KR20150038593A

KR20150038593A - 교모세포종의 치료를 위한 조합 요법

Info

Publication number: KR20150038593A
Application number: KR20157005660A
Authority: KR
Inventors: 아샤 다스; 안나 마리아 아바호 기하로; 라우렌 아브레이; 조셉 가르시아; 마갈리 힐톤; 야닉 켈로귄; 니콜라 무어
Original assignee: 제넨테크, 인크.
Priority date: 2012-08-07
Filing date: 2013-08-06
Publication date: 2015-04-08
Also published as: CA2880767A1; JP2019147812A; MX2015001627A; SG11201500903XA; MX360189B; CN104507498A; IL263661A; ZA201500811B; KR20180011356A; AU2013299724A1; HK1204993A1; AU2016244262A1; JP2021138704A; US20150148585A1; AU2018253461A1; JP6464085B2; US20200086139A1; AU2016244262B2; IL237028B; RU2015104001A

Abstract

본 발명은 교모세포종으로 진단된 환자에게 유효량의 항-VEGF 항체 및 화학요법제를 포함하는 요법을 투여하는 것을 포함하는, 상기 환자를 치료하는 방법에 관한 것이다.

Description

교모세포종의 치료를 위한 조합 요법{COMBINATION THERAPY FOR THE TREATMENT OF GLIOBLASTOMA}

관련 출원에 대한 상호 참조

본원은 2012년 8월 7일에 출원된 미국 가출원 번호 61/680672, 2012년 10월 16일에 출원된 미국 가출원 번호 61/714438, 및 2013년 2월 5일에 출원된 미국 가출원 번호 61/760763으로부터의 우선권을 주장하고, 그의 각각은 모든 목적을 위해 전문이 본원에 참조로 포함된다.

발명의 분야

본 발명은 일반적으로 항-VEGF 항체를 사용한 질환 및 병리학적 상태의 치료에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 교모세포종에 감수성이거나 또는 진단된 인간 환자를 항-VEGF 항체를 1종 이상의 추가의 항종양 치료제와 조합하여 사용하여 치료하는 것에 관한 것이다.

신경교종은 전체 악성 뇌 및 CNS 종양의 81%를 차지한다. 교모세포종 - 세계 보건 기구 (WHO) 등급 IV 성상세포종 -은 악성 신경교종의 60% 내지 70%를 차지하고, 신경교종의 가장 공격적인 하위-유형으로 남아 있다. 이는 성인 (진단시 연령 중앙값: 64세)에서 대부분 발생하고, 그의 발생률은 미국에서 3.05/100'000이고, 유럽에서 2/100'000 미만인 것으로 추정된다. 1년 및 5년 전체 생존은 각각 29% 및 3%로, 교모세포종의 예후는 특히 불량한 것으로 남아 있다 (미국의 중앙 뇌 종양 등록소 (2005),(CBTRUS; http://www.cbtrus.org)).

교모세포종의 치료에 약간의 진전이 있었지만, 이 질환은 제한된 치료 옵션으로 고도의 충족되지 않은 의료 수요에 직면하고 있다. 특히, 전-혈관신생 혈관 내피 성장 인자 (VEGF)에 대해 표적화된 모노클로날 항체인 베바시주맙 (아바스틴(Avastin)®)은 유의한 치료 잠재력을 갖는다.

발명의 개요

본 발명은 교모세포종으로 신규 진단된 환자를 비롯한 교모세포종으로 진단된 환자를 치료하기 위한 방법 및 키트를 제공한다.

본 발명의 한 실시양태는 교모세포종으로 진단된 환자에게 유효량의 항-VEGF 항체, 유효량의 화학요법제, 및 방사선요법을 포함하는 요법을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 치료는 항-VEGF 항체 없이 상기 화학요법제를 받은 교모세포종 환자와 비교하여 상기 환자의 무진행 생존 기간 중앙값을 연장하는 것을 포함하는, 상기 환자를 치료하는 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, 환자는 WHO 수행 상태 ≤2를 갖는다. 일부 실시양태에서, 화학요법제는 테모졸로미드이다. 일부 실시양태에서, 테모졸로미드의 유효량은 경구로 mg/m² 투여된다. 일부 실시양태에서, 테모졸로미드의 유효량은 경구로 200 mg/m² 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-VEGF 항체는 A4.6.1 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항-VEGF 항체는 베바시주맙이다. 일부 실시양태에서, 항-VEGF 항체는 가변 중쇄 (VH) 및 가변 경쇄 (VL)를 포함하며, 여기서 상기 VH는 서열 2의 아미노산 서열을 갖고, 상기 VL은 서열 1의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 상기 항-VEGF 항체의 유효량은 정맥내로 매 2주마다 10 mg/kg이고, 예를 들어 처음에 정맥내로 90분에 걸쳐 투여하고, 후속적인 주입을 60분에 걸쳐 이어서, 30분에 걸쳐 행하는 것이다. 일부 실시양태에서, 상기 항-VEGF 항체의 유효량은 정맥내로 매 3주마다 15 mg/kg, 예를 들어 처음에 정맥내로 90분, 후속적인 주입을 60분에 이어서, 30분에 걸쳐 투여하는 것이다. 상기 기재된 방법에서, 제1 사이클에서 항-VEGF 항체를 첫번째로 상기 환자에게 투여한 다음, 상기 항-VEGF 항체의 후속적인 투여는 상기 화학요법제 이전에 또는 이후에 한다. 또 다른 실시양태에서, 항-VEGF 항체는 상기 화학요법제 및 방사선요법과 병행하여 투여된다. 일부 실시양태에서, 환자에 대한 스테로이드의 투여는 중지된다.

교모세포종으로 진단된 환자를 치료하기 위한 상기 기재된 방법에서, 항-VEGF 항체 없이 상기 화학요법제를 받은 교모세포종 환자와 비교하여 무진행 생존 기간 중앙값이 0.64와 동등한 위험 비 (HR)로 약 4.4개월만큼 연장된다. 또 다른 실시양태에서, 항-VEGF 항체 없이 상기 화학요법제를 받은 교모세포종 환자와 비교하여 무진행 생존 기간 중앙값이 0.64와 동등한 위험 비 (HR)로 적어도 4개월 또는 그 초과만큼 연장된다. 또 다른 실시양태에서, 무진행 생존 기간 중앙값은 항-VEGF 항체 없이 상기 화학요법제를 받은 교모세포종 환자와 비교하여 약 0.55 내지 약 0.74의 위험 비 (HR)로 적어도 4개월 또는 그 초과만큼 연장된다. 또 다른 실시양태에서, 무진행 생존 기간 중앙값은 항-VEGF 항체 없이 상기 화학요법제를 받은 교모세포종 환자와 비교하여 약 0.55 내지 약 0.74의 위험 비 (HR)로 약 4.4개월만큼 연장된다. 상기 기재된 방법의 또 다른 실시양태에서, 환자는 65세 미만이다. 상기 기재된 방법의 또 다른 실시양태에서, 환자는 65세 이상이다. 상기 기재된 방법의 한 실시양태에서, 환자는 약 4주의 치료없는 간격 (TFI)을 갖는다.

본 발명의 또 다른 실시양태는 에피토프 A4.6.1에 본질적으로 결합하는 항-VEGF 항체, 화학요법제 및 환자에게 유효량의 항-VEGF 항체 및 화학요법제를 투여하는 것을 포함하는 교모세포종으로 진단된 환자를 치료하기 위한 지침서를 갖는 포장 삽입물 또는 라벨을 포함하며, 여기서 상기 치료는 항-VEGF 항체 없이 상기 화학요법제를 받은 교모세포종 환자와 비교하여 상기 환자의 무진행 생존 기간 중앙값을 연장하는 것인 키트를 제공한다. 상기 기재된 키트의 또 다른 실시양태에서, 항-VEGF 항체는 베바시주맙이고, 상기 화학요법제는 테모졸로미드이다.

도 1은 실시예 1에 보다 상세히 개시되는 2개의 치료군 III상 연구 설계 치료 순서를 나타낸 것이다. 연구 치료는 교모세포종의 용적축소 수술 또는 생검 후 4 내지 7주째에 시작하였고, 3가지 상이한 단계를 포함하였다: 10 mg/kg 베바시주맙 또는 위약을 테모졸로미드 및 방사선요법과 조합하여 매 2주마다 투여하는 병행 치료 단계 후, 28일의 치료 중단, 10 mg/kg 베바시주맙 또는 위약을 테모졸로미드와 조합하여 매 2주마다 투여하는 유지 단계, 및 15 mg/kg 베바시주맙 또는 위약을 질환 진행까지 매 3주마다 투여하는 단독요법 단계.
도 2는 III상 아바글리오(AVAglio) 시험으로부터의 PFS에 대한 카플란 마이어(Kaplan Meier) 곡선을 나타낸 것이다.

정의

"항혈관신생제" 또는 "혈관신생 억제제"는 혈관신생, 혈관생성 또는 바람직하지 않은 혈관 투과성을 직접 또는 간접적으로 억제하는 소분자량 물질, 폴리뉴클레오티드, 폴리펩티드, 단리된 단백질, 재조합 단백질, 항체 또는 그의 접합체 또는 융합 단백질을 지칭한다. 항혈관신생제는 혈관신생 인자 또는 그의 수용체에 결합하여 이것의 혈관신생 활성을 차단하는 작용제를 포함한다는 것을 이해해야 한다. 예를 들어, 항혈관신생제는 본 명세서 전반에 걸쳐 정의된 바와 같거나 또는 관련 기술분야에 공지된 혈관신생제에 대한 항체 또는 다른 길항제, 예를 들어 비제한적으로 VEGF-A 또는 VEGF-A 수용체 (예를 들어, KDR 수용체 또는 Flt-1 수용체)에 대한 항체, VEGF-트랩, 항-PDGFR 억제제, 예컨대 글리벡(Gleevec)™ (이마티닙 메실레이트)이다. 항혈관신생제는 또한 천연 혈관신생 억제제, 예를 들어 안지오스타틴, 엔도스타틴 등을 포함한다. 예를 들어, 문헌 [Klagsbrun and D'Amore, Annu. Rev. Physiol., 53:217-39 (1991); Streit and Detmar, Oncogene, 22:3172-3179 (2003)] (예를 들어, 악성 흑색종에서의 항혈관신생 요법을 열거한 표 3); 문헌 [Ferrara & Alitalo, Nature Medicine 5:1359-1364 (1999); Tonini et al., Oncogene, 22:6549-6556 (2003)] (예를 들어, 공지된 항혈관신생 인자를 열거한 표 2); 및 문헌 [Sato. Int. J. Clin. Oncol., 8:200-206 (2003)] (예를 들어, 임상 시험에 사용된 항혈관신생제를 열거한 표 1)을 참조한다.

본원에서 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되고, 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체), 및 이것이 목적하는 항원-결합 활성을 나타내는 한 항체 단편을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다양한 항체 구조를 포함한다.

용어 "복수" 또는 복부 복수는 복부내에 축적된 초과량의 유체를 지칭한다. 복수액은 암성 성장으로부터 분리된 자유-부유 암 세포를 종종 함유한다. 복부 복수의 제시는 전형적으로 복부 복수를 갖지 않은 상기 환자와 비교하여 더 증후성인 질환 및 더 불량한 결과를 나타낸다.

용어 "베바시주맙"은 "rhuMAb VEGF" 또는 "아바스틴®"으로서도 공지되어 있는 문헌 [Presta et al. (1997) Cancer Res. 57:4593-4599]에 따라 생산된 재조합 인간화 항-VEGF 모노클로날 항체를 지칭한다. 이것은 그의 수용체에 대한 인간 VEGF의 결합을 차단하는 뮤린 항-인간 VEGF 모노클로날 항체 A.4.6.1로부터 돌연변이된 인간 IgG1 프레임워크 영역 및 항원-결합 상보성-결정 영역을 포함한다. 대부분의 프레임워크 영역을 포함하는 베바시주맙의 아미노산 서열의 대략 93%는 인간 IgG1로부터 유래하고, 약 7%의 서열은 뮤린 항체 A4.6.1로부터 유래한다. 베바시주맙은 하이브리도마 ATCC HB 10709에 의해 생산된 모노클로날 항-VEGF 항체 A4.6.1과 동일한 에피토프에 결합한다.

용어 "암" 및 "암성"은 전형적으로 비조절된 세포 성장을 특징으로 하는 포유동물에서의 생리학적 상태를 지칭하거나 또는 기재한다. 상기 정의는 양성 및 악성 암 뿐만 아니라 휴면 종양 또는 미세전이를 포함한다. 암의 예는 암종, 림프종, 모세포종, 육종 및 백혈병을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 이러한 암의 보다 특정한 예는 교모세포종 (GBM), 예컨대 예를 들어 전신경 GBM, 신경 GBM, 전형적인 GBM 및 중간엽 GBM을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 다른 암은, 예를 들어 유방암, 편평세포암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암, 폐의 선암종 및 폐의 편평세포 암종 포함), 복막암, 간세포성암, 위암 또는 복부암 (위장관계암 포함), 췌장암, 난소암, 자궁경부암, 간암, 방광암, 간세포암, 결장암, 결장직장암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 타액선 암종, 신장암 또는 신암, 간암, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 간 암종 및 각종 유형의 두경부암, 뿐만 아니라 B-세포 림프종 (저등급/여포성 비-호지킨 림프종 (NHL); 소림프구성 (SL) NHL; 중등급/여포성 NHL; 중등급 미만성 NHL; 고등급 면역모세포성 NHL; 고등급 림프모구성 NHL; 고등급 비-분할 소세포 NHL; 거대 종양 NHL; 외투 세포 림프종; AIDS-관련 림프종; 및 발덴스트롬 마크로글로불린혈증 포함); 만성 림프구성 백혈병 (CLL); 급성 림프모구성 백혈병 (ALL); 모발상 세포 백혈병; 만성 골수모구성 백혈병; 및 이식 후 림프증식성 장애 (PTLD) 뿐만 아니라 모반증에 연관된 비정상적 혈관 증식, 부종 (예컨대 뇌 종양에 연관된 부종), 및 메이그스 증후군을 포함한다.

