KR20140090974A - 향상된 수확량 관련 형질을 갖는 식물 및 이의 제조 방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명에서 NUG 또는 NAC 상향 조절 유전자 (up-regulated gene)로 언급되는, NAC1 또는 NAC5-코딩 유전자의 과발현시 상향 조절된 핵산의 식물에서의 발현을 조절함으로써 식물의 수확량 관련 형질을 향상시키는 방법이 제공된다. 또한 NUG의 발현이 조절된 식물체가 제공되며, 상기 식물체는 해당 야생형 식물 또는 다른 대조구 식물에 비하여 향상된 수확량 관련 형질을 갖는다. 또한 비생물적 스트레스 조건 하에서 생장한 식물에서의 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드 코딩 핵산의 발현 조절을 포함하는, 식물에서의 비생물적 스트레스 내성을 부여하는 방법이 제공된다. NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드 코딩 핵산을 발현하는 식물은 증가된 비생물적 스트레스 내성을 가질 뿐만 아니라, 해당 야생형 식물에 비해 향상된 수확량 관련 형질 및/또는 변형된 뿌리 형태를 갖는다. 또한 상기 방법에 유용한 유전자 구축물 및 상기 방법에 의해 생산된 식물체가 제공된다.
Description
본 발명은 일반적으로 분자생물학 분야에 관한 것이며, 본 발명에서 NUG 또는 "NAC up-regulated gene"으로 언급되는, NAC1 또는 NAC5-코딩 유전자의 과발현에 의해 상향 조절된 핵산의 식물에서의 발현을 조절함으로써 식물의 수확량 관련 형질을 향상시키는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 NUG의 발현이 조절된 식물체에 관한 것이며, 상기 식물체는 해당 야생형 식물 또는 다른 대조구 식물에 비해 향상된 수확량 관련 형질을 갖는다. 본 발명은 또한 비생물적 스트레스 조건 하에서 생장한 식물에서의 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 발현 조절을 포함하는, 식물에서의 비생물적 스트레스 내성을 부여하는 방법에 관한 것이다. NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 발현하는 식물은 증가된 비생물적 스트레스 내성을 가질 뿐만 아니라, 해당 야생형 식물에 비해 향상된 수확량 관련 형질 및/또는 변형된 뿌리 형태를 갖는다. 본 발명은 또한 본 발명의 방법에 유용한 유전자 구축물 및 본 발명의 방법에 의해 생산된 식물체를 제공한다.
세계 인구의 증가와 농업에 유용한 경작지의 감소는 농업의 효율성을 증가시키는 연구에 박차를 가하게 만들었다. 작물 및 원예농업 향상을 위한 전통적인 방식은 바람직한 특성을 갖는 식물체를 동정하기 위하여 선택적 육종기법을 이용한다. 그러나, 상기 선택적 육종기법에는 몇가지 약점이 있는데, 즉 노동집약적이며 양친으로부터 원하는 형질이 항상 전해지는 것이 아닌 이종의 유전적 요소를 갖는 식물로 귀착된다는 것이다. 분자생물학의 진보는 인간이 동물 및 식물의 생식질 (germplasm)을 변형하게 허용했다. 식물유전공학은 유전물질 (전형적으로 DNA 또는 RNA 형태)의 분리와 조작 및 이 유전물질을 식물체 내로 도입하게 했다. 상기 기술은 다양한 향상된 경제적, 농업적, 원예적 형질을 갖는 작물 또는 식물을 제공하는 능력이 있다.
특히 경제적으로 관심 있는 형질은 증가된 수확량이다. 수확량은 보통 작물로부터 경제적 가치의 측정할 수 있는 산물로 정의된다. 이는 양 및/또는 질의 면에서 정의될 수 있다. 수확량은 몇 요인에 직접적으로 의존되는데, 예를 들면 기관의 수와 크기, 식물체 형상 (예를 들면, 가지의 수), 종자 생산, 잎의 노화 등이다. 뿌리 발달, 양분 흡수, 스트레스 내성, 및 초기 활력 또한 수확량 결정에 중요한 요인일 수 있다. 상기 요인들을 최적화하는 것이 작물 수확량 향상에 기여할 수 있다.
많은 식물의 종자는 인간과 동물의 영양에 중요하므로 종자 수확량은 특히 중요한 형질이다. 옥수수, 벼, 밀, 캐놀라 및 대두와 같은 작물이 종자 자체의 직접적인 소비 또는 가공 종자로 육성된 육류 소비를 통해서 전체 인간 칼로리 흡수량의 절반 이상을 차지한다.
상기 작물들은 설탕, 오일 및 산업적 가공공정에 사용되는 많은 종류의 대사물의 재료이기도 하다. 종자는 배 (어린 줄기와 뿌리의 근원) 및 배유 (발아 동안 및 실생의 초기 생장 동안 배의 양분의 공급원)를 포함한다. 종자 발달에는 많은 유전자가 관여되며, 뿌리, 잎 및 줄기로부터 생장하는 종자로 대사물의 이동이 필요하다. 특히 배유는 탄수화물, 오일 및 단백질의 대사 전구체를 동화하여, 이들을 알곡을 채우기 위한 저장성 고분자로 합성한다.
많은 작물에 있어 또 하나의 중요한 형질은 초기 활력 (early vigour)이다. 초기 활력을 향상시키는 것은 온대 및 열대 벼 품종에 있어 현대 벼 육종 프로그램의 중요한 목표이다. 긴 뿌리는 물에 파종하는 벼에서는 적절하게 토양에 박히기 위하여 중요하다. 벼를 직접 논에 파종한 곳에서와 식물이 물 밖으로 급속히 나와야 하는 곳에서는 긴 줄기가 활력과 연관되어 있다. 조파지에서는 긴 중배축과 자엽초가 좋은 실생 출현 (seedling emergence)에 있어서 중요하다. 식물체 내로 초기 활력을 부여하는 능력은 농업에서 매우 중요하다. 예를 들면, 불충분한 초기 활력은 대서양 연안 유럽에서 옥수수 지대 생식질에 기초한 옥수수 (Zea mays L.) 교배종의 도입에 대해서 제한되어 왔다.
추가의 중요한 형질은 향상된 비생물적 스트레스 내성이다. 비생물적 스트레스는 대다수 주요 작물의 평균 수확량을 50% 이상 감소시키는 전 세계적인 작물 손실의 주요 원인이다 (Wang et al., Planta 218, 1-14, 2003). 비생물적 스트레스는 건조, 염분, 극단적인 기온, 화학적 독성 및 산화적 스트레스에 의해 야기될 수 있다. 비생물적 스트레스에 대한 식물의 내성을 향상시키는 것은 전세계의 농부들에게 매우 경제적 가치가 있는 것이며, 불리한 상황에서 그리고 작물재배가 가능하지 않은 곳에서도 작물재배를 가능하게 한다.
작물 수확량은 따라서 상기 요인들 중 어느 하나를 최적화함으로써 증가시킬 수 있다.
최종 목적에 따라, 임의의 수확량 형질의 변형이 다른 것에 비해 월등히 유리할 수 있다. 예를 들면, 사료 또는 목재 생산, 또는 바이오연료 자원과 같은 적용에 대해, 식물체의 영양기관 부분의 증가가 바람직하며, 곡분, 전분 또는 유지 생산과 같은 경우에는 종자에 관련된 매개변수의 증가가 특히 바람직하다. 종자 매개변수 중에서도 용도에 따라 특정한 일부의 것이 다른 것에 비해 훨씬 중요하다. 종자 크기의 증가 또는 종자 수의 증가의 형태로 다양한 기작이 종자 수확량 증가에 영향을 미칠 수 있다.
광범위하게 연구된 가뭄-반응성 유전자들은 NAC (NAM, ATAF 및 CUC) 유전자 패밀리에 속하는 전사 조절자이다. NAC 유전자 패밀리 멤버는 식물에서만 발견되며, 대다수가 스트레스 반응에 관여한다. NAC 단백질은 고도로 보존된 N-말단, 단백질이 호모다이머 (homodimer) 또는 헤테로다이머 (heterodimer)를 형성할 수 있어서 β-판 구조를 만들 수 있는 DNA 결합 도메인 (Ernst et al., 2004; Hegedus et al., 2003; Jeong et al., 2009; Takasaki et al., 2010; Xie et al., 2000) 및 고도로 가변적인 C-말단 영역 (Zheng et al., 2009)으로 구성된다.
WO 2007/144190은 스트레스가 없는 조건 또는 순한 가뭄 조건 하에서 식물의 수확량을 증가시키는 다양한 NAC-코딩 뉴클레오티드 서열의 용도를 기술한다.
이제 NAC1 또는 NAC5 유전자/핵산의 과발현에 의해 상향 조절된 핵산의 식물에서의 발현을 조절함으로써 식물의 다양한 수확량 관련 형질이 향상될 수 있다는 것이 밝혀졌다. NAC1 또는 NAC5 유전자/핵산의 과발현에 의해 상향 조절된 핵산은 본 발명에서 NUG 또는 NAC 상향 조절 유전자 ( N AC u p-regulated g ene)로 언급된다.
또한, 비생물적 스트레스 조건 하에서 자란 식물에서, 조직 특이적 프로모터에 작동 가능하게 연결된 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 과발현은 해당 야생형 식물에 비해 향상된 수확량 관련 형질 및/또는 변형된 뿌리 형태를 갖는 식물체를 제공한다는 것이 밝혀졌다.
또한, 식물에서 조직 특이적 프로모터에 작동 가능하게 연결된 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 과발현함으로써 식물의 비생물적 스트레스 내성이 부여될 수 있다는 것이 밝혀졌다.
발명의 상세한 설명
본 발명은 본 발명에서 NUG 또는 NAC 상향 조절 유전자 ( N AC u p-regulated g ene)로 언급되는, NAC1 또는 NAC5 유전자/핵산의 과발현에 의해 상향 조절된 핵산의 식물에서의 발현 조절이 대조구 식물에 비해 향상된 수확량 관련 형질을 갖는 식물을 제공한다는 것을 보여준다.
또한, 본 발명은 비생물적 스트레스 조건 하에서 자란 식물에서, 조직 특이적 프로모터에 작동 가능하게 연결된 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 과발현이 해당 야생형 식물에 비해 향상된 수확량 관련 형질 및/또는 변형된 뿌리 형태를 갖는 식물체를 제공한다는 것을 보여준다.
1.
NUG
또는
NAC
상향 조절 유전자
본 발명의 첫 번째 양상에 따라, NUG의 식물에서의 발현 조절 및 임의로 향상된 수확량 관련 형질을 갖는 식물의 선발을 포함하는 대조구 식물에 비해 식물에서 수확량 관련 형질을 향상시키는 방법을 제공한다.
본 발명의 추가 양상에 따라, 본 발명에 기술된 NUG 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 식물에서의 발현 조절 단계 및 임의로 향상된 수확량 관련 형질을 갖는 식물의 선발을 포함하는, 대조구 식물에 비해 향상된 수확량 관련 형질을 갖는 식물을 생산하는 방법을 제공한다.
NUG 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 발현 조절, 바람직하게는 증가를 위한 바람직한 방법은 NUG 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 식물로의 도입 및 발현이다.
이후 "본 발명의 방법에 유용한 단백질"은 본 발명에 정의된 NUG 폴리펩티드를 의미한다. 이후 "본 발명의 방법에 유용한 핵산"은 NUG 폴리펩티드를 코딩하는 것이 가능한 핵산을 의미한다. 식물에 도입되는 핵산 (따라서 본 발명의 방법 수행에 유용한)은 하기에 기재될 유형의 단백질을 코딩하는 임의의 핵산이며, 이후 또한 "NUG 핵산" 또는 "NUG 유전자"라고 칭한다.
본 발명에서 정의된 "NUG 폴리펩티드"는 표 12 또는 표 15에 기재된 폴리펩티드 또는 표 12 또는 표 15에 기재된 임의의 폴리펩티드의 상동체를 의미한다.
본 발명에서 정의된 "NUG" 또는 "NUG 핵산"은 본 발명에서 정의된 NUG 폴리펩티드 또는 이의 상동체를 코딩하는 것이 가능한 임의의 유전자/핵산을 의미한다.
NUG 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 예는 본 발명의 표 12 또는 표 15에 제시했으며, 상기 핵산은 본 발명의 방법 수행에 유용하다. NUG 폴리펩티드의 상동체 또한 본 발명의 방법 수행에 유용하다.
표 12는 비형질전환 대조구에 비해 RCc3:OsNAC1 및 GOS2:OsNAC1 식물체에서 상향 조절된 뿌리 발현 유전자를 나타낸다.
표 15는 비형질전환 대조구에 비해 RCc3:OsNAC5 및/또는 GOS2:OsNAC5 식물체에서 상향 조절된 유전자를 나타낸다.
본 발명의 방법에 사용하기 위한 특히 바람직한 NUG는 하기를 포함한다:
a) O-메틸트랜스퍼라아제, 특히 Os09g0344500, OS10g0118000, OS10g0118200.
b) AAA-유형 ATPase, 특히 OS09g0445700.
c) LRR (Leucine rich repeat), 특히 OS08g0202300.
d) DNA 결합/호메오도메인 (homeodomain), 특히 OS11g0282700.
e) 옥시도리덕타아제 (Oxidoreductase), 20G-Fe(II)옥시게나아제, OS04g0581100.
f) 칼슘 전이 ATPase, 특히 OS10g0418100.
g) 9-시스 에폭시카르티노이드 디옥시게나아제, 특히 OS07g0154100.
h) 신나모일 CoA 리덕타아제 1, 특히 OS02g0811800.
i) LLR 키나아제, 특히 OS07g0251800.
j) WRKY40, 특히 OS09g0417600.
k) Germin-유사 GLP 옥시도리덕타아제, 특히 OS03g0694000.
I) C4 디카르복실레이트 운반체, 특히 OS04g0574700.
m) 프럭토스 비스포스페이트 알돌라아제, 특히 OS08g0120600.
n) MnT, 특히 OS10g0118200.
o) OPDA (Oxo phytodienoic acid) 리덕타아제, 특히 OS06g0215900.
p) 시토크롬 p450, 특히 OS12g0150200.
NUG 폴리펩티드 또는 이의 상동체는 표 12 또는 표 15에 기재된 하나 이상의 폴리펩티드 서열에 대해 적어도 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 전체 서열 동일성을 갖는 것으로 본 발명에서 정의된다.
표 12 및 15에 제시된 NUG 폴리펩티드의 오쏘로그 (orthologues) 및 패럴로그 (paralogues)도 용어 "상동체"에 포함되며, 용어 "오쏘로그" 및 "패럴로그"는 본 발명에 정의되어 있다. 오쏘로그 및 패럴로그는 정의 섹션에 기재된 소위 상호간 블라스트 (reciprocal blast) 탐색을 수행하여 용이하게 동정될 수 있다.
전체의 서열 동일성은 바람직하게는 디폴트 매개 변수 및 성숙 단백질 서열을 이용하여 (즉, 분비 신호 또는 수송 펩티드를 고려하지 않고), GAP 프로그램 (GCG Wisconsin Package, Accelrys)의 Needleman Wunsch 알고리즘과 같은, 전체적인 정렬 알고리즘을 이용하여 결정한다. 일 구현예에서 서열 동일성 수준은 표 12 및 표 15의 폴리펩티드 서열의 전체 길이에 걸친 폴리펩티드 서열의 비교에 의해 측정된다.
서열 동일성 수준은 또한 불확실한 NUG의 상동 패밀리 멤버에서 해당 보존된 도메인 또는 모티프와 비교하여 표 12 또는 표 15의 폴리펩티드 서열 중 하나에 존재하는 하나 이상의 보존된 도메인 또는 모티프의 비교에 의해 측정될 수 있다. 전체적인 서열 동일성에 비해, 서열 동일성은 일반적으로 보존된 도메인 또는 모티프만 고려되었을 때 더 높을 것이다. 용어 "도메인", "시그너처" 및 "모티프"는 본 발명의 "정의" 섹션에 정의되어 있다.
도메인 동정을 위한 도구는 당업계에 알려져 있고, 표 12 또는 표 15의 단백질 서열 또는 그것의 상동 서열의 단백질 서열과 함께 InterPro (Hunter et al., Nucleic Acids Res. 37 (Database Issue):D224-228, 2009)와 같은 데이터베이스로 조회하는 것을 포함한다. 또한, 예를 들면 MEME 알고리즘 (Bailey and Elkan, Proceedings of the Second International Conference on Intelligent Systems for Molecular Biology, pp. 28-36, AAAI Press, Menlo Park, California, 1994)을 이용하는 모티프의 동정이 당업계에 알려져 있다. 이를 위해, 상동 단백질 서열의 세트가 입력값 (input)으로 사용된다. MEME 모티프 내의 각 위치에서, 잔기는 0.2보다 높은 빈도로 서열의 조회 (query) 세트에 존재하는 것을 나타낸다. 대괄호 (square bracket) 안의 잔기는 대체를 나타낸다.
NUG 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열은 본 발명의 상기 핵산 서열이 살아있는 식물 세포에서 전사되거나 번역될 때, 본 발명에서 기재된 것처럼 수확량 또는 수확량 관련 형질을 증가시키는 NUG의 합성을 위한 정보를 부여한다.
핵산 변이체도 본 발명의 방법 수행에 유용할 수 있다. 상기 변이체의 예는 본 발명의 표 12 또는 표 15에 제시된 아미노산 서열 중 임의의 하나의 상동체 및 유도체를 코딩하는 핵산을 포함하며, 용어 "상동체" 및 "유도체"는 본 발명에 정의되어 있다.
본 발명의 방법에는 본 발명의 표 12 또는 표 15에 제시된 아미노산 서열 중 임의의 하나의 오쏘로그 또는 패럴로그의 상동체 및 유도체를 코딩하는 핵산도 유용하다. 본 발명의 방법에 유용한 상동체 및 유도체는 상기 상동체 및 유도체가 유래된 변형되지 않은 단백질과 실질적으로 동일한 생물학적 및 기능적 활성을 가진다. 본 발명의 방법 수행에 유용한 추가의 변이체는 코돈 사용 빈도(codon usage)가 최적화된 또는 miRNA 표적 위치가 제거된 변이체이다.
본 발명의 방법 수행에 유용한 또 다른 핵산 변이체는 NUG 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 일부, NUG 폴리펩티드를 코딩하는 핵산에 혼성화하는 핵산, NUG 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 스플라이스 변이체, NUG 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 대립인자 변이체 및 유전자 셔플링에 의해 얻은 NUG 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 변이체를 포함한다. 용어 혼성화하는 서열, 스플라이스 변이체, 대립인자 변이체 및 유전자 셔플링은 본 발명에 기재되어 있다.
본 발명의 방법의 수행은 전체 길이 핵산 서열의 사용에 의존하지 않으므로, NUG 폴리펩티드를 코딩하는 핵산은 전체 길이의 핵산일 필요는 없다. 본 발명에서는, 본 발명의 표 12 또는 표 15에 제시된 핵산 서열 중 임의의 하나의 일부 또는 본 발명의 표 12 또는 표 15에 제시된 임의의 아미노산 서열의 오쏘로그, 패럴로그 또는 상동체를 코딩하는 핵산의 일부를 식물에 도입 및 발현하는 것을 포함하는, 식물의 수확량 관련 형질을 향상시키는 방법을 제공한다.
핵산의 일부분은 예를 들면, 핵산에 하나 이상의 결실을 만들어서 제조될 수 있다. 그 일부분은 분리된 형태로 사용될 수 있거나, 또는 예를 들면, 몇 가지 활성을 조합한 단백질을 생산하기 위하여 다른 코딩 (또는 비코딩) 서열에 융합될 수도 있다. 다른 코딩 서열에 융합될 경우, 해독으로 생성된 결과적인 폴리펩티드는 단백질 부분에 대해 예측된 것보다 클 것이다.
본 발명의 방법에 유용한 일부분은 본 발명에 정의된 NUG 폴리펩티드 또는 적어도 이의 일부를 코딩하며, 본 발명의 표 12 또는 표 15에 제시된 아미노산 서열과 실질적으로 동일한 생물학적 활성을 갖는다. 바람직하게는, 상기 일부분은 본 발명의 표 12 또는 표 15에 제시된 핵산 중 임의의 하나의 일부분, 또는 표 12 또는 표 15에 제시된 아미노산 서열 중 임의의 하나의 오쏘로그 또는 패럴로그를 코딩하는 핵산의 일부분이다. 바람직하게는 상기 일부분은 적어도 길이 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000개의 연속적인 뉴클레오티드이며, 상기 연속적인 뉴클레오티드는 표 12 또는 표 15에 제시된 핵산 서열 중 임의의 하나, 또는 본 발명의 표 12 또는 표 15에 제시된 아미노산 서열 중 임의의 하나의 오쏘로그 또는 패럴로그를 코딩하는 핵산일 수 있다.
본 발명의 방법에 유용한 또 다른 핵산 변이체는 감소된 스트린전시 조건 하에서, 바람직하게는 스트린전트 조건 하에서, 본 발명에서 정의된 NUG 폴리펩티드를 코딩하는 핵산, 또는 본 발명에서 정의된 일부분과 혼성화가 가능한 핵산이다. 본 발명에 따라, 표 12 또는 표 15에 제시된 단백질 중 임의의 하나를 코딩하는 핵산, 또는 표 12 또는 표 15에 제시된 임의의 단백질의 오쏘로그, 패럴로그 또는 상동체를 코딩하는 핵산과 혼성화가 가능한 핵산의 식물로의 도입 및 발현을 포함하는 식물의 수확량 관련 형질을 향상시키는 방법을 제공한다.
본 발명의 방법에 유용한 혼성화 서열은 본 발명에서 정의된 NUG 폴리펩티드를 코딩하며, 상기 혼성화 서열에 혼성화하는 핵산에 의해 코딩된 표 12 또는 표 15에 제시된 아미노산 서열과 실질적으로 동일한 생물학적 활성을 가진다. 바람직하게는, 상기 혼성화 서열은 표 12 또는 표 15에 제시된 단백질 중 임의의 하나를 코딩하는 핵산의 상보적인 가닥에, 또는 본 발명에 정의된 일부인 임의의 이들 서열 중 일부에, 또는 표 12 또는 표 15에 제시된 아미노산 서열 중 임의의 하나의 오쏘로그, 패럴로그를 코딩하는 핵산의 상보적인 가닥에 혼성화가 가능하다. 상기 혼성화 조건은 본 발명에 정의된 중간 스트린전시 조건 또는 높은 스트린전시 조건일 수 있다.
바람직하게는, 상기 혼성화 서열은 적어도 혼성화 서열에 혼성화하는 핵산에 의해 코딩된 폴리펩티드 서열에 존재하는 모티프 또는 보존된 영역의 일부를 포함하고/하거나, 혼성화 서열에 혼성화하는 핵산에 의해 코딩된 폴리펩티드와 동일한 생물학적 활성을 갖고/갖거나, 혼성화 서열에 혼성화하는 핵산에 의해 코딩된 폴리펩티드에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩한다.
다른 구현예에서, 본 발명의 표 12 또는 표 15에 제시된 단백질 중 임의의 하나를 코딩하는 핵산의 스플라이스 변이체 또는 대립인자 변이체의 식물로의 도입 및 발현, 또는 표 12 또는 표 15에 제시된 임의의 아미노산 서열의 오쏘로그, 패럴로그 또는 상동체를 코딩하는 핵산의 스플라이스 변이체 또는 대립인자 변이체의 식물로의 도입 및 발현을 포함하는, 식물의 수확량 관련 형질을 향상시키는 방법을 제공한다.
바람직한 스플라이스 변이체 또는 대립인자 변이체는 적어도 비변이체 (non-variant) 서열에서 발견되는 모티프 또는 다른 보존된 영역의 일부를 포함하고/하거나, 비변이체 서열과 동일한 생물학적 활성을 갖고/갖거나, 비변이체 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 스플라이스 변이체 또는 대립인자 변이체에 의해 코딩된 아미노산 서열이다. 대립인자 변이체는 자연계에 존재하며, 본 발명의 방법은 상기 자연적인 대립인자의 사용을 포함한다.
본 발명의 추가의 구현예에 따라, 표 12 또는 표 15에 제시된 핵산 서열 중 임의의 하나의 변이체의 식물로의 도입 및 발현, 또는 표 12 또는 표 15에 제시된 임의의 아미노산 서열의 오쏘로그, 패럴로그 또는 상동체를 코딩하는 핵산 변이체의 식물로의 도입 및 발현을 포함하는, 식물의 수확량 관련 형질을 향상시키는 방법을 제공하며, 상기 변이체 핵산은 유전자 셔플링으로 얻어진다.
바람직하게는, 유전자 셔플링으로 얻어진 변이체 핵산에 의해 코딩된 아미노산 서열은 적어도 비변이체 서열에서 발견되는 일부 모티프 또는 다른 보존된 영역을 포함하고/하거나, 비변이체 서열과 동일한 생물학적 활성을 갖고/갖거나, 변이체가 유래된 비변이체 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는다.
더욱이, 핵산 변이체는 또한 자리지정 돌연변이유발에 의해서도 얻을 수 있다. 몇 가지 방법이 자리지정 돌연변이유발을 이루는데 유용하며, 가장 흔한 것은 PCR에 근거한 방법이다 (Current Protocols in Molecular Biology. Wiley Eds). 하나 또는 몇 가지 아미노산 (본 발명에 정의된 치환(들), 삽입(들) 및/또는 결실(들))에 의한 표 12 또는 표 15의 서열과 다른 NUG 폴리펩티드는 본 발명의 방법 및 유전자 구축물 및 식물에서 식물의 수확량을 증가시키는데 동등하게 유용할 수 있다.
NUG 폴리펩티드를 코딩하는 핵산은 임의의 자연적 또는 인공적인 출처로부터 유래될 수 있다. 상기 핵산은 고의적인 인간의 조작을 통해 조성 및/또는 게놈 환경에 있어서 그것의 자연 형태로부터 변형될 수 있다.
바람직하게는 상기 NUG 폴리펩티드 코딩 핵산은 식물 유래, 더 바람직하게는 단자엽 식물 유래, 더욱 바람직하게는 벼과 (family Poaceae) 유래, 가장 바람직하게는 상기 핵산은 벼 (Oryza sativa) 유래이다.
본 발명은 본 발명의 방법에 유용한 핵산 서열을 포함하는 재조합 염색체 DNA의 사용에도 확장되며, 상기 핵산은 재조합 방법의 결과 염색체 DNA에 존재하나, 이의 천연 유전적 환경에서는 존재하지 않는다. 추가의 구현예에서, 본 발명의 재조합 염색체 DNA는 식물 세포에 포함된다.
본 발명의 방법 수행은 향상된 수확량 관련 형질을 갖는 식물체를 제공한다. 본 발명의 특정한 구현예에서, 본 발명의 방법 수행은 대조구 식물에 비해 증가된 초기 활력 및/또는 증가된 수확량 및/또는 증가된 생물량 및/또는 증가된 종자 수확량을 갖는 식물체를 제공한다. 용어 "초기 활력", "생물량", "수확량" 및 "종자 수확량"은 본 발명의 "정의" 섹션에 더 상세하게 기재되어 있다.
따라서 본 발명은 본 발명에서 정의된 NUG 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 식물에서의 발현 조절을 포함하는, 대조구 식물에 비해 수확량 관련 형질을 향상시키는 방법을 제공한다.
본 발명의 추가의 구현예에 따라, 본 발명의 방법 수행은 대조구 식물에 비해 증가된 생장 속도를 갖는 식물체를 제공한다. 따라서, 본 발명의 방법에 따라 식물의 생장 속도를 증가시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명에서 정의된 NUG 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 식물에서의 발현 조절을 포함한다.
본 발명의 방법 수행은 스트레스가 없는 조건 또는 순한 가뭄 조건 하에서 자란 식물에 동등한 조건 하에서 자란 대조구 식물에 비하여 향상된 수확량 관련 형질을 제공한다. 따라서, 본 발명에 따라 스트레스가 없는 조건 또는 순한 가뭄 조건 하에서 자란 식물의 수확량 관련 형질을 향상시키기 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은 NUG 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 식물에서의 발현 조절을 포함한다.
본 발명의 방법 수행은 가뭄 조건 하에서 자란 식물에 동등한 조건 하에서 자란 대조구 식물에 비하여 향상된 수확량 관련 형질을 제공한다. 따라서, 본 발명에 따라, 가뭄 조건 하에서 자란 식물의 수확량 관련 형질을 향상시키기 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은 NUG 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 식물에서의 발현 조절을 포함한다.
본 발명의 방법 수행은 양분 결핍 조건 하에서, 특히 질소 결핍 조건 하에서 자란 식물에 동등한 조건 하에서 자란 대조구 식물에 비하여 향상된 수확량 관련 형질을 제공한다. 따라서, 본 발명에 따라, 양분 결핍 조건 하에서 자란 식물의 수확량 관련 형질을 향상시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 NUG 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 식물에서의 발현 조절을 포함한다.
본 발명의 방법 수행은 염분 스트레스 조건 하에서 자란 식물에 동등한 조건 하에서 자란 대조구 식물에 비하여 향상된 수확량 관련 형질을 제공한다. 따라서, 본 발명에 따라, 염분 스트레스 조건 하에서 자란 식물의 수확량 관련 형질을 향상시키기 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은 NUG 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 식물에서의 발현 조절을 포함한다.
본 발명은 또한 NUG 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 식물로의 도입 및/또는 발현을 용이하게 하는 유전자 구축물 및 벡터를 제공한다. 상기 유전자 구축물은 상업적으로 유용하고, 식물 또는 숙주 세포의 형질전환에 적절하며, 형질전환된 세포에서 목적 유전자의 발현에 적절한 벡터에 삽입될 수 있다. 본 발명은 또한 본 발명의 방법에 있어 본 발명에서 정의된 유전자 구축물의 용도를 제공한다.
더욱 구체적으로, 본 발명은 하기를 포함하는 구축물을 제공한다:
(a) 상기 정의된 NUG 폴리펩티드를 코딩하는 핵산;
(b) (a)의 핵산 서열의 발현을 유도할 수 있는 하나 이상의 조절 서열; 및 선택적으로
(c) 전사 종결 서열.
바람직하게는, NUG 폴리펩티드를 코딩하는 핵산은 상기에 정의된 바와 같다. 용어 "조절 서열" 및 "종결 서열"은 본 발명에서 정의된 바와 같다.
본 발명의 유전자 구축물은 숙주 세포, 식물 세포, 종자, 농산물 또는 식물체에 포함될 수 있다. 식물체 또는 숙주 세포는 상기 기재된 임의의 핵산 서열을 포함하는 벡터 또는 발현 카세트와 같은 유전자 구축물로 형질전환된다. 따라서 본 발명은 상기 기재된 구축물로 형질전환된 식물체 또는 숙주 세포를 추가로 제공한다. 특히, 본 발명은 상기 기재된 구축물로 형질전환된 식물체를 제공하며, 상기 식물체는 본 발명에 기재된 증가된 수확량 관련 형질을 갖는다.
일 구현예에서 본 발명의 유전자 구축물은 상기 식물체에 도입되었을 때, 식물체에 증가된 수확량 또는 수확량 관련 형질(들)을 부여하며, 상기 식물체는 유전자 구축물에 포함된 NUG 코딩 핵산을 발현한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 유전자 구축물은 유전자 구축물이 도입된 식물 세포를 포함하는 식물체에 증가된 수확량 또는 수확량 관련 형질(들)을 부여하며, 상기 식물 세포는 유전자 구축물에 포함된 NUG 코딩 핵산을 발현한다.
당업자는 목적 서열을 함유하는 숙주 세포를 성공적으로 형질전환, 선발 및 증식시키기 위하여 유전자 구축물에 존재해야 하는 유전적 요소를 주지하고 있다. 목적 서열은 하나 이상의 조절 서열 (적어도 프로모터)에 작동 가능하게 연결된다.
유리하게, 자연적이든 인공적이든 임의의 유형의 프로모터가 핵산 서열의 발현을 유도하기 위해 사용될 수 있으나, 바람직하게는 프로모터는 식물 유래이다. 항시성 (constitutive) 프로모터가 본 발명의 방법에 특히 유용하다. 본 발명의 "정의" 섹션에서 다양한 프로모터 유형의 정의에 대해 참고한다.
항시성 프로모터는 바람직하게는 중간 강도의 편재하는 (ubiquitous) 항시성 프로모터이다. 더 바람직하게는 상기 항시성 프로모터는 식물 유래 프로모터, 예를 들면 GOS2 프로모터와 같은 식물 염색체 유래의 프로모터 또는 실질적으로 동일한 강도 및 실질적으로 동일한 발현 양상 (기능적으로 동등한 프로모터)을 갖는 프로모터, 더욱 바람직하게는 벼 유래의 GOS2 프로모터이다. 본 발명의 "정의" 섹션에서 항시성 프로모터의 추가의 예에 대해 참고한다.
선택적으로, 하나 이상의 종결 서열이 식물에 도입된 구축물에 사용될 수 있다. 당업자는 본 발명을 수행하는데 사용하기 적절한 종결 서열을 주지하고 있다. 바람직하게는, 상기 구축물은 NUG 폴리펩티드 코딩 핵산에 작동 가능하게 연결된 항시성 프로모터 (GOS2와 같은)를 포함하는 발현 카세트를 포함한다. 상기 구축물은 NUG 코딩 서열의 3' 말단에 연결된 종결 서열 (zein 종결 서열과 같은)을 추가로 포함할 수 있다. 게다가, 선발 마커를 코딩하는 하나 이상의 서열이 식물에 도입된 구축물에 존재할 수 있다.
본 발명의 바람직한 특징에 따라, 조절된 발현은 증가된 발현이다. 핵산 또는 유전자, 또는 유전자 산물의 발현을 증가시키는 방법은 당업계에 잘 문서화되어 있으며, 정의 섹션에 예가 제시되어 있다.
상기에 언급된 바와 같이, NUG 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 발현을 조절하는 바람직한 방법은 NUG 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 식물로의 도입 및 발현이다; 그러나 상기 방법의 수행 효과 즉, 수확량 관련 형질을 향상시키는 효과는 T-DNA 활성화 태깅, 틸링 (TILLING), 상동 재조합을 포함하여 다른 잘 알려진 기술을 사용하여 행해질 수도 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 기술의 설명은 정의 섹션에서 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명에 정의된 NUG 폴리펩티드를 코딩하는 임의의 핵산의 식물로의 도입 및 발현을 포함하는, 대조구 식물에 비해 향상된 수확량 관련 형질을 갖는 형질전환 식물체를 생산하는 방법을 제공한다.
더욱 상세하게, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 향상된 수확량 관련 형질을 갖는 형질전환 식물체를 생산하는 방법을 제공한다:
(i) NUG 폴리펩티드-코딩 핵산 또는 NUG 폴리펩티드-코딩 핵산을 포함하는 유전자 구축물을 식물 또는 식물 세포로 도입 및 발현하는 단계; 및
(ii) 식물의 생장 및 발달을 촉진하는 조건 하에서 식물 세포를 배양하는 단계.
상기 (i)의 핵산은 본 발명에서 정의된 NUG 폴리펩티드를 코딩할 수 있는 임의의 핵산일 수 있다.
식물의 생장 및 발달을 촉진하는 조건 하에서 식물 세포의 배양은 재분화 및/또는 성숙기까지의 생장을 포함하거나 포함하지 않을 수 있다. 따라서, 본 발명의 특정한 구현예에서, 본 발명에 따른 방법으로 형질전환된 식물 세포는 형질전환 식물체로 재분화될 수 있다. 또 다른 특정한 구현예에서, 본 발명에 따른 방법으로 형질전환된 식물 세포는 형질전환 식물체로 재분화되지 않을 수 있으며, 즉 세포를 당업계에 알려진 세포 배양 기술을 사용하여 식물체로 재분화하는 것이 불가능할 수 있다. 식물 세포는 일반적으로 전체 형성능 특성을 갖는 반면에, 일부 식물 세포는 상기 세포로부터 온전한 식물체로 재분화 또는 증식하는데 사용될 수 없다. 본 발명의 일 구현예에서 본 발명의 식물 세포는 상기 세포이다. 또 다른 구현예에서 본 발명의 식물 세포는 독립영양 방법으로 그들 자신을 유지할 수 없는 식물 세포이다.
상기 핵산은 식물 세포로 또는 식물체 자체 (조직, 기관 또는 식물체의 임의의 다른 부분으로의 도입 포함)로 직접적으로 도입될 수 있다. 본 발명의 바람직한 특징에 따르면, 상기 핵산은 바람직하게는 형질전환에 의해 식물체 또는 식물 세포로 도입될 수 있다. 용어 "형질전환"은 본 발명의 "정의" 섹션에 더 상세하게 기재되어 있다.
일 구현예에서 본 발명은 본 발명에 기재된 임의의 방법으로 생산된 임의의 식물 세포 또는 식물체 및 모든 식물체 부분 및 그의 번식체로 확장된다.
본 발명은 본 발명에 따른 방법으로 얻을 수 있는 식물 또는 그의 부분 (종자 포함)을 포함한다. 식물 또는 그의 일부 또는 식물 세포는 상기에 정의된 NUG 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 외래유전자 (transgene)를 포함하며, 바람직하게는 발현 카세트와 같은 유전자 구축물을 포함한다. 본 발명은 앞서 언급한 임의의 방법으로 생산된 일차 형질전환된 또는 감염된 세포, 조직, 기관 또는 전체 식물의 자손을 포함하기 위해 더 확장될 수 있으며, 자손이 본 발명에 따른 방법으로 양친이 생산한 것과 동일한 유전형적 및/또는 표현형적 특징(들)을 나타내는 것만이 요구된다.
추가의 구현예에서 본 발명은 본 발명의 발현 카세트, 본 발명의 유전자 구축물, 또는 상기 기재된 NUG 코딩 핵산 및/또는 폴리펩티드를 포함하는 종자로 확장된다.
본 발명은 또한 상기 정의된 NUG 폴리펩티드를 코딩하는 분리된 핵산을 함유하는 숙주 세포를 포함한다. 일 구현예에서 본 발명에 따른 숙주 세포는 식물 세포, 효모, 박테리아 또는 곰팡이이다. 본 발명에 따른 방법에 사용된 핵산, 유전자 구축물, 발현 카세트 또는 벡터에 대한 숙주 식물은 원칙적으로 유리하게 본 발명의 방법에 사용된 폴리펩티드를 합성하는 것이 가능한 모든 식물이다. 특정한 구현예에서 본 발명의 식물 세포는 본 발명의 핵산 분자를 과발현한다.
본 발명의 방법은 유리하게 임의의 식물에, 특히 본 발명에 정의된 임의의 식물에 적용될 수 있다. 본 발명의 방법에 특히 유용한 식물은 비리디플란태 (Viridiplantae) 수퍼패밀리에 속하는 모든 식물, 특히 사료 또는 마초용 콩, 관상 식물, 식량 작물, 교목 또는 관목을 포함하는 단자엽 및 쌍자엽 식물을 포함한다. 본 발명의 구현예에 있어서, 식물은 작물이다. 작물 식물의 예는 치커리, 당근, 카사바, 토끼풀 (trefoil), 대두, 비트 (beet), 사탕무, 해바라기, 캐놀라, 알팔파, 유채, 아마, 목화, 토마토, 감자 및 담배를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 본 발명의 다른 구현예에 있어서, 상기 식물은 단자엽 식물이다. 단자엽 식물의 예는 사탕수수를 포함한다. 본 발명의 다른 구현예에 있어서, 상기 식물은 곡물이다. 곡물의 예는 벼, 옥수수, 밀, 보리, 기장, 호맥 (rye), 라이밀 (triticale), 수수 (sorghum), 에머밀 (emmer), 스펠트밀 (spelt), 외알밀 (소맥, einkorn), 테프 (teff), 마일로 (milo) 및 귀리를 포함한다. 특정한 구현예에서 본 발명의 방법에 사용된 식물체는 옥수수, 밀, 벼, 대두, 목화, 캐놀라를 포함하는 평지 (oilseed rape), 사탕수수, 사탕무 및 알팔파로 이루어진 군에서 선택된다. 유리하게 본 발명의 방법은 본 발명의 식물체가 동등한 방법에 사용된 대조구 식물에 비해 증가된 수확량 및/또는 환경 스트레스에 대한 내성을 갖기 때문에 알려진 방법보다 더 효율적이다.
본 발명은 또한 종자, 잎, 열매, 꽃, 줄기, 뿌리, 지하경, 괴경 및 인경과 같은 식물의 수확가능한 부분까지 확장되나, 이에 제한되지는 않으며, 상기 수확 가능한 부분은 NUG 폴리펩티드를 코딩하는 재조합 핵산을 포함한다. 본 발명은 더욱이 건조 펠렛, 가루 또는 분말, 오일, 지방 및 지방산, 전분 또는 단백질 같은 상기 식물의 수확 가능한 부분으로부터 유래된 또는 생산된, 바람직하게는 직접적으로 유래된 또는 생산된 생산물에 관련된다.
본 발명은 또한 a) 본 발명의 식물체의 성장 단계 및 b) 본 발명의 식물체 또는 종자를 포함하는 그의 일부로부터 또는 식물체 또는 종자를 포함하는 그의 일부에 의한 상기 산물의 생산 단계를 포함하는 산물의 제조 방법을 포함한다. 추가의 구현예에서 상기 방법은 a) 본 발명의 식물체의 성장 단계, b) 식물체로부터 본 발명에 기재된 수확 가능한 부분의 제거 단계 및 c) 본 발명에 따른 식물체의 수확 가능한 부분으로부터, 또는 식물체의 수확 가능한 부분과 함께 상기 산물을 생산하는 단계를 포함한다.
일 구현예에서 본 발명의 방법으로 생산된 산물은 식료품, 사료, 식품 첨가물, 사료 첨가물, 섬유질, 화장품 또는 의약품과 같은 식물 제품일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 다른 구현예에서 생산을 위한 방법은 식물 추출물, 단백질, 아미노산, 탄수화물, 지방, 오일, 폴리머, 비타민 등과 같은 농산물을 제조하기 위해 사용될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드는 농산물에 포함된다. 특정한 구현예에서 본 발명의 핵산 서열 및 단백질 서열은 예를 들면, 농산물이 본 발명의 방법으로 생산된 경우 생산 마커로 사용될 수 있다. 상기 마커는 과정의 더 높은 효율성뿐만 아니라, 과정에 사용된 식물 원료 및 수확 가능한 부분의 향상된 질 때문에 산물의 질을 향상시키는 유리한 과정에 의해 생산된 산물을 동정하는데 사용될 수 있다. 상기 마커는 당업계에 알려진 다양한 방법으로 검출될 수 있으며, 예를 들면 핵산 검출을 위한 PCR에 근거한 방법 또는 단백질 검출을 위한 항체에 근거한 방법이 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명은 또한 본 발명에 기재된 NUG 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 용도 및 식물에서 앞서 언급한 임의의 수확량 관련 형질을 향상시키는 상기 NUG 폴리펩티드의 용도를 포함한다. 예를 들면, 본 발명에 기재된 NUG 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 또는 NUG 폴리펩티드 그 자체는 NUG 폴리펩티드 코딩 유전자에 유전적으로 연결될 수 있는 마커가 동정된 육종 프로그램에서 용도를 찾을 수 있다. 상기 핵산/유전자, 또는 NUG 폴리펩티드 그 자체는 분자 마커를 정의하는데 사용될 수 있다. 이 DNA 또는 단백질 마커는 본 발명의 방법에 정의된 향상된 수확량 관련 형질을 갖는 식물을 선발하는 육종 프로그램에서 사용될 수 있다. 게다가, NUG 폴리펩티드 코딩 핵산/유전자의 대립인자 변이체는 마커 보조 육종 프로그램에서 용도를 찾을 수 있다. NUG 폴리펩티드를 코딩하는 핵산은 또한 이 유전자의 일부에 대한 유전자지도 및 물리지도 제작용 탐침으로서 및 그 유전자에 연관된 형질에 대한 마커로서 사용될 수 있다. 상기 정보는 원하는 표현형을 갖는 라인 개발을 위한 식물 육종에 유용할 것이다.
2.
NAC1
및
NAC5
본 발명의 두 번째 양상에 따라, NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 식물에서의 발현 조절을 포함하는, 비생물적 스트레스 조건 하에서 자란 식물의 수확량 관련 형질을 향상시키는 방법을 제공한다.
특정한 구현예에서, 식물이 비생물적 스트레스 조건 하에서 자랄 경우, NAC1 또는 NAC5 코딩 핵산의 발현은 조직 특이적 프로모터에 의해, 바람직하게는 뿌리 특이적 프로모터에 의해 유도될 수 있다.
추가의 구현예에서, 향상된 수확량 관련 형질은 증가된 종자 수확량 및/또는 변형된 뿌리 형태를 포함한다.
본 발명의 추가의 양상에 따라, 비생물적 스트레스 하에서 자란 식물에서의 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 발현 조절 단계 및 임의로 향상된 수확량 관련 형질을 갖는 식물의 선발을 포함하는, 대조구 식물에 비해 향상된 수확량 관련 형질을 갖는 식물을 생산하는 방법을 제공한다.
본 발명의 추가의 양상에 따라, NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 식물에서의 발현 조절을 포함하는 식물에 비생물적 스트레스 내성을 부여하는 방법을 제공한다.
NAC1 또는 NAC5에 관하여 본 발명의 명세서에서, "본 발명의 방법에 유용한 단백질"은 본 발명에 정의된 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 의미한다. 이후 "본 발명의 방법에 유용한 핵산"은 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 것이 가능한 핵산을 의미한다. 식물에 도입되는 핵산 (따라서 본 발명의 방법 수행에 유용한)은 하기에 기재될 유형의 단백질을 코딩하는 임의의 핵산이며, 이후 또한 "NAC1 핵산" 또는 "NAC1 유전자" 또는 "NAC5 핵산" 또는 "NAC5 유전자"라고 칭한다.
본 발명에 정의된 "NAC1 폴리펩티드" 또는 "NAC5 폴리펩티드"는 하기에 기재된 모티프의 임의의 하나 이상을 포함하는 임의의 폴리펩티드를 의미한다.
본 발명에 정의된 "NAC1 유전자" 또는 "NAC5 유전자"는 본 발명에 정의된 NAC1 폴리펩티드 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 임의의 핵산을 의미한다.
모티프 I: KIDLDIIQELD, 또는 모티프 I의 서열에 대해 증가하는 순으로 선호되는 적어도 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%의 서열 동일성을 갖는 모티프.
모티프 I은 바람직하게는 K/P/R/G l/S/M D/A/E/Q L/l/V D l/V/F I Q/V/R/K E/D L/l/V D 이다.
모티프 II: CKYGXGHGGDEQTEW, 또는 모티프 II의 서열에 대해 증가하는 순으로 선호되는 적어도 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%의 서열 동일성을 갖는 모티프이며, 'X'는 임의의 아미노산으로 간주된다.
모티프 II는 바람직하게는 C K/R Y/L/l G XXX G/Y/N D/E E Q/R T/N/S EW 이며, 'X'는 임의의 아미노산이다.
모티프 III: GWVVCRAFQKP, 또는 모티프 III의 서열에 대해 증가하는 순으로 선호되는 적어도 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%의 서열 동일성을 갖는 모티프.
모티프 III는 바람직하게는 GWVVCR A/V F X1 K X2 이고, 'X1' 및 'X2'는 임의의 아미노산일 수 있으며, 바람직하게는 X1은 Q/R/K, X2는 P/R/K 이다.
모티프 IV: PVPIIA, 또는 모티프 IV의 서열에 대해 증가하는 순으로 선호되는 적어도 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%의 서열 동일성을 갖는 모티프.
모티프 IV는 바람직하게는 A/P/S/N V/L/l/A P/S/D/V/Q V/l I A/T/G 이다.
모티프 V: NGSRPN, 또는 모티프 V의 서열에 대해 증가하는 순으로 선호되는 적어도 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%의 서열 동일성을 갖는 모티프.
모티프 V는 바람직하게는 N G/S S/Q/A/V RP N/S 이다.
모티프 VI: CRLYNKK, 또는 모티프 VI의 서열에 대해 증가하는 순으로 선호되는 적어도 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%의 서열 동일성을 갖는 모티프.
모티프 VI는 바람직하게는 C/Y R/K L/l Y/H/F N/K K K/N/C/S/T 이다.
모티프 VII: NEWEKMQ, 또는 모티프 VII의 서열에 대해 증가하는 순으로 선호되는 적어도 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%의 서열 동일성을 갖는 모티프.
모티프 VII는 바람직하게는 N E/Q/T WEK M/V Q/R/K 이다.
모티프 VIII: WGETRTPESE, 또는 모티프 VIII의 서열에 대해 증가하는 순으로 선호되는 적어도 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%의 서열 동일성을 갖는 모티프.
모티프 VIII는 바람직하게는 WGE T/A RTPES E/D 이다.
모티프 IX: VPKKESMDDA, 또는 모티프 IX의 서열에 대해 증가하는 순으로 선호되는 적어도 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%의 서열 동일성을 갖는 모티프.
모티프 IX는 바람직하게는 V/L PK K/E E S/R/A/V M/V/A/Q/R D/E D/E/L A/G/D 이다.
모티프 X: SYDDIQGMYS, 또는 모티프 X의 서열에 대해 증가하는 순으로 선호되는 적어도 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%의 서열 동일성을 갖는 모티프.
모티프 X는 바람직하게는 S L/Y DD L/l Q G/S L/M/P G/Y S/N 이다.
모티프 XI: DSMPRLHADSSCSE, 또는 모티프 XI의 서열에 대해 증가하는 순으로 선호되는 적어도 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%의 서열 동일성을 갖는 모티프.
모티프 XI은 바람직하게는 DS M/V/l P R/K L/l/A H T/A/S D/E SS C/G SE 이다.
모티프 I 내지 XI의 각각은 임의의 위치에서 하나 이상의 보존적 아미노산 치환을 포함할 수 있다.
NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드는 상기 정의된 모티프의 적어도 1개 또는 적어도 2개 또는 적어도 3개 또는 적어도 4개 또는 적어도 5개 또는 적어도 6개 또는 적어도 7개 또는 적어도 8개 또는 적어도 9개 또는 적어도 10개 또는 적어도 11개를 포함할 수 있다.
NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드에 존재하는 추가의 모티프는 MEME 알고리즘 (Bailey and Elkan , Proceedings of the Second International Conference on Intelligent Systems for Molecular Biology, pp. 28-36, AAAI Press, Menlo Park, California, 1994) 또는 당업계에 알려진 다른 방법 또는 도구를 사용하여 동정될 수 있다.
NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 발현을 조절하는 (바람직하게는, 증가시키는) 바람직한 방법은 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 식물로의 도입 및 발현이다.
본 발명의 하나의 양상에 따라, 본 발명에서 정의된 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 식물에서의 발현 조절을 포함하는, 대조구 식물에 비해 식물의 수확량 관련 형질 향상 및/또는 뿌리 형태를 변형시키는 방법을 제공한다.
부가적으로 또는 대안적으로, NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드는 상동 단백질이 상기에 기술된 보존된 모티프의 임의의 하나 이상을 포함한다면, 서열번호 2 또는 서열번호 4로 표시된 아미노산 서열에 대해, 증가하는 순으로 선호되는 적어도 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 전체 서열 동일성을 갖는다. 특정한 구현예에서 NAC1 폴리펩티드는 서열번호 2로 표시된다. 특정한 구현예에서 NAC5 폴리펩티드는 서열번호 4로 표시된다.
전체의 서열 동일성은 바람직하게는 디폴트 매개 변수 및 성숙 단백질 서열을 이용하여 (즉, 분비 신호 또는 수송 펩티드를 고려하지 않고), GAP 프로그램 (GCG Wisconsin Package, Accelrys)의 Needleman Wunsch 알고리즘과 같은, 전체적인 정렬 알고리즘을 이용하여 결정한다. 일 구현예에서 서열 동일성 수준은 서열번호 2 또는 서열번호 4의 서열의 전체 길이에 걸친 폴리펩티드 서열의 비교에 의해 측정된다.
다른 구현예에서, 서열 동일성 수준은 다른 NAC1 및 NAC5 폴리펩티드의 해당 보존된 도메인 또는 모티프와 서열번호 2 또는 서열번호 4의 하나 이상의 보존된 도메인 또는 모티프의 비교에 의해 측정된다. 전체적인 서열 동일성에 비해, 서열 동일성은 일반적으로 보존된 도메인 또는 모티프만 고려되었을 때 더 높을 것이다. 바람직하게는 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드의 모티프는 서열번호 5 내지 서열번호 15 (모티프 I 내지 XI)로 표시된 모티프의 임의의 하나 이상에 대해 증가하는 순으로 선호되는 적어도 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 갖는다. 용어 "도메인", "시그너처" 및 "모티프"는 본 발명의 "정의" 섹션에 정의되어 있다.
바람직하게는, Ooka 등 (DNA Research 10, 239-247, 2003)에 제시된 것과 같은 계통수의 구축에 이용될 때, 상기 폴리펩티드 서열은 임의의 다른 NAC보다 다른 NAC1 또는 NAC5 패밀리 멤버와 함께 클러스터링된다.
NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산은 본 발명의 실시예 섹션에 기술된 본 발명의 방법에 따라 벼에서 발현될 때, 생물학적 스트레스 조건 하에서 자란 식물에 향상된 수확량 관련 형질, 특히 증가된 종자 수확량 및/또는 변형된 뿌리 형태를 제공한다. NAC1 및 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열의 다른 기능은 본 발명의 상기 핵산 서열이 살아있는 식물 세포에서 전사 및 번역될 때, 본 발명에 기재된 수확량 또는 수확량 관련 형질을 증가시키는 NAC1 및 NAC5의 합성을 위한 정보를 부여하는 것이다.
본 발명은 서열번호 2의 폴리펩티드 서열을 코딩하는 서열번호 1로 표시된 핵산 서열 및 서열번호 4의 폴리펩티드를 코딩하는 서열번호 3으로 표시된 핵산 서열로 식물체를 형질전환함으로써 예시된다. 그러나, 본 발명의 수행은 상기 서열에 제한되지 않으며; 본 발명의 방법은 본 발명에 정의된 임의의 NAC1 코딩 또는 NAC5 코딩 핵산 또는 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 사용하여 유리하게 수행될 수 있다. 본 발명에 사용된 용어 "NAC1" 또는 "NAC1 폴리펩티드"는 하기에 정의된 서열번호 2의 상동체도 포함한다. 본 발명에 사용된 용어 "NAC5" 또는 "NAC5 폴리펩티드"는 하기에 정의된 서열번호 4의 상동체도 포함한다.
NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 예는 본 발명의 표 16에 제시하였다. 상기 핵산은 본 발명의 방법 수행에 유용하다. 실시예 섹션의 표 16에 제시된 아미노산 서열이 각각 서열번호 2 및 서열번호 4로 표시된 NAC1 및 NAC5 폴리펩티드의 오쏘로그 및 패럴로그 서열의 예이며, 용어 "오쏘로그" 및 "패럴로그"는 본 발명에 정의되어 있다. 추가의 오쏘로그 및 패럴로그는 정의 섹션에 기재된 소위 상호간 블라스트 (reciprocal blast) 탐색을 수행하면 용이하게 동정될 수 있으며; 조회 서열은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 또는 서열번호 4에서, 두 번째 BLAST (back-BLAST)는 벼 서열과 대조하는 것이다.
핵산 변이체도 본 발명의 방법의 수행에 유용할 수 있다. 상기 핵산 변이체의 예는 본 발명의 표 16에 제시된 아미노산 서열 중 임의의 하나의 상동체 및 유도체를 코딩하는 핵산을 포함하며, 용어 "상동체" 및 "유도체"는 본 발명에 정의되어 있다. 본 발명의 방법에는 실시예 섹션의 표 16에 제시된 아미노산 서열 중 임의의 하나의 오쏘로그 또는 패럴로그의 상동체 및 유도체를 코딩하는 핵산도 유용하다. 본 발명의 방법에 유용한 상동체 및 유도체는 상기 상동체 및 유도체가 유래된 변형되지 않은 단백질과 실질적으로 동일한 생물학적 및 기능적 활성을 가진다. 본 발명의 방법 수행에 유용한 추가의 변이체는 코돈 사용 빈도가 최적화된 또는 miRNA 표적 위치가 제거된 변이체이다.
본 발명의 방법 수행에 유용한 또 다른 핵산 변이체는 NAC1 및 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 일부, NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산에 혼성화하는 핵산, NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 스플라이스 변이체, NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 대립인자 변이체 및 유전자 셔플링에 의해 얻은 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 변이체를 포함한다. 용어 혼성화하는 서열, 스플라이스 변이체, 대립인자 변이체 및 유전자 셔플링은 본 발명에 기재되어 있다.
본 발명의 방법의 수행은 전체 길이 핵산 서열의 사용에 의존하지 않으므로, NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산은 전체 길이의 핵산일 필요는 없다. 본 발명에서는, 본 발명의 표 16에 제시된 단백질 중 임의의 하나를 코딩하는 핵산 서열의 일부 또는 표 16에 제시된 임의의 아미노산 서열의 오쏘로그, 패럴로그 또는 상동체를 코딩하는 핵산의 일부를 식물에 도입 및 발현하는 것을 포함하는, 비생물적 스트레스 조건 하에서 자란 식물의 수확량 관련 형질을 향상시키는 방법을 제공한다.
핵산의 일부분은 예를 들면, 핵산에 하나 이상의 결실을 만들어서 제조될 수 있다. 그 일부분은 분리된 형태로 사용될 수 있거나, 또는 예를 들면, 몇 가지 활성을 조합한 단백질을 생산하기 위하여 다른 코딩 (또는 비코딩) 서열에 융합될 수도 있다. 다른 코딩 서열에 융합될 경우, 해독으로 생성된 결과적인 폴리펩티드는 단백질 부분에 대해 예측된 것보다 클 것이다.
본 발명의 방법에 유용한 일부분은 본 발명에 정의된 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드 또는 적어도 그의 일부분을 코딩하며, 본 발명의 표 16에 제시된 아미노산 서열 및 상기 일부분이 유래된 핵산에 의해 코딩된 아미노산 서열과 실질적으로 동일한 생물학적 활성을 가진다. 바람직하게는, 상기 일부분은 표 16에 제시된 단백질 중 임의의 하나를 코딩하는 핵산의 일부분 또는 표 16에 제시된 아미노산 서열 중 임의의 하나의 오쏘로그 또는 패럴로그를 코딩하는 핵산의 일부분이다. 바람직하게는 상기 일부분은 적어도 길이 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000개의 연속적인 뉴클레오티드이며, 상기 연속적인 뉴클레오티드는 본 발명의 표 16에 제시된 핵산 서열 중 임의의 하나, 또는 표 16에 제시된 아미노산 서열 중 임의의 하나의 오쏘로그 또는 패럴로그를 코딩하는 핵산일 수 있다. 가장 바람직하게는, 상기 일부분은 서열번호 2 또는 서열번호 4를 코딩하는 핵산의 일부분이다. 바람직하게는, 상기 일부분은 모티프 I 내지 XI (서열번호 5 내지 서열번호 15)의 하나 이상을 포함하고/하거나, NAC1 또는 NAC5와 동일한 생물학적 활성을 갖고/갖거나, 서열번호 2 또는 서열번호 4에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열의 단편을 코딩한다.
본 발명의 방법에 유용한 또 다른 핵산 변이체는 감소된 또는 중간 스트린전시 조건 하에서, 바람직하게는 스트린전트 조건 하에서, 본 발명에서 정의된 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 상보적인 가닥, 또는 본 발명에서 정의된 일부분과 혼성화가 가능한 핵산이다. 본 발명에 따라, 본 발명의 표 16에 제시된 단백질 중 임의의 하나를 코딩하는 핵산 또는 표 16에 제시된 임의의 핵산 서열의 오쏘로그, 패럴로그 또는 상동체를 코딩하는 핵산에 혼성화가 가능한 핵산의 식물로의 도입 및 발현을 포함하는, 비생물적 스트레스 조건 하에서 자란 식물의 수확량 관련 형질을 향상시키는 방법을 제공한다.
본 발명의 방법에 유용한 혼성화 서열은 본 발명에서 정의된 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하며, 상기 혼성화 서열에 혼성화하는 핵산에 의해 코딩된 표 16에 제시된 아미노산 서열과 실질적으로 동일한 생물학적 활성을 가진다. 바람직하게는, 상기 혼성화 서열은 본 발명의 표 16에 제시된 단백질 중 임의의 하나를 코딩하는 핵산의 상보적인 가닥에, 또는 본 발명에 정의된 일부분인 임의의 이들 서열 중 일부분에, 또는 표 16에 제시된 아미노산 서열 중 임의의 하나의 오쏘로그 또는 패럴로그를 코딩하는 핵산의 상보적인 가닥에 혼성화가 가능하다. 가장 바람직하게는, 상기 혼성화 서열은 서열번호 2 또는 서열번호 4로 표시된 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 상보적인 가닥 또는 양쪽의 일부분에 혼성화가 가능하다. 일 구현예에서, 상기 혼성화 조건은 본 발명에 정의된 중간 스트린전시, 바람직하게는 높은 스트린전시이다.
바람직하게는, 상기 혼성화 서열은 모티프 I 내지 XI (서열번호 5 내지 서열번호 15)의 하나 이상을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하고/하거나, NAC1 또는 NAC5와 동일한 생물학적 활성을 갖고/갖거나, 서열번호 2 또는 서열번호 4에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 표 16에 제시된 단백질 중 임의의 하나를 코딩하는 핵산의 임의의 하나의 스플라이스 변이체 또는 대립인자 변이체, 또는 본 발명의 표 16에 제시된 임의의 아미노산 서열의 오쏘로그, 패럴로그 또는 상동체를 코딩하는 핵산의 스플라이스 변이체 또는 대립인자 변이체의 식물로의 도입 및 발현을 포함하는, 비생물적 스트레스 조건 하에서 자란 식물의 수확량 관련 형질을 향상시키는 방법을 제공한다.
바람직한 스플라이스 또는 대립인자 변이체는 서열번호 2 또는 서열번호 4를 코딩하는 핵산의 스플라이스 또는 대립인자 변이체, 또는 서열번호 2 또는 서열번호 4의 오쏘로그 또는 패럴로그를 코딩하는 핵산의 스플라이스 또는 대립인자 변이체이다. 바람직하게는, 스플라이스 변이체 또는 대립인자 변이체에 의해 코딩된 아미노산 서열은 모티프 I 내지 XI (서열번호 5 내지 서열번호 15)의 하나 이상을 포함하고/하거나, NAC1 또는 NAC5와 동일한 생물학적 활성을 갖고/갖거나, 서열번호 2 또는 서열번호 4에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는다.
본 발명의 추가의 구현예에 따라, 본 발명의 표 16에 제시된 단백질 중 임의의 하나를 코딩하는 핵산의 대립인자 변이체 또는 스플라이스 변이체의 식물로의 도입 및 발현, 또는 본 발명의 표 16에 제시된 임의의 아미노산 서열의 오쏘로그, 패럴로그 또는 상동체를 코딩하는 핵산의 대립인자 변이체 또는 스플라이스 변이체의 식물로의 도입 및 발현을 포함하는, 비생물적 스트레스 조건 하에서 자란 식물의 수확량 관련 형질을 향상시키는 방법을 제공한다.
본 발명의 방법에 유용한 대립인자 변이체 또는 스플라이스 변이체에 의해 코딩된 폴리펩티드는 서열번호 2의 NAC1 폴리펩티드 또는 서열번호 5의 NAC5 폴리펩티드 또는 본 발명의 표 16에 도시된 임의의 아미노산과 실질적으로 동일한 생물학적 활성을 갖는다. 대립인자 변이체는 자연계에 존재하며, 본 발명의 방법은 상기의 자연적인 대립인자의 사용을 포함한다. 바람직하게는, 대립인자 변이체 또는 스플라이스 변이체는 서열번호 2 또는 서열번호 4를 코딩하는 핵산의 변이체 또는 서열번호 2 또는 서열번호 4의 오쏘로그 또는 패럴로그를 코딩하는 핵산의 변이체이다. 바람직하게는, 상기 대립인자 변이체 또는 스플라이스 변이체에 의해 코딩된 아미노산 서열은 모티프 I 내지 XI (서열번호 5 내지 서열번호 15)의 하나 이상을 포함하고/하거나, NAC1 또는 NAC5와 동일한 생물학적 활성을 갖고/갖거나, 서열번호 2 또는 서열번호 4에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는다.
본 발명의 또 다른 구현예에서, 표 16에 제시된 단백질 중 임의의 하나를 코딩하는 핵산 변이체의 식물로의 도입 및 발현을 포함하는, 또는 표 16에 제시된 임의의 아미노산 서열의 오쏘로그, 패럴로그 또는 상동체를 코딩하는 핵산 변이체의 식물로의 도입 및 발현을 포함하는, 비생물적 스트레스 조건 하에서 자란 식물의 수확량 관련 형질을 향상시키는 방법을 제공하며, 상기 변이체 핵산은 유전자 셔플링으로 얻어진다.
바람직하게는, 유전자 셔플링으로 얻어진 변이체 핵산에 의해 코딩된 아미노산 서열은 모티프 I 내지 XI (서열번호 5 내지 서열번호 15)의 하나 이상을 포함하고/하거나, NAC1 또는 NAC5와 동일한 생물학적 활성을 갖고/갖거나, 서열번호 2 또는 서열번호 4에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는다.
더욱이, 핵산 변이체는 또한 자리지정 돌연변이유발에 의해서도 얻을 수 있다. 몇 가지 방법이 자리지정 돌연변이를 유발하는데 유용하며, 가장 흔한 것은 PCR에 근거한 방법이다 (Current Protocols in Molecular Biology. Wiley Eds). 하나 또는 몇 가지 아미노산 (본 발명에 정의된 치환(들), 삽입(들) 및/또는 결실(들))에 의한 서열번호 2 또는 서열번호 4의 서열과 다른 NCG 폴리펩티드는 본 발명의 방법 및 유전자 구축물 및 식물에서 식물의 수확량을 증가시키는데 동등하게 유용할 수 있다.
NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산은 임의의 자연적 또는 인공적인 출처로부터 유래될 수 있다. 상기 핵산은 고의적인 인간의 조작을 통해 조성 및/또는 게놈 환경에 있어서 그것의 자연 형태로부터 변형될 수 있다. 바람직하게는 상기 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산은 식물 유래, 더 바람직하게는 단자엽 식물 유래, 더욱 바람직하게는 벼과 (family Poaceae) 유래, 가장 바람직하게는 상기 핵산은 벼 (Oryza sativa) 유래이다.
또 다른 구현예에서 본 발명은 본 발명의 방법에 유용한 핵산 서열을 포함하는 재조합 염색체 DNA에도 확장되며, 상기 핵산은 재조합 방법의 결과 염색체 DNA에 존재하나, 이의 천연 유전적 환경에서는 존재하지 않는다. 추가의 구현예에서, 본 발명의 재조합 염색체 DNA는 식물 세포에 포함된다.
본 발명의 방법 수행은 향상된 수확량 관련 형질을 갖는 식물체를 제공한다. 특히, 본 발명의 방법 수행은 증가된 종자 또는 곡물 수확량 및/또는 변형된 뿌리 형태를 갖는 식물체를 제공한다. 용어 "종자 수확량"은 본 발명의 "정의" 섹션에 더 상세하게 기재되어 있다. 본 발명에 정의된 용어 "변형된 뿌리 형태"는 바람직하게는 하기의 임의의 하나 이상의 증가 또는 변화를 포함하거나, 하기의 임의의 하나 이상의 증가 또는 변화 때문이다: 생체 중량 또는 건조 중량 형태의 뿌리 생물량의 증가, 증가된 뿌리의 수, 증가된 뿌리 직경, 확대된 뿌리, 확대된 중심주 (stele), 확대된 통기 조직 (aerenchyma), 증가된 통기 조직 형성, 확대된 수피 (cortex), 확대된 수피 (cortical) 세포, 확대된 목질부, 변형된 분지, 향상된 침투 (penetration) 능력, 확대된 외피 (epidermis), 줄기에 대한 뿌리 비율의 증가.
따라서 본 발명은 대조구 식물에 비하여 종자 수확량 및/또는 변형된 뿌리 형태를 증가시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 비생물적 스트레스 조건 하에서 자란 식물에서의 발현 조절을 포함한다.
본 발명은 또한 대조구 식물에 비하여 식물의 비생물적 스트레스 내성을 증가시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 비생물적 스트레스 조건 하에서 자란 식물에서의 발현 조절을 포함한다.
본 발명의 바람직한 특징에 따라, 본 발명의 방법 수행은 비생물적 스트레스 조건 하에서 자란 식물에 대조구 식물에 비하여 증가된 생장 속도를 제공한다. 따라서, 본 발명에 따라 식물의 생장 속도를 증가시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 비생물적 스트레스 조건 하에서 자란 식물에서의 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 발현 조절을 포함한다.
본 발명의 방법 수행은 그들의 영양 생장 (vegetative growth) 단계 동안, 스트레스가 없는 조건 또는 순한 가뭄 조건 하에서 자란 식물에 동등한 조건 하에서 자란 대조구 식물에 비하여 향상된 수확량 관련 형질 및/또는 변형된 뿌리 형태를 제공한다. 따라서, 본 발명에 따라 그들의 식물 생장 단계 동안 및 스트레스가 없는 조건 또는 순한 가뭄 조건 하에서 자란 식물의 수확량 관련 형질 향상 및/또는 뿌리 형태를 변형시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 상기 식물에서의 발현 조절을 포함한다.
본 발명의 방법 수행은 가뭄 조건 하에서 자란 식물에 동등한 조건 하에서 자란 대조구 식물에 비하여 향상된 수확량 관련 형질 및/또는 변형된 뿌리 형태를 제공한다. 따라서, 본 발명에 따라 가뭄 조건 하에서 자란 식물의 수확량 관련 형질 향상 및/또는 뿌리 형태를 변형시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 조직 특이적 프로모터, 바람직하게는 뿌리 특이적 프로모터의 조절 하에서 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 식물에서의 발현 조절을 포함한다.
항시성 프로모터 및 뿌리 특이적 프로모터의 조절하에서 발현될 때, 정상 또는 스트레스가 없는 생장 조건 하에서 NAC1 코딩 핵산 서열을 발현하는 벼 식물체는 증가된 종자 수확량을 제공한다. 비교하면, 종자 또는 곡물 수확량의 현저하게 증가된 수준은 뿌리 특이적 프로모터의 조절 하에서 NAC1 코딩 핵산을 발현하는 식물에서 가뭄 조건 하에서 얻어졌다. 반면에, 형질전환되지 않은 대조구와 비교하여 가뭄 스트레스 하에서 자란 식물 및 항시성 프로모터의 조절 하에서 NAC1 코딩 핵산 서열을 발현하는 식물의 종자 또는 곡물 수확량의 두드러진 차이는 없었다.
NAC5의 경우에, 뿌리 특이적 프로모터의 조절 하에서 NAC5 코딩 핵산을 발현하는 식물체 및 항시성 프로모터의 조절 하에서 NAC5 코딩 핵산을 발현하는 식물체는 영양 생장 단계 동안 가뭄 및 고염에 대해 증가된 내성을 나타낸다. 정상, 스트레스가 없는 생장 조건 하에서, 이들 식물체는 증가된 종자 또는 곡물 수확량을 나타낸다. 그러나, 가뭄 스트레스 조건 하에서, 뿌리 특이적 프로모터의 조절 하에서 NAC5를 발현하는 식물체는 현저하게 증가된 종자 또는 곡물 수확량을 나타내는 반면에, 항시성 프로모터의 조절 하에서 NAC5를 발현하는 식물체는 형질전환되지 않은 대조구 식물에 비해 유사한 또는 감소된 수확량을 나타낸다.
본 발명의 방법 수행은 양분 결핍 조건 하에서, 특히 질소 결핍 조건 하에서 자란 식물에 동등한 조건 하에서 자란 대조구 식물에 비하여 향상된 수확량 관련 형질 및/또는 변형된 뿌리 형태를 제공한다. 따라서, 본 발명에 따라 양분 결핍 조건 하에서 자란 식물의 수확량 관련 형질 향상 및/또는 뿌리 형태를 변형시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 식물에서의 발현 조절을 포함한다.
본 발명의 방법 수행은 염분 스트레스 조건 하에서 자란 식물에 동등한 조건 하에서 자란 대조구 식물에 비하여 향상된 수확량 관련 형질 및/또는 변형된 뿌리 형태를 제공한다. 따라서, 본 발명에 따라, 염분 스트레스 조건 하에서 자란 식물의 수확량 관련 형질 향상 및/또는 뿌리 형태를 변형시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 식물에서의 발현 조절을 포함한다.
본 발명은 또한 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 식물로의 도입 및/또는 발현을 용이하게 하는 유전자 구축물 및 벡터를 제공한다. 상기 유전자 구축물은 상업적으로 유용하고, 식물 또는 숙주 세포의 형질전환에 적절하며, 형질전환된 세포에서 목적 유전자의 발현에 적절한 벡터에 삽입될 수 있다. 본 발명은 또한 본 발명의 방법에 있어 본 발명에서 정의된 유전자 구축물의 용도를 제공한다.
더욱 구체적으로, 본 발명은 하기를 포함하는 구축물을 제공한다:
(a) 상기 정의된 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산;
(b) (a)의 핵산 서열의 발현을 유도할 수 있는 하나 이상의 조절 서열; 및 선택적으로
(c) 전사 종결 서열.
바람직하게는, NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산은 상기에 정의된 바와 같다. 용어 "조절 서열" 및 "종결 서열"은 본 발명에서 정의된 바와 같다.
본 발명의 유전자 구축물은 숙주 세포, 식물 세포, 종자, 농산물 또는 식물체에 포함될 수 있다. 식물체 또는 숙주 세포는 상기 기재된 임의의 핵산 서열을 포함하는 벡터 또는 발현 카세트와 같은 유전자 구축물로 형질전환된다. 따라서 본 발명은 또한 상기 기재된 구축물로 형질전환된 식물체 또는 숙주 세포를 제공한다. 특히, 본 발명은 상기 기재된 구축물로 형질전환된 식물체를 제공하며, 상기 식물체는 본 발명에 기재된 증가된 수확량 관련 형질을 갖는다.
일 구현예에서 본 발명의 유전자 구축물은 상기 식물체에 도입되었을 때, 식물체에 증가된 수확량 또는 수확량 관련 형질(들)을 부여하며, 상기 식물체는 유전자 구축물에 포함된 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드 코딩 핵산을 발현한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 유전자 구축물은 유전자 구축물이 도입된 식물 세포를 포함하는 식물체에 증가된 수확량 또는 수확량 관련 형질(들)을 부여하며, 상기 식물 세포는 유전자 구축물에 포함된 NAC1 또는 NAC5 코딩 핵산을 발현한다.
당업자는 목적 서열을 함유하는 숙주 세포를 성공적으로 형질전환, 선발 및 증식시키기 위하여 유전자 구축물에 존재해야 하는 유전적 요소를 주지하고 있다. 목적 서열은 하나 이상의 조절 서열 (적어도 프로모터)에 작동 가능하게 연결된다.
유리하게, 자연적이든 인공적이든 임의의 유형의 프로모터가 식물의 영양 생장 단계 동안 핵산 서열의 발현을 유도하기 위해 사용될 수 있다. 바람직하게는 프로모터는 식물 유래이다. 본 발명의 "정의" 섹션에서 다양한 프로모터 유형의 정의에 대해 참고한다.
본 발명의 방법에 사용하기 위한 특히 바람직한 프로모터는 뿌리 특이적 프로모터이다. 상기 뿌리 특이적 프로모터는 바람직하게는 RCc3 프로모터 (Plant Mol Biol. 1995 Jan;27(2):237-48) 또는 실질적으로 동일한 강도 및 실질적으로 동일한 발현 양상 (기능적으로 동등한 프로모터)을 갖는 프로모터이며, 더 바람직하게는 상기 RCc3 프로모터는 벼 유래이며, 더욱 바람직하게는 상기 RCc3 프로모터는 서열번호 21에 대해 실질적으로 유사한 핵산 서열로 표시되며, 가장 바람직하게는 상기 프로모터는 서열번호 21로 표시된다. 또한 본 발명의 방법 수행에 사용될 수 있는 다른 뿌리 특이적 프로모터의 예는 "정의" 섹션의 표 3에 제시하였다.
항시성 프로모터는 또한 스트레스 또는 스트레스가 없는 조건 하에서 자란 식물에, 특히 식물의 영양 생장 단계 동안 사용될 수 있다. 항시성 프로모터는 또한 실질적으로 스트레스가 없는 조건 하에서 자라고, NAC1 또는 NAC5 코딩 핵산을 발현하는 식물에서 사용될 수 있다. 상기 항시성 프로모터는 바람직하게는 중간 강도의 편재하는 (ubiquitous) 항시성 프로모터이다. 더 바람직하게는 상기 항시성 프로모터는 식물 유래 프로모터, 예를 들면 GOS2 프로모터와 같은 식물 염색체 기원의 프로모터 또는 실질적으로 동일한 강도 및 실질적으로 동일한 발현 양상 (기능적으로 동등한 프로모터)을 갖는 프로모터이며, 더 바람직하게는 상기 프로모터는 벼 유래의 GOS2 프로모터이다. 더욱 바람직하게는 상기 항시성 프로모터는 서열번호 20에 대해 실질적으로 유사한 핵산 서열로 표시되며, 가장 바람직하게는 상기 항시성 프로모터는 서열번호 20으로 표시된다. 본 발명의 "정의" 섹션에서 항시성 프로모터의 추가의 예에 대해 참고한다.
본 발명의 적용은 서열번호 1 또는 서열번호 3으로 표시된 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드 코딩 핵산에 제한되지 않으며, 본 발명의 적용은 식물에서 NAC1 또는 NAC5의 발현을 유도하기 위한 벼 GOS2 또는 RCc3 프로모터에 제한되지 않는다는 것은 명백하다.
선택적으로, 하나 이상의 종결 서열이 식물에 도입된 구축물에 사용될 수 있다. 당업자는 본 발명을 수행하는데 사용하기 적절한 종결 서열을 주지하고 있다.
바람직하게는, 상기 구축물은 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드 코딩 핵산에 작동 가능하게 연결된 RCc3 프로모터를 포함하는 발현 카세트를 포함한다. 더 바람직하게는, 상기 구축물은 NAC1 또는 NAC5 코딩 서열의 3' 말단에 연결된 zein-종결 서열 (t-zein) 또한 포함한다. 게다가, 선발 마커를 코딩하는 하나 이상의 서열이 식물에 도입된 구축물에 존재할 수 있다.
본 발명의 바람직한 특징에 따라, 조절된 발현은 증가된 발현이다. 핵산 또는 유전자, 또는 유전자 산물의 발현을 증가시키는 방법은 당업계에 잘 문서화되어 있으며, 정의 섹션에 예가 제시되어 있다.
상기 언급된 바와 같이, NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 발현을 조절하는 바람직한 방법은 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 식물로의 도입 및 발현이다; 그러나 상기 방법의 수행 효과 즉, 수확량 관련 형질 향상 및/또는 뿌리 형태를 변형시키는 효과는 T-DNA 활성화 태깅, 틸링 (TILLING), 상동 재조합을 포함하여 다른 잘 알려진 기술을 사용하여 행해질 수도 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 기술의 설명은 정의 섹션에 기재되어 있다.
본 발명은 또한 본 발명에 정의된 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 임의의 핵산의 식물로의 도입 및 발현을 포함하는, 대조구 식물에 비해 향상된 수확량 관련 형질 및/또는 변형된 뿌리 형태를 갖는 형질전환 식물을 생산하는 방법을 제공한다.
더욱 상세하게, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 향상된 수확량 관련 형질, 특히 증가된 종자 수확량 및/또는 변형된 뿌리 형태를 갖는 형질전환 식물을 생산하는 방법을 제공한다:
(i) NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드 코딩 핵산 또는 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드 코딩 핵산을 포함하는 유전자 구축물을 식물 또는 식물 세포로 도입 및 발현하는 단계; 및
(ii) 비생물적 스트레스 조건 하에서 식물 세포를 배양하는 단계.
상기 (i)단계의 핵산은 본 발명에 정의된 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 것이 가능한 임의의 핵산일 수 있다.
식물 세포의 배양은 재분화 및/또는 성숙기까지의 생장을 포함하거나 포함하지 않을 수 있다. 따라서, 본 발명의 특정한 구현예에서, 본 발명에 따른 방법으로 형질전환된 식물 세포는 형질전환 식물체로 재분화될 수 있다. 또 다른 특정한 구현예에서, 본 발명에 따른 방법으로 형질전환된 식물 세포는 형질전환 식물체로 재분화되지 않을 수 있으며, 즉 세포를 당업계에 알려진 세포 배양 기술을 사용하여 식물체로 재분화하는 것이 불가능할 수 있다. 식물 세포는 일반적으로 전체 형성능 특성을 갖는 반면에, 일부 식물 세포는 상기 세포로부터 온전한 식물체로 재분화 또는 증식하는데 사용될 수 없다. 본 발명의 일 구현예에서 본 발명의 식물 세포는 상기 세포이다. 또 다른 구현예에서 본 발명의 식물 세포는 독립영양 방법으로 그들 자신을 유지할 수 없는 식물 세포이다.
상기 핵산은 식물 세포로 또는 식물체 자체 (조직, 기관 또는 식물체의 임의의 다른 부분으로의 도입 포함)로 직접적으로 도입될 수 있다. 본 발명의 바람직한 특징에 따르면, 상기 핵산은 바람직하게는 형질전환에 의해 식물체 또는 식물 세포로 도입될 수 있다. 용어 "형질전환"은 본 발명의 "정의" 섹션에 더 상세하게 기재되어 있다.
일 구현예에서 본 발명은 본 발명에 기재된 임의의 방법으로 생산된 임의의 식물 세포 또는 식물체 및 모든 식물체 부분 및 그의 번식체로 확장된다.
본 발명은 본 발명에 따른 방법으로 얻을 수 있는 식물 또는 그의 부분 (종자 포함)을 포함한다. 식물 또는 그의 일부 또는 식물 세포는 상기에 정의된 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 외래유전자 (transgene)를 포함하며, 바람직하게는 발현 카세트와 같은 유전자 구축물을 포함한다. 본 발명은 앞서 언급한 임의의 방법으로 생산된 일차 형질전환된 또는 감염된 세포, 조직, 기관 또는 전체 식물의 자손을 포함하기 위해 더 확장될 수 있으며, 자손이 본 발명에 따른 방법으로 양친이 생산한 것과 동일한 유전형적 및/또는 표현형적 특징(들)을 나타내는 것만이 요구된다.
추가의 구현예에서 본 발명은 본 발명의 발현 카세트, 본 발명의 유전자 구축물, 또는 상기 기재된 NAC1 또는 NAC5 코딩 핵산 및/또는 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 포함하는 종자로 확장된다.
본 발명은 또한 상기 정의된 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 분리된 핵산을 함유하는 숙주 세포를 포함한다. 일 구현예에서 본 발명에 따른 숙주 세포는 식물 세포, 효모, 박테리아 또는 곰팡이이다. 본 발명에 따른 방법에 사용된 핵산, 유전자 구축물, 발현 카세트 또는 벡터에 대한 숙주 식물은 원칙적으로 유리하게 본 발명의 방법에 사용된 폴리펩티드를 합성하는 것이 가능한 모든 식물이다. 특정한 구현예에서 본 발명의 식물 세포는 본 발명의 핵산 분자를 과발현한다.
본 발명의 방법은 유리하게 임의의 식물에, 특히 본 발명에 정의된 임의의 식물에 적용될 수 있다. 본 발명의 방법에 특히 유용한 식물은 비리디플란태 (Viridiplantae) 수퍼패밀리에 속하는 모든 식물, 특히 사료 또는 마초용 콩, 관상 식물, 식량 작물, 교목 또는 관목을 포함하는 단자엽 및 쌍자엽 식물을 포함한다. 본 발명의 구현예에 있어서, 식물은 작물이다. 작물 식물의 예는 치커리, 당근, 카사바, 토끼풀 (trefoil), 대두, 비트 (beet), 사탕무, 해바라기, 캐놀라, 알팔파, 유채, 아마, 목화, 토마토, 감자 및 담배를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 본 발명의 다른 구현예에 있어서, 상기 식물은 단자엽 식물이다. 단자엽 식물의 예는 사탕수수를 포함한다. 본 발명의 다른 구현예에 있어서, 상기 식물은 곡물이다. 곡물의 예는 벼, 옥수수, 밀, 보리, 기장, 호맥 (rye), 라이밀 (triticale), 수수 (sorghum), 에머밀 (emmer), 스펠트밀 (spelt), 외알밀 (소맥, einkorn), 테프 (teff), 마일로 (milo) 및 귀리를 포함한다. 특정한 구현예에서 본 발명의 방법에 사용된 식물체는 옥수수, 밀, 벼, 대두, 목화, 캐놀라를 포함하는 평지 (oilseed rape), 사탕수수, 사탕무 및 알팔파로 이루어진 군에서 선택된다. 유리하게 본 발명의 방법은 본 발명의 식물체가 동등한 방법에 사용된 대조구 식물에 비해 증가된 수확량 및/또는 환경 스트레스에 대한 내성을 갖기 때문에 알려진 방법보다 더 효율적이다.
본 발명은 또한 종자, 잎, 열매, 꽃, 줄기, 뿌리, 지하경, 괴경 및 인경과 같은 식물의 수확가능한 부분까지 확장되나, 이에 제한되지는 않으며, 상기 수확 가능한 부분은 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 재조합 핵산을 포함한다. 본 발명은 더욱이 건조 펠렛, 가루 또는 분말, 오일, 지방 및 지방산, 전분 또는 단백질 같은 상기 식물의 수확 가능한 부분으로부터 유래된 또는 생산된, 바람직하게는 직접적으로 유래된 또는 생산된 생산물에 관련된다.
본 발명은 또한 a) 본 발명의 식물체의 성장 단계 및 b) 본 발명의 식물체 또는 종자를 포함하는 그의 일부로부터 또는 식물체 또는 종자를 포함하는 그의 일부에 의한 상기 산물의 생산 단계를 포함하는 산물의 제조 방법을 포함한다. 추가의 구현예에서 상기 방법은 a) 본 발명의 식물체의 성장 단계, b) 식물체로부터 본 발명에 기재된 수확 가능한 부분의 제거 단계 및 c) 본 발명에 따른 식물체의 수확 가능한 부분으로부터 또는 식물체의 수확 가능한 부분으로 상기 산물을 생산하는 단계를 포함한다.
일 구현예에서 본 발명의 방법으로 생산된 산물은 식료품, 사료, 식품 첨가물, 사료 첨가물, 섬유질, 화장품 또는 의약품과 같은 식물 제품일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 다른 구현예에서 생산을 위한 방법은 식물 추출물, 단백질, 아미노산, 탄수화물, 지방, 오일, 폴리머, 비타민 등과 같은 농산물을 제조하기 위해 사용될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또 다른 구현예에서 본 발명의 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드는 농산물에 포함된다. 특정한 구현예에서 본 발명의 핵산 서열 및 단백질 서열은 예를 들면, 농산물이 본 발명의 방법으로 생산된 경우 생산 마커로 사용될 수 있다. 상기 마커는 과정의 더 높은 효율성뿐만 아니라, 과정에 사용된 식물 원료 및 수확 가능한 부분의 향상된 질 때문에 산물의 질을 향상시키는 유리한 과정에 의해 생산된 산물을 동정하는데 사용될 수 있다. 상기 마커는 당업계에 알려진 다양한 방법으로 검출될 수 있으며, 예를 들면 핵산 검출을 위한 PCR에 근거한 방법 또는 단백질 검출을 위한 항체에 근거한 방법이 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명은 또한 본 발명에 기재된 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 용도 및 식물에서 앞서 언급한 임의의 수확량 관련 형질을 향상시키거나 뿌리 형태를 변형시키는 상기 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드의 용도를 포함한다. 예를 들면, 본 발명에 기재된 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 또는 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드 그 자체는 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드 코딩 유전자에 유전적으로 연결될 수 있는 마커가 동정된 육종 프로그램에서 용도를 찾을 수 있다. 상기 핵산/유전자, 또는 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드 그 자체는 분자 마커를 정의하는데 사용될 수 있다. 이 DNA 또는 단백질 마커는 본 발명의 방법에 정의된 향상된 수확량 관련 형질 또는 변형된 뿌리 형태를 갖는 식물을 선발하는 육종 프로그램에서 사용될 수 있다. 게다가, NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드 코딩 핵산/유전자의 대립인자 변이체는 마커 보조 육종 프로그램에서 용도를 찾을 수 있다. NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산은 또한 이 유전자의 일부에 대한 유전자지도 및 물리지도 제작용 탐침으로서 및 그 유전자에 연관된 형질에 대한 마커로서 사용될 수 있다. 상기 정보는 원하는 표현형을 갖는 라인 개발을 위한 식물 육종에 유용할 것이다.
또한, 본 발명은 하기의 특정한 구현예에 관한 것이다.
A: 표 12 또는 표 15에 제시된 폴리펩티드 중 어느 하나를 코딩하는 NAC 상향 조절 유전자 (NUG) 또는 이의 상동체의 식물에서의 발현 조절을 포함하는, 대조구 식물에 비하여 식물의 수확량 관련 형질을 향상시키는 방법.
B: 조직 특이적 프로모터에 작동 가능하게 연결된 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 또는 이의 상동체의 식물에서의 발현 조절을 포함하는, 비생물학적 스트레스 조건 하에서 자란 식물의 수확량 관련 형질 향상 및/또는 뿌리 형태를 변형시키는 방법.
C: 구현예 A 또는 구현예 B에 있어서, 상기 조절된 발현은 NUG, NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 또는 이의 상동체의 식물로의 도입 및 발현에 의해 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.
D: 구현예 A에 있어서, 상기 향상된 수확량 관련 형질은 대조구 식물에 비해 증가된 수확량 및/또는 생물량을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
E: 구현예 B에 있어서, 상기 향상된 수확량 관련 형질은 증가된 종자 또는 곡물 수확량을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법 및/또는 상기 변형된 뿌리 형태는 하기의 어느 하나 이상의 증가 또는 변화를 포함하거나, 하기의 어느 하나 이상의 증가 또는 변화 때문인 것을 특징으로 하는 방법: 생체 중량 또는 건조 중량 형태의 뿌리 생물량의 증가, 증가된 뿌리의 수, 증가된 뿌리 직경, 확대된 뿌리, 확대된 중심주 (stele), 확대된 통기 조직 (aerenchyma), 증가된 통기 조직 형성, 확대된 수피 (cortex), 확대된 수피 (cortical) 세포, 확대된 목질부, 변형된 분지, 향상된 침투 (penetration) 능력, 확대된 외피 (epidermis), 어린줄기에 대한 뿌리 비율의 증가.
F: 구현예 A 또는 C 내지 E 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 향상된 수확량 관련 형질은 스트레스가 없는 조건 하에서 얻어지는 것을 특징으로 하는 방법.
G: 구현예 A 내지 F 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 향상된 수확량 관련 형질은 가뭄 스트레스, 염분 스트레스 또는 질소 결핍 조건 하에서 얻어지는 것을 특징으로 하는 방법.
H: 구현예 B 내지 G 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드는 서열번호 5 내지 서열번호 15로 표시된 모티프의 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
I: 구현예 A 내지 H 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 NUG, NAC1 또는 NAC5를 코딩하는 핵산은 식물 유래, 바람직하게는 단자엽 식물 유래, 더 바람직하게는 벼과 (family Poaceae) 유래, 더욱 바람직하게는 벼속 (genus Oryza) 유래, 가장 바람직하게는 벼 (Oryza sativa) 유래인 것을 특징으로 하는 방법.
J: 구현예 A 내지 I 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 NA\UG, NAC1 또는 NAC5를 코딩하는 핵산은 표 12, 표 15 또는 표 16에 열거된 폴리펩티드 중 어느 하나를 코딩하거나, 상기 핵산의 일부이거나, 상기 핵산과 혼성화가 가능한 핵산인 것을 특징으로 하는 방법.
K: 구현예 A 내지 J 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 핵산 서열은 표 12, 표 15 또는 표 16에 제시된 어느 하나의 폴리펩티드의 오쏘로그 (orthologue) 또는 패럴로그 (paralogue)를 코딩하는 것을 특징으로 하는 방법.
L: 구현예 A 내지 K 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 핵산은 서열번호 2로 표시된 NAC1 폴리펩티드를 코딩하는 것을 특징으로 하는 방법.
M: 구현예 A 내지 L 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 핵산은 서열번호 4로 표시된 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 것을 특징으로 하는 방법.
N: 구현예 A 및 C 내지 M 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 핵산은 식물 유래의 항시성 프로모터에, 바람직하게는 식물 유래의 중간 강도 항시성 프로모터에, 더 바람직하게는 GOS2 프로모터에, 가장 바람직하게는 벼 유래의 GOS2 프로모터에 작동 가능하게 연결되는 것을 특징으로 하는 방법.
O: 구현예 B 내지 M 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 조직 특이적 프로모터는 뿌리 특이적 프로모터, 바람직하게는 RCc3 프로모터, 더욱 바람직하게는 벼 유래의 RCc3 프로모터인 것을 특징으로 하는 방법.
P: 표 12, 표 15 또는 표 16에 제시된 NUG, NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드, 또는 이의 상동체, 패럴로그 또는 오쏘로그를 코딩하는 재조합 핵산을 포함하는 것을 특징으로 하는, 구현예 A 내지 O 중 어느 한 구현예의 방법에 의해 수득 가능한 식물체, 또는 식물체의 일부, 또는 식물 세포.
Q: 하기를 포함하는 유전자 구축물 (construct):
(i) 표 12, 표 15 또는 표 16에 제시된 NUG, NAC1, NAC5 또는 이의 상동체, 패럴로그 또는 오쏘로그를 코딩하는 핵산;
(ii) (i)의 핵산 서열의 발현을 유도할 수 있는 하나 이상의 조절 서열; 및 선택적으로
(iii) 전사 종결 서열.
R: 구현예 Q에 있어서, 상기 핵산은 식물 유래의 항시성 프로모터에, 바람직하게는 식물 유래의 중간 강도 항시성 프로모터에, 더 바람직하게는 GOS2 프로모터에, 가장 바람직하게는 벼 유래의 GOS2 프로모터에 작동 가능하게 연결된 것을 특징으로 하는 구축물.
S: 구현예 Q에 있어서, 상기 핵산은 조직 특이적 프로모터에, 바람직하게는 뿌리 특이적 프로모터에, 바람직하게는 RCc3 프로모터에, 더욱 바람직하게는 벼 유래의 RCc3 프로모터에 작동 가능하게 연결된 것을 특징으로 하는 구축물.
T: 대조구 식물에 비하여 향상된 수확량 관련 형질, 바람직하게는 증가된 종자 수확량 및/또는 증가된 생물량 및/또는 변형된 뿌리 형태를 갖는 식물을 제조하는 방법에 대한 구현예 Q 내지 구현예 S 중 어느 한 구현예에 따른 유전자 구축물의 용도.
U: 구현예 Q 내지 구현예 S 중 어느 한 구현예에 따른 유전자 구축물로 형질전환된 식물, 식물의 일부 또는 식물 세포.
V: 하기 단계를 포함하는, 대조구 식물에 비하여 향상된 수확량 관련 형질, 바람직하게는 대조구 식물에 비하여 증가된 및/또는 증가된 종자 수확량 및/또는 증가된 생물량을 갖는 형질전환 식물의 제조 방법:
(i) 표 12 또는 표 15에 제시된 NUG 폴리펩티드 또는 이의 상동체, 패럴로그 또는 오쏘로그를 코딩하는 핵산을 식물 세포 또는 식물에 도입 및 발현하는 단계; 및
(ii) 식물의 생장 및 발달을 촉진하는 조건 하에서 (i)단계의 상기 식물 세포 또는 식물을 배양하는 단계; 또는
(iii) 조직 특이적 프로모터에 작동 가능하게 연결된, 표 16에 제시된 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드 또는 이의 상동체, 패럴로그 또는 오쏘로그를 코딩하는 핵산을 식물 세포 또는 식물에 도입 및 발현하는 단계; 및
(iv) 비생물적 스트레스 조건 하에서, 상기 (iii)단계의 식물 세포 또는 증가된 종자 수확량 및 변형된 뿌리 형태를 갖는 식물을 배양하는 단계.
W: 표 12, 표 15 또는 표 16에 제시된 NUG, NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드 또는 이의 상동체, 패럴로그 또는 오쏘로그를 코딩하는 핵산의 조절된 발현으로 인하여 대조구 식물에 비해 향상된 수확량 관련 형질을 갖는 형질전환 식물.
X: 구현예 P, 구현예 U 또는 구현예 W 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 식물은 비트, 사탕무 또는 알팔파와 같은 작물; 또는 사탕수수와 같은 단자엽 식물; 또는 벼, 옥수수, 밀, 보리, 기장, 호맥 (rye), 라이밀 (triticale), 수수 (sorghum), 에머밀 (emmer), 스펠트밀 (spelt), 외알밀 (소맥, einkorn), 테프 (teff), 마일로 (milo) 또는 귀리 같은 곡물인 것을 특징으로 하는 형질전환 식물 또는 상기 형질전환 식물로부터 유래된 형질전환 식물 세포.
Y: 수확 가능한 부분이 바람직하게는 뿌리 생물량 및/또는 종자인 것을 특징으로 하는, 구현예 X에 따른 식물의 수확 가능한 부분.
Z: 구현예 X에 따른 식물 및/또는 구현예 Y에 따른 식물의 수확 가능한 부분 유래의 산물.
A': 대조구 식물에 비해 식물에서 수확량 관련 형질을 향상시키기 위한 표 12, 표 15 또는 표 16에 제시된 NUG, NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드 또는 이의 상동체, 패럴로그 또는 오쏘로그를 코딩하는 핵산의 용도.
B': 구현예 P, 구현예 U, 구현예 W 또는 구현예 X에 따른 식물의 재배 단계 및 종자를 포함하는 상기 식물 또는 식물의 일부로부터 또는 종자를 포함하는 상기 식물 또는 식물의 일부를 이용하여 산물을 생산하는 단계를 포함하는, 산물의 제조 방법.
정의
하기 정의는 본 출원의 전체에서 이용될 수 있다. 본 명세서에서 섹션 제목 및 표제는 단지 편의 및 참조 목적이며, 본 명세서의 의미 또는 해석에 어떤 식으로도 영향을 미쳐서는 안된다. 본 출원의 범위 내에 사용된 기술적 용어 및 표현은 일반적으로 식물 생물학, 분자 생물학, 생물정보학 및 식물 육종 관련 기술에서 그들에게 일반적으로 적용되는 의미를 제공한다. 하기의 모든 용어 정의는 본 출원의 전체 내용에 적용된다. 특성 또는 값과 관련된 용어, 특히 "필수적으로", "약", "대략" 등은 또한 각각 정확하게 특성 또는 정확하게 값을 정의한다. 본 명세서에서 제시된 수치 또는 범위에 대한 용어 "거의"는 특히 제시된 값 또는 범위의 20% 이내, 10% 이내, 또는 5% 이내의 값 또는 범위에 관한 것이다.
펩티드(들)/단백질(들)
용어 "펩티드", "올리고펩티드", "폴리펩티드" 및 "단백질"은 본 발명에서 상호 교체 사용되며, 다른 방법으로 본 발명에서 언급하지 않는 한, 펩티드 결합으로 연결된 임의의 길이의 아미노산의 중합형을 말한다.
폴리뉴클레오티드(들)/핵산(들)/핵산 서열(들)/뉴클레오티드 서열(들)
용어 "폴리뉴클레오티드(들)", "핵산 서열(들)", "뉴클레오티드 서열(들)", "핵산(들)", "핵산분자"는 본 발명에서 상호 교체 사용되며, 임의의 길이의 미분지된 중합형인, 리보뉴클레오티드 또는 데옥시리보뉴클레오티드 또는 양자의 조합인 뉴클레오티드를 말한다.
상동체
(들)
단백질의 "상동체"는 문제의 변형되지 않은 단백질에 대해 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 가지며, 이들이 유래되는 변형되지 않은 단백질과 유사한 생물학적 및 기능적 활성을 갖는 펩티드, 올리고펩티드, 폴리펩티드, 단백질 및 효소를 포함한다.
오쏘로그 (orthologue) 및 패럴로그 (paralogue)는 상동체의 두 가지 다른 형태이며, 유전자의 조상관계를 기재하는데 사용되는 진화적 개념을 포함한다. 패럴로그는 조상 유전자의 복제로 생긴 동일한 종 내의 유전자이고; 오쏘로그는 종분화로 인하여 비롯되고, 또한 공통 조상 유전자로부터 유래한 다른 생물체의 유전자이다.
"결실"은 단백질로부터 하나 또는 하나 이상의 아미노산의 제거를 말한다.
"삽입"은 단백질 내의 예정된 위치에 하나 이상의 아미노산 잔기가 도입되는 것을 말한다. 삽입은 하나 또는 다수 아미노산의 서열 내 삽입뿐 아니라 N-말단 및/또는 C-말단 융합을 포함할 수 있다. 일반적으로 아미노산 서열 내 삽입은 N- 또는 C-말단 융합보다 작을 것이며, 약 1 내지 10 개 정도의 잔기이다. N- 또는 C-말단 융합 단백질 또는 펩티드의 예는 효모 투-하이브리드(two-hybrid) 시스템에 사용된 전사 활성제의 결합 도메인 또는 활성화 도메인, 파아지 외피 단백질, (히스티딘)-6-태그, 글루타치온 S-전달효소-태그, 단백질 A, 말토스-결합 단백질, 디히드로폴레이트 환원효소, Tag·100 에피토프, c-myc 에피토프, FLAG®-에피토프, lacZ, CMP (칼모둘린-결합 펩티드), HA 에피토프, 단백질 C 에피토프 및 VSV 에피토프를 포함한다.
"치환"은 유사한 성질 (유사한 소수성, 친수성, 항원성, 알파 나선 구조 또는 베타 병풍 구조를 형성하거나 파괴하는 경향 같은)을 갖는 다른 아미노산으로 단백질의 아미노산의 치환을 말한다. 아미노산 치환은 전형적으로 하나의 잔기의 치환이나, 폴리펩티드에 부여된 기능적 제약에 따라 클러스터될 수도 있으며, 1 내지 10개의 아미노산일 수 있다. 아미노산 치환은 바람직하게는 보존적 아미노산 치환이다. 보존적 치환 표는 당업계에 주지되어 있다 (예를 들면, Creighton (1984) Proteins, W.H. Freeman and Company (Eds) 및 하기 표 1 참고).
잔기 | 보존적 치환 | 잔기 | 보존적 치환 |
Ala | Ser | Leu | Ile; Val |
Arg | Lys | Lys | Arg; Gln |
Asn | Gln; His | Met | Leu; Ile |
Asp | Glu | Phe | Met; Leu; Tyr |
Gln | Asn | Ser | Thr; Gly |
Cys | Ser | Thr | Ser; Val |
Glu | Asp | Trp | Tyr |
Gly | Pro | Tyr | Trp; Phe |
His | Asn; Gln | Val | Ile; Leu |
Ile | Leu, Val |
아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입은 고체상 펩티드 합성 등과 같은 당업계에 주지된 펩티드 합성 기술을 이용하거나 또는 재조합 DNA 조작에 의해 용이하게 수행될 수 있다. 단백질의 치환, 삽입 또는 결실 변이체를 제조하기 위한 DNA 서열 조작 방법은 당업계에 주지되어 있다. 예를 들면, DNA 상의 예정된 위치에 치환 돌연변이를 제조하기 위한 기술은 당업자에게 주지되어 있으며, M13 돌연변이유발, T7-Gen 시험관 내 돌연변이유발 (USB, Cleveland, OH), QuickChange 자리지정 돌연변이유발 (Stratagene, San Diego, CA), PCR-매개 자리지정 돌연변이유발 또는 다른 자리지정 돌연변이유발 프로토콜을 포함한다 (Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. (1989 and yearly updates) 참고).
