KR20150008180A

KR20150008180A - 인플루엔자 중화를 위한 작용제

Info

Publication number: KR20150008180A
Application number: KR1020147034586A
Authority: KR
Inventors: 에스. 라구람; 비스와나탄 사시세크하란; 벤카타라마난 사운다라라잔; 람 사시세크하란; 비드야 수브라마니안; 칸난 타라카라만
Original assignee: 메사츄세츠 인스티튜트 어브 테크놀로지
Priority date: 2012-05-10
Filing date: 2013-03-14
Publication date: 2015-01-21
Also published as: JP6431477B2; SG10201807059QA; US9982037B2; CA2871160C; US20130302348A1; CN104507500A; IL235237A0; US9683030B2; JP2018118991A; US20170306003A1; WO2013169377A1; EP3492101A3; US20190062407A1; AU2013260123A1; EP3492101A2; US10538578B2; KR102122618B1; HK1207970A1; EP2846833A1; BR112014027991A2

Abstract

본 발명은 다수의 인플루엔자 균주에 결합하는 항체 (가령, 단일클론 항체, 인간 항체, 인간화된 항체 등)를 제공한다. 이러한 항체는 예를 들어, 인플루엔자의 예방, 치료, 진단, 및/또는 연구에서 유용하다.

Description

인플루엔자 중화를 위한 작용제{AGENTS FOR INFLUENZA NEUTRALIZATION}

관련된 출원에 대한 교차-참조

본 출원은 2012년 5월 10일에 제출된, 미국 가출원 번호 제61/645,453호의 35 U.S.C. § 119(e) 하에 이익을 주장하며, 이의 내용은 이들 전체로 참조로서 본 명세서에 편입된다.

정부 지원

본 발명은 국립 보건원에 의해 지급된 수여 번호 제R37 GM057073호 하에 정부 지원으로 이루어졌다. 정부는 본 발명에서 특정한 권리를 갖는다.

서열 리스트

본 명세서는 서열 리스트를 참조한다 (2013년 3월 14일에 "Sequence Listing.txt"라는 명칭의 .txt 파일로서 전자적으로 제출됨). .txt 파일은 2013년 3월 11일에 만들어졌고 39.3 kb 크기이다. 서열 리스트의 전체 내용은 참조로서 본 명세서에 편입된다.

발명의 배경

인플루엔자 바이러스는 매년 300,000건 이상의 사망의 원인이 되는 세계적인 건강 위협이다. 상기 바이러스는 가속화된 항원소변이(antigenic drift), 도메인 재배열(domain reassortment), 유전적 재조합, 및 글리코단백질의 표면의 글리코실화 기반 마스킹(masking)의 조합에 관여함으로써 면역 인식을 회피한다. 바이러스의 이러한 신속한 변이 능력은 현재의 H1N1 '돼지 독감' 대유행병의 증가 위협 그리고 매우 병원성의 조류 H5N1 '조류 독감' 인플루엔자 균주로의 최근 감염에 대해 걱정스러울 정도로 전세계적인 빈발의 맥락에서 특히 악화된다. (Khanna et al., Journal of Biosciences,. 33(4):475, 2008, Soundararajan et al., Nature Biotechnology 27:510, 2009). 추가적으로, 지난 세기의 주요 독감 대유행병 중 두 가지는 인간 감염을 허용하도록 그들의 유전적 구성이 변화된 조류 독감 바이러스로부터 비롯되었다.

효과적인 항-인플루엔자 예방제 및 치료제의 개발이 필요하다. 추가적으로, 이들 인플루엔자 바이러스의 진화에서 고도의 예측불능을 고려해볼 때, 교차-균주(cross-strain) 효과적 (가령, "전반적인" 또는 "광범위 스펙트럼(broad spectrum)") 항-인플루엔자 예방제 및 치료제의 개발이 특히 필요하다. 이러한 효과적인 항-인플루엔자 작용제, 그리고 특히 이러한 전반적인 또는 광범위 스펙트럼 항-인플루엔자 작용제는 순환내 특이적인 '계절성' 바이러스 균주를 표적하도록 고안된 백신을 대체하거나 증대시킬 수 있었다 (Ekiert et al., Science, 324(5924):246, 2009 및 Sui et al., Nat Struct Mol Biol. 16(3):265, 2009). 대안으로 또는 추가적으로, 현재 항-바이러스 요법을 대체하거나 또는 증대시킬 수 있는 효과적인 항-인플루엔자 예방제 또는 치료제의 개발이 필요하다. 이러한 작용제의 중요성은 현재 항 바이러스제 타미플루/리렌자(Tamiflu/Relenza) (NA-저해제) 및 아만타틴/리만타딘 (MP-2 저해제)에 대한 약물 저항성이 나타남으로써 강조된다 (Collins et al., Nature 453:1258, Stouffer et al., Nature, 451:596, 2008, Pielak et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 106:7379, 2009). 예를 들면, 2011/2012 독감 계절에 98% 이상 및 100%의 H1N1 균주는 각각, 타미플루 및 아다만탄 유도체에 대해 저항성이 있다.

요약

본 발명은 새로운 인플루엔자 결합제를 제공한다. 여러 가지 중에서도, 본 발명은 다수의 인플루엔자 균주에 결합하는 인플루엔자 결합제를 제공한다. 본 발명은 구체적으로, 인플루엔자 헤마글루티닌 (HA)에 결합하는 결합제를 제공한다. 본 발명은 특정하게, 인플루엔자 HA에 결합하는 특정한 항체를 제공한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 항체는 특정한 HA 에피토프(epitope) 및/또는 군 1 바이러스, 군 2 바이러스, 또는 몇몇 구체예에서는 둘 모두로부터의 HA에 결합하는 것으로 특징된다. 몇몇 구체예에서, 제공된 항체는 하위유형 H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15, H16, 및 이의 조합의 HA 폴리펩티드로 구성된 군에서 선택된 HA에 결합한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 항체는 군 1 바이러스, 군 2, 바이러스, 또는 몇몇 구체예에서는 둘 모두에 의한 감염을 중화시키는 능력으로 특징된다. 이러한 몇몇 구체예에서, 이러한 제공된 항체는 본 명세서에서 설명된 및/또는 예시화된 바와 같은 범위 내에서 중화 IC₅₀ (ug/ml)을 나타낸다. 몇몇 구체예에서, 이러한 제공된 항체는 하계(lower bound)가 약 0.1 ug/ml이고 상계(upper bound)가 약 10 ug/ml인 중화 IC₅₀ (ug/ml)을 나타낸다. 몇몇 구체예에서, 이러한 제공된 항체는 하계가 0.05, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0 ug/ml 또는 그 이상으로 구성된 군에서 선택되고, 상계는 하계보다 더 높으며 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0, 9.5, 10.0 ug/ml 또는 그 이상으로 구성된 군에서 선택되는 중화 IC₅₀ (ug/ml)을 나타낸다.

몇몇 구체예에서, 이러한 제공된 항체는 2000nM 미만, 1500nM 미만, 1000nM 미만, 500nM 미만, 250nM 미만, 225nM 미만, 200nM 미만, 175nM 미만, 150nM 미만, 125nM 미만, 100nM 미만, 75nM 미만, 또는 50nM 미만의 K_D (nM)로 인플루엔자 HA (가령, 군 1 및/또는 군 2 하위유형)에 결합하는 것을 보여준다.

몇몇 구체예에서, 이러한 제공된 항체는 하계가 약 0.01x10⁵ M^-1s^-1이고 상계가 약 1.0x10⁶ M^-1s^-1인 K_a (M^-1s^-1)로 인플루엔자 HA에 결합하는 것을 보여준다. 이러한 제공된 항체는 하계가 0.01x10⁵, 0.02x10⁵, 0.04x10⁵, 0.04x10⁵, 0.08x10⁵, 0.1x10⁵, 0.2x10⁵, 0.4x10⁵, 0.6x10⁵, 0.8x10⁵, 1.0x10⁵, 1.2x10⁵, 1.4x10⁵, 1.6x10⁵, 1.8x10⁵, 2.0x10⁵ M^-1s^-1 또는 그 이상으로 구성된 군에서 선택되고, 상계는 하계보다 더 높으며 1.0x10⁵, 1.5x10⁵, 2.0x10⁵, 2.5x10⁵, 3.0x10⁵, 3.5x10⁵, 4.5x10⁵, 5.0x10⁵, 5.5x10⁵, 6.0x10⁵, 6.5x10⁵, 7.0x10⁵, 7.5x10⁵, 8.0x10⁵, 8.5x10⁵, 9.0x10⁵, 9.5x10⁵, 1.0x10⁶ 1.1x10⁶, 1.2x10⁶, 1.3x10⁶, 1.4x10⁶, 1.5x10⁶, 1.6x10⁶, 1.7x10⁶, 1.8x10⁶, 1.9x10⁶ M^-1s^-1 또는 그 이상으로 구성된 군에서 선택되는 K_a (M^-1s^-1)로 인플루엔자 HA와 결합하는 것을 보여준다.

몇몇 구체예에서, 이러한 제공된 항체는 하계가 약 0.01x10⁵ s^-1이고 상계가 약 1.0x10⁶ s^-1인 K_d (s^-1)로 인플루엔자 HA에 결합하는 것을 보여준다. 이러한 제공된 항체는 하계가 0.01x10⁵, 0.02x10⁵, 0.04x10⁵, 0.04x10⁵, 0.08x10⁵, 0.1x10⁵, 0.2x10⁵, 0.4x10⁵, 0.6x10⁵, 0.8x10⁵, 1.0x10⁵, 1.2x10⁵, 1.4x10⁵, 1.6x10⁵, 1.8x10⁵, 2.0x10⁵ s^-1 또는 그 이상으로 구성된 군에서 선택되고, 상계는 하계보다 더 높으며 1.0x10⁵, 1.5x10⁵, 2.0x10⁵, 2.5x10⁵, 3.0x10⁵, 3.5x10⁵, 4.5x10⁵, 5.0x10⁵, 5.5x10⁵, 6.0x10⁵, 6.5x10⁵, 7.0x10⁵, 7.5x10⁵, 8.0x10⁵, 8.5x10⁵, 9.0x10⁵, 9.5x10⁵, 1.0x10⁶ 1.1x10⁶, 1.2x10⁶, 1.3x10⁶, 1.4x10⁶, 1.5x10⁶, 1.6x10⁶, 1.7x10⁶, 1.8x10⁶, 1.9x10⁶ s^-1 또는 그 이상으로 구성된 군에서 선택되는 K_a (s^-1)로 인플루엔자 HA와 결합하는 것을 보여준다.

본 발명은 특정한 기능적 속성 (가령, HA 결합, 중화, 하위유형 특이성 등)을 부여하는 특정한 제공 항체의 구조적 특징을 또한 정의한다. 따라서 본 발명은 이들 제공된 항체의 이러한 구조적 특징, 그리고 몇몇 구체예에서 또한 기능적 속성을 공유하는 결합제를 제공한다. 예를 들면, 몇몇 구체예에서, 본 발명은 본 명세서의 표 2 및/또는 3에서 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 특정한 제공 항체의 구조적 특징, 및 기능적 속성을 공유하는 결합제를 제공한다.

몇몇 구체예에서, 이러한 특정한 제공 항체의 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호: 1-60)에서의 상응하는 CDR 또는 FR과 적어도 80% 서열이 동일한 하나 이상의 CDR 또는 하나 이상의 FR을 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 특정한 제공 항체의 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호: 1-60)에서의 상응하는 CDR 또는 FR과 서열이 동일한 하나 이상의 CDR 및/또는 하나 이상의 FR을 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 특정한 제공 항체의 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호: 1-60)에서 제시된 것들과 서열이 동일한 CDR과 FR을 포함한다.

몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 CDR과 FR 서열 요소를 포함하고, 이들 각각은 표 2 및/또는 표 3 (서열 번호:1-60)에서 제시된 참조 CDR 또는 FR 서열 요소와 동일하지만 상기 참조 서열 요소에 관하여 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다는 것은 제외하며, 이때 포함된 CDR과 FR 서열 요소는 표 2와 3 (서열 번호: 1-60)에서의 상응하는 CDR과 FR 참조 서열 요소와 비교하여, CDR과 FR 서열에서 둘 다 단지 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1개의 치환만 함유한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호: 1-60)에서의 상응하는 CDR과 FR 참조 서열 요소와 비교하여 둘 다 단지 18개의 치환만 함유하는 CDR과 FR 서열 요소를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호: 1-60)에서의 상응하는 CDR과 FR 참조 서열 요소와 비교하여 둘 다 단지 15개의 치환만 함유하는 CDR과 FR 서열을 포함한다.

몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 FR 서열 요소를 포함하고, 이는 표 2 및/또는 표 3 (서열 번호:1-60)에서 제시된 참조 FR 서열 요소와 동일하지만 상기 참조 서열 요소에 관하여 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다는 것은 제외하며, 이때 포함된 FR 서열 요소는 표 2와 3 (서열 번호: 1-60)에서의 상응하는 FR 참조 서열 요소와 비교하여, FR 서열에서 단지 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1개의 치환만 함유한다.

몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 CDR 서열 요소를 포함하고, 이는 표 2 및/또는 표 3 (서열 번호:1-60)에서 제시된 참조 CDR 서열 요소와 동일하지만 상기 참조 서열 요소에 관하여 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다는 것은 제외하며, 이때 포함된 CDR 서열 요소는 표 2와 3 (서열 번호: 1-60)에서의 상응하는 CDR 참조 서열 요소와 비교하여, CDR 서열에서 단지 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1개의 치환만 함유한다.

몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 VH 서열 요소를 포함하고, 이는 표 2 및/또는 표 3 (서열 번호:1-60)에서 제시된 참조 VH 서열 요소와 동일하지만 상기 참조 서열 요소에 관하여 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다는 것은 제외하며, 이때 포함된 VH 서열 요소는 표 2와 3 (서열 번호: 1-60)에서의 상응하는 VH 참조 서열 요소와 비교하여, CDR 서열에서 단지 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1개의 치환만 함유한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호: 1-60)에서의 상응하는 VH 참조 서열 요소와 비교하여, VH-1, VH-2, VH-3, VH-4, VH-5, VH-6, VH-7, VH-8, VH-9, VH-10, VH-11, VH-12, VH-13, VH-14, VH-15, VH-16 또는 이의 단편 중 어느 하나에 상응하는 구조적 요소를 포함한다.

몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 VL 서열 요소를 포함하고, 이는 표 2 및/또는 표 3 (서열 번호:1-60)에서 제시된 참조 VL 서열 요소와 동일하지만 상기 참조 서열 요소에 관하여 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다는 것은 제외하며, 이때 포함된 VL 서열 요소는 표 2와 3 (서열 번호: 1-60)에서의 상응하는 VH 참조 서열 요소와 비교하여 CDR 서열에서 단지 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1개의 치환만 함유한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호: 1-60)에서의 상응하는 VL 참조 서열 요소와 비교하여 VL-1, VL-2, VL-3, VL-4, VL-5, VL-6, VL-7, VL-8, VL-9, VL-10, VL-11, 또는 이의 단편 중 어느 하나에 상응하는 구조적 요소를 포함한다.

몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 VL-1, VL-2, VL-3, VL-4, VL-5, VL-6, VL-7, VL-8, VL-9, VL-10, VL-11, 또는 이의 단편 중 어느 하나와 조합된 VH-1, VH-2, VH-3, VH-4, VH-5, VH-6, VH-7, VH-8, VH-9, VH-10, VH-11, VH-12, VH-13, VH-14, VH-15, VH-16 또는 이의 단편 중 어느 하나에 상응하는 구조적 요소를 포함한다. 몇몇 구체예에서, VH-1 (서열 번호:1)은 VL-1 (서열 번호:33)과 조합된다.

몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2 및/또는 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR1 서열 요소와 적어도 65%, 70% 초과, 75% 초과, 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 95% 초과, 또는 99% 초과의 동일성을 보이는 상보성 결정 영역 (CDR) 1 서열 요소를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR1 서열 요소와 비교하여 2개 이상의 아미노산 치환을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 1 서열 요소를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR1 서열 요소와 비교하여 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 1 서열 요소를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR1 서열 요소와 비교하여 적어도 2개의 아미노산 치환을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 1 서열 요소를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR1 서열 요소와 비교하여 2개 미만의 아미노산 치환을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 1 서열 요소를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR1 서열 요소 중 하나의 것과 동일한 아미노산 서열을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 1 서열 요소를 포함한다.

몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2 및/또는 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR2 서열 요소와 적어도 65%, 70% 초과, 75% 초과, 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 95% 초과, 또는 99% 초과의 동일성을 보이는 상보성 결정 영역 (CDR) 2 서열 요소를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR2 서열 요소와 비교하여 2개 이상의 아미노산 치환을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 2 서열 요소를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR2 서열 요소와 비교하여 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 2 서열 요소를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR2 서열 요소와 비교하여 적어도 2개의 아미노산 치환을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 2 서열 요소를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR2 서열 요소와 비교하여 2개 미만의 아미노산 치환을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 2 서열 요소를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR2 서열 요소 중 하나의 것과 동일한 아미노산 서열 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 2 서열 요소를 포함한다.

몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2 및/또는 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR3 서열 요소와 적어도 65%, 70% 초과, 75% 초과, 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 95% 초과, 또는 99% 초과의 동일성을 보이는 상보성 결정 영역 (CDR) 3 서열 요소를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR3 서열 요소와 비교하여 2개 이상의 아미노산 치환을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 3 서열 요소을 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR3 서열 요소와 비교하여 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 3 서열 요소를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR3 서열 요소와 비교하여 적어도 2개의 아미노산 치환을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 3 서열 요소를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR3 서열 요소와 비교하여 2개 미만의 아미노산 치환을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 3 서열 요소를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR3 서열 요소 중 하나의 것과 동일한 아미노산 서열을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 3 서열 요소를 포함한다.

몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2 (서열 번호:1-16)에서의 참조 VH 프레임워크 영역 서열 요소와 65% 초과, 70% 초과, 75% 초과, 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 95% 초과, 또는 99% 초과의 동일성 퍼센트를 보이는 VH 프레임워크 영역 서열 요소를 포함한다.

몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 3 (서열 번호:33-43)에서의 참조 VL 프레임워크 영역 서열 요소와 65% 초과, 70% 초과, 75% 초과, 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 95% 초과, 또는 99% 초과의 동일성 퍼센트를 보이는 VL 프레임워크 영역 서열 요소를 포함한다.

몇몇 구체예에서, 본 발명은 이러한 특정한 제공 항체의 이러한 구조적 특징을 포함하는 결합제를 제공하고, 따라서 제공된 결합제는 군 1 하위유형, 군 2 하위유형, 및 이의 조합으로 구성된 군에서 선택된 인플루엔자 HA에 결합하는 기능적 속성을 특정한 제공 항체와 공유한다.

몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 특정한 제공 항체에 대해 본 명세서에서 제시된 바와 같은 범위 내에서 인플루엔자 중화 IC₅₀ (ug/ml)을 나타낸다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 군 1 하위유형, 군 2 하위유형, 또는 둘 모두의 인플루엔자 바이러스에 대해 이러한 IC₅₀ (ug/ml)을 나타낸다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 본 명세서에서 설명된 및/또는 예시화된 바와 같은 범위 내에서 인플루엔자 중화 IC₅₀ (ug/ml)의 기능적 속성으로 특징된다. 몇몇 구체예에서, 이러한 제공된 결합제는 하계가 약 0.1 ug/ml이고 상계가 약 10 ug/ml인 중화 IC₅₀ (ug/ml)을 나타낸다. 몇몇 구체예에서, 이러한 제공된 결합제는 하계가 0.05, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0 ug/ml 또는 그 이상으로 구성된 군에서 선택되고, 상계는 하계보다 더 높으며 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0, 9.5, 10.0 ug/ml 또는 그 이상으로 구성된 군에서 선택되는 중화 IC₅₀ (ug/ml)을 나타낸다.

몇몇 구체예에서, 이러한 제공된 결합제는 2000nM 미만, 1500nM 미만, 1000nM 미만, 500nM 미만, 250nM 미만, 225nM 미만, 200nM 미만, 175nM 미만, 150nM 미만, 125nM 미만, 100nM 미만, 75nM 미만, 또는 50nM 미만의 K_D (nM)로 인플루엔자 HA (가령, 군 1 및/또는 군 2 하위유형)에 결합하는 것을 보여준다.

몇몇 구체예에서, 이러한 제공된 결합제는 하계가 약 0.01x10⁵ M^-1s^-1이고 상계가 약 1.0x10⁶ M^-1s^-1인 K_a (M^-1s^-1)로 인플루엔자 HA에 결합하는 것을 보여준다. 이러한 제공된 항체는 하계가 0.01x10⁵, 0.02x10⁵, 0.04x10⁵, 0.04x10⁵, 0.08x10⁵, 0.1x10⁵, 0.2x10⁵, 0.4x10⁵, 0.6x10⁵, 0.8x10⁵, 1.0x10⁵, 1.2x10⁵, 1.4x10⁵, 1.6x10⁵, 1.8x10⁵, 2.0x10⁵ M^-1s^-1 또는 그 이상으로 구성된 군에서 선택되고 상계는 하계보다 더 높으며 1.0x10⁵, 1.5x10⁵, 2.0x10⁵, 2.5x10⁵, 3.0x10⁵, 3.5x10⁵, 4.5x10⁵, 5.0x10⁵, 5.5x10⁵, 6.0x10⁵, 6.5x10⁵, 7.0x10⁵, 7.5x10⁵, 8.0x10⁵, 8.5x10⁵, 9.0x10⁵, 9.5x10⁵, 1.0x10⁶ 1.1x10⁶, 1.2x10⁶, 1.3x10⁶, 1.4x10⁶, 1.5x10⁶, 1.6x10⁶, 1.7x10⁶, 1.8x10⁶, 1.9x10⁶ M^-1s^-1 또는 그 이상으로 구성된 군에서 선택되는 K_a (M^-1s^-1)로 인플루엔자 HA에 결합하는 것을 보여준다.

몇몇 구체예에서, 이러한 제공된 결합제는 하계가 약 0.01x10⁵ s^-1이고 상계가 약 1.0x10⁶ s^-1인 K_d (s^-1)로 인플루엔자 HA에 결합하는 것을 보여준다. 이러한 제공된 항체는 하계가 0.01x10⁵, 0.02x10⁵, 0.04x10⁵, 0.04x10⁵, 0.08x10⁵, 0.1x10⁵, 0.2x10⁵, 0.4x10⁵, 0.6x10⁵, 0.8x10⁵, 1.0x10⁵, 1.2x10⁵, 1.4x10⁵, 1.6x10⁵, 1.8x10⁵, 2.0x10⁵ s^-1 또는 그 이상으로 구성된 군에서 선택되고, 상계는 하계보다 더 높으며 1.0x10⁵, 1.5x10⁵, 2.0x10⁵, 2.5x10⁵, 3.0x10⁵, 3.5x10⁵, 4.5x10⁵, 5.0x10⁵, 5.5x10⁵, 6.0x10⁵, 6.5x10⁵, 7.0x10⁵, 7.5x10⁵, 8.0x10⁵, 8.5x10⁵, 9.0x10⁵, 9.5x10⁵, 1.0x10⁶ 1.1x10⁶, 1.2x10⁶, 1.3x10⁶, 1.4x10⁶, 1.5x10⁶, 1.6x10⁶, 1.7x10⁶, 1.8x10⁶, 1.9x10⁶ s^-1또는 그 이상으로 구성된 군에서 선택되는 K_a (s^-1)로 인플루엔자 HA에 결합하는 것을 보여준다.

몇몇 구체예에서, 본 발명은 이러한 특정한 제공 항체의 이러한 구조적 특징을 포함하는 결합제를 제공하고, 따라서 제공된 결합제는 적어도 하나의 HA 폴리펩티드에 결합하기 위해 표 2와 3 (서열 번호: 1-60)에 열거된 하나 이상의 항체와 경쟁하는 기능적 속성을 특정한 제공 항체와 공유한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 다수의 상이한 HA에 결합하기 위해 표 2와 3 (서열 번호: 1-60)에서 열거된 하나 이상의 항체와 경쟁하는 이러한 구조적 특징을 가지며, 여기서 다수의 상이한 HA 폴리펩티드는 적어도 2개의 상이한 HA 하위유형 유전자형에서 발견되는 HA 폴리펩티드 단백질을 포함한다.

몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 하나 이상의 하위유형 H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15, 및/또는 H16에 결합하는 기능적 속성으로 특징된다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 하위유형 H1, H3, H5, H7, 및 H9의 적어도 2개의 HA 폴리펩티드에 결합한다.

몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 HA 폴리펩티드의 MPER 영역에서 하나 이상의 에피토프에 결합하는 기능적 속성으로 특징된다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 이의 글리코실화와 관계없이 HA 폴리펩티드의 MPER 영역에서 하나 이상의 에피토프에 결합하는 기능적 속성으로 특징된다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 HA 폴리펩티드의 HA-1 (머리부(head)) 및/또는 HA-2 (경상부(stalk)) 도메인에서 하나 이상의 에피토프에 결합하는 기능적 속성으로 특징된다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 HA-1/HA-2 접점 막 근위 에피토프 영역 (MPER) 내에 위치한 하나 이상의 에피토프에 결합하는 기능적 속성으로 특징된다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 정규 α-나선 및/또는 이의 인근내 잔기 내에 위치한 하나 이상의 에피토프에 결합하는 기능적 속성으로 특징된다.

몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 폴리펩티드이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 항체 또는 이의 단편이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 단일클론 항체 또는 이의 단편이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 자연-생성 항체에서 발생하는 바와 같이 디설파이드 결합에 의해 선택적으로 회합되는, 2개의 중쇄와 2개의 경쇄를 포함한다는 점에서, "전장" 항체이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 전장 항체에서 발견된 서열을 모두는 아니지만, 몇 개를 함유한다는 점에서 전장 항체의 단편이거나 또는 이를 포함한다. 예를 들어, 몇몇 구체예에서, 결합제는 Fab, Fab', F(ab')2, scFv, Fv, dsFv 디아바디(diabody), 및 Fd 단편을 포함하지만, 이에 제한되지 않는 항체 단편이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 IgG, IgM, IgA, IgD, IgE 또는 이의 단편으로 구성된 군에서 선택된 항체 클래스(class)의 구성원인 항체이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 화학적 합성으로 생성된 항체이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 세포에 의해 생성된 항체이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 예를 들어 인간 불변 및/또는 가변 영역 도메인을 가진, 생쥐, 랫트, 말, 돼지, 또는 다른 종으로부터의 키메라 항체이거나 또는 이를 포함한다.

몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 항체 CDR를 가진 폴리펩티드이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 하나 이상의 CDR을 나타내는 데에 이용되는, 단백질 A, 리포클린, 안키린 공통 반복 도메인, 티오레독신, 아드넥틴, 안티칼린, 센티린, 아비머 도메인, 유비퀴틴, 징크 핑거 DNA-결합 단백질 (ZEP), 또는 IgNAR과 같은 스캐폴딩 도메인이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 시스틴-노트(knot) 미니단백질이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 아비바디(avibody) (디아바디, 트리바디, 테트라바디)이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 스콜피온(Scorpion)이거나 또는 이를 포함하며, 이때 스콜피온 구조는 면역글로불린 FC 도메인에 의해 분리된 2개의 결합 모이어티(moiety)를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 오로지 중쇄만 포함한 VHH (즉, 항원-특이적 VHH) 항체이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서 VHH는 라마 또는 다른 카멜리드 항체 (가령, 카멜리드 IgG2 또는 IgG3, 또는 이러한 카멜리드 Ig로부터의 CDR-디스플레잉 프레임)로부터 유래된다. 몇몇 구체예에서 이런 VHH는 상어로부터 유래된다.

몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 힌지(hinge) 영역에 의해 sFv로부터 분리된, 그들의 C-말단에서 올리고머화 도메인을 포함하는 sFv 폴리펩티드 사슬인, 하나 이상의 "미니-항체" 또는 "미니바디"이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 힌지 영역은 추가적인 디설파이드 결합에 의해 추가로 안정될 수 있거나 또는 될 수 없는, 자기-회합성(self-associating) 알파-나선 또는 류신 지퍼를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 펩티드모방체이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 미메오토프(mimeotope)이거나 또는 이를 포함한다.

몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 접합체이거나 또는 이를 포함하며, 여기서 결합제 모이어티는 접합된 모이어티를 가진 (결합제 또는 이의 기능적 부분을 포함하거나 또는 이로 구성)된다. 몇몇 구체예에서 이러한 접합 모이어티는 엔티티(entity)이다. 몇몇 구체예에서, 이러한 엔티티는 폴리펩티드, 탄수화물, 지질, 소형 유기분자, 유기 중합체, 무기 중합체, 금속, 이온, 동위원소 또는 이의 조합으로 구성된 군에서 선택된 화학 종류이다. 몇몇 구체예에서 이러한 접합 모이어티는 치료학적 또는 진단적 페이로드(payload)이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서 이러한 접합 모이어티는 검출가능한 페이로드이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 접합 모이어티는 검출가능한 엔티티이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 접합 모이어티는 친화제(affinity agent)이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 접합 모이어티는 표적제(targeting agent)이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 접합 모이어티는 마스킹제 및/또는 안정화제이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 접합체는 단일 결합제 모이어티 및 다수의 접합 모이어티를 포함한다; 몇몇 구체예에서, 이러한 다수의 접합 모이어티는 다수의 동일한 접합 모이어티를 포함한다; 몇몇 구체예에서, 이러한 다수의 접합 모이어티는 선택적으로 상이한 유형의 접합 모이어티 (가령, 치료학적 페이로드, 검출가능한 페이로드, 표적제, 친화제 등)를 2개 이상 포함한다.

몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 DNA 또는 RNA와 같은 핵산이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서 핵산은 헤마글루티닌 (HA) 폴리펩티드 내에서 에피토프를 모방하도록 고안된다. 몇몇 구체예에서 핵산은 하나 이상의 인플루엔자 HA 폴리펩티드 하위유형 내에서 보존 에피토프를 모방하도록 고안된다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 하나 이상의 올리고뉴클리오티드이거나 또는 이를 모방한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 2차 구조, 가령 루프(loop), 헤어핀(hairpin), 폴드(fold) 또는 이의 조합을 포함하는 하나 이상의 올리고뉴클레오티드이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 고차 (3차 또는 4차) 구조를 포함하는 하나 이상의 올리고뉴클레오티드이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 압타머(aptamer)이거나 또는 이를 포함한다.

몇몇 구체예에서, 본 발명은 본 명세서에서 설명된 바와 같은 결합제를 발현하는 세포 또는 세포주를 제공한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 세포 또는 세포주는 포유류 세포 또는 세포주이다. 특정한 구체예에서, 이러한 세포 또는 세포주는 하이브리도마이다.

몇몇 구체예에서, 본 발명은 환자를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 인플루엔자 감염으로 고통받거나 또는 인플루엔자 감염에 취약한 환자에게 본 명세서에 설명된 결합제를 포함한 조성물을 발병률 및/또는 중증도의 감소, 및/또는 인플루엔자 감염의 하나 이상의 징후 또는 영향의 시작의 지연과 관련 있는 양생법에 따른 전달을 위한 적절한 단위 제형으로 투여하는 단계를 포함한다.

