KR20150007383A

KR20150007383A - 나노 구조체

Info

Publication number: KR20150007383A
Application number: KR20130080811A
Authority: KR
Inventors: 신형석; 정성호; 오경희
Original assignee: 한솔바이오 주식회사
Priority date: 2013-07-10
Filing date: 2013-07-10
Publication date: 2015-01-21
Also published as: KR101511425B1

Abstract

본 발명은 나노 구조체에 관한 것으로서, 고순도의 라이조레시틴(Lysolecithin) 5.0~20.0 중량%; 가수 분해된 대두 원료인 하이드로라이즈드 완두콩(Hydrolyzed Pea) 0.5~10.0 중량%; 미용 성분의 천연물인 레드호그위드 뿌리 추출물(Boerhavia duffusa root extract) 0.5~10.0 중량%; 펩타이드 수용액 0.01~10.0 중량%; 금속이온 봉쇄제 0.01~0.05 중량%; 오일류의 밀폐제 0.01~10.0 중량%; 보습제 0.2~2.0 중량%; 정제수 37.95~93.77 중량%의 비율로 혼합되어 조성되는 것을 특징으로 한다.
이와 같이 구성된 본 발명은 대두 추출물에서 추출한 라이조포스포리피드 또는 라이조 레시틴으로 구성된 천연물질을 이용하여 제조한 나노 구조체는 나노 입자가 잘 형성되며 리포좀과 같은 이중층을 이루고 있는 것으로 판단된다. 또한 피부 합성이나 항염 효과가 있는 미용성분을 나노 구조체에 함유한 경우 그 효능 효과가 더 우수함을 알 수 있다. 이는 화장용 나노 구조체로서 콜라겐 합성 및 항염 효과가 우수한 특징인 생체 친화적인 화장품 원료로서의 피부 미용에 효과적이다.

Description

나노 구조체{NANO-COMPOSITION}

본 발명은 콩에서 추출한 라이조포스포리피드(Lysophospholipid) 또는 라이조 레시틴(Lysolecithin)으로 이루어진 추출물을 이용하여 제조된 나노 구조체에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 레시틴으로 이루어진 나노 구조체인 일반 리포좀보다 구조적으로 훨씬 안정되게 피부에 침투시킬 수 있는 새로운 나노 구조체의 제조 방법 및, 피부 재생에 효과가 있는 수첨시킨 완두콩 추출물(Hydrolyzed pea)과 해바라기씨 오일 및 로즈마리 잎 추출물로 이루어진 미용성분을 나노 구조체에 포집시킴으로써 피부 재생 및 항염증 효과를 갖도록 한 나노 구조체에 관한 것이다.

콜로이드 과학의 역사는 로마시대 이래, 입자의 색상을 연구하면서부터 시작 되었지만 페러데이(Faraday)가 콜로이드 금 입자의 색상에 대한 연구를 수행한 것이 학문적인 효시라고 볼 수 있다. 일반적으로 콜로이드란 잘게 부수어진 입자의 상태를 갖는 것으로 이해되어 왔다. 이러한 입자 상태는 넓은 표면적을 만들 수 있기 때문에 상간의 전이 상태가 만들어 내는 계면과 표면, 마이셀, 액정이나 나노 구조체인 리포좀과 같은 용액 속의 고차구조, 에멀젼, 기포 혹은 분산과 같은 비평형 분산체 그리고 분자수준의 초박막과 같은 핵심적인 내용을 포함하고 있다.

콜로이드와 계면화학을 이해하여야 나노 구조체인 리포좀과 같은 입자에 대해 이해하는데 도움이 된다. 콜로이드는 표면적과 표면에너지의 역할이 큰 시스템으로, 크기가 대략 10㎚에서 1㎛의 범위를 포함한다. 입자의 크기가 작아지면 단위 질량 당 표면적이 증가하고, 계면 에너지가 증가하게 될 뿐만 아니라 입자 간에 작용하는 힘도 달라진다.

여기서, 계면 에너지(ΔG)는 일정한 온도와 압력에서는 ΔG=d(γA)로 표현되며, 여기서 A는 계면의 면적, 그리고 γ는 게면 장력을 나타낸다. 즉, 나노미터 크기의 시스템에서는 계면 에너지의 비중이 매우 커지기 때문에 균일한 벌크 상과는 다른 현상을 나타낸다. 열역학의 법칙에 의하면 전체 시스템을 그 자유 에너지가 최소가 되도록 배열하지 않으면 안 된다. 예를 들면, 에멀젼에서 유화제의 양이 적으면 계면장력이 높고 입자의 크기가 크며, 유화제의 양이 많으면 계면장력이 낮아지고 입자의 크기도 감소한다. 이러한 계면에너지를 이용하는 방법에 따라 여러 가지 화장품의 유효성분을 피부 깊숙이 전달하는데 용이하게 만들어 줄 수 있도록 기여해 줄 수 있다.