유도체
"유도체"는 목적 단백질과 같이 자연발생 형태의 단백질의 아미노산 서열에 비교하여, 자연적으로 발생하지 않는 아미노산 잔기로 아미노산의 치환 또는 자연적으로 발생하지 않는 아미노산 잔기의 첨가를 포함할 수 있는 펩티드, 올리고펩티드, 폴리펩티드를 포함한다. 단백질의 "유도체"는 또한 자연발생 형인 폴리펩티드의 아미노산 서열에 비교하여 자연적으로 발생하는 변형된 (글리코실화, 아실화, 프레닐화, 인산화, 미리스토일화, 황화 등) 또는 자연적으로 발생하지 않는 변형된 아미노산 잔기를 포함하는 펩티드, 올리고펩티드, 폴리펩티드를 포함한다. 유도체는 또한 원래의 아미노산 서열에 비교하여 하나 이상의 비아미노산의 치환 또는 첨가를 포함할 수 있는데, 예를 들면, 이의 검출을 용이하게 하기 위해 결합되는 리포터 분자와 같은 아미노산 서열에 공유적으로 또는 비공유적으로 결합한 리포터 분자나 다른 리간드, 및 자연적으로 발생하는 단백질의 아미노산 서열에 대해 비자연적으로 발생하는 아미노산 잔기이다. 더욱이, "유도체"는 또한 단백질의 자연적으로 발생하는 형태와 FLAG, HIS6 또는 티오레독신 같은 태깅 펩티드 (태깅펩티드 리뷰를 위해, Terpe, Appl. Microbiol. Biotechnol. 60, 523-533, 2003 참고)와의 융합을 포함한다.
도메인, 모티프/일치 서열/
시그너처
용어 "도메인"은 진화적으로 연관된 단백질의 서열 정렬 시 특정 위치에서 보존된 아미노산의 세트이다. 다른 위치의 아미노산은 상동체들 간에 다양할 수 있는 반면, 특정 위치에서 고도로 보존된 아미노산은 단백질의 구조, 안정성 또는 기능에 필수적일 것인 아미노산을 나타낸다. 단백질 상동체 패밀리의 정렬된 서열상에서 고도로 보존된 부분은 임의의 문제되는 폴리펩티드가 이전에 동정된 폴리펩티드 패밀리에 속하는지를 결정하는 동정부위로 사용될 수 있다.
용어 "모티프", "일치 서열" 또는 "시그너처"는 진화적으로 연관된 단백질의 서열에 있어 짧은 보존된 영역을 말한다. 모티프는 흔히 도메인의 고도로 보존된 부분뿐만 아니라, 도메인의 일부만을 포함할 수도 있거나 또는 보존된 도메인 외부에 있을 수도 있다 (만일 모티프의 아미노산 모두가 지정된 도메인 외부에 있으면).
전문가 데이터베이스는 예를 들면, SMART (Schultz et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95, 5857-5864; Letunic et al. (2002) Nucleic Acids Res 30, 242-244), InterPro (Mulder et al., (2003) Nucl. Acids. Res. 31, 315-318), Prosite (Bucher and Bairoch (1994), A generalized profile syntax for biomolecular sequences motifs and its function in automatic sequence interpretation. (In) ISMB-94; Proceedings 2nd International Conference on Intelligent Systems for Molecular Biology. Altman R., Brutlag D., Karp P., Lathrop R., Searls D., Eds., pp53-61, AAAI Press, Menlo Park; Hulo et al., Nucl. Acids. Res. 32:D134-D137, (2004)), 또는 Pfam (Bateman et al., Nucleic Acids Research 30(1): 276-280 (2002))이 도메인의 확인을 위해 존재한다. 단백질 서열의 인실리코 분석을 위한 도구 세트는 ExPASy 프로테오믹스 서버에서 이용가능하다 (Swiss Institute of Bioinformatics (Gasteiger et al., ExPASy: the proteomics server for in-depth protein knowledge and analysis, Nucleic Acids Res. 31:3784-3788(2003)). 도메인 또는 모티프는 또한 서열 정렬과 같은 일상적인 기술을 이용해서도 확인할 수 있다.
비교를 위한 서열정렬 방법은 당업계에 주지되어 있으며, 상기 방법은 GAP, BESTFIT, BLAST, FASTA 및 TFASTA를 포함한다. GAP은 일치되는 (match) 수는 최대로, 공백 (gap)의 수는 최소로 되는 두 서열의 전체적인 (즉, 전체 서열에 걸쳐) 정렬을 찾기 위해 Needleman 및 Wunsch ((1970) J MoI Biol 48: 443-453)의 알고리즘을 사용한다. BLAST 알고리즘 (Altschul et al. (1990) J MoI Biol 215: 403-10)은 서열 동일성의 백분율을 계산하여, 두 서열 간에 유사도의 통계적 분석을 수행한다. BLAST 분석을 수행하는 소프트웨어는 NCBI (National Centre for Biotechnology Information)를 통해 공개적으로 이용 가능하다. 상동체는 예를 들면, ClustalW 다중 서열 정렬 알고리즘 (multiple sequence alignment algorithm; version 1.83)을 사용하여, 디폴트 페어와이즈 정렬 매개변수(default pairwise alignment parameter) 및 백분율 평점법으로 용이하게 동정된다. 유사성 및 동일성의 전체 백분율은 MatGAT 소프트웨어 패키지 (Campanell et al., BMC Bioinformatics. 2003 Jul 10; 4:29. MatGAT: 단백질 또는 DNA 서열을 사용하여 유사성/동일성 매트릭스를 생성하는 적용)에서 유용한 방법 중의 하나를 사용하여 결정될 수 있다. 당업자에게 명백한 것으로서 보존된 모티프 간에 정렬을 최적화하기 위하여 약간의 수작업의 편집을 수행할 수 있다. 더욱이, 상동체 동정을 위하여 전체 길이의 서열을 사용하는 대신에, 특정 도메인 또한 사용될 수 있다. 서열 동일성 값은 핵산 또는 아미노산 전체 서열에 걸쳐, 또는 선정된 도메인 또는 보존된 모티프(들)에 걸쳐 상기 기재된 프로그램으로 디폴트 매개변수(default parameter)를 사용하여 결정될 수 있다. 국부적인 정렬을 위해서는, Smith-Waterman 알고리즘이 특히 유용하다 (Smith TF, Waterman MS (1981) J. Mol. Biol 147(1);195-7).
상호간
블라스트
(
Reciprocal
BLAST
)
전형적으로 공개적으로 유용한 NCBI 데이터베이스 같은 임의의 서열 데이터베이스에 대해 조회 서열 (예를 들면, 실시예 섹션의 표 12에 열거된 서열 이용)을 BLASTing하는 것을 포함하는 첫 번째 BLAST를 포함한다. BLASTN 또는 TBLASTX (표준 디폴트값 사용)은 일반적으로 뉴클레오티드 서열로부터 시작할 때, BLASTP 또는 TBLASTN (표준 디폴트값 사용)은 단백질 서열로부터 시작할 때 사용된다. BLAST 결과를 선택적으로 필터할 수도 있다. 필터한 결과물 또는 필터하지 않은 결과물의 전체 길이의 서열을 조회 서열이 유래된 생물체의 서열과 대조하여 다시 BLAST한다 (두 번째 BLAST). 첫 번째와 두 번째 BLAST의 결과물을 비교한다. 첫 번째 BLAST로부터의 높은 랭킹 히트(ranking hit)이 조회 서열이 유래한 것과 동종으로부터라면 패럴로그가 동정되고, 후에 다시 BLAST (BLAST back)하면 이상적으로는 조회 서열이 가장 높은 히트를 보일 것이며; 첫 번째 BLAST로부터의 높은 랭킹 히트가 조회 서열이 유래한 것과 동종으로부터가 아니라면 오쏘로그가 동정되며, 바람직하게는 다시 BLAST하면 가장 높은 히트 중에 조회 서열이 있다.
높은 랭킹 히트는 낮은 E-값을 가진 것이다. E-값이 낮을수록, 점수가 더 의미 있다 (또는 다른 말로, 우연히 히트가 발견될 기회가 더 적다). E-값의 계산은 당업계에 주지되어 있다. E-값에다가, 비교는 또한 백분율 동일성에 의하여 점수화된다. 백분율 동일성은 특정 길이에 걸쳐 두 비교되는 핵산 (또는 폴리펩티드) 서열 간에 동일한 뉴클레오티드 (또는 아미노산)의 수를 말한다. 큰 패밀리의 경우, 연관 유전자의 클러스터링을 시각화하는데 도움을 주고 오쏘로그 및 패럴로그를 동정하기 위해서 ClustalW 다음에 neighbour joining tree가 사용된다.
혼성화
본 발명에 정의된 용어 "혼성화"는 사실상 상동인 상보적인 뉴클레오티드 서열이 서로 어닐링하는 과정이다. 혼성화 과정은 전적으로 용액 내에서, 즉 상보적인 두 핵산이 용액 내에 있을 때 일어날 수 있다. 혼성화 과정은 또한 상보적인 핵산의 하나가 자성 비드, 세파로오스(Sepharose) 비드 또는 어떤 다른 수지 (resin) 같은 기질에 고정되었을 때도 일어날 수 있다. 혼성화 과정은 더욱이 상보적인 핵산 중의 하나가 니트로셀룰로스 또는 나일론 막 같은 고체 지지체에 고정되었거나 또는 사진석판술에 의하여 규산질의 유리 지지체 (핵산 어레이, 마이크로어레이 또는 핵산 칩이라 알려짐)에 고정되었을 때에도 일어날 수 있다. 혼성화가 일어나게 하기 위하여, 핵산분자는 일반적으로 열적으로 또는 화학적으로 변성되어 이중 가닥을 2개의 단일가닥으로 녹이고/녹이거나 단일 가닥 핵산으로부터 헤어핀 또는 기타 이차 구조를 제거한다.
용어 "스트린전시"는 혼성화가 일어나는 조건을 말한다. 혼성화의 스트린전시는 온도, 염 농도, 이온 강도 및 혼성화 완충액 조성 같은 조건의 영향을 받는다. 일반적으로 낮은 스트린전시 조건은 정해진 이온강도 및 pH에서 특정 서열에 대한 용해점 (Tm)보다 약 30℃ 낮은 온도가 선택된다. 중간 스트린전시 조건은 Tm 보다 20℃ 낮은 온도일 때, 높은 스트린전시 조건은 Tm 보다 10℃ 낮은 온도이다. 높은 스트린전시 혼성화 조건은 전형적으로 표적 핵산 서열에 높은 서열 유사성을 갖는 혼성화 서열을 분리하기 위해 사용된다. 그러나, 핵산은 서열 상의 차이가 있더라도 유전암호의 축퇴로 인하여 실제로는 동일한 폴리펩티드를 코딩할 수 있다. 그러므로, 중간 스트린전시 혼성화 조건은 종종 상기 핵산분자를 동정하는데 필요할 수 있다.
Tm은 정해진 이온 강도 및 pH 하에서 표적 서열의 50%가 완벽하게 매치된 탐침에 혼성화하는 온도이다. Tm은 용액 조건, 염기 조성 및 탐침의 길이에 의존적이다. 예를 들면, 보다 긴 서열일수록 보다 높은 온도에서 특이적으로 혼성화한다. 최대 혼성화율은 Tm보다 약 16℃에서 32℃까지 낮을 때 얻어진다. 1가 양이온이 혼성액에 있으면 두 핵산 가닥 간에 정전기적 반발이 감소하여 혼성화가 촉진되고; 이 효과는 0.4M (보다 높은 농도에서는 이 효과가 무시될 수 있다)까지의 나트륨 농도에서 보여진다. 포름아미드는 DNA-DNA 및 DNA-RNA 이중가닥의 용해 온도를 포름아미드 퍼센트 당 0.6 내지 0.7℃ 내리며, 50% 포름아미드의 첨가는 혼성화율은 낮아지더라도 혼성화가 30 내지 45℃에서 일어나게 한다. 염기쌍 미스매치는 혼성화율 및 이중가닥의 온도 안정성을 감소시킨다. 평균적으로 그리고 큰 탐침에 대하여, Tm은 염기 미스매치 % 당 약 1℃ 감소한다. Tm은 혼성체의 유형에 따라 하기의 식으로 계산할 수 있다:
1) DNA-DNA 혼성체 (Meinkoth 및 Wahl, Anal. Biochem., 138: 267-284, 1984):
Tm=81.5℃+16.6xlog10[Na+]a+0.41x%[G/Cb]-500x[Lc]-1 -0.61x%포름아미드
2) DNA-RNA 또는 RNA-RNA 혼성체:
Tm= 79.8℃ + 18.5 (log10[Na+]a)+0.58(%G/Cb)+11.8(%G/Cb)2-820/Lc
3) 올리고-DNA 또는 올리고-RNAd 혼성체:
20개 뉴클레오티드 미만에 대해: Tm=2(In)
20-35개 뉴클레오티드에 대해: Tm=22+1.46(In)
a 또는 다른 1가 양이온에 대하여, 0.01-0.4 M 범위 내에서만 정확.
b 30% 내지 75% 범위 내에서 %GC에 대하여만 정확.
c L = bp으로 표시된 이중가닥의 길이.
d 올리고, 올리고뉴클레오티드; In,= 효과적인 프라이머 길이 = 2x(G/C의 수)+(A/T의 수)
비특이적 결합은 예를 들면, 단백질 함유 용액으로 막을 차단하고, 혼성화 완충액에 이종의 RNA, DNA, 및 SDS를 첨가하고, RNase 처리하는 것과 같은 많은 알려진 기술 중 임의의 하나를 사용하여 조절할 수 있다. 비상동 탐침에 대하여, 일련의 혼성화 과정은 (i) 점차적으로 어닐링 온도를 낮추거나 (예를 들면 68℃에서 42℃까지) (ii) 점차적으로 포름아미드 농도를 낮추거나 (예를 들면 50%에서 0%까지) 중 하나를 변화시킴으로써 수행될 수 있다. 당업자는 혼성화 중에 변할 수 있는, 그리고 스트린전시 조건을 유지하거나 바꾸는 다양한 매개변수를 인식하고 있다.
혼성화 조건 외에, 혼성화의 특이성은 또한 전형적으로 혼성화 후 세척 기능에 의존한다. 비특이적 혼성화로 생기는 백그라운드를 제거하기 위하여, 시료를 묽은 염 용액으로 세척한다. 이런 세척의 결정적인 요인은 최종 세척액의 이온 강도 및 온도를 포함한다: 염 농도가 낮고 세척 온도가 높을수록 세척의 스트린전시는 높아진다. 세척 조건은 전형적으로 혼성화 스트린전시에서 또는 보다 낮게 수행된다. 양성 혼성화는 적어도 백그라운드의 2 배의 신호로 나타난다. 일반적으로 핵산 혼성화 분석이나 유전자 증폭 검출 과정에 적절한 스트린전트 조건은 상기와 같다. 다소 스트린전트한 조건 또한 선택될 수 있다. 당업자는 세척 중에 변할 수 있는, 그리고 스트린전시 조건을 유지하거나 바꾸는 다양한 매개변수를 인식하고 있다.
예를 들면, 50개 뉴클레오티드보다 긴 DNA 혼성체에 대한 전형적인 높은 스트린전시 혼성화 조건은 65℃, 1x SSC에서 또는 42℃, 1x SSC 및 50% 포름아미드에서 혼성화 후 65℃, 0.3x SSC에서 세척하는 것이다. 50개 뉴클레오티드보다 긴 DNA 혼성체에 대한 중간 스트린전시 혼성화 조건은 50℃, 4x SSC 또는 40℃, 6x SSC 및 50% 포름아미드에서 혼성화 후, 50℃, 2x SSC에서 세척하는 것이다. 혼성체의 길이는 혼성화하는 핵산에 대해 예측된 길이이다. 알려진 서열의 핵산이 혼성화 될 때 혼성체의 길이는 서열을 정렬하고 본 발명에서 기재된 보존된 영역을 동정하면 결정될 수 있다. 1X SSC는 0.15M NaCl 및 15mM 소듐 시트레이트이며; 혼성액 및 세척액에는 부가적으로 5x Denhardt's reagent, 0.5-1.0% SDS, 100 ㎍/ml 변성된, 단편화된 연어 정자 DNA, 0.5% 소듐 피로포스페이트가 포함된다.
스트린전시 수준을 결정하기 위해서는 [Sambrook 등 (2001) Molecular Cloning: a laboratory manual, 3rd Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, CSH, New York or to Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. (1989, 매년 개정됨)]을 참조하면 된다.
스플라이스
변이체
본 발명에서 사용된 용어 "스플라이스 변이체"는 선정된 인트론 및/또는 엑손이 절단되거나, 치환되거나, 대체되거나, 부가된, 또는 인트론이 짧아지거나 길어진 핵산 서열의 변이체를 포함한다. 상기 변이체는 단백질의 생물학적 활성이 사실상 보유되며; 이는 단백질의 기능적 단편을 선택적으로 보유함으로써 달성될 수 있다. 상기 스플라이스 변이체는 자연계에서 발견되거나 인공적으로 만들 수도 있다. 상기 스플라이스 변이체를 예측하고 분리하는 방법은 당업계에 주지되어 있다 (예를 들면 Foissac 및 Schiex (2005) BMC Bioinformatics 6: 25 참고).
대립인자
변이체
"대립인자" 또는 "대립인자 변이체"는 동일한 염색체 상에 위치한 해당 유전자의 또 다른 형태이다. 대립인자 변이체는 작은 삽입/결실 다형성 (Insertion/Deletion Polymorphisms, INDELs) 뿐만 아니라 단일염기다형성 (Single Nucleotide Polymorphisms, SNPs)을 포함한다. INDELs의 크기는 보통 100 bp 미만이다. SNPs 및 INDELs이 대부분의 생물체의 자연적으로 발생하는 다형 균주에 있어 가장 큰 서열 변이체를 형성한다.
내재적 유전자
본 발명에서 "내재적" 유전자는 자연적 형태 (즉, 임의의 인간의 개입이 없는)로 식물에서 발견되는 것으로서 문제의 유전자뿐 아니라, 분리된 형태로 연이어 식물체에 (재)도입된 동일한 유전자 (또는 사실상 상동인 핵산/유전자)(외래유전자, transgene)를 말한다. 예를 들면, 상기 외래유전자를 갖는 형질전환 식물체에서는 외래유전자 발현의 실질적인 감소 및/또는 내재적 유전자 발현의 실질적인 감소가 있을 수 있다. 분리된 유전자는 생물체로부터 분리되거나, 또는 예를 들면 화학적 합성에 의하여 인위적으로 만들 수도 있다.
유전자
셔플링
(
shuffling
)/방향진화 (
directed
evolution
)
"유전자 셔플링" 또는 "방향진화"는 DNA 셔플링의 반복에 이은 변형된 생물학적 활성을 갖는 단백질을 코딩하는 핵산이나 그 일부분의 변이체 생성을 위해 적절한 탐색 및/또는 선발로 구성된다 (Castle 등, (2004) Science 304(5674): 1151-4; 미국 특허 제5,811,238호 및 제6,395,547호).
구축물 (
construct
)
인공적인 DNA (플라스미드 또는 바이러스 DNA와 같은, 그러나 이에 제한되지 않음)는 숙주 세포에서 복제가 가능하고, 숙주 세포 또는 숙주 개체로의 목적 DNA 서열의 도입을 위해 사용된다. 본 발명의 숙주 세포는 대장균 또는 아그로박테리움 종 세포와 같은 박테리아 세포, 효모 세포, 곰팡이, 조류 (algal) 또는 남조류 세포 또는 식물 세포에서 선택된 임의의 세포일 수 있다. 당업자는 목적 서열을 함유하는 숙주 세포를 성공적으로 형질전환, 선발 및 증식시키기 위하여 벡터 내에 존재해야 하는 유전적 요소를 주지하고 있다. 목적 서열은 본 발명에 기재된 하나 이상의 조절 서열 (적어도 프로모터)에 작동 가능하게 연결된다. 부가적인 조절 인자는 해독뿐만 아니라 전사 인핸서를 포함한다. 본 발명을 수행함에 있어 사용하기에 적절한 종결신호 및 인핸서 서열이 당업자에게 공지되어 있다. "정의" 섹션에 기재된 바와 같이, 세포질 내에 축적되는 성숙한 메시지의 양 증가를 위하여 인트론 서열이 또한 5' 비해독 영역 (UTR) 또는 코딩 서열에 첨가될 수 있다. 다른 조절 서열 (프로모터, 인핸서, 사일런서, 인트론 서열, 3'UTR 및/또는 5'UTR 영역 외에)은 단백질 및/또는 RNA 안정화 인자들일 수 있다. 상기 서열은 알려져 있거나, 당업자가 쉽게 얻을 수 있다.
본 발명의 유전자 구축물은 특정 세포 유형에서 유지 및/또는 복제에 필요한 복제원점 서열을 포함한다. 한 예는 에피좀 유전자 요소 (예를 들면, 플라스미드 또는 코스미드 분자)로서 유전자 구축물이 세균 세포 내에 유지되어야 할 때이다. 바람직한 복제 원점은 f1-ori 및 colE1를 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 방법에 사용된 핵산 서열이 성공적으로 전달되었는지 검출 및/또는 이들 핵산 서열을 포함하는 형질전환 식물의 선발을 위해서 마커 유전자 (또는 리포터 유전자)를 사용하는 것이 유리하다. 따라서, 유전자 구축물은 선택적으로 선발 마커 유전자를 포함한다. 선발 마커는 본 발명의 "정의" 섹션에서 더 상세히 기재된다. 마커 유전자는 더 이상 필요하지 않을 시 형질전환 세포로부터 제거 또는 절단될 수 있다. 마커 제거 기술은 당업계에 공지되어 있으며, 유용한 기술은 상기 정의 섹션에 기재되어 있다.
조절 인자/조절 서열/프로모터
용어 "조절 인자", "조절 서열" 및 "프로모터"는 본 발명에서 상호 호환적으로 사용되며, 결합되는 서열의 발현에 영향을 미칠 수 있는 조절 핵산 서열을 말하는 것으로 사용된다. 용어 "프로모터"는 전형적으로 유전자의 전사 개시점의 업스트림에 있으며, RNA 중합효소 및 다른 단백질의 인지 및 결합에 관여하여 작동가능하게 연결된 핵산의 전사를 지시하는 핵산 조절 서열을 말한다. 상기 언급한 용어에는 전형적인 진핵세포 게놈 유전자 (CCAAT 박스 서열이 있거나 없이 정확한 전사 개시에 필요한 TATA 박스를 포함) 및 발달 및/또는 외부 자극에 반응하여 또는 조직 특이적 방식으로 유전자 발현을 변경하는 부가적인 조절 인자 (즉, 업스트림 활성화 서열, 인핸서 및 사일런서)로부터 유래한 전사 조절 서열이 포함된다. 또한 상기 용어에는 -35 박스 서열 및/또는 -10 박스 전사 조절 서열을 포함하는 전형적인 원핵생물 유전자의 전사 조절 서열이 포함된다. 용어 "조절 인자"는 또한 세포, 조직 또는 기관에 핵산분자의 발현을 하게 하거나 활성화 또는 증가시키는 합성 융합 분자 또는 유도체를 포함한다.
"식물 프로모터"는 식물 세포에 코딩 서열 단편의 발현을 중재하는 조절 인자를 포함한다. 따라서, 식물 프로모터는 식물에서 유래해야 하는 것은 아니며, 예를 들면 식물 세포에 침범하는 바이러스 또는 미생물 기원일 수도 있다. "식물 프로모터"는 식물 세포, 예를 들면, 본 발명의 방법에서 발현되며, 본 발명에 기재된 핵산 서열로 형질전환된 식물 기원일 수 있다. 이는 또한 "식물" 종결신호 같은 "식물" 조절 신호에도 해당된다. 본 발명의 방법에 유용한 뉴클레오티드 서열의 프로모터 업스트림은 프로모터, 개방형해독틀 (ORF) 또는 종결신호 또는 ORF로부터 떨어져 있는 다른 3' 조절 영역 같은 3'-조절 영역의 기능성 또는 활성을 방해하지 않고 하나 또는 그 이상의 뉴클레오티드 치환(들), 삽입(들) 및/또는 결실(들)에 의하여 변형될 수 있다. 더욱이 서열의 변형에 의하여 프로모터 활성은 증가될 수 있거나, 또는 보다 활성이 큰 프로모터, 심지어 이종 생물체의 프로모터로 완전히 대체되는 것도 가능하다. 식물체에서의 발현을 위해서는 상기 언급된 것처럼 핵산분자는 올바른 시점 에 요구되는 공간적 발현 양상으로 유전자를 발현하는 적절한 프로모터에 작동가능하게 연결되거나 프로모터를 포함해야 한다.
기능적으로 동등한 프로모터 동정을 위해, 후보 프로모터의 프로모터 강도 및/또는 발현 양상은 예를 들면, 리포터 유전자에 프로모터를 작동하게 연결하여 다양한 식물 조직에서 리포터 유전자의 발현 수준 및 양상을 검정함으로써 분석할 수 있다. 적절한 주지된 리포터 유전자는 예를 들면 베타-글루쿠로니다제 또는 베타-갈락토시다제를 포함한다. 프로모터 활성은 베타-글루쿠로니다제 또는 베타-갈락토시다제의 효소 활성을 측정함으로써 검정된다. 프로모터 강도 및/또는 발현 양상은 기준 프로모터의 것에 비교된다 (본 발명의 방법에 사용된 것과 같은 것). 다르게는, 프로모터 강도는 방사선 사진의 농도계 분석을 이용한 노던 블럿, 정량적 실시간 PCR 또는 RT-PCR 같은 당업계에 공지된 방법을 사용하여, mRNA 수준을 정량화하거나 본 발명의 방법에 사용된 핵산의 mRNA 수준과 18S rRNA 같은 하우스키핑(housekeeping) 유전자의 mRNA 수준을 비교함으로써 분석될 수 있다 (Heid 등, 1996 Genome Methods 6: 986-994). 일반적으로 "약한 프로모터"는 코딩 서열의 발현을 낮은 수준으로 이끄는 것이다. "낮은 수준"은 세포당 약 1/10,000 전사체 내지 약 1/100,000 전사체, 약 1/500,0000 전사체까지의 수준을 말한다. 역으로, "강력한 프로모터" 는 코딩 서열의 발현을 높은 수준으로 또는 세포당 약 1/10 전사체 내지 약 1/100 전사체 내지 약 1/1000 전사체로 이끄는 것이다. 일반적으로 "중간 강도 프로모터"는 강한 프로모터보다 낮은 수준으로 특히 모든 경우에 있어서 35S CaMV 프로모터의 조절하에 있을 때 얻어지는 것보다 낮은 수준으로 코딩 서열의 발현을 이끄는 프로모터를 의미한다.
작동가능하게 연결된
본 발명에서 사용된 용어 "작동가능하게 연결된"은 프로모터 서열과 해당 유전자 간의 기능적 연관을 말하는 것으로, 그럼으로써 프로모터 서열이 해당 유전자의 전사를 개시할 수 있다.
항시성
프로모터
"항시성 프로모터"는 반드시 항상은 아니더라도 생장 및 발달의 대부분 기간 중에 그리고 대부분의 환경적 조건 하에서 적어도 하나의 세포, 조직 또는 기관에서 전사적으로 활성인 프로모터를 말한다. 하기 표 2가 항시성 프로모터의 예이다.
유전자 출처 | 참고문헌 |
액틴 | McElroy 등, Plant Cell, 2: 163-171, 1990 |
HMGP | WO 2004/070039 |
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옥수수 H3 히스톤 | Lepetit 등, Mol. Gen. Genet. 231:276-285, 1992 |
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SAD1 | Jain 등, Crop Science, 39 (6), 1999: 1696 |
SAD2 | Jain 등, Crop Science, 39 (6), 1999: 1696 |
Nos | Shaw 등 (1984) Nucleic Acids Res. 12(20):7831-7846 |
V-ATPase | WO 01/14572 |
Super 프로모터 | WO 95/14098 |
G-box 단백질 | WO 94/12015 |
편재하는 프로모터
"편재하는 프로모터"는 사실상 생물체의 모든 조직이나 세포에서 활성을 갖는 것이다.
발달적으로
조절된 프로모터
"발달적으로 조절된 프로모터"는 특정 발달 단계 중에 또는 발달적 변화가 일어나는 식물체의 부위에서 활성을 갖는 것이다.
유도성 프로모터
"유도성 프로모터"는 화학적 (리뷰를 위해, Gatz 1997, Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol., 48:89-108 참조), 환경적 또는 물리적 자극에 반응하여 전사 개시가 유도되거나 증가되거나 또는 식물이 다양한 스트레스 환경에 노출될 때 "스트레스 유도성", 즉 활성화될 수 있거나 또는, 식물이 다양한 병원균에 노출될 때 "병원균 유도성", 즉 활성화될 수 있다.
기관 특이적/조직 특이적 프로모터
"기관 특이적" 또는 "조직 특이적 프로모터"는 잎, 뿌리, 종자 조직 등과 같이 특정 기관 또는 조직에서 우선적으로 발현 개시가 가능한 것이다. 예를 들면, "뿌리 특이적 프로모터"는 식물의 다른 부위에 약간 누설된 (leaky) 발현을 허용하지만, 사실상 식물의 다른 부위를 제외하고 식물 뿌리에서 우세하게 전사적으로 활성이 있는 프로모터이다. 특정 세포에서만 전사를 개시할 수 있는 프로모터는 본 발명에서 "세포 특이적"이라 한다.
뿌리 특이적 프로모터의 예는 하기 표 3에 열거된다:
유전자 출처 | 참고문헌 |
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알팔파 인산염 운반자 (Medicago phosphate transporter) |
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BTG-26 유채 (Brassica napus) | US 20050044585 |
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The LeNRT1-1 (토마토) | Lauter et al. (1996, PNAS 3:8139) |
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NRT2;1Np (N. plumbaginifolia) | Quesada et al. (1997, Plant Mol. Biol. 34:265) |
"종자 특이적 프로모터"는 종자 조직에서만 반드시 배타적으로는 아니지만 (누설 발현의 경우) 종자조직에서 우세하게 전사적으로 활성인 것이다. 종자 특이적 프로모터는 종자발달 및/또는 발아 중에 활성일 것이다. 종자 특이적 프로모터는 배유/호분층/배 특이적일 수 있다. 종자 특이적 프로모터 (배유/호분층/배 특이적)의 예는 하기 표 4 내지 표 7에 제시된다. 종자 특이적 프로모터의 추가적인 예는 Qing Qu 및 Takaiwa (Plant Biotechnol. J. 2, 113-125, 2004)에 제시되며, 이의 개시는 충분히 설명한 것처럼 본 발명에 원용에 의해 포함된다.
유전자 출처 | 참고문헌 |
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PRO0136, 벼 알라닌 아미노트랜스퍼라제 | 미공개 |
PRO0147, 트립신 저해제 ITR1 (보리) | 미공개 |
PRO0151, 벼 WSI18 | WO 2004/070039 |
PRO0175, 벼 RAB21 | WO 2004/070039 |
PRO005 | WO 2004/070039 |
PRO0095 | WO 2004/070039 |
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PRO0095 | WO 2004/070039 |
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옥수수 B-Peru | Selinger et al., Genetics 149;1125-38,1998 |
본 발명에서 정의된 "녹색 조직 특이적 프로모터"는 식물의 다른 부위에 약간 누설된 발현을 허용하지만, 식물의 다른 부위를 제외하고 실질적으로 녹색 조직에서 우세하게 전사적으로 활성이 있는 프로모터이다.
본 발명의 방법을 수행하는데 사용될 수 있는 녹색 조직 특이적 프로모터의 예는 하기의 표 8에 있다.
유전자 출처 | 발현 | 참고문헌 |
옥수수 오쏘포스페이트 디키나아제 (Orthophosphate dikinase) |
잎 특이적 | Fukavama et al., Plant Physiol. 2001 Nov;127(3):1136-46 |
옥수수 포스포에놀피루베이트 카르복실라아제 | 잎 특이적 | Kausch et al., Plant Mol Biol. 2001 Jan;45(1):1-15 |
벼 포스포에놀피루베이트 카르복실라아제 | 잎 특이적 | Lin et al., 2004 DNA Seq. 2004 Aug;15(4):269-76 |
벼 작은 서브유닛 루비스코 | 잎 특이적 | Nomura et al., Plant Mol Biol. 2000 Sep;44(1)99-106 |
벼 베타 익스팬신(expansin) EXBP9 | 어린줄기 특이적 | WO 2004/070039 |
Pigeonpea 작은 서브유닛 루비스코 | 잎 특이적 | Panguluri et al., Indian J Exp Biol. 2005 Apr;43(4):369-72 |
완두 RBCS3A | 잎 특이적 |
조직 특이적 프로모터의 다른 예는 식물의 다른 부위에 약간 누설된 발현을 허용하지만, 식물의 다른 부위를 제외하고 실질적으로 분열조직에서 우세하게 전사적으로 활성이 있는 분열조직 특이적 프로모터이다. 본 발명의 방법을 수행하는데 사용될 수 있는 녹색 분열조직 특이적 프로모터의 예는 하기의 표 9에 있다.
유전자 출처 | 발현 패턴 | 참고문헌 |
벼 OSH1 | 어린줄기 정단 분열조직, 구상배 단계에서 실생단계까지 |
Sato et al. (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93:8117-8122 |
벼 메탈로티오네인 (metallothionein) |
분열조직 특이적 | BAD87835.1 |
WAK1 & WAK2 | 어린줄기 및 뿌리, 정단 분열조직, 및 팽창 잎 및 꽃받침 |
Wagner & Kohorn (2001) Plant Cell 13(2): 303-318 |
종결신호 (
Terminator
)
용어 "종결신호"는 일차 전사체의 3' 프로세싱 및 폴리아데닐화와 전사 종결의 신호가 되는 전사 단위의 말단에 있는 DNA 서열인 조절 서열이다. 종결신호는 자연 유전자, 다양한 다른 식물 유전자, 또는 T-DNA로부터 유래될 수 있다. 첨가된 종결신호는 예를 들면, 노팔린 신타아제 또는 옥토파인 신타아제 유전자, 또는 또 다른 식물 유전자, 또는 덜 바람직하게는 임의의 다른 진핵세포 유전자로부터 유래된다.
선발
마커
(유전자)/리포터 유전자
"선발 마커", "선발 마커 유전자" 또는 "리포터 유전자"는 본 발명의 핵산 구축물로 감염되거나 형질전환된 세포의 동정 및/또는 선발을 촉진하기 위하여 발현된 세포에 표현형을 부여하는 임의의 유전자를 포함한다. 이들 마커 유전자는 일련의 상이한 원리를 통해 핵산 분자의 성공적인 전달을 확인 가능하게 한다. 적절한 마커는 항생제나 제초제 저항성을 주거나 새로운 대사 형질을 도입하거나 또는 시각적인 선발을 가능하게 하는 마커로부터 선택된다. 선발 마커 유전자의 예는 항생제 (네오마이신 및 카나마이신을 인산화하는 nptII, 하이그로마이신을 인산화하는 hpt, 또는 예를 들면, 블레오마이신, 스트렙토마이신, 테트라사이클린, 클로람페니콜, 앰피실린, 겐타마이신, 제네티신 (G418), 스펙티노마이신, 블라스티시딘에 저항성을 주는 유전자), 제초제 (예를 들면, Basta®에 저항성을 제공하는 bar; 글리포제이트에 대한 저항성을 제공하는 aroA 또는 gox, 또는 예를 들면, 이미다졸리논, 포스피노트리신, 설포닐우레아에 저항성을 주는 유전자)에 저항성을 주는 유전자 또는 대사적 형질을 제공하는 유전자 (식물이 유일한 탄소원으로 만노즈를 이용하게 하는 manA 또는 자일로스 이용을 위한 자일로스 이성화효소, 또는 2-데옥시글루코스에 대한 저항성 같은 반영양적 마커)를 포함한다. 가시적 마커 유전자의 발현으로 발색 (예를 들면 베타-글루쿠로니다제, GUS, 또는 발색된 기질, 예를 들면 X-Gal을 가진 베타-갈락토시다제), 발광 (루시페린/루시파라제 시스템 같은) 또는 형광 (녹색 형광 단백질, GFP, 및 이의 유도체)이 형성된다. 이 목록은 소수의 가능한 마커만을 나타낸다. 당업자는 상기 마커에 친숙하다. 생물체 및 선발 방법에 따라 다른 마커가 선호된다.
식물 세포로 핵산의 안정적인 또는 일시적인 통합에 따라 소수의 세포만이 외래 DNA를 취하여, 필요 시 사용된 발현벡터 및 사용된 감염 기술에 따라 게놈 내로 이를 통합한다는 것이 알려져 있다. 통합체를 동정하고 선발하기 위하여, 선발 마커를 코딩하는 유전자 (상기 기재된 것과 같은)가 보통 목적 유전자와 함께 숙주 세포에 도입된다. 이들 마커는 예를 들면 이들 마커 유전자가 예를 들면 전통적인 방법에 의한 결실에 의하여 기능이 없는 돌연변이체에 사용될 수 있다. 더욱이, 선발 마커를 코딩하는 핵산분자는 본 발명의 또는 본 발명의 방법에 사용된 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 동일한 벡터 또는 그 외 별개 백터 상에서 숙주 세포로 도입될 수 있다. 도입된 핵산으로 안정적으로 감염된 세포는 예를 들면 선발에 의해서 동정될 수 있다 (예를 들면, 통합된 선발 마커를 갖는 세포는 생존하는 반면, 다른 세포는 사멸한다).
마커 유전자, 특히 항생제 및 제초제에 저항성이 있는 유전자는 일단 핵산이 성공적으로 도입되면 형질전환 숙주 세포에서 더 이상 필요하지 않거나, 바람직하지 않으므로, 핵산 도입을 위한 본 발명의 방법에서는 이들 마커 유전자가 제거 또는 절단되게 하는 기술을 사용한다. 하나의 상기 방법이 동시형질전환 (co-transformation)으로 알려진 것이다. 동시형질전환 방법은 형질전환을 위해 두 벡터를 동시에 사용하여, 하나의 벡터에는 본 발명에 따른 핵산이 있고, 둘째 벡터에는 마커 유전자(들)이 있다. 대부분의 형질전환체는 양 벡터를 받거나, 식물의 경우 (형질전환체의 40% 이상까지) 포함한다. 아그로박테리아로 형질전환한 경우, 형질전환체는 보통 벡터의 일부, 즉 보통 발현 카세트인 T-DNA에 의해 플랭킹된 서열만을 받는다. 마커 유전자는 연이어 교배를 하여 형질전환 식물체로부터 제거될 수 있다. 다른 방법에서는, 마커 유전자가 트랜스포존 (transposon)에 통합되어 원하는 핵산과 함께 형질전환에 사용된다 (Ac/Ds 기술로 알려짐). 형질전환체는 트랜스포자제 (transposase) 공급원과 교배될 수 있거나 또는 트랜스포자제가 발현되게 하는 핵산 구축물로 일시적으로 또는 안정적으로 형질전환된다. 어떤 경우에 (약 10%), 일단 형질전환이 성공적으로 되면 트랜스포존은 숙주 세포의 게놈 밖으로 튀어나가 소실된다. 더 많은 경우에, 트랜스포존은 다른 구역으로 튄다. 이들 경우에 마커 유전자는 교배에 의하여 제거되어야 한다. 미생물학에서 상기 일이 있어났는지 검출을 가능하게 하거나 용이하게 하는 기술이 개발되었다. 보다 편리한 방법은 재조합 시스템이라 알려진 것에 의존하는 것으로; 이점은 교배에 의한 제거가 면제될 수 있다는 것이다. 이 유형의 가장 잘 알려진 시스템은 Cre/lox 시스템이다. Cre1은 loxP 서열 사이에 위치한 서열을 제거하는 리콤비나아제이다. 만일 마커 유전자가 loxP 서열 사이에 통합되면 리콤비나아제의 발현에 의해서 마커 유전자는 제거된다. 다른 재조합 시스템은 HIN/HIX, FLP/FRT 및 REP/STB 시스템 (Tribble 등, J. Biol. Chem., 275, 2000: 22255-22267; Velmurugan 등, J. Cell Biol., 149, 2000: 553-566)이다. 본 발명에 따른 핵산 서열의 식물 게놈 내로 위치 특이적 통합이 가능하다. 자연적으로, 이들 방법은 또한 효모, 균류 또는 세균 같은 미생물에 응용될 수 있다.
형질전환된 (
transgenic
)/외래유전자 (
transgene
)/재조합
본 발명에서 "형질전환된", "외래유전자" 또는 "재조합"은 예를 들면, 핵산 서열, 발현카세트, 핵산 서열을 포함하는 유전자 구축물 또는 벡터, 또는 본 발명에 따른 핵산 서열, 발현 카세트나 벡터로 형질전환된 생물체, 하기에 기재된 재조합 방법에 의해 생성된 모든 구조물에 관한 의미이다:
(a) 본 발명의 방법에 유용한 단백질을 코딩하는 핵산서열, 또는
(b) 본 발명에 따른 핵산 서열에 작동가능하게 연결된 유전자 조절 서열 (들), 예를 들면 프로모터, 또는
(c) a) 및 b)
가 자연적인 유전적 환경에 있지 않거나, 재조합 방법으로 변형되어 왔으므로 예를 들면, 하나 또는 그 이상의 뉴클레오티드 잔기의 치환, 부가, 결실, 역위 또는 삽입의 유형의 변형이 가능하다. 자연적인 유전적 환경은 원래의 식물에서 자연적인 게놈 또는 염색체상의 위치나 게놈 라이브러리에서의 존재를 의미하는 것으로 이해된다. 게놈 라이브러리의 경우, 핵산 서열의 자연적인 유전적 환경은 바람직하게는 적어도 부분적으로는 보유된다. 환경은 적어도 한쪽의 핵산 서열을 플랭킹하며 적어도 50 bp, 바람직하게는 적어도 500 bp, 특히 바람직하게는 적어도 1000 bp, 가장 바람직하게는 적어도 5000 bp 길이의 서열을 갖는다. 자연적으로 발생하는 발현 카세트, 예를 들면 본 발명의 방법에 유용한 폴리펩티드를 코딩하는 해당 핵산 서열과 핵산 서열의 자연적 프로모터의 자연적으로 생긴 조합은 이 발현 카세트가 예를 들면 돌연변이 처리 같은 비자연적인 합성 ("인위적") 방법으로 변형될 때 형질 전환 발현카세트가 된다. 적절한 방법이 예를 들면 US 5,565,350 또는 WO 00/15815에 기재되어 있다.
본 발명의 목적상, 형질전환된 식물은 상기처럼 본 발명의 방법에서 사용된 핵산이 상기 식물의 게놈에 존재하지 않거나, 상기 식물로부터 유래하지 않거나, 상기 식물의 게놈에 존재할 수 있지만, 상기 식물의 게놈상의 자연적 위치에 있지 않아 핵산이 동종에서 또는 이종에서 발현될 수 있다는 의미로 이해된다. 그러나, 언급된 바와 같이, 형질전환은 또한 본 발명에 있어 또는 본 발명 방법에 사용된 핵산이 식물 게놈 내의 자연적 위치에 있는 반면, 그 서열이 자연적 서열에 대하여 변형되었고 및/또는 자연적 서열의 조절 서열이 변형되었음을 의미한다. 형질전환은 핵산의 동종 또는 바람직하게는 이종 발현이 일어나는 게놈 내의 비자연적 위치에서 본 발명에 따른 핵산의 발현을 의미하는 것으로 바람직하게는 이해된다. 바람직한 형질전환된 식물이 본 발명에서 언급된다.
본 발명의 명세서에서, 용어 "분리된 핵산" 또는 "분리된 폴리펩티드"는 어떤 경우에는 각각 "재조합 핵산" 또는 "재조합 폴리펩티드"와 동의어로서 생각될 수 있으며, 이의 천연 유전적 환경에서 존재하지 않고/않거나 재조합 방법에 의해 변형된 핵산 또는 폴리펩티드를 말한다는 것을 더 주목할 수 있다.
조절 (
modulation
)
용어 "조절"은 발현 또는 유전자 발현에 관한 것으로, 대조구 식물에 비하여 발현 수준이 상기 유전자 발현에 의하여 변화되는, 발현 수준이 증가되거나 감소되는 과정이다. 원래의 조절되지 않은 발현은 구조 RNA (rRNA, tRNA) 또는 연이어 해독되는 mRNA 같이 임의의 종류의 발현일 수 있다. 본 발명의 목적을 위해, 원래의 조절되지 않은 발현은 또한 임의의 발현의 부재일 수 있다. 용어 "활성 조절"은 식물의 증가된 수확량 관련 형질로 이끄는, 본 발명의 핵산 서열 또는 코딩된 단백질의 발현의 임의의 변화를 의미한다. 발현은 없는 상태 (zero) (부재, 또는 측정 불가능한 발현)에서 특정 양까지 증가하거나, 특정 양에서 측정 불가능한 적은 양 또는 없는 상태까지 감소할 수 있다.
발현
용어 "발현" 또는 "유전자 발현"은 특정 유전자 또는 특정 유전자들 또는 특정 유전자 구축물의 전사를 의미한다. 용어 "발현" 또는 "유전자 발현"은 특히 유전자 또는 유전자들 또는 유전자 구축물의 구조 RNA (rRNA, tRNA), 또는 단백질로의 이은 번역이 있거나 없는 mRNA로의 전사를 의미한다. 상기 과정은 DNA의 전사 및 생성된 mRNA 산물의 가공을 포함한다.
증가된
발현/과발현
본 발명에 사용된 용어 "증가된 발현" 또는 "과발현"은 원래의 야생형 발현 수준에 부가적인 임의의 형태의 발현을 의미한다. 본 발명의 목적을 위해, 원래의 야생형 발현 수준은 또한 없는 상태 (zero), 즉 발현의 부재 또는 측정 불가능한 발현일 수 있다.
유전자 또는 유전자 산물의 발현을 증가시키는 방법은 당업계에 잘 문서화되어 있으며, 예를 들면, 적절한 프로모터에 의한 과발현, 전사 인핸서 또는 해독 인핸서의 사용을 포함한다. 프로모터 또는 인핸서 인자로 작용하는 분리된 핵산 서열은 비이질성 형태의 폴리뉴클레오티드의 적절한 위치 (전형적으로 업스트림)에 도입되어 목적 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열의 발현을 상향 조절한다. 예를 들면, 내재적 프로모터는 돌연변이, 결실, 및/또는 치환에 의해 생체 내에서 변할 수 있거나 (Kmiec, US 5,565,350; Zarling 등, WO9322443 참고), 또는 분리된 프로모터는 본 발명의 유전자로부터 적절한 거리와 방향으로 식물 세포 내에 도입될 수 있어 해당 유전자의 발현을 조절한다.
폴리펩티드 발현을 원한다면, 일반적으로 폴리뉴클레오티드 코딩 영역의 3'-말단에 폴리아데닐화 영역을 포함하는 것이 바람직하다. 폴리아데닐화 영역은 자연 유전자, 다양한 다른 식물 유전자, 또는 T-DNA로부터 유래할 수 있다. 부가된 3' 말단 서열은 예를 들면, 노팔린 신타아제 또는 옥토파인 신타아제 유전자, 또는 대안으로 또 다른 식물 유전자, 또는 덜 바람직하게는 임의의 다른 진핵세포 유전자로부터 유래된다.
세포질 내에 축적되는 성숙된 메세지 양의 증가를 위하여 인트론 서열이 또한 부분적인 코딩 서열의 5' 비해독 영역 (UTR) 또는 코딩 서열에 첨가될 수 있다. 식물 및 동물 발현 구축물에 있어 전사 단위 내에 스플라이스 가능한 인트론이 포함되면 mRNA 및 단백질 수준에서 유전자 발현이 1000배까지 증가함이 보였다 (Buchman and Berg (1988) Mol. Cell biol. 8: 4395-4405; Callis 등 (1987) Genes Dev 1:1183-1200). 인트론에 의한 유전자 발현의 상승효과는 전형적으로 전사 단위의 5' 말단 가까이에 위치하였을 때 가장 컸다. 옥수수 인트론 Adh1-S 인트론 1, 2, 및 6, Bronze-1 인트론의 사용은 당업계에 주지되어 있다. 전반적인 정보는 하기를 참고한다: The Maize Handbook, Chapter 116, Freeling and Walbot, Eds., Springer, N.Y. (1994).
감소된
발현
본 발명에서 "감소된 발현" 또는 발현의 "감소 또는 실질적인 제거"는 대조구에 비하여 내재적 유전자 발현 및/또는 폴리펩티드 수준 및/또는 폴리펩티드 활성의 감소를 의미한다. 감소 또는 실질적인 제거는 대조구 식물에 비하여 증가하는 순으로 선호되는 적어도 10%, 20%, 30%, 40% 또는 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 또는 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 감소된 것이다.
식물체에 내재적 유전자의 발현의 감소 또는 실질적인 제거를 위해서는 충분한 길이의 핵산 서열의 상당히 연속적인 뉴클레오티드가 필요하다. 유전자 침묵을 수행하기 위한 뉴클레오티드는 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10개 또는 더 소수의 뉴클레오티드만큼 적을 수도 있고, 대신에 전체 유전자 (5' 및/또는 3' UTR을 포함하여, 일부분 또는 전체)만큼 많을 수도 있다. 상당한 길이의 연속적인 뉴클레오티드는 목적 단백질을 코딩하는 핵산 서열 (표적 유전자)로부터, 또는 목적 단백질의 오쏘로그 (orthologue), 패럴로그 (paralogue) 또는 상동체 (homologue)를 코딩하는 것이 가능한 임의의 핵산 서열로부터 유래할 수 있다. 바람직하게는, 상당한 길이의 연속적인 뉴클레오티드는 표적 유전자 (센스 또는 안티센스 가닥)와 수소결합을 형성할 수 있으며, 더욱 바람직하게는, 상당한 길이의 연속적인 뉴클레오티드는 표적 유전자 (센스 또는 안티센스 가닥)에 증가하는 순으로 선호되는, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100% 동일한 서열을 갖는다. (기능성) 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열은 내재적 유전자의 발현의 감소 또는 실질적인 제거를 위해 본 발명에서 논의된 다양한 방법에 대한 필요조건은 아니다.
상기 발현의 감소 또는 실질적인 제거는 통상적인 수단 및 기술을 사용하여 이룰 수 있다. 내재적 유전자의 발현의 감소 또는 실질적인 제거를 위한 바람직한 방법은 핵산 (이 경우, 목적 유전자 유래의, 또는 목적 단백질의 오쏘로그, 패럴로그 또는 상동체를 코딩하는 것이 가능한 임의의 핵산 유래의 상당한 길이의 연속적인 뉴클레오티드)이 스페이서 (spacer: 비코딩(non-coding) DNA)로 분리되어 역반복 (inverted repeat: 부분적으로 또는 완전히)으로 클로닝된 유전자 구축물의 식물체로의 도입 및 발현이다.
상기 바람직한 방법에 있어, 내재적 유전자의 발현은 핵산 또는 그 일부 (이 경우, 목적 유전자 유래의, 또는 목적 단백질의 오쏘로그, 패럴로그 또는 상동체를 코딩하는 것이 가능한 임의의 핵산 유래의 상당한 길이의 연속적인 뉴클레오티드)의, 바람직하게는 헤어핀 (hairpin) 구조를 형성하는 것이 가능한 역반복을 사용한 RNA 매개 침묵에 의해 감소되거나 또는 실질적으로 제거된다. 상기 역반복 (inverted repeat)은 조절서열을 포함하는 발현벡터로 클로닝된다. 비코딩 DNA 핵산 서열 (스페이서, 예를 들면 matrix attachment region fragment (MAR), 인트론, 폴리링커 등)은 두 역위 핵산 사이에 위치하여 역반복을 형성한다. 역반복의 전사 후, 자체 상보적인 (self-complementary) 구조를 가진 키메릭 (chimeric) RNA가 형성된다 (부분적인 또는 완전한). 상기 이중가닥 RNA 구조를 hpRNA (hairpin RNA)라고 한다. 상기 hpRNA는 식물에 의해 RISC (RNA-induced silencing complex)로 통합되는 siRNA로 가공된다. 상기 RISC는 mRNA 전사물로 쪼개어져, 폴리펩티드로 번역될 mRNA 전사물의 수를 실질적으로 감소시킨다. 더욱 상세한 내용은 예를 들면, Grierson 등 (1998) WO 98/53083; Waterhouse 등 (1999) WO 99/53050를 참고하면 된다.
본 발명의 방법의 수행은 핵산이 역반복으로 클로닝된 유전자 구축물의 식물로의 도입 및 발현에 의존하지 않으나, 임의의 하나 이상의 몇 가지 공지된 "유전자 침묵 (gene silencing)" 방법이 동일한 효과를 얻기 위해 사용될 수 있다.
내재적 유전자 발현의 감소를 위한 상기 방법 중 하나는 유전자 발현의 RNA-매개 침묵 (하향조절 (downregulation))이다. 상기의 경우 침묵 (Silencing)은 목적 내재적 유전자에 실질적으로 유사한 이중가닥 RNA 서열 (dsRNA)에 의해 식물체에서 유발된다. 상기 dsRNA는 식물에 의해 siRNAs (short interfering RNAs)라는 약 20 내지 약 26개의 뉴클레오티드로 더 가공된다. 상기 siRNAs는 내재적 표적 유전자의 mRNA 전사물을 쪼개는 RISC (RNA-induced silencing complex)로 통합되며, 그로 인하여 실질적으로 폴리펩티드로 해독될 mRNA 전사물의 수를 감소시킨다. 바람직하게는, 이중가닥 RNA 서열이 표적 유전자에 해당한다.
RNA 침묵 방법의 또 다른 예는 핵산 서열 또는 그 일부 (이 경우, 관심있는 유전자 유래의, 또는 관심있는 단백질의 오쏘로그, 패럴로그 또는 상동체를 코딩하는 것이 가능한 임의의 핵산 유래의 상당한 길이의 연속적인 뉴클레오티드)를 센스 방향으로 식물체로의 도입을 포함한다. "센스 방향"은 해당 mRNA 전사물에 상동인 DNA 서열을 말한다. 식물로 도입되면 따라서 적어도 한 카피의 핵산 서열이다. 부가적인 핵산 서열은 내재적 유전자의 발현을 감소시켜, 공억제 (co-suppression)라 알려진 현상이 생긴다. 높은 전사물 수준 및 공억제 (co-suppression)의 유발 간에는 양의 상관관계가 있으므로 유전자 발현의 감소는 몇 부가적인 카피의 핵산 서열이 식물체 내로 도입되면 더욱 현저해질 것이다.
RNA 침묵 방법의 또 다른 예는 안티센스 (antisense) 핵산 서열의 사용을 포함한다. "안티센스" 핵산 서열은 단백질을 코딩하는 "센스 (sense)" 핵산 서열에 상보적인, 즉 이중 가닥 cDNA 분자의 코딩 가닥에 상보적인 또는 mRNA 전사물 서열에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 안티센스 핵산 서열은 바람직하게는 침묵 (silencing)하게 될 내재적 유전자에 상보적이다. 상기 상보성은 유전자의 "코딩 영역" 및/또는 "비코딩 영역 (non-coding region)"에 위치할 수 있다. 용어 "코딩 영역"은 아미노산 잔기로 해독되는 코돈 (codon)을 포함하는 뉴클레오티드 서열의 영역을 말한다. "비코딩 영역 (non-coding region)"은 전사는 되나 아미노산으로 해독되지 않는, 코딩 영역을 플랭킹하는 5' 및 3' 서열을 말한다 (또한 5' 및 3' 비해독 영역이라 한다).
안티센스 핵산 서열은 Watson 및 Crick 염기 페어링 (base pairing)의 방식에 따라 디자인될 수 있다. 안티센스 핵산 서열은 전체 핵산 서열 (이 경우, 목적 유전자 유래의, 또는 목적 단백질의 오쏘로그, 패럴로그 또는 상동체를 코딩하는 것이 가능한 임의의 핵산 유래의 상당한 길이의 연속적인 뉴클레오티드)에 상보적일 수 있으나, 또한 핵산 서열의 일부 (mRNA 5' 및 3' UTR 포함)에 대해서만 안티센스인 올리고뉴클레오티드일 수 있다. 예를 들면, 안티센스 올리고뉴클레오티드 서열은 폴리펩티드를 코딩하는 mRNA 전사물의 해독 개시부위 주변의 영역에 상보적일 수 있다. 적절한 안티센스 올리고뉴클레오티드 서열의 길이는 당업계에 공지되어 있으며 약 50, 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15 또는 10개의 뉴클레오티드 길이 또는 그 이하일 수 있다. 본 발명에 따른 안티센스 핵산 서열은 당업계에 공지된 방법을 사용하여 화학적 합성 및 효소적 라이게이션 반응으로 구축될 수 있다. 예를 들면, 안티센스 핵산 서열 (예를 들면, 안티센스 올리고뉴클레오티드 서열)은 자연적으로 발생하는 뉴클레오티드 또는 분자의 생물학적 안정성을 증가시키기 위해 또는 안티센스 및 센스 핵산 서열 간에 형성된 이중선 (duplex)의 물리적 안정성을 증가시키기 위해 디자인된 다양하게 변형된 뉴클레오티드를 사용하여 화학적으로 합성될 수 있으며, 예를 들면, 포스포로티오에이트 (phosphorothioate) 유도체 및 아크리딘 (acridine) 치환 뉴클레오티드가 사용될 수 있다. 안티센스 핵산 서열의 생성에 사용될 수 있는 변형된 뉴클레오티드의 예는 당업계에 주지되어 있다. 알려진 뉴클레오티드 변형은 메틸화 (methylation), 고리화 (cyclization) 및 '캡 (caps)' 및 하나 이상의 자연적으로 발생하는 뉴클레오티드의 이노신 (inosine)과 같은 유사체 (analogue)로의 치환을 포함한다. 뉴클레오티드 변형의 다른 경우는 당업계에 주지되어 있다.
안티센스 핵산 서열은 핵산 서열이 안티센스 방향으로 서브클로닝된 (즉, 삽입된 핵산으로부터 전사된 RNA는 목적 핵산에 대해 안티센스 방향일 수 있다) 발현 벡터를 사용하여 생물학적으로 생산될 수 있다. 바람직하게는, 식물에서 안티센스 핵산 서열의 생성은 프로모터, 작동가능하게 연결된 안티센스 올리고뉴클레오티드, 및 종결신호 (terminator)를 포함하여 안정적으로 통합된 핵산 구축물을 통해 일어난다.
본 발명의 방법에서 침묵에 사용된 핵산 분자 (식물로 도입되거나 또는 인 시투로 생성되거나)는 mRNA 전사물 및/또는 폴리펩티드를 코딩하는 게놈 DNA와 혼성화하거나 또는 이들에 결합하여, 그로 인하여 예를 들면, 전사 및/또는 해독을 저해함으로서 단백질의 발현을 저해한다. 상기 혼성화는 안정적인 이중선 (duplex)를 형성하기 위해 전형적인 뉴클레오티드 상보성에 의해 이루어질 수 있거나, 또는, 예를 들면, DNA 이중선 (duplexes)에 결합하는 안티센스 핵산 서열의 경우에, 이중 나선 (double helix)의 깊은 홈 (major groove)에서의 특정 상호작용을 통해 이루어질 수 있다. 안티센스 핵산 서열은 형질전환에 의해 또는 특정 조직 부위에서 직접적인 주입에 의해 식물체로 도입될 수 있다. 대안적으로, 안티센스 핵산 서열은 선발된 세포를 표적화하기 위해 변형되어, 체계적으로 도입될 수 있다. 예를 들면, 체계적인 도입을 위해, 안티센스 핵산 서열은 변형될 수 있어, 상기 서열은 예를 들면, 안티센스 핵산 서열을 세포 표면 수용체 또는 항원에 결합하는 펩티드 또는 항원에 연결함으로써 선발된 세포 표면상에 발현된 수용체 또는 항원에 특이적으로 결합한다. 상기 안티센스 핵산 서열은 또한 본 발명에서 기재된 벡터를 사용하여 세포로 전달될 수 있다.
추가적인 양상에 따라, 상기 안티센스 핵산 서열은 a-아노머 핵산 서열이다. a-아노머 핵산 서열은 상보적인 RNA와 특정 이중가닥 혼성체 (hybrid)를 형성하며, 상기에서 보통의 b-units과 달리 상기 이중 가닥은 서로 평행이다 (Gaultier 등 (1987) Nucl Ac Res 15: 6625-6641). 상기 안티센스 핵산 서열은 또한 2'-o-메틸리보뉴클레오티드 (Inoue 등 (1987) Nucl Ac Res 15, 6131-6148) 또는 키메릭 (chimeric) RNA-DNA 유사체 (analogue) (Inoue 등 (1987) FEBS Lett. 215, 327-330)를 포함할 수 있다.
내재적 유전자 발현의 감소 또는 사실상의 제거는 또한 리보자임 (ribozyme)을 사용하여 수행될 수 있다. 리보자임 (ribozyme)은 상보적인 영역을 갖는 부위에서 mRNA와 같은 단일 가닥인 핵산 서열을 절단할 수 있는 리보핵산가수분해효소 (ribonuclease) 활성을 가진 촉매성 RNA 분자이다. 따라서, 리보자임 (예를 들면, 햄머헤드 (hammerhead) 리보자임 (Haselhoff 및 Gerlach (1988) Nature 334, 585-591 참조)은 폴리펩티드를 코딩하는 mRNA 전사물의 촉매적 절단에 사용될 수 있어, 그로 인하여 폴리펩티드로 해독될 mRNA 전사물의 수를 실질적으로 줄인다. 핵산 서열에 대해 특이성을 가진 리보자임이 디자인될 수 있다 (예를 들면: Cech 등 U.S. Patent No. 4,987,071; 및 Cech 등 U.S. Patent No. 5,116,742 참고). 대안적으로, 핵산 서열에 해당하는 mRNA 전사물이 RNA 분자의 풀 (pool)로부터 특정 리보핵산가수분해효소 (ribonuclease) 활성을 가진 촉매성 RNA의 선발에 사용될 수 있다 (Bartel 및 Szostak (1993) Science 261, 1411 -1418). 식물에서 유전자 침묵 (gene silencing)을 위한 리보자임의 사용은 당업계에 공지되어 있다 (예를 들면, Atkins 등 (1994) WO 94/00012; Lenne 등 (1995) WO 95/03404; Lutziger 등 (2000) WO 00/00619; Prinsen 등 (1997) WO 97/13865 및 Scott 등 (1997) WO 97/38116).
유전자 침묵 (gene silencing)은 또한 삽입 돌연변이 유발 (예를 들면, T-DNA 삽입 또는 트랜스포존 삽입)에 의해 또는 Angell 및 Baulcombe ((1999) Plant J 20(3): 357-62), (Amplicon VIGS WO 98/36083), 또는 Baulcombe (WO 99/15682)에 기재된 전략에 의해서도 수행될 수 있다.
유전자 침묵은 또한 내재적 유전자상에 돌연변이 및/또는 실질적으로 식물체로 도입될 분리된 유전자/핵산에 돌연변이의 존재 시 발생할 수 있다. 상기 감소 또는 사실상의 제거는 기능이 없는 폴리펩티드에 의해서도 야기될 수 있다. 예를 들면, 폴리펩티드가 다양한 상호작용하는 단백질에 결합할 수 있다; 하나 이상의 돌연변이(들) 및/또는 절단(들)은 따라서, 상호작용하는 단백질 (수용체 단백질과 같은)에 결합할 수는 있으나 정상적인 기능(신호전달 리간드와 같은)을 나타낼 수 없는 폴리펩티드를 제공할 수 있다.
유전자 침묵의 또 다른 방법은 표적 세포 내 유전자의 전사를 막는 3중 나선 (triple helical) 구조를 형성하기 위해 유전자의 조절 영역 (예를 들면, 프로모터 및/또는 인핸서)에 상보적인 핵산 서열을 표적화하는 것이다. [Helene, C, Anticancer Drug Res. 6, 569-84, 1991; Helene 등 Ann. N.Y. Acad. Sci. 660, 27-36 1992; 및 Maher, LJ. Bioassays 14, 807-15, 1992]을 참조하면 된다.
식물체 내에서의 기능 저해를 위해 내재적 폴리펩티드에 대한 항체의 사용, 또는 폴리펩티드가 관여되는 신호전달 경로 (signalling pathway)의 방해와 같은 다른 방법들이 당업자에게 주지되어 있다. 특히, 인공합성 분자가 표적 폴리펩티드의 생물학적 기능을 저해하거나 또는 표적 폴리펩티드가 관여되는 신호전달 경로의 방해에 유용할 수 있다는 것을 고려할 수 있다.
대안적으로, 유전자의 식물 개체군 자연 변이체를 동정하기 위해 스크리닝 프로그램이 셋업될 수도 있으며, 상기 변이체는 활성이 감소된 폴리펩티드를 코딩한다. 상기 자연 변이체는 또한 예를 들면, 상동 재조합의 수행에 사용될 수 있다.
인공적인 및/또는 자연적인 miRNAs (microRNAs)가 유전자 발현 및/또는 mRNA 해독을 넉아웃 (knock out)하는 데 사용될 수 있다. 내재적 miRNAs는 전형적으로 19-24개 뉴클레오티드 길이의 단일 가닥의 작은 RNAs이며, 주로 유전자 발현 및/또는 mRNA 해독을 조절하는 작용을 한다. 대부분의 식물 miRNAs (microRNAs)는 표적 서열에 완전한 또는 완전에 가까운 상보성을 가진다. 그러나, 5개까지의 미스매치 (mismatches)를 가진 자연적인 표적이 있으며, 다이서 (Dicer) 패밀리의 이중 가닥 특정 RNases에 의해 특징적인 폴더백 (fold-back) 구조를 가진 더욱 긴 넌코딩 (non-coding) RNAs로부터 가공될 수 있다. 가공 (processing)으로, 주성분인 Argonaute 단백질에 결합함으로써 RISC (RNA-induced silencing complex)로 통합된다. MiRNAs는 세포질 내에서 표적 핵산, 대개 mRNAs와 염기쌍을 이루므로 RISC의 특이성 요소로서 작용한다. 연이은 조절은 표적 mRNA 절단 및 붕괴 및/또는 해독 저해를 포함한다. miRNA 과발현의 효과는 따라서 표적 유전자의 감소된 mRNA 수준으로 흔히 반영된다.
전형적으로 21개 뉴클레오티드 길이인 인공적인 microRNAs (amiRNAs)가 하나 또는 다수의 목적 유전자의 유전자 발현을 특이적으로 음성적으로 조절하도록 유전공학적으로 조작될 수 있다. 식물 microRNA 표적 선발의 결정인자는 당업계에 주지되어 있다. 표적 인지에 대한 경험적 매개변수는 정해져 있으며, 특정 amiRNAs의 디자인에 도움이 되게 사용될 수 있다 (Schwab 등 Dev. Cell 8, 517-527, 2005). amiRNAs 및 이의 전구체의 디자인 및 생성을 위한 편리한 수단은 또한 공개되어 있다 (Schwab 등 Plant Cell 18, 1 121-1 133, 2006).
최적의 수행을 위해, 내재적 유전자의 식물에서의 발현을 감소시키기 위해 이용하는 유전자 침묵 기술은 단자엽 식물의 형질전환을 위해서는 단자엽 식물 유래의 핵산 서열을, 쌍자엽 식물의 형질전환을 위해서는 쌍자엽 식물 유래의 핵산 서열을 사용할 것이 요구된다. 바람직하게는, 임의의 해당 식물 종의 핵산 서열이 동일 생물종에 도입된다. 예를 들면, 벼 유래의 핵산 서열은 벼 식물로 형질전환된다. 그러나, 도입될 핵산 서열이 도입될 식물과 동일 식물 종으로부터 유래해야 한다는 것은 절대적인 필요조건은 아니다. 내재적 표적 유전자 및 도입될 핵산 간에 실질적인 상동성이 있으면 충분하다.
상기 기재된 것은 내재적 유전자의 식물에서의 발현의 감소 또는 실질적인 제거를 위한 다양한 방법의 예이다. 당업자는 전체 식물 또는 그 일부에서 내재적 유전자의 발현을 감소시키기 위한 침묵을 위해, 예를 들면, 적절한 프로모터를 사용하여 상기 언급된 방법을 용이하게 변형할 수 있다.
형질전환
본 발명에 언급된 용어 "도입" 또는 "형질전환"은 전달에 사용된 방법에 관계없이 외래 폴리뉴클레오티드의 숙주 세포로의 전달을 포함한다. 기관 발생이나 배발생에 의하여 연이은 클론 번식이 가능한 식물 조직은 본 발명의 유전자 구축물로 형질전환될 수 있으며, 전체 식물체가 이로부터 재생된다. 선택된 특정 조직은 형질전환될 특정 종에 이용 가능하며 가장 잘 맞는 클론 번식 시스템에 따라 다양할 것이다. 전형적인 조직 표적은 잎 디스크, 화분, 배, 자엽, 하배축, 대배우체, 캘러스 조직, 분열조직 (예를 들면, 정단 분열조직, 액아, 및 뿌리 분열조직), 및 유도된 분열조직 (예를 들면, 자엽 분열조직 및 하배축 분열조직)을 포함한다. 폴리뉴클레오티드는 일시적으로 또는 안정적으로 숙주 세포에 도입되며 예를 들면, 플라스미드처럼 비통합적으로 유지된다. 다르게는, 숙주 게놈으로 통합된다. 결과적인 형질전환 식물 세포는 당업자에게 주지된 방식으로 형질전환 식물을 재생하는데 사용된다. 대안적으로, 식물로 재분화되지 못하는 식물 세포가 숙주 세포로, 즉 (전체) 식물로 재분화하는 능력을 갖지 않는 형질전환된 식물 세포가 숙주 세포로 선발될 수 있다.
외래 유전자의 식물 게놈으로 전달을 형질전환이라 부른다. 식물 종의 형질전환은 일상적인 기술이다. 유리하게도, 임의의 몇 가지 형질전환 방법이 목적 유전자를 적절한 조상 세포로의 도입에 사용될 수 있다. 식물 조직 또는 식물 세포로부터 식물의 형질전환 및 재생에 관하여 기재된 방법은 일시적인 또는 안정한 형질전환에 이용될 수 있다. 형질전환 방법은 리포좀, 전기천공법, 유리 DNA 흡수를 증가시키는 화학물질, 식물체 내로 DNA의 직접적인 주입, 입자총 충격법, 바이러스 또는 화분을 이용한 형질전환 및 미세주입 (microprojection)을 포함한다. 방법은 원형질에 대한 칼슘/폴리에틸렌 글리콜법 (Krens, F.A. et al., (1982) Nature 296, 72-74; Negrutiu I et al. (1987) Plant Mol Biol 8: 363-373); 원형질의 전기천공법 (Shillito R.D. et al. (1985) Bio/Technol 3, 1099-1102); 식물로 미세주사 (microinjection) (Crossway et al., (1986) Mol. Gen Genet 202: 179-185); DNA 또는 RNA 코팅된 입자 충격법 (Klein TM et al., (1987) Nature 327: 70) (비통합적) 바이러스로 감염 등으로부터 선택할 수도 있다. 형질전환 작물을 포함한 형질전환 식물은 바람직하게는 아그로박테리움-매개 형질전환을 통해 제조된다. 유리한 형질전환방법은 식물체에서의 형질전환이다. 이를 위해, 예를 들면, 아그로박테리아를 식물 종자 상에 작용하게 하거나 식물 분열조직을 아그로박테리아로 접종하는 것이 가능하다. 형질전환된 아그로박테리아의 현탁액을 온전한 식물이나 적어도 꽃 원기에 작용하게 하는 것이 본 발명에 따라 특히 편리하다는 것이 입증되었다. 처리된 식물의 종자를 얻을 때까지 식물체를 키운다 (Clough and Bent, Plant J. (1998) 16, 735-743). 벼의 아그로박테리움 매개 형질전환 방법은 하기 임의의 것에 기재된 것처럼 벼 형질전환에 관한 잘 알려진 방법들을 포함한다: 유럽특허출원 EP 1198985 A1, Aldemita and Hodges (Planta 199: 612-617, 1996); Chan 등 (Plant Mol Biol 22 (3): 491-506, 1993), Hiei 등 (Plant J 6 (2): 271-282, 1994), 상기 명세서는 충분히 설명한 것처럼 본 발명에 참조문헌으로 통합된다. 옥수수 형질전환의 경우에, 바람직한 방법은 Ishida 등 (Nat. Biotechnol 14(6): 745-50, 1996) 또는 Frame 등 (Plant Physiol 129(1): 13-22, 2002)에 기재된 것이며, 상기 명세서는 충분히 설명한 것처럼 본 발명에 참조문헌으로 통합된다. 상기 방법들은 [B. Jenes 등, Techniques for Gene Transfer, in: Transgenic Plants, Vol. 1, Engineering and Utilization, eds. S.D. Kung and R. Wu, Academic Press (1993) 128-143] 및 [Potrykus Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Molec. Biol. 42 (1991) 205-225]에 예로서 기재되어 있다. 핵산 또는 발현될 구축물은 바람직하게는 아그로박테리움 투머파시엔스 형질전환에 적절한 벡터, 예를 들면 pBin19 내로 클로닝된다 (Bevan 등, Nucl. Acids Res. 12 (1984) 8711). 상기 벡터로 형질전환된 아그로박테리아가 애기장대처럼 모델로 사용된 식물 (본 발명의 범위 내의 애기장대 (아라비돕시스 탈리아나)는 작물로 고려되지 않는다)이나 예로서 담배 같은 작물의 예를 들면, 상처 내거나 잘게 썬 잎을 아그로박테리아 용액에 적신 후 적절한 배지에 배양하는 것과 같은 식물 형질전환을 위해 알려진 방식으로 사용될 수 있다. 아그로박테리움 투머파시엔스에 의한 식물의 형질전환은 예를 들면, [Hofgen and Willmitzer in Nucl. Acid Res. (1988) 16, 9877]에 의하여 기재되었거나, 특히 [F.F. White, Vectors for Gene Transfer in Higher Plants; in Transgenic Plants, Vol. 1, Engineering and Utilization, eds. S.D. Kung and R. Wu, Academic Press, 1993, pp. 15-38]에 알려져 있다.
온전한 식물로 재생되는 체세포의 형질전환 외에, 식물의 분열조직 세포 특히 배우자로 발달하는 세포의 형질전환이 가능하다. 이 경우에, 형질전환된 배우자는 자연적인 식물 발달 과정을 거쳐 형질전환 식물이 된다. 따라서 예를 들면, 애기장대의 종자가 아그로박테리아로 처리되고, 발달하는 식물체로부터 취한 종자 중의 일부분이 형질전환되어 형질전환 식물체로 된다 [Feldman, KA and Marks MD (1987). Mol Gen Genet 208:1-9; Feldmann K (1992). In: C Koncz, N-H Chua and J Shell, eds, Methods in Arabidopsis Research. Word Scientific, Singapore, pp. 274-289]. 또 다른 방법은 화서의 반복적인 제거에 근거하며 근생엽 중앙의 절단 부위를 형질전환된 아그로박테리아와 함께 배양하면 형질전환된 종자를 이후에 얻을 수 있다 (Chang (1994). Plant J. 5: 551-558; Katavic (1994). Mol Gen Genet, 245: 363-370). 그러나, 특히 효과적인 방법은 화서 담그기 ("floral dip") 방법의 변형인 진공 침윤 (vacuum infiltration)이다. 애기장대의 진공 침윤의 경우, 감압 하에 온전한 식물체를 아그로박테리아 현탁액으로 처리하는 것이고 [Bechthold, N (1993). C R Acad Sci Paris Life Sci, 316: 1194-1199], "화서 담그기법"에서는 발달 중인 화서 조직을 계면활성제가 처리된 아그로박테리아 현탁액과 잠깐 배양하는 것이다 [Clough, SJ and Bent AF (1998) The Plant J. 16, 735-743]. 양 경우에 특정 비율의 형질전환 종자가 수확되며, 이들 종자는 상기 기재된 선발 조건 하에서 재배함으로써 형질전환되지 않은 종자와 구분된다. 색소체는 모계로 유전되기 때문에 색소체의 안정적인 형질전환의 이점은 대부분의 작물에서 화분을 통한 외래유전자의 흐름의 위험이 감소되거나 제거된다는 점이다. 엽록체 게놈의 형질전환은 일반적으로 Klaus 등, 2004 [Nature Biotechnology 22 (2), 225-229]에 체계적으로 표시된 과정에 의하여 수행된다. 간단히, 형질전환될 서열을 선발 마커 유전자와 함께 엽록체 게놈에 상동인 플랭킹 서열 사이에 클로닝한다. 이들 상동 플랭킹 서열이 플라스톰 (plastome) 내로 특이적으로 통합된다. 색소체 형질전환은 많은 다른 식물 종에 대해 기술되어 왔으며, 개관은 [Bock (2001) Transgenic plastids in basic research and plant biotechnology. J Mol Biol. 2001 Sep 21; 312 (3):425-38 or Maliga, P (2003) Progress towards commercialization of plastid transformation technology. Trends Biotechnol. 21, 20-28]에 있다. 추가의 생물공학적 진보는 마커 없는 색소체 형질전환체의 형태로 최근 보고되었으며, 이는 일시적인 동시통합된 (co-integrated) 마커 유전자에 의해 생성될 수 있다 (Klaus et al., 2004, Nature Biotechnology 22(2), 225-229).
유전적으로 변형된 식물 세포는 당업자에게 친숙한 모든 방법을 통해서 재분화될 수 있다. 적절한 방법은 앞서 언급된 S.D. Kung 및 R. Wu, Potrykus 또는 Hofgen 및 Willmitzer의 문헌에서 찾을 수 있다. 대안적으로, 유전적으로 변형된 식물 세포는 전체 식물체로의 재분화가 불가능할 수 있다.
일반적으로 형질전환 후, 식물 세포 또는 세포 집단은 목적 유전자와 함께 전달된 식물에서 발현 가능한 유전자에 의해 코딩되는 하나 이상의 마커의 존재에 대하여 선발되어, 형질전환된 재료는 온전한 식물로 재분화된다. 형질전환 식물을 선발하기 위하여, 형질전환에서 얻은 식물 재료는 대체로 선택적 조건 하에 두어, 형질전환 식물이 형질전환되지 않은 식물과 구분될 수 있게 한다. 예를 들면, 상기 기재된 방식으로 얻은 종자를 심고, 초기 생장기간 후, 분무에 의해 적절한 선발을 하게 된다. 추가의 가능한 방법으로는, 종자를 멸균하여 적절한 선발물질을 사용하여 한천 판에 키우면, 형질전환된 종자만 식물체로 자랄 수 있다. 다르게는, 형질전환 식물은 상기 기재된 것과 같은 선발 마커의 존재에 대하여 가려진다.
DNA 전달 및 재분화에 이어, 형질전환된 것으로 추정되는 식물은 또한 예를 들면, 목적 유전자의 존재, 카피 수 및/또는 게놈 조직에 대하여 서던 분석을 사용하여 평가될 수 있다. 다르게는 또는 부가적으로, 새로이 도입된 DNA의 발현수준을 노던 및/또는 웨스턴 분석으로 측정할 수 있으며, 두 기술은 당업자에게 주지되어 있다.
생성된 형질전환된 식물은 클론 번식 또는 전통적인 육종 기술 같은 다양한 수단으로 증식될 수 있다. 예를 들면, 제1세대 (또는 T1) 형질전환 식물은 자가교배되고, 동형접합 제2세대 (또는 T2) 형질전환체가 선발되어, T2 식물은 전통적인 육종 기술로 더 증식된다. 생성된 형질전환된 생물체는 다양한 형태를 취할 수 있다. 예를 들면, 형질전환된 세포 및 형질전환되지 않은 세포의 키메라; 클론 형질전환체 (예를 들면, 발현카세트를 함유하도록 형질전환된 모든 세포); 형질전환된 및 형질전환되지 않은 조직의 그라프트 (graft) (예를 들면, 식물에 있어 형질전환되지 않은 접순에 접목된 형질전환된 대목)일 수 있다.
T-
DNA
활성화 태깅
"T-DNA 활성화" 태깅 (Hayashi et al. Science (1992) 1350-1353)은 보통 프로모터 (또한 해독 인핸서 또는 인트론)를 함유하는 T-DNA를 프로모터가 표적 유전자의 발현을 지시하게 배치되어 목적 유전자의 게놈 영역 내로 또는 유전자 코딩 영역의 10 kb 업스트림 또는 다운스트림으로 삽입하는 것을 포함한다. 전형적으로, 자체의 자연 프로모터에 의한 표적 유전자 발현의 조절은 붕괴되고 유전자는 새로 도입된 프로모터의 조절하에 있게 된다. 프로모터는 전형적으로 T-DNA 내에 끼워져 있다. 이 T-DNA는 식물 게놈 내에 예를 들면, 아그로박테리움 감염을 통하여 무작위로 삽입되며 삽입된 T-DNA 인근의 유전자의 변형된 발현을 이끈다. 결과적인 형질전환 식물은 도입된 프로모터에 가까운 유전자의 변형된 발현으로 인하여 우성 표현형을 보인다.
틸링
(
TILLING
)
용어 "틸링 (TILLING)"은 "Targeted Induced Local Lesions In Genomes"의 약어이며 변형된 발현 및/또는 활성을 갖는 단백질을 코딩하는 핵산을 생성 및/또는 동정하는데 유용한 돌연변이유도 기술을 말한다. 틸링은 또한 상기 돌연변이체를 갖는 식물의 선발을 가능하게 한다. 이들 돌연변이체는 강도나 위치 또는 시기상의 변형된 발현을 보인다 (만일 돌연변이가 프로모터에 영향을 준다면). 이들 돌연변이체는 자체의 자연적 형태의 유전자에 비하여 훨씬 높은 활성을 나타낸다. 틸링은 고밀도 돌연변이 유발과 고속처리 탐색 방법을 조합한 것이다. 틸링의 전형적인 단계는 하기와 같다: (a) EMS 돌연변이유발 (Redei GP 및 Koncz C (1992) In Methods in Arabidopsis Research, Koncz C, Chu NH, Schell J, eds. Singapore, World Scientific Publishing Co, pp. 1682; Feldmann et al., (1994) In Meyerowitz EM, Somerville CR, eds, Arabidopsis. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, pp 137-172; Lightner J and Caspar T (1998) In J Martinez-Zapater, J Salinas, eds, Methods on Molecular Biology, Vol. 82. Humana Press, Totowa, NJ, pp 91-104); (b) DNA 준비 및 개체의 풀링 (pooling); (c) 목적 영역의 PCR 증폭; (d) 이형 이중 가닥 (heteroduplexes)이 되게 변성 및 어닐링; (e) DHPLC로 이형 이중 가닥이 풀(pool) 안에 있는지를 크로마토그램 상의 여분의 정점으로 검출; (f) 돌연변이체 개체의 동정; (g) 돌연변이체 PCR 산물의 염기서열결정. 틸링의 방법은 당업계에 주지되어 있다 (McCallum et al., (2000) Nat Biotechnol 18: 455-457; Stemple (2004) Nat Rev Genet 5(2): 145-50).
상동 재조합
상동 재조합은 정해진 선택된 위치에 선택된 핵산이 게놈 내로 도입되게 한다. 상동 재조합은 생물학에서 효모 또는 선류 (Physcomitrella) 같은 하등생물에 대해 통상적으로 사용되는 표준기술이다. 식물에서 상동 재조합을 수행하는 방법은 모델 식물 (Offring et al. (1990) EMBO J 9(10): 3077-84)에 대해서 뿐 아니라 작물 예를 들면, 벼 (Terad et al. (2002) Nat Biotech 20(10): 1030-4; Iid and Terad (2004) Curr Opin Biotech 15(2): 132-8)에 대해서도 기재된 바 있고, 일반적으로 목적 생물체에 구애받지 않고 적용 가능한 접근법이 존재한다 (Miller et al., Nature Biotechnol. 25, 778-785, 2007).
수확량 관련 형질(들)
"수확량 관련 형질"은 식물 수확량에 관련된 형질 또는 특징이다. 수확량 관련 형질은 빠른 개화 시기, 수확량, 생물량 (biomass), 종자 수확량, 초기 활력, 녹색지수, 생장 속도, 침수에 대한 내성 (벼에서 수확량 유도)과 같은 농업 형질, 물 이용 효율 (WUE), 질소 이용 효율 (NUE) 등의 특징 중 제한되지 않는 목록의 하나 이상을 포함할 수 있다.
본 발명에서 향상된 수확량 관련 형질은 대조구 식물에 비하여 (i) 지상부 및 바람직하게는 수확 가능한 지상부 및/또는 (ii) 지하부 및 바람직하게는 수확 가능한 지하부를 포함하는, 식물의 한 부분 이상의 초기 활력 및/또는 생물량 (중량)의 하나 이상의 증가를 의미한다. 특히, 상기 수확 가능한 부분은 종자이다.
수확량
일반적인 의미에서의 용어 "수확량"은 경제적 가치 있는 측정 가능한 생산량을 말하며, 전형적으로 특정 작물, 면적, 및 기간에 관련이 있다. 개개 식물체 부분이 직접적으로 수, 크기 및/또는 중량에 근거한 수확량에 기여하거나, 또는 실제 수확량은 작물 및 년에 대해 평방 미터 당 수확량이고, 이는 총생산량 (수확된 및 평가된 생산량을 포함)을 재배된 평방 미터로 나눔으로써 결정된다.
용어 식물의 "수확량" 및 "식물 수확량"은 본 발명에서 호환성 있게 사용되고, 뿌리 및/또는 줄기 생물량과 같은 식물의 생물량, 생식 기관, 및/또는 그 식물의 종자와 같은 번식체 (propagule)로 언급될 수 있다.
옥수수의 꽃은 단성 (unisexual)으로 수꽃차례 (male inflorescence, tassel)는 줄기 정단에서 발생하고, 암꽃차례 (ear)는 액아 정점 (axillary bud apex)에서 발생한다. 암꽃차례는 중앙 축 (cob)의 표면에 작은 이삭 쌍을 생성한다. 암꽃 이삭 각각은 2개의 수정가능한 소화 (floret)를 가지며, 그중 하나는 보통 수정되면 옥수수 낱알로 성숙하게 된다. 따라서 옥수수에서 수확량 증가는 다음 중의 하나 이상으로 표시된다: 평방 미터 당 식물체의 수 증가, 식물체 당 이삭 (열매) 수의 증가, 낱알 줄의 수, 줄 당 낱알의 수, 낱알 중량, 천립 중량, 열매 길이/직경의 증가, 충전된 소화의 수 (즉, 종자를 함유하는 소화)/전체 소화의 수 ×100인 종자 충전율의 증가.
벼 식물에서 꽃차례는 원추화서라고 불린다. 상기 원추화서는 작은 이삭을 지니며, 상기 작은 이삭은 원추화서의 기본 단위이고, 소수경 (pedicel) 및 소화로 구성된다. 소화는 소수경 위에 생기고, 큰 영포 (glume, 포엽, lemma) 및 짧은 영포 (내화영, palea)로 이루어지는 2개의 보호적인 포엽에 감싸진 꽃을 포함한다. 따라서, 벼를 예로 들면, 수확량 증가는 다음 중의 하나 이상의 증가로 표시된다: 평방 미터 당 식물체의 수, 식물체 당 원추화서의 수, 원추화서의 길이, 원추화서 당 작은 이삭의 수, 원추화서 당 꽃 (또는 소화)의 수; 충전된 소화 (즉, 종자를 함유하는 소화)의 수/전체 소화의 수×100인 종자 충전율의 증가; 천립 중량의 증가.
조기 개화 시기
본 발명에 사용된 "조기 개화 시기"를 갖는 식물은 대조구 식물보다 빠르게 개화하기 시작하는 식물이다. 따라서, 상기 용어는 조기 개화 시작을 나타내는 식물을 의미한다. 식물의 개화 시기는 파종과 첫 번째 꽃차례의 출현 사이의 일수 ("개화하는 시간")를 계산하여 평가될 수 있다. 식물의 "개화 시기"는 예를 들면 WO 2007/093444에 기재된 방법을 사용하여 결정될 수 있다.
초기 활력
"초기 활력" 특히 식물 생장의 초기 단계 중에 활기차고 건강하게 잘 균형을 이룬 생장을 말하며, 예를 들면, 식물이 환경에 보다 잘 적응함으로 인하여 (즉, 에너지 자원 사용이 최적화되고 어린 줄기와 뿌리 간에 분배됨) 증가된 식물체의 적응성에 기인할 것이다. 초기 활력을 갖는 식물은 또한 증가된 실생 생존 및 보다 나은 작물 생성을 보여주며, 이는 흔히 고도로 균일한 밭 (균일한 양상으로 자라는 작물, 즉 대다수의 식물이 사실상 거의 동시에 다양한 발달단계에 이르는)과 흔히 보다 낫고 보다 높은 수확량이 된다. 따라서, 초기 활력은 천립 중량, 발아율, 출현율, 실생 생장, 실생 높이, 뿌리 길이, 뿌리 및 어린 줄기 생물량 등과 같은 다양한 요인들을 측정함으로써 결정될 수 있다.
증가된
생장 속도
증가된 생장 속도는 식물체의 하나 이상의 부분 (종자 포함)에 특이적이거나, 또는 실질적으로 전체 식물에 걸쳐서일 수도 있다. 증가된 생장 속도를 가진 식물은 보다 짧은 생활사를 가질 수 있다. 식물의 생활사는 성숙 종자로부터 식물체가 출발 물질과 유사한 성숙한 종자를 생산하는 단계까지 자라는데 필요한 시간을 의미하는 것일 수 있다. 상기 생활사는 발아의 속도, 초기 활력, 생장 속도, 녹색 지수, 개화 시기 및 종자 성숙 속도와 같은 요인에 의해 영향을 받을 수 있다. 생장 속도의 증가는 식물의 생활사 중의 하나 이상의 단계에서 또는 실질적으로 전체 식물 생활사 중에 나타날 수 있다. 식물의 생활사 중의 초기 단계 중에 증가된 생장 속도는 향상된 활력을 반영한다. 생장 속도의 증가는 그렇지 않았으면 가능했을 시기보다 식물을 늦게 파종하고/하거나 이르게 수확하게 함으로써 식물의 수확 주기를 변경할 수도 있다 (비슷한 효과는 보다 이른 개화시기로 얻을 수 있다). 만일 생장 속도가 충분히 증가하면 동일 식물 종의 잇따른 파종이 가능하다 (예를 들면, 한 생장기간 내에 벼의 파종 및 수확 후에 잇따라 벼의 파종 및 수확). 유사하게 만일 생장 속도가 충분히 증가하면 다른 식물 종의 잇따른 파종이 가능하다 (예를 들면, 옥수수 식물의 파종 및 수확 후에 예를 들면, 대두, 감자 또는 임의의 다른 적절한 식물의 파종 및 선택적 수확). 일부 작물의 경우 동일한 근경으로부터 부가적인 횟수의 수확도 가능하다. 식물의 수확 주기 변경은 평방 미터 당 연간 생물량 생산의 증가로 이끈다 ((말하자면 일년 내) 임의의 식물을 재배하여 수확하는 횟수의 증가로 인하여). 작물 생육에 대한 지형적인 제한은 이식기에 (초기) 또는 수확기에 (후기) 흔히 불리한 환경 조건에 의해 결정되므로, 생장 속도 증가는 야생형에 비하여 보다 넓은 지리적 지역에 형질전환 식물이 재배되게 한다. 상기 불리한 조건은 수확 주기가 짧아지면 피할 수 있다. 생장 속도는 생장 곡선으로부터 다양한 매개변수를 유도함으로써 결정될 수 있으며, 상기 매개변수는 T-Mid (식물이 최대 크기의 50%에 이를 때까지 걸린 시간) 및 T-90 (식물이 최대 크기의 90%에 이를 때까지 걸린 시간)이다.
스트레스 저항성 (
Stress
resistance
)
식물이 스트레스가 없는 조건 하에 있든지 식물이 대조구 식물에 비하여 다양한 스트레스에 노출되든지 간에 수확량 및/또는 생장 속도의 증가가 생긴다. 식물은 전형적으로 보다 느리게 성장함으로써 스트레스에 대한 노출에 반응한다. 심각한 스트레스 하에서 식물의 생장이 중단되기도 한다. 다른 한편으로 본 발명에서 순한 스트레스는 식물이 노출됨으로써 생장을 재개하는 능력 없이 생장을 중단하게 하지 않는 임의의 스트레스로 정의된다. 본 발명이 의미하는 순한 스트레스는 스트레스 받은 식물의 생장 감소가 스트레스가 없는 조건 하의 대조구 식물에 비하여 40%, 35%, 30% 또는 25% 미만, 더욱 바람직하게는 20% 또는 15% 미만이다. 실제 농업상의 진전 (관개, 시비, 살충제 처리)으로 인하여 심각한 스트레스가 재배 작물에 가해지지는 않는다. 결과적으로 순한 스트레스에 의해 유도되는 손상된 생장은 흔히 농업에서는 바람직하지 않은 특징이다. 비생물적 스트레스는 가뭄 또는 과도한 수분, 혐기적 스트레스, 염분 스트레스, 화학적 독성, 산화적 스트레스 및 더운, 추운 또는 동결 (freezing) 온도에 의한 것이다.
"생물적 스트레스"는 전형적으로 병원균, 예를 들면, 세균, 바이러스, 균류, 선형동물 및 곤충에 의한 스트레스이다.
"비생물적 스트레스"는 예를 들면 가뭄에 의한 수분 스트레스, 염분 스트레스, 또는 동결 스트레스에 의한 삼투 스트레스일 수 있다. 비생물적 스트레스는 또한 산화적 스트레스 또는 저온 스트레스일 수 있다. "동결 스트레스"는 동결 온도, 즉, 이용가능한 물 분자가 동결되어 얼음으로 바뀌는 온도에 의한 스트레스를 의미한다. "냉각(chilling) 스트레스"로도 불리는 "저온 (cold) 스트레스"는 예를 들면 10℃ 미만의 온도 또는 바람직하게는 5℃ 미만의 온도, 그러나 물 분자가 동결되지 않는 차가운 온도를 의미한다. Wang 등 (Planta (2003) 218: 1-14)에 보고된 바와 같이, 비생물적 스트레스는 일련의 형태적, 생리적, 생화학적 및 분자적 변화를 이끌어 식물 생장 및 생산성에 불리한 영향을 미친다. 가뭄, 염분, 극단적인 온도 및 산화적 스트레스는 상호 연관된 것으로 알려져 있으며, 유사한 기작을 통하여 생장 및 세포 손상을 유도할 수 있다. Rabbani 등 (Plant Physiol (2003) 133: 1755-1767)은 특히 가뭄 스트레스와 고염도 스트레스 간에 고도의 "혼선"을 기재하고 있다. 예를 들면, 가뭄 및/또는 염분은 일차적으로 삼투 스트레스로 나타나서 세포 내 항상성 및 이온 분포의 파괴를 야기한다. 흔히 고온 또는 저온을 동반하는 산화적 스트레스, 염분 또는 가뭄 스트레스는 기능적 및 구조 단백질의 변성을 야기한다. 결국 이들 다양한 환경적 스트레스는 흔히 유사한 세포 신호전달 경로 및 스트레스 단백질 생산, 항산화제 상향조절, 친화성 용질 축적 및 생장 정지 같은 세포 반응을 활성화한다. 본 발명에서 사용된 용어 "스트레스가 없는" 조건은 식물의 최적 생장을 허용하는 환경 조건이다. 당업자는 주어진 위치에서 정상적인 토양 조건 및 기후 조건을 인식하고 있다. 최적의 성장 조건에서 (스트레스가 없는 조건 하에서 자랄 때) 식물은 일반적으로 주어진 환경에서 그 식물의 평균 생산량의 증가하는 순으로 선호되는 적어도 97%, 95%, 92%, 90%, 87%, 85%, 83%, 80%, 77% 또는 75%를 생산한다. 평균 생산량은 수확 및/또는 계절에 근거해서 계산될 수 있다. 당업자는 작물의 평균 수확량 생산을 인식하고 있다.
특히, 본 발명의 방법은 스트레스가 없는 조건 하에서 수행될 수 있다. 한 예에서 본 발명의 방법은 대조구 식물에 비해 증가된 수확량을 갖는 식물을 제공하기 위해 순한 가뭄 같은 스트레스가 없는 조건 하에서 수행될 수 있다.
다른 구현예에서, 본 발명의 방법은 스트레스 조건 하에서 수행될 수 있다.
한 예에서, 본 발명의 방법은 대조구 식물에 비해 증가된 수확량을 갖는 식물을 제공하기 위해 가뭄과 같은 스트레스 조건 하에서 수행될 수 있다. 또 다른 예에서, 본 발명의 방법은 대조구 식물에 비해 증가된 수확량을 갖는 식물을 제공하기 위해 양분 결핍과 같은 스트레스 조건 하에서 수행될 수 있다.
양분 결핍은 질소, 인산염 및 다른 인 함유 화합물, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 망간, 철 및 붕소 같은 양분 부족의 결과이다.
또 다른 예에서, 본 발명의 방법은 대조구 식물에 비해 증가된 수확량을 갖는 식물을 제공하기 위해 염분 스트레스와 같은 스트레스 조건 하에서 수행될 수 있다. 용어 염분 스트레스는 통상적인 소금 (NaCl)에 제한되는 것이 아니라, NaCl, KCl, LiCl, MgCl2, CaCl2 중 임의의 하나 이상일 수 있다.
또 다른 예에서, 본 발명의 방법은 대조구 식물에 비해 증가된 수확량을 갖는 식물을 제공하기 위해 저온 스트레스 또는 동결 스트레스와 같은 스트레스 조건 하에서 수행될 수 있다.
증가/향상/강화
용어 "증가", "향상", 또는 "강화"는 서로 호환성 있게 사용할 수 있으며, 본 발명에서 정의된 대조구 식물과 비교하여 적어도 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9% 또는 10%, 바람직하게는 적어도 15% 또는 20%, 더욱 바람직하게는 25%, 30%, 35% 또는 40% 이상의 수확량 및/또는 생장을 의미한다.
종자 수확량
증가된 종자 수확량은 다음 중 하나 이상으로 나타난다:
(a) 개별 종자 당 및/또는 식물체 당 및/또는 평방 미터 당의 종자 생물량 (총 종자 중량)의 증가;
(b) 식물체 당 꽃 수의 증가;
(c) 증가된 종자의 수;
(d) 증가된 종자 충전율 (충전된 소화의 수를 총 소화 수로 나눈 비로 나타냄);
(e) 증가된 수확 지수 (종자 같은 수확할 수 있는 부분의 수확량을 식물 지상부의 생물량으로 나눈 비율); 및
(f) 증가된 천립 중량 (TKW) (계수된 종자의 수 및 이의 총 중량으로부터 외삽됨). 증가된 TKW는 증가된 종자 크기 및/또는 종자 중량, 및 배 및/또는 배유 크기의 증가로 인한다.
용어 "충전된 소화" 및 "충전된 종자"는 동의어로 생각될 수 있다.
종자 수확량의 증가는 또한 종자 크기 및/또는 종자 부피의 증가로 나타낼 수 있다. 더욱이, 종자 수확량의 증가는 또한 종자 면적 및/또는 종자 길이 및/또는 종자 폭 및/또는 종자 주계의 증가로 나타난다.
녹색 지수
본 발명에 사용된 "녹색 지수 (greenness index)"는 식물의 디지털 이미지로부터 계산된다. 이미지 상에 식물 대상에 속하는 각 화소에 대하여, 녹색 값 대 적색 값의 비율 (코딩 색상에 대하여 RGB 모델에서)이 계산된다. 녹색 지수는 녹색 대 적색의 비율이 주어진 역치를 능가하는 화소의 백분율로 표시된다. 정상적인 생장 조건 하에서, 염분 스트레스가 있는 생장 조건 하에서, 양분 이용도가 감소된 생장 조건 하에서 식물의 녹색 지수는 개화 전 마지막 이미지에서 측정된다. 대조적으로, 가뭄 스트레스 생장 조건 하에서 식물의 녹색 지수는 가뭄 후의 첫 번째 이미지에서 측정된다.
생물량
(
Biomass
)
본 발명에서 사용된 용어 "생물량"은 식물의 총 중량을 의미한다. 생물량의 정의에서, 하기의 임의의 하나 이상을 포함할 수 있는, 하나 이상의 식물 일부의 생물량 사이에 구별될 수 있다:
- 어린줄기 생물량, 종자 생물량, 잎 생물량 등과 같은 지상부일 수 있으나, 이에 제한되지 않음;
- 어린줄기 생물량, 종자 생물량, 잎 생물량 등과 같은 지상부의 수확 가능한 부분일 수 있으나, 이에 제한되지 않음;
- 뿌리 생물량, 괴경 (tuber), 인경 (bulb)과 같은 지하부일 수 있으나, 이에 제한되지 않음;
- 뿌리 생물량, 괴경, 인경과 같은 지하부의 수확 가능한 부분일 수 있으나, 이에 제한되지 않음;
- 사탕무 및 식물의 다른 하배축 (hypocotyl) 부분, 지하경, 포복경 (stolon) 또는 서행성 근경 (creeping rootstalk)과 같은 지하부의 부분적으로 수확 가능한 부분일 수 있으나, 이에 제한되지 않음;
- 뿌리 생물량, 어린줄기 생물량과 같은 영양적 (vegetative) 생물량;
- 생식 기관; 및
- 종자와 같은 번식체.
마커
보조 육종
상기 육종 프로그램은 때때로 예를 들면, EMS 돌연변이 유발을 사용하여 식물의 돌연변이 유발 처리로 대립인자 변이의 도입을 필요로 하며; 다르게는, 그 프로그램은 자연발생적으로 생성된 "자연적인" 대립인자 변이체의 수집물로부터 시작될 수도 있다. 그러면 대립인자 변이체의 동정은 예를 들면, PCR로 한다. 문제되는 서열의 증가된 수확량을 제공하는 우수한 대립인자 변이체의 선발 단계가 잇따른다. 선발은 전형적으로 문제되는 서열의 다른 대립인자 변이체를 함유하는 식물의 생장 능력을 관찰함으로써 이루어진다. 생장 능력은 온실 또는 야외에서 관찰할 수 있다. 추가의 선택 가능한 단계는 우수한 대립인자 변이체가 동정된 식물과 또 다른 식물의 교배를 포함한다. 이는 예를 들면, 흥미로운 표현형적 특징의 조합을 만드는데 사용될 수 있다.
(유전자 지도 제작에서) 탐침으로 사용
상기 유전자에 대한 유전자 및 물리지도 제작을 위해 목적 단백질을 코딩하는 핵산의 사용에는 적어도 15개 뉴클레오티드 길이의 핵산 서열만이 필요하다. 이 핵산은 RFLP (restriction fragment length polymorphism) 마커로 사용될 수 있다. 제한효소로 절단된 식물 게놈 DNA의 서던 블럿 (Sambrook J, Fritsch EF and Maniatis T (1989) Molecular Cloning, A Laboratory Manual)은 목적 단백질을 코딩하는 핵산으로 프로빙될 수 있다. 생성된 밴드 패턴으로 유전자지도 제작을 위하여 MapMaker (Lander 등 (1987) Genomics 1: 174-181) 같은 컴퓨터 프로그램을 사용하여 유전적 분석을 하게 된다. 또한, 핵산은 지정된 유전적 교배의 양친 및 자손을 나타내는 개체들 세트의 제한 효소 처리된 게놈 DNA를 포함하는 서던 블럿에 탐침으로 사용될 수 있다. DNA 다형성의 분리를 기록하고, 이 집단을 이용하여 이전에 얻었던 유전자 지도상에 목적 단백질을 코딩하는 핵산의 위치 계산에 사용한다 (Botstein et al. (1980) Am. J. Hum. Genet. 32:314-331).