몇몇 구체예에서, 본 발명은 투여 장치를 통한 투여를 위해 조제된, 본 명세서에서 설명된 바와 같은 적어도 하나의 결합제와 하나 이상의 용기를 포함하는 세트에서 이러한 투여 장치를 함께 포함하는 키트를 제공한다. 몇몇 구체예에서, 적절한 투여 장치는 주사기, 바늘, 도포기(applicator), 및 이의 조합으로 구성된 군에서 선택된다. 몇몇 구체예에서, 제공된 키트는 사용 설명서를 포함한다.

제공된 결합제, 조성물, 및 방법은 예를 들어 연구 및/또는 의료에서 유용하다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제, 조성물, 및 방법은 예를 들어 인플루엔자의 예방, 치료, 진단, 및/또는 연구에서 유용하다. 예를 들어, 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제 또는 조성물은 인플루엔자 감염으로 고통받거나 또는 인플루엔자 감염에 취약한 대상에게 투여된다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제 또는 조성물은 인플루엔자, 또는 특정한 인플루엔자 하위유형 또는 균주에 공지된 노출 전에 투여된다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 인플루엔자, 또는 인플루엔자 하위유형 또는 균주에 공지된 노출 후에 투여된다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제 또는 조성물은 하나 이상의 특정한 인플루엔자 하위유형 또는 균주로의 인플루엔자 감염을 비롯하여, 인플루엔자 감염의 증상 또는 영향의 징후 전에, 또는 인플루엔자 감염의 하나 이상의 특정한 증상 또는 영향 전에 투여된다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제 또는 조성물은 하나 이상의 특정한 인플루엔자 하위유형 또는 균주로의 인플루엔자 감염을 비롯하여, 인플루엔자 감염의 증상 또는 영향의 징후 전에, 또는 인플루엔자 감염의 하나 이상의 특정한 증상 또는 영향 전에 투여된다.

몇몇 구체예에서, 제공된 결합제 또는 조성물은 인플루엔자 감염의 증상 (가령, 염증, 열, 메스꺼움, 무게 감소, 식욕 감소, 빠른 호흡, 심박동수 증가, 고혈압, 몸살, 근육통, 안통, 피로, 불쾌감, 마른 기침, 콧물, 및/또는 인후염)에 영향을 주기 위해 하나 이상의 다른 항-인플루엔자 요법 및/또는 하나 이상의 다른 요법과 조합하여 대상에게 투여된다.

도면의 간단한 설명

그림과 함께 구성된 하기 설명된 도면은 제한을 위한 것이 아닌, 오로지 설명 목적을 위한 것이다.

도 1은 포유류 항체의 여러 가지 부분, 영역 및 도메인의 구조 표현을 도시한다.

도 2A와 B는 예시적인 항체에 대한 HA 결합 친화도를 도시한다. 도 1A (상부 패널)은 특정한 도시된 항체가 차등적 결합 친화도로 HA의 군 1 및 군 2 하위유형 둘 모두에 결합한다는 점을 증명한다; 그리고 도 1A (하부 패널)과 도 1B는 항체가 HA에 특이적으로 결합한다는 점을 보여준다.

도 3A-E는 농도 범위에 걸쳐 예시적인 항체에 대한 HA 결합 친화도 및 동역학을 도시한다. 특정한 항체는 차등적 결합 친화도 및 동역학으로 HA의 군 1및 군 2 둘 모두에 결합한다.

도 4는 예시적인 항체에 대한 HA 결합 친화도 및 중화를 도시한다. 특정한 항체는 6 가지 상이한 용량에 대해 PR8 바이러스 (H1N1) 인플루엔자 바이러스-유도 플라크 생성을 저해한다.

도 5는 MDCK 세포의 감염력에 미치는 PR8과의 예시적인 항체 사전-인큐베이션의 효과를 나타낸다. 감염 후, IC₅₀ 값을 계산하기 위해 바이러스에 특이적인 프라이머(primer)를 이용한 실시간 PCR에 의해 바이러스 역가가 정량화 되기 전 48시간 동안 여러 가지 농도의 항체와 함께 무-바이러스 배지에서 MDCK 세포를 성장시켰다.

도 6은 H1N1 공격에서 예시적인 항체로 치료된 생쥐로부터 얻은 데이터를 나타낸다. 이 공격에서, 예시적인 항체로 치료된 생쥐는 치료되지 않은 대조군에 비해 감염 후 더 적은 퍼센트의 무게 감소가 있다.

도 7은 생쥐에서의 H1N1 공격으로부터 얻은 데이터를 나타낸다. 보여지는 바와 같이, 예시적인 항체는 PBS 대조군에서 관찰된 것과 비교하여 생쥐내 H1N1 감염의 발달을 지연시킨다. 예시적인 항체의 존재에서 관찰된 감염력 (즉, 감염 증상의 개시 속도)의 감소는 항바이러스성 약물 리바비린(Ribavirin)에서 보여지는 것과 필적한다.

도 8은 H1N1 공격에서 예시적인 항체로 치료된 생쥐로부터 얻은 데이터를 나타낸다. 이 공격에서, 감염-후 예시적인 항체로 치료된 생쥐는 무게 회복을 증명한다.

도 9는 예시적인 항체로 치료된 생쥐에서 관찰된 약동학 프로필을 도시한다. 예시적인 항체를 이용한 치료에 따라, 혈청 샘플이 시간에 걸쳐 수집되고 항체 농도에 대해 평가되었다.

도 10A-B는 예시적인 VH (도 10A) 및 VL (도 10B) 서열의 정렬을 보여준다. 각각의 예시적인 서열은 또한 표 2 및/또는 3에서 나타난다.

정의

친화도: 해당 분야에서 공지된 바와 같이, "친화도"는 특정한 리간드 (가령, 항체)와 이의 파트너 (가령, 에피토프)의 결합의 견고함의 척도이다. 친화도는 상이한 방식으로 측정될 수 있다.

아미노산: 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "아미노산"은 가장 넓은 의미에서 폴리펩티드 사슬 내로 편입될 수 있는 임의의 화합물 및/또는 물질을 지칭한다. 몇몇 구체예에서, 아미노산은 일반적인 구조 H₂N-C(H)(R)-COOH를 갖는다. 몇몇 구체예에서, 아미노산은 자연적으로 발생하는 아미노산이다. 몇몇 구체예에서, 아미노산은 합성 아미노산이다; 몇몇 구체예에서, 아미노산은 d-아미노산이다; 몇몇 구체예에서, 아미노산은 l-아미노산이다. "표준 아미노산"은 자연적으로 발생하는 펩티드에서 공통으로 발견되는 20개의 표준 l-아미노산 중 어느 하나를 지칭한다. "비표준 아미노산"은 합성으로 제조되거나 또는 천연 원료에서 얻은 것인지에 상관 없이, 표준 아미노산이 아닌 임의의 아미노산을 지칭한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "합성 아미노산"은 염, 아미노산 유도체 (가령, 아미드), 및/또는 치환을 포함하지만, 이에 제한되지 않는 화학적으로 변형된 아미노산을 포함한다. 펩티드내 카르복시- 및/또는 아미노-말단 아미노산을 비롯한, 아미노산은 메틸화, 아미드화, 아세틸화, 보호기, 및/또는 활성에 부정적인 영향을 주는 것 없이 펩티드 순환 반감기를 변화시킬 수 있는 다른 화학 기로의 치환에 의해 변형될 수 있다. 아미노산은 디설파이드 결합에 관여할 수 있다. 아미노산은 한 가지 또는 번역후 변형, 가령 하나 이상의 화학적 엔티티 (가령, 메틸기, 아세테이트기, 아세틸기, 포스페이트기, 포르밀 모이어티, 이소프레노이드기, 설페이트기, 폴리에틸렌 글리콜 모이어티, 지질 모이어티, 탄수화물 모이어티, 비오틴 모이어티 등)와의 회합을 포함할 수 있다. 용어 "아미노산"은 "아미노산 잔기"와 상호교환적으로 사용되고 유리 아미노산 및/또는 펩티드의 아미노산 잔기를 지칭할 수 있다. 이는 상기 용어가 유리 아미노산 또는 펩티드의 잔기를 지칭하는지 안 하는지에 상관 없이 사용되는 문맥으로부터 명확해질 것이다.

동물: 본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "동물"은 동물계의 임의의 구성원을 지칭한다. 몇몇 구체예에서, "동물"은 어느 한 쪽 성별의 인간 및 임의의 발달 단계에 있는 인간을 지칭한다. 몇몇 구체예에서, "동물"은 임의의 발달 단계에 있는 비-인간 동물을 지칭한다. 특정한 구체예에서, 비-인간 동물은 포유류 (가령, 설치류, 생쥐, 랫트, 토끼, 원숭이, 개, 고양이, 양, 소, 영장류, 및/또는 돼지)이다. 몇몇 구체예에서, 동물은 포유류, 새, 파충류, 양서류, 어류, 곤충, 및/또는 벌레를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 특정한 구체예에서, 동물은 인플루엔자에 의한 감염에 취약하다. 몇몇 구체예에서, 동물은 형질전환 동물, 유전적으로 조작된 동물, 및/또는 클론일 수 있다.

항체: 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "항체"는 해당 분야에서 이해되는 것들과 같이, 면역글로불린의 구조적 특성을 갖는 폴리펩티드를 지칭한다. 자연에서 포유류 세포에 의해 생성되는 바와 같이, 면역글로불린은 도 1에서 도시된 구조를 갖는다. 전형적인 면역글로불린 (항체) 구조 단위는 사합체를 포함하는 것으로 공지된다. 각각의 사합체는 2개의 동일한 쌍의 폴리펩티드 사슬로 구성되며, 각각의 쌍은 하나의 "경쇄" (대략 25 kD)와 하나의 "중쇄" (대략 50-70 kD)를 갖는다. 각각의 사슬의 N-말단은 주로 항원 인식을 담당하는 약 100 내지 110개 또는 그 이상의 아미노산의 가변 영역을 정의한다. 용어 "가변 경쇄" (VL) 및 "가변 중쇄" (VH)는 각각, 이들의 경쇄와 중쇄를 지칭한다. 각각의 가변 영역은 추가로, 초가변 (HV) 및 프레임워크 (FR) 영역으로 세분화된다. 초가변 영역은 베타-시트(beta-sheet) 구조를 형성하고 위치에 HV 영역을 고정시키기 위해 스캐폴드(scaffold)로서 역할을 하는 4 가지 프레임워크 영역 (FR1, FR2, FR2, 및 FR4)으로 분리되는, 상보성 결정 영역 (CDR 1, CDR 2 및 CDR 3)으로 불리는 3개의 부분의 초가변성 서열을 포함한다. 각각의 중쇄와 경쇄의 C-말단은 경쇄 (CL)의 경우 하나의 도메인 그리고 중쇄의 경우 3개 (CH1, CH2 및 CH3)로 구성되는 불변 영역을 정의한다. 많은 구체예에서, 항체는 폴리펩티드이며, 이의 아미노산 서열은 상보성 결정 영역 (CDR)으로서 해당 분야의 통상의 기술자에 의해 인식되는 하나 이상의 구조적 요소를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 항체는 폴리펩티드이며, 이의 아미노산 서열은 면역글로불린 가변 도메인으로서 해당 분야의 통상의 기술자에 의해 인식되는 구조적 요소를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 항체는 자연적으로-생성된 항체에서 일어나는 것과 같이 디설파이드 결합에 의해 선택적으로 회합되는, 2개의 중쇄와 2개의 경쇄를 함유한다는 점에서 "전장"이다. 몇몇 구체예에서, 항체는 전장 항체에서 발견된 서열 모두는 아니지만 몇 개를 함유한다는 점에서 전장 항체의 단편이다. 예를 들어, 몇몇 구체예에서, 항체 단편의 예시로는 Fab, Fab', F(ab')2, scFv, Fv, dsFv 디아바디, 및 Fd 단편이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다. 몇몇 구체예에서, 항체는 IgG, IgM, IgA, IgD, 및 IgE로 구성된 군에서 선택된 항체 클래스의 구성원이다. 몇몇 구체예에서, 항체는 화학적 합성에 의해 생성된다. 몇몇 구체예에서, 항체는 단일클론 항체이다. 몇몇 구체예에서, 항체는 다클론 항체이다. 몇몇 구체예에서, 항체는 세포에 의해 생성된다. 몇몇 구체예에서, 항체는 화학적 합성에 의해 생성된다. 몇몇 구체예에서, 항체는 포유류로부터 유래된다. 몇몇 구체예에서, 항체는 생쥐, 랫트, 말, 돼지, 또는 염소와 같은, 하지만 이에 제한되지 않는 동물로부터 유래된다. 몇몇 구체예에서, 항체는 재조합 세포 배양 시스템을 이용하여 생성된다. 몇몇 구체예에서, 항체는 예를 들어, 인간 불변 및/또는 가변 영역 도메인을 가진, 생쥐, 랫트, 말, 돼지, 또는 다른 종으로부터의 키메라 항체이다. 몇몇 구체예에서, 항체는 인간으로부터 유래된 항체이다. 몇몇 구체예에서, 항체는 다클론 항체이다. 몇몇 구체예에서, 항체는 인간화된 항체이다.

대략: 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 하나 이상의 관심 값에 적용되는 바와 같은, 용어 "대략" 또는 "약"은 명시된 참조 값과 유사한 값을 지칭한다. 특정한 구체예에서, 용어 "대략" 또는 "약"은 명시되지 않는 한 또는 문맥으로부터 명백하지 않는 한 (이러한 숫자가 가능한 값의 100%를 초과할 경우는 제외함), 명시된 참조 값의 양쪽 방향 (초과 또는 미만)으로 25%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 또는 그 이하에 포함되는 값의 범위를 지칭한다.

결합제: 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "결합제"는 항원 또는 생물학적 표적에 결합할 수 있는 작용제를 지칭한다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 단백질을 포함한다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 자연적으로 발생한 단백질이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 세포 또는 바이러스로부터 유래된다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 합성 또는 화학적으로 합성된 단백질이다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 천연 아미노산으로 구성된다. 다른 구체예에서, 결합제는 하나 이상의 비천연 아미노산을 포함한다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 천연 및 비천연 아미노산의 조합으로 구성된다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 공유결합으로 또는 비-공유결합으로 회합되는 1개, 2개 또는 그 이상의 폴리펩티드 사슬로 구성된다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 결합제가 상호작용을 위해 이의 3차 구조와 배열을 유지하기만 한다면, 더 긴 폴리펩티드 사슬과 연결되거나 또는 상기 사슬의 부분이 될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 결합제이거나 결합제가 아닌 또 다른 폴리펩티드 서열의 N- 또는 C-말단에 부가될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 결합제이거나 결합제가 아닌 또 다른 폴리펩티드의 서열 내로 편입될 수 있고, 따라서 2개 이상의 조각(segment)으로 폴리펩티드 서열이 분리될 수 있다.

몇몇 구체예에서, 결합제는 항체와 유사하게 기능하는 단백질이고 특이적인 항원에 결합하여 복합체를 형성할 수 있고 그리고 생물학적 반응을 유발한다 (특정한 생물학적 활성을 작동시키거나 또는 길항작용시킴). 몇몇 구체예에서, 결합제는 항체이다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 자연적으로-생성된 항체에서 일어나는 것과 같이 디설파이드 결합에 의해 선택적으로 회합되는, 2개의 중쇄와 2개의 경쇄를 함유한다는 점에서 "전장" 항체이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 전장 항체에서 발견된 서열을 모두는 아니지만, 몇 개를 함유한다는 점에서 전장 항체의 단편이거나 또는 이를 포함한다. 예를 들어, 몇몇 구체예에서, 결합제는 Fab, Fab', F(ab')2, scFv, Fv, dsFv 디아바디, 및 Fd 단편을 포함하지만, 이에 제한되지 않는 항체 단편이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 오로지 중쇄만을 포함하는 VHH (즉, 항원-특이적 VHH) 항체이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서 VHH는 라마 또는 다른 카멜리드 항체 (가령, 카멜리드 IgG2 또는 IgG3, 또는 이러한 카멜리드 Ig로부터의 CDR-디스플레잉 프레임)로부터 유래된다. 몇몇 구체예에서 VHH는 상어로부터 유래된다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 힌지 영역에 의해 sFv로부터 분리된, 그들의 C-말단에서 올리고머화 도메인을 포함하는 sFv 폴리펩티드 사슬인, 하나 이상의 "미니-항체" 또는 "미니바디"이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 힌지 영역은 추가적인 디설파이드 결합에 의해 추가로 안정될 수 있거나 또는 될 수 없는, 자기-회합성 알파-나선 또는 류신 지퍼를 포함한다.

몇몇 구체예에서, 결합제는 단백질 A, 리포클린, 안키린 공통 반복 도메인, 티오레독신, 아드넥틴, 안티칼린, 센티린, 아비머 도메인, 유비퀴틴, 징크 핑거 DNA-결합 단백질 (ZEP), 또는 IgNAR과 같은, 하지만 이에 제한되지 않는 스캐폴드 단백질이다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 스캐폴드 단백질이며, 이때 스캐폴드 단백질은 하나 이상의 CDR을 나타내도록 조작된다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 시스틴-노트 미니단백질이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 아비바디 (디아바디, 트리바디, 테트라바디)이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 스콜피온이거나 또는 이를 포함하며, 이때 스콜피온 구조는 면역글로불린 FC 도메인에 의해 분리된 2개의 결합 모이어티를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 펩티드모방체이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 스태플링된(stapled) 펩티드이거나 또는 이를 포함한다.

몇몇 구체예에서, 결합제는 선별된 결합 부위에 결합될 수 있는 작용제를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 헤마글루티닌 (HA) 폴리펩티드내 선별된 결합 부위에 결합할 수 있다. 몇몇 특이적인 구체예에서, 결합제는 HA 폴리펩티드의 막 근위 에피토프 영역 (MPER)내 선별된 결합 부위에 결합할 수 있다. 몇몇 특이적인 구체예에서, 결합제는 HA 폴리펩티드의 HA-1 (머리부) 및/또는 HA-2 (경상부) 도메인내 선별된 결합 부위에 결합할 수 있다. 몇몇 특이적인 구체예에서, 결합제는 HA-1/HA-2 접점 막 근위 에피토프 영역 (MPER) 내 선별된 결합 부위에 결합할 수 있다.

몇몇 구체예에서, 결합제는 하나 이상의 표적 잔기와의 상호작용에 의해 결합 표적과 회합될 수 있는 작용제이다. 몇몇 구체예에서, 이러한 표적 잔기는 아미노산, 사카라이드, 또는 이의 조합이다. 몇몇 특이적인 구체예에서 결합제는 N-연결된 글리칸, 시알릴화 글리칸 및/또는 이의 조합과 같은, 하지만 이에 제한되지 않는 변형된 HA 폴리펩티드에 결합할 수 있다.

몇몇 구체예에서, 결합제는 HA 폴리펩티드에 결합하기 위해 인플루엔자 바이러스와 경쟁할 수 있는 작용제이고, 따라서 인플루엔자 바이러스와 HA 폴리펩티드 사이의 결합은 적어도 적어도 1.5배, 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 11배, 적어도 12배, 적어도 13배, 적어도 14배, 적어도 15배, 적어도 16배, 적어도 17배, 적어도 18배, 적어도 19배, 또는 적어도 20배 감소된다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 HA 수용체 상에서 글리칸에 결합하기 위해 인플루엔자 바이러스와 경쟁할 수 있는 작용제이고, 따라서 HA 수용체 상에서 글리칸과 인플루엔자 바이러스 사이의 결합은 적어도 1.5배, 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 11배, 적어도 12배, 적어도 13배, 적어도 14배, 적어도 15배, 적어도 16배, 적어도 17배, 적어도 18배, 적어도 19배, 또는 적어도 20배 감소된다.

몇몇 구체예에서, 결합제는 DNA 또는 RNA와 같은 핵산이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 하나 이상의 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 2차 구조, 가령 루프, 헤어핀, 폴드 또는 이의 조합을 포함하는 하나 이상의 올리고뉴클레오티드이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 고차 (3차 또는 4차) 구조를 포함하는 하나 이상의 올리고뉴클레오티드이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 헤마글루티닌 (HA) 폴리펩티드 내에서 발견된 에피토프를 모방하도록 고안된 구조를 형성하는 핵산이다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 하나 이상의 인플루엔자 HA 폴리펩티드 하위유형 내에서 발견된 보존 에피토프를 모방하도록 고안된 구조를 형성하는 핵산이다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 압타머이거나 또는 이를 포함한다.

생물학적으로 활성: 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 구절 "생물학적으로 활성"은 생물학적 시스템 (가령, 세포 배양, 유기체 등)에서 활성을 갖는 임의의 물질의 특성을 지칭한다. 예를 들면, 유기체에 투여될 때, 유기체에 생물학적 효과를 갖는 물질이 생물학적으로 활성인 것으로 간주된다. 특정한 구체예에서, 단백질 또는 폴리펩티드가 생물학적으로 활성인 경우, 단백질 또는 폴리펩티드의 적어도 한 가지 생물학적 활성을 공유하는 그 단백질 또는 폴리펩티드의 일부는 전형적으로 "생물학적으로 활성" 부분으로서 언급된다.

광범위 스펙트럼: 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 구절 "광범위 스펙트럼"은 상이한 인플루엔자 바이러스 균주로부터의 여러 가지 HA 폴리펩티드를 결합시키는 작용제를 지칭한다. 몇몇 구체예에서, 광범위 스펙트럼 작용제는 다수의 상이한 HA 폴리펩티드에 결합한다. 예시적인 이러한 HA 폴리펩티드는 H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15, 및/또는 H16 폴리펩티드, 또는 이의 조합을 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 작용제는 바이러스의 적어도 2개의 상이한 클레이드(clade) 또는 클러스터(cluster)로부터의 HA 폴리펩티드에 결합한다는 점에서 광범위 스펙트럼이다. 몇몇 구체예에서, 제공된 작용제는 바이러스의 공지된 모든 클레이드로부터의 HA 폴리펩티드에 결합한다는 점에서 광범위 스펙트럼이다. 몇몇 구체예에서, 제공된 작용제는 군 1과 군 2 인플루엔자 바이러스로부터의 HA 폴리펩티드에 결합한다는 점에서 광범위 스펙트럼이다. 몇몇 구체예에서, 광범위 스펙트럼은 특정한 숙주, 가령 조류, 낙타, 개, 고양이, 사향 고양이, 말, 인간, 표범, 밍크, 생쥐, 물개, 스톤 마틴(stone martin), 돼지, 호랑이, 고래 등의 감염을 매개하는 몇 가지 또는 모든 유형의 HA 폴리펩티드에 결합하는 작용제를 지칭한다.

특징적인 부분: 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 물질의 "특징적인 부분"은 가장 넓은 의미에서 전체 물질에 대하여 어느 정도의 서열 또는 구조 동일성을 공유하는 부분이다. 특정한 구체예에서, 특징적인 부분은 완전한 물질과 적어도 한 가지 기능적 특성을 공유한다. 예를 들어, 단백질 또는 폴리펩티드의 "특징적인 부분"은 아미노산의 연속적인 구간, 또는 아미노산의 연속적인 구간의 모음을 함유하는 부분이며, 이들 모두 단백질 또는 폴리펩티드의 특성이다. 몇몇 구체예에서, 각각의 이러한 연속적인 구간은 일반적으로, 적어도 2, 5, 10, 15, 20, 50개, 또는 그 이상의 아미노산을 함유한다. 일반적으로, 물질 (가령, 단백질, 항체 등)의 특징적인 부분은 상기 명시된 서열 및/또는 구조적 동일성뿐만 아니라, 관련 있는 완전한 물질과 적어도 한 가지 기능적 특성을 공유한다. 몇몇 구체예에서, 특징적인 부분은 생물학적으로 활성일 수 있다.

특징적인 서열: "특징적인 서열"은 폴리펩티드 또는 핵산 패밀리의 모든 구성원에서 발견되는 서열이고 따라서 패밀리의 구성원을 정의하는 데에 해당 분야의 통상의 기술자에게 이용될 수 있다.

병용 요법: 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "병용 요법"은 대상이 두 가지 작용제에 동시에 노출되도록 2개 이상의 상이한 작용제가 중복 양생법으로 투여되는 상황을 지칭한다.

제형: 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "제형" 및 "단위 제형"은 치료되어야 하는 환자를 위한 치료학적 단백질 (가령, 항체)의 물리적으로 개별적인 단위를 지칭한다. 각각의 단위는 바람직한 치료학적 효과를 유도하도록 계산된 활성 물질의 예정된 양을 함유한다. 하지만, 조성물의 총 투여량이 타당한 의학적 판단의 범위 내에서 담당 의사에 의해 결정될 것이라는 점이 이해될 것이다.

투여 양생법: 본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "투여 양생법" (또는 "치료적 양생법")은 전형적으로 기간을 두고 분리하여, 개별적으로 대상에게 투여되는 단위 용량 (전형적으로 1회 초과)의 세트이다. 몇몇 구체예에서, 주어진 치료제는 권장되는 투여 양생법이 있는데, 이는 1회 이상의 용량을 포함한다. 몇몇 구체예에서, 투여 양생법은 다수의 용량을 포함하며, 각각의 용량은 동일한 기간의 시간을 두고 서로 분리된다; 몇몇 구체예에서, 투여 양생법은 다수의 용량과 개별적인 용량을 분리시키는 적어도 두 가지 상이한 기간을 포함한다.

발현: 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 핵산 서열의 "발현"은 하나 이상의 다음 사건을 지칭한다: (1) DNA 서열로부터 RNA 주형의 생성 (가령, 전사에 의해); (2) RNA 전사물의 가공처리 (가령, 스플라이싱(splicing), 편집, 5' 캡(cap) 형성, 및/또는 3' 말단 형성에 의해); (3) RNA에서 폴리펩티드 또는 단백질로의 번역; 및/또는 (4) 폴리펩티드 또는 단백질의 번역-후 변형.

기능적인: 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "기능적인" 생물학적 분자는 특징이 되는 성질 및/또는 활성을 나타내는 형태의 생물학적 분자이다.

유전자: 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "유전자"는 해당 분야에서 이해되는 바와 같은 의미를 갖는다. 용어 "유전자"는 유전자 조절 서열 (가령, 프로모터, 인핸서 등) 및/또는 인트론 서열을 포함할 수 있다는 점이 해당 분야의 통상의 기술자에 의해 이해될 것이다. 유전자의 정의는 단백질을 인코딩하지 않고 대신 기능적인 RNA 분자, 가령 tRNA, RNAi-유도제 등을 인코딩하는 핵산에 대한 참고를 포함한다는 점이 추가로 이해될 것이다. 명확성의 목적을 위해, 본 출원에서 사용된 바와 같이, 용어 "유전자"는 단백질을 인코딩하는 핵산의 부분을 일반적으로 지칭한다는 점에 주목한다; 상기 용어는 문맥에서 해당 분야의 통상의 기술자에게 명확해지는 바와 같이, 조절 서열을 선택적으로 포함할 수 있다. 이 정의는 용어 "유전자"를 비-단백질-코딩 발현 단위에 적용하는 것을 제외하려는 의도가 아니고 대부분의 경우, 본 문서에서 사용된 바와 같은 용어가 단백질-코딩 핵산을 지칭한다는 점을 명확하게 하기 위함이다.

유전자 산물 또는 발현 산물: 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "유전자 산물" 또는 "발현 산물"은 일반적으로, 유전자로부터 전사된 RNA (가공처리-전 및/또는 -후) 또는 유전자로부터 전사된 RNA에 의해 인코딩된 폴리펩티드 (변형-전 및/또는 -후)를 지칭한다.

헤마글루티닌 (HA) 폴리펩티드: 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "헤마글루티닌 폴리펩티드" (또는 "HA 폴리펩티드")는 아미노산 서열이 HA의 적어도 하나의 특징적인 서열 포함하는 폴리펩티드는 지칭한다. 인플루엔자 분리주로부터의 매우 다양한 HA 서열이 해당 분야에서 공지된다; 실제로, 국립 생물공학 정보센터 (NCBI)는 9796개 HA 서열이 포함된 본 출원 후부터 데이터베이스를 보존한다 (www.ncbi.nlm.nih.gov/genomes/FLU/FLU.html). 이 데이터베이스에 관하여, 해당 분야의 통상의 기술자는 일박적으로는 HA 폴리펩티드, 및/또는 특정한 HA 폴리펩티드 (가령, H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15, 또는 H16 폴리펩티드); 또는 특정한 숙주, 가령, 조류, 낙타, 개, 고양이, 사향 고양이, 환경, 말, 인간, 표범, 밍크, 생쥐, 물개, 스톤 마틴, 돼지, 호랑이, 고래 등의 감염을 매개하는 HA 폴리펩티드의 특성인 서열을 쉽게 식별할 수 있다.

상동성(Homology): 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "상동성"은 중합체 분자 사이, 가령 핵산 분자 (가령, DNA 분자 및/또는 RNA 분자) 사이 및/또는 폴리펩티드 분자 사이의 전체 관련성을 지칭한다. 몇몇 구체예에서, 중합체 분자들은 그들의 서열이 적어도 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 99% 동일하다면 서로 "상동"인 것으로 간주된다. 몇몇 구체예에서, 중합체 분자들은 그들의 서열이 적어도 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 99% 유사하다면 서로 "상동"인 것으로 간주된다.

동일성: 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "동일성"은 중합체 분자 사이, 가령 핵산 분자 (가령, DNA 분자 및/또는 RNA 분자) 사이 및/또는 폴리펩티드 분자 사이의 전체 관련성을 지칭한다. 2개의 핵산 서열의 동일성 퍼센트의 계산은 예를 들어, 최적 비교 목적을 위해 2개의 서열을 정렬시킴으로써 수행될 수 있다 (가령, 갭은 최적의 정렬을 위해 1차 및 2차 핵산 서열 중 하나 또는 둘 모두에 도입될 수 있고 비-동일 서열은 비교 목적을 위해 제거될 수 있다). 특정한 구체예에서, 비교 목적을 위해 정렬된 서열의 길이는 참조 서열 길이의 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 실질적으로 100%이다. 이후 상응하는 뉴클레오티드 위치에 있는 뉴클레오티드가 비교된다. 1차 서열내 위치는 2차 서열내 상응하는 위치와 동일한 뉴클레오티드로 점유된다면, 이때 분자는 그 위치에서 동일하다. 두 서열 간의 동일성 퍼센트는 갭의 수, 그리고 2개의 서열의 최적 정렬을 위해 도입되기 위해 필요한, 각각의 갭의 길이를 고려하여, 서열에 의해 공유되는 동일 위치의 수의 함수이다. 두 서열 간의 서열 비교 및 동일성 퍼센트의 결정은 수학적 알고리즘을 이용하여 수행될 수 있다. 예를 들어, 두 뉴클레오티드 서열 간의 동일성 퍼센트는 메이어(Meyers)와 밀러(Miller)의 알고리즘 (CABIOS, 1989, 4: 11-17)을 이용하여 결정될 수 있으며, 상기 알고리즘은 PAM120 웨이트 잔기 테이블(weight residue table), 갭 길이 패널티(gap length penalty) 12 및 갭 패널티 4를 이용하여 ALIGN 프로그램 (버전 2.0) 내로 통합된다. 2개의 뉴클레오티드 서열 간의 동일성 퍼센트는 대안으로, NWSgapdna.CMP 매트릭스를 이용한 GCG 소프트웨어 패키지에서 GAP 프로그램을 이용하여 결정될 수 있다.