1960년대에 인지질 계통의 계면 활성제들이 수상의 매질에서 생체막과 같은 이중막을 자발적으로 형성한다는 사실이 발견된 이래 나노 구조체인 리포좀은 생체막 연구의 모델로서 뿐만 아니라 약제학 분야에서 표적 지향화, 지속적 작용 및 부작용 경감을 위한 생체 내 약물 수송체로의 적용에 대한 많은 연구가 진행되어 왔다. 리포좀(Liposome)은 입체 안정화 리포좀, 용해성 리포좀(fusogenic liposome), pH 감응성 리포좀, 온도 감응성 리포좀, 면역 리포좀 등이 연구되고 있으며, 항체나 폴레이트와 같은 비타민, 성장인자(growth factor), 단백질 등의 리간드를 표면 수식하거나 표면층에 PEG를 첨가하여 안정성을 향상시켜 항암제나 유전자 전달체로 사용하기도 한다.

나노 구조체인 리포좀은 제조 방식 중 자기조립(self-assembly)체를 형성하는 방식을 주로 이용한다. 양친매성 고분자는 수용액상에서 자기 회합체를 구성하여 나노 수준의 폴리머 마이셀 입자를 형성하게 되는데, 이 입자는 표면에서 입체장애나 전하의 반발력을 통해 안정화되며, 낮은 임계미셀 농도(CMC)를 가진다. 리포좀 입자 내에는 유전자, 효소, 약물 등 다양한 생리활성 물질을 포집하게 할 수 있고 수용성 표면을 다양하게 기능화를 시킴으로써 체내에서 순환 시간을 조절하고, 종양 세포로의 표적화 효과를 얻을 수도 있다. 이와 같이 리포좀은 산업작 가치가 높기 때문에 리포좀의 주성분인 레시틴(lecithin)의 순도를 높이는 레시틴 분리, 추출산업이 발달해 있다.

리포좀을 만드는데 사용되는 레시틴(lecithin 또는 phospholipid)은 천연 계면활성제의 한 부류이며 대두 레시틴(soybean lecithin)과 난황 레시틴(egg yolk lecithin) 등이 화장품, 의약품, 식품 등의 분야에서 사용되고 있다. 이들은 친수부(hydrophilic group)과 소수부(hydrophobic group)의 구조를 이루고 있으며, 종류에 따라 다른 계면적 활성을 나타낸다. 전통적으로 레시틴의 분리, 추출방법은 주로 아세톤 등 유기용매를 이용하고 있으나 최근에는 고순도의 레시틴을 독성이 없는 용매를 사용하여 경제적인 방법으로 분리, 추출하려는데 연구의 초점을 맞추어 왔다. 콩에서 유래된 대두 레시틴은 주로 유지정제 과정의 부산물로 얻어지며, 난황 레시틴은 난황에 에탄올이나 이소프로판올(isopropanol)을 사용하여 추출하는 방법이 일반적이다.

이처럼 리포좀을 이용한 약물 전달은 인체에 부작용이 적고 효과적이며 표적 지향적 치료를 위한 수단으로 연구되어 지고 있고 생체 적합성이 매우 우수하고 제법이 간편하고 수용성 및 지용성 약물을 운반할 수 있는 장점이 있으나, 리포좀계 자체가 물리화학적으로 불안정하기 때문에 수용액 내에 분산시켜 보관할 때 응집, 융합, 인지질의 가수분해, 산화 및 봉입 약물의 누출 등을 야기할 수 있는 단점을 지니고 있다.

리조 레시틴(lysolecithin 또는 lysophospholipid)은 레시틴이 취약점인 불포화 아실기의 산화능과 친수부의 가수분해능을 보완하기 위하여 레시틴을 포스포 리파아제로 가수분해하여 개질한 것으로 레시틴과 같이 천연계면활성제로서 생체 친화성이 우수하여 제약, 약품, 식품, 화장품 등에서 사용되고 있다. 리조 레시틴은 일반 계면활성제처럼 양친매성 분자(amphiphilic molecule)로서 수용액 상태에서 임계 미셀 농도(CMC) 이상에서는 회합(aggregate)하여 미셀(micelle)을 형성한다.

하기 그림 1은 일반 레시틴과 리조 레시틴을 이용한 리포좀 입자의 구조적 차이점을 나타내는 사진이다.

[그림 1]

나노 구조체로서의 리포좀은 그 동안 수많은 연구를 통해 다양한 조성과 비율의 나노 입자들이 확립되어 오고 있으나, 이에 반해 리조 레시틴은 구조적으로 매우 안정한 나노 구조체를 형성할 수 있음에도 불구하고 현재까지 매우 한정된 포뮬레이션 만이 사용되고 있다. 지질 이중층을 이루는 리포좀은 소수부의 사슬이 두 개로 이루어진 형태로 구조적으로 조밀하지 못한 단점으로 인해 보조 계면활성제를 사용하여 안정성을 높이고자 하는 여러 연구가 진행되고 있다.

