KR20140098806A - 피부 장벽 기능을 개선시키는 데 유용한 호호바 추출물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 피부 장벽 기능을 촉진시키는 데 효과적이고, 피부 완전성, 건강 및 외관을 개선시키는 데, 및 항노화제로서 유용한, 극성 용매 중의 호호바 (시몬드시아 키넨시스) 추출물을 포함하는 조성물에 관한 것이다.

Description

피부 장벽 기능을 개선시키는 데 유용한 호호바 추출물{JOJOBA EXTRACT USEFUL IN IMPROVING SKIN BARRIER FUNCTIONS}

본 발명의 기술분야

본 발명은 피부 관리 분야, 특히, 피부 장벽 기능을 촉진시키는 데 효과적이고, 피부 완전성, 구조 및 강도를 개선시키며, 피부 항노화제로서 유용한, 호호바(Jojoba) (시몬드시아 키넨시스(Simmondsia chinensis)) 추출물에 관한 것이다.

피부는 수많은 기능을 수행하지만, 그의 1차 기능은 보호층 또는 보호 장벽으로서의 기능이다. 육상 동물의 경우, 피부의 가장 중요한 역할은 물이 풍부한 내장 기관을 건조한 외부 환경으로부터 보호하는 데 있다. 추가로, 피부는 유해 화학물질 및 물리적 힘으로부터 뿐만 아니라, 병원체 침투로부터 내부 조직을 보호한다.

피부는 구조상 복잡한 두꺼운 막이다. 피부는 표피, 진피, 피하조직, 및 부속 구조 (표피 부속기)로 구성된다. 피부의 가장 바깥쪽 상피 조직인 표피 그 자체는 여러 층 - 각질층, 과립층, 유극층, 및 기저층으로 구성된다. 표피는 주로 케라티노사이트로 구성되고, 계속해서 자기 치환되고 있는 상태에 있다. 바닥층에서, 케라티노사이트 줄기 세포는 원 위치에서 바깥쪽으로 옮겨지고, 분화되어 연이은 피개층을 거쳐 각질층에 이르게 되는 딸세포로 나뉜다. 이어서, 케라티노사이트 세포는 아폽토시스를 겪게 되고, 사멸하게 되며, 그의 세포 소기관 및 세포질은 최종 분화 과정 동안 소멸된다.

피부의 수분 불투과성은 살아있는 유기체의 다른 막과 비교하여 약 10³배 더 높은 내수성을 가지는 각질층 (SC) 상부의 가장 얇은 층 (인간의 경우, 대략 10-20 μ)에 의해 야기된다.

각질층의 수화 상태는 그의 장벽 기능을 위해서 뿐만 아니라, 피부의 건강하고 견고한 외관을 위해 중요하다. 전형적으로는 반비례 관계를 보이는 각질층 수화 및 경표피 수분 손실 (TEWL)은 그의 특징 규명에 사용되는 중요한 두 지표이다. 피부 장벽 기능 장애의 마커로서의 높은 TEWL 값은 빈번하게는 각질층의 낮은 수화와 상관관계에 있다. 장벽 기능 장애는 특히 비누 및 세정제를 이용한 피부 세정으로부터 및 각종 피부 질환으로부터 발생할 수 있다. 예를 들어, 아토피 피부염에서, 피부 장벽 장애는 전자 현미경 및 투과 연구에 의해 확인되고 있으며, 병변성 아토피 피부염은 높은 TEWL 값을 보인다. 각질층 수화와 경표피 수분 손실 사이의 이러한 상호작용에 관한 기전이 완전하게 연구된 상태는 아니다. 그러나, 피부 장벽 기능 장애가 표피 분화를 변화시키는 것으로 제안되고 있다.

조직 완전성은 세포간 연접부에 의해 수행되는 적절한 세포간 부착에 고도로 의존한다. 세포간 연접부는 부착성 막 통과 단백질을 포함하는 복합체이고, 그의 형태 및 분포는 조직 유형에 따라 달라질 수 있다. 피부에서 두드러진 연접부로는 데스모솜, 밀착 연접부 및 간극 연접부가 존재한다.

데스모솜은 인접한 세포를 밀착 연결시키는 세포간 연접부이다. 데스모플라킨이라는 단백질은, 중간형 필라멘트를 데스모솜 판에 고정시키는, 기능성 데스모솜의 필수 성분이다.

밀착 연접부 (TJ)는 이웃 세포를 연결하고, 분자의 세포 주위 경로를 제어하며 ("장벽 기능"), 세포막의 바닥가쪽 부분으로부터 첨단 부분을 분리하는 ("펜스 기능") 세포-세포 연접부이다. 표피에서 그의 장벽 기능을 위해서는 밀착 연접부의 조성이 매우 중요한 것으로 보인다. 특정 단백질의 하향 조절 뿐만 아니라, 과다발현은 이러한 장벽을 교란시킨다. 밀착 연접부에의 손상은 피부 수분 손실, 건성 및 민감성 피부, 및 심상성 건선, 편평 태선, 담관염 및 심상성 어린선을 포함하는 어린선을 비롯한, 여러 피부 장애와 연관이 있다.

간극 연접부는 인접 세포 사이에 이온 및 소형 분자가 통과할 수 있도록 하는, 세포막 중 조직화된 단백질 채널의 무리이다. 간극 연접부를 구성하는 단백질 채널은 코넥손이라고 명명되는 막 관통 단백질로 이루어진 육각형 모양의 두 어레이로 구성된다. 한 코넥손이 한 세포의 막에 존재한다. 이는 이웃 세포의 코넥손과 정렬되고 연결됨으로써, 이온 및 소형 분자가 한 세포에서 나머지 다른 한 세포로 자유롭게 (수동적으로) 통과할 수 있도록 하는 연속 수성 경로를 형성한다.

수개의 합성 화합물 뿐만 아니라, 식물 추출물이 피부 장벽 기능에 영향을 미치는 것으로 나타났다. 예를 들어, 미국 특허 제8,101,214호에는 피부 케라티노사이트의 분화를 촉진시키고, 손상된 피부 장벽 기능을 회복시키고, 피부 보습화를 증가시키는 데 있어 한약재 각각을 단독으로 추출하여 수득된 추출물보다 우수한, 수개의 한약재가 식물 추출물의 비로 이루어진 한약재 추출물 복합체가 개시되어 있다.

미국 특허 제8,168,197호에는, 주요 성분으로서 스크로풀라리아 부에르제리아나 Miq.(Scrophularia buergeriana Miq.)의 추출물을 함유하고, 포리아 코코스 울프(Poria cocos Wolf)의 추출물을 추가로 함유하는, 건성 피부 증상을 경감시키기 위한 피부 외용제 조성물 뿐만 아니라, 피부 보습용 화합물으로서의 그의 용도가 개시되어 있다. 조성물은 활성 성분으로서 스크로풀라리아 부에르제리아나 Miq. 추출물 및 포리아 코코스 울프 추출물을 함유하는데, 이들 추출물은 물, 에탄올, 메탄올, 헥산, 에틸 아세테이트 또는 부탄올을 사용하여 각각 따로따로 추출함으로써 제조된다.

미국 특허 출원 공개 제20040156818호에는 인도 멀구슬나무(neem) 종자 세포 브로쓰 및 하나 이상의 추가의 식물 성분 또는 석류 과실 추출물, 및 임의적으로, 특히, 피부 취약성을 감소시키는 데, 피부 장벽 수복 및/또는 기능을 개선시키는 데, 및 피부 보습화를 개선시키는 데 유용한 하나 이상의 추가의 식물 성분으로 이루어진 혼화물을 포함하는 조성물이 개시되어 있다.

국제 (PCT) 특허 출원 공개 WO 2008/148694에는 4 내지 10개의 단당류 단위로 구성되고, 적어도 하나의 프럭토스 잔기를 가지는 갈락토-올리고당을 포함하는 보습용 화장품 조성물이 개시되어 있다. 상기 갈락토-올리고당은 라미아세아에(Lamiaceae) 과의 식물군에 속하는 식물로부터 수득할 수 있다. 상기 식물로부터의 추출물은 끈적임 없는 개선된 피부 보습 효과, 및 다가 알콜과 함께 시너지적인 보습 효과를 보였다.

국제 (PCT) 특허 출원 공개 WO 2009/106934에는 아쿠아포린-3, 피브로넥틴 및 외피 단백질 필라그린 및 인보루크린의 발현 자극을 포함하는 기전에 기인하는, 피부 장벽 보호 및 보습제로서 유용한 안지오-브란코(Angico-Branco) (핍타데니아 콜루브리나(Piptadenia colubrina)) 추출물이 개시되어 있다. 발명은 추가로 예컨대, 피부 건조증, 크래킹, 각화, 플레이킹 또는 피부 장벽 손상을 비롯한 임의의 장애와 같은 특정 피부 변화에 대한 얼굴 또는 신체 치료를 위한, 추출물을 포함하는 미용적 및 피부과용 제제에 관한 것이다.

이미 시판되고 있는, 피부 장벽 기능을 촉진시키는 데 유용한, 식물 추출물 기반의 제품에 관한 예시적인 목록으로는 미벨레 인더스트리즈(Mibelle Industries: 스위스)의 피토셀테크 Alp 로즈(PhytoCellTec Alp Rose) 및 바네트 프로덕츠(Barnet Products: 미국)의 피토글리코 리피드 II(Phytoglyco lipid II)를 포함한다.

피부 장벽 기능을 개선시키기 위한 시도로 제품 및 기술 목록이 연속해서 증가한다는 것은 보편적으로 유용한 용액이 아직까지도 여전히 이용 불가능하다는 것을 나타낸다.

호호바 (시몬드시아 키넨시스)는 아리조나, 캘리포니아, 및 멕시코의 소노란(Sonoran) 및 모하비(Mojave) 사막이 원산지인 관목이다. 카리오필라레스(Caryophyllales) 목에 배치된, 시몬드시아세아에(Simmondsiaceae) 과의 단일 종이다. 이는 또한 염소 너트, 사슴 너트, 돼지 너트, 야생 개암나무, 퀴닌 너트, 커피베리, 및 그레이 박스 부쉬로도 알려져 있다. 호호바는 종자에 존재하는 액상 왁스 에스테르인, 그의 오일을 위해 상업적으로 재배된다. 호호바 오일은 고래 오일 및 그의 유도체, 예컨대, 세틸 알콜에 대한 대체물로 사용된다. 1971년 미국내 고래 오일 수입을 금지시킴에 따라 호호바 오일이 다수와 관련하여 화장품 및 다른 산업에서 적용하는 데 우수하다는 것을 발견하게 되었다. 호호바 오일 또한 살진균제이고, 이는 흰곰팡이를 방제하는 데 사용될 수 있다. 얼레스트라(olestra)와 같이, 호호바 오일도 식용가능하지만, 칼로리가 없고, 소화가 잘 되지 않는다. 호호바 바이오디젤은 석유 디젤에 대한 대용물로서의 역할을 할 수 있는, 저렴하고, 지속 가능한 연료로서 연구되어 왔다.