"화학요법제"는 암의 치료에 유용한 화학적 화합물이다. 화학요법제의 예는 암의 치료에 유용한 화학적 화합물을 포함한다. 화학요법제의 예는 알킬화제, 예컨대 예를 들어 테모졸로미드, 알킬화제 다카르바진의 이미다조테트라진 유도체를 포함한다. 화학요법제 작용제의 추가의 예는, 예를 들어 파클리탁셀 또는 토포테칸 또는 PEG화 리포솜 독소루비신 (PLD)을 포함한다. 화학요법제의 다른 예는 알킬화제, 예컨대 티오테파 및 시톡산(CYTOXAN)® 시클로포스파미드; 알킬 술포네이트, 예컨대 부술판, 임프로술판 및 피포술판; 아지리딘, 예컨대 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파 및 우레도파; 에틸렌이민 및 메틸라멜라민, 예컨대 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드 및 트리메틸올로멜라민; 아세토게닌 (특별히 불라타신 및 불라타시논); 캄프토테신; 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065 (그의 아도젤레신, 카르젤레신 및 비젤레신 합성 유사체 포함); 크립토피신 (특히 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴; 두오카르마이신 (합성 유사체, KW-2189 및 CB1-TM1 포함); 엘레우테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕티인; 스폰지스타틴; 질소 머스타드, 예컨대 클로람부실, 클로르나파진, 콜로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥시드 히드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비킨, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드; 니트로스우레아, 예컨대 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 및 라니무스틴; 항생제, 예컨대 에네디인 항생제 (예를 들어, 칼리케아미신, 특별히 칼리케아미신 감마1I 및 칼리케아미신 오메가I1 (예를 들어, 문헌 [Agnew, Chem. Intl. Ed. Engl., 33: 183-186 (1994)] 참조); 디네미신, 예컨대 디네미신 A; 비스포스포네이트, 예컨대 클로드로네이트; 에스페라미신; 뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련 색소단백질 에네디인 항생 발색단), 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 아드리아마이신(ADRIAMYCIN)® 독소루비신 (모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신 포함), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신, 예컨대 미토마이신 C, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항대사물, 예컨대 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실 (5-FU); 폴산 유사체, 예컨대 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체, 예컨대 플루다라빈, 6-메르캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체, 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘; 안드로겐, 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤; 항-부신, 예컨대 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄; 폴산 보충제, 예컨대 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르미틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 질산갈륨; 히드록시우레아; 렌티난; 로니다이닌; 메이탄시노이드, 예컨대 메이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미톡산트론; 모피단몰; 니트라에린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 포도필린산; 2-에틸히드라지드; 프로카르바진; PSK® 폴리사카라이드 복합체 (JHS 내츄럴 프로덕츠(JHS Natural Products), 오레곤주 유진); 라족산; 리족신; 시조푸란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센 (특별히 T-2 독소, 베라큐린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드 ("Ara-C"); 시클로포스파미드; 티오테파; 탁소이드, 예를 들어, 탁솔(TAXOL)® 파클리탁셀 (브리스톨-마이어스 스큅 온콜로지(Bristol-Myers Squibb Oncology), 뉴저지주 프린스턴), 파클리탁셀의 아브락산(ABRAXANE)® 크레모포르-무함유, 알부민-조작된 나노입자 제제 (아메리칸 파마슈티칼 파트너스(American Pharmaceutical Partners), 일리노이주 샤움버그), 및 탁소테레(TAXOTERE)® 도세탁셀 (롱-프랑 로러(Rhone-Poulenc Rorer), 프랑스 안토니); 클로란부실; 겜자르(GEMZAR)® 겜시타빈; 6-티오구아닌; 메르캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 유사체, 예컨대 시스플라틴, 옥살리플라틴 및 카르보플라틴; 빈블라스틴; 백금; 에토포시드 (VP-16); 이포스파미드; 미톡산트론; 빈크리스틴; 나벨빈(NAVELBINE)® 비노렐빈; 노반트론; 테니포시드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 젤로다; 이반드로네이트; 이리노테칸 (캄프토사르, CPT-11) (이리노테칸과 5-FU 및 류코보린의 치료 요법 포함); 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴 (DMFO); 레티노이드, 예컨대 레티노산; 카페시타빈; 콤브레타스타틴; 류코보린 (LV); 옥살리플라틴, 예컨대 옥살리플라틴 치료 요법 (FOLFOX); 라파티닙 (타이커브(Tykerb)®); 세포 증식을 감소시키는 PKC-알파, Raf, H-Ras, EGFR (예를 들어, 에를로티닙 (타르세바(Tarceva)®)) 및 VEGF-A의 억제제 및 상기 중 임의의 제약상 허용되는 염, 산 또는 유도체를 포함한다.

용어 "병행하여"는 2종 이상의 치료제의 투여가 적어도 일부의 투여 시간이 중첩되는 경우를 지칭하도록 본원에서 사용된다. 따라서, 병행 투여는 하나 이상의 작용제(들)의 투여를 하나 이상의 다른 작용제(들)의 투여를 중단한 후에 계속하는 경우의 투여 요법을 포함한다.

용어 "유효량"은 포유동물에서 질환 또는 장애를 치료하는데 유효한 약물의 양을 지칭한다. 암의 경우에, 치료 유효량의 약물은 암 세포의 수를 감소시키고/거나; 종양 크기를 감소시키고/거나; 말초 기관으로의 암 세포 침윤을 억제하고/거나 (즉, 어느 정도 늦추고, 바람직하게는 정지시키는 것); 종양 전이를 억제하고/거나 (즉, 어느 정도 늦추고, 바람직하게는 정지시키는 것); 종양 성장을 어느 정도 억제하고/거나 장애에 연관된 하나 이상의 증상을 어느 정도 경감시킬 수 있다. 약물은, 존재하는 암 세포의 성장을 방지하고/거나 존재하는 암 세포를 사멸시킬 수 있는 정도까지 세포증식 억제성 및/또는 세포독성일 수 있다. 암 요법의 경우에, 생체내 효능은, 예를 들어 생존 기간, 무진행 생존 (PFS)의 기간, 반응률 (RR), 반응의 지속기간, 및/또는 삶의 질을 평가함으로써 측정될 수 있다.

"에피토프 A4.6.1"은 항-VEGF 항체 베바시주맙 (아바스틴®)에 의해 인식되는 에피토프를 지칭한다 (문헌 [Muller Y et al., Structure 15 September 1998, 6:1153-1167] 참조). 본 발명의 특정 실시양태에서, 항-VEGF 항체는 하이브리도마 ATCC HB 10709에 의해 생산된 모노클로날 항-VEGF 항체 A4.6.1과 동일한 에피토프에 결합하는 모노클로날 항체; 문헌 [Presta et al. (1997) Cancer Res. 57:4593-4599]에 따라 생산되는 재조합 인간화 항-VEGF 모노클로날 항체를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.

"인간 항체"는 인간 또는 인간 세포에 의해 생산되는 항체의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 보유하거나, 또는 인간 항체 레퍼토리 또는 다른 인간 항체-코딩 서열을 이용하여 비인간 공급원으로부터 유래된 항체이다. 이러한 인간 항체의 정의는 비-인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화 항체를 특히 배제한다.

"인간화" 항체는 비인간 HVR로부터의 아미노산 잔기 및 인간 FR로부터의 아미노산 잔기를 포함하는 키메라 항체를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 인간화 항체는 실질적으로 적어도 1개, 전형적으로 2개의 가변 도메인을 모두 포함할 것이며, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 HVR (예를 들어, CDR)은 비인간 항체의 것에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR은 인간 항체의 것에 상응한다. 인간화 항체는 임의로 인간 항체로부터 유래된 항체 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 항체, 예를 들어 비인간 항체의 "인간화 형태"는 인간화를 거친 항체를 지칭한다.

본원에 사용된 바와 같은 용어 "초가변 영역" 또는 "HVR"은 서열이 초가변성이고/거나 구조적으로 한정된 루프 ("초가변 루프")를 형성하는 항체 가변 도메인의 각각의 영역을 지칭한다. 일반적으로, 천연 4-쇄 항체는 6개의 HVR; VH 내의 3개 (H1, H2, H3) 및 VL 내의 3개 (L1, L2, L3)를 포함한다. HVR은 일반적으로 초가변 루프로부터의 및/또는 "상보성 결정 영역" (CDR)으로부터의 아미노산 잔기를 포함하며, 후자는 서열 가변성이 가장 높고/거나 항원 인식과 관련된다. 예시적인 초가변 루프는 아미노산 잔기 26-32 (L1), 50-52 (L2), 91-96 (L3), 26-32 (H1), 53-55 (H2) 및 96-101 (H3)에서 발생한다. (Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). 예시적인 CDR (CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3)은 L1의 아미노산 잔기 24-34, L2의 50-56, L3의 89-97, H1의 31-35B, H2의 50-65 및 H3의 95-102에서 발생한다 (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)). VH 내의 CDR1을 제외하고, CDR은 일반적으로 초가변 루프를 형성하는 아미노산 잔기를 포함한다. CDR은 또한 항원에 접촉하는 잔기인 "특이성 결정 잔기" 또는 "SDR"을 포함한다. SDR은 단축-CDR, 또는 a-CDR로 불리는 CDR의 영역 내에 함유된다. 예시적인 a-CDR (a-CDR-L1, a-CDR-L2, a-CDR-L3, a-CDR-H1, a-CDR-H2 및 a-CDR-H3)은 L1의 아미노산 잔기 31-34, L2의 50-55, L3의 89-96, H1의 31-35B, H2의 50-58 및 H3의 95-102에서 발생한다 (문헌 [Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)] 참조). 달리 나타내지 않는 한, HVR 잔기 및 가변 도메인에서의 다른 잔기 (예를 들어, FR 잔기)는 본원에서 상기 문헌 [Kabat et al.]에 따라 넘버링된다.

"개체" 또는 "대상체"는 포유동물이다. 포유동물은 가축 (예를 들어, 소, 양, 고양이, 개 및 말), 영장류 (예를 들어, 인간 및 비-인간 영장류, 예컨대 원숭이), 토끼 및 설치류 (예를 들어, 마우스 및 래트)를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 특정 실시양태에서, 개체 또는 대상체는 인간이다.

본 발명의 방법에 대해, 환자에게 "지시하는"이라는 용어는 적용가능한 요법, 의약, 치료, 치료 요법 등에 관한 지시를 임의의 수단에 의해, 그러나 바람직하게는 서면, 예컨대 포장 삽입물 또는 다른 서면 홍보 자료의 형태로 제공하는 것을 의미한다.

용어 "정맥내 주입"은 약물을 대략 5분 초과, 바람직하게 대략 30분 내지 90분의 기간에 걸쳐 동물 또는 인간 대상체의 정맥 내로 도입하는 것을 지칭하지만, 본 발명에 따르면, 정맥내 주입은 대안적으로 10시간 이하 동안 투여하기도 한다.

용어 "정맥내 볼루스" 또는 "정맥내 푸시(push)"는 약물을 대략 15분 이하 내에, 바람직하게 5분 이하 내에 체내에 투여하는, 동물 또는 인간의 정맥 내로 약물을 투여하는 것을 지칭한다.

"단리된" 항체는 그의 자연 환경의 성분에서 분리된 것이다. 일부 실시양태에서, 항체는, 예를 들어 전기영동 (예를 들어, SDS-PAGE, 등전 포커싱 (IEF), 모세관 전기영동) 또는 크로마토그래피 (예를 들어, 이온 교환 또는 역상 HPLC)에 의해 결정된 바와 같이 95% 또는 99% 초과의 순도로 정제한다. 항체 순도의 평가 방법의 검토를 위해, 예를 들어 문헌 [Flatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87 (2007)]을 참조한다.

본원에서의 "유지" 용량은 치료 기간에 걸쳐 또는 그 후에 환자에게 투여되는 치료제의 1회 이상의 용량을 지칭한다. 통상적으로, 유지 용량은 치료 시간 간격을 두고 투여되며, 예컨대 대략 매주, 대략 2주마다, 대략 3주마다, 또는 대략 4주마다 투여된다.

"유지 요법"은 질환 재발 또는 진행 가능성을 저하시키기 위해 제공되는 치료 요법을 의미한다. 유지 요법은 대상체의 수명까지의 연장된 기간을 포함하는 임의의 길이의 시간 동안 제공될 수 있다. 유지 요법은 초기 요법 후에 제공될 수 있거나, 또는 초기 또는 추가의 요법과 함께 제공될 수 있다. 유지 요법에 사용되는 투여량은 상이할 수 있고, 다른 유형의 요법에 사용되는 투여량과 비교할 때 감소된 투여량을 포함할 수 있다. 또한, 본원에서 "유지"를 참조한다.

용어 "마케팅"은 제품 (예를 들어, 약물)의 홍보, 판매 또는 유통을 설명하기 위해 본원에 사용된다. 마케팅은 구체적으로 제품을 상품화할 목적을 갖는 포장, 광고, 임의의 비지니스 활동을 포함한다.

"전이" 또는 "전이성"은 암이 그의 원발성 부위로부터 신체 내 다른 위치로 확산되는 것을 의미한다. 암 세포는 원발성 종양으로부터 분리되어, 림프 및 혈관 내로 침투하고, 혈류를 통해 순환하여 신체 내의 다른 정상 조직의 원위 병소에서 성장 (전이)할 수 있다. 전이는 국부 또는 원위일 수 있다. 전이는 원발성 종양으로부터의 종양 세포 분리가 우발적으로 발생하고 혈류를 통해 이동하여 원위 부위에서 멈추는 순차적 과정이다. 새로운 부위에서 상기 세포는 혈액 공급을 확립시키고 성장하여 생명을 위협하는 종괴를 형성할 수 있다. 종양 세포 내에서의 자극성 및 억제성 분자 경로 둘 다가 이러한 거동을 조절하고, 종양 세포와 원위 부위의 숙주 세포 사이의 상호작용이 또한 중요하다.