그러나 리조 레시틴은 소수부가 단일 구조로 되어 있어 구조적으로 콘(cone) 형태를 이루어 매우 조밀한 나노 구조체를 형성할 수 있을 것으로 판단된다.

본 발명은 상기한 바와 같은 문제점을 해결하기 위하여 안출된 것으로서, 레시틴으로 이루어진 나노 구조체인 일반 리포좀보다 구조적으로 훨씬 안정되게 피부에 침투시킬 수 있어 피부 재생에 효과가 있는 수첨시킨 완두콩 추출물(Hydrolyzed pea)과 해바라기씨 오일 및 로즈마리 잎 추출물로 이루어진 미용성분을 나노 구조체에 포집시킴으로써 피부 재생 및 항염증 효과를 갖도록 한 나노 구조체를 제공하는데 있다.

본 발명의 제1 실시예에 의한 나노 구조체는, 고순도의 라이조레시틴(Lysolecithin) 5.0~20.0 중량%; 가수 분해된 대두 원료인 하이드로라이즈드 완두콩(Hydrolyzed Pea) 0.5~10.0 중량%; 미용 성분의 천연물인 레드호그위드 뿌리 추출물(Boerhavia duffusa root extract) 0.5~10.0 중량%; 펩타이드 수용액 0.01~10.0 중량%; 금속이온 봉쇄제 0.01~0.05 중량%; 오일류의 밀폐제 0.01~10.0 중량%; 보습제 0.2~2.0 중량%; 정제수 37.95~93.77 중량%의 비율로 혼합되어 조성되는 것을 특징으로 한다.

상기 오일류의 밀폐제는, 카프릴릭/카프릴 트리글리세라이드(Caprylic/Capric Triglyceride), 스쿠알란(Squalane), 아르간 트리커넬오일(Argania Spinosa Kernel Oil), 토코페릴아세테이트(Tocopheryl Acetate), 마카다미아씨오일(Macadamia Integrifolia Seed Oil), 해바라기씨오일(Helianthus Annuus Seed oil), 및 로즈마리잎 추출물(Rosmarinus Officinalis Leaf Extract) 중 선택된 하나인 것을 특징으로 한다.

상기 펩타이드 수용액은 표피성장인자(EGF:Epidermal growth factor)로서, 에스에이치 - 올리고펩타이드-1(sh-Oligopeptide-1), 올리고펩타이드 - 1 (Oligopeptide-1) 및 휴먼 올리고펩타이드 - 1(Human Oligopeptide-1)로 이루어진 군에서 1종 이상 선택되는 것을 특징으로 한다.

상기 금속이온 봉쇄제는, 디소듐이디티에이(Disodium EDTA)인 것을 특징으로 한다.

상기 보습제는, 1, 2-헥산디올(1,2-Hexanedio)인 것을 특징으로 한다.

본 발명의 나노 구조체에 의하면, 대두 추출물에서 추출한 라이조포스포리피드 또는 라이조 레시틴으로 구성된 천연물질을 이용하여 제조한 나노 구조체는 나노 입자가 잘 형성되며 리포좀과 같은 이중층을 이루고 있는 것으로 판단된다. 또한 피부 합성이나 항염 효과가 있는 미용성분을 나노 구조체에 함유한 경우 그 효능 효과가 더 우수함을 알 수 있다. 이는 화장용 나노 구조체로서 콜라겐 합성 및 항염 효과가 우수한 특징인 생체 친화적인 화장품 원료로서의 피부 미용에 효과적이다.

이하, 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명하기로 한다. 아울러 본 발명을 설명함에 있어서, 관련된 공지 구성 또는 기능에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명을 생략한다.

본 발명의 나노 구조체는, 고순도의 라이조레시틴(Lysolecithin) 5.0~20.0 중량%, 가수 분해된 대두 원료인 하이드로라이즈드 완두콩(Hydrolyzed Pea) 0.5~10.0 중량%, 미용 성분의 천연물인 레드호그위드 뿌리 추출물(Boerhavia duffusa root extract) 0.5~10.0 중량%, 펩타이드 수용액 0.01~10.0 중량%, 금속이온 봉쇄제 0.01~0.05 중량%, 오일류인 밀폐제 0.01~10.0 중량%, 보습제 0.2~2.0 중량%, 정제수 37.95~93.77 중량%의 비율로 혼합되어 조성된다.

본 발명에 따르면, 상기 고순도의 라이조레시틴은 대두에서 추출한(Glycine soja Seed Extract) 원료로서 이를 고순도로 정제하여 라이조레시틴을 90% 이상 함유한 것을 선택하는 것이 바람직하다.