호호바의 친수성 추출물을 사용하는 것은 앞서, 호호바 굵은 가루(meal), 특히, 오일 추출 후에 보유되는 굵은 가루를 사용하여 피부를 화이트닝하고 박피하기 위한 것으로만 개시되었다. 굵은 가루는 주로 하나 이상의 히드록시산과 조합하여 기계식 박피제로서 사용된다 (미국 특허 제6,890,566호, 제7,025,957호, 제7,029,709호, 제7,097,866호).

본원 상기에 기술된 바와 같이, 장벽 기능 촉진 및 이어지는 피부 완전성 유지가 각종 피부 장애를 치료 및/또는 완화시키는 것을 비롯한, 피부 외관 및 건강을 개선시키는 데 중요하다. 피부 장벽 기능을 촉진시키는 데 효과적인 조성물 및 방법, 특히, 유해 효과가 없는 것으로 알려져 있는 식물 유래의 조성물이 고도로 바람직하고, 이익이 될 것이다.

본 발명의 요약

본 발명은 호호바 식물 추출물, 특히 피부 구조, 강도 및 응집력을 개선시키는 데, 및 피부 장벽 기능을 촉진시키는 데 유용한 식물 지상부의 추출물에 관한 것이다.

본 발명은 부분적으로는, 호호바의 잎 부위를 극성 용매, 특히, 물 중에서 추출하면, 피부 장벽 기능을 유지 및/또는 촉진시키는 데 효과적인 추출물을 얻을 수 있다는 예상 밖의 발견에 기초한다. 특히, 본 발명의 추출물은 데스모플라킨 I, 데스모플라킨 II 및 사이토케라틴 5 코딩 유전자 뿐만 아니라, 수개의 다른 케라틴 코딩 유전자의 발현을 유의적으로 증진시켰다. 어떤 특정의 이론 또는 작용 기전으로 제한하고자 하지 않으면서, 따라서, 피부 완전성의 촉진은 기능성 데스모솜의 필수 성분인 데스모플라킨, 및 단층 및 중층 상피 조직의 적절한 분화에 필수적인 것으로 알려져 있는, 사이토케라틴 5, 사이토케라틴 2A 및 사이토케라틴 1을 비롯한, 여러 종류의 케라틴의 존재에 기인하는 것일 수 있다. 따라서, 본 발명의 추출물은 피부 완전성을 유지시키고, 피부 장벽 기능을 보존 및/또는 촉진시키는 데 사용될 수 있다.

따라서, 한 측면에 따라, 본 발명은 활성 성분으로서 극성 용매 중의 호호바 (시몬드시아 키넨시스) 식물 또는 그의 임의 부위의 추출물을 포함하는 조성물을 대상체의 피부에 투여하여 피부 장벽 기능을 유지 또는 촉진시키는 단계를 포함하는, 피부 구조, 강도, 응집력 또는 이들의 임의 조합을 유지 및/또는 촉진시키는 방법을 제공한다.

특정 실시양태에 따라, 조성물은 단일 활성 성분으로서 호호바 추출물을 포함한다. 다른 실시양태에 따라, 조성물은 적어도 하나의 추가의 활성제를 추가로 포함한다.

특정 실시양태에 따라, 피부 장벽 기능을 유지 또는 촉진시키는 것은 피부 탈수율을 유지 또는 감소시키는 것, 피부 수화 값을 유지 또는 촉진시키는 것, 환경 위해로부터의 보호를 유지 또는 촉진시키는 것, 및 이들의 임의 조합 중 적어도 하나를 포함한다.

다른 실시양태에 따라, 본 발명의 방법은 피부 건강, 피부 완전성 피부 견고성, 피부 신장성, 피부 탄력성, 전반적 피부 외관의 미화, 및 이들의 임의 조합을 유지 또는 개선시키는 것 중 적어도 하나에서 효과적이다. 각각의 가능성이 본 발명의 독립된 실시양태를 나타낸다.

특정 실시양태에 따라, 피부 건강을 개선시키는 것은 습진 및/또는 피부병, 특히, 심상성 건선, 편평 태선, 담관염 및 심상성 어린선, 어린선을 비롯한 어린선의 증상을 완화시키는 것; 수포성 장애 (예컨대, 심상성 천포창)를 예방하는 것; 정상적인 피부 항상성을 유지시키는 것; 피부 상처 치유를 촉진시키는 것; 및 이들의 임의 조합을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 각각의 가능성이 본 발명의 독립된 실시양태를 나타낸다.

피부 수화/탈수 값은 당업자에게 공지되어 있는 것과 같은 임의의 방법에 의해 측정될 수 있다. 일부 실시양태에 따라, 미리 결정된 문턱값은 본 발명의 추출물을 투여하기 이전에 측정된 값이다. 다른 실시양태에 따라, 미리 결정된 문턱값은 건강한 피부를 가진 개체로부터 수득된 평균값이다. 추가의 실시양태에 따라, 미리 결정된 문턱값은 피부 장애가 있는 개체로부터 수득된 평균값이다.

피부 매개변수는 당업자에게 공지되어 있는 것과 같은 임의의 방법에 의해 측정될 수 있다. 피부 장벽 기능의 상태를 측정하는 일반 방법으로는 경표피 수분 손실 (TEWL) 값을 측정함으로써 피부 탈수를 조사하고/거나, 피부의 보습 지수 (% 또는 임의 단위)를 측정함으로써 피부 수화를 조사하는 것을 포함한다.

특정 실시양태에 따라, 호호바 식물 또는 그의 부위를 추출하는 데 사용되는 극성 용매는 물, 에탄올, 프로필렌 글리콜, 부틸렌 글리콜, 메탄올, 글리세롤, 프로판올, 부탄올, 디프로필렌 글리콜, 펜틸렌 글리콜, 헥실렌 글리콜, 디메틸 포름아미드, 아세토니트릴, 디메틸 설폭시드, 디클로로메탄, 에틸 아세테이트, 테트라히드로푸란, 포름산, 아세트산 및 아세톤 또는 이들의 임의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 각각의 가능성이 본 발명의 독립된 실시양태를 나타낸다.

특정의 전형적인 실시양태에 따라, 극성 용매는 물이다. 다른 실시양태에 따라, 추출물은 물 및 적어도 하나의 추가의 극성 용매를 이용하여 수득된다. 특정 실시양태에 따라, 추출 매질은 30-90%의 물 및 10-70%의 극성 용매를 포함한다.

특정 실시양태에 따라, 추출물은 뿌리, 줄기, 잎, 종자, 과실 및 이들의 임의 조합을 비롯한, 생 호호바 식물 부위 중 어느 하나로부터 수득된다. 일부 실시양태에 따라, 추출물은 호호바 식물의 지상부로부터 수득된다. 현재 전형적인 실시양태에 따라, 추출물은 잎 및 줄기로부터 수득된다. 특정 실시양태에 따라, 잎의 색상은 녹색에서 갈색으로 갈변된다. 다른 실시양태에 따라, 줄기의 직경은 1-5 mm, 전형적으로 약 2 mm이다. 호호바 식물은 자웅이체이며, 식물 부위는 자성 식물 뿐만 아니라, 암성 식물로부터, 및 어느 발생 단계에서든 채취될 수 있다.

특정 실시양태에 따라, 신선한 호호바 식물 부위를 추출을 위해 채취한다. 다른 실시양태에 따라, 식물 부위를 추출 이전에 부분적으로 또는 완전하게 건조시킨다.

특정 실시양태에 따라, 식물 또는 그의 부위를 선택된 추출 용매에 첨가한다. 다른 실시양태에 따라, 용매를 첨가하기 이전에, 식물 또는 그의 부위를 조각으로 절단한다. 추가의 실시양태에 따라, 용매를 첨가하기 이전에, 식물 또는 그의 부위를 분쇄시킨다.

건조시키거나, 절단시키는 옵션을 제외하면, 호호바 식물 물질은 본 발명의 교시에 따라 추출되기 이전에는 어느 가공 처리의 대상이 되지 못한다는 것을 명확하게 이해할 수 있을 것이다. 따라서, 본 발명의 교시에 따라 사용되는 호호바 식물 부위는 본원 하기에서 정의되는 바와 같이 "생 식물 물질"로 지칭된다.

특정 실시양태에 따라, 조성물은 조성물의 총 중량에 대하여 0.003% 내지 30% 중량 대 중량 (w/w)의 농도로 호호바 추출물을 포함한다. 일부 실시양태에 따라, 호호바 추출물은 0.3% 내지 10% 범위이다. 전형적인 실시양태에 따라, 조성물 중 호호바 추출물의 농도는 조성물의 총 중량에 대하여 1% 내지 3% (w/w)이다.

특정 실시양태에 따라, 조성물은 미용적으로 또는 약학적으로 허용되는 희석제, 담체 또는 부형제를 추가로 포함하는, 화장료 또는 약학 조성물이다.

일부 실시양태에 따라, 화장료 또는 약학 조성물은 지방, 유화제 및 공-유화제, 친수성 또는 친유성 겔화제, 보존제, 용매, 향료, 충전제, 친수성 및 친유성 필터, 염료, 중화제, 침투 증진제 및 중합체를 포함하나, 이에 한정되지 않는, 화장품 및/또는 피부과 분야에서 유용한 첨가제를 추가로 포함한다. 이러한 각종 첨가제의 양은 당업자에게 공지되어 있는 것과 같이, 화장품 및 피부과용 제제에서 통상 사용되는 것이다. 각각의 가능성이 본 발명의 독립된 실시양태를 나타낸다.

특정의 전형적인 실시양태에 따라, 적어도 하나의 첨가제는 제한하는 것은 아니지만, 아스코르브산, 그의 유도체 및 상응하는 염, 글리세린, 시트르산, 아세트산, 설파이트, 페녹시에탄올, EDTA, 디에틸말레이트, t-부틸-히드로퀴논, 아미노구아니딘, 니코틴산/니아신, 니코틴아미드, 염화제1주석, 글루코스 옥시다제, 폴리비닐폴리피롤리돈, 인산 및 미용적으로/약학적으로 허용되는 염기로 이루어진 군으로부터 선택된다. 각각의 가능성이 본 발명의 독립된 실시양태를 나타낸다.

추가의 실시양태에 따라, 화장료 또는 약학 조성물은 적어도 하나의 추가의 식물 추출물 및/또는 미세조류 추출물을 추가로 포함한다.

특정의 현재 전형적인 실시양태에 따라, 조성물은 호호바의 물 추출물 및 히알루로네이트를 포함하나, 이에 한정되지 않는, 단기간 또는 장기간 보습 효과를 가진 작용제; 토코페롤, Co-Q 10, 아스코르브산 및 그의 유도체 및 카로티노이드를 포함하나, 이에 한정되지 않는, 라디칼 제거제 및/또는 항산화제; 아보벤존 (부틸 메톡시디벤조일메탄), 이산화티탄, 산화아연 및 카로티노이드를 포함하나, 이에 한정되지 않는, UV 필터; 및 류코줌 아에스티붐(Leucojum aestivum) 추출물을 포함하나, 이에 한정되지 않는, 주름 방지제로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 추가 활성 성분을 포함한다.