"단독요법"은 치료 기간 동안 암 또는 종양을 치료하기 위해 단지 단일 치료제 만을 포함하는 치료 요법을 의미한다. VEGF-특이적 길항제를 사용한 단독요법은 VEGF-특이적 길항제가 치료 기간 동안 추가의 항암 요법 없이 투여되는 것을 의미한다.

본원에 사용된 바와 같은 용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 균질한 항체 집단으로부터 수득된 항체를 지칭하고, 즉 이러한 집단에 포함되는 개별 항체는 일반적으로 소량으로 존재할 수도 있는, 예를 들어 자연 발생 돌연변이를 함유하거나 또는 모노클로날 항체 제제의 생산 동안 생성되는 가능한 변이체 항체를 제외하고는 동일하고/하거나, 동일한 에피토프에 결합한다. 전형적으로 상이한 결정자 (에피토프)에 대해 지시된 상이한 항체를 포함하는 폴리클로날 항체 제제와는 반대로, 모노클로날 항체 제제의 각각의 모노클로날 항체는 항원 상의 단일 결정자에 대해 지시된다. 따라서, 수식어 "모노클로날"은 항체의 실질적으로 균질한 집단으로부터 얻은 항체의 특성을 나타내고, 임의의 특정한 방법에 의한 항체 생산을 필요로 하는 것으로서 간주되지 않아야 한다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용되는 모노클로날 항체는 하이브리도마 방법, 재조합 DNA 방법, 파지-디스플레이 방법, 및 인간 이뮤노글로불린 유전자좌의 전부 또는 일부를 함유하는 트랜스제닉 동물을 이용하는 방법을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다양한 기술에 의해 제조할 수 있고, 이러한 방법 및 모노클로날 항체를 제조하기 위한 다른 예시적인 방법이 본원에 기재된다.

용어 "제약 제제"는 그 안에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성이 효과적이도록 하는 형태로 존재하며, 제제를 투여할 대상체에게 허용되지 않는 독성인 추가의 성분을 함유하지 않는 제제를 지칭한다.

"제약상 허용되는 담체"는 대상체에게 비독성인, 활성 성분 이외의 다른 제약 제제 내의 성분을 지칭한다. 제약상 허용되는 담체는 완충제, 부형제, 안정화제 또는 보존제를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.

본 발명의 방법에 대해, 용어 "홍보하는"은 특정한 약물, 약물 조합물, 또는 치료 양식을 포장 삽입물 형태와 같은 서면을 비롯한 임의의 수단에 의해 제공하거나, 광고하거나, 판매하거나 또는 기재하는 것을 의미한다. 본원에서의 홍보는 적응증, 예컨대 유방암 치료를 위한 치료제, 예컨대 VEGF 길항제, 예를 들어 항-VEGF 항체 또는 화학요법제에 대한 홍보를 지칭하며, 이러한 홍보는 대상체 집단 내 통계적으로 유의한 치료 효능 및 허용되는 안전성에 연관된 것으로 입증되어야 미국 식품 의약품국 (FDA)의 승인을 받게 된다.

"무진행 생존 (PFS)"은 치료 (또는 무작위화) 시점으로부터 최초 질환 진행 또는 사망 시점까지의 시간을 지칭한다. 예를 들어, 대상체가 처치 개시 시점 또는 초기 진단 시점으로부터 암의 재발 없이, 예를 들어 규정된 기간의 시간, 예컨대 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 약 6개월, 약 7개월, 약 8개월, 약 9개월, 약 1년, 약 2년, 약 3년 등 동안 살아있는 시간이다. 본 발명의 한 측면에서, PFS는 문헌 [MacDonald et al., J Clin Oncol 1990;8:1277-80)]에 기재된 바와 같은 맥도널드(MacDonald) 반응 기준에 의해 평가될 수 있다.

대상체의 "집단"은 임상 시험에서와 같이, 또는 유방암 요법과 같은 특정한 적응증에 대한 FDA 승인 후에 종양학자에 의해 관찰되는 바와 같이 암을 앓는 일군의 대상체를 지칭한다.

"대상체"는 인간, 또는 비-인간 포유동물, 예컨대 소, 말, 개, 양, 또는 고양이를 포함하지만 이에 제한되지 않은 포유동물을 의미한다. 바람직하게는, 대상체는 인간이다. 환자도 본원에서의 대상체이다.

"생존"은 환자가 살아있는 상태를 지칭하며, 무진행 생존 (PFS) 및 전체 생존 (OS)을 포함한다. 생존은 카플란-마이어(Kaplan-Meier) 방법에 의해 추정할 수 있고, 생존에서의 임의의 차이는 계층화된 로그-순위 시험을 사용하여 전산화된다.

"전체 생존"은 대상체가 치료 개시 시점 또는 초기 진단 시점으로부터 규정된 기간의 시간, 예컨대 약 1년, 약 2년, 약 3년, 약 4년, 약 5년, 약 10년 등 동안 살아있는 상태를 지칭한다. 본 발명의 기초가 되는 연구에서 생존율 분석을 위해 사용된 사건은 임의의 원인으로 인한 사망이었다.

"전체 반응률" 또는 "객관적 반응률" (ORR) - 최소량의 시간 동안 암의 크기 (또는 혈액 암의 경우 암의 양)의 감소를 경험한 사람의 백분율이며, ORR은 완전한 및 부분 반응률의 합계이다.

"생존을 연장시키는 것" 또는 "생존 가능성을 증가시키는 것"은 치료받지 않은 대상체에 비해 (즉, VEGF 항체로 치료받지 않은 대상체에 비해), 또는 대조군 치료 프로토콜, 예컨대 교모세포종에 대한 표준 관리에 사용되는 것과 같은 화학요법제만을 이용한 치료, 예컨대 예를 들어 방사선요법을 이용하거나 또는 이용하지 않고 테모졸로미드만 이용한 치료에 비해 치료받은 환자에서 PFS 및/또는 OS를 증가시키는 것을 의미한다. 생존은 치료 개시 또는 초기 진단 후에 적어도 약 1개월, 약 2개월, 약 4개월, 약 6개월, 약 9개월, 또는 적어도 약 1년, 또는 적어도 약 2년, 또는 적어도 약 3년, 또는 적어도 약 4년, 또는 적어도 약 5년, 또는 적어도 약 10년 등 동안 모니터링된다.

위험 비 (HR)는 사건 발생률에 대한 통계적 정의이다. 본 발명의 목적상, 위험 비는 임의의 특정 시점에서 실험 치료군에서의 사건 확률을 대조군 치료군에서의 사건 확률로 나눈 것으로 정의된다. 무진행 생존 분석에서의 "위험 비"는 추적 기간 전반에 걸쳐 대조군과 비교하여 치료시의 사망 위험의 감소를 나타내는, 2개의 무진행 생존 곡선 사이의 차이에 관한 요약이다.

본원에 사용된 바와 같은 "치료" (및 "치료하다" 또는 "치료하는"과 같은 그의 문법적 변형)는 치료되는 개체의 자연적 과정을 변경시키려는 임상적 개입을 지칭하고, 임상 병리상태의 예방을 위해 또는 그 과정 동안 수행될 수 있다. 바람직한 치료 효과는 질환의 발생 또는 재발 예방, 증상의 완화, 질환의 임의의 직접 또는 간접적인 병리학적 결과의 축소, 전이의 예방, 질환 질행 속도의 감소, 질환 상태의 개선 또는 호전, 및 완화 또는 개선된 예후를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체는 질환의 발생을 지연시키거나 또는 질환의 진행을 느리게 하기 위해 사용된다.

용어 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항체의 항원에 대한 결합에 관여하는 항체 중쇄 또는 경쇄의 도메인을 지칭한다. 천연 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 (각각 VH 및 VL)은 일반적으로 유사한 구조를 갖고, 각각의 도메인은 4개의 보존된 프레임워크 영역 (FR) 및 3개의 초가변 영역 (HVR)을 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007)]을 참조한다). 단일 VH 또는 VL 도메인은 항원-결합 특이성을 부여하기에 충분할 수 있다. 또한, 특정한 항원에 결합하는 항체는 각각 상보적 VL 또는 VH 도메인의 라이브러리를 스크리닝하기 위해 항원에 결합하는 항체로부터의 VH 또는 VL 도메인을 사용하여 단리할 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)]을 참조한다.

용어 "VEGF" 또는 "VEGF-A"는, 예를 들어 문헌 [Leung et al. Science, 246:1306 (1989), 및 Houck et al. Mol. Endocrin., 5:1806 (1991)]에 기재된 바와 같은 165-아미노산 인간 혈관 내피 세포 성장 인자 및 관련 121-, 145-, 189-, 및 206-아미노산 인간 혈관 내피 세포 성장 인자, 및 이와 함께 그의 자연 발생 대립유전자 및 프로세싱된 형태를 지칭하는데 사용된다. VEGF-A는 VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E, VEGF-F 및 PlGF를 비롯한 유전자 패밀리의 일부이다. VEGF-A는 주로 2종의 고친화도 수용체 티로신 키나제, VEGFR-1 (Flt-1) 및 VEGFR-2 (Flk-1/KDR)에 결합하며, 후자는 VEGF-A의 혈관 내피 세포 유사분열촉진 신호의 주요 전달자이다. 추가로, 뉴로필린-1이 헤파린-결합 VEGF-A 이소형에 대한 수용체로서 확인되었고, 이는 혈관 발생시에 소정의 역할을 할 수 있다. 용어 "VEGF" 또는 "VEGF-A"는 또한, 비-인간 종, 예컨대 마우스, 래트 또는 영장류로부터의 VEGF를 지칭한다. 때때로, 특정한 종으로부터의 VEGF는 인간 VEGF의 경우에는 hVEGF, 또는 뮤린 VEGF의 경우에는 mVEGF와 같은 용어로 표시된다. 전형적으로, VEGF는 인간 VEGF를 지칭한다. 용어 "VEGF"는 또한 165-아미노산 인간 혈관 내피 세포 성장 인자의 아미노산 8 내지 109 또는 1 내지 109를 포함하는 폴리펩티드의 말단절단된 형태 또는 단편을 지칭하는데 사용된다. 임의의 이러한 형태의 VEGF에 대한 언급은, 본원에서 예를 들어 "VEGF (8-109)", "VEGF (1-109)" 또는 "VEGF165"에 의해 확인할 수 있다. "말단절단된" 천연 VEGF에 대한 아미노산 위치는 천연 VEGF 서열에 나타내어진 바와 같이 넘버링된다. 예를 들어, 말단절단된 천연 VEGF에서의 아미노산 위치 17 (메티오닌)은 또한 천연 VEGF에서의 위치 17 (메티오닌)이다. 말단절단된 천연 VEGF는 KDR 및 Flt-1 수용체에 대해 천연 VEGF와 대등한 결합 친화도를 갖는다.

"항-VEGF 항체"는 VEGF에 충분한 친화도 및 특이성으로 결합하는 항체이다. 선택된 항체는 통상적으로 VEGF에 대해 결합 친화도를 가질 것이고, 예를 들어 항체는 100 nM-1 pM의 Kd 값으로 hVEGF에 결합할 수 있다. 항체 친화도는, 예를 들어 표면 플라즈몬 공명 기반 검정 (예컨대, PCT 출원 공개 번호 WO2005/012359에 기재된 바와 같은 비아코어(BIAcore) 검정); 효소-연결된 면역흡착 검정 (ELISA); 및 경쟁 검정 (예를 들어, RIA)에 의해 결정될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 항-VEGF 항체는 VEGF 활성이 수반되는 질환 또는 상태를 표적화하고 이를 방해하는데 있어서 치료제로서 사용될 수 있다. 또한, 항체는, 예를 들어 치료제로서의 그의 유효성을 평가하기 위해 다른 생물학적 활성 검정에 적용될 수 있다. 이러한 검정은 관련 기술분야에 공지되어 있고, 항체에 대한 표적 항원 및 의도된 용도에 따라 달라진다. 예는 HUVEC 억제 검정; 종양 세포 성장 억제 검정 (예를 들어, WO 89/06692에 기재된 바와 같음); 항체-의존성 세포 세포독성 (ADCC) 및 보체-매개 세포독성 (CDC) 검정 (미국 특허 5,500,362); 및 효능작용 활성 또는 조혈 검정 (WO 95/27062 참조)을 포함한다. 항-VEGF 항체는 통상적으로 다른 VEGF 상동체, 예컨대 VEGF-B 또는 VEGF-C에도 결합하지 않을 것이고, 다른 성장 인자, 예컨대 PlGF, PDGF 또는 bFGF에도 결합하지 않을 것이다.

"VEGF 길항제"는 하나 이상의 VEGF 수용체에 대한 그의 결합을 포함하여, VEGF 활성을 중화하거나, 차단하거나, 억제하거나, 폐지시키거나, 감소시키거나 또는 방해할 수 있는 분자를 지칭한다. VEGF 길항제는 항-VEGF 항체 및 그의 항원-결합 단편, VEGF에 특이적으로 결합함으로써 1종 이상의 수용체에 대한 그의 결합을 봉쇄하는 수용체 분자 및 유도체, 항-VEGF 수용체 항체 및 VEGF 수용체 길항제, 예컨대 VEGFR 티로신 키나제의 소분자 억제제를 포함한다.

"키메라 VEGF 수용체 단백질"은 적어도 2종의 상이한 단백질로부터 유래된 아미노산 서열을 갖는 VEGF 수용체 분자이며, 이 중 적어도 1종은 VEGF 수용체 단백질로서 존재한다. 특정 실시양태에서, 키메라 VEGF 수용체 단백질은 VEGF에 결합하여 그의 생물학적 활성을 억제할 수 있다.