본 발명에 따르면, 상기 가수분해된 대두 원료는 하이드로라이즈드 완두콩(Hydrolyzed Pea)인 것이 바람직하다.

본 발명에 따르면, 상기 미용성분의 천연물은 레드호그위드 뿌리 추출물(Boerhavia duffusa root extract)인 것이 바람직하다.

본 발명에 따르면, 상기 오일류의 밀폐제는, 카프릴릭/카프릴 트리글리세라이드(Caprylic/Capric Triglyceride), 스쿠알란(Squalane), 아르간 트리커넬오일(Argania Spinosa Kernel Oil), 토코페릴아세테이트(Tocopheryl Acetate), 마카다미아씨오일(Macadamia Integrifolia Seed Oil), 해바라기씨오일(Helianthus Annuus Seed oil), 및 로즈마리잎 추출물(Rosmarinus Officinalis Leaf Extract) 중 선택된 하나인 것이 바람직하다.

본 발명자들은 나노 구조체 조성물에 대하여 연구를 거듭하는 과정에서, 고순도의 라이조 레시틴 및 가수 분해된 대두 원료 및 미용성분의 천연물 및 오일류 밀폐제를 적정 조성비로 첨가할 경우, 나노 구조체를 얻을 수 있을 뿐만 아니라 피부에 사용시 피부의 재생 및 항산화 효과가 우수함을 확인하여, 이를 토대로 본 발명을 완성하였다.

상기 라이조레시틴은 대두에서 추출하여 고 순도로 이루어진 원료를 선택되는 것이 바람직하다. 라이조레시틴은 5 내지 20.0 중량%인 것이 바람직하다. 이는 총 배합 기준에서 그 함량이 5.0중량% 미만일 경우 나노구조체 특성상 입자 표면의 비표면적이 증가하기 때문에 나노 구조체를 형성해도 그 안정성이 떨어지기 때문이며, 그 함량이 20.0중량% 이상일 경우 나노 구조체를 만들기 위한 물리적 교반기에 무리한 힘이 가해짐으로써 오히려 나노 구조체를 형성하는데 방해를 받기 때문이다.

상기 미용성분의 추출물은 레드호그위드 뿌리 추출물로서 그 함량은 0.5 내지 10.0 중량% 인 것이 바람직하다. 이는 총 배합 기준에서 그 함량이 0.5% 미만일 경우 In-Vitro 상에서 실험한 결과 피부 염증효과 떨어지기 때문이며, 그 함량이 10.0 중량% 이상일 경우 그 효능, 효과 부분에서 통계적 차이를 볼 수 없기 때문이다.

상기 오일류의 밀폐제는 0.01 내지 10.0 중량%인 것이 바람직하다. 이는 총 배합 기준에서 그 함량이 0.01% 이하일 경우 오일을 함유한 나노 구조체의 입자 크기를 알 수 없으며, 10.0 중량% 이상일 경우 나노 구조체의 입자 크기가 커지고 안정성이 떨어지기 때문이다.

상기 펩타이드 및 금속이온 봉쇄제 및 보습제는 본 발명이 속하는 기술 분야에 공지된 통상적인 성분들을 각각 선택하여 필요로 하는 효과의 정도에 따라 사용할 수 있으므로 그 종류 및 함량은 특별히 한정하지 않는다.

상기 펩타이드는 표피성장인자(EGF:Epidermal growth factor)로서 에스에이치 - 올리고펩타이드-1(sh-Oligopeptide-1), 올리고펩타이드 - 1 (Oligopeptide-1) 및 휴먼 올리고펩타이드 - 1(Human Oligopeptide-1)로 이루어진 군에서 1종 이상 선택되는 것이 바람직하며, 이 중 휴먼 올리고펩타이드-1이 더욱 바람직하다. 그러나 본 발명이 속하는 기술 분야에 공지된 통상적인 성분들로 각각 선택하여 필요로 하는 효과의 정도에 따라 사용할 수 있으므로 그 종류 및 함량은 특별히 한정하지 않는다.

상기 금속이온 봉쇄제로서는 디소듐이디티에이(Disodium EDTA) 및 보습제로서는 1, 2-헥산디올(1,2-Hexanedio)이 선택되는 것이 바람직하다. 디소듐이디티에이는 0.01 내지 0.05 중량%로 포함될 수 있으며, 1, 2-헥산디올은 0.2 내지 2.0 중량%로 포함될 수 있다.

본 발명에 따른 나노 구조체 조성물은 상기와 같은 구성성분의 함량비에 따라 다양한 제형의 화장료에 배합하여 제조할 수 있으며, 바람직하게는 스킨, 에센스, 로션, 크림 및 마스크 팩을 이루어진 군에서 선택되는 제형일 수 있다.