특정 실시양태에 따라, 조성물은 국소 투여를 위한 것이다. 임의의 국소용 제제는 상기 제제가 추출물 활성을 보존하는 한, 당업계에 공지되어 있는 바와 같이 사용될 수 있다. 특정 실시양태에 따라, 조성물은 수성 액제, 크림, 로션, 유중수 또는 수중유 에멀젼을 비롯한, 에멀젼, 마이크로에멀젼 또는 나노에멀젼, 겔, 세럼 및 밀크로 이루어진 군으로부터 선택되는 형태로 투여된다.

추가의 실시양태에 따라, 조성물은

(a) 호호바 식물 또는 그의 임의 부위를 적어도 하나의 극성 용매와 혼합하는 단계;

(b) 액체 추출물을 형성하는 데 충분한 기간 동안 혼합물을 인큐베이션시키는 단계;

(c) 호호바 식물 또는 그의 부위를 제거하고, 액체 추출물을 수집하는 단계;

(d) 액체 추출물을 여과하는 단계; 및

(e) 여액을 수집하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된 호호바 추출물을 포함한다.

특정 실시양태에 따라, 혼합물을 인큐베이션시키는 단계는 10 분 내지 24 시간, 전형적으로 40 분 내지 12 시간, 더욱 전형적으로 40 분 내지 2 시간의 기간 동안 인큐베이션시키는 것을 포함한다.

추가의 실시양태에 따라, 인큐베이션 온도는 20-120℃, 전형적으로 60-120℃, 더욱 전형적으로 80-110℃ 범위이다.

특정 실시양태에 따라, 단계 (c)는 호호바 식물 부위를 제거하기 위해 원심분리하는 것을 포함한다. 다른 실시양태에 따라, 단계 (d)는 시브(seive)를 통해 액체 추출물을 여과하는 것을 포함한다. 추가의 실시양태에 따라, 본 방법은 공극 크기가 1.5 ㎛ 미만인 필터를 통해 단계 (e)의 여액을 여과하는 것을 추가로 포함한다.

본 발명의 다른 목적, 특징 및 이점은 하기 상세한 설명 및 도면으로부터 자명해질 것이다.

도 1은 대조군 케라티노사이트 (도 1A) 및 처리된 케라티노사이트 (도 1B)에서 조사된 유전자의 발현을 보여주는 것이다. 막 상에서의 유전자 패턴은 하기 표 1에 제시되어 있는 바와 같다.
도 2는 호호바 추출물로 처리된 후 24 시간 경과시, 케라티노사이트의 RNA 정질 및 정량 조절을 보여주는 것이다. 도 2A: 대조군: RNA 농도: 2.45 ㎍/㎕; RNA 정량: 36.75 ㎍. 도 2B: 0.03% 호호바 추출물로 처리된 배양물: RNA 농도: 1.97 ㎍/㎕; RNA 정량: 29.55 ㎍.
도 3은 3% 호호바 추출물을 포함하는 조성물이 피부 완화에 미치는 시각적 효과를 입증하는 것이다.

본 발명의 상세한 설명

본 발명은 피부 구조, 강도 및 응집력을 개선시켜 피부 장벽 기능을 촉진시키는 데 유용한 호호바 식물의 추출물을 개시한다. 본 발명의 추출물은 적어도 하나의 극성 용매, 특히, 물 중에 침지된 식물 부위로부터 제조된다.

예상 밖으로, 본 발명은 이에 호호바의 수성 및/또는 추가의 극성 용매 추출물이 피부 구조 및 장벽 기능을 유지 및/또는 촉진시키는 데 고도로 효과적이라는 것을 보여준다. 어떤 특정의 이론 또는 작용 기전으로 제한하고자 하지 않으면서, 이러한 개선은 피부 관리 시스템에서 중요한 성분의 활성화에 기인하는 것일 수 있다. 특히, 본 발명의 추출물은 특히, 데스모플라킨 I & II, 신데캔 1, 인보루크린 및 피브로넥틴을 코딩하는 유전자를 비롯한, 적절한 장벽 기능의 기전에 관여하는 중요한 유전자, 및 사이토케라틴 5, 사이토케라틴 2E/A 및 사이토케라틴 1 및 사이토케라틴 10을 코딩하는 유전자를 비롯한, 케라티노사이트 분화에 관여하는 유전자의 발현을 유의적으로 증진시켰다.

따라서, 본 발명의 추출물의 유의적인 이점은 적절한 피부 구조 및 장벽 기능에 기여하는 피부 조직의 내인성 기전을 활성화시킬 수 있는 그의 능력이다. 피부 구조 및 장벽 기능을 유지 및/또는 촉진시키는 것이 피부 건강 및 동안 외모(juvenile appearance)에 긍정적인 영향을 미치는 다수의 매개변수에 영향을 미친다.

따라서, 한 측면에서, 본 발명은 극성 용매 중 호호바 또는 그의 임의 부위의 추출물을 포함하는 조성물을 대상체의 피부에 투여하여 피부 장벽 기능을 유지 또는 촉진시키는 단계를 포함하는, 피부 장벽 기능을 유지 및/또는 촉진시키는 방법을 제공한다.

본원에서 사용되는 바, "생 호호바 식물 물질" 또는 "생 식물 물질"이라는 용어는 적어도 하나의 극성 용매를 이용하여 추출하기 위해 채취되는, 신선한 또는 건조된, 호호바 식물의 임의 부위를 의미한다. 선택적으로, 생 물질을 용매에 첨가하기 전에, 조각으로 절단하거나, 세절하거나, 분쇄시킨다. 상기 용어는 적어도 하나의 극성 용매를 이용하여 추출하기 이전에 초임계 CO₂ (SCCO₂) 추출, 가수분해, 오일 분획 제거 또는 이들의 임의 조합 중 어느 하나로 적용된 호호바 식물 물질은 포함하지 않는다는 것을 명확하게 이해할 수 있을 것이다.

본 발명의 특정 실시양태에 따라, 생 식물 물질은 호호바 식물의 지상부를 포함한다.

본원에서 사용되는 바, 호호바 식물을 언급할 때, "지상부"라는 용어는 줄기, 잎, 꽃, 종자, 과실, 새싹 등을 비롯한, 지상에 있는 식물의 모든 부위를 의미한다. 특정의 현재 전형적인 실시양태에 따라, 본 발명의 추출물은 호호바 줄기 및/또는 잎로부터 제조된다. 특정 실시양태에 따라, 식물 생 식물 물질은 종자를 포함하지 않는다.

호호바는 자웅이체 유형의 식물이며, 즉, 웅성 기관 및 자성 기관이 다른 식물에 위치한다. 본 발명의 추출물은 모든 종류의 식물로부터 제조될 수 있고, 식물 부위는 추출을 위해 어느 발생 단계에서든 채취될 수 있다.

특정 실시양태에 따라, 본 발명의 추출물은 자성 호호바 식물 또는 그의 부위로부터 제조된다. 다른 실시양태에 따라, 본 발명의 추출물은 웅성 호호바 식물 또는 그의 부위로부터 제조된다. 특정의 전형적인 실시양태에 따라, 추출물은 자성 및 웅성 식물 또는 그의 부위의 조합으로부터 제조된다.

특정 실시양태에 따라, 신선한 호호바 식물 부위는 추출을 위해 채취된다. 다른 실시양태에 따라, 식물 부위는 추출 이전에 부분적으로 또는 완전하게 건조된다.

추출 이전에 당업자에게 공지되어 있는 바와 같은 임의의 방법을 사용하여 식물 물질을 건조시킬 수 있다. 예를 들어, 식물 물질을 오븐 건조, 일광 건조시킬 수 있거나, 또는 주변 조건하에 암실에서 건조시킬 수 있다. 본원에서 사용되는 바, "부분적으로 건조된"이라는 용어는 식물 물질이 초기 수분 함량의 약 5% 내지 80%를 포함하는 것을 의미한다. 전형적으로, 부분적으로 건조된 물질은 약 10% 이하의 수분을 함유한다. 식물 물질과 관련하여 사용될 때, "완전하게 건조된"이라는 용어는 건조 조건하에서 추가로 인큐베이션시킬 경우, 추가의 중량 손실이 검출될 수 없는 상태를 의미한다.

건조 상태와는 상관없이, 호호바 식물 부위를 추출을 위해 전체로 채취할 수 있고, 이를 추출 용매 중에 넣기 전에, 다양한 크기의 조각으로 절단할 수 있거나, 또는 분말로 분쇄할 수 있다.

이어서, 식물 또는 그의 부위를 극성 용매 중에 넣는다. 본원에서 사용되는 바, "극성 용매"라는 용어는 유전율이 약 5 이상인 용매를 의미한다. 특정 실시양태에 따라, 본 발명의 추출물은 용매로서 물을 이용하여 제조된다. 다른 실시양태에 따라, 추출을 위해 사용되는 용매는 제한하는 것은 아니지만, 에탄올, 프로필렌 글리콜, 부틸렌 글리콜, 메탄올, 글리세롤, 프로판올, 부탄올, 디프로필렌 글리콜, 펜틸렌 글리콜, 헥실렌 글리콜, 디메틸 포름아미드, 아세토니트릴, 디메틸 설폭시드, 디클로로메탄, 에틸 아세테이트, 테트라히드로푸란, 포름산, 아세트산 및 아세톤으로 이루어진 군으로부터 선택된다, 각각의 가능성이 본 발명의 독립된 실시양태를 나타낸다. 추가의 실시양태에 따라, 추출은 적어도 2종의 극성 용매의 조합을 이용하여 수행된다. 특정 실시양태에 따라, 추출은 물 및 적어도 하나의 추가의 극성 용매를 이용하여 수행된다.

극성 용매(들) 중 식물 부위의 인큐베이션 시간은 사용되는 식물 부위, 그의 크기 및 건조 상태에 따라 달라질 수 있다. 특정 실시양태에 따라, 인큐베이션 시간은 10 분 내지 24 시간 범위이다.

호호바 식물 물질로부터 극성 물질을 용매 내로 추출하는 것은 임의적으로 가열, 초음파, 마이크로파 적용, 및 당업계에 공지되어 있는 다른 방법에 의해 증진될 수 있다. 비록 극성 용매(들)를 사용하여 극성 물질을 추출하는 것이 본 발명의 추출을 제조하는 데 일반적으로 사용되는 방법이기는 하지만, 예를 들어, 식물 부위의 냉압착과 같은, 당업계에 공지되어 있는 임의의 다른 방법에 의해 추출된 극성 물질 또한 본 발명의 범주 내에 포함된다는 것을 명확하게 이해할 수 있을 것이다.