단리된: 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "단리된"은 (1) 초기에 생성 (자연에서든 및/또는 실험 환경에서든)되었을 때 회합되었던 적어도 몇 가지 성분으로부터 분리된, 및/또는 (2) 사람의 손에 의해 생산, 제조, 및/또는 제작된 물질 및/또는 엔티티를 지칭한다. 단리된 물질 및/또는 엔티티는 그들이 처음에 회합되었던 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 약 99% 초과의 다른 성분으로부터 분리될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 단리된 작용제는 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 약 99%보다 높게 순수하다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 물질은 다른 성분이 실질적으로 없다면 "순수"하다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 단리된 물질 및/또는 엔티티의 순도 퍼센트 계산은 부형제 (가령, 완충액, 용매, 물 등)를 포함해서는 안된다.

미모토프(Mimotope): 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "미모토프"는 에피토프의 구조를 모방하는 거대분자를 지칭한다. 몇몇 구체예에서, 미모토프는 이의 상응 에피토프에 의해 유발되는 것과 동일한 또는 유사한 항체 반응을 유발한다. 몇몇 구체예에서, 항체는 에피토프를 인식하며, 또한 그 에피토프를 모방하는 미모토프도 인식한다. 몇몇 구체예에서, 미모토프는 펩티드이다. 몇몇 구체예에서, 미모토프는 소분자, 탄수화물, 지질, 또는 핵산이다. 몇몇 구체예에서, 미모토트는 보존된 인플루엔자 에피토프의 펩티드 또는 비-펩티드 미모토프이다. 몇몇 구체예에서, 정의된 바이러스 에피토프의 구조를 모방함으로써, 미모토프는 인플루엔자 바이러스 입자가 이의 천연 결합 파트너와 결합하는 능력을 방해하는데 이는 가령, 미모토프가 천연 결합 파트너 자체에 결합함으로써 이루어진다.

핵산: 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "핵산"은 이의 가장 넓은 의미에서 올리고뉴클레오티드 사슬 내로 편입되거나 또는 편입될 수 있는 임의의 화합물 및/또는 물질을 지칭한다. 몇몇 구체예에서, 핵산은 포스포디에스테르 연결을 통해 올리고뉴클레오티드 사슬 내로 편입되거나 또는 편입될 수 있는 화합물 및/또는 물질이다. 몇몇 구체예에서, "핵산"은 개별적인 핵산 잔기 (가령, 뉴클레오티드 및/또는 뉴클레오시드)를 지칭한다. 몇몇 구체예에서, "핵산"은 개별적인 핵산 잔기를 포함한 올리고뉴클레오티드 사슬을 지칭한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "올리고뉴클레오티드" 및 "폴리뉴클레오티드"는 상호교환적으로 사용될 수 있다. 몇몇 구체예에서, "핵산"은 RNA 그리고 단일 및/또는 이중-가닥 DNA 및/또는 cDNA를 포함한다. 추가적으로, 용어 "핵산", "DNA", "RNA", 및/또는 유사한 용어는 핵산 유사체, 즉 포스포디에스테르 백본(backbone)이 아닌 것을 포함한다. 예를 들어, 해당 분야에서 공지되고 백본내 포스포디에스테르 대신 펩티드 결합을 갖는, 소위 "펩티드 핵산"이 본 발명의 범위 내에서 고려된다. 용어 "아미노산 서열을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열"은 서로의 버전을 퇴화시키거나 및/또는 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 모든 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 단백질 및/또는 RNA를 암호화하는 뉴클레오티드 서열은 인트론을 포함할 수 있다. 핵산은 천연 원료로부터 정제되고, 재조합 발현 시스템을 이용하여 생성되고 그리고 선택적으로 정제, 화학적으로 합성될 수 있다. 적절한 경우, 가령, 화학적으로 합성된 분의 경우에, 핵산은 뉴클레오시드 유사체, 가령 화학적으로 변형된 염기 또는 당, 백본 변형 등을 갖는 유사체를 포함할 수 있다. 핵산 서열은 달리 명시되지 않는 한, 5 '에서 3'으로의 방향으로 제시된다. 용어 "핵산 조각"은 더 긴 핵산 서열의 일부인 핵산 서열을 지칭하는 것으로 본 명세서에서 사용된다. 많은 구체예에서, 핵산 조각은 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 또는 그 이상의 잔기를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 핵산은 천연 뉴클레오시드 (가령, 아데노신, 티미딘, 구아노신, 시티딘, 유리딘, 데옥시아데노신, 데옥시티미딘, 데옥시구아노신, 및 데옥시시티딘); 뉴클레오시드 유사체 (가령, 2-아미노아데노신, 2-티오티미딘, 이노신, 피롤로-피리딘, 3-메틸 아데노신, 5-메틸시티딘, C-5 프로피닐-시티딘, C-5 프로피닐-유리딘, 2-아미노아데노신, C5-브로모유리딘, C5-플루오로유리딘, C5-아이오도유리딘, C5-프로피닐-유리딘, C5-프로피닐-시티딘, C5-메틸시티딘, 2-아미노아데노신, 7-데아자아데노신, 7-데아자구아노신, 8-옥소아데노신, 8-옥소구아노신, O(6)-메틸구아닌, 및 2-티오시티딘); 화학적으로 변형된 염기; 생물학적으로 변형된 염기 (가령, 메틸화 염기); 삽입된 염기; 변형된 당 (가령, 2'-플루오로리보오스, 리보오스, 2'-데옥시리보오스, 아라비노스, 및 헥소오스); 및/또는 변형된 포스페이트 기 (가령, 포스포로티오에이트 및 5'-N-포스포라미다이트 연결)이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 본 발명은 구체적으로 "비변형 핵산"에 대한 것이며, 상기 핵산은 전달을 촉진하거나 성취하기 위하여 화학적으로 변형되지 않은 핵산 (가령, 뉴클레오티드 및/또는 뉴클레오시드를 비롯한, 폴리뉴클레오티드 및 잔기)을 의미한다.

환자: 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "환자" 또는 "대상"은 제공된 조성물이 가령, 실험 목적, 진단 목적, 예방 목적, 미용 목적, 및/또는 치료 목적을 위해 투여될 수 있는 임의의 유기체를 지칭한다. 전형적인 환자는 동물 (가령, 포유류, 가령 생쥐, 랫트, 토끼, 비-인간 영장류 및/또는 인간)을 포함한다. 몇몇 구체예에서, 환자는 인간이다.

제약학적으로 허용가능한: 본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "제약학적으로 허용가능한"은 타당한 의학적 판단의 범위 내에서, 합리적인 혜택/위험요소 비에 비례하여, 초과 독성, 과민증, 알러지 반응, 또는 다른 문제점 또는 합병증 없이 인간 및 동물 조직과의 접촉에서 이용하는 데에 적합한 물질을 지칭한다.

폴리펩티드: 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "폴리펩티드"는 일반적으로, 펩티드 결합에 의해 서로 부착된 적어도 2개의 아미노산의 줄이다. 몇몇 구체예에서, 폴리펩티드는 적어도 3-5개 아미노산을 포함할 수 있으며, 이들 각각은 적어도 하나의 펩티드 결합으로 다른 것에 부착된다. 해당 분야의 통상의 기술자는 폴리펩티드가 때로는 선택적으로 폴리펩티드 사슬 내로 통합될 수 있는 "비-천연" 아미노산 또는 다른 엔티티를 포함한다는 점을 이해할 것이다.

단백질: 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "단백질"은 폴리펩티드 (즉, 펩티드 결합에 의해 서로 연결된 적어도 2개의 아미노산의 줄)를 지칭한다. 단백질은 아미노산 외에 모이어티를 포함할 수 있고 (가령, 글리코단백질, 프로테오글리칸 등) 및/또는 그렇지 않으면 가공처리 또는 변형될 수 있다. 해당 분야의 통상의 기술자는 "단백질"이 세포에 의해 생성된 바와 같은 완전한 폴리펩티드 사슬이 될 수 있거나 (신호 서열을 가짐 또는 없음), 또는 특징적인 이의 부분이 될 수 있다. 해당 분야의 통상의 기술자는 단백질이 예를 들어 하나 이상의 디설파이드 결합으로 연결되거나 다른 수단으로 회합된, 하나 이상의 폴리펩티드 사슬을 때로 포함할 수 있다는 점을 이해할 것이다. 폴리펩티드는 l-아미노산, d-아미노산, 또는 둘 다 함유할 수 있고 해당 분야에서 공지된 여러 가지 아미노산 변형 또는 유사체 중 어느 하나를 함유할 수 있다. 유용한 변형은 가령, 말단 아세틸화, 아미드화, 메틸화 등을 포함한다. 몇몇 구체예에서, 단백질은 천연 아미노산, 비-천연 아미노산, 합성 아미노산, 및 이의 조합을 포함할 수 있다. 용어 "펩티드"는 일반적으로, 약 100개 미만의 아미노산, 약 50개 미만의 아미노산, 20개 미만 아미노산, 또는 10개 미만의 아미노산의 길이를 갖는 폴리펩티드를 지칭하는 것으로 사용된다. 몇몇 구체예에서, 단백질은 항체, 항체 단편, 생물학적으로 활성인 이의 부분, 및/또는 특징적인 이의 부분이다.

참조 구조 요소: 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "참조 구조 요소"는 또 다른 요소와 비교되는 화학 구조의 요소이다. 몇몇 구체예에서, 참조 구조 요소는 서로에 대하여 및/또는 3차원 공간으로 원자 또는 모이어티의 배열이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 관련된 원자 또는 모이어티는 화학 동일성 (가령, 특정한 아미노산 또는 화학기 또는 구조 등)에 의해 및/또는 기능 (가령, 수소-결합 공여자 또는 수용자, 자유 라디칼(free radical) 등)에 의해 정의된다. 몇몇 특정한 구체예에서, 참조 구조 요소가 참조 중합체에서 발견되는 경우, 참조 구조 요소는 참조 중합체에 존재하는 단량체 서열일 수 있거나 또는 이를 포함할 수 있다. 예를 들어, 몇 가지 이러한 구체예에서, 참조 구조 서열은 폴리펩티드내 특정한 아미노산 서열 요소, 폴리뉴클레오티드내 특정한 뉴클레오티드 서열 요소, 및/또는 폴리사카라이드내 특정한 글리칸 구조일 수 있거나 또는 이를 포함할 수 있다.

소분자: 일반적으로, "소분자"는 크기가 약 5 킬로달톤 (kD) 미만인 분자이다. 몇몇 구체예에서, 소분자는 약 4 kD, 3 kD, 약 2 kD, 또는 약 1 kD 미만이다. 몇몇 구체예에서, 소분자는 약 800 달톤 (D), 약 600 D, 약 500 D, 약 400 D, 약 300 D, 약 200 D, 또는 약 100 D 미만이다. 몇몇 구체예에서, 소분자는 약 2000 g/mol 미만, 약 1500 g/mol 미만, 약 1000 g/mol 미만, 약 800 g/mol 미만, 또는 약 500 g/mol 미만이다. 몇몇 구체예에서, 소분자는 비-중합체성이다. 몇몇 구체예에서, 본 발명에 따라, 소분자는 단백질, 폴리펩티드, 올리고펩티드, 펩티드, 폴리뉴클레오티드, 올리고뉴클레오티드, 폴리사카라이드, 글리코단백질, 프로테오글리칸 등이 아니다.

실질적으로: 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "실질적으로"는 관심물질의 특성 또는 성질에서 나타나는 전체 또는 거의-전체 규모 또는 정도의 정성 조건(qualitative condition)을 지칭한다. 생물학 분야의 통상의 기술자는 생물학적 및 화학적 현상이 거의, 완성에 이르지 않고 및/또는 완결로 진행되지 않거나 절대적인 결과를 획득 또는 회피하지 않는다는 점을 이해할 것이다. 따라서 용어 "실질적으로"는 많은 생물학적 및 화학적 현상에서 내재하는 완전성의 잠재적 결여를 표현하기 위해 본 명세서에서 사용된다.

실질적인 상동성: 구절 "실질적인 상동성"은 아미노산 또는 핵산 서열 간의 비교를 나타내는 것으로 본 명세서에서 사용된다. 해당 분야의 통상의 기술자에게 이해되는 바와 같이, 2개의 서열은 일반적으로, 그들이 상응하는 위치에 상동인 잔기를 함유한다면, "실질적으로 상동인" 것으로 간주된다. 상동 잔기는 동일한 잔기일 수 있다. 대안으로, 상동 잔기는 비-동일 잔기일 수 있는데, 이때는 적절하게 유사한 구조적 및/또는 기능적 특성을 가질 것이다. 예를 들어, 해당 분야의 통상의 기술자에게 잘 공지된 바와 같이, 특정한 아미노산은 "소수성" 또는 "친수성" 아미노산으로서, 및/또는 "극성" 또는 "비-극성" 측쇄를 갖는 것으로서 전형적으로 분류된다. 동일한 유형의 또 다른 것에 대한 한 가지 아미노산의 치환은 종종 "상동" 치환으로 간주될 수 있다.

해당 분야에서 잘 공지된 바와 같이, 아미노산 또는 핵산 서열은 상업 컴퓨터 프로그램, 가령 뉴클레오티드 서열의 경우 BLASTN 그리고 아미노산 서열의 경우 BLASTP, 갭이 있는(gapped) BLAST, 및 PSI-BLAST에서 이용가능한 것들을 비롯한, 여러 가지 알고리즘 중 어느 하나를 이용하여 비교될 수 있다. 예시적인 이러한 프로그램은 Altschul, et al., Basic local alignment search tool, J. Mol. Biol., 215(3): 403-410, 1990; Altschul, et al., Methods in Enzymology; Altschul, et al., "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs", Nucleic Acids Res. 25:3389-3402, 1997; Baxevanis, et al., Bioinformatics : A Practical Guide to the Analysis of Genes and Proteins, Wiley, 1998; 및 Misener, et al., (eds.), Bioinformatics Methods and Protocols (Methods in Molecular Biology, Vol. 132), Humana Press, 1999에서 설명된다. 상동 서열을 식별하는 것 외에도, 상기 언급된 프로그램은 전형적으로, 상동 정도의 표시를 제공한다. 몇몇 구체예에서, 2개의 서열은 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 그들 상응 잔기가 잔기의 관련 스트레치(stretch)에 대해 상동이라면, 실질적으로 상동인 것으로 간주된다. 몇몇 구체예에서, 관련 스트레치는 완전한 서열이다. 몇몇 구체예에서, 관련 스트레치는 적어도 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500개 또는 그 이상의 잔기이다.

실질적인 동일성: 구절 "실질적인 동일성"은 아미노산 또는 핵산 서열 간의 비교를 나타내는 것으로 본 명세서에서 사용된다. 해당 분야의 통상의 기술자에 의해 이해되는 바와 같이, 2개의 서열은 일반적으로, 그들이 상응 위치에서 동일한 잔기를 함유한다면, "실질적인 동일한" 것으로 간주된다. 해당 분야에서 잘 공지된 바와 같이, 아미노산 또는 핵산 서열은 상업 컴퓨터 프로그램, 가령 뉴클레오티드 서열의 경우 BLASTN 그리고 아미노산 서열의 경우 BLASTP, 갭이 있는 BLAST, 및 PSI-BLAST에서 이용가능한 것들을 비롯한, 여러 가지 알고리즘 중 어느 하나를 이용하여 비교될 수 있다. 예시적인 이러한 프로그램은 Altschul, et al., Basic local alignment search tool, J. Mol. Biol., 215(3): 403-410, 1990; Altschul, et al., Methods in Enzymology; Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25:3389-3402, 1997; Baxevanis et al., Bioinformatics : A Practical Guide to the Analysis of Genes and Proteins, Wiley, 1998; 및 Misener, et al., (eds.), Bioinformatics Methods and Protocols (Methods in Molecular Biology, Vol. 132), Humana Press, 1999에서 설명된다. 동일한 서열을 식별하는 것 외에도, 상기 언급된 프로그램은 전형적으로, 동일성의 정도의 표시를 제공한다. 몇몇 구체예에서, 2개의 서열은 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 그들 상응 잔기가 잔기의 관련 스트레치에 대해 동일하다면, 실질적으로 동일한 것으로 간주된다. 몇몇 구체예에서, 관련 스트레치는 완전한 서열이다. 몇몇 구체예에서, 관련 스트레치는 적어도 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500개 또는 그 이상의 잔기이다.

고통 받는: 질병, 장애, 또는 질환 (가령, 인플루엔자)으로부터 "고통 받는" 개채는 질병, 장애, 또는 질환의 하나 이상의 증상으로 진단 받았거나 또는 상기 증상을 나타낸다.

취약한: 질병, 장애, 또는 질환 (가령, 인플루엔자) 에 "취약한" 개체는 질병, 장애, 또는 질환을 발병시킬 위험에 있다. 몇몇 구체예에서, 질병, 장애, 또는 질환에 취약한 개체는 질병, 장애, 또는 질환의 임의의 증상도 나타내지 않는다. 몇몇 구체예에서, 질병, 장애, 또는 질환에 취약한 개체는 질병, 장애, 및/또는 질환을 진단받지 않았다. 몇몇 구체예에서, 질병, 장애, 또는 질환에 취약한 개체는 질병, 장애, 또는 질환의 발병과 연관된 조건에 노출된 개체이다 (가령, 인플루엔자에 노출된 개체).

증상이 감소된다: 본 발명에 따르면, 특정한 질병, 장애 또는 질환의 하나 이상의 증상에서 규모 (가령, 강도, 중증도 등) 또는 빈도가 감소될 때 "증상이 감소된다". 명확성의 목적을 위해, 특정한 증상의 시작의 지연은 그 증상의 빈도를 감소시키는 한 가지 형태로 간주된다. 본 발명은 증상이 제거되는 경우에만 제한되는 것으로 의도되지 않는다. 본 발명은 하나 이상의 증상이 완전히 제거되는 것은 아닐지라도 감소되도록 (그렇게 함으로써 대상의 상태가 "개선"되도록) 치료를 구체적으로 고려한다.

치료제: 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 구절 "치료제"는 대상에게 투여될 때, 치료학적 효과를 갖는 및/또는 바람직한 생물학적 및/또는 약리학적 효과를 유발시키는 임의의 작용제를 지칭한다.

치료학적 유효량: 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "치료학적 유효량"은 임의의 의학적 치료에 적용가능한 합리적인 혜택/위험요소 비로, 대상의 모집단에 투여될 때 특정한 치료학적 효과와 통계학적으로 관련 있는 치료제 (가령, 단백질, 구체적으로 가령, 항체)의 양을 지칭한다. 치료학적 효과는 객관적 (즉, 몇 가지 검사 또는 마커에 의해 측정가능)이거나 또는 주관적 (즉, 대상이 효과의 조짐 또는 의식을 제공함)일 수 있다. 특정하게, "치료학적 유효량"은 질병, 장애, 또는 질환의 발병률 및/또는 중증도를 감소시키는 데에 효과적인 및/또는 질병, 장애, 또는 질환의 하나 이상의 특징, 증상, 또는 특성의 시작을 지연시키는 데에 효과적인 치료제의 양을 지칭한다. 치료학적 유효량은 일반적으로, 다수의 단위 용량을 포함할 수 있는 투여 양생법으로 투여된다. 임의의 특정한 치료학적 단백질의 경우, 치료학적 유효량 (및/또는 효과적인 투약 양생법 내에서 적절한 단위 용량)은 예를 들어, 투여의 경로에 따라 그리고, 다른 약학 제제와의 조합에 따라 달라질 수 있다. 또한, 특정한 환자를 위한 특이적인 치료학적 유효량 (및/또는 단위 용량)은 치료되어야 하는 장애와 장애의 중증도; 이용된 특이적인 제약 제제의 활성; 이용된 특이적인 조성물; 환자의 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별 및 식이요법; 투여 시간, 투여 경로, 및/또는 이용된 특이적인 융합 단백질의 대사 또는 배출 속도; 치료 기간; 및 의학 분야에서 잘 공지된 바와 같은 유사 요인을 비롯한 여러 가지 요인에 의존할 수 있다.

치료: 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치료" (또한 "치료하다" 또는 "치료하는")은 특정한 질병, 장애, 및/또는 질환 (가령, 인플루엔자)의 하나 이상의 증상, 특징, 및/또는 원인의 시작을 부분적으로 또는 완전하게 완화, 개선, 경감, 저해, 지연시키고, 상기 증상, 특징, 및/또는 원인의 중증도를 감소시키고, 및/또는 상기 증상, 특징, 및/또는 원인의 발병률을 감소시키는 물질 (가령, 제공된 조성물)의 임의의 투여를 지칭한다. 이러한 치료는 관련된 질병, 장애 및/또는 질환의 증상을 나타내지 않는 대상 및/또는 질병, 장애, 및/또는 질환의 초기 증상만을 나타내는 대상에게 이루어질 수 있다. 대안으로 또는 추가적으로, 이러한 치료는 관련된 질병, 장애 및/또는 질환의 하나 이상의 확립된 증상을 나타내는 대상에게 이루어질 수 있다. 몇몇 구체예에서, 치료는 관련된 질병, 장애 및/또는 질환으로부터 고통받는 것으로 진단된 대상에게 이루어질 수 있다. 몇몇 구체예에서, 치료는 관련된 질병, 장애 및/또는 질환의 증가된 발달 위험과 통계학적으로 관련 있는 하나 이상의 감수성 인자(susceptibility factor)를 갖는 것으로 공지된 대상에게 이루어질 수 있다.

보편적인 항-인플루엔자 작용제: 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "보편적인 항-인플루엔자 작용제"는 인플루엔자 바이러스 균주, 군, 클레이드, 및 클러스터에 걸쳐 광범위 스펙트럼 중화가 있는 작용제를 지칭한다.

비천연 아미노산: 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "비천연 아미노산"은 20가지의 자연적으로 발생한 아미노산 중 하나가 아닌, 임의의 아미노산, 변형된 아미노산, 및/또는 아미노산 유사체를 지칭한다. 미국 특허 번호 제7,045,337호, 미국 특허 번호 제7,385,028호, 및 미국 특허 번호 제7,332,571호에 관해서, 이들 전체 개시는 참조로서 본 명세서에 편입된다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "비천연 아미노산"은 또한, 염, 아미노산 유도체 (가령, 아미드), 및/또는 치환을 포함하지만, 이에 제한되지 않는, 화학적으로 변형된 아미노산을 포함한다. 펩티드내 카르복시- 및/또는 아미노-말단 아미노산을 비롯한 아미노산은 페길화, 메틸화, 아미드화, 아세틸화, 및/또는 결합제의 활성에 부정적인 영향을 주지 않는 다른 화학 기로의 치환에 의해 변형될 수 있다. 아미노산은 디설파이드 결합에 관여할 수 있다. 용어 "아미노산"은 "아미노산 잔기"와 상호교환적으로 사용되고, 유리 아미노산 및/또는 펩티드의 아미노산 잔기를 지칭할 수 있다. 상기 용어는 유리 아미노산 또는 펩티드의 잔기를 지칭하든 안 하든 상관없이 사용되는 문맥으로부터 명확해질 것이다.

백신 접종: 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "백신 접종"은 예를 들어 질병-유발제에 대한 면역 반응을 발생시키기는 것으로 의도되는 조성물의 투여를 지칭한다. 본 발명의 목적을 위하여, 백신 접종은 질병-유발제에 노출 전, 중, 및/또는 후에 그리고 특정한 구체예에서, 상기 질병-유발제에 노출 전, 중, 및/또는 직후에 투여될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 백신 접종은 적절하게 시간 간격을 두고, 백신 접종 조성물의 다수의 투여를 포함한다.

벡터: 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "벡터"는 연관되어 있는 또 다른 핵산을 수송할 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 몇몇 구체예에서, 벡터는 핵산의 염색체외 복제 및/또는 발현을 할 수 있으며, 그들은 숙주 세포, 가령 진핵 및/또는 원핵 세포에서 연결된다. 작동적으로 연결된 유전자의 발현을 유도할 수 있는 벡터는 본 명세서에서 "발현 벡터"로 언급된다.

상세한 설명

본 명세서에서 설명된 바와 같이, 본 발명은 다수의 인플루엔자 균주에 결합하는 새로운 인플루엔자 결합제를 제공한다. 본 발명은 특정하게, 제공된 항체의 특정한 구조적 및/또는 기능적 특성으로 공유하는 결합제와 함께 인플루엔자 HA에 결합하는 특정한 항체를 제공한다.

인플루엔자 항원

헤마글루티닌 (HA) 폴리펩티드

인플루엔자 바이러스는 특정 바이러스의 막에 내포된, 2개의 글리코단백질, 헤마글루티닌 (HA) 폴리펩티드 그리고 뉴라미다아제 (NA) 폴리펩티드를 함유한 지질 막 외피로 특징되는 RNA 바이러스이다. 16개의 공지된 HA 폴리펩티드 하위유형(H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15, 및 H16) 그리고 9개의 NA 폴리펩티드 하위유형 (N1, N2, N3, N4, N5, N6, N7, N8, 및 N9)이 있으며 그리고 상이한 인플루엔자 균주는 균주의 HA 폴리펩티드 및 NA 폴리펩티드 하위유형의 수에 기반하여 명명되고, 이때 하나의 NA 폴리펩티드 하위유형과 결합된 하나의 HA 폴리펩티드 하위유형의 상이한 조합이 존재한다 (예를 들어, H1N1, H1N2, H1N3, H1N4, H1N5 등).

아미노산 서열 동일성 및 결정 구조의 비교에 기반하여, HA 폴리펩티드 하위유형은 2개의 주요 군과 4개의 더 작은 클레이드로 나뉘어지고, 이는 추가로 5개의 클러스터로 나뉘어 진다. 상이한 HA 폴리펩티드 하위유형은 강력한 아미노산 서열 동일성을 필수적으로 공유하지는 않지만, 상이한 HA 폴리펩티드 하위유형의 전체 3D 구조는 분류 목적을 위해 사용될 수 있는 여러 가지 미묘한 차이점을 가지고, 서로 유사하다. 예를 들어, 중앙 α-나선에 관하여, 막-원위 서브도메인의 특정한 배향(orientation)은 HA 폴리펩티드 하위유형을 결정하는 데에 공통적으로 이용되는 하나의 구조적 특성이다 (Russell et al., Virology, 325:287, 2004).

자연에서 발생하는 바와 같은 HA는 3개의 동일한 단량체로 이루어진 삼합체며, 각각은 2개의 디-설파이드 결합된 폴리펩티드 사슬로 단백질 가수분해 처리되는 전구체를 합성한다. 성숙한 HA 폴리펩티드는 2개의 도메인, (1) 시알산-결합 도메인으로 공지된 중심 HA-1 도메인, 그리고 (2) HA-2 도메인으로 공지된, HA의 막관통 경상부로 구성된다. HA-1은 글리칸에 대한 결합 부위를 함유하고 HA-1이 HA-수용체와 HA의 결합을 매개하는 것의 원인이 되는 것으로 간주된다. HA-2는 HA-1 도메인 제시의 원인이 된다. 전형적으로, HA 단량체의 줄기부의 3개의 긴 HA 알파-나선 사이에서 극성 및 비-극성 상호작용은 HA 삼합체를 안정시키기 위한 주력을 제공한다. 본 발명에 따라 HA 폴리펩티드는 임의의 HA 도메인 (가령, 중심 HA-1, 막관통 HA-2, 및/또는 이의 조합)으로부터 아미노산 잔기 및/또는 서열을 함유할 수 있다는 점이 이해될 것이다.

몇몇 구체예에서, 본 발명에 따라 HA 폴리펩티드는 하나 보다 더 많은 인플루엔자 하위유형에 걸쳐 보존된 서열을 함유한다. 예를 들면, 모든 인플루엔자 하위유형으로부터 HA 서열의 분석은 HA-1 (머리부) 및 HA-2 (경상부) 도메인의 접점에서 아미노산의 세트를 보여주었으며, 상기 도메인들은 잘 보존되고 유망한 치료학적 분자에 접근가능하다. 또한 연구를 통해 정규 α-나선 및/또는 이의 인근내 잔기를 포함하는 HA-1/HA-2 접점 막 근위 에피토프 영역 (MPER)의 뛰어난 광범위 스펙트럼 보존을 관찰하였다 (Ekiert et al., Science,. 324(5924):246, 2009; Sui et al., Nat Struct Mol Biol. 16(3):265, 2009).

HA 수용체

본 명세서에서 설명된 바와 같은 HA 폴리펩티드는 HA 수용체로 공지된, 글리코단백질 수용체에 결합함으로써 세포의 표면과 상호작용한다. HA 수용체와 HA 폴리펩티드의 결합은 HA 수용체 상의 N-연결 글리칸에 의해 대부분 매개된다. 구체적으로, 독감 바이러스 입자의 표면 상의 HA 폴리펩티드는 세포 숙주의 표면 상의 HA 수용체와 연관된 시알릴화 글리칸을 인식한다. 인식과 결합 후, 숙주 세포는 바이러스 세포를 완전히 에워싸고 바이러스는 이웃 세포에 분포되기 위해 복제가능해지고 더욱 많은 바이러스 입자를 생산한다.

천연 HA (그리고 많은 구체예에서, HA 폴리펩티드)는 H1-H16으로 명명되는, 16개의 하위유형 중 하나의 호모삼합체로서 바이러스 막에 존재한다. 이들 하위유형 중 오직 3개 (H1, H2, 및 H3)만이 지금까지 인간 감염에 적합해졌다. 인간을 감염시키는 데에 적합해진 HA 폴리펩티드 (가령, 대유행성 H1N1 (1918)과 H3N2 (1967-68) 인플루엔자 하위유형으로부터의 HA 폴리펩티드)의 한 가지 보고된 특성은 α2,3 시알릴화 글리칸에 바람직하게 결합하는 그들의 조류 전구세포와 비교하여 α2,6 시알릴화 글리칸에 바람직하게 결합하는 그들의 능력이다 (Skehel & Wiley, Annu Rev Biochem, 69:531, 2000; Rogers, & Paulson, Virology, 127:361, 1983; Rogers et al., Nature, 304:76, 1983; Sauter et al., Biochemistry, 31:9609, 1992; Connor et al., Virology, 205:17, 1994; Tumpey et al., Science, 310:77, 2005).

임의의 특정 이론에 한정됨 없이, 인간 숙주를 감염시키는 능력은 특정 연결의 글리칸과의 결합과는 덜 관련있고, 특정 토폴로지(topology)의 글리칸과의 결합과는 더욱 관련이 있다는 점이 제안되었다. 인간의 감염을 매개하는 HA 폴리펩티드는 우산형 토폴로지 글리칸에 결합한다는 점을 구체적으로 증명하였으며, 이는 종종 원뿔형 토폴로지 글리칸보다 (비록 원뿔형-토폴로지 글리칸이 α2,6 시알릴화 글리칸이 될 수 있음에도 불구하고) 우산형 토폴로지 글리칸을 더 선호한다는 것을 보여준다 (예를 들어, 2009년 1월 2일에 제출된 USSN 12/348,266, 2008년 11월 17일에 제출된 USSN 12/301,126, 2008년 1월 3일에 제출된 USSN 61/018,783, 2008년 1월 3일에 제출된 USSN 11/969,040, 2007년 8월 14일에 제출된 USSN 11/893,171, 2006년 8월 14일에 제출된 USSN 60/837,868, 8월 14일에 제출된 USSN 60/837,869, 그리고 2007년 8월 14일에 제출된 PCT 출원 PCT/US07/18160을 참고, 이들 각각은 참조로서 본 명세서에 편입됨).

