KR20150000723A - 항균 활성을 갖는 가락지나물 추출물을 포함하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 가락지나물(Potentilla kleiniana Wight et Arnott) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균 활성 화장료 조성물을 제공하는 것이다. 본 발명에 따르면, 프로피오니박테리움 아크네(Propionibacterium acne)균에 대한 항균활성을 나타내는 가락지나물(Potentilla kleiniana Wight et Arnott)을 유효 성분으로 포함할 경우 항균, 특히 항여드름 효과가 우수한 화장료 조성물을 제공할 수 있다.

Description

항균 활성을 갖는 가락지나물 추출물을 포함하는 화장료 조성물{A Cosmetic Composition Containing Extracts of Potentilla kleiniana Wight et Arnott Having antibacterial Activity}

본 발명은 피부 항균 활성을 갖는 가락지나물(Potentilla kleiniana Wight et Arnott) 추출물과 이를 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 보다 상세하게는 여드름균, 특히 프로피오니박테리움 아크네(Propionibacterium acnes)에 대하여 항균 활성을 갖는 가락지나물 전초 추출물 및 이를 포함한 항 여드름 화장품 조성물에 관한 것이다.

여드름이란, 털 피지선 샘 단위의 만성 염증질환으로서 면포(모낭 속에 고여 딱딱해진 피지), 구진(1cm 미만 크기의 솟아 오른 피부 병변), 고름, 물집, 결절, 거짓낭 등의 다양한 피부 변화를 동반하며, 이에 따른 후유증으로 오목한 흉터 또는 확대된 흉터를 남기기도 한다. 여드름은 주로 털을 만드는 모낭에 붙어있는 피지선에서 발생하며 특히, 피지선이 모여 있는 얼굴, 목 가슴 등에서 많이 증상이 나타난다. 여드름이 많이 발생하는 시기는 10-20대 사춘기이며, 이 시기에는 남성호르몬의 과잉으로 피지선의 분비가 왕성해지고 모낭의 상피가 이각화증(불완전하고 미숙한 각질화를 보이는 비정상적 각질화)을 일으켜 결과적으로 모낭이 막히고 여드름의 기본 병변인 면포(comedone, 모낭 속에 고여 딱딱해진 피지)가 형성되어 여드름이 주로 발생하는 것으로 알려져 있다. 그러나 여드름의 정확한 원인은 밝혀져 있지 않으나 한 가지 원인 보다는 여러 원인이 복합적으로 작용한다.

이 중 박테리아에 의한 여드름 발진은 모낭 내에 상주하는 균 가운데 특히 프로피오니박테리움 아크네(Propionibacterium acnes)에 의해 유발되는 것으로 잘 알려져 있다. 프로피오니박테리움 아크네(Propionibacterium acnes)라는 박테리아 세균은 피지를 먹고 자라면서 트러블 발생의 주된 원인이 되는데, 깨끗한 피부 환경에서 이 균은 정상적으로 피부에 존재하면서 전혀 문제를 일으키지 않으나, 모낭이 막혀 피지가 모낭 안에 쌓이게 되면 피지를 먹고 빠르게 자라난다. 이 균이 피지와같은 지방(트리글리세라이드)을 먹게 되면 버터와 비슷한 물질, 즉 지방산을 배설하게 되는데, 그 결과 피부 표면의 유분 및 pH 밸런스가 무너지고 약산성을 유지하였던 건강한 피부가 알칼리화되어 결국 피부 자체 기능이 저하되고 피부의 악순환을 초래하게 된다.