포유동물에서 피부 장벽 기능과 관련된 변수로는 경표피 수분 손실, 각질층 수분, 피부 표면 pH, 및 피부 온도를 포함한다.

수분은 피부 기능을 위해서는 중심적으로 중요하고, 피부 최상층의 수분 비율이 그의 외관에 상당한 영향을 미친다. 생체(living) 표피층에서 모든 수송 및 다른 생리학적 기능을 유지시키는 것 이외에도, 수분은 각질층(horny layer) (각질층(stratum corneum))에서도 또한 매우 중요하다. 각질층에 존재하는 효소는 오직 특정의 수화도 및 pH 값에서만 그의 활성을 적절하게 발휘할 수 있다. 수분 함량 및 효소 활성이 불충분하면, 피부 외관은 건성의 비늘 모양이 되는데, 이는 손상되기 쉽고, 민감하며 소양성을 띠는 경향이 있다. 전체적으로 보면, 피부 외관은 잔주름 및 주름살이 있는 불량한 상태이다.

피부의 세포내 분자 및 결합 조직에 대한 추가의 손상과, 피부를 통한 추가 수분 손실을 유도하는, 피부 보호 장벽에 대한 외부 공격에 의해 유발되는 손상을 감소시키기 위해, 피부 수분 함량을 유지시키고, 건성 피부를 예방하는 것은 주로 피부 조직의 완전성 및/또는 그의 회복 능력을 유지시킴으로써 달성될 수 있다.

당업계에 공지되어 있는 임의의 피부 장벽 기능 평가 방법을 본 발명의 교시에 따라 사용할 수 있다. 피부 장벽 기능의 특징을 규명하는 기법으로는 수분 함량 및 피부 표면을 통한 수분 손실을 측정하는 다수의 비침습 방법을 포함한다. 이러한 측정법 중 하나는 보습력 측정(corneometry)으로 알려져 있는 방법을 사용하여 피부 수화 (HYDR)를 측정하는 것이다. 상기 기법은 유전 매질에 따른 피부의 거동에 기인하는 피부의 정전 용량(capacitance)을 측정하고, 10-20 ㎛ 두께의 각질층을 평가한다. 비록 이것이 피부의 수분 함량의 척도이기는 하지만, 이는 장벽 기능에 대한 유일의 간접적인 척도이다. 그럼에도 불구하고, 손상, 대사 현상, 또는 국소 요법에 대하여 다양한 생리학적 조건하에서 HYDR 정도와 관련이 있을 수 있다. 인간 피부 평가에 대해 기록된 값은 연구된 피부 부위에 따라 다르다. 그럼에도 불구하고, 인간 대상체 군에서 개별 또는 평균 HYDR 점수의 변화가 피부 건강 지수로서의 역할을 할 수 있으며, 전형적으로, 값이 높을수록 더욱 바람직한 것으로 간주된다.

또 다른 방법은 불감 수분 손실에 대한 피부 장벽의 완전성을 평가하는 것이다. 상기 기법은 표피 표면을 통한 경표피 수분 손실 (TEWL)을 측정함으로써 수행된다. TEWL 값은 피부를 통해 손실되는 수분의 손실률 (g/h·㎡)의 척도이고, 수분을 보유할 수 있는 피부 능력의 예측치이다. 상기 방법은 피부 표면상의 10 mm 층에서 확립된 수증기 밀도 구배의 측정치에 기초한다. 이는 피부의 수분-장벽 기능에 대한 가능한 손상 정도를 나타내는 지수이다. 피부를 통해 일어나는 수분 손실은 보통 표피를 통한 수동 확산에 의해 일어나기 때문에, TEWL 값이 더 높다는 것은 수분 손실이 더 크다는 것으로 나타내며, 이는 예컨대, 자극제 노출 동안 발생할 수 있는 것 또는 아토피 피부염과 같이, 각질층의 장벽 기능 손상 증가와 일관된다.

하기 예시되는 바와 같이, 이에 본 발명은 본 발명의 호호바 추출물을 포함하는 조성물을 팔뚝 피부에 도포하면, TEWL 값의 현저하게 감소된다는 것을 보여준다. 따라서, 본 발명의 조성물은 피부 장벽 기능을 촉진시키는 데 효과적이라는 것이 명백하게 입증된다.

본 발명의 조성물이 피부 구조, 강도 및 장벽 기능에 미치는 효과는 피부의 생체역학적 특성을 조사함으로써 추가로 측정될 수 있다. 유변학적 평가(rheological evaluation)는 활성제의 국소 적용에 의해 유도된 변동을 측정하는 비침습성 생체내 측정 방법으로서, 당업자에게 공지되어 있는, 현재의 바람직한 방법이다. 피부는 2가지 유변학적 특징: 탄력성이 높은 점탄성 특성 및 구역에 따라 달라지는 천연 장력을 가진다. 피부내 장력선에 의해 형성되는 네트워크는 랑거(Langer) 네트워크로 불린다. 결합 조직의 유변학적 특성은 근본적으로 콜라겐 및 엘라스틴 섬유로 이루어진 3차원 네트워크인 상기 조직의 구조에 기인한다. 본 방법을 통해 얕은 피부층의 생물학적 신장성 및 탄력성의 변동을 평가할 수 있고, 본 방법은 전형적으로 쿠토미터(Cutometer)를 사용함으로써 수행된다. 원칙적으로는 피부는 설정된 기간 동안 일정한 진공 압력에 의해 프로브의 오리피스(orifice)로 흡입된다. 피부가 프로브 내로 침투되는 깊이는 마찰 및 기계적 변형의 효과를 제거하기 위해 프로브의 오리피스의 개구부에 위치하는 두 광학 프리즘에 의해 측정된다. 수득된 결과에 기초하여, 하기 생체역학적 매개변수를 분석할 수 있다: 장력, 견고성, 긴장성 (잔류 신장이 감소된다면, 피부는 더 긴장성을 띤다), 및 탄력 (즉시 신장이 증가한다면, 피부는 더 큰 탄력을 가진다).

피부 강도, 특히, 각질층의 강도 및 장벽 기능은 테이프 박리 프로토콜에 따라 추가로 평가할 수 있다. 이러한 검정의 원리에 따라, 패치를 지원자에 신속하게 (초 범위로) 도포한다. 이어서, 패치를 천천히 제거하고, 제거된 SC의 양을 정량화하여 분석한다. 분석은 제거된 SC 중량, 단백질 양 및/또는 시각적 영상화에 의해 이루어질 수 있다 (문헌 [Dreher, F et al., 1998. Acta Derm Venereol 78:186-189]).

본원 하기에서 예시되는 바와 같이, 본 발명의 조성물은 비-자극성이고, 피부에 의해 고도로 용인된다. 추가로, 조성물은 유의적인 연화 효과 및 장근 효과를 제시하였다. 어떤 특정의 이론 또는 작용 기전으로 제한하고자 하지 않으면서, 이러한 연화 및 항노화 효과는 피부 장벽 기능을 증가시킬 수 있는 조성물의 능력에 기인하는 것일 수 있다.

상처 치유는 다중의 세포-부착 분자 발현에 의해 간접적으로 조절되는 과정이다. 세포 부착 분자 부재시에는 상처 치유가 지연되는 것으로 알려져 있다. 따라서, 상처 치유가 세포 부착 단백질의 자극을 입증할 수 있다. 따라서, 본 발명의 조성물은 세포 단층 배양물에서의 상처 치유에 기여할 수 있거나, 또는 다공성 막을 통해 이동할 수 있는 세포의 능력에 기여할 수 있다. 상처 치유 진행 과정은 스크래치 검정에 의해 평가될 수 있다. 상기 검정은 특정 단백질의 과다발현 (또는 넉다운)이 세포 이동에 미치는 효과를 연구하기 위해 천연 세포 또는 형질감염된 세포에서 수행된다.

시험관내 스크래치 검정은 시험관내에서 세포 이동을 측정할 수 있는 쉽고, 비용면에서 저렴하고, 잘 발달된 방법이다. 기본 단계는 세포 단층에 "스크래치"를 생성하고, 스크래치를 봉하기 위한 세포 이동 시작 시점에 및 세포 이동 동안 일정한 간격으로 영상을 포착하고, 본 발명의 조성물의 존재 또는 부재하에서 수득된 영상을 비교함으로써 세포의 이동 속도를 정량화하는 것을 포함한다. 다른 방법과 비교하여, 상기 시험관내 스크래치 검정은 생체내 상처 치유 동안의 세포 이동을 모방하는 세포 이동에 대하여 세포-기질 및 세포-세포 상호작용이 미치는 효과에 관해 연구하는 데 특히 적합하고, 이는 원하는 경우, 세포내 이벤트를 모니터링하기 위해 살아있는 세포를 영상화하는 것과 호환된다. 동질성 세포 집단의 이동을 모니터링하는 것 이외에도, 상기 방법은 또한 스크래치의 선단부에서 개체 세포의 이동을 측정하기 위해 채용될 수 있다.

본 발명의 추출물이 피부 장벽 기능에 미치는 효과는 또한 당업자에게 공지되어 있는 임의의 방법에 의해, 생체내 또는 시험관내에서 평가될 수 있다. 예를 들어, 재구성된 인간 피부의 경표피 전기 저항 (TEER)을 측정하여 세포층의 견고함을 평가할 수 있다. TEER은 피부 장벽의 기능을 보여주는 직접적인 척도이다; 이는 조직 그 자체의 두께 뿐만 아니라, 그 자체의 구조에 의해 제공되는 조직의 전체 저항 모두를 반영한다. 외부 화합물의 침투를 방해하는 이층 지질 구조의, 밀착 연접부 수준에서 세포간 접촉의 완전성을 반영한다. TEER은 경표피 수분 손실의 측정치인, 생체내에서 측정된 TEWL와 반비례 관계이다; TEWL이 높을수록, 장벽 기능에의 손상은 더 많은 반면, TEER의 높을수록, 장벽 기능에의 손상은 더 적다. TEER 측정을 위해, 조사되는 재구성 피부를 소량의 생리학적 완충제 (PBS)를 포함하는 챔버에 삽입하고, 추가량의 완충제를 조직의 상부 표면에 적용시킨다. 상단에 전극을 포함하는 챔버 뚜껑을 삽입하고, 저항을 측정한다. (전형적으로, 처리 및 비처리된 조직의) TEER 값을 밀리포어(Millipore)-ERS 볼트/옴-미터를 사용하여 측정하였다. TEER은 전형적으로 TEER 50으로, 즉, TEER이 50%만큼 감소되었을 때의 시간으로 제시된다.

추가의 방법은 면역조직화학 염색법을 이용하여 시험관내 피부 모델/재구성된 인간 표피의 형태학적 분석에 의해 필라그린 및/또는 데스모글레인1 및/또는 클라우딘1의 발현을 정량화하는 것을 사용한다. 예를 들어, 프란츠(Franz)형 확산 세포를 사용하여, 또는 챔버 시스템을 사용함으로써 재구성된 인간 표피 또는 생체외 피부 생검/경피를 사용하여 참조 분자/염료의 침투 역학적 성질을 측정할 수 있다. 재구성된 인간 표피 또한 트랜스글루타미나제 활성 검정에 사용될 수 있다. 추가로, 피부 샘플에서 중요한 유전자의 발현 프로파일 또한 피부 장벽 상태의 지표로서의 역할을 할 수 있다.