유전자 지도 제작에 사용하기 위한 식물 유전자 유래 탐침의 생산 및 사용은 [Bematzky and Tanksley (1986) Plant Mol. Biol. Reporter 4: 37-41]에 기재되어 있다. 수많은 공개문헌이 상기 개설된 방법론 또는 이의 변형을 사용하여 특정 cDNA 클론의 유전자 지도 제작을 기술한다. 예를 들면, F2 이종교배 개체군, 역교배 개체군, 무작위 교배 개체군, 근동질유전자계통, 및 다른 세트의 개체가 유전자 지도 제작에 사용될 수 있다. 상기 방법론은 당업자에게 주지되어 있다.
핵산 탐침은 또한 물리 지도에 제작 사용될 수 있다 (즉, 물리 지도상에 서열의 위치; Hoheisel et al. In: Non-mammalian Genomic Analysis: A Practical Guide, Academic press 1996, pp. 319-346, 인용된 문헌 참고).
또 다른 구현예에 있어서, 핵산 탐침은 직접적인 형광 인 시투 혼성화 (fluorescence in situ hybridisation, FISH) 지도 제작에 사용될 수 있다 (Trask (1991) Trends Genet. 7:149-154). 비록 현 FISH 지도 제작 방법이 큰 클론 사용에 유리하지만 (수 kb 내지 수백 kb; Laan et al. (1995)Genome Res. 5:13-20), 감도가 향상되면 더욱 짧은 탐침으로 FISH 지도 제작이 가능해진다.
유전자지도 및 물리지도 제작을 위한 핵산증폭에 근거한 다양한 방법이 핵산을 사용하여 수행될 수 있다. 예는 대립인자 특이적 증폭 (allele-specific amplification, Kazazian (1989) J. Lab. Clin. Med 11:95-96), CAPS (polymorphism of PCR-amplified fragments; Sheffield 등 (1993) Genomics 16:325-332), 대립인자 특이적 라이게이션 (allele-specific ligation, Landegren 등 (1988) Science 241:1077-1080), 뉴클레오티드 연장 반응 (nucleotide extension reactions, Sokolov (1990) Nucleic Acid Res. 18:3671), Radiation Hybrid Mapping (Walter et al. (1997) Nat. Genet. 7:22-28) 및 Happy Mapping (Dear and Cook (1989) Nucleic Acid Res. 17:6795-6807)을 포함한다. 이들 방법을 위해서 증폭 반응 또는 프라이머 연장 반응에 사용하기 위한 프라이머 쌍을 고안하고 제작하기 위해 핵산 서열이 사용된다. 상기 프라이머의 고안은 당업자에게는 주지되어 있다. PCR에 근거한 유전자 지도 제작에 사용하는 방법에서는 핵산 서열에 해당하는 영역에서 교배 양친 간의 DNA 서열 차이를 알 필요가 있다. 그러나 이는 일반적으로 지도제작 방법에는 필요하지 않다.
식물
본 발명에서 사용된 용어 "식물"은 전체 식물, 식물 및 종자, 어린 줄기, 줄기, 잎, 뿌리 (괴경 포함), 꽃, 및 조직과 기관을 포함하는 식물 부분의 조상 및 자손을 포함하며, 이들 각각은 목적 유전자/핵산을 포함한다. 용어 "식물"은 또한 식물 세포, 현탁 배양액, 캘러스 조직, 배, 분열조직, 배우체, 포자체, 화분 및 소포자를 포함하며, 이들 각각은 목적 유전자/핵산을 포함한다.
본 발명의 방법에 유용한 특히 유용한 식물은 수퍼패밀리 비리디플란태 (Viridiplantae)에 속하는 모든 식물, 특히 하기를 포함하는 목록에서 선택된 사료 또는 마초용 콩, 관상 식물, 식량 작물, 교목 또는 관목을 포함하는 단자엽 및 쌍자엽 식물을 포함한다: 에이서 (Acer spp.), 악티니디아 (Actinidia spp.), 아벨모스쿠스 (Abelmoschus spp.), 아가베 시살라나 (Agave sisalana), 아그로피론 (Agropyron spp.), 아그로스티스 스톨로니페라 ( Agrostis stolonifera ), 알리움 (Allium spp.), 아마란투스 (Amaranthus spp.), 암모필라 아레나리아 (Ammophila arenaria), 아나나스 코모수스 ( Ananas comosus ), 안노나 (Annona spp.), 아피움 그라베오렌스 (Apium graveolens), 아라키스 ( Arachis spp.), 알토칼푸스 (Artocarpus spp.), 아스파라거스 오피시날리스 ( Asparagus officinalis ), 아베나 (Avena spp.) (예를 들면, 아베나 사티바 ( Avena sativa ), 아베나 파투아 ( Avena fatua), 아베나 비잔티나 (Avena byzantina), 아베나 파투아 var . 사티바 (Avena fatua var . sativa), 아베나 하이브리다 (Avena hybrida)), 아베로아 카람볼라 (Averrhoa carambola), 뱀부사 (Bambusa sp .), 베닌카사 히스피다 (Benincasa hispida), 벨톨레티아 엑셀세아 (Bertholletia excelsea), 베타 불가리스 (Beta vulgaris), 브라시카 (Brassica spp.) (예를 들면, 브라시카 나푸스 ( Brassica napus), 브라시카 라파 (Brassica rapa ssp.) [캐놀라, 유채, 순무]), 카다바 파리노사 (Cadaba farinosa), 카멜리아 시넨시스 (Camellia sinensis), 칸나 인디카 (Canna indica), 칸나비스 사티바 (Cannabis sativa), 캡시쿰 ( Capsicum spp.), 카렉스 엘라타 (Carex elata), 카리카 파파야 (Carica papaya), 카리사 마크로칼파 (Carissa macrocarpa), 카리야 (Carya spp .), 카르타무스 팅크토리우스 (Carthamus tinctorius), 카스타네아 (Castanea spp.), 케이바 펜탄드라 (Ceiba pentandra), 키코리움 엔디비아 (Cichorium endivia ), 신나모뭄 (Cinnamomum spp .), 시트룰루스 라나투스 (Citrullus lanatus), 시트루스 (Citrus spp.), 코코스 (Cocos spp .), 코페아 ( Coffea spp.), 콜로카시아 에스쿨렌타 (Colocasia esculenta), 콜라 (Cola spp.), 콜코루스 (Corchorus sp.), 코리안드룸 사티붐 (Coriandrum sativum), 코리루스 (Corylus spp.), 크라태구스 (Crataegus spp.), 크로쿠스 사티부스 (Crocus sativus), 쿠쿨비타 (Cucurbita spp .), 쿠쿠미스 ( Cucumis spp.), 키나라 ( Cynara spp.), 다우쿠스 카로타 (Daucus carota), 데스모디움 ( Desmodium spp.), 디모칼푸스 론간 (Dimocarpus longan), 디오스코레아 (Dioscorea spp.), 디오스피로스 (Diospyros spp.), 에키노크로아 (Echinochloa spp .), 엘래이스 ((Elaeis (예를 들면, 엘래이스 귀넨시스 (Elaeis guineensis), 엘레이스 올레이페라 (Elaeis oleifera)), 엘레우신 코라카나 (Eleusine coracana), 에라그로스티스 테프 (Eragrostis tef), 에리안투스 (Erianthus sp .), 에리오보트리아 야포니카 (Eriobotrya japonica), 유카립투스 (Eucalyptus spp.), 유게니아 유니플로라 (Eugenia uniflora), 파고피룸 (Fagopyrum spp.), 파구스 (Fagus spp.), 페스투카 아룬디나케아 (Festuca arundinacea), 피쿠스 카리카 (Ficus carica), 폴투넬라 (Fortunella spp.), 프라가리아 (Fragaria spp.), 깅코 빌로바 (Ginkgo biloba), 글라이신 (Glycine spp.) (예를 들면, 글라이신 맥스 (Glycine max), 소야 히스피다 (Soja hispida) 또는 소야 맥스 (Soja max)), 고시피움 힐수툼 (Gossypium hirsutum), 헬리안투스 (Helianthus spp.) (예를 들면, 헬리안투스 안누스 (Helianthus annuus)), 헤메로칼리스 풀바 (Hemerocallis fulva), 히비스쿠스 (Hibiscus spp.) 홀데움 (Hordeum spp.) (예를 들면, 홀데움 불가레 (Hordeum vulgare)), 이포모에아 바타타스 (Ipomoea batatas ), 주글란스 (Juglans spp.), 락투카 사티바 (Lactuca sativa), 라티루스 (Lathyrus spp.), 렌스 쿨리나리스 (Lens culinaris), 리눔 우시타티시뭄 (Linum usitatissimum), 리치 키넨시스 (Litchi chinensis), 로투스 ( Lotus spp.), 루파 아쿠탄굴라 ( Luffa acutangula ), 루피누스 (Lupinus spp.), 루줄라 실바티카 (Luzula sylvatica), 라이코펠시콘 (Lycopersicon spp.) (예를 들면, 라이코펠시콘 에스쿨렌툼 (Lycopersicon esculentum), 라이코펠시콘 라이코펠시쿰 (Lycopersicon lycopersicum), 라이코펠시콘 피리폴메 (Lycopersicon pyriforme)), 마크로틸로마 (Macrotyloma spp.), 말루스 (Malus spp.), 말피기아 에말기나타 (Malpighia emarginata), 맘메아 아메리카나 (Mammea americana), 망기페라 인디카 (Mangifera indica), 마니호트 (Manihot spp.), 마닐카라 자포타 (Manilkara zapota), 메디카고 사티바 (Medicago sativa), 메릴로투스 (Melilotus spp.), 멘타 ( Mentha spp.), 미스칸투스 시넨시스 (Miscanthus sinensis), 모몰디카 (Momordica spp.), 모루스 니그라 (Morus nigra), 무사 (Musa spp.), 니코티아나 ( Nicotiana spp.), 올레아 ( Olea spp.), 오푼티아 (Opuntia spp.), 오르니토푸스 (Ornithopus spp.), 오리자 (Oryza spp.) (예를 들면, 오리자 사티바 (Oryza sativa ), 오리자 라티포리아 ( Oryza latifolia)), 패니쿰 미리아케움 (Panicum miliaceum), 패니쿰 벌가툼 ( Panicum virgatum), 파시플로라 에둘리스 (Passiflora edulis), 파스티나카 사티바 (Pastinaca sativa), 페니세툼 (Pennisetum sp .), 펠세아 (Persea spp.), 페트로셀리눔 크리스품 (Petroselinum crispum), 파라리스 아룬디나케아 (Phalaris arundinacea), 파세올루스 (Phaseolus spp.), 플레움 프라텐세 (Phleum pratense), 피닉스 (Phoenix spp .), 프라그미테스 오스트라리스 (Phragmites australis), 피사리스 (Physalis spp.), 피누스 ( Pinus spp.,) 피스타키아 베라 (Pistacia vera ), 피숨 (Pisum spp.), 포아 (Poa spp.), 포푸러스 ( Populus spp.), 프로소피스 (Prosopis spp.), 프루누스 (Prunus spp.), 프시디움 ( Psidium spp.), 푸니카 그라나툼 (Punica granatum), 피루스 코무니스 (Pyrus communis), 켈쿠스 (Quercus spp.), 라파누스 사티부스 (Raphanus sativus), 레움 라발바룸 (Rheum rhabarbarum), 리베스 (Ribes spp.), 리키누스 코무니스 ( Ricinus communis ), 루부스 (Rubus spp.), 사카룸 (Saccharum spp.), 살릭스 ( Salix spp.), 삼부쿠스 (Sambucus spp.), 세카레 세레알레 ( Secale cereale ), 세사뭄 ( Sesamum spp.), 시나피스 ( Sinapis sp .), 솔라눔 ( Solanum spp.) (예를 들면, 솔라눔 투베로숨 (Solanum tuberosum ), 솔라눔 인테그리폴리움 (Solanum integrifolium) 또는 솔라눔 라이코펠시쿰 (Solanum lycopersicum)), 솔굼 바이칼라 ( Sorghum bicolor ), 스피나시아 (Spinacia spp.), 시지기움 (Syzygium spp.), 타게테스 ( Tagetes spp.), 타마린두스 인디카 ( Tamarindus indica ), 테오브로마 카카오 (Theobroma cacao ), 트리폴리움 (Trifolium spp.), 트리프사쿰 다크틸로이드 (Tripsacum dactyloides), 트리티코세칼레 림파우이 ( Triticosecale rimpaui ), 트리티쿰 (Triticum spp. (예를 들면, 트리티쿰 아에스티붐 (Triticum aestivum ), 트리티쿰 두룸 (Triticum durum), 트리티쿰 툴기둠 (Triticum turgidum ), 트리티쿰 하이베르눔 (Triticum hybernum), 트리티쿰 마차 (Triticum macha ), 트리티쿰 사티붐 (Triticum sativum), 트리티쿰 모노코쿰 (Triticum monococcum) 또는 트리티쿰 불가레 (Triticum vulgare)), 트로패오룸 미누스 (Tropaeolum minus), 트로패오룸 마주스 (Tropaeolum majus), 박시니움 (Vaccinium spp.), 비시아 (Vicia spp.), 비그나 (Vigna spp.), 비올라 오도라타 (Viola odorata), 비티스 ( Vitis spp.), 제아 메이즈 (Zea mays), 지자니아 팔루스트리스 (Zizania palustris), 지지푸스 (Ziziphus spp.).
대조구
식물(들)
적절한 대조구 식물의 선택은 실험 셋업에서는 통상적인 부분이며, 상기 식물의 야생형 또는 목적 유전자가 없는 해당 식물을 실험에 포함할 수 있다. 대조구 식물은 전형적으로 평가되는 식물과 동일한 식물 종 또는 동일한 변종이다. 대조구 식물은 또한 평가되는 식물의 공접합자 (nullizygote)일 수 있다. 공접합자 (또는 공 (null) 대조구 식물)는 분리에 의하여 외래 유전자가 없는 개체이다. 게다가, 대조구 식물은 본 발명의 식물의 성장 조건과 동등한 성장 조건 하에서, 즉 본 발명의 식물의 인근에서 및 본 발명의 식물과 동시에 키운다. 본 발명에서 사용된 "대조구 식물"은 전체 식물뿐 아니라 종자 및 종자의 일부분을 포함한 식물의 일부분을 말한다.
도 1은 OsNAC1의 발현에 대한 RNA 겔 블럿 분석을 나타낸다. (a) 스트레스 조건에 대한 벼의 OsNAC1 발현. 14일 된 실생은 표시된 시간 동안 가뭄, 고염, ABA 또는 저온에 노출되었다. 가뭄 스트레스를 위해서, 실생은 28℃의 공기로 건조하였다; 고염 스트레스를 위해서, 실생은 28℃에서 400 mM NaCl에 노출되었다; 저온 스트레스를 위해서, 실생은 4℃에 노출되었다; ABA 처리를 위해서, 실생은 100 μM ABA를 함유하는 용액에 노출되었다. (b) RCc3 : OsNAC1, GOS2 : OsNAC1 및 NT 식물 세 가지의 동형접합 T5 라인에 대한 RNA 겔 블럿 분석. 동등한 RNA의 로딩은 EtBr (ethidium bromide) 염색을 이용하여 측정하였다. (-) 및 (+)는 각각 형질전환되지 않은 라인 (null) 및 형질전환 라인을 나타낸다.
도 2는 영양 생장 (vegetative) 단계에서 RCc3 : OsNAC1 및 GOS2 : OsNAC1 식물체의 스트레스 저항성을 나타낸다. (a) 가뭄 스트레스 동안의 식물체의 모습. RCc3:OsNAC1 및 GOS2 : OsNAC1 식물의 3개의 독립적인 동형접합 T5 라인 및 NT 대조구는 5일의 가뭄 스트레스에 이어서 더하기 (+) 기호로 표시된 7일은 재급수하면서 온실에서 2주 동안 키웠다. (b) 가뭄, 고염 및 저온 스트레스 조건에 노출된 벼 식물체의 엽록소 형광 비교 (Fv/Fm). 각 데이터는 3회 반복 실험의 평균±표준오차로 나타낸다 (n=10).
도 3은 (a) 정상 및 (b) 가뭄 조건 하의 경작지에서 2번의 재배 시기 (2009-2010) 동안 RCc3 : OsNAC1 및 GOS2 : OsNAC1 식물체의 농업 형질을 나타낸다. 각 형질전환 식물체에 대한 3개의 독립적인 동형접합 T5 (2009) 및 T6 (2010) 라인과 함께 NT 대조구의 농업 형질은 마이크로소프트 엑셀을 사용하여 구분되었다. 각 데이터는 100%로 지정된 NT 식물체의 평균값 (n=30)의 백분율로 나타냈다. CL, 줄기(culm) 길이; PL, 원추화서 길이, NP, 주 (hill) 당 원추화서의 수; NSP, 원추화서 당 작은 이삭 (spikelet)의 수; TNS, 작은 이삭의 총 수; FR, 충전율; NFG, 충전된 곡물의 수; TGW, 총 곡물 중량; 1000GW, 천립 중량.
도 4는 이삭이 나오는 재생산 단계까지 키운 RCc3 : OsNAC1, GOS2 : OsNAC1 및 NT 식물체의 뿌리 생장 비교를 나타낸다. (a) 상단 패널은 각 식물의 대표적인 뿌리를 보여주는 반면, 하단 패널은 각 식물의 대표적인 뿌리 1개를 보여준다. 상단 및 하단 패널에서 막대는 각각 10 cm 및 2 mm이다. (b) 가로로 절단된 (cross-sectioned) 형질전환 및 NT 식물 뿌리의 광학 현미경 이미지. 뿌리의 전체 횡단면 (상단 패널), 중심주 (stele) 내의 관다발 (중간 패널) 및 외피 및 수피의 일부 (하단 패널). co, 수피; xy, 목질부; ae, 통기 조직 (aerenchyma); 외피는 화살표로 표시하였다. 막대는 상단 패널에서 500 ㎛, 중간 및 하단 패널에서 100㎛이다. (c) NT 식물에 대해 표준화된 형질전환 식물체 뿌리의 부피, 길이, 건조 중량 및 직경. 값은 뿌리 50개 (5개 식물체 각각의 뿌리 10개)의 평균±표준편차이다. 별표 (**)는 0.01 수준 (LSD)에서 유의한 평균 차이를 나타낸다.
도 5는 OsNAC5의 발현에 대한 RNA 겔 블럿 분석을 나타낸다.
A. 10 ㎍의 총 RNA는 표시된 기간 동안 가뭄, 고염, ABA 또는 저온에 노출된 14일 된 실생의 잎 및 뿌리 조직으로부터 준비했다. 가뭄 스트레스를 위해서, 실생은 28℃의 공기로 건조하였다; 고염 스트레스를 위해서, 실생은 28℃에서 400 mM NaCl에 노출되었다; 저온 스트레스를 위해서, 실생은 4℃에 노출되었다; ABA 처리를 위해서, 실생은 100 μM ABA를 함유하는 용액에 노출되었다. 총 RNA는 블럿팅되었고, OsNAC5 유전자 특이적 탐침 (probe)으로 혼성화되었다. 이어서 블럿은 스트레스 처리에 따른 핵심 유전자 중 상향- 및 하향-조절에 대한 마커로 각각 사용되는 Dip1 (Oh et al., 2005b) 및 rbcS (Jang et al., 1999) 유전자에 대해 다시 프로빙되었다. EtBr 염색은 동등한 RNA의 로딩을 측정하기 위해 사용되었다.
B. RNA 겔 블럿 분석은 RCc3 : OsNAC5 및 GOS2 : OsNAC5 식물체의 3개의 동형접합 T5 라인 및 형질전환되지 않은 (NT) 대조구 식물체 각각의 뿌리 및 잎으로부터 준비한 총 RNA를 사용하여 수행되었다. 블럿은 OsNAC5 유전자 특이적 탐침으로 혼성화되었고, 또한 rbcS 및 튜불린에 대해 다시 프로빙되었다. EtBr 염색은 동등한 RNA의 로딩을 측정하기 위해 사용되었다. (-) 공접합자 (외래 유전자가 없는 분리주) 라인, (+) 형질전환 라인.
도 6은 RCc3 : OsNAC5 및 GOS2 : OsNAC5 식물체의 스트레스 내성을 나타낸다.
A. 가뭄 스트레스 동안 형질전환 식물체의 외형. RCc3 : OsNAC5 및 GOS2:OsNAC5 식물체의 3개의 독립적인 동형접합 T6 라인 및 형질전환되지 않은 (NT) 대조구는 3일의 가뭄 스트레스에 이어서 7일은 재급수하면서 온실에서 4주 동안 키웠다. 이미지는 표시된 시점에 촬영했다. '+'는 정상 생장 조건 하에서 재급수하는 일수를 나타낸다.
B. 가뭄, 고염 및 저온 스트레스 조건 하에서 벼 식물체의 엽록소 형광 변화 (Fv/Fm). 14일 동안 MS 배지에서 자란 RCc3 : OsNAC5 및 GOS2 : OsNAC5 식물체의 3개의 독립적인 동형접합 T6 라인 및 NT 대조구는 실시예 섹션에 기재된 것처럼 다양한 스트레스 조건이 처리되었다. 상기 스트레스 처리 후, Fv/Fm 값은 펄스 조절 형광계 (pulse modulation fluorometer; mini-PAM, Walze, Germany)를 사용하여 측정되었다. 모든 식물체는 스트레스 처리 전에 150 μmol m-2 S-1의 연속적인 광 조건 하에서 키웠다. 각 데이터는 3회 반복 실험의 평균±표준오차로 나타낸다 (n=10).
C. 가뭄 조건 하에서 식물의 L-밴드 (L-band)는 ΔWok = Voksample - Vokcontrol 공식을 사용하여 컴퓨터로 계산된 F o 에서 F k 까지의 차이 역학 (difference kinetics)을 통해 나타낸다; 왼쪽 축. O에서 K 단계까지의 이중 표준화; Vok = (Ft-Fo)/(Fk-Fo); 오른쪽 축.
D. 마지막 전자 수용체 (end electron acceptor)의 전체 크기 (pool size)의 차이를 예시하는 Vol≥1.0에 대한 이벤트 (events); 정상 및 가뭄 조건 하에서 Vol = (Ft-Fo)/(Fl-Fo).
도 7은 (A) 정상 및 (B) 가뭄 조건 하에서 경작지에서 자란 RCc3 : OsNAC5 및 GOS2:OsNAC5 식물체의 농업 형질을 나타낸다. 정상 및 가뭄 두 조건 하에서 RCc3:OsNAC5 및 GOS2 : OsNAC5 식물체의 3개의 독립적인 동형접합 T5 및 T6 라인 및 해당 NT 대조구의 농업 형질의 스파이더 플롯 (Spider plots)은 마이크로소프트 엑셀을 사용하여 그렸다. 각 데이터는 표 13 및 14에 열거된 평균값 (n=30)의 백분율을 나타낸다. NT 대조구의 평균 측정은 100% 기준 값으로 지정했다. CL, 줄기(culm) 길이; PL, 원추화서 길이, NP, 주 (hill) 당 원추화서의 수; NSP, 원추화서 당 작은 이삭 (spikelet)의 수; TNS, 작은 이삭의 총 수; FR, 충전율; NFG, 충전된 곡물의 수; TGW, 총 곡물 중량; 1000GW, 천립 중량.
도 8은 RCc3 : OsNAC5 및 GOS2 : OsNAC5 식물체의 뿌리 생장에서의 차이를 나타낸다.
A. RCc3 : OsNAC5 및 GOS2 : OsNAC5 식물체의 뿌리 부피, 길이, 건조 중량 및 직경은 NT 대조구 뿌리의 부피, 길이, 건조 중량 및 직경에 대해 표준화하였다. ** 평균 차이는 0.01 수준 (LSD)에서 유의하다. 값은 50개 뿌리 (5개 식물체 각각의 뿌리 10개)의 평균±표준편차이다.
B. 이삭이 나오는 재생산 단계까지 키운 RCc3 : OsNAC5, GOS2 : OsNAC5 및 NT 대조구 식물체의 하나의 대표적인 뿌리. 스케일 바 = 2 mm.
C. 가로로 절단된 (cross-sectioned) RCc3 : OsNAC5, GOS2 : OsNAC5 및 NT 식물체 뿌리의 광학 현미경 이미지. 후생 목부 물관 (metaxylem vessel; Me) 및 통기 조직 (Ae)의 위치를 표시했다. 스케일 바, 상단 패널에서 500 ㎛, 중간 및 하단 패널에서 100 ㎛.
도 9는 다양한 NAC1 폴리펩티드의 다중 정렬을 나타낸다. 별표는 다양한 단백질 서열 사이에서 동일한 아미노산을 가리키며, 콜론은 고도로 보존된 아미노산 치환을 나타내고, 점은 더 적게 보존된 아미노산 치환을 나타내며, 다른 위치에서는 서열 보존이 없다. 이 정렬은 보존된 아미노산을 이용할 때, 추가의 모티프 또는 시그너처 서열을 정의하는데 이용될 수 있다.
도 10은 다양한 NAC5 폴리펩티드의 다중 정렬을 나타낸다. 별표는 다양한 단백질 서열 사이에서 동일한 아미노산을 가리키며, 콜론은 고도로 보존된 아미노산 치환을 나타내고, 점은 더 적게 보존된 아미노산 치환을 나타내며, 다른 위치에서는 서열 보존이 없다. 이 정렬은 보존된 아미노산을 이용할 때, 추가의 모티프 또는 시그너처 서열을 정의하는데 이용될 수 있다.
도 2는 영양 생장 (vegetative) 단계에서 RCc3 : OsNAC1 및 GOS2 : OsNAC1 식물체의 스트레스 저항성을 나타낸다. (a) 가뭄 스트레스 동안의 식물체의 모습. RCc3:OsNAC1 및 GOS2 : OsNAC1 식물의 3개의 독립적인 동형접합 T5 라인 및 NT 대조구는 5일의 가뭄 스트레스에 이어서 더하기 (+) 기호로 표시된 7일은 재급수하면서 온실에서 2주 동안 키웠다. (b) 가뭄, 고염 및 저온 스트레스 조건에 노출된 벼 식물체의 엽록소 형광 비교 (Fv/Fm). 각 데이터는 3회 반복 실험의 평균±표준오차로 나타낸다 (n=10).
도 3은 (a) 정상 및 (b) 가뭄 조건 하의 경작지에서 2번의 재배 시기 (2009-2010) 동안 RCc3 : OsNAC1 및 GOS2 : OsNAC1 식물체의 농업 형질을 나타낸다. 각 형질전환 식물체에 대한 3개의 독립적인 동형접합 T5 (2009) 및 T6 (2010) 라인과 함께 NT 대조구의 농업 형질은 마이크로소프트 엑셀을 사용하여 구분되었다. 각 데이터는 100%로 지정된 NT 식물체의 평균값 (n=30)의 백분율로 나타냈다. CL, 줄기(culm) 길이; PL, 원추화서 길이, NP, 주 (hill) 당 원추화서의 수; NSP, 원추화서 당 작은 이삭 (spikelet)의 수; TNS, 작은 이삭의 총 수; FR, 충전율; NFG, 충전된 곡물의 수; TGW, 총 곡물 중량; 1000GW, 천립 중량.
도 4는 이삭이 나오는 재생산 단계까지 키운 RCc3 : OsNAC1, GOS2 : OsNAC1 및 NT 식물체의 뿌리 생장 비교를 나타낸다. (a) 상단 패널은 각 식물의 대표적인 뿌리를 보여주는 반면, 하단 패널은 각 식물의 대표적인 뿌리 1개를 보여준다. 상단 및 하단 패널에서 막대는 각각 10 cm 및 2 mm이다. (b) 가로로 절단된 (cross-sectioned) 형질전환 및 NT 식물 뿌리의 광학 현미경 이미지. 뿌리의 전체 횡단면 (상단 패널), 중심주 (stele) 내의 관다발 (중간 패널) 및 외피 및 수피의 일부 (하단 패널). co, 수피; xy, 목질부; ae, 통기 조직 (aerenchyma); 외피는 화살표로 표시하였다. 막대는 상단 패널에서 500 ㎛, 중간 및 하단 패널에서 100㎛이다. (c) NT 식물에 대해 표준화된 형질전환 식물체 뿌리의 부피, 길이, 건조 중량 및 직경. 값은 뿌리 50개 (5개 식물체 각각의 뿌리 10개)의 평균±표준편차이다. 별표 (**)는 0.01 수준 (LSD)에서 유의한 평균 차이를 나타낸다.
도 5는 OsNAC5의 발현에 대한 RNA 겔 블럿 분석을 나타낸다.
A. 10 ㎍의 총 RNA는 표시된 기간 동안 가뭄, 고염, ABA 또는 저온에 노출된 14일 된 실생의 잎 및 뿌리 조직으로부터 준비했다. 가뭄 스트레스를 위해서, 실생은 28℃의 공기로 건조하였다; 고염 스트레스를 위해서, 실생은 28℃에서 400 mM NaCl에 노출되었다; 저온 스트레스를 위해서, 실생은 4℃에 노출되었다; ABA 처리를 위해서, 실생은 100 μM ABA를 함유하는 용액에 노출되었다. 총 RNA는 블럿팅되었고, OsNAC5 유전자 특이적 탐침 (probe)으로 혼성화되었다. 이어서 블럿은 스트레스 처리에 따른 핵심 유전자 중 상향- 및 하향-조절에 대한 마커로 각각 사용되는 Dip1 (Oh et al., 2005b) 및 rbcS (Jang et al., 1999) 유전자에 대해 다시 프로빙되었다. EtBr 염색은 동등한 RNA의 로딩을 측정하기 위해 사용되었다.
B. RNA 겔 블럿 분석은 RCc3 : OsNAC5 및 GOS2 : OsNAC5 식물체의 3개의 동형접합 T5 라인 및 형질전환되지 않은 (NT) 대조구 식물체 각각의 뿌리 및 잎으로부터 준비한 총 RNA를 사용하여 수행되었다. 블럿은 OsNAC5 유전자 특이적 탐침으로 혼성화되었고, 또한 rbcS 및 튜불린에 대해 다시 프로빙되었다. EtBr 염색은 동등한 RNA의 로딩을 측정하기 위해 사용되었다. (-) 공접합자 (외래 유전자가 없는 분리주) 라인, (+) 형질전환 라인.
도 6은 RCc3 : OsNAC5 및 GOS2 : OsNAC5 식물체의 스트레스 내성을 나타낸다.
A. 가뭄 스트레스 동안 형질전환 식물체의 외형. RCc3 : OsNAC5 및 GOS2:OsNAC5 식물체의 3개의 독립적인 동형접합 T6 라인 및 형질전환되지 않은 (NT) 대조구는 3일의 가뭄 스트레스에 이어서 7일은 재급수하면서 온실에서 4주 동안 키웠다. 이미지는 표시된 시점에 촬영했다. '+'는 정상 생장 조건 하에서 재급수하는 일수를 나타낸다.
B. 가뭄, 고염 및 저온 스트레스 조건 하에서 벼 식물체의 엽록소 형광 변화 (Fv/Fm). 14일 동안 MS 배지에서 자란 RCc3 : OsNAC5 및 GOS2 : OsNAC5 식물체의 3개의 독립적인 동형접합 T6 라인 및 NT 대조구는 실시예 섹션에 기재된 것처럼 다양한 스트레스 조건이 처리되었다. 상기 스트레스 처리 후, Fv/Fm 값은 펄스 조절 형광계 (pulse modulation fluorometer; mini-PAM, Walze, Germany)를 사용하여 측정되었다. 모든 식물체는 스트레스 처리 전에 150 μmol m-2 S-1의 연속적인 광 조건 하에서 키웠다. 각 데이터는 3회 반복 실험의 평균±표준오차로 나타낸다 (n=10).
C. 가뭄 조건 하에서 식물의 L-밴드 (L-band)는 ΔWok = Voksample - Vokcontrol 공식을 사용하여 컴퓨터로 계산된 F o 에서 F k 까지의 차이 역학 (difference kinetics)을 통해 나타낸다; 왼쪽 축. O에서 K 단계까지의 이중 표준화; Vok = (Ft-Fo)/(Fk-Fo); 오른쪽 축.
D. 마지막 전자 수용체 (end electron acceptor)의 전체 크기 (pool size)의 차이를 예시하는 Vol≥1.0에 대한 이벤트 (events); 정상 및 가뭄 조건 하에서 Vol = (Ft-Fo)/(Fl-Fo).
도 7은 (A) 정상 및 (B) 가뭄 조건 하에서 경작지에서 자란 RCc3 : OsNAC5 및 GOS2:OsNAC5 식물체의 농업 형질을 나타낸다. 정상 및 가뭄 두 조건 하에서 RCc3:OsNAC5 및 GOS2 : OsNAC5 식물체의 3개의 독립적인 동형접합 T5 및 T6 라인 및 해당 NT 대조구의 농업 형질의 스파이더 플롯 (Spider plots)은 마이크로소프트 엑셀을 사용하여 그렸다. 각 데이터는 표 13 및 14에 열거된 평균값 (n=30)의 백분율을 나타낸다. NT 대조구의 평균 측정은 100% 기준 값으로 지정했다. CL, 줄기(culm) 길이; PL, 원추화서 길이, NP, 주 (hill) 당 원추화서의 수; NSP, 원추화서 당 작은 이삭 (spikelet)의 수; TNS, 작은 이삭의 총 수; FR, 충전율; NFG, 충전된 곡물의 수; TGW, 총 곡물 중량; 1000GW, 천립 중량.
도 8은 RCc3 : OsNAC5 및 GOS2 : OsNAC5 식물체의 뿌리 생장에서의 차이를 나타낸다.
A. RCc3 : OsNAC5 및 GOS2 : OsNAC5 식물체의 뿌리 부피, 길이, 건조 중량 및 직경은 NT 대조구 뿌리의 부피, 길이, 건조 중량 및 직경에 대해 표준화하였다. ** 평균 차이는 0.01 수준 (LSD)에서 유의하다. 값은 50개 뿌리 (5개 식물체 각각의 뿌리 10개)의 평균±표준편차이다.
B. 이삭이 나오는 재생산 단계까지 키운 RCc3 : OsNAC5, GOS2 : OsNAC5 및 NT 대조구 식물체의 하나의 대표적인 뿌리. 스케일 바 = 2 mm.
C. 가로로 절단된 (cross-sectioned) RCc3 : OsNAC5, GOS2 : OsNAC5 및 NT 식물체 뿌리의 광학 현미경 이미지. 후생 목부 물관 (metaxylem vessel; Me) 및 통기 조직 (Ae)의 위치를 표시했다. 스케일 바, 상단 패널에서 500 ㎛, 중간 및 하단 패널에서 100 ㎛.
도 9는 다양한 NAC1 폴리펩티드의 다중 정렬을 나타낸다. 별표는 다양한 단백질 서열 사이에서 동일한 아미노산을 가리키며, 콜론은 고도로 보존된 아미노산 치환을 나타내고, 점은 더 적게 보존된 아미노산 치환을 나타내며, 다른 위치에서는 서열 보존이 없다. 이 정렬은 보존된 아미노산을 이용할 때, 추가의 모티프 또는 시그너처 서열을 정의하는데 이용될 수 있다.
도 10은 다양한 NAC5 폴리펩티드의 다중 정렬을 나타낸다. 별표는 다양한 단백질 서열 사이에서 동일한 아미노산을 가리키며, 콜론은 고도로 보존된 아미노산 치환을 나타내고, 점은 더 적게 보존된 아미노산 치환을 나타내며, 다른 위치에서는 서열 보존이 없다. 이 정렬은 보존된 아미노산을 이용할 때, 추가의 모티프 또는 시그너처 서열을 정의하는데 이용될 수 있다.
실시예
본 발명은 단지 예시인 하기 실시예를 참고하여 기재될 것이다. 하기 실시예는 본 발명의 범위를 제한할 의도는 아니다. 달리 나타내지 않는 한, 본 발명은 종래 기술 및 식물 생물학, 분자 생물학, 생물정보학 및 식물 육종 방법을 사용한다.
DNA 조작에 대해: 달리 언급되지 않는 한, 재조합 DNA 기술은 Sambrook (2001, Molecular Cloning: a laboratory manual, 3rd Edition Cold Spring Harbor Laboratory Press, CSH, New York) 또는 Ausubel 등 (1994, Current Protocols in Molecular Biology, Current Protocols의 Volumes 1 및 2)에 기재된 표준 프로토콜에 따라 수행되었다. 식물 분자 작업에 대한 표준 재료 및 방법은 Plant Molecular Biology Labfax (1993, by R.D.D. Croy, published by BIOS Scientific Publications Ltd (UK) 및 Blackwell Scientific Publications (UK))에 기재되어 있다.
A: 실험 절차
(i)
OsNAC1
의 플라스미드 구축물 및 벼 형질전환
OsNAC1의 코딩 영역은 제조사의 지시에 따라 RT-PCR system (Promega)을 사용하여 총 RNA로부터 정방향 (5'-ATGGGGATGGGGATGAGGAG-3'), 역방향 (5'-TCAGAACGGGACCATGCCCA-3') 프라이머 쌍을 이용하여 증폭하였다. 벼에서의 과발현을 위해서, OsNAC1의 cDNA는 Gateway system (Invitrogen, Carlsbad, CA)을 사용하여 항시성 발현을 위한 GOS2 프로모터 및 뿌리 특이적 발현을 위한 RCc3 프로모터에 연결되었다. 플라스미드는 삼친 교배 (triparental mating)에 의해 아그로박테리움 튜머파시엔스 LBA4404로 도입되었고, 성숙 종자 유래의 배 발생 (Oryza sativa cv Nipponbare) 캘러스는 이전에 기술된 방법 (Jang et al., 1999)으로 형질전환되었다.
(
ii
)
OsNAC5
의 플라스미드 구축물 및 벼 형질전환
OsNAC5 (AK102475)의 코딩 영역은 제조사의 지시에 따라 RT-PCR system (Promega, Wl)을 사용하여 벼 총 RNA로부터 증폭되었다. 프라이머 쌍은 하기와 같다: 정방향 (5'-ATGGAGTGCGGTGGTGCGCT-3') 및 역방향 (5'-TTAGAACGGCTTCTGCAGGT-3'). 벼에서 OsNAC5 유전자를 과발현시키기 위해서, 상기 유전자에 대한 cDNA는 Gateway system (Invitrogen, Carlsbad, CA)을 사용하여 항시성 발현을 위한 GOS2 프로모터 및 뿌리 특이적 발현을 위한 RCc3 프로모터에 연결되었다. 플라스미드는 삼친 교배 (triparental mating)에 의해 아그로박테리움 튜머파시엔스 LBA4404로 도입되었고, 성숙 종자 유래의 배 발생 (Oryza sativa cv Nipponbare) 캘러스는 이전에 기술된 방법 (Jang et al., 1999)으로 형질전환되었다.
(
iii
) 영양 생장 (
vegetative
) 단계에서 벼 식물체의 가뭄 처리
형질전환 및 형질전환되지 않은 (NT) 벼 (Oryza sativa cv Nipponbare) 식물체의 종자는 절반 강도의 MS 고체 배지에서 발아시켰고, 28℃의 어두운 생장 챔버에 4일 동안 두었다. 실생은 토양에 이식한 후 28-30℃의 온실 (16시간 광/8시간 암 주기)에서 키웠다. 가뭄 스트레스 실험을 수행하기 전에, 각 형질전환 및 형질전환되지 않은 라인의 18개의 실생은 4주 동안 포트 (3×3×5 cm; 포트 당 1개 식물체)에서 키웠다. 가뭄 스트레스는 3-5일 동안 실생에 물을 억제하여 시뮬레이션했고, 반면에 회복 시험은 가뭄 스트레스 처리된 식물에 재급수하여 수행했으며, 7일 동안 관찰했다. 그리고 생존한 또는 계속 성장하는 식물의 수를 기록하였다.
(
iv
)
NAC5
RNA
겔
블럿
분석
벼 (Oryza sativa cv Nipponbare) 종자는 토양에서 발아시켰고, 28℃의 온실 (16시간 광/8시간 암 주기)에서 키웠다. 고염 및 ABA 처리를 위해, 14일 된 실생은 표시된 기간 동안 약 1000 μmol/m2/s의 지속적인 광 조건 하의 온실의 400 mM NaCl 또는 100 μM ABA를 함유하는 영양 용액에 옮겨졌다. 가뭄 처리를 위해, 14일 된 실생을 잘라냈고, 약 1000 μmol/m2/s의 지속적인 광 조건 하에서 표시된 시간별로 공기 건조되었다. 저온 스트레스 처리를 위해, 14일 된 실생은 표시된 시간별로 150 μmol/m2/s의 지속적인 광 조건 하의 저온 챔버에서 4℃에 노출되었다. 총 RNA 준비 및 RNA 겔 블럿 분석은 이전에 보고된 방법 (Jang et al., 2002)으로 수행하였다.
(v) 노던
블럿
분석
벼 (Oryza sativa cv Nipponbare) 종자는 토양에서 발아시켰고, 22℃의 온실 (16시간 광/8시간 암 주기)에서 키웠다. 총 RNA는 표시된 시간 동안 가뭄, 고염, ABA 및 저온에 노출된 14일 된 실생으로부터 준비했다. 고염 및 ABA 처리를 위해, 실생은 표시된 기간 동안 약 1000 μmol/m2/s의 지속적인 광 조건 하의 온실의 400 mM NaCl 또는 100 μM ABA를 함유하는 영양 용액에 옮겨졌다. 가뭄 처리를 위해, 실생을 잘라냈고, 약 1000 μmol/m2/S의 지속적인 광 조건 하에서 표시된 시간별로 공기 건조되었다. 저온 스트레스 처리를 위해, 실생은 표시된 시간별로 150 μmol/m2/S의 지속적인 광 조건 하의 저온 챔버에서 4℃에 노출되었다. 10 ㎍의 총 RNA를 블럿팅하였고, OsNAC1 유전자 특이적 탐침과 혼성화하였다. 그리고 블럿은 스트레스 처리에 다른 핵심 유전자의 상향 조절에 대한 마커로 사용되는 Dip1 유전자와 함께 다시 프로빙되었다. EtBr (ethidium bromide) 염색은 동등한 RNA의 로딩을 측정하기 위해 사용되었다. RNA 겔 블럿 분석을 위한 샘플은 RCc3 : OsNAC1, GOS2:OsNAC1 및 NT 식물체 각각의 3개의 동형접합 T5 라인에 대한 잎 및 줄기 샘플의 총 RNA (10 ㎍)로부터 준비되었다. 블럿은 OsNAC1 유전자 특이적 탐침으로 혼성화였고, RbcS 및 튜불린에 대해 다시 프로빙되었다. 동등한 RNA 로딩은 EtBr 염색을 이용하여 측정되었다. 총 RNA의 준비 및 RNA 겔 블럿 분석은 Jang (2002)등에 따라 수행되었다.
(
vi
) 가뭄, 고염 및 저온 조건 하에서 엽록소 형광의 측정
형질전환 및 형질전환되지 않은 벼 (Oryza sativa cv Nipponbare) 식물체의 종자는 발아시켜 절반 강도의 MS 고체 배지에서 14일 동안 키웠다. 생장 챔버는 28℃의 150 μmol m-2 s-1의 16시간 광/8시간 암 주기의 광 조건 및 암 조건의 세팅을 가졌다. 그리고 약 10개의 실생의 녹색 부분은 시험관 내 스트레스 처리 전에 가위로 잘랐다. 모든 스트레스 조건은 150 μmol m-2 s-1의 지속적인 광 하에서 수행되었다. 저온 스트레스 처리를 위해, 실생은 최대 6시간 동안 4℃의 물에서 배양되었다. 고염 스트레스는 28℃의 400 mM NaCl에서 2시간 동안 배양하여 유도되었다. 가뭄 스트레스를 시뮬레이션하기 위해, 식물체는 28℃에서 2시간 동안 공기 건조되었다. 그리고 Fv/Fm 값은 이전에 기술된 방법으로 측정되었다 (Oh et al., 2005).
(
vii
) 벼 3'-
타일링
마이크로어레이
(3'-
Tiling
Microarray
) 분석
벼 3'-타일링 마이크로어레이는 이전에 기술된 것처럼 발현 프로파일링 (profiling) 분석을 위해 사용되었다 (Oh et al., 2009). 형질전환 및 형질전환되지 않은 벼 (Oryza sativa cv Nipponbare) 종자는 토양에서 발아시켰고, 22℃의 온실 (16시간 광/8시간 암 주기)에서 키웠다. 벼에서 스트레스 유도성 NAC 유전자를 동정하기 위해, 총 RNA (100 ㎍)는 가뭄, 고염, ABA 및 저온 스트레스를 받은 14일 된 식물의 잎으로부터 준비되었다. 고염 및 ABA 처리를 위해, 14일 된 실생은 2시간 동안 약 1000 μmol m-2 s-1의 지속적인 광 조건 하의 온실의 400 mM NaCl 또는 100 μM ABA를 함유하는 영양 용액에 옮겨졌다. 가뭄 처리를 위해, 14일 된 실생은 또한 약 1000 μmol m-2 s-1의 지속적인 광 조건 하에서 2시간 동안 공기 건조되었다. 저온 스트레스 처리를 위해, 14일 된 실생은 150 μmol m-2 s-1의 지속적인 광 조건 하의 저온 챔버에서 6시간 동안 4℃에 노출되었다. RCc3 : OsNAC1 , GOS2:OsNAC1 식물체에서 상향 조절된 유전자의 동정을 위해, 총 RNA (100 ㎍)는 정상 생장 조건 하에서 자란 14일 된 형질전환 및 형질전환되지 않은 벼 실생 (Oryza sativa cv Nipponbare)의 뿌리 및 잎 조직으로부터 준비되었다.
(
viii
) 2년 (2009 및 2010) 동안 경작지에서 벼 식물체의 가뭄 처리 및 곡물 수확량 분석
정상 경작지 조건 하에서 형질전환 식물의 수확량 구성요소를 평가하기 위해, RCc3 : OsNAC1 및 GOS2 : OsNAC1 식물체의 3개의 독립적인 T5 (2009) 및 T6 (2010) 동형접합 라인과 함께 형질전환되지 않은 (NT) 대조구는 대한민국 수원 농촌진흥청 (2009) 및 대한민국 군위 국립경북대학교 (2010)의 논 (paddy field)에 이식하였다. 임의 배치법 (randomized design)은 2번의 경작 시기 (2009-2010) 동안 3번 반복 사용되었다. 실생은 파종 후 25일에 주 (hill) 당 하나의 실생으로 15×30 cm 간격 내에 무작위로 이식되었다. 비료는 70N/40P/70K kg/ha로 마지막 패들링 (paddling) 후 및 이식 45일 후에 사용하였다. 수확량 매개변수는 시기당 형질전환 라인당 30개의 식물체에 대해 기록되었다. 가장자리에 위치한 식물은 데이터 기록에서 제외했다.
가뭄 경작지 조건 하에서 형질전환 식물의 수확량 구성요소를 평가하기 위해, RCc3 : OsNAC1 및 GOS2 : OsNAC1 식물체 각각의 3개의 독립적인 T5 (2009) 및 T6 (2010) 동형접합 라인 및 NT 대조구는 천연의 논 흙으로 채워진 1 m 깊이의 컨테이너와 함께 제거할 수 있는 비가림 시설 (대한민국 용인 명지대학교에 위치)에 이식되었다.
실험 설계, 이식 간격, 비료의 사용, 가뭄 처리 및 농업 형질의 계산은 Oh 등 (2009)에 기술된 방법이 사용되었다. 정상 및 가뭄 조건하에서 자란 식물이 성숙에 이르고 곡물이 익었을 때, 그들은 수확되고 수작업으로 탈곡 되었다 (식물 영양생장 부분으로부터 종자의 분리). 충전되지 않은 및 충전된 곡물은 분리되었고, Countmate MC1000H (Prince Ltd, Korea)를 사용하여 독립적으로 세어졌고, 무게가 측정되었다. 하기 농업 형질이 기록되었다: 원추화서 길이 (cm), 주 (hill) 당 원추화서의 수, 원추화서 당 작은 이삭의 수, 주 당 작은 이삭의 수, 충전율 (%), 주 당 충전된 작은 이삭의 수, 총 곡물 중량 (g) 및 천립중량 (g). 3개의 독립적인 라인의 결과는 단방향 (one way) ANOVA 및 NT 대조구와 비교하여 따로따로 분석되었다. ANOVA는 형질전환 라인 및 NT 대조구의 동등한 평균의 귀무가설 (null hypothesis)을 거절하기 위해 사용되었다 (p<0.05). SPSS 버전 16.0이 상기 통계분석을 수행하기 위해 사용되었다.
상기 절차는 RCc3 : OsNAC5 및 GOS2 : OsNAC5 식물체에도 사용되었다.
(
ix
) 뿌리의 현미경 검사
뿌리의 현미경 검사는 Jeong 등 (2010)에 의해 기술된 방법으로 수행되었다. 개요로서, 원추화서 이삭이 나오는 단계에서 형질전환 및 형질전환되지 않은 식물의 뿌리는 변형된 Karnovsky's 고정액을 사용하여 4℃에서 밤새 고정시켰고, 동일한 버퍼를 사용하여 각각 10분 동안 3회 세척했다. 그들은 동일한 버퍼로 4℃에서 2시간 동안 후기-고정시켰고 (post-fixed), 증류수로 간단하게 2회 세척했다. 후기 고정된 뿌리 조직은 4℃에서 밤새 enbloc 염색했다. 그들은 일련의 등급의 에탄올 (30, 50, 70, 80, 95 및 100%)에서 탈수되었고, 100% 에탄올로 각각 10분 동안 3회 탈수되었다. 탈수된 샘플은 전환 유체로 프로필렌 옥시드 (propylene oxide)를 사용하여 각각 30분 동안 2회 추가로 처리했고, Spurr's 배지에 넣었다. 초박 절편 (약 1 μm 두께)은 다이아몬드 칼을 이용하여 울트라-마이크로톰 (ultra-microtome; MT-X; RMC Inc., Tucson, AZ)으로 만들었다. 절편은 1% 톨루이딘 블루 (toluidine blue)를 사용하여 염색했고, 광학 현미경 하에서 사진 촬영했다.
(x)
JIP
분석
식물체의 엽록소 a 형광 통과 (transient)는 이전에 기술된 방법으로 핸디-PEA 형광계 (Handy-PEA fluorimeter; Plant Efficiency Analyzer, Hansatech Instruments Ltd., King's Lynn Norfolk, PE 30 4NE, UK)를 사용하여 측정하였다 (Redillas et al., 2011a 및 2011b). 식물은 반응 중심 (RC; reaction center)의 개방을 충분히 확실하게, 즉 RC가 충분히 산화되게 하기 위해 적어도 30분 동안 암-순응되었다. 3개의 독립적인 T6 동형접합 라인의 각각에 대해 두 식물체가 선발되었다. 각 식물체에 대해 가장 크고 시각적으로 건강해보이는 잎들을 선발하였고, 그들의 정점 (apex), 중간 및 기저부에서 측정했다. 측정값은 핸디 PEA 소프트웨어 (Handy PEA Software; 버전 1.31)를 사용하여 평균을 구했다. 핸디 PEA-형광계는 하기 프로그램을 사용하여 설정했다: 초기 형광은 O (50 μs), J (2 ms)로 설정했고, I (30 ms)는 중간, 정점 (peak)으로 P (500 ms-1s)를 설정했다. 통과 (transient)는 3개의 발광 다이오드 (light-emitting diode)에 의해 제공된 3,500 μmol photons m-2s-1의 650 nm에서 적색 빛에 의해 유도되었고, 직경 5 mm의 부위 (spot)에 초점을 맞추고, 12 비트 (bit) 해상도로 1초 동안 기록되었다. 데이터 수집은 10 μs마다 (10 μs부터 0.3 ms까지), 0.1 ms마다 (0.2부터 3 ms까지), 1 ms마다 (3부터 30 ms까지), 10 ms마다 (30부터 300 ms 까지) 및 100 ms마다 (300 ms부터 1 s까지)로 설정했다. 표준화 및 계산은 JIP-test 공식에 따라 Biolyzer 4HP 소프트웨어 (v4.0.30.03.02)를 사용하여 수행되었다. OK 단계 (Δ W OK )에 대해 계산된 차이 역학은 처리되지 않은 NT (Vokcontrol)로 샘플 (Voksample)의 표준화된 데이터를 공제 (subtract)하여 수행되었다. 각 데이터 설정에 대한 표준화는 VOK= (Ft - Fo)/(Fk - Fo) 공식으로 수행되었다. 그래프는 OriginPro 8 SR0 v9.0724 (B724)를 사용하여 만들었다.
B: 결과
실시예
1:
OsNAC1
의 형질전환된 과발현은 영양 생장 단계에서 스트레스 내성을 부여한다
본 발명자는 시간별로는 가뭄, 고염, 저온 및 ABA에 노출된 14일 된 실생의 잎 및 뿌리의 총 RNA를 사용하여 RNA 겔 블럿 분석을 수행하였다. 벼 잎 및 뿌리에서 내재적 OsNAC1의 발현은 가뭄, 고염 및 ABA에 의해 현저하게 상향조절되나, 저온 조건에 의해서는 약하게 상향조절되었다 (도 1a). 형질전환 벼 식물체에서 OsNAC1을 과발현하기 위해, OsNAC1의 전체 길이 cDNA는 두 가지 다른 프로모터, 뿌리 특이적 발현을 위한 RCc3 (RCc3 : OsNAC1) 및 항시성 발현을 위한 GOS2 (GOS2 : OsNAC1)에 연결되었다. 유전자 구축물 당 15 내지 20개의 독립적인 형질전환 라인은 아그로박테리움 매개 형질전환 방법으로 제조되었다. 발육 저해 없이 정상 조건에서 자란 형질전환 라인의 T1 -6 종자를 수집했고, RCc3 : OsNAC1 및 GOS2 : OsNAC1 두 식물체의 3개의 독립적인 T5 -6 동형접합 라인은 추가의 분석을 위해 선발했다. RCc3 : OsNAC1 및 GOS2:OsNAC1의 발현은 뿌리 및 잎의 RNA 겔 블럿 분석으로 확인했다 (도 1b). 외래유전자 OsNAC1의 발현은 RCc3 : OsNAC1 식물의 잎에서는 검출되지 않았으나, 뿌리는 RCc3 프로모터의 뿌리 특이성을 검증하는 외래유전자의 높은 발현 수준을 나타냈다. 외래유전자의 발현 수준은 GOS2 : OsNAC1 식물의 뿌리 및 잎 모두에서 유사하게 증가했다. 게다가, 외래유전자의 발현 수준은 GOS2:OsNAC1 식물의 뿌리에서보다 RCc3 : OsNAC1 식물의 뿌리에서 더 높은 반면, 참조 튜불린의 발현은 일정하게 유지되었다.
영양 생장 단계에서 OsNAC1 과발현체 (overexpressor)의 스트레스 내성을 평가하기 위해, 4주령 형질전환 및 형질전환되지 않은 (NT) 대조구 식물은 최대 5일 동안 가뭄 스트레스를 겪었다 (도 2a). 형질전환 식물은 가뭄 처리 동안 NT에 비해 지연된 잎 말림이 나타났다. 재급수 후, 형질전환 식물은 회복하기 시작한 반면, NT 식물은 회복의 징후 없이 계속 시들어서, 영양 생장 단계에서 형질전환 식물의 가뭄 내성을 증명했다. 환경 스트레스는 식물의 광합성 기구에 영향을 미치므로, PSII의 최대 광화학 효율 (Fv/Fm: Fv, 가변 형광; Fm, 최대 형광)은 펄스 진폭 조절 형광계 (pulse amplitude modulation fluorometer)를 사용하여 측정하였다 (도 2b). 14일 된 식물은 시간별로 가뭄, 고염 및 저온 스트레스를 겪었고, 그들의 Fv/Fm 값이 측정되었다. 가뭄 및 고염 두 조건 하에서, RCc3 : OsNAC1 및 GOS2:OsNAC1 식물은 스트레스 정도 및 형질전환 라인에 따라 NT 대조구 식물보다 10-30% 더 높은 Fv/Fm 값을 나타냈다. 저온 조건 하에서는, 대조적으로, 형질전환 및 NT 대조구 식물 사이의 Fv/Fm 값의 차이가 관찰되지 않았다. 동시에, 이러한 결과는 영양 생장 단계에서 가뭄 스트레스에 대한 두 형질전환 식물체의 향상된 내성을 나타낸다.
하기 표 10은 2009년 및 2010년 동안 정상 조건 하에서 RCc3 : OsNAC1 및 GOS2:OsNAC1 식물의 종자 생산 매개변수의 분석을 나타낸다.
실시예
2:
OsNAC1
의 과발현은 정상 및 가뭄 두 조건 하에서 곡물 수확량을 증가시킨다
정상 및 경작지 가뭄 조건 하에서 형질전환 식물의 수확량 구성요소는 2번의 경작 시기 (2009년 및 2010년)동안 평가되었다. RCc3 : OsNAC1 및 GOS2 : OsNAC1 식물체의 3개의 독립적인 T5 (2009) 및 T6 (2010) 동형접합 라인은 형질전환되지 않은 (NT) 대조구와 함께 논에 이식했고, 성숙기까지 키웠다. 수확량 매개변수는 3회의 반복 실험에서 형질전환 라인 당 30개의 식물에 대해 기록되었다. 2년의 경작지 시험으로부터의 데이터 세트는 일반적으로 일정했고, RCc3 : OsNAC1 및 GOS2 : OsNAC1 식물의 총 곡물 중량은 각각 13-18% 및 13-32% 증가했다. 총 곡물 중량의 증가는 주로 RCc3 : OsNAC1 식물에서는 증가된 원추화서 길이 때문이며, GOS2:OsNAC1 식물에서는 증가된 원추화서 길이 및 원추화서 수 때문이었다 (도 3a; 표 10).
가뭄 조건 하에서 형질전환 식물체를 시험하기 위해, RCc3 : OsNAC1 및 GOS2:OsNAC1 식물의 3개의 독립적인 T5 및 T6 라인은 제거할 수 있는 비가림 시설이 있는 논에 이식하였다. 식물은 원추화서 이삭이 나오는 단계까지 가뭄 스트레스에 노출되었다 (이삭이 나오기 10일 전부터 이삭이 나온 10일 후까지). 비가림 시설 하에서 적용된 가뭄 스트레스의 수준은 정상 생장 조건 하에서 얻은 총 곡물 중량의 40-50%를 제공하는 것과 동등했으며, 이는 정상 및 가뭄 조건 사이의 NT 식물의 총 곡물 중량 수준의 차이에 의해 입증된다 (추가의 표 S1 및 S2). 2번의 경작 시기 동안 기록된 수확량 매개변수의 통계 분석은 가뭄 조건 하에서 곡물 수확량의 감소가 NT 대조구에서 관찰된 것보다 RCc3 : OsNAC1 식물에서 현저하게 적다는 것을 보여주었다. 특히, 가뭄 처리된 RCc3 : OsNAC1 식물에서, 충전율이 가뭄 처리된 NT 식물보다 18-36% 더 높았고, 이는 형질전환 라인에 따라 28-72%의 총 곡물 중량의 증가를 야기했다 (도 3b; 표 11). 가뭄 처리된 GOS2 : OsNAC1 식물에서는, 대조적으로, 총 곡물 중량이 가뭄 처리된 NT 대조구와 유사하게 유지되었다. RCc3 : OsNAC1 및 GOS2 : OsNAC1 식물에서 영양 생장 단계 동안 유사한 가뭄 내성의 수준이 주어지면, 경작지 가뭄 조건 하에서 총 곡물 중량의 차이는 예상되지 않았다.
형질전환 식물의 뿌리 형태는 또한 이삭이 나오는 재생산 단계까지 자란 RCc3:OsNAC1, GOS2 : OsNAC1 및 NT 식물의 뿌리 부피, 길이, 건조 중량 및 직경을 측정하여 관찰되었다. 도 4b에 나타난 것처럼, RCc3 : OsNAC1 및 GOS2 : OsNAC1 식물의 뿌리 직경은 NT 대조구 식물의 뿌리 직경보다 각각 30% 및 7% 더 두꺼웠다. 가로로 절단된 뿌리의 현미경 분석은 뿌리 직경의 증가가 RCc3 : OsNAC1 뿌리의 확대된 중심주 (stele), 수피 (cortex) 및 외피 (epidermis) 때문이라는 것을 나타냈다. 특히, 통기 조직 (도 4b에서 ae)은 GOS2 : OsNAC1 및 NT 식물과 비교하여 RCc3:OsNAC1 뿌리에서 더 컸는데, 이는 확대된 중심주와 함께 RCc3 : OsNAC1 뿌리의 확대에 기여할 수 있다. OsNAC1의 뿌리 특이적 과발현이 큰 통기 조직과 뿌리 직경을 증가시킨다는 사실은 재생산 단계에서 형질전환 식물의 향상된 가뭄 내성과 관련된다. GOS2 : OsNAC1 뿌리의 부피, 길이 및 건조 중량은 NT 뿌리에 비해 각각 50%, 20% 및 35% 증가했는데, 이는 상기 매개변수가 정상 생장 조건 하에서 식물의 곡물 수확량 증가에도 영향을 미친다는 것을 제안한다.
정상 생장 조건 하에서, 두 식물은 형질전환되지 않은 (NT) 대조구에 비해 더 높은 곡물 수확량을 나타냈다. RCc3 : OsNAC1 식물의 총 곡물 수확량의 증가는 주로 원추화서 길이의 증가 때문이었으나, GOS2 : OsNAC1 식물의 총 곡물 수확량 증가는 원추화서 길이, 원추화서의 수 및 작은 이삭의 수를 포함하는 수많은 형질 때문이었다. 가뭄 조건 하에서, 대조적으로, RCc3 : OsNAC1 식물은 주로 충전율의 증가 때문에 28-72%의 총 곡물 중량이 현저하게 향상되었으나, GOS2 : OsNAC1 식물은 어느 형질에도 현저한 변화가 나타나지 않았다.
OsNAC1의 뿌리 특이적 과발현은 특히 가뭄 조건 하에서 분명하게 벼 수확량의 증가에 중요한 역할을 수행했다. T5 또는 이후 세대에서 RCc3 : OsNAC1 및 GOS2:OsNAC1 식물은 이전 세대에서 예비 선발 동안 분리되었다면, 생장 지연, 비정상적인 잎 모양 및 색깔, 및 원추화서 발육 불량과 같은 어떤 불필요한 다면 발현 효과를 나타내지 않았다. 따라서 NT 대조구에 비해서, T5 -6의 RCc3 : OsNAC1 및 GOS2:OsNAC1 식물에 의해 나타난 반응의 변화는 전적으로 외래유전자에 의한 것이다. 이삭이 나오는 재생산 단계의 RCc3 : OsNAC1 식물의 뿌리 특성은 NT 대조구 및 GOS2:OsNAC1 식물의 뿌리 특성과 비교하여 뿌리 직경의 증가를 나타냈다. 상기 증가는 외견상 확대된 목질부, 커진 수피 (cortical) 세포 및 외피 (epidermis) 때문이었다. 확대된 목질부를 갖는 두꺼운 뿌리는 더 나은 수분 이동 (water flux)에 기여하며, 얇은 뿌리보다 낮은 공동현상 (cavitation)을 갖는다 (Yambao et ai, 1992). 또한, 큰 뿌리 직경 크기는 침투 (penetration)(Clark et ai, 2008; Nguyen et ai, 1997) 및 분지 (Fitter, 1991; Ingram et al., 1994) 능력에 관련되어 있기 때문에, 더 큰 뿌리는 가뭄 내성에 직접적인 역할을 한다.
하기 표 11은 2009년 및 2010년 동안 가뭄 스트레스 조건 하에서 RCc3:OsNAC1 및 GOS2 : OsNAC1 식물의 종자 생산 매개변수의 분석을 나타낸다.
실시예
3: 과발현된
OsNAC1
에 의해 상향 조절된 유전자의 동정
발현 프로파일링 (profiling)은 OsNAC1의 과발현에 따라 상향 조절된 유전자를 동정하기 위해 RCc3 : OsNAC1 및 GOS2 : OsNAC1 뿌리에 대해 수행되었다. 벼 3'-타일링 마이크로어레이는 정상 조건 하에서 자란 14일 된 식물의 뿌리에서 추출된 RNA 샘플에 대해 수행되었다. 각 데이터 세트는 2회 반복 실험된 (duplicate) 생물학적 샘플로부터 얻었다. 단방향 (one-way) ANOVA (p<0.01)를 사용한 통계적 분석은 OsNAC1 과발현에 따라 RCc3 : OsNAC1 및 GOS2 : OsNAC1 뿌리에서 3배 이상 상향 조절된 46개 유전자를 동정했다 (표 10). 또한 RCc3 : OsNAC1 및 GOS2 : OsNAC1 뿌리에 특이적인 9개 및 28개 유전자가 각각 동정되었다 (표 12). 두 형질전환 뿌리에서 공통으로 높게 상향 조절된 표적 유전자는 ABA 생합성을 위한 유전자인 9-시스-에폭시카로티노이드 디옥시게나아제 (9- cis -epoxycarotenoid dioxygenase), 통기 조직 형성을 유도하는 수피 세포 사멸 (apoptosis)을 위한 Ca2 + 신호전달을 위한 구성 요소인 칼슘-수송 ATPase (calcium - transporting ATPase), 통기 조직을 둘러싼 경계 (barrier) 형성 (카스파리선; Casparian Strip)을 위한 리그닌 생합성에 관련된 유전자인 신나모일 CoA 리덕타아제 1 (cinnamoyl CoA reductase 1)을 포함한다. 흥미롭게도, 또한 경계 형성을 위해 필수적인 코르크질(suberin) 생합성을 위한 유전자인 O-메틸트랜스퍼라아제 (O- methyltransferase)는 RCc3 : NAC1 뿌리에서만 특이적으로 상향 조절되었다. 형질전환 뿌리에서 특이적으로 상향 조절된 상기 표적 유전자는 재생산 단계에서 뿌리 형태의 차이, 따라서 가뭄의 내성을 설명할 수 있다.
공통적인 표적 유전자는 9-시스-에폭시카로티노이드 디옥시게나아제, 칼슘-수송 ATPase 및 신나모일 CoA 리덕타아제 1을 포함한다. 크산톡신 (xanthoxin)을 생성하기 위한 9-시스-에폭시카로티노이드 디하이드로게나아제 (NCED)에 의한 시스-에폭시카로티노이드의 산화적 분해 (oxidative cleavage)는 ABA 생합성의 조절에서 결정적 및 율속 단계 (rate-limiting step)이다 (Tan et al., 1997). NCED 유전자는 가뭄 스트레스에 노출되었을 때 두 형질전환 식물에서 20배 이상 상향 조절되었으며, 이는 상기 식물의 민감도에 기여할 수 있다. Ca2 +-수송-ATPase (Ca 2 + -ATPase)는 RCc3 : OsNAC1 및 GOS2 : OsNAC1 식물에서 각각 26배 및 32배 상향 조절되었다. 아포플라스트 공간 (apoplastic space)으로부터의 유입 또는 내부 저장소로부터의 유출 중 하나에 의해 유래된 세포질 Ca2 +의 일시적인 증가는 식물 세포에서 저온, 가뭄 및 염분 스트레스에 대한 초기 반응으로 이용된다 (Knight, 2000). 세포질 Ca2 +의 증가는 액포막 (tonoplast)의 파열과 결부되며, 이는 또한 뿌리의 수피 영역에서 기체가 채워진 공간인 통기 조직의 형성에 따라 뿌리 수피 세포의 사멸에 앞선 조기 이벤트 (events)를 나타낸다. 이는 RCc3 : OsNAC1 뿌리에서 관찰된 더 큰 수피 세포의 기여를 설명한다. 통기 조직은 벼에서 정단 분열조직 (apical meristem)에 의한 호흡을 위해 주변 토양으로 O2 손실을 최소화하는 것을 돕는 해부학적 적응으로 이용된다. 상기 구조는 코르크화된 후벽 섬유층 (hypodermis) 및 후벽 섬유층 바로 안쪽에 리그닌화된 세포의 층을 포함하며, 상기 두 층은 약간의 기체 투과성이다 (Drew et al., 2000). 흥미롭게도, 리그닌 생합성의 주요 효소 (EC 1.2.144)를 코딩하는 유전자인 신나모일-CoA 리덕타아제 (CRR)는 OsNAC1 과발현에 따라 RCc3 : OsNAC1 및 GOS2 : OsNAC1 식물에서 상향 조절된다. CRR은 모노리그놀스 p-쿠마릴 (monolignols p-coumaryl), 코니페릴 (coniferyl) 및 시나필 알콜 (sinapyl alcohol)의 생산을 유도하는 생합성 경로에 특이적인 첫 번째 효소이며, 리그닌의 양 및 질을 조절한다 (Jones et al., 2001). 애기장대 상동체인 AtCCR1의 하향 조절은 식물의 표현형에 급격한 변형 (alteration)을 초래한다 (Goujon et al., 2003). 또한, 옥수수에서 기능 상실 돌연변이 (Zmccr1 -/- )는 리그닌 함량의 약간의 감소를 야기하며, 리그닌 구조에 있어서 현저한 변화를 초래한다 (Tamasloukht et al., 2011). 옥수수 유전자 ZmCCR2는 가뭄 조건에 의해 유도되는 것으로 밝혀졌으며, 주로 뿌리에서 검출할 수 있다 (Fan et al., 2006). CCR과 함께, 리그닌 생합성에 관련된 효소를 코딩하는 다른 유전자인 신나밀 알콜 디하이드로게나아제 (CAD)는 또한 두 식물에서 상향 조절되었다. CAD는 리그닌 생합성 경로에서 하이드록시신나모일 알데하이드 (모노리그날)의 모노리그놀로의 최종 전환을 촉매한다 (Sattler et al., 2009). 게다가, 코르크질 생합성에 관련된 효소 (EC=2.1.1-)를 코딩하는 유전자인 O-메틸트랜스퍼라아제는 RCc3 : OsNAC1 식물에서 특이적으로 상향 조절된다. 애기장대에서 O-메틸트랜스퍼라아제를 코딩하는 ZRP4 mRNA는 뿌리에 우선적으로 축적되며, 잎, 줄기 및 다른 어린줄기 기관에서는 낮은 수준으로 내피 (endodermis) 영역 내에 대부분 위치해 있다는 것이 밝혀졌다 (Held et al., 1993). 뿌리 특이적 프로모터를 사용한 3가지 O-메틸로트랜스퍼라아제 유전자의 상향 조절은 코르크질 생합성에서의 그들의 관여 때문에 GOS2 : OsNAC1 및 NT 식물에 비해 RCc3 : OsNAC1 식물의 향상된 가뭄 내성에 기여할 수 있다. 코르크질과 함께 리그닌은 경계 형성으로 불리는 과정에서 뿌리 주변 층 (peripheral layer) 벽의 리그닌화 및/또는 코르크화를 통해 방사형 산소 손실 (radial oxygen loss)을 방지하는데 중요한 역할을 한다. 이러한 내피 및 외피 세포의 방사형 및 횡단 (transverse) 벽에 대한 경계 형성은 일반적으로 카스파리선 (Casparian Strip, CS)과 관련되어 있다. CS의 주요 기능은 뿌리에서 선택적인 아포플라스트 우회 (selective apoplastic bypass)를 방지하여 중심주 (stele)로의 수분 및 염 수송을 저해하는 것이다 (Ma et al., 2003). Cai 등 (2011)은 염 및 가뭄 내성이 있는 Liaohan 109에서 내피 및 외피에 대한 CS의 발달이 중간 정도의 염-민감성인 Tianfeng 202 및 염 민감성인 Nipponbare보다 더 일찍 발생한다는 것을 보고했다. 상기 그룹은 또한 영양 용액에 염분이 없더라도, Liaohan 109에서 CS의 발달이 앞당겨지고 증가했다는 것을 보고했다. 따라서, 마이크로어레이 결과는 뿌리에서 특이적으로 또는 전체 식물체 전역에서 OsNAC1의 과발현에 의해 영향받은 식물이 어떻게 가뭄 스트레스를 견디는지 및 어떻게 유전자를 조절하는지에 대한 이해를 우리에게 제공했다.
마이크로어레이 결과는 RCc3 : OsNAC1 및 GOS2 : OsNAC1 뿌리에서 공통적인 46개의 상향 조절된 표적 유전자를 나타냈다 (표 12). 게다가, 9개 및 28개 표적 유전자는 각각 RCc3 : OsNAC1 및 GOS2 : OsNAC1 뿌리에서 특이적으로 상향 조절되는 것이 밝혀졌다 (표 12). 공통적인 표적 유전자는 9-시스-에폭시카로티노이드 디옥시게나아제, 칼슘-수송 ATPase 및 신나모일 CoA 리덕타아제 1을 포함한다. 크산톡신 (xanthoxin)을 생성하기 위한 9-시스-에폭시카로티노이드 디하이드로게나아제 (NCED)에 의한 시스-에폭시카로티노이드의 산화적 분해 (oxidative cleavage)는 ABA 생합성의 조절에서 결정적 및 율속 단계 (rate-limiting step)이다 (Tan et al., 1997). NCED 유전자는 가뭄 스트레스에 노출되었을 때 두 형질전환 식물에서 20배 이상 상향 조절되었으며, 이는 상기 식물의 민감도에 기여할 수 있다. Ca2 +-수송-ATPase (Ca 2 + - ATPase)는 RCc3 : OsNAC1 및 GOS2 : OsNAC1 식물에서 각각 26배 및 32배 상향 조절되었다. 아포플라스트 공간 (apoplastic space)으로부터의 유입 또는 내부 저장소로부터의 유출 중 하나에 의해 유래된 세포기질의 Ca2 +의 일시적인 증가는 식물 세포에서 저온, 가뭄 및 염분 스트레스에 대한 이른 반응을 제공한다 (Knight, 2000). 세포질 Ca2 +의 증가는 액포막 (tonoplast)의 파열과 결부되며, 이는 또한 뿌리의 수피 영역에서 기체가 채워진 공간인 통기 조직의 형성에 따라 뿌리 수피 세포의 사멸에 앞선 조기 이벤트 (events)를 나타낸다. 이는 RCc3 : OsNAC1 뿌리에서 관찰된 더 큰 수피 세포의 기여를 설명한다. 통기 조직은 벼에서 정단 분열조직 (apical meristem)에 의한 호흡을 위해 주변 토양으로 O2 손실을 최소화하는 것을 돕는 해부학적 적응으로 이용된다. 상기 구조는 코르크화된 후벽 섬유층 (hypodermis) 및 후벽 섬유층 바로 안쪽에 리그닌화된 세포의 층을 포함하며, 상기 두 층은 약간의 기체 투과성이다 (Drew et al., 2000). 흥미롭게도, 리그닌 생합성의 주요 효소 (EC 1.2.144)를 코딩하는 유전자인 신나모일-CoA 리덕타아제 (CRR)는 OsNAC1 과발현에 따라 RCc3 : OsNAC1 및 GOS2 : OsNAC1 식물에서 상향 조절된다. CRR은 모노리그놀스 p-쿠마릴 (monolignols p-coumaryl), 코니페릴 (coniferyl) 및 시나필 알콜 (sinapyl alcohol)의 생산을 유도하는 생합성 경로에 특이적인 첫 번째 효소이며, 리그닌의 양 및 질을 조절한다 (Jones et al., 2001). 애기장대 상동체인 AtCCR1의 하향 조절은 식물의 표현형에 급격한 변형 (alteration)을 초래한다 (Goujon et al., 2003). 또한, 옥수수에서 기능 상실 돌연변이 (Zmccr1 -/- )는 리그닌 함량의 약간의 감소를 야기하며, 리그닌 구조에 있어서 현저한 변화를 초래한다 (Tamasloukht et al., 2011). 옥수수 유전자 ZmCCR2는 가뭄 조건에 의해 유도되는 것으로 밝혀졌으며, 주로 뿌리에서 검출할 수 있다 (Fan et al., 2006). CCR과 함께, 리그닌 생합성에 관련된 효소를 코딩하는 다른 유전자인 신나밀 알콜 디하이드로게나아제 (CAD)는 또한 두 식물에서 상향 조절되었다. CAD는 리그닌 생합성 경로에서 하이드록시신나모일 알데하이드 (모노리그날)의 모노리그놀로의 최종 전환을 촉매한다 (Sattler et al., 2009). 게다가, 코르크질 생합성에 관련된 효소 (EC=2.1.1-)를 코딩하는 유전자인 O-메틸트랜스퍼라아제는 RCc3 : OsNAC1 식물에서 특이적으로 상향 조절된다. 애기장대에서 O-메틸트랜스퍼라아제를 코딩하는 ZRP4 mRNA는 잎, 줄기 및 다른 신초 기관에서는 낮은 수준으로 나타나고, 뿌리에 우선적으로 축적되며, 내피 (endodermis) 영역 내에 대부분 위치해 있다는 것이 밝혀졌다 (Held et al., 1993). 뿌리 특이적 프로모터를 사용한 3가지 O-메틸로트랜스퍼라아제 유전자의 상향 조절은 상기 기술된 것처럼 코르크질 생합성에서 그것 (O-메틸로트랜스퍼라아제)의 관여 때문에 GOS2 : OsNAC1 및 NT 식물에 비해 RCc3 : OsNAC1 식물의 향상된 가뭄 내성에 기여할 수 있다. 따라서, 마이크로어레이 결과는 뿌리에서 특이적으로 또는 전체 식물체 전역에서 OsNAC1의 과발현에 의해 영향받은 식물이 어떻게 가뭄 스트레스를 견디는지 및 어떻게 유전자를 조절하는지에 대한 이해를 우리에게 제공했다.
유전자명 | 유전자좌 번호a (IRGSP) |
RCc3 : OsNAC1 | GOS2 : OsNAC1 | 서열번호 | ||
평균b | p-값c | 평균b | p-값c | |||
RCc3 : OsNAC1 및 GOS2 : OsNAC1 식물에서 상향조절된 유전자 |
||||||
Protein kinase | Os01g0117600 | 3,60 | 0,00 | 3,04 | 0,00 | 48 & 49 |
ABC transporter | Os01g0609300 | 3,39 | 0,00 | 4,44 | 0,00 | 50 & 51 |
Peptidase aspartic | Os01g0937500 | 3,40 | 0,00 | 3,37 | 0,00 | 52 & 53 |
Cytochrome P450 | Os02g0601400 | 5,35 | 0,00 | 2,91 | 0,00 | 54 & 55 |
WAK3 | Os02g0807900 | 5,02 | 0,00 | 4,47 | 0,00 | 56 & 57 |
Cinnamoyl CoA Reductase 1 | Os02g0811800 | 10,65 | 0,00 | 7,47 | 0,00 | 58 & 59 |
Acyl-activating enzyme | Os03g0130100 | 3,09 | 0,00 | 3,31 | 0,00 | 60 & 61 |
Phytosulfokine | Os03g0232400 | 3,69 | 0,00 | 2,85 | 0,00 | 62 & 63 |
U-box | Os03g0240600 | 6,16 | 0,00 | 7,27 | 0,00 | 64 & 65 |
Aspartyl protease | Os03g0318400 | 3,59 | 0,00 | 3,61 | 0,00 | 66 & 67 |
High affinity K+ transporter 5 | Os03g0575200 | 5,28 | 0,00 | 5,03 | 0,00 | 68 & 69 |
Copalyl diphosphate synthetase | Os04g0178300 | 3,50 | 0,00 | 3,56 | 0,00 | 70 & 71 |
RLP (receptor-like protein kinase) | Os04g0202700 | 4,10 | 0,00 | 4,16 | 0,00 | 72 & 73 |
MAPKKK9 | Os04g0339800 | 7,17 | 0,00 | 6,91 | 0,00 | 74 & 75 |
WAK2 | Os04g0365100 | 4,60 | 0,00 | 3,56 | 0,00 | 76 & 77 |
WAK2 | Os04g0368800 | 3,87 | 0,00 | 3,56 | 0,00 | 78 & 79 |
Glutamate dehydrogenase | Os04g0543900 | 3,13 | 0,00 | 3,00 | 0,00 | 80 & 81 |
Downy mildew resistnant 6 | Os04g0581000 | 4,49 | 0,00 | 4,55 | 0,00 | 82 & 83 |
Oxidoreductase, 2OG-Fe(II) oxygenase | Os04g0581100 | 70,90 | 0,00 | 61,65 | 0,00 | 84 & 85 |
Pyruvate kinase | Os04g0677300 | 3,27 | 0,00 | 4,05 | 0,00 | 86 & 87 |
Zinc finger | Os05g0404700 | 3,11 | 0,00 | 5,46 | 0,00 | 88 & 89 |
Aldo/keto reductase | Os05g0456100 | 3,89 | 0,00 | 2,37 | 0,00 | 90 & 91 |
Aldo/keto reductase | Os05g0456200 | 3,40 | 0,00 | 2,57 | 0,00 | 92 & 93 |
Early nodulin 93 | Os06g0141600 | 3,06 | 0,00 | 3,47 | 0,00 | 94 & 95 |
Integral membrane protein | Os06g0218900 | 3,12 | 0,00 | 2,37 | 0,00 | 96 & 97 |
Haem peroxidase | Os06g0521500 | 3,01 | 0,00 | 3,44 | 0,00 | 98 & 99 |
Pathogenesis-related protein | Os07g0129300 | 3,08 | 0,00 | 3,44 | 0,00 | 100 & 101 |
RLK (receptor lectin kinase) | Os07g0129800 | 4,87 | 0,00 | 3,96 | 0,00 | 102 & 103 |
9-cis-epoxycarotenoid dioxygenase | Os07g0154100 | 20,06 | 0,00 | 25,41 | 0,00 | 104 & 105 |
Cloroplastosos alterados | Os07g0190000 | 4,09 | 0,00 | 4,50 | 0,00 | 106 & 107 |
Leucine-rich repeat transmembrane kinase | Os07g0251900 | 8,22 | 0,00 | 5,96 | 0,00 | 108 & 109 |
Leucine-rich repeat protein kinase | Os08g0201700 | 3,53 | 0,00 | 2,26 | 0,00 | 110 & 111 |
Leucine-rich repeat protein kinase | Os08g0203400 | 7,64 | 0,00 | 6,21 | 0,00 | 112 & 113 |
WRKY40 | Os09g0417600 | 7,64 | 0,00 | 7,21 | 0,00 | 114 & 115 |
WRKY18 | Os09g0417800 | 6,93 | 0,00 | 7,16 | 0,00 | 116 & 117 |
Potassium ion transmembrane transporter | Os09g0448200 | 7,71 | 0,00 | 7,06 | 0,00 | 118 & 119 |
WAK2 | Os10g0151100 | 6,63 | 0,00 | 4,06 | 0,00 | 120 & 121 |
Calcium-transporting ATPase | Os10g0418100 | 26,21 | 0,00 | 32,54 | 0,00 | 122 & 123 |
Aspartyl protease | Os10g0537800 | 4,59 | 0,00 | 4,28 | 0,00 | 124 & 125 |
Aspartyl protease | Os10g0538200 | 4,47 | 0,00 | 3,98 | 0,00 | 126 & 127 |
DNA binding/ Homeodomain | Os11g0282700 | 126,94 | 0,00 | 100,82 | 0,00 | 128 & 129 |
Calcium-binding EF hand family protein | Os11g0600500 | 4,32 | 0,00 | 4,02 | 0,00 | 130 & 131 |
Zinc finger | Os11g0687100 | 5,60 | 0,00 | 6,05 | 0,00 | 132 & 133 |
Zinc finger | Os11g0702400 | 3,23 | 0,00 | 3,74 | 0,00 | 134 & 135 |
Germin-like protein 9 | Os12g0154800 | 3,01 | 0,00 | 2,99 | 0,00 | 136 & 137 |
AAA-ATPase 1 | Os12g0431100 | 3,10 | 0,00 | 4,24 | 0,00 | 138 & 139 |
RCc3 : OsNAC1 식물에서 상향조절된 유전자 |
||||||
Cytochrome P450 | Os02g0601500 | 5,42 | 0,00 | 1,86 | 0,00 | 140 & 141 |
MtN3 | Os05g0426000 | 4,03 | 0,00 | 1,27 | 0,07 | 142 & 143 |
Leucine-rich repeat | Os08g0202300 | 3,34 | 0,00 | 1,52 | 0,03 | 144 & 145 |
O-methyltransferase | Os09g0344500 | 3,68 | 0,00 | 1,23 | 0,05 | 146 & 147 |
AAA-type ATPase | Os09g0445700 | 31,09 | 0,00 | 1,15 | 0,11 | 148 & 149 |
O-methyltransferase | Os10g0118000 | 4,39 | 0,00 | 1,50 | 0,01 | 150 & 151 |
O-methyltransferase | Os10g0118200 | 6,36 | 0,00 | 1,30 | 0,06 | 152 & 153 |
protein kinase | Os11g0274700 | 5,00 | 0,00 | 1,95 | 0,00 | 154 & 155 |
Disease resistance protein | Os11g0491600 | 59,47 | 0,00 | 1,08 | 0,91 | 156 & 157 |
GOS2 : OsNAC1 식물에서 상향조절된 유전자 |
||||||
Aminotransferase | Os01g0729600 | 1,54 | 0,10 | 8,41 | 0,00 | 158 & 159 |
Xyloglucosyl transferase | Os02g0280300 | -2,09 | 0,01 | 4,44 | 0,00 | 160 & 161 |
Cinnamoyl CoA reductase 1 | Os02g0808800 | -1,23 | 0,47 | 9,51 | 0,00 | 162 & 163 |
Downy mildew resistant 6 | Os03g0122300 | 1,78 | 0,01 | 3,01 | 0,00 | 164 & 165 |
Proline extensin-like receptor kinase 1 | Os03g0269300 | 1,76 | 0,01 | 5,31 | 0,00 | 166 & 167 |
WRKY1 | Os03g0335200 | 1,78 | 0,03 | 3,28 | 0,00 | 168 & 169 |
Salt tolerance zinc finger | Os03g0437200 | -1,29 | 0,76 | 3,65 | 0,00 | 170 & 171 |
AAA-ATPase 1 | Os03g0802400 | 1,44 | 0,15 | 3,13 | 0,00 | 172 & 173 |
Hydrolase | Os04g0411800 | 1,81 | 0,01 | 3,30 | 0,00 | 174 & 175 |
Hydrolase | Os04g0412000 | 1,55 | 0,03 | 3,05 | 0,00 | 176 |
Membrane bound O-acyl transferase | Os04g0481800 | 1,92 | 0,02 | 4,22 | 0,00 | 177 & 178 |
Cinnamyl alcohol dehydrogenase 6 | Os04g0612700 | -1,33 | 0,37 | 5,27 | 0,00 | 179 & 180 |
Leucine-rich repeat | Os04g0621900 | -0,05 | 0,50 | 4,18 | 0,00 | 181 & 182 |
Phosphofructokinase 3 | Os05g0194900 | 1,73 | 0,01 | 4,42 | 0,00 | 183 & 184 |
Pyruvate decarboxylase | Os05g0469600 | 1,61 | 0,00 | 4,65 | 0,00 | 185 & 186 |
L-lactate dehydrogenase | Os06g0104900 | 1,67 | 0,01 | 4,17 | 0,00 | 187 & 188 |
Disease resistance protein | Os06g0279900 | -1,18 | 0,18 | 4,54 | 0,00 | 189 & 190 |
FAD-binding domain-containing protein | Os06g0548200 | 2,00 | 0,00 | 3,78 | 0,00 | 191 & 192 |
Universal stress protein | Os07g0673400 | 1,89 | 0,01 | 4,39 | 0,00 | 193 & 194 |
Terpene synthase/cyclase | Os08g0167800 | 1,89 | 0,02 | 3,74 | 0,00 | 195 & 196 |
Acidic endochitinase | Os08g0518900 | 1,95 | 0,00 | 4,03 | 0,00 | 197 & 198 |
Pin-formed 5 | Os08g0529000 | 0,17 | 0,43 | 4,10 | 0,00 | 199 & 200 |
Calcium-binding EF | Os09g0483100 | -0,08 | 0,94 | 6,22 | 0,00 | 201 & 201 |
Calcium-binding EF hand | Os09g0483300 | 1,39 | 0,12 | 3,54 | 0,00 | 203 & 204 |
Purple acid phosphatase 3 | Os10g0116800 | 1,46 | 0,21 | 3,96 | 0,00 | 205 & 206 |
Phosphoenolpyruvate carboxykinas 1 | Os10g0204400 | 1,53 | 0,05 | 4,42 | 0,00 | 207 & 208 |
HAT dimerization domain-containing protein | Os10g0567900 | -0,11 | 0,60 | 3,56 | 0,00 | 209 & 210 |
Acidic endochitinase | Os11g0701000 | -1,27 | 0,65 | 3,03 | 0,00 | 211 & 212 |
a해당 유전자의 전체 길이 cDNA 서열에 대한 서열 식별 번호. b반복 실험된 (duplicate) 생물학적 샘플의 평균. c p-값은 단방향 ANOVA (p<O.01)로 분석했다. 상기 마이크로어레이 데이터 세트는 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/ (Gene Expression Omnibus, GEO, Accession number)에서 찾을 수 있다.
실시예
4:
OsNAC5
의 형질전환된 과발현은 가뭄 및
고염
조건에 대한 식물 내성을 증가시켰다
스트레스 조건 하에서 OsNAC5의 전사체 수준을 조사하기 위해, 본 발명자는 고염, 가뭄, ABA 및 저온에 노출된 14일 된 벼 실생의 잎 및 뿌리 조직의 총 RNA를 사용하여 RNA 겔 블럿 분석을 수행했다 (도 5A). 잎 및 뿌리 두 조직에서 OsNAC5의 발현은 가뭄, 고염 및 ABA의 처리에 의해 현저하게 유도되었으나, 저온 조건에서는 유도되지 않았다. OsNAC5의 전사체 수준은 가뭄 및 염분 처리 0.5시간 후에 증가하기 시작하여 스트레스 처리 2시간에 최대로 나타났으나, 외인성 ABA의 처리에 의해서는 전사체 수준이 6시간까지 점진적으로 증가했다.
형질전환 벼 식물에서 OsNAC5를 과발현시키기 위해, RCc3 : OsNAC5 및 GOS2:OsNAC5의 두 발현 벡터는 뿌리 특이적 및 보존된 발현을 위해 RCc3 (Xu et al., 1995) 및 GOS2 (de Pater et al., 1992)에 OsNAC5 cDNA를 각각 융합하여 제작했다. 발현 벡터는 아그로박테리움 매개 형질전환 방법 (Hiei et al., 1994)을 이용하여 벼 (Oryza sativa cv Nipponbare)에 형질전환하였고, 유전자 구축물 당 15-20개의 형질전환 식물을 생산했다. 발육 저해 없이 정상 조건에서 자란 형질전환 라인의 T1 -6 종자를 수집하였고, RCc3 : OsNAC5 및 GOS2 : OsNAC5 두 식물의 3개의 독립적인 T5 -6 동형접합 라인은 추가의 분석을 위해 선발했다. 형질전환 식물에서 OsNAC5의 발현 수준을 측정하기 위해, RNA 겔 블럿 분석이 정상 생장 조건 하에서 자란 14일 된 실생의 잎 및 뿌리 조직의 총 RNA를 사용하여 수행되었다. OsNAC5 발현의 증가한 수준은 RCc3 : OsNAC5 식물의 뿌리 및 GOS2 : OsNAC5 식물의 잎 및 뿌리에서는 검출되었으나, 형질전환되지 않은 (NT) 및 공접합자 (외래 유전자가 없는 분리주) 식물에서는 검출되지 않았다 (도 5B).
가뭄 스트레스에 대한 형질전환 식물의 내성을 평가하기 위해, 1개월 된 형질전환 및 NT 대조구 식물은 온실에서 물을 억제함으로써 가뭄 스트레스를 처리했다. 시간별 가뭄 처리에서, 두 형질전환 식물은 NT 대조구보다 엽록소의 부수적인 손실을 동반한 시들음 및 잎 말림과 같은 스트레스에 의해 유도된 손상 증상이 지연되는 것을 보여주었다 (도 6A). 형질전환 식물은 또한 7일까지의 재급수 동안 더 잘 회복되었다. 형질전환 식물의 생존율은 60 내지 80%에 이르는 반면, NT 대조구 식물은 회복의 징후가 없었다.
형질전환 식물의 스트레스 내성을 더 확인하기 위해, 본 발명자는 암-순응 상태에서 광계 II (PSII)의 광화학 효율의 지표인 Fv/Fm 값의 변화를 측정하였다. 2주령의 형질전환 및 NT 대조구 식물의 잎 디스크 (leaf disc)는 표시된 시간 동안 가뭄, 고염 및 저온 처리되었다. 스트레스 처리되지 않은 식물의 Fv/Fm 값은 약 0.8이었다. 가뭄 (0.5시간) 및 고염 (2시간) 조건의 초기 단계에서, RCc3 : OsNAC5 및 GOS2 : OsNAC5 식물의 Fv/Fm 수준은 NT 대조구의 Fv/Fm 수준보다 15-22% 더 높았다 (도 6B). 그러나, 연장된 가뭄 (2시간) 및 고염 (6시간) 스트레스뿐만 아니라 저온 조건 하에서, 상기 Fv/Fm 수준은 NT 대조구의 Fv/Fm 수준과 유사하게 유지되었으며, 이는 형질전환 식물의 내성의 적당한 (moderate) 수준을 제안한다. JIP 테스트는 암-순응된 식물의 조명 (illumination) 후 50 μs 및 300 μs 사이에 일시적인 엽록소 a 형광을 분석함으로써 대안적인 스트레스 내성 측정 방법을 제공한다 (Redillas et al., 2011a and 2011 b). 상기 JIP 테스트는 PSII 유닛의 안테나 (antenna) 사이의 연결성 (connectivity)에 대한 정보를 제공한다. 상기 연결은 소위 L-밴드 (L-band)가 나타내는 차이 역학 (difference kinetics)에 의해 도시될 수 있다. 상기 밴드는 상기 식물의 연결성이 스트레스 처리되지 않은 NT 대조구의 연결성보다 높을 때 (또는 낮을 때) 부정적 (또는 긍정적)이다. 상기 연결성은 또한 식물의 엽록소 a 형광을 측정하는 Fv/Fm 분석을 이용해서 검출할 수 없다. 본 발명자는 재생산 단계의 식물에 대해 JIP 테스트를 수행했는데, 이는 두 형질전환 식물이 가뭄 조건 하에서 NT 대조구보다 높은 연결성을 갖는다는 것을 나타냈다 (도 6C 및 D). 더 구체적으로, 연결성은 NT 대조구를 제외하고, RCc3:OsNAC5 식물 다음으로 GOS2 : OsNAC5 식물에서 높았는데, 이는 재생산 단계에서 가뭄 내성의 차이를 나타낸다.
실시예
5:
OsNAC5
의 과발현은 정상 및 가뭄 두 조건 하에서 곡물 수확량을 증가시킨다
RCc3 : OsNAC5 및 GOS2 : OsNAC5 식물의 경작지 성과는 정상 및 가뭄 조건 하의 논에서 2번의 재배 시기 동안 평가되었다. RCc3 : OsNAC5 및 GOS2 : OsNAC5 식물체의 3개의 독립적인 T5 (2009) 및 T6 (2010) 동형접합 라인은 형질전환되지 않은 (NT) 대조구와 함께 논에 이식했고, 성숙기까지 키웠다. 수확량 매개변수는 3회의 반복 실험에서 형질전환 라인 당 30개의 식물에 대해 기록되었다. 2년의 경작지 시험으로부터의 데이터 세트는 일반적으로 일정했고, RCc3 : OsNAC5 및 GOS2 : OsNAC5 식물의 총 곡물 중량은 각각 9-15% 및 13-26% 증가했다. 두 형질전환 식물에서 증가된 총 곡물 중량은 NT 대조구의 충전율과 유사한 충전율을 갖는 증가된 원추화서 당 작은 이삭의 수 및 총 작은 이삭의 수와 관련되어 있다 (도 7A; 표 13).
가뭄 조건 하에서 형질전환 식물체를 시험하기 위해, RCc3 : OsNAC5 및 GOS2:OsNAC5 식물의 3개의 독립적인 T5 (2009) 및 T6 (2010) 라인은 이동할 수 있는 비가림 시설이 설치된 순화된 경작지 (refined field)에 이식하였다. 식물은 원추화서 이삭이 나오는 단계까지 가뭄 스트레스에 노출되었다 (이삭이 나오기 10일 전부터 이삭이 나온 10일 후까지). 잎 말림이 완료될 때까지 스트레스 처리한 후에, 식물은 밤새 급수되었고, 직후에 잎 말림이 완료될 때까지 2번째 가뭄 처리를 다시 수행하였다. 가뭄 처리가 완료되면, 식물이 종자 성숙 단계에서 회복할 수 있게 하기 위해 급수했다. 비가림 시설 하에서 적용된 가뭄 스트레스의 수준은 정상 생장 조건 하에서 얻은 총 곡물 중량의 40%를 제공하는 것과 동등했으며, 이는 정상 및 가뭄 조건 사이의 NT 식물의 총 곡물 중량 수준의 차이에 의해 입증된다 (표 13 및 14). 2번의 경작 시기 동안 기록된 수확량 매개변수의 통계 분석은 가뭄 조건 하에서 곡물 수확량의 감소가 GOS2 : OsNAC5 또는 NT 대조구에서 관찰된 것보다 RCc3:OsNAC5 식물에서 현저하게 적다는 것을 보여준다. 특히, 가뭄 처리된 RCc3:OsNAC5 식물에서, 작은 이삭의 수 및/또는 충전율이 가뭄 처리된 NT 식물보다 더 높았고, 이는 형질전환 라인에 따라 33-63% (2009) 및 22-48% (2010)의 총 곡물 중량을 증가시켰다 (도 7B; 표 13). 가뭄 처리된 GOS2 : OsNAC5 식물에서는, 대조적으로, 총 곡물 중량이 가뭄 처리된 NT 대조구보다 감소했거나 (2009), NT 대조구와 유사하게 (2010) 유지되었다. RCc3 : OsNAC5 및 GOS2 : OsNAC5 식물에서 영양 생장 단계 동안 유사한 가뭄 내성의 수준이 주어지면, 경작지 가뭄 조건 하에서 총 곡물 중량의 차이는 예상되지 않았다. 이러한 관찰은 본 발명자가 형질전환 식물의 뿌리 형태를 조사하는 것을 촉구했다. 본 발명자는 이삭이 나오는 재생산 단계까지 자란 RCc3:OsNAC5, GOS2 : OsNAC5 및 NT 식물의 뿌리 부피, 길이, 건조 중량 및 직경을 측정했다. 도 4A 및 B에 나타난 것처럼, RCc3 : OsNAC5 및 GOS2 : OsNAC5 식물의 뿌리 직경은 NT 대조구 식물의 직경보다 각각 30% 및 10% 더 컸다. 가로로 절단된 뿌리의 현미경 분석은 뿌리 직경의 증가가 RCc3 : OsNAC5 뿌리의 확대된 중심주 및 통기 조직 때문이라는 것을 나타냈다. 특히, 중심주의 주요 부위인 후생 목부 (metaxylem; Me) 및 수피 세포 사멸에 의해 생긴 조직인 통기 조직 (Ae)는 NT 뿌리에 비해 RCc3 : OsNAC5 및 GOS2 : OsNAC5 뿌리에서 더 컸다 (도 8C). 후생 목부 및 통기 조직의 크기는 이전에 생식생장 단계의 가뭄 내성과 관련되어 있었다 (Yambao et al., 1992; Zhu et al., 2010). RCc3 : OsNAC5 및 GOS2:OsNAC5 뿌리의 부피 및 건조 중량도 증가했는데, 이는 직경과 함께 이러한 매개 변수가 정상 및/또는 가뭄 조건 하에서 형질전환 식물의 곡물 수확량의 증가에 기여한다는 것을 제안한다.
실시예
6:
OsNAC5
과발현에 따라 상향 조절된 유전자의 동정
OsNAC5의 과발현에 의해 상향 조절되는 유전자를 동정하기 위해, 본 발명자는 정상 생장 조건 하에서 NT 대조구와 비교하여 RCc3 : OsNAC5 및 GOS2 : OsNAC5 식물의 발현 프로파일링 (profiling)을 수행했다. 상기 프로파일링은 정상 조건 하에서 자란 14일 된 식물의 뿌리에서 추출한 RNA 샘플을 사용한 벼 3'-타일링 마이크로어레이를 이용하여 수행되었다. 각 데이터 세트는 2회의 생물학적 반복 실험으로부터 얻었다. 단방향 ANOVA를 이용한 통계 분석은 OsNAC5 과발현에 따라 NT 대조구에 비해(P>0.05) 두 형질전환된 뿌리에서 3배 이상 상향 조절된 25개의 표적 유전자를 동정했다. 또한 RCc3 : OsNAC5 및 GOS2 : OsNAC5 뿌리에서 각각 특이적으로 상향 조절된 19개 및 18개의 표적 유전자가 동일한 분석에서 동정되었다 (표 15). 앞서 수행된 마이크로어레이 실험 (GEO 등록 번호 GSE31874)은 가뭄, 고염, 추위 및 ABA 하에서 스트레스에 의해 유도된 62개의 표적 유전자 중 22개의 전체 (각각, 공통의, RCc3 : OsNAC5-특이적 및 GOS2 : OsNAC5-특이적인 7개, 8개 및 7개 유전자)를 밝혔다 (표 15). 게다가, 세포 성장 및 발달에 관련된 유전자인 GLP (Yin et al., 2009), PDX (Titiz et al., 2006), MERI5 (Verica and Medford, 1997) 및 O-메틸트랜스퍼라아제 (Held et al., 1993)는 RCc3 : OsNAC5 뿌리에서 특이적으로 상향 조절되었는데, 이는 뿌리 형태의 변형에 있어서 그들의 역할(들)을 제시한다. OsNAC5 형질전환 뿌리에서 공통으로 또는 특이적으로 상향 조절된 상기 표적 유전자는 변형된 뿌리 형태 및 그것에 의해 증가된 가뭄 내성 표현형을 설명할 수 있다.