일반적으로 프로피오니박테리움 아크네(Propionibacterium acnes)에 의해 유발되는 여드름을 예방 및 완화하기 위해서는 바르는 약 또는 먹는 약을 이용한 치료를 하고 있다. 바르는 약은 여드름균에 대한 직접적인 살균 효과를 지니며, 유리 지방산이 생성되는 것을 막아주는 국소도포 항생제(클린다마이신, 에리쓰로마이신)와 비타민 A를 변형시켜 만든 약제들이다. 바르는 약에는 각질을 벗겨내 피지 배출이 잘 되도록 하는 작용이 있는 피부재생 연고(트레티노인, 아답팔렌), 강력한 항균제제로 세균집단을 줄이고 약간의 항염증과 면포용해작용이 있는 여드름 연고(벤조일퍼옥사이드) 등이 있다. 반면, 먹는 약은 크게 두 가지로 여드름균을 살균하고 염증을 줄여주는 역할을 하는 항생제와 흔히 로아큐탄으로 알려진 약제로 비타민 A를 변형시켜서 만든 레티노이드가 있다. 레티노이드는 피지 분비를 줄여주는 작용이 있어 피지 조절제로 잘 알려져 있으나 이 약제는 피지 조절뿐만 아니라 그 외 여드름 발생 원인인 이상각화(불완전하고 미숙한 각질화를 보이는 비정상적 각질화), 염증반응, 세균증식 등의 여드름 발생의 모든 경로를 차단하는데 도움을 준다. 하지만, 이러한 치료는 위장장애, 간 및 신장에 장해, 심지어 임산부에게는 기형아를 낳는 위험을 주는 등의 신체 부작용과 함께 체내 상재균들의 항균제에 대한 면역력만 키워준다는 지적이 일고 있다.

한편, 가락지나물(Potentilla kleiniana Wight et Arnott)은 쌍떡잎식물 장미목 장미과의 여러해살이 풀로서 쇠스랑개비라고도 한다. 한방에서 가락지나물은 청열, 해독, 발열, 경기, 종기, 습진, 해수, 인후통, 사교상(뱀에 물린 상처), 벌레에 물린 상처, 말라리아를 다스리는 것으로 알려져 있으며, 줄기는 기부가 비스듬히 자라다가 잎겨드랑이에서 가지가 갈라지며 끝이 위로 향해 높이 20~60cm 정도로 자란다. 뿌리잎은 5장의 장타원형의 잎이 손가락 모양으로 모여 달리며, 표면에는 성글게 털이 있거나 없고 가장자리에 톱니가 있다. 줄기잎은 3개씩 달리며 위쪽의 것일수록 잎자루가 짧아지는 특징이 있다.

항여드름 화장료 조성물에 관련된 종래 특허기술로는 대한민국 특허출원 제 10-2008-0001359 호 「누에 동충하초(Paecilomyces japonica)균사체를 뽕잎 분말을 함유하는 배지에서 배양하여 얻은 배양액을 포함하는 것을 특징으로 하고 여드름 원인균인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)에 대해 생장 억제효과를 나타내는 항 여드름 화장료 조성물」과, 초음파로 추출한 발효콩, 마치현 및 버드나무 추출물 및 초임계 추출법으로 추출한 오레가노, 편백, 육계 및 황금 추출물을 포함하는 대한민국 특허출원 제 10-2009-0045957 호 「항균, 항여드름, 피부진정, 보습 및 피지 조절 활성이 우수한 생약 혼합 추출물」 등이 존재한다. 그러나 가락지나물의 항여드름 활성에 관한 기술은 공개되지 않은 실정이다.

본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조 되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.

본 발명자들은 천연 식물 추출물을 이용하여 우수한 항균 활성, 특히 여드름 균에 대한 항균 효과를 갖는 화장료 조성물을 개발하고자 예의 연구 노력한 결과, 가락지나물 추출물을 유효성분으로 하여 화장료 조성물을 제공할 경우 프로피오니박테리움 아크네(Propionibacterium acne , KCTC3314)균에 대한 항균활성을 나타낸다는 것을 검증하여 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 가락지나물(Potentilla kleiniana Wight et Arnott) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균 활성 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 가락지나물(Potentilla kleiniana Wight et Arnott) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균 활성 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 상기 가락지나물 추출물은 가락지나물의 꽃, 잎, 줄기, 열매, 종자, 뿌리 및 전초(잎, 줄기, 꽃, 뿌리 따위를 가진 풀포기)를 포함하는 군으로부터 선택된 1 종 이상의 부위추출물인 것을 특징으로 한다. 가락지나물 추출물의 항균 효과는 특정 부위에 한정되지 않으나 잎, 줄기, 뿌리를 포함하는 전초로부터 추출하는 것이 추출효율과 항균효과 측면에서 보다 바람직할 수 있다.