키메라 및 인간화 항체

특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 키메라 항체이다. 특정 키메라 항체는, 예를 들어 미국 특허 번호 4,816,567; 및 문헌 [Morrison et al., PNAS USA, 81:6851-6855 (1984)]에 기재되어 있다. 한 예에서, 키메라 항체는 비-인간 가변 영역 (예를 들어, 마우스, 래트, 햄스터, 토끼 또는 비-인간 영장류, 예컨대 원숭이로부터 유래된 가변 영역) 및 인간 불변 영역을 포함한다. 추가의 예에서, 키메라 항체는 부류 또는 하위부류가 모 항체의 것으로부터 변화된 "부류 스위칭" 항체이다. 키메라 항체는 그의 항원-결합 단편을 포함한다.

특정 실시양태에서, 키메라 항체는 인간화 항체이다. 전형적으로, 비인간 항체는 모 비-인간 항체의 특이성 및 친화도를 유지하면서 인간에 대한 면역원성이 감소하도록 인간화된다. 일반적으로, 인간화 항체는 HVR, 예를 들어 CDR (또는 그의 일부)이 비-인간 항체로부터 유래되고, FR (또는 그의 일부)이 인간 항체 서열로부터 유래된 1개 이상의 가변 도메인을 포함한다. 인간화 항체는 또한 임의로 인간 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 것이다. 일부 실시양태에서, 인간화 항체의 일부 FR 잔기는, 예를 들어 항체 특이성 또는 친화도를 복원하거나 또는 개선하기 위해, 비-인간 항체 (예를 들어, HVR 잔기가 유래된 항체)로부터의 상응하는 잔기로 치환된다.

인간화 항체 및 그의 제조 방법은, 예를 들어 문헌 [Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)]에서 검토되었고, 예를 들어 문헌 [Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); Queen et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989)]; 미국 특허 번호 5,821,337, 7,527,791, 6,982,321, 및 7,087,409; [Kashmiri et al., Methods 36:25-34 (2005)] (SDR (a-CDR) 그라프팅 기재); [Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991)] ("재표면화" 기재); [Dall'Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005)] ("FR 셔플링" 기재); 및 [Osbourn et al., Methods 36:61-68 (2005) 및 Klimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000)] (FR 셔플링에 대한 "유도 선택" 접근법 기재)에 추가로 기재되어 있다.

인간화에 사용될 수 있는 인간 프레임워크 영역은 "베스트-핏(best-fit)" 방법을 사용하여 선택된 프레임워크 영역 (예를 들어, 문헌 [Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993)] 참조); 경쇄 또는 중쇄 가변 영역의 특정 하위군의 인간 항체의 컨센서스 서열로부터 유래된 프레임워크 영역 (예를 들어, 문헌 [Carter et al. PNAS USA, 89:4285 (1992); 및 Presta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993)] 참조); 인간 성숙 (체세포 성숙) 프레임워크 영역 또는 인간 배선 프레임워크 영역 (예를 들어, 문헌 [Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)] 참조); 및 FR 라이브러리 스크리닝으로부터 유래된 프레임워크 영역 (예를 들어, 문헌 [Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997) 및 Rosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)] 참조)을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.

인간 항체

특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 인간 항체이다. 인간 항체는 다양한 관련 기술분야의 공지된 기술을 이용하여 생산될 수 있다. 인간 항체는 일반적으로 문헌 [van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001) 및 Lonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008)]에 기재되어 있다.

인간 항체는 항원 접종에 반응하여 인간 가변 영역을 갖는 무손상 인간 항체 또는 무손상 항체를 생산하도록 변형된 트랜스제닉 동물에게 면역원을 투여함으로써 제조할 수 있다. 이러한 동물은 전형적으로 내인성 이뮤노글로불린 유전자좌를 대체하거나 또는 염색체외에 존재하거나 또는 동물의 염색체로 무작위적으로 통합된 인간 이뮤노글로불린 유전자좌의 전부 또는 일부를 함유한다. 이러한 트랜스제닉 마우스에서, 내인성 이뮤노글로불린 유전자좌는 일반적으로 불활성화된다. 트랜스제닉 동물로부터 인간 항체를 수득하는 방법의 검토를 위해, 문헌 [Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005)]을 참조한다. 또한, 예를 들어 미국 특허 번호 6,075,181 및 6,150,584 (제노마우스(XENOMOUSE)™ 기술 기재); 미국 특허 번호 5,770,429 (HUMAB® 기술 기재); 미국 특허 번호 7,041,870 (K-M 마우스(K-M MOUSE)® 기술 기재), 및 미국 특허 출원 공개 번호 US 2007/0061900 (벨로시마우스(VELOCIMOUSE)® 기술 기재)을 참조한다. 이러한 동물에 의해 생산된 무손상 항체로부터의 인간 가변 영역은, 예를 들어 상이한 인간 불변 영역과 조합시켜 추가로 변형될 수 있다.

인간 항체는 또한 하이브리도마-기반 방법에 의해 제조될 수 있다. 인간 모노클로날 항체의 생산을 위한 인간 골수종 및 마우스-인간 이종골수종 세포주가 기재되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques 및 Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987); 및 Boerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991)] 참조). 인간 B-세포 하이브리도마 기술을 통해 생산된 인간 항체는 또한 문헌 [Li et al., PNAS USA, 103:3557-3562 (2006)]에 기재되어 있다. 추가의 방법은, 예를 들어 미국 특허 번호 7,189,826 (하이브리도마 세포주로부터의 모노클로날 인간 IgM 항체 생산 기재) 및 문헌 [Ni, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (2006)] (인간-인간 하이브리도마 기재)에 기재된 것을 포함한다. 인간 하이브리도마 기술 (트리오마(Trioma) 기술)은 또한 문헌 [Vollmers and Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005) 및 Vollmers and Brandlein, Methods and Findings in Experimental 및 Clinical Pharmacology, 27(3):185-91 (2005)]에 기재되어 있다.

인간 항체는 또한 인간-유래 파지 디스플레이 라이브러리로부터 선택된 Fv 클론 가변 도메인 서열을 단리함으로써 생산될 수 있다. 이어서, 이러한 가변 도메인 서열은 바람직한 인간 불변 도메인과 조합될 수 있다. 항체 라이브러리로부터 인간 항체를 선택하기 위한 기술은 하기에 기재된다.

라이브러리-유래 항체

본 발명의 항체는 목적하는 활성을 갖는 항체에 대해 조합 라이브러리를 스크리닝함으로써 단리될 수 있다. 예를 들어, 파지 디스플레이 라이브러리를 생산하고, 목적하는 결합 특성을 보유하는 항체에 대하여 이러한 라이브러리를 스크리닝하는 다양한 방법이 관련 기술분야에 공지되어 있다. 이러한 방법은, 예를 들어 문헌 [Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001)]에서 검토되고, 예를 들어 문헌 [McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks and Bradbury, in Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, PNAS USA 101(34): 12467-12472 (2004); 및 Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004)]에 추가로 기재되어 있다.

특정 파지 디스플레이 방법에서, VH 및 VL 유전자의 레퍼토리는 개별적으로 폴리머라제 연쇄 반응 (PCR)에 의해 클로닝되고, 파지 라이브러리에 무작위적으로 재조합되며, 이는 이어서 문헌 [Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994)]에 기재된 바와 같이 항원-결합 파지에 대해 스크리닝될 수 있다. 파지는 전형적으로 항체 단편을 단일-쇄 Fv (scFv) 단편 또는 Fab 단편으로 디스플레이한다. 면역화된 공급원으로부터의 라이브러리는 하이브리도마를 구축할 필요 없이 면역원에 대한 고-친화도 항체를 제공한다. 대안적으로, 나이브 레퍼토리를 클로닝 (예를 들어, 인간으로부터)하여, 문헌 [Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993)]에 기재된 바와 같이 어떠한 면역화도 없이 광범위한 비자기 및 또한 자기 항원에 대한 항체의 단일 공급원을 제공할 수 있다. 최종적으로, 문헌 [Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992)]에 기재된 바와 같이, 줄기 세포로부터의 재배열되지 않은 V-유전자 절편을 클로닝하고, 고도로 가변성인 CDR3 영역을 코딩하고, 시험관내 재배열이 달성되도록 무작위 서열을 함유하는 PCR 프라이머를 사용함으로써, 나이브 라이브러리를 또한 합성적으로 제조할 수 있다. 인간 항체 파지 라이브러리를 기재하고 있는 특허 공보는, 예를 들어 미국 특허 번호 5,750,373, 및 미국 특허 공개 번호 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936 및 2009/0002360을 포함한다.

인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체 또는 항체 단편은 본원에서 인간 항체 또는 인간 항체 단편으로 여겨진다.

항-VEGF 항체 및 길항제

VEGF 항체 생산에 사용될 VEGF 항원은, 예를 들어 VEGF₁₆₅ 분자 뿐만 아니라 목적하는 에피토프를 함유하는 VEGF의 다른 이소형 또는 그의 단편일 수 있다. 한 실시양태에서, 바람직한 에피토프는 하이브리도마 ATCC HB 10709 (본원에 정의된 "에피토프 A.4.6.1"로서 공지되어 있음)에 의해 생산된 모노클로날 항-VEGF 항체 A4.6.1과 동일한 에피토프에 결합하는 베바시주맙에 의해 인식되는 것이다. 본 발명의 항-VEGF 항체 생산에 유용한 다른 형태의 VEGF는 통상의 기술자에게 명백할 것이다.

인간 VEGF는 소 VEGF cDNA를 혼성화 프로브로서 사용하여 인간 세포로부터 제조된 cDNA 라이브러리를 최초 스크리닝함으로써 수득하였다 (Leung et al. (1989) Science, 246:1306). 이로써 확인된 하나의 cDNA는 소 VEGF와 95% 초과의 상동성을 갖는 165-아미노산 단백질을 코딩하며; 이러한 165-아미노산 단백질은 전형적으로 인간 VEGF (hVEGF) 또는 VEGF₁₆₅로서 지칭된다. 인간 VEGF의 유사분열촉진 활성은 포유동물 숙주 세포에서의 인간 VEGF cDNA 발현으로써 확인되었다. 인간 VEGF cDNA로 형질감염된 세포에 의해 조건화된 배지는 모세관 내피 세포의 증식을 촉진시켰지만, 대조군 세포는 그렇지 않았다 (상기 문헌 [Leung et al. (1989) Science]). 재조합 DNA 기술을 통해 VEGF를 클로닝하고 발현시키기 위한 추가의 노력이 있었다 (예를 들어, 문헌 [Ferrara, Laboratory Investigation 72:615-618 (1995)], 및 본원에 인용된 참고문헌 참조).

VEGF는 다양한 조직에서 대안적 RNA 스플라이싱으로 인해 다중 동종이량체 형태 (단랑체당 121, 145, 165, 189 및 206개의 아미노산)로서 발현된다. VEGF₁₂₁은 헤파린에 결합하지 않는 가용성 미토겐이고; 보다 긴 형태의 VEGF가 점진적으로 더 높은 친화도로 헤파린에 결합한다. VEGF의 헤파린-결합 형태는 플라스민에 의해 카르복시 말단에서 절단되어 확산가능한 형태(들)의 VEGF를 방출시킬 수 있다. 플라스민 절단 후에 확인된 카르복시 말단 펩티드의 아미노산 서열분석은 Arg₁₁₀-Ala₁₁₁이다. 동종이량체로서 단리된 아미노 말단 "코어" 단백질인 VEGF (1-110)는 중화 모노클로날 항체 (예컨대 4.6.1 및 3.2E3.1.1로서 지칭되는 항체) 및 가용성 형태의 VEGF 수용체에 무손상 VEGF₁₆₅ 동종이량체와 유사한 친화도로 결합한다.

또한, 태반 성장 인자 (PIGF), VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D 및 VEGF-E를 비롯하여 VEGF와 구조적으로 관련이 있는 여러 분자가 최근 확인된 바 있다 (상기 문헌 [Ferrara and Davis-Smyth (1987) Endocr. Rev.], 문헌 [Ogawa et al. J. Biological Chem. 273:31273-31281 (1998); Meyer et al. EMBO J., 18:363-374 (1999)]). 수용체 티로신 키나제, Flt-4 (VEGFR-3)는 VEGF-C 및 VEGF-D에 대한 수용체로 확인되었다 (Joukov et al. EMBO. J. 15:1751 (1996); Lee et al. PNAS USA 93:1988-1992 (1996); Achen et al. (1998) PNAS USA 95:548-553). VEGF-C는 림프 혈관신생의 조절에 관련되는 것으로 밝혀졌다 (Jeltsch et al. Science 276:1423-1425(1997)).

Flt-1 (VEGFR-1이라고도 불림) 및 KDR (VEGFR-2라고도 불림)의 2종의 VEGF 수용체가 확인된 바 있다 (Shibuya et al. (1990) Oncogene 8:519-527; de Vries et al. (1992) Science 255:989-991; Terman et al. (1992) Biochem. Biophys. Res. Commun. 187:1579-1586). 뉴로필린-1은 헤파린-결합 VEGF 이소형에 결합할 수 있는 선택적 VEGF 수용체인 것으로 밝혀졌다 (Soker et al. (1998) Cell 92:735-45).

본 발명의 방법에 유용한 항-VEGF 항체는 VEGF에 충분한 친화도 및 특이성으로 결합하고, VEGF의 생물학적 활성을 감소시키거나 또는 억제할 수 있는 임의의 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다. 항-VEGF 항체는 통상적으로 다른 VEGF 동족체, 예컨대 VEGF-B 또는 VEGF-C에도 결합하지 않을 것이고, 다른 성장 인자, 예컨대 PlGF, PDGF 또는 bFGF에도 결합하지 않을 것이다.