상기 가수분해된 대두 원료는 화장품 제형 조성물 기준으로 0.001 내지 0.1 중량%인 것이 바람직하다. 이는 총 배합 기준에서 그 함량이 0.1중량% 이상일 경우 In-vitro 상에서 실험한 결과 피부 리조레시틴의 인지질 특성상 세포 재생 효과가 떨어지기 때문이며, 그 함량이 0.001% 이하일 경우 그 효능,효과 부분에서 통계적 차이를 볼 수 없기 때문이다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 다만, 하기 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 하기 실시예들에 의해 한정되는 것은 아니다.

[실시예 1]

하기 표 1 에서 라이조 레시틴을 이용한 하기 제조방법에 따라 나노 구조체(이하 '펩타좀') 조성물을 만들었다.

번호	분류	성분	Lot. No. A1	Lot. No. A2
1	*대두추출물	콩추출물 (Glycinesoja(soybean)seedextract)	10.0	10.0
2	미용성분 추출물	* 레드호그위드뿌리추출물 (Boerhaviaduffusarootextract)	0	4.0
3		* 하이드로라이즈드 완두콩 (HydrolyzedPea)	0	4.0
4		효모추출물(Yeast Extract)	0	4.0
5	펩타이드류	휴먼 올리고펩타이드-1(10ppm) (HumanOligopeptide-1)	0	1.0
6	펩타이드류	에스에이치-올리고펩타이드-1(100ppm) (sh-Oligopeptide-1)	0	1.0
7	오일류 밀폐제	카프릴릭/카프릭트리글리세라이드(Caprylic/CapricTriglyceride)	0	4.5
8		스쿠알란	0	0.2
9		아르간오일(Argan Oil)	0	0.1
10		토코페릴아세테이트 (TocopherylAcetate)	0	0.1
11	금속이온 봉쇄제	디소듐이디티에이(Disodium EDTA)	0	0.1
12	보습제	1,2-헥산디올(1,2-Hexanediol)	0	2.0
13	정제수	정제수	0	69.1
대두추출물 : (제품명 : Lysofix, 제조사 : KEMIN(USA)) 레드호그위드뿌리추출물 : (제품명 : Mediacalm, 제조사 : Silab(France)) *하이드로라이즈드 완두콩 : (제품명 : Stem-C-Guard, 제조사 : Silab(France))

[실시예 2] 화장품 제형 제조

실시예의 표 2에서와 만든 나노 구조체인 '펩타좀'이 함유된 화장품 제형의 조성물을 제조하였고 실시예의 표 3는 나노 구조체인 '펩타좀'을 제와한 비교예로서 화장품 제형의 조성물을 제조하였다. 하기 표2~표3의 제형에 들어가는 원료중 과일산을 첨가한 이유는 하기 실험예4에서 피부의 자극여부를 관능 실험하기 위하여 첨가하였다.

성 분	실시예2(중량부)
성 분	T1(스킨)	T2(로션)	T3(에센스)	T4(크림)	T5(팩)
디소듐 이디티에이	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05
글리세린	2	2	3	3	5
부틸렌글라이콜	2	3.5	3	3	7
피이지-60 하이드로제네이티드캐스터오일	0.2	0	0	0	0
카보머	0	0.05	0.08	0.2	0.3
정제수	90.03	87.13	87.47	76.83	65.63
스테아린산	0	0.1	0	1.2	1.5
세테아릴알코올	0	0.05	0	1.5	2
스쿠알란	0	0.1	0.1	3	5
쉐어버터	0	0.05	0	1.5	2
비즈왁스	0	0	0	0.5	1.5
글리세릴스테아레이트	0	0.5	0.5	1.5	1.5
피이지-100 스테아레이트	0	0.5	0	1	1
소르비탄세스퀴올리에이트	0	0.2	0	0.8	1.5
트리에탄올아민	0	0.05	0.08	0.2	0.3
마치현 추출물	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
위치하젤추출물	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
히아루론산	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
과일산	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2
1,2-헥산디올	2	2	2	2	2
향료	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02
*펩타좀	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0

성 분	비교예2(중량부)
성 분	S1(스킨)	S2(로션)	S3(에센스)	S4(크림)	S5(팩)
디소듐 이디티에이	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05
글리세린	2	2	3	3	5
부틸렌글라이콜	2	3.5	3	3	7
피이지-60 하이드로제네이티드캐스터오일	0.2	0	0	0	0
카보머	0	0.05	0.08	0.2	0.3
정제수	92.03	89.13	89.47	78.83	67.63
스테아린산	0	0.1	0	1.2	1.5
세테아릴알코올	0	0.05	0	1.5	2
스쿠알란	0	0.1	0.1	3	5
쉐어버터	0	0.05	0	1.5	2
비즈왁스	0	0	0	0.5	1.5
글리세릴스테아레이트	0	0.5	0.5	1.5	1.5
피이지-100 스테아레이트	0	0.5	0	1	1
소르비탄세스퀴올리에이트	0	0.2	0	0.8	1.5
트리에탄올아민	0	0.05	0.08	0.2	0.3
마치현 추출물	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
위치하젤추출물	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
히아루론산	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
과일산	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2
1,2-헥산디올	2	2	2	2	2
향료	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02
*펩타좀	-	-	-	-	-