본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 상기 추출물은 물, 메탄올, 에탄올, 헥산, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트, 부탄올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 디프로필렌글리콜, 글리세린을 포함하는 군으로부터 선택된 1 종 이상을 추출용매로 하여 추출한 추출물인 것을 특징으로 한다. 물을 이용하여 추출할 경우, 50-120℃에서 1-10시간 동안 열수추출하는 것이 바람직하고, 유기용매를 이용하여 추출할 경우 5-40℃에서 1-5일간 유기용매에 침지하여 추출하는 것이 바람직하다. 상기 추출용매의 중량은 각별히 한정이 있는 것은 아니나, 가락지나물 중량 대비 과소량을 사용하면 추출물이 충분히 추출될 수 없고, 과다량을 사용하면 추출용매를 제거하고 건조 추출물을 얻는 데 시간과 비용이 많이 들게 된다. 만약, 열수추출할 경우 시료가 충분히 포함되도록 하고, 추출 효율을 높이기 위해 가온된 상태로 추출을 행하는 것이 필요다. 이 때, 온도가 너무 낮으면 가온의 이점을 충분히 살리기 어렵고 많은 시간을 추출해야 하며, 온도가 너무 높으면 유용물질의 분해가 생길 수 있는 점을 유의해야 한다. 또한, 유기용매 추출의 경우 상온에서 추출할 수 있으며, 시료를 3일 정도의 시간 동안 충분한 추출용매에 침지하여 추출이 충분히 이루어지도록 하며, 추출이 충분하지 못한 경우 반복 공정을 통하거나 추출 시간을 증가시켜 추출량을 늘릴 수도 있다.

본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 상기 가락지나물 추출물은 여드름 균에 대한 항균활성을 갖는 것을 특징으로 하며, 특히, 프로피오니박테리움 아크네(Propionibacterium acne)균에 대한 항균활성을 갖는 것을 특징으로 한다. 본 발명에서 가락지나물 추출물이 여드름 균에 항균활성을 나타낸다는 것은 매우 중요한 의미가 있다. 가락지나물 추출물은 피부에 증식하는 다양한 균 가운데, 황색포도상구균, 대장균, 칸디다균, 및 비듬균 등에 대한 활성은 유의적으로 나타나지 않았지만 여드름 균에 대한 항균활성은 매우 우수하게 나타나기 때문에 (하기 실험예 참조) 가락지나물 추출물을 유효성분으로 포함한다는 것은 여드름 균 억제에 효과적인 화장료 조성물을 제공할 수 있다는 의미를 갖는다.

본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 상기 가락지나물 추출물은 여드름 균에 대해 100 내지 1000ppm에서 최소저해농도(MIC)를 갖는 것을 특징으로 한다. 최소저해농도는 항생제의 균 활성저해 효과가 나타나는 최소농도를 의미하며 MIC값이 낮을수록 낮은농도에서도 효과적인 향균효과를 보이는 것으로 해석될 수 있다. 본 발명의 가락지 나물 추출물의 경우 바람직하게는 100 내지 1000ppm, 즉 0.01 내지 0.1% 에서 최소저해농도를 가지고, 더욱 바람직하게는 300 내지 700ppm, 가장 바람직하게는 400-500ppm에서 최소저해농도를 갖는다. 즉, 가락지나물 추출물은 낮은 농도에서도 항균, 보다 바람직하게는 항 여드름균 활성이 우수한 것이 특징이다.

본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 상기 가락지나물 추출물은 화장료 조성물 총 중량 대비 0.01 내지 30중량% 포함되는 것을 특징으로 한다. 본 발명에서 추출물의 화장료 조성물에 대한 함량 범위는 중요하다. 가락지나물 추출물이 항균 활성 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.01중량% 미만일 경우에는 항균 활성 효과를 충분히 얻을 수 없기 때문에 항균, 특히 여드름 완화용 화장료로서의 기능이 떨어지고, 30중량%를 초과하는 경우에는 세포 독성에 의한 안전성의 문제점이 있기 때문이다.