본 발명의 특정 실시양태에서, 항-VEGF 항체는 하이브리도마 ATCC HB 10709에 의해 생산된 모노클로날 항-VEGF 항체 A4.6.1과 동일한 에피토프에 결합하는 모노클로날 항체; 문헌 [Presta et al. (1997) Cancer Res. 57:4593-4599]에 따라 생산된 재조합 인간화 항-VEGF 모노클로날 항체를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 한 실시양태에서, 항-VEGF 항체는 "rhuMAb VEGF" 또는 "아바스틴®"으로도 공지되어 있는 "베바시주맙 (BV)"이다. 이것은 인간 VEGF의 그의 수용체에 대한 결합을 차단하는 뮤린 항-hVEGF 모노클로날 항체 A.4.6.1로부터의 돌연변이된 인간 IgG1 프레임워크 영역 및 항원-결합 상보성-결정 영역을 포함한다. 대부분의 프레임워크 영역을 포함하는 베바시주맙의 아미노산 서열의 대략 93%는 인간 IgG1로부터 유래되고, 서열의 약 7%는 뮤린 항체 A4.6.1로부터 유래된다.

베바시주맙 (아바스틴®)은 FDA의 승인을 받은 최초의 항혈관신생 요법이었고, 전이성 결장직장암 (정맥내 5-FU-기재의 화학요법과 조합된 1차 및 2차 치료), 진행성 비-편평, 비소세포 폐암 (NSCLC) (카르보플라틴 및 파클리탁셀과 조합된 절제불가능, 국소 진행성, 재발성 또는 전이성 NSCLC의 1차 치료) 및 전이성 HER2-음성 유방암 (파클리탁셀과 조합된, 이전에 처치받은 적이 없는 전이성 HER2-음성 유방암)의 치료용으로 승인을 받았다.

베바시주맙 및 다른 인간화 항-VEGF 항체는 2005년 2월 26일에 등록된 미국 특허 번호 6,884,879에 추가로 기재되어 있다. 추가의 항체는 PCT 공개 번호 WO2005/012359, PCT 공개 번호 WO2005/044853 및 미국 특허 출원 60/991,302에 기재되어 있는 바와 같은 G6 또는 B20 시리즈 항체 (예를 들어, G6-31, B20-4.1)를 포함하며, 이들 특허 출원의 내용은 명백하게 본원에 참조로 포함된다. 추가의 항체에 대해 미국 특허 번호 7,060,269, 6,582,959, 6,703,020; 6,054,297; WO98/45332; WO 96/30046; WO94/10202; EP 0666868B1; 미국 특허 출원 공개 번호 2006009360, 20050186208, 20030206899, 20030190317, 20030203409, 및 20050112126; 및 문헌 [Popkov et al., Journal of Immunological Methods 288:149-164 (2004)]을 참조한다. 다른 항체는 잔기 F17, M18, D19, Y21, Y25, Q89, I191, K101, E103, 및 C104를 포함하거나, 또는 대안적으로 잔기 F17, Y21, Q22, Y25, D63, I83 및 Q89를 포함하는 인간 VEGF 상의 기능적 에피토프에 결합하는 것을 포함한다.

본 발명의 한 실시양태에서, 항-VEGF 항체는 하기 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역:

및 하기 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 갖는다.

본 발명에 따른 "G6 시리즈 항체"는 그의 전체 개시내용이 명백하게 본원에 참조로 포함되는 PCT 공개 번호 WO2005/012359의 도 7, 24-26 및 34-35 중 어느 하나에 따른 G6 항체 또는 G6-유래 항체의 서열로부터 유래된 항-VEGF 항체이다. 또한, PCT 공개 번호 WO2005/044853을 참조하고, 그의 전체 개시내용은 명백하게 본원에 참조로 포함된다. 한 실시양태에서, G6 시리즈 항체는 잔기 F17, Y21, Q22, Y25, D63, I83 및 Q89를 포함하는 인간 VEGF 상의 기능적 에피토프에 결합한다.

본 발명에 따른 "B20 시리즈 항체"는 그의 전체 개시내용이 명백하게 본원에 참조로 포함되는 PCT 공개 번호 WO2005/012359의 도 27-29 중 어느 하나에 따른 B20 항체 또는 B20-유래 항체의 서열로부터 유래된 항-VEGF 항체이다. 또한, PCT 공개 번호 WO2005/044853 및 미국 특허 출원 60/991,302를 참조하고, 이들 특허 출원의 내용은 명백하게 본원에 참조로 포함된다. 한 실시양태에서, B20 시리즈 항체는 잔기 F17, M18, D19, Y21, Y25, Q89, I91, K101, E103 및 C104를 포함하는 인간 VEGF 상의 기능적 에피토프에 결합한다.

본 발명에 따른 "기능적 에피토프"는 항체의 결합에 강력하게 기여하는 항원의 아미노산 잔기를 지칭한다. 강력하게 기여하는 항원의 잔기 중 어느 하나를 돌연변이시키면 (예를 들어, 알라닌에 의한 야생형 VEGF의 돌연변이 또는 상동체 돌연변이) 항체의 결합이 파괴되어 항체의 상대적 친화도 비 (IC50돌연변이체 VEGF/IC50야생형 VEGF)는 5 초과일 것이다 (WO2005/012359의 실시예 2 참조). 한 실시양태에서, 상대적 친화도 비는 용액 결합 파지 디스플레이 ELISA에 의해 결정된다. 간략하게, 96-웰 맥시소르프(Maxisorp) 이뮤노플레이트 (NUNC)를 4℃에서 PBS 중 2ug/ml 농도의 Fab 형태의 시험할 항체로 밤새 코팅하고, 2시간 동안 실온에서 PBS, 0.5% BSA 및 0.05% 트윈20 (PBT)으로 차단한다. PBT 중 hVEGF 알라닌 점 돌연변이체 (잔기 8-109 형태) 또는 야생형 hVEGF (8-109)를 디스플레이하는 파지의 연속 희석액을 우선 실온에서 15분 동안 Fab-코팅된 플레이트에서 인큐베이션하고, 상기 플레이트를 PBS, 0.05% 트윈20 (PBST)으로 세척한다. 결합된 파지는 PBT 중에서 1:5000으로 희석된 항-M13 모노클로날 항체 양고추냉이 퍼옥시다제 (아머샴 파마시아(Amersham Pharmacia)) 접합체로 검출하고, 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘 (TMB, 키르케가드 ＆ 페리 랩스(Kirkegaard ＆ Perry Labs), 메릴랜드주 게이더스버그) 기질로 대략 5분 동안 발색시키며, 1.0 M H3PO4로 켄칭한 후에 450 nm에서 분광광도계로 판독한다. IC50 값의 비 (IC50,ala/IC50,wt)는 결합 친화도 (상대적 결합 친화도)에 있어서 감소 배수를 나타낸다.

VEGF 수용체 분자

가장 잘 특성화된 2종의 VEGF 수용체는 VEGFR1 (Flt-1로서도 공지됨) 및 VEGFR2 (뮤린 상동체의 경우에 KDR 및 FLK-1로서도 공지됨)이다. 각각의 VEGF 패밀리 구성원에 대한 각각의 수용체의 특이성은 다양하지만, VEGF-A는 Flt-1 및 KDR 둘 다에 결합한다. Flt-I 및 KDR은 둘 다 수용체 티로신 키나제 (RTK) 패밀리에 속한다. RTK는 다양한 생물학적 활성을 갖는 막횡단 수용체의 거대 패밀리를 포함한다. 적어도 열아홉 (19)종의 별개의 RTK 서브패밀리가 확인되었다. 수용체 티로신 키나제 (RTK) 패밀리는 다양한 세포 유형의 성장 및 분화에 중요한 수용체를 포함한다 (Yarden and Ullrich (1988) Ann. Rev. Biochem. 57:433-478; Ullrich and Schlessinger (1990) Cell 61:243-254). RTK의 내인성 기능은 리간드 결합시에 활성화되며, 이로써 수용체 및 다중 세포 기질의 인산화 및 이후에 다양한 세포 반응이 일어난다 (Ullrich & Schlessinger (1990) Cell 61:203-212). 따라서, 수용체 티로신 키나제 매개된 신호 전달은 특정 성장 인자 (리간드)와의 세포외 상호작용에 의해 개시되고, 전형적으로는 이후에 수용체 이량체화, 내인성 단백질 티로신 키나제 활성의 자극 및 수용체 트랜스-인산화가 일어난다. 이에 따라 세포내 신호 전달 분자를 위한 결합 부위가 생성되고, 적절한 세포 반응을 용이하게 하는 세포질 신호전달 분자의 스펙트럼을 갖는 복합체가 형성된다 (예를 들어, 세포 분열, 분화, 대사 효과, 세포외 미세환경의 변화). 문헌 [Schlessinger and Ullrich (1992) Neuron 9:1-20]을 참조한다. 구조적으로, Flt-1 및 KDR 둘 다 세포외 도메인의 7개 이뮤노글로불린-유사 도메인, 단일 막횡단 영역, 및 키나제-삽입 도메인이 개재된 컨센서스 티로신 키나제 서열을 갖는다 (Matthews et al. (1991) PNAS USA 88:9026-9030; Terman et al. (1991) Oncogene 6:1677-1683). 세포외 도메인은 VEGF의 결합에 관련되고, 세포내 도메인은 신호 전달에 관련된다.

VEGF에 특이적으로 결합하는 VEGF 수용체 분자 또는 그의 단편은 본 발명의 방법에 사용되어 VEGF 단백질에 결합하고 이를 봉쇄시킴으로써 이것의 신호전달을 막을 수 있다. 특정 실시양태에서, VEGF 수용체 분자 또는 그의 VEGF 결합 단편은 가용성 형태, 예컨대 sFlt-1이다. 가용성 형태의 수용체는 VEGF에 결합하여 VEGF 단백질이 표적 세포 표면 상에 존재하는 그의 천연 수용체에 결합하는 것을 막음으로써, VEGF 단백질의 생물학적 활성에 대한 억제 효과를 발휘한다. 또한, VEGF 수용체 융합 단백질이 포함되며, 그 예는 하기에 기재된다.

키메라 VEGF 수용체 단백질은 적어도 2종의 상이한 단백질로부터 유래된 아미노산 서열을 갖는 수용체 분자로서, 이 중 적어도 1종은 VEGF에 결합하여 그의 생물학적 활성을 억제할 수 있는 VEGF 수용체 단백질 (예를 들어, flt-1 또는 KDR 수용체)이다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 키메라 VEGF 수용체 단백질은 오직 2종의 상이한 VEGF 수용체 분자로부터 유래된 아미노산 서열로 이루어지지만; flt-1 및/또는 KDR 수용체의 세포외 리간드-결합 영역으로부터의 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개의 모든 Ig-유사 도메인을 포함하는 아미노산 서열이 다른 비관련 단백질로부터의 아미노산 서열, 예를 들어 이뮤노글로불린 서열에 연결될 수 있다. Ig-유사 도메인과 조합되는 다른 아미노산 서열은 통상의 기술자에게 매우 명백할 것이다. 키메라 VEGF 수용체 단백질의 예는, 예를 들어 가용성 Flt-1/Fc, KDR/Fc 또는 FLt-1/KDR/Fc (VEGF 트랩으로서도 공지됨)를 포함한다 (예를 들어, PCT 출원 공개 번호 WO97/44453 참조).

본 발명의 가용성 VEGF 수용체 단백질 또는 키메라 VEGF 수용체 단백질은 막횡단 도메인을 통해 세포의 표면에 고정되지 않는 VEGF 수용체 단백질을 포함한다. 이와 같이 키메라 수용체 단백질을 비롯한 가용성 형태의 VEGF 수용체는 VEGF에 결합하여 이것을 불활성화시키면서도 막횡단 도메인을 포함하지 않기 때문에 일반적으로는 해당 분자가 발현되는 세포의 세포막과 회합되지 않는다.

치료 용도 및 조성물

본 발명은, 종양 성장을 뒷받침해주는 영양분 공급에 필요한 종양 혈관 발생을 억제시키고자 하는 새로운 암 치료 전략인 항혈관신생 요법을 포괄한다. 혈관신생은 원발성 종양 성장 및 전이 둘 다에 관여하기 때문에, 본 발명에 의해 제공되는 항혈관신생 치료는 원발성 부위에서 종양의 신생물 성장을 억제할 수 있을 뿐만 아니라, 또한 2차 부위에서의 종양의 전이를 예방할 수 있어서, 다른 치료제에 의한 종양의 공격을 허용한다.

특히, 교모세포종으로 진단된 대상체에게 유효량의 화학요법제 및 항-VEGF 항체를 조합한 치료 요법을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체를 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 화학요법제 및 항-VEGF 항체의 투여를 조합하는 치료 요법은 대상체의 무진행 생존 (PFS) 또는 전체 생존 (OS)을 연장한다.

조합 요법

본 발명은 항-VEGF 항체와 하나 이상의 추가의 항암 요법의 조합의 용도 또는 조성물을 특징으로 한다. 항암 요법의 예는 제한 없이 수술, 방사선 요법 (방사선요법), 생물요법, 면역요법, 화학요법 (예를 들어, 테모졸로미드), 또는 이들 요법의 조합을 포함한다. 또한, 세포독성제, 항혈관신생 및 항증식제를 항-VEGF 항체와 조합하여 사용할 수 있다.

임의의 방법 및 용도의 특정 측면에서, 본 발명은 유효량의 항-VEGF 항체 및 화학요법제를 교모세포종을 앓고 있는 것으로 진단된 대상체에게 투여함으로써 교모세포종을 치료하는 것을 제공한다. 다양한 화학요법제가 본 발명의 조합 치료 방법 및 용도에서 사용될 수 있다. 고려되는 화학요법제의 예시적이고 비제한적인 목록은 본원에서 "정의" 하에 제공되거나 또는 본원에 기재되어 있다. 한 실시양태에서, 화학요법제는 테몰로졸로미드이다. 또 다른 실시양태에서, 화학요법제는 방사선요법과 병용되어 투여된다.