세포-세포 부착은 형태 발생 동안 중요한 과정이다. 이를 통해 이웃 세포간의 확실한 밀착이 이루어질 수 있으며, 이는 세포 분리, 및 상이한 조직의 형태학적 및 기능적 분화를 위해 필요하다. 세포-세포 부착은 건강한 조직에서 필수적인 역할을 하고, 피부 조직의 완전성을 유지하는 데 있어 특히 중요한 역할을 한다.

피부 외층 중의 중요한 구조 물질로는 케라틴으로 명명되는 섬유성 구조 단백질 패밀리를 포함한다. 케라틴 단량체는 다발로 조립되어 중간형 필라멘트를 형성하게 되는데, 이는 인성(tough)을 띠며, 불용성이고, 파충류, 조류, 양서류, 및 포유동물에서 발견되는 강성의 비광물화된 조직을 형성한다.

본원 하기에서 예시되는 바와 같이, 본 발명은 이에 본 발명의 추출물이 세포간 부착 및 케라티노사이트 분화에 관여하는 폴리펩티드를 코딩하는 수개의 중요한 유전자의 발현을 증진시킨다는 것을 보여준다. 어떤 특정의 이론 또는 작용 기전으로 제한하고자 하지 않으면서, 피부 장벽 기능의 유지 및/또는 촉진은 상기 유전자의 발현에 기인하는 것일 수 있다.

데스모플라킨은 (인간에서) DSP 유전자에 의해 코딩된, 고분자량의 (약 332 kDa) 동종이량체 단백질이다. 데스모플라킨은 중간형 필라멘트를 데스모솜 판에 고정시키는, 기능성 데스모솜의 필수 성분이다. 데스모플라킨의 N-말단은 데스모솜에서 그의 국재화에 요구되며, 플라코필린 1 및 플라코글로빈의 N-말단과 상호작용한다. N-말단은 추가로 스펙트린(Spectrin) 반복부라고 불리는 반복 도메인으로 구성된, "플라킨 도메인"으로 명명되는 영역으로 세분화된다. 플라킨 도메인 중 일부는 결정 구조인 것으로 분석된 반면, 전체 플라킨 도메인은 X선 작은 각 산란을 사용하여 밝혀진 바, 비-선형 구조인 것으로 나타났고, 스펙트린 반복부로 간주되는 예상 밖의 결과는 선형 배향으로 관찰된다. 데스모플라킨의 C-말단은 중간형 필라멘트와 결합한다. 데스모플라킨의 중간 영역의 꼬인 코일형 막대형 도메인은 그의 동종이량체화를 담당한다. 상기 유전자의 돌연변이는 여러 심근 질환 및 각피증 뿐만 아니라, 자가면역 질환 부종양성 천포창의 원인이 된다. 데스모플라킨은 플라코글로빈, 비멘틴, 케라틴 1 데스민, PKP1 및 PKP2와 상호작용하는 것으로 밝혀졌다.

II형 세포 골격 5 케라틴 (K5; CK5; KRT5)으로도 또한 알려져 있는 케라틴 5, 및 케라틴 2E 또는 케라틴 2로도 또한 알려져 있는 케라틴 2A는 II형 사이토케라틴이다. II형 사이토케라틴은 단층 및 중층 상피 조직의 분화 동안 공-발현된 이형 케라틴 쇄가 쌍으로 배열된 염기성 또는 중성 단백질로 구성되어 있다. II형 사이토케라틴 유전자는 염색체 12q12-q13 영역에 클러스터링되어 있다.

인간에서, 케라틴 5는 KRT5 유전자에 의해 코딩되고, 이는 구체적으로, 패밀리 멤버 KRT14와 함께 표피의 기저층에서 발현되어 케라틴 중간형 필라멘트를 형성한다. 이러한 필라멘트는 강한 네트워크로 조립되어 케라티노사이트의 부착, 및 표피의 피부 하부층에의 고정이라는 결과를 일으킨다. 케라틴 중간형 필라멘트의 네트워크는 피부에 강도 및 탄성을 제공하고, 피부가 마찰 및 다른 일상의 신체적 스트레스에 의해 손상되는 것으로부터 보호해 준다.

케라틴 5는 또한 멜라닌으로 명명되는 색소를 생산하는 세포 구조인 멜라노솜 수송에서도 중요할 역할을 할 수 있다고 제안된 바 있다. 상기 구조를 케라티노사이트로 수송하는 것은 정상적인 피부 착색 (색소침착)에 중요하다.

케라틴 2A는 인간에서 KRT2A 유전자에 의해 코딩된다. 이는 특히 대부분의 신체 부위로부터의 정상적인 성인 표피 조직의 상부 가시층 및 기저층 위에서 발현된다.

케라틴 1 또한 케라틴 패밀리의 멤버이다. 이는 구체적으로 패밀리 멤버 케라틴 10과 같이 표피의 가시층 및 과립층에서 발현된다. 케라틴 1의 돌연변이는 손바닥 및 발의 발바닥이 이환되는 선천성 수포 비늘증 모양 홍색 피부증의 변종과 관련이 있다. I형 세포 골격 케라틴 10, 사이토케라틴-10 (CK-10) 또는 케라틴-10 (K10)으로도 또한 알려져 있는 케라틴 10은 인간에서 KRT10 유전자에 의해 코딩된다. 케라틴-10은 중간형 필라멘트 (IF) 단백질의 슈퍼패밀리에 속하는, I형 (산성) 사이토케라틴 패밀리의 멤버이다.

신데캔(syndecan) 1은 인간에서 SDC1 유전자에 의해 코딩된 단백질이다. 상기 유전자에 의해 코딩된 단백질은 막 통과 (I형) 헤파란 설페이트 프로테오글리칸이고, 신데캔 프로테오글리칸 패밀리의 멤버이다. 신데캔은 세포 결합, 세포 신호 전달, 및 세포 골격 조직화를 매개하고, 신데캔 수용체는 HIV-1 tat 단백질의 내재화에 요구된다. 신데캔-1 단백질은 내재 막 단백질로서의 기능을 하고, 세포 증식, 세포 이동 및 세포외 기질 단백질에 대한 그의 수용체를 통해 세포-기질 상호작용에 참여한다. 수개의 상이한 종양 종류에서 변경된 신데캔-1 발현이 검출되었다. 상기 유전자에 대하여 수개의 전사체 변이체가 존재할 수 있지만, 현재까지는 단 2개의 전장(full-length)의 성질이 기술되었다. 이 둘은 상기 유전자의 주요 변이체를 나타내며, 둘 모두 같은 단백질을 코딩한다.

세포 기질 부착 조절 인자 (CMAR) 유전자가 콜라겐에의 세포 부착에 영향을 미치고, 이를 통해 가능하게는 종양 억제에 관여할 수 있는, 신호 전달 분자인 것으로 제안되었다.

인보루크린은 인간에서 IVL 유전자에 의해 코딩되는 단백질이다. 상기 유전자는 칼팩틴 I 경쇄, 트리코히알린, 프로필라그린, 로리크린, 및 칼시클린 중에서 1q21로 지도화된다. 인보루크린은 표피 및 다른 중층 편평 상피의 케라티노사이트에 존재하는, 고도로 반응성이 높고, 가용성인 트랜스글루타미나제 기질 단백질이다. 이는 처음에는 세포의 세포질에서 출현하지만, 최종적으로는 트랜스글루타미나제에 의해 막 단백질과 가교됨으로써 각화된 외피가 조립되는 동안 글루타밀 공여체로서의 기능을 하면서, 원형질 막 아래의 불용성 외피 형성에 도움을 준다. 인보루크린은 유극층에서 합성되고, 과립층에서 트랜스글루타미나제 효소에 의해 가교되고, 이를 통해 고도로 안정화된다. 따라서, 세포를 구조적으로 지지함으로써 세포는 미생물에 의한 침입에 대해 저항할 수 있다.

피브로넥틴은 인테그린으로 명명되는 막 관통 수용체 단백질에 결합하는, 고분자량 (~440 kDa)의, 세포 기질의 당단백질이다. 피브로넥틴은 인테그린 이외에도, 세포외 기질 성분, 예컨대, 콜라겐, 피브린, 및 헤파란 설페이트 프로테오글리칸 (예컨대, 신데캔)에도 또한 결합한다. 피브로넥틴은 한쌍의 이황화 결합에 의해 연결된 거의 동일한 두 단량체로 구성된, 단백질 이량체로서 존재한다. 피브로넥틴 단백질은 단일의 유전자로부터 제조되지만, 그의 프리-mRNA(pre-mRNA)의 선택적 스플라이싱을 통해 수개의 이소폼이 생성된다. 하기 두 종류의 피브로넥틴이 척추동물에 존재한다: 혈액 혈장의 주요 단백질 성분 (300 ㎍/ml)이고, 이는 간에서 간세포에 의해 생산되는, (이전에는 "냉-불용성 글로불린" 또는 CIg로 명명된) 가용성 혈장 피브로넥틴; 및 세포외 기질의 주요 성분인 불용성 세포 피브로넥틴. 이는 다양한 세포에 의해, 주로 섬유아세포에 의해 가용성 단백질 이량체로 분비되고, 이어서, 복합 세포-매개 과정에서 불용성 매트릭스로 조립된다. 피브로넥틴은 세포 부착, 성장, 이동, 및 분화에서 중요한 역할을 하며, 예컨대, 상처 치유 및 배 발생과 같은 과정에서 중요하다. 변경된 피브로넥틴 발현, 분해, 및 조직화는 암 및 섬유증을 비롯한, 다수의 병리와 관련이 있다.

본 발명의 조성물은 당업자에게 공지된 바와 같이, 임의의 미용적으로 및/또는 약학적으로, 전형적으로는, 피부과용으로 적합한 형태로 제제화될 수 있다. 특정 실시양태에 따라, 제제는 연고 또는 오일 기재의, 로션, 겔, 또는 크림 형태 뿐만 아니라, 분무가능한 액체 형태이다. 본 발명의 조성물에 적합한 다른 화장품 제품 형태로는 예를 들어, 에멀젼, 무스, 립밤, 립글로스, 로션, 마스크, 연고, 포마드, 세럼 또는 스프레이를 포함한다.