시알릴화 올리고사카라이드 (α2,3 및 α2,6 연결 둘 모두의 것)에 결합된 H1 (인간 및 돼지), H3 (조류) 그리고 H5 (조류) 하위유형으로부터 HA 폴리펩티드의 여러 가지 결정 구조는 이용가능하고 이들 글리칸과 HA 폴리펩티드의 뚜렷한 상호작용에 관여하는 특이적인 아미노산에 대한 분자적 통찰력을 제공한다 (Eisen et al., Virology, 232:19, 1997; Ha et al., Proc Natl Acad Sci USA, 98:11181, 2001; Ha et al., Virology, 309:209, 2003; Gamblin et al., Science, 303:1838, 2004; Stevens et al., Science, 303:1866, 2004; Russell et al., Glycoconj J 23:85, 2006; Stevens et al., Science, 312:404, 2006). 예시적인 HA-글리칸 상호작용의 몇 가지 결정 구조가 식별되었고 하기 표 1에 제시된다.

[표 1]

HA - α2-6 시알릴화 글리칸 복합체는 ASI30_H1_26과 APR34_H1_26 (H1) 상에서 Viet04_H5 그리고 ADU63_H3과 ADS97_H5의 HA1 아단위의 CA 흔적(trace)의 중첩에 의해 만들어졌다. α2-6 시알릴화 글리칸과 인간 A/아이치/2/68 (H3N2)의 구조적 복합체가 공개되었음에도 불구하고 (Eisen et al., 1997, Virology, 232:19; 참조로서 본 명세서에 편입됨), 그들의 배위는 단백질 데이터 은행(Protein Data Bank)에서 이용불가하다. 중첩을 위한 상이한 HA1 아단위의 구조적 정렬을 얻기 위해 SARF2 프로그램이 사용되었다.

예를 들어, H5 (A/오리/싱가포르/3/97) 단독 또는 α2,3 또는 α2,6 시알릴화 올리고사카라이드에 결합된 H5의 결정 구조는 결합된 글리칸과 직접적으로 상호작용하는 특정 아미노산, 그리고 제거된 분리도(degree of separation)가 하나 이상인 아미노산도 또한 식별한다 (Stevens et al., Proc Natl Acad Sci USA 98:11181, 2001). 몇몇 경우에, 이들 잔기의 입체구조는 결합 대 비결합 상태에서 상이하다. 예를 들면, Glu190, Lys193 및 Gln226 모두 직접-결합 상호작용에 관여하고 결합 대 비결합 상태에서 상이한 입체구조를 갖는다. Glu190에 가까운 Asn186의 입체구조는 또한 결합 대 비결합 상태에서 유의적으로 상이하다.

임의의 특정 이론에 한정됨 없이, HA 수용체는 수용체의 HA 폴리펩티드-결합 부위 근처의 α2,3 또는 α2,6 시알릴화 글리칸 중 하나에 의해 변형되고, 그리고 수용체-결합된 글리칸의 연결 유형은 수용체의 HA 폴리펩티드-결합 부위의 입체구조에 영향을 줄 수 있고, 따라서 상이한 HA 폴리펩티드에 대한 수용체의 특이성에 영향을 준다는 점이 간주된다. 예를 들어, 조류 HA 수용체의 글리칸 결합 포켓(pocket)은 좁다. 임의의 특정 이론에 한정됨 없이, 이 포켓은 α2,3 시알릴화 글리칸의 트랜스(trans) 입체구조에, 및/또는 α2,3 또는 α2,6 연결된 것에 관계없이, 원뿔형-토폴로지 글리칸에 결합한다는 점이 제시되었다.

조류 조직내, 그리고 또한 인간 폐의 심부(deep lung)와 위장 (GI) 관 조직내 HA 수용체는 α2,3 시알릴화 글리칸 연결로 특징되고, 그리고 추가로, 대부분이 원뿔형 토폴로지를 취하는, α2,3 시알릴화 및/또는 α2,6 시알릴화 글리칸을 비롯한, 글리칸으로 특징된다. 이러한 원뿔형-토폴로지 글리칸을 갖는 HA 수용체는 본 명세서에서 CTHArs로서 언급될 수 있다.

대조적으로, 기도 위쪽의 기관지 및 기관내 인간 HA 수용체는 α2,6 시알릴화 글리칸에 의해 변형된다. α2,3 모티프와는 다르게, α2,6 모티프는 C6-C5 결합으로 인해 추가적인 입체구조 자유도를 갖는다 (Russell et al., Glycoconj J 23:85, 2006). 이러한 α2,6 시알릴화 글리칸에 결합하는 HA 폴리펩티드는 이 입체구조 자유로부터 생긴 구조의 다양성에 순응하기 위해 더 열린 결합 포켓을 갖는다. 더욱이, 본 발명에 따라, HA 폴리펩티드는 인간의 상부 기도 조직의 감염을 효과적으로 매개하기 위하여, 우산형 토폴로지내 글리칸 (가령, α2,6 시알릴화 글리칸)에 결합해야할 수도 있으며, 그리고 특정하게는 강한 친화도 및/또는 특이성을 가진 이러한 우산형 토폴로지 글리칸에 결합해야할 수도 있다. 우산형-토폴로지 글리칸을 가진 HA 수용체는 본 명세서에서 UTHArs로 언급될 수 있다.

이들 공간적으로 제한된 글리코실화 프로필의 결과로서, 인간은 많은 야생형 조류 HA 폴리펩티드 (가령, 조류 H5)를 함유한 바이러스에 의해 주로 감염되지 않는다. 구체적으로, 바이러스와 접할 가능성이 가장 큰 인간의 기도 부분 (즉, 기관 및 기관지)은 원뿔형 글리칸 (가령, α2,3 시알릴화 글리칸, 및/또는 짧은 글리칸)을 갖는 수용체 그리고 전형적으로, 원뿔형 글리칸 (가령, α2,3 시알릴화 글리칸, 및/또는 짧은 글리칸)과 연관된 수용체에 주로 또는 독점적으로 결합하는 야생형 조류 HA 폴리펩티드가 부족하기 때문에, 인간은 조류 바이러스에 거의 감염되지 않는다. 우산형 글리칸 (가령, 긴 α2,6 시알릴화 글리칸)을 갖는 폐의 심부 및/또는 위장관 수용체에 접근할 수 있는 바이러스와 충분히 가깝게 접촉할 때에만, 인간은 감염된다.

인플루엔자 감염의 증상 및 영향

인플루엔자 감염 또는 "독감"은 주로 인간 신체의 코, 목 및 기관지에서의 바이러스 감염이다. 상기 설명된 바와 같이, 여러 가지 상이한 인플루엔자 균주와 하위유형의 존재를 고려할 때, 인플루엔자 감염과 연관된 증상의 중증도는 감염 유형에 따라 달라할 수 있다. 또한 만성 근본 질병 (가령, 암, 기종 또는 당뇨병)을 앓는 개채 또는 면역력이 약화된 개체에서 증상은 생명에 위협을 줄 수 있다. 증상의 중증도가 달라질 수 있지만, 염증, 열, 메스꺼움, 무게 감소, 식욕 감소, 빠른 호흡, 심박동수 증가, 고혈압, 몸살, 근육통, 안통, 피로, 불쾌감, 마른 기침, 콧물, 및/또는 인후염과 같은, 하지만 이에 제한되지 않는 인플루엔자 감염의 여러 가지 특징적인 증상이 있다. 결과로서, 몇몇 구체예에서, 환자내 증상의 징후는 인플루엔자 감염의 존재를 결정하는 데에 예후 또는 진단으로서 이용될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 증상의 중증도 및/또는 변화는 인플루엔자 치료, 가령 결합제의 투여를 위해 투여 양생법을 결정하는 데에 이용될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 환자에 의해 나타나는 증상의 시작, 중증도 및/또는 변화는 결합제를 이용한 환자의 예방을 위한 치료에 대한 필요성을 나타내는 데에 이용될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 증상의 중증도, 변화 및/또는 개선은 인플루엔자 치료의 특이적인 유형 또는 방법에 대한 환자의 반응을 평가하는 데에 이용될 수 있다.

항체

본 명세서에서 살명된 바와 같이, 본 발명은 HA 폴리펩티드에 결합하는, 몇몇 구체예에서 다수의 인플루엔자 균주에 결합하는 항체 (가령, 단일클론 항체, 인간 항체, 인간화된 항체 등)를 제공한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 항체는 인플루엔자의 예방, 치료, 진단, 및/또는 연구에서 유용하다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 항체는 해당 분야에서 이해되는 바와 같이, 면역글로불린의 구조적 특성을 갖는 폴리펩티드를 지칭한다. 많은 구체예에서, 항체는 아미노산 서열이 상보성 결정 영역 (CDR)으로서 해당 분야의 통상의 기술자에 의해 인식되는 하나 이상의 구조적 요소를 포함하는 폴리펩티드이다. 몇몇 구체예에서, 항체는 아미노산 서열이 면역글로불린 가변 도메인으로서 해당 분야의 통상의 기술자에게 인식되는 구조적 요소를 포함하는 폴리펩티드이다. 몇몇 구체예에서, 항체는 자연적으로-생성된 항체에서 일어나는 것과 같이 디설파이드 결합에 의해 선택적으로 회합되는, 2개의 중쇄와 2개의 경쇄를 함유한다는 점에서 "전장"이다. 몇몇 구체예에서, 항체는 전장 항체에서 발견된 서열 전체는 아니지만, 몇 개를 함유한다는 점에서 전장 항체의 단편이다. 예를 들어, 몇몇 구체예에서, 항체 단편의 예시는 Fab, Fab', F(ab')2, scFv, Fv, dsFv 디아바디, 및 Fd 단편을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 몇몇 구체예에서, 항체는 단쇄 항체 단편을 포함할 수 있다. 몇몇 구체예에서, 항체는 예를 들어, 디설파이드 연결에 의해 함께 연결되는 다수의 사슬을 포함한다. 몇몇 구체예에서, 항체는 다분자 복합체를 포함할 수 있다. 몇몇 구체예에서, 항체는 적어도 약 50개의 아미노산을 포함할 수 있고 그리고 전형적으로는 적어도 약 200개의 아미노산을 포함할 수 있다.

몇몇 구체예에서, 항체는 IgG, IgM, IgA, IgD, 및 IgE로 구성된 군에서 선택된 항체 클래스 구성원이다. 몇몇 구체예에서, 항체는 세포에 의해 생성된다. 몇몇 구체예에서, 항체는 재조합 세포 배양 시스템을 이용하여 생성된다. 몇몇 구체예에서, 항체는 화학적 합성에 의해 생성된다. 몇몇 구체예에서, 항체는 단일클론 항체이다. 몇몇 구체예에서, 항체는 다클론 항체이다. 몇몇 구체예에서, 항체는 포유류로부터 유래된다. 몇몇 구체예에서, 항체는 생쥐, 랫트, 말, 돼지, 또는 염소와 같은, 하지만 이에 제한되지 않는 동물에 의해 생성된다. 몇몇 구체예에서, 항체는 인간으로부터 유래된다. 몇몇 구체예에서 항체는 예를 들어, 인간 불변 및/또는 가변 영역 도메인을 가진, 생쥐, 랫트, 말, 돼지, 또는 다른 종으로부터의 키메라 항체이다. 몇몇 구체예에서, 항체는 인간화된 항체이다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "인간화된" 항체는 비-인간 (가령, 생쥐 또는 랫트) 면역글로불린으로부터의 하나 이상의 CDR 그리고 인간 프레임워크 영역을 포함한 면역글로불린을 지칭한다. CDR을 제공하는 비-인간 면역글로불린을 "공여자"라고 부르고 프레임워크를 제공하는 인간 면역글로불린은 "수용자"라 부른다. "인간화된 항체"는 인간화된 경쇄 및 인간화된 중쇄 면역글로불린을 포함한 항체이다.

항체 변형

몇몇 구체예에서, 제공된 항체에서 하나 이상의 서열은 해당 분야에서 공지된 바와 같이, 하나 이상의 특성 또는 활성을 향상시키도록 (안정성을 증가시키고 응집은 감소시키고, 면역원성은 감소시키도록) 조작되었다 (가령, 친화도 성숙 또는 다른 최적화 기법). 몇몇 구체예에서, 항체는 페길화, 메틸화, 시알릴화, 아미노화 또는 항산화에 의해 변형된다. 몇몇 구체예에서, 항체는 고분자 미셀(polymeric micelle)을 만들기 위해 양친매성 중심부/외피에 접합된다. 몇몇 구체예에서, 항체는 고차분지형 거대분자 (즉 덴드리머)에 접합된다. 몇몇 구체예에서, 항체는 알부민, 키토산, 헤파린, 파클리탁셀, 폴리-(L-글루타메이트), N-(2-하이드록시프로필)메타크릴아미드 (HPMA), 폴리-(L-락티드) (PLA), 폴리(아미도아민) (PAMAM), 폴레이트 및/또는 이의 조합로 구성된 군에서 선택된 천연 중합체에 접합된다. 몇몇 구체예에서, 항체는 친수성 아미노산 (rPEG)의 긴 비구조 꼬리를 하나 이상 포함한다. 몇몇 구체예에서, 항체 결합 부위를 변경시키지 않는 반응 조건을 이용하여, 면역글로불린의 Fc 영역내 설프하이드릴기를 선별적으로 도입시킴에 의한 면역글로불린의 유도체화가 고려된다. 방법론에 따라 생성된 항체 접합체는 향상된 수명, 특이성 및 민감도를 나타낼 수 있다 (미국 특허 번호 제5,196,066호, 참조로서 본 명세서에 편입됨). 효과기 또는 리포터(reporter) 분자의 부위-특이적 부착이 또한 문헌 (O'Shannessy et al., 1987)에 개시되었으며, 여기서 리포터 또는 효과기 분자는 Fc 영역내 탄수화물에 접합된다.

제공된 항-HA 항체

본 개시는 인플루엔자 HA에 결합하는 특정한 항체를 제공한다. 본 발명은 특정하게, 하나 이상의 인플루엔자 군으로부터의 특정 HA 에피토프 및/또는 HA에 결합하는 것으로 특징되는 특정한 항체를 제공한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 항체는 군 1 바이러스로부터의 특정 HA 에피토프 및/또는 HA에 결합하는 것으로 특징된다. 몇몇 구체예에서, 이러한 항체는 군 2 바이러스로부터의 특정 HA 에피토프 및/또는 HA에 결합하는 것으로 특징된다. 몇몇 구체예에서, 이러한 항체는 군 1 바이러스와 군 2 바이러스로부터의 특정 HA 에피토프 및/또는 HA에 결합하는 것으로 특징된다. 몇몇 구체예에서, 이러한 항체는 하위유형 H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15, 및/또는 H16의 HA 폴리펩티드에 결합한다. 구체적으로, 몇몇 구체예에서, 이러한 항체는 H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15 및 H16 HA 폴리펩티드 중 하나 이상의 서열 요소 특성을 갖는 HA 폴리펩티드에 결합한다. 몇몇 구체예에서, 이런 항체는 상이한 H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15 및 H16 HA 폴리펩티드 중 하나 이상에 대한 이의 친화도의 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 그 이상인 친화도로 H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15 및 H16 HA 폴리펩티드 중 하나 이상에 결합한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 항체는 서로의 결합 친화도가 5배 이내에 있는 상이한 HA 폴리펩티드 (가령, 상이한 군, 클레이드, 또는 클러스터로부터 및/또는 상이한 균주로부터 HA 폴리펩티드)에 대한 결합 친화도를 보여준다. 몇몇 구체예에서 이러한 항체는 서로의 결합 친화도가 2배 이내에 있는 상이한 HA 폴리펩티드에 대한 결합 친화도를 보여준다. 몇몇 구체예에서 이러한 항체는 서로의 결합 친화도가 150배 이내 (가령, 100배 이내, 50배 이내, 25배 이내, 10배 이내, 또는 5배 이내)에 있는 상이한 HA 폴리펩티드 (가령, 상이한 군, 클레이드, 또는 클러스터로부터 및/또는 상이한 균주로부터 HA 폴리펩티드)에 대한 결합 친화도를 보여준다.

몇몇 구체예에서, 이러한 항체는 H1, H3, H5, H7, 및/또는 H9 HA 폴리펩티드 중 적어도 2개에 결합한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 항체는 H1, H3, H5, H7, 및/또는 H9 HA 폴리펩티드 중 적어도 3, 4 또는 5개에 결합한다.

몇몇 구체예에서, 이러한 항체는 하위유형 H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15, 및/또는 H16 중 적어도 하나의 HA 폴리펩티드에 결합하고, 하위유형 H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15, 및/또는 H16의 적어도 하나의 HA 폴리펩티드에 결합하지 않는다. 몇몇 구체예에서, 이러한 항체는 하위유형 H1의 HA 폴리펩티드에 결합한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 항체는 하위유형 H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15, 및/또는 H16 중 적어도 하나의 HA 폴리펩티드에 결합한 것의 적어도 100%, 적어도 125%, 적어도 150%, 적어도 200% 또는 그 이상의 친화도로 하위유형 H1의 HA 폴리펩티드에 결합한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 항체는 하위유형 H3의 HA 폴리펩티드에 결합한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 항체는 하위유형 H1, H2, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15, 및/또는 H16 중 적어도 하나의 HA 폴리펩티드에 결합하는 것의 적어도 100%, 적어도 125%, 적어도 150%, 적어도 200% 또는 그 이상의 친화도로 하위유형 H3의 HA 폴리펩티드에 결합한다.

몇몇 구체예에서, 이러한 항체는 본 명세서에서 설명된 및/또는 예시화된 바와 같은 범위 내에서 중화 IC₅₀ (ug/ml)을 나타낸다. 몇몇 구체예에서, 이러한 제공된 항체는 하계가 약 0.1 ug/ml이고 상계가 약 10 ug/ml인 중화 IC₅₀ (ug/ml)을 나타낸다. 몇몇 구체예에서, 이러한 제공된 항체는 하계가 0.05, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0 ug/ml 또는 그 이상으로 구성된 군에서 선택되고, 상계는 하계보다 더 높으며 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0, 9.5, 10.0 ug/ml 또는 그 이상으로 구성된 군에서 선택되는 중화 IC₅₀ (ug/ml)을 나타낸다.

몇몇 구체예에서, 이러한 제공된 항체는 하계가 약 0.01x10⁵ M^-1s^-1 이고 상계가 약 1.0x10⁶ M^-1s^-1인 K_a (M^-1s^-1)로 인플루엔자 HA에 결합하는 것을 보여준다. 이러한 제공된 항체는 하계가 0.01x10⁵, 0.02x10⁵, 0.04x10⁵, 0.04x10⁵, 0.08x10⁵, 0.1x10⁵, 0.2x10⁵, 0.4x10⁵, 0.6x10⁵, 0.8x10⁵, 1.0x10⁵, 1.2x10⁵, 1.4x10⁵, 1.6x10⁵, 1.8x10⁵, 2.0x10⁵ M^-1s^-1 또는 그 이상으로 구성된 군에서 선택되고 상계는 하계보다 더 높으며 1.0x10⁵, 1.5x10⁵, 2.0x10⁵, 2.5x10⁵, 3.0x10⁵, 3.5x10⁵, 4.5x10⁵, 5.0x10⁵, 5.5x10⁵, 6.0x10⁵, 6.5x10⁵, 7.0x10⁵, 7.5x10⁵, 8.0x10⁵, 8.5x10⁵, 9.0x10⁵, 9.5x10⁵, 1.0x10⁶ 1.1x10⁶, 1.2x10⁶, 1.3x10⁶, 1.4x10⁶, 1.5x10⁶, 1.6x10⁶, 1.7x10⁶, 1.8x10⁶, 1.9x10⁶ M^-1s^-1 또는 그 이상으로 구성된 군에서 선택되는 K_a (M^-1s^-1)로 인플루엔자 HA에 결합하는 것을 보여준다.

몇몇 구체예에서, 이러한 제공된 항체는 하계가 약 0.01x10⁵ s^-1이고 상계가 약 1.0x10⁶ s^-1인 K_d (s^-1)로 인플루엔자 HA에 결합하는 것을 보여준다. 이러한 제공된 항체는 하계가 0.01x10⁵, 0.02x10⁵, 0.04x10⁵, 0.04x10⁵, 0.08x10⁵, 0.1x10⁵, 0.2x10⁵, 0.4x10⁵, 0.6x10⁵, 0.8x10⁵, 1.0x10⁵, 1.2x10⁵, 1.4x10⁵, 1.6x10⁵, 1.8x10⁵, 2.0x10⁵ s^-1 또는 그 이상으로 구성된 군에서 선택되고 상계는 하계보다 더 높으며 1.0x10⁵, 1.5x10⁵, 2.0x10⁵, 2.5x10⁵, 3.0x10⁵, 3.5x10⁵, 4.5x10⁵, 5.0x10⁵, 5.5x10⁵, 6.0x10⁵, 6.5x10⁵, 7.0x10⁵, 7.5x10⁵, 8.0x10⁵, 8.5x10⁵, 9.0x10⁵, 9.5x10⁵, 1.0x10⁶ 1.1x10⁶, 1.2x10⁶, 1.3x10⁶, 1.4x10⁶, 1.5x10⁶, 1.6x10⁶, 1.7x10⁶, 1.8x10⁶, 1.9x10⁶ s^-1 또는 그 이상으로 구성된 군에서 선택되는 K_a (s^-1)로 인플루엔자 HA에 결합되는 것을 보여준다.

몇몇 구체예에서, 이러한 제공된 항체는 특이적인 구조적 특징으로 특징된다. 몇몇 구체예에서, 이러한 특정한 제공 항체의 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호: 1-60)에서의 상응하는 CDR 또는 FR과 서열이 적어도 65, 70, 75, 80, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99% 동일한 하나 이상의 CDR 또는 하나 이상의 FR을 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 특정한 제공 항체의 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호: 1-60)에서의 상응하는 CDR 또는 FR과 적어도 65, 70, 75, 80, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99% 상동을 포함하는 하나 이상의 CDR 또는 하나 이상의 FR을 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 특정한 제공 항체의 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호: 1-60)에서의 상응하는 CDR 또는 FR과 서열이 동일한 하나 이상의 CDR 및/또는 하나 이상의 FR을 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 특정한 제공 항체의 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호: 1-60)에서 제시된 것들과 서열이 동일한 CDR과 FR을 포함한다.

[표 2]

[표 3]

몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 CDR과 FR 서열 요소를 포함하고, 이들 각각은 표 2 및/또는 표 3 (서열 번호:1-60)에서 제시된 참조 CDR 또는 FR 서열 요소와 동일하지만 상기 참조 서열 요소에 관하여 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다는 것은 제외하며, 이때 포함된 CDR과 FR 서열 요소는 표 2와 3 (서열 번호: 1-60)에서의 상응하는 CDR과 FR 참조 서열 요소와 비교하여, CDR과 FR 서열에서 둘 다 단지 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1개의 치환만 함유한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 CDR과 FR 서열 요소가 표 2와 3 (서열 번호: 1-60)에서의 상응하는 CDR과 FR 참조 서열 요소와 비교하여 둘 다 단지 18개의 치환만 함유한다는 점을 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 CDR과 FR 서열 요소가 표 2와 3 (서열 번호: 1-60)에서의 상응하는 CDR과 FR 참조 서열 요소와 비교하여 둘 다 단지 15개의 치환만 함유한다는 점을 포함한다.

몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 VL 서열 요소를 포함하고, 이는 표 2 및/또는 표 3 (서열 번호:1-60)에서 제시된 참조 VL 서열 요소와 동일하지만 상기 참조 서열 요소에 관하여 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다는 것은 제외하며, 이때 포함된 VL 서열 요소는 표 2와 3 (서열 번호: 1-60)에서의 상응하는 VH 참조 서열 요소와 비교하여, CDR 서열에서 단지 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1개의 치환만 함유한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호: 1-60)에서의 상응하는 VL 참조 서열 요소와 비교하여, VL-1, VL-2, VL-3, VL-4, VL-5, VL-6, VL-7, VL-8, VL-9, VL-10, VL-11, 또는 이의 단편 중 어느 하나에 상응하는 구조적 요소를 포함한다.

몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 VL-1, VL-2, VL-3, VL-4, VL-5, VL-6, VL-7, VL-8, VL-9, VL-10, VL-11, 또는 이의 단편 중 어느 하나와 조합된 VH-1, VH-2, VH-3, VH-4, VH-5, VH-6, VH-7, VH-8, VH-9, VH-10, VH-11, VH-12, VH-13, VH-14, VH-15, VH-16 또는 이의 단편 중 어느 하나와 상응하는 구조적 요소를 포함한다. 몇몇 구체예에서, VH-1 (서열 번호:1)은 VL-1 (서열 번호:33)과 조합된다.

몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2 및/또는 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR2 서열 요소와 적어도 65%, 70% 초과, 75% 초과, 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 95% 초과, 또는 99% 초과의 동일성을 보이는 상보성 결정 영역 (CDR) 2 서열 요소를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR2 서열 요소와 비교하여 2개 이상의 아미노산 치환을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 2 서열 요소를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR2 서열 요소와 비교하여 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 2 서열 요소를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR2 서열 요소와 비교하여 적어도 2개의 아미노산 치환을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 2 서열 요소를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR2 서열 요소와 비교하여 2개 미만의 아미노산 치환을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 2 서열 요소를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR2 서열 요소 중 하나의 것과 동일한 아미노산 서열을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 2 서열 요소를 포함한다.

몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2 및/또는 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR3 서열 요소와 적어도 65%, 70% 초과, 75% 초과, 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 95% 초과, 또는 99% 초과의 동일성을 보이는 상보성 결정 영역 (CDR) 3 서열 요소를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR3 서열 요소와 비교하여 2개 이상의 아미노산 치환을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 3 서열 요소를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR3 서열 요소와 비교하여 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 3 서열 요소를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR3 서열 요소와 비교하여 적어도 2개의 아미노산 치환을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 3 서열 요소를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR3 서열 요소와 비교하여 2개 미만의 아미노산 치환을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 3 서열 요소를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR3 서열 요소 중 하나의 것과 동일한 아미노산 서열을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 3 서열 요소를 포함한다.

결합제

구조 및 특징

본 개시는 인플루엔자 결합제를 제공한다. 본 발명은 이러한 특정한 제공 항체의 이러한 구조적 특징을 포함하는 결합제를 특정하게 제공하고, 따라서 제공된 결합제는 특이적인 인플루엔자 군으로부터의 특정한 HA 에피토프 및/또는 HA에 결합하는 기능적 속성을 특정한 제공 인플루엔자 항체와 공유한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 결합제는 군 1 바이러스로부터의 특정한 HA 에피토프 및/또는 HA에 결합하는 기능적 속성으로 특징된다. 몇몇 구체예에서, 이러한 결합제는 군 2 바이러스로부터의 특정한 HA 에피토프 및/또는 HA의 기능적인 속성으로 특징된다. 몇몇 구체예에서, 이러한 결합제는 군 1 바이러스와 군 2 바이러스로부터의 특정한 HA 에피토프 및/또는 HA에 결합하는 기능적 속성으로 특징된다. 몇몇 구체예에서, 이러한 결합제는 하위유형 H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15, 및/또는 H16의 HA 폴리펩티드에 결합하는 기능적 속성으로 특징된다. 구체적으로, 몇몇 구체예에서, 이러한 결합제는 H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15 및 H16 HA 폴리펩티드 중 하나 이상의 서열 요소 특성을 갖는 HA 폴리펩티드에 결합하는 기능적 속성으로 특징된다. 몇몇 구체예에서, 이러한 결합제는 상이한 H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15 및 H16 HA 폴리펩티드 중 하나 이상에 대한 이의 친화도의 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 그 이상의 친화도로 H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15 및 H16 HA 폴리펩티드 중 하나 이상에 결합하는 기능적 속성으로 특징된다.

몇몇 구체예에서, 이러한 결합제는 서로의 결합 친화도가 5배 이내에 있는 상이한 HA 폴리펩티드 (가령, 상이한 군, 클레이드, 또는 클러스터로부터 및/또는 상이한 균주로부터 HA 폴리펩티드)에 대한 결합 친화도를 보여준다. 몇몇 구체예에서 이러한 결합제는 서로의 결합 친화도가 2배 이내에 있는 상이한 HA 폴리펩티드에 대한 결합 친화도를 보여준다. 몇몇 구체예에서 이러한 결합제는 서로의 결합 친화도가 150배 이내 (가령, 100배 이내, 50배 이내, 25배 이내, 10배 이내, 또는 5배 이내)에 있는 상이한 HA 폴리펩티드 (가령, 상이한 군, 클레이드, 또는 클러스터로부터 및/또는 상이한 균주로부터 HA 폴리펩티드)에 대한 결합 친화도를 보여준다.

몇몇 구체예에서, 이러한 결합제는 H1, H3, H5, H7, 및/또는 H9 HA 폴리펩티드 중 적어도 2개에 결합하는 기능적 속성으로 특징된다. 몇몇 구체예에서, 이러한 결합제는 H1, H3, H5, H7, 및/또는 H9 HA 폴리펩티드 중 적어도 3, 4 또는 5개에 결합하는 기능적 속성으로 특징된다.

몇몇 구체예에서, 이러한 결합제는 하위유형 H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15, 및/또는 H16 중 적어도 하나에 결합하는 기능적 속성으로 특징되고, 하위유형 H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15, 및/또는 H16의 적어도 하나의 HA 폴리펩티드에 결합하지 않는다. 몇몇 구체예에서, 이러한 결합제는 하위유형 H1의 HA 폴리펩티드에 결합한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 결합제는 하위유형 H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15, 및/또는 H16 중 적어도 하나의 HA 폴리펩티드에 결합하는 것의 적어도 100%, 적어도 125%, 적어도 150%, 적어도 200% 또는 그 이상의 친화도로 하위유형 H1의 HA 폴리펩티드에 결합한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 결합제는 하위유형 H3의 HA 폴리펩티드에 결합한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 결합제는 하위유형 H1, H2, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15, 및/또는 H16 중 적어도 하나의 HA 폴리펩티드에 결합하는 것의 적어도 100%, 적어도 125%, 적어도 150%, 적어도 200% 또는 그 이상의 친화도로 하위유형 H3의 HA 폴리펩티드에 결합한다.

몇몇 구체예에서, 이러한 결합제는 본 명세서에서 설명된 및/또는 예시화된 바와 같은 범위 내에서 중화 IC₅₀ (ug/ml)을 나타내는 기능적 속성으로 특징된다. 몇몇 구체예에서, 이러한 결합제는 하계가 약 0.1 ug/ml이고 상계가 약 10 ug/ml인 중화 IC₅₀ (ug/ml)을 나타낸다. 몇몇 구체예에서, 이러한 결합제는 하계가 0.05, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0 ug/ml 또는 그 이상으로 구성된 군에서 선택되고 상계는 하계보다 더 높으며 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0, 9.5, 10.0 ug/ml 또는 그 이상으로 구성된 군에서 선택되는 중화 IC₅₀ (ug/ml)을 나타낸다.