본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 상기 항균활성 화장료 조성물은 상술한 추출물 이외에 다른 성분들을 포함할 수 있다. 글리세린, 부틸렌 글라이콜, 폴리옥시에칠렌 경화피마자유, 토코페릴 아세테이트, 시트릭산, 판테놀, 스쿠알란, 소듐 시트레이트 및 알란토인으로 포함된 군으로부터 선택되는 최소 하나의 보조성분을 추가적으로 포함하며, 보다 바람직하게는 글리세린, 폴리옥시에칠렌 경화피마자유, 토코페릴 아세테이트, 스쿠알란 및 소듐 시트레이트을 추가적으로 포함하고, 부틸렌 글라이콜, 시트릭산, 판테놀 및 알란토인으로 구성된 군으로부터 선택되는 최소 하나의 성분을 포함하며, 가장 바람직하게는 글리세린, 부틸렌 글라이콜, 폴리옥시에칠렌 경화피마자유, 토코페릴 아세테이트, 시트릭산, 판테놀, 스쿠알란, 소듐 시트레이트 및 알란토인 모두를 추가적으로 포함한다.

본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 본 발명의 화장료 조성물은 기본적으로 피부에 도포되는 것이므로, 당업계의 화장료 조성물을 참조하여 제공될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제 함유 클린징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올, 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가, 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 가락지나물(Potentilla kleiniana Wight et Arnott) 추출물은 프로피오니박테리움 아크네(Propionibacterium acne)균에 대한 항균활성을 나타내므로, 상기 추출물을 유효 성분으로 포함하는 본 발명의 화장료 조성물은 항균, 특히 항여드름 효과가 우수하다.

도 1은 가락지나물 추출물의 스타피로코커스 아우레우스(Staphyrococcus aureus)균에 대한 생장정지환 측정 실험 결과를 나타낸 사진이다.
도 2는 가락지나물 추출물의 에스케리시아 콜라이(Escherichia coli)균에 대한 생장정지환 측정 실험 결과를 나타낸 사진이다.
도 3은 가락지나물 추출물의 칸디다 알비칸스(Candida albicans)균에 대한 생장정지환 측정 실험 결과를 나타낸 사진이다.
도 4는 가락지나물 추출물의 피티로스포럼 오발레(Pityrosporum ovale)균에 대한 생장정지환 측정 실험 결과를 나타낸 사진이다.
도 5는 가락지나물 추출물의 프로피오니박테리움 아크네(Propionibacterium acne)균에 대한 생장정지환 측정 실험 결과를 나타낸 사진이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명 하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

실시예

본 명세서 전체에 걸쳐, 특정 물질의 농도를 나타내기 위하여 사용되는 %는 별도의 언급이 없는 경우, 고체/고체는 (중량/중량) %, 고체/액체는 (중량/부피) %, 그리고 액체/액체는 (부피/부피) %이다.

실시예 1. 가락지나물 추출물 제조

1-1. 99.5% 메탄올 추출물

가락지나물과 99.5% 메탄올을 1:70의 중량 비율로 넣고 상온에서 72시간 동안 진탕추출하는 공정을 3회 반복하여 추출한 후, 추출액을 380 메쉬(Mesh)로 여과하고 0.45㎛ 멤브레인 필터(Membrane filter)로 재차 여과하였다. 이 여과액을 냉각 콘덴서가 달린 증류장치에서 40℃로 감압 농축하고, 감압 증발한 후 이어서 동결건조하여 최종적으로 가락지나물의 99.5% 메탄올 추출물 0.6353g(건조중량)을 수득하였다.

1-2. 94.0% 에탄올 추출물

가락지나물과 94.0% 에탄올을 1:70의 중량 비율로 넣고 상온에서 72시간 동안 진탕추출하는 공정을 3회 반복하여 추출한 후, 추출액을 380 메쉬(Mesh)로 여과하고 0.45㎛ 멤브레인 필터(Membrane filter)로 재차 여과하였다. 이 여과액을 냉각 콘덴서가 달린 증류장치에서 40℃로 감압 농축하고, 감압 증발한 후 이어서 동결건조하여 최종적으로 가락지나물의 94.0% 에탄올 추출물 0.5383g(건조중량)을 수득하였다.

1-3. 70.0% 에탄올 추출물

가락지나물과 70.0% 에탄올을 1:70의 중량 비율로 넣고 상온에서 72시간 동안 진탕추출하는 공정을 3회 반복하여 추출한 후, 추출액을 380 메쉬(Mesh)로 여과하고 0.45㎛ 멤브레인 필터(Membrane filter)로 재차 여과하였다. 이 여과액을 냉각 콘덴서가 달린 증류장치에서 40℃로 감압 농축하고, 감압 증발한 후 이어서 동결건조하여 최종적으로 가락지나물의 70.0% 에탄올 추출물 0.5672g(건조중량)을 수득하였다.

