Ala Gly Cys Ala Ser Leu Ala Lys Glu 85 90 95 Met Phe Ala Met Lys Thr Lys Ala Ala Leu Ala Ile Trp Cys Pro Gly 100 105 110 Tyr Ser Glu Thr Gln Ile Asn Ala Thr Gln Ala Met Lys Lys Arg Arg 115 120 125 Lys Arg Lys Val Thr Thr Asn Lys Cys Leu Glu Gln Val Ser Gln Leu 130 135 140 Gln Gly Leu Trp Arg Arg Phe Asn Arg Pro Leu Leu Lys Gln Gln 145 150 155 <210> 14 <211> 171 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 14 Met Glu His Ser Thr Phe Leu Ser Gly Leu Val Leu Ala Thr Leu Leu 1 5 10 15 Ser Gln Val Ser Pro Phe Lys Ile Pro Ile Glu Glu Leu Glu Asp Arg 20 25 30 Val Phe Val Asn Cys Asn Thr Ser Ile Thr Trp Val Glu Gly Thr Val 35 40 45 Gly Thr Leu Leu Ser Asp Ile Thr Arg Leu Asp Leu Gly Lys Arg Ile 50 55 60 Leu Asp Pro Arg Gly Ile Tyr Arg Cys Asn Gly Thr Asp Ile Tyr Lys 65 70 75 80 Asp Lys Glu Ser Thr Val Gln Val His Tyr Arg Met Cys Gln Ser Cys 85 90 95 Val Glu Leu Asp Pro Ala Thr Val Ala Gly Ile Ile Val Thr Asp Val 100 105 110 Ile Ala Thr Leu Leu Leu Ala Leu Gly Val Phe Cys Phe Ala Gly His 115 120 125 Glu Thr Gly Arg Leu Ser Gly Ala Ala Asp Thr Gln Ala Leu Leu Arg 130 135 140 Asn Asp Gln Val Tyr Gln Pro Leu Arg Asp Arg Asp Asp Ala Gln Tyr 145 150 155 160 Ser His Leu Gly Gly Asn Trp Ala Arg Asn Lys 165 170 <210> 15 <211> 207 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 15 Met Gln Ser Gly Thr His Trp Arg Val Leu Gly Leu Cys Leu Leu Ser 1 5 10 15 Val Gly Val Trp Gly Gln Asp Gly Asn Glu Glu Met Gly Gly Ile Thr 20 25 30 Gln Thr Pro Tyr Lys Val Ser Ile Ser Gly Thr Thr Val Ile Leu Thr 35 40 45 Cys Pro Gln Tyr Pro Gly Ser Glu Ile Leu Trp Gln His Asn Asp Lys 50 55 60 Asn Ile Gly Gly Asp Glu Asp Asp Lys Asn Ile Gly Ser Asp Glu Asp 65 70 75 80 His Leu Ser Leu Lys Glu Phe Ser Glu Leu Glu Gln Ser Gly Tyr Tyr 85 90 95 Val Cys Tyr Pro Arg Gly Ser Lys Pro Glu Asp Ala Asn Phe Tyr Leu 100 105 110 Tyr Leu Arg Ala Arg Val Cys Glu Asn Cys Met Glu Met Asp Val Met 115 120 125 Ser Val Ala Thr Ile Val Ile Val Asp Ile Cys Ile Thr Gly Gly Leu 130 135 140 Leu Leu Leu Val Tyr Tyr Trp Ser Lys Asn Arg Lys Ala Lys Ala Lys 145 150 155 160 Pro Val Thr Arg Gly Ala Gly Ala Gly Gly Arg Gln Arg Gly Gln Asn 165 170 175 Lys Glu Arg Pro Pro Pro Val Pro Asn Pro Asp Tyr Glu Pro Ile Arg 180 185 190 Lys Gly Gln Arg Asp Leu Tyr Ser Gly Leu Asn Gln Arg Arg Ile 195 200 205 <210> 16 <211> 182 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 16 Met Glu Gln Gly Lys Gly Leu Ala Val Leu Ile Leu Ala Ile Ile Leu 1 5 10 15 Leu Gln Gly Thr Leu Ala Gln Ser Ile Lys Gly Asn His Leu Val Lys 20 25 30 Val Tyr Asp Tyr Gln Glu Asp Gly Ser Val Leu Leu Thr Cys Asp Ala 35 40 45 Glu Ala Lys Asn Ile Thr Trp Phe Lys Asp Gly Lys Met Ile Gly Phe 50 55 60 Leu Thr Glu Asp Lys Lys Lys Trp Asn Leu Gly Ser Asn Ala Lys Asp 65 70 75 80 Pro Arg Gly Met Tyr Gln Cys Lys Gly Ser Gln Asn Lys Ser Lys Pro 85 90 95 Leu Gln Val Tyr Tyr Arg Met Cys Gln Asn Cys Ile Glu Leu Asn Ala 100 105 110 Ala Thr Ile Ser Gly Phe Leu Phe Ala Glu Ile Val Ser Ile Phe Val 115 120 125 Leu Ala Val Gly Val Tyr Phe Ile Ala Gly Gln Asp Gly Val Arg Gln 130 135 140 Ser Arg Ala Ser Asp Lys Gln Thr Leu Leu Pro Asn Asp Gln Leu Tyr 145 150 155 160 Gln Pro Leu Lys Asp Arg Glu