몇몇 구체예에서, 이러한 제공된 결합제는 하계가 약 0.01x10⁵ M^-1s^-1이고 상계가 약 1.0x10⁶ M^-1s^-1인 K_a (M^-1s^-1)로 인플루엔자 HA에 결합하는 것을 보여준다. 이러한 제공된 항체는 하계가 0.01x10⁵, 0.02x10⁵, 0.04x10⁵, 0.04x10⁵, 0.08x10⁵, 0.1x10⁵, 0.2x10⁵, 0.4x10⁵, 0.6x10⁵, 0.8x10⁵, 1.0x10⁵, 1.2x10⁵, 1.4x10⁵, 1.6x10⁵, 1.8x10⁵, 2.0x10⁵ M^-1s^-1 또는 그 이상으로 구성된 군에서 선택되고, 상계는 하계보다 더 높으며 1.0x10⁵, 1.5x10⁵, 2.0x10⁵, 2.5x10⁵, 3.0x10⁵, 3.5x10⁵, 4.5x10⁵, 5.0x10⁵, 5.5x10⁵, 6.0x10⁵, 6.5x10⁵, 7.0x10⁵, 7.5x10⁵, 8.0x10⁵, 8.5x10⁵, 9.0x10⁵, 9.5x10⁵, 1.0x10⁶ 1.1x10⁶, 1.2x10⁶, 1.3x10⁶, 1.4x10⁶, 1.5x10⁶, 1.6x10⁶, 1.7x10⁶, 1.8x10⁶, 1.9x10⁶ M^-1s^-1 또는 그 이상으로 구성된 군에서 선택되는 K_a (M^-1s^-1)로 인플루엔자 HA에 결합하는 것을 보여준다.

몇몇 구체예에서, 이러한 제공된 결합제는 하계가 약 0.01x10⁵ s^-1이고 상계가 약 1.0x10⁶ s^-1인 K_d (s^-1)로 인플루엔자 HA에 결합하는 것을 보여준다. 이러한 제공된 항체는 하계가 0.01x10⁵, 0.02x10⁵, 0.04x10⁵, 0.04x10⁵, 0.08x10⁵, 0.1x10⁵, 0.2x10⁵, 0.4x10⁵, 0.6x10⁵, 0.8x10⁵, 1.0x10⁵, 1.2x10⁵, 1.4x10⁵, 1.6x10⁵, 1.8x10⁵, 2.0x10⁵ s^-1 또는 그 이상으로 구성된 군에서 선택되고 상계는 하계보다 더 높으며 1.0x10⁵, 1.5x10⁵, 2.0x10⁵, 2.5x10⁵, 3.0x10⁵, 3.5x10⁵, 4.5x10⁵, 5.0x10⁵, 5.5x10⁵, 6.0x10⁵, 6.5x10⁵, 7.0x10⁵, 7.5x10⁵, 8.0x10⁵, 8.5x10⁵, 9.0x10⁵, 9.5x10⁵, 1.0x10⁶ 1.1x10⁶, 1.2x10⁶, 1.3x10⁶, 1.4x10⁶, 1.5x10⁶, 1.6x10⁶, 1.7x10⁶, 1.8x10⁶, 1.9x10⁶ s^-1 또는 그 이상으로 구성된 군에서 선택되는 K_a (s^-1)로 인플루엔자 HA에 결합하는 것을 보여준다.

몇몇 구체예에서, 이런 특정한 결합제의 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호: 1-60)에서의 상응하는 CDR 또는 FR과 서열이 적어도 65, 70, 75, 80, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99% 동일한 하나 이상의 CDR 또는 하나 이상의 FR을 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 결합제의 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호: 1-60)에서의 상응하는 CDR 또는 FR과 적어도 65, 70, 75, 80, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99% 상동을 포함하는 하나 이상의 CDR 또는 하나 이상의 FR을 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 결합제의 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호: 1-60)에서의 상응하는 CDR 또는 FR과 서열이 동일한 하나 이상의 CDR 및/또는 하나 이상의 FR을 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 결합제의 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호: 1-60)에서 제시된 것들과 서열이 동일한 CDR과 FR을 포함한다.

몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2 및/또는 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR3 서열 요소과 적어도 65%, 70% 초과, 75% 초과, 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 95% 초과, 또는 99% 초과의 동일성을 보이는 상보성 결정 영역 (CDR) 3 서열 요소를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR3 서열 요소와 비교하여 2개 이상의 아미노산 치환을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 3 서열 요소를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54에서의 참조 CDR3 서열 요소와 비교하여 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 3 서열 요소를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR3 서열 요소와 비교하여 적어도 2개의 아미노산 치환을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 3 서열 요소를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR3 서열 요소와 비교하여 2개 미만의 아미노산 치환을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 3 서열 요소를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 구조적 특징은 표 2와 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 참조 CDR3 서열 요소 중 하나의 것과 동일한 아미노산 서열을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 3 서열 요소를 포함한다.

예시적인 결합제

항체 및/또는 항체 단편

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 결합제는 항원 또는 생물학적 표적에 결합할 수 있는 작용제를 지칭한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 폴리펩티드이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 항체 또는 이의 단편이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 단일클론 항체 또는 이의 단편이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 다클론 항체 또는 이의 단편이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 자연적으로-생성된 항체에서 일어나는 것과 같이 디설파이드 결합에 의해 선택적으로 회합되는, 2개의 중쇄와 2개의 경쇄를 함유한다는 점에서 "전장" 항체이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 전장 항체에서 발견된 서열을 모두는 아니지만, 몇 개를 함유한다는 점에서 전장 항체의 단편이거나 또는 이를 포함한다. 예를 들어, 몇몇 구체예에서, 결합제는 Fab, Fab', F(ab')2, scFv, Fv, dsFv 디아바디, 및 Fd 단편을 포함하지만, 이에 제한되지 않는 항체 단편이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 IgG, IgM, IgA, IgD, IgE 또는 이의 단편으로 구성된 군에서 선택된 항체 클래스의 구성원인 항체이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 화학적 합성으로 생성된 항체이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 세포에 의해 생성된 항체이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 재조합 세포 배양 시스템을 이용하여 생성된 항체이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 예를 들어 인간 불변 및/또는 가변 영역 도메인을 가진, 생쥐, 랫트, 말, 돼지, 또는 다른 종으로부터의 키메라 항체이거나 또는 이를 포함한다.

몇몇 구체예에서, 결합제는 Fab', Fab, F(ab')2, 단일 도메인 항체 (DAB), Fv, scFv (단쇄 Fv), 항체 CDR이 있는 폴리펩티드, CDR을 나타내는 스캐폴딩 도메인 (가령, 안티칼린) 또는 나노바디를 포함하지만, 이에 제한되지 않는 하나 이상의 항체 단편을 포함한다. 예를 들어, 제공된 항체는 오직 중쇄만 포함한 VHH (즉, 항원-특이적 VHH) 항체일 수 있다. 이러한 항체 분자는 라마 또는 다른 카멜리드 항체 (가령, 카멜리드 IgG2 또는 IgG3, 또는 이러한 카멜리드 Ig로부터의 CDR-디스플레잉 프레임)로부터 또는 상어 항체로부터 유래될 수 있다. 몇몇 구체예에서 결합제는 아비바디 (디아바디, 트리바디, 테트라바디)이거나 또는 이를 포함한다. 다양한 항체-기반 구조체 및 단편을 제조하고 이용하기 위한 기술은 해당 분야에서 잘 공지된다. 항체를 제조하고 특성화하기 위한 수단도 또한 해당 분야에서 잘 공지된다 (가령, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988을 참고; 참조로서 본 명세서에 편입됨).

몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 하나 이상의 "미니-항체" 또는 "미니바디"를 포함한다. 미니바디는 힌지 영역에 의해 sFv로부터 분리된, 그들의 C-말단에서 올리고머화 도메인을 포함한 sFv 폴리펩티드 사슬이다. Pack et al. (1992) Biochem 31:1579-1584. 올리고머화 도메인은 추가적인 디설파이드 결합에 의해 추가로 안정될 수 있는, 자기-회합성 α-나선, 가령, 류신 지퍼를 포함한다. 올리고머화 도메인은 기능적 결합 단백질 내로 폴리펩티드의 생체내 폴딩을 촉진하는 것으로 간주되는 과정인, 막을 가로지르는 벡터 폴딩(vectorial folding)과 양립할 수 있도록 고안된다. 일반적으로, 미니바디는 해당 분야에서 잘 공지된 재조합 방법을 이용하여 생성된다. 가령, Pack et al. (1992) Biochem 31:1579-1584; Cumber et al. (1992) J Immunology 149B:120-126을 참고.

펩티드모방체

몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 하나 이상의 항체-유사 결합 펩티드모방체를 포함한다. Liu et al. Cell Mol Biol (Noisy-le-grand). 2003 Mar;49(2):209-16은 "항체 유사 결합 펩티드모방체" (ABiP)를 설명하며, 이는 긴축된 항체로서 작용하고 더 긴 혈청 반감기 그리고 덜 번거로운 합성 방법의 특정한 이점을 갖는 펩티드이다. 유사하게, 몇 가지 측면에서, 항체-유사 분자는 고리형 또는 이고리형 펩티드이다. 예를 들어, 항원-결합 이고리형 펩티드를 단리시키기 위한 (가령, 파지 디스플레이로) 그리고 이러한 펩티드를 이용하기 위한 방법이 미국 특허 공개공보 번호 제20100317547호에서 제공되며, 이는 참조로서 본 명세서에 편입된다.

스캐폴드 단백질

몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 하나 이상의 항체-유사 결합 스캐폴드 단백질을 포함한다. 예를 들어, 몇몇 구체예에서, 항체에서 발생한 하나 이상의 CDR은 단백질 스캐폴드 상에 이식될 수 있다. 일반적으로, 단백질 스캐폴드는 최대수의 다음 기준을 충족할 수 있다: (Skerra A., J. Mol. Recogn., 2000, 13:167-187): 뛰어난 계통발생 보존; 공지된 3차원 구조 (예를 들어, 결정학, NMR 분광학 또는 해당 분야의 통상의 기술자에게 공지된 임의의 다른 기술에 의한); 소형; 전사-후 약간의 변형 또는 변형 없음; 및/또는 생성, 발현 그리고 정제하기 쉬움. 이러한 단백질 스캐폴드의 기원은 피브로넥틴 (가령, 피브로넥틴 유형 III 도메인 10), 리포칼린, 안티칼린 (Skerra A., J. Biotechnol., 2001, 74(4):257-75), 황색 포도상구균(Staphylococcus aureus)의 단백질 A의 도메인 B에서 발생한 단백질 Z, 티오레독신 A 또는 반복된 모티프, 가령 "안키린 반복" (Kohl et al., PNAS, 2003, vol. 100, No. 4, 1700-1705), "아르마딜로 반복", "류신-풍부 반복" 그리고 "테트라트리코펩티드 반복"을 가진 단백질일 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 예를 들어, 안티칼린 또는 리포칼린 유도체는 미국 특허 공개공보 번호 제20100285564호, 제20060058510호, 제20060088908호, 제20050106660호, 그리고 PCT 공개공보 번호 제WO2006/056464호에서 설명되며, 이들은 참조로서 본 명세서에 편입된다. 예를 들면 전갈, 곤충, 식물, 연체동물 등으로부터 나온 독소와 같은 독소에서 유래된 스캐폴드, 그리고 뉴런 NO 신타아제의 단백질 저해제도 또한 본 발명에 따라 이용될 수 있다.

미모토프

몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 인플루엔자 바이러스와 HA 폴리펩티드 수용체 사이의 상호작용을 방해하는 데에 이용될 수 있는, 미모토프를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 미모토프는 이의 상응하는 표적 에피토프에 의해 유발된 것과 동일하거나 유사한 항체 반응을 유발하는 데에 이용된다. 몇몇 구체예에서, 표적 에피토프는 하나 보다 많은 인플루엔자 하위유형에 걸쳐 보존되는 서열이다. 몇몇 구체예에서, 보존된 에피토프는 인플루엔자 유형 1과 2를 걸쳐 보존된 서열이다. 예를 들면, 모든 인플루엔자 하위유형으로부터 HA 서열은 HA-1 (머리부) 및 HA-2 (경상부) 도메인 내에 위치하였다. 몇몇 구체예에서, 에피토프는 HA-1/HA-2 접점 막 근위 에피토프 영역 (MPER) 내에 위치하는 보존된 서열이다. 몇몇 구체예에서, 에피토프는 정규 α-나선 및/또는 이의 인근내 잔기 내에 위치한 보존된 서열이다. 몇몇 구체예에서, 미모토프는 펩티드이다. 몇몇 구체예에서, 미모토프는 소분자, 탄수화물, 지질, 또는 핵산이다. 몇몇 구체예에서, 미모토프는 보존된 인플루엔자 에피토프의 펩티드 또는 비-펩티드 미모토프이다. 몇몇 구체예에서, 정의된 바이러스 에피토프의 구조를 모방함으로써, 미모토프는 가령, 천연 결합 파트너 그 자체에 결합하여, 인플루엔자 바이러스 입자가 이의 천연 결합 파트너에 결합하는 능력을 방해한다.

스태플링된 펩티드

몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 스태플링된 펩티드이다. 몇몇 구체예에서, 스태플링된 펩티드는 아래 논의된 바와 같이, 표 2와 3에서의 항-HA 항체의 상응하는 CDR 및/또는 FR과 적어도 65, 70, 75, 80, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99% 초과의 상동성 및/또는 동일성을 포함한 하나 이상의 CDR 및/또는 FR을 인코딩하는 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 구체예에서, 스태플링된 펩티드는 아래 논의된 바와 같이, 표 2와 3에서의 항-HA 항체의 상응하는 VH 및 VL 사슬과 적어도 65, 70, 75, 80, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99% 초과의 상동성 및/또는 동일성을 포함한 하나 이상의 VH 및/또는 VL 사슬을 암호화하는 아미노산 서열을 포함한다.

핵산

특정한 구체예에서, 결합제는 DNA 또는 RNA와 같은 핵산이거나 또는 이를 포함한다. 특정한 구체예에서, 핵산은 DNA 또는 RNA일 수 있고, 그리고 단일 가닥 또는 이중-가닥일 수 있다. 몇몇 구체예에서, 핵산은 하나 이상의 비-천연 뉴클레오티드를 포함할 수 있다; 몇몇 구체예에서, 핵산은 오직 천연 뉴클레오티드만 포함할 수 있다. 몇몇 구체예에서 핵산은 헤마글루티닌 (HA) 폴리펩티드 내에서 에피토프를 모방하도록 고안된다. 몇몇 구체예에서 핵산은 하나 이상의 인플루엔자 HA 폴리펩티드 하위유형 내에서 보존된 에피토프를 모방하도록 고안된다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 하나 이상의 올리고뉴클레오티드이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 2차 구조, 가령 루프, 헤어핀, 폴드 또는 이의 조합을 포함하는 하나 이상의 올리고뉴클레오티드이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 고차 (3차 또는 4차) 구조를 포함하는 하나 이상의 올리고뉴클레오티드이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 압타머이거나 또는 이를 포함한다.

표적된 결합

몇몇 구체예에서 결합제는 선별된 결합 부위에 결합하는 작용제이거나 또는 이를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 결합제는 조작된 또는 고안된 폴리펩티드이다. 몇몇 구체예에서, 이러한 선별된 결합 부위는 헤마글루티닌 (HA) 폴리펩티드 내에 있다. 몇몇 구체예에서, 이러한 선별된 결합 부위는 HA 폴리펩티드의 MPER 영역 내에 있다. 몇몇 구체예에서, 이러한 선별된 결합제는 이의 글리코실화와는 관계 없이 HA 폴리펩티드 MPER 영역내 선별된 결합 부위에 결합할 수 있다. 예를 들어, 몇몇 구체예에서, 결합제는 적절한 크기로 고안되고 MPER 영역과 그들의 결합은 이의 글리코실화에 의해 방지되지 않는다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 다른 점에서 보면 동일한 비-글리코실화 MPER 영역에 대한 이의 친화도의 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 그 이상인 친화도로 글리코실화 MPER 영역에 결합한다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 HA-1 (머리부) 및/또는 HA-2 (경상부) 도메인 내에 위치한 HA 폴리펩티드 서열에 결합한다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 HA-1/HA-2 접점 막 근위 에피토프 영역 (MPER) 내에 위치한 HA 폴리펩티드 서열에 결합한다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 정규 α-나선 및/또는 이의 인근내 잔기 내에 위치한 HA 폴리펩티드 서열에 결합한다.

몇몇 구체예에서, 결합제는 하나 이상의 표적 잔기와의 상호작용에 의해 그들의 선별된 결합 부위에 결합한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 표적 잔기는 아미노산, 사카라이드, 지질 또는 이의 조합이다. 몇몇 구체예에서, 본 발명은 결합제는 HA 폴리펩티드, HA 폴리펩티드 상의 N-연결된 글리칸, HA 수용체, HA 수용체 상의 시알릴화 글리칸 또는 다양한 이의 조합에 결합하는 결합제를 제공한다. 몇몇 구체예에서, HA 수용체에 결합하는 결합제는 HA 수용체 상에서 하나 이상의 글리칸과 상호작용한다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 시알릴화 글리칸과 결합한다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 HA 수용체에 결합하기 위해 인플루엔자 바이러스와 경쟁한다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 결합하기 위해 인플루엔자 바이러스와 경쟁하고, 따라서 인플루엔자 바이러스와 HA 수용체 사이의 결합이 적어도 1.5배, 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 11배, 적어도 12배, 적어도 13배, 적어도 14배, 적어도 15배, 적어도 16배, 적어도 17배, 적어도 18배, 적어도 19배, 또는 적어도 20배 감소된다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 HA 수용체 상의 글리칸과 결합하기 위해 인플루엔자 바이러스와 경쟁한다.

많은 구체예에서, 결합제는 약 1000개 미만의 아미노산 길이를 갖는다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 약 1000, 975, 950, 925, 900, 875, 850, 825, 800, 775, 750, 725, 700, 675, 650, 625, 600, 575, 550, 525, 500, 475, 450, 425, 400, 375, 350, 325, 300, 275, 250, 240, 230, 220, 210, 200, 190, 180, 170, 160, 150, 140, 130, 125, 120, 115, 110, 105, 100, 95, 90, 85, 80, 75, 70, 65, 60, 55, 50, 45, 40, 35, 30, 25, 또는 20개의 아미노산 길이의 최대 길이보다 더 짧은 길이를 갖는다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 약 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 개 또는 그 이상의 아미노산 길이의 최소 길이보다 더 긴 길이를 갖는다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 최대 길이가 최소 길이보다 길다면, 이러한 최소 길이 중 어느 하나와 이러한 최대 길이 중 어느 하나 사이의 길이를 갖는다. 몇몇 특정한 구체예에서, 결합제는 약 20 내지 500, 또는 약 30 내지 400, 또는 40 내지 300, 또는 80 내지 250개의 아미노산 길이를 갖는다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 약 84, 88, 93, 95, 98, 104, 106, 110, 111, 116, 119,123, 124, 132, 212, 215, 244, 또는 245의 길이를 갖는다.

결합제 변형

몇몇 구체예에서, 결합제는 천연 아미노산으로 구성된다. 다른 구체예에서, 결합제는 하나 이상의 비천연 아미노산을 포함한다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 천연 및 비천연 아미노산의 조합으로 구성된다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 공유결합으로 또는 비-공유결합으로 회합되는 1개, 2개, 또는 그 이상의 폴리펩티드 사슬로 구성된다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 결합제가 상호작용을 위해 이의 3차원 구조와 배열을 유지하기만 한다면, 더 긴 폴리펩티드 사슬과 연결되거나, 또는 상기 사슬의 부분이 될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 결합제이거나 결합제가 아닌 또 다른 폴리펩티드 서열의 N- 또는 C-말단에 부가될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 결합제는 결합제이거나 결합제가 아닌 또 다른 폴리펩티드의 서열 내로 편입되고, 따라서 2개 이상의 조각으로 폴리펩티드 서열이 분리된다.

몇몇 구체예에서, 결합제이거나 또는 결합제가 아닌 또 다른 폴리펩티드의 서열 내에 또는 N 또는 C 말단에 결합제를 부가하는 것은 다음 중 적어도 하나 이상을 허용할 수 있다: 면역원성의 감소, 증가된 순환 수명, 더 느린 생체내 분해, 국부적인 면역 반응을 유발, 면역계 분자와의 상호작용, 부피의 증가, 결합제 표적(들)에 대한 친화도의 증가, 결합 표적(들)에 대한 특이성의 증가, 또는 일반적으로 사용되는 치료적/예방적 전달 프로토콜의 이용. 몇몇 구체예에서, 결합제이거나 또는 결합제가 아닌 또 다른 폴리펩티드의 서열 내에 또는 N 또는 C 말단에 결합제를 부가하는 것은 표적 (가령, HA 폴리펩티드, HA 폴리펩티드의 MPER 영역, HA 폴리펩티드 상의 N-글리칸, HA 수용체 또는 HA 수용체 상의 시알릴화 글리칸)과 결합제의 결합에 직접적인 영향을 주지 않는다.

결합제 접합체

몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 접합체이거나 또는 이를 포함하며, 여기서 결합제 모이어티는 접합된 모이어티와 (결합제 또는 이의 기능적 부분을 포함하거나 또는 이로 구성)된다. 몇몇 특정한 구체예에서, 본 명세서에서 설명된 바와 같은 결합제는 치료제 또는 검출제와 같은, 하나 이상의 활성제 또는 "페이로드"와 회합되어 제공되고 및/또는 활용된다. 이러한 몇몇 구체예에서, 결합제와 활성제 및/또는 페이로드 간의 회합은 결합제 접합체가 제공되도록 적어도 하나의 공유결합성 상호작용을 포함한다.

몇몇 구체예에서, 치료적 페이로드 작용제는 바람직한 활성, 가령 항-바이러스 활성, 항-염증 활성, 세포독성 활성 등을 갖는 효과기 엔티티이다. 치료제는 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지질, 핵산, 소형 유기분자, 비-생물학적 중합체, 금속, 이온, 방사성 동위원소 등을 비롯한 임의의 종류의 화학적 엔티티일 수 있거나 또는 이를 포함할 수 있다. 몇몇 구체예에서, 본 발명에 따라 이용하기 위한 치료제는 인플루엔자 감염의 하나 이상의 증상 또는 원인의 치료에 관련된 생물학적 활성을 가질 수 있다 (예를 들어, 항-바이러스, 통증-완화, 항-염증, 면역조절, 수면-유도 활성 등). 몇몇 구체예에서, 본 발명에 따라 이용하기 위한 치료제는 하나 이상의 다른 활성을 갖는다.

몇몇 구체예에서, 페이로드 검출제는 예를 들어 이의 특이적인 기능적 성질 및/또는 화학적 특성 때문에, 어세이를 이용하여 검출될 수 있는 임의의 모이어티이거나 또는 이를 포함한다. 이러한 작용제의 비-제한 예시로는 효소, 방사성 표지, 합텐(hapten), 형광 표지, 인광성 분자, 화학발광 분자, 발색단, 발광 분자, 광친화성 분자, 유색 입자 또는 리간드, 가령 비오틴이 포함된다.

다수의 적절한 페이로드 검출제는 결합제와 그들의 부착에 대한 시스템으로서 해당 분야에 공지된다 (가령, 미국 특허 번호 제5,021,236호; 제4,938,948호; 및 제4,472,509호를 참고, 이들 각각은 참조로서 본 명세서에 편입됨). 이러한 페이로드 검출제의 예시로는 상자성 이온, 방사성 동위원소, 플루오로크롬, NMR-검출가능 물질, X-레이 이미지화 작용제 등이 포함된다. 예를 들어, 몇몇 구체예에서, 상자성 이온은 크로뮴 (III), 망간 (II), 철 (III), 철 (II), 코발트 (II), 니켈 (II), 구리 (II), 네오디뮴 (III), 사마륨 (III), 이테르븀 (III), 가돌리늄 (III), 바나듐 (II), 테르븀 (III), 디스프로슘 (III), 홀뮴 (III), 에르븀 (III), 란타늄 (III), 금 (III), 납 (II), 및/또는 비스무트 (III) 중 하나 이상이다.

몇몇 구체예에서, 방사성 동위원소는 아스타틴211, 14탄소, 51크로뮴, 36염소, 57코발트, 58코발트, 구리67, 152Eu, 갈륨67, 3수소, 요오드123, 요오드125, 요오드131, 인듐111, 59철, 32인, 라듐223, 레늄186, 레늄188, 75셀레늄, 35황, 테크니시움99m, 토륨227 및/또는 이트륨90 중 하나 이상이다. 방사능으로 표지된 항체는 해당 분야에서 잘-공지된 방법에 따라 생성될 수 있다. 예를 들면, 단일클론 항체는 요오드화 나트륨 및/또는 요오드화 칼륨 및 화학 산화제, 가령 차아염소산나트륨, 또는 효소 산화제, 가령 락토퍼옥시다아제와의 접촉에 의해 요오드화될 수 있다. 제공된 결합제는 리간드 교환 과정에 의해, 예를 들어 주석 함유 용액으로 퍼테크네테이트를 환원시키고, 세파덱스(Sephadex) 칼럼 상에 환원된 테크네튬을 킬레이트 화합물로 만들고 그리고 이 칼럼을 항체에 적용시킴으로써 테크네티움99m으로 표지될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 직접적인 표지 기술을 이용하여, 가령, 퍼테크네테이트, 환원제, 가령 SNCl₂, 완충 용액, 가령 나트륨-칼륨 프탈레이트 용액, 및 항체를 인큐베이션함으로써 표지된다. 항체에 대한 금속 이온으로서 존재하는 방사성 동위원소에 결합하는 데에 종종 이용되는 매개 작용기는 디에틸렌트리아민펜타아세트산 (DTPA) 또는 에틸렌 디아민테트라아세트산 (EDTA)이다.

몇몇 구체예에서, 형광 표지는 하나 이상의 알렉사(Alexa) 350, 알렉사 430, AMCA, BODIPY 630/650, BODIPY 650/665, BODIPY-FL, BODIPY-R6G, BODIPY-TMR, BODIPY-TRX, 캐스캐이드 블루(Cascade Blue), Cy3, Cy5,6-FAM, 플루오르세인 이소티오시아네이트, HEX, 6-JOE, 오레곤 그린(Oregon Green) 488, 오레곤 그린 500, 오레곤 그린 514, 퍼시픽 블루(Pacific Blue), REG, 로다민 그린(Rhodamine Green), 로다민 레드(Rhodamine Red), 레노그라핀(Renographin), ROX, TAMRA, TET, 테트라메틸로다민, 및/또는 텍사스 레드(Texas Red) 등이거나 또는 이를 포함한다.

페이로드에 결합제의 부착 또는 접합에 대하여 여러 가지 방법이 해당 분야에서 공지된다. 몇 가지 부착 방법은 예를 들어 유기 킬트레이트제, 가령 디에틸렌트리아민펜타아세트산 무수물 (DTPA); 에틸렌트리아민테트라아세트산; N-클로로-p-톨루엔설폰아미드; 및/또는 항체에 부착된 테트라클로로-3α-6α-디페닐글리코우릴-3을 이용하여 금속 킬레이트 복합체의 용도를 포함한다 (미국 특허 번호 제4,472,509호 및 제4,938,948호, 이들 각각은 참조로서 본 명세서에 편입됨). 제공된 결합제는 또한, 커플링제, 가령 글루타르알데하이드 또는 퍼이오데이트의 존재에서 효소와 반응할 수 있다. 플루오레세인 마커와의 접합체는 커플링제의 존재에서 또는 이소티오시아네이트와의 반응에 의해 제조된다.

항-인플루엔자 항체의 생성

제공된 항체, 및/또는 이의 특징적인 부분, 또는 그들은 인코딩하는 핵산은 이용가능한 어떤 수단으로도 생성될 수 있다. 항체 (가령, 단일클론 항체 및/또는 다클론 항체)를 발생시키기 위한 방법은 해당 분야에서 잘 공지된다. 토끼, 생쥐, 랫트, 햄스터, 기니 피그 또는 염소를 비롯한, 광범위한 동물 종이 항혈청의 생산을 위해 이용될 수 있다는 점이 이해될 것이다. 동물의 선택은 해당 분야의 통상의 기술자에게 공지된 바와 같이, 조작의 용이함, 비용 또는 혈청의 바람직한 양으로 결정될 수 있다. 항체는 또한, 관심의 면역글로불린 중쇄 및 경쇄 서열에 대해 이식유전자를 가진 포유류 또는 식물의 발생 그리고 이로부터 회수가능한 형태내 항체의 생성을 통해 형질전환으로 생성될 수 있다. 포유류내 형질전환 생산과 관련하여, 항체는 염소, 소, 또는 다른 포유류의 젖에서 생성되고, 회수될 수 있다. 가령, 미국 특허 번호 제5,827,690호, 제5,756,687호, 제5,750,172호, 및 제5,741,957호를 참고.

제공된 항체 (또는 특징적인 부분)는 예를 들어, 발명의 항체-인코딩 핵산을 발현하도록 조작된 숙주 세포 시스템을 활용함으로써 생성될 수 있다. 대안으로 또는 추가적으로, 제공된 항체는 화학 합성에 의해 부분적으로 또는 완전히 제조될 수 있다 (가령, 자동화된 펩티드 합성기를 이용).

본 발명에 적합한 항체 제조를 위한 예시적인 공급원으로는 관심 단백질을 발현시키는 재조합 세포주를 배양하는 것으로부터, 또는 가령, 항체-생성 세포, 박테리아, 곰팡이 세포, 곤충 세포, 형질전환 식물 또는 식물 세포, 형질전환 동물 또는 동물 세포, 또는 동물의 혈청, 복수(ascites) 유체, 하이브리도마 또는 골수종 상청액의 세포 추출물로부터 유래된 조건화 배양 배지가 포함되지만, 이에 제한되지 않는다. 적합한 박테리아 세포로는 대장균(Escherichia coli) 세포가 포함되지만, 이에 제한되지 않는다. 적합한 대장균(E. coli) 균주의 예시로는 외래 DNA를 절단시키는 것을 실패한 HB101, DH5α, GM2929, JM109, KW251, NM538, NM539, 및 임의의 대장균(E. coli) 균주가 포함된다. 사용될 수 있는 적합한 곰팡이 숙주 세포는 사카로마이세스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae), 피키아 파스토리스(Pichia pastoris) 및 아스퍼질러스(Aspergillus) 세포를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 적합한 곤충 세포로는 S2 슈나이더(Schneider) 세포, D. Mel-2 세포, SF9, SF21, High-5^TM, Mimic^TM -SF9, MG1 및 KC1 세포가 포함되지만, 이에 제한되지 않는다. 적절한 예시적인 재조합 세포주로는 BALB/c 생쥐 골수종 세포주, 인간 망막아세포 (PER.C6), 원숭이 신장 세포, 인간 배아 신장 세포주 (293), 새끼 햄스터 신장 세포 (BHK), 중국 햄스터 난소 세포 (CHO), 생쥐 세르톨리 세포, 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포 (VERO-76), 인간 자궁 경부 암종 세포 (HeLa), 개 신장 세포, 버팔로 랫트 간 세포, 인간 폐 세포, 인간 간 세포, 생쥐 포유류 종양 세포, TRI 세포, MRC 5 세포, FS4 세포, 및 인간 간암 세포주 (Hep G2)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

관심 항체는 해당 분야에서 공지된 다양한 벡터 (가령, 바이러스 벡터)와 를 이용하여 발현될 수 있고 그리고 세포는 해당 분야에서 공지된 다양한 조건 하에 배양될 수 있다 (가령, 유가식(fed-batch)). 항체를 생성하기 위해 세포를 유전적으로 조작하는 다양한 방법이 해당 분야에서 잘 공지된다. 가령, Ausabel et al., eds. (1990), Current Protocols in Molecular Biology (Wiley, New York)를 참고.