[실험예 1] : 입자 특성 분석

실시예 1에 대하여 입자의 형태를 분석 및 평가하기 위하여 아래와 같이 광산란 측정 장비를 이용한 입자크기 분석 및 입자형태를 확인하기 위한 TEM 을 이용한 평가를 실시하였다.

광산란 측정장비는 NANO-ZS90(제조사 : Malvern Korea) 로서 입자와 분자크기, 제타전위, 분자량 측정을 위한 제품으로서 나노입자와 콜로이드의 특성을 파악하는데 사용된다. 각 광산란 측정에 사용된 실험 샘플은 실시예 1의 Lot.No. A1 및 Lot. No. A2로서 대두추출물 속에 들어있는 라이조레시틴(Lysolecithin)을 이용한 입자 크기의 상태를 확인하였다.

Lot. No. A1. 에 따라 제조된 나노 입자 분석결과

Lot. No. A2에 따라 제조 후 경시변화(1일)에 따른 입자 분석결과

Lot. No. A2에 따라 제조 후 경시변화(60일)에 따른 입자 분석결과

표 4 ~ 표 6은 광 산란 측정장비를 이용한 실험 데이터를 나타낸 것이다. 실시예 1에 따른 Lot. No. A1의 경우 대두추출물만을 함유한 경우 평균 입자 크기는 33.99㎚으로서 나노입자의 크기가 매우 작음을 알 수 있었다. 그리고 Lot. No. A2에 따라 제조된 나노 입자의 경우 경시변화에 따른 평균 입자 크기가 제조 후 1일 경과 시 평균 85.58㎚이었으며, 60일 경과 후 입자 크기는 평균 130㎚임을 알 수 있었다. 이는 대두 추출물에 함유된 라이조레시틴(Lysolecithin)이 화장품에 적용되는 나노 입자로서 매우 안정적이고 우수함을 나타내 주고 있다.

실시예 1에 따른 처방 Lot. No. A2에 따라 제조된 나노구조체를 투과전자현미경(TEM : Transmission Electron Microscope)을 이용하여 입자의 형태를 분석하였다(표 7).


투과전자 현미경(TEM)을 통해 Lot. No. A2에 따라 제조된 나노 구조체의 입자 형태를 분석한 그림

상기 표 7의 그림은 투과전자현미경을 이용하여 나노 구조체의 형태를 분석하여 나타낸 사진으로서, 전체적으로 거의 둥근 형태를 이루고 있으며, 입자크기도 평균 200㎚이하로 균일하게 분포되어 있음을 알 수 있다. 이로 인해 미국 케민사의 대두 추출물속의 고순도의 리조레시틴이 리포좀과 같은 나노 구초체를 형성할 수 있다는 사실을 알 수 있다.

[실험예 2 ]

실시예1에 따른 콜라겐 합성 능력을 평가하기 위해 본 실험은 인간섬유아세포(CCD986sk)에서 콜라겐 합성에 관여하는 마커인 Procollagen C-endopeptidase enhancer:PCOLCE 의 발현 정도를 mRNA 수준에서 확인하는 방법으로 구체적으로는 인간섬유아세포를 Dulbecco's Modified Eagle's Medium(DMEM), 10% Fetal bovine serum(FBS), 1% Antibiotic-Antimycotic(GIBCO, Cat No.15240-062)과 함께 100 mm/60.1 cm²culturedish에서 37℃, 5% CO²의 조건으로 배양하였다. 이 인간세포가 100%이상 confluence 될 때 96 well plate에 1x10⁴cells/well에서 24시간 동안 배양하였다. 이 후 배지를 제거한 다음 DMEM free 배지 (FBS가 빠진 배지)로 교환 후 실시예 1에 따른 시험샘플을 세포 독성이 없는 농도 0.001%로 처리하였다. 그 후 24시간 세포배양 조건에서 추가 배양하여 PCOLCE의 발현에 어떠한 영향이 있는지 보았다. 시험방법은 Realtime-PCR 법을 수행하였고 그 결과를 하기 [그림 2]에 나타내었다.