1-4. 열수 추출물

가락지나물과 증류수를 1:20의 중량 비율로 넣고, 냉각 콘덴서가 달린 열수 추출기에서 2시간 동안 105℃의 온도로 끓여서 추출한 후 상온으로 냉각하였다. 이 최초 추출물을 380 메쉬(Mesh)로 여과하고, 11㎛ 페이퍼 필터(Paper filter)로 재차 여과하였으며, 마지막으로 0.45㎛ 멤브레인 필터(Membrane filter)로 한번 더 여과하였다. 그 다음 냉각 콘덴서가 달린 증류장치에서 40℃로 감압 농축하고, 감압 증발한 후 이어서 동결건조하여 최종적으로 가락지나물의 열수 추출물을 0.4637g(건조중량) 수득하였다.

실험예 1. 생장정지환 ( Paper Disc ) 측정

상기 실시예 1-1의 가락지나물 추출물을 사용하여 가락지나물 추출물의 일반적인 피부상주균에 대한 항균활성을 측정하였다. 한국미생물보존센터로부터 분양 받은 균 5종 스타피로코커스 아우레우스(Staphyrococcus aureus , KCTC1621), 에스케리시아 콜라이(Escherichia coli , KCTC1039), 칸디다 알비칸스(Candida albicans, KCTC7270), 피티로스포럼 오발레(Pityrosporum ovale, KCCM11894)및 프로피오니박테리움 아크네(Propionibacterium acne , KCTC3314)를 하기 표 1과 같이 각 배지 및 각각의 조건하에서 배양하여 활성화시켰다.

피부상주균	미생물 균주	배양 배지	배양 조건
황색 포도상구균	스타피로코커스 아우레우스 (Staphyrococcus aureus)	Tryptic soy	37℃, 24hr, 호기
대장균	에스케리시아 콜라이 (Escherichia coli)	Trypticase soy	37℃, 24hr, 호기
칸디다균	칸디다 알비칸스 (Candida albicans)	YM	25℃, 24hr, 호기
비듬균	피티로스포럼 오발레 (Pityrosporum ovale)	Malt extract, Tween40, Glycerol mono oleate, Ox-bile(Desicate)	37℃, 72hr, 호기
여드름균	프로피오니박테리움 아크네 (Propionibacterium acne)	Reinforced clostridial	37℃, 24hr, 혐기

상기 배양액들을 페트리디쉬(Petri dish)에 각 100㎕씩 분주한 후 Paper disc(ADVANTEC 8mm paper disc)를 놓고, 1%, 0.1%, 및 0.01%의 농도로 정제수에 희석한 가락지나물 추출물(상기 실시예 1-1의 추출물 이용)을 각각 60㎕씩 로딩하였다. 각 조건에서 다시 배양시킨 후 형성된 생장 정지환을 측정하였다. 이에 얻은 결과를 확인하기 위하여 위의 실험을 3회 반복 실험하였다. 가락지나물 추출물의 항균활성을 비교 및 대조하기 위해 Positive control로 트리클로산(TRICLOSAN)을 사용하였으며 결과는 도 1 내지 5와 같았다(하기 도면 참조).

상기 균 5종에 대한 생장정지환 측정 실험 결과, 가락지나물 추출물은 여드름 원인 균주를 제외한 나머지 균주에서는 항균 효과를 나타내지 않았고, 여드름 원인균주인 프로피오니박테리움 아크네(KCTC3314)에 대해서만 높은 항균 활성을 보였다. 결과적으로 가락지나물이 항균활성을 나타낸 페트리디쉬의 Clear zone의 넒이를 측정하였고, 가락지나물의 프로피오니박테리움 아크네(KCTC3314)에 대한 생장정지환 실험 측정 결과는 하기 표 2와 같았다.