제공된 항체는 원한다면, 여과, 원심분리 및/또는 다양한 크로마토그래피 방법, 가령 HPLC 또는 친화성 크로마토그래피를 이용하여 정제될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 제공된 항체의 단편은 효소, 가령 펩신 또는 파파인을 이용한 분해를 포함한 방법에 의해, 및/또는 화학적 환원에 의한 디설파이드 결합의 절단에 의해 얻는다.

또한, 폴리펩티드, 그리고 특정하게는 본 명세서에서 설명된 바와 같은 항체는 인플루엔자 항원 (가령, 인플루엔자 HA)에 결합할 수 있는 폴리펩티드의 스크리닝 및/또는 선별을 준비할 수 있도록 하는 조건 하에, 항체 (단독으로 또는 바이러스 또는 바이러스 입자의 일부를 포함하여, 복합체의 일부로서)를 생성하는 세포 또는 유기체를 배양함으로써 발생, 식별, 단리, 및/또는 생성될 수 있다는 점이 해당 분야의 통상의 기술자에 의해 이해될 것이다. 한 가지 예를 들자면, 몇몇 구체예에서, HA 폴리펩티드 (가령, 특정한 특이성 및/또는 친화도를 가짐)에 결합하는 이들 변종이 나타나는 및/또는 상기 변종을 촉진하는 조건 하에 항체 모음을 생성 및/또는 연구하는 데에 유용할 수 있다. 몇몇 구체예에서, 이러한 항체 모음은 자연에서의 진화에 기인한 것이다. 몇몇 구체예에서, 이러한 항체 모음은 조작에 기인한 것이다. 몇몇 구체예에서, 이러한 항체 모음은 조작과 자연적 진화의 조합에 기인한 것이다.

제공된 항체는 항체의 특성 및/또는 활성을 향상시키는 것에 관한 이러한 방법으로 조작, 생성, 및/또는 정제될 수 있다는 점이 이해될 것이다. 예를 들면, 제공된 항체의 향상된 특성으로는 증가된 안정성, 향상된 결합 친화도 및/또는 친화도, 증가된 결합 특이성, 증가된 생산량, 감소된 응집, 감소된 비특이적 결합 등이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.

핵산

특정한 구체예에서, 본 발명은 항체 또는 항체의 특징적인 또는 생물학적으로 활성인 부분을 인코딩하는 핵산을 제공한다. 몇몇 구체예에서, 본 발명은 항체 또는 항체의 특징적인 또는 생물학적으로 활성인 부분을 인코딩하는 핵산에 상보적인 핵산을 제공한다.

몇몇 구체예에서, 본 발명은 항체 또는 항체의 특징적인 또는 생물학적으로 활성인 부분을 인코딩하는 핵산에 하이브리화되는 핵산 분자를 제공한다. 이러한 핵산은 예를 들어, 프라이머 또는 프로브(probe)로서 이용될 수 있다. 한 가지 예를 들자면, 이러한 핵산은 중합효소 연쇄 반응 (PCR)에서 프라이머로서, 하이브리드화 (원위치 하이브리드화를 포함)를 위한 프로브로서, 및/또는 역 전사-PCR (RT-PCR)를 위한 프라이머로서 이용될 수 있다.

특정한 구체예에서, 핵산은 DNA 또는 RNA일 수 있고 단일 가닥 또는 이중-가딕일 수 있다. 특정한 구체예에서, 핵산은 하나 이상의 비-천연 뉴클레오티드를 포함할 수 있다; 특정한 구체예에서, 핵산은 오직 천연 뉴클레오티드만 함유한다.

결합제를 식별 및/또는 특성화하기 위한 시스템

본 발명은 인플루엔자 결합제 (가령, 항-HA 항체)를 검사하고, 특성화하고, 및/또는 식별하기 위한 여러 가지 시스템을 제공한다. 몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 다른 인플루엔자 작용제 (가령, 항체, 폴리펩티드, 소분자 등)를 식별하고 및/또는 특성화하는 데에 이용된다.

몇몇 구체예에서, 제공된 결합제는 하나 이상의 후보 물질, 가령 HA 폴리펩티드의 영역, HA 폴리펩티드 상의 N-글리칸, HA 수용체, 시알릴화 HA 수용체, 시알릴화 HA 수용체 상의 글리칸 및/또는 시알릴화 HA 수용체 상의 우산형 토폴로지 글리칸과 결합제를 접촉시키는 단계를 포함하는 이러한 시스템과 방법으로 특징된다.

몇몇 구체예에서, 작용제 및/또는 후보 물질은 용액에서 유리될 수 있고, 지지체에 고정될 수 있고, 및/또는 세포 표면에서 및/또는 세포 표면 위에서 발현될 수 있다. 후보 물질 및/또는 작용제는 표지되어 결합이 검출될 수 있다. 작용제 또는 후보 물질은 표지된 종류이다. 경쟁적인 결합 형태는 물질 중 하나가 표지되는 것으로 수행될 수 있고, 그리고 결합에 미치는 효과를 결정하기 위해 유리 표지 대 결합 표지의 양을 측정할 수 있다.

몇몇 구체예에서, 결합 어세이는 예를 들어 후보 물질을 작용제에 노출시키는 단계 그리고 후보 물질과 작용제 간의 결합을 검출하는 단계를 포함한다. 결합 어세이는 시험관 내에서 (가령, 언급된 성분만 실질적으로 포함하는 후보 물질에서; 및/또는 실질적으로 정제된 성분에서) 수행될 수 있다. 대안으로 또는 추가적으로, 결합 어세이는 세포질내 및/또는 생체내 (가령, 세포, 조직, 기관, 및/또는 유기체 내에서; 아래에서 더 상세하게 설명됨)에서 수행될 수 있다.

특정한 구체예에서, 적어도 하나의 작용제는 적어도 하나의 후보 물질과 접촉되고 효과가 검출되었다. 몇몇 구체예에서, 예를 들어, 작용제는 후보 물질과 접촉되고, 두 개의 엔티티 간의 결합이 모니터링된다. 몇몇 구체예에서, 어세이는 작용제의 특징적인 부분과 후보 물질을 접촉시키는 단계를 포함한다. 후보물질과 작용제의 결합이 검출된다. 작용제의 단편, 부분, 동족체, 변이체, 및/또는 유도체는 그들이 하나 이상의 후보 물질을 결합시키는 능력을 포함한다면, 이용될 수 있다는 점이 이해될 것이다.

후보 물질과 작용제의 결합은 해당 분야에서 잘-공지된 여러 가지 방법에 의해 측정될 수 있다. 본 발명은 고체상-결합 작용제를 포함하고 그들과 하나 이상의 후보 물질의 상호작용을 검출하는 어세이를 제공한다. 따라서, 작용제는 검출가능한 마커, 가령 방사성, 형광, 및/또는 발광 표지를 포함할 수 있다. 추가적으로, 후보 물질은 간접적인 검출을 허용하는 물질과 커플링될 수 있다 (가령 발색 물질을 이용하는 효소를 이용함으로써 및/또는 검출가능한 항체를 결합시킴으로써). 후보 물질과의 상호작용의 결과로서 작용제의 입체구조 변화는 예를 들어, 검출가능한 마커의 방출의 변화에 의해 검출될 수 있다. 대안으로 또는 추가적으로, 고체상-결합 단백질 복합체는 질량 분석법에 의해 분석될 수 있다.

몇몇 구체예에서, 작용제는 비-고정화될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 비-고정화 성분이 표지될 수 있다 (예를 들어, 방사성 표지, 에피토프 태그, 효소-항체 접합체 등을 이용하여). 대안으로 또는 추가적으로, 결합은 면역 검출 기술에 의해 측정될 수 있다. 예를 들어, 반응 혼합물은 웨스턴 블롯팅(Western blotting) 처리될 수 있고 그리고 블롯(blot)은 비-고정화 성분을 검출하는 항체로 프로빙되었다. 대안으로 또는 추가적으로, 효소결합면역흡착법 (enzyme linked immunosorbent assay (ELISA))이 결합에 대해 어세이하기 위해 활용될 수 있다.

특정한 구체예에서, 세포는 작용제와 후보 물질 간의 결합에 대해 직접적으로 어세이될 수 있다. 면역조직화학 기술, 공초점 기술, 및/또는 결합을 평가하기 위한 다른 기술은 해당 분야의 통상의 기술자에게 잘 공지된다. 다양한 세포주는 이 목적을 위해 특이적으로 조작된 세포를 포함하여, 이러한 스크리닝 어세이를 위해 활용될 수 있다. 스크리닝 어세이에 이용되는 세포의 예시로는 포유류 세포, 곰팡이 세포, 박테리아 세포, 또는 바이러스 세포가 포함된다. 세포는 자극된 세포, 가령 성장 인자로 자극된 세포일 수 있다. 해당 분야의 통상의 기술자는 본 명세서에 개시된 발명이 후보 물질에 결합하는 작용제의 능력을 측정하기 위해 광범위한 세포질내 어세이를 고려한다는 점을 이해할 것이다.

어세이에 따라서, 세포 및/또는 조직 배양이 요구될 수 있다. 다수의 상이한 생리적 어세이 중 어느 하나를 이용하여 세포가 검사될 수 있다. 대안으로 또는 추가적으로, 단백질 발현을 모니터링하고 및/또는 단백질-단백질 상호작용을 검사하기 위한 웨스턴 블롯팅; 다른 화학 변형을 모니터링하기 위한 질량 분석법 등을 포함하지만, 이에 제한되지 않는 분자 분석이 수행될 수 있다.

몇몇 구체예에서, 본 명세서에서 설명된 결합 어세이는 작용제 및/또는 후보 물질의 농도 범위를 이용하여 수행될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 본 명세서에서 설명된 결합 어세이는 항체 농도의 범위 이상으로 작용제에 결합하는 후보 물질의 능력을 평가하는 데에 이용된다 (가령 약 100 μg/ml, 약 100 μg/ml, 약 50 μg/ml, 약 40 μg/ml, 약 30 μg/ml, 약 20 μg/ml, 약 10 μg/ml, 약 5 μg/ml, 약 4 μg/ml, 약 3 μg/ml, 약 2 μg/ml, 약 1.75 μg/ml, 약 1.5 μg/ml, 약 1.25 μg/ml, 약 1.0 μg/ml, 약 0.9 μg/ml, 약 0.8 μg/ml, 약 0.7 μg/ml, 약 0.6 μg/ml, 약 0.5 μg/ml, 약 0.4 μg/ml, 약 0.3 μg/ml, 약 0.2 μg/ml, 약 0.1 μg/ml, 약 0.05 μg/ml, 약 0.01 μg/ml 초과, 및/또는 약 0.01 μg/ml 미만).

몇몇 구체예에서, 본 명세서에서 설명된 결합 연구 중 어느 하나가 고처리율 방식으로 실행될 수 있다. 고처리량 어세이를 이용하면, 하루 안에 최대 몇 천 개의 작용제를 스크리닝하는 것이 가능하다. 몇몇 구체예에서, 마이크로티터 플레이트(microtiter plate)의 각각의 웰은 선별된 후보 물질에 대하여 분리된 어세이를 하는 데에 이용될 수 있고, 또는 농도 및/또는 인큐베이션 시간 효과가 관찰되어야 한다면, 모든 5-10개의 웰은 단일 후보 물질을 검사할 수 있다. 따라서, 단일 표준 마이크로티터 플레이트는 작용제와 후보 물질 간에 최대 96개의 결합 상호작용을 어세이할 수 있다; 1536개의 웰 플레이트가 이용된다면, 단일 플레이트는로 작용제와 후보 물질 간에 최대 1536개의 결합 상호작용을 어세이할 수 있다. 하루에 많은 플레이트를 어세이하는 것이 가능하다. 예를 들어, 최대 약 6,000, 약 20,000, 약 50,000, 또는 약 100,000개 초과의 어세이 스크린은 본 발명에 따라 고처리량 시스템을 이용하여 항체와 후보 물질 간에 결합 상호작용에서 수행될 수 있다.

몇몇 구체예에서, 이러한 방법은 동물 숙주를 활용한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "동물 숙주"는 인플루엔자 연구에 적합한 임의의 동물 모델을 포함한다. 예를 들어, 본 발명에 적합한 동물 숙주는 영장류, 패럿, 고양이, 개, 소, 말, 설치류, 가령 생쥐, 햄스터, 토끼, 그리고 랫트를 비롯한, 임의의 포유류 숙주일 수 있다. 특정한 구체예에서, 본 발명에서 이용된 동물 숙주는 페럿이다. 특정하게, 몇몇 구체예에서, 동물 숙주는 작용제 (선택적으로 발명의 조성물로)의 투여 전에 바이러스 노출 또는 감염의 경험이 없다. 몇몇 구체예에서, 숙주 세포는 작용제의 투여 전 또는 동시에 바이러스가 접종되거나, 바이러스에 감염되거나, 또는 바이러스에 노출된다. 본 발명의 실시에서 이용된 동물 숙주는 해당 분야에서 공지된 임의의 방법에 의해 바이러스가 접종되거나, 바이러스에 감염되거나, 또는 바이러스에 노출될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 동물 숙주는 비강 내로 바이러스가 접종되거나, 바이러스로 감염되거나, 또는 바이러스에 노출될 수 있다.

몇몇 구체예에서, 적합한 동물 숙주는 인간 기도에서 발견된 분포와 유사한 우산형 대 원뿔형 토폴로지 글리칸 및/또는 α2,6 글리칸 대 α2,3 글리칸의 분포를 갖는다. 예를 들어, 동물 숙주로서 페럿은 인간내 인플루엔자 바이러스에 기인한 질병 모델로서 이용될 때 생쥐보다 더 대표적일 수 있다는 점이 고려된다 (Tumpey, et al. Science (2007) 315; 655-659). 어떠한 이론에 한정됨 없이, 본 발명은 페럿이 인간에 대한 생쥐보다 인간 기도내 글리칸 분포와 더 유사한 기도내 글리칸의 분포를 가질 수 있다는 견해를 포함한다.

미경험 및/또는 접종된 동물은 여러 가지 연구 중 어느 하나를 위해 이용될 수 있다. 예를 들어, 이러한 동물 모델은 해당 분야에서 공지된 바와 같은 바이러스 전염 연구를 위해 이용될 수 있다. 바이러스 전염 연구에서 페럿의 이용은 인간내 바이러스 전염에 대해 신뢰할 수 있는 예측기로서 역할을 한다는 점이 고려된다. 예를 들어, 접종된 동물 (가령, 페럿)에서 미경험 동물로 바이러스 인플루엔자의 공기 전염이 해당 분야에서 공지된다 (Tumpey, et al. Science (2007) 315; 655-659). 바이러스 전염 연구는 작용제를 검사하는 데에 이용될 수 있다. 예를 들어, 작용제는 동물 숙주에서 바이러스 결합 및/또는 감염력을 차단하는 상기 작용제의 효능을 결정하기 위하여 바이러스 전염 연구 전, 중 또는 후에 적합한 동물 숙주에게 투여될 수 있다. 동물 숙주에서 바이러스 전염 연구로부터 모은 정보를 이용하여, 인간 숙주에서 바이러스 결합 및/또는 감염력을 차단하는 작용제의 효능을 예측할 수 있다.

제약학적 조성물

본 발명은 하나 이상의 제공된 결합제를 포함하는 조성물을 제공한다. 몇몇 구체예에서 본 발명은 적어도 하나의 결합제와 적어도 하나의 제약학적으로 허용되는 부형제를 제공한다. 이러한 제약학적 조성물은 하나 이상의 추가적인 치료학적 활성 물질을 선택적으로 포함할 수 있고 및/또는 상기 물질과 조합하여 투여될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 제공된 제약학적 조성물은 의학에서 유용하다. 몇몇 구체예에서, 제공된 제약학적 조성물은 인플루엔자 감염 또는 인플루엔자 감염과 연관된 또는 관련 있는 부정적 영향 및/또는 증상의 치료 또는 예방에서 예방제 (즉, 백신)로서 유용하다. 몇몇 구체예에서, 제공된 제약학적 조성물은 치료 적용에서, 예를 들어 인플루엔자 감염으로 고통받거나 또는 인플루엔자 감염에 취약한 개체에서 유용하다. 몇몇 구체예에서, 제약학적 조성물은 인간에게 투여를 위해 조제된다.

예를 들어, 본 명세서에서 제공된 제약학적 조성물은 멸균 주사가능 형태 (가령, 피하 주사 또는 정맥내 주입에 적합한 형태)로 제공될 수 있다. 예를 들어, 몇몇 구체예에서, 제약학적 조성물은 주사에 적합한 액상 제형으로 제공된다. 몇몇 구체예에서, 제약학적 조성물은 선택적으로 진공 하에, 주사에 앞서 수성 희석제 (가령, 물, 완충액, 염 용액 등)로 복원되는, 분말 (가령 동결건조됨 및/또는 멸균됨)로 제공된다. 몇몇 구체예에서, 제약학적 조성물은 물, 염화 나트륨 용액, 나트륨 아세테이트 용액, 벤질 알코올 용액, 포스페이트 완충 식염수 등으로 희석 및/또는 복원된다. 몇몇 구체예에서, 분말은 수성 희석와 부드럽게 혼합되어야 한다 (가령, 흔드는 것은 아님).

몇몇 구체예에서, 제공된 제약학적 조성물은 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 부형제 (가령, 보존제, 비활성 희석제, 분산제, 표면 활성제 및/또는 유화제, 완충제)를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제약학적 조성물은 하나 이상의 보존제를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 제약하적 조성물은 보존제를 포함하지 않는다.

몇몇 구체예에서, 제약학적 조성물은 냉장 및/또는 냉동될 수 있는 형태로 제공된다. 몇몇 구체예에서, 제약학적 조성물은 냉장 및/또는 냉동될 수 없는 형태로 제공된다. 몇몇 구체예에서, 복원된 용액 및/또는 액상 제형은 복원 후 특정 시간 (가령, 2시간, 12시간, 24시간, 2일, 5일, 7일, 10일, 2주, 1달, 2달, 또는 더 긴 시간) 동안 저장될 수 있다.

액상 제형 및/또는 복원된 용액은 투여에 앞서 미립성 물질 및/또는 변색이 있을 수 있다. 몇몇 구체예에서, 용액은 변색되거나 또는 탁하다면 및/또는 미립성 물질이 여과 후에도 남아 있다면 사용되어서는 안 된다.

본 명세서에서 설명된 제약학적 조성물의 조제는 약물학 분야에서 공지된 또는 이후 개발된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 이러한 제조 방법은 활성 성분을 하나 이상의 부형제 및/또는 하나 이상의 다른 부속 성분과의 관계로 가져오는 단계, 그리고 이후 필요하다면 및/또는 원한다면, 산물을 형성하고 및/또는 바람직한 단일- 또는 복수-용량 단위로 포장하는 단계를 포함한다.

본 발명에 따라 제약학적 조성물은 단일 단위 용량으로 및/또는 다수의 단일 단위 용량으로서, 제조되고, 포장되고, 및/또는 산매될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "단위 용량"은 예정량의 활성 성분을 포함하는 제약학적 조성물의 이산량(discrete amount)이다. 활성 성분의 양은 대상에게 투여될 용량 및/또는 이러한 용량의 편리한 분획, 가령 이러한 용량의 2분의 1 또는 3분의 1과 일반적으로 동일하다.

본 발명에 따라 제약학적 조성물내 활성 성분, 제약학적으로 허용되는 부형제, 및/또는 임의의 추가적인 성분의 상대적인 양은 치료되는 대상의 신원, 크기, 및/또는 상태에 따라 및/또는 조성물이 투여되는 경로에 따라 달라질 수 있다. 예로서, 조성물은 0.1% 내지 100% (w/w) 활성 성분을 포함할 수 있다.

본 발명의 제약학적 조성물은 본 명세서에서 이용된 바와 같이, 바람직한 특정 제형에 적합한, 용매, 분산매, 희석제, 또는 다른 액상 비히클(vehicle), 분산 또는 현탁 조제(aid), 표면 활성제, 등장성 작용제, 증점제 또는 에멀젼화제, 보존제, 고형 결합제, 윤활제 등일 수 있거나 또는 이를 포함할 수 있는 제약학적으로 허용되는 부형제를 추가로 포함할 수 있다. Remington's The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, A. R. Gennaro, (Lippincott, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2006)는 제약학적 조성물을 조제하는 데에 이용된 다양한 부형제 그리고 이의 제조를 위한 공지된 기술을 개시한다. 가령, 임의의 바람직하지 않은 생물학적 영향을 유발하거나 그렇지 않으면 유해한 방식으로 제약학적 조성물의 임의의 다른 성분(들)과 상호작용시킴으로써 임의의 기존 부형제 배지가 물질 또는 이의 유도체와 양립 가능하지 않는 한에서 제외하면, 이의 용도는 본 발명의 범위 내에 있는 것으로 고려된다.

백신

몇몇 구체예에서, 본 발명은 인플루엔자 감염으로 고통받거나 또는 인플루엔자 감염에 취약한 대상의 수동 면역 (즉, 결합제가 대상에게 투여되는 면역화)에서의 이용 및/또는 시험을 위한 백신 조성물을 제공한다. 몇몇 구체예에서, 수동 면역은 항체가 임신 중에 모체에서 태아로 이동될 때 일어난다. 몇몇 구체예에서, 수동 면역은 개체에 직접 항체를 투여하는 것을 포함한다 (가령, 경구, 비강 등으로 주사함으로써).

몇몇 구체예에서, 예방적 적용으로는 백신을 투여하는 것이 포함될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 백신 접종은 개개의 환자에게 맞게 만든다. 예를 들어, 아래 설명된 바와 같이, 혈청은 환자로부터 수집될 수 있고 인플루엔자의 존재에 대해, 그리고 몇몇 구체예에서, 하나 이상의 특정한 인플루엔자 하위유형에 대해 검사될 수 있다. 몇몇 구체예에서 제공된 백신의 적절한 수혈자는 제공된 항체에 의해 결합된 및/또는 중화된 하나 이상의 인플루엔자 하위유형으로의 감염으로 고통받거나 또는 상기 감염에 취약한 개체이다.

몇몇 구체예에서, 백신 조성물은 적어도 하나의 어쥬번트(adjuvant)를 포함한다. 임의의 어쥬번트는 본 발명에 따라 이용될 수 있다. 다수의 어쥬번트가 공지된다; 이러한 많은 화합물의 유용한 일람표는 국립 보건원에 의해 준비되고 그들의 웹사이트에서 찾아볼 수 있다. 또한 Allison (1998, Dev. Biol. Stand., 92:3-11; 참조로서 본 명세서에 편입됨), Unkeless et al. (1998, Annu. Rev. Immunol., 6:251-281; 참조로서 본 명세서에 편입됨), 및 Phillips et al. (1992, Vaccine, 10:151-158; 참조로서 본 명세서에 편입됨)를 참고. 수 백가지의 상이한 어쥬번트가 해당 분야에서 공지되고 본 발명의 실시에서 이용될 수 있었다. 본 발명에 따라 활용될 수 있는 예시적인 어쥬번트로는 사이토카인, 겔-유형 어쥬번트 (가령, 알루미늄 하이드록사이드, 알루미늄 포스페이트, 칼슘 포스페이트 등); 미생물 어쥬번트 (가령, CpG 모티프; 내독소, 가령 모노포스포릴 지질 A; 외독소, 가령 콜레라 독소, 대장균(E. coli) 이열성 독소, 및 백일해 독소; 무라밀 디펩티드 등을 포함한 면역조절 DNA 서열); 오일-유제 및 유화제-기반 어쥬번트 (가령, 프로이드(Freund) 어쥬번트, MF59 [Novartis], SAF, etc.); 미립성 어쥬번트 (가령, 리포좀, 생분해성 미소구체, 사포닌 등); 합성 어쥬번트 (가령, 비이온성 블록 공중합체, 무라밀 펩티드 유사체, 폴리포스파젠, 합성 폴리뉴클레오티드 등); 및/또는 이의 조합이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다. 다른 예시적인 어쥬번트는 몇 가지 중합체 (가령, 폴리포스파젠; 미국 특허 5,500,161에서 설명됨, 이는 참조로서 본 명세서에 편입됨), Q57, QS21, 스쿠알렌, 테트라클로로데카옥사이드 등을 포함한다. 제약학적으로 허용되는 부형제는 이전에, "제약학적 조성물"이라는 제목의 상기 섹션에서 추가로 상세히 설명되었다.

병용 요법

본 발명의 제약학적 조성물은 단독으로 또는 백신 및/또는 항체를 포함하지만, 이에 제한되지 않는 하나 이상의 다른 치료제와 조합하여 투여될 수 있다. "와 조합하여"에 의하면, 작용제가 동시에 투여되거나 또는 이들 전달 방법이 본 발명 범위 내에 있음에도 불구하고, 함께 전달하기 위해 조제되어야 한다는 점을 암시하는 것으로 의도되지 않는다. 일반적으로, 각각의 작용제는 한 용량으로 그리고 그 작용제에 대해 정해진 시간 스케줄에 맞춰 투여될 것이다. 추가적으로, 본 발명은 작용제와 조합하여 제약학적 조성물의 전달을 포함하는데, 이때 상기 조합은 신체내 그들의 생체이용률을 향상시키고, 그들의 대사를 감소시키거나 변형시키고, 그들의 배출을 저해하거나, 또는 그들의 분포를 변형시킬 수 있다. 본 발명의 제약학적 조성물이 이를 필요로 하는 임의의 대상 (가령, 임의의 동물)의 치료를 위해 이용될 수 있음에도 불구하고, 상기 조성물은 인간의 치료에서 가장 바람직하게 이용된다.

몇몇 구체예에서, 본 발명의 제약학적 조성물은 하나 이상의 다른 작용제와 조합하여 투여될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 본 발명의 제약학적 조성물은 하나 이상의 다른 제약학적 작용제 (가령, 항-인플루엔자 백신, 항-바이러스제, 통증 완화제, 소염제, 항생제, 스테로이드성 약제, 항체, 시알리다아제 등)와 조합하여 투여될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 본 발명의 제약학적 조성물 및/또는 작용제 (가령, 항체)는 어쥬번트와 조합하여 투여될 수 있다.

몇몇 구체예에서, 본 발명의 제약학적 조성물은 하나 이상의 항-바이러스제와 조합하여 투여된다. 몇몇 구체예에서, 이러한 항-바이러스제로는 아사이클로비르, 리바비린, 아만타틴, 레만티딘, 자나미비르 (리렌자(Relenza)), 오셀타미비르 (타미플루(Tamiflu)), 아만타틴, 리만타딘 및/또는 이의 조합이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.

몇몇 구체예에서, 본 발명의 제약학적 조성물은 하나 이상의 백신과 조합하여 투여된다. 몇몇 구체예에서, 백신은 항-바이러스 백신이다. 몇몇 구체예에서, 백신은 항-인플루엔자 백신이다. 몇몇 구체예에서, 항-인플루엔자 백신은 계절성 인플루엔자 (가령, 일반적으로 "독감"으로 언급됨)를 치료하기 위함이다. 몇몇 구체예에서, 항-인플루엔자 백신은 독감 예방주사(flu shot) 및/또는 FluMist이다. 몇몇 구체예에서, 항-인플루엔자 백신은 하나 이상의 HA 폴리펩티드 (가령, H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15, 또는 H16 폴리펩티드)와의 특이적인 조합을 표적으로 한다. 몇몇 구체예에서, 항-인플루엔자 백신은 H1N1, H2N2, H3N2, H5N1, H7N7, H1N2, H9N2, H7N2, H7N3, 또는 H10N7 바이러스의 하나 이상의 조합에 특이적이다. 몇몇 구체예에서, 항-인플루엔자 백신은 H1N1 바이러스에 특이적이다. 몇몇 구체예에서, 항-인플루엔자 백신은 H3N2 바이러스에 특이적이다. 몇몇 구체예에서, 항-인플루엔자 백신은 H1N1과 H3N2 바이러스에 특이적이다.

몇몇 구체예에서 제약학적 조성물은 인플루엔자 바이러스 감염과 연관된 증상을 치료하는 데에 이용되는 하나 이상의 다른 제약학적 작용제와 조합하여 투여될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 인플루엔자 감염과 연관된 증상을 치료하는 데에 이용되는 제약학적 작용제는 통증 완화제, 소염제, 항생제 및/또는 이의 조합이다. 몇몇 구체예에서, 인플루엔자 감염과 연관된 염증 증상을 치료하는 데에 이용되는 제약학적 작용제는 NSAID, 스테로이드, 글루코코르티코이드, 및/또는 이의 조합으로 구성된 군에서 선택된다. 몇몇 구체예에서, 인플루엔자 감염과 연관된 인플루엔자 증상을 치료하는 데에 이용되는 NSAID 제약학적 작용제는 아세트아미노펜, 이부프로펜, 아스피린, 나프록센 및/또는 이의 조합으로 구성된 군에서 선택된다.

투여 방법

본 발명의 제약학적 조성물은 경구, 정맥내, 근육내, 동맥내, 피하, 심실내, 경피, 피내, 직장, 질내, 복강내, 국부적 (분말, 연고, 크림, 또는 점적약으로써), 점막, 비강, 구강, 장, 설하를 비롯한 여러 가지 경로로; 기관내 점적주입, 기관지 점적주입, 및/또는 흡입으로; 및/또는 경구 스프레이, 비강 스프레이, 및/또는 에어로졸로 투여될 수있다. 일반적으로 가장 적절한 투여 경로는 작용제의 성질 (가령, 위장관 환경에서 이의 안정성), 환자의 상태 (가령, 환자가 경구 투여를 용인할 수 있는지 없는지) 등을 비롯한 여러 가지 요인에 의존할 것이다.

현재, 경구 또는 비강 스프레이 또는 에어로졸 경로 (가령, 흡입에 의한)는 직접적으로 폐와 호흡계로 치료제를 전달하는 데에 가장 일반적으로 이용된다. 하지만, 본 발명은 약물 전달 과학에서의 진척 가능성을 고려하여, 임의의 적절한 경로에 의한 발명의 제약학적 조성물의 전달을 포함한다.

몇몇 구체예에서, 흡입 또는 에어로졸 전달을 위한 제조물은 다수의 입자를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 제조물은 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 또는 13 마이크론의 평균 입자 크기를 가진다. 몇몇 구체예에서, 흡입 또는 에어로졸 전달을 위한 제조물은 건조 분말로서 조제된다. 몇몇 구체예에서, 흡입 또는 에어로졸 전달을 위한 제조물은 예를 들어 습윤제의 포함을 통해, 젖은 분말로서 조제된다. 몇몇 구체예에서, 습윤제는 물, 식염수, 또는 생리학적 pH의 다른 액체로 구성된 군에서 선택된다.