마이크로어레이 실험은 RCc3 : OsNAC5 및 GOS2 : OsNAC5 두 식물에서 공통으로 상향 조절된 25개의 뿌리 발현 유전자에 더하여, RCc3 : OsNAC5 및 GOS2 : OsNAC5 식물에서 각각 특이적으로 상향 조절된 19개 및 18개의 뿌리 발현 유전자를 동정했다. 스트레스 반응에서 작용하는 많은 유전자는 두 형질전환 뿌리에서 상향 조절되었다. 이들은 시토크롬 P450, ZIM, 옥시다아제, 스트레스 반응 단백질 및 열 충격 단백질을 포함한다. 또한 두 형질전환된 뿌리에서 WRKY, bZIP 및 징크 핑거 (Zinc finger)와 같은 전사인자 및 멀티코퍼 옥시다아제 (multicopper oxidase), 키티나아제 (chitinase) 및 글리코실 하이드롤라아제 (glycosyl hydrolase)와 같은 활성 산소종 제거 시스템이 동정되었다. 이러한 표적 유전자의 증가된 발현은 가뭄 조건에 대한 향상된 내성에 기여할 수 있다. RCc3 : OsNAC5 뿌리에서 특이적으로 상향 조절된 표적 유전자는 세포 성장 및 발달에 작용하는 것이 알려진 GLP, PDX, MERI5 및 O-메틸트랜스퍼라아제였다. IAA에 특이적으로 결합하는 애기장대 GLP4가 세포 성장을 조절하는 것이 제안되었다 (Yin et al., 2009). PDX는 비타민 B6 생합성에 관련되고, 애기장대 pdx1 .3 돌연변이체는 일차근 (primary root) 성장이 강하게 감소했으며, 염분 및 삼투 스트레스에 대한 과민성이 증가했다 (Titiz et al., 2006). 애기장대에서 MERI5의 과발현은 세포 팽창 변화를 갖는 비정상적인 발달을 초래했다 (Verica and Medford, 1997). 코르크질 생합성에 관련된 효소를 코딩하는 유전자인 O-메틸트랜스퍼라아제 또한 RCc3 : OsNAC5 뿌리에서 특이적으로 상향 조절되었다. 애기장대에서, O-메틸트랜스퍼라아제를 코딩하는 유전자인 ZRP4의 전사체는 뿌리에 우선적으로 축적되며, 잎, 줄기 및 다른 신초 기관에서는 낮은 수준으로 내피 (endodermis) 영역 내에 대부분 위치해 있다는 것이 밝혀졌다 (Held et al., 1993). 뿌리 특이적 프로모터에 의한 3가지 O-메틸트랜스퍼라아제 유전자의 상향 조절은 코르크질 생합성에서의 그들의 관여 때문에 GOS2:OsNAC5 및 NT 식물에 비해 RCc3 : OsNAC5 식물의 향상된 가뭄 내성에 기여할 수 있다. 리그닌 및 코르크질은 경계 형성으로 알려진 과정에서 뿌리 주변 층 벽의 리그닌화 및/또는 코르크화를 통해 방사형 산소 손실 (radial oxygen loss)을 방지하는데 중요한 역할을 한다. 종합적으로, RCc3 : OsNAC5 뿌리에서 상기 표적 유전자의 증가된 발현은 재생산 단계에서 가뭄 스트레스에 대한 내성을 향상시키는 뿌리 조직을 확대시켰다.
하기 표 15는 형질전환되지 않은 대조구에 비해 RCc3 : OsNAC5 및/또는 GOS2:OsNAC5 식물에서 상향 조절된 뿌리 발현 유전자를 나타낸다.
a해당 유전자의 전체 길이 cDNA 서열에 대한 서열 식별 번호. b(A) ABA, (C)추위, (D) 가뭄 및 (S) 염분에 대한 스트레스 반응성 유전자는 본 발명의 마이크로어레이 프로파일링 데이터 (등록 번호: GSE31874)를 기반으로 한다. C2회의 독립적인 생물학적 반복 실험 (replicate)의 평균. 굵은 글씨의 숫자는 3배 이상의 상향 조절을 나타낸다 (p<0.05). d P-값은 단방향 ANOVA로 분석했다. 명세서에서 논의된 유전자는 굵은 글씨이다. 상기 마이크로어레이 데이터 세트는 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/ (Gene Expression Omnibus, GEO), 등록번호: GSE31856에서 찾을 수 있다.
유전자명 | 유전자좌 번호a | RCc3:OsNAC5 | GOS2:OsNAC3 | 스트레스 반응 | 서열번호 | ||
평균b | p-값c | 평균b | p-값c | ||||
RCc3 : OsNAC5 및 GOS2 : OsNAC5 식물에서 상향조절된 유전자 |
|||||||
Calcium-transporting ATPase | Os10g0418100 | 10,36 | 0,00 | 6,19 | 0,00 | C | 213 & 214 |
Oxo-phytodienoic acid reductase | Os06g0215900 | 10,82 | 0,00 | 15,54 | 0,00 | 215 & 216 | |
Cinnamoyl-CoA reductase | Os02g0811800 | 8,55 | 0,00 | 9,05 | 0,00 | 217 & 218 | |
Chitinase | Os11g0701500 | 7,12 | 0,00 | 14,20 | 0,00 | 219 & 220 | |
Cytochrome P450 | Os12g0150200 | 6,37 | 0,00 | 4,79 | 0,00 | C, D, S | 221 & 222 |
CBS protein | Os02g0639300 | 6,04 | 0,00 | 3,70 | 0,00 | 223 & 224 | |
Sulfotransferase | Os01g0311600 | 5,24 | 0,00 | 7,60 | 0,00 | 225 & 226 | |
Aminotransferase | Os05g0244700 | 5,18 | 0,00 | 6,05 | 0,00 | A, D, S | 227 & 228 |
Chitinase | Os11g0701000 | 4,97 | 0,00 | 14,04 | 0,00 | 229 & 230 | |
Multicopper oxidase | Os01g0127000 | 4,69 | 0,00 | 4,91 | 0,00 | 231 & 232 | |
Nicotianamine synthase | Os07g0689600 | 4,70 | 0,00 | 5,15 | 0,00 | 233 & 234 | |
Pathogenesis-related transcriptional factor | Os07g0674800 | 4,09 | 0,00 | 12,03 | 0,00 | 235 & 236 | |
Cinnamoyl-CoA reductase | Os02g0808800 | 4,14 | 0,00 | 11,52 | 0,00 | 237 & 238 | |
Cinnamyl alcohol dehydrogenase | Os04g0612700 | 3,90 | 0,00 | 17,61 | 0,00 | 239 & 240 | |
ZIM | Os03g0180900 | 4,06 | 0,00 | 3,07 | 0,00 | A,C,D,S | 241 & 242 |
Glycoside hydrolase | Os05g0247800 | 4,07 | 0,00 | 4,04 | 0,00 | A, S | 243 & 244 |
Glutathione-S-transferase | Os10g0530500 | 3,88 | 0,00 | 4,81 | 0,00 | 245 & 246 | |
Iron-phytosiderophore transporter | Os02g0649900 | 3,86 | 0,00 | 5,40 | 0,00 | 247 & 248 | |
Aminotransferase | Os01g0729600 | 3,21 | 0,00 | 15,45 | 0,00 | 249 & 250 | |
Oxidase | Os06g0548200 | 3,61 | 0,00 | 3,82 | 0,00 | 251 & 252 | |
Disease resistance response protein | Os07g0643800 | 3,07 | 0,00 | 3,45 | 0,00 | 253 & 254 | |
WRKY | Os06g0649000 | 3,39 | 0,00 | 5,62 | 0,00 | D, S | 255 & 256 |
Acyltransferase | Os03g0245700 |
3,06 | 0,00 | 3,76 | 0,00 | 257 & 258 | |
Pyruvate kinase | Os04g0677300 |
3,01 | 0,00 | 3,66 | 0,00 | 259 & 260 | |
Oxidative stress response protein | Os03g0830500 |
3,32 | 0,00 | 4,07 | 0,00 | D, S | 261 & 262 |
RCc3 : OsNAC5 식물에서 상향조절된 유전자 |
|||||||
GLP | Os03g0694000 |
32,65 | 0,00 | 1,05 | 0,00 | A, S | 263 & 264 |
C4-dicarboxylate transporter | Os04g0574700 |
30,10 | 0,00 | 1,11 | 0,00 | 265 & 266 | |
O-methyltransferase | Os10g0118200 |
16,47 | 0,00 | -1,46 | 0,00 | A, S | 267 & 268 |
Fructose-bisphosphate aldolase | Os08g0120600 | 11,27 | 0,00 | 1,01 | 0,00 | D, S | 269 & 270 |
O-methyltransferase | Os09g0344500 | 8,43 | 0,00 | -1,09 | 0,00 | A, S | 271 & 272 |
MtN | Os05g0426000 | 7,86 | 0,00 | 1,62 | 0,00 | 273 & 274 | |
O-methyltransferase | Os10g0118000 | 7,09 | 0,00 | -2,23 | 0,00 | S | 275 & 276 |
Dehydration-responsive protein | Os11g0170900 | 6,10 | 0,00 | 1,24 | 0,00 | D | 277 & 278 |
Lipid transfer protein | Os01g0822900 | 5,06 | 0,00 | 1,61 | 0,00 | 279 & 280 | |
Oxidase | Os03g0693900 | 4,86 | 0,00 | 1,99 | 0,00 | A, S | 281 & 282 |
Glutamine synthetase | Os03g0712800 | 4,16 | 0,00 | 1,25 | 0,00 | 283 & 284 | |
Lipid transfer protein | Os11g0115400 | 3,71 | 0,00 | 1,87 | 0,00 | A | 285 & 286 |
PDX | Os07g0100200 | 3,61 | 0,00 | 1,77 | 0,00 | 287 & 288 | |
Cytochrome P450 | Os01g0804400 | 3,61 | 0,00 | 1,10 | 0,00 | 289 & 290 | |
MERI5 | Os04g0604300 | 3,57 | 0,00 | 1,41 | 0,00 | 291 & 292 | |
Homeobox | Os06g0317200 | 3,33 | 0,00 | -1,97 | 0,00 | 293 & 294 | |
Pectin acetylesterase | Os01g0319000 | 3,24 | 0,00 | -1,50 | 0,00 | 295 & 296 | |
bZIP | Os02g0191600 | 3,20 | 0,00 | -1,73 | 0,00 | 297 & 298 | |
Lipid transfer protein | Os12g0115000 | 3,08 | 0,00 | 1,76 | 0,00 | 299 & 300 | |
GOS2 : OsNAC5 식물에서 상향조절된 유전자 |
|||||||
Glutathione S-transferase | Os09g0367700 | 1,30 | 0,00 | 10,26 | 0,00 | A, D, S | 301 & 302 |
Serine/threonine protein kinase | Os03g0269300 | 1,51 | 0,00 | 8,70 | 0,00 | 303 & 304 | |
WRKY | Os03g0335200 | 1,18 | 0,00 | 7,56 | 0,00 | 305 & 306 | |
Heavy metal transport/detoxification protein | Os04g0464100 | 1,20 | 0,00 | 6,78 | 0,00 | 307 & 308 | |
Stress response protein | Os01g0959100 | -1,09 | 0,00 | 4,76 | 0,00 | C, D, S | 309 & 310 |
Auxin efflux carrier | Os08g0529000 | 1,19 | 0,00 | 4,52 | 0,00 | 311 & 312 | |
Subtilase | Os02g0270200 | 1,93 | 0,00 | 4,41 | 0,00 | 313 & 314 | |
UDP-glucuronosyl/UDP-glucosyltransferase | Os01g0638000 | 1,23 | 0,00 | 4,59 | 0,00 | A, S | 315 & 316 |
Disease resistance protein | Os06g0279900 | -2,53 | 0,00 | 4,84 | 0,00 | 317 & 318 | |
Nitrate reductase | Os02g0770800 | -1,26 | 0,00 | 4,85 | 0,00 | C | 319 & 320 |
Heat shock protein | Os01g0606900 | 1,66 | 0,00 | 4,44 | 0,00 | A, D, S | 321 & 322 |
Phosphoenolpyruvate carboxykinase | Os10g0204400 | 1,28 | 0,00 | 3,29 | 0,00 | 323 & 324 | |
Xyloglucan endotransglycosylase | Os02g0280300 | -2,13 | 0,00 | 3,95 | 0,00 | 325 & 326 | |
Isopenicillin N synthase | Os05g0560900 | 1,98 | 0,00 | 3,25 | 0,00 | 327 & 328 | |
Zinc finger | Os03g0820300 | 1,61 | 0,00 | 3,44 | 0,00 | D, S | 329 & 330 |
Serine/threonine protein kinase | Os09g0418000 | 1,60 | 0,00 | 3,07 | 0,00 | A | 331 & 332 |
ATPase | Os03g0584400 | 1,38 | 0,00 | 3,62 | 0,00 | 333 & 334 | |
Malic enzyme | Os05g0186300 | 1,88 | 0,00 | 3,06 | 0,00 | 335 & 336 |
실시예
7: 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4에 연관된 서열의 동정
서열번호 1 및 서열번호 2에 연관된 서열 (전체 길이 cDNA, ESTs 또는 게놈)이 BLAST (Basic Local Alignment Tool) 같은 데이터베이스 서열 탐색 도구를 사용하여 NCBI (National Center for Biotechnology Information)의 Entrez 뉴클레오티드 데이터베이스 (Altschul 등 (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410; 및 Altschul 등 (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402)에 보유된 것 중에서 동정되었다. 이 프로그램은 핵산 또는 폴리펩티드 서열을 서열 데이터베이스에 비교하고, 매치 (match)의 통계적 유의성을 계산하여 서열 간에 국부적인 유사성이 있는 영역을 발견하는 데 사용된다. 예를 들면, 서열번호 1의 핵산에 의해 코딩된 폴리펩티드는 낮은 복잡성 서열 세트 오프를 무시하기 위해, 디폴트 셋팅 및 필터를 갖는 TBLASTN 알고리즘에 대해 이용되었다. 분석 결과는 pairwise 비교로 보이게 하였으며, 확률 점수 (E-값)에 따라 순위를 매겼으며, 여기서 점수는 특정 정렬이 우연히 발생할 가능성을 반영한다 (E-값이 낮을수록 hit가 보다 유의하다). E-값 외에, 비교는 동일성 백분율에 의해서도 점수가 매겨진다. 동일성 백분율은 특정 길이에 걸쳐 두 가지 비교되는 핵산 (또는 폴리펩티드) 서열 간에 동일한 뉴클레오티드 (또는 아미노산)의 수를 말한다. 특정 경우에, 탐색의 엄격성 (stringency)을 변경하기 위하여 디폴트 매개변수를 조절할 수도 있다. 예를 들면, E-값은 덜 엄격한 일치부위를 나타내기 위해 증가될 수도 있다. 이와 같은 방식으로, 거의 정확하게 일치하는 짧은 부위가 동정될 수 있다.
식물 유래 | 핵산 서열번호 | 단백질 서열번호 |
필로스타치 에둘리스(Phyllostachy edulis) | 서열번호 22 | 서열번호 23 |
솔굼 바이칼라(Sorghum bicolour ) | 서열번호 24 | 서열번호 25 |
제아 메이즈(Zea mays) | 서열번호 26 | 서열번호 27 |
트리티쿰 아에스티붐(Triticum aesticum) | 서열번호 28 | 서열번호 29 |
홀데움 불가레(Hordeum vulgare) | 서열번호 30 | 서열번호 31 |
엘레우신 코라카나(Eleusine coracana) | 서열번호 32 | 서열번호 33 |
비티스 비니페라(Vitis vinifera) | 서열번호 34 | 서열번호 35 |
필로스타치 에둘리스(Phyllostachy edulis) | 서열번호 36 | 서열번호 37 |
홀데움 불가레(Hordeum vulgare) | 서열번호 38 | 서열번호 39 |
솔굼 바이칼라(Sorghum bicolour ) | 서열번호 40 | 서열번호 41 |
제아 메이즈(Zea mays) | 서열번호 42 | 서열번호 43 |
비티스 비니페라(Vitis vinifera) | 서열번호 44 | 서열번호 45 |
포푸러스 트리코카르파(Populus trichocarpa) | 서열번호 46 | 서열번호 47 |
서열은 TIGR (The Institute for Genomic Research; TA로 시작)과 같은 연구 기관에 의해 시험적으로 조립되어 (assembled), 공개된다. 예를 들면, EGO (Eukaryotic Gene Orthologs) 데이터베이스는 키워드 탐색으로 또는 목적 핵산 서열 또는 폴리펩티드 서열로 BLAST 알고리즘을 사용하여 상기와 같은 연관 서열의 동정에 사용될 수 있다. 특별한 핵산 서열 데이터베이스는 통합 게놈 연구소 (Joint Genome Institute)에 의한 것과 같은 특정한 생물체, 예를 들면 특정한 원핵생물에 대해 생성된다. 더욱이, 사유 데이터베이스에 대한 접근은 새로운 핵산 및 폴리펩티드 서열의 동정을 허용한다.
실시예
8:
NCG
폴리펩티드 서열의 정렬
폴리펩티드 서열의 정렬은 표준 세팅 (느린 정렬, 유사 매트릭스: Gonnet, 갭 끊김(opening) 벌점 10, 갭 확장 벌점: 0.2)으로 점진적인 정렬의 ClustalW 2.0 알고리즘 (Thompson et al. (1997) Nucleic Acids Res 25:4876-4882; Chenna et al. (2003). Nucleic Acids Res 31:3497-3500)을 사용하여 수행되었다. 정렬을 최적화하기 위해 약간의 편집이 수작업으로 가해졌다. 도 9 및 10을 참고한다.
실시예
9: 폴리펩티드 서열 사이의 전체적인 동일성 백분율의 계산
본 발명의 방법 수행에 유용한 전체 길이의 폴리펩티드 서열 사이의 전체적인 유사성 및 동일성 백분율은 MatGAT (Matrix Global Alignment Tool) 소프트웨어 (BMC Bioinformatics. 2003 4:29. MatGAT: an application that generates similarity/identity matrices using protein or DNA sequences. Campanella JJ, Bitincka L, Smalley J; Ledion Bitincka에 의해 호스팅되는 소프트웨어)를 이용하여 결정되었다. MatGAT는 데이터의 사전 정렬의 필요없이 DNA 또는 단백질 서열에 대한 유사성/동일성 매트릭스를 생성한다. 상기 프로그램은 Myers 및 Miller 전체적인 정렬 알고리즘을 사용하여 일련의 pair-wise 정렬을 수행하고, 유사성 및 동일성을 계산하여, 결과를 거리 매트릭스로 배열한다.
특정한 도메인의 연속을 토대로 MATGAT 표가 생성되었으며, 이는 NUG 폴리펩티드의 다중 정렬을 기반으로 할 수 있다. 보존된 서열은 MaTGAT 분석을 위해 선발되었다. 이러한 접근은 NUG 단백질 사이의 전체적인 서열 보전이 다소 낮은 곳에서 유용하다.
실시예
10: 본 발명의 방법 수행에 유용한 폴리펩티드 서열에 포함된 도메인의 동정
InterPro (The Integrated Resource of Protein Families, Domains and Sites) 데이터베이스는 문자 및 서열에 근거한 탐색을 위한 통상적으로 사용되는 시그너처(signature) 데이터베이스에 대한 통합된 인터페이스이다. InterPro 데이터베이스는 단백질 시그너처를 유도하기 위해 다른 방법론 및 잘 규명된 단백질에 관한 다양한 정도의 생물학적 정보를 사용하는 이들 데이터베이스를 통합한다. 협력 데이터베이스는 SWISS-PROT, PROSITE, TrEMBL, PRINTS, ProDom 및 Pfam, Smart 및 TIGRFAMs을 포함한다. Pfam은 많은 일반적인 단백질 도메인 및 패밀리를 포함하는 복수 서열 정렬 및 숨겨진 마코브 (hidden Markov) 모델의 큰 집합체이다. Pfam은 영국의 생거 연구소 서버에서 호스팅된다. InterPro는 영국의 유럽 생물정보학 연구소 (European Bioinformatics Institute)에서 호스팅된다.
실시예
11:
NCG
폴리펩티드 서열의
토폴로지
(
Topology
) 예측
TargetP 1.1은 진핵세포 단백질의 세포 내 위치를 예측한다. 위치 지정은 임의의 N-말단 사전 서열 (엽록체 운반 펩티드 (cTP), 미토콘드리아 표적 펩티드 (mTP) 또는 분비 경로 신호 펩티드 (SP))의 예측된 존재에 근거한다. 최종 예측이 근거를 둔 점수는 실제로 가능성은 아니며, 하나에 반드시 추가하지는 않는다. 그러나, 가장 높은 점수를 갖는 위치는 아마 TargetP에 따른 것이며, 점수 간에 상관 관계 (신뢰성 등급)는 아마 그 예측이 얼마나 확실한가의 표시이다. 신뢰성 등급 (RC)은 1에서 5까지이며, 1은 가장 강한 예측을 나타낸다. N-말단 사전 서열을 포함하는 것으로 예측되는 서열에 대해 잠재적인 절단 부위도 예측 가능하다. TargetP는 [Technical University of Denmark]의 서버에서 유지된다.
생물체 집단 (비식물 또는 식물), 컷오프 세트 (없거나, 컷오프의 미리 정의된 세트 또는 컷오프의 사용자 지정 세트) 및 절단 부위 예측의 계산 (유 또는 무)과 같은 많은 매개변수가 서열 분석 전에 선택된다.
하기의 것을 포함하여 많은 다른 알고리즘도 이런 분석 수행에 사용될 수 있다:
● [Technical University of Denmark]의 서버상에 호스팅된 ChloroP 1.1;
● [Institute for Molecular Bioscience, University of Queensland, Brisbane, Australia]의 서버상에 호스팅된 Protein Prowler Subcellular Localisation Predictor version 1.2;
● [University of Alberta, Edmonton, Alberta, Canada]의 서버상에 호스팅된 PENCE Proteome Analyst PA-GOSUB 2.5;
● [Technical University of Denmark]의 서버상에 호스팅된 TMHMM
● PSORT (URL: psort.org)
● PLOC (Park and Kanehisa, Bioinformatics, 19, 1656-1663, 2003).
실시예
12: 다른 작물의 형질전환
옥수수 형질전환
옥수수 (Zea mays) 형질전환은 [Ishida 등 (1996) Nature Biotech 14(6): 745-50]에 기재된 방법을 변형하여 수행하였다. 옥수수에 있어서 형질전환은 유전형에 의존하며, 특정 유전형만이 형질전환 및 재분화를 받아들인다. 근교계통 A188 (University of Minnesota) 또는 양친으로서 A188과의 교배는 형질전환을 위한 공여자의 좋은 원천이나 다른 유전형도 성공적으로 사용될 수 있다. 옥수수 알을 미성숙된 배의 길이가 약 1 내지 1.2 mm일 때인 수분 후 약 11일 (DAP) 된 옥수수 식물체로부터 수확한다. 미성숙한 배는 발현 벡터를 함유하는 아그로박테리움 투머파시엔스와 공배양 되었으며, 형질전환 식물체는 기관발생 (organogenesis)을 통해 회수된다. 절단된 배는 캘러스 유도 배지에서, 다음에는 선발제 (예를 들면 이미다졸리논, 그러나 다양한 선발 마커 사용 가능)를 함유하는 옥수수 재분화 배지에서 키운다. 페트리 플레이트는 25℃의 명소 (light)에서 2 내지 3주간, 또는 어린 줄기가 발달하기까지 배양한다. 각 배에서 녹색 어린 줄기를 옥수수 발근 배지로 옮겨 25℃에서 2 내지 3주간 뿌리가 발달하기까지 배양한다. 발근된 어린 줄기를 온실의 토양으로 이식한다. T1 종자는 선발제에 내성을 보이며 하나의 카피의 T-DNA 삽입물을 가진 식물에서 생산된다.
밀 형질전환
밀의 형질전환은 [Ishida 등 (1996) Nature Biotech 14(6): 745-50]에 기재된 방법으로 수행하였다. 재배품종 봅화이트 (Bobwhite; Mexico CIMMYT로부터 입수 가능)가 형질전환에 흔히 사용된다. 미성숙한 배는 발현 벡터를 함유하는 아그로박테리움 투머파시엔스와 공배양 되었으며, 형질전환 식물체는 기관발생을 통해 회수된다. 아그로박테리움과의 배양 후, 배는 캘러스 유도 배지에서, 다음에는 선발제 (예를 들면 이미다졸리논, 그러나 다양한 선발 마커 사용 가능)를 함유하는 재분화 배지에서 시험관 내에서 키운다. 페트리 플레이트를 25℃의 명소에서 2 내지 3주간, 또는 어린 줄기가 발달하기까지 배양한다. 각 배에서 녹색 어린 줄기를 발근 배지로 옮겨 25℃에서 2 내지 3주간 뿌리가 발달하기까지 배양한다. 발근된 어린 줄기는 온실의 토양으로 이식한다. T1 종자는 선발제에 내성을 보이며 하나의 카피의 T-DNA 삽입물을 가진 식물에서 생산된다.
대두 형질전환
대두는 Texas A&M 특허 US 5,164,310에 기재된 방법을 변형하여 형질전환되었다. 몇 가지 상업적 대두 변종은 이 방법에 의한 형질전환을 수용한다. 재배품종 잭 (Jack; Illinois Seed foundation으로부터 입수 가능)이 흔히 형질전환에 사용된다. 대두 종자는 시험관 내 파종을 위해 멸균된다. 하배축, 유근 및 자엽 하나를 7일 된 어린 실생으로부터 잘라낸다. 상배축 및 나머지 자엽은 엽액 마디가 발달할 때까지 키운다. 이 엽액 마디를 잘라내어 발현 벡터를 함유하는 아그로박테리움 투머파시엔스와 배양한다. 공배양 처리 후, 잘라낸 식물체 조각을 세척하여 선발 배지로 옮긴다. 재분화된 어린 줄기를 잘라내어 어린 줄기 신장 배지에 둔다. 1 cm가 되지 않는 어린 줄기를 뿌리가 발달하기까지 발근 배지에 둔다. 발근된 어린 줄기를 온실의 토양으로 이식한다. T1 종자는 선발제에 내성을 보이며 하나의 카피의 T-DNA 삽입물을 가진 식물에서 생산된다.
유채/
캐놀라
형질전환
5 내지 6일 된 어린 실생의 자엽 엽병 및 하배축이 조직 배양을 위한 식물 절편으로 사용되었으며, Babic 등 (1998, Plant Cell Rep 17: 183-188)에 따라 형질전환되었다. 상업적 재배종 웨스타 (Westar; Agriculture Canada)가 형질전환을 위한 표준 변종으로 사용되나, 다른 변종도 사용될 수 있다. 캐놀라 종자는 시험관 내 파종을 위해 표면 살균된다. 자엽이 붙어 있는 자엽 엽병 식물 절편을 시험관 내 실생으로부터 절단하여, 엽병 절편의 잘린 끝 부분을 세균 현탁액에 담가 아그로박테리움 (발현 벡터 포함)을 접종하였다. 식물 절편은 3 mg/l BAP, 3% 수크로오스, 0.7% Phytagar를 함유하는 MSBAP-3 배지에서 23℃, 16시간의 광 조건으로 2일간 배양하였다. 아그로박테리움과의 공배양 2일 후, 엽병 식물 절편을 3 mg/l BAP, 세포탁심, 카베니실린, 또는 티멘틴 (300 mg/l)을 함유하는 MSBAP-3 배지에 옮겨 7일간 둔 후, 어린 줄기가 재분화될 때까지 세포탁심, 카베니실린, 또는 티멘틴 및 선발제가 든 MSBAP-3 배지에 배양하였다. 어린 줄기의 길이가 5 내지 10 mm일 때 잘라 어린 줄기 신장 배지 (0.5 mg/l BAP 함유 MSBAP-0.5)로 옮긴다. 길이 약 2 cm의 어린 줄기는 뿌리 유도를 위하여 발근 배지 (MS0)로 옮긴다. 발근된 어린 줄기를 온실의 토양으로 이식한다. T1 종자는 선발제에 내성을 보이며 하나의 카피의 T-DNA 삽입물을 가진 식물에서 생산된다.
알팔파
형질전환
알팔파 (Medicago sativa)의 재분화 클론은 McKersie 등 (1999, Plant Physiol 119: 839-847)의 방법으로 형질전환된다. 알팔파의 재분화 및 형질전환은 유전형 의존적이므로 재분화 식물이 요구된다. 재분화 식물을 얻는 방법이 기술되어있다. 예를 들면, 이들은 재배품종 랭그랜더 (Rangelander; Agriculture Canada) 또는 Brown DCW 및 A Atanassov (1985. Plant Cell Tissue Organ Culture 4: 111-112)에 의해 기재된 임의의 다른 상업적 알팔파 변종으로부터 선택할 수 있다. 대안적으로, RA3 변종 (University of Wisconsin)이 조직 배양에 사용하기 위해 선택되었다 (Walker 등, 1978 Am J Bot 65: 654-659). 엽병 식물 절편은 발현 벡터를 가진 아그로박테리움 투머파시엔스 C58C1 pMP90 (McKersie 등, 1999 Plant Physiol 119: 839-847) 또는 LBA4404와 밤새 공배양된다. 식물 절편은 288 mg/L Pro, 53 mg/L 티오프롤린, 4.35 g/L K2SO4, 및 100 μM 아세토시린곤을 함유하는 SH 유도배지 상에서 암 조건 (dark)으로 3일간 공배양된다. 식물 절편을 절반 강도의 Murashige-Skoog 배지 (Murashige and Skoog, 1962)로 세척하고, 아세토시린곤은 없으나 적절한 선발제 및 아그로박테리움 생장을 저해하는 적절한 항생제를 포함하는 동일한 SH 유도 배지 상에 둔다. 몇 주 후, 체세포 배를 생장조절제 및 항생제는 없고, 50 g/L 수크로오스가 함유된 BOi2Y 발달 배지로 옮긴다. 이어서 체세포 배는 절반 강도의 Murashige-Skoog 배지 상에서 발아시킨다. 발근된 실생은 온실의 토양으로 이식하여 키운다. T1 종자는 선발제에 내성을 보이며 하나의 카피의 T-DNA 삽입물을 가진 식물에서 생산된다.
목화 형질전환
목화는 US 5,159,135에 기재된 방법에 따라 아그로박테리움 투머파시엔스 (Agrobacterium tumefaciens)를 사용하여 형질전환된다. 목화 종자는 3% 차아염소산나트륨 (sodium hypochlorite) 용액에서 20분간 표면 살균하고, 500 ㎍/ml 세포탁심 (cefotaxime)이 함유된 증류수로 세척한다. 상기 종자는 발아를 위해 50 ㎍/ml 베노밀 (benomyl)이 함유된 SH 배지로 옮겼다. 4 내지 6일 된 실생의 상배축을 제거하고, 0.5 cm 조각으로 잘라 0.8% 아가에 두었다. 아그로박테리움 현탁액 (목적 유전자 및 적절한 선발 마커로 형질전환되어 밤새 배양된 것으로부터 약 108 세포/ml로 희석된)이 상배축 절편체의 접종에 사용되었다. 상온 및 명소에서 3일 후, 조직을 비타민 B5가 든 Murashige 및 Skoog 염 (Gamborg 등, Exp. Cell Res. 50:151-158 (1968)), 0.1 mg/l 2,4-D, 0.1 mg/l 키네틴 (6-furfurylaminopurine) 및 750 ㎍/ml MgCl2, 그리고 잔존 세균을 죽이기 위해 50 내지 100 ㎍/ml 세포탁심 및 400-500 ㎍/ml 카르베니실린이 포함된 고체 배지 (1.6 g/l Gelrite) 로 옮겼다. 개별적인 세포 라인은 2 내지 3달 후에 (4 내지 6주마다 계대배양) 분리되어 조직 증식을 위해 선발 배지에 배양되었다 (30℃, 16시간 광주기). 형질전환된 조직은 체세포배를 얻기 위해 2 내지 3달간 비선발배지에서 연이어 배양되었다. 적어도 4 mm 길이의 건강해 보이는 배는 미세한 질석에 0.1 mg/l 인돌초산, 키네틴 및 지베렐린산이 첨가된 SH 배지가 들어있는 튜브로 옮겼다. 배는 30℃에서 16시간의 광주기로 배양하였고, 2 내지 3 장의 잎이 달린 단계에서 식물체를 질석 및 양분이 든 화분으로 옮겼다. 식물체가 튼튼해진 이후에 재배를 위해 온실로 옮겼다.
사탕무 형질전환
사탕무 (Beta vulgaris L.)의 종자는 70% 에탄올에서 1분, 이어서 20% 차아염소산염 표백제, 예를 들어 Clorox® regular bleach (Clorox로부터 상업적으로 입수 가능, 1221 Broadway, Oakland, CA 94612, USA)에서 20분 동안 교반하여 멸균한다. 종자는 멸균수로 헹구고, 공기 건조한 후 발아 배지 (10 g/l 수크로오스 및 0.8% 아가가 보충된 B5 비타민 (Gamborg et al.; Exp. Cell Res., vol. 50, 151-8.)을 포함하는 MS (Murashige and Skoog) 기초 배지 (Murashige, T., and Skoog, F., 1962. Physiol. Plant, vol. 15, 473- 497)) 상에 둔다. 하배축 조직은 Hussey 및 Hepher (Hussey, G., and Hepher, A., 1978. Annals of Botany, 42, 477-9)에 따른 어린 줄기 배양의 개시에 필수적으로 사용되고, 30 g/l 수크로오스에 더하여 0.25 mg/l 벤질아미노퓨린 및 0.75% 아가가 첨가된 pH 5.8의 MS 기초 배지 상에서 16시간 광주기로 23-25℃에서 유지된다. 선발 마커 유전자, 예를 들면 nptII를 포함하는 바이너리 플라스미드를 가진 아그로박테리움 튜머파시엔스 균주가 형질전환 실험에 사용된다. 형질전환 하루 전에, 항생제를 포함하는 액체 LB 배양액은 600 nm에서 광학 밀도 (O.D.) 1에 도달할 때까지 교반기 (28℃, 150 rpm)에서 키운다. 밤새 키운 박테리아 배양액은 원심분리하여, 아세토시린곤을 포함하는 pH 5.5의 접종 배지에 다시 현탁한다 (O.D. ~1). 어린 줄기 기초 조직은 얇은 조각으로 자른다 (약 1.0 cm×1.0 cm×2.0 mm). 조직은 액체 박테리아 접종 배지에 30초 동안 침지한다. 잔여 액체는 여과지 블럿팅으로 제거한다. 공배양은 30 g/l 수크로오스를 포함하는 MS 기초 배지 상에서 24-72시간에 이어서 어린 줄기 발생을 유도하기 위한 MS 기초 배지, 30 g/l 수크로오스와 1 mg/l BAP 및 아그로박테리움을 제거하기 위한 세포탁심을 포함하는 비선택 기간 동안 일어났다. 3-10일 후에 식물체 조각을 예를 들면 카나마이신 또는 G418 (유전자형에 따라 50-100 mg/l)를 포함하는 유사한 선발 배지에 옮긴다. 조직은 선택압 (selection pressure)을 유지하기 위해 2-3주마다 신선한 배지로 옮겨준다. 어린 줄기의 매우 빠른 개시 (3-4일 후)는 새롭게 발달된 형질전환 분열조직의 기관발생보다 현존하는 분열조직의 재생을 나타낸다. 작은 어린 줄기는 여러 차례의 계대배양 후에 5 mg/l NAA 및 카나마이신 또는 G418을 포함하는 뿌리 유도 배지로 옮긴다. 추가적인 단계는 키메라 (chimeric; 부분적으로 형질전환된)인 생성된 형질전환 식물체의 잠재성을 감소시키기 위해 수행한다. 재분화된 어린 줄기로부터의 조직 샘플은 DNA 분석에 사용된다. 사탕무에 대한 다른 형질전환 방법, 예를 들면 Linsey & Gallois (Linsey, K., and Gallois, P., 1990. Journal of Experimental Botany; vol. 41, No. 226; 529-36)에 의한 방법 또는 W09623891A로 출원된 국제 출원에 게재된 방법이 당업계에 알려져 있다.
사탕수수 형질전환
줄기 (spindle)는 6개월 된 경작지에서 키운 사탕수수 식물로부터 분리된다 (Arencibia et al., 1998. Transgenic Research, vol. 7, 213-22; Enriquez-Obregon et al., 1998. Planta, vol. 206, 20-27). 재료는 20% 차아염소산염 표백제, 예를 들어 Clorox® regular bleach (Clorox로부터 상업적으로 입수 가능, 1221 Broadway, Oakland, CA 94612, USA)에서 20분 동안 침지하여 멸균했다. 0.5 cm 정도의 횡단면은 위쪽 (top-up) 방향으로 배지에 치상했다. 식물 재료는 20 g/l 수크로오스, 500 mg/l 카제인 가수분해물, 0.8% 아가 및 5 mg/l 2,4-D가 보충된 B5 비타민을 포함하는 MS 기초 배지 상에서 암 조건으로 23℃에서 4주 동안 배양된다. 배양체는 4주 후에 동일한 신선한 배지로 옮긴다. 선발 마커 유전자, 예를 들면 hpt를 포함하는 바이너리 플라스미드를 가진 아그로박테리움 튜머파시엔스 균주가 형질전환 실험에 사용된다. 형질전환 하루 전에, 항생제를 포함하는 액체 LB 배양액은 600 nm에서 광학 밀도 (O.D.) 0.6에 도달할 때까지 교반기 (28℃, 150 rpm)에서 키운다. 밤새 키운 박테리아 배양액은 원심분리하여, 아세토시린곤을 포함하는 pH 5.5의 MS 기초 접종 배지에 다시 현탁한다 (O.D. ~0.4). 사탕수수 배발생 캘러스 조각 (2-4 mm)은 조밀한 구조 및 노란 색깔과 같은 형태학적 특성을 바탕으로 선발하고, 플로우 후드 (flow hood)에서 20분 동안 건조한 후 액체 박테리아 접종 배지에 10-20분 동안 침지한다. 잔여 액체는 여과지 블럿팅으로 제거한다. 공배양은 1 mg/l 2,4-D를 함유하는 B5 비타민을 포함하는 MS 기본 배지의 상단에 놓은 여과지 상에서 암 조건으로 3-5일 동안 일어났다. 공배양 후에, 캘러스는 멸균수로 세척하고 남아있는 아그로박테리움 세포를 제거하기 위한 500 mg/l 세포탁심을 포함하는 유사한 배지 상에서 비선택적 배양기간을 갖는다. 3-10일 후에, 식물 절편을 3주 동안 25 mg/l의 하이그로마이신 (유전자형에 따라서)을 포함하며, 1 mg/l 2,4-D를 함유하는 B5 비타민을 포함하는 MS 기본 선발 배지로 옮긴다. 모든 처리는 23℃, 암 조건 하에서 이루어진다. 저항성 캘러스는 어린 줄기 구조의 발생을 유도하기 위해 16시간 광주기로 2,4-D가 결여되고 1 mg/l BA 및 25 mg/l 하이그로마이신을 포함하는 배지 상에서 더 배양한다. 어린 줄기를 분리하고 선택적 발근 배지 (20 g/l 수크로오스, 20 mg/l 하이그로마이신 및 500 mg/l 세포탁심을 포함하는 MS 기본 배지) 상에서 키운다. 재분화된 어린 줄기로부터의 조직 샘플은 DNA 분석을 위해 사용된다. 사탕수수에 대한 다른 형질전환 방법, 예를 들면 WO2010/151634A로 출원된 국제 출원 및 유럽 등록 특허 EP1831378의 방법이 당업계에 알려져 있다.
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ctttcagttg 1870
<210> 4
<211> 329
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 4
Met Glu Cys Gly Gly Ala Leu Gln Leu Pro Pro Gly Phe Arg Phe His
1 5 10 15
Pro Thr Asp Asp Glu Leu Val Met Tyr Tyr Leu Cys Arg Lys Cys Gly
20 25 30
Gly Leu Pro Leu Ala Ala Pro Val Ile Ala Glu Val Asp Leu Tyr Lys
35 40 45
Phe Asn Pro Trp Asp Leu Pro Glu Arg Ala Met Gly Gly Glu Lys Glu
50 55 60
Trp Tyr Phe Phe Ser Pro Arg Asp Arg Lys Tyr Pro Asn Gly Gln Arg
65 70 75 80
Pro Asn Arg Ala Ala Gly Thr Gly Tyr Trp Lys Ala Thr Gly Ala Asp
85 90 95
Lys Pro Val Gly Ser Pro Arg Ala Val Ala Ile Lys Lys Ala Leu Val
100 105 110
Phe Tyr Ala Gly Lys Pro Pro Lys Gly Val Lys Thr Asn Trp Ile Met
115 120 125
His Glu Tyr Arg Leu Ala Asp Val Asp Arg Ser Ala Ala Ala Arg Lys
130 135 140
Leu Ser Lys Ser Ser His Asn Ala Leu Arg Leu Asp Asp Trp Val Leu
145 150 155 160
Cys Arg Ile Tyr Asn Lys Lys Gly Val Ile Glu Arg Tyr Asp Thr Val
165 170 175
Asp Ala Gly Glu Asp Val Lys Pro Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys
180 185 190
Gly Gly Arg Ile Gly Gly Gly Gly Gly Ala Ala Ala Met Lys Val Glu
195 200 205
Leu Ser Asp Tyr Gly Phe Tyr Asp Gln Glu Pro Glu Ser Glu Met Leu
210 215 220
Cys Phe Asp Arg Ser Gly Ser Ala Asp Arg Asp Ser Met Pro Arg Leu
225 230 235 240
His Thr Asp Ser Ser Gly Ser Glu His Val Leu Ser Pro Ser Pro Ser
245 250 255
Pro Asp Asp Phe Pro Gly Gly Gly Asp His Asp Tyr Ala Glu Ser Gln
260 265 270
Pro Ser Gly Gly Cys Gly Gly Trp Pro Gly Val Asp Trp Ala Ala Val
275 280 285
Gly Asp Asp Gly Phe Val Ile Asp Ser Ser Leu Phe Glu Leu Pro Ser
290 295 300
Pro Ala Ala Phe Ser Arg Ala Ala Gly Asp Gly Ala Ala Phe Gly Asp
305 310 315 320
Met Phe Thr Tyr Leu Gln Lys Pro Phe
325
<210> 5
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Motif 1
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)..(1)
<223> Xaa can be Lys, Pro, Arg or Gly
<220>
<221> VARIANT
<222> (2)..(2)
<223> Xaa can be Ile, Ser or Met
<220>
<221> VARIANT
<222> (3)..(3)
<223> Xaa can be Asp or Ala
<220>
<221> VARIANT
<222> (4)..(4)
<223> Xaa can be Leu, Ile or Val
<220>
<221> VARIANT
<222> (6)..(6)
<223> Xaa can be Ile, Val or Phe
<220>
<221> VARIANT
<222> (8)..(8)
<223> Xaa can be Gln, Val, Arg or Lys
<220>
<221> VARIANT
<222> (9)..(9)
<223> Xaa can be Glu or Asp
<220>
<221> VARIANT
<222> (10)..(10)
<223> Xaa can be Leu, Ile or Val
<400> 5
Xaa Xaa Xaa Xaa Asp Xaa Ile Xaa Xaa Xaa Asp
1 5 10
<210> 6
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Motif 2
<220>
<221> VARIANT
<222> (2)..(2)
<223> Xaa can be Lys or Arg
<220>
<221> VARIANT
<222> (3)..(3)
<223> Xaa can be Tyr, Leu or Ile
<220>
<221> UNSURE
<222> (5)..(7)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> VARIANT
<222> (8)..(8)
<223> /replace = "Tyr" /replace = "Asn"
<220>
<221> VARIANT
<222> (9)..(9)
<223> Xaa can be Asp or Glu
<220>
<221> VARIANT
<222> (11)..(11)
<223> Xaa can be Gly or Arg
<220>
<221> VARIANT
<222> (12)..(12)
<223> Xaa can be Thr, Asn or Ser
<400> 6
Cys Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Glu Xaa Xaa Glu Trp
1 5 10
<210> 7
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Motif 3
<220>
<221> VARIANT
<222> (7)..(7)
<223> Xaa can be Ala or Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> UNSURE
<222> (9)..(9)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid, preferably Gln,
Arg or Lys
<220>
<221> UNSURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid, preferably Pro,
Arg or Lys
<400> 7
Gly Trp Val Val Cys Arg Ala Xaa Xaa Lys Xaa
1 5 10
<210> 8
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> motif 4
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)..(1)
<223> Xaa can be Ala, Pro, Ser or Asn
<220>
<221> VARIANT
<222> (2)..(2)
<223> Xaa can be Val, Leu, Ile or Ala
<220>
<221> VARIANT
<222> (3)..(3)
<223> Xaa can be Pro, Ser, Asp, Val or Gln
<220>
<221> VARIANT
<222> (4)..(4)
<223> Xaa can be Val or Ile
<220>
<221> VARIANT
<222> (6)..(6)
<223> Xaa can be a Ala, Thr or Ala
<400> 8
Xaa Xaa Xaa Xaa Ile Xaa
1 5
<210> 9
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> motif 5
<220>
<221> VARIANT
<222> (2)..(2)
<223> Xaa can be Gly or Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> (3)..(3)
<223> Xaa can be Ser, Gln, Ala or Val
<220>
<221> VARIANT
<222> (6)..(6)
<223> Xaa can be Asn or Ser
<400> 9
Asn Xaa Xaa Arg Pro Xaa
1 5
<210> 10
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> motif 6
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)..(1)
<223> Xaa can be Cys or Tyr
<220>
<221> VARIANT
<222> (2)..(2)
<223> Xaa can be Arg or Lys
<220>
<221> VARIANT
<222> (3)..(3)
<223> Xaa can be Leu or Ile
<220>
<221> VARIANT
<222> (4)..(4)
<223> Xaa can be Tyr, His or Phe
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)..(5)
<223> Xaa can be Asn or Lys
<220>
<221> VARIANT
<222> (7)..(7)
<223> Xaa can be Lys, Asn, Cys, Ser or Thr
<400> 10
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Lys Xaa
1 5
<210> 11
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> motif 7
<220>
<221> VARIANT
<222> (2)..(2)
<223> Xaa can be Glu, Gln or Thr
/replace="Gln" /replace="Thr"
<220>
<221> VARIANT
<222> (6)..(6)
<223> Xaa can be Val or Met
<220>
<221> VARIANT
<222> (7)..(7)
<223> Xaa can be Gln, Arg or Lys
<400> 11
Asn Xaa Trp Glu Lys Xaa Xaa
1 5
<210> 12
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> motif 8
<220>
<221> VARIANT
<222> (4)..(4)
<223> Xaa can be Thr or Ala
<220>
<221> VARIANT
<222> (10)..(10)
<223> Xaa can be Glu or Asp
<400> 12
Trp Gly Glu Xaa Arg Thr Pro Glu Ser Xaa
1 5 10
<210> 13
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> motif 9
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)..(1)
<223> Xaa can be Val or Leu
<220>
<221> VARIANT
<222> (4)..(4)
<223> Xaa can be Lys or Glu
<220>
<221> VARIANT
<222> (6)..(6)
<223> Xaa can be Ser, Arg, Ala or Val
<220>
<221> VARIANT
<222> (7)..(7)
<223> Xaa can be Meet, Val, Ala, Gln or Arg
<220>
<221> VARIANT
<222> (8)..(8)
<223> Xaa can be Asp or Glu
<220>
<221> VARIANT
<222> (9)..(9)
<223> Xaa can Asp, Glu or Leu
<220>
<221> VARIANT
<222> (10)..(10)
<223> Xaa can be Ala, Gly or Asp
<400> 13
Xaa Pro Lys Xaa Glu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5 10
<210> 14
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> motif 10
<220>
<221> VARIANT
<222> (2)..(2)
<223> Xaa can be Leu or Tyr
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)..(5)
<223> Xaa can be Leu or Ile
<220>
<221> VARIANT
<222> (7)..(7)
<223> Xaa can be Gly or Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> (8)..(8)
<223> Xaa can be Leu, Met or Pro
<220>
<221> VARIANT
<222> (9)..(9)
<223> Xaa can be Cys or Tyr
<220>
<221> VARIANT
<222> (10)..(10)
<223> Xaa can be Ser or Asn
<400> 14
Ser Xaa Asp Asp Xaa Gln Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5 10
<210> 15
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Motif 11
<220>
<221> VARIANT
<222> (3)..(3)
<223> Xaa can be Met, Val or Ile
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)..(5)
<223> Xaa can be Arg or Lys
<220>
<221> VARIANT
<222> (6)..(6)
<223> Xaa can be Leu, Ile or Ala
<220>
<221> VARIANT
<222> (8)..(8)
<223> Xaa can be Thr, Ala or Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> (9)..(9)
<223> Xaa can be Asp or Glu
<220>
<221> VARIANT
<222> (12)..(12)
<223> Xaa can be Cys or Gly
<400> 15
Asp Ser Xaa Pro Xaa Xaa His Xaa Xaa Ser Ser Xaa Ser Glu
1 5 10
<210> 16
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> forward primer (OsNAC1)
<400> 16
atggggatgg ggatgaggag 20
<210> 17
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> reverse primer (OsNAC1)
<400> 17
tcagaacggg accatgccca 20
<210> 18
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> forward primer (OsNAC5)
<400> 18
atggagtgcg gtggtgcgct 20
<210> 19
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> reverse primer (OsNAC5)
<400> 19
ttagaacggc ttctgcaggt 20
<210> 20
<211> 2194
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 20
aatccgaaaa gtttctgcac cgttttcacc ccctaactaa caatataggg aacgtgtgct 60
aaatataaaa tgagacctta tatatgtagc gctgataact agaactatgc aagaaaaact 120
catccaccta ctttagtggc aatcgggcta aataaaaaag agtcgctaca ctagtttcgt 180
tttccttagt aattaagtgg gaaaatgaaa tcattattgc ttagaatata cgttcacatc 240
tctgtcatga agttaaatta ttcgaggtag ccataattgt catcaaactc ttcttgaata 300
aaaaaatctt tctagctgaa ctcaatgggt aaagagagag atttttttta aaaaaataga 360
atgaagatat tctgaacgta ttggcaaaga tttaaacata taattatata attttatagt 420
ttgtgcattc gtcatatcgc acatcattaa ggacatgtct tactccatcc caatttttat 480
ttagtaatta aagacaattg acttattttt attatttatc ttttttcgat tagatgcaag 540
gtacttacgc acacactttg tgctcatgtg catgtgtgag tgcacctcct caatacacgt 600
tcaactagca acacatctct aatatcactc gcctatttaa tacatttagg tagcaatatc 660
tgaattcaag cactccacca tcaccagacc acttttaata atatctaaaa tacaaaaaat 720
aattttacag aatagcatga aaagtatgaa acgaactatt taggtttttc acatacaaaa 780
aaaaaaagaa ttttgctcgt gcgcgagcgc caatctccca tattgggcac acaggcaaca 840
acagagtggc tgcccacaga acaacccaca aaaaacgatg atctaacgga ggacagcaag 900
tccgcaacaa ccttttaaca gcaggctttg cggccaggag agaggaggag aggcaaagaa 960
aaccaagcat cctccttctc ccatctataa attcctcccc ccttttcccc tctctatata 1020
ggaggcatcc aagccaagaa gagggagagc accaaggaca cgcgactagc agaagccgag 1080
cgaccgcctt ctcgatccat atcttccggt cgagttcttg gtcgatctct tccctcctcc 1140
acctcctcct cacagggtat gtgcctccct tcggttgttc ttggatttat tgttctaggt 1200
tgtgtagtac gggcgttgat gttaggaaag gggatctgta tctgtgatga ttcctgttct 1260
tggatttggg atagaggggt tcttgatgtt gcatgttatc ggttcggttt gattagtagt 1320
atggttttca atcgtctgga gagctctatg gaaatgaaat ggtttaggga tcggaatctt 1380
gcgattttgt gagtaccttt tgtttgaggt aaaatcagag caccggtgat tttgcttggt 1440
gtaataaagt acggttgttt ggtcctcgat tctggtagtg atgcttctcg atttgacgaa 1500
gctatccttt gtttattccc tattgaacaa aaataatcca actttgaaga cggtcccgtt 1560
gatgagattg aatgattgat tcttaagcct gtccaaaatt tcgcagctgg cttgtttaga 1620
tacagtagtc cccatcacga aattcatgga aacagttata atcctcagga acaggggatt 1680
ccctgttctt ccgatttgct ttagtcccag aatttttttt cccaaatatc ttaaaaagtc 1740
actttctggt tcagttcaat gaattgattg ctacaaataa tgcttttata gcgttatcct 1800
agctgtagtt cagttaatag gtaatacccc tatagtttag tcaggagaag aacttatccg 1860
atttctgatc tccattttta attatatgaa atgaactgta gcataagcag tattcatttg 1920
gattattttt tttattagct ctcacccctt cattattctg agctgaaagt ctggcatgaa 1980
ctgtcctcaa ttttgttttc aaattcacat cgattatcta tgcattatcc tcttgtatct 2040
acctgtagaa gtttcttttt ggttattcct tgactgcttg attacagaaa gaaatttatg 2100
aagctgtaat cgggatagtt atactgcttg ttcttatgat tcatttcctt tgtgcagttc 2160
ttggtgtagc ttgccacttt caccagcaaa gttc 2194
<210> 21
<211> 1264
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 21
tcgacgctac tcaagtggtg ggaggccacc gcatgttcca acgaagcgcc aaagaaagcc 60
ttgcagactc taatgctatt agtcgcctag gatatttgga atgaaaggaa ccgcagagtt 120
tttcagcacc aagagcttcc ggtggctagt ctgatagcca aaattaagga ggatgccaaa 180
acatgggtct tggcgggcgc gaaacacctt gataggtggc ttacctttta acatgttcgg 240
gccaaaggcc ttgagacggt aaagttttct atttgcgctt gcgcatgtac aattttattc 300
ctctattcaa tgaaattggt ggctcactgg ttcattaaaa aaaaaagaat ctagcctgtt 360
cgggaagaag aggattttgt tcgtgagaga gagagagaga gagagagaga gagagagaga 420
gaaggaggag gaggattttc aggcttcgca ttgcccaacc tctgcttctg ttggcccaag 480
aagaatccca ggcgcccatg ggctggcagt ttaccacgga cctacctagc ctaccttagc 540
tatctaagcg ggccgaccta gtagccacgt gcctagtgta gattaaagtt gccgggccag 600
caggaagcca cgctgcaatg gcatcttccc ctgtccttcg cgtacgtgaa aacaaaccca 660
ggtaagctta gaatcttctt gcccgttgga ctgggacacc caccaatccc accatgcccc 720
gatattcctc cggtctcggt tcatgtgatg tcctctcttg tgtgatcacg gagcaagcat 780
tcttaaacgg caaaagaaaa tcaccaactt gctcacgcag tcacgctgca ccgcgcgaag 840
cgacgcccga taggccaaga tcgcgagata aaataacaac caatgatcat aaggaaacaa 900
gcccgcgatg tgtcgtgtgc agcaatcttg gtcatttgcg ggatcgagtg cttcacagct 960
aaccaaatat tcggccgatg atttaacaca ttatcagcgt agatgtacgt acgatttgtt 1020
aattaatcta cgagccttgc tagggcaggt gttctgccag ccaatccaga tcgccctcgt 1080
atgcacgctc acatgatggc agggcagggt tcacatgagc tctaacggtc gattaattaa 1140
tcccggggct cgactataaa tacctcccta atcccatgat caaaaccatc tcaagcagcc 1200
taatcatctc cagctgatca agagctctta attagctagc tagtgattag ctgcgcttgt 1260
gatc 1264
<210> 22
<211> 1146
<212> DNA
<213> Phyllostachys edulis
<400> 22
actcgagatc gtcgcagaat tcacaagaca cagccagagc agaagcggag taagaagagg 60
tcagtaactt tcttgaattc aaggatcaag aagagagatc aagaatgggg atggcggtga 120
ggagggagag ggacgcggag gcggagctga acctgccgcc ggggttccgg ttccacccga 180
cggacgagga gctcgtggag cactacctct gcaggaaggc ggcggggcag cgcttgccgg 240
tgcccatcat cgccgaggtc gacctctaca agttcgaacc ctgggacctg cccgagcggg 300
cgctgttcgg gaccaaggag tggtacttca ccacgcccag ggaccgaaag taccccaacg 360
ggtcgcgccc caaccgcgcc gccgggaacg ggtactggaa ggccaccggc gccgacaagc 420
ccatcgcgcc gcgggggcgc accttgggga tcaagaaggc gctcgtcttc tacgccggca 480
aggccccccg cggggtcaag accgactgga tcatgcacga gtaccgcctc gccgacgaga 540
gccgcgccac cacaggtgcc aagaagggat ccctcaggtt ggatgattgg gtgctgtgcc 600
gattgtgcaa caagaagaac aagtggggga agatgcagct ggggaaggag accaaggaag 660
aggcgtcgga catgatcacc tcgcagtccc actcccactc gtggggcgag acgcgcacgc 720
cggagtcgga gatcgtggac aacgacccgt tcccggcgtt ccaggacccg gcggcgcaga 780
tgacgatgat ggtgcccaag aaggagcagg aggtggacgg gggcgcgcgg aacgccagga 840
acgacctgtt cgtggacctc agctacgacg acatccagag catgtacagc ggcctcgaca 900
tgctaccgcc cggggacgac ttctactcgt cgctcttcgc gtcgccgcgg gtcaaggcga 960
atcagcccgg cgccggcggc atggccccct tctgaagaag acggcgtggg gagaagacgt 1020
ttccaagtcg caacctctgt taatatagaa taggaatggg acattcttcc gttttttact 1080
tttactcgga cggtagatac acgcagctct gccttctctt taatagaacc gaccaaattt 1140
tgttgt 1146
<210> 23
<211> 296
<212> PRT
<213> Phyllostachys edulis
<400> 23
Met Gly Met Ala Val Arg Arg Glu Arg Asp Ala Glu Ala Glu Leu Asn
1 5 10 15
Leu Pro Pro Gly Phe Arg Phe His Pro Thr Asp Glu Glu Leu Val Glu
20 25 30
His Tyr Leu Cys Arg Lys Ala Ala Gly Gln Arg Leu Pro Val Pro Ile
35 40 45
Ile Ala Glu Val Asp Leu Tyr Lys Phe Glu Pro Trp Asp Leu Pro Glu
50 55 60
Arg Ala Leu Phe Gly Thr Lys Glu Trp Tyr Phe Thr Thr Pro Arg Asp
65 70 75 80
Arg Lys Tyr Pro Asn Gly Ser Arg Pro Asn Arg Ala Ala Gly Asn Gly
85 90 95
Tyr Trp Lys Ala Thr Gly Ala Asp Lys Pro Ile Ala Pro Arg Gly Arg
100 105 110
Thr Leu Gly Ile Lys Lys Ala Leu Val Phe Tyr Ala Gly Lys Ala Pro
115 120 125
Arg Gly Val Lys Thr Asp Trp Ile Met His Glu Tyr Arg Leu Ala Asp
130 135 140
Glu Ser Arg Ala Thr Thr Gly Ala Lys Lys Gly Ser Leu Arg Leu Asp
145 150 155 160
Asp Trp Val Leu Cys Arg Leu Cys Asn Lys Lys Asn Lys Trp Gly Lys
165 170 175
Met Gln Leu Gly Lys Glu Thr Lys Glu Glu Ala Ser Asp Met Ile Thr
180 185 190
Ser Gln Ser His Ser His Ser Trp Gly Glu Thr Arg Thr Pro Glu Ser
195 200 205
Glu Ile Val Asp Asn Asp Pro Phe Pro Ala Phe Gln Asp Pro Ala Ala
210 215 220
Gln Met Thr Met Met Val Pro Lys Lys Glu Gln Glu Val Asp Gly Gly
225 230 235 240
Ala Arg Asn Ala Arg Asn Asp Leu Phe Val Asp Leu Ser Tyr Asp Asp
245 250 255
Ile Gln Ser Met Tyr Ser Gly Leu Asp Met Leu Pro Pro Gly Asp Asp
260 265 270
Phe Tyr Ser Ser Leu Phe Ala Ser Pro Arg Val Lys Ala Asn Gln Pro
275 280 285
Gly Ala Gly Gly Met Ala Pro Phe
290 295
<210> 24
<211> 1472
<212> DNA
<213> Sorghum bicolor
<400> 24
acaccgcgga aaccatccac aggacacaca gagccgagcc acccaccatc gacagcaccc 60
agccgccgga gcgcgagctt ctttacacag caggccggag aaacacaggc agccaaagcc 120
gccaccgctt ttaccgaccg accgatcggt gttgccgccg cctgtcgggt ttaagcaacc 180
aaccagacca agccatggga ttgccggtga tgaggaggga gagggacgcg gaggcggagc 240
tgaacctgcc gccggggttc cggttccacc ccacagacga cgagctggtg gagcactacc 300
tgtgccggaa agcggcgggg cagcgcctcc cggtgcccat catcgcggag gtggacctat 360
acaagttcga cccctgggac ctgccggagc gcgcgctgtt cggggtcagg gagtggtact 420
tcttcacgcc cagggaccgc aagtacccaa acgggtcccg ccccaaccgc gccgccggca 480
acgggtactg gaaggccacc ggcgccgaca agcccgtcgc gccgcggggc cgcacgctcg 540
ggatcaagaa ggcgctcgtc ttctacgccg ggaaggcgcc gcgtggggtc aagacggact 600
ggatcatgca cgagtacagg ctcgcggacg ccggccgcgc agccgcctcc aagaagggat 660
cgctcaggct ggatgactgg gtgctgtgcc gcctgtacaa taagaagaac gagtgggaga 720
agatgcagct ggggaaggag tccgccgccg gcgtcggcac cgccaaggag gaggcgatgg 780
acatgaccac ctcgcactcg cactcccact cgcagtcgca ctcgcactcg tggggcgaga 840
cgcgcacgcc ggagtcggag atcgtggaca acgacccgtt cccggagctg gactcgttcc 900
cggcgttcca ggacccggcg gcggcgatga tgatggtgcc caagaaggag caggtggacg 960
acggcagcgc cgccgccaac gccgccaaga gcagcgacct gttcgtggac cttagctacg 1020
acgacatcca gggcatgtac agcggcctcg acatgctgcc cccgccaggg gaggacttct 1080
tctcctcgct cttcgcgtcg cccagggtca aggggaacca gcccgccgga gccgccgggt 1140
tggggccatt ctgaggctga ggcgagcgag gatggagcca tggatcagga gaagacagcg 1200
ttgcaaggtt gcgaactctg taaatacagc ataggagtcg aacctgaacc cgactctgaa 1260
cctggtcggg gttacagggt tatgggtgtc ggtgttagcg tacatggagc cggccggccc 1320
agtgttggcg aggctcattc tttagtttca ctttcaacgc agaagacggt agatatatgt 1380
gtagctgttc actttcatca cttcctcttc aacagaaccg acgaaatttt gctgctcttg 1440
ttaacaactt acgagtacta ccgtgtgtcc gt 1472
<210> 25
<211> 319
<212> PRT
<213> Sorghum bicolor
<400> 25
Met Gly Leu Pro Val Met Arg Arg Glu Arg Asp Ala Glu Ala Glu Leu
1 5 10 15
Asn Leu Pro Pro Gly Phe Arg Phe His Pro Thr Asp Asp Glu Leu Val
20 25 30
Glu His Tyr Leu Cys Arg Lys Ala Ala Gly Gln Arg Leu Pro Val Pro
35 40 45
Ile Ile Ala Glu Val Asp Leu Tyr Lys Phe Asp Pro Trp Asp Leu Pro
50 55 60
Glu Arg Ala Leu Phe Gly Val Arg Glu Trp Tyr Phe Phe Thr Pro Arg
65 70 75 80
Asp Arg Lys Tyr Pro Asn Gly Ser Arg Pro Asn Arg Ala Ala Gly Asn
85 90 95
Gly Tyr Trp Lys Ala Thr Gly Ala Asp Lys Pro Val Ala Pro Arg Gly
100 105 110
Arg Thr Leu Gly Ile Lys Lys Ala Leu Val Phe Tyr Ala Gly Lys Ala
115 120 125
Pro Arg Gly Val Lys Thr Asp Trp Ile Met His Glu Tyr Arg Leu Ala
130 135 140
Asp Ala Gly Arg Ala Ala Ala Ser Lys Lys Gly Ser Leu Arg Leu Asp
145 150 155 160
Asp Trp Val Leu Cys Arg Leu Tyr Asn Lys Lys Asn Glu Trp Glu Lys
165 170 175
Met Gln Leu Gly Lys Glu Ser Ala Ala Gly Val Gly Thr Ala Lys Glu
180 185 190
Glu Ala Met Asp Met Thr Thr Ser His Ser His Ser His Ser Gln Ser
195 200 205
His Ser His Ser Trp Gly Glu Thr Arg Thr Pro Glu Ser Glu Ile Val
210 215 220
Asp Asn Asp Pro Phe Pro Glu Leu Asp Ser Phe Pro Ala Phe Gln Asp
225 230 235 240
Pro Ala Ala Ala Met Met Met Val Pro Lys Lys Glu Gln Val Asp Asp
245 250 255
Gly Ser Ala Ala Ala Asn Ala Ala Lys Ser Ser Asp Leu Phe Val Asp
260 265 270
Leu Ser Tyr Asp Asp Ile Gln Gly Met Tyr Ser Gly Leu Asp Met Leu
275 280 285
Pro Pro Pro Gly Glu Asp Phe Phe Ser Ser Leu Phe Ala Ser Pro Arg
290 295 300
Val Lys Gly Asn Gln Pro Ala Gly Ala Ala Gly Leu Gly Pro Phe
305 310 315
<210> 26
<211> 994
<212> DNA
<213> Zea mays
<400> 26
ctccagctcc atccaaatcc accgccagca agcaagccgg cgccatgggt ctgccgatga 60
ggagggagag ggacgcggag gcggagctga acctgccgcc ggggttccgg ttccacccca 120
cggacgacga gctggtggag cactacctgt gccgcaaggc ggcggggcag cgcctccccg 180
tgcccatcat cgccgaggtg gacctgtaca ggttcgaccc ctgggacctg ccggagcgcg 240
cgctcttcgg ggcccgcgag tggtacttct tcacgcccag ggaccgcaag taccccaacg 300
gctcccgccc caaccgcgcc gccggcaacg ggtactggaa ggccaccggc gccgacaagc 360
ccgtcgcgcc gcgcggccgc acgctcggga tcaagaaggc tcttgtcttc tacgccggta 420
aggcgccgcg cggggtcaag acggactgga tcatgcacga gtacaggctc gccgacgccg 480
gccgcgccgc cgccgccaag aaggggtcgc ttaggttgga tgactgggtg ctgtgccggc 540
tgtacaacaa gaagaacgag tgggagaaga tgcagctggg gaagaccgcc gtcgccggcg 600
tcggcgccac caaggaggag gcgatggaca tggccacctc gcacacgcac tcccactccc 660
aatcacactc gcactcgtgg ggcgagacgc gcacgccaga gtcggagatc gtggacaacg 720
acccgttccc ggagctggac tcgttcccgg cgttccagga cccggcgatg atgatgacgg 780
tgcccaagga ggagcaggtg gacggctgca gcgccaagag cggcaacctg ttcgtggacc 840
tcagctacga cgacatccag ggcatgtaca gcggcctcga catgctgccg ccgcccgggg 900
aggacttcta ctcctcgctc ttcgcgtctc ccagggtcaa ggggaaccag cccgccggag 960
ccgccgggtt gggacagttc tgagctgagt cgag 994
<210> 27
<211> 312
<212> PRT
<213> Zea mays
<400> 27
Met Gly Leu Pro Met Arg Arg Glu Arg Asp Ala Glu Ala Glu Leu Asn
1 5 10 15
Leu Pro Pro Gly Phe Arg Phe His Pro Thr Asp Asp Glu Leu Val Glu
20 25 30
His Tyr Leu Cys Arg Lys Ala Ala Gly Gln Arg Leu Pro Val Pro Ile
35 40 45
Ile Ala Glu Val Asp Leu Tyr Arg Phe Asp Pro Trp Asp Leu Pro Glu
50 55 60
Arg Ala Leu Phe Gly Ala Arg Glu Trp Tyr Phe Phe Thr Pro Arg Asp
65 70 75 80
Arg Lys Tyr Pro Asn Gly Ser Arg Pro Asn Arg Ala Ala Gly Asn Gly
85 90 95
Tyr Trp Lys Ala Thr Gly Ala Asp Lys Pro Val Ala Pro Arg Gly Arg
100 105 110
Thr Leu Gly Ile Lys Lys Ala Leu Val Phe Tyr Ala Gly Lys Ala Pro
115 120 125
Arg Gly Val Lys Thr Asp Trp Ile Met His Glu Tyr Arg Leu Ala Asp
130 135 140
Ala Gly Arg Ala Ala Ala Ala Lys Lys Gly Ser Leu Arg Leu Asp Asp
145 150 155 160
Trp Val Leu Cys Arg Leu Tyr Asn Lys Lys Asn Glu Trp Glu Lys Met
165 170 175
Gln Leu Gly Lys Thr Ala Val Ala Gly Val Gly Ala Thr Lys Glu Glu
180 185 190
Ala Met Asp Met Ala Thr Ser His Thr His Ser His Ser Gln Ser His
195 200 205
Ser His Ser Trp Gly Glu Thr Arg Thr Pro Glu Ser Glu Ile Val Asp
210 215 220
Asn Asp Pro Phe Pro Glu Leu Asp Ser Phe Pro Ala Phe Gln Asp Pro
225 230 235 240
Ala Met Met Met Thr Val Pro Lys Glu Glu Gln Val Asp Gly Cys Ser
245 250 255
Ala Lys Ser Gly Asn Leu Phe Val Asp Leu Ser Tyr Asp Asp Ile Gln
260 265 270
Gly Met Tyr Ser Gly Leu Asp Met Leu Pro Pro Pro Gly Glu Asp Phe
275 280 285
Tyr Ser Ser Leu Phe Ala Ser Pro Arg Val Lys Gly Asn Gln Pro Ala
290 295 300
Gly Ala Ala Gly Leu Gly Gln Phe
305 310
<210> 28
<211> 1075
<212> DNA
<213> Triticum aestivum
<400> 28
tcatcgacca actctcttcc aagtttcgat tcaacggaca tggggatgcc ggcggtgagg 60
aggagggaga gggacgcgga ggcggagctc aacctgccgc cgggcttccg cttccacccc 120
accgacgacg agctcgtgga gcactacctg tgccgcaagg cggccggcca gcgcctgccc 180
gtgcccatca tcgccgaggt cgacctctac cgcttcgacc cgtgggcgct ccccgaccgc 240
gccctcttcg gcacccgcga gtggtacttc ttcaccccgc gcgaccgcaa gtaccccaac 300
ggctcccgcc ccaaccgcgc cgccggcaac ggatactgga aggccaccgg cgccgacaag 360
cccgtcgcgc cccgcggtgg gaggaccatg gggatcaaga aggccctggt gttttacgcc 420
ggcaaggcgc ccaagggggt taagaccgac tggatcatgc atgagtaccg cctcgccgac 480
gccggccgcg ccgccgccag caagaagggc tcgctcaggc tggacgactg ggtgctctgc 540
cggctctaca acaagaagaa cgagtgggag aagatgcagc tccagcagca ggggggagag 600
gagatgatgg tggagcccaa ggaggagcac gccgcgtcgg acatggtggt cacctcgcac 660
tcccactcgc agtcccagtc gcactcgcac tcctggggcg aggcgcgcac gcccgagtcg 720
gagatcgtcg acaacgaccc gtcgctgttc cagcaggcgg cggcgttcca ggcccagagc 780
cccgccgccg cggcggcgca ccaggagatg atggccacgc tgatggtgcc caagaaggag 840
gcggcggacg aggccggcag gaacgacctg ttcgtggacc tcagctacga cgacatccag 900
agcatgtaca acggcctcga catgatgccg ccaggggacg atctgctcta ctcgtccctc 960
ttcgcctccc caagggtccg ggggagccag cccggcgccg gcggcatgcc ggccccgttc 1020
taagcagagc caagacacag accgtcagat accgagatcg acagaagtgg aacgg 1075
<210> 29
<211> 327
<212> PRT
<213> Triticum aestivum
<400> 29
Met Gly Met Pro Ala Val Arg Arg Arg Glu Arg Asp Ala Glu Ala Glu
1 5 10 15
Leu Asn Leu Pro Pro Gly Phe Arg Phe His Pro Thr Asp Asp Glu Leu
20 25 30
Val Glu His Tyr Leu Cys Arg Lys Ala Ala Gly Gln Arg Leu Pro Val
35 40 45
Pro Ile Ile Ala Glu Val Asp Leu Tyr Arg Phe Asp Pro Trp Ala Leu
50 55 60
Pro Asp Arg Ala Leu Phe Gly Thr Arg Glu Trp Tyr Phe Phe Thr Pro
65 70 75 80
Arg Asp Arg Lys Tyr Pro Asn Gly Ser Arg Pro Asn Arg Ala Ala Gly
85 90 95
Asn Gly Tyr Trp Lys Ala Thr Gly Ala Asp Lys Pro Val Ala Pro Arg
100 105 110
Gly Gly Arg Thr Met Gly Ile Lys Lys Ala Leu Val Phe Tyr Ala Gly
115 120 125
Lys Ala Pro Lys Gly Val Lys Thr Asp Trp Ile Met His Glu Tyr Arg
130 135 140
Leu Ala Asp Ala Gly Arg Ala Ala Ala Ser Lys Lys Gly Ser Leu Arg
145 150 155 160
Leu Asp Asp Trp Val Leu Cys Arg Leu Tyr Asn Lys Lys Asn Glu Trp
165 170 175
Glu Lys Met Gln Leu Gln Gln Gln Gly Gly Glu Glu Met Met Val Glu
180 185 190
Pro Lys Glu Glu His Ala Ala Ser Asp Met Val Val Thr Ser His Ser
195 200 205
His Ser Gln Ser Gln Ser His Ser His Ser Trp Gly Glu Ala Arg Thr
210 215 220
Pro Glu Ser Glu Ile Val Asp Asn Asp Pro Ser Leu Phe Gln Gln Ala
225 230 235 240
Ala Ala Phe Gln Ala Gln Ser Pro Ala Ala Ala Ala Ala His Gln Glu
245 250 255
Met Met Ala Thr Leu Met Val Pro Lys Lys Glu Ala Ala Asp Glu Ala
260 265 270
Gly Arg Asn Asp Leu Phe Val Asp Leu Ser Tyr Asp Asp Ile Gln Ser
275 280 285
Met Tyr Asn Gly Leu Asp Met Met Pro Pro Gly Asp Asp Leu Leu Tyr
290 295 300
Ser Ser Leu Phe Ala Ser Pro Arg Val Arg Gly Ser Gln Pro Gly Ala
305 310 315 320
Gly Gly Met Pro Ala Pro Phe
325
<210> 30
<211> 1516
<212> DNA
<213> Hordeum vulgare
<400> 30
gaccatcacc acacaaccca actcctctca ctccccaaca atctcaaaca acagctcgag 60
gaatcaacag cagcgactac tctgttcgtt gaaccaacaa tcaacagacg gacatgggga 120
tgccggcggc gaggaggagg gagagggacg cggaggcgga gctgaacctg cccccgggat 180
tccgcttcca ccccaccgac gacgagctgg tggagcacta cctgtgccgc aaggcggcgg 240
ggcagcgcct gcccgtgccc atcatcgccg aggtcgacct ctaccgcttc gacccgtggg 300
cgctccccga ccgcgccctc ttcggcaccc gcgagtggta cttcttcacg ccccgcgacc 360
gcaagtaccc caacggatcc cgccccaacc gcgccgccgg caacggctac tggaaggcca 420
ccggcgccga caagcccgtc gcgccccgcg ggggtcgcac catggggatc aagaaggccc 480
tcgtgttcta cgccggcaag gcgcccaagg gggtcaagac ggactggatc atgcatgagt 540
accgcctcgc cgacgccgga cgcgccgccg ccagcaagaa gggctccctc aggctggacg 600
actgggtgct ctgccggctg tacaacaaga agaacgagtg ggagaagatg cagctgcagc 660
agcagcaggg ggaaggggag accatgatgg agcccaaggc ggaggagaac acggcgtccg 720
acatggtcgt cacctcgcac tcccactccc agtcccagtc gcactcgcac tcgtggggcg 780
aggcgcgcac gcccgagtcg gagatcgtcg acaacgaccc gtcgctgttc caccaggcgc 840
aggcgacggc gttccagacg cagagccccg cggccgccgc ggcgcaccag gagatgatgg 900
ccacgctgat ggtgcccaag aaggaggcgg ccgatgaggg caggaacgac ctgttcgtgg 960
acctcagcta cgacgacatc cagagcatgt acaacggcct cgacatgatg ccgcccgggg 1020
acgacctgct ctactcctcc ttcttcgcct cccccagggt ccggggcagc cagcccggct 1080
ccggcggcat gccagccccg ttctaagcac acagcaaaga cagaccatca gaccgtcaga 1140
ctccgatcga cagaagcgga atggatgact tcttcgccgc gggcgagcga gcgagatcgc 1200
ggtgcagtgt aaatacagca taggaaacgg gagggaggtg gccgtcctgt ctgagagaag 1260
ccggcgtggt gagggcggcg gcgccggggc gtgttgctgt acatggagag cccggcgccg 1320
gggcctggcc ggctgggttg attctttcgt tcttactttg tactctcaat gcggatgtag 1380
ctctcttctc ttctcactcc tcagtagtag aatgagaatc gaccgaccaa atacatatgt 1440
agctctgttt cttccttctc ttcagtagaa atcaaccaaa ttttgctgtt tatgctgctc 1500
aaaaaaaaaa aaaaaa 1516
<210> 31
<211> 328
<212> PRT
<213> Hordeum vulgare
<400> 31
Met Pro Ala Ala Arg Arg Arg Glu Arg Asp Ala Glu Ala Glu Leu Asn
1 5 10 15
Leu Pro Pro Gly Phe Arg Phe His Pro Thr Asp Asp Glu Leu Val Glu
20 25 30
His Tyr Leu Cys Arg Lys Ala Ala Gly Gln Arg Leu Pro Val Pro Ile
35 40 45
Ile Ala Glu Val Asp Leu Tyr Arg Phe Asp Pro Trp Ala Leu Pro Asp
50 55 60
Arg Ala Leu Phe Gly Thr Arg Glu Trp Tyr Phe Phe Thr Pro Arg Asp
65 70 75 80
Arg Lys Tyr Pro Asn Gly Ser Arg Pro Asn Arg Ala Ala Gly Asn Gly
85 90 95
Tyr Trp Lys Ala Thr Gly Ala Asp Lys Pro Val Ala Pro Arg Gly Gly
100 105 110
Arg Thr Met Gly Ile Lys Lys Ala Leu Val Phe Tyr Ala Gly Lys Ala
115 120 125
Pro Lys Gly Val Lys Thr Asp Trp Ile Met His Glu Tyr Arg Leu Ala
130 135 140
Asp Ala Gly Arg Ala Ala Ala Ser Lys Lys Gly Ser Leu Arg Leu Asp
145 150 155 160
Asp Trp Val Leu Cys Arg Leu Tyr Asn Lys Lys Asn Glu Trp Glu Lys
165 170 175
Met Gln Leu Gln Gln Gln Gln Gly Glu Gly Glu Thr Met Met Glu Pro
180 185 190
Lys Ala Glu Glu Asn Thr Ala Ser Asp Met Val Val Thr Ser His Ser
195 200 205
His Ser Gln Ser Gln Ser His Ser His Ser Trp Gly Glu Ala Arg Thr
210 215 220
Pro Glu Ser Glu Ile Val Asp Asn Asp Pro Ser Leu Phe His Gln Ala
225 230 235 240
Gln Ala Thr Ala Phe Gln Thr Gln Ser Pro Ala Ala Ala Ala Ala His
245 250 255
Gln Glu Met Met Ala Thr Leu Met Val Pro Lys Lys Glu Ala Ala Asp
260 265 270
Glu Gly Arg Asn Asp Leu Phe Val Asp Leu Ser Tyr Asp Asp Ile Gln
275 280 285
Ser Met Tyr Asn Gly Leu Asp Met Met Pro Pro Gly Asp Asp Leu Leu
290 295 300
Tyr Ser Ser Phe Phe Ala Ser Pro Arg Val Arg Gly Ser Gln Pro Gly
305 310 315 320
Ser Gly Gly Met Pro Ala Pro Phe
325
<210> 32
<211> 1532
<212> DNA
<213> Eleusine coracana
<400> 32
aataaccttc aagaacatcg cggaatacac tactccacag ggggaggagc ccggaagcac 60
tactaatcat tcacaaagca gcagcaggca gctttagcag tcgaggggag cgagcggatc 120
gagtgatcag attcttcaat ttcgtcaaaa caggagggag agaggaaaga ggataaatca 180
tcgaccatga ccatgggagg agggatgatg tccgtgccgg tgcggcggga gcgcgacgcg 240
gaggcggagc tgaacctgcc gccagggttc cggttccacc cgacggacga cgagctggtg 300
gagcactacc tgtgccggaa ggcggcgggg cagcgtctcc ccgtgcccat catcgccgag 360
gtggacctct acaagttcga cccgtgggac ctccccgacc gcgcgctctt cggcaccggg 420
gagtggtact tcttcacccc gcgggaccgc aagtacccca acgggtcgcg acccaaccgc 480
gccgccggca acgggtactg gaaggccacc ggcgccgaca agcccgtcgc gcccaagggg 540
cgcacgctcg ggatcaagaa ggcgctcgtg ttctatgcgg gcaaggcgcc gcgcggggtc 600
aagacggact ggatcatgca cgagtaccgt cttgctgatg ccggccgcgc cgccgctgcc 660
aaaaagggat cgctaaggtt ggatgactgg gtgctgtgcc gcctgtacaa caagaagaac 720
gagtgggaga agatgcagat gaagaagggc taccggcgcc gccactgcca ctgcaaagga 780
ggaggaagcc ggcggagaca tgaccacctc ctggaactcg cactcgcact cgtggggcga 840
gacccgcacg ccggagtcgg agatcgtgga caacgacccg ttcccggagc tcgactcgtt 900
cccggcgttc caggacccgg caccgcagca gcatcagcag cagatgatgg tgcccaagaa 960
aggagagggt ggacgacgcc gccgccgccg gcaagacacc cctctcttca tcgacctcca 1020
gctatgacga catccagagc atgtaccagc ggcctcgaca tgctgccgcc ccccggggga 1080
ggacttctac tcctcgctct tcgcgtcgcc cagggtcaag gggaaccaga ccgcccggcg 1140
tcggtggctt ggcccccttc tgaagtgatg ctgagcggcg cgcgttggtg ttgctggaac 1200
catcatcatc agtcgtctcg tcgggatagg ccgtccgacg aacgccaaga cggcggcggc 1260
ggcgactttg caggactgca gctgcgacct ctgtaaatac agcagcgtag gagtcgaaga 1320
acctgaacct gatccgggtt acggggtggt taaaactcta aaagtgtcgg cgtagcgtac 1380
atggagtcga cggcccggcg ttggcgccgg gtcattcttt tgtttcaact tttactctgc 1440
tcggaccata gatatacagc atgtagctct tctcactcga caaaatcgac caaattttgc 1500
gtttcttgtc taaaaaaaaa aaaaaaaaaa aa 1532
<210> 33
<211> 369
<212> PRT
<213> Eleusine coracana
<400> 33
Met Thr Met Gly Gly Gly Met Met Ser Val Pro Val Arg Arg Glu Arg
1 5 10 15
Asp Ala Glu Ala Glu Leu Asn Leu Pro Pro Gly Phe Arg Phe His Pro
20 25 30
Thr Asp Asp Glu Leu Val Glu His Tyr Leu Cys Arg Lys Ala Ala Gly
35 40 45
Gln Arg Leu Pro Val Pro Ile Ile Ala Glu Val Asp Leu Tyr Lys Phe
50 55 60
Asp Pro Trp Asp Leu Pro Asp Arg Ala Leu Phe Gly Thr Gly Glu Trp
65 70 75 80
Tyr Phe Phe Thr Pro Arg Asp Arg Lys Tyr Pro Asn Gly Ser Arg Pro
85 90 95
Asn Arg Ala Ala Gly Asn Gly Tyr Trp Lys Ala Thr Gly Ala Asp Lys
100 105 110
Pro Val Ala Pro Lys Gly Arg Thr Leu Gly Ile Lys Lys Ala Leu Val
115 120 125
Phe Tyr Ala Gly Lys Ala Pro Arg Gly Val Lys Thr Asp Trp Ile Met
130 135 140
His Glu Tyr Arg Leu Ala Asp Ala Gly Arg Ala Ala Ala Ala Lys Lys
145 150 155 160
Gly Ser Leu Arg Leu Asp Asp Trp Val Leu Cys Arg Leu Tyr Asn Lys
165 170 175
Lys Asn Glu Trp Glu Lys Met Gln Met Lys Lys Gly Tyr Arg Arg Arg
180 185 190
His Cys His Cys Lys Gly Gly Gly Ser Arg Arg Arg His Asp His Leu
195 200 205
Leu Glu Leu Ala Leu Ala Leu Val Gly Arg Asp Pro His Ala Gly Val
210 215 220
Gly Asp Arg Gly Gln Arg Pro Val Pro Gly Ala Arg Leu Val Pro Gly
225 230 235 240
Val Pro Gly Pro Gly Thr Ala Ala Ala Ser Ala Ala Asp Asp Gly Ala
245 250 255
Gln Glu Arg Arg Gly Trp Thr Thr Pro Pro Pro Pro Ala Arg His Pro
260 265 270
Ser Leu His Arg Pro Pro Ala Met Thr Thr Ser Arg Ala Cys Thr Ser
275 280 285
Gly Leu Asp Met Leu Pro Pro Pro Gly Gly Gly Leu Leu Leu Leu Ala
290 295 300
Leu Arg Val Ala Gln Gly Gln Gly Glu Pro Asp Arg Pro Ala Ser Val
305 310 315 320
Ala Trp Pro Pro Ser Glu Val Met Leu Ser Gly Ala Arg Trp Cys Cys
325 330 335
Trp Asn His His His Gln Ser Ser Arg Arg Asp Arg Pro Ser Asp Glu
340 345 350
Arg Gln Asp Gly Gly Gly Gly Asp Phe Ala Gly Leu Gln Leu Arg Pro
355 360 365
Leu
<210> 34
<211> 894
<212> DNA
<213> Vitis vinifera
<400> 34
atgaagaggg agagagatgc agaggcggag ttgaatcttc cccccggatt ccggttccat 60
cccacagatg aagagcttgt tgttcattac ctttgccgca aggccagcta ccagactcta 120
ccggttccaa ttattgttga gattgacctt tataaatatg atccttggca gcttcctgag 180
aaggcgctgt tcggaatcaa ggaatggtac ttctttacac ctcgggacag gaagtacccg 240
aatgggtcga gacctaacag agccgcaggc aatggatact ggaaagcaac tggcgctgat 300
aaacccgtta gaccaacggg aagcacaaaa gctgttggaa taaagaaagc gctggttttc 360
tactctggaa aagctcctaa aggaaccaag actgattgga ttatgcatga gtacaggctt 420
gcccaaccaa atcgttcatc tgataaaaag agcagtttaa ggttggacga ctgggttctt 480
tgccggatct acaacaaaaa gaacaattgg agggagaaga tgcaacacca aatgaaccaa 540
ctattacctc atgaacctat tgatcccttt gaggtggctg aagacgatgg gtcagacagt 600
ctgaggaccc ctgaatcaga tattgacatt gagactcttt cttacaatca cgatctacat 660
ggtgcccagg ggcagggcta ttcatatcaa gtgctacatg ataacaattt gcaaattact 720
gatactgaca gcggtttccc cgcacgagaa tgcttcaaag aagaagatga ctactggtta 780
acaaacttga atctggaaga tctgcagaat tcccttacaa cctttggaac aatgccctta 840
ccagatttca gttatcagga ttctttttca atgatccatg gtttaccata ctaa 894
<210> 35
<211> 297
<212> PRT
<213> Vitis vinifera
<400> 35
Met Lys Arg Glu Arg Asp Ala Glu Ala Glu Leu Asn Leu Pro Pro Gly
1 5 10 15
Phe Arg Phe His Pro Thr Asp Glu Glu Leu Val Val His Tyr Leu Cys
20 25 30
Arg Lys Ala Ser Tyr Gln Thr Leu Pro Val Pro Ile Ile Val Glu Ile
35 40 45
Asp Leu Tyr Lys Tyr Asp Pro Trp Gln Leu Pro Glu Lys Ala Leu Phe
50 55 60
Gly Ile Lys Glu Trp Tyr Phe Phe Thr Pro Arg Asp Arg Lys Tyr Pro
65 70 75 80
Asn Gly Ser Arg Pro Asn Arg Ala Ala Gly Asn Gly Tyr Trp Lys Ala
85 90 95
Thr Gly Ala Asp Lys Pro Val Arg Pro Thr Gly Ser Thr Lys Ala Val
100 105 110
Gly Ile Lys Lys Ala Leu Val Phe Tyr Ser Gly Lys Ala Pro Lys Gly
115 120 125
Thr Lys Thr Asp Trp Ile Met His Glu Tyr Arg Leu Ala Gln Pro Asn
130 135 140
Arg Ser Ser Asp Lys Lys Ser Ser Leu Arg Leu Asp Asp Trp Val Leu
145 150 155 160
Cys Arg Ile Tyr Asn Lys Lys Asn Asn Trp Arg Glu Lys Met Gln His
165 170 175
Gln Met Asn Gln Leu Leu Pro His Glu Pro Ile Asp Pro Phe Glu Val
180 185 190
Ala Glu Asp Asp Gly Ser Asp Ser Leu Arg Thr Pro Glu Ser Asp Ile
195 200 205
Asp Ile Glu Thr Leu Ser Tyr Asn His Asp Leu His Gly Ala Gln Gly
210 215 220
Gln Gly Tyr Ser Tyr Gln Val Leu His Asp Asn Asn Leu Gln Ile Thr
225 230 235 240
Asp Thr Asp Ser Gly Phe Pro Ala Arg Glu Cys Phe Lys Glu Glu Asp
245 250 255
Asp Tyr Trp Leu Thr Asn Leu Asn Leu Glu Asp Leu Gln Asn Ser Leu
260 265 270
Thr Thr Phe Gly Thr Met Pro Leu Pro Asp Phe Ser Tyr Gln Asp Ser
275 280 285
Phe Ser Met Ile His Gly Leu Pro Tyr
290 295
<210> 36
<211> 1329
<212> DNA
<213> Phyllostachys edulis
<400> 36
agtccaaact ttccagagat cctgattagc agctaaccag cctccctgat cccctaatcc 60
accattaata agcaaccttt tgctgtgatc tggtgcttgc aatggactgc ggtggtgcgc 120
tgcagctgcc gccggggttc cggttccacc cgaccgacga cgagctggtg atgtgctacc 180
tctgccgcaa gtgcggcggc ctgcccctcg ccgcgcccgt catcgccgag atcgacctct 240
acaagttcaa cccatgggag ctcccagaga aggcgatggg aggggagaag gagtggtact 300
tcttctcgcc gagggacagg aagtacccga acgggtcgcg gccgaaccgg gcggcgggga 360
cggggtactg gaaggcgacg ggggccgaca agccggtggg gttgccgcgg ccggtggcca 420
tcaagaaggc gctcgtcttc tacgccggca agccacccaa gggcgtcaag accaactgga 480
tcatgcacga gtaccgcctc gccgacgtcg accgctccgc cgccgcgcgc aagaagtcca 540
acaacgcgct caggttggat gactgggtgc tgtgccgaat ctacaacaag aagggcgtca 600
tcgagcggta cgacacggtg cccgccggcg acgtcaagca ggccgcggcg gccaagaagc 660
cgcggccggg gcatcacgcc ggtggggcgg cggggacggc gatgaagctc gagctgtccg 720
actacggcta ctacccgccg tcgccgccgc cgacgtcggc gacggagatg ctgtgcttcg 780
accggtcggg gtcggcggac cgggagtcga tgccgcggct gcacacggac tccagcagct 840
ccgatcacgt gctgtcgccg tctccggact tcccgagcga cggcgatcgc gacctggatt 900
acgccgagag ccagcccacc ggcggcggat ggccgggcga cgactggggc gtcgacgacg 960
ggttcgtcat cgacagctcg ctcttcgagg cgccgtcgcc gggcgtcttc gcccgggacg 1020
gcgccttgtt cggggacatg ttcacgtacc tgcagaagcc gttctgaaag aacgcagcat 1080
cgatctgcac gtactacgta ctctagcaca ctaacatgtt caggtcgtgt aatccggttc 1140
aggaaaattt aattaccagt ctaggtacat caaaaccaaa tcaaccgtgc acacttcctc 1200
ccgcggcaga tcaatggaaa gaagagagag ttaatagtgc accaatacct aattgcgaat 1260
tcgcgattgg atgcagagtt ttccgcacca tatatataag aggttcacta tgtcatattg 1320
acatgacat 1329
<210> 37
<211> 321
<212> PRT
<213> Phyllostachys edulis
<400> 37
Met Asp Cys Gly Gly Ala Leu Gln Leu Pro Pro Gly Phe Arg Phe His
1 5 10 15
Pro Thr Asp Asp Glu Leu Val Met Cys Tyr Leu Cys Arg Lys Cys Gly
20 25 30
Gly Leu Pro Leu Ala Ala Pro Val Ile Ala Glu Ile Asp Leu Tyr Lys
35 40 45
Phe Asn Pro Trp Glu Leu Pro Glu Lys Ala Met Gly Gly Glu Lys Glu
50 55 60
Trp Tyr Phe Phe Ser Pro Arg Asp Arg Lys Tyr Pro Asn Gly Ser Arg
65 70 75 80
Pro Asn Arg Ala Ala Gly Thr Gly Tyr Trp Lys Ala Thr Gly Ala Asp
85 90 95
Lys Pro Val Gly Leu Pro Arg Pro Val Ala Ile Lys Lys Ala Leu Val
100 105 110
Phe Tyr Ala Gly Lys Pro Pro Lys Gly Val Lys Thr Asn Trp Ile Met
115 120 125
His Glu Tyr Arg Leu Ala Asp Val Asp Arg Ser Ala Ala Ala Arg Lys
130 135 140
Lys Ser Asn Asn Ala Leu Arg Leu Asp Asp Trp Val Leu Cys Arg Ile
145 150 155 160
Tyr Asn Lys Lys Gly Val Ile Glu Arg Tyr Asp Thr Val Pro Ala Gly
165 170 175
Asp Val Lys Gln Ala Ala Ala Ala Lys Lys Pro Arg Pro Gly His His
180 185 190
Ala Gly Gly Ala Ala Gly Thr Ala Met Lys Leu Glu Leu Ser Asp Tyr
195 200 205
Gly Tyr Tyr Pro Pro Ser Pro Pro Pro Thr Ser Ala Thr Glu Met Leu
210 215 220
Cys Phe Asp Arg Ser Gly Ser Ala Asp Arg Glu Ser Met Pro Arg Leu
225 230 235 240
His Thr Asp Ser Ser Ser Ser Asp His Val Leu Ser Pro Ser Pro Asp
245 250 255
Phe Pro Ser Asp Gly Asp Arg Asp Leu Asp Tyr Ala Glu Ser Gln Pro
260 265 270
Thr Gly Gly Gly Trp Pro Gly Asp Asp Trp Gly Val Asp Asp Gly Phe
275 280 285
Val Ile Asp Ser Ser Leu Phe Glu Ala Pro Ser Pro Gly Val Phe Ala
290 295 300
Arg Asp Gly Ala Leu Phe Gly Asp Met Phe Thr Tyr Leu Gln Lys Pro
305 310 315 320
Phe
<210> 38
<211> 1230
<212> DNA
<213> Hordeum vulgare
<400> 38
gaaaatcttc cccaagagcc gccgccgata gtcgagacag ccgcctcgcc tccactacaa 60
ccgatcgcgc gagcgcccgc cgcccgttcc tccgagctcg ctcaagccaa gcccccgttc 120
gtgaatggac cacggcttcg acggcgccct ccagctgccc ccggggttca ggttccaccc 180
cacggacgag gagctggtga tgtactacct ctgccgcaag tgcggcggcc tgcccatcgc 240
cgcgccggtg atcgccgagg tcgacctgta caagctggag ccgtggaggc tgccggagaa 300
ggcggcgggg ggaggccagg actccaagga gtggtacttc ttctcgccgc gggaccgcaa 360
gtaccccaac gggtcgcgcc cgaaccgcgc cgccgggacg ggctactgga aggccacggg 420
cgccgataag cccgtcggct cgccccgccc cgtcgccatc aagaaggccc tcgtcttcta 480
cgccggcaag ccacccaagg gcgtcaagac caactggatc atgcacgagt accgcctcgc 540
cgacgtcgac cgctccgccg ccgcccgcaa gaagtccaac aacgcgctca ggctggatga 600
ctgggtgctg tgccgaatct acaacaagaa gggcgtcatc gagcggtacg acacggtgga 660
gtccgacgtc gccgatgtca agccggcgcc ggcgccggct gccaagaacc cgcggcaggg 720
acactacgct cctgggccgg caatgaaggt cgagctctct gactacgggt tctaccagca 780
gccgtcgccg ccggcgacgg agatgctctg cttcgaccgg tccgggtcgg cagacaggga 840
ctcgaaccac tccatgccgc gcctgcacac ggactccagc tcctcggagc gcgcgctgtc 900
ctcgccctcg cccgacttcc ctagcgacat ggactacgcg gagagccagc acgcggccgg 960
cctcgccgga ggctggccag gcgacgactg gggcggcgtc atcgacgacg acgggttcgt 1020
catcgacggc tcgctgatct tcgacccgcc gtcgccgggc gccttcgccc gcgacgccgc 1080
cgcgttcggg gacatgctca cgtacctgca gaaaccgttc tgaatgagcg cagcgcagca 1140
tccgtcagac tcctccttaa cagcccccac taacatgtcc atcaggtctc gtgtaataca 1200
gttcaggaaa actgatcaca tgtctaggtg 1230
<210> 39
<211> 332
<212> PRT
<213> Hordeum vulgare
<400> 39
Met Asp His Gly Phe Asp Gly Ala Leu Gln Leu Pro Pro Gly Phe Arg
1 5 10 15
Phe His Pro Thr Asp Glu Glu Leu Val Met Tyr Tyr Leu Cys Arg Lys
20 25 30
Cys Gly Gly Leu Pro Ile Ala Ala Pro Val Ile Ala Glu Val Asp Leu
35 40 45
Tyr Lys Leu Glu Pro Trp Arg Leu Pro Glu Lys Ala Ala Gly Gly Gly
50 55 60
Gln Asp Ser Lys Glu Trp Tyr Phe Phe Ser Pro Arg Asp Arg Lys Tyr
65 70 75 80
Pro Asn Gly Ser Arg Pro Asn Arg Ala Ala Gly Thr Gly Tyr Trp Lys
85 90 95
Ala Thr Gly Ala Asp Lys Pro Val Gly Ser Pro Arg Pro Val Ala Ile
100 105 110
Lys Lys Ala Leu Val Phe Tyr Ala Gly Lys Pro Pro Lys Gly Val Lys
115 120 125
Thr Asn Trp Ile Met His Glu Tyr Arg Leu Ala Asp Val Asp Arg Ser
130 135 140
Ala Ala Ala Arg Lys Lys Ser Asn Asn Ala Leu Arg Leu Asp Asp Trp
145 150 155 160
Val Leu Cys Arg Ile Tyr Asn Lys Lys Gly Val Ile Glu Arg Tyr Asp
165 170 175
Thr Val Glu Ser Asp Val Ala Asp Val Lys Pro Ala Pro Ala Pro Ala
180 185 190
Ala Lys Asn Pro Arg Gln Gly His Tyr Ala Pro Gly Pro Ala Met Lys
195 200 205
Val Glu Leu Ser Asp Tyr Gly Phe Tyr Gln Gln Pro Ser Pro Pro Ala
210 215 220
Thr Glu Met Leu Cys Phe Asp Arg Ser Gly Ser Ala Asp Arg Asp Ser
225 230 235 240
Asn His Ser Met Pro Arg Leu His Thr Asp Ser Ser Ser Ser Glu Arg
245 250 255
Ala Leu Ser Ser Pro Ser Pro Asp Phe Pro Ser Asp Met Asp Tyr Ala
260 265 270
Glu Ser Gln His Ala Ala Gly Leu Ala Gly Gly Trp Pro Gly Asp Asp
275 280 285
Trp Gly Gly Val Ile Asp Asp Asp Gly Phe Val Ile Asp Gly Ser Leu
290 295 300
Ile Phe Asp Pro Pro Ser Pro Gly Ala Phe Ala Arg Asp Ala Ala Ala
305 310 315 320
Phe Gly Asp Met Leu Thr Tyr Leu Gln Lys Pro Phe
325 330
<210> 40
<211> 1367
<212> DNA
<213> Sorghum bicolor
<400> 40
attccaaaag ctctccagct agtcgtctcc tccaaccagc agagaggccg cgcgcgaacg 60
aagcgaaggc cccagcacag caatcagctg agctctcctc gtcctcgccc tgctcgtctc 120
gaacctcgaa gctctccaat ccgccggtcg atcgccggag gttgctaagg tcgtgccgga 180
tcgatcgatc gacgacgacc gagatcgatc gaatggactg cggtggcgcg ctgcagctcc 240
cgcccgggtt ccggttccac cccaccgacg acgagctggt gatgtactac ctcctccgca 300
agtgcggcgg cctgcccctc gccgcgccgg tcatcgccga ggtcgacctc tacaagttcg 360
atccatggca gctcccagag aaggcgtatg gtggggagaa ggagtggtac ttcttctcgc 420
cgagggaccg caagtacccg aacgggtcga ggccgaacag ggcggccggg acggggtact 480
ggaaggccac cggcgccgac aagcccgtcg ggtcgccgcg ccccgtcgcc atcaagaagg 540
ccctcgtctt ctacgccggc aagccgccca agggcgtcaa gaccaactgg atcatgcacg 600
agtaccgcct cgccgacgtc gaccgttccg ccgccgcacg caagaagacc aacaacgccc 660
tcaggctgga tgactgggtg ctgtgccgga tctacaacaa gaagggcgtg atcgagcggt 720
acgacacggt ggacgacgac gccgacgacg ccgtggcaga ggacgtcaag cctgcgccgg 780
cgtccaggaa taacccgcgc gggaccgcca gtggccgcgg cggggcagca gcagcagcgg 840
cgccgatgaa ggtggagttc ccggagtacg gtgggtacta cgactacgaa gacctcgagg 900
cgacgccgtc ggcggggatg ctgtgcttcg atcgcccgtc ggccgcggtc ccgacggccc 960
cagcctctgc gcccgcgccc gcgcccgggc cggcgctgtc gtcgccgccg ccggcggcgg 1020
actcggaccc agagcgcgac gacgactcga acaactccgt ggcgtggacg atgcaccaca 1080
cgcacgcgca cacggacaac tactccagct gcggctccga gcacgtgctg tcgccgtcgc 1140
cggacctccc cgaccgcgac cacgccgaga gccagtccgc cgggttatgg tggcccgtcg 1200
gcgtcggcgg cgactgggcc gccgccgagg acgggttcat ggtcgacgtc gacgtcgacg 1260
acgggagctc gctgttcggg ccgccgtccc cggggctgcc gttcgctcgc gtcgacgccg 1320
ccgcgttcgg cgacatgctc gcgtcgtacc tccacaagcc gttctga 1367
<210> 41
<211> 384
<212> PRT
<213> Sorghum bicolor
<400> 41
Met Asp Cys Gly Gly Ala Leu Gln Leu Pro Pro Gly Phe Arg Phe His
1 5 10 15
Pro Thr Asp Asp Glu Leu Val Met Tyr Tyr Leu Leu Arg Lys Cys Gly
20 25 30
Gly Leu Pro Leu Ala Ala Pro Val Ile Ala Glu Val Asp Leu Tyr Lys
35 40 45
Phe Asp Pro Trp Gln Leu Pro Glu Lys Ala Tyr Gly Gly Glu Lys Glu
50 55 60
Trp Tyr Phe Phe Ser Pro Arg Asp Arg Lys Tyr Pro Asn Gly Ser Arg
65 70 75 80
Pro Asn Arg Ala Ala Gly Thr Gly Tyr Trp Lys Ala Thr Gly Ala Asp
85 90 95
Lys Pro Val Gly Ser Pro Arg Pro Val Ala Ile Lys Lys Ala Leu Val
100 105 110
Phe Tyr Ala Gly Lys Pro Pro Lys Gly Val Lys Thr Asn Trp Ile Met
115 120 125
His Glu Tyr Arg Leu Ala Asp Val Asp Arg Ser Ala Ala Ala Arg Lys
130 135 140
Lys Thr Asn Asn Ala Leu Arg Leu Asp Asp Trp Val Leu Cys Arg Ile
145 150 155 160
Tyr Asn Lys Lys Gly Val Ile Glu Arg Tyr Asp Thr Val Asp Asp Asp
165 170 175
Ala Asp Asp Ala Val Ala Glu Asp Val Lys Pro Ala Pro Ala Ser Arg
180 185 190
Asn Asn Pro Arg Gly Thr Ala Ser Gly Arg Gly Gly Ala Ala Ala Ala
195 200 205
Ala Ala Pro Met Lys Val Glu Phe Pro Glu Tyr Gly Gly Tyr Tyr Asp
210 215 220
Tyr Glu Asp Leu Glu Ala Thr Pro Ser Ala Gly Met Leu Cys Phe Asp
225 230 235 240
Arg Pro Ser Ala Ala Val Pro Thr Ala Pro Ala Ser Ala Pro Ala Pro
245 250 255
Ala Pro Gly Pro Ala Leu Ser Ser Pro Pro Pro Ala Ala Asp Ser Asp
260 265 270
Pro Glu Arg Asp Asp Asp Ser Asn Asn Ser Val Ala Trp Thr Met His
275 280 285
His Thr His Ala His Thr Asp Asn Tyr Ser Ser Cys Gly Ser Glu His
290 295 300
Val Leu Ser Pro Ser Pro Asp Leu Pro Asp Arg Asp His Ala Glu Ser
305 310 315 320
Gln Ser Ala Gly Leu Trp Trp Pro Val Gly Val Gly Gly Asp Trp Ala
325 330 335
Ala Ala Glu Asp Gly Phe Met Val Asp Val Asp Val Asp Asp Gly Ser
340 345 350
Ser Leu Phe Gly Pro Pro Ser Pro Gly Leu Pro Phe Ala Arg Val Asp
355 360 365
Ala Ala Ala Phe Gly Asp Met Leu Ala Ser Tyr Leu His Lys Pro Phe
370 375 380
<210> 42
<211> 1347
<212> DNA
<213> Zea mays
<400> 42
cagctttcca gcgatcggca gctcctcgat cgtttcgaag ctccaatccg cccggccgcc 60
tccgcctgtt gccactagct aggtgatcga tcgaatggac tgcggtggcg cgctgcagct 120
cccgcctggg ttccgcttcc accccaccga tgacgagctg gtgatgtact atctcctccg 180
caagtgcggc ggcctgccgc tcgccgcgcc ggtcatcgcc gaggtggatc tctacaagtt 240
cgacccatgg cagctcccag agaaggcgtt cggtggggag aaggagtggt acttcttctc 300
gccgcgcgac cgcaagtacc cgaatggctc caggcctaac cgggcggccg ggacagggta 360
ctggaaggcc accggcgccg acaagccggt agggtcgccg cgccccgtgg ccatcaagaa 420
ggcgctcgtc ttctacgccg ggaagccgcc caagggcgtc aagaccaact ggatcatgca 480
cgagtaccgc ctcgcggacg tcgaccgctc ggccgccgca cgcaagaaga ccaacaacgc 540
gctcaggctg gatgactggg tgctgtgccg gatctacaac aagaagggtg ttatcgagcg 600
gtacgacaca gtggacgacg acgacggcga cggcgccgtg gccgaagacg tcaagccggt 660
gccggcgccg gcggcgtcga agaacccgcg ttcggcttcg gcgacatgct cgcgtcgtac 720
ctgcacaaac cgttctgatg caacgcgacg cgacgcgagc gcggccaccc cgcgcctgcg 780
tgctcctcta ggccactgac cactgacatg gacattctgg tcgtcgtgta gctcggttca 840
ggacgaatcg agagccggcc ggtctaggtg tagtgctgcg aaaccaacac caccgtgcag 900
gcacactctc cgcgggcggc agatcgacgg acaatcctgc gcccgtaggt atataccggt 960
cgtcgatcag gtgttcatca gttcttcatt cattcaggtc gacgtgcaac tggtaattgt 1020
acaagatctt gggcagctgc cgtatggaga tcgatgagtg ccgagttagc atggaggacg 1080
actggtggtc atggttggta cagagctagc tagccgtccg atcgggtatc ggattaatct 1140
gattgccagt tttgtttttt tttggtcgcg tcaagtagct gacatcttaa gaatgaagcc 1200
tactggattc agaggcctgt tgatggtaat ggtatggtgt atgtatatcg tctagtttag 1260
tctagcctag ctgtacttag aattggttca ggttggtggc aagcagagcg ctgtaatttt 1320
tgttgagtgt ttatgcacta taattgc 1347
<210> 43
<211> 234
<212> PRT
<213> Sorghum bicolor
<400> 43
Met Asp Cys Gly Gly Ala Leu Gln Leu Pro Pro Gly Phe Arg Phe His
1 5 10 15
Pro Thr Asp Asp Glu Leu Val Met Tyr Tyr Leu Leu Arg Lys Cys Gly
20 25 30
Gly Leu Pro Leu Ala Ala Pro Val Ile Ala Glu Val Asp Leu Tyr Lys
35 40 45
Phe Asp Pro Trp Gln Leu Pro Glu Lys Ala Phe Gly Gly Glu Lys Glu
50 55 60
Trp Tyr Phe Phe Ser Pro Arg Asp Arg Lys Tyr Pro Asn Gly Ser Arg
65 70 75 80
Pro Asn Arg Ala Ala Gly Thr Gly Tyr Trp Lys Ala Thr Gly Ala Asp
85 90 95
Lys Pro Val Gly Ser Pro Arg Pro Val Ala Ile Lys Lys Ala Leu Val
100 105 110
Phe Tyr Ala Gly Lys Pro Pro Lys Gly Val Lys Thr Asn Trp Ile Met
115 120 125
His Glu Tyr Arg Leu Ala Asp Val Asp Arg Ser Ala Ala Ala Arg Lys
130 135 140
Lys Thr Asn Asn Ala Leu Arg Leu Asp Asp Trp Val Leu Cys Arg Ile
145 150 155 160
Tyr Asn Lys Lys Gly Val Ile Glu Arg Tyr Asp Thr Val Asp Asp Asp
165 170 175
Asp Gly Asp Gly Ala Val Ala Glu Asp Val Lys Pro Val Pro Ala Pro
180 185 190
Ala Ala Ser Lys Asn Pro Arg Ser Ala Ser Ala Thr Cys Ser Arg Arg
195 200 205
Thr Cys Thr Asn Arg Ser Asp Ala Thr Arg Arg Asp Ala Ser Ala Ala
210 215 220
Thr Pro Arg Leu Arg Ala Pro Leu Gly His
225 230
<210> 44
<211> 1019
<212> DNA
<213> Vitis vinifera
<400> 44
gtttcaagcg ccgtcttggc tcagagcaaa gccgtgagag aagagaaaaa aaaggtcagg 60
gagaaacatt cattcaagag aggaaggaga gagaagctaa tatgacagcg gagttgcagt 120
tacctccagg cttcaggttc catccgacgg atgaggagct tgtgatgcac tatctgtgcc 180
gtaaatgtgc atcgcaatcg atcgccgtgc cgatcattgc cgaaattgat ctctacaaat 240
tcgatccctg gcagcttcct gagatggcct tgtacggaga gaaagagtgg tacttctttt 300
cgccgagaga tcggaaatat ccgaacggtt caaggccgaa ccgggcagcg ggaacagggt 360
actggaaggc caccggagcg gataagccta ttgggcatcc gaagccggtt gggattaaga 420
aggctttggt tttttatgcc ggaaaagccc ccaggggaga gaagacaaat tggattatgc 480
atgaataccg gctggcagac gtggaccggt cggctcgcaa gaagaataat agcttaaggt 540
tggacgattg ggttctgtgc cgcatataca acaagaaggg cattgtcgag aaacaacaca 600
ccgctgcccg gaaatcagat tgctccgatg ttgaggatca aaagcctgga cctcttgctc 660
taagcaggaa ggtaggtgcg atgcctccac ctccgccgcc atcgtcctct acggcaccaa 720
ctgcgacagc ggcactggac gatttggtgt acttcgactc atcggattcg gtgccgcgcc 780
tccacaccga ctcgagctgt tcggagcacg tggtgtcgcc ggagttcacg tgcgagaggg 840
aggtgcagag cgagcccaag tggaaggagt gggaaaatcc catggacttt tcgtacaatt 900
acatggatgc cacagttgac aacgcatttt tgtctcagtt cccgaataat cagatgtcgc 960
cattgcagga catgttcatg tacctgcaga agcccttctg atctgtcatc gcatcaaaa 1019
<210> 45
<211> 299
<212> PRT
<213> Vitis vinifera
<400> 45
Met Thr Ala Glu Leu Gln Leu Pro Pro Gly Phe Arg Phe His Pro Thr
1 5 10 15
Asp Glu Glu Leu Val Met His Tyr Leu Cys Arg Lys Cys Ala Ser Gln
20 25 30
Ser Ile Ala Val Pro Ile Ile Ala Glu Ile Asp Leu Tyr Lys Phe Asp
35 40 45
Pro Trp Gln Leu Pro Glu Met Ala Leu Tyr Gly Glu Lys Glu Trp Tyr
50 55 60
Phe Phe Ser Pro Arg Asp Arg Lys Tyr Pro Asn Gly Ser Arg Pro Asn
65 70 75 80
Arg Ala Ala Gly Thr Gly Tyr Trp Lys Ala Thr Gly Ala Asp Lys Pro
85 90 95
Ile Gly His Pro Lys Pro Val Gly Ile Lys Lys Ala Leu Val Phe Tyr
100 105 110
Ala Gly Lys Ala Pro Arg Gly Glu Lys Thr Asn Trp Ile Met His Glu
115 120 125
Tyr Arg Leu Ala Asp Val Asp Arg Ser Ala Arg Lys Lys Asn Asn Ser
130 135 140
Leu Arg Leu Asp Asp Trp Val Leu Cys Arg Ile Tyr Asn Lys Lys Gly
145 150 155 160
Ile Val Glu Lys Gln His Thr Ala Ala Arg Lys Ser Asp Cys Ser Asp
165 170 175
Val Glu Asp Gln Lys Pro Gly Pro Leu Ala Leu Ser Arg Lys Val Gly
180 185 190
Ala Met Pro Pro Pro Pro Pro Pro Ser Ser Ser Thr Ala Pro Thr Ala
195 200 205
Thr Ala Ala Leu Asp Asp Leu Val Tyr Phe Asp Ser Ser Asp Ser Val
210 215 220
Pro Arg Leu His Thr Asp Ser Ser Cys Ser Glu His Val Val Ser Pro
225 230 235 240
Glu Phe Thr Cys Glu Arg Glu Val Gln Ser Glu Pro Lys Trp Lys Glu
245 250 255
Trp Glu Asn Pro Met Asp Phe Ser Tyr Asn Tyr Met Asp Ala Thr Val
260 265 270
Asp Asn Ala Phe Leu Ser Gln Phe Pro Asn Asn Gln Met Ser Pro Leu
275 280 285
Gln Asp Met Phe Met Tyr Leu Gln Lys Pro Phe
290 295
<210> 46
<211> 1062
<212> DNA
<213> Populus trichocarpa
<400> 46
cctcctcatg tctatctctt ggagagtatc ataattcaga aagcaagagc taagcagcag 60
cagcagcagc acagcaagaa caagcagctc tcttagagag attcaagaca aggaagaaaa 120
gcaccaagaa cgatttcaaa gctgggaatg aaaggaaata gatcagcaga tcagttggag 180
ttaccagctg gatttagatt tcatccaaca gatgatgagt tggtgaatca ttacttgctt 240
aagaaatgtg gaggccaatc aatttctgct cctattattg ctgagattga tctttataag 300
tatgatcctt ggcagcttcc agaaatggca ctatatggtg aaaaggaatg gtacttcttt 360
tctccaaggg atagaaaata tccaaacggt tcaaggccga accgggcggc tggaaccggg 420
tattggaaag caaccggagc agataaaccc attggtcggc ccaaaccact aggcataaaa 480
aaagctcttg tattttatgc tggtaaagct cctaaaggaa tcaaaaccaa ttggatcatg 540
catgaatatc gccttgctaa tgttgacagg actgccggca agaaaaataa cctcaggctt 600
gatgattggg tattatgtag aatatacaac aagaaaggaa gcgtagagaa gcattttcct 660
gctgaaagaa aatcaatagc aaagtatcca gagatggaag agcagaagcc caacatcagt 720
gaaatgtctg gctatcataa tggaatgtca caaattgcag caccgacaat gatgatgagt 780
aatagcaatg acttcttata tatggacaca tctgattcaa ttccaaggtt gaatacagac 840
tcaagtagtt cagagcacgt gctgtcacct gaggtcacat gcgagaagga ggttcagagt 900
cagccaaaat ggaatgatca gctagataat gccttcgatt tcaacttcaa ttacattgat 960
gatggcttcc aagattaccc ttttgcttca caagatcagt tccaattgga ccagctctca 1020
cctttgcagg acatgttcat gtatttacag aagccatttt ga 1062
<210> 47
<211> 304
<212> PRT
<213> Populus trichocarpa
<400> 47
Met Lys Gly Asn Arg Ser Ala Asp Gln Leu Glu Leu Pro Ala Gly Phe
1 5 10 15
Arg Phe His Pro Thr Asp Asp Glu Leu Val Asn His Tyr Leu Leu Lys
20 25 30
Lys Cys Gly Gly Gln Ser Ile Ser Ala Pro Ile Ile Ala Glu Ile Asp
35 40 45
Leu Tyr Lys Tyr Asp Pro Trp Gln Leu Pro Glu Met Ala Leu Tyr Gly
50 55 60
Glu Lys Glu Trp Tyr Phe Phe Ser Pro Arg Asp Arg Lys Tyr Pro Asn
65 70 75 80
Gly Ser Arg Pro Asn Arg Ala Ala Gly Thr Gly Tyr Trp Lys Ala Thr
85 90 95
Gly Ala Asp Lys Pro Ile Gly Arg Pro Lys Pro Leu Gly Ile Lys Lys
100 105 110
Ala Leu Val Phe Tyr Ala Gly Lys Ala Pro Lys Gly Ile Lys Thr Asn
115 120 125
Trp Ile Met His Glu Tyr Arg Leu Ala Asn Val Asp Arg Thr Ala Gly
130 135 140
Lys Lys Asn Asn Leu Arg Leu Asp Asp Trp Val Leu Cys Arg Ile Tyr
145 150 155 160
Asn Lys Lys Gly Ser Val Glu Lys His Phe Pro Ala Glu Arg Lys Ser
165 170 175
Ile Ala Lys Tyr Pro Glu Met Glu Glu Gln Lys Pro Asn Ile Ser Glu
180 185 190
Met Ser Gly Tyr His Asn Gly Met Ser Gln Ile Ala Ala Pro Thr Met
195 200 205
Met Met Ser Asn Ser Asn Asp Phe Leu Tyr Met Asp Thr Ser Asp Ser
210 215 220
Ile Pro Arg Leu Asn Thr Asp Ser Ser Ser Ser Glu His Val Leu Ser
225 230 235 240
Pro Glu Val Thr Cys Glu Lys Glu Val Gln Ser Gln Pro Lys Trp Asn
245 250 255
Asp Gln Leu Asp Asn Ala Phe Asp Phe Asn Phe Asn Tyr Ile Asp Asp
260 265 270
Gly Phe Gln Asp Tyr Pro Phe Ala Ser Gln Asp Gln Phe Gln Leu Asp
275 280 285
Gln Leu Ser Pro Leu Gln Asp Met Phe Met Tyr Leu Gln Lys Pro Phe
290 295 300
<210> 48
<211> 2361
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 48
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cgattcttat ggttttgtct atttggccac tgcttcagac acttgggcat gctttgtgaa 540
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caacaattca tttgtttttg tctcgtttga tgactgtgcc gttggagagc ttcaaccttc 660
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gctacagaat gcaagttaca cagatatcat aggattcata aggaaaggat ttagtgttcg 780
gtttccatat cgtcctgacc agtaccagag tcctcgtatg agcgccaggg aatgcctgaa 840
ggattcaaac aggtacttca aggagcgtat atctcatcca agcattctga atttaacccg 900
tgctattttc tggagcgaaa caaactccga agtagactgc ggatatgaag ttgcccccca 960
aaaagatagg atttttttgg gaaccatagt atcggctatt gatatcatca aatttcattt 1020
cgttttattc aggttagtgt tggggtcact ggtggtattc atcttccttg cccacaagta 1080
ctggaaaaca gggatcacga tcgacgcagt agagaagttc cttcgaatgc agcagatgat 1140
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gggctacata gctcccgaga tgatctctcg gagcttcggt gtcatatcaa gcaaatccga 1740
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gcgagaaaca agcgagatct ctgacattgc tgatatgcat gaactagaga agaagctttg 1920
cattgttgga ttgtggtgca ttcagatgag gtcatgtgat cgaccgacga tgagcgaggt 1980