	Positive Control (TRICLOSAN)	가락지나물 10000ppm(1%)	가락지나물 1000ppm(0.1%)	가락지나물 100ppm(0.01%)
Clear zone	3.30 ㎠	4.52 ㎠	1.77 ㎠	0.79 ㎠

생잔정지환의 넓이 측정 결과, 특히 가락지나물은 10000ppm(1%) 농도에서 Positive Control인 TRICLOSAN 보다 우수한 항균 효과를 나타낸다는 것을 확인할 수 있었다.

실험예 2. 최소저해농도( MIC ) 측정

실험예 1에서 가락지나물을 여드름 원인균에 항균 활성을 추가 입증하기 위하여 상기 실시예 1-1의 가락지나물 추출물을 사용하여 여드름 원인균에 대한 MIC(Minimal inhibitory concentration, 최소저해농도) 측정 실험을 진행하였다. 실험은 멸균된 Reinforced Clostridial Broth를 10개 준비하고 활성화시킨 여드름균주 배양액을 각각 1%씩 접종한 후, 실시예 1-1에서 수득한 가락지나물 추출물을 첨가하되 농도를 변화시키면서 각 배지에 첨가하였다. 그런 다음 모든 배지를 37℃, CO₂ 조건 하에서 72시간 혐기 배양 한 후, Reinforced Clostridial Agar에 100㎕씩 분주하고 혐기 배양하여 여드름 균주의 성장 여부를 확인하였다. 또한 보다 객관적인 결과를 확인하기 위하여 위의 실험을 3회 반복 실험하였다.

실험	MIC 농도(%)
1차	0.040
2차	0.060
3차	0.040
평균	0.046

MIC측정 결과 3차에 걸쳐 측정된 가락지나물 추출물의 여드름 균주에 대한 MIC농도는 상기 표 3과 같다. 결과와 같이 가락지나물 추출물의 여드름 균주 활성에 대한 저해효과는 평균 최소 0.046%(460ppm)의 농도에서 나타내는 것으로 확인되었다.

실험예 3. 세포 독성 시험( Neutral red assay )

상기 실시예 1-1의 추출물에 대한 세포독성을 알아보기 위하여, 우선 CCD-986 sk(human skin dermal fibroblast)를 5x10⁴cells/㎖ 농도로 하여 96-well plate에 200㎕씩 분주하여 37℃, CO₂ 인큐베이터에서 24시간 동안 배양하였다. 이때 배지는 소혈청 10%와 항생제 1%가 포함된 DMEM/high glucose(Dulbeco's Modified Eagle Medium, Hyclone)를 이용하였다. 배양한 후 상기 실시예 1-1의 가락지나물 추출물을 농도별로 처리한 후 같은 배양 조건에서 72시간 배양하였다. 배양이 끝난 후 배양액을 제거하고 5㎎/㎖ Neutral red 시약을 첨가한 배양액을 넣은 후 37℃에서 2시간 동안 배양하였다. 그 다음 배양액을 제거하고 1% CaCl₂ & Formaldehyde를 처리한 다음 1분간 400-500rpm으로 흔들어 준 뒤 이를 다시 제거하였다. 그리고 1% Acetic acid & 50% Ethanol을 각 well에 처리하고 10분간 잘 흔들어 준 다음 마이크로 플레이트 계수기(Micro plate reader)를 이용하여 570nm/655nm의 흡광도 측정으로 결과를 측정하였으며, 그 결과는 하기 표 4와 같았다.

시료	실시예__
농도(㎍/㎖)	100	75	50	25	10	5	1	0.1	0.01
세포생존율(%)	106.9	111.4	105.9	103.2	94.9	94.8	95.9	97.3	97.2

세포독성 실험 결과, 가락지나물 추출물은 100 ㎍/㎖ 이하의 농도에서 세포 독성을 나타내지 않았다.

처방예 : 화장료 조성물의 처방예

처방예 1-1 : 유연화장수

실시예 1-1의 추출물을 함유한 화장료 중 유연화장수의 처방 예는 다음과 같다.