[그림 2]

인간 섬유아세포주인 CCD986에서의 실시예 1에 따라 제조된 시료품인 Lot. No. A1 및 Lot. No. A2에 의한 procollagen 합성에 관련있는 유전자 PCOLCE 발현의 변화를 관찰하였다. PCOLCE는 콜라겐 합성과정에 직접적으로 영향을 미치는 유전자로서 각 시료들이 PCOLCE의 발현에 영향을 주어 콜라겐 형성을 증가시키는 효과를 기대해 보았다. 그 결과 음성 대조군에 비해 Lot. No. A1 시료는 대조군에 비해 약 17%, Lot. No. A2 시료는 대조군에 비해 약 39% 정도 PCOLCE 발현을 증가시키는 것을 확인하였다. 이러한 결과로 보아 케민사의 대두추출물의 고순도 라이조레시틴이 콜라겐 합성에 영향을 줄 뿐만 아니라 미용성분과 펩타이드류, 오일류등의 성분과 함께 나노구조체를 형성시 콜라겐 합성능력이 더 증가한다는 것을 알게 되었다.

[실험예 3]

실시예 1에 따른 염증억제 효과를 평가하기 위해 염증과 밀접한 관련이 있는 COX-2 마커의 발현 변화를 통하여 알아보았다. Cyclooxygenase(COX)라는 효소는 우리 몸 소거에서 COX-1과 COX-2의 두 개의 아형으로 존재한다. 그 중 COX-1은 보호 작용을 맡은 효소로서 몸 어디에서나 발견되는 반면 COX-2는 주로 염증이 발생된 환경에서 유도적으로 발현이 증가되며 세균의 지질다당류(lipopolysaccharides), 사이토카인, 성장인자 그리고 종양 인자에 의해 표현이 증가된다. 즉 cox-2는 염증 유발성 prostaglandin의 합성을 촉진하는 효소이다. 본 실험은 인간 각질형성세포(HaCaT)에서 염증에 관여하는 마커인 COX-2의 발현 정도를 mRNA수준에서 확인하는 방법으로 구체적으로는 인간각질형성세포(HaCaT)를 Dulbecco's Modified Eagle's Medium(DMEM), 10% Fetal bovine serum(FBS), 1% Antibiotic-Antimycotic(GIBCO, Cat No. 152-062)과 함께 100mm/60.1cm²culturedish에서 37℃, 5% CO²의 조건으로 배양하였다. 이 인간각질형성세포가 70%이상 Confluence 될 때 96 welll plate에 1x10⁴cells/well에서 24시간동안 배양하였다. 이 후 배지를 제거한 다음 DMEM free 배지(FBS가 빠진 배지)로 교환 후 5mj/cm²로 UV 조사하여 염증을 유도한 후 실시예 1에 따른 시험샘플 Lot. No. A1, Lot. No. A2를 세포 독성이 없는 농도인 0.001%로 처리하였다. 그 후 24시간 세포배양 조건에서 추가 배양하여 COX-2의 발현에 어떠한 영향이 있는지 알아보았다. 시험방법은 real-time PCR 법을 수행하였으며 그 결과를 하기 [그림 3]에 나타내었다.

[그림 3]

인간 각질형성 세포주인 HaCaT에서의 실시예1에 따라 제조된 시료 품인 Lot. No. A1 및 Lot. No. A2에 의한 염증 관련 유전자 COX-2 발현의 변화로서 COX-2는 염증 유발성 prostaglandin의 합성을 촉진하는 효소로써 본 실험에서는 각 시료들이 UV에 의해 증가된 COX-2의 발현을 줄여 효과적인 항염 효과를 기대해 보았다. COX-2 발현량을 확인하기 위해 Real-time PCR로 COX-2의 mRNA level을 측정한 결과, 음성 대조균(시료 무첨가균/UV 무조사균)에 비해 5배 증가한 양성대조군(시료 무첨가군/UV 조사군)을 기준으로 각각의 시료들의 발현량은 Lot. No. A2에서는 COX-2 발현량이 약 2.5배 줄어듦을 확인할 수 있었다. 그러나 Lot. No. A1의 경우 UV 조사에 의한 COX-2의 발현량을 줄여주지 않았다. 이는 실시예 1의 표 1에 따른 미용성분인 레드호그위드 뿌리 추출물 및 하이드로라이즈드 완두콩 추출물과 같은 성분들이 나노 입자 상태에서 항염 효과를 가지고 있다고 판단된다.

[실험예 4]

실시예 2에 따른 화장품 제형에 따른 피부 보습감, 사용감, 탄력감, 피부상태 개선, 사용후 느낌, 피부자극 효과를 평가하기 위하여 아래와 같은 관능평가를 실시하였다.