몇몇 구체예에서, 발명의 조성물은 비강 또는 구강에 점적하여 투여된다. 몇몇 구체예에서, 용량은 다수의 액적을 포함할 수 있다 (가령, 1-100, 1-50, 1-20, 1-10, 1-5 등).

몇몇 구체예에서, 발명의 조성물은 계량된 투여량의 조성물을 전달하는 장치를 이용하여 투여된다.

본 명세서에서 설명된 피내 제약학적 조성물을 전달하는 데에서 이용하기 위한 적합한 장치는 미국 특허 번호 제4,886,499호, 미국 특허 번호 제5,190,521호, 미국 특허 번호 제5,328,483호, 미국 특허 번호 제5,527,288호, 미국 특허 번호 제4,270,537호, 미국 특허 번호 제5,015,235호, 미국 특허 번호 제5,141,496호, 미국 특허 번호 제5,417,662호 에서 설명된 바과 같은 짧은 바늘 장치를 포함한다. 피내 조성물은 또한, 참조로서 본 명세서에 편입된, WO99/34850에서 설명된 바와 같이, 피부 내로 바늘의 효과적인 관통 길이를 제한하는 장치, 및 이의 기능적 등가물로 투여될 수 있다. 액상 분사식 주사기를 통해 또는 각질층을 뚫고 진피에 도달하는 분사를 일으키는 주사를 통해 진피로 액상 조성물을 전달하는 분사식 주사 장치가 또한 적합하다. 분사식 주사 장치는 예를 들어, 미국 특허 번호 제5,480,381호, 미국 특허 번호 제5,599,302호, 미국 특허 번호 제5,334,144호, 미국 특허 번호 제5,993,412호, 미국 특허 번호 제5,649,912호, 미국 특허 번호 제5,569,189호, 미국 특허 번호 제5,704,911호, 미국 특허 번호 제5,383,851호, 미국 특허 번호 제5,893,397호, 미국 특허 번호 제5,466,220호, 미국 특허 번호 제5,339,163호, 미국 특허 번호 제5,312,335호, 미국 특허 번호 제5,503,627호, 미국 특허 번호 제5,064,413호, 미국 특허 번호 제5,520,639호, 미국 특허 번호 제4,596,556호, 미국 특허 번호 제4,790,824호, 미국 특허 번호 제4,941,880호, 미국 특허 번호 제4,940,460호, WO 97/37705 및 WO 97/13537에서 설명된다. 피부의 바깥 층을 통해 진피로의 탄도학 분말/입자 전달 장치가 또한 적합하며, 상기 장치는 분말 형태의 조성물을 가속화하는 데에 압축된 가스를 이용한다. 추가적으로, 기존 주사기는 피내 투여의 고전적인 망투(mantoux) 방법에서 이용될 수 있다.

진단 적용

몇몇 구체예에서, 본 발명에 따른 인플루엔자 결합제는 진단 적용을 위해 이용된다. 예를 들어, 결합제의 여러 가지 결합 프로필 덕분에, 판-인플루엔자 결합제 (즉, 판-인플루엔자 항체)를 제공하기 위하여, 다수의 인플루엔자 유전자형 및/또는 하위유형을 검출할 진단 어세이가 이용될 수 있는 동시에, 감산 분석(subtractive analysis)으로 개별적인 유전자형 및/또는 하위유형이 세밀히 조사될 수 있다.

진단 목적을 위하여, 결합제는 HA 단백질을 검출하기 위해, 인플루엔자 유전자형 및/또는 하위유형을 분별하기 위해, 비리온(virion) 및 항체를 검출하기 위해 매우 다양한 형태로 이용될 수 있다. 진단 목적을 위하여, 대부분이 이전에 언급된 매우 다양한 표지가 이용될 수 있다. 이들에는 발색단, 화학발광 모이어티, 방사성 동위원소, 효소, 입자 (가령, 콜로이드 탄소 입자, 금 입자, 라텍스 입자), 고 친화성 수용체가 있는 리간드, 및 검출가능 신호를 제공하기 위해 활성화될 수 있는 프로라벨(prolabel)이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.

몇몇 구체예에서, 표면은 유리 단백질 (가령, 순환 단백질)로서 또는 완전한 또는 부분적으로 완전한 비리온의 부분으로서 인플루엔자 항원에 결합할 수 있는 단백질로 코팅된다. 다수의 인플루엔자 유전자형 및/또는 하위유형에결합하는 본 발명의 제공된 결합제가 이용될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 본 발명에 따른 결합제는 적어도 1, 2, 3, 4, 5개, 또는 5개 이상의 상이한 유전자형 및/또는 하위유형에 결합한다.

몇몇 구체예에서, 어세이는 유리 또는 인플루엔자-연관된 단백질(들)을 함유할 수 있는 배지와 표면을 접촉시키는 단계를 포함할 수 있으며, 여기서 배지는 하나 이상의 유전자형 및/또는 하위유형의 공지된 HA의 용액 또는 샘플일 수 있다. 인큐베이션과 비-특이적으로 결합된 단백질을 제거하기 위한 세척 후, 어세이는 무엇이 어세이되는 지에 따라 여러 가지 방식으로 진행될 수 있다. 혈청반응 양성으로 의심되는 혈액 샘플이 어세이되는 경우, 샘플은 HA 단백질의 층에 적용되고, 인큐베이션되고, 세척될 수 있으며, 그리고 단백질 층에 결합된 인간 항체의 존재가 결정될 수 있다. 표지된 α-인간 항체 (대상 항체의 이소타입 이외에, 여기서 대상 항체는 초기에 이용되었음)가 이용될 수 있다. 혈청반응 양성 대상의 항체에 대한 어세이에서, 대상 항체는 이러한 대상의 혈청내 임의의 인간 항- 인플루엔자 항체를 검출하는 데에 이용되는 동일한 시약을 가지고 대조로서 이용될 수 있다. 샘플내 항체의 특이성은 항-인간 항체로부터 별도로 표지되고 그들이 샘플내 항체에 의해 차단되는지 안 되는지 결정하는, 대상 항체를 이용함으로써 확인될 수 있다.

샘플이 인플루엔자 HA 단백질에 대해 어세이되는 경우에, 검출은 표지된 대상 항체를 이용하고, 선별은 HA 단백질의 검출 또는 유전자형 분석에 관심이 있는지 없는지에 따른다. 비-특이적으로 결합된 항체를 세척한 후, 표지된 항체의 존재는 공지된 기술에 따라 표지의 존재를 검출함으로써 결정된다. 대안으로 또는 추가적으로, 대상 항체가 표면에 결합되는 경우, HA에 대한 표지된 렉틴은 HA 단백질의 존재를 검출하기 위해 이용될 수 있다.

본 발명에 따른 결합제는 혈청내 항체, 단일클론 항체, 유전적 조작의 결과로서 발현되는 항체 등을 비롯한 다른 결합제의 반응성을 측정하는 데에 이용될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 완전한 비리온이 이용된다. 몇몇 구체예에서, 입체구조적으로 보존된 외피 단백질이 이용된다.

표지된 대상 항체는 생검 물질로부터 인플루엔자의 존재에 대하여 어세이하는 데에 이용될 수 있다. 표지된 항체는 대상 표지된 항체 중 하나 이상의 용액으로, 고정된 생검 물질, 가령 폐 조각과 인큐베이션될 수 있다. 비-특이적으로 결합된 항체를 세척한 후, 생검된 조직의 세포에 결합된 항체의 존재가 표지의 성질에 따라 검출될 수 있다.

몇몇 구체예에서, 본 발명에 따른 인플루엔자 결합제는 인플루엔자 수용체를 식별하는 데에 이용될 수 있다. 해당 분야의 통상의 기술자는 많은 방식이 성취될 수 있다는 점을 이해할 것이다 (Sambrook J., Fritsch E. and Maniatis T. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989; 및 Ausubel et al., eds., Current Protocols in Molecular Biology, 1987; 이 둘 모두 참조로서 본 명세서에 편입됨). 전형적으로, 단백질 및 펩티드 수용체는 HA에 결합할 수 있는 결합제가 인플루엔자 감염에 취약한 세포와의 인플루엔자 비리온의 부착을 저해할 수 있거나 또는 없는 것을 결정함으로써 식별될 수 있다. 따라서, 인플루엔자 HA 단백질 및 펩티드에 대한 수용체는 이 방식으로 식별될 수 있다. 취약한 세포는 인플루엔자 및 항- 인플루엔자 HA 결합제의 존재에서 인큐베이션될 수 있고, 그리고 세포-결합 어세이는 부착이 결합제의 존재에서 감소되는지 안 되는지 결정하기 위해 활용될 수 있다.

인플루엔자에 대한 추정 수용체를 발현하는 세포 및/또는 인플루엔자에 대한 추정 수용체의 라이브러리(library)는 인플루엔자에 결합하는 그들의 능력에 대해 스크리닝될 수 있다. 예를 들어, 추정 인플루엔자 수용체 (가령, 인플루엔자 HA에 대한 수용체)를 발현하는 세포는 세포 표면 상의 추정 수용체와 인플루엔자 단백질 또는 펩티드의 결합을 허용하는 데에 충분한 조건 하에 또는 시간 동안 항체의 존재에서 인플루엔자 단백질 또는 펩티드와 접촉될 수 있다. 대안으로 또는 추가적으로, 인플루엔자 단백질, 펩티드, 또는 비리온은 세포 표면 상에서 추정 수용체를 접촉시키기에 앞서 항체와 사전-인큐베이션될 수 있다. 결합은 해당 분야에서 공지된 임의의 수단, 가령 유동 세포 분석법 등에 의해 검출될 수 있다 (상기 Ausubel et al. 또는 Sambrook et al.를 참고). 항체의 부재에서 세포의 부재시 결합과 비교하여 항체의 존재에서 세포의 표면과의 결합의 감소는 인플루엔자 수용체의 식별을 나타낸다.

몇몇 구체예에서, 인플루엔자 수용체 (가령, HA 수용체)를 식별하는 방법은 고형 지지체, 가령 구슬, 칼럼 등의 용도를 포함한다. 예를 들어, 인플루엔자 단백질 및 펩티드 (가령, HA 단백질 및/또는 이의 단편) 및/또는 인플루엔자 비리온에 대한 수용체는 고형 지지체에 인플루엔자 항체를 부착함으로써 그리고 이후에 항체에 결합하기 위해 인플루엔자 단백질 또는 펩티드에 충분한 시간 동안 인플루엔자 단백질 또는 펩티드와 항체를 접촉시킴으로써 식별될 수 있다. 이것은 인플루엔자 단백질 또는 펩티드와 수용체의 결합을 허용하는 데에 충분한 조건 하에 및 시간 동안 고형 지지체 상에서 항체:리간드 복합체와 접촉될 수 있는 추정 인플루엔자 수용체에 대한 인플루엔자 단백질을 제공한다. 단백질은 라이브러리로부터 발현될 수 있거나 또는 천연 또는 재조합 세포로부터의 정제된 단백질 제조물 또는 세포 추출물로서 제공될 수 있다. 일단 인플루엔자 단백질과 펩티드 사이의 특이적인 결합 복합이 형성되면, 비결합 인플루엔자 단백질 또는 펩티드, 가령 인플루엔자 단백질 또는 펩티드에 특이적으로 결합하지 않았던 라이브러리 단백질 또는 펩티드가 가령, 표준 세척 단계에 의해 제거된다. 이후 결합된 단백질은 가령, 겔 전기영동에 의해 용리되고 식별된다.

키트

본 발명은 본 발명에 따라 편리하게 및/또는 효과적으로 수행되는 방법에 대한 여러 가지 키트를 제공한다. 키트는 전형적으로 본 발명에 따른 하나 이상의 인플루엔자 결합제를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 키트는 상이한 목적 (가령, 진단, 치료, 및/또는 예방)을 위해 이용되기 위한 상이한 인플루엔자 결합제의 모음을 포함한다. 전형적으로 키트는 대상(들)에게 다수의 투여를 수행하는 것 및/또는 다수의 실험을 수행하는 것을 사용자에게 허용하기 위한 충분한 양의 인플루엔자 결합제를 포함할 것이다. 몇몇 구체예에서, 키트는 구매자에 의해 명시되었던 하나 이상의 인플루엔자 항체를 공급받거나 또는 상기 항체를 포함한다.

특정한 구체예에서, 본 발명에 따라 사용하기 위한 키트는 하나 이상의 참조 샘플; 설명서 (가령, 샘플을 가공처리하기 위한, 검사를 수행하기 위한, 결과를 해석하기 위한, 인플루엔자 결합제를 가용화하기 위한); 완충액; 및/또는 검사를 수행하기 위해 필요한 다른 시약을 포함할 수 있다. 특정한 구체예에서 키트는 항체의 패널을 포함할 수 있다. 키트의 다른 성분은 세포, 세포 배양 배지, 조직, 및/또는 조직 배양 배지를 포함할 수 있다.

키트는 사용을 위한 설명서를 포함할 수 있다. 예를 들어, 설명서는 인플루엔자 결합제를 포함하는 제약학적 조성물을 제조하기 위한 적절한 절차 및/또는 대상에게 제약학적 조성물을 투여하기 위한 적절한 절차를 사용자에게 알려줄 수 있다.

몇몇 구체예에서, 키트는 인플루엔자 결합제를 포함하는 제약학적 조성물의 단위 투여량 많이 포함한다. 메모리 지원 (memory aid)이 예를 들어, 수, 문자, 및/또는 다른 표시의 형태로 및/또는 투여량이 투여될 수 있는 치료 스케줄에서 날짜/시간이 지정된 달력 삽입으로 제공될 수 있다. 제약학적 조성물의 투여량과 유사한 형태로 또는 상기 투여량과는 별개로, 플라시보(placebo) 투여량, 및/또는 칼슘 식이 보충물이 포함되어 투여량이 매일 투여되는 키트를 제공할 수 있다.

키트는 특정한 개별적 성분 또는 시약이 따로따로 수용되도록 하나 이상의 그릇 또는 용기를 포함할 수 있다. 키트는 상업적 판매를 위해 상대적으로 거의 제한된 개별적인 용기, 가령 플라스틱 상자를 봉입하기 위한 수단을 포함할 수 있으며, 여기에는 설명서, 포장 물질, 가령 스티로폼 등이 봉입될 수 있다.

몇몇 구체예에서, 키트는 인플루엔자로 고통받는 및/또는 인플루엔자에 취약한 대상의 치료, 진단, 및/또는 예방에서 이용된다. 몇몇 구체예에서, 발명의 키트는 적어도 한 가지 성분의 전달 장치, 가령 주사기, 바늘, 도포기, 흡입기 등을 포함한다. 이러한 몇몇 구체예에서, 본 발명은 적어도 한 가지 성분의 전달 장치, 가령 흡입기 및/또는 주사기 그리고 1회 용량의 작용제를 포함한 키트를 제공한다. 몇몇 구체예에서, 키트는 (i) 적어도 한 가지 인플루엔자 결합제; (ii) 개체에게 적어도 한 가지 인플루엔자 결합제의 투여를 위한 주사기, 바늘, 도포기, 흡입기 등; 그리고 (iii) 사용 설명서를 포함한다.

몇몇 구체예에서, 키트는 인플루엔자로 고통받는 및/또는 인플루엔자에 취약한 대상의 치료, 진단, 및/또는 예방에서 이용된다. 몇몇 구체예에서, 이러한 키트는 (i) 동결건조된 분말로 제공된 적어도 한 가지 인플루엔자 결합제 (즉, 판-인플루엔자 항체); 및 (ii) 동결건조된 분말을 복원하기 위한 희석제를 포함할 수 있다. 이러한 키트는 대상에게 적어도 한 가지 인플루엔자 결합제의 투여를 위한 주사기, 바늘, 도포기 등; 및/또는 사용 설명서를 선택적으로 포함할 수 있다.

본 발명은 적어도 한 가지 인플루엔자 결합제를 포함하는 백신의 발생을 위한 시약을 함유한 키트를 제공한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 키트는 (i) 인플루엔자 결합체, 이의 특징적인 부분, 및/또는 이의 생물학적으로 활성인 부분을 발현하는 세포; (ii) 세포를 성장시키기 위한 배지; 및 (iii) 칼럼, 레진, 완충액, 튜브, 및 항체 정제에 유용한 다른 기구를 포함할 수 있다. 몇몇 구체예에서, 이러한 키트는 (i) 인플루엔자 결합체, 이의 특징적인 부분, 및/또는 이의 생물학적으로 활성인 부분을 인코딩하는 뉴클레오티드를 함유한 플라스미드; (ii) 플라스미드로 형질전환될 수 있는 세포, 가령 Vero 및 MDCK 세포주를 포함하지만, 이에 제한되지 않는 포유류 세포주; (iii) 세포를 성장시키기 위한 배지; (iv) 음성 대조로서 인플루엔자 결합제를 인코딩하는 뉴클레오티드를 함유하지 않은 발현 플라스미드; (v) 칼럼, 레진, 완충제, 튜브, 및 항체 정제를 위해 유용한 다른 기구; 및 (vi) 사용 설명서를 포함할 수 있다.

몇몇 구체예에서, 키트는 하나 이상의 샘플내 인플루엔자의 존재를 검출하는 데에 이용된다. 이러한 샘플은 혈액, 혈청/혈장, 말초 혈액 단핵구 세포/말초 혈액 림프구 (PBMC/PBL), 가래, 소변, 대변, 인후 표본(throat swab), 진피 병변 표본(dermal lesion swab), 뇌척수액, 자궁경관 도말(cervical smear), 고름 샘플, 음식 매트릭스(food matrices), 및 뇌, 비장과 간과 같은 신체의 여러 가지 부분으로부터의 조직을 포함하지만, 이에 제한되지 않는 병리학적 샘플일 수 있다. 이러한 샘플은 토양, 물, 및 식물상을 포함하지만, 이에 제한되지 않는 환경적 샘플일 수 있다. 열거되지 않은 다른 샘플도 또한 적용가능할 수 있다. 몇몇 구체예에서, 이러한 키트는 (i) 적어도 한 가지 인플루엔자 결합제; (ii) 양성 대조로서 인플루엔자를 함유한 것으로 공지된 샘플, 및 (iii) 음성 대조로서 인플루엔자를 함유하지 않은 것으로 공지된 샘플; 그리고 (iv) 사용 설명서를 포함한다.

몇몇 구체예에서, 키트는 하나 이상의 샘플내 인플루엔자를 중화시키는 데에 이용된다. 이러한 키트는 적어도 한 가지 인플루엔자 결합제로 인플루엔자-함유 샘플을 처리하기 위해 요구되는 그리고 처리되지 않은 샘플에 비해 배양된 세포를 감염시키는 처리된 샘플의 능력을 검사하기 위해 요구되는 물질을 제공할 수 있다. 이러한 키트는 (i) 적어도 한 가지 인플루엔자 결합제; (ii) 인플루엔자로 배양 및 감염될 수 있는 세포; (iii) 음성 대조로서 인플루엔자에 결합하지 못하는 그리고 인플루엔자를 중화시키지 못하는 결합제; (iv) 양성 대조로서 인플루엔자에 결합할 수 있는 그리고 인플루엔자를 중화시킬 수 있는 결합제; (v) 음성 대조로서 인플루엔자를 함유하지 않는 것으로 공지된 샘플; (vi) 양성 대조로서 인플루엔자를 함유하는 것으로 공지된 샘플; 그리고 (vii) 사용 설명서를 포함할 수 있다.

본 발명의 이들 및 다른 측면은 본 발명의 특정한 구체예를 설명하도록 의도되지만, 청구범위로 제한된 바와 같이, 이의 범위를 제한하는 것으로는 의도되지 않는, 다음 실시예를 고려하여 추가로 이해될 것이다.

실시예

실시예 1: 인플루엔자 항체의 식별 및 특성화

본 발명은 본 발명에 따라 제공된 여러 가지 항체의 생성 및/또는 검사를 설명한다.

항-HA 단일클론 항체가 발생되고 프레임워크 (FR) 서열이 결정되었다. 표 2는 항-HA 항체의 VH 도메인의 예시적인 아미노산 서열을 도시한다. 표 3은 항-HA 항체의 VL 도메인의 예시적인 아미노산 서열을 도시한다. 중쇄 및 경쇄 각각의 상보성 결정 영역 (CDR)은 표 2와 3의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 세로줄에서 열거되고 그리고 굵은 활자체로 나타난다.

예시적인 항체는 인플루엔자의 상이한 하위유형으로부터의 HA에 결합하기 위한 것으로 특징되었다. 예시적인 항체 프레임워크의 서열 및 상보성 결정 영역이 아래 표 4에 명시된다. 예시적인 항체는 차등적인 결합 친화도를 가진 HA의 군 1과 군 2 하위유형 둘 모두에 결합한다.

[표 4]

시험관내 결합 어세이에서 HA 폴리펩티드와의 결합에 대해 예시적인 항체를 검사하였다. Maxisorp 96-웰 플레이트 웰을 상이한 하위유형 (H1, H3, H5, H7 및 H9)의 HA 폴리펩티드 0.2μg으로 코팅하였고 그리고 4 ℃에서 하룻밤 동안 두었다. HA 폴리펩티드 코팅된 플레이트를 PBS로 3회 세척하였고 PBST에서 1% BSA로 블로킹시켰다. C179 항체 (대조)와 함께 상이한 농도의 예시적인 항체를 HA 폴리펩티드 코팅된 웰에 첨가하였고 그리고 플레이트를 2시간 동안 RT에서 인큐베이션하였다. 플레이트를 PBST로 3회 세척하였고 그리고 작용제를 함유한 웰을 RT에서 1시간 동안 생쥐-항-6xHis 항체 (1:1000 희석)와 인큐베이션하였다. 플레이트를 PBST로 3회 세척하였고, 모든 웰을 RT에서 1시간 동안 염소-항-생쥐 HRP 항체와 인큐베이션하였다. 인큐베이션-후, 웰을 PBST로 세척하였고 그리고 결합된 HRP를 TMB 기질을 이용하여 측정하였다. TMB 기질을 웰에 첨가하고, 3분 동안 인큐베이션하고, 그 다음 1N 황산을 첨가하였다. 450nm에서 흡광도를 측정하였다.

도 2A (하부 패널)와 도 2B에서 보여질 수 있는 바와 같이, 결과는 예시적인 항체가 여러 가지 HA 폴리펩티드 (H1, H3, H5, H7 및 H9)에 결합한다는 점을 보여준다.

실시예 2. 예시적인 인플루엔자 항체와 인플루엔자 항체의 표적 간의 결합 친화도

본 발명은 예시적인 인플루엔자 항체와 항체의 표적 사이에서, 평형 해리 상수 (K_D)로 나타난 바와 같은, 결합 친화도의 계산을 보여준다. 이 실시예에서, 항체는 실시예 1의 항체이고 항체의 표적은 상이한 인플루엔자 균주로부터의 HA 폴리펩티드이다.

예시적인 항체와 HA 폴리펩티드 간의 결합 친화도는 항체와 HA 폴리펩티드 둘 모두의 농도의 함수이다. 본 실시예에서, 결합 친화도는 평형 해리 속도 상수 (K_D)를 이용하여 정량적으로 설명된다. 해리 상수를 어떻게 측정하는 지에 대한 예시는 아래에서 설명된다.

이전에 설명된 바와 같은 예시적인 항체로 ELISA 어세이를 수행하는 데에 HA 폴리펩티드 코팅된 플레이트를 이용하였다. 수용체의 분획 포화를 계산하는 데에 450 nm에서 측정된 흡광도를 이용하였다. 분획 포화를 항체의 몰 농도의 함수로 플롯팅하였다. 데이터는 다음 식에 맞추었다:

여기서 y는 분획 포화이다. I₀는 항체의 농도이고 K_D는 평형 해리 속도 상수임.

상기 참조된 계산을 이용하여, 그리고 회귀 분석을 적용하여, 상이한 인플루엔자 하위유형 (도 2A, 상부 패널)으로부터 HA 폴리펩티드에 대한 차등적인 K_D 값을 관찰하였다. 몇몇 구체예에서, 상이한 HA 폴리펩티드 하위유형과 항체의 결합에 대해 0.01 내지 100 nM의 범위에서 K_D값을 갖는 예시적인 항체를 관찰하였다. 몇몇 구체예에서, 상이한 HA 폴리펩티드 하위유형과 항체의 결합에 대해 0.1 내지 500 nM의 범위에서 K_D값을 갖는 예시적인 항체를 관찰하였다. 몇몇 구체예에서, 상이한 HA 폴리펩티드 하위유형과 항체의 결합에 대해 10 내지 100 nM의 범위에서 K_D값을 관찰하였다. 몇몇 구체예에서, HA 폴리펩티드 하위유형과의 항체의 결합에 대해 50 내지 100 nM의 범위에서 K_D값을 관찰하였다.

실시예 3. 인플루엔자 항체의 동역학 속도 평가

본 실시예는 실험관내 결합 어세이에서 바이러스 감염력을 감소시키는 예시적인 인플루엔자 항체의 능력을 설명한다. 본 실시예는 예시적인 인플루엔자 항체와 항체의 표적 간의 결합 속도 상수 (k_a), 해리 속도 상수 (k_d), 및 평형 해리 상수 K_D로 나타난 바와 같이, 결합 친화도를 계산하기 위한 대안적인 방법을 보여준다. 이 실시예에서, 항체는 실시예 1의 항체이고 항체의 표적은 상이한 인플루엔자 균주로부터의 HA 폴리펩티드이다.

예시적인 항체와 HA 폴리펩티드 간의 결합 친화도는 항체와 HA 폴리펩티드 둘 모두의 농도의 함수이다. 본 실시예에서, 결합 친화도는 결합 상수 (k_a), 해리 상수 (k_d) 및 평형 상수 (K_D)를 이용하여 정량적으로 설명된다. 이들 상수를 어떻게 측정하고 계산하는 지에 대한 예시는 아래에서 설명된다.

실험에서, 실시간으로 예시적인 항체와 다양한 HA 폴리펩티드 간의 동역학 속도 상호작용을 모니터링하는 데에 Biacore^TM 시스템을 이용하였다. Biacore 시스템은 표면에서 굴절률의 변화를 정확하게 측정할 수 있는, 표면 플라스몬 공명 (SPR)의 원리로 작동된다. 간단히, 한 가지 상호반응물 (리간드)을 센서 칩의 표면에 고정시킨다. 잠재적인 결합 파트너(들)을 함유한 용액이 고정된 표면을 지나가게 하고, 결합은 시간이 지남에 따라 표면에서 굴절률의 변화로서 가시화된다 (응답 단위 (RU)). 표면 플라스몬 공명은 관심의 상호작용에서 표지의 잠재적인 영향을 줄이는, 무-표지 방식으로 상호작용의 즉각적인 가시화를 허용한다.

다음 비오틴화된 폴리펩티드; H1 (A/솔로몬 아일랜드/03/06), H3 (A/와이오밍/3/2003), H5 (A/베트남/1203/2004), H7 (A/네덜란드/219/03) 및 H9 (A/홍콩/1073/99)을 별개의 Biacore 센서칩의 표면에 각각 결합시켰다. SPR 결합 분석을 위해 변화하는 농도의 항체가 칩을 지나가게 하였다. RU 대 시간에서 측정된 반응 차이의 함수로서 데이터를 플롯팅하였다. 다음 식을 이용하여 여러 가지 동역학 속도 값을 계산하였다:

여기서, d[AB]는 RU이고, 이때 [A]는 항체 농도이고, [B]는 [R_max - R]이고, k_a는 결합 상수이고, k_d는 해리 상수이고 그리고 K_D는 평형 해리 상수임.

상기 참조된 계산을 이용하여, 상이한 인플루엔자 하위유형 (도 3A-E)으로부터 항체와 HA 폴리펩티드 간의 차등적인 동역학적 결합 속도를 관찰하였다. 몇몇 구체예에서, 상이한 HA 폴리펩티드 하위유형과 항체의 결합에 대해 0.01 내지 100 nM의 범위에서 K_D 값을 가진 예시적인 항체를 관찰하였다. 몇몇 구체예에서, 상이한 HA 폴리펩티드 하위유형과 항체의 결합에 대해 0.1 내지 500 nM의 범위에서 K_D 값을 가진 예시적인 항체를 관찰하였다. 몇몇 구체예에서, HA 폴리펩티드 하위유형과 항체의 결합에 대해 10 내지 100 nM의 범위에서 K_D 값을 관찰하였다. 몇몇 구체예에서, HA 폴리펩티드 하위유형과의 항체의 결합에 대해 50 내지 100 nM의 범위에서 K_D 값을 관찰하였다.

몇몇 구체예에서, 상이한 HA 폴리펩티드 하위유형과 항체의 결합에 대해0.01x10⁵ 내지 0.1x10⁵ M^-1s^-1의 범위에서 k_a 값을 가진 예시적인 항체를 관찰하였다. 몇몇 구체예에서, 상이한 HA 폴리펩티드 하위유형과 항체의 결합에 대해 0.1x10⁵ 내지 1.0x10⁵ M^-1s^-1의 범위에서 k_a 값을 가진 예시적인 항체를 관찰하였다. 몇몇 구체예에서, 상이한 HA 폴리펩티드 하위유형과 항체의 결합에 대해 1.0x10⁵ 내지 1.0x10⁶ M^-1s^-1의 범위에서 k_a 값을 가진 예시적인 항체를 관찰하였다.

몇몇 구체예에서, 상이한 HA 폴리펩티드 하위유형과 항체의 결합에 대해 0.01x10^-5 내지 0.1x10^-5s^-1의 범위에서 k_d 값을 가진 예시적인 항체를 관찰하였다. 몇몇 구체예에서, 상이한 HA 폴리펩티드 하위유형과 항체의 결합에 대해 0.1x10^-5 내지 1.0x10^-5s^-1의 범위에서 k_d 값을 가진 예시적인 항체를 관찰하였다. 몇몇 구체예에서, 상이한 HA 폴리펩티드 하위유형과 항체의 결합에 대해 1.0x10^-5 내지 10.0x10^-6s^-1의 범위에서 k_d 값을 가진 예시적인 항체를 관찰하였다.

실시예 4. 항체는 시험관 내에서 바이러스 감염력을 저해한다

본 실시예는 시험관 내 결합 어세이에서 바이러스 감염력을 예방하는 예시적인 인플루엔자 항체의 능력을 설명한다.