	성분	함량(중량%)
	실시예 (1-1)	0.1
1	폴리옥시에칠렌경화피마자유	0.5
2	글리신	3.0
3	디포타슘글리시리제이트	0.1
4	1,3-부틸렌 글리콜	3.0
5	소듐히아루로네이트	0.1
6	에탄올	5.0
7	항산화제	0.1
8	트리에탄올아민	0.1
9	EDTA	0.1
10	방부제	적량
11	정제수	잔량

소듐히아루로네이트는 프로펠러믹서(3000rpm)로 정제수에 분산하여 1% solution상태로 준비하였다. 소듐히아루로네이트를 제외한 원료 1 내지 8은 프로펠러믹서를 사용하여 수상 용해조에 500rpm으로 균일화시키고 75℃에서 가온하여 완전 용해 한 후, 실온으로 냉각하였다. 그런 다음, 별도의 용해조에 원료 9 내지 11을 완전 용해하여 상기 수상 용해조에 투입하고 교반 혼합하였다. 여기에 실시예 1-1을 투입하여 충분히 교반 혼합하여, 실시예 1-1을 함유한 유연화장수를 제조하였다.

처방예 1-2 : 영양화장수

실시예 1-1의 추출물을 함유한 화장료 중 영양화장수의 처방예는 다음과 같다.

	성분	함량(중량%)
	실시예 (1-1)	0.1
1	글리세린	7.0
2	소르비탄스테아레이트 슈크로오즈코코에이트	2.0
3	미네랄 오일	4.0
4	트리옥타노인	1.0
5	스테아릭에씨드	1.0
6	글리세릴 스테아레이트	0.5
7	소르비탄모노스테아레이트	1.0
8	디메치콘	0.5
9	항산화제	0.3
10	트리에탄올아민	0.1
11	카보머	0.2
12	EDTA	0.1
13	방부제	적량
14	정제수	잔량

프로펠러믹서를 이용하여 카보머를 4000rpm으로 분산하여 2% solution상태로 준비하였다. 수상 용해조에 원료 1 내지 6을 투입하여 호모믹서(2000rpm)로 교반하여 분산 후, 75℃까지 가온하였다. 유상 용해조에 원료 7 내지 14을 투입하여 75℃까지 가온 용해하였다. 그 다음 수상 용해조에 용해된 유상을 투입하여 유화(3000rpm/5분)시킨 후, 실온으로 냉각하였다. 여기에 실시예 1-1을 투입하여 충분히 교반 혼합하여, 실시예 1-1을 함유한 영양화장수를 제조하였다.

처방예 1-3 : 에센스

실시예 1-1의 추출물을 함유한 화장료 중 에센스의 처방 예는 다음과 같다.

	성분	함량(중량%)
	실시예 (1-1)	0.1
1	글리세린	5.0
2	1,3-부틸렌 글리콜	2.0
3	폴리에칠렌 글리콜	2.0
4	카보머	1.0
5	소듐히아루로네이트	0.1
6	글리신	3.0
7	폴리아크릴아마이드	2.0
8	히드록시에칠셀룰로이즈	0.2
9	에탄올	3.0
10	항산화제	0.3
11	트리에탄올아민	0.1
12	폴리옥시에칠렌경화피마자유	1.0
13	EDTA	0.1
14	방부제	적량
15	정제수	잔량

소듐히아루로네이트, 히드록시에칠셀룰로이즈는 각각 정제수에 프로펠러믹서(2000rpm)로 분산하여 1% solution상태로 준비하였다. 또 카보머는 정제수에 프로펠러믹서(4000rpm)로 분산하여 2% solution상태로 준비하였다. 한편, 수상 용해조에 원료 1 내지 12를 투입하여 호모믹서(2000rpm)로 교반하여 분산 후, 75℃까지 가온하였고, 가온 된 수상을 다시 실온으로 냉각하였다. 별도의 용해조에 원료 13 내지 15를 완전 용해시킨 후, 상기 수상 용해조에 투입하여 교반 혼합하였다. 여기에 실시예 1-1을 투입하여 충분히 교반 혼합하여, 실시예 1-1을 함유한 에센스를 제조하였다.

처방예 1-4 : 영양크림

실시예 1-1의 추출물을 함유한 화장료 중 영양크림의 처방 예는 다음과 같다.