gatagagatg cttgaaggtg gcagtgatga actgcaggtt cctccaaggc cattcttctg 2040
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acatataata aagtgagagc ttgtaatatt taggagtgta tgcttaatct ccacaagaca 2340
gtattatgaa taatcttctc t 2361
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<211> 706
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 49
Met Ala Lys Ser Asn Ala Ser Arg Ala Ser Ala Thr Arg Arg Lys Phe
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35 40 45
Ser Cys Gly Asp Leu Gly Asn Ile Ser Tyr Pro Phe Arg Leu Ala Ser
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100 105 110
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115 120 125
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Pro Trp Tyr Arg Pro Val Thr Cys Leu Leu Pro Asn Asn Ser Phe Val
180 185 190
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195 200 205
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Arg Lys Gly Phe Ser Val Arg Phe Pro Tyr Arg Pro Asp Gln Tyr Gln
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Ser Pro Arg Met Ser Ala Arg Glu Cys Leu Lys Asp Ser Asn Arg Tyr
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275 280 285
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Asp Ile Ile Lys Phe His Phe Val Leu Phe Arg Leu Val Leu Gly Ser
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Leu Val Val Phe Ile Phe Leu Ala His Lys Tyr Trp Lys Thr Gly Ile
340 345 350
Thr Ile Asp Ala Val Glu Lys Phe Leu Arg Met Gln Gln Met Ile Gly
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370 375 380
Arg Asp Lys Leu Gly Gln Gly Gly Tyr Gly Ser Val Tyr Lys Gly Val
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Arg Ile His His Val Asn Val Val Arg Leu Val Gly Phe Cys Ser Glu
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Glu Met Arg Arg Ala Leu Val Tyr Glu Tyr Met Pro Arg Gly Ser Leu
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Asp Lys Tyr Ile Phe Ser Ser Glu Lys Ser Phe Ser Trp Asp Lys Leu
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485 490 495
Gly Cys Glu Met Gln Ile Leu His Phe Asp Ile Lys Pro His Asn Ile
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Leu Leu Asp Asp Asn Phe Val Pro Lys Val Ala Asp Phe Gly Leu Ala
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Gly Thr Val Gly Tyr Ile Ala Pro Glu Met Ile Ser Arg Ser Phe Gly
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595 600 605
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Tyr Gln
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 50
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cgaaaaaaaa aaaaaaaaa 4699
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<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 51
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Gly Val Val Asp Val His Gly Leu Gly Pro Arg Glu Arg Arg Ala Leu
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195 200 205
Ala Leu Ala Gly Arg Leu Gly Lys Asp Leu Lys Ala Ser Gly Lys Val
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245 250 255
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755 760 765
Ala Met Ile Gly Phe Thr Ile Leu Phe Asn Ala Leu Phe Thr Leu Ala
770 775 780
Leu Thr Tyr Leu Arg Pro Tyr Gly Asn Ser Arg Gln Ser Val Ser Glu
785 790 795 800
Glu Glu Met Lys Glu Lys Arg Ala Asn Leu Asn Gly Glu Ile Val Gly
805 810 815
Asp Val His Leu Ser Ser Gly Ser Thr Arg Arg Pro Met Gly Asn Gly
820 825 830
Thr Glu Asn Asp Ser Thr Ile Val Asp Asp Asp Thr Glu Val Thr Gln
835 840 845
Arg Gly Met Val Leu Pro Phe Thr Pro Leu Ser Leu Ser Phe Asp Asn
850 855 860
Val Arg Tyr Ser Val Asp Met Pro Gln Glu Met Lys Ala Gln Gly Val
865 870 875 880
Ala Asp Asp Arg Leu Glu Leu Leu Lys Gly Val Ser Gly Ser Phe Arg
885 890 895
Pro Gly Val Leu Thr Ala Leu Met Gly Val Ser Gly Ala Gly Lys Thr
900 905 910
Thr Leu Met Asp Val Leu Ala Gly Arg Lys Thr Gly Gly Tyr Ile Glu
915 920 925
Gly Ser Ile Asn Ile Ser Gly Tyr Pro Lys Lys Gln Glu Thr Phe Ala
930 935 940
Arg Val Ser Gly Tyr Cys Glu Gln Asn Asp Ile His Ser Pro Gln Val
945 950 955 960
Thr Val Tyr Glu Ser Leu Leu Phe Ser Ala Trp Leu Arg Leu Pro Glu
965 970 975
Asp Val Asp Ser Asn Thr Arg Lys Met Phe Ile Glu Glu Val Met Glu
980 985 990
Leu Val Glu Leu Lys Ser Leu Arg Asp Ala Leu Val Gly Leu Pro Gly
995 1000 1005
Val Asn Gly Leu Ser Thr Glu Gln Arg Lys Arg Leu Thr Ile Ala
1010 1015 1020
Val Glu Leu Val Ala Asn Pro Ser Ile Ile Phe Met Asp Glu Pro
1025 1030 1035
Thr Ser Gly Leu Asp Ala Arg Ala Ala Ala Ile Val Met Arg Thr
1040 1045 1050
Val Arg Asn Thr Val Asn Thr Gly Arg Thr Val Val Cys Thr Ile
1055 1060 1065
His Gln Pro Ser Ile Asp Ile Phe Glu Ala Phe Asp Glu Leu Phe
1070 1075 1080
Leu Met Lys Arg Gly Gly Glu Glu Ile Tyr Ala Gly Pro Leu Gly
1085 1090 1095
His His Ser Ser Glu Leu Ile Lys Tyr Phe Glu Ser Ile Pro Gly
1100 1105 1110
Val Ser Lys Ile Lys Asp Gly Tyr Asn Pro Ala Thr Trp Met Leu
1115 1120 1125
Glu Val Thr Thr Ile Gly Gln Glu Gln Ala Leu Gly Val Asp Phe
1130 1135 1140
Ser Asp Ile Tyr Lys Lys Ser Glu Leu Tyr Gln Ser Asn Lys Ala
1145 1150 1155
Leu Ile Lys Asp Leu Ser Gln Pro Ala Pro Asp Ser Ser Asp Leu
1160 1165 1170
Tyr Phe Pro Thr Gln Tyr Ser Gln Ser Ser Leu Thr Gln Cys Met
1175 1180 1185
Ala Cys Leu Trp Lys Gln Asn Leu Ser Tyr Trp Arg Asn Pro Pro
1190 1195 1200
Tyr Asn Ala Val Lys Phe Phe Phe Thr Thr Val Ile Ala Leu Leu
1205 1210 1215
Phe Gly Thr Ile Phe Trp Asp Leu Gly Gly Lys Val Thr Lys Ser
1220 1225 1230
Gln Asp Leu Phe Asn Ala Met Gly Ser Met Tyr Ala Ala Val Leu
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Phe Ile Gly Val Met Asn Cys Thr Ser Val Gln Pro Val Val Ala
1250 1255 1260
Val Glu Arg Thr Val Phe Tyr Arg Glu Arg Ala Ala Gly Met Tyr
1265 1270 1275
Ser Ala Phe Pro Tyr Ala Phe Gly Gln Val Val Ile Glu Ile Pro
1280 1285 1290
Tyr Thr Leu Val Gln Ala Thr Val Tyr Gly Ile Ile Val Tyr Ala
1295 1300 1305
Met Ile Gly Phe Glu Trp Thr Ala Ala Lys Phe Phe Trp Tyr Leu
1310 1315 1320
Phe Phe Met Val Phe Thr Leu Leu Tyr Phe Thr Phe Tyr Gly Met
1325 1330 1335
Met Ala Val Gly Leu Thr Pro Asn Tyr His Ile Ala Ser Ile Val
1340 1345 1350
Ser Ser Ala Phe Tyr Ala Ile Trp Asn Leu Phe Ser Gly Phe Val
1355 1360 1365
Ile Pro Arg Pro Arg Val Pro Ile Trp Trp Arg Trp Tyr Cys Trp
1370 1375 1380
Ala Cys Pro Val Ala Trp Thr Leu Tyr Gly Leu Val Val Ser Gln
1385 1390 1395
Phe Gly Asp Ile Glu Thr Pro Met Glu Asp Gly Thr Pro Val Lys
1400 1405 1410
Val Phe Val Glu Asn Tyr Phe Gly Phe Lys His Ser Trp Leu Gly
1415 1420 1425
Trp Val Ala Thr Val Val Ala Ala Phe Ala Phe Leu Phe Ala Ser
1430 1435 1440
Leu Phe Gly Phe Ala Ile Met Lys Phe Asn Phe Gln Lys
1445 1450 1455
<210> 52
<211> 1601
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 52
agcgtctctc ttcatcctaa tcacctcgat cattcgctac gtttttgctt gttcagagca 60
acgcatcgca tcatgcctcg tccacctgaa cctgtgcacg tgctgcttct tgctgccatc 120
gcagtgcaag tgttcgtccg gtgcacagca caagctgcga gtgatcagaa gccactagtc 180
tccaggctcg ccaaggatta caacacctca ctctacacca tctccgtcaa gaacggcgcg 240
ccgccgctcg tcgtcgacct cgccggcgcg ctcgtctggt cgacgtgccc gtccacgcac 300
tccacggtgc catgccagtc cgccgcgtgc gacgcggtca accggcagca gcctcgccgc 360
tgccggtacg tcgacggcgg ctggttctgg gccggccgcg aaccggggtc gcgctgcgcc 420
tgcaccgccc acccgttcaa tccggtcacc ggcgagtgct ccaccggcga tctgacgaca 480
ttcaccatgt cggcgaacac gaccaacggc accgacctgc tgtacccgga gtcgttcacc 540
gccgtcggcg cgtgcgcgcc ggagcggctg ctggcgtcgc cgtcgctgcc gcaggcggcc 600
gccggcgtcg cggggttctc cgggacgacg ccgctctcgc tgccgtcgca gctcgccgcg 660
cagcgccggt tcggcagcac gttcgccctg tgcctgccgg tgttcgcgac gttcggcgac 720
acgccggtgt acctgcccaa ctacaacccg tacgggccct tcgactacac caagatgctc 780
cggcgaaccc cgttcctgac gaacccgagg aggaacggcg gttactacct ccccgtaaaa 840
cgcatctccg tgtcgtggcg cgggcccggc gacgtcccgg tgtccctgcc cgccggcgcg 900
ctcgacctca acgcccgcac gggccgcggc ggcgtcgtgc tcagcaccac gacgccgtac 960
gcgatcatgc gcaccgacgt gttccgcgcc ttcggcaagg cgttcgacac agtcgtgacc 1020
agaggaacgg aaagcagaat ggcgagggtg gccaggcaga agcagttcga gctttgttac 1080
ggcggcgcag gcgacaccat gttgtcattc cctatgatga agcggacggg cttcgacgcg 1140
ccggcgatca ccctggagtt ggacgccgga gccacgggta actggacgat actgaacggc 1200
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tgttacagcg caagcttttt gtgaggaaat aactttatcg tgtctcaggc gttttccaat 1440
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tgtcacgtac cagccttgat gaatcctgca gggatgaaac ttttgttgct gaagctcaaa 1560
attcaaaagt aatcgatcta aacttgttca aaaaaaaaaa t 1601
<210> 53
<211> 443
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 53
Met Pro Arg Pro Pro Glu Pro Val His Val Leu Leu Leu Ala Ala Ile
1 5 10 15
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Lys Pro Leu Val Ser Arg Leu Ala Lys Asp Tyr Asn Thr Ser Leu Tyr
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Cys Gln Ser Ala Ala Cys Asp Ala Val Asn Arg Gln Gln Pro Arg Arg
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Cys Arg Tyr Val Asp Gly Gly Trp Phe Trp Ala Gly Arg Glu Pro Gly
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Ala Gly Val Ala Gly Phe Ser Gly Thr Thr Pro Leu Ser Leu Pro Ser
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Asn Pro Tyr Gly Pro Phe Asp Tyr Thr Lys Met Leu Arg Arg Thr Pro
225 230 235 240
Phe Leu Thr Asn Pro Arg Arg Asn Gly Gly Tyr Tyr Leu Pro Val Lys
245 250 255
Arg Ile Ser Val Ser Trp Arg Gly Pro Gly Asp Val Pro Val Ser Leu
260 265 270
Pro Ala Gly Ala Leu Asp Leu Asn Ala Arg Thr Gly Arg Gly Gly Val
275 280 285
Val Leu Ser Thr Thr Thr Pro Tyr Ala Ile Met Arg Thr Asp Val Phe
290 295 300
Arg Ala Phe Gly Lys Ala Phe Asp Thr Val Val Thr Arg Gly Thr Glu
305 310 315 320
Ser Arg Met Ala Arg Val Ala Arg Gln Lys Gln Phe Glu Leu Cys Tyr
325 330 335
Gly Gly Ala Gly Asp Thr Met Leu Ser Phe Pro Met Met Lys Arg Thr
340 345 350
Gly Phe Asp Ala Pro Ala Ile Thr Leu Glu Leu Asp Ala Gly Ala Thr
355 360 365
Gly Asn Trp Thr Ile Leu Asn Gly Asn Tyr Leu Val Arg Glu Thr Cys
370 375 380
Val Gly Val Val Glu Met Gly Pro Glu Gly Met Pro Val Asp Gly Glu
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Pro Ala Val Val Leu Gly Gly Met Gln Leu Glu Asn Ile Leu Met Val
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Phe Asp Leu Asp Lys Arg Thr Leu Gly Phe Ser Arg Leu Leu Glu Trp
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Asp Leu Thr Asn Cys Tyr Ser Ala Ser Phe Leu
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 54
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<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 55
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Phe Leu Ala Leu Leu Leu Leu Val Arg Ile Gly Gly Lys Arg Gly Arg
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Gly Gly Asp Gly Ala Arg Leu Arg Gln Pro Pro Pro Gly Pro Trp Arg
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Leu Pro Val Ile Gly Asn Leu His Gln Leu Met Leu Arg Gly Pro Leu
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Val His Arg Thr Met Ala Asp Leu Ala Arg Gly Leu Asp Asp Ala Pro
65 70 75 80
Leu Met Arg Leu Gln Leu Gly Gly Val Pro Val Val Val Ala Ser Ser
85 90 95
Pro Asp Ala Ala Arg Glu Val Thr Cys Thr His Asp Ala Ala Phe Ala
100 105 110
Ser Arg Pro Trp Pro Pro Thr Val Arg Arg Leu Arg Pro His Arg Glu
115 120 125
Gly Val Val Phe Ala Pro Tyr Gly Ala Met Trp Arg Gln Leu Arg Lys
130 135 140
Val Cys Ile Val Glu Met Leu Ser Ala Arg Arg Val Arg Ser Phe Arg
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Arg Val Arg Glu Glu Glu Ala Ala Asn Leu Ala Ala Ala Val Ala Ala
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Pro Pro Ala Arg Arg Asp Ala Val Asn Val Ser Ala
180 185 190
Leu Val Ala Ala Ala Val Ala Asp Ala Thr Met Arg Val Val Ile Gly
195 200 205
Asp Arg Leu Glu Arg Arg Glu Glu Phe Leu Glu Ser Met Thr Glu Ala
210 215 220
Val Arg Ser Phe Thr Gly Phe Ser Leu Asp Asp Leu Phe Pro Ser Ser
225 230 235 240
Arg Ile Ala Ala Ala Val Gly Gly Met Thr Arg Arg Ala Glu Ala Ser
245 250 255
His Arg Lys Gly Asn Glu Leu Ile Glu Ser Ala Ile Arg Gln His Glu
260 265 270
Gln Val Arg Asp Ala Met Ala Ala Gln Gly Gly Gly Gly Ala Met Glu
275 280 285
Glu Asp Leu Leu Asp Thr Leu Leu Arg Ile Gln Lys Glu Gly Ala Leu
290 295 300
Asp Met Pro Leu Thr Met Asp Asn Ile Lys Ala Val Ile Gln Glu Thr
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Leu Arg Leu His Pro Val Val Pro Leu Leu Leu Pro Arg Glu Cys Leu
325 330 335
His Ala Cys Lys Val Met Gly Tyr Asp Val Pro Lys Gly Thr Thr Val
340 345 350
Phe Val Asn Ile Trp Ala Ile Asn Arg Asp Pro Lys His Trp Asp Asp
355 360 365
Pro Glu Val Phe Lys Pro Glu Arg Phe Asp Asp Gly Lys Ile Asp Phe
370 375 380
Lys Gly Ala Asn Phe Glu Tyr Ile Pro Phe Gly Ala Gly Arg Arg Ser
385 390 395 400
Cys Pro Gly Val Thr Phe Gly His Ala Thr Val Glu Leu Met Leu Ala
405 410 415
Thr Leu Leu Tyr His Phe Lys Trp Glu Leu Leu Glu Gly Val Ala Pro
420 425 430
Asn Glu Leu Asp Met Thr Glu Glu Ile Gly Ile Asn Val Gly Arg Lys
435 440 445
Asn Pro Leu Trp Leu Cys Pro Ile Val Arg Val Pro Leu
450 455 460
<210> 56
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 56
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<210> 57
<211> 402
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 57
Met Ser Asp Ile Ala Met Pro Ser Ser Gly Val Ser Val Gly Val Phe
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Leu Ser Val Phe Met Cys Phe Trp Leu Tyr Leu Gly Leu Gln Lys Arg
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Lys Leu Ile Arg Thr Lys Gln Arg Phe Phe Glu Gln Asn Gly Gly Val
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Ile Leu Gln Gln Gln Met His Ser Gly Gly Gly Thr Gly Gly Phe Lys
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Ile Phe Ser Thr Glu Glu Leu Lys Lys Ala Thr Asn Asn Phe Ala Ala
65 70 75 80
Asp Arg Val Leu Gly Arg Gly Gly His Gly Val Val Tyr Lys Gly Val
85 90 95
Leu Glu Asp Asn Met Val Val Ala Ile Lys Lys Ser Lys Met Met Glu
100 105 110
Glu Ala Gln Thr Lys Glu Phe Ala Arg Glu Met Phe Ile Leu Ser Gln
115 120 125
Ile Asn His Arg Asn Val Val Lys Leu Leu Gly Cys Cys Leu Glu Val
130 135 140
Glu Val Pro Met Leu Val Tyr Glu Phe Val Ser Asn Gly Thr Leu Tyr
145 150 155 160
His Tyr Ile His Gly Lys Glu Pro Thr Thr Asp Ile Ala Leu Asp Asn
165 170 175
Arg Leu Arg Ile Ala Ala Lys Ser Ala Glu Ala Leu Ala Tyr Met His
180 185 190
Ser Ser Ala Ser Pro Pro Ile Leu His Gly Asp Val Lys Thr Ala Asn
195 200 205
Ile Leu Leu Asp Asp Lys Leu Asn Ala Lys Val Ala Asp Phe Gly Ala
210 215 220
Ser Lys Leu Ala Pro Thr Asp Glu Ala Ala Ile Ala Thr Leu Val Gln
225 230 235 240
Gly Thr Cys Gly Tyr Leu Asp Pro Glu Tyr Leu Met Thr Cys Gln Leu
245 250 255
Thr Asp Lys Ser Asp Val Tyr Ser Phe Gly Val Val Val Leu Glu Leu
260 265 270
Leu Thr Arg Lys Lys Ala Leu Tyr Leu Asp Gly Pro Glu Glu Asp Met
275 280 285
Ser Leu Val Ser Arg Phe Thr Thr Ala Val Lys Ala Gly Arg His Arg
290 295 300
Glu Leu Met Asp Ser Gln Val Arg Lys Glu Met Asn Asp Glu Met Ala
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Thr Glu Ile Ala Asp Leu Leu Met Arg Cys Leu Ser Met Asn Gly Glu
325 330 335
Glu Arg Pro Thr Met Lys Glu Val Ala Glu Arg Leu Glu Met Leu Arg
340 345 350
Arg Tyr Gln Gln His Pro Trp Ala Glu Ala Lys Gly Asn Ala Glu Glu
355 360 365
Asn Gln Ser Leu Leu Gly Ile Glu His Gln Asn Pro Asn Tyr Gln Phe
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Arg Gln His Asp Val Leu Asp Leu Glu Glu Gly Ser Thr Tyr Thr Phe
385 390 395 400
Ser Leu
<210> 58
<211> 1560
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 58
actcgagctc gaacaatcta tatattgtca gagacgcaca ctttactgat cagctagtta 60
gtcccagttc tgaagaacaa ctggaaaaag aaaatcgagc tgtaaaaata ttagtaccag 120
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ggatccccgc aagaacgccc acctgcttga tcttgaggga gccaaggaga ggctgacact 360
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cgtcttccac atcgcctccc cggtgtccaa ggaccctaat ctggtgccgg tcgcgattga 480
ggggacgagg aacgtgatga aggcggcggc ggacatgggc gtgcggcgcg tggtgttcac 540
gtcgtcgtac ggcgccgtgc acatgaaccc caaccggagc cccgacgccg tcctcgacga 600
gtcctgctgg agcgaccccg aattctgcca gcgagaggac atatactgct acgccaagat 660
gatggcggag aagacggcga cggaggaggc gtcgaggcgt cggctgcagc tcgcggtggt 720
ggtgccgtgc gtgacggtgg gtcccatcct gcagccgtcc gtcaacttca gctgccacca 780
cgtcgtccgc tacctcaccg gcgccgcggc cacctacccc aacgccgtcg ccgcctacgc 840
cgacgtccgc gacgtcgccc gcgcccacgt cctcgtctac gagcaccacg gcgcgcgcgg 900
ccgctacctc tgcatcggca ccgtcatcca ccgcgccgag ctcctccgga tgctcaagga 960
gctcttcccc cagtaccccg tcacttcaaa gtgtgaggat gaggggaatc agatggtgaa 1020
gccgtacaag ttctcgaacc agaggctcag ggatttgggt ttggagttta ctccactgag 1080
gaagagcttg catgaggcga tcgaatgtct gcagcgcaag ggtcacctgc ctgttgtcac 1140
ggtggcacaa cagcgtgcat gtttgtagaa ccaagatttt atacacggtg aacttccaag 1200
ttccaaagat aataaaagca gagacatgac agcggcggca tatgcataac aaatttatat 1260
tttggcggcg gcttaaattt gaaattttgt ctacctgaag aataaagtag gagtaccata 1320
taaagggaag ttcagcgtgg aagaacccgt actactacta ctcctagcta gccagttcat 1380
atcgtaaatc tgcatgtgta acacaagttc tttctttggt atgaattaca tctgtatctc 1440
tactttgttc atacttctac gatataaaat gaaaaaaaat attatataat accgatcgag 1500
aatgtatcta agaaacagga atgaaattaa gggaggaata gcgcacctct cctctactct 1560
<210> 59
<211> 339
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 59
Met Ser Ser Asn Asn Ser Met Glu Ala Asn Asn Gly Asp Asp Glu Lys
1 5 10 15
Lys Gln Glu Gln Val Val Cys Val Thr Gly Ala Gly Gly Phe Ile Gly
20 25 30
Ser Trp Val Val Lys Glu Leu Leu Leu Arg Gly Tyr Arg Val Arg Gly
35 40 45
Thr Ala Arg Asp Pro Arg Lys Asn Ala His Leu Leu Asp Leu Glu Gly
50 55 60
Ala Lys Glu Arg Leu Thr Leu Cys Arg Ala Asp Val Leu Asp Phe Ala
65 70 75 80
Ser Leu Arg Ala Ala Phe Ala Gly Cys His Gly Val Phe His Ile Ala
85 90 95
Ser Pro Val Ser Lys Asp Pro Asn Leu Val Pro Val Ala Ile Glu Gly
100 105 110
Thr Arg Asn Val Met Lys Ala Ala Ala Asp Met Gly Val Arg Arg Val
115 120 125
Val Phe Thr Ser Ser Tyr Gly Ala Val His Met Asn Pro Asn Arg Ser
130 135 140
Pro Asp Ala Val Leu Asp Glu Ser Cys Trp Ser Asp Pro Glu Phe Cys
145 150 155 160
Gln Arg Glu Asp Ile Tyr Cys Tyr Ala Lys Met Met Ala Glu Lys Thr
165 170 175
Ala Thr Glu Glu Ala Ser Arg Arg Arg Leu Gln Leu Ala Val Val Val
180 185 190
Pro Cys Val Thr Val Gly Pro Ile Leu Gln Pro Ser Val Asn Phe Ser
195 200 205
Cys His His Val Val Arg Tyr Leu Thr Gly Ala Ala Ala Thr Tyr Pro
210 215 220
Asn Ala Val Ala Ala Tyr Ala Asp Val Arg Asp Val Ala Arg Ala His
225 230 235 240
Val Leu Val Tyr Glu His His Gly Ala Arg Gly Arg Tyr Leu Cys Ile
245 250 255
Gly Thr Val Ile His Arg Ala Glu Leu Leu Arg Met Leu Lys Glu Leu
260 265 270
Phe Pro Gln Tyr Pro Val Thr Ser Lys Cys Glu Asp Glu Gly Asn Gln
275 280 285
Met Val Lys Pro Tyr Lys Phe Ser Asn Gln Arg Leu Arg Asp Leu Gly
290 295 300
Leu Glu Phe Thr Pro Leu Arg Lys Ser Leu His Glu Ala Ile Glu Cys
305 310 315 320
Leu Gln Arg Lys Gly His Leu Pro Val Val Thr Val Ala Gln Gln Arg
325 330 335
Ala Cys Leu
<210> 60
<211> 1949
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 60
acctcgatca tatcatccat aatccttcaa gctcttgttg gctttgctta attgcagctg 60
ccactagctt tgttaggatc aatcacatcc atctacgtgt gtagagcgtc gtgacagaga 120
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ccctcggcgt ccgcaaccac gacgtcgtgt cggttttggc gccgaacgtg ccggcaatgt 360
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ccttcacctg gggcatggca gcgcgcggcg gcgtcaacgt ctgcatccgc gacgcgcgcg 900
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<210> 61
<211> 578
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 61
Met Glu Gln Leu Pro Lys Arg Pro Ala Asn Tyr Val Pro Leu Ser Pro
1 5 10 15
Val Gly Phe Leu Pro Arg Ala Asn Ala Val Tyr Gly Asp Arg Thr Ser
20 25 30
Val Ile Tyr Gly Arg Val Arg Phe Thr Trp Ser Gln Thr Tyr Ala Arg
35 40 45
Cys Arg Arg Leu Ala Ser Ser Leu Leu Ser Leu Gly Val Arg Asn His
50 55 60
Asp Val Val Ser Val Leu Ala Pro Asn Val Pro Ala Met Tyr Glu Met
65 70 75 80
His Phe Ala Val Pro Met Ala Gly Ala Val Leu Asn Thr Ile Asn Thr
85 90 95
Arg Leu Asp Ala Arg Ala Val Ala Gly Ile Leu Arg His Ser Glu Ala
100 105 110
Lys Val Phe Phe Val Asp Tyr Gln Tyr Val Arg Leu Ala Ser Asp Ala
115 120 125
Leu Gln Ile Val Ala Asp Glu Gly Arg His Val Pro Leu Val Ala Val
130 135 140
Ile Asp Asp Ile Asp Val Pro Thr Gly Val Arg Leu Gly Glu Leu Glu
145 150 155 160
Tyr Glu Gly Leu Val Ala Arg Gly Asp Pro Ala Ala Glu Leu Pro Ser
165 170 175
Leu Ala Asp Glu Trp Asp Ala Val Thr Leu Asn Tyr Thr Ser Gly Thr
180 185 190
Thr Ser Ala Pro Lys Gly Val Val Tyr Ser His Arg Gly Ala Tyr Leu
195 200 205
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210 215 220
Tyr Leu Trp Thr Leu Pro Met Phe His Cys Asn Gly Trp Thr Phe Thr
225 230 235 240
Trp Gly Met Ala Ala Arg Gly Gly Val Asn Val Cys Ile Arg Asp Ala
245 250 255
Arg Ala Ala Asp Ile Tyr Arg Ala Ile Ala Arg His Gly Val Thr His
260 265 270
Leu Cys Cys Ala Pro Val Val Phe Asn Ile Leu Leu Glu Gly Gly Glu
275 280 285
Ala Ala Ala Lys Gln Leu Ala Ala Pro Val His Val Leu Thr Gly Gly
290 295 300
Ala Pro Pro Pro Ala Ala Leu Leu Glu Arg Val Glu Arg Ile Gly Phe
305 310 315 320
Arg Val Thr His Ala Tyr Gly Leu Thr Glu Ala Thr Gly Pro Ala Leu
325 330 335
Ala Cys Glu Trp Arg Ala Gln Trp Asp Arg Leu Pro Leu Pro Glu Arg
340 345 350
Ala Arg Leu Lys Ser Arg Gln Gly Val Ser Val Leu Ser Leu Ala Asp
355 360 365
Ala Asp Val Lys Asp Ala Lys Thr Met Ala Arg Val Pro Arg Asp Gly
370 375 380
Lys Thr Val Gly Glu Ile Val Leu Arg Gly Ser Ser Ile Met Lys Gly
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Tyr Leu Asn Asn Pro Glu Ala Asn Ser Asp Ala Phe Lys Gly Glu Trp
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Phe Leu Thr Gly Asp Val Gly Val Val His Ala Asp Gly Tyr Ile Glu
420 425 430
Ile Lys Asp Arg Ser Lys Asp Val Ile Ile Ser Gly Gly Glu Asn Ile
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Cys Ser Lys Glu Val Glu Glu Val Leu Phe Gln His Pro Ala Val Ala
450 455 460
Asp Ala Ala Val Val Ala Met Pro His Pro His Trp Gly Glu Thr Pro
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Cys Ala Phe Val Val Ala Arg Asp Lys Ala Ala Gly Val Cys Glu Asp
485 490 495
Asp Val Val Ala Phe Cys Arg Lys His Met Ala Arg Phe Met Val Pro
500 505 510
Lys Lys Val Val Val Tyr Asp Ala Ile Pro Arg Asn Gly Asn Gly Lys
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Val Glu Lys Asn Leu Leu Arg Glu Ala Ala Lys Lys Leu Ala Pro Ala
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Ala Val Pro Ala Gln Lys Thr Lys Val Lys Thr Thr Thr Thr Thr Val
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Gly Gly Arg Arg Gly Glu His Pro Val Ala His Val Met Ala Val Ser
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Arg Leu
<210> 62
<211> 838
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 62
aataattagc ctgtgatccc tcatccctga acttcccaga gagggagagc tcagagaaaa 60
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<213> Oryza sativa
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Met Ala Ser Ser Ser Lys Leu Ser Ala Leu Phe Leu Thr Ala Ile Leu
1 5 10 15
Leu Cys Leu Ile Cys Thr Arg Ser Gln Ala Ala Arg Pro Glu Pro Gly
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Ser Ser Gly His Lys Ser Gln Gly Val Val Ala Ser Ser Ile Ala His
35 40 45
Gln Lys Ser Val Gly Ser Ser Gly Ile Gly Val Glu Met His Gln Gly
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Glu Pro Asp Gln Ala Val Glu Cys Lys Gly Gly Glu Ala Glu Glu Glu
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Cys Leu Met Arg Arg Thr Leu Val Ala His Thr Asp Tyr Ile Tyr Thr
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Gln Gly Asn His Asn
100
<210> 64
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 64
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<213> Oryza sativa
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Met Ala Leu Leu Ala Arg Arg Ala Arg Lys Ala Val Met Ala Lys Ala
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Pro Ala Pro Leu Leu Gln Lys Arg Gly Gly Gly Ala Ala Ala Glu Leu
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Ala Ile Pro Ala His Phe Arg Cys Pro Ile Ser Leu Asp Leu Met Arg
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Glu Ala Trp Leu Asp Thr Gly Arg Ala Val Cys Pro Val Thr His Ala
65 70 75 80
Pro Leu Arg His Glu Asp Leu Val Pro Asn His Ala Ile Arg Arg Val
85 90 95
Ile Gln Asp Trp Cys Val Ala Asn Arg Ser Arg Gly Val Glu Arg Ile
100 105 110
Pro Thr Pro Lys Ile Pro Val Thr Pro Val Gln Ala Ser Glu Leu Leu
115 120 125
Phe Asp Val Ala Glu Ser Ala Ala Arg Arg Gly Ala Ala Gly Arg Ala
130 135 140
Ala Gly Ala Val Ala Arg Val Arg Ala Leu Ala Arg Asp Ser Glu Arg
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Asn Arg Arg Cys Phe Val Ser Val Gly Thr Gly Arg Val Leu Ala Ala
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Ala Phe Glu Ser Leu Ala Ala Ala Gly Glu Ala Gly Val Leu Glu Asp
180 185 190
Val Leu Ala Ala Leu Val Cys Met Met Pro Leu Asp Glu Glu Ala Ala
195 200 205
Arg Val Leu Ala Ser Ser Ser Ser Met Gly Ser Leu Val Ala Ile Ala
210 215 220
Lys His Gly Ser Leu Ala Gly Arg Leu Asn Ala Val Leu Ala Ile Lys
225 230 235 240
Glu Ala Val Ser Arg Asp Gly Ala Phe Val Asp Leu Ala Asp Asp Lys
245 250 255
Val Asp Lys Val Val Asp Ala Leu Val Val Ile Ile Lys Ala Pro Ile
260 265 270
Cys Pro Gln Ala Thr Lys Ala Ala Met Val Ala Thr Tyr His Leu Ala
275 280 285
Ser Ser Asp Glu Arg Val Ala Ala Arg Val Ala Ser Thr Gly Leu Val
290 295 300
Pro Thr Leu Ile Glu Ala Leu Val Asp Ala Asp Lys Ser Val Ser Glu
305 310 315 320
Lys Ala Leu Ala Val Leu Asp Ala Met Leu Ala Ser Glu Glu Gly Arg
325 330 335
Ala Ser Ala Arg Gly His Ala Leu Ala Met Pro Ala Leu Val Lys Lys
340 345 350
Met Phe Arg Val Ser Asp Val Ala Thr Glu Leu Ala Val Ser Ala Met
355 360 365
Trp Arg Leu Gly Cys Lys Ala Ser Ser Gly Asp Glu Glu Ala Ala Ala
370 375 380
Thr Gly Cys Leu Val Glu Ala Leu Arg Val Gly Ala Phe Gln Lys Leu
385 390 395 400
Leu Leu Leu Leu Gln Val Gly Cys Arg Asp Ala Thr Lys Glu Lys Ala
405 410 415
Thr Glu Leu Leu Lys Met Leu Asn Lys His Lys Gly Leu Gly Glu Cys
420 425 430
Val Asp Ala Val Asp Phe Arg Gly Leu Asn Arg Leu Ser
435 440 445
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<211> 1515
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 66
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tacagacatc catgt 1515
<210> 67
<211> 434
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<213> Oryza sativa
<400> 67
Met Gln Asn Leu Ala Phe Val Ile Val Thr Leu Leu Ala Ala Leu Ala
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20 25 30
Ala Asp Ala Gly Arg Gly Leu Ala Ala Arg Glu Leu Met Gln Arg Met
35 40 45
Ala Leu Arg Ser Lys Ala Arg Ala Ala Arg Arg Leu Ser Ser Ser Ala
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65 70 75 80
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130 135 140
Leu Pro Val Ala Ser Cys Gly Ser Pro Lys Phe Trp Pro Asn Gln Thr
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Cys Val Tyr Thr Tyr Ser Tyr Gly Asp Lys Ser Val Thr Thr Gly Phe
165 170 175
Leu Glu Val Asp Lys Phe Thr Phe Val Gly Ala Gly Ala Ser Val Pro
180 185 190
Gly Val Ala Phe Gly Cys Gly Leu Phe Asn Asn Gly Val Phe Lys Ser
195 200 205
Asn Glu Thr Gly Ile Ala Gly Phe Gly Arg Gly Pro Leu Ser Leu Pro
210 215 220
Ser Gln Leu Lys Val Gly Asn Phe Ser His Cys Phe Thr Ala Val Asn
225 230 235 240
Gly Leu Lys Pro Ser Thr Val Leu Leu Asp Leu Pro Ala Asp Leu Tyr
245 250 255
Lys Ser Gly Arg Gly Ala Val Gln Ser Thr Pro Leu Ile Gln Asn Pro
260 265 270
Ala Asn Pro Thr Phe Tyr Tyr Leu Ser Leu Lys Gly Ile Thr Val Gly
275 280 285
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290 295 300
Thr Gly Gly Thr Ile Ile Asp Ser Gly Thr Ala Met Thr Ser Leu Pro
305 310 315 320
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325 330 335
Leu Pro Val Val Ser Gly Asn Thr Thr Asp Pro Tyr Phe Cys Leu Ser
340 345 350
Ala Pro Leu Arg Ala Lys Pro Tyr Val Pro Lys Met Val Leu His Phe
355 360 365
Glu Gly Ala Thr Met Asp Leu Pro Arg Glu Asn Tyr Val Phe Glu Val
370 375 380
Glu Asp Ala Gly Ser Ser Ile Leu Cys Leu Ala Ile Ile Glu Gly Gly
385 390 395 400
Glu Val Thr Thr Ile Gly Asn Phe Gln Gln Gln Asn Met His Val Leu
405 410 415
Tyr Asp Leu Gln Asn Ser Lys Leu Ser Phe Val Pro Ala Gln Cys Asp
420 425 430
Lys Leu
<210> 68
<211> 2907
<212> DNA
<213> Oryza sativa
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Ala Ala Arg Gly Gly Ser Gly Gly Ser Ser Ser Ala Gly Asp Ala Glu
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Ala Pro Pro Leu Asp Val Leu Arg Gln Asp Ser Leu Tyr Arg Asp Ala
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Val Phe Phe Leu Thr Ile Phe Ala Thr Ala Leu Ala Ile Ser Asp Cys
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Leu Arg Ala Pro His Leu Thr Thr Asp Glu Val Val Trp Ile Thr Val
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Gly Ile Leu Val Val Phe Phe Ala Val Gln Arg Phe Gly Thr Asp Lys
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Ser Gly Ile Gly Ile Tyr Asp Leu Val Lys Tyr Asp Val Gly Val Leu
275 280 285
Arg Ala Phe Asn Pro Lys Tyr Ile Ile Asp Tyr Phe Arg Arg Asn Lys
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Lys Asp Gly Trp Val Gln Leu Gly Glu Val Leu Leu Thr Phe Thr Gly
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340 345 350
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Pro Arg Ile Lys Ile Leu His Thr Ser Arg Arg Tyr Ser Gly Gln Leu
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
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Asp Gly Ser Phe His Cys Ser Pro Ala Ser Thr Ala Thr Ala Phe Gln
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Gln Thr Gly Asp Gln Lys Cys Phe Glu Tyr Leu Asp Gly Ile Val Lys
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Ile
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tctgagcttg agcagatggg gaggacagta gcaccaacaa ttggagggag agcaagaaga 2520
gtggaggtgc catattgctt gttctgatta ttgcttcc 2558
<210> 73
<211> 155
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 73
Met Val Val Val Leu His Gly Ala Asp His Pro Arg Cys His Val Glu
1 5 10 15
Leu Cys Ser Ile Leu His Ala His Val Tyr Pro Thr Gly Ser Ile Glu
20 25 30
His Gln Ile Gly Asp Leu Ile Cys Asp Ile Leu Ile Tyr Gly Cys Gly
35 40 45
Pro Ile Trp Val Ile Lys Val Ser Arg Trp Asn Cys His Gly Ile Lys
50 55 60
Cys Ser Ser Leu Ser Phe His Val Lys Lys Lys Pro Ala Ile Gly Val
65 70 75 80
Ile Cys Gly Lys Glu Ser Ala Ala Glu Leu His Ser Arg Gly Gln Arg
85 90 95
Leu Cys Asp Gln Asp Gly Val Cys Trp Val Leu Glu Ser Phe Pro Ala
100 105 110
Asp Ser Arg Ala Ser Cys Ser Ser Asn His Lys Ile Pro Gly Val Glu
115 120 125
His Ala Gly Ile Gly Cys Thr Ser Cys Ser Trp Ile Pro Tyr Leu Ser
130 135 140
Ile Gly Gly Ile Ser Glu Arg Lys Tyr Thr Ser
145 150 155
<210> 74
<211> 1874
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 74
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gttcttcacg tgctggtctt cgctgtcgga gtcgacggat gatgagacga cgaggaggac 240
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ttgttcatcg gtaatattca tacgtctgtt tgcaccatag gcaatttcaa cctgtaattt 1020
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caaaggaata aaatattaat tatatactca tgtacttcaa tgttcaaaat tcttgtaggg 1140
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gtcttgctaa gcaggtctct gctttctgct gggcagaatc tgtatttatg tttgtgttag 1260
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gataaacaaa ttcagcatgc ttaaatcatg tgaaggaagt gtttattgga tggcacccga 1380
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atttaagatc ggaaggggtg aaccaccagc aatcccaaaa tacctttcaa aggaggctcg 1560
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tataaatctt ctca 1874
<210> 75
<211> 56
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 75
Arg Leu Gln Glu Asp Ser Lys Leu Tyr Val Phe Leu Glu Leu Met Ser
1 5 10 15
Gln Gly Ser Leu Ala Ser Leu Tyr Gln Lys Tyr Arg Leu Arg Asn Ser
20 25 30
His Val Ser Arg Tyr Thr Lys Gln Ile Leu Asn Gly Leu Thr Tyr Leu
35 40 45
His Asn Arg Asn Ile Val His Arg
50 55
<210> 76
<211> 2331
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 76
gctttctcat ttcgcacaac agaataccag caaagaatcc aagattatcc aggcatcgct 60
catgaaacca ttcatccaca gagcagctgc tttgctatgt ctcgccgtag caactgcggt 120
gtgtctctcc tccgtcacag cgatgtcctg ccagagaaaa tgcggtgaca tcgaagttcc 180
ttttccattc ggcatagacg gtgatcagcc tggctgtgcc aagccgggct ttgagctgag 240
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caggagcgtg gaggtgctcg gcatctcctt gccgaaaggc cagctccgga tgaggatgca 360
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ttgtttggac tcacagaatg gaccgggtta catttgcaac tgcagaaagg ggttccaggg 960
taacccttac aataaaggtc ttgacagctg ccaagatatt aatgagtgtg acgatcctaa 1020
gaagtacccc tgctatggta aatgcattaa caaacttgga ggatttgatt gtttctgccc 1080
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tggtattgca attggtttgg gtgttggttt cggaattctc ctacttagct tgtctgtggt 1200
gtttcttatc cgtaaacaga gaagcgacat ccaaaggcaa ctacggaaaa aatattttca 1260
gaaaaacaaa ggccttctac tagaacaact aatatcttct gacgaaagag ctagcgatag 1320
cacaaaaatt ttctccctag aagagcttaa agaggcaact aataactttg acccaacacg 1380
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ggtggcgata aaaaaaccaa acatcatcag ggaagaggag attagccagt ttatcaatga 1500
ggttgtaatt ctctcacaaa taaatcatcg ccatattgtc aaactctttg gatgctgtct 1560
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tattcatgct gataaaagta acagacgttt ctcattgtcc tgggatgatt gtttgcgaat 1680
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<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 77
Met His Leu Leu Asp His Ala Gly Lys Ile Ser His Trp Glu Leu Val
1 5 10 15
Leu Gln Leu Val Trp Val Leu Val Ser Glu Phe Ser Tyr Leu Ala Cys
20 25 30
Leu Trp Cys Phe Leu Ser Val Asn Arg Glu Ala Thr Ser Lys Gly Asn
35 40 45
Tyr Gly Lys Asn Ile Phe Arg Lys Thr Lys Ala Phe Tyr
50 55 60
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<211> 2301
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 78
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<213> Oryza sativa
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Met Ala Phe Gln Phe His Thr Leu Leu Ser Ala Val Thr Ile Trp Leu
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Gly Val Ala Ala Ala Thr Ala Arg Leu His Ala Ala Val Ala Gly Ala
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Arg Ala Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Gly Asn Cys Gln Arg Lys Cys
35 40 45
Gly Asp Val Asp Ile Pro Tyr Pro Phe Gly Val Trp Asn Gly Ser Glu
50 55 60
Ser Asp Gly Cys Ala Val Pro Gly Phe Tyr Leu Asn Cys Asp Val Asp
65 70 75 80
Asp Asn His Val Tyr Arg Pro Phe His Gly Asn Val Glu Val Leu Ser
85 90 95
Ile Ser Leu Pro Thr Gly Gln Ala Arg Val Thr Asn Ser Ile Ser Ser
100 105 110
Ala Cys Tyr Asn Thr Ser Ser Arg Asp Met Asp Tyr Asn Asp Trp Gln
115 120 125
Ile Asn Phe Thr Gly Thr Pro Leu Thr Ile Ser Asp Ala Asp Asn Lys
130 135 140
Phe Thr Val Val Gly Cys Gln Thr Leu Ala Tyr Ile Thr Asp Asp Asp
145 150 155 160
Asn Met Gly Lys Tyr Thr Ser Gly Cys Val Ala Met Cys Gln Gly Gly
165 170 175
Asp Leu Thr Ser Leu Ala Thr Asn Gly Ser Cys Ser Gly Ile Gly Cys
180 185 190
Cys Gln Thr Ala Ile Pro Arg Gly Leu Lys Tyr Tyr Arg Val Arg Phe
195 200 205
Asp Thr Gly Phe Asn Thr Ser Glu Ile Tyr Asn Val Ser Arg Cys Ser
210 215 220
Tyr Ala Val Leu Met Glu Ser Lys Ala Phe Ser Phe Arg Thr Ser Tyr
225 230 235 240
Val Ser Ser Leu Glu Phe Asn Ser Ser Asn Gly Gly Arg Val Pro Leu
245 250 255
Val Val Asp Trp Ala Ile Gly Asn Glu Thr Cys Asp Lys Ala Arg Arg
260 265 270
Lys Val Asp Thr Tyr Ala Cys Val Ser His Asn Ser Lys Cys Phe Asn
275 280 285
Ser Ser Asn Gly Pro Gly Tyr Ile Cys Asn Cys Ser Glu Gly Tyr Gln
290 295 300
Gly Asn Pro Tyr Leu Gln Asp Gly Gln His Gly Cys Thr Asp Ile Asp
305 310 315 320
Glu Cys Ala Asp Pro Lys Tyr Pro Cys Ser Val Pro Gly Thr Cys His
325 330 335
Asn Leu Pro Gly Gly Phe Glu Cys Leu Cys Pro Arg Ser Arg Pro Lys
340 345 350
Gly Asn Ala Phe Asn Gly Thr Cys Glu Arg Asp Gln Thr Leu His Thr
355 360 365
Gly Gly Lys Val Ala Ile Gly Ile Ser Gly Phe Ala Ile Val Gly Leu
370 375 380
Val Val Phe Leu Val Arg Glu Val Ile Gln His Lys Arg Ser Ile Lys
385 390 395 400
Arg Gln Ala Leu Gln Arg Gln Thr Asp Met Tyr Phe Gln Gln His Gly
405 410 415
Gly Gln Ile Leu Leu Glu Leu Met Lys Val Glu Ser Ser Ala Glu Phe
420 425 430
Thr Leu Tyr Asp Arg Glu Lys Ile Glu Val Ala Thr Asn Asn Phe Ala
435 440 445
Lys Glu Asn Ile Val Gly Lys Gly Gly Gln Gly Thr Val Tyr Lys Ala
450 455 460
Val Leu Asp Gly Thr Thr Val Ala Ile Lys Arg Cys Asn Glu Val Asp
465 470 475 480
Glu Ser Arg Arg Ala Asp Phe Val Gln Glu Leu Val Ile Leu Cys Arg
485 490 495
Val Asn His Pro Asn Ile Val Lys Leu Val Gly Cys Cys Leu Gln Phe
500 505 510
Glu Ala Pro Met Leu Ile Tyr Glu Phe Val Gln Asn Lys Thr Leu Gln
515 520 525
Glu Leu Leu Asp Leu Gln Arg Ser Arg Lys Phe His Val Thr Leu Ala
530 535 540
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545 550 555 560
His Ser Leu Pro Arg Pro Ile Leu His Gly Asp Val Lys Pro Ala Asn
565 570 575
Ile Leu Leu Ala Glu Gly Leu Val Ala Lys Val Ser Asp Phe Gly Cys
580 585 590
Ser Thr Ile Asp Glu Lys Thr Gln Ala Val Val Lys Gly Thr Pro Gly
595 600 605
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610 615 620
Asp Val Tyr Ser Phe Gly Val Ile Leu Leu Glu Leu Leu Thr Gly Lys
625 630 635 640
Lys Pro Leu Ser Lys Glu Arg Thr Ser Leu Ile Pro Ile Phe Gln Gly
645 650 655
Ala Met Glu Ser Gly Lys Leu Val Glu Leu Leu Asp Ser Asp Ile Val
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Asp Glu Ala Asn Met Gly Val Ile Cys Gln Ala Ala Ser Leu Ala Ser
675 680 685
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<213> Oryza sativa
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115 120 125
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130 135 140
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Asp Cys Asn Leu Arg Met Gly Ala Phe Thr Leu Gly Val Asn Arg Val
385 390 395 400
Ala Arg Ala Thr Leu Leu Arg Gly Trp Glu Ala
405 410
<210> 82
<211> 1361
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 82
ctctcgctcc ccttctctct tagcttgcta gctgatgtac ttgccgcgat ccagcgacct 60
cgcgcttcgt ctcccatggc aacgacgcag ttgctgtcca ccgtcgagca ccgggagacg 120
ctcccggagg gctatgctcg gcctgagtcc gaccggccgc ggctcgccga agttgccacg 180
gacagcaaca tcccgctcat cgacctcgcc tcgccggaca agccgcgggt catcgccgag 240
attgctcagg cctgtcgcac ctacggcttc ttccaggtca ccaaccacgg gatagcagag 300
gagctactgg agaaggtgat ggccgtggcg ttggagttct tcaggctgcc gccggaggag 360
aaggagaagc tgtattccga tgagccatcc aagaaaatca gactctctac gagctttaac 420
gtccgcaagg agacagtaca caactggaga gattatctcc gccttcactg ccacccgctg 480
gaggaattcg tacccgagtg gccctctaat ccggcacagt tcaaggagat tatgagcacg 540
tactgccgag aagtccggca actggggctc cggcttctcg gcgccatctc tgtcagcctc 600
ggcctcgagg aggactacat cgagaaggtg ctcggcgagc aggagcagca catggctgtg 660
aactactacc cgcggtgtcc ggagccggac ctgacctacg gccttcccaa gcacacggac 720
cccaacgccc tcaccatcct cctccccgat ccccatgtcg ccggcctcca ggtcctcagg 780
gacggcgacc agtggatcgt cgtcaaccca cgccccaacg ctctcgtcgt caacctaggc 840
gaccagatac aggctctgag caatgacgcg tacaagagcg tgtggcaccg tgcggtggtt 900
aacgcggtgc aagagcgcat gtcggtggca tctttcatgt gtccgtgcaa cagcgcggtg 960
atcagcccgg cgaggaagct cgtcgcggac ggggacgcgc ccgtgtaccg gagcttcacc 1020
tacgacgagt actacaagaa gttctggagc aggaacctgg accaggagca ctgcctagag 1080
ctcttcaaag gccagtagta acgactaatg aactcgatcg tgtgcagaaa cttcagactt 1140
gcgcttcact acccaagtta aaattgcttg ccgctcgttg ctgcagtgca gatatcctcg 1200
tcgtttgacg gttgtgtgtg gttgtctggt gcacttaatt tatcggttca gtacttaatt 1260
atgtcgggca atgctttact tattttatcg atgttatgta tcacataatg ctttggttat 1320
tcctaaaact tccaataaaa ttggtatgcc taattaccct c 1361
<210> 83
<211> 340
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 83
Met Ala Thr Thr Gln Leu Leu Ser Thr Val Glu His Arg Glu Thr Leu
1 5 10 15
Pro Glu Gly Tyr Ala Arg Pro Glu Ser Asp Arg Pro Arg Leu Ala Glu
20 25 30
Val Ala Thr Asp Ser Asn Ile Pro Leu Ile Asp Leu Ala Ser Pro Asp
35 40 45
Lys Pro Arg Val Ile Ala Glu Ile Ala Gln Ala Cys Arg Thr Tyr Gly
50 55 60
Phe Phe Gln Val Thr Asn His Gly Ile Ala Glu Glu Leu Leu Glu Lys
65 70 75 80
Val Met Ala Val Ala Leu Glu Phe Phe Arg Leu Pro Pro Glu Glu Lys
85 90 95
Glu Lys Leu Tyr Ser Asp Glu Pro Ser Lys Lys Ile Arg Leu Ser Thr
100 105 110
Ser Phe Asn Val Arg Lys Glu Thr Val His Asn Trp Arg Asp Tyr Leu
115 120 125
Arg Leu His Cys His Pro Leu Glu Glu Phe Val Pro Glu Trp Pro Ser
130 135 140
Asn Pro Ala Gln Phe Lys Glu Ile Met Ser Thr Tyr Cys Arg Glu Val
145 150 155 160
Arg Gln Leu Gly Leu Arg Leu Leu Gly Ala Ile Ser Val Ser Leu Gly
165 170 175
Leu Glu Glu Asp Tyr Ile Glu Lys Val Leu Gly Glu Gln Glu Gln His
180 185 190
Met Ala Val Asn Tyr Tyr Pro Arg Cys Pro Glu Pro Asp Leu Thr Tyr
195 200 205
Gly Leu Pro Lys His Thr Asp Pro Asn Ala Leu Thr Ile Leu Leu Pro
210 215 220
Asp Pro His Val Ala Gly Leu Gln Val Leu Arg Asp Gly Asp Gln Trp
225 230 235 240
Ile Val Val Asn Pro Arg Pro Asn Ala Leu Val Val Asn Leu Gly Asp
245 250 255
Gln Ile Gln Ala Leu Ser Asn Asp Ala Tyr Lys Ser Val Trp His Arg
260 265 270
Ala Val Val Asn Ala Val Gln Glu Arg Met Ser Val Ala Ser Phe Met
275 280 285
Cys Pro Cys Asn Ser Ala Val Ile Ser Pro Ala Arg Lys Leu Val Ala
290 295 300
Asp Gly Asp Ala Pro Val Tyr Arg Ser Phe Thr Tyr Asp Glu Tyr Tyr
305 310 315 320
Lys Lys Phe Trp Ser Arg Asn Leu Asp Gln Glu His Cys Leu Glu Leu
325 330 335
Phe Lys Gly Gln
340
<210> 84
<211> 1369
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 84
gactaaaacc tcattaattg atcaaggcag cgagtagccc cagctaacca ttacacgggc 60
attccatctc cagccatccc tagggctgta attaacatgg ctccagccat tgccaagcct 120
ctcctgagcg atctggtggc acaatccggg caagtcccct cgagccacat tcgtccggtt 180
ggcgaccgcc cggacctcga caacgtcgac cacgagtccg gcgccggcat tccggtcatc 240
gacctgaaac agctcgacgg cccggatcgc cgcaaggttg tcgaggccat cggttcggcg 300
tgcgaaaccg acggtttttt catggtgaag aatcacggga tcccggagga ggtggtggaa 360
gggatgctgc gcgtggcgag ggagttcttc cacatgccgg agtcggagcg gctcaagtgc 420
tattccgacg accccaagaa ggcgatccgg ctgtcgacga gcttcaacgt gcgcaccgag 480
aaggtgagca actggcgcga cttcctgcgc ttgcattgct accctctcga gagcttcatc 540
gaccagtggc cctccaaccc accctccttc aggcaagtgg tcggcaccta ctcgagggag 600
gcgagggcgc tggcgctgcg gttgctggag gcgatatctg agagcctcgg gctggagagg 660
ggccacatgg tgtcggccat ggggcggcag gcgcagcaca tggcggtgaa ctactatccg 720
ccatgcccac agccggagct cacctacggc ctgccggggc acaaggaccc caatgccatc 780
acgctgctgc tccaggacgg cgtctccggc ctgcaggtcc agcgcaacgg ccgctgggtg 840
gccgtcaacc ccgtgcccga cgccctggtc atcaacatcg gagatcaaat ccaggcgctg 900
agcaacgacc ggtataagag cgtgctccac cgggtgatcg tgaacagcga gagcgagagg 960
atctccgtgc cgacgttcta ctgcccgtcc ccggacgcgg tgatcgcgcc ggccggcgcg 1020
ctggtggacg gcgccctgca cccgctggcg taccggccct tcaagtacca ggcctactac 1080
gacgaattct ggaacatggg cctccagtcc gccagctgct tagaccggtt ccggcctaac 1140
gatcaggccg tctgattatg gtccataaac ttttcttgaa aaaggaaaag attgtgatcc 1200
ataaacaggc catgcaaaat atccttacat ccgatgcgac gtgttatacc actaaaaaag 1260
gtgctcctct accctagctt tctcgaaaaa aataaaacaa agtggagcac taccaatcta 1320
gatctatgtg acgctaaaca atagacatgt gagtgaaata tgttttggc 1369
<210> 85
<211> 352
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 85
Met Ala Pro Ala Ile Ala Lys Pro Leu Leu Ser Asp Leu Val Ala Gln
1 5 10 15
Ser Gly Gln Val Pro Ser Ser His Ile Arg Pro Val Gly Asp Arg Pro
20 25 30
Asp Leu Asp Asn Val Asp His Glu Ser Gly Ala Gly Ile Pro Val Ile
35 40 45
Asp Leu Lys Gln Leu Asp Gly Pro Asp Arg Arg Lys Val Val Glu Ala
50 55 60
Ile Gly Ser Ala Cys Glu Thr Asp Gly Phe Phe Met Val Lys Asn His
65 70 75 80
Gly Ile Pro Glu Glu Val Val Glu Gly Met Leu Arg Val Ala Arg Glu
85 90 95
Phe Phe His Met Pro Glu Ser Glu Arg Leu Lys Cys Tyr Ser Asp Asp
100 105 110
Pro Lys Lys Ala Ile Arg Leu Ser Thr Ser Phe Asn Val Arg Thr Glu
115 120 125
Lys Val Ser Asn Trp Arg Asp Phe Leu Arg Leu His Cys Tyr Pro Leu
130 135 140
Glu Ser Phe Ile Asp Gln Trp Pro Ser Asn Pro Pro Ser Phe Arg Gln
145 150 155 160
Val Val Gly Thr Tyr Ser Arg Glu Ala Arg Ala Leu Ala Leu Arg Leu
165 170 175
Leu Glu Ala Ile Ser Glu Ser Leu Gly Leu Glu Arg Gly His Met Val
180 185 190
Ser Ala Met Gly Arg Gln Ala Gln His Met Ala Val Asn Tyr Tyr Pro
195 200 205
Pro Cys Pro Gln Pro Glu Leu Thr Tyr Gly Leu Pro Gly His Lys Asp
210 215 220
Pro Asn Ala Ile Thr Leu Leu Leu Gln Asp Gly Val Ser Gly Leu Gln
225 230 235 240
Val Gln Arg Asn Gly Arg Trp Val Ala Val Asn Pro Val Pro Asp Ala
245 250 255
Leu Val Ile Asn Ile Gly Asp Gln Ile Gln Ala Leu Ser Asn Asp Arg
260 265 270
Tyr Lys Ser Val Leu His Arg Val Ile Val Asn Ser Glu Ser Glu Arg
275 280 285
Ile Ser Val Pro Thr Phe Tyr Cys Pro Ser Pro Asp Ala Val Ile Ala
290 295 300
Pro Ala Gly Ala Leu Val Asp Gly Ala Leu His Pro Leu Ala Tyr Arg
305 310 315 320
Pro Phe Lys Tyr Gln Ala Tyr Tyr Asp Glu Phe Trp Asn Met Gly Leu
325 330 335
Gln Ser Ala Ser Cys Leu Asp Arg Phe Arg Pro Asn Asp Gln Ala Val
340 345 350
<210> 86
<211> 1108
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 86
aactctgcca tttcgtcgat tgtcctcctc ttcccttgac ggtgcaaagc agcatctcca 60
tcgcaatgga ttaccaccga atccacccgg tgggcgtcgg ctcgccggcg ccggcgccgg 120
acagccagca gcaggtcggc aaggggaggt cgacggcgag ctacggtgag aaggagcagc 180
tgccgatcac cgcgccacgg ccgtacgcgc cggcaccgct gccgccgccg ccgccgcggc 240
gcaggagccg cgggcggcgg tgctgccggt gcgtgtgctg gacgctgctc gccgtactcg 300
tcctcgccgt ggcgctgggc gccacggcgg gcatcctgta cgcggtgttc aagcccaaga 360
taccggactt ccacgtggac cggctcaccg tgacgcggtt cgacgtgaac gcgacggcgg 420
cgacggtgag cgacgcgttc gaggtggagg tgacgtcgac gaacccgaac cggcggatcg 480
ggatctacta cgacggcggc gaggtgacgg cgtcgttcaa cggcacggag ctgtgccgcg 540
gcgggttccc ggcgctgtac cagggccacc ggagcacggt gcgccccgtc atcctgctcg 600
ccggcgagac gcggctggac agcgccgtgg cgctgcagct ggcgcggcag cagcaggccg 660
ggttcgtgcc gctcacggtg tgggcgcgcg tgccgatccg catcaagttc ggcaccatca 720
agctgtggaa gatgaccggg aaggcgacct gcaacctcgt cgtcgacaac ctcgtcgccg 780
gcaggcagat ccgcatccgc tccaacagct gcagcttcaa gctcaaggtc tgatcgagct 840
ttgtagaggc gttgatccat ctccatttct gtgaatccat ccgttgagtt gagattagca 900
ggtggtagag gcgcgtattt ttacattttt accaatacta gtttctgtga atccatccgt 960
ttttggaagc tctgctactc agattaggtt taatgtatga gcaccgatgt atatatgaaa 1020
atgcatacgc gatgaatttc tttgaaaatg gcaataaaga tggcgaattt gttcgtctgg 1080
catgccccaa ctgaagcaat ttcagtat 1108
<210> 87
<211> 255
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 87
Met Asp Tyr His Arg Ile His Pro Val Gly Val Gly Ser Pro Ala Pro
1 5 10 15
Ala Pro Asp Ser Gln Gln Gln Val Gly Lys Gly Arg Ser Thr Ala Ser
20 25 30
Tyr Gly Glu Lys Glu Gln Leu Pro Ile Thr Ala Pro Arg Pro Tyr Ala
35 40 45
Pro Ala Pro Leu Pro Pro Pro Pro Pro Arg Arg Arg Ser Arg Gly Arg
50 55 60
Arg Cys Cys Arg Cys Val Cys Trp Thr Leu Leu Ala Val Leu Val Leu
65 70 75 80
Ala Val Ala Leu Gly Ala Thr Ala Gly Ile Leu Tyr Ala Val Phe Lys
85 90 95
Pro Lys Ile Pro Asp Phe His Val Asp Arg Leu Thr Val Thr Arg Phe
100 105 110
Asp Val Asn Ala Thr Ala Ala Thr Val Ser Asp Ala Phe Glu Val Glu
115 120 125
Val Thr Ser Thr Asn Pro Asn Arg Arg Ile Gly Ile Tyr Tyr Asp Gly
130 135 140
Gly Glu Val Thr Ala Ser Phe Asn Gly Thr Glu Leu Cys Arg Gly Gly
145 150 155 160
Phe Pro Ala Leu Tyr Gln Gly His Arg Ser Thr Val Arg Pro Val Ile
165 170 175
Leu Leu Ala Gly Glu Thr Arg Leu Asp Ser Ala Val Ala Leu Gln Leu
180 185 190
Ala Arg Gln Gln Gln Ala Gly Phe Val Pro Leu Thr Val Trp Ala Arg
195 200 205
Val Pro Ile Arg Ile Lys Phe Gly Thr Ile Lys Leu Trp Lys Met Thr
210 215 220
Gly Lys Ala Thr Cys Asn Leu Val Val Asp Asn Leu Val Ala Gly Arg
225 230 235 240
Gln Ile Arg Ile Arg Ser Asn Ser Cys Ser Phe Lys Leu Lys Val
245 250 255
<210> 88
<211> 528
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 88
atggctcttg aggggaaacc aggtttcatt accatgtacg ccatcacatg ctgcaaatgc 60
gagaaatggc gtacgattcc aacaaaagaa gagttcgagg taatccgtga gaactacccc 120
gcgaagccat ggttctgcag caaaaagcgc gactgctcat gtgagcaccc tgaagatatc 180
cagtatgaca ccagccgtat ttgggccatt gataggccca acatccctaa gcctccgccg 240
aagacagaga ggctactgat catgaggaat gatctatcta aaatggatgc ctattatgtc 300
ttgccaaatg ggaagcgtgc aaagggcaaa cctgatatag ataggtttct gaaggaaaac 360
ccagagtatg ctgctacttt accactttcg agcttcaact tctcaacacc taagatagtt 420
aaggagactg tttccgatag tgcaaagtgg gtgatggcga agtctgagag ggaagagcag 480
tgtatgcaac tagacgcaaa agaagttcca agttccagca gcaagtat 528
<210> 89
<211> 175
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 89
Met Ala Leu Glu Gly Lys Pro Gly Phe Ile Thr Met Tyr Ala Ile Thr
1 5 10 15
Cys Cys Lys Cys Glu Lys Trp Arg Thr Ile Pro Thr Lys Glu Glu Phe
20 25 30
Glu Val Ile Arg Glu Asn Tyr Pro Ala Lys Pro Trp Phe Cys Ser Lys
35 40 45
Lys Arg Asp Cys Ser Cys Glu His Pro Glu Asp Ile Gln Tyr Asp Thr
50 55 60
Ser Arg Ile Trp Ala Ile Asp Arg Pro Asn Ile Pro Lys Pro Pro Pro
65 70 75 80
Lys Thr Glu Arg Leu Leu Ile Met Arg Asn Asp Leu Ser Lys Met Asp
85 90 95
Ala Tyr Tyr Val Leu Pro Asn Gly Lys Arg Ala Lys Gly Lys Pro Asp
100 105 110
Ile Asp Arg Phe Leu Lys Glu Asn Pro Glu Tyr Ala Ala Thr Leu Pro
115 120 125
Leu Ser Ser Phe Asn Phe Ser Thr Pro Lys Ile Val Lys Glu Thr Val
130 135 140
Ser Asp Ser Ala Lys Trp Val Met Ala Lys Ser Glu Arg Glu Glu Gln
145 150 155 160
Cys Met Gln Leu Asp Ala Lys Glu Val Pro Ser Ser Ser Ser Lys
165 170 175
<210> 90
<211> 3084
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 90
ggcaggcaga ggataccggc gcggcggcgc ggcgggccgg cggcggcggg ggaaggatct 60
cggccggcaa accgcgcggc cgttctactc ctccgggaat atggagccga agcgcccagg 120
aaaaagactc aggcagtcag actgaacaat gagcttatga gaatgctaga aatcgacgaa 180
ctcaagacag tttttgggat ccatcacaaa gtgttcatcc ctatcctgga tacatttgat 240
tcgaagcatc taaacacggt gaactgttat gcaacgccac gagcagctga actggggaac 300
tgaatttggc tgctggcttt agatctcccc gtcccagaaa tcctccagcg acttgtaaaa 360
gctcgtcgga tgggtcaaga attcgtactt gaaaagccta acctgcatgt tgcaaacaga 420
acgtacagct caggaaaaat ctttagagta tcaggctttc agcaagtaat ttgtcaaaat 480
atggagccat gcctgttgaa tctcgtagaa ctttgccatc agttcttcag ggatgcacca 540
gtcaaatatg tcaatgttct cccttgtcca cacctcattg tcgctctttg ggagcacgct 600
ctgtcccatc tgaatacccc agcgaagagc aacctgagca ggacttttct gcagcttctt 660
ggcaatggaa atcacagtag gatggctcag aacgtttggt ccatcgttcc ctggtgatcc 720
gggtgaacct aatggtgcat atgcctgcaa gaatagcatg aaaacaaatc agagtgaagt 780
aaatgattaa tatgctgagt tgctgaccaa agttggaaag aaatggaaag taaacagtga 840
gaggatcata ggaacgtctt aatacagttc gaacttacag aaagatgaac gcccttggat 900
tggcagagct tccggagctt gccttgctgc caaaccggat ggcactccac ctggttgacc 960
gctggaggca cgcgagcaac attgagcaag tcctccagct tcttgcatga aaaattgctc 1020
acgccaatgg cacgagcttt gcctgaatca tacaacttct ccattgcttg ccatgtagct 1080
gggatatcag gcttgagtca atatgacgat atccaacctg caccagtaca agaagataac 1140
atttacatcc aaacagagaa aaatccagtc gatcgacatg attgttatac gcaggtgggt 1200
gcagcatgag taacaacgaa atagaagata ataagactat cgcctatatt gattgttaat 1260
catcaagaag aaatgaaaag acctggacag cagcgcggat ggaatcttga acagcacctg 1320
gtgaaatttg ccaggtgcca agaccgactg atgggatcgc cgcgttggtg tttaggacaa 1380
aggattcagc catattcact ccaaagatca aactgtcctt ggtttccaag cttcctcttc 1440
ttgtgtcgat ggaatccaac agagagcgaa cttgagctta cctggtgtct gagcaagaag 1500
atctgagcac taatggtagg tagccaaggt atgcagcggt tgaaatgagc ccggtgatca 1560
ccagtagtat actctaaaat aagagcttcc agaatccatt taataataca taattgacca 1620
ctctagatga gacttagaga aacctgcaac tgacgaagct aatgcaattt gaaatagaga 1680
aatcgcatct tggcaattga tctgccaaag agaaggtaat aggcaagcat cacagctcaa 1740
gtaatttatt ttaagggtga gtcaagtcaa tttatatttc agaaagactt tcgaaacaag 1800
tttaactaga aatattagct gctgaagtca tacaacaaaa tcaagatgct gactaactac 1860
ttactggcag catttaaaaa tcattgtaca cttgagagaa aacatcttat gtcactgaaa 1920
ttttacttgt cccaaatatg ctactcatat cgcaaactca tgcccattta tgccatcaga 1980
gatgcagcgg ccaagttatc tattatctag taaacactta tgccatcagg tgacaattct 2040
aacactgcca atgcttcttc cccaatgaac tcgccttcac ttgttcaatg gcagtggcgg 2100
gcaggttgtg ctgctggtgc ggggtccgtg agctgctgga cactgcccgg tgatgtcctg 2160
tccccggcag gtgaggggcc tggctagctg gtaccgcaga agatggtgag aggctgagac 2220
ctcagatcag agtggcgaac tggagtgctg acctgatgcc atcgcctggc ggggactcgt 2280
tgagcaatgg cagtttccag tttttcaccc acacgaagaa agcaaacttc agtccagcca 2340
agtcgatcat tagatttcgc catcccaaag ctcttcgatt gatttgtaga cgccttccgg 2400
agagcttgat gaacaggtcc tccgggatgg accagtcata gacgtcaatg ttctccttga 2460
tcctctcctc gtgggtgctc ttcgggagca cgctgtgccc catctgaatc ccccaccgta 2520
gagccacctg cgccggcgtc ttccccagct tctccgccgt ggagacgacc accgggtgcg 2580
cgagcacatt gcccaccgct ttcaccgacg ctgtccccgg cgagcccaac ggcgagtacg 2640
cctgcagtga cgcatgacaa agaagaagat ttgaagcaca tcactaggat aatgcactga 2700
aggagaagtt cagagttggg tgatatcctg ttcagaatag cttcagctgt tcagcatcag 2760
aacttgcgga gcttggtctg ctgccacacc gggtggcact ccacctggtc gacggccggc 2820
ggcacgcgtg cgacggcgag caggtcctcc agcttcttgc tcgagaagtt gctgacgccg 2880
atggcgcgag ccttgccgga gtcgtggagc ttctccatcg ccgcccacgt cgccgggata 2940
tcggtcggga ggacgttttg cccgccaaag ccggcgccct tcttcatcct cactggccag 3000
tggatctgac gaacagcgtg agcatcctca actcggatac ttttaagata atgaaagctt 3060
tatttaaact cagttaatta catc 3084
<210> 91
<211> 115
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 91
Met Gly Gln Glu Phe Val Leu Glu Lys Pro Asn Leu His Val Ala Asn
1 5 10 15
Arg Thr Tyr Ser Ser Gly Lys Ile Phe Arg Val Ser Gly Phe Gln Gln
20 25 30
Val Ile Cys Gln Asn Met Glu Pro Cys Leu Leu Asn Leu Val Glu Leu
35 40 45
Cys His Gln Phe Phe Arg Asp Ala Pro Val Lys Tyr Val Asn Val Leu
50 55 60
Pro Cys Pro His Leu Ile Val Ala Leu Trp Glu His Ala Leu Ser His
65 70 75 80
Leu Asn Thr Pro Ala Lys Ser Asn Leu Ser Arg Thr Phe Leu Gln Leu
85 90 95
Leu Gly Asn Gly Asn His Ser Arg Met Ala Gln Asn Val Trp Ser Ile
100 105 110
Val Pro Trp
115
<210> 92
<211> 720
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 92
atggcatcag agtatactac tggtgatcac cgggctcatt tcaaccgctg cataccttgg 60
ctacctacca ttagtgctca gatcttcttg ctcagacacc aggttggata tcgtcatatt 120
gactgttctc cacagtatgg taatcagaaa gaggtccacg gtccagttcg tgccaagaaa 180
ggtactaaat tgagtgtgga aaattacctc aagcctgata tcccagctac atggcaagca 240
atggagaagt tgtatgattc aggcaaagct cgtgccattg gcgtgagcaa tttttcatgc 300
aagaagctgg aggacttgct caatgttgct cgcgtgcctc cagcggtcaa ccaggtggag 360
tgccatccgg tttggcagca aggcaagctc cggaagctct gccaatccaa gggcgttcat 420
ctttctgcat atgcaccatt aggttcaccc ggatcaccag ggaacgatgg accaaacgtt 480
ctgagccatc ctactgtgat ttccattgcc aagaagctgc agaaaagtcc tgctcaggtt 540
gctcttcgct ggggtattca gatgggacag agcgtgctcc caaagagcga caatgaggtg 600
tggacaaggg agaacattga catatttgac tggtgcatcc ctgaagaact gatggcaaag 660
ttctacgaga ttcaacaggc atggctccat attttgacaa attacttgct gaaagcctga 720
<210> 93
<211> 239
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 93
Met Ala Ser Glu Tyr Thr Thr Gly Asp His Arg Ala His Phe Asn Arg
1 5 10 15
Cys Ile Pro Trp Leu Pro Thr Ile Ser Ala Gln Ile Phe Leu Leu Arg
20 25 30
His Gln Val Gly Tyr Arg His Ile Asp Cys Ser Pro Gln Tyr Gly Asn
35 40 45
Gln Lys Glu Val His Gly Pro Val Arg Ala Lys Lys Gly Thr Lys Leu
50 55 60
Ser Val Glu Asn Tyr Leu Lys Pro Asp Ile Pro Ala Thr Trp Gln Ala
65 70 75 80
Met Glu Lys Leu Tyr Asp Ser Gly Lys Ala Arg Ala Ile Gly Val Ser
85 90 95
Asn Phe Ser Cys Lys Lys Leu Glu Asp Leu Leu Asn Val Ala Arg Val
100 105 110
Pro Pro Ala Val Asn Gln Val Glu Cys His Pro Val Trp Gln Gln Gly
115 120 125
Lys Leu Arg Lys Leu Cys Gln Ser Lys Gly Val His Leu Ser Ala Tyr
130 135 140
Ala Pro Leu Gly Ser Pro Gly Ser Pro Gly Asn Asp Gly Pro Asn Val
145 150 155 160
Leu Ser His Pro Thr Val Ile Ser Ile Ala Lys Lys Leu Gln Lys Ser
165 170 175
Pro Ala Gln Val Ala Leu Arg Trp Gly Ile Gln Met Gly Gln Ser Val
180 185 190
Leu Pro Lys Ser Asp Asn Glu Val Trp Thr Arg Glu Asn Ile Asp Ile
195 200 205
Phe Asp Trp Cys Ile Pro Glu Glu Leu Met Ala Lys Phe Tyr Glu Ile
210 215 220
Gln Gln Ala Trp Leu His Ile Leu Thr Asn Tyr Leu Leu Lys Ala
225 230 235
<210> 94
<211> 1019
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 94
atccatcact ccatcatcta tctgctcaca cattcactgc tgctcatcgc gtgcagagcg 60
gttaactgaa atttgatttg gatcatagtt agggattgaa ttaggatggc aacgacggtg 120
actcgtgcac acctggacca gaggcttgcc ctcgccaagc gctgctccag gggtacgtac 180
gttaattacg tgtgttttac aaaagaaaac tagctagtac tactgtaata acattcatgt 240
tctttttgcg tcaaatcttc ttgcattcca tggcgctaat aactgaatat atacaaactg 300
atgtatgctt cgtcgatctg cagaggcgaa ccttgcaggg gttaaggcgg ctgctgtcgc 360
gaccatcgcc tctgccgttc caaccgtcag tagtctctct tctttctcaa atgcttcttc 420
tttcttgtgt caattaattc tttatcagaa gagtaggttt tctaacttag ctgcatatgc 480
ttgtgtgtgc tgtttatttc agctggcgag cgtgaggatg gtgccatggg cgaaggccaa 540
catcaacccg acgggacagg cgctgatcat ctgcacggcg gccgggatgg catacttcgt 600
cgccgccgac aagaagatcc tctcgctggc caggaggcac tccttcgaga acgcacctga 660
acacctcaag aacacctcct tccagggcac cggccgcccc caccctgcct tcttcaggcc 720
ctgatcaata attacaagaa cacaacatat gctatattat atatacttct agctacctgg 780
ctagctagct gcatatgatc agagtagtat ctgtatcatg tagtagtagt agtagtagta 840
atacaataca agtactacgc ccctgcagag atcgaaccgt ttacaacagc tagctgctca 900
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ctcctatctt gtactaataa cttcatgtaa cactgctgca gtaataatgt tcagaaatc 1019
<210> 95
<211> 139
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 95
Met Leu Arg Arg Ser Ala Glu Ala Asn Leu Ala Gly Val Lys Ala Ala
1 5 10 15
Ala Val Ala Thr Ile Ala Ser Ala Val Pro Thr Val Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ser Phe Ser Asn Ala Ser Ser Phe Leu Cys Gln Leu Ile Leu Tyr Gln
35 40 45
Lys Ser Arg Phe Ser Asn Leu Ala Ala Tyr Ala Cys Val Cys Cys Leu
50 55 60
Phe Gln Leu Ala Ser Val Arg Met Val Pro Trp Ala Lys Ala Asn Ile
65 70 75 80
Asn Pro Thr Gly Gln Ala Leu Ile Ile Cys Thr Ala Ala Gly Met Ala
85 90 95
Tyr Phe Val Ala Ala Asp Lys Lys Ile Leu Ser Leu Ala Arg Arg His
100 105 110
Ser Phe Glu Asn Ala Pro Glu His Leu Lys Asn Thr Ser Phe Gln Gly
115 120 125
Thr Gly Arg Pro His Pro Ala Phe Phe Arg Pro
130 135
<210> 96
<211> 2148
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 96
atgtgggcgt tctacctgct gtcgctgccg ctgacggtgg ggatggtggt ggcgacgctg 60
cgctacttcg cgggccccgc cgtgccgctc cacgtcctcg ccaccgtcgg ctacgcctgg 120
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tttggtctga gcgaaattcc aaagaatata tggaaaactg ctgattggac ccgtcgccaa 540
aaattcctct atcacagaat cgcaaatatg gctggcaaat ttgataatgc tcaccaagaa 600
tattgccacg caatagctgt tgttcaagcc acctcgaaac aaatgaccaa gcgtgagcct 660
ctaaggcctt ttatggatat cattgatgat atgcttgctc aaatgctgag agatgatcca 720
ctgttcaagc cttctggtgg aaaattagga gaagatgata tggactatga tactgatgaa 780
aatacaatgg cctcacttcg acgtcaactt aggagagcca atgaggagta ttataggtgt 840
aaaagcaaat atacaagtta cgttatggag gcccttgaac tagaagacac cattaaaaac 900
tacgagcaac gtgatgcaaa tgaatggaaa tatgtatcag gtttaaggga aagtagatct 960
tgcacactgg gatccttcct tgacttcata gagttcattt ggcgttgtat actgaaaaag 1020
caactcctga aggttcttgc tgtaatcctc ggttgcatct cagctgccat actattggct 1080
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gtaggaaagc aagaagttct agtccaggtt gttgcattta ttcctttgat gtacatgtgt 1200
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atatatccac tcattatggt tgtttataca ctattggtcg ctggtaattt ctttgggtat 1500
gtgcttgaat tttttggaag ctggaaaagg ttcagattct ggactgaaca agaagaagat 1560
catacagatg ggttcgatcc atctggagtg cttattctgc agaaagagag atgttggatt 1620
gaacaaggac ataaagtcgg tgagctggtt gctccattag caagaaattt cactggtata 1680
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acaacacttc catccaaaaa ggaaggaaga ctccagtcga aatatgctag taacgttgct 1800
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tcaagcaatg caagtgtgga ttacctcgac gatgatgacg gcatttag 2148
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<211> 715
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 97
Met Trp Ala Phe Tyr Leu Leu Ser Leu Pro Leu Thr Val Gly Met Val
1 5 10 15
Val Ala Thr Leu Arg Tyr Phe Ala Gly Pro Ala Val Pro Leu His Val
20 25 30
Leu Ala Thr Val Gly Tyr Ala Trp Leu Cys Ser Leu Ser Phe Ile Val
35 40 45
Leu Val Pro Ala Asp Ile Ser Thr Thr Ile Thr Gly Ser Gln Glu Gly
50 55 60
Asp Val Gly Phe Phe Trp Ser Trp Thr Tyr Trp Ser Thr Phe Phe Leu
65 70 75 80
Ser Trp Ser Ile Val Pro Thr Leu Gln Gly Tyr Glu Asp Ala Gly Asp
85 90 95
Phe Thr Val Lys Glu Arg Leu Lys Thr Ser Ile His Lys Asn Leu Val
100 105 110
Tyr Tyr Lys Ile Ile Gly Ser Ile Gly Leu Val Gly Val Ile Leu Ile
115 120 125
Ile Thr Met Arg His Asp Trp Ala Gly Gly Ile Met Gly Phe Ala Met
130 135 140
Ala Cys Ser Asn Thr Phe Gly Leu Val Thr Gly Ala Phe Leu Leu Gly
145 150 155 160
Phe Gly Leu Ser Glu Ile Pro Lys Asn Ile Trp Lys Thr Ala Asp Trp
165 170 175
Thr Arg Arg Gln Lys Phe Leu Tyr His Arg Ile Ala Asn Met Ala Gly
180 185 190
Lys Phe Asp Asn Ala His Gln Glu Tyr Cys His Ala Ile Ala Val Val
195 200 205
Gln Ala Thr Ser Lys Gln Met Thr Lys Arg Glu Pro Leu Arg Pro Phe
210 215 220
Met Asp Ile Ile Asp Asp Met Leu Ala Gln Met Leu Arg Asp Asp Pro
225 230 235 240
Leu Phe Lys Pro Ser Gly Gly Lys Leu Gly Glu Asp Asp Met Asp Tyr
245 250 255
Asp Thr Asp Glu Asn Thr Met Ala Ser Leu Arg Arg Gln Leu Arg Arg
260 265 270
Ala Asn Glu Glu Tyr Tyr Arg Cys Lys Ser Lys Tyr Thr Ser Tyr Val
275 280 285
Met Glu Ala Leu Glu Leu Glu Asp Thr Ile Lys Asn Tyr Glu Gln Arg
290 295 300
Asp Ala Asn Glu Trp Lys Tyr Val Ser Gly Leu Arg Glu Ser Arg Ser
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Cys Thr Leu Gly Ser Phe Leu Asp Phe Ile Glu Phe Ile Trp Arg Cys
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Ile Leu Lys Lys Gln Leu Leu Lys Val Leu Ala Val Ile Leu Gly Cys
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Ile Ser Ala Ala Ile Leu Leu Ala Glu Ala Thr Leu Leu Pro Ser Asp
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Val Asp Leu Ser Leu Phe Ser Val Leu Thr Asn Val Val Gly Lys Gln
370 375 380
Glu Val Leu Val Gln Val Val Ala Phe Ile Pro Leu Met Tyr Met Cys
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Ile Cys Thr Tyr Tyr Ser Leu Phe Arg Ile Gly Met Met Val Val Tyr
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Ser Leu Thr Pro Arg Gln Thr Ser Ser Val Ser Leu Leu Met Ile Cys
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Ser Met Val Ala Arg Tyr Ala Ala Pro Ile Ser Tyr Asn Phe Leu Asn
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Leu Ile His Leu Gly Gly Asn Ser Lys Thr Thr Phe Glu Lys Arg Met
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Gly Asn Ile Asp Asp Val Val Pro Phe Phe Gly Arg Ser Phe Asn Arg
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Ile Tyr Pro Leu Ile Met Val Val Tyr Thr Leu Leu Val Ala Gly Asn
485 490 495
Phe Phe Gly Tyr Val Leu Glu Phe Phe Gly Ser Trp Lys Arg Phe Arg
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Phe Trp Thr Glu Gln Glu Glu Asp His Thr Asp Gly Phe Asp Pro Ser
515 520 525
Gly Val Leu Ile Leu Gln Lys Glu Arg Cys Trp Ile Glu Gln Gly His
530 535 540
Lys Val Gly Glu Leu Val Ala Pro Leu Ala Arg Asn Phe Thr Gly Ile
545 550 555 560
Tyr Lys Asp Val Glu Ser Gly Asn Val Gln Gln Asp Glu Glu Thr Ala
565 570 575
Gly Met Lys Ala Thr Thr Leu Pro Ser Lys Lys Glu Gly Arg Leu Gln
580 585 590
Ser Lys Tyr Ala Ser Asn Val Ala Leu Lys Tyr Ser Ser Ile Arg Glu
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610 615 620
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Val Ser Lys Glu Pro Asp Ser Ser Ala Gly Ile Ala Ser Arg Trp Thr
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Ser Leu Asp Glu Ile Phe Glu Gly Leu Lys Arg His Ser Ser Asn Ala
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Ser Val Asp Tyr Leu Asp Asp Asp Asp Gly Ile
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<210> 98
<211> 1379
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 98
gatccacact gccaacatct gcaagcagca gccagcagca gcagcagctc accatcactt 60
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<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 99
Met Ala Phe Ser Ser Arg Ala Val Val Ala Val Ala Ser Val Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Ala Ala Leu Ala Ser Thr Ala Ala Ala Glu Gly Asn Pro Val
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Glu Tyr Thr Glu Ser Tyr Tyr Asp Asn Thr Cys Pro Asn Ala Gln Asn
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Ile Val Arg Ser Val Met Glu Arg Ser Val Ala Ala Asn Pro Arg Met
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65 70 75 80
Cys Asp Gly Ser Leu Leu Leu Asp Ser Thr Asp Ser Thr Glu Ser Glu
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Lys Glu Glu Lys Ala Asn Ala Ser Leu Ala Gly Phe Asp Val Ile Asp
100 105 110
Ala Ile Lys Ser Glu Leu Glu Arg Ser Cys Pro Ala Thr Val Ser Cys
115 120 125
Ala Asp Val Leu Ala Leu Ala Ser Arg Asp Ala Val Ala Met Leu Gly
130 135 140
Gly Pro Ser Trp Gly Val Leu Leu Gly Arg Lys Asp Ser Arg Phe Val
145 150 155 160
Thr Lys Asn Ala Thr Glu Glu Leu Pro Asp Pro Arg Asn Gly His Leu
165 170 175
Asp Val Leu Leu Gly Val Phe Arg Glu His Gly Leu Asp Glu Arg Asp
180 185 190
Leu Thr Ala Leu Ser Gly Ala His Thr Val Gly Lys Ala His Ser Cys
195 200 205
Asp Asn Phe Glu Gly Arg Ile Asp Gly Gly Glu Gly Tyr Asp Asp Ile
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Asp Pro Ser Tyr Ala Ala Glu Leu Arg Arg Thr Cys Gln Arg Pro Asp
225 230 235 240
Asn Cys Glu Glu Ala Gly Val Pro Phe Asp Glu Arg Thr Pro Met Lys
245 250 255
Phe Asp Met Leu Tyr Tyr Gln Asp Leu Leu Phe Lys Arg Gly Leu Leu
260 265 270
Ala Thr Asp Gln Ala Leu Tyr Thr Pro Gly Ser Trp Ala Gly Glu Leu
275 280 285
Val Leu Thr Tyr Ser Arg Asn Gln Glu Ala Phe Phe Ala Asp Phe Ala
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<213> Oryza sativa
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at 842
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<211> 165
<212> PRT
<213> Oryza sativa
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Met Ala Thr Ser Ser Leu Leu Val Ala Ala Val Leu Ala Ala Ala Ala
1 5 10 15
Met Ala Ala Thr Ala Gln Asn Ser Ala Gln Asp Tyr Val Asp Ala His
20 25 30
Asn Ala Ala Arg Ser Asp Val Gly Val Gly Pro Val Ser Trp Asp Asp
35 40 45
Thr Val Ala Ala Tyr Ala Glu Ser Tyr Ala Ala Gln Arg Gln Gly Asp
50 55 60
Cys Ala Leu Glu His Ser Asp Ser Gly Gly Lys Tyr Gly Glu Asn Ile
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Phe Trp Gly Ser Ala Gly Gly Asp Trp Thr Ala Ala Ser Ala Val Ser
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 102
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aagtcccatt cttctaggat cttggtaatc atatcaccgg tggcaaccgc tgtattgatt 900
ttccttgttg gtgttctcct tgttctctgt gtacggaggc gactcaagta cacagagatt 960
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aaccttgtgc agttgctcgg ttattgtagg aggaaaggtg aactccttct ggtctatgac 1260
tatatgtcaa acggtagcct tgacaactat ttgtattgtg atttgaccga gccaacattg 1320
gattgggcac agagatttaa cattgtcaaa ggtgtcacgt caggactact ctacctccat 1380
gagaaatggg ggaagattgt aatccaccga gatatcaagg caagcaacgt gcttcttgat 1440
aaagatatga atgcacgatt aggtgacttt ggcctctcaa gattatatga ccacggaacc 1500
gacccacaaa ctacgcacct ggtaggcaca atggggtacc tagccccaga gctagtgttc 1560
acaggcaagg catctcctgc cacagacata tttgcctttg gcgtattcct tctcgaagtc 1620
acttgtggac aaaggccact caacaacaat caacaagata atcaaccccc aatgctggtt 1680
gattgggtcc ttgagcactg gcagaaagga ttactgcctg agacagtaga caaaagattg 1740
cagggcaact acaatgttga tgaggcatgt ctagtgctga agctaggtct attgtgttct 1800
cacccaatcg ccatggaaag gcctaccatg agtcaagtcc agagatacct cgacggcgac 1860
gcgccgctgc cagagttggc accgtcggag ctgaagttca acatggtggc tctcatgcag 1920
ggccaaggct tcgactcgta tgtcttgcca tgtctgtctt tgtcgtcggt ggtgagcatt 1980
gaaacctcac ccgaggtaga cgatgacact gctagtgttt ga 2022
<210> 103
<211> 674
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 103
Met Lys Tyr Thr Phe Leu Leu Phe Leu Cys Leu Val Ser Phe Val Thr
1 5 10 15
Ser Ser Glu His Gln Phe Val Phe Ser Gly Phe Thr Gly Ser Asn Leu
20 25 30
Val Leu Asp Gly Ala Ala Thr Ile Thr Glu Asp Gly Leu Leu Glu Leu
35 40 45
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50 55 60
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100 105 110
Leu Pro Ala Gln Tyr Leu Gly Leu Leu Asn Asn Gln Asn Asn Gly Asn
115 120 125
Arg Ser Asn Asp Leu Phe Ala Val Glu Leu Asp Thr Phe Gln Asn Lys
130 135 140
Glu Phe Gln Asp Met Asp Asp Asn His Val Gly Ile Asn Val Asn Ser
145 150 155 160
Met Lys Ser Leu Asp Ala His Tyr Ala Gly Phe Tyr Glu Asp Arg Ser
165 170 175
Gly Ile Phe Arg Asn Leu Thr Leu Val Ile His Glu Ala Met Gln Val
180 185 190
Trp Phe Asp Tyr Asp Gly Asp Ala Lys Lys Ile Ser Val Thr Leu Ala
195 200 205
Pro Ala Arg Leu Ala Lys Pro Lys Arg Pro Leu Leu Ser Val Thr Tyr
210 215 220
Asp Leu Ser Thr Val Val Ala Asp Ser Ala Tyr Ile Gly Phe Ser Ala
225 230 235 240
Ala Thr Gly Gly Val Val Asn Thr Lys His Cys Val Leu Gly Trp Ser
245 250 255
Phe Arg Met Asn Gly Pro Ala Gln Ala Ile Asp Ile Ser Arg Leu Pro
260 265 270
Lys Leu Pro Asn Leu Gly Ser Lys Lys Ser His Ser Ser Arg Ile Leu
275 280 285
Val Ile Ile Ser Pro Val Ala Thr Ala Val Leu Ile Phe Leu Val Gly
290 295 300
Val Leu Leu Val Leu Cys Val Arg Arg Arg Leu Lys Tyr Thr Glu Ile
305 310 315 320
Gln Glu Asp Trp Glu Val Glu Phe Gly Pro His Arg Phe Ser Tyr Lys
325 330 335
Val Leu Tyr Asp Ala Thr Glu Gly Phe Lys Asp Lys Asn Leu Leu Gly
340 345 350
Val Gly Gly Phe Gly Lys Val Tyr Lys Gly Val Leu Pro Val Ser Lys
355 360 365
Arg Val Val Ala Val Lys Cys Val Ser His Glu Ser Ser Gln Gly Met
370 375 380
Lys Glu Phe Val Ala Glu Ile Val Ser Ile Gly Gln Leu Arg His Arg
385 390 395 400
Asn Leu Val Gln Leu Leu Gly Tyr Cys Arg Arg Lys Gly Glu Leu Leu
405 410 415
Leu Val Tyr Asp Tyr Met Ser Asn Gly Ser Leu Asp Asn Tyr Leu Tyr
420 425 430
Cys Asp Leu Thr Glu Pro Thr Leu Asp Trp Ala Gln Arg Phe Asn Ile
435 440 445
Val Lys Gly Val Thr Ser Gly Leu Leu Tyr Leu His Glu Lys Trp Gly
450 455 460
Lys Ile Val Ile His Arg Asp Ile Lys Ala Ser Asn Val Leu Leu Asp
465 470 475 480
Lys Asp Met Asn Ala Arg Leu Gly Asp Phe Gly Leu Ser Arg Leu Tyr
485 490 495
Asp His Gly Thr Asp Pro Gln Thr Thr His Leu Val Gly Thr Met Gly
500 505 510
Tyr Leu Ala Pro Glu Leu Val Phe Thr Gly Lys Ala Ser Pro Ala Thr
515 520 525
Asp Ile Phe Ala Phe Gly Val Phe Leu Leu Glu Val Thr Cys Gly Gln
530 535 540
Arg Pro Leu Asn Asn Asn Gln Gln Asp Asn Gln Pro Pro Met Leu Val
545 550 555 560
Asp Trp Val Leu Glu His Trp Gln Lys Gly Leu Leu Pro Glu Thr Val
565 570 575
Asp Lys Arg Leu Gln Gly Asn Tyr Asn Val Asp Glu Ala Cys Leu Val
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Leu Lys Leu Gly Leu Leu Cys Ser His Pro Ile Ala Met Glu Arg Pro
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Glu Leu Ala Pro Ser Glu Leu Lys Phe Asn Met Val Ala Leu Met Gln
625 630 635 640
Gly Gln Gly Phe Asp Ser Tyr Val Leu Pro Cys Leu Ser Leu Ser Ser
645 650 655
Val Val Ser Ile Glu Thr Ser Pro Glu Val Asp Asp Asp Thr Ala Ser
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<211> 2144
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 104
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cgaggccaat gcgtgtctcg gcgccgccgg tggagccgcg gcggcggatg aacccgctcc 300
agcggctggc ggcggcggcg attgacgccg tggaggaagg cctcgtcgcc gggttgctcg 360
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agtcgtacgc gtgccggttc acggagacgg cgcggctgcg gcaggagcgg gagatgggac 660
gccccgtgtt ccccaaggcc atcggcgagc tccacggcca ctccggcgtc gcgcggcttc 720
tgctgttcgg ctcgcgcgcg ctctgcggcg tgctcgacgc gtcccggggc atcggcgtcg 780
ccaacgccgg cctcgtctac cacgacggcc gcctcctcgc catgtccgag gacgacctcc 840
cctaccacgt ccgtgtcacc cacgacggcg acctcgagac cgtcgggagg tacgacttcc 900
atgggcagct cgacgccgac ggcaccatga tcgcgcaccc caagctcgac ccggtcaccg 960
gcgagctctt cgcgctcagc tacaatgtcg tgtccaagcc gtacctcaag tacttctact 1020
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tccacgactt cgccgtcacc gagaactatg ccgtcgtccc cgaccagcag atcgtgttca 1140
agctccagga gatggtgcgc ggcggctcgc cggtggtata cgacagggag aaggcgtcgc 1200
ggttcggcgt gctcccgaag cgcgccgccg acgcgtcgga gctccggtgg gtggaggtcc 1260
ccggctgctt ctgcttccac ctctggaacg cgtgggagga cgacgccacc ggcgagatcg 1320
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cggcggagga cgacggccac gtgctgtgct tcgtccacga cgaggagcgc ggcacgtcgg 1740
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cgcgtgtgtg tatatgcatg tatacctttt actgtatctt cagattgtgt atatatatca 2100
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<210> 105
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<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 105
Met Ala Ser Ser Ala Pro Ser Ala Pro Gly Leu Ala Pro Val Ala Lys
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Pro Pro Pro Pro Pro Ser Lys Val Lys Val Ala Thr Ala Thr Val Pro
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Gly His Ser Gly Val Ala Arg Leu Leu Leu Phe Gly Ser Arg Ala Leu
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210 215 220
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Pro Tyr His Val Arg Val Thr His Asp Gly Asp Leu Glu Thr Val Gly
245 250 255
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Asn Val Val Ser Lys Pro Tyr Leu Lys Tyr Phe Tyr Phe Thr Ala Asp
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Ile His Asp Phe Ala Val Thr Glu Asn Tyr Ala Val Val Pro Asp Gln
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Gln Ile Val Phe Lys Leu Gln Glu Met Val Arg Gly Gly Ser Pro Val
340 345 350
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Ala Ala Asp Ala Ser Glu Leu Arg Trp Val Glu Val Pro Gly Cys Phe
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 106
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His Lys Ile Leu Thr Gly Arg Arg Ser Arg Met His Thr Ile Arg Gln
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Met Ala Val Ala Arg Asp Leu Leu Gly Lys Lys Asn His Val Ile Ser
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Asn Asn Ser Gly Tyr Leu Asp Ser Asn Met Ile Val Val Leu Asn Asp
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agctcatgtt ggagactttg gacttgcaag gttcaaaatt gattctaaaa catctttggg 2940
taactcagtt tcaacttctt cattcacaat aaatggaacc ataggatatg ttgctccagg 3000
tatatatgat ccatttcaca cagtattttc ttaacaatta attgaagaca acagtttcat 3060
aatttgttta tatgacatct aaaatgaact ctcttcctgc atacgatatg tagaatgtgc 3120
cataggtggt caagtttcaa ctgctgcaga tgtatacagc ttcggagttg ttctcttaga 3180
gatattcata aggaagaggc caacagatga catgtttaag gatggattga gcattgcaaa 3240
atatgcagat atcaacatcc ctgacaggtt gctgcagatt gttgatcctc agctggtaca 3300