한 예에서, 상기에 고려된 조합 치료는 개별 제제 또는 단일 제약 제제를 사용하는 동시 투여, 및 어느 한 순서로의 연속 투여를 포함하는 투여를 포함하며, 여기서 바람직하게는 활성제 둘 다 (또는 모두)가 동시에 그의 생물학적 활성을 발휘하는 기간이 존재한다. 이러한 화학요법제에 대한 제조 및 투여 스케줄은 제조업체의 지침에 따라 또는 숙련된 진료의가 경험적으로 결정하는 바에 따라 사용될 수 있다. 화학요법을 위한 제조 및 투여 스케줄은 또한 문헌 [Chemotherapy Service Ed., M. C. Perry, Williams & Wilkins, Baltimore, Md. (1992)]에도 기재되어 있다. 화학요법제는 선행될 수 있거나, 또는 항-VEGF 항체의 투여에 이어서, 또는 그와 함께 동시에 주어질 수 있다.

임의의 방법 및 용도의 일부 다른 측면에서, 본 발명의 항체와의 조합 종양 요법에 유용한 다른 치료제는 종양 성장에 관련된 다른 인자, 예컨대 EGFR, ErbB3, ErbB4 또는 TNF의 길항제를 포함한다. 때때로, 1종 이상의 시토카인을 대상체에게 투여하는 것이 유익할 수도 있다. 한 실시양태에서, VEGF 항체는 성장 억제제와 공-투여된다. 예를 들어, 성장 억제제가 먼저 투여된 후에 VEGF 항체가 투여될 수 있다. 그러나, 동시 투여 또는 VEGF 항체의 우선 투여 또한 고려된다. 성장 억제제의 적합한 투여량은 현재 사용되고 있는 양이며, 성장 억제제 및 항-VEGF 항체의 조합 작용 (상승작용)으로 인해 감소될 수 있다.

본원의 제제는 또한 치료할 특정한 적응증에 필요한, 바람직하게는 서로 악영향을 미치지 않는 상보적인 활성을 갖는 1종 초과의 활성 화합물을 함유할 수 있다. 예를 들어, 하나의 제형 중에 EGFR, VEGF (예를 들어, VEGF 상의 상이한 에피토프 또는 동일한 에피토프에 결합하는 항체), VEGFR 또는 ErbB2 (예를 들어, 헤르셉틴(Herceptin)®)에 결합하는 항체를 추가로 제공하는 것이 바람직할 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 조성물은 화학요법제 또는 세포독성제를 포함할 수 있다. 이러한 분자는 의도된 목적에 유효한 양으로 조합되어 적합하게 존재한다.

임의의 방법 및 용도의 특정 측면에서, 본 발명의 항체와의 조합 암 요법에 유용한 다른 치료제는 다른 항혈관신생제를 포함한다. 많은 항혈관신생제가 관련 기술분야에서 확인되었고 공지되어 있으며, 예컨대 문헌 [Carmeliet and Jain (2000)])에 열거되어 있는 것이다. 한 실시양태에서, 본 발명의 항-VEGF 항체는 또 다른 VEGF 길항제 또는 VEGF 수용체 길항제, 예컨대 VEGF 변이체, 가용성 VEGF 수용체 단편, VEGF 또는 VEGFR을 차단시킬 수 있는 압타머, 중화 항-VEGFR 항체, VEGFR 티로신 키나제의 저분자량 억제제, 및 그의 임의의 조합물과 조합되어 사용된다. 대안적으로 또는 추가로, 2종 이상의 항-VEGF 항체가 대상체에게 공-투여될 수 있다.

질환의 예방 또는 치료를 위해, VEGF-특이적 길항제의 적절한 투여량은 상기 규정된 바와 같은 치료할 질환의 유형, 질환의 중증도 및 경과, VEGF-특이적 길항제가 예방 또는 치료 목적을 위해 투여되는지의 여부, 선행 요법, 대상체의 임상 병력 및 VEGF-특이적 길항제에 대한 반응, 및 담당의의 판단에 좌우될 것이다. VEGF-특이적 길항제는 대상체에게 1회 또는 일련의 치료에 걸쳐 적합하게 투여된다. 조합 치료 요법에서는, 본 발명의 VEGF-특이적 길항제 및 1종 이상의 항암 치료제가 치료상 유효한 또는 상승작용적인 양으로 투여된다. 본원에 사용된 바와 같이, 치료 유효량은 VEGF-특이적 길항제 및 1종 이상의 다른 치료제의 공-투여 또는 본 발명의 조성물의 투여로 인해 상기 기재된 바와 같이 암이 감소 또는 억제되는 양이다. 치료적 상승작용적인 양은, 특정한 질환에 연관된 상태 또는 증상을 상승작용적으로 또는 유의하게 감소시키거나 또는 없애는데 필요한, VEGF-특이적 길항제 및 1종 이상의 다른 치료제의 양이다.

VEGF-특이적 길항제 및 1종 이상의 다른 치료제는 종양, 휴면 종양 또는 미세전이의 발생 또는 재발을 감소시키거나 또는 없애는데 충분한 양으로 충분한 시간 동안 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. VEGF-특이적 길항제 및 1종 이상의 다른 치료제는 종양 재발의 가능성을 예방하거나 또는 감소시키기 위한 유지 요법으로서 투여될 수 있다.

통상의 기술자에게 이해되는 바와 같이, 화학요법제 또는 다른 항암제의 적절한 용량은 일반적으로, 예를 들어 화학요법제가 단독으로 또는 다른 화학요법제와 조합되어 투여되는 임상 요법에서 이미 사용된 용량 정도일 것이다. 치료할 상태에 따라 투여량에 변동이 발생할 것이다. 치료를 투여하는 의사는 개별 대상체를 위한 적절한 용량을 결정할 수 있을 것이다.

상기 치료 요법 뿐만 아니라 대상체에게 방사선 요법을 수행할 수 있다.

임의의 방법, 용도 및 조성물의 특정 실시양태에서, 투여된 VEGF 항체는 무손상, 네이키드 항체이다. 그러나, VEGF 항체는 세포독성제와 접합될 수 있다. 임의의 방법 및 용도의 특정 실시양태에서, 접합된 항체 및/또는 이것과 결합되는 항원은 세포에 의해 내재화되어, 이와 결합되는 암 세포를 사멸시키는데 있어서의 접합체의 치료 효능을 증가시킨다. 한 실시양태에서, 세포독성제는 암 세포 내의 핵산을 표적화하거나 또는 이를 방해한다. 이러한 세포독성제의 예는 메이탄시노이드, 칼리케아미신, 리보뉴클레아제 및 DNA 엔도뉴클레아제를 포함한다.

본 발명은 또한 교모세포종을 앓고 있는 인간 대상체 또는 건강 관리자에게 화학요법제 (예를 들어, 테모졸로미드) 및 1종 이상의 다른 치료제 (예를 들어, 방사선요법)를 조합하여 항-VEGF 항체를 이용한 치료를 받기 위한 지침서를 제공함으로써 무진행 생존 기간을 증가시키거나, 대상체의 암 재발 위험을 감소시키거나 또는 대상체의 생존 가능성을 증가시키기 위해 지시하는 방법을 특징으로 한다. 일부 실시양태에서, 방법은 적어도 1종의 화학요법제를 이용한 치료를 받는 것에 대한 지침서를 제공하는 것을 추가로 포함한다. 항-VEGF 항체를 이용한 치료는 화학요법제를 이용한 치료와 병행하여 이루어질 수도 있거나 또는 그와 순차적으로 이루어질 수도 있다. 특정 실시양태에서, 대상체는 상기 지시 방법에 의해 지시되는 바에 따라 치료된다. 화학요법을 이용하거나 또는 이용하지 않고, 다른 치료제를 이용하거나 또는 이용하지 않는 항-VEGF 항체의 투여에 의한 교모세포종의 치료는 암 재발 또는 사망까지 계속될 수 있다.

본 발명은 인간 대상체에서 교모세포종의 치료를 위한 항-VEGF 항체 및 1종 이상의 다른 치료제의 투여를 홍보하는 것을 포함하는 홍보 방법을 추가로 제공한다. 일부 실시양태에서, 방법은 적어도 1종의 화학요법제의 투여를 홍보하는 것을 추가로 포함한다. 항-VEGF 항체의 투여는 화학요법제 투여와 병행하여 이루어질 수도 있거나 또는 그와 순차적으로 이루어질 수도 있다. 홍보는 이용가능한 임의의 수단에 의해 수행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 홍보는 항-VEGF 항체의 시판 제제가 동봉된 포장 삽입물에 의해 이루어진다. 홍보는 또한 화학요법제의 시판 제제가 동봉된 포장 삽입물에 의해 행해질 수도 있다. 홍보는 의사 또는 건강 관리자에 대한 서면 또는 구두 커뮤니케이션에 의한 것일 수 있다. 일부 실시양태에서 홍보는 포장 삽도가 항-VEGF 항체 및 1종 이상의 다른 화학요법제 또는 치료제를 조합하여 교모세포종 요법을 받기 위한 지침서를 제공하는 포장 삽입물에 의한 것이다. 추가의 실시양태에서, 포장 삽입물은 실시예 1의 결과를 일부 또는 전부 포함한다. 일부 실시양태에서, 홍보는 화학요법제 및 다른 치료제와 항-VEGF 항체를 이용한 대상체의 치료로 이어진다.

본 발명은 대상체의 무진행 생존 기간을 증가시키거나, 대상체의 암 재발의 가능성을 감소시키거나 또는 대상체의 생존의 가능성을 증가시키기 위해 인간 대상체에서 교모세포종의 치료를 위한 항-VEGF 항체 및 1종 이상의 다른 치료제를 조합하는 마케팅을 포함하는, 비즈니스 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 항-VEGF 항체와 조합하여 사용하기 위한 화학요법제를 마케팅하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 마케팅 후에 항-VEGF 항체 및 화학요법제로 대상체를 치료한다.

또한, 인간 대상체에서 교모세포종을 치료하여 대상체의 무진행 생존 기간을 증가시키거나, 대상체의 암 재발 가능성을 감소시키거나 또는 대상체의 생존 가능성을 증가시키기 위해 항-VEGF 항체와 조합된 화학요법제를 마케팅하는 것을 포함하는 비지니스 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 마케팅 후에 대상체를 화학요법제 및 항-VEGF 항체의 조합물로 치료한다.

투여량 및 지속기간

본 발명은 우수한 의료 행위와 일치하는 방식으로 제제화되고 투약되고 투여될 것이다. 이와 관련하여 고려할 인자는 치료할 특정한 장애, 치료받을 특정한 대상체, 개별 대상체의 임상적 상태, 장애의 원인, 작용제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 스케줄, 및 의료 진료의에게 공지된 다른 인자를 포함한다. 투여될 본 발명의 "치료 유효량"은 이러한 고려사항에 따라 달라질 것이고, 암을 예방하거나 호전시키거나 치료하거나 안정화시키거나, 진행까지의 시간 (무진행 생존의 지속기간)을 증가시키거나, 또는 종양, 휴면 종양 또는 미세전이물을 치료하거나 또는 이것의 발생 또는 재발을 예방하는데 필요한 최소량이다. VEGF-특이적 길항제는 암 또는 암 발생 위험을 예방 또는 치료하기 위해 현재 사용되는 1종 이상의 작용제와 함께 제제화될 필요는 없지만 임의로 이것과 함께 제제화된다. 이러한 다른 작용제의 유효량은 제제 내에 존재하는 VEGF-특이적 길항제의 양, 장애 또는 치료의 유형, 및 상기 논의된 다른 요인에 따라 달라진다. 일반적으로, 이들은 이전에 사용되던 것과 동일한 투여량 및 투여 경로로 사용되거나, 또는 이전에 사용되던 투여량의 약 1 내지 99%로 사용된다.

질환의 유형 및 중증도에 따라, 예를 들어 1회 이상의 개별 투여 또는 연속 주입에 의해, 항-VEGF 항체 약 1 ug/kg 내지 100 mg/kg (예를 들어, 0.1 mg/kg 내지 20 mg/kg)이 대상체에게 투여하기 위한 초기 후보 투여량이다. 한 실시양태에서, 바람직한 투여량은, 예를 들어 6 mg/kg, 8 mg/kg, 10 mg/kg, 및 15 mg/kg을 포함한다. 수일 또는 그 초과에 걸친 반복 투여 또는 사이클의 경우에는 상태에 따라, 상기에 기재되거나 또는 관련 기술분야에 공지되어 있는 방법에 의해 측정된 바와 같이, 암이 치료될 때까지 치료를 지속한다. 그러나, 다른 투여 요법이 유용할 수 있다. 한 예에서, 항-VEGF 항체는 약 6 mg/kg 내지 약 15 mg/kg의 용량 범위로, 예컨대 비제한적으로 6 mg/kg, 8 mg/kg, 10 mg/kg 또는 15 mg/kg으로 매주, 2주마다, 또는 3주마다 1회 투여된다. 본 발명의 요법의 진행은 통상의 기술 및 검정에 의해 용이하게 모니터링된다. 다른 실시양태에서, 이러한 투여 요법은 교모세포종의 화학치료 요법과 조합되어 사용된다. 적합한 투여량에 대한 추가의 정보는 하기 실시예에서 제공된다.

요법의 지속기간은 의학적으로 나타나는 한 계속되거나 바람직한 치료 효과 (예를 들어, 본원에 기재된 효과)가 달성될 때까지 계속될 것이다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 요법은 1개월, 2개월, 4개월, 6개월, 8개월, 10개월, 1년, 2년, 3년, 4년, 5년, 또는 최대로는 대상체의 수명까지의 기간 동안 계속된다.