	성분	함량(중량%)
	실시예 (1-1)	0.1
1	1,3-부틸렌글리콜	3.0
2	글리세린	3.0
3	하이드로제네이티드 레시친	1.0
4	옥틸도데카놀	3.0
5	트리옥타노인	2.0
6	스테아릭에씨드	1.5
7	세토스테아릴알콜	2.0
8	폴리솔베이트60	1.5
9	소르비탄세스퀴올레이트	2.0
10	디메치콘	3.0
11	항산화제	0.3
12	산탄검	0.2
13	트리에탄올아민	0.1
14	EDTA	0.1
15	방부제	적량
16	정제수	잔량

수상용해조에 원료 1 내지 8을 투입하여 호모믹서(2000 rpm)로 교반하여 분산 후, 75℃까지 가온하였다. 또 유상 용해조에 원료 9 내지 16을 투입하여 80℃까지 가온 용해하였다. 수상 용해조에 용해된 유상을 투입하여 유화(3000 rpm/10분)시킨 후, 실온으로 냉각하였다. 여기에 실시예 1-1을 투입하여 충분히 교반 혼합하여, 실시예 1-1을 함유한 영양크림을 제조하였다.

처방예 1-5 : 팩

실시예 1-1의 추출물을 함유한 화장료 중 팩의 처방 예는 다음과 같다.

	성분	함량(중량%)
	실시예 (1-1)	0.1
1	글리세린	7.0
2	1,3-부틸렌글리콜	3.0
3	스쿠알렌	3.0
4	디메치콘	3.0
5	소듐히아루로네이트	0.1
6	글리신	2.0
7	폴리아크릴아마이드	5.0
8	항산화제	0.3
9	트리에탄올아민	0.1
10	EDTA	0.1
11	방부제	적량
12	정제수	잔량

별도의 용해조에 원료 1 내지 8을 완전 용해시켜 교반 혼합하고, 여기에 실시예 1-1을 투입하여 충분히 교반 혼합하여 실시예 1-1을 함유한 팩을 제조하였다.

Claims (10)

1. 가락지나물(Potentilla kleiniana Wight et Arnott) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균 활성 화장료 조성물.
   
2. 제 1 항에 있어서,
   상기 가락지나물 추출물은 가락지나물의 꽃, 잎, 줄기, 열매, 종자, 뿌리 및 전초를 포함하는 군으로부터 선택된 1 종 이상의 부위추출물인 것을 특징으로 하는 항균 활성 화장료 조성물.
   
3. 제 1 항에 있어서,
   상기 가락지나물 추출물은 물, 메탄올, 에탄올, 헥산, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트, 부탄올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 디프로필렌글리콜, 글리세린을 포함하는 군으로부터 선택된 1 종 이상을 추출용매로 하여 추출한 추출물인 것을 특징으로 하는 항균 활성 화장료 조성물.
   
4. 제 1 항에 있어서,
   상기 가락지나물 추출물은 50-120℃에서 1-10시간 동안 열수추출하거나 5-40℃에서 1-5일간 유기용매에 침지하여 추출하는 것을 특징으로 하는 항균 활성 화장료 조성물.
   
5. 제 1 항에 있어서,
   상기 가락지나물 추출물은 여드름 균에 대한 항균활성을 갖는 것을 특징으로 하는 항균 활성 화장료 조성물.
   
6. 제 5 항에 있어서,
   상기 여드름 균은 프로피오니박테리움 아크네(Propionibacterium acne)인 것을 특징으로 하는 항균 활성 화장료 조성물.
   
7. 제 5 항에 있어서,
   상기 가락지나물 추출물은 여드름 균에 대해 100 내지 1000ppm에서 최소저해농도(MIC)를 갖는 것을 특징으로 하는 항균 활성 화장료 조성물.
   
8. 제 1 항에 있어서,
   상기 가락지나물 추출물은 화장료 조성물 총 중량 대비 0.01 내지 30중량% 포함되는 것을 특징으로 하는 항균 활성 화장료 조성물.
   
9. 제 1 항에 있어서,
   상기 화장료 조성물은 글리세린, 부틸렌 글라이콜, 폴리옥시에칠렌 경화피마자유, 토코페릴 아세테이트, 시트릭산, 판테놀, 스쿠알란, 소듐 시트레이트 및 알란토인을 포함하는 군으로부터 선택된 1종 이상의 보조성분을 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 항균 활성 화장료 조성물.
   
10. 제 1 항에 있어서,
    상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제 함유 클렌징, 오일, 분말파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 및 스프레이를 포함하는 군으로부터 선택된 1종 이상의 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 항균 활성 화장료 조성물.
    

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