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ttaaacatgt ttgatcgttc gtcttattca aaaatttaag taattattaa ttcttttcct 4140
acc 4143
<210> 109
<211> 283
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 109
Met Asn Asn Gly Val Gly Gly Gly Ile Pro Gly Glu Leu Ala Ala Leu
1 5 10 15
Arg Gly Met Glu Val Leu Ala Val Asp Gly Asn Arg Leu Ser Gly Gly
20 25 30
Phe Pro Val Ala Val Met Asn Met Ser Gly Leu Ala Val Leu Gly Leu
35 40 45
Ser Thr Asn Gly Phe Thr Gly Glu Leu Pro Ser Gly Ile Gly Gly Phe
50 55 60
Leu Pro Lys Leu Arg Gln Leu Thr Ile Gly Gly Asn Phe Phe Gln Gly
65 70 75 80
Asn Ile Pro Ser Ser Leu Ala Asn Ala Ser Asn Leu Phe Lys Leu Gly
85 90 95
Met Ser Asp Asn Asn Phe Thr Gly Val Val Pro Ala Ser Ile Gly Lys
100 105 110
Leu Ala Lys Leu Thr Leu Leu Asn Leu Glu Met Asn Gln Leu His Ala
115 120 125
Arg Ser Lys Gln Glu Trp Glu Phe Met Asp Asn Leu Ala Asn Cys Thr
130 135 140
Glu Leu Gln Val Leu Ser Leu Glu Lys Asn Gln Met Glu Gly Gln Val
145 150 155 160
Pro Ser Ser Leu Gly Asn Phe Ser Val Gln Leu Gln Tyr Leu Tyr Leu
165 170 175
Gly Leu Asn Arg Leu Ser Gly Ser Phe Pro Ser Gly Ile Ala Asn Leu
180 185 190
Pro Asn Leu Ile Ile Leu Ala Leu Asp Asp Asn Trp Phe Thr Gly Ser
195 200 205
Val Pro Gln Trp Leu Gly Gly Leu Lys Thr Leu Gln Ser Leu Thr Val
210 215 220
Ser Tyr Asn Asn Phe Thr Gly Tyr Val Pro Ser Ser Leu Ser Asn Leu
225 230 235 240
Ser His Leu Met Glu Leu Phe Leu Glu Ser Asn Gln Phe Ile Gly Asn
245 250 255
Ile Pro Pro Ser Leu Gly Asn Leu Gln Phe Leu Thr Thr Ile Asp Ile
260 265 270
Ser Asn Asn Asn Leu His Gly Ser Val Pro Glu
275 280
<210> 110
<211> 2565
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 110
atgtccacct tgttagccca ccttgttcgg cgggaaggat tcggtgaact ggcagttcac 60
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<213> Oryza sativa
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<210> 112
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
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tgatc 3365
<210> 113
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<213> Oryza sativa
<400> 113
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130 135 140
Leu Thr Glu Leu His Val Gly Phe Asn Pro Leu Ser Gly Ser Leu Pro
145 150 155 160
Lys Glu Leu Gly Asn Leu Thr Asn Leu Asn Leu Leu Gly Ile Ser Leu
165 170 175
Thr Asn Phe Ser Gly Gln Leu Pro Glu Glu Leu Gly Asn Leu Thr Lys
180 185 190
Leu Arg Gln Leu Tyr Thr Asp Ser Ala Gly Leu Ser Gly Pro Phe Pro
195 200 205
Ser Thr Leu Ser Arg Leu Lys Asn Leu Lys Leu Leu Arg Ala Ser Asp
210 215 220
Asn Asn Phe Thr Gly Thr Ile Pro Asp Phe Ile Gly Ser Leu Ser Asn
225 230 235 240
Leu Glu Asp Leu Ala Phe Gln Gly Asn Ser Phe Glu Gly Pro Ile Pro
245 250 255
Ala Ser Leu Ser Asn Leu Thr Lys Leu Thr Thr Leu Arg Ile Gly Asp
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Ile Val Asn Gly Ser Ser Ser Leu Ala Phe Ile Ser Ser Leu Thr Ser
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Leu Ser Gln Ser Ser His Gln Gly Lys Ser Gln Phe Val Thr Glu Val
725 730 735
Ala Thr Ile Ser Ala Val Gln His Arg Asn Leu Val Lys Leu His Gly
740 745 750
Cys Cys Ile Asp Ser Asn Thr Pro Leu Leu Val Tyr Glu Tyr Leu Lys
755 760 765
Asn Gly Ser Leu Asp Lys Ala Leu Phe Gly Asn Gly Ser Ile Lys Leu
770 775 780
Asp Trp Ala Thr Arg Phe Glu Ile Ile Leu Gly Ile Ala Arg Gly Leu
785 790 795 800
Thr Tyr Leu His Glu Glu Ser Ser Val Arg Ile Val His Arg Asp Ile
805 810 815
Lys Ala Ser Asn Val Leu Leu Asp Thr Asp Leu Thr Pro Lys Ile Ser
820 825 830
Asp Phe Gly Leu Ala Lys Leu Tyr Asp Glu Lys Lys Thr His Val Ser
835 840 845
Thr Gly Ile Ala Gly Thr Phe Gly Tyr Leu Ala Pro Glu Tyr Ala Met
850 855 860
Arg Arg His Leu Thr Glu Lys Val Asp Val Phe Ala Phe Gly Val Val
865 870 875 880
Ala Leu Glu Ile Val Ala Gly Arg Ser Asn Thr Asp Asn Ser Leu Glu
885 890 895
Glu Ser Lys Ile Tyr Leu Phe Glu Trp Ala Trp Ser Leu Tyr Glu Lys
900 905 910
Glu Gln Ala Leu Gly Ile Val Asp Pro Arg Leu Glu Glu Phe Ser Arg
915 920 925
Asp Glu Val Tyr Arg Val Ile His Val Ala Leu Ile Cys Thr Gln Gly
930 935 940
Ser Pro Tyr Gln Arg Pro Pro Met Ser Lys Val Val Ala Met Leu Thr
945 950 955 960
Gly Asp Val Glu Val Ala Glu Val Val Thr Lys Pro Asn Tyr Ile Thr
965 970 975
Glu Trp Gln Phe Arg Gly Gly Asn Thr Ser Tyr Val Thr Ser His Ser
980 985 990
Gly Ser Thr Thr Pro Lys Leu Ser Arg Gln Lys Glu Ile Asp Pro Leu
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Thr Gln Ser Pro Thr Ile Thr Gly Val Ser His Glu His Glu Gly
1010 1015 1020
Arg
<210> 114
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 114
gaagtgtttg tacttggctt tgctggcctg tttctgtttt gattactcga gctccagagc 60
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gcgcggcggc gttggctgct cgccggtctg cctcgacctc tgcgtcgggc tgtcgccggt 180
gcgggagccg tcggcggcga ggcacgagct gcttgaccgg ccggccggct gccgcggcgg 240
tggggattcc aagtcgatga ccaatgacga ggcgaagatc gtcgaggcga aggtcactca 300
gatgagcgag gagaatcggc ggctgaccga ggtgatcgcc cgcctgtacg gcggccaaat 360
cccgcggctc ggcctcgacg gctcggcctc gccgccgcgg ccggtgtcgc cgttatcggg 420
caagaagagg agcagggaga gcatggagac ggcgaattcc tgcgacgcca acagcaacag 480
gcatcagggc ggcgacgccg accacgccga gagcttcgcc gccgacgatg gcacctgccg 540
gaggatcaag gtcagccggg tgtgcaggcg gatcgacccg tcggacacct ccctggtggt 600
caaggacggg taccaatggc ggaagtacgg gcagaaggtg acgcgcgaca acccgtcgcc 660
gagggcctac ttccggtgcg ccttcgcgcc atcgtgcccg gtgaagaaga aggtgcagcg 720
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cccgtctccg cgcgccggcg agctcccggc ggcggcgggg ggggccggtg gctcgctgcc 840
gtgctccatc tccatcaact cctccggccc gaccatcacg ctcgacctca ccaagaacgg 900
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cgaattctag cttcctttac aattctccaa ttcttcttac aggaaaaaac atagaggcgc 1140
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<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 115
Met Asp Ala Ala Trp Arg Gly Gly Val Gly Cys Ser Pro Val Cys Leu
1 5 10 15
Asp Leu Cys Val Gly Leu Ser Pro Val Arg Glu Pro Ser Ala Ala Arg
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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Pro Arg Pro Val Ser Pro Leu Ser Gly Lys Lys Arg Ser Arg Glu Ser
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115 120 125
Gly Asp Ala Asp His Ala Glu Ser Phe Ala Ala Asp Asp Gly Thr Cys
130 135 140
Arg Arg Ile Lys Val Ser Arg Val Cys Arg Arg Ile Asp Pro Ser Asp
145 150 155 160
Thr Ser Leu Val Val Lys Asp Gly Tyr Gln Trp Arg Lys Tyr Gly Gln
165 170 175
Lys Val Thr Arg Asp Asn Pro Ser Pro Arg Ala Tyr Phe Arg Cys Ala
180 185 190
Phe Ala Pro Ser Cys Pro Val Lys Lys Lys Val Gln Arg Ser Ala Glu
195 200 205
Asp Ser Ser Leu Leu Val Ala Thr Tyr Glu Gly Glu His Asn His Pro
210 215 220
His Pro Ser Pro Arg Ala Gly Glu Leu Pro Ala Ala Ala Gly Gly Ala
225 230 235 240
Gly Gly Ser Leu Pro Cys Ser Ile Ser Ile Asn Ser Ser Gly Pro Thr
245 250 255
Ile Thr Leu Asp Leu Thr Lys Asn Gly Gly Ala Val Gln Val Val Glu
260 265 270
Ala Ala His Pro Pro Pro Pro Pro Asp Leu Lys Glu Val Cys Arg Glu
275 280 285
Val Ala Ser Pro Glu Phe Arg Thr Ala Leu Val Glu Gln Met Ala Ser
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Ala Leu Thr Ser Asp Pro Lys Phe Thr Gly Ala Leu Ala Ala Ala Ile
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Leu Gln Lys Leu Pro Glu Phe
325
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
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gaaagttcac gttttggtcc ccctcctgtt cggcgacggg cgacgtacgg cgccactata 60
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<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 117
Met Asp Asp Asp Gly Asp Gly Ser Ser Ser Pro Thr Asp Asp Ser Ala
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Ala Ala Gly Leu Leu Pro Leu Phe Ser Arg Ser Pro Ala Glu Asp Leu
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Glu Glu Lys Leu Arg Arg Ala Met Glu Glu Asn Ala Arg Leu Thr Arg
35 40 45
Ala Leu Asp Ala Ile Leu Ala Gly His His Ala His Gln Arg Ala Leu
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Leu Ala Pro Ser Leu Ser Pro Pro Pro Pro Ser Ala Thr Ala Arg Ala
65 70 75 80
Pro Ser Val Ser Thr Ser Cys Ala Ala Arg Glu Asp Ala Ala Pro Ala
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Val Ala Ala Ala Ala Ala Ser Thr Ala Cys Pro Ser Arg Gln Gln Pro
100 105 110
Pro Thr Ala Glu Pro Arg Pro Lys Val Arg Thr Val Arg Val Arg Ala
115 120 125
Asp Ala Ala Asp Ala Thr Asp Ala Asn Ser Met Ala Glu Thr Val Lys
130 135 140
Asp Gly Tyr Gln Trp Arg Lys Tyr Gly Gln Lys Val Thr Arg Asp Asn
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Pro Tyr Pro Arg Ala Tyr Phe Arg Cys Ala Phe Ala Pro Ser Cys Pro
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Val Lys Lys Lys Leu Gln Arg Cys Ala Glu Asp Arg Ser Met Leu Val
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Ala Thr Tyr Glu Gly Glu His Asn His Ala Leu Ser Thr Gln Thr Thr
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210 215 220
Ser Ser Ser Pro Leu Pro Cys Ser Ile Ser Ile Asn Ser Ser Gly Arg
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Thr Ile Thr Leu Asp Leu Thr Asn Gln Ala Gly Ser Gly Ser Ile Ala
245 250 255
Ser Cys Gly Val Glu Ala Ala Ala Val Ser Gly Glu Leu Val Thr Val
260 265 270
Leu Ser Pro Glu Leu Arg Arg His Leu Val Glu Glu Val Val Gln Val
275 280 285
Leu Lys Asn Asp Ala Glu Phe Val Glu Ala Val Thr Asn Ala Val Ala
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Ala Arg Val Val Asp Gln Ile Pro His Ile Pro Val His Leu
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 118
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ctg 2643
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<212> PRT
<213> Oryza sativa
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Asp Leu Phe Leu Ala Tyr Lys Thr Leu Gly Val Val Phe Gly Gly Leu
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Thr Leu Ile Gly Val Val Lys Tyr Val Cys Ile Ala Leu Asn Ala Asp
85 90 95
Asp His Gly Glu Gly Gly Thr Phe Ala Met Tyr Ser Leu Leu Cys Arg
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His Ala Asp Ile Gly Ile Leu Pro Ser Lys Arg Val Tyr Ala Glu Glu
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Asp Pro Leu Leu His Ser Gln Ser Ala Ile Ala Arg Arg Pro Ser Arg
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Leu Gly Lys Phe Phe Glu Gln Ser Ile Thr Ala Arg Arg Val Leu Leu
145 150 155 160
Phe Val Ala Val Leu Gly Met Cys Met Leu Ile Gly Asp Gly Ile Leu
165 170 175
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180 185 190
Phe Pro Thr Val Ser Lys Pro Val Val Glu Ala Leu Ser Ala Ala Ile
195 200 205
Leu Ile Gly Leu Phe Leu Leu Gln Lys Tyr Gly Thr Ser Lys Val Ser
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Phe Leu Phe Ser Pro Ile Met Ala Ala Trp Thr Phe Thr Thr Pro Ile
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Ile Gly Leu Tyr Ser Ile Val His Tyr Tyr Pro Gly Ile Phe Lys Ala
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Gly Trp Gln Leu Leu Gly Gly Thr Val Leu Cys Ile Thr Gly Ala Glu
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Arg Asn Met Phe Val Val Ile Gly Cys Asn Thr Leu Ser Tyr Thr Gln
130 135 140
Asn Gly Asn Ser Gly Gly Lys Gly Pro Tyr Ala Gly Leu Tyr Tyr Thr
145 150 155 160
Gly Cys Val Ser Tyr Cys Asn Asp Ser Ser Ser Ala Arg Asp Ser Met
165 170 175
Cys Ala Gly Val Gly Cys Cys His Ile Asp Ile Ser Pro Gly Leu Ser
180 185 190
Asp Asn Val Val Ser Phe Gly Pro Trp Lys Arg Gly Phe Gln Val Asp
195 200 205
Phe Ser Pro Cys Asp Tyr Ser Phe Leu Val Asp Lys Asn Glu Tyr Glu
210 215 220
Phe Arg Ser Ala Asp Leu Lys Met Asp Leu Asn Arg Thr Met Pro Val
225 230 235 240
Trp Leu Asp Trp Ala Ile Arg Asp Ser Val Thr Cys Pro Pro Leu Glu
245 250 255
Val Gln Glu Lys Lys Pro Ala Gly Tyr Ala Cys Met Ser Asp Asn Ser
260 265 270
Glu Cys Val Asn Ser Thr Asn Gly Pro Gly Tyr Tyr Cys Lys Cys Lys
275 280 285
Gln Gly Tyr Asp Gly Asn Pro Tyr Val Asp Lys Asp Gln Gly Cys Lys
290 295 300
Asp Ile Asn Glu Cys Asp Val Ser Asn Lys Lys Lys Tyr Pro Cys Tyr
305 310 315 320
Gly Val Cys Asn Asn Ile Pro Gly Asp Tyr Glu Cys His Cys Arg Val
325 330 335
Gly Tyr Gln Trp Ser Gly Glu Gly Pro Lys Lys Gln Glu Cys Ser Ala
340 345 350
Lys Phe Pro Leu Ala Ala Arg Leu Ala Leu Gly Ile Thr Leu Gly Phe
355 360 365
Ser Phe Leu Ile Val Ala Val Leu Phe Thr Leu Met Met His Lys Lys
370 375 380
Arg Lys Met Asn Glu Tyr Phe Lys Lys Asn Gly Gly Ser Val Leu Gln
385 390 395 400
Lys Val Asp Asn Ile Lys Ile Phe Thr Lys Asp Glu Leu Lys Lys Ile
405 410 415
Thr Lys Asn Asn Ser Glu Val Leu Gly Gln Gly Ser Phe Gly Lys Val
420 425 430
Tyr Lys Gly Thr Leu Glu Asp Asn Thr Pro Val Ala Val Lys Thr Ser
435 440 445
Ile Glu Val Asn Glu Ala Arg Lys Asp Asp Phe Thr Asn Glu Val Ile
450 455 460
Ile Gln Ser Gln Met Met His Asn Asn Ile Ile Lys Leu Leu Gly Cys
465 470 475 480
Cys Leu Glu Val Asp Val Pro Met Leu Val Tyr Glu Phe Ala Ala Lys
485 490 495
Gly Asn Leu Gln Asp Ile Leu His Gly Asp Ala Asn Ile Pro Leu Pro
500 505 510
Leu Gly Leu Arg Leu Asp Ile Ala Ile Glu Ser Ala Glu Gly Leu Arg
515 520 525
Tyr Met His Ser Ser Thr Ser Arg Thr Ile Arg His Gly Asp Val Lys
530 535 540
Pro Ala Asn Ile Leu Leu Thr Asp Lys Phe Ile Pro Lys Ile Ser Asp
545 550 555 560
Phe Gly Thr Ser Lys Leu Leu Asn Val Asp Lys Asp Phe Thr Met Phe
565 570 575
Val Val Gly Ser Met Gly Tyr Ile Asp Pro Val Phe His Lys Thr Gly
580 585 590
His Leu Thr Gln Lys Ser Asp Val Tyr Ser Phe Gly Val Val Leu Leu
595 600 605
Glu Leu Ile Cys Arg Lys Pro Thr Ile Tyr Gly Glu Asn Cys Ser Leu
610 615 620
Ile Ile Glu Phe Gln Asn Ala Tyr Asp Gln Glu Asn Ser Gly Arg Ile
625 630 635 640
Met Phe Asp Lys Glu Ile Ala Asn Glu Glu Asp Ile Leu Ile Leu Glu
645 650 655
Glu Ile Gly Arg Leu Ala Met Glu Cys Leu Lys Glu Lys Val Glu Glu
660 665 670
Arg Pro Asp Met Lys Glu Val Ala Glu Arg Phe Val Met Leu Arg Arg
675 680 685
Ser Arg Lys Cys Gly
690
<210> 122
<211> 1503
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 122
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gcggcggcga gcctccgctg catcgcgttc gcctacaagc aagtcgtcga cggcggcgac 180
agcgacaacg ccaagatcga cgacgagggg ctgacattgc tgggcttcgt cggactgaaa 240
gacccgtgca gaccagaggt aaaatccgcc atcgaagctt gcaccaaagc aggcatcgcc 300
gtcaagatgg tcaccggcga caacgtcctc aaggctcgcg ccatcgccaa ggaatgcggc 360
atcatctccg gcaacgacga cgacgccgcc ggcgtcgtga tcgaggggca cgagttccgc 420
gccatgtcgg agcaggagca gctcgccatc gtcgacaaca tccgcgtcat ggcgcggtcg 480
ctgccactcg acaagctggt gctcgtccag cgcctgaagc agaagggcca cgtggtggcc 540
gtcaccggcg acggcacgaa cgacgcgccg gcgctgaaag aagccgacgt gggcctctcc 600
atgggagtcc agggcaccga ggtcgccaag gagagctccg acatcgtcat cctcaacgac 660
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aagttcatcc agttccagct caccgtcaac gtcgcggcgc tcgtcatcaa cttcgtgtcg 780
gcggtgacca cgggcaggat gccgctgacc acggtgcagc tgctgtgggt gaacctgatc 840
atggacacca tgggcgcgct ggcgctcgcc acggacacgc cgacggcggg gctgatgcgc 900
cgcccgccca tcggccgcgc ggcgccgctg atcagcaacg ccatgtggcg caacctggcg 960
gcgcaggcgg cgtaccaggt ggccgtgctg ctggcgctcc agtaccgcgg cttcggcggc 1020
gccggcgccg gcgagagggc gaacgggacg atgatcttca acgcgttcgt gctgtgccag 1080
gtgttcaacg agttcaacgc gagggagatc gagaggagga acgtgttcgc cggcgtgcac 1140
cggaacagga tgttcctggg catcgtcgcc gtcacggtgg cgctgcaggt ggtgatggtg 1200
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gagatattat accatcttgt tatttgccat atataatatg atatatgatt tgtttggttc 1500
atc 1503
<210> 123
<211> 452
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 123
Met Val Leu Ala Arg Cys Thr Val Tyr Val Gly Ala Asp Gly Ala Ala
1 5 10 15
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Asp Met Ala Ala Ala Ser Leu Arg Cys Ile Ala Phe Ala Tyr Lys Gln
35 40 45
Val Val Asp Gly Gly Asp Ser Asp Asn Ala Lys Ile Asp Asp Glu Gly
50 55 60
Leu Thr Leu Leu Gly Phe Val Gly Leu Lys Asp Pro Cys Arg Pro Glu
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Val Lys Ser Ala Ile Glu Ala Cys Thr Lys Ala Gly Ile Ala Val Lys
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Met Val Thr Gly Asp Asn Val Leu Lys Ala Arg Ala Ile Ala Lys Glu
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Cys Gly Ile Ile Ser Gly Asn Asp Asp Asp Ala Ala Gly Val Val Ile
115 120 125
Glu Gly His Glu Phe Arg Ala Met Ser Glu Gln Glu Gln Leu Ala Ile
130 135 140
Val Asp Asn Ile Arg Val Met Ala Arg Ser Leu Pro Leu Asp Lys Leu
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Val Leu Val Gln Arg Leu Lys Gln Lys Gly His Val Val Ala Val Thr
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Gly Asp Gly Thr Asn Asp Ala Pro Ala Leu Lys Glu Ala Asp Val Gly
180 185 190
Leu Ser Met Gly Val Gln Gly Thr Glu Val Ala Lys Glu Ser Ser Asp
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Trp Gly Arg Cys Val Tyr Asn Asn Ile Gln Lys Phe Ile Gln Phe Gln
225 230 235 240
Leu Thr Val Asn Val Ala Ala Leu Val Ile Asn Phe Val Ser Ala Val
245 250 255
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Leu Ile Met Asp Thr Met Gly Ala Leu Ala Leu Ala Thr Asp Thr Pro
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Thr Ala Gly Leu Met Arg Arg Pro Pro Ile Gly Arg Ala Ala Pro Leu
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Val Ala Val Leu Leu Ala Leu Gln Tyr Arg Gly Phe Gly Gly Ala Gly
325 330 335
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340 345 350
Cys Gln Val Phe Asn Glu Phe Asn Ala Arg Glu Ile Glu Arg Arg Asn
355 360 365
Val Phe Ala Gly Val His Arg Asn Arg Met Phe Leu Gly Ile Val Ala
370 375 380
Val Thr Val Ala Leu Gln Val Val Met Val Glu Leu Leu Thr Lys Phe
385 390 395 400
Ala Gly Thr Glu Arg Leu Gly Trp Gly Gln Trp Gly Ala Cys Val Gly
405 410 415
Ile Ala Ala Val Ser Trp Pro Ile Gly Trp Ala Val Lys Cys Ile Pro
420 425 430
Val Pro Glu Arg Pro Phe His Glu Ile Ile Thr Ala Arg Arg Arg Arg
435 440 445
Arg Arg Ser Thr
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
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<213> Oryza sativa
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Met Gly Arg Pro Val Ala Thr Leu Leu Val Leu Cys Phe Ile Ser Val
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130 135 140
Thr Phe Ala Val Gly Thr Ala Lys Ala Ser Leu Ala Phe Gly Cys Val
145 150 155 160
Val Ala Ser Asp Ile Asp Thr Met Gly Gly Pro Ser Gly Ile Val Gly
165 170 175
Leu Gly Arg Thr Pro Trp Ser Leu Val Thr Gln Thr Gly Val Ala Ala
180 185 190
Phe Ser Tyr Cys Leu Ala Pro His Asp Ala Gly Lys Asn Ser Ala Leu
195 200 205
Phe Leu Gly Ser Ser Ala Lys Leu Ala Gly Gly Gly Lys Ala Ala Ser
210 215 220
Thr Pro Phe Val Asn Ile Ser Gly Asn Gly Asn Asp Leu Ser Asn Tyr
225 230 235 240
Tyr Lys Val Gln Leu Glu Gly Leu Lys Ala Gly Asp Ala Met Ile Pro
245 250 255
Leu Pro Pro Ser Gly Ser Thr Val Leu Leu Asp Thr Phe Ser Pro Ile
260 265 270
Ser Phe Leu Val Asp Gly Ala Tyr Gln Ala Val Lys Lys Ala Val Thr
275 280 285
Val Ala Val Gly Ala Pro Pro Met Ala Thr Pro Val Glu Pro Phe Asp
290 295 300
Leu Cys Phe Pro Lys Ser Gly Ala Ser Gly Ala Ala Pro Asp Leu Val
305 310 315 320
Phe Thr Phe Arg Gly Gly Ala Ala Met Thr Val Pro Ala Thr Asn Tyr
325 330 335
Leu Leu Asp Tyr Lys Asn Gly Thr Val Cys Leu Ala Met Leu Ser Ser
340 345 350
Ala Arg Leu Asn Ser Thr Thr Glu Leu Ser Leu Leu Gly Ser Leu Gln
355 360 365
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385 390
<210> 126
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 126
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<211> 394
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<213> Oryza sativa
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Met Gly Arg Pro Val Ala Thr Leu Leu Val Leu Cys Phe Ile Ser Val
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Thr Ala Arg Ala Ala Ala Phe Arg Val His Gly Arg Leu Leu Ala Asp
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Ala Ala Thr Glu Gly Gly Ala Val Val Pro Ile His Trp Thr Gln Ala
35 40 45
Met Asn Tyr Val Ala Asn Phe Thr Ile Gly Thr Pro Pro Gln Pro Ala
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130 135 140
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165 170 175
Leu Gly Arg Thr Pro Trp Ser Leu Val Thr Gln Thr Gly Val Ala Ala
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Phe Ser Tyr Cys Leu Ala Pro His Asp Ala Gly Arg Asn Ser Ala Leu
195 200 205
Phe Leu Gly Ser Ser Ala Lys Leu Ala Gly Gly Gly Lys Ala Ala Ser
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Thr Pro Phe Val Asn Ile Ser Gly Asn Gly Asn Asp Leu Ser Asn Tyr
225 230 235 240
Tyr Lys Val Gln Leu Glu Gly Leu Lys Ala Gly Asp Ala Met Ile Pro
245 250 255
Leu Pro Pro Ser Gly Ser Thr Val Leu Leu Asp Thr Phe Ser Pro Ile
260 265 270
Ser Phe Leu Val Asp Gly Ala Tyr Gln Ala Val Lys Lys Ala Val Thr
275 280 285
Ala Ala Val Gly Ala Pro Pro Met Ala Thr Pro Val Glu Pro Phe Asp
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Leu Cys Phe Pro Lys Ser Gly Ala Ser Gly Ala Ala Pro Asp Leu Val
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Phe Thr Phe Arg Gly Gly Ala Ala Met Thr Val Pro Ala Thr Asn Tyr
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Ala Arg Leu Asn Ser Thr Thr Glu Leu Ser Leu Leu Gly Ser Leu Gln
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370 375 380
Phe Glu Pro Ala Asp Cys Thr Lys Leu Ser
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 128
gcctaatcac ccaacacaat cttgccatac catgggtcga tcgaaacggg aagttgcccc 60
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taggactgag aagcggttga catggacaca tgaagaggac ataaggctag tgagtgcttg 600
gttgaacaac ttgaatgatt cgatcaatgg taatttcaag aaaaatgatt gttattgggg 660
agatgttaca actgcctaca atagcaccac tccgagaaat aggatgaggc aagaaaaaca 720
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ggaggtgaaa tctatctatg ttagtggaca aaatgaacta caattgatgg agaaggtcca 840
tgcaacatat gaagcagatt acaaggaagg ccaatttaca tttctgcatt gttggaaagc 900
tctccgtgac caaccaaagt ggcatgctta cttggaggaa cttgagaagc caaacaaaac 960
aaagtcagat aatgaagtgg aagtaaggga acttacatcc actcctaata gccctgaaga 1020
tattatacgt cctgaaggaa ccaaagctgc taaggcgcgg cgtaatggta aagacaaacg 1080
caaaaggaag gcaaaggttt atctatcgga tatggatgat gagattgaca agcctaaaga 1140
agttcagaac atggcagata aaggtcgcga tgagctactg gagactcaga ggcgtgtttc 1200
tagtgagaat cttgaatcaa aaaggttagc tcacctggca gccatggagc acaaggaggc 1260
ggttatgttg gaaacatatc gggctctcat gttgcaagat acaaaagata tgcctgatga 1320
tgtcagattt gagcatgtga tggcattgaa gagtatgagg gaaaagttgt ttcctaaaac 1380
taaggtatcg aagatgctca ttttggctgc ttgttttggc agtgcttcag caagagaagc 1440
tacttattac ataattttca gtaatccacc gattttatca aaacagaact tgtgttctaa 1500
ctatctactc agtatgtcgt tgtatgggtc actgttatgg cctatgaatg atgtatggat 1560
cattgtaata gactaagttc ttttgtcagt ctatgaacta attagtagtt ttgcc 1615
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<400> 129
Met Gly Arg Ser Lys Arg Glu Val Ala Pro Pro Pro Gln Ala Leu Pro
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65 70 75 80
Ser Asp Arg Ser Ser Met Asp Asp Ser Leu Ser Asp Leu Gln Glu Ser
85 90 95
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100 105 110
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165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
Trp Gly Asp Val Thr Thr Ala Tyr Asn Ser Thr Thr Pro Arg Asn Arg
210 215 220
Met Arg Gln Glu Lys Gln Ile Lys Asp Arg Phe His Lys Ile Lys Lys
225 230 235 240
Asn Val Gly Arg Phe Cys Cys Ala Tyr Lys Glu Val Lys Ser Ile Tyr
245 250 255
Val Ser Gly Gln Asn Glu Leu Gln Leu Met Glu Lys Val His Ala Thr
260 265 270
Tyr Glu Ala Asp Tyr Lys Glu Gly Gln Phe Thr Phe Leu His Cys Trp
275 280 285
Lys Ala Leu Arg Asp Gln Pro Lys Trp His Ala Tyr Leu Glu Glu Leu
290 295 300
Glu Lys Pro Asn Lys Thr Lys Ser Asp Asn Glu Val Glu Val Arg Glu
305 310 315 320
Leu Thr Ser Thr Pro Asn Ser Pro Glu Asp Ile Ile Arg Pro Glu Gly
325 330 335
Thr Lys Ala Ala Lys Ala Arg Arg Asn Gly Lys Asp Lys Arg Lys Arg
340 345 350
Lys Ala Lys Val Tyr Leu Ser Asp Met Asp Asp Glu Ile Asp Lys Pro
355 360 365
Lys Glu Val Gln Asn Met Ala Asp Lys Gly Arg Asp Glu Leu Leu Glu
370 375 380
Thr Gln Arg Arg Val Ser Ser Glu Asn Leu Glu Ser Lys Arg Leu Ala
385 390 395 400
His Leu Ala Ala Met Glu His Lys Glu Ala Val Met Leu Glu Thr Tyr
405 410 415
Arg Ala Leu Met Leu Gln Asp Thr Lys Asp Met Pro Asp Asp Val Arg
420 425 430
Phe Glu His Val Met Ala Leu Lys Ser Met Arg Glu Lys Leu Phe Pro
435 440 445
Lys Thr Lys Val Ser Lys Met Leu Ile Leu Ala Ala Cys Phe Gly Ser
450 455 460
Ala Ser Ala Arg Glu Ala Thr Tyr Tyr Ile Ile Phe Ser Asn Pro Pro
465 470 475 480
Ile Leu Ser Lys Gln Asn Leu Cys Ser Asn Tyr Leu Leu Ser Met Ser
485 490 495
Leu Tyr Gly Ser Leu Leu Trp Pro Met Asn Asp Val Trp Ile Ile Val
500 505 510
Ile Asp
<210> 130
<211> 576
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 130
atggagaagt caccggccat gcacttcctc ctggaactgg agtcccaaga accggtttgc 60
ctcctcatcc tcttcaccat gtttacctgg ttcatctcga aggttcagat gatcctccct 120
agttcttgcc aacactgcaa ttatgccgtc accaaggtga cctcgacacc ggttctcgcc 180
gacagaaaga tatcaaagaa tctaagtaag cataaagatg atgggataga gatgacacat 240
gaagatgttg agtctgtgat gacaaagatg gggcctgatt ttgatcacgg aaaaactatg 300
gtttacaagg agattggttc taactgcatg tcagagttgt tcgatgacga tgaaccgagc 360
ttggacgaag taaagcaggc atttttggtg tttgatgagg ataatgatgg gtacattgat 420
gcattggatt tgtatagagt ccttaggaat ctaggattaa gagaaggtgt aggggttgat 480
gagtgtgagc aaatgattgc caaatatgac atgaacagag ataggaggat agatatggta 540
gagttcatta gggttctgga ggccagtttt ttctga 576
<210> 131
<211> 191
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 131
Met Glu Lys Ser Pro Ala Met His Phe Leu Leu Glu Leu Glu Ser Gln
1 5 10 15
Glu Pro Val Cys Leu Leu Ile Leu Phe Thr Met Phe Thr Trp Phe Ile
20 25 30
Ser Lys Val Gln Met Ile Leu Pro Ser Ser Cys Gln His Cys Asn Tyr
35 40 45
Ala Val Thr Lys Val Thr Ser Thr Pro Val Leu Ala Asp Arg Lys Ile
50 55 60
Ser Lys Asn Leu Ser Lys His Lys Asp Asp Gly Ile Glu Met Thr His
65 70 75 80
Glu Asp Val Glu Ser Val Met Thr Lys Met Gly Pro Asp Phe Asp His
85 90 95
Gly Lys Thr Met Val Tyr Lys Glu Ile Gly Ser Asn Cys Met Ser Glu
100 105 110
Leu Phe Asp Asp Asp Glu Pro Ser Leu Asp Glu Val Lys Gln Ala Phe
115 120 125
Leu Val Phe Asp Glu Asp Asn Asp Gly Tyr Ile Asp Ala Leu Asp Leu
130 135 140
Tyr Arg Val Leu Arg Asn Leu Gly Leu Arg Glu Gly Val Gly Val Asp
145 150 155 160
Glu Cys Glu Gln Met Ile Ala Lys Tyr Asp Met Asn Arg Asp Arg Arg
165 170 175
Ile Asp Met Val Glu Phe Ile Arg Val Leu Glu Ala Ser Phe Phe
180 185 190
<210> 132
<211> 2349
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 132
gggagattca tttgcatcag ccgaaggcaa gaatcacaca agactcggtt ggacgatttg 60
cagcaaatag tagcatgggg caactccata atttgatgct tctgctgccg tgcctgatct 120
tctctacgct actgcgcaca gaggcgatga gtgtagctcc agtgaaagtg agcaccacac 180
ccatcttccc cacaatccca agaggtcaga cgaacaagga cttccaggtg ctactgcgcg 240
tcgaggcgcc gccggcggcc gatctcaaca gccatgtccc cttagacgta gtcgcggtgc 300
ttgatgtcag cggcagcatg aatgatccgg tggcggcggc gtcgccgaag agcaatctgc 360
aggggtcgag gttggatgtg ctcaaggcgt ccatgaagtt tgtcatcagg aagcttgctg 420
atggtgatcg cctctccatc gtggcgttta acgatggacc cgtcaaggaa tatagctccg 480
gcttgttgga tgtttccggc gatggccgga gcatcgccgg aaaaaagatt gaccggcttc 540
aggcccgtgg tggcactgcg cttatgccag ccctggagga ggccgtcaag atccttgatg 600
agcggcaagg cagcagccgg aaccacgtag ggttcatcct cctcctcacc gacggcgacg 660
acacgaccgg attccggtgg acccgcgacg ccatccatgg cgccgtcttc aagtaccccg 720
tccacacctt cggcctgggc gcgtcccacg acccggaggc gctgctccac atcgcgcaag 780
gatcgcgcgg cacctactcc ttcgtcgacg acgacaacct cgccaacatc gccggcgccc 840
tcgccgtgtg ccttggcggg ctcaagaccg tcgccgccgt cgacacgcgc gtcagcctca 900
aggccgccga gctaagcggc ggcggcgcgc ggatagtgcg cgtagactcc ggcggctacg 960
agagcagcgt tgcttgcggc ggggcctccg gtgaggtcgt cgtcggcgtg ctctacaccg 1020
gcgaggtgaa gaacttcgtc gtccacctcc acgtgccggc tgcttcgtcg acgaccttga 1080
ccttctcgtc ggtggagtgc ggcggctact acgacgccgc cacggtctgc gaccactgcc 1140
atcaccgtca ccagcagcag ctgctcgccg tcggctactc gtacagccac gctccgggcg 1200
ccgcctctgc agcggtgtcc gtcgaagggc acggcgtgtt cgtcgagagg cccgaggtgg 1260
cggccgtctt cgtctccgtc gacggcgtcg gcgtcggcgg cggccgacag cgacaaatcc 1320
ccctcccctc ccccgtcgtg atgcagcaca tggtccggtt cgagctgctg gagctcgtcg 1380
ccggcttcgc ggaagccgag atggcgtcga agccggcggc gacgacgacg cagccgcgcg 1440
ccgccgacgt gctgcagggc aagtgggagg agttccggcg agcccggcag ttctggggcg 1500
gcgtcgagct ggacggcgtg gagaaggagg tggacgccat ggtggccagc ctcaggagcg 1560
ggctagccta cgtcagctcg ttggtgtcga gccaccagat gcagcgcgcc accgccatgg 1620
gctcgccgga gaaggtggtg gccgagttca tgactccggc gatggtgatc attgtggagg 1680
aggcgcggaa gctaccgcca ccaccgccgc cgccgccggc agctgctgag gcggcgagag 1740
agaggcccag cggctgcgat ggcggcgacg atatccatca cgtgatccgg cagcggcttg 1800
agctgtggtc aaaggtgaga cgcgaggtgc cgctcatgta ccagccgtcg ccggagcagg 1860
aagacgtcca gctgaccgcc gtgttccggg aggcgtcgct ggaggccatc gaccgagcaa 1920
tgcaccacga catctacctg gccgttgtgc acgtgagcaa ccagaggcga tgctagattg 1980
ctgtccacgg cgatccggcg ccagaagtgg aattagccga tgaagcagct tgcaagcata 2040
atgcttgtta gctatataat taatcttata agtattttgc catatgcatg tctattgcgt 2100
tgatttgcat gtattgaaca agtgtatgag ctttgcctat gttgctagct cgtagagatc 2160
aatcgatctg tgtgtatgca tcacgagatt atgtactgga gagcagagag ctagtaatat 2220
ccggcagtcg tgtgagttgt gccgttgccg ttggcggcaa gagcaagctg gcggatctgc 2280
tcattttcca ttactgtatc cattttcctt ctcaataaat aatattatct cgtgatcgat 2340
tatcctacc 2349
<210> 133
<211> 633
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 133
Met Gly Gln Leu His Asn Leu Met Leu Leu Leu Pro Cys Leu Ile Phe
1 5 10 15
Ser Thr Leu Leu Arg Thr Glu Ala Met Ser Val Ala Pro Val Lys Val
20 25 30
Ser Thr Thr Pro Ile Phe Pro Thr Ile Pro Arg Gly Gln Thr Asn Lys
35 40 45
Asp Phe Gln Val Leu Leu Arg Val Glu Ala Pro Pro Ala Ala Asp Leu
50 55 60
Asn Ser His Val Pro Leu Asp Val Val Ala Val Leu Asp Val Ser Gly
65 70 75 80
Ser Met Asn Asp Pro Val Ala Ala Ala Ser Pro Lys Ser Asn Leu Gln
85 90 95
Gly Ser Arg Leu Asp Val Leu Lys Ala Ser Met Lys Phe Val Ile Arg
100 105 110
Lys Leu Ala Asp Gly Asp Arg Leu Ser Ile Val Ala Phe Asn Asp Gly
115 120 125
Pro Val Lys Glu Tyr Ser Ser Gly Leu Leu Asp Val Ser Gly Asp Gly
130 135 140
Arg Ser Ile Ala Gly Lys Lys Ile Asp Arg Leu Gln Ala Arg Gly Gly
145 150 155 160
Thr Ala Leu Met Pro Ala Leu Glu Glu Ala Val Lys Ile Leu Asp Glu
165 170 175
Arg Gln Gly Ser Ser Arg Asn His Val Gly Phe Ile Leu Leu Leu Thr
180 185 190
Asp Gly Asp Asp Thr Thr Gly Phe Arg Trp Thr Arg Asp Ala Ile His
195 200 205
Gly Ala Val Phe Lys Tyr Pro Val His Thr Phe Gly Leu Gly Ala Ser
210 215 220
His Asp Pro Glu Ala Leu Leu His Ile Ala Gln Gly Ser Arg Gly Thr
225 230 235 240
Tyr Ser Phe Val Asp Asp Asp Asn Leu Ala Asn Ile Ala Gly Ala Leu
245 250 255
Ala Val Cys Leu Gly Gly Leu Lys Thr Val Ala Ala Val Asp Thr Arg
260 265 270
Val Ser Leu Lys Ala Ala Glu Leu Ser Gly Gly Gly Ala Arg Ile Val
275 280 285
Arg Val Asp Ser Gly Gly Tyr Glu Ser Ser Val Ala Cys Gly Gly Ala
290 295 300
Ser Gly Glu Val Val Val Gly Val Leu Tyr Thr Gly Glu Val Lys Asn
305 310 315 320
Phe Val Val His Leu His Val Pro Ala Ala Ser Ser Thr Thr Leu Thr
325 330 335
Phe Ser Ser Val Glu Cys Gly Gly Tyr Tyr Asp Ala Ala Thr Val Cys
340 345 350
Asp His Cys His His Arg His Gln Gln Gln Leu Leu Ala Val Gly Tyr
355 360 365
Ser Tyr Ser His Ala Pro Gly Ala Ala Ser Ala Ala Val Ser Val Glu
370 375 380
Gly His Gly Val Phe Val Glu Arg Pro Glu Val Ala Ala Val Phe Val
385 390 395 400
Ser Val Asp Gly Val Gly Val Gly Gly Gly Arg Gln Arg Gln Ile Pro
405 410 415
Leu Pro Ser Pro Val Val Met Gln His Met Val Arg Phe Glu Leu Leu
420 425 430
Glu Leu Val Ala Gly Phe Ala Glu Ala Glu Met Ala Ser Lys Pro Ala
435 440 445
Ala Thr Thr Thr Gln Pro Arg Ala Ala Asp Val Leu Gln Gly Lys Trp
450 455 460
Glu Glu Phe Arg Arg Ala Arg Gln Phe Trp Gly Gly Val Glu Leu Asp
465 470 475 480
Gly Val Glu Lys Glu Val Asp Ala Met Val Ala Ser Leu Arg Ser Gly
485 490 495
Leu Ala Tyr Val Ser Ser Leu Val Ser Ser His Gln Met Gln Arg Ala
500 505 510
Thr Ala Met Gly Ser Pro Glu Lys Val Val Ala Glu Phe Met Thr Pro
515 520 525
Ala Met Val Ile Ile Val Glu Glu Ala Arg Lys Leu Pro Pro Pro Pro
530 535 540
Pro Pro Pro Pro Ala Ala Ala Glu Ala Ala Arg Glu Arg Pro Ser Gly
545 550 555 560
Cys Asp Gly Gly Asp Asp Ile His His Val Ile Arg Gln Arg Leu Glu
565 570 575
Leu Trp Ser Lys Val Arg Arg Glu Val Pro Leu Met Tyr Gln Pro Ser
580 585 590
Pro Glu Gln Glu Asp Val Gln Leu Thr Ala Val Phe Arg Glu Ala Ser
595 600 605
Leu Glu Ala Ile Asp Arg Ala Met His His Asp Ile Tyr Leu Ala Val
610 615 620
Val His Val Ser Asn Gln Arg Arg Cys
625 630
<210> 134
<211> 845
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 134
atttcggtag ctggtttgct attaacactt taattttgca tgcagcaatt aaggtgttaa 60
ttaatatata taattaagct ttaagctcat tagtttaccg acgatggaag tggccaccaa 120
tacggcgaca cgatcgccgg tgaagctaat gctggtgctg acactgtcgc cggcgagcaa 180
ggtgatcgcc aagggcggcg gcggcgtgaa gcgggtgcac ctcgacggcg gcgcgttcca 240
gtgccggaca tgcgggcggc ggttctccac gttccaggct ctcggcggcc accggaccag 300
ccacaagcgg ccgcgggtgc gcgccgacgg ccttgacctc ctcctcggcg cgcgccccgg 360
caagctcggc gccggcggcg cctcgacgcc ggtagtgcac cggtgcgaca tgtgcggcaa 420
ggtgttcgcc accggccagg cgctcggcgg ccacatgcgc cgccaccggc cgctggtgag 480
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cggctcctcg tcggaagagc gtgacgacga cgacgacgac gacgtgcaca attataattt 600
catccacttt ttgtgagtgg ctaatggaca aatcaatata tgaattgaat aaaaccagtg 660
attaatgtca ataataatta agtttgttct ggagtggtat acaaacacgc aacatgctta 720
tagctagata tatatacacg tatacgccac aagatacaat accaattaag ttcgtctttg 780
attttgtaat gttcaattat attttttcaa tgattaaata cacgtgattt taattgtatt 840
cgttc 845
<210> 135
<211> 170
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 135
Met Glu Val Ala Thr Asn Thr Ala Thr Arg Ser Pro Val Lys Leu Met
1 5 10 15
Leu Val Leu Thr Leu Ser Pro Ala Ser Lys Val Ile Ala Lys Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Val Lys Arg Val His Leu Asp Gly Gly Ala Phe Gln Cys Arg
35 40 45
Thr Cys Gly Arg Arg Phe Ser Thr Phe Gln Ala Leu Gly Gly His Arg
50 55 60
Thr Ser His Lys Arg Pro Arg Val Arg Ala Asp Gly Leu Asp Leu Leu
65 70 75 80
Leu Gly Ala Arg Pro Gly Lys Leu Gly Ala Gly Gly Ala Ser Thr Pro
85 90 95
Val Val His Arg Cys Asp Met Cys Gly Lys Val Phe Ala Thr Gly Gln
100 105 110
Ala Leu Gly Gly His Met Arg Arg His Arg Pro Leu Val Ser Arg Asn
115 120 125
Gly Thr Met Ser Thr Thr Trp Thr Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Thr
130 135 140
Met Ser Gly Ser Ser Ser Glu Glu Arg Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp
145 150 155 160
Val His Asn Tyr Asn Phe Ile His Phe Leu
165 170
<210> 136
<211> 905
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 136
atagactaca gctatacaag aagcatcgac cactacttgt acacaagcaa aagttccatc 60
aacttaacat ggcctcctcg aacttctttc ttctcacagc tctcatcgct ttggtcgcta 120
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ctccagtaca tgtcaatggg ttcccttgca aggatgctaa agatgtgaat gttgatgact 240
tcttcctagc agctaacctc gacaagccga tggacacaac caagagcaag gctggatcca 300
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aaggtctcat tcacttccag ttcaatccaa gctatgataa gccagcagtt gccatcgctg 600
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agtac 905
<210> 137
<211> 229
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 137
Met Ala Ser Ser Asn Phe Phe Leu Leu Thr Ala Leu Ile Ala Leu Val
1 5 10 15
Ala Thr Gln Ala Met Ala Ser Asp Pro Ser Pro Leu Gln Asp Phe Cys
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Val Ala Asp Arg Asn Ser Pro Val His Val Asn Gly Phe Pro Cys Lys
35 40 45
Asp Ala Lys Asp Val Asn Val Asp Asp Phe Phe Leu Ala Ala Asn Leu
50 55 60
Asp Lys Pro Met Asp Thr Thr Lys Ser Lys Ala Gly Ser Asn Val Thr
65 70 75 80
Leu Ile Asn Val Met Lys Leu Ala Gly Leu Asn Thr Leu Gly Ile Ser
85 90 95
Met Ala Arg Ile Asp Tyr Ala Pro Lys Gly Gln Asn Pro Pro His Thr
100 105 110
His Pro Arg Ala Thr Glu Ile Leu Thr Val Leu Glu Gly Thr Leu Tyr
115 120 125
Val Gly Phe Val Thr Ser Asn Gln Ala Asn Gly Glu Asn Lys Leu Phe
130 135 140
Thr Lys Thr Leu Asn Lys Gly Asp Val Phe Val Phe Pro Gln Gly Leu
145 150 155 160
Ile His Phe Gln Phe Asn Pro Ser Tyr Asp Lys Pro Ala Val Ala Ile
165 170 175
Ala Ala Leu Ser Ser Gln Asn Pro Gly Ala Ile Thr Ile Ala Asn Ala
180 185 190
Val Phe Gly Ser Asn Ser Pro Ile Ser Asp Asp Val Leu Ala Lys Ala
195 200 205
Phe Gln Val Asp Lys Lys Ala Val Asp Trp Leu Gln Ala Gln Phe Trp
210 215 220
Glu Asn Asn His Asn
225
<210> 138
<211> 1620
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 138
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ccggcgacaa ggacgccatc gtcgtcgacc tcgtggcgtt ccgcgacggc aaggactact 540
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gcaagtccac catgatcgcc gccatggcca acttcctcga ctacgacgtc tatgacctcg 660
agctcacggc cgtcaagaac aacaccgagc tgcgcaagct ctacatcgag accaccggca 720
agtccatcat cgtcatcgag gacatcgact gctccatcga cctcaccggc aagcgcaaga 780
agtcctccgg cgacaacaag gcgtccgacg gcggcggcga gggcagcgac gacaaaccca 840
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cgaaccacaa ggagaagctg gacccggcgc tgatccggcg ggggaggatg gacgtccaca 1020
tcgagatgtc ctactgcggc ttcgaggcgt tcaaagtgct ggccagcaac tacctcggcg 1080
tggagcagca cgagctgcta ggcgacatac ggcggctgct cgaggaggcc gacatgtcgc 1140
cggcggacgt cgccgagaac ctgatgccca tgtccaagag gaagaagagg gaccctgacg 1200
cgtgcctggc aggtctagtc gaggcgctga acatggccaa ggaggaagca caagcaaaca 1260
aggcggcgaa agaggacgag gaggcaaagg cagcgaaagg gatagaagag atgaaaacca 1320
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gatccctgga gttgcaagcc atgtatccta gcagagtgct catgaagatt ttcaaccttt 1500
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<211> 399
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<213> Oryza sativa
<400> 139
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Leu Asp Gly Tyr Leu Pro His Val Leu Ala Glu Gly Arg Ala Val Thr
35 40 45
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50 55 60
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100 105 110
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115 120 125
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145 150 155 160
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165 170 175
Val Ile Glu Asp Ile Asp Cys Ser Ile Asp Leu Thr Gly Lys Arg Lys
180 185 190
Lys Ser Ser Gly Asp Asn Lys Ala Ser Asp Gly Gly Gly Glu Gly Ser
195 200 205
Asp Asp Lys Pro Lys Leu Pro Thr Glu Ala Asp Lys Asp Asp Gly Gly
210 215 220
Ser Lys Val Thr Leu Ser Gly Leu Leu Asn Phe Ile Asp Gly Leu Trp
225 230 235 240
Ser Ala Cys Gly Gly Glu Arg Ile Ile Ile Phe Thr Thr Asn His Lys
245 250 255
Glu Lys Leu Asp Pro Ala Leu Ile Arg Arg Gly Arg Met Asp Val His
260 265 270
Ile Glu Met Ser Tyr Cys Gly Phe Glu Ala Phe Lys Val Leu Ala Ser
275 280 285
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290 295 300
Leu Leu Glu Glu Ala Asp Met Ser Pro Ala Asp Val Ala Glu Asn Leu
305 310 315 320
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325 330 335
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340 345 350
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355 360 365
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370 375 380
Lys Asp Lys Arg Thr Ser Glu Glu Asn Lys Ala Asn Gly Asp Ile
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<211> 1856
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 140
aattctatct tgcactcaca gatccatcta aacgcgcagc ttggtcgcca tggagcaagt 60
cgcgtactgg ttcatctgcg catgcgcctt cttggctctc gtgctcctcg tcaggctggg 120
cgccgcgcgc cgcgacgtcg tgcgcctccc gccgggcccg tggcggctgc cggtcgtcgg 180
caacctccac cagctgatgc tccggggacc gctcgtccac cgcaccatgg cggacctagc 240
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catcgcctcg tcgtcgtcct cctcgccgac cggccacgac ggcggcgccg cccccgccgt 600
gaacgtcagc gcgccgatcg ccgcggccgt ggcggacgcg acgatgcgcg ccgtgatcgg 660
ggacaggttc gagaggcggg aggagttcct ggagtcgatc acggaggcgg tgaggagctt 720
cacggggttc agcctggacg acctgttccc gtcgtcgagg ctcgccgccg ccgtcggcgg 780
catgacgcgc cgcgcggagg ccagcatccg gaagggccac cagctaatgg acagcgcctt 840
ccgacagcac cagcagctga gggacgccat ggctgcgcag ccgcatcttg atgattgcgc 900
catggaggag gacctgttgg acacgctcct caggatccag aaggaagaca acctcgacgt 960
gcctctcacc accggcaaca tcaaagccgt tctcctggta tgtatacatt aaatttgctt 1020
taacgtcaaa cccgtcacag atgactcatc acagatgcca ggttctatag tagtgggtga 1080
taatagtgtc attttcgctt tgtataatgc cgtaatatat acacaggaca tctttggtgc 1140
ggggagtgac acatcttcac acatggtcca gtgggtcttg tcagagctaa tgaggaaccc 1200
agaagcgatg cacaaagcac aaatcgagct tcggagtacc cttcaaggga agcagatggt 1260
aagtgaagac gacttggcaa gcctgacgta cctaaagctt gtcatcaagg agaccctgag 1320
gcttcatccc gtggtgccat tgcttctccc gagggagtgt cgtcaaacat gcaaggtcat 1380
ggggtacgat gtgcctcaag gcaccaccgt gttcgttaac gtatgggcga ttaacagaga 1440
ccctaggcac tgggatgagc ctgaggtgtt caagccggaa cggtttcaca gtggaaagat 1500
cgactttaaa ggtgcaaatt tcgagtatat accgtttggt gcgggtagga ggatttgccc 1560
tggcatgaca ttcggacatg ctaccgtgga gctcatgctt gcaatgcttc tgtaccactt 1620
cgactgggag ctccctaaag gagttgcacc gaacgaacta gacatgacag aggagatggg 1680
catcactgtg ggtaggaaga atgctcttta tctgcatcct atagtccgtg tgcccttgga 1740
acaagctact atgtcgtagt tgtgctacat accatggggg ttctctacct tgcattatca 1800
tgcttttata tataaatggt tgtggcgact taataaagtg gttctcattt tcattc 1856
<210> 141
<211> 320
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 141
Met Glu Gln Val Ala Tyr Trp Phe Ile Cys Ala Cys Ala Phe Leu Ala
1 5 10 15
Leu Val Leu Leu Val Arg Leu Gly Ala Ala Arg Arg Asp Val Val Arg
20 25 30
Leu Pro Pro Gly Pro Trp Arg Leu Pro Val Val Gly Asn Leu His Gln
35 40 45
Leu Met Leu Arg Gly Pro Leu Val His Arg Thr Met Ala Asp Leu Ala
50 55 60
Arg Gly Leu Asp Asp Ala Pro Leu Met Arg Leu Gln Leu Gly Gly Val
65 70 75 80
Pro Val Val Val Ala Ser Ser Ala Asp Ala Ala Arg Glu Val Thr Arg
85 90 95
Thr His Asp Leu Asp Phe Ala Ser Arg Pro Trp Pro Pro Thr Val Arg
100 105 110
Arg Leu Arg Pro His Arg Glu Gly Val Val Phe Ala Pro Tyr Gly Ala
115 120 125
Met Trp Arg Gln Leu Arg Lys Val Cys Val Val Glu Met Leu Ser Ala
130 135 140
Arg Arg Val Arg Ser Phe Arg Arg Val Arg Glu Glu Glu Ala Ala Arg
145 150 155 160
Leu Val Ala Ser Ile Ala Ser Ser Ser Ser Ser Ser Pro Thr Gly His
165 170 175
Asp Gly Gly Ala Ala Pro Ala Val Asn Val Ser Ala Pro Ile Ala Ala
180 185 190
Ala Val Ala Asp Ala Thr Met Arg Ala Val Ile Gly Asp Arg Phe Glu
195 200 205
Arg Arg Glu Glu Phe Leu Glu Ser Ile Thr Glu Ala Val Arg Ser Phe
210 215 220
Thr Gly Phe Ser Leu Asp Asp Leu Phe Pro Ser Ser Arg Leu Ala Ala
225 230 235 240
Ala Val Gly Gly Met Thr Arg Arg Ala Glu Ala Ser Ile Arg Lys Gly
245 250 255
His Gln Leu Met Asp Ser Ala Phe Arg Gln His Gln Gln Leu Arg Asp
260 265 270
Ala Met Ala Ala Gln Pro His Leu Asp Asp Cys Ala Met Glu Glu Asp
275 280 285
Leu Leu Asp Thr Leu Leu Arg Ile Gln Lys Glu Asp Asn Leu Asp Val
290 295 300
Pro Leu Thr Thr Gly Asn Ile Lys Ala Val Leu Leu Val Cys Ile His
305 310 315 320
<210> 142
<211> 1211
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 142
acaagaacac gcgccacatt tgtcattcag acattcagtt tgtgctggct gggcacttac 60
tgcatcgatc gatctcctct tcagaacaag aagagatcag ctttggagct agctagctta 120
gctagccggc tgagctaatt tcgccttgct ttggtttttg tttttagttt atctgaagga 180
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acaacatcct ggtgtcgacg atcaacggcg ccggcgcggt gatcgagacg gcgtacgtgg 480
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tacatttgtt t 1211
<210> 143
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<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 143
Met Glu Asp Leu Ala Lys Phe Leu Phe Gly Val Ser Gly Asn Val Ile
1 5 10 15
Ala Leu Phe Leu Phe Leu Ser Pro Val Pro Thr Phe Trp Arg Ile Ile
20 25 30
Arg Arg Lys Ser Thr Glu Asp Phe Ser Gly Val Pro Tyr Asn Met Thr
35 40 45
Leu Ile Asn Cys Leu Leu Ser Ala Trp Tyr Gly Leu Pro Phe Val Ser
50 55 60
Pro Asn Asn Ile Leu Val Ser Thr Ile Asn Gly Ala Gly Ala Val Ile
65 70 75 80
Glu Thr Ala Tyr Val Val Val Phe Leu Val Phe Ala Ser Thr His Lys
85 90 95
Thr Arg Leu Arg Thr Leu Gly Leu Ala Ala Ala Val Ala Ser Val Phe
100 105 110
Ala Ala Val Ala Leu Val Ser Leu Leu Ala Leu His Gly Gln His Arg
115 120 125
Lys Leu Leu Cys Gly Val Ala Ala Thr Val Cys Ser Ile Cys Met Tyr
130 135 140
Ala Ser Pro Leu Ser Ile Met Arg Leu Val Ile Lys Thr Lys Ser Val
145 150 155 160
Glu Tyr Met Pro Phe Leu Met Ser Leu Ala Val Phe Leu Cys Gly Thr
165 170 175
Ser Trp Phe Ile Tyr Gly Leu Leu Gly Arg Asp Pro Phe Val Thr Ile
180 185 190
Pro Asn Gly Cys Gly Ser Phe Leu Gly Ala Val Gln Leu Val Leu Tyr
195 200 205
Ala Ile Tyr Arg Asn Asn Lys Gly Ala Gly Gly Gly Ser Gly Gly Lys
210 215 220
Gln Ala Gly Asp Asp Asp Val Glu Met Ala Glu Gly Arg Asn Asn Lys
225 230 235 240
Val Ala Asp Gly Gly Ala Ala Asp Asp Asp Ser Thr Ala Gly Gly Lys
245 250 255
Ala Gly Thr Glu Val
260
<210> 144
<211> 1968
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 144
acgaaaacat agattagatc attagacgtg ctattaattt gcgacctgtt aaaaaataaa 60
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tatgggcatc cgacaatgat ttcactggga gaatacctga ttatattggg agcttatcag 660
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gacagaaaag gaaaaaaatg gaggcggaga tgggaggtag ttaaaatt 1968
<210> 145
<211> 484
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 145
Met Thr Ala Leu Gln Tyr Leu Leu Val Gly Ile Asn Ala Leu Thr Gly
1 5 10 15
Ile Leu Pro Arg Glu Leu Gly Asn Leu Asn Asn Leu Leu Ala Leu Trp
20 25 30
Ala Ser Asp Asn Asp Phe Thr Gly Arg Ile Pro Asp Tyr Ile Gly Ser
35 40 45
Leu Ser Asp Leu Thr Glu Leu Arg Ile Gln Gly Asn Asn Phe Asp Gly
50 55 60
Pro Ile Pro Thr Ser Phe Ser Asn Leu Val Asn Leu Thr Ser Leu Arg
65 70 75 80
Ile Gly Asp Leu Val Ser Gly Ser Ser Ser Leu Ala Phe Met Ser Asn
85 90 95
Met Thr Ser Leu Ile Val Leu Thr Leu Arg Asn Cys Arg Ile Ser Asp
100 105 110
Asn Leu Ala Ser Val Asp Phe Ser Lys Phe Val Gly Leu Tyr Tyr Leu
115 120 125
Asp Leu Ser Phe Asn Asn Ile Thr Gly Lys Val Pro Ser Val Leu Leu
130 135 140
Asn Leu Asn Ser Leu Ile Tyr Leu Phe Leu Gly Asn Asn Ser Leu Ser
145 150 155 160
Gly Ser Leu Pro Asp Thr Lys Gly Ala Ser Leu Lys Val Leu Asp Phe
165 170 175
Ser Tyr Asn Glu Leu Ser Gly Lys Phe Pro Ser Trp Tyr Ser Thr Glu
180 185 190
Arg His Leu Gln Val Asn Leu Val Trp Asn Asn Phe Met Ile Asp Ser
195 200 205
Ser Asn Arg Ser Ile Leu Ser Ser Gly Leu Asn Cys Leu Gln Arg Asn
210 215 220
Thr Pro Cys Leu Pro Ala Ser Pro Asp Asp Ser Ser Phe Ala Val Asp
225 230 235 240
Ser Gly Gly Thr Arg Pro Ile Ile Gly Ser Asp Lys Ser Tyr Tyr Glu
245 250 255
Pro Asp Asp Thr Asn Leu Gly Glu Ala Ser Tyr Tyr Val Ser Asn Ser
260 265 270
Thr Arg Trp Gly Ile Ser Asn Thr Gly Lys Phe Met Glu Ala Ala Asn
275 280 285
Phe Ser Phe Ile Val Tyr Thr Ser Arg Gln Phe Thr Asn Thr Leu Asp
290 295 300
Ser Val Leu Phe Gln Thr Ala Arg Thr Ser Ser Ser Ser Leu Arg Tyr
305 310 315 320
Tyr Gly Ile Gly Leu Lys Asn Gly Phe Tyr Asn Val Glu Leu Gln Phe
325 330 335
Ala Glu Ile Phe Phe Pro Asp Asn Thr Thr Trp Thr Ser Leu Gly Thr
340 345 350
Arg Ile Phe Asp Ile Phe Ile Gln Gly Glu Leu Arg Glu Lys Asp Phe
355 360 365
Asp Ile Lys Lys Gln Thr Asn Gly Lys Ser Tyr Thr Val Val Leu Arg
370 375 380
Gln Tyr Val Val Arg Val Thr Glu Asn Phe Met Glu Ile His Leu Phe
385 390 395 400
Trp Ala Gly Lys Gly Thr Cys Cys Ile Pro Arg Gln Gly Ser Tyr Gly
405 410 415
Pro Leu Ile Ser Ala Leu Ser Val Ser Pro Tyr Gly Gly Asn Asn Lys
420 425 430
Val Asp Pro Gly Pro Ile Lys Asn Ser Ala Gly Lys Ser Lys Ile Ala
435 440 445
Leu Val Ala Gly Val Val Val Cys Thr Ile Val Leu Gly Leu Leu Ser
450 455 460
Thr Gly Thr Phe Leu Trp Arg Gln Lys Arg Lys Lys Met Glu Ala Glu
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Met Gly Gly Ser
<210> 146
<211> 1466
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 146
gagtagcaca tatagtactg cacgaagaac tacaccatgg cgcaaaatgt ccaagaaaat 60
gagcaggtga tgagcacgga ggacttgctc caagctcaga tcgagctcta ccaccactgc 120
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<211> 364
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 147
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1 5 10 15
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35 40 45
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100 105 110
Val Glu Arg Thr His Gly Leu Ser Gln Met Val Arg Val Phe Val Asn
115 120 125
Pro Val Ala Val Ala Ser Gln Phe Ser Leu His Glu Trp Phe Thr Val
130 135 140
Glu Lys Ala Ala Ala Val Ser Leu Phe Glu Val Ala His Gly Cys Thr
145 150 155 160
Arg Trp Glu Met Ile Ala Asn Asp Ser Lys Asp Gly Ser Met Phe Asn
165 170 175
Ala Gly Met Val Glu Asp Ser Ser Val Ala Met Asp Ile Ile Leu Arg
180 185 190
Lys Ser Ser Asn Val Phe Arg Gly Ile Asn Ser Leu Val Asp Val Gly
195 200 205
Gly Gly Tyr Gly Ala Val Ala Ala Ala Val Val Arg Ala Phe Pro Asp
210 215 220
Ile Lys Cys Thr Val Leu Asp Leu Pro His Ile Val Ala Lys Ala Pro
225 230 235 240
Ser Asn Asn Asn Ile Gln Phe Val Gly Gly Asp Leu Phe Glu Phe Ile
245 250 255
Pro Ala Ala Asp Val Val Leu Leu Lys Cys Ile Leu His Cys Trp Gln
260 265 270
His Asp Asp Cys Val Lys Ile Met Arg Arg Cys Lys Glu Ala Ile Ser
275 280 285
Ala Arg Asp Ala Gly Gly Lys Val Ile Leu Ile Glu Val Val Val Gly
290 295 300
Ile Gly Ser Asn Glu Thr Val Pro Lys Glu Met Gln Leu Leu Phe Asp
305 310 315 320
Val Phe Met Met Tyr Thr Asp Gly Ile Glu Arg Glu Glu His Glu Trp
325 330 335
Lys Lys Ile Phe Leu Glu Ala Gly Phe Ser Asp Tyr Lys Ile Ile Pro
340 345 350
Val Leu Gly Val Arg Ser Ile Ile Glu Val Tyr Pro
355 360
<210> 148
<211> 1971
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 148
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gcggagctct ccgacgagtc gccgaggaag aaagggttag ggtgggaggg caaggtcagg 1500
tctccgtcaa agtttgacct aatgttcaaa tctcaagatt gtgttctgtt aggaatcgag 1560
tgggctgcca atgggcctgt acaaccattc attcaagctg gcccaagcaa acccaagccg 1620
ctgatccatg ggatttcaag catggaggca atggggaagt accgctgcgg cgtcccgtgc 1680
agttggtcat tggatttggg caaggctact gctcatggca ccaacgccca caacctgttc 1740
ggtgaaatgt caagccaagg agaggtgtcc caagaagatc tcaagatatc taaggccgtc 1800
cccatcaatt cccccatgaa caaagaggag aaaatgatgg atgaagctct ggatcagata 1860
ttggagaagc ttgaacaaat gaagaccaag cgtaggtgca atgagaagat tgatcagatt 1920
ttggagaagt tggacgagat agaagctaat aggcgctata gttggccata a 1971
<210> 149
<211> 656
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 149
Met Glu Phe Leu Ser Gln Met Trp Ser Leu Leu Gly Leu Leu Thr Ile
1 5 10 15
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100 105 110
Ser Val Ser Leu Ser Pro Asn His Ser Val Ala Asp Ser Phe Asp Gly
115 120 125
His Arg Ala Val Trp Thr His His Ala Asp Thr Leu Gln Asp Ser Leu
130 135 140
Glu Glu Arg Arg Ser Phe Ser Leu Arg Leu Pro Lys Arg His Ala Ala
145 150 155 160
Ala Val Leu Pro Ala Tyr Leu Ala His Leu Ala Ala Ala Ala Asp His
165 170 175
Leu Glu Arg Ser Ser Arg Ala Arg Arg Leu His Thr Asn Ala Ala Ser
180 185 190
Pro Arg Gly Ala Ala Ala Trp Ser Ser Val Pro Phe Cys His Pro Ser
195 200 205
Thr Phe Asp Thr Leu Ala Leu Asp Pro Glu Leu Lys Ala Arg Leu Leu
210 215 220
Ala Asp Leu Thr Ala Phe Ala Asp Gly Ser Glu Phe Tyr Arg Arg Thr
225 230 235 240
Gly Arg Pro Trp Lys Arg Gly Tyr Leu Leu His Gly Pro Pro Gly Ser
245 250 255
Gly Lys Ser Ser Leu Ile Ala Ala Met Ala Asn His Leu Arg Tyr Asp
260 265 270
Val Phe Asp Leu Glu Leu Thr Arg Val Ala Thr Asn Ala Asp Leu Arg
275 280 285
Ala Leu Leu Ile Gln Thr Thr Asn Arg Ser Leu Ile Val Ile Glu Asp
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Ile Asp Cys Ser Leu His Leu Thr Gly Asp Arg Lys Ser Arg Arg Asn
305 310 315 320
Lys Arg Arg Arg Leu Leu His Ala Thr Ala Ala Ser Asp Asp Asp Ser
325 330 335
Ser Asp Ser Asp Ser Asp Gly Gly Asp Asn His Arg Ser Lys Val Thr
340 345 350
Leu Ser Gly Leu Leu Asn Phe Thr Asp Gly Leu Trp Ser Cys Cys Gly
355 360 365
Glu Glu Arg Ile Ile Val Phe Thr Thr Asn His Val Asp Gly Ile Asp
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Pro Ala Leu Leu Arg Pro Gly Arg Met Asp Val His Val Arg Leu Gly
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Ala Cys Gly Ala His Ala Met Arg Glu Leu Val Gly Arg Tyr Val Gly
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Val Glu Asp His Glu Met Leu Asp Ala Ala Glu Cys Cys Val Arg Gly
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435 440 445
Arg Asp Asp Pro Asp Ala Ala Val Thr Glu Leu Ala Val Glu Leu Lys
450 455 460
Ala Arg Gln Ser Ala Ala Ala Asp Glu Leu Gln Trp Glu Asp Ser Ala
465 470 475 480
Ala Glu Leu Ser Asp Glu Ser Pro Arg Lys Lys Gly Leu Gly Trp Glu
485 490 495
Gly Lys Val Arg Ser Pro Ser Lys Phe Asp Leu Met Phe Lys Ser Gln
500 505 510
Asp Cys Val Leu Leu Gly Ile Glu Trp Ala Ala Asn Gly Pro Val Gln
515 520 525
Pro Phe Ile Gln Ala Gly Pro Ser Lys Pro Lys Pro Leu Ile His Gly
530 535 540
Ile Ser Ser Met Glu Ala Met Gly Lys Tyr Arg Cys Gly Val Pro Cys
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Ser Trp Ser Leu Asp Leu Gly Lys Ala Thr Ala His Gly Thr Asn Ala
565 570 575
His Asn Leu Phe Gly Glu Met Ser Ser Gln Gly Glu Val Ser Gln Glu
580 585 590
Asp Leu Lys Ile Ser Lys Ala Val Pro Ile Asn Ser Pro Met Asn Lys
595 600 605
Glu Glu Lys Met Met Asp Glu Ala Leu Asp Gln Ile Leu Glu Lys Leu
610 615 620
Glu Gln Met Lys Thr Lys Arg Arg Cys Asn Glu Lys Ile Asp Gln Ile
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Leu Glu Lys Leu Asp Glu Ile Glu Ala Asn Arg Arg Tyr Ser Trp Pro
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 150
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ggagagctgt ggcgttttcc agggcatcag ctctctggtt gatgttggcg gtggccatgg 540
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ctttttcgag tttattccag cagctgatgt tgtgctactt aagtatattt tgcatgcttg 720
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<212> PRT
<213> Oryza sativa
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Asp Ser Arg Val Ala Met Asp Ile Ile Leu Lys Glu Ser Cys Gly Val
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Ala Ala Ala Ala Ile Ala Thr Ala Phe Pro Asn Ile Lys Cys Thr Val
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Leu Asp Leu Pro His Ile Val Ala Glu Ala Pro Thr Thr His Ser Asn
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Ile Gln Phe Val Gly Gly Asp Phe Phe Glu Phe Ile Pro Ala Ala Asp
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Val Val Leu Leu Lys Tyr Ile Leu His Ala Trp Gln Asp Asp Asp Cys
115 120 125
Val Lys Ile Leu Arg Arg Cys Lys Glu Ala Ile Leu Ala Arg Asp Ala
130 135 140
Gly Gly Lys Val Ile Ile Ile Glu Val Val Val Gly Ile Gly Pro Lys
145 150 155 160
Glu Ile Val Pro Lys Glu Met Gln Ile Leu Phe Asp Val Phe Met Met
165 170 175
Tyr Val Asp Gly Ile Glu Arg Glu Glu His Glu Trp Lys Lys Ile Phe
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Leu Glu Ala Gly Phe Ser Asp Tyr Lys Ile Thr Pro Val Leu Gly Ala
195 200 205
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115 120 125
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195 200 205
Gly Gly Gly His Gly Ala Ala Ala Ala Ala Ile Ala Thr Ala Phe Pro
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Asn Ile Lys Cys Thr Val Leu Asp Leu Pro His Ile Val Ala Glu Ala
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245 250 255
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275 280 285
Ile Pro Ala Arg Asp Ala Gly Gly Lys Val Ile Ile Ile Glu Val Val
290 295 300
Val Gly Ile Gly Ser Glu Glu Ile Val Pro Lys Glu Met Gln Leu Leu
305 310 315 320
Phe Asp Val Phe Met Met Tyr Ile Asp Gly Ile Glu Arg Glu Glu Tyr
325 330 335
Glu Trp Lys Lys Ile Phe Leu Glu Ala Gly Phe Ser Asp Tyr Lys Ile
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 154
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Leu Leu Glu Leu Gln Phe Leu Leu His Asp Leu Gln Ser Tyr Asn Ser
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<210> 156
<211> 4593
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 156
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cgaataaagc acaagatggt tttacttgtg ctggatgatg tatggaatga acgaagagat 780
tgctgggatc tgttgtgcga accgatgaac acagcaaagt tatgtatgat tatagtaaca 840
acccgtagtg agagagtggc aaagcttgtg cagacaatgc ctaatttcta cagcctaaac 900
tgcctaagtt ctgaagagag ctggtcattg tttaagcaag ttgcttttac tgttgacaat 960
ggaaacactc caaaccttca agagatcgga atgtctattg ttaaaaagtg taagggctta 1020
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attcctgcat cgacttcact acgcacgctg cgcattgatc ggcggagctt tgacttgcgc 2520
agaagctcaa ctgatggtcc gcggctgaat cgcctcccgt ccttggagtg tttaacagtc 2580
atctgccatg acaccacaag catccttctt cagccacagc acctgccttc actcaagaag 2640
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cagctacaga ctctggatgt tcgttgctca ccaggaatcg agtgggctgc caatgggcct 2820
gtacaaccat tcattcaagc tggcccaagc aaacccaagc cgctgatcca tgggatttca 2880
agcatggagg caatggggaa gtaccgctgc ggcgtcccgt gcagttggtc attggatttg 2940
ggcaaggcta ctgctcatgg caccaacgcc cacaacctgt tcggtgaaat gtcaagccaa 3000
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atagaagcta ataggcgcaa atcattcgag gagacaacta acatcatcaa ggcgacaacc 3240
tccatcttca attctgcatc atcttcaaca cccccgacct cgcctactcc agtgctcgcc 3300
aagtgttcgt gggcgtgttc caacagtgcc agtgcgtaca cgacaacaag tgcaagccac 3360
aacatcgatg ttcctactcc gacagtcgcc atgggcttgc aggtgagttt gaaccatggc 3420
attggtacta caacagtgac gcccaccaag tgcttggtaa attgcttcga caatgacacc 3480
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gagacagtgg ttagcgagga caaggcctgc tctattttca tcaatactac tgacctcacc 3600
aaggttatgc attcaaggtg tacgacaatc agcctcaaag acaacatcgg tactattcag 3660
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aacgggtgtt tgatgaaatg cctcaaaagt gacaagaggc tgctggcggg gcttcccaag 3840
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ctgtttgctt ggaaggcaca gtgggatttt gttagttaca ggagctgcac cgttgttgaa 4020
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tattttgagg ttattgaaag caggcttatt agtgatataa gccacttgga tggcaacaat 4200
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aaaacaagag gcacaattgt taagcttgtg gtaaaatatg agcactgtga agaaggcata 4500
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<213> Oryza sativa
<400> 157
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Leu Ser Ser Ile Leu Pro Ala Arg Ser Leu Leu Ala Ser Ser Ser Ser
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Asn Cys Gly Leu Ser Glu Val Cys Ser Pro His Glu Thr Leu Ala Lys
225 230 235 240
Arg Ile Lys His Lys Met Val Leu Leu Val Leu Asp Asp Val Trp Asn
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Lys Leu Cys Met Ile Ile Val Thr Thr Arg Ser Glu Arg Val Ala Lys
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tccgcgccgc cttcagcggg tgccacggcg tcttccatgt cgcctccccg gtgtctaacg 420
accctgacct tgttccggtt gcagtggagg ggacgaggaa cgtgatcaac gcagcggcgg 480
acatgggcgt gcgccgcgtg gtgttcacgt cgtcgtacgg cgccgtgcac atgaacccca 540
accggagccc cgacgccgtc ctcgacgaga cctgctggag cgactacgaa ttctgcaagc 600
aaacagacaa cctgtactgc tgcgccaaga tgatggcgga gatgacggcg acggaggagg 660
cggcgaagag ggggctggag ctggcggtgg tggtgccgtc gatgacgatg ggtcccatgc 720
ttcagcagac gctcaacttc agcaccaacc acgtcgcccg ctacctcatg ggcaccaaga 780
agtcctaccc caacgccgtc gcggcctacg tcgacgtccg cgacgtcgcc cgcgcacacg 840
tcctcgtcta cgagcgcccc gaggcacgcg gccgctacct ctgcatcggc accgtgctcc 900
accgcgccga gctcctccgg atgctcaggg agctcttccc acggtaccct gccactgcaa 960
agtgtgagga tgatgggaag ccgatggcga agccgtataa gttctcgaac cagaggctca 1020
aggatttggg tttggagttc actccactga ggaagagttt gaatgaggcg gtcctatgca 1080
tgcagcagaa gggtcacctg cctctgattt atcccgttcc aaaacgtgct tacctataaa 1140
atcaagataa aaatacgaat tcgtctgttg cgatgggaaa cagagagcaa cagggaaaaa 1200
acaaaggaaa aaaaaggaaa cacaagggct ctgagattgt ttatttgtgc aagtgtagta 1260
ggcatttata ttttgttctt acacatgtaa agcccttctg taatgaacaa taaggtccca 1320
tggagggaac ggcaaatgca aatatggcct tcatttgtat tctgggcttc aggatgtaaa 1380
tttgaatatc attgtattta ttttctatgt tgcagggaat ttccgagt 1428
<210> 163
<211> 338
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 163
Met Ser Ser Asn Phe Glu Ala Asn Asn Asn Asn Asn Gly Glu Lys Gln
1 5 10 15
Leu Val Cys Val Thr Gly Ala Gly Gly Phe Ile Gly Ser Trp Val Val
20 25 30
Lys Glu Leu Leu Ile Arg Gly Tyr His Val Arg Gly Thr Ala Arg Asp
35 40 45
Pro Ala Asp Ser Lys Asn Ala His Leu Leu Glu Leu Glu Gly Ala Asp
50 55 60
Glu Arg Leu Ser Leu Cys Arg Ala Asp Val Leu Asp Ala Ala Ser Leu
65 70 75 80
Arg Ala Ala Phe Ser Gly Cys His Gly Val Phe His Val Ala Ser Pro
85 90 95
Val Ser Asn Asp Pro Asp Leu Val Pro Val Ala Val Glu Gly Thr Arg
100 105 110
Asn Val Ile Asn Ala Ala Ala Asp Met Gly Val Arg Arg Val Val Phe
115 120 125
Thr Ser Ser Tyr Gly Ala Val His Met Asn Pro Asn Arg Ser Pro Asp
130 135 140
Ala Val Leu Asp Glu Thr Cys Trp Ser Asp Tyr Glu Phe Cys Lys Gln
145 150 155 160
Thr Asp Asn Leu Tyr Cys Cys Ala Lys Met Met Ala Glu Met Thr Ala
165 170 175
Thr Glu Glu Ala Ala Lys Arg Gly Leu Glu Leu Ala Val Val Val Pro
180 185 190
Ser Met Thr Met Gly Pro Met Leu Gln Gln Thr Leu Asn Phe Ser Thr
195 200 205
Asn His Val Ala Arg Tyr Leu Met Gly Thr Lys Lys Ser Tyr Pro Asn
210 215 220
Ala Val Ala Ala Tyr Val Asp Val Arg Asp Val Ala Arg Ala His Val
225 230 235 240
Leu Val Tyr Glu Arg Pro Glu Ala Arg Gly Arg Tyr Leu Cys Ile Gly
245 250 255
Thr Val Leu His Arg Ala Glu Leu Leu Arg Met Leu Arg Glu Leu Phe
260 265 270
Pro Arg Tyr Pro Ala Thr Ala Lys Cys Glu Asp Asp Gly Lys Pro Met
275 280 285
Ala Lys Pro Tyr Lys Phe Ser Asn Gln Arg Leu Lys Asp Leu Gly Leu
290 295 300
Glu Phe Thr Pro Leu Arg Lys Ser Leu Asn Glu Ala Val Leu Cys Met
305 310 315 320
Gln Gln Lys Gly His Leu Pro Leu Ile Tyr Pro Val Pro Lys Arg Ala
325 330 335
Tyr Leu
<210> 164
<211> 1285
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 164
ggcgtgccaa gttgtgtgtg tgtaccgcgg catggcggac cagctcatct ccacggcaga 60
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ctacccgctt caccgctacc tccctgattg gccatccaac cccccttcct tcagggagat 480
cataagcaca tactgcaaag aagttcggga gctcggattc agactgtacg gagcgatatc 540
cgagagcctg ggcttggaac aggactacat caagaaggtt cttggtgagc aggagcagca 600
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agttctcaag gaaggcaggt ggatcgccgt gaatccacag cccaacgcgc tggtgatcaa 780
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<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 165
Met Ala Asp Gln Leu Ile Ser Thr Ala Asp His Asp Thr Leu Pro Gly
1 5 10 15
Asn Tyr Val Arg Pro Glu Ala Gln Arg Pro Arg Leu Ala Asp Val Leu
20 25 30
Ser Asp Ala Ser Ile Pro Val Val Asp Leu Ala Asn Pro Asp Arg Ala
35 40 45
Lys Leu Val Ser Gln Val Gly Ala Ala Cys Arg Ser His Gly Phe Phe
50 55 60
Gln Val Leu Asn His Gly Val Pro Val Glu Leu Thr Leu Ser Val Leu
65 70 75 80
Ala Val Ala His Asp Phe Phe Arg Leu Pro Ala Glu Glu Lys Ala Lys
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Leu Tyr Ser Asp Asp Pro Ala Lys Lys Ile Arg Leu Ser Thr Ser Phe
100 105 110
Asn Val Arg Lys Glu Thr Val His Asn Trp Arg Asp Tyr Leu Arg Leu
115 120 125
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130 135 140
Pro Ser Phe Arg Glu Ile Ile Ser Thr Tyr Cys Lys Glu Val Arg Glu
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Leu Gly Phe Arg Leu Tyr Gly Ala Ile Ser Glu Ser Leu Gly Leu Glu
165 170 175
Gln Asp Tyr Ile Lys Lys Val Leu Gly Glu Gln Glu Gln His Met Ala
180 185 190
Val Asn Phe Tyr Pro Lys Cys Pro Glu Pro Glu Leu Thr Phe Gly Leu
195 200 205
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210 215 220
Gln Val Ala Gly Leu Gln Val Leu Lys Glu Gly Arg Trp Ile Ala Val
225 230 235 240
Asn Pro Gln Pro Asn Ala Leu Val Ile Asn Ile Gly Asp Gln Leu Gln
245 250 255
Ala Leu Thr Asn Gly Arg Tyr Lys Ser Val Trp His Arg Ala Val Val
260 265 270
Asn Ser Asp Lys Ala Arg Met Ser Val Ala Ser Phe Leu Cys Pro Cys
275 280 285
Asn Asp Val Leu Ile Gly Pro Ala Gln Lys Leu Ile Thr Asp Gly Ser
290 295 300
Pro Ala Val Tyr Arg Asn Tyr Thr Tyr Asp Glu Tyr Tyr Lys Lys Phe
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Trp Ser Arg Asn Leu Asp Gln Glu His Cys Leu Glu Leu Phe Arg Thr
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Thr Pro Thr Asp Thr Ser
340
<210> 166
<211> 1853
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 166
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<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 167
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Ala Ala Phe Val Pro Pro Pro Pro Pro Pro Thr Pro Pro Gln Tyr Val
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Pro Pro Glu Glu Pro Ser Ala Phe Ala Lys Leu Tyr Ala Val Ala Gly
35 40 45
Asp Val Val Gly Arg Ala Lys Ala Leu Leu Thr Thr Gly Gly Pro Val
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Thr Ala Pro Pro Ser Asp Pro Ala Pro Ala Ala Pro Gln Lys Asp Ser
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Gly Val Val Gly Ala Val Leu Ala Leu Cys Val Leu Thr Leu Trp Ile
115 120 125
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130 135 140
Pro Leu Pro Pro Pro Ile Tyr Asn Pro Asn Pro Tyr Tyr Lys Gly Asp
145 150 155 160
Leu Pro Pro Gln Pro Phe Val Ala Gln Gln Pro Pro Ser Asp His Tyr
165 170 175
Phe Ile Gln His Gln His Pro Thr Pro Pro Gln Thr Ser Gly Thr Phe
180 185 190
Ser Asp Ala Gly Ser Glu Arg Pro His Ser Ile Asp Ile Leu Thr Glu
195 200 205
Leu Pro Thr Gly Gly Ser Leu Ser Tyr Asp Gln Leu Ala Ala Ala Thr
210 215 220
Asp Gly Phe Ser Pro Asp Asn Val Ile Gly Gln Gly Gly Phe Gly Cys
225 230 235 240
Val Tyr Arg Gly Thr Leu Gln Asp Gly Thr Glu Val Ala Ile Lys Lys
245 250 255
Leu Lys Thr Glu Ser Lys Gln Gly Asp Arg Glu Phe Arg Ala Glu Val
260 265 270
Glu Ile Ile Thr Arg Val His His Arg Asn Leu Val Ser Leu Val Gly
275 280 285
Phe Cys Ile Ser Gly Asn Glu Arg Leu Leu Val Tyr Glu Phe Val Pro
290 295 300
Asn Lys Thr Leu Asp Thr His Leu His Gly Asn Lys Gly Pro Pro Leu
305 310 315 320
Asp Trp Gln Gln Arg Trp Lys Ile Ala Val Gly Ser Ala Arg Gly Leu
325 330 335
Ala Tyr Leu His Asp Asp Cys Ser Pro Lys Ile Ile His Arg Asp Val
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Lys Ala Ser Asn Ile Leu Leu Asp His Asp Phe Glu Pro Lys Val Ala
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370 375 380
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Tyr Met Asp Ser Thr Leu Val Ala Trp Ala Lys Pro Leu Leu Ser Glu
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485 490 495
Leu Lys His Leu Gln Gly Glu Thr His Gly Glu Asp Leu Asn Ser Ile
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Phe Arg Ile Thr Tyr Ala Glu Asp Thr Tyr Ser Ser Ile Met Glu Ser
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Asn Arg Ser Pro Ala Lys Gly Arg
565
<210> 168
<211> 1483
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 168
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<213> Oryza sativa
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Met Ala Phe Ser Ser Glu Gly Gly Val Pro Ala Glu Arg Val Ala Ala
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Gly Phe Leu Pro Pro Pro Pro Gln Ala Glu Gln Ser Ser Ser Arg Pro
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 170
atcatccatc catctccctg cagctacgta ctgtacttgt tagcaatcaa tcccatcaaa 60
tcatccaccg ctcgctgctg ctgctacgta ctatacagct tgattaatta ggttttacga 120
cgacggcaac ggggacagat atgacggccg ccctgcaagc gctgctcgac ccgacggcgc 180
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ccgcgctcgc ctgcacgcgg gcggggaagg ccctggtggg agtgggaggc cagcagcagg 300
tgcaggcctg caataagtgg ctgtgcccag cgcccgcggc gcctgaggag ctccgcttcc 360
ggtgcaccgt ctgcgggaag gccttcgcct cgtaccaggc gctcggcgga cacaagtcca 420
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agaagctcag gatgtccaac taattcatca tacgccatct tgtaaaaaca agagatctgc 840
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<213> Oryza sativa
<400> 171
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100 105 110
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115 120 125
Ala Gly Ser Thr Gly Pro His Arg Cys Thr Ile Cys Arg Arg Ser Phe
130 135 140
Ala Thr Gly Gln Ala Leu Gly Gly His Lys Arg Cys His Tyr Trp Asp
145 150 155 160
Gly Thr Ser Val Ser Val Ser Val Ser Ala Ser Ala Ser Ala Ala Ser
165 170 175
Ser Ala Val Arg Asn Phe Asp Leu Asn Leu Met Pro Leu Pro Glu Ser
180 185 190
Thr Ala Ala Ala Gly Ile Lys Arg Trp Ala Glu Glu Glu Glu Val Gln
195 200 205
Ser Pro Leu Pro Val Lys Lys Leu Arg Met Ser Asn
210 215 220
<210> 172
<211> 1454
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 172
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cgtcgtcgtc ggccgcctcc ttcttcttct tgcgcgcgcc ggtgaggtcg agcgagcagt 120
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agaggcggta gtaccggcga ttctcctgcg cgcggccgcc gccgccccag ccgtagtacc 660
cgcctccatc ggtgcgcggc ggcggcgtgg agtacgcgca ccaccagacg gtgacgtcgg 720
tgctgtcgtc ggcggcgacg acgtcggaga cctcctcgcc gtcgaccatg ctgaggacga 780
gcttgtcggc gtccttggcg ccctcggcgc ggaggtggcg cacgtcgcgc gccgacgacg 840
cgctgaggta ggccttgacc tcctcgtacg ccgcgctccg cttcatcctg ccgccctcgt 900
actcgtggat ggtgaccgac aggtacgggt cgacgagcgc cgccagccgc cgcgcgtgcc 960
ggttcatgtg ccgccccacc agcgtctgca gctgcagccg ctgcagattc tgccacacca 1020
ccgtccacag caccgcgatc aggctcagca ccacgccgga gttcagcccg ttcaacaacg 1080
acgacgacga cgacgtcgcc tccatttgtc tcaaaaccaa attaatttcc caattcacga 1140
acacgcagaa ggattgatca gagatgtgat atgggtggat atggatatgg aaagatgtgg 1200
aggctttggc acttggcgcg ccgtggattt ataggggcgc ggcggcgggc ggaatgtgct 1260
tggaaagggg gtaaggaatg gtggtggtgt ggtggtcgag tcgtcgttgt cgtcgcatct 1320
ctcgcatgtg cagctgctgc tcaagccgac atgaacgttt ttgttctctt gtgatgtggt 1380
ggtagtggac tggatagact agtactccac tgttgtttac ttttgggcga aggatcaaat 1440
gctaggcgtt tctt 1454
<210> 173
<211> 82
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 173
Met Val Thr Asp Arg Tyr Gly Ser Thr Ser Ala Ala Ser Arg Arg Ala
1 5 10 15
Cys Arg Phe Met Cys Arg Pro Thr Ser Val Cys Ser Cys Ser Arg Cys
20 25 30
Arg Phe Cys His Thr Thr Val His Ser Thr Ala Ile Arg Leu Ser Thr
35 40 45
Thr Pro Glu Phe Ser Pro Phe Asn Asn Asp Asp Asp Asp Asp Val Ala
50 55 60
Ser Ile Cys Leu Lys Thr Lys Leu Ile Ser Gln Phe Thr Asn Thr Gln
65 70 75 80
Lys Asp
<210> 174
<211> 1293
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 174
gatcagagtt tgacattgtt gcctgcatca ctttcacagg tatggtgagg aagctcatcc 60
tagctctggc cgtgttcttg ccggcgctgg tgtaccagca gctccagcct ccgcctccga 120
agatctgcgg ctccccgggt ggccctccgg ttacagggac aagaacacag ctcaaggacg 180
gtaggcattt ggcctacctg gagtccggcg tcccaaagga ccaggccaag tacaagatca 240
tctttgttca tggttttgac tcgtgcagat acgatgctct cccaatttcc ccggagctgg 300
cgcaagagct gggcatttac cagctgtcct tcgatcggcc ggggtacgcc gagagcgacc 360
caaacccggc aagtacagag aagagcatag ccctggacgt cgaggagctc gcggacaacc 420
tgcagctggg ccccaagttc tacctcatgg gcttctccat gggcggagag atcatgtgga 480
gctgcctcaa gcacatctca cacaggctcg ccggggtggc cattcttggc cccgtgggca 540
actactggtg gtccggcttg ccgtcgaacg tgtcgtggca cgcctggaac cagcagctcc 600
cgcaggacaa gtgggcggtc tgggtctccc accacctgcc gtggctcacc tactggtgga 660
actcccagaa gctcttccct gcctccagcg tcatcgccta caacccggcc ctcctctctg 720
aggaagacaa gctcatcatg cccaaattcg ccttccgaac ctacatgccg cagataaggc 780
agcaggggga gtacagctgc ctgcaccgcg acatgacggt cggattcggg aagtggagct 840
ggagcccgct ggagctcgag gacccgttcg ccggcggcaa agggaaggtg cacctgtggc 900
acggcgccga ggacctgatc gtgccggtca gcctgtccag gtacctaagc gagaagctgc 960
cctgggtcgt ctaccacgag ctccccaagt ccggccacat gttcccgctc gccgacggga 1020
tggccgatac catcgtcaag tcgctgctgc tcggcgatca gccacctcag gcctgatcct 1080
gattcgaact ctggtcctcc ccgttcacca atgtggagtg cgtttcttgg tgcttcgtta 1140
agtacatatt gctggcattg acagcgtagt taatcggccg gtcgtcagta aaagaaaagc 1200
agttcgttga ttatactgtt gtggttgtat cttcactgaa tttttcatcc gatatctgga 1260
tagtttatca acgtcttgtt ttcctattgg ctc 1293
<210> 175
<211> 344
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 175
Met Val Arg Lys Leu Ile Leu Ala Leu Ala Val Phe Leu Pro Ala Leu
1 5 10 15
Val Tyr Gln Gln Leu Gln Pro Pro Pro Pro Lys Ile Cys Gly Ser Pro
20 25 30
Gly Gly Pro Pro Val Thr Gly Thr Arg Thr Gln Leu Lys Asp Gly Arg
35 40 45
His Leu Ala Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Lys Asp Gln Ala Lys Tyr
50 55 60
Lys Ile Ile Phe Val His Gly Phe Asp Ser Cys Arg Tyr Asp Ala Leu
65 70 75 80
Pro Ile Ser Pro Glu Leu Ala Gln Glu Leu Gly Ile Tyr Gln Leu Ser
85 90 95
Phe Asp Arg Pro Gly Tyr Ala Glu Ser Asp Pro Asn Pro Ala Ser Thr
100 105 110
Glu Lys Ser Ile Ala Leu Asp Val Glu Glu Leu Ala Asp Asn Leu Gln
115 120 125
Leu Gly Pro Lys Phe Tyr Leu Met Gly Phe Ser Met Gly Gly Glu Ile
130 135 140
Met Trp Ser Cys Leu Lys His Ile Ser His Arg Leu Ala Gly Val Ala
145 150 155 160
Ile Leu Gly Pro Val Gly Asn Tyr Trp Trp Ser Gly Leu Pro Ser Asn
165 170 175
Val Ser Trp His Ala Trp Asn Gln Gln Leu Pro Gln Asp Lys Trp Ala
180 185 190
Val Trp Val Ser His His Leu Pro Trp Leu Thr Tyr Trp Trp Asn Ser
195 200 205
Gln Lys Leu Phe Pro Ala Ser Ser Val Ile Ala Tyr Asn Pro Ala Leu
210 215 220
Leu Ser Glu Glu Asp Lys Leu Ile Met Pro Lys Phe Ala Phe Arg Thr
225 230 235 240
Tyr Met Pro Gln Ile Arg Gln Gln Gly Glu Tyr Ser Cys Leu His Arg
245 250 255
Asp Met Thr Val Gly Phe Gly Lys Trp Ser Trp Ser Pro Leu Glu Leu
260 265 270
Glu Asp Pro Phe Ala Gly Gly Lys Gly Lys Val His Leu Trp His Gly
275 280 285
Ala Glu Asp Leu Ile Val Pro Val Ser Leu Ser Arg Tyr Leu Ser Glu
290 295 300
Lys Leu Pro Trp Val Val Tyr His Glu Leu Pro Lys Ser Gly His Met
305 310 315 320
Phe Pro Leu Ala Asp Gly Met Ala Asp Thr Ile Val Lys Ser Leu Leu
325 330 335
Leu Gly Asp Gln Pro Pro Gln Ala
340
<210> 176
<211> 2016
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 176
gttgttgctg ttgcttggct cctctcttct cccactccct cgcgaactcg atcgcttgct 60
gcctttgctg gccttggcaa ccgccgcatg gcggcctccg gcgtgaagcg gccaccgagg 120
ccggccccgg cctcctccgg cgtaaggaag ctcattctag ctctggccgt gttcttgccg 180
gcgctgctgt acagtcagct ccagcctccg cctccgaaga tctgcggctc cccgggtggc 240
cctccgatta cagggacaag aacacggctc aaagacggta ggtatttggc ctacctggag 300
tccggcgttc caaaggagca ggccaagtac aagatcatct ttgttcatgg tttcgactcg 360
tgcagatacg atgcactccc tatttccccg gtaaagatac tggcacttac ctatcttgtt 420
catttttcaa gtctgaacac tttaaacagt ctggttaaaa actactccct ccgttccaaa 480
gtattaacat ttagtcattt acggtatatc ttgaaactgg gggaagaata cagtgtattt 540
agttatgttt cagatttcag agcatagtga tacatgatca tgatgatcat atcatggact 600
gagactgaaa ctggtgcagg agctggcgca agagctgggc atttaccagc tgtccttcga 660
tcggccgggg tacgccgaga gcgacccaaa cctggcaagt acagagaaga gcatcgccct 720
ggacatcgag gagctcgccg acaacctgca gctgggcccc aagttctacc tcatgggctt 780
ctccatgggc ggcgagatca tgtggagctg cctcaaacac atctcacaca ggtaattagc 840