Asp Asp Gln Tyr Ser His Leu Gln Gly 165 170 175 Asn Gln Leu Arg Arg Asn 180 <210> 17 <211> 164 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 17 Met Lys Trp Lys Ala Leu Phe Thr Ala Ala Ile Leu Gln Ala Gln Leu 1 5 10 15 Pro Ile Thr Glu Ala Gln Ser Phe Gly Leu Leu Asp Pro Lys Leu Cys 20 25 30 Tyr Leu Leu Asp Gly Ile Leu Phe Ile Tyr Gly Val Ile Leu Thr Ala 35 40 45 Leu Phe Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr 50 55 60 Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg 65 70 75 80 Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met 85 90 95 Gly Gly Lys Pro Gln Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn 100 105 110 Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met 115 120 125 Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly 130 135 140 Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala 145 150 155 160 Leu Pro Pro Arg <210> 18 <211> 312 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 18 Met Ala Ala Gly Gln Asn Gly His Glu Glu Trp Val Gly Ser Ala Tyr 1 5 10 15 Leu Phe Val Glu Ser Ser Leu Asp Lys Val Val Leu Ser Asp Ala Tyr 20 25 30 Ala His Pro Gln Gln Lys Val Ala Val Tyr Arg Ala Leu Gln Ala Ala 35 40 45 Leu Ala Glu Ser Gly Gly Ser Pro Asp Val Leu Gln Met Leu Lys Ile 50 55 60 His Arg Ser Asp Pro Gln Leu Ile Val Gln Leu Arg Phe Cys Gly Arg 65 70 75 80 Gln Pro Cys Gly Arg Phe Leu Arg Ala Tyr Arg Glu Gly Ala Leu Arg 85 90 95 Ala Ala Leu Gln Arg Ser Leu Ala Ala Ala Leu Ala Gln His Ser Val 100 105 110 Pro Leu Gln Leu Glu Leu Arg Ala Gly Ala Glu Arg Leu Asp Ala Leu 115 120 125 Leu Ala Asp Glu Glu Arg Cys Leu Ser Cys Ile Leu Ala Gln Gln Pro 130 135 140 Asp Arg Leu Arg Asp Glu Glu Leu Ala Glu Leu Glu Asp Ala Leu Arg 145 150 155 160 Asn Leu Lys Cys Gly Ser Gly Ala Arg Gly Gly Asp Gly Glu Val Ala 165 170 175 Ser Ala Pro Leu Gln Pro Pro Val Pro Ser Leu Ser Glu Val Lys Pro 180 185 190 Pro Pro Pro Pro Pro Pro Ala Gln Thr Phe Leu Phe Gln Gly Gln Pro 195 200 205 Val Val Asn Arg Pro Leu Ser Leu Lys Asp Gln Gln Thr Phe Ala Arg 210 215 220 Ser Val Gly Leu Lys Trp Arg Lys Val Gly Arg Ser Leu Gln Arg Gly 225 230 235 240 Cys Arg Ala Leu Arg Asp Pro Ala Leu Asp Ser Leu Ala Tyr Glu Tyr 245 250 255 Glu Arg Glu Gly Leu Tyr Glu Gln Ala Phe Gln Leu Leu Arg Arg Phe 260 265 270 Val Gln Ala Glu Gly Arg Arg Ala Thr Leu Gln Arg Leu Val Glu Ala 275 280 285 Leu Glu Glu Asn Glu Leu Thr Ser Leu Ala Glu Asp Leu Leu Gly Leu 290 295 300 Thr Asp Pro Asn Gly Gly Leu Ala 305 310 <210> 19 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapien <220> <223> Amino acid sequence identified using molecular biology techniques. <400> 19 Met Ala Arg Ala Thr Leu Ser Ala Ala Pro Ser Asn Pro Arg Leu Leu 1 5 10 15 Arg Val Ala Leu Leu Leu Leu Leu Leu Val Ala Ala Ser Arg Arg Ala 20 25 30 Ala Gly Ala Pro Leu Ala Thr Glu Leu Arg Cys Gln Cys Leu Gln Thr 35 40 45 Leu Gln Gly Ile His Leu Lys Asn Ile Gln Ser Val Lys Val Lys Ser 50 55 60 Pro Gly Pro His Cys Ala Gln Thr Glu Val Ile Ala Thr Leu Lys Asn 65 70 75 80 Gly Gln Lys Ala Cys Leu Asn Pro Ala Ser Pro Met Val Lys Lys Ile 85 90 95 Ile Glu Lys Met Leu Lys Asn Gly Lys Ser Asn 100 105 <210> 20 <211> 114 