활성제로서 호호바 추출물 이외에도, 본원에 기술된 바와 같이, 본 발명의 조성물은, 활성 화합물의 약학적으로 또는 미용적으로 사용될 수 있는 제제로의 가공 처리가 용이하게 이루어질 수 있도록 하는 보조제를 포함하는, 적합한 약학적으로 또는 미용적으로 허용되는 담체, 희석제, 또는 부형제를 함유할 수 있다. 제제화 및 투여 기법에 관한 추가의 상세한 설명은 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co.; Easton, Pa.)]의 최신판에 제공되어 있다. 본 발명의 호호바 추출물을 함유하는 조성물은 당업계에 공지되어 있는 방식으로, 예컨대, 종래의 혼합, 용해, 과립화, 당의정 제조, 분쇄(levigating), 유화, 캡슐화, 포획, 또는 냉동 건조 방법에 의해 제조될 수 있다.

특정 실시양태에 따라, 본 발명의 조성물은 지방, 유화제 및 공-유화제, 친수성 또는 친유성 겔화제, 착색제, 향료, 피부 연화제, 보습제, 보존제, 비타민, 킬레이트제, 증점제, 충전제, 용매, 친수성 및 친유성 필터, 염료, 중화제, 침투 증진제 중합체 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는, 하나 이상의 화합성인 미용적으로 또는 약학적으로 허용되는 첨가제 뿐만 아니라, 다른 식물성 약품, 예컨대, 알로에, 캐모마일 등을 추가로 포함한다.

특정 실시양태에 따라, 첨가제는 아스코르브산, 그의 유도체 및 상응하는 염, 글리세린, 시트르산, 아세트산, 설파이트, 페녹시에탄올, EDTA, 디에틸말레이트, t-부틸-히드로퀴논, 아미노구아니딘, 니코틴산/니아신, 니코틴아미드, 염화제1주석, 글루코스 옥시다제, 폴리비닐폴리피롤리돈, 인산 및 미용적으로/약학적으로 허용되는 염기로 이루어진 군으로부터 선택된다. 각각의 가능성이 본 발명의 독립된 실시양태를 나타낸다.

특정의 전형적인 실시양태에 따라, 조성물은 국소적으로 적용된다.

당업자는 호호바 추출물을 포함하는 조성물 뿐만 아니라, 적용 요법의 유효 용량 또는 양을 결정할 수 있다. 유효 용량 및 요법이란 예를 들어, TEWL을 측정함으로써, 또는 본원에 기술된 바와 같은, 그리고, 당업자에게 공지되어 있는 바와 같은 임의의 다른 방법에 의해 측정될 수 있는 바와 같이, 피부의 피부 장벽 기능을 유지 또는 촉진시키는 데 필요한 것을 의미한다.

특정 실시양태에 따라, 본 발명의 조성물은 조성물의 총 중량에 대하여 0.003% 내지 30% 중량 대 중량 (w/w)의 농도로 호호바 추출물을 포함한다. 일부 실시양태에 따라, 호호바 추출물은 0.3% 내지 10% 범위이다. 전형적인 실시양태에 따라, 조성물 중 호호바 추출물의 농도는 조성물의 총 중량에 대하여 1% 내지 3% (w/w)이다.

정확한 용량은 개체의 특정 상태의 중증도, 개체의 일반적 건강 상태, 개체의 연령, 체중, 및 성별, 섭식, 투여 시간 및 빈도, 약물 조합(들), 반응 감수성, 및 치료에 대한 내성/반응을 비롯한, 치료를 필요로 하는 개체와 관련된 특정 인자에 따라 의사에 의해 결정될 것이다. 일반 가이드로서, 장기 지속형 화장품 조성물은 특정 제제의 반감기 및 제거율에 따라 1일 1회, 매 2 내지 4일마다, 매주, 또는 매 2주마다 1회씩 투여될 수 있다. 이러한 투여량 수준의 변동은 당업자에게 주지되어 있는 바와 같이, 최적화를 위한 표준의 실험상 통상의 작업을 사용하여 조정될 수 있다. 특정 투여량 및 전달 방법에 관한 가이던스는 문헌에 제공되어 있고, 일반적으로 당업계의 종사자는 이용가능하다.

추가의 또 다른 측면에 따라, 본 발명은

(a) 호호바 식물 또는 그의 임의 부위를 적어도 하나의 극성 용매와 혼합하는 단계;

(b) 액체 추출물을 형성하는 데 충분한 기간 동안 혼합물을 인큐베이션시키는 단계;

(c) 호호바 식물 또는 그의 부위를 제거하고, 액체 추출물을 수집하는 단계;

(d) 액체 추출물을 여과하는 단계; 및

(e) 여액을 수집하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된 호호바 추출물을 포함하는, 피부 구조, 강도, 응집력 또는 이들의 임의 조합을 유지 및/또는 촉진시켜 상기 피부 장벽 기능을 유지 또는 촉진시키는 데 효과적인 조성물을 제공한다.

특정 실시양태에 따라, 혼합물을 인큐베이션시키는 단계는 10 분 내지 24 시간, 전형적으로, 40 분 내지 12 시간, 더욱 전형적으로, 40 분 내지 2 시간의 기간 동안 인큐베이션시키는 것을 포함한다. 추가의 실시양태에 따라, 인큐베이션 온도는 20-120℃, 전형적으로, 60-120℃, 더욱 전형적으로, 80-110℃ 범위이다.

특정 실시양태에 따라, 단계 (c)는 호호바 식물 부위를 제거하기 위해 원심분리하는 것을 포함한다. 다른 실시양태에 따라, 단계 (d)는 시브를 통해 액체 추출물을 여과하는 것을 포함한다. 추가의 실시양태에 따라, 본 방법은 공극 크기가 1.5 μ 미만인 필터를 통해 단계 (e)의 여액을 여과하는 것을 추가로 포함한다.

하기 실시예는 본 발명의 일부 실시양태를 더욱 충분하게 설명하기 위해 제공된다. 그러나, 이는 어느 방식으로든 본 발명의 넓은 범위를 한정하는 것으로 해석되지 않아야 한다. 당업자는 본 발명의 범주로부터 벗어남 없이 본원에 개시된 원리에 대한 다수의 변형 및 수정을 쉽게 고안해낼 수 있다.

실시예

실시예 1: 호호바 추출물 제조

오염되지 않은 생생한 호호바 식물의 색상은 암록색 내지 갈색이다. 따라서, 추출을 위해 채취된 식물 부위를 그 색상에 대해 조사하였다. 밝은 노란색을 띠는 잎, 또는 반점, 특히, 흰색 반점이 있는 식물 부위는 제거하였다. 이어서, 식물 부위를 부분적으로 또는 완전하게 건조시켰다. 마른 식물 부위를 실온에서 1:2 내지 1:5 비, 전형적으로, 1:2 비 (식물 부위:물)로 물에 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 가열하고, 밤새도록 방치하여 냉각시켰다. 30 분 동안 4,500 rpm으로 원심분리하여 (시그마 라보르젠트리푸겐(Sigma Laborzentrifugen) 3-10 3,645 g) 고체를 제거하였다. 상청액을 수집하고, 1.2 마이크론 필터를 통해, 이어서, 0.45 마이크론 필터를 통해, 및 마지막으로 0.22 마이크론 필터를 통해 여과하고, 여액을 수집하였다. 여액에 1% 아스코르브산 1% 및 50% 글리세린을 첨가하여 최종 조성물을 형성하였다.

조성에 대한 명세 사항은 하기와 같았다: 건중량: 36-41 mg/g; pH - 4-4.3, 트롤록스 등가물(Trolox Equivalent) (TAA) 120 mM. 폴리페놀 값: 22,200 mg/L; 갈산 등가물 (GAE), 투명한 용액, 갈변.

실시예 2: 호호바 추출물이 케라티노사이트 유전자 발현 프로파일에 미치는 효과

0.03%의 호호바 추출물 (hBA15m-NHEK 배치 15/10/07, 본원 상기 실시예 1에 기술된 바와 같이, 잎:물의 비 = 1:2; 페놀 함량 7,617.7 mg/L 갈산 등가물; 트롤록스 등가물 108.6 mM; 보존제 미첨가인 것으로 제조)를 이용하여 cDNA 어레이 유전자 발현 연구를 수행하였다. 검정용 배지 (하기 참조)를 사용하여 공급원의 추출물을 희석하였다.

물질 및 방법

생물학적 모델

세포 종류: 정상적인 인간 표피 케라티노사이트 (NHEK)

3차 계대 접종시 K₀₇₄ 사용

배양 조건 37℃, 5% CO₂

배양 배지: 표피 성장 인자 (EGF) 0.25 ng/ml- 뇌하수체

추출물 (PE) 25 ㎍/ml (인비트로겐 3700015)

겐타마이신 25 ㎍/ml (시그마(Sigma) G1397)로 보충된

케라티노사이트-SFM (인비트로겐(Invitrogen) 17005-034)

검정용 배지: 겐타마이신 25 ㎍/ml (시그마 G1397)로 보충된

케라티노사이트-SFM (인비트로겐 17005-034)

예비 세포독성 검정

- 플레이트 포맷: 96-웰

- 세포/웰: 20000 NHEK, 케라티노사이트-SFM-EGF-PE 배지

- 실험 반복 횟수: 6

- 농도 범위: 하기 표 2 참조

- 세포/화합물 접촉: 24 시간

- 평가 매개변수: MTT 감소 검정 및

현미경 (대물렌즈 x 10)을 이용한 형태 관찰

배양 및 처리

정상적인 인간 표피 케라티노사이트 (NHEK) 세포를 컨플루언스될 때까지 배양 배지 중 12 웰 플레이트에 시딩한 후, 검정용 배지에 놓았다. 이어서, 호호바 추출물을 시험 웰에 첨가하고, 세포를 5% CO₂ 하에 37℃에서 24시간 동안 배양하였다. 단독으로 검정용 배지에서만 배양된 세포를 대조군으로 사용하였다. 각 조건 (시험/대조군)에 대해 n=3으로 수행하였다.

인큐베이션 시간 종료시, 세포를 PBS 용액 (인비트로겐 14190094) 중에서 세척하고; 300 ㎕의 트리리에이전트(TriReagent)를 첨가하고, 세포를 즉시 -80℃에서 냉동시켰다.

미니-칩에 의한 차별적 발현 분석

유전자 발현 연구 전용의, 특별히 스크리닝 목적에 맞게 적합화된 표준 미니 칩 (바이오얼터너티브스(BIOalternatives: 프랑스)에 의해 제조)을 사용하여 유전자 발현 분석을 수행하였다.

바이오얼터너티브스 스폿팅 장치 (비-접촉 스포터, 피에조 테크놀리지(piezzo technology), 피에조레이(Piezorray), 퍼킨엘머(PerkinElmer)) 및 관심 cDNA 특이 마커를 사용하여 상기 나일론 칩 (< 3 ㎠)을 스폿팅하였다. 현재 사용되는 포맷을 소형화할 수 있고, 비용상 효율적으로 분석할 수 있도록 하는 사유 기술을 사용하여 분석하였다. 이는 역전사를 위한 주형으로서의 mRNA 및 ³³P 표지 (최적의 감도)를 사용하는 것에 기초하여 수행되었다. 본 실험에서 조사된 유전자에 관한 요약 설명은 본원 하기 표 1에 제시되어 있다.