ttgtgttatc actgttctta cttcagctga tcagcgtttt cttctctgaa aaatctatgg 900
caggactgca aatttctgaa ctctgaccaa tgtgtttatt catgcaggct cgccggggtg 960
gccattcttg cccccgtggg caactattgg tggtccggct tgccgtcgaa catgtcgtgg 1020
cacgtctgga accagcagct cccgcaggat aagtgggcgg tctgggtctc acaccacctg 1080
ccatggctca cctactggtg gaactcccag aagctcttcc ctgcctccag cgtcatcgcc 1140
tacaacccgg ctctcttctc tgaaggagac aagctcctcc tgtccaagtt cgccttccga 1200
acctacatgg taaggatcac tggattactt catcacgttg cattgcatat ttgcttgtaa 1260
ctggcgtttt gctcatcggt ttgcgtgtcg ttgtcgcagc cgcagataag gcagcagggg 1320
gagtatggct gcctgcaccg cgacatgaca gtcggattcg ggaagtggag ctggagccca 1380
ctggagctcg aggacccgtt cgccggcggc gaagggaagg tgcacctgtg gcacggcgcc 1440
gaggatctga tcgtgccggt cagcctgtcc aggtacctca gcgagaaact cccctgggtc 1500
gtctaccacg agctccccaa gtccggccac atgttccctc tcgccgacgg gatggccgac 1560
accatcgtca agtcgctgct gctcggggat cagccacctc aggcctcctg attcgaactc 1620
ctctagtgtg cttttcccgt ccttcattaa gtacatattg ctggccctga tagttaatga 1680
gctggtcgtc agctcgtggt gacttaataa gatttcccaa tttaggatga ttgagaaatt 1740
tgccggattt ctacacttct gcccgagact gttcttcccc accgtgtttg aaccgcggcc 1800
tgtgtaactc taagttcaag ttcgttatgg gctaatcgca ttaggattgc gtttcgtttt 1860
cgtttggacc gagaaactat ggcccataag gcttggtctg gtcgggttgc ttaggcacaa 1920
ctagaaataa gtccacttta actcccacaa atataggtcc aatctaattt gtattcctca 1980
actgcaatct gattattaaa atcagtgtat tttgac 2016
<210> 177
<211> 1321
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 177
aaattcagca attccccgtc tcgtgccaat ctgttctttc cgtcgcgccc catcgaccgg 60
accccgatga tggccggcgg cgacctgcgc agcctgttgg ccgtcgttgc cgcggtggcc 120
gcggccatgt cgtacgttcg cttcgtggcg cgccgcctcc gccctggcct gccccgcctc 180
gccgcgttcg tgccgctgct cgccgtcctc cccgtcatcc cgctcgcgtt ccgcgcgctc 240
catctccgcg tcacctccgg gttcttcctc ggatggctcg cggagttcaa gctgctgctc 300
cttgcctcgg ggcatggccc gctcgacacg tccctcccgc tgcccgcctt cgtcgccatc 360
gcctccttgc ccgtcaggcg acgcgcgcag cgcgattccg agaacgcccc gcgcccgggc 420
cttggcctcg tcacctccgc cgtgatggcc gcgctgctcg ccaccatcgt gtcggtctac 480
ccccacaagg agcggatgaa cgagtacgtc ctgctgatgc tgtactcgct gcacgtctac 540
ctcgcgctgg agctcgtcct ggcgttcgcc gcggcggcgg cgcgcgcggt gatggggatg 600
gacttagagc cgcagttcga ccggccctac ctgtcggcga gcctgcggga gttctggggc 660
aggcggtgga acctgtcggt gcccgcgctg ctccgccagt gcgtgagccg ccccgtgcgc 720
gcgcgcgtag gcggcggcgt cgccggcgtc gccgcggggg tgctcgcggc gttcctcgtc 780
tcggggatca tgcacgaggc ggtgatctac tacgccacgc tgcggccgcc gacgggggag 840
ccgaccgcgt tcttcgcgct gcacggggcg tgcgcggtgg cggaggggtg gtttgctgcg 900
cacaaggggt ggccgcggcc gccgcgcgcc gttgcgaccg ccctgacgct ggcgttcatc 960
ctagcgacgg ggttctggct catcgtcccg ccgatcacga ggaccgggac tgacagggtg 1020
gtgatcgcgg agagcgaggc catggtcgcg ttcgttcggg acgccggaag ctgggccgcc 1080
gcatccgtcc gatcggcttt gaccggccac tcctagtttg attacgacgg gtcactggcg 1140
catctctcgt tcagttcacg gtacaaattt gtatattgat ttttcgttag atttggagct 1200
acagattttt catgtagctt tagatttatg tatatagaaa gaaaaaaatt atttgattag 1260
tgctgctaaa tttaaaatta gaaattcatg atgaattaat acaaagttat actcgttcta 1320
t 1321
<210> 178
<211> 349
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 178
Met Met Ala Gly Gly Asp Leu Arg Ser Leu Leu Ala Val Val Ala Ala
1 5 10 15
Val Ala Ala Ala Met Ser Tyr Val Arg Phe Val Ala Arg Arg Leu Arg
20 25 30
Pro Gly Leu Pro Arg Leu Ala Ala Phe Val Pro Leu Leu Ala Val Leu
35 40 45
Pro Val Ile Pro Leu Ala Phe Arg Ala Leu His Leu Arg Val Thr Ser
50 55 60
Gly Phe Phe Leu Gly Trp Leu Ala Glu Phe Lys Leu Leu Leu Leu Ala
65 70 75 80
Ser Gly His Gly Pro Leu Asp Thr Ser Leu Pro Leu Pro Ala Phe Val
85 90 95
Ala Ile Ala Ser Leu Pro Val Arg Arg Arg Ala Gln Arg Asp Ser Glu
100 105 110
Asn Ala Pro Arg Pro Gly Leu Gly Leu Val Thr Ser Ala Val Met Ala
115 120 125
Ala Leu Leu Ala Thr Ile Val Ser Val Tyr Pro His Lys Glu Arg Met
130 135 140
Asn Glu Tyr Val Leu Leu Met Leu Tyr Ser Leu His Val Tyr Leu Ala
145 150 155 160
Leu Glu Leu Val Leu Ala Phe Ala Ala Ala Ala Ala Arg Ala Val Met
165 170 175
Gly Met Asp Leu Glu Pro Gln Phe Asp Arg Pro Tyr Leu Ser Ala Ser
180 185 190
Leu Arg Glu Phe Trp Gly Arg Arg Trp Asn Leu Ser Val Pro Ala Leu
195 200 205
Leu Arg Gln Cys Val Ser Arg Pro Val Arg Ala Arg Val Gly Gly Gly
210 215 220
Val Ala Gly Val Ala Ala Gly Val Leu Ala Ala Phe Leu Val Ser Gly
225 230 235 240
Ile Met His Glu Ala Val Ile Tyr Tyr Ala Thr Leu Arg Pro Pro Thr
245 250 255
Gly Glu Pro Thr Ala Phe Phe Ala Leu His Gly Ala Cys Ala Val Ala
260 265 270
Glu Gly Trp Phe Ala Ala His Lys Gly Trp Pro Arg Pro Pro Arg Ala
275 280 285
Val Ala Thr Ala Leu Thr Leu Ala Phe Ile Leu Ala Thr Gly Phe Trp
290 295 300
Leu Ile Val Pro Pro Ile Thr Arg Thr Gly Thr Asp Arg Val Val Ile
305 310 315 320
Ala Glu Ser Glu Ala Met Val Ala Phe Val Arg Asp Ala Gly Ser Trp
325 330 335
Ala Ala Ala Ser Val Arg Ser Ala Leu Thr Gly His Ser
340 345
<210> 179
<211> 1329
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 179
ggcatagacc tagccagcta gcaaccgaca agccaaggcg acggcaatgg cgccgacgac 60
gacggccacg gcggcggcgg agcaggcgcc gccgccgcag catacgagga aggcggtggg 120
gctcgccgcg cacgacgact ccggccacct cacacccatc cgcatctcgc gcaggaaaac 180
tggagatgac gacgtcgcta taaaggtgct gtactgtggg atttgtcact ctgacctgca 240
caccatcaag aatgagtgga gaaacgctgt ctacccagtt gttgcagggc acgagatcac 300
cggggtggtg accgaggtgg ggaagaacgt ggcgaggttc aaggccggcg acgaggtcgg 360
cgtcgggtgc atggtgaaca cctgcggcgg ctgcgagagc tgccgggacg gctgcgagaa 420
ctactgctcc ggcggggtcg tcttcaccta caactccgtc gaccgggacg gcacgcgcac 480
ctacggcggc tactccgacg cggtggtcgt cagccagcgc ttcgtcgtgc gcttcccctc 540
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cgccggggtg acggtgtacg cgccgatgag gcagcatggg ctgtgcgagg ccgggaagca 660
cgtcggcgtg gtggggctcg gcgggctcgg ccacgtcgcc gtcaagttcg ccagggcgtt 720
cgggatgagg gtgacggtga tcagcacgtc gccggtgaag aggcaggagg ccctggagag 780
gctcggcgcc gacggcttca tcgtcagcac caacgccagt gagatgaagg ctgcgatggg 840
caccatgcat ggcatcatca acacggcctc tgcaagcaca tccatgcact cttacctggc 900
actcttgaag cccaagggca agatgatctt ggttggcctg cctgagaagc ctctccagat 960
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cttgctacaa gacatacata tcacctctac ttggtgtcaa taaatgtagc aaaagaggta 1320
cattgttgt 1329
<210> 180
<211> 379
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 180
Met Ala Pro Thr Thr Thr Ala Thr Ala Ala Ala Glu Gln Ala Pro Pro
1 5 10 15
Pro Gln His Thr Arg Lys Ala Val Gly Leu Ala Ala His Asp Asp Ser
20 25 30
Gly His Leu Thr Pro Ile Arg Ile Ser Arg Arg Lys Thr Gly Asp Asp
35 40 45
Asp Val Ala Ile Lys Val Leu Tyr Cys Gly Ile Cys His Ser Asp Leu
50 55 60
His Thr Ile Lys Asn Glu Trp Arg Asn Ala Val Tyr Pro Val Val Ala
65 70 75 80
Gly His Glu Ile Thr Gly Val Val Thr Glu Val Gly Lys Asn Val Ala
85 90 95
Arg Phe Lys Ala Gly Asp Glu Val Gly Val Gly Cys Met Val Asn Thr
100 105 110
Cys Gly Gly Cys Glu Ser Cys Arg Asp Gly Cys Glu Asn Tyr Cys Ser
115 120 125
Gly Gly Val Val Phe Thr Tyr Asn Ser Val Asp Arg Asp Gly Thr Arg
130 135 140
Thr Tyr Gly Gly Tyr Ser Asp Ala Val Val Val Ser Gln Arg Phe Val
145 150 155 160
Val Arg Phe Pro Ser Ser Ala Gly Gly Gly Ala Gly Ala Ala Leu Pro
165 170 175
Leu Asp Ser Gly Ala Pro Leu Leu Cys Ala Gly Val Thr Val Tyr Ala
180 185 190
Pro Met Arg Gln His Gly Leu Cys Glu Ala Gly Lys His Val Gly Val
195 200 205
Val Gly Leu Gly Gly Leu Gly His Val Ala Val Lys Phe Ala Arg Ala
210 215 220
Phe Gly Met Arg Val Thr Val Ile Ser Thr Ser Pro Val Lys Arg Gln
225 230 235 240
Glu Ala Leu Glu Arg Leu Gly Ala Asp Gly Phe Ile Val Ser Thr Asn
245 250 255
Ala Ser Glu Met Lys Ala Ala Met Gly Thr Met His Gly Ile Ile Asn
260 265 270
Thr Ala Ser Ala Ser Thr Ser Met His Ser Tyr Leu Ala Leu Leu Lys
275 280 285
Pro Lys Gly Lys Met Ile Leu Val Gly Leu Pro Glu Lys Pro Leu Gln
290 295 300
Ile Pro Thr Phe Ala Leu Val Gly Gly Gly Lys Ile Leu Ala Gly Ser
305 310 315 320
Cys Met Gly Ser Ile Ser Glu Thr Gln Glu Met Ile Asp Phe Ala Ala
325 330 335
Glu His Gly Val Ala Ala Asp Ile Glu Leu Ile Gly Ala Asp Glu Val
340 345 350
Asn Thr Ala Met Glu Arg Leu Ala Lys Gly Asp Val Arg Tyr Arg Phe
355 360 365
Val Val Asp Ile Gly Asn Thr Leu Arg Ser Asp
370 375
<210> 181
<211> 1944
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 181
atgggggact tgaattccag tttaagggtc ctgaagattg aacagtgccc tgttctgaag 60
gtctttccac tgtttcagaa ctcccagcaa tttaaaatcg agcgaatgtc atggttgtct 120
agtcttacca agcttaccat caatgattgt cctcatttgc atgtgcacaa tcctcttccg 180
ccttcaacta ttgtttcgga attatttatc gctggagttt caacacttcc aagggtggag 240
gggtcatccc acggaacatt aagaattgga cgtcatccta atgatatttt cagttttgat 300
tccgatgata ttttagagct aatgatattg gatgataaat ctctatcatt ccatagcttg 360
aggtccctaa ctagattggt aatagatggt tgcaaaaacc ttatgtctgt tttatttgaa 420
agtttaaggc aactcttgcg tttgaagagt ttggggatat acaactgccc acaacttttc 480
tcttcaaatg tcccatcgga gcttaccagt gaagacacga caggtgcaaa tcgcaacgcc 540
ctcccttctc tcgaatgtct tgatattgct tcttgtggaa ttaatgggaa gtggctatct 600
ctgatgctgc aacatgcgga ggtcctacag aaattgagta taacctcgtg ttggcagata 660
agagggctat caataggaga ggaagaaaat ggtcatccaa atcttatgtc agctacagag 720
gcttcgtcgt caggatatcc aagtcgagac gaacttttgc accttccatt aaatctcatc 780
ccatctctga agaaggtaac tattagattc tgcagtttaa gattttatgg aaacaaggaa 840
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tcgtccttgg tgcataacaa cagaaaggat gagcaggtga acggaagatg gctcctcccg 960
ccatcaattg tagaacttga gattcaagat gataattatc tacaaatgtt gcagccctgc 1020
tttccaggga gcctcaccca cctgaaaaga ctacaagtac agggaaaccc aaatttaaca 1080
tctctgcagc tgcattcctg cacagagctc caagagttga taattcaaag ctgtaggtca 1140
cttaattctc tacaaggctt gcaatcactc tgcaacctca ggttgctgcg ggcatacaga 1200
tgcctcggcg atcttggagg agatgaaagg tgtctccttc cgcaatcaat tgaggaactt 1260
gatatcgacg agtattttca agaaactctg cagccattct ttccaaggaa tctcacctgc 1320
ctaaaaaaat tacgagtatc aggcactaca agttttaaat ctctagaact gatgtcatgc 1380
actgcactcg aacatttgaa gattgaaggt tgtgcatcgc ttgctacatt agtgggcttg 1440
caatccctcc acagcctcag gcatttggaa gtatttagat gccctagctt gcctctatgt 1500
ttggagagtt tgtcagggca gggctatgag ctatgccctc gattggaaag gctccagatc 1560
gatgacctct ctatccttac tacgtcgctc tgccagcacc tcatctcagt ccaattccta 1620
gagctttacg gagatccata cctttacatt cgtggagtcg aagtggcaag actaacggat 1680
gagcaagaga gagcgcttca gctcctcacg tccttgcaag agctccaatt caagtctcat 1740
gacagtcttg tagatcttcc tacagggctg cataaccttc cttccctcaa gaggttgaag 1800
atcgataatt gcaagagcat catgaggctg ccagagaagg gtctcccacc ttcgttggaa 1860
gaattgcata tcagcaattg cagcaaagag ctagctgacc attgcagaat gctagaaagc 1920
aagctgatgg tatcaactga ttga 1944
<210> 182
<211> 647
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 182
Met Gly Asp Leu Asn Ser Ser Leu Arg Val Leu Lys Ile Glu Gln Cys
1 5 10 15
Pro Val Leu Lys Val Phe Pro Leu Phe Gln Asn Ser Gln Gln Phe Lys
20 25 30
Ile Glu Arg Met Ser Trp Leu Ser Ser Leu Thr Lys Leu Thr Ile Asn
35 40 45
Asp Cys Pro His Leu His Val His Asn Pro Leu Pro Pro Ser Thr Ile
50 55 60
Val Ser Glu Leu Phe Ile Ala Gly Val Ser Thr Leu Pro Arg Val Glu
65 70 75 80
Gly Ser Ser His Gly Thr Leu Arg Ile Gly Arg His Pro Asn Asp Ile
85 90 95
Phe Ser Phe Asp Ser Asp Asp Ile Leu Glu Leu Met Ile Leu Asp Asp
100 105 110
Lys Ser Leu Ser Phe His Ser Leu Arg Ser Leu Thr Arg Leu Val Ile
115 120 125
Asp Gly Cys Lys Asn Leu Met Ser Val Leu Phe Glu Ser Leu Arg Gln
130 135 140
Leu Leu Arg Leu Lys Ser Leu Gly Ile Tyr Asn Cys Pro Gln Leu Phe
145 150 155 160
Ser Ser Asn Val Pro Ser Glu Leu Thr Ser Glu Asp Thr Thr Gly Ala
165 170 175
Asn Arg Asn Ala Leu Pro Ser Leu Glu Cys Leu Asp Ile Ala Ser Cys
180 185 190
Gly Ile Asn Gly Lys Trp Leu Ser Leu Met Leu Gln His Ala Glu Val
195 200 205
Leu Gln Lys Leu Ser Ile Thr Ser Cys Trp Gln Ile Arg Gly Leu Ser
210 215 220
Ile Gly Glu Glu Glu Asn Gly His Pro Asn Leu Met Ser Ala Thr Glu
225 230 235 240
Ala Ser Ser Ser Gly Tyr Pro Ser Arg Asp Glu Leu Leu His Leu Pro
245 250 255
Leu Asn Leu Ile Pro Ser Leu Lys Lys Val Thr Ile Arg Phe Cys Ser
260 265 270
Leu Arg Phe Tyr Gly Asn Lys Glu Gly Phe Ala Arg Phe Thr Phe Leu
275 280 285
Glu Gly Ile Ala Ile Ser Arg Cys Pro Glu Leu Ile Ser Ser Leu Val
290 295 300
His Asn Asn Arg Lys Asp Glu Gln Val Asn Gly Arg Trp Leu Leu Pro
305 310 315 320
Pro Ser Ile Val Glu Leu Glu Ile Gln Asp Asp Asn Tyr Leu Gln Met
325 330 335
Leu Gln Pro Cys Phe Pro Gly Ser Leu Thr His Leu Lys Arg Leu Gln
340 345 350
Val Gln Gly Asn Pro Asn Leu Thr Ser Leu Gln Leu His Ser Cys Thr
355 360 365
Glu Leu Gln Glu Leu Ile Ile Gln Ser Cys Arg Ser Leu Asn Ser Leu
370 375 380
Gln Gly Leu Gln Ser Leu Cys Asn Leu Arg Leu Leu Arg Ala Tyr Arg
385 390 395 400
Cys Leu Gly Asp Leu Gly Gly Asp Glu Arg Cys Leu Leu Pro Gln Ser
405 410 415
Ile Glu Glu Leu Asp Ile Asp Glu Tyr Phe Gln Glu Thr Leu Gln Pro
420 425 430
Phe Phe Pro Arg Asn Leu Thr Cys Leu Lys Lys Leu Arg Val Ser Gly
435 440 445
Thr Thr Ser Phe Lys Ser Leu Glu Leu Met Ser Cys Thr Ala Leu Glu
450 455 460
His Leu Lys Ile Glu Gly Cys Ala Ser Leu Ala Thr Leu Val Gly Leu
465 470 475 480
Gln Ser Leu His Ser Leu Arg His Leu Glu Val Phe Arg Cys Pro Ser
485 490 495
Leu Pro Leu Cys Leu Glu Ser Leu Ser Gly Gln Gly Tyr Glu Leu Cys
500 505 510
Pro Arg Leu Glu Arg Leu Gln Ile Asp Asp Leu Ser Ile Leu Thr Thr
515 520 525
Ser Leu Cys Gln His Leu Ile Ser Val Gln Phe Leu Glu Leu Tyr Gly
530 535 540
Asp Pro Tyr Leu Tyr Ile Arg Gly Val Glu Val Ala Arg Leu Thr Asp
545 550 555 560
Glu Gln Glu Arg Ala Leu Gln Leu Leu Thr Ser Leu Gln Glu Leu Gln
565 570 575
Phe Lys Ser His Asp Ser Leu Val Asp Leu Pro Thr Gly Leu His Asn
580 585 590
Leu Pro Ser Leu Lys Arg Leu Lys Ile Asp Asn Cys Lys Ser Ile Met
595 600 605
Arg Leu Pro Glu Lys Gly Leu Pro Pro Ser Leu Glu Glu Leu His Ile
610 615 620
Ser Asn Cys Ser Lys Glu Leu Ala Asp His Cys Arg Met Leu Glu Ser
625 630 635 640
Lys Leu Met Val Ser Thr Asp
645
<210> 183
<211> 1064
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 183
ggtcggcgtc cccaagacga tcgacaacga catcgccgtg atcgaccgct cgttcgggtt 60
cgacaccgcc gtggaggagg cccagcgcgc catcaacgcc gcccacgtcg aggccgagag 120
cgccgagaac ggcgtcggcg tcgtcaagct catggggcgg aacagcggct tcatcgccat 180
gtacgccacg ctcgccagcc gcgacgtcga cctgtgcctc atcccggagt cccccttcta 240
cctcgaaggc aagggcggcc tcctcgagtt cgccgagaag cggctgcgcg agaacggcca 300
catggtgatc gtcgtcgccg agggcgccgg ccaggacgtg atcgccagga gcatgcgcct 360
cgccgacgcg cacgacgcgt cgggcaacaa ggtgctcctc gacgtcggcc tctggctgtg 420
cgccaagatc aaggatcact tcaagaagaa ggcgaatttc cccatcacgc tcaagtacat 480
cgaccccacg tacatgatcc gcgccgtgcc gtccaacgcc tccgacaacg tctactgctc 540
gctgctcgcc cacagcgcca tccatggcgc catggccggg tacaccggct tcaccgtcgc 600
acccgtcaat ggccgccacg cctacatccc cttctacagg atcacggaga agcagaacaa 660
ggtggtcatc acggacagga tgtgggcgag ggtgctctgc tcgacgaacc agccgtgctt 720
cctcagcacg gaggacgtcg agaaggcagg gcaggacgac gaggagccga tcgtgccgct 780
cgtcgagggc gagaactcgc tcgtcaaggc gccgccgctg ctggccaacg ccggcgatcg 840
cgccgccctc tgcaacggcg ccgcctgaag cttgaagaag tagctacacg aagaagacga 900
tcacacggcc atgtttggta gtgcgaaatt cacagaaatg tttatgtaat tgtaggattt 960
ttttttcttt agattctttt tgctcattca tttttcggct tgccggtata gaggaagtat 1020
tgacaaaatg agaataattg aaagtttatg tggcaattgt ttgc 1064
<210> 184
<211> 238
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 184
Met Gly Arg Asn Ser Gly Phe Ile Ala Met Tyr Ala Thr Leu Ala Ser
1 5 10 15
Arg Asp Val Asp Leu Cys Leu Ile Pro Glu Ser Pro Phe Tyr Leu Glu
20 25 30
Gly Lys Gly Gly Leu Leu Glu Phe Ala Glu Lys Arg Leu Arg Glu Asn
35 40 45
Gly His Met Val Ile Val Val Ala Glu Gly Ala Gly Gln Asp Val Ile
50 55 60
Ala Arg Ser Met Arg Leu Ala Asp Ala His Asp Ala Ser Gly Asn Lys
65 70 75 80
Val Leu Leu Asp Val Gly Leu Trp Leu Cys Ala Lys Ile Lys Asp His
85 90 95
Phe Lys Lys Lys Ala Asn Phe Pro Ile Thr Leu Lys Tyr Ile Asp Pro
100 105 110
Thr Tyr Met Ile Arg Ala Val Pro Ser Asn Ala Ser Asp Asn Val Tyr
115 120 125
Cys Ser Leu Leu Ala His Ser Ala Ile His Gly Ala Met Ala Gly Tyr
130 135 140
Thr Gly Phe Thr Val Ala Pro Val Asn Gly Arg His Ala Tyr Ile Pro
145 150 155 160
Phe Tyr Arg Ile Thr Glu Lys Gln Asn Lys Val Val Ile Thr Asp Arg
165 170 175
Met Trp Ala Arg Val Leu Cys Ser Thr Asn Gln Pro Cys Phe Leu Ser
180 185 190
Thr Glu Asp Val Glu Lys Ala Gly Gln Asp Asp Glu Glu Pro Ile Val
195 200 205
Pro Leu Val Glu Gly Glu Asn Ser Leu Val Lys Ala Pro Pro Leu Leu
210 215 220
Ala Asn Ala Gly Asp Arg Ala Ala Leu Cys Asn Gly Ala Ala
225 230 235
<210> 185
<211> 2224
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 185
cctagctggt tctatagtgg tcacaactca cagccaaaac ctcgtacatt ttcagctagc 60
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gactacctca tcgccgagcc cgggctcaag ctcatcggct gctgcaatga gctcaacgcc 420
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cacaccatcg gcctcccgga cttctcacag gagctccgct gcttccagac catcacctgc 660
taccaggccg tcattaacaa cctcgacgac gcgcacgagc agatcgacac cgccatcgcg 720
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ccggtgatgg tcggtgggcc aaagatccgg gtggccaagg cgaagaaggc gttcgccggc 960
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aagg 2224
<210> 186
<211> 605
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 186
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1 5 10 15
Ser Cys Asn Ser Val Gly Ser Leu Pro Val Val Ser Ser Asn Ala Val
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Ile Asn Pro Pro Val Thr Ser Ala Ala Gly Ala Thr Leu Gly Arg His
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Leu Ala Arg Arg Leu Val Gln Ile Gly Ala Thr Asp Val Phe Ala Val
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Pro Gly Asp Phe Asn Leu Thr Leu Leu Asp Tyr Leu Ile Ala Glu Pro
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Gly Leu Lys Leu Ile Gly Cys Cys Asn Glu Leu Asn Ala Gly Tyr Ala
85 90 95
Ala Asp Gly Tyr Ala Arg Ala Arg Gly Val Gly Ala Cys Ala Val Thr
100 105 110
Phe Thr Val Gly Gly Leu Ser Val Leu Asn Ala Ile Ala Gly Ala Tyr
115 120 125
Ser Glu Asn Leu Pro Val Ile Cys Ile Val Gly Gly Pro Asn Ser Asn
130 135 140
Asp Tyr Gly Thr Asn Arg Ile Leu His His Thr Ile Gly Leu Pro Asp
145 150 155 160
Phe Ser Gln Glu Leu Arg Cys Phe Gln Thr Ile Thr Cys Tyr Gln Ala
165 170 175
Val Ile Asn Asn Leu Asp Asp Ala His Glu Gln Ile Asp Thr Ala Ile
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Ala Thr Ala Leu Arg Glu Ser Lys Pro Val Tyr Ile Ser Val Gly Cys
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Asn Leu Ala Gly Leu Ser His Pro Thr Phe Ser Arg Glu Pro Val Pro
210 215 220
Leu Phe Ile Ser Pro Arg Leu Ser Asn Lys Ala Asn Leu Glu Tyr Ala
225 230 235 240
Val Glu Ala Ala Ala Asp Phe Leu Asn Lys Ala Val Lys Pro Val Met
245 250 255
Val Gly Gly Pro Lys Ile Arg Val Ala Lys Ala Lys Lys Ala Phe Ala
260 265 270
Gly Ile Ala Glu Ser Ser Gly Tyr Pro Phe Ala Val Met Pro Ser Ala
275 280 285
Lys Gly Leu Val Pro Glu His His Pro Arg Phe Ile Gly Thr Tyr Trp
290 295 300
Gly Ala Val Ser Thr Thr Phe Cys Ala Glu Ile Val Glu Ser Ala Asp
305 310 315 320
Ala Tyr Leu Phe Ala Gly Pro Ile Phe Asn Asp Tyr Ser Ser Val Gly
325 330 335
Tyr Ser Leu Leu Leu Lys Arg Glu Lys Ala Val Ile Val Gln Pro Asp
340 345 350
Arg Val Val Val Gly Asn Gly Pro Ala Phe Gly Cys Ile Leu Met Thr
355 360 365
Glu Phe Leu Asp Ala Leu Ala Lys Arg Leu Asp Arg Asn Thr Thr Ala
370 375 380
Tyr Asp Asn Tyr Arg Arg Ile Phe Ile Pro Asp Arg Glu Pro Pro Asn
385 390 395 400
Gly Gln Pro Asp Glu Pro Leu Arg Val Asn Ile Leu Phe Lys His Ile
405 410 415
Lys Glu Met Leu Ser Gly Asp Thr Ala Val Ile Ala Glu Thr Gly Asp
420 425 430
Ser Trp Phe Asn Cys Gln Lys Leu Arg Leu Pro Glu Gly Cys Gly Tyr
435 440 445
Glu Phe Gln Met Gln Tyr Gly Ser Ile Gly Trp Ser Val Gly Ala Thr
450 455 460
Leu Gly Tyr Ala Gln Ala Ala Lys Asp Lys Arg Val Ile Ser Cys Ile
465 470 475 480
Gly Asp Gly Ser Phe Gln Met Thr Ala Gln Asp Val Ser Thr Met Leu
485 490 495
Arg Cys Gly Gln Lys Ser Ile Ile Phe Leu Ile Asn Asn Gly Gly Tyr
500 505 510
Thr Ile Glu Val Glu Ile His Asp Gly Pro Tyr Asn Val Ile Lys Asn
515 520 525
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530 535 540
Cys Trp Thr Lys Lys Val Arg Thr Glu Glu Glu Leu Ile Glu Ala Ile
545 550 555 560
Ala Thr Ala Thr Gly Ala Lys Lys Asp Cys Leu Cys Phe Ile Glu Ile
565 570 575
Ile Val His Lys Asp Asp Thr Ser Lys Glu Leu Leu Glu Trp Gly Ser
580 585 590
Arg Val Ser Ala Ala Asn Ser Arg Pro Pro Asn Pro Gln
595 600 605
<210> 187
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
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<213> Oryza sativa
<400> 188
Met Lys Lys Ala Ser Ser Leu Ser Glu Leu Gly Phe Asp Ala Asp Gly
1 5 10 15
Pro Ser Phe Phe Arg His Leu Thr Leu Thr Asp Gly Asp Asp Gly Thr
20 25 30
Leu Pro Arg Arg Arg Leu Ile Lys Ile Ser Val Ile Gly Ala Gly Asn
35 40 45
Val Gly Met Ala Ile Ala Gln Thr Ile Leu Thr Gln Asp Leu Ala Asp
50 55 60
Glu Ile Val Leu Ile Asp Ala Val Ala Asp Lys Val Arg Gly Glu Met
65 70 75 80
Leu Asp Leu Gln His Ala Ala Ala Phe Leu Pro Arg Val Asn Ile Val
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Ser Gly Thr Glu Val Ser Leu Thr Arg Ser Ser Asp Leu Val Ile Val
100 105 110
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115 120 125
Gln Arg Asn Val Ser Leu Phe Arg Lys Ile Val Pro Ala Ala Ala Glu
130 135 140
Ala Ser Pro Glu Ser Val Leu Val Ile Val Ser Asn Pro Val Asp Val
145 150 155 160
Leu Thr Tyr Val Ala Trp Lys Leu Ser Gly Phe Pro Ala Ser Arg Val
165 170 175
Ile Gly Ser Gly Thr Asn Leu Asp Ser Ser Arg Phe Arg Phe Leu Leu
180 185 190
Ala Glu His Leu Glu Val Ser Ala Gln Asp Val Gln Ala Tyr Met Val
195 200 205
Gly Glu His Gly Asp Ser Ser Val Ala Leu Trp Ser Ser Ile Ser Val
210 215 220
Gly Gly Met Pro Val Leu Ala His Leu Gln Lys Asn His Arg Ser Ala
225 230 235 240
Ala Thr Ala Lys Lys Phe Asp Glu Ala Ala Leu Glu Gly Ile Arg Arg
245 250 255
Ala Val Val Gly Ser Ala Tyr Glu Val Ile Lys Leu Lys Gly Tyr Thr
260 265 270
Ser Trp Ala Ile Gly Tyr Ser Val Ala Ser Ile Ala Trp Ser Leu Leu
275 280 285
Arg Asp Gln Arg Arg Ile His Pro Val Ser Val Leu Ala Lys Gly Leu
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 189
atggtagagc cagtgaccgc tagtgccgca gtgggatggg gcatatcagc tgttggttgg 60
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cctccaaatg ttgtatttgg tcgagatgaa gatcgtaata aggtcatagc aatgcttcat 660
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atttatggca tcgctgggtc tggaaaatca acccttgcac aatatgttat tgcccatgag 780
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<213> Oryza sativa
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20 25 30
Gly Phe Ser Phe Leu Gly Phe Glu Thr Lys Glu Lys Leu Lys Glu Leu
35 40 45
Glu Thr Lys Val Leu Glu Leu Gln Met Leu Arg Glu Val Val Glu Glu
50 55 60
Ser Pro His Arg Ala Arg Leu Met Lys Trp Ser Glu Glu Leu Lys Ser
65 70 75 80
Ala Leu Tyr Asp Ala Glu Asp Ile Phe Asp Asp Val Glu Tyr Asn Arg
85 90 95
Leu Glu Arg Arg Ile Leu Ser Glu Ser Asp Asp Met Gln Glu Ser Asp
100 105 110
Phe Arg Ala Arg Pro Ala Leu Ser Cys Val Lys Gly Lys Gln Leu Leu
115 120 125
Ile Ile Tyr Ala Arg Asn Glu Tyr Gly Gln Asn Ser Thr Leu Asp Lys
130 135 140
Lys Val Cys Gly Thr Ser Ser Asp His His Gly Met Ser Lys Ser Lys
145 150 155 160
Leu Lys Lys Ile Leu Gly Asn Ile Glu Lys Ile Ile Asn Glu Gly His
165 170 175
Asp Ile Leu Lys Leu Leu Asp Leu Lys Lys Ala Val Ala Thr Asn Ser
180 185 190
Arg Ala Ala Val Thr Thr Ser Ala Pro Pro Asn Val Val Phe Gly Arg
195 200 205
Asp Glu Asp Arg Asn Lys Val Ile Ala Met Leu His Asp Arg Ser Gly
210 215 220
Asp Glu Gln Pro Asn Ser Ser Ser Ala Leu Asn Tyr Ser Val Ile Gly
225 230 235 240
Ile Tyr Gly Ile Ala Gly Ser Gly Lys Ser Thr Leu Ala Gln Tyr Val
245 250 255
Ile Ala His Glu Lys Glu Leu Arg Arg Glu Lys Ser Pro Gly His Phe
260 265 270
Asp Leu Ile Met Trp Val His Val Ser Gln Lys Phe Ser Val Asn Ala
275 280 285
Ile Phe Thr Glu Met Leu Asp Ala Ala Thr Glu Arg Gly Gly His Gln
290 295 300
Phe Ser Asn Leu Asp Thr Leu Gln Gln Lys Leu Glu Glu Glu Leu Asn
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Gly Lys Lys Ile Leu Leu Val Leu Asp Asp Val Trp Tyr His Asp Ser
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Val Ala Leu Gly Ala Val Arg Arg Ile Pro Ile Ser Glu Leu Asn Asp
370 375 380
Ser Val Phe Leu Glu Leu Phe Met His Ser Ala Leu Ser Gly Ala Asn
385 390 395 400
Ile Asp Glu Arg Asp Arg Asn Val Phe Ala Glu Ile Gly Arg Gly Ile
405 410 415
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420 425 430
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435 440 445
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450 455 460
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Pro Arg Arg His Arg Leu Lys Arg Glu Glu Leu Ile Lys Leu Trp Val
485 490 495
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515 520 525
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565 570 575
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Ser Leu Ala His Leu Val Ile Gly Asn Cys Asp Pro Trp Phe Thr Arg
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cgccaacaag acctcccgcc tcgggttccc cggcagcgtc ggcccgacgg tcggcgtcgg 600
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<213> Oryza sativa
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Lys Ala Lys Ser Asp Tyr Val Gln Glu Pro Met Pro Ser Gln Val Trp
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<213> Oryza sativa
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taatcattac tttcagcctc attagaaagt ttccatggtt aaactaagaa atgttttcct 4500
tagcttgttg tcacaatatt atgtgcaata tactaagtcc atatgatctt gttctgtcc 4559
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<211> 114
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 196
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<213> Oryza sativa
<400> 197
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cgccggcgat caccacctac catcctcgcc gccatccttc ttctctcctt cttggcgacg 120
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ctcctctcca tcggcggcgg cgatggaaaa gactactccc taccttcctc caaatccgcc 420
gccgacgccg ccgacaacct ctacaactcc ttcctcggcg gcagccgccc gggagtctac 480
cacccattcg gcgatgacgt cacagtcgtc ggcattgact tcttcattga ccgcggtcaa 540
cccgaccact actacgagat cgccgagcgg atcaactacg acacccgcca ctggcgtgac 600
cccatcgggt tcaagctgac ggcgacggtg agttgtgcgt acgacgactc tgaccccagg 660
atgaagaagg cgctggaaac ctaccttttc cggcgaatcc acgtcaggtt ctacgatgat 720
ccgaggtgtt catacaacca tgccgggctc gccggcgtca tggcgcagtg gaacaggtgg 780
tcggcgagtt acccttataa tgggaagatt tacttggggc tcgcggcggc gaatttgacg 840
gggaagaatg acatggtcgc cgtcggtgag ctctaccgga agctgctgcc ggcggtgcag 900
aagacggata cctacggagg agtgatgctt tggaacagct actatgactc catcactcac 960
tacggacggt atgtcagtgc ctgggcttaa ttataagatt cagagatcaa ccaacgataa 1020
tctctctata tatacgtgtg cctccatcat cagtccaatc cgtgcgtgca tatagctcaa 1080
tcactatcac agtaatcatt acttagtaca tgttgttttg taatctttgc tagcgaaagc 1140
tagtgttttt tttttatgtg cacaactcgg tgtgccgcca tacatgcatg tgtgatcgac 1200
gtatcagtct gtactctccc ttttttatct tgctagcgaa agctagtatt ttgagtatta 1260
ttatctgcgc aatttggata ccctacatcg ctacgtgctt ttgtaagcta ctaaccttga 1320
cggggttgaa cctgtataaa aatatatctc cctctatgtt tatcatgt 1368
<210> 198
<211> 315
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 198
Met Ala Ser Glu Gln Gln Arg Arg Arg Ser Pro Pro Thr Ile Leu Ala
1 5 10 15
Ala Ile Leu Leu Leu Ser Phe Leu Ala Thr Ala Asn Leu Ala Gly Ala
20 25 30
Ile Asp Pro Ala Gly Arg Arg Arg Asn Val Val Val Phe Trp Gly Gly
35 40 45
Asn Lys Asn Glu Gly Ser Leu Arg Ser Val Cys Asp Ser Gly Leu Tyr
50 55 60
Asn Ile Val Ile Ile Ser Phe Tyr Ser Leu Phe Gly His Gly Arg Tyr
65 70 75 80
Trp Asp Asp Leu Ser Gly His Asp Leu Arg His Ile Gly Ala Asp Ile
85 90 95
Thr His Cys His Phe Lys Ala Val Tyr Val Leu Leu Ser Ile Gly Gly
100 105 110
Gly Asp Gly Lys Asp Tyr Ser Leu Pro Ser Ser Lys Ser Ala Ala Asp
115 120 125
Ala Ala Asp Asn Leu Tyr Asn Ser Phe Leu Gly Gly Ser Arg Pro Gly
130 135 140
Val Tyr His Pro Phe Gly Asp Asp Val Thr Val Val Gly Ile Asp Phe
145 150 155 160
Phe Ile Asp Arg Gly Gln Pro Asp His Tyr Tyr Glu Ile Ala Glu Arg
165 170 175
Ile Asn Tyr Asp Thr Arg His Trp Arg Asp Pro Ile Gly Phe Lys Leu
180 185 190
Thr Ala Thr Val Ser Cys Ala Tyr Asp Asp Ser Asp Pro Arg Met Lys
195 200 205
Lys Ala Leu Glu Thr Tyr Leu Phe Arg Arg Ile His Val Arg Phe Tyr
210 215 220
Asp Asp Pro Arg Cys Ser Tyr Asn His Ala Gly Leu Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Gln Trp Asn Arg Trp Ser Ala Ser Tyr Pro Tyr Asn Gly Lys Ile
245 250 255
Tyr Leu Gly Leu Ala Ala Ala Asn Leu Thr Gly Lys Asn Asp Met Val
260 265 270
Ala Val Gly Glu Leu Tyr Arg Lys Leu Leu Pro Ala Val Gln Lys Thr
275 280 285
Asp Thr Tyr Gly Gly Val Met Leu Trp Asn Ser Tyr Tyr Asp Ser Ile
290 295 300
Thr His Tyr Gly Arg Tyr Val Ser Ala Trp Ala
305 310 315
<210> 199
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 199
accagatgaa ttcccagttc agagtttcag gtactctcaa tctgaaacat atagaggagc 60
tagtagcaaa gagaagtaat tagagtgagc ttaagtagta attaattaga ggaggttaat 120
taattaggga agatgatagg atggggagat gtgtacaagg tggtgggggc aatggcgccg 180
ctgtacttcg cgctggggct agggtacggg tcggtgaggt ggtggaggtt cttcacggcg 240
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gacttcgtcg tccgcaccga cccgttcgcc atgaactacc gcgtcatcgc cgccgacgcg 360
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cacctcgcca tcatacaggc cgcactgcct caatcgattg cttccttcgt tttcgcaaag 1140
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taccgtgagg taccggtatt tcgagatact ttttgttgga cgataacaaa cctctaatta 1440
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atattccaat tagtcgatat tgtgtttcga gcaaagtaaa taataaagtt ttcaacagtt 1620
ttgctacct 1629
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<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 200
Met Gly Arg Cys Val Gln Gly Gly Gly Gly Asn Gly Ala Ala Val Leu
1 5 10 15
Arg Ala Gly Ala Arg Val Arg Val Gly Glu Val Val Glu Val Leu His
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Gly Gly Ala Val Arg Arg His Gln His His Gly Gly Leu Leu Leu His
35 40 45
Ala Leu Leu His Leu Arg Leu Arg Arg Pro His Arg Pro Val Arg His
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65 70 75 80
Arg Arg His Gly Gly Val Gly Ala His Ala Leu Arg Leu Arg Arg Arg
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100 105 110
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Arg Glu Val Gly Ala Gly Pro Arg Gly Ala Asp Arg Arg Arg Ala Val
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His Gly Val Val Pro Ala Pro Ala His Gly Val Arg Ala Pro Gln Gly
145 150 155 160
Leu Gly Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Ala Gly Gly Asp Val Val
165 170 175
Val Val Ala Ala Gly Glu Ala Glu Arg Arg Arg Asp Glu Arg Arg Arg
180 185 190
Arg Arg Gly Ala Gly Arg Arg Arg Arg Arg Pro Ala Thr Val Leu Gly
195 200 205
Asp Gly Glu Asp Gly Gly Ala Glu Ala Gly Glu Glu Pro Glu Arg Val
210 215 220
Arg Gln Arg Ser Arg Arg Arg Val Gly Val His Arg Val Gln Val Ala
225 230 235 240
Pro Glu Leu Ala Gly Asp Arg Asp Gly Val Ala Ala Gly Asp Val Gln
245 250 255
Asp Trp His Gly Asp Val His Val Gln His Gly Val Val His Gly Ala
260 265 270
Ala Gly Glu Gly Asp Ser Val Arg Gly Gly Ala Asp Gly Ala Gly Asp
275 280 285
Gly Ala Ala Val Arg Arg Arg Ser Ala Arg His Ala Arg Arg Arg Arg
290 295 300
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305 310 315 320
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Ser Ser Ala Gln Leu Asp Pro Thr Ile Glu Asn Asn Leu Val Pro
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
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<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 202
Met Ser Val Glu Ile Leu Asp Gly Lys Thr Val Arg Ser Phe Val Glu
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Asp Ala Asn Arg Asp Gly Leu Leu Ser Tyr Thr Glu Met Ala Gly Glu
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Leu Met Ser Leu Arg Val Leu Glu Lys His Phe Gly Val Asp Asp Glu
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Ala Ala Met Gly Pro Asp Glu Leu Val Glu Leu Tyr Arg Gly Leu Phe
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Ala Val Asp Arg Glu Leu Ala Lys Ala Ala
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 203
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<213> Oryza sativa
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Met Ser Val Glu Ile Leu Asp Gly Lys Thr Val Arg Ser Phe Val Glu
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Asp Glu Gly Ala Phe Asn Ser Ser Val Asp Gly Arg Phe Ala Ala Leu
20 25 30
Asp Ala Asn Arg Asp Gly Val Leu Ser Tyr Ala Glu Met Ala Gly Glu
35 40 45
Leu Met Ser Leu Arg Val Leu Glu Lys His Phe Gly Ala Asp Glu Asp
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Glu Ala Ala Met Gly Ala Asp Glu Leu Ala Ala Leu Tyr Arg Gly Leu
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Phe Ala Arg Phe Asp Arg Asp Gly Ser Gly Gly Val Asp Leu Glu Glu
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Phe Arg Ala Glu Met Lys Glu Val Leu Leu Ala Val Ala Asn Gly Leu
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Val Ala Val Asp Arg Glu Leu Ala Gly Ala Ala Ala
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 205
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<213> Oryza sativa
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115 120 125
Pro Ala Leu Arg Lys Ile Asp Ser Arg Phe Ile Cys Met Arg Ser Phe
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Ile Val Ser Ala Gly Ile Val Asp Phe Phe Phe Val Asp Thr Thr Pro
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Phe Gln Leu Gln Tyr Trp Thr Asp Pro Gly Glu Asp His Tyr Asp Trp
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Arg Gly Val Ala Pro Arg Asp Ala Tyr Ile Ala Asn Leu Leu Glu Asp
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Val Asp Ala Ala Met Lys Lys Ser Thr Ala Thr Trp Lys Ile Ala Val
195 200 205
Gly His His Thr Met Arg Ser Val Ser Ala His Gly Asp Thr Gln Glu
210 215 220
Leu Leu Glu Leu Leu Leu Pro Val Leu Lys Glu Asn Gly Val Asp Phe
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Tyr Ile Asn Gly His Asp His Cys Leu Glu His Ile Ser Ser Arg Asn
245 250 255
Ser Pro Ile Gln Tyr Phe Thr Ser Gly Gly Gly Ser Lys Ala Trp Arg
260 265 270
Gly Ile Phe Gln Gln Asn Glu Asp Lys Leu Gln Phe Phe Tyr Asp Gly
275 280 285
Gln Gly Phe Leu Ser Leu Glu Leu Ser Glu Asn Arg Ala Arg Phe Ala
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Phe Tyr Asp Val Phe Gly Glu Ala Leu Tyr His Trp Ser Phe Ser Lys
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Ala Asn Leu Gln Lys Val Gln Ser Ser Ala Ser Val Thr Glu Glu
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<210> 207
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 207
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gcactctggc tgcaacatgg gcagaggggg tgatgtagcc ctgttttttg gattgtcagg 1080
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tctttctcag gagaaagaac ctgacatttg ggatgcaatc aagtttggca cagtgttgga 1260
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gaatacccgt gctgcttacc ctattgaata catagctaat gctaagatac catgtgttgg 1380
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cagcaagttg agccatgcac aaaccatgta ccattttatc agtggctaca ctgcattggt 1500
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agcttttata atgctccacc caactcggta cgctgccatg ctggcagata agatgaacaa 1620
gcatggagct accggatggc ttgtcaacac tggttggatc ggggggagtt atggtgtagg 1680
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tttggctaga agctacaaaa agacagatgt ctttggacta gacatcccca caaaagtgga 1800
aggagttcca tctgaattgc ttgacccaat aaatacctgg gaagacaaag actcatacaa 1860
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<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 208
Met Met Glu Ala Lys Asp Gly Gln Ala Trp Leu Gly Thr Asn Gly Tyr
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Gly Ser Arg Arg Glu Glu Asp Gly Val Cys His Asp Asp Ser Ala Thr
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35 40 45
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Ala Ser Leu Ala Ser Met Thr Cys Gly Ile Gly Pro Lys Leu Val Asn
65 70 75 80
Gly Asp Pro Ala Arg Lys Lys Glu Met Ala Gly Lys Ala Val Thr His
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Leu Lys Phe Thr His Val Leu Tyr Asn Leu Ser Pro Ser Glu Leu Tyr
115 120 125
Glu His Ala Ile Lys Tyr Glu Lys Gly Ser Phe Ile Thr Ser Ser Gly
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Ala Leu Ala Thr Leu Ser Gly Ala Lys Thr Gly Arg Ser Pro Arg Asp
145 150 155 160
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165 170 175
Gly Ser Pro Asn Ile Glu Met Asp Glu Gln Thr Phe Leu Ile Asn Arg
180 185 190
Glu Arg Ala Val Asp Tyr Leu Asn Ser Leu Asp Lys Val Phe Val Asn
195 200 205
Asp Gln Phe Leu Asn Trp Asp Pro Asn Asn Arg Ile Lys Val Arg Ile
210 215 220
Ile Ser Ala Arg Ala Tyr His Ser Leu Phe Met His Asn Met Cys Ile
225 230 235 240
Arg Pro Thr Tyr Glu Glu Leu Glu Asn Phe Gly Glu Pro Asp Phe Thr
245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
Gly Cys Asn Met Gly Arg Gly Gly Asp Val Ala Leu Phe Phe Gly Leu
325 330 335
Ser Gly Thr Gly Lys Thr Thr Leu Ser Thr Asp Arg Asn Arg Ile Leu
340 345 350
Ile Gly Asp Asp Glu His Cys Trp Ser Asp Asn Gly Ile Ser Asn Ile
355 360 365
Glu Gly Gly Cys Tyr Ala Lys Cys Ile Asp Leu Ser Gln Glu Lys Glu
370 375 380
Pro Asp Ile Trp Asp Ala Ile Lys Phe Gly Thr Val Leu Glu Asn Val
385 390 395 400
Val Phe Asp Glu His Ser Arg Glu Val Asp Tyr Thr Glu Lys Ser Val
405 410 415
Thr Glu Asn Thr Arg Ala Ala Tyr Pro Ile Glu Tyr Ile Ala Asn Ala
420 425 430
Lys Ile Pro Cys Val Gly Pro His Pro Lys Asp Val Ile Leu Leu Ala
435 440 445
Cys Asp Ala Phe Gly Val Leu Pro Pro Val Ser Lys Leu Ser His Ala
450 455 460
Gln Thr Met Tyr His Phe Ile Ser Gly Tyr Thr Ala Leu Val Ala Gly
465 470 475 480
Thr Glu Asp Gly Ile Lys Glu Pro Gln Ala Thr Phe Ser Ala Cys Phe
485 490 495
Gly Ala Ala Phe Ile Met Leu His Pro Thr Arg Tyr Ala Ala Met Leu
500 505 510
Ala Asp Lys Met Asn Lys His Gly Ala Thr Gly Trp Leu Val Asn Thr
515 520 525
Gly Trp Ile Gly Gly Ser Tyr Gly Val Gly Glu Arg Ile Ser Leu Ala
530 535 540
Tyr Thr Arg Lys Ile Ile Asp Ala Ile His Ser Gly Glu Leu Leu Ala
545 550 555 560
Arg Ser Tyr Lys Lys Thr Asp Val Phe Gly Leu Asp Ile Pro Thr Lys
565 570 575
Val Glu Gly Val Pro Ser Glu Leu Leu Asp Pro Ile Asn Thr Trp Glu
580 585 590
Asp Lys Asp Ser Tyr Lys Leu Thr Leu Leu Lys Leu Ser Asp Leu Phe
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Lys Arg Asn Phe Lys Val Phe Ala Asn Tyr Lys Lys Gly Gly Val Ser
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Asp Leu Ala Asp Glu Ile Ala Ala Ala Gly Pro Asn Phe
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<210> 209
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 209
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atttgctcct ttgtatggct gcatttagtc ctatagataa ctttgctagt tgggacaaag 120
ataagttgat taagcttgca cggttttatc ctaatgattt ctcaagcaca gagatgaacc 180
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atgagattgt ttacaagctt ctcaaattgg ttctggtact tccagtagca acagctagtg 360
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aggagtgtga tattataaac cgctttcaag ccatgaagga acgcagaatt aaagctactc 540
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cctggctccg ccactgcttc atccgaaccc aactccagtg ctcggcttcc agacggcagc 660
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ggttcagcct gcgagacgag gcgttcgccg taacccgtct cccggaatcg atggacccga 1260
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<210> 210
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<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 210
Met Asp Ala Lys Asp Phe Pro Val Gly His Lys Phe Arg Leu Ile Ser
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Leu Tyr Leu Phe Asn Pro Ala Thr Arg Glu Ala Ile Thr Leu Pro Asp
35 40 45
Gly His Gly His Ser His Thr Ala Gly Leu Gly Leu Asp Pro Gly Thr
50 55 60
Gly Arg Tyr Lys Val Val Arg Ser Phe Tyr Arg Ser Pro Ser Met Asp
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Pro Pro Val Ser Met Gly Met Glu Val Leu Thr Val Gly Glu Pro Gly
85 90 95
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100 105 110
Trp Arg Thr Ala Leu Ala Val Asn Gly Gly Tyr Leu Phe Trp Tyr Met
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Asp Arg Arg Arg Tyr Pro Asp Asp Ala Pro Arg Gly Leu Leu Arg Phe
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Ser Leu Arg Asp Glu Ala Phe Ala Val Thr Arg Leu Pro Glu Ser Met
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Leu Cys Val Val Gln Ala Leu Pro Asp Lys Ala Gly Val Leu Ile Trp
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Gly Pro Trp Glu Leu Arg Tyr Cys Ile Cys Val Asn Ala Leu Cys His
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Pro Leu Gly Val Leu Pro Asp Gly Gly Gly Ile Leu Leu Trp Ala Asn
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Val Arg Ile Thr Ala Ala
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 211
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<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 212
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35 40 45
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Tyr Asn Ile Val Ile Ile Ser Phe Leu Ser Val Phe Gly His Gly Lys
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Tyr Trp Leu Asp Leu Ser Gly His Asp Leu Arg Asp Val Gly Ala Asp
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Ile Arg His Cys Gln Ser Lys Gly Val Tyr Met Leu Leu Ser Ile Gly
100 105 110
Gly Asp Gly Asp Gly Tyr Ser Leu Pro Ser Ser Lys Ser Ala Ala Asp
115 120 125
Val Ala Tyr Asn Leu Tyr His Ser Phe Leu Gly Arg Pro Arg Ala Gly
130 135 140
Ile Phe Arg Pro Phe Gly Asp Asp Thr Ile Val Asn Gly Val Asn Phe
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Phe Ile Asp His Gly Pro Gly Asp His Tyr Asp Asp Leu Ala Asn Arg
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Ile Asn Asp Tyr Asn Gln Asn Ile His Asp Pro Ile Gly Ile Met Leu
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Thr Ala Thr Val Arg Cys Ser Tyr Pro Asp Pro Arg Met Lys Lys Ala
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Leu Asp Thr Lys Leu Phe Thr Gln Ile His Val Arg Phe Tyr Asp Asp
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Pro Arg Cys Ser Tyr Asn His Ala Gly Leu Ala Gly Val Met Ala Gln
225 230 235 240
Trp Asn Arg Trp Ser Ala Arg Tyr Pro Asn Ser Arg Ile Phe Leu Gly
245 250 255
Leu Ala Ala Ala Asn Val Thr Gly Lys Asn Asp Met Val Gly Val Gly
260 265 270
Glu Leu Ser Arg Lys Leu Leu Pro Ala Val Gln Lys Thr Glu Ser Tyr
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Ala Gly Val Thr Leu Trp Asn Ser Tyr Tyr Asp Ser Lys Thr His Tyr
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
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<213> Oryza sativa
<400> 214
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Val Lys Ser Ala Ile Glu Ala Cys Thr Lys Ala Gly Ile Ala Val Lys
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Met Val Thr Gly Asp Asn Val Leu Lys Ala Arg Ala Ile Ala Lys Glu
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Cys Gly Ile Ile Ser Gly Asn Asp Asp Asp Ala Ala Gly Val Val Ile
115 120 125
Glu Gly His Glu Phe Arg Ala Met Ser Glu Gln Glu Gln Leu Ala Ile
130 135 140
Val Asp Asn Ile Arg Val Met Ala Arg Ser Leu Pro Leu Asp Lys Leu
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Val Leu Val Gln Arg Leu Lys Gln Lys Gly His Val Val Ala Val Thr
165 170 175
Gly Asp Gly Thr Asn Asp Ala Pro Ala Leu Lys Glu Ala Asp Val Gly
180 185 190
Leu Ser Met Gly Val Gln Gly Thr Glu Val Ala Lys Glu Ser Ser Asp
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Ile Val Ile Leu Asn Asp Asn Phe Asp Thr Val Val Thr Ala Thr Arg
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Trp Gly Arg Cys Val Tyr Asn Asn Ile Gln Lys Phe Ile Gln Phe Gln
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Leu Thr Val Asn Val Ala Ala Leu Val Ile Asn Phe Val Ser Ala Val
245 250 255
Thr Thr Gly Arg Met Pro Leu Thr Thr Val Gln Leu Leu Trp Val Asn
260 265 270
Leu Ile Met Asp Thr Met Gly Ala Leu Ala Leu Ala Thr Asp Thr Pro
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Val Ala Val Leu Leu Ala Leu Gln Tyr Arg Gly Phe Gly Gly Ala Gly
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Ala Gly Glu Arg Ala Asn Gly Thr Met Ile Phe Asn Ala Phe Val Leu
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Val Phe Ala Gly Val His Arg Asn Arg Met Phe Leu Gly Ile Val Ala
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Ala Gly Thr Glu Arg Leu Gly Trp Gly Gln Trp Gly Ala Cys Val Gly
405 410 415
Ile Ala Ala Val Ser Trp Pro Ile Gly Trp Ala Val Lys Cys Ile Pro
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
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100 105 110
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145 150 155 160
Arg Ala Ala Arg Asn Ala Ile Glu Ala Gly Phe Asp Gly Val Glu Ile
165 170 175
His Gly Ala His Gly Tyr Leu Leu Glu Gln Phe Met Lys Asp Ser Ala
180 185 190
Asn Asp Arg Ser Asp Glu Tyr Gly Gly Ser Leu Glu Asn Arg Cys Arg
195 200 205
Phe Val Val Glu Val Ile Asp Ala Ile Val Ala Glu Val Gly Ala His
210 215 220
Arg Val Gly Ile Arg Leu Ser Pro Phe Ile Asp Tyr Met Asp Cys Val
225 230 235 240
Asp Ser Asp Pro Val Ala Leu Gly Ser Tyr Met Val Gln Gln Leu Asn
245 250 255
Lys His Pro Gly Phe Leu Tyr Cys His Met Val Glu Pro Arg Met Ala
260 265 270
Ile Val Glu Gly Arg Arg Lys Ile Thr His Gly Leu Leu Pro Phe Arg
275 280 285
Lys Leu Phe Asn Gly Thr Phe Ile Ala Ala Gly Gly Tyr Asp Arg Glu
290 295 300
Glu Gly Asn Lys Val Ile Ala Asp Gly Tyr Ala Asp Leu Val Ala Tyr
305 310 315 320
Gly Arg His Phe Leu Ala Asn Pro Asp Leu Pro Lys Arg Phe Ala Ile
325 330 335
Asn Ala Pro Leu Asn Lys Tyr Asn Arg Ser Thr Phe Tyr Ile Gln Asp
340 345 350
Pro Val Val Gly Tyr Thr Asp Tyr Pro Phe Leu Asp Glu Lys Asp Glu
355 360 365
Gly Ala Ala Thr Tyr Ala
370
<210> 217
<211> 1560
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 217
actcgagctc gaacaatcta tatattgtca gagacgcaca ctttactgat cagctagtta 60
gtcccagttc tgaagaacaa ctggaaaaag aaaatcgagc tgtaaaaata ttagtaccag 120
tgatcagtga cagttcagag catcaaccat gtcgtccaac aattccatgg aggccaacaa 180
tggcgatgat gagaagaagc aagagcaggt ggtgtgcgtg acgggagcgg gaggcttcat 240
cgggtcgtgg gtggtgaagg agctcctcct ccgcggctac cgcgtgaggg gaacagccag 300
ggatccccgc aagaacgccc acctgcttga tcttgaggga gccaaggaga ggctgacact 360
gtgccgcgcc gacgtcctgg acttcgccag cctacgcgcc gcgttcgccg ggtgccatgg 420
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ggtgccgtgc gtgacggtgg gtcccatcct gcagccgtcc gtcaacttca gctgccacca 780
cgtcgtccgc tacctcaccg gcgccgcggc cacctacccc aacgccgtcg ccgcctacgc 840
cgacgtccgc gacgtcgccc gcgcccacgt cctcgtctac gagcaccacg gcgcgcgcgg 900
ccgctacctc tgcatcggca ccgtcatcca ccgcgccgag ctcctccgga tgctcaagga 960
gctcttcccc cagtaccccg tcacttcaaa gtgtgaggat gaggggaatc agatggtgaa 1020
gccgtacaag ttctcgaacc agaggctcag ggatttgggt ttggagttta ctccactgag 1080
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ggtggcacaa cagcgtgcat gtttgtagaa ccaagatttt atacacggtg aacttccaag 1200
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tttggcggcg gcttaaattt gaaattttgt ctacctgaag aataaagtag gagtaccata 1320
taaagggaag ttcagcgtgg aagaacccgt actactacta ctcctagcta gccagttcat 1380
atcgtaaatc tgcatgtgta acacaagttc tttctttggt atgaattaca tctgtatctc 1440
tactttgttc atacttctac gatataaaat gaaaaaaaat attatataat accgatcgag 1500
aatgtatcta agaaacagga atgaaattaa gggaggaata gcgcacctct cctctactct 1560
<210> 218
<211> 339
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 218
Met Ser Ser Asn Asn Ser Met Glu Ala Asn Asn Gly Asp Asp Glu Lys
1 5 10 15
Lys Gln Glu Gln Val Val Cys Val Thr Gly Ala Gly Gly Phe Ile Gly
20 25 30
Ser Trp Val Val Lys Glu Leu Leu Leu Arg Gly Tyr Arg Val Arg Gly
35 40 45
Thr Ala Arg Asp Pro Arg Lys Asn Ala His Leu Leu Asp Leu Glu Gly
50 55 60
Ala Lys Glu Arg Leu Thr Leu Cys Arg Ala Asp Val Leu Asp Phe Ala
65 70 75 80
Ser Leu Arg Ala Ala Phe Ala Gly Cys His Gly Val Phe His Ile Ala
85 90 95
Ser Pro Val Ser Lys Asp Pro Asn Leu Val Pro Val Ala Ile Glu Gly
100 105 110
Thr Arg Asn Val Met Lys Ala Ala Ala Asp Met Gly Val Arg Arg Val
115 120 125
Val Phe Thr Ser Ser Tyr Gly Ala Val His Met Asn Pro Asn Arg Ser
130 135 140
Pro Asp Ala Val Leu Asp Glu Ser Cys Trp Ser Asp Pro Glu Phe Cys
145 150 155 160
Gln Arg Glu Asp Ile Tyr Cys Tyr Ala Lys Met Met Ala Glu Lys Thr
165 170 175
Ala Thr Glu Glu Ala Ser Arg Arg Arg Leu Gln Leu Ala Val Val Val
180 185 190
Pro Cys Val Thr Val Gly Pro Ile Leu Gln Pro Ser Val Asn Phe Ser
195 200 205
Cys His His Val Val Arg Tyr Leu Thr Gly Ala Ala Ala Thr Tyr Pro
210 215 220
Asn Ala Val Ala Ala Tyr Ala Asp Val Arg Asp Val Ala Arg Ala His
225 230 235 240
Val Leu Val Tyr Glu His His Gly Ala Arg Gly Arg Tyr Leu Cys Ile
245 250 255
Gly Thr Val Ile His Arg Ala Glu Leu Leu Arg Met Leu Lys Glu Leu
260 265 270
Phe Pro Gln Tyr Pro Val Thr Ser Lys Cys Glu Asp Glu Gly Asn Gln
275 280 285
Met Val Lys Pro Tyr Lys Phe Ser Asn Gln Arg Leu Arg Asp Leu Gly
290 295 300
Leu Glu Phe Thr Pro Leu Arg Lys Ser Leu His Glu Ala Ile Glu Cys
305 310 315 320
Leu Gln Arg Lys Gly His Leu Pro Val Val Thr Val Ala Gln Gln Arg
325 330 335
Ala Cys Leu
<210> 219
<211> 1019
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 219
atgcaaatca catacacata acgtgtgcgt tgctgcaaca tgaagatgaa ggctctcctc 60
cccgtagccg ccatgctgct cctcgtctcc ggccagctcg ccgccccggt caccgccgac 120
ggctacgtcg gccagctcgc cgtgttctgg ggccgccaca aggaggaggg ctcgttgcgc 180
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gacatcaagc actgccagtc caagggcgtc caggtcctcc tctccatcgg cggccagggc 360
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atgatcaatc tctacctgct atatatctct ctcaatatat gtaatgtaat gtaatgtaat 960
aatattcgaa taaaatgagg tcacaaatta tattataaat atggatcaga cctcagatg 1019
<210> 220
<211> 284
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 220
Met Lys Met Lys Ala Leu Leu Pro Val Ala Ala Met Leu Leu Leu Val
1 5 10 15
Ser Gly Gln Leu Ala Ala Pro Val Thr Ala Asp Gly Tyr Val Gly Gln
20 25 30
Leu Ala Val Phe Trp Gly Arg His Lys Glu Glu Gly Ser Leu Arg Glu
35 40 45
Ala Cys Asp Thr Gly Arg Tyr Asn Ile Val Val Ile Thr Phe Tyr Asn
50 55 60
Val Phe Gly Tyr Gln Arg Gly Arg Tyr Gly Leu Asp Phe Ser Gly His
65 70 75 80
Pro Val Ala Ala Val Gly Ala Asp Ile Lys His Cys Gln Ser Lys Gly
85 90 95
Val Gln Val Leu Leu Ser Ile Gly Gly Gln Gly Gly Glu Tyr Ser Leu
100 105 110
Pro Ser Ser Gln Ser Ala Ser Asp Val Ala Asp Asn Leu Trp Asn Ala
115 120 125
Tyr Leu Gly Gly Arg Arg Ala Gly Val Pro Arg Pro Phe Gly Asp Ala
130 135 140
Val Val Asp Gly Ile Asp Phe Phe Ile Asp Gln Gly Gly Ala Asp His
145 150 155 160
Tyr Glu Gln Leu Ala Arg Gln Leu His Gly Arg Gly Val Leu Leu Thr
165 170 175
Ala Thr Val Arg Cys Ala Tyr Pro Asp Ser Arg Met Glu Ala Ala Leu
180 185 190
Ala Thr Gly Val Phe Ala Arg Ile His Val Arg Ile Phe Gly Asp Asp
195 200 205
Gln Cys Thr Met Phe Pro Lys Asp Ala Trp Glu Lys Trp Ala Ala Ala
210 215 220
Tyr Pro Arg Cys Thr Val Phe Leu Thr Val Val Ala Ser Pro Glu Gln
225 230 235 240
Asp Glu Gly Tyr Met Phe Gln Lys Asp Leu Tyr Tyr Gly Val Gln Gln
245 250 255
Phe Ile Asp Lys Glu Pro Asn Tyr Gly Gly Ile Ala Ile Trp Asp Arg
260 265 270
Tyr Tyr Asp Lys Lys Ala Asn Tyr Ser Gly Glu Gly
275 280
<210> 221
<211> 1772
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 221
acaagctcca cattttcctc ctctcttctt cttcttcctc cgatcgacga ttcgctctct 60
cgctctcgct cgatttccgt ttctttgatt attgttgtcg agtgtaactg atccgccatg 120
gaggtggagt tgccatgggg cgcgcggtgc gcggcggcgg cgttcttcgt gtcctcgctg 180
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tggtacgccg acctgctccg ccgctcgccg acgggcaccg tccacgtcca cgtcctcggc 360
tgcaccgtca cggcgaaccc ggcgaacgtg gagtacatgc tcaagacgcg cttcgacaac 420
ttccccaagg ggaggccgtt cgccgcgctc ctcggcgacc tcctcggcga cggcatcttc 480
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ccggtgctcg ccaacgccgc cgacagcggc gccgtggtcg acctgcagga cgtgttccgc 660
cgcttcgcct tcgacaccat ctgcaagatc tccttcggcc tcgacccggg ctgcctcgac 720
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tcggagaggg agctcaagaa ggccatcaag ctcatcgacg ggctcgcggc ggcgatgatc 900
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tcctccggcg acgacgcgcg cggcgccgcc gacgacaagt tcctccgcga catcgtcgtc 1020
agcttcctcc tcgccggccg ggacacggtg tcctccgcgc tcaccactct gttcatgatc 1080
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gagagcgccg ccgtcagcta cgagcacctg aagcggctga actacaccca cgccgtgctg 1200
tacgagaaca tgcggctgtt cccgccggtg cagttcgact ccaagttctg cgccgccgcc 1260
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tggctcaccg gcgccggcgg cgcgttcgtg ccggagagcc tcttcaagta cccggtgttc 1440
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tcattcactg tatcaacaaa ttggataaga aattaaatag gcatgtacat agaacaaaaa 1740
agggagaaat caatatacca aatttttcat ct 1772
<210> 222
<211> 509
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 222
Met Glu Val Glu Leu Pro Trp Gly Ala Arg Cys Ala Ala Ala Ala Phe
1 5 10 15
Phe Val Ser Ser Leu Cys Val Ala Ala Leu Gly Val Val Leu Leu Leu
20 25 30
Leu Arg Arg Trp Pro Trp Cys Gly Cys His Val Cys Arg Ala Tyr Leu
35 40 45
Ala Gly Ser Trp Arg Arg Glu Phe Ala Asn Leu Gly Asp Trp Tyr Ala
50 55 60
Asp Leu Leu Arg Arg Ser Pro Thr Gly Thr Val His Val His Val Leu
65 70 75 80
Gly Cys Thr Val Thr Ala Asn Pro Ala Asn Val Glu Tyr Met Leu Lys
85 90 95
Thr Arg Phe Asp Asn Phe Pro Lys Gly Arg Pro Phe Ala Ala Leu Leu
100 105 110
Gly Asp Leu Leu Gly Asp Gly Ile Phe Asn Val Asp Gly Asp Ala Trp
115 120 125
Arg His Gln Arg Lys Met Ala Ser Leu Glu Leu Gly Ser Val Ala Val
130 135 140
Arg Ser Tyr Ala Tyr Lys Ile Val Ala Gln Glu Val Glu Ala Arg Leu
145 150 155 160
Met Pro Val Leu Ala Asn Ala Ala Asp Ser Gly Ala Val Val Asp Leu
165 170 175
Gln Asp Val Phe Arg Arg Phe Ala Phe Asp Thr Ile Cys Lys Ile Ser
180 185 190
Phe Gly Leu Asp Pro Gly Cys Leu Asp Arg Glu Met Pro Val Ser Glu
195 200 205
Leu Ala Asp Ala Phe Asp Ala Ala Ser Arg Leu Ser Ala Met Arg Gly
210 215 220
Ala Ala Ala Ser Pro Leu Leu Trp Lys Met Lys Arg Phe Leu Asn Val
225 230 235 240
Gly Ser Glu Arg Glu Leu Lys Lys Ala Ile Lys Leu Ile Asp Gly Leu
245 250 255
Ala Ala Ala Met Ile Arg Glu Arg Arg Lys Leu Gly Val Ala Asn Ser
260 265 270
His Asp Leu Leu Ser Arg Phe Met Ala Ser Ser Gly Asp Asp Ala Arg
275 280 285
Gly Ala Ala Asp Asp Lys Phe Leu Arg Asp Ile Val Val Ser Phe Leu
290 295 300
Leu Ala Gly Arg Asp Thr Val Ser Ser Ala Leu Thr Thr Leu Phe Met
305 310 315 320
Ile Leu Ser Lys Asn Pro Asp Val Ala Ala Ala Met Arg Ala Glu Ala
325 330 335
Gly Ala Ala Ala Gly Glu Ser Ala Ala Val Ser Tyr Glu His Leu Lys
340 345 350
Arg Leu Asn Tyr Thr His Ala Val Leu Tyr Glu Asn Met Arg Leu Phe
355 360 365
Pro Pro Val Gln Phe Asp Ser Lys Phe Cys Ala Ala Ala Asp Val Leu
370 375 380
Pro Asp Gly Thr Tyr Val Asp Gly Gly Ala Arg Val Met Tyr His Pro
385 390 395 400
Tyr Ala Met Gly Arg Met Pro Arg Ile Trp Gly Ala Asp Cys Asp Ala
405 410 415
Phe Arg Pro Glu Arg Trp Leu Thr Gly Ala Gly Gly Ala Phe Val Pro
420 425 430
Glu Ser Leu Phe Lys Tyr Pro Val Phe Gln Ala Gly Leu Arg Val Cys
435 440 445
Leu Gly Lys Glu Leu Ala Ile Thr Glu Met Lys Ala Val Ser Val Ala
450 455 460
Val Val Arg Ala Phe Asp Val Glu Val Val Gly Glu Asn Gly Arg Cys
465 470 475 480
Gly Gly Gly Ala Ala Ala Ala Pro Arg Phe Val Pro Gly Leu Thr Ala
485 490 495
Ser Ile Ser Gly Gly Leu Pro Val Lys Ile Arg Arg Val
500 505
<210> 223
<211> 1626
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 223
gagacacttc cacccatttg caccgccatt tcgaccggcc ggggcagtag tgtactacgt 60
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gctacc 1626
<210> 224
<211> 143
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 224
Met Thr Tyr Ile Asp Cys Ser Leu Ser Pro Pro Glu Phe Leu Leu Arg
1 5 10 15
Ser Ile Arg Ala Gln Leu Lys Gly Arg Gly Met Asp Ala Met Ala Asp
20 25 30
Leu Met Asp Ala Ala Asp Asp Ala Ala Ser Ser Leu Pro Leu Ser Pro
35 40 45
Ser Ser Ser Ser Ser Ala Ser Ser Asp Glu Asp Ser Pro Phe Gly Arg
50 55 60
Ala Arg Arg Ala Arg Arg Ser Ser Ser Gly Ser Phe Arg Trp Arg Ser
65 70 75 80
Thr Lys Asp Val Ala Ala Cys His Ala Gly Ser Ser Leu Val Ala Val
85 90 95
Met Ala Gln Ala Leu Ala His Arg Val Gly Tyr Val Trp Val Val Asp
100 105 110
Glu Val Ser Gly Ala Leu Thr Gly Val Val Ser Phe Gly Asp Val Leu
115 120 125
Ala Val Leu Arg Glu His Leu Arg Asp Gly Asp Thr Gln Met Asn
130 135 140
<210> 225
<211> 1407
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 225
tgaattctcg ctcgtgagtc gtgacagtag aagagctatc agagtatcag tagaaaaatc 60
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cgcgacggcg gcggcgccgg cggcgtggag gacgacgcgg cgctcgcgca gctcagggcg 420
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ctgtcgccgg agatggccac aaggatcgac gagattaccg agagcaagtt cagaggctct 1080
ggactggtgt tgcccacgat gatgaccatg taataagtac agtacatttt gcaatattgt 1140
tacaaccact ggtggagaaa tatttttagt cacggttcgc aaccccctgt agtcccggtt 1200
aaccaggact accaatccgg gactaaaaat cgctatcttt attcccggtt caaatacccg 1260
gaactaaaaa tagatcttta gtcccggtta gcaacaccaa tcgggactaa agagaggggc 1320
caacgggact aaagagaggg ttgcggtagt gagatgatcc cctttttctt ttttattttc 1380
tcccaaatca agtgggagac atatctc 1407
<210> 226
<211> 346
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 226
Met Ala Ser Pro Pro Ser Leu Leu Pro Ser Ala Gly Glu Asp Asp Glu
1 5 10 15
Ser Gln Arg Glu Val Tyr Glu Gln Leu Arg Gln Leu Val Ser Thr Tyr
20 25 30
Pro Thr Val Pro Ser Gly Leu Asp Thr Pro Tyr Tyr Arg His Pro Asp
35 40 45
Gly Trp Tyr Thr Phe Leu Pro Ala Met Val Ser Val Met Val Ala Gln
50 55 60
Arg His Phe Thr Ala Arg Asp Thr Asp Ile Ile Ile Ala Thr Phe Pro
65 70 75 80
Lys Cys Gly Thr Thr Trp Leu Lys Ala Leu Leu Phe Ala Thr Val His
85 90 95
Arg Asp Gly Gly Gly Ala Gly Gly Val Glu Asp Asp Ala Ala Leu Ala
100 105 110
Gln Leu Arg Ala Arg Asn Pro His Gln Leu Val Pro Phe Leu Glu Ile
115 120 125
Gln Val Tyr Val Arg Asp Arg Ala Pro Asp Leu Ser Ser Leu Pro Ala
130 135 140
Pro Arg Leu Leu Ala Thr His Ile Pro Arg Pro Ser Leu Pro Ala Ser
145 150 155 160
Val Ala Ile Ser Gly Cys Lys Val Val Tyr Met Cys Arg Asp Pro Lys
165 170 175
Asp Cys Pro Val Ser Leu Trp His Phe Leu Asp Ala Gln Arg Pro Glu
180 185 190
Pro Arg Gly Asp Val Gly Glu Asp Phe Arg Leu Phe Cys Asp Gly Val
195 200 205
Ser Leu Val Gly Pro Tyr Trp Asp His Val Leu Ala Tyr Trp Arg Trp
210 215 220
His Val Glu Arg Pro Gly Gln Val Leu Phe Met Thr Tyr Glu Glu Leu
225 230 235 240
Ser Gly Asp Thr Leu Gly Gln Leu Arg Arg Leu Ala Glu Phe Val Gly
245 250 255
Arg Pro Phe Thr Gly Glu Glu Arg Ala Ala Arg Val Asp Glu Ala Ile
260 265 270
Val Lys Ala Cys Ser Phe Glu Ser Leu Ala Gly Ala Glu Val Asn Arg
275 280 285
Ser Gly Thr Ile Glu Leu Met Glu Glu Pro Met Arg Asn Ala Glu Phe
290 295 300
Phe Arg Arg Gly Val Val Gly Gly Trp Pro Asn Tyr Leu Ser Pro Glu
305 310 315 320
Met Ala Thr Arg Ile Asp Glu Ile Thr Glu Ser Lys Phe Arg Gly Ser
325 330 335
Gly Leu Val Leu Pro Thr Met Met Thr Met
340 345
<210> 227
<211> 1205
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 227
aaaacacact gcaaacatta cggtatctct tgcgttgatg tcttggtgat cgacaggatg 60
caaggggaac accatgacca tgtccctgtc tacgagtcag gcaccgaggt gttccaaaag 120
cttcaggaga aatggaattc caccaagcac aagcgatacc gcgcgatgta ctccagcgtc 180
gtcggcggaa tcatcctcga tccatcgatg atggtcatcc ccatcgacga tcacatggtc 240
cacagaggcc atggcgtctt cgacaccgcc atgctttccg acgggtacct gtatgagctg 300
gattcgcact tggatcggct gctgctatct gcatccaaag caaagatcag ctccccattc 360
tcccgcgaaa cacttcgcgc cattttggtg cagatgacgg ctgcgtccaa gtgcaggaat 420
ggctcgatca agtactggct cagcgccggc cccggcgact tcctcctctc gccaaagggc 480
tgcactgcgc cggcgttcta cgccgtcgtc atcgcgtccg ccaccgccgc cgccgccggc 540
gggcacccgc ggctcaggga gggcgtgagg gcgatcacgt cgacggtgcc gatgaaggac 600
ccgttcttcg cggcgatgaa gagcgtcaac tacctggcga acgcgctggc catggcggag 660
gcagaggagc gcggcgcgta cgcgtcggtg tgggtggacg gcgacggggg cgtggcggag 720
ggcccgatga tgaacgtggc gttcgtcacg ggcggcggcg acctggtggt gccggcgttc 780
gacagggtcc tcagcgggtg cacggcgagg cggctgctcg cgctggcgcc caggctggtg 840
gacgccggcg tgctcaggag cgtcggcgcg gcgaggatct ccgccgccga cgcgaggagg 900
tgcgccgaga tgatgttcgt cggcagcggc ctcccgttgc tgcccatcgt cgaatgggac 960
ggccagccgg ttggcgatgg tcaagtgggg aaaattgccc ttgccctatc tgacatgctt 1020
tgcgaagaca tcaaggccgg tctcgacaga gtacttgttc cttatgatca agcgagctag 1080
acgacgacta atagagcttt ggaagatcaa ctttgtataa taataataat aatgtaatac 1140
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aattg 1205
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<211> 340
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 228
Met Gln Gly Glu His His Asp His Val Pro Val Tyr Glu Ser Gly Thr
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Arg Tyr Arg Ala Met Tyr Ser Ser Val Val Gly Gly Ile Ile Leu Asp
35 40 45
Pro Ser Met Met Val Ile Pro Ile Asp Asp His Met Val His Arg Gly
50 55 60
His Gly Val Phe Asp Thr Ala Met Leu Ser Asp Gly Tyr Leu Tyr Glu
65 70 75 80
Leu Asp Ser His Leu Asp Arg Leu Leu Leu Ser Ala Ser Lys Ala Lys
85 90 95
Ile Ser Ser Pro Phe Ser Arg Glu Thr Leu Arg Ala Ile Leu Val Gln
100 105 110
Met Thr Ala Ala Ser Lys Cys Arg Asn Gly Ser Ile Lys Tyr Trp Leu
115 120 125
Ser Ala Gly Pro Gly Asp Phe Leu Leu Ser Pro Lys Gly Cys Thr Ala
130 135 140
Pro Ala Phe Tyr Ala Val Val Ile Ala Ser Ala Thr Ala Ala Ala Ala
145 150 155 160
Gly Gly His Pro Arg Leu Arg Glu Gly Val Arg Ala Ile Thr Ser Thr
165 170 175
Val Pro Met Lys Asp Pro Phe Phe Ala Ala Met Lys Ser Val Asn Tyr
180 185 190
Leu Ala Asn Ala Leu Ala Met Ala Glu Ala Glu Glu Arg Gly Ala Tyr
195 200 205
Ala Ser Val Trp Val Asp Gly Asp Gly Gly Val Ala Glu Gly Pro Met
210 215 220
Met Asn Val Ala Phe Val Thr Gly Gly Gly Asp Leu Val Val Pro Ala
225 230 235 240
Phe Asp Arg Val Leu Ser Gly Cys Thr Ala Arg Arg Leu Leu Ala Leu
245 250 255
Ala Pro Arg Leu Val Asp Ala Gly Val Leu Arg Ser Val Gly Ala Ala
260 265 270
Arg Ile Ser Ala Ala Asp Ala Arg Arg Cys Ala Glu Met Met Phe Val
275 280 285
Gly Ser Gly Leu Pro Leu Leu Pro Ile Val Glu Trp Asp Gly Gln Pro
290 295 300
Val Gly Asp Gly Gln Val Gly Lys Ile Ala Leu Ala Leu Ser Asp Met
305 310 315 320
Leu Cys Glu Asp Ile Lys Ala Gly Leu Asp Arg Val Leu Val Pro Tyr
325 330 335
Asp Gln Ala Ser
340
<210> 229
<211> 1317
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 229
gactctcatc actgattaca cccaacaaca acacaatcca accatcaacc atactacacc 60
agaacacaac aatggcgtcc caacgccggc gatcatccgc cgccaccatc gccgtcttct 120
tcttcctcct ctccttgtta gcggtgttct tccagccggc cgccgcctac taccaccctc 180
aggggaagag gcagaccgtc gccgtcttct ggggacgcaa caaggccgag ggctcgctcc 240
ggcaaacctg cgacaccggc gactacaaca tcgtcatcat ctccttcctc agcgtcttcg 300
gccatggcaa gtactggctc gacctctccg gccacgacct ccgagacgtc ggcgccgaca 360
tccgccactg ccagtccaag ggcgtctaca tgctcctctc catcggcggc gacggcgacg 420
gctactccct cccttcctcc aagtccgccg ccgacgtcgc ctacaacctc taccactcct 480
tcctcggccg cccacgcgcc ggcatcttcc gccccttcgg cgacgacacc atcgtcaacg 540
gcgtcaactt cttcatcgac cacggccccg gcgaccacta cgacgacctc gccaaccgca 600
tcaacgacta caaccagaac atccacgacc ccatcggcat catgctgacg gcgacggtga 660
ggtgctcgta ccctgacccg aggatgaaga aggcgctgga caccaagctg ttcacgcaga 720
tccacgtgag gttctacgac gacccgaggt gctcgtacaa ccacgcgggg ctcgccggcg 780
tcatggcgca gtggaacagg tggtcggcga ggtacccaaa cagccggatc ttcctggggc 840
tcgcggcggc gaacgtgacg gggaagaacg acatggtcgg cgtcggggag ctcagccgga 900
agctgctgcc ggcggtgcag aagacggaga gctacgcggg agtgacgctc tggaacagct 960
actacgactc caagactcac tacggaagat atgtcaagca ctgggcttaa tttaatcaat 1020
taatttaagc tcagatcaac cagctataat aatctactac agtgcatgca gctcaatcac 1080
tatcgcagta atcacggtgt catgggttta atgtagtaaa ctacccccac ttaattacat 1140
gttgtttgtt gttttttgat cttggtctcg agagcaagtg ttttttttat ttgcacaact 1200
ctagtgtgtc atatatgcat gtgtgatcga tgtatctgta cttttctttt tccctttttt 1260
cctttttgca actgtgtatg tattgatgta taatgaagtt gtacatgatg tttaatg 1317
<210> 230
<211> 312
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 230
Met Ala Ser Gln Arg Arg Arg Ser Ser Ala Ala Thr Ile Ala Val Phe
1 5 10 15
Phe Phe Leu Leu Ser Leu Leu Ala Val Phe Phe Gln Pro Ala Ala Ala
20 25 30
Tyr Tyr His Pro Gln Gly Lys Arg Gln Thr Val Ala Val Phe Trp Gly
35 40 45
Arg Asn Lys Ala Glu Gly Ser Leu Arg Gln Thr Cys Asp Thr Gly Asp
50 55 60
Tyr Asn Ile Val Ile Ile Ser Phe Leu Ser Val Phe Gly His Gly Lys
65 70 75 80
Tyr Trp Leu Asp Leu Ser Gly His Asp Leu Arg Asp Val Gly Ala Asp
85 90 95
Ile Arg His Cys Gln Ser Lys Gly Val Tyr Met Leu Leu Ser Ile Gly
100 105 110
Gly Asp Gly Asp Gly Tyr Ser Leu Pro Ser Ser Lys Ser Ala Ala Asp
115 120 125
Val Ala Tyr Asn Leu Tyr His Ser Phe Leu Gly Arg Pro Arg Ala Gly
130 135 140
Ile Phe Arg Pro Phe Gly Asp Asp Thr Ile Val Asn Gly Val Asn Phe
145 150 155 160
Phe Ile Asp His Gly Pro Gly Asp His Tyr Asp Asp Leu Ala Asn Arg
165 170 175
Ile Asn Asp Tyr Asn Gln Asn Ile His Asp Pro Ile Gly Ile Met Leu
180 185 190
Thr Ala Thr Val Arg Cys Ser Tyr Pro Asp Pro Arg Met Lys Lys Ala
195 200 205
Leu Asp Thr Lys Leu Phe Thr Gln Ile His Val Arg Phe Tyr Asp Asp
210 215 220
Pro Arg Cys Ser Tyr Asn His Ala Gly Leu Ala Gly Val Met Ala Gln
225 230 235 240
Trp Asn Arg Trp Ser Ala Arg Tyr Pro Asn Ser Arg Ile Phe Leu Gly
245 250 255
Leu Ala Ala Ala Asn Val Thr Gly Lys Asn Asp Met Val Gly Val Gly
260 265 270
Glu Leu Ser Arg Lys Leu Leu Pro Ala Val Gln Lys Thr Glu Ser Tyr
275 280 285
Ala Gly Val Thr Leu Trp Asn Ser Tyr Tyr Asp Ser Lys Thr His Tyr
290 295 300
Gly Arg Tyr Val Lys His Trp Ala
305 310
<210> 231
<211> 1669
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 231
accgtcgtcc acctccacgg cgccgcccag gcccccgatt ccgacggcca cgccttcgcc 60
tggttcaccc gggacttcgc cgagaacggc agcacatgga cgcagaagac ctacacctac 120
cccaacgtgc agccggcggc cggcaacatc tggtaccacg accacgccct cggcctcact 180
cgcgccagcc tcctcgccgg cctcctcgcc gcctacatcg tcgagtggcc cgagctcgag 240
atgcccttca acctcccctc cggcgagttc gacctccacc tcgtcatcgc cgaccgcaag 300
ttcaacgtcg acggcaccat cttcatggac accgtcggcg ccgtgccatc cgtccacccg 360
cagtggcagc cggagtactt cggcgaggtc atcaccgtca acggcaaggc gtggccgttc 420
caagccgtcc agcgccgccg ctaccgcctc cgcatcctca acgccagcaa cgcgaggtac 480
ctcaacatca ggttctccaa tggtctcccc ctcaccgtca tcgcctccga cgcgacgtac 540
ctctcccgcc cggtcaccgt ctccaacctc ctcctctccc cggccgagat cttcgacgtc 600
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gcgccctacc cgttccccac cggcactccg gcgaacgcga cactcgacgg caaggtgatg 720
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ctgcacctcc acctcgccga gttccaggcc gtccagatgc tgcagctcgt cgacccggac 1080
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catttctgtt tgggtgaaag ttaattatcg cgttatccaa gttattttac tatagttgtc 1500
aacccgtgca tttgtatggg ggtatttgtt acatgttggt ggccatgcat ggttgtctcc 1560
attcggatag gatagcctat gctttgtgcc tttgttgtac gtttgccttg tgatcccttc 1620
ccttaataaa atttggccgg agttcctccg ccggccgacc tgccgattc 1669
<210> 232
<211> 444
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 232
Met Asp Ala Glu Asp Leu His Leu Pro Gln Arg Ala Ala Gly Gly Arg
1 5 10 15
Gln His Leu Val Pro Arg Pro Arg Pro Arg Pro His Ser Arg Gln Pro
20 25 30
Pro Arg Arg Pro Pro Arg Arg Leu His Arg Arg Val Ala Arg Ala Arg
35 40 45
Asp Ala Leu Gln Pro Pro Leu Arg Arg Val Arg Pro Pro Pro Arg His
50 55 60
Arg Arg Pro Gln Val Gln Arg Arg Arg His His Leu His Gly His Arg
65 70 75 80
Arg Arg Arg Ala Ile Arg Pro Pro Ala Val Ala Ala Gly Val Leu Arg
85 90 95
Arg Gly His His Arg Gln Arg Gln Gly Val Ala Val Pro Ser Arg Pro
100 105 110
Ala Pro Pro Leu Pro Pro Pro His Pro Gln Arg Gln Gln Arg Glu Val
115 120 125
Pro Gln His Gln Val Leu Gln Trp Ser Pro Pro His Arg His Arg Leu
130 135 140
Arg Arg Asp Val Pro Leu Pro Pro Gly His Arg Leu Gln Pro Pro Pro
145 150 155 160
Leu Pro Gly Arg Asp Leu Arg Arg His Arg Arg Leu Leu Pro Arg Gly
165 170 175
Glu Pro Gln Arg His Arg His Arg Val Ala Gln Leu Gly Ala Leu Pro
180 185 190
Val Pro His Arg His Ser Gly Glu Arg Asp Thr Arg Arg Gln Gly Asp
195 200 205
Gly Val Gln Cys Leu Arg Gln Val Ala Gly Arg Arg Arg His Ala Asp
210 215 220
Ala Gly Ala Gly Lys Leu Asp Gly Gly Ala Gly Asp Arg Cys Ala Val
225 230 235 240
Arg Glu Gly Asp Gly Ala Ala Ala Asp Asp Glu Asp Glu Val His Arg
245 250 255
Pro Val Arg Glu His Asp Glu Gln Arg Pro Glu His Arg Gln Asp Asp
260 265 270
Glu Pro Leu His Gln Arg Ala Pro Ala Gly Gly Ser Ala Asp Gly Asp
275 280 285
Ala Asp Ile Gly Asp Asp Gly Ala Val Ala Arg Asp Gln Pro His Pro
290 295 300
Arg Gln Pro Pro Ala Ala Pro Pro Pro Arg Arg Val Pro Gly Arg Pro
305 310 315 320
Asp Ala Ala Ala Arg Arg Pro Gly His Leu Gln Glu Leu His Ala Glu
325 330 335
Ala Gln Arg His Leu Arg Leu Gln Pro Arg Pro Ala Arg Arg Arg Gly
340 345 350
Pro Ala Ala Gly Ala Gly Gly Gly Glu Asp Val Glu Glu Arg Arg Glu
355 360 365
Asp Pro Ala Gly Val Arg His Val Gly Gly Gly Gly Val Gln Ala Arg
370 375 380
Pro Gln Gln His Ala Leu Pro Leu Arg Arg His Gly Gly Ala Gly Ile
385 390 395 400
Arg Leu Ser Leu Pro His Pro Gly Ser Arg Arg Gln Arg His Asp Gln
405 410 415
Ala Thr His Ala Ala Ser Met Asn Lys Thr Ala His Cys Thr Trp Trp
420 425 430
Leu Met His Glu Glu Ile Lys Met Pro His Gln Asp
435 440
<210> 233
<211> 1513
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 233
gattccaatc caaaagtata atcaagcaaa gcagctcgat cgagtgttcg actgatcacc 60
agttggagct aatcgatcga gagagagagt atgacggtgg aagtggaggc ggtgacgatg 120
gcgaaggagg agcagccgga ggaggaggag gtgatcgaga agttggttga gaagatcacc 180
gggctggcgg cggccatcgg caagctgccg tcgctgagcc cgtcgccgga ggtgaacgcg 240
ctgttcacgg agctggtgat gacctgcatc ccgcccagca gcgtggacgt ggagcagctg 300
ggggcggagg cgcaggacat gcgcggccgc ctcatccgcc tctgcgccga cgccgagggc 360
cacctcgagg cgcactactc cgacgtcctc gccgcccacg acaacccgct cgaccacctc 420
gccctcttcc cctacttcaa caactacatc cagctcgccc agctcgagta cgccctcctc 480
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ctcccgctca gctccctcgt cctcgccgcc cgccacctcc ccgccgcctc cttccacaac 600
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ctgtccgcgc gcatggcctt ccacacctcc gacgtcgccc acgtcaccac cgacctcgcc 720
gcctacgacg tcgtgttcct ggcggcgctg gtgggtatgg ccgccgagga gaaggcgcgc 780
atggtggagc acctcgggaa gcacatggcg cccggcgccg ccctggtggt gcggagcgcg 840
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atggaggaca tgtccgccat ggagaagctg ccctcctcgt aggcaggcat cgatgactgc 1140
ttccatcgct tgctacctca ccagctcacc tgataaatca cctcagttac tatcgattaa 1200
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caaatctaat agtagtattt aataatctcg ttggtaatta actgcagtca tgcatgaatg 1320
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atatatgtcg ctattgagtg ttactgcttg attactgtac tagtagctta ttacaatcaa 1440
ccattgtctc tgttgcgtat ttatgagtgt aagtggttaa ttttctgttg cagcataatt 1500
aagttacctg tat 1513
<210> 234
<211> 343
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 234
Met Thr Val Glu Val Glu Ala Val Thr Met Ala Lys Glu Glu Gln Pro
1 5 10 15
Glu Glu Glu Glu Val Ile Glu Lys Leu Val Glu Lys Ile Thr Gly Leu
20 25 30
Ala Ala Ala Ile Gly Lys Leu Pro Ser Leu Ser Pro Ser Pro Glu Val
35 40 45
Asn Ala Leu Phe Thr Glu Leu Val Met Thr Cys Ile Pro Pro Ser Ser
50 55 60
Val Asp Val Glu Gln Leu Gly Ala Glu Ala Gln Asp Met Arg Gly Arg
65 70 75 80
Leu Ile Arg Leu Cys Ala Asp Ala Glu Gly His Leu Glu Ala His Tyr
85 90 95
Ser Asp Val Leu Ala Ala His Asp Asn Pro Leu Asp His Leu Ala Leu
100 105 110
Phe Pro Tyr Phe Asn Asn Tyr Ile Gln Leu Ala Gln Leu Glu Tyr Ala
115 120 125
Leu Leu Ala Arg His Leu Pro Ala Ala Pro Pro Pro Ser Arg Leu Ala
130 135 140
Phe Leu Gly Ser Gly Pro Leu Pro Leu Ser Ser Leu Val Leu Ala Ala
145 150 155 160
Arg His Leu Pro Ala Ala Ser Phe His Asn Tyr Asp Ile Cys Ala Asp
165 170 175
Ala Asn Arg Arg Ala Ser Arg Leu Val Arg Ala Asp Arg Asp Leu Ser
180 185 190
Ala Arg Met Ala Phe His Thr Ser Asp Val Ala His Val Thr Thr Asp
195 200 205
Leu Ala Ala Tyr Asp Val Val Phe Leu Ala Ala Leu Val Gly Met Ala
210 215 220
Ala Glu Glu Lys Ala Arg Met Val Glu His Leu Gly Lys His Met Ala
225 230 235 240
Pro Gly Ala Ala Leu Val Val Arg Ser Ala His Gly Ala Arg Gly Phe
245 250 255
Leu Tyr Pro Val Val Asp Pro Glu Glu Ile Arg Arg Gly Gly Phe Asp
260 265 270
Val Leu Ala Val His His Pro Glu Gly Glu Val Ile Asn Ser Val Ile
275 280 285
Ile Ala Arg Lys Pro Pro Val Ala Ala Pro Ala Leu Gly Gly Gly Asp
290 295 300
Ala His Ala His Gly His Gly Ala Val Val Ser Arg Pro Cys Gln Arg
305 310 315 320
Cys Glu Met Glu Ala Arg Ala His Gln Lys Met Glu Asp Met Ser Ala
325 330 335
Met Glu Lys Leu Pro Ser Ser
340
<210> 235
<211> 885
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 235
gactcgtcag cttagagcac cgcaagcgcg cacagccagc aaagatgtgt ggcggcgcga 60
tcatttccga cttcatcccg cagcgggaag cccaccgcgc ggccaccggc agcaagcgtg 120
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ccgccatccc gtgcagggag ttcatggact acgacgccgt catggcgggc ttcttccacc 540
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cgtacgtgca ccaccacctg ccgccgcagc cgcagcagga cgcggggctg gagctctgga 660
gctttgataa catccacacg gccgtgccga tgtgagatcg atctgatgat cattcagatc 720
gatgctagct catgtgtttt ttaattatat cttcacagca gaaacaaaaa aaagttcaat 780
tcagtttatt ttgttgttat acgttttaaa atgtttcatt aggttttcat gttataggag 840
tgatttatcg gattgaactc tcaagtgacc gacttctgag ttctt 885
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<211> 216
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 236
Met Cys Gly Gly Ala Ile Ile Ser Asp Phe Ile Pro Gln Arg Glu Ala
1 5 10 15
His Arg Ala Ala Thr Gly Ser Lys Arg Ala Leu Cys Ala Ser Asp Phe
20 25 30
Trp Pro Ser Ala Ser Gln Glu Ala Ala Asp Phe Asp His Leu Thr Ala
35 40 45
Pro Cys Thr Phe Thr Pro Asp Gln Ala Ala Glu Glu Pro Thr Lys Lys
50 55 60
Arg Glu Arg Lys Thr Leu Tyr Arg Gly Ile Arg Arg Arg Pro Trp Gly
65 70 75 80
Lys Trp Ala Ala Glu Ile Arg Asp Pro Ala Lys Gly Ala Arg Val Trp
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Leu Gly Thr Phe Ala Thr Ala Glu Ala Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Cys
100 105 110
Ala Ala Arg Arg Ile Arg Gly Ala Lys Ala Lys Val Asn Phe Pro Asn
115 120 125
Glu Asp Pro Pro Leu Asp Asp Pro Ala Ala Asp Gly His Ser His Gly
130 135 140
Gly Ala Ala Ile Pro Cys Arg Glu Phe Met Asp Tyr Asp Ala Val Met
145 150 155 160
Ala Gly Phe Phe His Gln Pro Tyr Val Val Ala Asp Gly Val Pro Ala
165 170 175
Val Pro Ala Glu Glu Ala Pro Thr Val Ala Tyr Val His His His Leu
180 185 190
Pro Pro Gln Pro Gln Gln Asp Ala Gly Leu Glu Leu Trp Ser Phe Asp
195 200 205
Asn Ile His Thr Ala Val Pro Met
210 215
<210> 237