우선, 21세~40세에 속하는 여성 30명을 10명씩 3개 군으로 나누어 피실험을 구성하였다. 피실험 대상의 얼굴을 깨끗하게 세안한 후, 얼굴 반쪽은 실시예 2의 내용물을 0.1g 내지 0.2g 을 균일하게 도포하고 나머지 반대편 얼굴 반쪽은 비교예 2의 내용물을 0.1g 내지 0.2g을 균일하게 도포하였다. 각 제형 별 실험은 7일씩 중간에 1주일씩 사용을 중지하고 다시 7일씩 사용하는 방법으로 측정하였다. 각 7일간 후에 피부 보습, 사용감, 탄력감, 피부상태 개선, 사용 후 느낌, 피부자극을 관능 평가하도록 하였고, 그 결과는 하기 표 8 및 표 9에 나타내었다.

이 때 느껴지는 효과가 우수할 경우에는 5점, 전혀 효과가 느껴지지 않을 경우에는 0점으로 하여 각각 6단계로 평가하였다.

평가항목	실시예2
평가항목	T1(스킨)	T2(로션)	T3(에센스)	T4(크림)	T5(팩)
보습감	3.50	3.30	3.50	4.00	4.00
사용감	3.40	3.60	4.20	4.20	4.30
탄력감	4.20	4.40	4.30	4.20	4.10
피부상태개선	3.30	3.30	3.50	3.40	3.30
사용후 느낌	4.20	4.10	3.90	4.40	4.10
피부자극	0.00	0.00	0.00	0.00	0.00

평가항목	비교예2
평가항목	S1(스킨)	S2(로션)	S3(에센스)	S4(크림)	S5(팩)
보습감	0.7	1.2	1.5	1.3	1.1
사용감	2.8	2.7	3.3	3.1	2.9
탄력감	1.8	1.1	1.4	1.6	2.2
피부상태개선	1.1	0.8	1.7	1.3	1.1
사용후 느낌	2.4	2.2	2.6	1.3	1.1
피부자극	2.7	2.8	3.3	2.8	2.9

상기 표 8 및 표 9에 나타낸 바와 같이, 실시예 2의 제형에 따른 사용 후 7일 경과시 피부에 자극이 없을 뿐만 아니라 보습감, 사용감, 탄력감, 피부상태 개선 및 사용 후 느낌에서 정도가 우수하였다. 그에 비하여 비교예 2에서 나노 구조체인 '펩타좀'이 함유되어 있지 않음에 따라 피부의 보습, 사용감, 탄력감, 피부상태개선 및 사용 후 느낌에서 그 효과가 떨어지고 피부 자극도 나타남을 알 수 있다.

이상에서와 같이, 본 발명의 상세한 설명에서 구체적인 실시예에 관해 설명하였으나, 본 발명의 기술이 당업자에 의하여 용이하게 변형 실시될 가능성이 자명하며, 이러한 변형된 실시예들은 본 발명의 특허청구범위에 기재된 기술사상에 포함된다할 것이다.

Claims

고순도의 라이조레시틴(Lysolecithin) 5.0~20.0 중량%;
가수 분해된 대두 원료인 하이드로라이즈드 완두콩(Hydrolyzed Pea) 0.5~10.0 중량%;
미용 성분의 천연물인 레드호그위드 뿌리 추출물(Boerhavia duffusa root extract) 0.5~10.0 중량%;
펩타이드 수용액 0.01~10.0 중량%;
금속이온 봉쇄제 0.01~0.05 중량%;
오일류의 밀폐제 0.01~10.0 중량%;
보습제 0.2~2.0 중량%;
정제수 37.95~93.77 중량%의 비율로 혼합되어 조성되는 것을 특징으로 하는 나노 구조체.
제 1 항에 있어서,
상기 오일류의 밀폐제는, 카프릴릭/카프릴 트리글리세라이드(Caprylic/Capric Triglyceride), 스쿠알란(Squalane), 아르간 트리커넬오일(Argania Spinosa Kernel Oil), 토코페릴아세테이트(Tocopheryl Acetate), 마카다미아씨오일(Macadamia Integrifolia Seed Oil), 해바라기씨오일(Helianthus Annuus Seed oil), 및 로즈마리잎 추출물(Rosmarinus Officinalis Leaf Extract) 중 선택된 하나인 것을 특징으로 하는 나노 구조체.
제 1 항에 있어서,
상기 펩타이드 수용액은 표피성장인자(EGF:Epidermal growth factor)로서, 에스에이치 - 올리고펩타이드-1(sh-Oligopeptide-1), 올리고펩타이드 - 1 (Oligopeptide-1) 및 휴먼 올리고펩타이드 - 1(Human Oligopeptide-1)로 이루어진 군에서 1종 이상 선택되는 것을 특징으로 하는 나노 구조체.
제 1 항에 있어서,
상기 금속이온 봉쇄제는, 디소듐이디티에이(Disodium EDTA)인 것을 특징으로 하는 나노 구조체.
제 1 항에 있어서,
상기 보습제는, 1, 2-헥산디올(1,2-Hexanedio)인 것을 특징으로 하는 나노 구조체.