각 배양물의 mRNA는 트리리에이전트 (표준 프로토콜)를 사용하여 추출하였다. [³³P]-dATP 및 올리고dT를 사용하여 mRNA의 직접 역전사에 의해 다중 cDNA ³³P-표지화된 표적을 제조하였다. RNA 정질 조절은 도 2에 제시되어 있다.

이들 표지화된 cDNA 표적을, 미니-칩에 공유적으로 고정되어 있는 특이 cDNA 프로브에 하이브리드화시켰다. 철저하게 세척한 후, 그의 프로브에 하이브리드화된 각각의 특이 표적의 상대적인 양을 포스포르이미징(PhosphorImaging)에 의해 밝혀내었다.

"사이클론" 포스포르이미저("Cyclone" PhosphorImager) (패커드(Packard) 장치; 72 h 전시) 및 영상 분석 소프트웨어인 이미지콴트(ImageQuant) TL (아머샴 바이오사이언시즈(Amersham Biosciences))을 사용하여 스폿 방사능을 직접적으로 정량화함으로써 분석을 수행하였다.

[표 1]

정량적 RT - PCR

역전사

- 공급업체의 권고 사항에 따라 트리리에이전트를 사용하여 각 샘플로부터 전체 RNA를 추출하였다.

- DNA프리(DNAfree) 시스템 (앰비온(Ambion) 참조 1906)을 사용하여 잠재된 오염 물질인 미량의 DNA를 제거하였다.

- 올리고(dT) 및 슈퍼스크립트(Superscript) II 역전사 효소 (인비트로겐)의 존재하에서 mRNA의 역전사를 수행하였다.

실시간 PCR 분석

공급업체가 권고하는 프로토콜에 따라 라이트사이클러(LightCycler)® 시스템 (로슈 몰레큘러 시스템즈 인코퍼레이티드(Roche Molecular Systems Inc.))을 사용하여 PCR 반응을 3중으로 수행하였다. 시험되는 프라이머의 분석 조건을 결정한 후, 상기 시스템을 통해 신속하고, 매우 효과적으로 PCR 반응을 진행할 수 있었다. 상기 시스템은 2개의 구성 요소로 이루어졌다:

써모-사이클러: 이는 신속한 PCR 적용을 위해 최적화된 것으로서; 이를 통해 반응 혼합물 내에서 열 전달이 매우 신속하게 일어날 수 있다.

형광계: 이를 통해, 신장 사이클 동안 이중 가닥 DNA에 특이적으로 결합하는 염료인 인터컬레이팅 염료 SYBR 그린(Green) I의 형광을 일정하게 측정할 수 있다 (검출 파장: 521 nm).

후보 유전자의 정량적 분석을 위해 실시간 (RT) PCR을 사용한 결과, 상기 기술된 미니-칩 검정에서 발현이 증가된 것으로 나타났다. 60S 리보솜 단백질 L13A (RPL13A, 수탁 번호 NM_002423)로도 또한 지정된, 23 kDa의 고 염기성 단백질을 내부 표준 대조군으로서 사용하였고, 이를 증폭시켜 483 bp의 단편을 수득하였다. 3가지 유전자: 사이토케라틴 5, 데스모플라킨 및 시르투인 1을 조사하였다.

정량적 PCR 데이터 관리

형광 염료의 증폭된 DNA 내로의 혼입은 PCR 사이클 동안 연속하여 측정하였다. 결과를 "형광 강도" 대 "PCR 사이클" 플롯으로 연역하였고, 이를 통해 각 마커에 대한 상대적인 발현 (RE) 값을 평가할 수 있었다.

RE 계산을 위해 선택된 값은 형광 곡선의 "출력점"이다. 고려시 되는 마커의 경우, 최고점은 사이클 횟수이고, 최저점은 mRNA 정량이다.

RE 값은 하기 식에 따라 임의 단위 (AU)로 표시하였다:

(1/2^{사이클 횟수}) x 10⁶.

데이터 관리

마이크로소프트 엑셀(Microsoft Excel)® 소프트웨어를 이용하여 원시 데이터를 분석하였다.

평균의 표준 오차 (sem)를 평균 =

으로 계산하였다.

생존율(%)은 (OD 샘플/OD 대조군) x 100으로 측정되었다.

결과

세포독성 예비 검정

표 2에는 호호바 추출물이 케라티노사이트 배양물의 생존율에 미치는 효과가 요약되어 있다.

[표 2]

미니-칩에 의한 유전자 발현 분석

시험된 모든 유전자와 함께 미니-칩 디자인은 본원 상기 표 1에 제시되어 있다. 도 1은 24 시간 동안 0.03% 호호바 추출물로 처리된 케라티노사이트 (도 1B)와의 비교로 대조군 케라티노사이트 (도 1A)에서의 시험된 유전자의 발현을 보여주는 것이다.

정량적 RT - PCR 에 의한 유전자 발현 분석

하기의 유전자 발현 분류를 사용하였다:

하기 유전자가 자극된 것으로 나타났다:

II형 세포 골격 5 케라틴 (KRT5)으로도 또한 지정된 사이토케라틴 5 (K5; CK5); 58 kDa 사이토케라틴: 229%의 상대적인 발현 (=자극);

데스모플라킨 I & II (DSP; DPI & DPII): 185%의 상대적인 발현 (=중간 정도의 자극);

II형 세포 골격 2 표피 케라틴 (KRT2E; KRT2A)으로도 또한 지정된 사이토케라틴 2E/A (K2E; CK2E); (지멘스형(Siemens) 수포성 표피 어린선): 160%의 상대적인 발현 (=중간 정도의 자극);

II형 세포 골격 11 케라틴 (KRT11)으로도 또한 지정된 사이토케라틴 1 (K1; CK1); 67 kDa 사이토케라틴; 헤어 알파 단백질: 156%의 상대적인 발현 (=중간 정도의 자극);

CD 138 항원으로도 또한 지정된 신데캔-1 (SYND1; SDC1); 160%의 상대적인 발현 (=중간 정도의 자극);

세포 기질 부착 조절 인자 (CMAR; CAR): 146%의 상대적인 발현 (=중간 정도의 자극);

I형 세포 골격 10 케라틴으로도 또한 지정된 사이토케라틴 10 (K10): 146%의 상대적인 발현 (=중간 정도의 자극);

인보루크린: 154%의 상대적인 발현 (=중간 정도의 자극);

피브로넥틴 (FN): 146%의 상대적인 발현 (=중간 정도의 자극);

실시예 3: 호호바 추출물의 독성 평가

48 시간 동안 폐쇄형 패치하에 건강한 성인 지원자의 등쪽 피부에 호호바 추출물을 단일 적용시킴으로써 상기 추출물에 대한 피부 내성을 측정하였다.

연구 부위에 피부 병변이 없고, 연구 구두 요건을 이행할 수 있는, 18-70세의 여성 또는 남성 지원자 24명이 본 연구에 참여하였다. 본원 상기 실시예 1에 기술된 바와 같이 제조된 호호바 추출물 (잎:물의 비 = 1:2; 페놀 함량 13,110 mg/L 갈산 등가물; 트롤록스 등가물 92.5 mM)을 X2로 희석시켰다. 패치하에 각 지원자의 등쪽 피부에 0.02 ml를 적용시켰다. 육안으로 관찰되는 자극 마크, 흉터 또는 결과 판독을 방해할 수 있는 임의의 이상이 없는 표면에 생성물을 적용시키기 위해 접촉 구역에 대한 검사는 연구 직전에 수행하였다. 음성 대조군으로서 공(empty) 패치를 동시에 적용시켰다.

48 시간 경과 후, 패치를 제거하고, 피부과 종사자를 통해 미리 결정된 스케일에 따라 상기 부위를 홍반; 건조증/박리; 부종 및 수포에 대해 평가하였다.

상기 실험 조건하에서, 48 시간 동안 폐쇄형 패치하에 50%로 희석된 호호바 추출물 0.02 ml를 24명의 건강한 지원자에 단일 적용시킨 후, 추출물을 그의 1차 피부 내성에 관하여 비-자극성인 것으로 정의하였다.

실시예 4: 경표피 수분 손실 ( TEWL ) 측정

11명의 건강한 여성 지원자 (43세 내지 67세)가 참가한 이중 맹검 검정으로 경표피 수분 손실 (TEWL)을 조사하였다. 1차 적용 전 (D0), 및 적용 후 28일째 (D28) 테왐미터(Tewameter)® (커리지 & 카자카(Courage & Khazaka))를 이용하여 지원자의 팔뚝에서 TEWL을 측정하였다. 각 팔뚝마다 2회씩 측정하고, 평균을 계산하였다. D0 및 D28 사이에 TEWL 변화율(%)을 계산하였다. TEWL 감소는 피부 장벽 기능이 개선되었음을 나타낸다.

각 지원자는 검정용 생성물 (5%의 호호바 추출물을 함유하는 겔, 그에 대한 명세 사항은 본원 하기 표 3에 제시되어 있다) 및 위약 (호호바 추출물을 함유하지 않고, 대신 글리세린 및 물로 대체되어 있는다는 점을 제외하면 동일한 겔)을 사용하였다. 각 생성물을 무작위화된 패턴으로 다른 팔뚝에 적용시켰다.

[표 3]

28일간의 시험 동안 매일 1일 2회에 걸쳐 (아침 및 저녁) 지원자 본인이 검정용 생성물 및 위약 생성물을 지정 부위에 적용시켰다. 적용시키기 전에 상기 부위를 세정하고; 생성물이 완전히 침투될 때까지 생성물을 문질렀고; 양은 필요에 따라 달리했다.

측정된 두 TEWL 측정값의 평균을 계속해서 실험값으로 하였다. D0 및 D28 사이의 TEWL 변화율(%)이 하기 표 4에 제시되어 있다.

[표 4]

28일 동안 1일 2회에 걸쳐 11명의 여성 지원자가 적용한 5% 호호바 추출물을 포함하는 검정용 생성물은 TEWL은 12%의 감소를 보이며, 피부 장벽 기능을 통계학상 유의적으로 개선시킨 것으로 나타난 반면, 위약 겔의 경우, TEWL 변화는 유의적이지 않았다.

실시예 5: 호호바 추출물이 피부 응집력 및 외관에 미치는 효과

더마톱(Dermatop)® (이오테크(EOTECH: 프랑스))을 사용하여 피부 완화 매개변수를 조사함으로써 호호바 추출물의 항노화 효과를 평가하였다. 피부 완화 매개변수로는 평균 거칠기 (Ra); 최대 진폭 (Rt); 및 평균 완화 (Rz)를 포함하였다.

검정은 간섭 무늬 투영을 이용하여 영상으로부터의 위상 영상을 계산하는 것에 기초하였다. 이어서, 상기 영상을 통해 각 지점의 높이를 계산할 수 있었다. 획득 소프트웨어를 통해 2D 및 3D로 측정할 수 있고, 관심 구역을 따라 분포된 50개의 수직 프로파일 상의 피부 완화에 대한 매개변수를 측정할 수 있었다. 자동 재배치 시스템을 통해 측정 구역을 다시 정확하게 확인할 수 있었다.