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 20 Met Ser Leu Leu Ser Ser Arg Ala Ala Arg Val Pro Gly Pro Ser Ser 1 5 10 15 Ser Leu Cys Ala Leu Leu Val Leu Leu Leu Leu Leu Thr Gln Pro Gly 20 25 30 Pro Ile Ala Ser Ala Gly Pro Ala Ala Ala Val Leu Arg Glu Leu Arg 35 40 45 Cys Val Cys Leu Gln Thr Thr Gln Gly Val His Pro Lys Met Ile Ser 50 55 60 Asn Leu Gln Val Phe Ala Ile Gly Pro Gln Cys Ser Lys Val Glu Val 65 70 75 80 Val Ala Ser Leu Lys Asn Gly Lys Glu Ile Cys Leu Asp Pro Glu Ala 85 90 95 Pro Phe Leu Lys Lys Val Ile Gln Lys Ile Leu Asp Gly Gly Asn Lys 100 105 110 Glu Asn <210> 21 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 21 Met Ala Arg Ala Ala Leu Ser Ala Ala Pro Ser Asn Pro Arg Leu Leu 1 5 10 15 Arg Val Ala Leu Leu Leu Leu Leu Leu Val Ala Ala Gly Arg Arg Ala 20 25 30 Ala Gly Ala Ser Val Ala Thr Glu Leu Arg Cys Gln Cys Leu Gln Thr 35 40 45 Leu Gln Gly Ile His Pro Lys Asn Ile Gln Ser Val Asn Val Lys Ser 50 55 60 Pro Gly Pro His Cys Ala Gln Thr Glu Val Ile Ala Thr Leu Lys Asn 65 70 75 80 Gly Arg Lys Ala Cys Leu Asn Pro Ala Ser Pro Ile Val Lys Lys Ile 85 90 95 Ile Glu Lys Met Leu Asn Ser Asp Lys Ser Asn 100 105 <210> 22 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 22 Met Ala His Ala Thr Leu Ser Ala Ala Pro Ser Asn Pro Arg Leu Leu 1 5 10 15 Arg Val Ala Leu Leu Leu Leu Leu Leu Val Ala Ala Ser Arg Arg Ala 20 25 30 Ala Gly Ala Ser Val Val Thr Glu Leu Arg Cys Gln Cys Leu Gln Thr 35 40 45 Leu Gln Gly Ile His Leu Lys Asn Ile Gln Ser Val Asn Val Arg Ser 50 55 60 Pro Gly Pro His Cys Ala Gln Thr Glu Val Ile Ala Thr Leu Lys Asn 65 70 75 80 Gly Lys Lys Ala Cys Leu Asn Pro Ala Ser Pro Met Val Gln Lys Ile 85 90 95 Ile Glu Lys Ile Leu Asn Lys Gly Ser Thr Asn 100 105

Claims

카모스타트 메실레이트 및 단일 가변 도메인을 포함하는 조성물.
제1항에 있어서, 제약 조성물인 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 경구로 투여되는 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 단일 가변 도메인이 항-표적 단일 가변 도메인이며, 여기서 표적은 TNFα, IL-23, LAG-3, IL-6, IL-13, IL-18, TSLP, CD3, 상기 중 어느 하나의 수용체, 또는 ELR 수용체인 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 단일 가변 도메인이 TNFα, IL-23, LAG-3, IL-6, IL-13, IL-18, TSLP 또는 CD3을 중화시키는 것인 조성물.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 단일 가변 도메인이 약 66℃ 이상의 전이 중간점 (Tm)을 갖는 것인 조성물.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 단일 가변 도메인 대 카모스타트 메실레이트 비가 약 1:0.1, 1:1, 1:10, 1:25, 1:50 또는 1:100인 조성물.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 장용 코팅된 조성물.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 의약으로서 사용하기 위한 조성물.
의약의 제조를 위한, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 조성물의 용도.
제9항 또는 제10항에 있어서, 의약이 위장 병태를 치료하기 위한 것인, 조성물 또는 용도.
제11항에 있어서, 위장 병태가 크론병, 궤양성 결장염을 비롯한 결장염, 복강 질환, 베체트 증후군 및 경구 점막염인 조성물 또는 용도.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 위장 병태의 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 위장 병태를 치료하는 방법.
단일 가변 도메인을 카모스타트 메실레이트를 포함하는 조성물로 제제화한 후 상기 조성물을 프로테아제-풍부 용액에 노출시키는 것을 포함하는, 프로테아제-풍부 용액 중에서 단일 가변 도메인을 안정화시키는 방법.
제14항에 있어서, 단일 가변 도메인 대 카모스타트 메실레이트 비가 약 1:0.1, 1:1, 1:10, 1:25, 1:50 또는 1:100인 방법.
제14항 또는 제15항에 있어서, 프로테아제-풍부 용액이 공복상태 인공 장액인 방법.
제14항 또는 제15항에 있어서, 프로테아제-풍부 용액이 트립신, 키모트립신 및/또는 판크레아틴을 포함하는 용액인 방법.