본 발명의 VEGF-특이적 길항제는 공지된 방법에 따라, 예컨대 볼루스로서 또는 일정 기간에 걸친 연속 주입에 의한 정맥내 투여, 근육내, 복강내, 뇌척수내, 피하, 관절내, 활막내, 척수강내, 경구, 국소 또는 흡입 경로에 의해 대상체, 예를 들어 인간 대상체에게 투여된다. 광범위한 부작용 또는 독성이 VEGF 길항제에 연관된 경우에는 국부 투여가 특히 바람직하다. 치료 용도를 위해 생체외 전략을 사용할 수도 있다. 생체외 전략은 대상체로부터 수득된 세포를 VEGF 길항제를 코딩하는 폴리뉴클레오티드로 형질감염 또는 형질도입시키는 것을 포함한다. 이어서, 상기 형질감염되거나 형질도입된 세포를 대상체에게 다시 주입한다. 세포는 조혈 세포 (예를 들어, 골수 세포, 대식세포, 단핵구, 수지상 세포, T 세포, 또는 B 세포), 섬유모세포, 상피 세포, 내피 세포, 각질세포, 또는 근육 세포를 포함하지만 이에 제한되지 않은 임의의 광범위한 유형일 수 있다.

예를 들어, VEGF-특이적 길항제가 항체인 경우, 항체는 임의의 적합한 수단, 예컨대 비경구, 피하, 복강내, 폐내 및 비강내 및 국부 면역억제 치료를 위해 원하는 경우에, 병변내 투여에 의해 투여된다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다. 또한, 항체는 특히 항체의 용량을 감소시킨 펄스 주입에 의해 적합하게 투여된다. 바람직하게는, 투여는 부분적으로는 투여가 단기인지 장기인지에 따라 주사, 가장 바람직하게는 정맥내 또는 피하 주사에 의해 제공된다.

또 다른 예에서, VEGF 항체는 국소로, 예를 들어 장애 또는 종양의 위치가 허용하는 경우에 직접 주사에 의해 투여되고, 주사는 주기적으로 반복될 수 있다. VEGF 항체는 또한, 예를 들어 휴면 종양 또는 미세전이의 국부 재발 또는 전이를 예방하거나 감소시키기 위해서 종양의 외과적 절제 이후에 대상체에게 전신 전달될 수 있거나, 또는 종양 세포에, 예를 들어 종양 또는 종양 층에 직접 전달될 수 있다.

제약 제제

본 발명에 따라 사용되는 본원에 기재된 항체의 치료 제제는 목적하는 순도를 갖는 항체를 임의적 제약상 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제 (Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980))와 혼합하여 동결건조된 제제 또는 수용액 형태로 저장을 위한 것으로 제조된다. 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제는 사용된 용량 및 농도에서 수용자에게 비독성이고, 완충제, 예컨대 포스페이트, 시트레이트, 및 다른 유기 산; 아스코르브산 및 메티오닌을 비롯한 항산화제; 보존제 (예컨대, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량 (약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 이뮤노글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신; 모노사카라이드, 디사카라이드, 및 글루코스, 만노스 또는 덱스트린을 비롯한 다른 탄수화물; 킬레이트화제, 예컨대 EDTA; 당, 예컨대 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염-형성 반대-이온, 예컨대 나트륨; 금속 착물 (예를 들어, Zn-단백질 착물); 및/또는 비-이온성 계면활성제, 예컨대 트윈(TWEEN)™, 플루로닉스(PLURONICS)™ 또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 포함한다. 동결건조된 항-VEGF 항체 제제는 본원에 참조로 명백하게 포함되는 WO 97/04801에 기재되어 있다.

임의로, 그러나 바람직하게는, 제제는 제약상 허용되는 염, 전형적으로는, 예를 들어 염화나트륨을 바람직하게는 대략 생리학적 농도로 함유한다. 임의로, 본 발명의 제제는 제약상 허용되는 보존제를 함유할 수 있다. 일부 실시양태에서, 보존제 농도는 0.1 내지 2.0%, 전형적으로 v/v의 범위이다. 적합한 보존제는 제약 업계에 공지된 것을 포함한다. 벤질 알콜, 페놀, m-크레졸, 메틸파라벤 및 프로필파라벤은 보존제의 예이다. 임의로, 본 발명의 제제는 0.005 내지 0.02% 농도의 제약상 허용되는 계면활성제를 포함할 수 있다.

전형적으로, 베바시주맙은 4 mL 또는 16 mL의 베바시주맙을 전달하기 위해 100 mg 및 400 mg 보존제-무함유 1회용 바이알에서 치료 용도를 위해 제공된다 (25 mg/mL). 100 mg 제품은 α,α-트레할로스 탈수화물 240 mg, 인산나트륨 (일염기성, 1수화물) 23.2 mg, 인산나트륨 (이염기성, 무수물) 4.8 mg, 폴리소르베이트 20 1.6 mg, 및 주사용수 USP로 제제화된다. 400 mg 제품은 α,α-트레할로스 탈수화물 960 mg, 인산나트륨 (일염기성, 1수화물) 92.8 mg, 인산나트륨 (이염기성, 무수물) 19.2 mg, 폴리소르베이트 20 6.4 mg, 및 주사용수 USP로 제제화된다. 또한, 베바시주맙에 대한 라벨을 참조한다.

본원의 제제는 또한 치료할 특정한 적응증에 필요한, 바람직하게는 서로 유해한 영향을 미치지 않는 상보적인 활성을 갖는 1종 초과의 활성 화합물을 함유할 수 있다. 예를 들어, 하나의 제형 중에 VEGF (예를 들어, VEGF 상의 상이한 에피토프에 결합하는 항체), VEGFR에 결합하는 항체를 추가로 제공하는 것이 바람직할 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 상기 조성물은 세포독성제, 시토카인, 성장 억제제 및/또는 VEGFR 길항제를 포함할 수 있다. 이러한 분자는 의도된 목적에 유효한 양으로 조합되어 적합하게 존재한다.

활성 성분은 또한, 예를 들어 코아세르베이션 기술 또는 계면 중합에 의해 제조된 마이크로캡슐, 예를 들어 각각 히드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐에, 콜로이드성 약물 전달 시스템 (예를 들어, 리포솜, 알부민 마이크로구체, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐)에, 또는 마크로에멀젼에 포획될 수 있다. 이러한 기술은 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)]에 개시되어 있다.

지속-방출 제제를 제조할 수 있다. 지속-방출 제제의 적합한 예는 항체를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함하고, 이 매트릭스는 성형품, 예를 들어 필름 또는 마이크로캡슐의 형태이다. 지속-방출 매트릭스의 예는 폴리에스테르, 히드로겔 (예를 들어, 폴리(2-히드록시에틸-메타크릴레이트) 또는 폴리(비닐알콜)), 폴리락티드 (미국 특허 번호 3,773,919), L-글루탐산 및 y 에틸-L-글루타메이트의 공중합체, 비-분해성 에틸렌-비닐 아세테이트, 분해성 락트산-글리콜산 공중합체, 예컨대 루프론 데포(LUPRON DEPOT)™ (락트산-글리콜산 공중합체 및 류프롤리드 아세테이트로 구성된 주사가능한 마이크로구체), 및 폴리-D-(-)-3-히드록시부티르산을 포함한다. 중합체, 예컨대 에틸렌-비닐 아세테이트 및 락트산-글리콜산은 100일을 초과하여 분자를 방출할 수 있는 반면, 특정 히드로겔은 단백질을 보다 짧은 기간 동안 방출한다. 캡슐화된 항체가 신체 내에 장기간 동안 유지되는 경우에, 37℃에서 수분에 노출된 결과로 이들이 변성되거나 또는 응집될 수 있어, 생물학적 활성의 손실, 및 가능하게는 면역원성의 변화를 초래한다. 관련 메카니즘에 따라 안정화를 위한 합리적인 전략이 고안될 수 있다. 예를 들어, 응집 메카니즘이 티오-디술피드 교환을 통한 분자간 S--S 결합 형성인 것으로 밝혀지는 경우에, 술프히드릴 잔기를 변형시키는 것, 산성 용액으로부터 동결건조시키는 것, 수분 함량을 제어하는 것, 적합한 첨가제를 사용하는 것, 및 특정한 중합체 매트릭스 조성물을 개발하는 것에 의해 안정화를 달성할 수 있다.

생체내 투여에 사용하기 위한 제제는 멸균될 수 있다. 이는 멸균 여과 막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성된다.

치료 효능

본원에서 제공되는 임의의 방법, 용도 및 조성물의 주요 이점은 유의한 독성 또는 부작용 없이 인간 대상체에서 현저한 항암 효과를 생성하는 능력이며, 이로써 대상체는 치료로 인해 전반적으로 유익하다. 임의의 방법, 용도 또는 조성물의 한 실시양태에서, 안전성 프로파일은 이전의 베바시주맙 III상 연구와 유사하다. 본 발명의 치료 효능은 암 치료의 평가에 통상적으로 사용되는 다양한 종점, 예컨대 비제한적으로 종양 퇴행, 종양 중량 또는 크기 수축, 진행까지의 시간, 생존 기간, 무진행 생존, 전체 반응률, 반응의 지속기간 및 삶의 질에 의해 측정될 수 있다.

키트

본 발명의 또 다른 실시양태에서, 상기 기재된 장애의 치료에 유용한 물질들을 함유하는 제조품이 제공된다. 상기 제조품은 용기, 라벨 및 포장 삽입물을 포함한다. 적합한 용기는, 예를 들어 병, 바이알, 시린지 등을 포함한다. 용기는 다양한 물질, 예컨대 유리 또는 플라스틱으로부터 형성될 수 있다. 용기는 상태를 치료하는데 효과적인 조성물을 보유하고, 멸균 접근 포트가 있을 수 있다 (예를 들어, 용기는 피하주사 바늘이 관통가능한 마개가 있는 정맥내 용액 백 또는 바이알일 수 있음). 조성물 중 적어도 1종의 활성제는 항-VEGF 항체이다. 용기 상의 또는 용기와 연관된 라벨은 조성물이 선택된 상태를 치료하는데 사용된다는 것을 나타낸다. 제조품은 제약상-허용되는 완충제, 예컨대 포스페이트-완충 염수, 링거액 및 덱스트로스 용액을 포함하는 제2 용기를 추가로 포함할 수 있다. 이는 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘 및 시린지를 포함하여, 상업적 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다. 또한, 제조품은, 예를 들어 대상체에게 항-VEGF 항체 조성물 및 화학요법제, 예를 들어 테모졸로미드를 투여하기 위해 조성물의 사용자에게 설명하는 것을 포함하는, 사용 지침서를 갖는 포장 삽입물을 포함한다. 포장 삽입물은 임의로 실시예 1에서 확인된 결과를 일부 또는 전부 함유할 수 있다.

항-VEGF 항체는 단독으로 또는 다른 항암 치료제 화합물과 조합하여 키트로서 패키징할 수 있다. 키트는 대상체에게 단위 용량을 투여하는데 도움을 주는 임의적인 성분, 예컨대 분말 형태를 재구성하기 위한 바이알, 주사용 시린지, 주문제작된 IV 전달 시스템, 흡입기 등을 포함할 수 있다. 추가로, 단위 용량 키트는 조성물의 제조 및 투여를 위한 지침서를 함유할 수 있다. 특정 실시양태에서, 지침서는, 예를 들어 대상체에게 항-VEGF 항체 조성물 및 화학요법제, 예를 들어 테모졸로미드를 투여하기 위해 조성물의 사용자에게 지시하는 것을 포함하는 사용 지침서를 포함한다. 지침서는 임의로 실시예 1에서 확인된 결과를 일부 또는 전부 함유할 수 있다. 키트는 1명의 대상체를 위한 1회용 단위 용량으로서 제조될 수도 있고 특정한 대상체를 위해 여러회 사용하도록 (일정한 용량으로 투여되도록, 또는 요법이 진행됨에 따라 개별 화합물의 효력이 달라질 수 있게 투여되도록) 제조될 수도 있으며, 또는 키트는 다수의 대상체에게 투여하는데 적합한 다중 용량을 함유할 수 있다 ("벌크 패키징"). 키트 성분은 카툰, 블리스터 팩, 병, 튜브 등에 조립될 수 있다.

실시예

다음은 본 발명의 방법 및 조성물의 실시예이다. 상기 제공된 일반적 설명에 따라 다양한 다른 실시양태를 실시할 수 있는 것으로 이해된다.

실시예 1 - 교모세포종으로 신규 진단된 환자에서의 베바시주맙, 테모졸로미드 및 방사선요법 후, 베바시주맙 및 테모졸로미드 대 위약, 테모졸로미드 및 방사선요법에 이어서, 위약 및 테모졸로미드의 무작위 이중 맹검 위약 대조 다기관 III상 시험 (아바글리오)

아바글리오 시험은 신규 진단된 교모세포종에 대한 베바시주맙과 테모졸로미드 및 방사선요법의 조합의 효능 및 안전성을 평가하였다. 이 연구는 베바시주맙 + 화학요법 대 화학요법 단독의 전향적 무작위 이중 맹검 위약 대조 III상 평가로서 설계하였다. 선정되기 위해서는, 환자는 외과적 절제 또는 생검 후 확립된 조직 진단을 통해 교모세포종을 신규 진단받았어야 한다. 화학요법 및 방사선요법에 베바시주맙을 추가함으로써, 본 아바글리오 시험은 제한된 치료 옵션을 갖고 특히 불량한 예후에 직면한 상기 환자 군에 있어 전체 생존 (OS) 및 무진행 생존 (PFS)을 개선하는 것을 목표로 하였다. 주요 목적은 테모졸로미드 및 방사선요법만으로 무작위화되거나 또는 테모졸로미드 및 방사선요법 + 베바시주맙에 무작위화된 환자의 OS와 PFS를 비교하는 것이었다.