스물 여섯명 (26명)의 건강한 여성 지원자 (46-64세)가 본 연구에 참가하였다. 적용 방식은 본원 상기 실시예 4에 기술되어 있는 바와 같았다. 검정용 생성물은 3%의 호호바 추출물을 함유하는 겔 (IBRG앱쳐(IBRGapture)® 지정, 그에 대한 명세 사항은 본원 하기 표 5에 제시되어 있다) 및 위약 (호호바 추출물을 함유하지 않고, 대신 활성 겔 중에서 추출물이 기여하는 수준에 상응하는 비율로 물, 글리세린 및 소듐 메타비설파이트로 대체되어 있는다는 점을 제외하면 동일한 겔, 그리고, 여기에는 활성 생성물의 최종 색상과 매치되도록 하기 위해 적절한 FD&C 착색제가 첨가되어 있음)을 사용하였다.

[표 5]

연구 매개변수는 하기와 같았다:

(1) Ra: 평균 거칠기 (㎛): 이 매개변수의 감소는 연화 효과의 특징이 된다; (2) Rz: 평균 완화 (㎛): 모든 고저간 높이의 평균; (3) Rt: 완화 진폭 (㎛): 고저간 높이가 가장 큰 5개의 평균.

이들 매개변수 (Rt 및 Rz) 중 하나의 감소는 생성물의 장근 효과의 특징이 된다.

생성물 적용 이전 (D0) 및 이후 (D28)에 모든 매개변수를 측정하였다. 종합 결과는 본원 하기 표 6에 제시되어 있다. 피부에 대한 시각적 효과는 도 3에 제시되어 있다.

[표 6]

본 연구 조건하에서 호호바 추출물을 함유하는 검정용 생성물을 28일 동안 사용하였을 때, 하기와 같은 결과가 유도되었다:

- 평균 거칠기 (Ra)가 평균 -2.1 ㎛, 즉, -6% 만큼 유의적으로 감소;

- 65%의 대상체에서 연화 효과가 관찰됨;

- 평균 완화 (Rz)가 평균 -8.6 ㎛, 즉, -8% 만큼 유의적으로 감소;

- 완화 진폭 (Rt)이 평균 -18.0 ㎛, 즉, -9% 만큼 유의적으로 감소; 및

- 65% 내지 73%의 대상체에서 장근(tensor) 효과가 관찰됨.

요약하면, - 평균 거칠기의 유의적인 감소가 관찰되었는데, 이는 활성 생성물의 유의적인 연화 효과를 나타내는 것이다. 평균 완화의 유의적인 감소 및 완화 진폭의 유의적인 감소가 관찰되었으며, 이를 통해 활성 생성물의 유의적인 장근 효과가 나타난다.

실시예 6: 호호바 추출물이 세포 응집력에 미치는 효과

D-스쾀(D-Squam)®을 이용하여 팔뚝으로부터 제거된 피부 샘플을 분석함으로써 호호바 추출물 (본원 상기 실시예 5에 기술된 IBRG앱쳐®)이 각질층 응집력에 미치는 효과를 평가하였다. D-스쾀® 적용시 가해지는 압력은 Q덤(QDerm)®을 이용하여 조절하였다.

콴티스쾀(QuantiSquam)® 소프트웨어와 함께 스킨 이미지 애널라이저(Skin Image Analyser)® (S.I.A®)를 이용하여 샘플 분석을 수행하고; 박리 표면에 표준화된 방식 (35)으로 조광하고, 컴퓨터에 연결된 디지털 카메라로 관찰하였다. 연구 면적은 1 ㎠였다.

제거된 비늘이 점유하고 있는 표면 (㎟) 및 박리 지수 (점유 표면과 세포층 두께 사이의 비)를 측정하기 위해 수득된 디지털 영상을 그레이 레벨(grey level)로 분석하였다.

매우 조밀한 구역을 팔뚝 위에 그 범위를 한정지었다. D-스쾀®을 이용하여 제1 구역 상에서 제1 샘플을 채취함으로써 비늘의 기초 정량 (t0)을 정의하였다. 검정용 생성물 IBRG앱쳐® 적용 후 즉시 (t1) 및 다양한 역학적 성질하에서 (ti) 다른 샘플을 채취하였다.

t1과 t0 사이의 차이가 생성물 적용에 의해 제거된 비늘의 정량에 관한 정보를 제공한다.

(ti-tO)과 (t1-tO) 사이의 차이는 검정용 생성물에 기인하는 각질층의 응집력에 관한 정보를 제공한다: 적용 후 즉시인 시점에서보다 적용 후 2시간 경과시에 더 적은 양의 비늘이 샘플링되었다면, 이는 생성물이 각질세포 사이의 응집력을 증가시킴에 따라, 피부에 그대로 남아있다는 것을 의미한다.

구체적인 실시양태에 관한 상기의 설명이 본 발명의 일반적인 성질을 충분히 밝혀냄에 따라 본 발명자들 이외의 당업자들은 현 지식을 적용시킴으로써 과도한 실험없이, 및 일반 개념으로부터 벗어남 없이 상기의 구체적인 실시양태를 쉽게 변형시킬 수 있고/있거나, 다양한 적용을 위해 적합화시킬 수 있으며, 따라서, 그러한 개조 및 변형은 개시된 실시양태의 등가물의 의미 및 범위 내에서 이해되어야 하고, 이해되도록 하고자 한다. 본원에서 사용된 전문어 또는 용어는 설명 목적을 위한 것이며, 제한하고자 하는 것은 아님을 이해하여야 한다. 개시된 다양한 기능을 수행하기 위한 수단, 물질, 및 단계는 본 발명으로부터 벗어남 없이 다양한 대체 형태를 취할 수 있다.

Claims (21)

1. 활성 성분으로서 극성 용매 중의 호호바 (시몬드시아 키넨시스(Simmondsia chinensis)) 식물 또는 그의 부위의 추출물을 포함하는 조성물을 대상체의 피부에 투여하여 피부 장벽 기능을 유지 또는 촉진시키는 단계를 포함하는, 피부 구조, 강도, 응집력 또는 이들의 임의 조합을 유지 및/또는 촉진시키는 방법.
2. 제1항에 있어서, 피부 장벽 기능을 유지 또는 촉진시키는 것이 피부 탈수율을 유지 또는 감소시키는 것; 피부 수화 값을 유지 또는 촉진시키는 것; 환경 위해로부터의 보호를 유지 또는 촉진시키는 것, 및 이들의 임의 조합 중 적어도 하나를 포함하는 것인 방법.
3. 제1항에 있어서, 상기 방법이 피부 건강, 피부 완전성, 피부 견고성, 피부 신장성, 피부 탄력성, 전반적인 피부 외관, 및 이들의 임의 조합을 유지 또는 개선시키는 것 중 적어도 하나에서 효과적인 것인 방법.
4. 제3항에 있어서, 피부 건강을 개선시키는 것이 습진, 피부병, 심상성 건선, 편평 태선, 어린선, 심상성 어린선 및 담관염의 증상을 완화시키는 것; 수포성 장애를 예방하는 것; 정상적인 피부 항상성을 유지시키는 것; 피부 상처 치유를 촉진시키는 것 및 이들의 임의 조합 중 적어도 하나를 포함하는 것인 방법.
5. 제3항에 있어서, 전반적인 피부 외관을 촉진시키는 것이 주름살(wrinkles) 및 주름(lines)을 포함하는 노화의 시각적 징후 및 날씨에 퇴화된(weathered) 피부를 예방하는 것; 피부 표면을 고르게 하는 것; 피부 모공 크기를 축소시키는 것, 또는 이들의 임의 조합 중 적어도 하나를 포함하는 것인 방법.
6. 제1항에 있어서, 피부 구조, 강도, 응집력 또는 장벽 기능을 촉진 또는 유지시키는 것이 미리 결정된 문턱값과의 비교로 결정되는 것인 방법.
7. 제6항에 있어서, 미리 결정된 문턱값이 조성물을 피부에 투여하기 이전에 측정된 값인 것인 방법.
8. 제6항에 있어서, 미리 결정된 문턱값이 건강한 피부를 가진 개체로부터 수득된 평균값인 것인 방법.
9. 제6항에 있어서, 미리 결정된 문턱값이 피부 장애가 있는 개체로부터 수득된 평균값인 것인 방법.
10. 제1항에 있어서, 극성 용매가 물, 에탄올, 프로필렌 글리콜, 부틸렌 글리콜, 메탄올, 글리세롤, 프로판올, 부탄올, 디프로필렌 글리콜, 펜틸렌 글리콜, 헥실렌 글리콜, 디메틸 포름아미드, 아세토니트릴, 디메틸 설폭시드, 디클로로메탄, 에틸 아세테이트, 테트라히드로푸란, 포름산, 아세트산, 아세톤 및 이들의 임의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
11. 제10항에 있어서, 극성 용매가 물인 것인 방법.
12. 제10항에 있어서, 극성 용매가 물과 에탄올, 프로필렌 글리콜, 부틸렌 글리콜, 메탄올, 글리세롤 및 아세톤 중 적어도 하나인 것인 방법.
13. 제1항에 있어서, 조성물이 미용적으로 또는 약학적으로 허용되는 희석제, 담체 또는 부형제를 추가로 포함하는 화장료 또는 약학 조성물인 것인 방법.
14. 제13항에 있어서, 화장료 또는 약학 조성물이 국소 적용을 위한 것으로 제제화된 것인 방법.
15. 제1항에 있어서, 조성물이 적어도 하나의 추가 활성 성분을 추가로 포함하는 것인 방법.
16. 제1항에 있어서, 호호바 추출물이
    a. 호호바 식물 또는 그의 임의 부위를 적어도 하나의 극성 용매와 혼합하는 단계;
    b. 액체 추출물을 형성하는 데 충분한 기간 동안 혼합물을 인큐베이션시키는 단계;
    c. 호호바 식물 또는 그의 부위를 제거하고, 액체 추출물을 수집하는 단계;
    d. 액체 추출물을 여과하는 단계; 및
    e. 여액을 수집하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된 것인 방법.
17. 제16항에 있어서, 인큐베이션 온도가 20℃-120℃ 범위인 것인 방법.
18. 제16항에 있어서, 단계 (e)의 여액이 공극 크기가 1.5 μ 미만인 필터를 통해 추가로 여과되는 것인 방법.
19. 제16항에 있어서, 호호바 식물 부위가 뿌리, 줄기, 잎, 종자, 과실 또는 이들의 임의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
20. 제16항에 있어서, 식물 부위가 잎인 것인 방법.
21. 제16항에 있어서, 호호바 식물 또는 그의 부위가 신선한 형태, 부분적으로 건조된 또는 완전하게 건조된 형태로 이루어진 군으로부터 선택되는 형태인 것인 방법.

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