인플루엔자 바이러스 균주의 증식 및 검사를 위해 일반적으로 이용되는 상피 세포, MDCK (마딘-다비(Madin-Darby) 개 신장) 세포를 이용하여 인플루엔자 감염을 저해하는 실시예 1의 예시적인 인플루엔자 항체의 능력을 시험관 내에서 평가하였다. 숙주 세포에서 인플루엔자-유도된 세포변성 효과 (CPE)의 정도와 바이러스 수량(viral yield)을 측정함으로써 감염력에 미치는 항체의 저해 효과를 결정하였다. 바이러스 생성을 정량화하는 데에 플라크 어세이와 qRT-PCR을 이용하였다. CPE 수준을 측정하는 데에 세포 생존력 어세이를 이용하였다. 숙주 세포 내로 도입 전에 1시간의 사전-인큐베이션 기간 동안 항체가 이의 바이러스 표적에 첫 번째로 결합하도록 실험을 설정하였다. 감염은 저수준의 트립신 (1 μM)의 존재에서 수행되었다. 검사 샘플의 계열 희석(serial dilution)으로 세포의 융합 단일층을 접종하고 중합체 Avicel (FMC Biopolymers)의 점성 현탁액으로 오버레이(overlay)시킴으로써 플라크 어세이를 수행하였다. 플라크를 35℃에서 48시간의 기간에 걸쳐 발생하도록 허용하고, 포르말린으로 고정시키고, 크리스탈 바이올렛(crystal violet)으로 염색하고 가시화하였다 (도 4). 검사 샘플에서 감염성 바이러스 역가를 계산하는 데에 플라크의 총 수를 이용하였다. 감염에 따른 생존가능 세포의 상대적인 수를 CPE의 척도로서 이용하였다. 서브-융합 세포 배양물을 35℃에서 1시간의 기간 동안 화합물/바이러스 혼합물 (moi =1.0)에 노출시켰다. 이후 비결합 바이러스와 약물을 제거하고 바이러스 성장 배지로 교체하였다. 세포 생존력은 비-형광 레사주린(resazurin)에서 형광 레소루핀(resorufin) 판독 (555/585 nm 여기(excitation)/방출(emission); SpectraMax M2; 분자 프로브)으로의 대사 전환의 정도로서 Promega's CellTiter Blue 시약 (레사주린)을 이용하여 인큐베이션 48시간 후 결정하였다.

이들 연구로부터, 예시적인 항체가 바이러스-유도된 플라크 생산을 저해한다는 점을 밝혀내었다.

실시예 5. 인플루엔자 항체의 IC ₅₀ 평가

본 실시예는 시험관내 결합 어세이에서 바이러스 감염력을 예방하는 예시적인 인플루엔자 항체의 능력을 설명한다.

HA를 표적하는 항-인플루엔자 작용제에 대한 IC₅₀을 이전에 정량화하였다. 연구에서 H1N1 인플루엔자 균주 PR8 (A/푸에르토리코/8/34)을 활용하였다. 간략하게, 융합 MDCK 세포를 PR8 [4E3 PFU/mL]로 감염시키고 변화하는 농도의 항-인플루엔자 작용제와 40분 동안 사전-인큐베이션하였다. 감염 1시간 후, 배지를 제거하고 실험에 따라 무-바이러스, 약물-함유 배지 또는 무-바이러스, 무-약물 배지로 교체하였다. 5% CO₂, 37℃에서 48시간의 인큐베이션 후, 상청액을 수집하였다. 바이러스 RNA를 단리시키고, 바이러스 M 단백질에 특이적인 프라이머를 이용하여 실시간 PCR로 바이러스 역가를 정량화하였다.

실시예 1의 예시적인 항체에 대한 IC₅₀ 값의 초기 평가는 미세중화 어세이에 의해 그 다음 정량적 PCR (qPCR)에 의해 결정되었다. 각각, 다양한 역가와 농도에서 바이러스 (PR8) 및 인플루엔자 표적 항체의 혼합물을 96-웰 조직 배양 플레이트 (~10,000개 세포/웰)에서 MDCK 세포 배양에 적용하기 전에 35℃에서 1시간 동안 사전-인큐베이션하였다. 추가적인 48시간의 인큐베이션 후, 배양 배지를 바이러스 수량을 위해 각각의 웰에서 수집하였다.

삼중 샘플로부터의 배지를 조합하고 이후 qPCR로 바이러스 수량의 정량화를 유도하였다. 내부 표준 곡선을 이용하여 PCR Ct 값으로부터 바이러스 역가를 계산하였고, 그리고 항체 농도에 대하여 계산된 역가를 플롯팅함으로써 IC₅₀ 값을 결정하였다 (도 5). 결과는 실시예 1로부터의 0.5 μg/ml의 항체를 이용한 PR8 바이러스 입자의 50% 저해 (IC₅₀)를 보여주었다. 이들 결과는 실시예 1의 항체가 인플루엔자 바이러스 감염력을 저해할 수 있다는 점을 제시한다. 몇몇 구체예에서, 여러 가지 인플루엔자 균주에 대한 인플루엔자 감염력을 저해하는 것에 대하여 0.01 내지 10 μg/ml의 범위에서 IC₅₀ 값을 관찰하였다. 몇몇 구체예에서, 여러 가지 인플루엔자 균주에 대한 인플루엔자 감염력을 저해하는 것에 대하여 0.1 내지 100 μg/ml의 범위에서 IC₅₀ 값을 관찰하였다.

실시예 6. 인플루엔자 항체는 생체 내에서 HA 폴리펩티드에 결합한다

본 실시예는 생체 내에서 HA 폴리펩티드에 결합하는 인플루엔자 항체의 능력을 설명한다.

인플루엔자 감염을 저해하는 실시예 1의 예시적인 인플루엔자 항체의 능력을 생체 내에서 평가하였다. 더욱 특정하게, 감염에 앞서 여러 가지 농도로 투여된 항체가 인플루엔자 감염력을 감소시키는 예방의 역할을 할 수 있었는지 없었는지 평가하기 위한 어세이를 수행하였다,

찰스 리버 랩스(Charles River Labs)로부터 BALB/c 생쥐 (4-6 주령)를 구입하였다. 실험을 위해 생쥐의 무게를 재고, 각각 6마리씩 4개의 군으로 나누었다. 군은 다음으로 구성된다: 군 1 - 치료하지 않은 군; 군 2 - 제-1일, 제0일, 및 제1일에 항바이러스 약물로 치료; 군 3- 단일 용량의 6 mg/kg 항체로 치료; 그리고 군 4 - 단일 용량의 10 mg/kg 항체로 치료. 감염에 앞서 첫 번째 날 (제-1일)에, 각각의 군에게 이소플루란을 투여하였고, 대조, 75mg/kg의 항바이러스 약물 리바비린 및 인플루엔자 항체 (6 또는 10 mg/kg 중 하나)를 투약하였고 그리고 회복시켰다 (< 2 분). 다음 날 (제0일)에, 각각의 군에게 이소플루란을 재투여하였고 각각의 군을 치사량의 H1N1 PR8 바이러스로 비강 내로 공격하였다. 상기 명시된 바와 같이, 실험 제0일 및 제1일에 75 mg/kg을 군 2에게 또한 투여하였다. 바이러스 감염과 연관된 무게 감소의 변화에 대해 생쥐를 14일 동안 매일 모니터링하였고 생존률을 매일 기록하였다. 생쥐에서 인플루엔자 감염의 임상 증상에는 구부린 자세, 헝클어진 털, 빠른 호흡, 식욕 감소, 무게 감소, 및 사망이 포함된다. 도 6은 항체를 이용하여 예방적으로 치료된 이들 생쥐가 대조군과 비교할 때, 무게 감소가 거의 없음을 입증하였다는 점을 증명한다.

무게 감소뿐만 아니라, 감염-후 기관지-폐포 세척 어세이에서 바이러스 수량을 측정하였다. 군 1, 2, 그리고 4 각각으로부터의 3마리 동물에서 제3일에 세비액을 수집하였고, 희생시키기에 앞서 그들의 폐를 수확하였다. 3마리 생쥐로부터의 기관지-폐포 세척 유체를 조합하고 qPCR로 바이러스 수량의 정량화를 유도하였다. 바이러스 RNA를 단리시키고, 바이러스 M 단백질에 특이적인 프라이머를 이용하여 실시간 PCR로 바이러스 역가를 정량화하였다. 내부 표준 곡선을 이용하여 PCR Ct 값으로부터 바이러스 역가를 계산하였다. 도 7에서 제시된 데이터는 인플루엔자 감염에 앞서 단일 예방적 항체 치료가 항바이러스 약물 리바비린의 수준과 유사한 감소된 수준의 감염 (바이러스 부하로 증명된 바와 같음)을 초래한다는 점을 제시한다.

이들 연구의 결과는 여러 가지 중에서도, 제공된 항체가 감염 전에 투여되었을 때 생쥐에서 H1N1 감염의 시작을 성공적으로 지연시키고 및/또는 예방할 수 있다는 점을 보여준다.

실시예 7. 생체내 요법으로서 인플루엔자 항체의 평가

본 실시예는 치료법으로서 이용하기 위해 생체 내에서 HA 폴리펩티드를 결합시키는 인플루엔자 항체의 능력을 설명한다.

인플루엔자 감염을 저해하는 실시예 1의 예시적인 인플루엔자 항체의 능력을 생체 내에서 평가하였다. 감염-후 여러 가지 농도로 투여된 항체가 인플루엔자 감염력을 감소시키는 치료 요법으로서 역할을 할 수 있었는지 없었는지 평가하기 위한 어세이를 수행하였다.

찰스 리버 랩스로부터 BALB/c 생쥐 (4-6 주령)를 구입하였다. 실험을 위해 생쥐의 무게를 재고, 각각 6마리씩 3개의 군으로 나누었다. 군은 다음으로 구성된다: 군 1 - 치료하지 않은 군; 군 2 - 단일 용량의 5 mg/kg의 항체로 치료; 그리고 군 3 - 단일 용량의 10 mg/kg 항체로 치료. 실험의 시작 (제0일)에서, 각각의 군에게 이소플루란을 투여하였고, 각각의 군을 치사량의 H1N1 PR8 바이러스로 비강 내로 공격하였다. 감염-후 2일 (제2일)에, 각각의 군에게 이소플루란을 재투여하였고 대조, 5mg/kg의 인플루엔자 항체, 또는 10 mg/kg의 인플루엔자 항체를 투약하였고 그리고 회복시켰다 (< 2 분). 바이러스 감염과 연관된 무게 감소의 변화에 대해 생쥐를 14일 동안 매일 모니터링하였고 생존률을 매일 기록하였다. 생쥐에서 인플루엔자 감염의 임상 증상에는 구부린 자세, 헝클어진 털, 빠른 호흡, 식욕 감소, 무게 감소, 및 사망이 포함된다. 도 8은 항체 요법으로 치료된 이들 생쥐가 하나 이상의 감염 증상의 반전을 보여주었다는 점을 증명한다. 예를 들어, 바이러스 연관된 무게 감소에서의 반전은 대조와 비교할 때, 증가된 생존률을 야기한다. 이들 결과는 항체 요법이 인플루엔자 감염과 연관된 질병 상태와 증상을 반전시킬 수 있다는 점을 나타낸다.

실시예 8. 생체내 항체의 약동학적 평가

본 실시예는 생체내 인플루엔자 항체의 약동학적 성질을 설명한다.

실험을 위해 찰스 리버 랩스로부터 BALB/c 생쥐 (4-6 주령)를 구입하고 생쥐 6마리씩 단일 군으로 두었다. 각각의 생쥐는 5 mg/ml 항체의 단일 볼러스(bolus) 주사를 맞았다. 180시간의 기간에 걸쳐 예정된 시점에 혈청 샘플을 수집하였다. 상기 설명된 바와 같은 방법을 이용하여, ELISA로 수집된 샘플을 평가하였다. 간단히, Maxisorp 96-웰 플레이트 웰을 0.2μg의 인간 IgG로 코팅시키고 4℃에서 하룻밤 동안 두었다. 인간 IgG 코팅된 플레이트를 PBS로 3회 세척하고 PBST에서 1% BSA로 블로킹시켰다. 항체 감염 후 180시간의 기간에 걸쳐 수집된 혈청 샘플을 인간 IgG 코팅된 웰에 첨가하였고 그리고 플레이트를 2시간 동안 RT에서 인큐베이션하였다. 플레이트를 PBST로 3회 세척하였고 그리고 웰을 RT에서 1시간 동안 염소-항-생쥐 HRP 항체와 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 웰을 PBST로 세척하였고 그리고 결합된 HRP를 TMB 기질을 이용하여 측정하였다. TMB 기질을 웰에 첨가하고, 3분 동안 인큐베이션하고, 그 다음 1N 황산을 첨가하였다. 450nm에서 흡광도를 측정하였다. 도 9의 데이터는 대략 30 시간에 피크 혈청 농도를 갖는, 0 내지 30 시간의 빠른 분포 단계(rapid distribution phase)를 증명한다. 도 9는 또한 혈청 농도의 감소를 나타내는, 30 내지 160 시간의 점진적인 제거 단계를 증명하며, 이는 생쥐 신체의 상이한 구획으로 항체의 분할 또는 가능성 있는 클리어런스(clearance)를 제시한다.

실시예 9. 진단에서의 결합제

본 실시예는 (a) 생물학적 샘플에서 인플루엔자 바이러스의 존재를 식별하고 (b) 하위 유형에 기반하여, 바이러스를 특성화하기 위한 신속한 방식을 제공하는 예시적인 인플루엔자 항체의 능력을 설명한다.

인플루엔자 바이러스의 존재를 식별하고 바이러스 하위유형을 특성화하는 목적을 위해 샌드위치 ELISA (바이러스 타이핑 ELISA 어세이) 어세이를 이용한다. 바이러스 타이핑 ELISA 어세이를 위하여, 96-웰 플레이트를 2 μg의 인플루엔자 항체로 코팅하고 4℃에서 하룻밤 동안 인큐베이션할 것이다. 이후 플레이트를 PBS로 광범위하게 세척할 것이고 1시간 동안 PBST에서 1% BSA로 블로킹시킬 것이다. 블로킹 후, 플레이트를 PBST로 세척하고 추가로 이용할 때까지 4℃에서 저장한다.

인플루엔자 바이러스를 함유한 것으로 의심되는 생물학적 샘플을 바로 또는 가공처리 후 샘플 완충액 (PBS)에서 희석한다. 희석된 샘플을 인플루엔자 항체-코팅된 웰에 적용시키고 실온 (RT)에서 2시간 동안 인큐베이션하고 그 다음 광범위하게 세척한다. 따라서 샘플로부터의 바이러스는 인플루엔자 항체에 의해 포획되고 추가 분석에 적합해진다. 하위유형 특이적 항체를 RT에서 1시간 동안 상이한 웰에 적용시킨다. PBST로 추가 세척한 후, HRP-적합된 2차 항체를 웰에 적용시킨다. 인큐베이션-후, 웰을 세척하고 TMB 기질과 1N 황산으로 처리한다. 분광 광도계를 이용하여 450 nm에서의 흡광도를 측정한다. 적절한 음성 및 양성 대조가 포함된다.

바이러스 타이핑 ELISA 어세이의 결과로 샘플내 인플루엔자 바이러스의 존재 및 상기 바이러스의 하위유형에 대한 정보를 얻는다.

실시예 10. 인플루엔자 바이러스 글리칸 특성화를 위한 항체

본 실시예는 글리칸 타이핑 어세이를 이용하여 글리칸 특성화를 위해 인플루엔자 바이러스를 강화하고 표지하는 수단으로서 예시적인 인플루엔자 항체의 능력을 설명한다.

글리칸 타이핑 어세이에서, 인플루엔자 항체를 제조자의 지시에 따라 EDC 화학을 이용하여 Qdot 525 카르복실 양자점에 접합시킨다. Qdot-인플루엔자 항체 복합체를 가공처리된 생물학적 샘플에 추가하고 2시간 동안 잘 교반한다. 이후 샘플을 원심분리하고 Qdot-인플루엔자 항체 복합체를 PBST로 3회 세척한다. 이후 이 복합체를 글리칸 어레이 (우산형 및 원뿔형 토폴로지 글리칸을 함유)에 적용시킨다. RT에서 2시간 동안 인큐베이션 후, 웰을 PBST로 3회 세척한다. 하부 판독 모드를 이용한 SpectraMax M2e 분광광도계를 이용하여 결합된 형광을 측정한다.

이 어세이의 결과로 인플루엔자 바이러스의 글리칸 특성화에 관한 정보를 얻는다.

실시예 11. 최소 저해 활성 어세이

인플루엔자 A에 대한 인플루엔자 항체의 최소 저해 농도 (MIC)를 결정하는 방법을 이용한다. 이 어세이에서 활성이 되기 위해서, 인플루엔자 항체는 바이러스에 결합해야 하고 플라크를 형성하는 바이러스의 능력을 중화시켜야만 한다. 간단히, 다수의 웰을 거쳐 농도 구배를 형성하기 위해 PBS를 2배씩 증가시켜 인플루엔자 항체를 연속적으로 희석한다. 공지된 수의 바이러스 플라크 형성 단위를 각각의 웰에 첨가하고 1시간의 인큐베이션 후, 바이러스 결합을 시키기 위해 혼합물을 MDCK 단일층에 첨가한다. Avicel 오버레이는 플라크 형성을 촉진하고 플라크는 면역염료로 가시화한다. 플라크 형성을 예방하기 위한 가장 낮은 농도의 작용제는 MIC로 보고된다. 이들 연구에서는 H1N1 균주 PR8 (A/푸에르토리코/8/34)을 활용한다. H1N1과 대비하여 어세이에서 대표적인 인플루엔자 항체 활성을 결정한다.

등가물

해당 분야에서 통상의 기술자는 본 명세서에 설명된 방법의 특이적인 구체예와 많이 동등한, 정례적인 실험만을 이용하여 확인할 수 있거나, 또는 인식할 것이다. 본 발명의 범위는 상기 설명에 제한되는 것으로 의도되지 않지만, 다음 청구 범위에서 제시되는 바와 같다:

SEQUENCE LISTING <110> MASSACHUSETTS INSTITUTE OF TECHNOLOGY Raguram, S Sasisekharan, Ram Sasisekharan, Viswanathan Soundararajan, Venkataramanan Subramanian, Vidya Tharakaraman, Kannan <120> AGENTS FOR INFLUENZA NEUTRALIZATION <130> 0492612-0931 <150> US 61/645,453 <151> 2012-05-10 <160> 60 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary VH Chain <400> 1 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Tyr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Ser Glu Leu Arg Ser Leu Leu Tyr Phe Glu Trp Leu Ser 100 105 110 Gln Gly Tyr Phe Asn Pro Trp Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser 115 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Ala Pro 35 40 45 Lys Val Leu Ile Tyr Trp Gly Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr 85 90 95 Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly 100 105 110 Ser <210> 44 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary VL Chain CDR 1 <400> 44 Lys Ser Ser Gln Ser Val Thr Tyr Asn Tyr Lys Asn Tyr Leu Ala 1 5 10 15 <210> 45 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary VL Chain CDR 1 <400> 45 Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala 1 5 10 <210> 46 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary VL Chain CDR 1 <400> 46 Arg Ala Ser Gln Asp Ile Pro Arg Ser Ile Ser Gly Tyr Val Ala 1 5 10 15 <210> 47 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary VL Chain CDR 1 <400> 47 Arg Ala Ser Gln Asp Ile Pro Phe Ser Tyr Lys Gly Tyr Val Ala 1 5 10 15 <210> 48 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary VL Chain CDR 1 <400> 48 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Thr Phe Asp Tyr Lys Asn Tyr Val Ala 1 5 10 15 <210> 49 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary VL Chain CDR 1 <400> 49 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Thr Phe Asn Tyr Lys Asn Tyr Val Ala 1 5 10 15 <210> 50 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary VL Chain CDR 1 <400> 50 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Thr Phe Ser Tyr Lys Asn Tyr Val Ala 1 5 10 15 <210> 51 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary VL Chain CDR 1 <400> 51 Arg Ala Ser Gln Asp Ile Pro Phe Ser Tyr Lys Gly Tyr Val Ala 1 5 10 15 <210> 52 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary VL Chain CDR 1 <400> 52 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Thr Phe Asp Tyr Lys Asn Tyr Val Ala 1 5 10 15 <210> 53 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary VL Chain CDR 1 <400> 53 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Thr Phe Asn Tyr Lys Asn Tyr Val Ala 1 5 10 15 <210> 54 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary VL Chain CDR 1 <400> 54 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Thr Phe Ser Tyr Lys Asn Tyr Val Ala 1 5 10 15 <210> 55 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary VL Chain CDR 2 <400> 55 Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser 1 5 <210> 56 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary VL Chain CDR 2 <400> 56 Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser 1 5 <210> 57 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary VL Chain CDR 2 <400> 57 Trp Gly Ser Tyr Leu Tyr Ser 1 5 <210> 58 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary VL Chain CDR 2 <400> 58 Trp Gly Ser Tyr Leu Glu 1 5 <210> 59 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary VL Chain CDR 3 <400> 59 Gln Gln Tyr Tyr Arg Thr Pro Pro Thr 1 5 <210> 60 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary VL Chain CDR 3 <400> 60 Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr 1 5

Claims

다수의 상이한 헤마글루티닌 (HA) 폴리펩티드에 결합하기 위하여 표 2와 3 (서열 번호: 1-60)에서 열거된 하나 이상의 항체와 경쟁하는 항체이되, 다수의 상이한 HA 폴리펩티드는 적어도 2개의 상이한 HA 하위유형에서 발견되는 HA 폴리펩티드 단백질을 포함하는 항체.
제1항에 있어서, 항체는 표 2와 3 (서열 번호: 1-60)에서의 상응하는 CDR 또는 FR과 서열이 동일한 하나 이상의 상보성 결정 영역 (CDR) 또는 하나 이상의 프레임워크 영역 (FR)을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
표 2와 3 (서열 번호: 1-60)에서의 상응하는 CDR 또는 FR과 서열이 적어도 80% 동일한 하나 이상의 CDR 또는 하나 이상의 FR을 포함하는 항체.
표 2와 3 (서열 번호: 1-60)에서의 상응하는 CDR과 FR 서열과 비교하여 둘 다 단지 18개의 치환만 함유하는 CDR과 FR 서열을 포함하는 항체.
표 2와 3 (서열 번호: 1-60)에서의 상응하는 CDR과 FR 서열과 비교하여 둘 다 단지 15개의 치환만 함유하는 CDR과 FR 서열을 포함하는 항체.
전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 표 2와 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 CDR1 영역과 적어도 65%, 70% 초과, 75% 초과, 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 95% 초과, 또는 99% 초과의 동일성을 보이는 상보성 결정 영역 (CDR) 1을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 표 2와 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 CDR1 영역과 비교하여 적어도 2개의 아미노산 치환을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 1을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 표 2와 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 CDR1 영역과 비교하여 2개 미만의 아미노산 치환을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 1을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 표 2와 3 (서열 번호:17-18 및/또는 서열 번호:44-54)에서의 CDR1 영역 중 하나의 것과 동일한 아미노산 서열을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 1을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 표 2와 3 (서열 번호:19-20 및/또는 서열 번호:55-58)에서의 CDR2 영역과 적어도 65%, 70% 초과, 75% 초과, 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 95% 초과, 또는 99% 초과의 동일성을 보이는 상보성 결정 영역 (CDR) 2를 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 표 2와 3 (서열 번호:19-20 및/또는 서열 번호:55-58)에서의 CDR2 영역과 비교하여 적어도 2개의 아미노산 치환을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 2를 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 표 2와 3 (서열 번호:19-20 및/또는 서열 번호:55-58)에서의 CDR2 영역과 비교하여 2개 미만의 아미노산 치환을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 2를 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 표 2와 3 (서열 번호:19-20 및/또는 서열 번호:55-58)에서의 CDR2 영역 중 하나의 것과 동일한 아미노산 서열을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 2를 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 표 2와 3 (서열 번호:21-32 및/또는 서열 번호:59-60)에서의 CDR3 영역과 적어도 65%, 70% 초과, 75% 초과, 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 95% 초과, 또는 99% 초과의 동일성을 보이는 상보성 결정 영역 (CDR) 3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 표 2와 3 (서열 번호:21-32 및/또는 서열 번호:59-60)에서의 CDR3 영역과 비교하여 적어도 2개의 아미노산 치환을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 표 2와 3 (서열 번호:21-32 및/또는 서열 번호:59-60)에서의 CDR3 영역과 비교하여 2개 미만의 아미노산 치환을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 표 2와 3 (서열 번호:21-32 및/또는 서열 번호:59-60)에서의 CDR 3 영역 중 하나의 것과 동일한 아미노산 서열을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 표 2 (서열 번호:1-16)에서의 VH 프레임워크 영역과 65% 초과, 70% 초과, 75% 초과, 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 95% 초과, 또는 99% 초과의 동일성 퍼센트를 공유하는 VH 프레임워크 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 표 3 (서열 번호:33-43)에서의 VL 프레임워크 영역과 65% 초과, 70% 초과, 75% 초과, 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 95% 초과, 또는 99% 초과의 동일성 퍼센트를 공유하는 본 발명의 VL 프레임워크 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 군 1 하위유형, 군 2 하위유형, 그리고 이의 조합으로 구성된 군에서 선택된 인플루엔자 HA에 결합하는 것을 보여주는 것을 특징으로 하는 항체.
전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 군 1 하위유형, 군 2 하위유형, 그리고 이의 조합으로 구성된 군에서 선택된 인플루엔자 HA의 중화 IC50 (ug/ml)을 나타내는 것을 특징으로 하는 항체.
전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15, H16, 및 이의 조합으로 구성된 군에서 선택된 하위유형의 적어도 하나의 HA 폴리펩티드에 결합하는 것을 특징으로 하는 항체.
제22항에 있어서, 항체는 H1, H3, H5, H7, H9, 및 이의 조합으로 구성된 군에서 선택된 하위유형의 HA 폴리펩티드 중 적어도 2개에 결합하는 것을 특징으로 하는 항체.
전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 IgG인 것을 특징으로 하는 항체.
전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 단일클론 항체인 것을 특징으로 하는 항체.
전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 인간 항체, 생쥐 항체, 토끼 항체, 그리고 이의 조합으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 항체.
전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 인간 항체인 것을 특징으로 하는 항체.
VL-1, VL-2, VL-3, VL-4, VL-5, VL-6, VL-7, VL-8, VL-9, VL-10, VL-11, 또는 이의 단편 중 어느 하나와 조합된 VH-1, VH-2, VH-3, VH-4, VH-5, VH-6, VH-7, VH-8, VH-9, VH-10, VH-11, VH-12, VH-13, VH-14, VH-15, VH-16 또는 이의 단편 중 어느 하나를 포함하는 항체.
제28항에 있어서, 항체는 VL-1 (서열 번호:33)과 조합된 VH-1 (서열 번호:1)을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
결합제이되, 결합제의 구조는 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에서 제시된 바와 같은 항체의 하나 이상의 특징을 포함하고, 따라서 결합제가 군 1 하위유형, 군 2 하위유형, 그리고 이의 조합으로 구성된 군에서 선택된 인플루엔자 바이러스에 대한 IC₅₀ (ug/ml)을 보이는 결합제.
결합제이되, 결합제의 구조는 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에서 제시된 바와 같은 항체의 하나 이상의 특징을 포함하고, 따라서 결합제가 2000nM 미만, 1500nM 미만, 1000nM 미만, 500nM 미만, 250nM 미만, 225nM 미만, 200nM 미만, 175nM 미만, 150nM 미만, 125nM 미만, 100nM 미만, 75nM 미만, 또는 50nM 미만의 K_D로 인플루엔자 HA와 결합하는 것을 보이는 결합제.
결합제이되, 결합제의 구조는 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에서 제시된 바와 같은 항체의 하나 이상의 특징으로 포함하고, 따라서 결합제가 하계(lower bound)는 약 0.01x10⁵ M^-1s^-1이고 상계(upper bound)는 약 1.0x10⁶ M^-1s^-1인 K_a로 인플루엔자 HA와 결합하는 것을 보이는 결합제.
결합제이되, 결합제의 구조는 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에서 제시된 바와 같은 항체의 하나 이상의 특징으로 포함하고, 따라서 결합제가 하계는 약 0.01x10⁵ s^-1이고 상계는 약 1.0x10⁶ s^-1인 K_d로 결합하는 것을 보이는 결합제.
제30항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제는 폴리펩티드를 포함하는 것을 특징으로 하는 결합제.
제34항에 있어서, 폴리펩티드는 적어도 하나의 페길화 아미노산을 포함하는 것을 특징으로 하는 폴리펩티드.
제34항에 있어서, 폴리펩티드는 적어도 하나의 글리코실화 아미노산을 포함하는 것을 특징으로 하는 폴리펩티드.
제34항에 있어서, 폴리펩티드는 항체를 포함하는 것을 특징으로 하는 폴리펩티드.
제37항에 있어서, 항체는 항체 단편을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
제37항에 있어서, 항체는 알부민, 키토산, 헤파린, 파클리탁셀, 폴리-(L-글루타메이트), N-(2-하이드록시프로필)메타크릴아미드 (HPMA), 폴리-(L-락티드) (PLA), 폴리(아미도아민) (PAMAM), 폴레이트 및 이의 조합으로 구성된 군에서 선택된 천연 중합체에 접합되는 것을 특징으로 하는 항체.
제30항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제는 스태플링된(stapled) 펩티드를 포함하는 것을 특징으로 하는 결합제.
제30항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제는 스캐폴드(scaffold) 단백질을 포함하는 것을 특징으로 하는 결합제.
제41항에 있어서, 스캐폴드 단백질은 피브로넥틴, 리포칼린, 안티칼린, 단백질, 티오레독신 A, 안키린 반복, 아르마딜로 반복, 테트라트리코펩티드 반복 그리고 이의 조합으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 스캐폴드 단백질.
제30항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제는 미니-항체를 포함하는 것을 특징으로 하는 결합제.
제30항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제는 펩티드모방체를 포함하는 것을 특징으로 하는 결합제.
제30항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제는 미모토프(mimotope)를 포함하는 것을 특징으로 하는 결합제.
제1항 내지 제29항 중 어느 한 항의 항체를 발현하는 세포주.
제46항에 있어서, 세포주는 포유류 세포주인 것을 특징으로 하는 세포주.
제46항에 있어서, 세포주는 하이브리도마인 것을 특징으로 하는 세포주.
다음을 포함하는 제약학적 조성물:
제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에서 선택된 항체; 및
제약학적으로 허용되는 부형제.
다음을 포함하는 제약학적 조성물:
제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에서 선택된 항체에 의해 인식되는 에피토프(epitope)를 인식하는 결합제; 및
제약학적으로 허용되는 부형제.
다음을 포함하는 제약학적 조성물:
제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에서 선택된 항체의 단편, 여기서 단편은 전체 항체의 항원 결합 활성을 보유함; 및
제약학적으로 허용되는 부형제.
제49항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 한 가지 추가적인 항바이러스제를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
대상을 치료하는 방법이되, 상기 방법은 다음 단계를 포함하는 방법:
인플루엔자 감염으로 고통 받거나 또는 인플루엔자 감염에 취약한 대상에게 제1항 내지 제29항, 제30항 내지 제45항, 그리고 제49항 내지 제52항 중 어느 한 항의 항체, 결합제 또는 제약학적 조성물을 치료학적 유효량으로 투여하는 단계.
다음을 포함하는 키트:
제1항 내지 제29항 중 어느 한 항의 적어도 한 가지 항체;
대상에게 적어도 한 가지 항체의 투여를 위한 주사기, 바늘, 또는 도포기(applicator); 및
사용 설명서.
다음을 포함하는 키트:
제30항 내지 제45항 중 어느 한 항의 적어도 한 가지 결합제;
대상에게 적어도 한 가지 항체의 투여를 위한 주사기, 바늘, 또는 도포기; 및
사용 설명서.