연구 설계 - 이 시험은 3가지 단계 (병행, 유지 및 단독요법) 및 2가지의 (2) 치료군으로 이루어졌다: 테모졸로미드 및 방사선요법 (치료군 1) 및 테모졸로미드 및 방사선요법 + 베바시주맙 (치료군 2). 환자는 치료군 중 어느 하나에 무작위로 할당 (1:1)되었고, 도 1을 참조한다.

치료군 1 (화학요법 및 방사선요법 단독): 선정 환자는 매 2주마다 IV로의 10 mg/kg 베바시주맙과 조합하여 1일째부터 마지막 날까지 6주 동안 주 5일 2 Gy 방사선요법을 받고, 6주 동안 매일 경구로 75 mg/m² 테모졸로미드 (TMZ)를 받았다. 치료 중단 4주 후에, 선정 환자는 매 2주마다 IV로의 10 mg/kg 위약과 조합하여 매 4주 스케줄의 1-5일째 150-200 mg/m² TMZ의 6사이클을 받았다. TMZ를 150 mg/m²용량으로 시작하여 경구로 투여하였고, 이를 증가시킬 수 있었다. 이어서, 위약 단독요법 (매 3주마다 15 mg/kg)을 질환 진행까지 계속하였다.

질환 진행시, 환자를 연구자의 판단에 따라 치료하였다.

치료군 2 (TMZ 및 방사선요법 + 베바시주맙): 선정 환자는 매 2주마다 IV로의 10 mg/kg 베바시주맙과 조합하여 1일째부터 마지막 날까지 6주 동안 주 5일 2 Gy 방사선요법을 받고, 6주 동안 매일 경구로 75 mg/m² TMZ를 받았다. 치료 중단 4주 후에, 선정 환자는 매 2주마다 IV로의 10 mg/kg 베바시주맙과 조합하여 매 4주 스케줄의 1-5일째 150-200 mg/m² TMZ의 6사이클을 받았다. TMZ를 150 mg/m²용량으로 시작하여 경구로 투여하였고, 이를 증가시킬 수 있었다. 이어서, 베바시주맙 단독요법 (매 3주마다 15 mg/kg)을 질환 진행까지 계속하였다.

질환 진행시, 환자를 연구자의 판단에 따라 치료하였다.

처음의 베바시주맙 주입은 90분에 걸쳐 진행하였고, 허용되는 한 후속적인 주입은 60분 및 이어서 30분에 걸쳐 진행하였다. 베바시주맙을 방사선요법 및 TMZ의 마지막 날, 즉 TMZ 치료 중단 시작 전날에 투여하였다.

PFS의 분석은 문헌 [Macdonald et al., Response criteria for phase II studies of supratentorial malignant glioma. J Clin Oncol 1990;8:1277-80]에 기재된 바와 같은 뇌 MRI 및 신경학적 평가를 사용한 종양 평가 맥도널드 반응 기준 (수정된 WHO 기준)에 기초하였다.

종양 평가는 기준선에서, 4주 치료 중단의 종료시에, 그 다음 매 8주마다 수행하였다.

연구 집단 - 포함 기준

18세 이상이고, 외과적 절제 또는 생검 후에 확립된 조직 진단을 통해 신규 진단된 천막상 교모세포종 (GBM)을 앓고 있는 환자. 이는 조직학적으로 검증된 GBM에 대해 갱신된 보다 낮은 등급의 성상세포종으로 사전 진단을 받은 치료-미처치 -(화학요법 및 방사선요법)- 환자를 포함한다. 환자의 WHO 수행 상태는 ≤ 2이어야 한다.

연구 집단 - 배제 기준

뇌 수술 후 MRI 상의 최근의 출혈 증거. 그러나, 수술과 관련된 출혈성 변화를 해결하는 헤모시데린의 임상적으로 무증상성인 존재, 및 종양에서 반점 출혈의 존재를 수반한 환자는 연구 내의 진입이 허락된다. 임상 시험으로의 등록을 위한 MGMT 상태에 대한 사전 집중화된 스크리닝; 교모세포종 및 저등급 성상세포종에 대한 임의의 이전 화학요법 (카르무스틴-함유 웨이퍼 (글리아델(Gliadel)®) 포함) 또는 면역요법 (백신 요법 포함); 뇌에 대한 임의의 이전 방사선요법 또는 방사선 필드에서 전위 중첩이 초래되는 이전 방사선요법; 고혈압성 발증 또는 고혈압성 뇌병증의 이전 병력; 무작위화 전의 1개월 내 NCI-CTC 기준에 따른 등급 2 이상의 객혈의 병력; 출혈성 소질 또는 응고병증의 증거 (치료적 항응고 부재 하의); 무작위화 전의 28일 내 주요 외과적 절차, 개방 생검, 두개내 생검, 뇌실복강단락술 또는 중요한 외상성 손상; 무작위화 전의 7일 내 핵 생검 (두개내 생검 제외) 또는 다른 부차적 외과적 절차. 베바시주맙/위약 투여 전 2일 내 수행하는 경우에 중심 혈관 접근 기기 (CVAD)의 배치; 무작위화 전 6개월 내 복부 누공 또는 위장 천공의 병력, 무작위화 전 6개월 내 두개내 농양의 병력; 심각한 비-치유 상처, 활성 궤양 또는 치료되지 않은 골절. 임신 또는 수유 여성. 연구 치료 시작 전 7일 내, 또는 (연구 치료 시작 전 7일 내 확실하게 하는 소변 임신 시험과 함께) 14일 내 평가된 혈청 임신 시험; 피임의 고효과성, 호르몬 수단 또는 비-호르몬 수단 (즉, 자궁 내 삽입 피임 기구)을 사용하지 않은 가임 여성 및 남성 (마지막 월경 후 <2년으로 한정 및 외과적으로 불임이 아님); 무작위화 전 ≤6개월 내 졸중 또는 일과성 허혈 발작 (TIA)의 병력; 불충분하게 제어된 고혈압 (지속된 심장수축기 >150 mmHg 및/또는 심장 확장기 >100 mmHg) 또는 무작위화 전 ≤6개월 내 수술 회복이 요구되는 대동맥류 또는 최근 말초 동맥 혈전증을 포함하는 유의한 혈관 질환. 무작위화 전 ≤6개월 내 심근경색 또는 불안정형 협심증 또는 뉴욕 심장 학회 (NYHA) 등급 II 또는 더 큰 울혈성 심부전 (CHF); 연구 약물 또는 부형제 중 임의의 것에 대해 기지의 과민증.

결과

선정 환자는 교모세포종 (WHO 수행 상태 ≤ 2)을 신규 진단받았다. 외과적 절제 후에, 환자는 테모졸로미드와 방사선 및 위약 또는 테모졸로미드와 방사선 및 베바시주맙을 이용한 병행 요법 후, 28일의 치료 중단, 10 mg/kg 베바시주맙 또는 위약을 테모졸로미드와 조합하여 매 2주마다 투여받는 유지 요법, 및 15 mg/kg 베바시주맙 또는 위약을 이용하여 질환 진행 또는 허용되지 않는 독성까지 매 3주마다 투여하는 단독요법으로 무작위화하였다. 위약 치료군의 환자는 진행시에 연구자의 판단에 따라 치료하였다. 이 설계는 테모졸로미드 + 방사선요법 + 위약으로 7.0개월 및 테모졸로미드 + 방사선요법 + 베바시주맙으로 9.1개월의 중앙 PFS를 상정하여 677개의 사건 후 양측 로그-순위 검정 및 α=0.01로써 PFS 위험 비 (HR) 0.769를 검출하는 80% 검정력을 제공하였다.

2009년 6월과 2011년 3월 사이에, 921명의 환자가 테모졸로미드와 방사선 및 위약 또는 테모졸로미드와 방사선 및 베바시주맙을 받도록 무작위화하였다. 추적 관찰 중앙값은 위약 + 테모졸로미드 + 방사선요법에 대해 13.7개월 및 베바시주맙 + 테모졸로미드 + 방사선요법에 대해 14.4개월이었다.

표 1: 아바글리오 III상 결과

도 2는 아바글리오의 PFS에 대한 카플란 마이어 곡선을 나타낸 것이다.

아바글리오는 신규 진단된 교모세포종에서의 베바시주맙의 최초의 무작위화 시험이었다. 상기 표 1에 나타낸 바와 같이, 화학요법과 조합한 베바시주맙 및 방사선요법은 방사선요법과 조합한 화학요법에 비해 PFS에서의 통계적으로 유의하고 임상적으로 의미있는 개선을 제공하였다. 주의깊은 환자 스크리닝은 베바시주맙 유해 사건의 위험을 최소화하였다. 베바시주맙으로, 기준선에서 스테로이드 사용 중인 환자의 66%가 위약을 사용 중인 환자의 47%에 비해 그의 무진행 생존 간격의 일부 동안 스테로이드를 중지할 수 있었다. 하기 표 2에 나타낸 바와 같이, 첫번째 줄의 테모졸로미드 + 방사선요법에 대한 베바시주맙의 추가는 ORR을 유의하게 개선시켰다.

표 2

상기는 화학요법 및 방사선요법에 비하여 베바시주맙, 화학요법 및 방사선요법의 조합의 이익을 입증하는 최초의 교모세포종의 III상 시험이다.

SEQUENCE LISTING <110> Genentech, Inc. et al. <120> Combination Therapy For the Treatment of Glioblastoma <130> P4946R1-WO <141> 2013-08-06 <150> US 61/760,763 US 61/714,438 US 61/680,672 <151> 2013-02-05 2012-10-16 2012-08-07 <160> 2 <210> 1 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> sequence is synthesized <400> 1 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 1 5 10 15 Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser 20 25 30 Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys 35 40 45 Val Leu Ile Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 80 85 90 Tyr Ser Thr Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu 95 100 105 Ile Lys Arg <210> 2 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> sequence is synthesized <400> 2 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr 20 25 30 Asn Tyr Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 35 40 45 Glu Trp Val Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr 50 55 60 Ala Ala Asp Phe Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser 65 70 75 Lys Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 80 85 90 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser 95 100 105 Ser His Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 110 115 120 Val Ser Ser

Claims

교모세포종으로 진단된 환자에게 유효량의 항-VEGF 항체, 유효량의 화학요법제 및 유효량의 방사선요법을 포함하는 요법을 투여하는 것을 포함하고, 항-VEGF 항체 없이 상기 화학요법제를 받는 교모세포종 환자와 비교하여 상기 환자의 무진행 생존 기간 중앙값(median progression-free survival time)을 연장하는 상기 환자를 치료하는 방법.
제1항에 있어서, 상기 환자의 WHO 수행 상태가 ≤2인 방법.
제1항에 있어서, 화학요법제가 테모졸로미드인 방법.
제3항에 있어서, 테모졸로미드가 150 mg/m²로 투여되는 것인 방법.
제3항에 있어서, 테모졸로미드가 200 mg/m²로 투여되는 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 항-VEGF 항체가 A4.6.1 에피토프에 결합하는 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 항-VEGF 항체가 베바시주맙인 방법.
제1항에 있어서, 상기 항-VEGF 항체가 가변 중쇄 (VH) 및 가변 경쇄 (VL)를 포함하고, 여기서 상기 VH가 서열 2의 아미노산 서열을 갖고, 상기 VL이 서열 1의 아미노산 서열을 갖는 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 항-VEGF 항체의 상기 유효량이 매 2주마다 정맥내로 10 mg/kg인 방법.
제1항에 있어서, 상기 항-VEGF 항체의 상기 유효량이 매 3주마다 정맥내로 15 mg/kg인 방법.
제1항에 있어서, 상기 유효량의 상기 항-VEGF 항체를 처음에 정맥내로 90분에 걸쳐 투여하고, 후속적으로 60분 및 이어서 30분에 걸쳐 주입하는 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 항-VEGF 항체를 상기 환자에게 제1 사이클에서 첫번째로 투여하는 것인 방법.
제9항에 있어서, 상기 항-VEGF 항체의 후속 투여가 상기 화학요법제 전 또는 후인 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 항-VEGF 항체가 상기 화학요법제와 병행하여 투여되는 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 무진행 생존 기간 중앙값이, 항-VEGF 항체 없이 상기 화학요법제를 받은 교모세포종 환자와 비교하여 0.64와 동등한 위험 비 (HR)로 약 4.4개월만큼 연장되는 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 무진행 생존 기간 중앙값이, 항-VEGF 항체 없이 상기 화학요법제를 받은 교모세포종 환자와 비교하여 0.64와 동등한 위험 비 (HR)로 적어도 4개월 또는 그 초과만큼 연장되는 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 무진행 생존 기간 중앙값이, 항-VEGF 항체 없이 상기 화학요법제를 받은 교모세포종 환자와 비교하여 약 0.55 내지 약 0.74인 위험 비 (HR)로 약 4.4개월만큼 연장되는 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 무진행 생존 기간 중앙값이, 항-VEGF 항체 없이 상기 화학요법제를 받은 교모세포종 환자와 비교하여 약 0.55 내지 약 0.74인 위험 비 (HR)로 적어도 4개월 또는 그 초과만큼 연장되는 것인 방법.
제15항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자가 65세 미만인 방법.
제15항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자가 65세 이상인 방법.
에피토프 A4.6.1에 본질적으로 결합하는 항-VEGF 항체, 화학요법제 및 환자에게 유효량의 항-VEGF 항체 및 화학요법제를 투여하는 것을 포함하는 교모세포종으로 진단된 환자를 치료하기 위한 지침서를 갖는 포장 삽입물 또는 라벨을 포함하며, 여기서 상기 환자는 2개 이하의 이전 항암 요법을 받은 환자이고, 상기 치료는 항-VEGF 항체 없이 상기 화학요법제를 받은 교모세포종 환자와 비교하여 상기 환자의 무진행 생존 기간 중앙값을 연장하는 것인, 키트.
제21항에 있어서, 상기 항-VEGF 항체가 베바시주맙인 키트.