<211> 1428
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 237
acaccaacat acggagttcg agtgacatac gagcagcagc caacacaagc tcgatcgaaa 60
gttctctcac aagttcagag tagcatttgg ttagtgacag taactggtca gcgtctctca 120
ccatgtcgtc caattttgag gccaacaaca acaacaatgg cgagaagcag ctggtctgtg 180
tgaccggagc aggtggcttc attgggtcgt gggtggtgaa ggagctcctc atccgtggct 240
accacgtcag gggaacagcc agggatcctg ctgacagcaa gaatgctcac ctgcttgagc 300
tggagggagc cgacgagagg ctctccctct gccgcgccga cgtcctcgac gccgccagcc 360
tccgcgccgc cttcagcggg tgccacggcg tcttccatgt cgcctccccg gtgtctaacg 420
accctgacct tgttccggtt gcagtggagg ggacgaggaa cgtgatcaac gcagcggcgg 480
acatgggcgt gcgccgcgtg gtgttcacgt cgtcgtacgg cgccgtgcac atgaacccca 540
accggagccc cgacgccgtc ctcgacgaga cctgctggag cgactacgaa ttctgcaagc 600
aaacagacaa cctgtactgc tgcgccaaga tgatggcgga gatgacggcg acggaggagg 660
cggcgaagag ggggctggag ctggcggtgg tggtgccgtc gatgacgatg ggtcccatgc 720
ttcagcagac gctcaacttc agcaccaacc acgtcgcccg ctacctcatg ggcaccaaga 780
agtcctaccc caacgccgtc gcggcctacg tcgacgtccg cgacgtcgcc cgcgcacacg 840
tcctcgtcta cgagcgcccc gaggcacgcg gccgctacct ctgcatcggc accgtgctcc 900
accgcgccga gctcctccgg atgctcaggg agctcttccc acggtaccct gccactgcaa 960
agtgtgagga tgatgggaag ccgatggcga agccgtataa gttctcgaac cagaggctca 1020
aggatttggg tttggagttc actccactga ggaagagttt gaatgaggcg gtcctatgca 1080
tgcagcagaa gggtcacctg cctctgattt atcccgttcc aaaacgtgct tacctataaa 1140
atcaagataa aaatacgaat tcgtctgttg cgatgggaaa cagagagcaa cagggaaaaa 1200
acaaaggaaa aaaaaggaaa cacaagggct ctgagattgt ttatttgtgc aagtgtagta 1260
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<210> 238
<211> 338
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 238
Met Ser Ser Asn Phe Glu Ala Asn Asn Asn Asn Asn Gly Glu Lys Gln
1 5 10 15
Leu Val Cys Val Thr Gly Ala Gly Gly Phe Ile Gly Ser Trp Val Val
20 25 30
Lys Glu Leu Leu Ile Arg Gly Tyr His Val Arg Gly Thr Ala Arg Asp
35 40 45
Pro Ala Asp Ser Lys Asn Ala His Leu Leu Glu Leu Glu Gly Ala Asp
50 55 60
Glu Arg Leu Ser Leu Cys Arg Ala Asp Val Leu Asp Ala Ala Ser Leu
65 70 75 80
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100 105 110
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115 120 125
Thr Ser Ser Tyr Gly Ala Val His Met Asn Pro Asn Arg Ser Pro Asp
130 135 140
Ala Val Leu Asp Glu Thr Cys Trp Ser Asp Tyr Glu Phe Cys Lys Gln
145 150 155 160
Thr Asp Asn Leu Tyr Cys Cys Ala Lys Met Met Ala Glu Met Thr Ala
165 170 175
Thr Glu Glu Ala Ala Lys Arg Gly Leu Glu Leu Ala Val Val Val Pro
180 185 190
Ser Met Thr Met Gly Pro Met Leu Gln Gln Thr Leu Asn Phe Ser Thr
195 200 205
Asn His Val Ala Arg Tyr Leu Met Gly Thr Lys Lys Ser Tyr Pro Asn
210 215 220
Ala Val Ala Ala Tyr Val Asp Val Arg Asp Val Ala Arg Ala His Val
225 230 235 240
Leu Val Tyr Glu Arg Pro Glu Ala Arg Gly Arg Tyr Leu Cys Ile Gly
245 250 255
Thr Val Leu His Arg Ala Glu Leu Leu Arg Met Leu Arg Glu Leu Phe
260 265 270
Pro Arg Tyr Pro Ala Thr Ala Lys Cys Glu Asp Asp Gly Lys Pro Met
275 280 285
Ala Lys Pro Tyr Lys Phe Ser Asn Gln Arg Leu Lys Asp Leu Gly Leu
290 295 300
Glu Phe Thr Pro Leu Arg Lys Ser Leu Asn Glu Ala Val Leu Cys Met
305 310 315 320
Gln Gln Lys Gly His Leu Pro Leu Ile Tyr Pro Val Pro Lys Arg Ala
325 330 335
Tyr Leu
<210> 239
<211> 1329
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 239
ggcatagacc tagccagcta gcaaccgaca agccaaggcg acggcaatgg cgccgacgac 60
gacggccacg gcggcggcgg agcaggcgcc gccgccgcag catacgagga aggcggtggg 120
gctcgccgcg cacgacgact ccggccacct cacacccatc cgcatctcgc gcaggaaaac 180
tggagatgac gacgtcgcta taaaggtgct gtactgtggg atttgtcact ctgacctgca 240
caccatcaag aatgagtgga gaaacgctgt ctacccagtt gttgcagggc acgagatcac 300
cggggtggtg accgaggtgg ggaagaacgt ggcgaggttc aaggccggcg acgaggtcgg 360
cgtcgggtgc atggtgaaca cctgcggcgg ctgcgagagc tgccgggacg gctgcgagaa 420
ctactgctcc ggcggggtcg tcttcaccta caactccgtc gaccgggacg gcacgcgcac 480
ctacggcggc tactccgacg cggtggtcgt cagccagcgc ttcgtcgtgc gcttcccctc 540
ctccgccggc ggcggcgccg gcgccgcgct gccgctggac agcggcgcgc cgctgctgtg 600
cgccggggtg acggtgtacg cgccgatgag gcagcatggg ctgtgcgagg ccgggaagca 660
cgtcggcgtg gtggggctcg gcgggctcgg ccacgtcgcc gtcaagttcg ccagggcgtt 720
cgggatgagg gtgacggtga tcagcacgtc gccggtgaag aggcaggagg ccctggagag 780
gctcggcgcc gacggcttca tcgtcagcac caacgccagt gagatgaagg ctgcgatggg 840
caccatgcat ggcatcatca acacggcctc tgcaagcaca tccatgcact cttacctggc 900
actcttgaag cccaagggca agatgatctt ggttggcctg cctgagaagc ctctccagat 960
cccaaccttc gctttggttg gagggggcaa gatactagct gggagctgca tggggagcat 1020
cagtgaaacg caggagatga tcgacttcgc cgccgagcac ggggtggccg ccgacatcga 1080
gctgatcggc gccgacgagg tgaacacggc catggagcgc ctcgccaagg gcgacgtcag 1140
gtaccgcttc gtcgtcgaca tcggcaacac cctcaggtcg gattgactag ggagctcact 1200
gtcactggtc tcagctctgt agcataccgg acctgcaatc ctgcaaagta gtgcaatctt 1260
cttgctacaa gacatacata tcacctctac ttggtgtcaa taaatgtagc aaaagaggta 1320
cattgttgt 1329
<210> 240
<211> 379
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 240
Met Ala Pro Thr Thr Thr Ala Thr Ala Ala Ala Glu Gln Ala Pro Pro
1 5 10 15
Pro Gln His Thr Arg Lys Ala Val Gly Leu Ala Ala His Asp Asp Ser
20 25 30
Gly His Leu Thr Pro Ile Arg Ile Ser Arg Arg Lys Thr Gly Asp Asp
35 40 45
Asp Val Ala Ile Lys Val Leu Tyr Cys Gly Ile Cys His Ser Asp Leu
50 55 60
His Thr Ile Lys Asn Glu Trp Arg Asn Ala Val Tyr Pro Val Val Ala
65 70 75 80
Gly His Glu Ile Thr Gly Val Val Thr Glu Val Gly Lys Asn Val Ala
85 90 95
Arg Phe Lys Ala Gly Asp Glu Val Gly Val Gly Cys Met Val Asn Thr
100 105 110
Cys Gly Gly Cys Glu Ser Cys Arg Asp Gly Cys Glu Asn Tyr Cys Ser
115 120 125
Gly Gly Val Val Phe Thr Tyr Asn Ser Val Asp Arg Asp Gly Thr Arg
130 135 140
Thr Tyr Gly Gly Tyr Ser Asp Ala Val Val Val Ser Gln Arg Phe Val
145 150 155 160
Val Arg Phe Pro Ser Ser Ala Gly Gly Gly Ala Gly Ala Ala Leu Pro
165 170 175
Leu Asp Ser Gly Ala Pro Leu Leu Cys Ala Gly Val Thr Val Tyr Ala
180 185 190
Pro Met Arg Gln His Gly Leu Cys Glu Ala Gly Lys His Val Gly Val
195 200 205
Val Gly Leu Gly Gly Leu Gly His Val Ala Val Lys Phe Ala Arg Ala
210 215 220
Phe Gly Met Arg Val Thr Val Ile Ser Thr Ser Pro Val Lys Arg Gln
225 230 235 240
Glu Ala Leu Glu Arg Leu Gly Ala Asp Gly Phe Ile Val Ser Thr Asn
245 250 255
Ala Ser Glu Met Lys Ala Ala Met Gly Thr Met His Gly Ile Ile Asn
260 265 270
Thr Ala Ser Ala Ser Thr Ser Met His Ser Tyr Leu Ala Leu Leu Lys
275 280 285
Pro Lys Gly Lys Met Ile Leu Val Gly Leu Pro Glu Lys Pro Leu Gln
290 295 300
Ile Pro Thr Phe Ala Leu Val Gly Gly Gly Lys Ile Leu Ala Gly Ser
305 310 315 320
Cys Met Gly Ser Ile Ser Glu Thr Gln Glu Met Ile Asp Phe Ala Ala
325 330 335
Glu His Gly Val Ala Ala Asp Ile Glu Leu Ile Gly Ala Asp Glu Val
340 345 350
Asn Thr Ala Met Glu Arg Leu Ala Lys Gly Asp Val Arg Tyr Arg Phe
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Val Val Asp Ile Gly Asn Thr Leu Arg Ser Asp
370 375
<210> 241
<211> 1111
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 241
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<210> 242
<211> 209
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 242
Met Ala Gly Ser Ser Glu Gln Gln Leu Val Ala Asn Ala Ala Ala Thr
1 5 10 15
Thr Val Ala Gly Asn Gly Ser Arg Phe Ala Val Thr Cys Gly Leu Leu
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Arg Gln Tyr Met Lys Glu His Ser Gly Ser Asn Gly Gly Gly Gly Phe
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Gln Ala Gly Thr Leu Lys Asp Thr Gln Glu Arg Lys Glu Ile Thr Glu
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Asp Phe Pro Ala Glu Lys Ala Gly Glu Leu Met Lys Leu Ala Gly Ser
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Arg Asp Ser Thr Ala Ala Ala Ala Val Ser Asp Ala Gly Ala Ala Ala
130 135 140
Gly Gln Pro Cys Leu Pro Asp Met Pro Ile Ala Arg Lys Val Ser Leu
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Gln Arg Phe Leu Glu Lys Arg Lys Asn Arg Ile Val Val Ala Glu Pro
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Leu Pro Glu Ser Glu Lys Lys Glu Ala Glu Ser Ser Lys Arg Ala Lys
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Leu
<210> 243
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 243
gacacctcga tcagtagctc catcgtaaga tcgattcgac caacatatca acaatggcgc 60
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<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 244
Met Ala Leu Arg Arg Leu Ala Ala Leu Leu Ser Leu Ala Val Leu Leu
1 5 10 15
Ser Ala Gly Leu Ala Ala Val Ser Ala Thr Ser Gln Asn Thr Gly Asp
20 25 30
Thr Val Ile Ile Trp Gly Arg Asn Lys Asp Glu Gly Ser Leu Arg Glu
35 40 45
Ala Cys Asp Ala Gly Arg Tyr Thr Thr Val Ile Ile Ser Phe Leu Ser
50 55 60
Ala Phe Gly Tyr Ile Pro Gly Thr Tyr Lys Leu Asp Ile Ser Gly His
65 70 75 80
Gln Val Ser Ala Val Gly Pro Asp Ile Lys Tyr Cys Gln Ser Lys Gly
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Lys Leu Ile Leu Leu Ala Ile Gly Gly Gln Gly Gly Glu Tyr Ser Leu
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Tyr Leu Gly Gly Arg Arg Asn Gly Val Tyr Arg Pro Phe Gly Asp Ala
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Asn Val Asn Gly Ile Asp Phe Phe Ile Asp Gln Gly Ala Arg Glu His
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Tyr Asn Glu Leu Ala Lys Met Leu Tyr Asp His Asn Lys Asp Tyr Arg
165 170 175
Ala Thr Val Gly Val Met Val Thr Ala Thr Thr Arg Cys Gly Tyr Pro
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Asp His Arg Leu Asp Glu Ala Leu Ala Thr Gly Leu Phe His Arg Ile
195 200 205
His Val Lys Met Phe Ser Asp Gly Arg Cys Pro Ala Trp Ser Arg Arg
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Gln Ser Phe Glu Lys Trp Ala Lys Thr Tyr Pro Gln Ser Arg Val Leu
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Ile Gly Val Val Ala Ser Pro Asp Val Asp Lys Asp Ala Tyr Met Pro
245 250 255
Pro Glu Ala Leu Asn Asn Leu Leu Gln Phe Ile Asn Lys Gln Pro Asn
260 265 270
Phe Gly Gly Val Met Val Trp Asp Arg Phe Tyr Asp Lys Lys Thr Gly
275 280 285
Phe Thr Ala His Leu
290
<210> 245
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 245
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<210> 246
<211> 233
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 246
Met Ala Gly Lys Asp Asp Asp Val Lys Val Leu Gly Val Val Val Ser
1 5 10 15
Pro Phe Ala Ile Arg Val Arg Ile Ala Leu Asn Ile Lys Gly Val Ser
20 25 30
Tyr Glu Tyr Val Glu Glu Asp Ile Phe Asn Lys Ser Glu Leu Leu Leu
35 40 45
Thr Ser Asn Pro Val His Lys Lys Val Pro Val Leu Ile His Gly Gly
50 55 60
Lys Pro Ile Ser Glu Ser Leu Val Ile Val Gln Tyr Val Asp Glu Val
65 70 75 80
Trp Ala Ala Ala Pro Ser Val Leu Pro Ala Asp Pro Tyr Asp Arg Ala
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Val Ala Arg Phe Trp Ala Ala Tyr Val Asp Asn Asn Met Phe Pro Gly
100 105 110
Met Ala Gly Val Leu Phe Ala Ala Thr Glu Glu Glu Arg Ala Ala Lys
115 120 125
Ala Glu Glu Thr Leu Ala Ala Leu Ala Gln Leu Glu Lys Ala Phe Ala
130 135 140
Glu Cys Ala Gly Gly Lys Ala Phe Phe Gly Gly Asp Ser Ile Gly Tyr
145 150 155 160
Val Asp Leu Ala Leu Gly Ser Asn Leu His Trp Phe Glu Ala Leu Arg
165 170 175
Arg Leu Phe Gly Val Ala Leu Leu Asp Ala Gly Lys Thr Pro Leu Leu
180 185 190
Ala Ala Trp Ala Lys Arg Phe Val Glu Ala Glu Ala Ala Lys Gly Val
195 200 205
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<210> 247
<211> 2025
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 247
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tcacaccttg taaacctctc cgcgctcttt ggcgcaatac tttcttgggg gataatgtgg 900
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<213> Oryza sativa
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Glu Ser Asp His Asp Gly Ala Ala Ala Ala Ala Glu Arg Val Pro Pro
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115 120 125
Gly Gly Phe Gly Ser Ser Leu Leu Ala Leu Asn Arg Lys Thr Tyr Glu
130 135 140
Leu Ala Gly Val Ser Thr Pro Gly Asn Ser Pro Gly Ser Tyr Lys Glu
145 150 155 160
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165 170 175
Gly Leu Leu Asn Leu Leu Pro Leu Arg Lys Ala Leu Ile Ile Asp Tyr
180 185 190
Lys Leu Thr Tyr Pro Ser Gly Thr Ala Thr Ala Val Leu Ile Asn Gly
195 200 205
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Phe Leu Asn Cys Phe Gly Ile Ser Leu Leu Trp Ser Phe Phe Gln Trp
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245 250 255
Gly Leu Lys Ala Trp Lys Gln Thr Phe Tyr Phe Asp Phe Ser Leu Thr
260 265 270
Tyr Val Gly Ala Gly Met Ile Cys Ser His Leu Val Asn Leu Ser Ala
275 280 285
Leu Phe Gly Ala Ile Leu Ser Trp Gly Ile Met Trp Pro Leu Ile Ser
290 295 300
Ile Gln Lys Gly Lys Trp Tyr Pro Gly Asn Val Pro Glu Ser Ser Met
305 310 315 320
Thr Ser Leu Phe Gly Tyr Lys Ser Phe Met Cys Val Ala Leu Ile Met
325 330 335
Gly Asp Gly Leu Tyr His Phe Ile Lys Val Thr Gly Ile Thr Ala Lys
340 345 350
Ser Leu His Glu Arg Ser Asn Arg Arg His Ala Lys Lys Ala Thr Asp
355 360 365
Glu Asp Thr Phe Val Ile Ala Asp Met Gln Arg Asp Glu Phe Phe Asn
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<210> 249
<211> 2022
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 249
gattaacggg tcatctcctg ccttccccat tggtccgaac agctaccgct agcacacaaa 60
agtacagaat tccaaaccaa atcctgtacc aaaacaggaa gggcgcaggc atgcctcttc 120
ttatcgtgca gcccgtaccc atttcgacag gtcctattgc ctgcgctagc accgcgcgtc 180
ctgcagcagc ggcgcacgat gacgacggcc accttttcga cgatctcgtg ctcggctacg 240
gcggcgacga caagacgagc gccgacgccg acgatccagc gaggaagctc gagtggctca 300
ggtcgcaggt catcggcgcg gacgcggagt tcgcgtcgcc gttcgggacc cgccgcgtca 360
cgtacgccga tcacaccgcg tccggccgct gcctgcgttt cgtcgaggac ttcgtgcagc 420
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ttgttgttga attttaccct tggtttttgg ccgaaaacct gg 2022
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<211> 616
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 250
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1 5 10 15
Ala Cys Ala Ser Thr Ala Arg Pro Ala Ala Ala Ala His Asp Asp Asp
20 25 30
Gly His Leu Phe Asp Asp Leu Val Leu Gly Tyr Gly Gly Asp Asp Lys
35 40 45
Thr Ser Ala Asp Ala Asp Asp Pro Ala Arg Lys Leu Glu Trp Leu Arg
50 55 60
Ser Gln Val Ile Gly Ala Asp Ala Glu Phe Ala Ser Pro Phe Gly Thr
65 70 75 80
Arg Arg Val Thr Tyr Ala Asp His Thr Ala Ser Gly Arg Cys Leu Arg
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Phe Val Glu Asp Phe Val Gln Arg Asn Val Leu Pro Tyr Tyr Gly Asn
100 105 110
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115 120 125
Ser Glu Ala Ala Lys Tyr Val Lys Arg Ser Leu Gly Ala Gly Ala Glu
130 135 140
Asp Val Leu Leu Phe Cys Gly Thr Gly Cys Thr Ala Ala Ile Lys Arg
145 150 155 160
Leu Gln Glu Val Thr Gly Met Ala Val Pro Pro Thr Leu Arg Ser Val
165 170 175
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180 185 190
Pro Tyr Glu His His Ser Asn Leu Leu Thr Trp Arg Glu Ser Leu Ala
195 200 205
Glu Val Val Glu Ile Gly Leu Arg Pro Asp Asp Gly His Leu Asp Leu
210 215 220
Asp Ala Leu Glu Ala Ala Leu Ala Ala Pro Glu Arg Ala Gly Arg Pro
225 230 235 240
Met Leu Gly Ser Phe Ser Ala Cys Ser Asn Val Thr Gly Ile Arg Thr
245 250 255
Asp Thr Arg Ala Val Ala Arg Leu Leu His Gly Tyr Gly Ala Tyr Ala
260 265 270
Cys Phe Asp Phe Ala Cys Ser Ala Pro Tyr Val Gly Ile Asp Met Arg
275 280 285
Ser Gly Glu Glu Asp Gly Tyr Asp Ala Val Tyr Leu Ser Pro His Lys
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Phe Leu Gly Gly Pro Gly Ser Pro Gly Val Leu Ala Met Ala Lys Arg
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Leu Tyr Arg Leu Arg Arg Thr Ala Pro Ser Thr Ser Gly Gly Gly Thr
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Val Val Tyr Val Ser Ala Tyr Gly Asp Thr Val Tyr Cys Glu Asp Thr
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Glu Glu Arg Glu Asp Ala Gly Thr Pro Ala Ile Ile Gln Lys Val Arg
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Glu Ala Arg Glu Asp His Met Leu Ala Leu Ala Leu Arg Arg Met Gln
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Cys Ala Gly Pro Tyr Gly His Arg Leu Leu Gly Ile Thr Pro Ala Arg
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Asn Ala Ala Ala Ala Ala Ser Ser Gly Arg Val Lys Ala Glu Asp Glu
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Gly Cys Leu Asp Asn Thr Pro Ala Arg His Val Pro Lys Gly Ile Asp
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Pro Gln Leu Leu Tyr Phe Pro Met
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
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<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 252
Met Ala Ala Ala Pro Met Ser Phe Ala Phe Thr Leu Leu Ala Ala Cys
1 5 10 15
Ile Ser Phe Leu His His Ala Pro Ala Ala Ala Ala Ala Ala Pro Ala
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Val Ala Val Val Glu Ala Thr Asp Ala Ser His Val Gln Ala Ala Val
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His Asp Tyr Glu Gly Leu Ser Tyr Arg Ser Leu Asp Ala Ala Arg Ala
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Phe Ala Val Val Asp Met Ala Gly Gly Ala Leu Arg Ala Val Arg Val
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Asp Val Leu Gly Arg Ala Ala Trp Val Gly Ser Gly Ala Thr Leu Gly
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Glu Val Tyr Tyr Ala Ile Ala Asn Lys Thr Ser Arg Leu Gly Phe Pro
165 170 175
Gly Ser Val Gly Pro Thr Val Gly Val Gly Gly Phe Leu Ser Gly Gly
180 185 190
Gly Phe Gly Leu Met Leu Arg Lys His Gly Leu Ala Ser Asp His Val
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Leu Asp Ala Thr Met Val Glu Ala Lys Gly Arg Leu Leu Asp Arg Ala
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Asn Phe Gly Ile Val Leu Ser Trp Lys Leu Arg Leu Val Pro Val Pro
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Thr Asp Leu Leu Ala Lys Trp Gln Arg Val Ala Pro Ser Leu Pro Ser
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Trp Val Gln Ser Val Leu Tyr Phe Ala Phe Tyr Gly Thr Gly Lys Pro
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Pro Glu Met Leu Leu Asp Arg Gly Thr Gly Arg Pro Asp Arg Tyr Phe
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Lys Ala Lys Ser Asp Tyr Val Gln Glu Pro Met Pro Ser Gln Val Trp
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Leu Asp Pro Tyr Gly Gly Glu Met Ala Arg Val Ala Pro Ala Ala Thr
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Trp Ser Glu Ser Gly Ala Pro Ala Ala Ala Lys His Met Gly Trp Ile
435 440 445
Arg Gly Val Tyr Gly Glu Met Glu Pro Tyr Val Ser Lys Asn Pro Arg
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Gly Ala Tyr Val Asn Tyr Arg Asp Leu Asp Leu Gly Val Asn Asp Asp
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Gly Asp Gly Gly Gly Gly Val Ala Arg Ala Arg Tyr Glu Lys Ala Thr
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Val Trp Gly Arg Ala Tyr Phe Lys Ala Asn Phe Glu Arg Leu Ala Ala
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<212> DNA
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<213> Oryza sativa
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cccaaggtct ccaagcgctt cgtccacgcc gacccctccg acctcagcct cgtggtgaag 660
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gcctacttca ggtgctcgtt cgcgccggcg tgcccggtga agaagaaggt gcagcgcagc 780
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<212> PRT
<213> Oryza sativa
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Met Asp Ser Trp Ile Glu Gln Thr Ser Leu Ser Leu Asp Leu Asn Val
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Gly Leu Pro Ser Thr Ala Arg Arg Ser Ser Ala Pro Ala Ala Pro Ile
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
Ala Tyr Ala Ser Pro Asp Gln Met Glu Cys Thr Ser Ala Ala Ala Ala
145 150 155 160
Ala Ala Ala Lys Arg Val Val Arg Glu Asp Cys Lys Pro Lys Val Ser
165 170 175
Lys Arg Phe Val His Ala Asp Pro Ser Asp Leu Ser Leu Val Val Lys
180 185 190
Asp Gly Tyr Gln Trp Arg Lys Tyr Gly Gln Lys Val Thr Lys Asp Asn
195 200 205
Pro Cys Pro Arg Ala Tyr Phe Arg Cys Ser Phe Ala Pro Ala Cys Pro
210 215 220
Val Lys Lys Lys Val Gln Arg Ser Ala Asp Asp Asn Thr Val Leu Val
225 230 235 240
Ala Thr Tyr Glu Gly Glu His Asn His Ala Gln Pro Pro His His Asp
245 250 255
Ala Gly Ser Lys Thr Ala Ala Ala Ala Lys His Ser Gln His Gln Pro
260 265 270
Pro Pro Ser Ala Ala Ala Ala Val Asp Arg Gln Gln Gln Glu Gln Ala
275 280 285
Ala Ala Ala Gly Pro Ser Thr Glu Val Ala Ala Arg Lys Asn Leu Ala
290 295 300
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<213> Oryza sativa
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ggccgccgag gctcaacatg gccgaggcga ggatggaggc cgaggccgtc atgttcgggt 720
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tggcgcggga gctcatggcg gtggccggcg acgcgctcaa gaccaacatc accacgctgg 1260
ggcccctcgt cctcccgctc accgagcagc tcaagttcct caagtccctg atgatgcgcc 1320
gcgtgttccg cgtcaagggc gtgcgcccct acatcccgga cttccgccgc gcgttcgagc 1380
acttctgcgt gcacgccggc ggccgcgccg tgctggagga ggtgcagcgc agcctcagcc 1440
tggaggacag ggacatggag ccgagcaagt gctcgctgca ccggttcggc aacaccagca 1500
gcagctcgct gtggtacgag ctggcgtacg ccgaggccaa gggccgcgtc cagcgcggca 1560
accgcgtgtg gcagatcggc ttcggctcgg ggttcaagtg caacagcgcg gtctggcgcg 1620
cgctccgcga cgtgccggcc gtgtcgccgc cgccgaaggg gaagaagagc tgcaacccct 1680
gggtggactg cgtcgccaag tacccgccca aggcgtacgt ttgacggtta cgttttcgtg 1740
acctcgcaca aattgtatga ttcatttctc ctcaccaaaa cacacaaaaa aaagagggca 1800
tatgctgggg aagacttttt tttttttgtc gttttttctt cttcgcatag gtttgctgta 1860
gacattgccg gttattggaa ttcagggatt tatacggcga attgaattcc aaaagctagc 1920
agtgccattc ttttcagttt ttgtactagc agcatttgtt ttacacatcc tggccttcta 1980
gaagttgggg ggaaacagaa tggaggacat cacaacatgc catactacat atgactagag 2040
aacaatattg ccaagtgtaa attataaacg agaaatcaat gttacacgtt gtttgtgt 2098
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<211> 532
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 258
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1 5 10 15
Phe Arg Asp Asp Ala Arg Ala Ala Gly Gly Glu Trp Ala Pro Ser Ile
20 25 30
Val Ile Lys Ile Arg Arg Arg Leu Pro Asp Phe Ala Arg Ser Val Asn
35 40 45
Leu Lys Tyr Val Lys Leu Gly Ile Arg His Gly Gly Ser Val Thr Ser
50 55 60
Tyr Leu Pro Met Leu Cys Val Pro Leu Leu Ala Ser Ala Ala Tyr Ser
65 70 75 80
Phe Val Arg Leu Asp Val Ile Tyr Arg Ser Ile Asp Pro Leu Thr Cys
85 90 95
Val Ala Trp Leu Gly Thr Ala Val Leu Leu Leu Thr Val Tyr Tyr Phe
100 105 110
Lys Arg Pro Arg Pro Val Tyr Leu Val Glu Phe Ala Cys Tyr Lys Pro
115 120 125
Asp Asp Gln His Lys Ile Ser Lys Glu Gly Phe Leu Glu Met Thr Glu
130 135 140
Ser Thr Gly Cys Phe Asn Asp Ala Ala Leu Asp Phe Gln Thr Lys Ile
145 150 155 160
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165 170 175
Gln Ala Arg Pro Pro Arg Leu Asn Met Ala Glu Ala Arg Met Glu Ala
180 185 190
Glu Ala Val Met Phe Gly Cys Leu Asp Ala Leu Phe Glu Ser Thr Gly
195 200 205
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210 215 220
Phe Asn Pro Thr Pro Ser Leu Ser Ser Met Ile Ile Asn His Tyr Glu
225 230 235 240
Met Arg Ala Asp Val Lys Ser Phe Asn Leu Gly Gly Met Gly Cys Ser
245 250 255
Ala Gly Leu Ile Ala Ile Asp Leu Ala Lys Asp Met Leu Gln Ala Asn
260 265 270
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275 280 285
Trp Tyr Phe Gly Asn Asp Arg Ser Met Leu Leu Ser Asn Cys Ile Phe
290 295 300
Arg Met Gly Gly Ala Ala Ala Leu Leu Ser Asn Arg Arg Ala Asp Ala
305 310 315 320
Gly Arg Ala Lys Tyr Arg Leu Leu His Thr Val Arg Thr His Lys Gly
325 330 335
Ala Thr Asp Glu Cys Phe Asn Cys Val Tyr Gln Arg Glu Asp Glu Asp
340 345 350
Gly Lys Val Gly Val Ser Leu Ala Arg Glu Leu Met Ala Val Ala Gly
355 360 365
Asp Ala Leu Lys Thr Asn Ile Thr Thr Leu Gly Pro Leu Val Leu Pro
370 375 380
Leu Thr Glu Gln Leu Lys Phe Leu Lys Ser Leu Met Met Arg Arg Val
385 390 395 400
Phe Arg Val Lys Gly Val Arg Pro Tyr Ile Pro Asp Phe Arg Arg Ala
405 410 415
Phe Glu His Phe Cys Val His Ala Gly Gly Arg Ala Val Leu Glu Glu
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Val Gln Arg Ser Leu Ser Leu Glu Asp Arg Asp Met Glu Pro Ser Lys
435 440 445
Cys Ser Leu His Arg Phe Gly Asn Thr Ser Ser Ser Ser Leu Trp Tyr
450 455 460
Glu Leu Ala Tyr Ala Glu Ala Lys Gly Arg Val Gln Arg Gly Asn Arg
465 470 475 480
Val Trp Gln Ile Gly Phe Gly Ser Gly Phe Lys Cys Asn Ser Ala Val
485 490 495
Trp Arg Ala Leu Arg Asp Val Pro Ala Val Ser Pro Pro Pro Lys Gly
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Lys Lys Ser Cys Asn Pro Trp Val Asp Cys Val Ala Lys Tyr Pro Pro
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Lys Ala Tyr Val
530
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<211> 1108
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 259
aactctgcca tttcgtcgat tgtcctcctc ttcccttgac ggtgcaaagc agcatctcca 60
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<212> PRT
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Met Asp Tyr His Arg Ile His Pro Val Gly Val Gly Ser Pro Ala Pro
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Ala Val Ala Leu Gly Ala Thr Ala Gly Ile Leu Tyr Ala Val Phe Lys
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Leu Leu Ala Gly Glu Thr Arg Leu Asp Ser Ala Val Ala Leu Gln Leu
180 185 190
Ala Arg Gln Gln Gln Ala Gly Phe Val Pro Leu Thr Val Trp Ala Arg
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Gly Lys Ala Thr Cys Asn Leu Val Val Asp Asn Leu Val Ala Gly Arg
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Gln Ile Arg Ile Arg Ser Asn Ser Cys Ser Phe Lys Leu Lys Val
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<213> Oryza sativa
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<213> Oryza sativa
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1 5 10 15
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Val Arg Ala Ala Gly Asp Gly His Arg Leu Pro Val Arg Leu Leu Leu
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Arg Arg Ala Ala His Gly Pro Leu Asn Gly Leu Ala Ser Tyr Ser Val
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<400> 264
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Leu Leu Leu Gln Gln Ala Pro Val Leu Ile Arg Ala Thr Asp Ala Asp
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100 105 110
Asn Pro Pro His Val His Pro Arg Ala Thr Glu Val Gly Ile Val Leu
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Arg Gly Leu Met His Phe Gln Phe Asn Val Gly Lys Thr Glu Ala Thr
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Met Val Val Ser Phe Asn Ser Gln Asn Pro Gly Ile Val Phe Val Pro
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225
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 265
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<211> 510
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<213> Oryza sativa
<400> 266
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Pro Arg Ser Gly Lys Ser Leu Gly Val Leu Asn His Thr Gly Ala Leu
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Gly Gln Ala Ala Ala Gly Asp Gly Ala Ala Arg Arg Gly Asp Phe Ser
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Gly Ser Gln Ala Ile Leu Trp Gly Ala Leu Ala Ala Ser Pro Ala Met
145 150 155 160
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165 170 175
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Gly Leu Pro Arg Ala Val Ala Pro Glu Arg Leu His Pro Ala Val Trp
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Cys Ala Phe Val Ala Pro Leu Phe Gly Leu Glu Leu Lys Ile Tyr Gly
245 250 255
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275 280 285
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340 345 350
Ser Phe Asp Ala Val Ala Arg Thr Phe Phe Phe Met Ala Leu Phe Leu
355 360 365
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Ser Ile Ala Trp Trp Ser Tyr Thr Phe Pro Met Thr Thr Ala Ser Leu
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Ala Thr Val Lys Tyr Ala Glu Ala Glu Pro Cys Phe Thr Ser Arg Ala
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Leu Val Ser Thr Leu Leu His Ala Phe Val Trp Arg Ser Leu Phe Pro
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Lys Pro His Gly Lys Gly Arg Lys Ala Gly Lys Arg Val Tyr Asp Ile
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 267
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tccgaggaaa ttgttcctaa ggagatgcaa cttttgtttg atgttttcat gatgtacatc 1020
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aaatacataa catgttggtt ataaacatgt ttatgttagt cttttgattt cctttcgttc 1260
atgagtcagt agccttgagg cgtgtgcatg ttcacactga ggccatcgtt ttttcgtttt 1320
tctgttgtcg tatgagctac agtatgtgct ctgtgggatg gtacaactta tgtacgtcgt 1380
ggcttgagtc ttgggcatat tggtagcccg tgatttccat ttttattttc atcacaataa 1440
gaggaagaga aaactgaaaa gctgcaatgc agttcgcagc gcc 1483
<210> 268
<211> 366
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 268
Met Ala Gln Arg Val Gln Glu Glu Asp Glu Gln Met Met Ser Thr Asp
1 5 10 15
Asp Leu Ile Gln Ala Gln Ile Lys Leu Tyr His His Cys Phe Ala Phe
20 25 30
Ile Lys Ser Thr Ala Leu Trp Ala Ala Ile Asp Leu Arg Ile Ala Asp
35 40 45
Val Ile His Arg Asn Gly Gly Ala Ala Thr Leu Ser Asp Leu Ala Leu
50 55 60
Asn Val Gly Leu His Pro Thr Lys Leu Ser His Leu Arg Arg Leu Met
65 70 75 80
Arg Val Leu Thr Val Thr Gly Ile Phe Ala Val Glu Asp Arg Asn Gly
85 90 95
Glu Ala Met Tyr Thr Leu Thr Arg Val Ser Arg Leu Leu Leu Asn Ser
100 105 110
Asp Gly Glu Gly Thr His Ala Leu Ser Gln Met Ala Arg Val Leu Ala
115 120 125
Asn Pro Leu Ala Val Ile Ser His Phe Ser Ile His Glu Trp Phe Thr
130 135 140
Thr Glu Lys Ala Thr Thr Met Thr Pro Phe Glu Val Ala His Gly Cys
145 150 155 160
Thr Arg Trp Glu Met Ile Ala Asn Asp Ala Lys Asp Gly Ser Val Phe
165 170 175
Asn Ala Gly Met Val Glu Asp Ser Arg Val Ala Met Asp Ile Ile Leu
180 185 190
Lys Glu Ser Cys Gly Ile Phe Gln Gly Ile Ser Ser Leu Ile Asp Val
195 200 205
Gly Gly Gly His Gly Ala Ala Ala Ala Ala Ile Ala Thr Ala Phe Pro
210 215 220
Asn Ile Lys Cys Thr Val Leu Asp Leu Pro His Ile Val Ala Glu Ala
225 230 235 240
Pro Ala Thr His Ser Asn Ile Gln Phe Ile Gly Gly Asp Leu Phe Lys
245 250 255
Phe Ile Pro Ala Ala Asp Val Val Leu Leu Lys Cys Leu Leu His Cys
260 265 270
Trp Gln Asp Asp Asp Cys Val Lys Ile Leu Arg Leu Cys Lys Glu Ala
275 280 285
Ile Pro Ala Arg Asp Ala Gly Gly Lys Val Ile Ile Ile Glu Val Val
290 295 300
Val Gly Ile Gly Ser Glu Glu Ile Val Pro Lys Glu Met Gln Leu Leu
305 310 315 320
Phe Asp Val Phe Met Met Tyr Ile Asp Gly Ile Glu Arg Glu Glu Tyr
325 330 335
Glu Trp Lys Lys Ile Phe Leu Glu Ala Gly Phe Ser Asp Tyr Lys Ile
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Thr Pro Val Leu Gly Ala Arg Ser Ile Ile Glu Val Tyr Pro
355 360 365
<210> 269
<211> 1405
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 269
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cgtcgacgtg ctcgccgccg ccggcgttct ggccgggatc aaggtcgaca agggcaccgt 420
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gtcgcgtatt tgattttgat ttttgcttgg tcttgtttag cgagtgtttt gttttggttc 1320
tgaattttga aatgaattca aagtgatttt gtctgctgtt taacagtgaa ttaaaaagtg 1380
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<211> 365
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 270
Met Ser Ala Tyr Cys Gly Lys Tyr Lys Asp Glu Leu Ile Arg Asn Ala
1 5 10 15
Ala Tyr Ile Gly Thr Pro Gly Lys Gly Ile Leu Ala Ala Asp Glu Ser
20 25 30
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50 55 60
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65 70 75 80
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Gly Val Leu Ala Gly Ile Lys Val Asp Lys Gly Thr Val Glu Leu Ala
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Gly Thr Asp Arg Glu Thr Thr Thr Gln Gly His Asp Gly Leu Gly Glu
115 120 125
Arg Cys Arg Arg Tyr Tyr Ala Ala Gly Ala Arg Phe Ala Lys Trp Arg
130 135 140
Ala Val Leu Ser Ile Gly Arg Ala Ser Ser Arg Pro Ser Gln Leu Ala
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Val Asp Ala Asn Ala Gln Gly Leu Ala Arg Tyr Ala Ile Ile Cys Gln
165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
Ala Cys Tyr Lys Ala Leu Ser Asp His His Val Leu Leu Glu Gly Thr
210 215 220
Leu Leu Lys Pro Asn Met Val Thr Pro Gly Ser Asp Ala Ala Arg Ala
225 230 235 240
Pro Pro Glu Val Val Ala Glu His Thr Val Arg Ala Leu Leu Arg Thr
245 250 255
Val Pro Pro Ala Val Pro Ala Ile Val Phe Leu Ser Gly Gly Gln Ser
260 265 270
Glu Glu Glu Ala Thr Arg Asn Leu Asn Ala Met Asn Gln Val Ala Ser
275 280 285
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Gln Gln Ser Thr Leu Lys Ala Trp Ala Gly Lys Ala Glu Asn Val Gly
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Lys Ala Gln Ala Ala Leu Leu Ala Ala Ala Gly Pro Thr Pro Arg Arg
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Arg Thr Ser Thr Ser Arg Thr Thr Ser Thr Glu Ala Leu
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 271
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<212> PRT
<213> Oryza sativa
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115 120 125
Pro Val Ala Val Ala Ser Gln Phe Ser Leu His Glu Trp Phe Thr Val
130 135 140
Glu Lys Ala Ala Ala Val Ser Leu Phe Glu Val Ala His Gly Cys Thr
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Arg Trp Glu Met Ile Ala Asn Asp Ser Lys Asp Gly Ser Met Phe Asn
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Ala Gly Met Val Glu Asp Ser Ser Val Ala Met Asp Ile Ile Leu Arg
180 185 190
Lys Ser Ser Asn Val Phe Arg Gly Ile Asn Ser Leu Val Asp Val Gly
195 200 205
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Ile Lys Cys Thr Val Leu Asp Leu Pro His Ile Val Ala Lys Ala Pro
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Ser Asn Asn Asn Ile Gln Phe Val Gly Gly Asp Leu Phe Glu Phe Ile
245 250 255
Pro Ala Ala Asp Val Val Leu Leu Lys Cys Ile Leu His Cys Trp Gln
260 265 270
His Asp Asp Cys Val Lys Ile Met Arg Arg Cys Lys Glu Ala Ile Ser
275 280 285
Ala Arg Asp Ala Gly Gly Lys Val Ile Leu Ile Glu Val Val Val Gly
290 295 300
Ile Gly Ser Asn Glu Thr Val Pro Lys Glu Met Gln Leu Leu Phe Asp
305 310 315 320
Val Phe Met Met Tyr Thr Asp Gly Ile Glu Arg Glu Glu His Glu Trp
325 330 335
Lys Lys Ile Phe Leu Glu Ala Gly Phe Ser Asp Tyr Lys Ile Ile Pro
340 345 350
Val Leu Gly Val Arg Ser Ile Ile Glu Val Tyr Pro
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 273
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<213> Oryza sativa
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Glu Thr Ala Tyr Val Val Val Phe Leu Val Phe Ala Ser Thr His Lys
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Ala Ala Val Ala Leu Val Ser Leu Leu Ala Leu His Gly Gln His Arg
115 120 125
Lys Leu Leu Cys Gly Val Ala Ala Thr Val Cys Ser Ile Cys Met Tyr
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Ala Ser Pro Leu Ser Ile Met Arg Leu Val Ile Lys Thr Lys Ser Val
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Ser Trp Phe Ile Tyr Gly Leu Leu Gly Arg Asp Pro Phe Val Thr Ile
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Pro Asn Gly Cys Gly Ser Phe Leu Gly Ala Val Gln Leu Val Leu Tyr
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Ala Ile Tyr Arg Asn Asn Lys Gly Ala Gly Gly Gly Ser Gly Gly Lys
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Gln Ala Gly Asp Asp Asp Val Glu Met Ala Glu Gly Arg Asn Asn Lys
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Val Ala Asp Gly Gly Ala Ala Asp Asp Asp Ser Thr Ala Gly Gly Lys
245 250 255
Ala Gly Thr Glu Val
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 275
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<213> Oryza sativa
<400> 277
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caagcctggg actgtgcctg tctgccactt catgcagcct gacactgtcg tctggacccg 1800
caggggctga tgtatgtatg tatgccatat agtacctact tcatcgtact gtactgcgta 1860
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cttatatact cgtcacttct atcgtgtgtc gaaggttata tacttgtagc atttggggat 1980
gcagtacgta cgtgtgtctg taataagttt cgtgatatgt tgcttcatcc atatggacca 2040
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<400> 278
Met Asp Arg Ile Phe Ala Arg Phe Phe Cys Phe Leu Leu Ile Ala Ala
1 5 10 15
Val Ser His Ala Ala Asp Leu Ser Pro Glu Gln Tyr Trp Arg Ser Ile
20 25 30
Leu Pro Asn Thr Pro Met Pro Ser Ser Ile Ser Gln Leu Leu Asn Tyr
35 40 45
Pro Tyr Leu Pro Ala Val Arg Leu Pro Arg Arg Thr Asp Ala Gly Gln
50 55 60
Arg Asn Tyr Lys Ser Ser Val Ser His Val Ala Glu Arg Ser His Arg
65 70 75 80
Val Asp Asp Gly Gln Arg Asn Tyr Lys Leu Ser Ala Leu Pro Ala Thr
85 90 95
Asn Glu Leu Pro His Arg Thr Asp Ala Gly Gln Arg Asn Tyr Lys Ser
100 105 110
Ser Val Ser Pro Val Ala Glu Leu Pro His Arg Val Asp Asp Gly Gln
115 120 125
Arg Asn Tyr Lys Leu Ser Ala Leu Pro Ala Thr Asn Glu Leu Pro His
130 135 140
Arg Thr Asp Ala Gly Gln Arg Asn Tyr Lys Ser Ser Val Ser Pro Met
145 150 155 160
Ala Glu Leu Ser His Arg Val Asp Asp Gly Gln Arg Asn Tyr Lys Leu
165 170 175
Ser Ala Leu Pro Ala Thr Asn Glu Leu Pro His His Thr Asp Ala Gly
180 185 190
Gln Arg Asn Tyr Lys Ser Ser Val Ser Pro Val Ala Glu Leu Pro His
195 200 205
Arg Val Asp Asp Gly Gln Arg Asn Tyr Lys Leu Ser Ala Leu Pro Ala
210 215 220
Thr Asn Glu Leu Pro His Arg Thr Asp Ala Gly Gln Arg Asn Tyr Lys
225 230 235 240
Ser Ser Val Ser Pro Val Ala Glu Leu Pro His Arg Val Asp Asp Gly
245 250 255
Gln Arg Asn Tyr Lys Leu Ser Ala Leu Pro Ala Thr Asn Glu Leu Pro
260 265 270
His Arg Ile Asp Ala Gly Gln Arg Asn Tyr Lys Ser Ser Val Ser Pro
275 280 285
Met Ala Glu Leu Pro His Arg Ala Asp Asp Gly Gln Arg Asn Tyr Lys
290 295 300
Leu Ser Val Ser Pro Ala Ala Glu Leu Pro His Arg Val Asp Asp Gly
305 310 315 320
Gln Arg Asn Tyr Lys Leu Ser Val Leu Pro Ala Thr Glu Leu Val His
325 330 335
Tyr Thr Asp Gly Gln Arg Asn Tyr Lys Ser Ser Val Leu Glu Thr Pro
340 345 350
Glu Leu Leu Lys Asp Pro Asp Met Ala Leu Phe Phe Leu Glu Lys Asn
355 360 365
Leu Gln Gln Gly Lys Lys Ile Asn Asn Ala Leu His Phe Ala Asn Leu
370 375 380
Leu Ala Thr Thr Asn Ser Lys Phe Leu Pro Arg Gly Lys Ala Asp Ser
385 390 395 400
Ile Pro Phe Ser Ser Lys Glu Leu Pro Glu Ile Leu Asp Arg Phe Gly
405 410 415
Val Arg Pro Gly Ser Asp Asp Ala Ala Glu Met Ser Ala Thr Leu Gln
420 425 430
Asp Cys Glu Leu Pro Ala Asn Lys Gly Glu Lys Lys Ala Cys Ala Thr
435 440 445
Ser Leu Glu Ser Ile Val Asp Phe Val Thr Ser Ser Phe Gly Ala Ser
450 455 460
Asp Val Asp Ala Ala Ser Thr Val Val Leu Ser Lys Ala Val Glu Ser
465 470 475 480
Ser Ser Leu Ala Gln Asp Tyr Thr Val Ser Gly Val Arg Arg Met Ala
485 490 495
Gly Thr Gly Gln Leu Ile Ala Cys His Pro Glu Ser Tyr Pro Tyr Ala
500 505 510
Val Phe Met Cys His Leu Thr Glu Ala Thr Thr Arg Ala Tyr Lys Ala
515 520 525
Ser Leu Val Gly Lys Asp Gly Thr Ala Val Glu Ala Val Ala Val Cys
530 535 540
His Thr Asp Thr Ser Asp Trp Asn Pro Glu His Ala Ala Phe His Val
545 550 555 560
Leu Gly Val Lys Pro Gly Thr Val Pro Val Cys His Phe Met Gln Pro
565 570 575
Asp Thr Val Val Trp Thr Arg Arg Gly
580 585
<210> 279
<211> 816
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 279
gacacgtttc agctgtcttt cagtgttcac gtaggttgta gagagcacaa caacgtacgt 60
acacagcagc aaagactgag actagctagc ttagctgaca tggctccaag gtgcgcgacg 120
ctggcggtgg tggtggtgct ggtggcggcc gtggtggcgc cgccgacggc ggtgcgcgcg 180
gctatctcgt gctcggcggt gtacaacacg ctgatgccgt gcctgccgta cgtgcaggcg 240
gggggcacgg tgcccagggc gtgctgcggc ggcattcaga gcctgctcgc cgccgccaac 300
aacacccccg atcgccgcac catctgcggc tgcctcaaga acgtcgccaa cggcgcctcc 360
gggggcccct acatcacccg cgccgccgcg ctcccctcca agtgcaacgt ctccctccct 420
tacaagatca gcaccagcgt caactgcaac gcgataaact agggcggccg gcctgatgcg 480
tacgtgtgtg cccgcgcctc ccgtacgaga ggagaataaa atgtcattag taccatcaaa 540
ttaagctagc tagttaagct ttacgaaaat cgatcccttt cttcctctgt ggtgtttagc 600
agtttaggga tcgtatgtct ccacagttcc tactatagtg tcgcttgggc gatggtggag 660
ctatattgtg cactttataa ggtggtgtta ttatgtaacg cctgtgctag ctttggtcct 720
gatgttctcc atgtgaactg tgtcaaccgt ccattgttct gcaaatctgc agtatgtact 780
gtgtgtgata gtatcaagct gaacttctga acatgc 816
<210> 280
<211> 120
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 280
Met Ala Pro Arg Cys Ala Thr Leu Ala Val Val Val Val Leu Val Ala
1 5 10 15
Ala Val Val Ala Pro Pro Thr Ala Val Arg Ala Ala Ile Ser Cys Ser
20 25 30
Ala Val Tyr Asn Thr Leu Met Pro Cys Leu Pro Tyr Val Gln Ala Gly
35 40 45
Gly Thr Val Pro Arg Ala Cys Cys Gly Gly Ile Gln Ser Leu Leu Ala
50 55 60
Ala Ala Asn Asn Thr Pro Asp Arg Arg Thr Ile Cys Gly Cys Leu Lys
65 70 75 80
Asn Val Ala Asn Gly Ala Ser Gly Gly Pro Tyr Ile Thr Arg Ala Ala
85 90 95
Ala Leu Pro Ser Lys Cys Asn Val Ser Leu Pro Tyr Lys Ile Ser Thr
100 105 110
Ser Val Asn Cys Asn Ala Ile Asn
115 120
<210> 281
<211> 684
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 281
atggagtacg gcttcaaagc agctgggttg gtgttcgtcg tgctgctcct gcagcaggcg 60
cccgtgttaa tccgagccac cgacgcggac cctctgcagg atttctgcgt cgctgacctc 120
aacagcgagg tgacggtgaa cgggcacgcg tgcaagccgg cgtcggccgc cggcgacgag 180
ttcctcttct cctccaagat tgccacgggc ggcgacgtga acgccaaccc gaacggctcc 240
aacgtcacgg agctcgacgt cgccgagtgg cccggcgtca acacgctcgg cgtgtccatg 300
aaccgcgtcg acttcgcgcc cggtggcacc aacccgccgc acgtccaccc gcgcgccacc 360
gaggtcggca tcgtgctccg cggcgagctc ctcgtcggca tcatcggcac cctcgacacc 420
gggaacaggt actactccaa ggtggtccgt gccggcgaga cgttcgtcat cccgaggggg 480
ctcatgcact tccagttcaa cgttggcaag acggaggcca ccatggtggt gtccttcaac 540
agccagaacc ccggcatcgt cttcgtcccg ctcacattgt tcggctccaa cccgcccatc 600
ccgacgccgg tgcttgtcaa ggcactccgc gtggatgctg gtgtagttga gctgctcaag 660
tccaaattca ccggcgggta ctaa 684
<210> 282
<211> 227
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 282
Met Glu Tyr Gly Phe Lys Ala Ala Gly Leu Val Phe Val Val Leu Leu
1 5 10 15
Leu Gln Gln Ala Pro Val Leu Ile Arg Ala Thr Asp Ala Asp Pro Leu
20 25 30
Gln Asp Phe Cys Val Ala Asp Leu Asn Ser Glu Val Thr Val Asn Gly
35 40 45
His Ala Cys Lys Pro Ala Ser Ala Ala Gly Asp Glu Phe Leu Phe Ser
50 55 60
Ser Lys Ile Ala Thr Gly Gly Asp Val Asn Ala Asn Pro Asn Gly Ser
65 70 75 80
Asn Val Thr Glu Leu Asp Val Ala Glu Trp Pro Gly Val Asn Thr Leu
85 90 95
Gly Val Ser Met Asn Arg Val Asp Phe Ala Pro Gly Gly Thr Asn Pro
100 105 110
Pro His Val His Pro Arg Ala Thr Glu Val Gly Ile Val Leu Arg Gly
115 120 125
Glu Leu Leu Val Gly Ile Ile Gly Thr Leu Asp Thr Gly Asn Arg Tyr
130 135 140
Tyr Ser Lys Val Val Arg Ala Gly Glu Thr Phe Val Ile Pro Arg Gly
145 150 155 160
Leu Met His Phe Gln Phe Asn Val Gly Lys Thr Glu Ala Thr Met Val
165 170 175
Val Ser Phe Asn Ser Gln Asn Pro Gly Ile Val Phe Val Pro Leu Thr
180 185 190
Leu Phe Gly Ser Asn Pro Pro Ile Pro Thr Pro Val Leu Val Lys Ala
195 200 205
Leu Arg Val Asp Ala Gly Val Val Glu Leu Leu Lys Ser Lys Phe Thr
210 215 220
Gly Gly Tyr
225
<210> 283
<211> 1494
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 283
aattgatagc ctgtgcgtct ccaagaagag gcttgccgct gccgccattg gagccctctc 60
gtttctgctc gagctctgca tttcttcagt aggaggagga ggaggaagag ttggagtcgc 120
catgtcgtcg tccctgctca ctgacctcgt taacctcgac ctgtcggaga gcacggacaa 180
ggtcatcgcc gagtacatat gggttggtgg tactgggatg gatgtgagga gcaaagccag 240
aacgttgtct ggacctgttg atgacccaag caagcttcca aagtggaact ttgatggctc 300
cagcaccggt caggctaccg gtgacgacag tgaagtcatc ctccaccctc aagccatctt 360
cagagaccca ttcaggaagg ggaagaacat cctggtcatg tgtgactgtt atgcgccgaa 420
tggcgagccg attccgacga acaaccggta caatgcagca aggatcttca gtcatcctga 480
tgtcaaggct gaagagccat ggtatgggat tgagcaggag tacacccttc ttcagaagca 540
catcaactgg cctcttggct ggccactagg tggctatcca ggccctcagg gtccgtacta 600
ctgtgcggcg ggagccgata aatcgtacgg gcgcgacatc gttgatgccc actacaaggc 660
ctgcctgttt gccggcatca acatcagcgg gatcaacgca gaagtcatgc cggggcagtg 720
ggagttccag attggccctg tcgttggcgt ctccgcaggg gatcatgtct gggtggcacg 780
ctacattctt gagaggatca ctgagattgc tggcgtcgtc gtgtccttcg accccaagcc 840
cattccggga gactggaatg gcgccggtgc tcacaccaac tacagcacca agtcgatgag 900
gagcaatggc ggctacgagg tgatcaagaa agcgatcaag aagcttggca tgcgccaccg 960
tgagcacatc gccgcctacg gcgacggcaa cgagcgccgc ctcaccggcc gccacgagac 1020
cgccgacatc aacaacttcg tctggggcgt agcgaaccgc ggcgcgtcgg tgcgtgtcgg 1080
ccgggacacc gagaaggacg gcaaaggtta cttcgaggac aggaggccgg cgtccaacat 1140
ggacccgtac ctggtgaccg ccatgatcgc cgagaccacc atcctctggg agcccagcca 1200
cggccacggc cacggccaat ccaacggcaa gtgaggagga gtcgcctcgc ccgggttgat 1260
gaactgcttt ctcgcgttct gggtttcatg gaaatctgtg tgtgtgttct ctgacgctgg 1320
tgctgttaga aacttccaat aattcagaaa taactgcgat gtgctctcaa atttctcatg 1380
aggccatcac ctgcagcatc tcatgaaata gatctattgc aatgacaata ccaatggcaa 1440
cgcaaaattt tatggtacct ccagatacca tctactctcc tcaataatga caat 1494
<210> 284
<211> 370
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 284
Met Ser Ser Ser Leu Leu Thr Asp Leu Val Asn Leu Asp Leu Ser Glu
1 5 10 15
Ser Thr Asp Lys Val Ile Ala Glu Tyr Ile Trp Val Gly Gly Thr Gly
20 25 30
Met Asp Val Arg Ser Lys Ala Arg Thr Leu Ser Gly Pro Val Asp Asp
35 40 45
Pro Ser Lys Leu Pro Lys Trp Asn Phe Asp Gly Ser Ser Thr Gly Gln
50 55 60
Ala Thr Gly Asp Asp Ser Glu Val Ile Leu His Pro Gln Ala Ile Phe
65 70 75 80
Arg Asp Pro Phe Arg Lys Gly Lys Asn Ile Leu Val Met Cys Asp Cys
85 90 95
Tyr Ala Pro Asn Gly Glu Pro Ile Pro Thr Asn Asn Arg Tyr Asn Ala
100 105 110
Ala Arg Ile Phe Ser His Pro Asp Val Lys Ala Glu Glu Pro Trp Tyr
115 120 125
Gly Ile Glu Gln Glu Tyr Thr Leu Leu Gln Lys His Ile Asn Trp Pro
130 135 140
Leu Gly Trp Pro Leu Gly Gly Tyr Pro Gly Pro Gln Gly Pro Tyr Tyr
145 150 155 160
Cys Ala Ala Gly Ala Asp Lys Ser Tyr Gly Arg Asp Ile Val Asp Ala
165 170 175
His Tyr Lys Ala Cys Leu Phe Ala Gly Ile Asn Ile Ser Gly Ile Asn
180 185 190
Ala Glu Val Met Pro Gly Gln Trp Glu Phe Gln Ile Gly Pro Val Val
195 200 205
Gly Val Ser Ala Gly Asp His Val Trp Val Ala Arg Tyr Ile Leu Glu
210 215 220
Arg Ile Thr Glu Ile Ala Gly Val Val Val Ser Phe Asp Pro Lys Pro
225 230 235 240
Ile Pro Gly Asp Trp Asn Gly Ala Gly Ala His Thr Asn Tyr Ser Thr
245 250 255
Lys Ser Met Arg Ser Asn Gly Gly Tyr Glu Val Ile Lys Lys Ala Ile
260 265 270
Lys Lys Leu Gly Met Arg His Arg Glu His Ile Ala Ala Tyr Gly Asp
275 280 285
Gly Asn Glu Arg Arg Leu Thr Gly Arg His Glu Thr Ala Asp Ile Asn
290 295 300
Asn Phe Val Trp Gly Val Ala Asn Arg Gly Ala Ser Val Arg Val Gly
305 310 315 320
Arg Asp Thr Glu Lys Asp Gly Lys Gly Tyr Phe Glu Asp Arg Arg Pro
325 330 335
Ala Ser Asn Met Asp Pro Tyr Leu Val Thr Ala Met Ile Ala Glu Thr
340 345 350
Thr Ile Leu Trp Glu Pro Ser His Gly His Gly His Gly Gln Ser Asn
355 360 365
Gly Lys
370
<210> 285
<211> 2882
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 285
gtcatttcat cgaacacctt gcaatcaccc tctcaccacc gctagagatc accattgtga 60
ggctccccgg ccggagctgg aggttggagg gagtggagga agagccgtgc tgccgccgtc 120
gccatggggg aagccaggta gccgctggac atcaagaaac gccgtcgagc accttacatc 180
gccgctgtct gcccctgtcc tgcaccgcgt cgagctccac ttcgccgcgt ttcgccatct 240
cgccgtctcg cgaaattgta tatcggttag tcgtgaggca acgtatgcag cttccaggag 300
gtgaaggttg atcaagatca tatcaagaat aagaactatc ctgagcagag tattgaagag 360
aagcccttgt tagtacgctt gcgtacctaa caagatgatc ggagtgcggt tctgttctag 420
gtctcgttcc ccagtcgact gcttgtggca tgtcaactga gcccttgtat tattttgtct 480
tccactgttg tttctctgat agttgttggc ctgcctggcc ctaatgtaag tatttaactc 540
tcttagcctg aattcattcg tgatatgttg tgattcggct atgtatgtgt gtaccaacta 600
ctgatccagg gattggtact gataaacaca gaagatttcc gatttacaaa atcgggggtc 660
gacatgccag atctggcgga ggggagggcc ccgccatgtt gccgcctccc ttcccgctgg 720
atctggcgga gaggagggtg ccgccgcttc cgggccgctt cctcccctcc cgtcggctct 780
ggcatagggg agcacgccgc cgtgctgccg ctggaccacc gcctcccctc ccatcggatc 840
tggcagaggg gagggccccg ccatggtgga tggaggagga ggagaggagt gctgccactg 900
ttgtggatgg aagaggagga gagaggagaa ggaagaaatg gagagaaaga aggaagaaga 960
agagaggagg aagtggattg cgggtgcggg agatagagtt cgagagagag ggaggggagg 1020
aagagataag gatgggagta gatagggtgg ctcagctcgg ctcggttagt tcggcagata 1080
ggtgtcggtt ttaaaaaaac cggcacttat aatatattat aggtctcggt ttttaattaa 1140
ccgacaccta taatatatta cagatgccgg tttttttctt aaaaaccgac acccatagta 1200
taagtgtcga tttttcttta gaaccaacac ctatagttgt ttaaaggtgt cggttttttt 1260
atgttttcat cccgttgagg tttgaaaaac attatatata ggtgccagtt ttagcacgtc 1320
cggtacctat agtgccgata tatatgtccc tttttgtagt agtgatccct cggaataata 1380
gtaaccaaac aatattctta ttctgcaggt gtgaacaaat taaacttagt tttgtcttga 1440
tcatctgcca actattcttt ttaaggttaa ctgtcgacta ctcgcatttc tcatataccc 1500
atcctcctcg tggaaaacag ttctcctcct agactatgtt tagttcctaa aaaaagttga 1560
aagtttaggg aaagttagta gtttggaaaa aaaattgaaa gttcatgtgt gtaggagaga 1620
tttggatgtg atgtgatgga aagctggaag ttgggggtga actaaacacg gccctagtgt 1680
tctctcgttc cccaaaatta atataaatat atttactctt tctacacatt tacatcaaca 1740
caattcgcaa tatgcgaaga tcgtttcata ttgccttcca cgtgtaccgt aaaaggggag 1800
caaatacagt cgacagtgga tggaggggaa tagctctggt tttcccaaca gccaaccacc 1860
agctgctaag ctagctccca atcgtattga atgaacgtat ggacacatgc accgtttaaa 1920
caccacaaac ccatccttgc tttgttaatt gctcgatctc ttgcagctgc gtgcaccgca 1980
tctgtgcatg catccacact agcaactcta cctatttaag cccctgcatt cccgcgtatt 2040
ctcctcatcc atctcatcag caacgaacca attcacaccg atcgatcgag caacagtagt 2100
aggaaccatg gcccgtgcac agttggtgtt ggtcgccgtt gtggcagctc tgctcctcgc 2160
cgccccgcac gccgccgtgg ccatcacctg cggccaggtc aactccgccg ttgggccctg 2220
cctcacctac gcccgcggcg gcgccggccc gtcggcggcc tgctgcagcg gcgtgaggag 2280
cctcaaggcc gcagccagca gcaccgctga caggcgcacc gcgtgcaact gcctcaagaa 2340
cgcggcccgc ggcatcaagg ggctcaacgc cggcaacgcc gccagcatcc cctctaagtg 2400
cggcgtcagc gtcccctaca ccatcagcgc ttccatcgac tgctccaggg tgagctgagc 2460
tatcgatcgg atggatcatt tatatgcata cagaagcgcg acggtgggtc gatgtgtgga 2520
gccgatcgaa ttctgtatcc aatattagta gtatctgtac gtattctgga ataaaaagat 2580
gagctagcta aggtcgatca atcaccatgc atgcatgtgt gtgcatccat ggttgatcgg 2640
cccggccggt caggctagct agctttcttc ttcttgtgtg ttcatctcgt acgttttgct 2700
ccttctcgag gtgtacgtgt accagagaga gctagctaga gattctacat gcatgtactg 2760
caactccttg tactacgtgc ttgttttgga atattacaca tacatatagc tctttttggt 2820
acatatatag ctctttgtag agctccacac tagtatagat actctcatct gtgacgtcct 2880
ct 2882
<210> 286
<211> 169
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 286
Met Cys Val Pro Thr Thr Asp Pro Gly Ile Gly Thr Asp Lys His Arg
1 5 10 15
Arg Phe Pro Ile Tyr Lys Ile Gly Gly Arg His Ala Arg Ser Gly Gly
20 25 30
Gly Glu Gly Pro Ala Met Leu Pro Pro Pro Phe Pro Leu Asp Leu Ala
35 40 45
Glu Arg Arg Val Pro Pro Leu Pro Gly Arg Phe Leu Pro Ser Arg Arg
50 55 60
Leu Trp His Arg Gly Ala Arg Arg Arg Ala Ala Ala Gly Pro Pro Pro
65 70 75 80
Pro Leu Pro Ser Asp Leu Ala Glu Gly Arg Ala Pro Pro Trp Trp Met
85 90 95
Glu Glu Glu Glu Arg Ser Ala Ala Thr Val Val Asp Gly Arg Gly Gly
100 105 110
Glu Arg Arg Arg Lys Lys Trp Arg Glu Arg Arg Lys Lys Lys Arg Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Leu Arg Val Arg Glu Ile Glu Phe Glu Arg Glu Gly Gly
130 135 140
Glu Glu Glu Ile Arg Met Gly Val Asp Arg Val Ala Gln Leu Gly Ser
145 150 155 160
Val Ser Ser Ala Asp Arg Cys Arg Phe
165
<210> 287
<211> 1337
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 287
gaccacaccc ctaccgccca ctcccccggc cgccgccgca tctgcgctct tagggcctct 60
ccttccccat ccccaaattt cccctccggc catggccacc gacggcacag gcgtcgtcac 120
cgtctacggc tccggcacca acggtgccgc cttgctcgag ccctccaacc acaagtccgc 180
caccttctcc gtcaaggtgg gcctcgccca gatgctgcgc ggcggcgtca tcatggacgt 240
cgtcaccccc gaacaggcgc gcatcgccga ggaggccggt gcctgcgccg tcatggccct 300
cgagcgcgtc cccgccgaca tccgcgccca gggcggcgtc gcccgcatgt ccgaccctgg 360
cctcatccgc gacatcaagc gcgccgtcac catccccgtc atggccaagg cccgcatcgg 420
ccacttcgtc gaggcccaga tcctcgaggc catcggcgtc gactacgtcg acgagagcga 480
ggtcctcacc ctcgccgacg acgcccacca catcaacaag cacaacttcc gcgtcccctt 540
cgtctgcggc tgccgcgacc tcggcgaggc cctccgccgc atccgcgagg gcgccgccat 600
gatccgcacc aagggcgagg ccggcaccgg caacgtcgtc gaggccgtcc gccacgtccg 660
ctccgtcatg ggcgacatcc gcgcgctccg caacatggac gacgacgagg tcttctccta 720
cgccaagcgc atcgccgcgc cctacgacct tgtcatgcag accaagcagc tgggccgtct 780
accagtcgtt cagtttgcgg ccggcggtgt ggccaccccc gccgacgctg ccctcatgat 840
gcagctcggc tgcgacggcg tcttcgtcgg ctccggcatc ttcaagagcg gcgaccccgc 900
gcgccgcgcc cgcgccatcg tgcaggccgt cacccactac agcgacccca agatcttggc 960
ggaggtcagc agcgggctcg gcgaggccat ggttggcatc aacctctccg atcctaaggt 1020
ggagcgcttc gccgcccgct ccgagtagcc catccatcat cattcatatc cgccttatcc 1080
ttctttcgct atatatatat gctccttcct tcgattaagt aataattaca tctactatca 1140
tcgtcgtgat aagaagaaaa tgaattagac accagccagc caggactttg ttggcttggc 1200
tcacttccct tcccttccct tcttggtgat gatgtaacat ggaacagcac atgtatcgat 1260
taggagcatg tattgttatt tttgctaatt gctgtggact ggatccattt ctatggaaac 1320
tgtcatactt cccgttc 1337
<210> 288
<211> 318
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 288
Met Ala Thr Asp Gly Thr Gly Val Val Thr Val Tyr Gly Ser Gly Thr
1 5 10 15
Asn Gly Ala Ala Leu Leu Glu Pro Ser Asn His Lys Ser Ala Thr Phe
20 25 30
Ser Val Lys Val Gly Leu Ala Gln Met Leu Arg Gly Gly Val Ile Met
35 40 45
Asp Val Val Thr Pro Glu Gln Ala Arg Ile Ala Glu Glu Ala Gly Ala
50 55 60
Cys Ala Val Met Ala Leu Glu Arg Val Pro Ala Asp Ile Arg Ala Gln
65 70 75 80
Gly Gly Val Ala Arg Met Ser Asp Pro Gly Leu Ile Arg Asp Ile Lys
85 90 95
Arg Ala Val Thr Ile Pro Val Met Ala Lys Ala Arg Ile Gly His Phe
100 105 110
Val Glu Ala Gln Ile Leu Glu Ala Ile Gly Val Asp Tyr Val Asp Glu
115 120 125
Ser Glu Val Leu Thr Leu Ala Asp Asp Ala His His Ile Asn Lys His
130 135 140
Asn Phe Arg Val Pro Phe Val Cys Gly Cys Arg Asp Leu Gly Glu Ala
145 150 155 160
Leu Arg Arg Ile Arg Glu Gly Ala Ala Met Ile Arg Thr Lys Gly Glu
165 170 175
Ala Gly Thr Gly Asn Val Val Glu Ala Val Arg His Val Arg Ser Val
180 185 190
Met Gly Asp Ile Arg Ala Leu Arg Asn Met Asp Asp Asp Glu Val Phe
195 200 205
Ser Tyr Ala Lys Arg Ile Ala Ala Pro Tyr Asp Leu Val Met Gln Thr
210 215 220
Lys Gln Leu Gly Arg Leu Pro Val Val Gln Phe Ala Ala Gly Gly Val
225 230 235 240
Ala Thr Pro Ala Asp Ala Ala Leu Met Met Gln Leu Gly Cys Asp Gly
245 250 255
Val Phe Val Gly Ser Gly Ile Phe Lys Ser Gly Asp Pro Ala Arg Arg
260 265 270
Ala Arg Ala Ile Val Gln Ala Val Thr His Tyr Ser Asp Pro Lys Ile
275 280 285
Leu Ala Glu Val Ser Ser Gly Leu Gly Glu Ala Met Val Gly Ile Asn
290 295 300
Leu Ser Asp Pro Lys Val Glu Arg Phe Ala Ala Arg Ser Glu
305 310 315
<210> 289
<211> 1757
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 289
ggcttgtagt ctccagccac acaaccgtaa aggtccacac ctcttctcgc aaccacttga 60
gccactcgca agtctcaagc caaaatcata tcacagtcgc catggaactc tcctcaacct 120
cagcttctct cctgctcatc ctcctgctca ccctcgtcta cttcctctac ctgcaccagg 180
atcccaagaa gaagcctcgc acccatggac tcaagtccta ccccgtggtc ggcacgctgc 240
cgcatttcat caataacaag gaccgtttcc ttgagtggtc gaccggcgtc atgaagcgca 300
gccccacgca caccatgtcg ttcaaggagc tcggactcac cggcggcgtc atcaccgcca 360
acccggccaa cgtcgagcac attctcaagg ctaactttgg taactacccc aagggcgagc 420
ttgccgtgtc cttgctcgag gattttcttg gccacggcat cttcaattcc gacggcgaac 480
agtggctatg gcagcggaag gccgccagtt acgagttcaa caagcgctcg ctgaggaact 540
tcgtggtgga caccgtccgg ttcgaggtcg tcgagaggct gctgccgctg ctcgagtatg 600
cggggcgcca cggacggacg ctggacgtgc aagacgtgct tgagcgcttc gcgttcgaca 660
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cgccccagag cgcggagttc gtgcgcgcgt tcaacgacgc gcagaacgcc atcttggacc 780
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agcgcaggga gagaagggag gcccggctgg agcgccgcga cgacttcctg tcgcgcttcg 960
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ccggccgcga cacgacgtct tcggcgctga cctggttctt ctggctactc tccggccggc 1080
ccgacgtgga agacaagatc gtgcgcgaga tccgcgcggt gagacagtcg tcggccggca 1140
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acgcggccat caccgagtcc atgcgtctgt atccgccggt acccttcgac acgcacagct 1260
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tgctccggtt ttttacc 1757
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<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 290
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Arg Thr His Gly Leu Lys Ser Tyr Pro Val Val Gly Thr Leu Pro His
35 40 45
Phe Ile Asn Asn Lys Asp Arg Phe Leu Glu Trp Ser Thr Gly Val Met
50 55 60
Lys Arg Ser Pro Thr His Thr Met Ser Phe Lys Glu Leu Gly Leu Thr
65 70 75 80
Gly Gly Val Ile Thr Ala Asn Pro Ala Asn Val Glu His Ile Leu Lys
85 90 95
Ala Asn Phe Gly Asn Tyr Pro Lys Gly Glu Leu Ala Val Ser Leu Leu
100 105 110
Glu Asp Phe Leu Gly His Gly Ile Phe Asn Ser Asp Gly Glu Gln Trp
115 120 125
Leu Trp Gln Arg Lys Ala Ala Ser Tyr Glu Phe Asn Lys Arg Ser Leu
130 135 140
Arg Asn Phe Val Val Asp Thr Val Arg Phe Glu Val Val Glu Arg Leu
145 150 155 160
Leu Pro Leu Leu Glu Tyr Ala Gly Arg His Gly Arg Thr Leu Asp Val
165 170 175
Gln Asp Val Leu Glu Arg Phe Ala Phe Asp Asn Ile Cys Arg Val Ala
180 185 190
Phe Asp Glu Asp Pro Ala Cys Leu Thr Glu Glu Ser Met Ala Ala Pro
195 200 205
Gln Ser Ala Glu Phe Val Arg Ala Phe Asn Asp Ala Gln Asn Ala Ile
210 215 220
Leu Asp Arg Phe Asn Ser Pro Ala Lys Ser Leu Trp Arg Ile Lys Lys
225 230 235 240
Leu Phe Asn Met Glu Pro Glu Arg Arg Met Arg Asp Ser Leu Ala Thr
245 250 255
Ile His Gly Tyr Ala Glu Arg Ile Val Arg Glu Arg Arg Glu Arg Arg
260 265 270
Glu Ala Arg Leu Glu Arg Arg Asp Asp Phe Leu Ser Arg Phe Ala Ala
275 280 285
Ser Gly Glu His Ser Asp Glu Ser Leu Arg Asp Val Val Thr Asn Phe
290 295 300
Ile Leu Ala Gly Arg Asp Thr Thr Ser Ser Ala Leu Thr Trp Phe Phe
305 310 315 320
Trp Leu Leu Ser Gly Arg Pro Asp Val Glu Asp Lys Ile Val Arg Glu
325 330 335
Ile Arg Ala Val Arg Gln Ser Ser Ala Gly Ser Glu Gly Thr Arg Gly
340 345 350
Ala Thr Phe Ser Leu Asp Glu Leu Arg Asp Met Gln Tyr Leu His Ala
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Ala Ile Thr Glu Ser Met Arg Leu Tyr Pro Pro Val Pro Phe Asp Thr
370 375 380
His Ser Cys Lys Glu Glu Glu Phe Leu Pro Asp Gly Thr Phe Ala Gly
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Lys Gly Trp Leu Val Thr Tyr Cys Ala Tyr Ala Met Gly Arg Val Glu
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Asp Ile Trp Gly Ala Asp Cys Glu Glu Phe Arg Pro Glu Arg Trp Leu
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Asp Glu Ala Gly Ala Phe Arg Pro Glu Ser Thr Phe Lys Tyr Pro Val
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Phe His Ala Gly Pro Arg Met Cys Leu Gly Lys Glu Met Ala Tyr Ile
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Gln Met Lys Ser Ile Val Ala Cys Val Leu Glu Gln Phe Ser Leu Arg
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Tyr Ala Gly Asp Ala Lys Gly His Pro Gly Leu Val Val Ala Leu Thr
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Leu Arg Met Glu Gly Gly Leu Pro Met Lys Val Thr Ile Arg Glu
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<212> DNA
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<220>
<221> misc_feature
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<223> n is a, c, g, or t
<400> 291
tcttctcatc atctatatca cgatcgatca caaagaggtt aacagtaaca catggggttc 60
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<212> PRT
<213> Oryza sativa
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Met Gly Phe Gly Ser Arg Glu Met Ala Cys Ala Leu Val Ala Leu Val
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Leu Gly Leu Cys Cys Val Gly Gly Ala Arg Ala Thr Gly Arg Ile Asp
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Glu Gly Leu Glu Val Met Trp Gly Asp Gly Arg Gly Ser Val Ser Pro
35 40 45
Asp Gly Gln Val Met Ala Leu Ser Leu Asp His Thr Ser Gly Ser Gly
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Trp Arg Ser Lys Asn Thr Tyr Leu Phe Ala Arg Val Asp Leu Gln Ile
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Lys Leu Val Ala Asn Asn Ser Ala Gly Thr Val Thr Thr Cys Tyr Phe
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Met Ser Glu Gly Glu Trp Asp Ile His Asp Glu Val Asp Leu Glu Phe
100 105 110
Leu Gly Asn Val Thr Gly Gln Pro Tyr Thr Leu His Thr Asn Val Phe
115 120 125
Ala Asn Gly Thr Gly Gly Lys Glu Gln Gln Phe His Leu Trp Phe Asp
130 135 140
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Ile Leu Val Leu Val Asp Gly Thr Pro Ile Arg Glu Met Lys Asn His
165 170 175
Ala Asp Lys Gly Ile Ala Tyr Pro Ser Ser Gln Arg Met Arg Leu Tyr
180 185 190
Gly Ser Leu Trp Asn Ala Asp Asp Trp Ala Thr Gln Gly Gly Arg Val
195 200 205
Lys Thr Asp Trp Ser Gln Ala Pro Phe Val Ala Arg Tyr Arg Asn Phe
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Thr Ala Thr Glu Ala Ala Ser Ser Ser Ser Pro Ala Gly Tyr Asp Gln
225 230 235 240
Gln Met Asp Ala Thr Ala Gln Gln Ala Met Lys Trp Ala Arg Asp Lys
245 250 255
Tyr Met Val Tyr Asp Tyr Cys Ala Asp Ser Lys Arg Phe Pro Gln Gly
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Phe Pro Pro Glu Cys Ser Met Pro
275 280
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 293
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<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 294
Met Ala Arg Lys Asn Leu Leu Leu Leu Gly Val Phe Leu Ser Ala Leu
1 5 10 15
Leu Phe Phe Phe Leu Asp Val Ala His Ala Arg Glu Leu Ala Glu Ala
20 25 30
Ser Glu Ser Glu Gly Lys Asn Val Lys Pro Thr Gly Arg Ser Gly Val
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Gly Gly Tyr Gly Gly Gly Gly Tyr Gly His Pro Gly Tyr Gly Gly Gly
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Tyr Gly Gly Gly Tyr Gly His Pro Gly Tyr Gly Gly Gly Tyr Gly Gly
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Gly Tyr Gly Gln Gly Tyr Gly Cys Gly Tyr Gly His Pro Gly His Ser
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Gly Gly Tyr Gly Gly Gly Tyr Gly Gly Gly Tyr Gly Gly Gly Tyr Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Tyr Gly Gly Gly Gly Gly Tyr Gly Gly Gly His Gly
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Gly Gly Trp Pro
145
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 295
atgcctacac agtacacaca gtgcgtttcc attttgttct ttcttccaac actttgggag 60
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<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 296
Met Ala Met Met Glu Arg Ile Glu Val Thr Lys Leu His His His Leu
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Leu Leu Leu Val Leu Leu Leu Val Val Ala Ala Ala Gly Gly Gly Ser
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Val Gln Ala Ala Glu Glu Asp Glu Met Ser Gly Arg Arg Arg Arg Ser
35 40 45
Arg Arg Arg Arg Ala Ala Asp Val Met Val Pro Ile Thr Ile Leu Asn
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Ser Ala Val Asp Lys Gly Ala Val Cys Met Asp Gly Thr Pro Pro Ala
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Tyr His Leu Asp Pro Gly Ser Gly Gly Gly Asn Arg Ser Trp Val Val
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Asn Leu Glu Gly Gly Gly Trp Cys Asn Asn Ala Arg Thr Arg Arg Phe
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Arg Thr Ala Ser Arg His Gly Ser Ser Asp His Met Glu Arg Arg Ile
115 120 125
Ala Phe Thr Gly Ile Met Ser Ser Ala Ala Ala Asp Asn Pro Asp Phe
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His Ser Trp Asn Arg Val Lys Ile Arg Tyr Cys Asp Ser Gly Ser Phe
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Ala Gly Asp Ala Phe Asn Glu Gly Leu Lys Leu Gln Phe Arg Gly Gln
165 170 175
Arg Ile Trp Gly Ala Val Ile Gln His Leu Leu Asp Val Gly Met Ala
180 185 190
Ser Ala Glu His Val Leu Leu Thr Gly Cys Ser Ala Gly Gly Leu Ala
195 200 205
Ala Ile Leu His Cys Asp Gln Leu Arg Ala Leu Leu Pro Ala Ala Ala
210 215 220
Thr Val Lys Cys Leu Ser Asp Gly Gly Leu Phe Leu Asp Ala Val Asp
225 230 235 240
Val Ala Gly Gly Arg Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Gly Asp Val Val Gly
245 250 255
Leu Gln Ala Val Ala Pro Asn Leu Pro Glu Thr Cys Thr Asp His Leu
260 265 270
Asp Ala Thr Ser Cys Phe Phe Pro Gln Asn Ile Ile Asp Gly Ile Lys
275 280 285
Thr Pro Ile Phe Leu Leu Asn Ala Ala Tyr Asp Val Trp Gln Ile Glu
290 295 300
Gln Ser Leu Ala Pro Asn Ala Ala Asp Thr Ser Gly Thr Trp Arg Val
305 310 315 320
Cys Lys Phe Asn Arg Ala Ala Cys Asn Ala Ser Gln Leu Gln Phe Leu
325 330 335
Gln Gly Phe Arg Asp Gln Met Val Ala Ala Val Arg Val Phe Ser Glu
340 345 350
Ser Arg Ser Asn Gly Leu Phe Ile Asn Ser Cys Phe Ala His Cys Gln
355 360 365
Ser Glu Leu Thr Ala Thr Trp Asn Gly Gly Ser Pro Ala Leu Gln Asn
370 375 380
Lys Gly Ile Ala Lys Ser Val Gly Asp Trp Tyr Phe Gly Arg Ala Glu
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Ile Ile
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<213> Oryza sativa
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130 135 140
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210
<210> 299
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 299
cacagctcct cttggtcgcc ctcgtggcag ctctgctcct ggcgggccca cacaccacca 60
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gatcgactat acgtacctga gagctagaga tcagtttttg taccatatgc atatgtactt 600
ctgcatgtac atggagtact acttgtacta cgtgcgtgta cgttgtggat tatacataga 660
tatatagctc tttttcgtaa aaaaaaaaaa aa 692
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<211> 110
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 300
Leu Val Ala Leu Val Ala Ala Leu Leu Leu Ala Gly Pro His Thr Thr
1 5 10 15
Met Ala Ala Ile Ser Cys Gly Gln Val Asn Ser Ala Val Ser Pro Cys
20 25 30
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 301
gacacacaaa acgcagaagc agctagcttc actgatccac attactacca gcttcttctt 60
ccaatcttct tctccgacga gcagctagcc agctagcggc gccggccggc aatggcggac 120
gaggtggtgc tcctggactt gtgggtgagc ccgttcgggc agcgttgccg gatcgcgctt 180
gcggagaagg gcgtggagta cgagtacagc gagcagagcc tcgccgacaa gagcgacctc 240
ctcctccgct ccaaccccgt ccacaagaag gtccccgtcc tcctccacgc cggccgcccc 300
gtctgcgagt ccctcgtcat cctcgagtac atcgacgaga catggccgcc ggagccggag 360
aagaagaagg agtcgccgcg tctcctcccc agcgacccct acgcccgcgc gcgtgccagg 420
ttctgggcgg actacgtcga caagaagctg ttcgactgcc agacacgcct ctggaagctc 480
agggccggcg acgccgcgca cgagcaggcc aagagggaca tggcggaggc gctggggacg 540
ctggaggcgg agctcgggga gggggactac ttcggcggcg aggcgttcgg ctacctcgac 600
gtcgtgctcg tgccgttcgt ggcgtggttc cacgcctacg agaggctcgc gggattcgcc 660
gtggcggaga tctgcccgcg gctggtggcg tggggggaac gatgcaaggg gagggacagc 720
gtcgccaaga cgcttactga tcctgagaag gtgtacgagt tcgcgctcta cctcaaggcc 780
aagtttggcg ccaagtagag tgagaattcc agatttggtt tggttaacaa tcgcagcgta 840
tgatctatat ctattgttac tgtatttggt tatcgcgttg tgattttgct cctacctatc 900
acctgtatgt atgtgcttga gcttcacgaa taaattagaa agtgcagttg tgt 953
<210> 302
<211> 228
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 302
Met Ala Asp Glu Val Val Leu Leu Asp Leu Trp Val Ser Pro Phe Gly
1 5 10 15
Gln Arg Cys Arg Ile Ala Leu Ala Glu Lys Gly Val Glu Tyr Glu Tyr
20 25 30
Ser Glu Gln Ser Leu Ala Asp Lys Ser Asp Leu Leu Leu Arg Ser Asn
35 40 45
Pro Val His Lys Lys Val Pro Val Leu Leu His Ala Gly Arg Pro Val
50 55 60
Cys Glu Ser Leu Val Ile Leu Glu Tyr Ile Asp Glu Thr Trp Pro Pro
65 70 75 80
Glu Pro Glu Lys Lys Lys Glu Ser Pro Arg Leu Leu Pro Ser Asp Pro
85 90 95
Tyr Ala Arg Ala Arg Ala Arg Phe Trp Ala Asp Tyr Val Asp Lys Lys
100 105 110
Leu Phe Asp Cys Gln Thr Arg Leu Trp Lys Leu Arg Ala Gly Asp Ala
115 120 125
Ala His Glu Gln Ala Lys Arg Asp Met Ala Glu Ala Leu Gly Thr Leu
130 135 140
Glu Ala Glu Leu Gly Glu Gly Asp Tyr Phe Gly Gly Glu Ala Phe Gly
145 150 155 160
Tyr Leu Asp Val Val Leu Val Pro Phe Val Ala Trp Phe His Ala Tyr
165 170 175
Glu Arg Leu Ala Gly Phe Ala Val Ala Glu Ile Cys Pro Arg Leu Val
180 185 190
Ala Trp Gly Glu Arg Cys Lys Gly Arg Asp Ser Val Ala Lys Thr Leu
195 200 205
Thr Asp Pro Glu Lys Val Tyr Glu Phe Ala Leu Tyr Leu Lys Ala Lys
210 215 220
Phe Gly Ala Lys
225
<210> 303
<211> 1853
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 303
gatgcttgtg ctgttgtgca catgcagtag ctgaaatgtg ggcgcgcttc tggtattcca 60
agccggccga gagggcgcgg ccggcggcgt tcgtgccccc gccgccaccg ccgacgccgc 120
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acgtggtcgg ccgcgccaag gctctcctga ccaccggtgg acctgtcacg ccctccgacg 240
acgggcagag agtccgccgt gccttggccc agctcacggc cccgccttcc gacccggcgc 300
ccgcggcacc gcagaaggac tcgagctcgg gcttgagctc tacggcggtg gtctggatca 360
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caatatacaa ccccaacccc tactacaaag gtgaccttcc gccgcagcca ttcgttgcgc 540
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gcggcacgtt ctccgacgcc ggctccgagc gcccgcactc catcgacatc ctcaccgagc 660
tgcccaccgg cggctcgctc tcgtacgacc agctggccgc cgcgacggac gggttctctc 720
ccgacaacgt catcgggcag ggcggcttcg ggtgcgtgta cagggggacg ctgcaggatg 780
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tctgcatctc cggcaacgag aggctgctgg tttacgagtt tgtccccaac aagacgctcg 960
acacgcattt acacgggaac aaggggccac ctctggattg gcagcaaaga tggaaaatcg 1020
ctgtggggtc tgcaaggggt ttggcctatc tacacgatga ctgttctcct aaaattatac 1080
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attttggtct agcaaagtat caaccaggaa accacactca cgtttccaca agaataatgg 1200
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atgtctttgc ttttggtgtc gtcctcttgg aactgataac tggaaggctg ccggttcagt 1320
catctgagtc ttacatggat agcacgttag ttgcttgggc gaaacccttg ctttccgaag 1380
ctacggagga aggcaacttt gatatccttg ttgatccaga tattggagat gattatgatg 1440
aaaacataat gatgcgaatg atcgagtgtg ccgccgctgc cgtgcgccaa tcagcacatc 1500
tgcgtccatc catggttcag atcctgaagc acttgcaagg agaaacgcac ggagaagatc 1560
taaactctat atttaggata acgtacgcag aagatacata cagttccatc atggaatccg 1620
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attacagcag tgaacaagct cttacagaca aagccaaccg aagccccgct aagggcaggt 1740
gaactgaaga tatattgttt aggtagtact atttcttttt tttttttttt tgagattgaa 1800
caaatgttgc tggtcaagag gacatgaatg gaatggttgt gttgtgcatt tag 1853
<210> 304
<211> 568
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 304
Met Trp Ala Arg Phe Trp Tyr Ser Lys Pro Ala Glu Arg Ala Arg Pro
1 5 10 15
Ala Ala Phe Val Pro Pro Pro Pro Pro Pro Thr Pro Pro Gln Tyr Val
20 25 30
Pro Pro Glu Glu Pro Ser Ala Phe Ala Lys Leu Tyr Ala Val Ala Gly
35 40 45
Asp Val Val Gly Arg Ala Lys Ala Leu Leu Thr Thr Gly Gly Pro Val
50 55 60
Thr Pro Ser Asp Asp Gly Gln Arg Val Arg Arg Ala Leu Ala Gln Leu
65 70 75 80
Thr Ala Pro Pro Ser Asp Pro Ala Pro Ala Ala Pro Gln Lys Asp Ser
85 90 95
Ser Ser Gly Leu Ser Ser Thr Ala Val Val Trp Ile Ile Val Ala Ala
100 105 110
Gly Val Val Gly Ala Val Leu Ala Leu Cys Val Leu Thr Leu Trp Ile
115 120 125
Arg Arg Cys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Arg Arg Gln Ala Gln Pro Phe
130 135 140
Pro Leu Pro Pro Pro Ile Tyr Asn Pro Asn Pro Tyr Tyr Lys Gly Asp
145 150 155 160
Leu Pro Pro Gln Pro Phe Val Ala Gln Gln Pro Pro Ser Asp His Tyr
165 170 175
Phe Ile Gln His Gln His Pro Thr Pro Pro Gln Thr Ser Gly Thr Phe
180 185 190
Ser Asp Ala Gly Ser Glu Arg Pro His Ser Ile Asp Ile Leu Thr Glu
195 200 205
Leu Pro Thr Gly Gly Ser Leu Ser Tyr Asp Gln Leu Ala Ala Ala Thr
210 215 220
Asp Gly Phe Ser Pro Asp Asn Val Ile Gly Gln Gly Gly Phe Gly Cys
225 230 235 240
Val Tyr Arg Gly Thr Leu Gln Asp Gly Thr Glu Val Ala Ile Lys Lys
245 250 255
Leu Lys Thr Glu Ser Lys Gln Gly Asp Arg Glu Phe Arg Ala Glu Val
260 265 270
Glu Ile Ile Thr Arg Val His His Arg Asn Leu Val Ser Leu Val Gly
275 280 285
Phe Cys Ile Ser Gly Asn Glu Arg Leu Leu Val Tyr Glu Phe Val Pro
290 295 300
Asn Lys Thr Leu Asp Thr His Leu His Gly Asn Lys Gly Pro Pro Leu
305 310 315 320
Asp Trp Gln Gln Arg Trp Lys Ile Ala Val Gly Ser Ala Arg Gly Leu
325 330 335
Ala Tyr Leu His Asp Asp Cys Ser Pro Lys Ile Ile His Arg Asp Val
340 345 350
Lys Ala Ser Asn Ile Leu Leu Asp His Asp Phe Glu Pro Lys Val Ala
355 360 365
Asp Phe Gly Leu Ala Lys Tyr Gln Pro Gly Asn His Thr His Val Ser
370 375 380
Thr Arg Ile Met Gly Thr Phe Gly Tyr Ile Ala Pro Glu Phe Leu Ser
385 390 395 400
Ser Gly Lys Leu Thr Asp Lys Ala Asp Val Phe Ala Phe Gly Val Val
405 410 415
Leu Leu Glu Leu Ile Thr Gly Arg Leu Pro Val Gln Ser Ser Glu Ser
420 425 430
Tyr Met Asp Ser Thr Leu Val Ala Trp Ala Lys Pro Leu Leu Ser Glu
435 440 445
Ala Thr Glu Glu Gly Asn Phe Asp Ile Leu Val Asp Pro Asp Ile Gly
450 455 460
Asp Asp Tyr Asp Glu Asn Ile Met Met Arg Met Ile Glu Cys Ala Ala
465 470 475 480
Ala Ala Val Arg Gln Ser Ala His Leu Arg Pro Ser Met Val Gln Ile
485 490 495
Leu Lys His Leu Gln Gly Glu Thr His Gly Glu Asp Leu Asn Ser Ile
500 505 510
Phe Arg Ile Thr Tyr Ala Glu Asp Thr Tyr Ser Ser Ile Met Glu Ser
515 520 525
Gly Glu Ser Ile Gly Pro Arg Ser Arg Arg Ala Pro Arg Ser Gln Arg
530 535 540
Asn Thr Ser Ser Asp Tyr Ser Ser Glu Gln Ala Leu Thr Asp Lys Ala
545 550 555 560
Asn Arg Ser Pro Ala Lys Gly Arg
565
<210> 305
<211> 1483
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 305
attttgcacg gtatatatcc cagtctgtgt gtgagtgtgt gtggtctgtg gagtgtatgg 60
ttgatttggt tggtaattgg ctaagctagc tatagcatgg cgttctcgtc ggagggcggc 120
gtgccggcgg agagggtggc ggcggcggtg aacgacctgg tggaggtgcg cgacggattg 180
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cttatccaag gagctactac aggtgcacgc acaagctaga ccaaggctgc ggtgccagga 480
ggcaaaccca gcgctgcgag gccgacccgt cgaattacga catcacctac tacggcgagc 540
acacctgcag ggacccttcc acgattatcc cgacggccat cgccaacgcc gccggcgcgg 600
cgagcgacgg gccaaacaac aacatcatca gcttcgccac aggcggcgtc gttgttgcta 660
attcgtctcg gctggcgagg gaagggacga cggcgacgac gacgagcgcg gccacgcagc 720
tgtcctcctc gtggggcacg agcggcggtg gcggcggcgg cgacgacgtg ttcagctcgt 780
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ccactatacc gacaaggaaa aacccatgta atctgctagg ctc 1483
<210> 306
<211> 90
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 306
Met Ala Phe Ser Ser Glu Gly Gly Val Pro Ala Glu Arg Val Ala Ala
1 5 10 15
Ala Val Asn Asp Leu Val Glu Val Arg Asp Gly Leu Val Arg Leu Arg
20 25 30
Gly Phe Leu Pro Pro Pro Pro Gln Ala Glu Gln Ser Ser Ser Arg Pro
35 40 45
Pro Cys Ala Ala Glu Leu Met Asp Ala Thr Met Ser Lys Leu Met Ser
50 55 60
Ala Met Ala Thr Leu Gly Gly Ser Gly Asp Ile Ala Gly Glu Val Asp
65 70 75 80
Ala Pro Leu Thr Arg Glu Ser Pro Gln His
85 90
<210> 307
<211> 776
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 307
gttccaccgc tagaaatcgc aacgcacgca gctaggaaat ctgcagcgag cgagcgagct 60
catcttgatc gcattgcatc tgcactgcaa acgatcgaat cgaatcgaat cggccgaggc 120
atttcacgct gaacacgatg acgaaggtga gggaaactgt tcgattagtt gcttcgcatg 180
catgcagctt aattagtttt gatgatccac tgatgaatca gtttcttatt gggggcgtgg 240
ttgaataatg cagcaaaaga tcgtgatcaa ggtgagcatg ccgtgcgaga agagccggtc 300
caaggccatg gcgctggtgg cgagggcgtc cggcgtgaac tcgatggagg tcaccggcga 360
cggcaaggac cggctgcagg tggtcggcga cggcgtcgac ccggtctgcc tcgtcgcctg 420
cctccgcagg aagatcggct acgccgagat cgttcaggtg gaggaggtga aggacaagaa 480
gccggaggag aagcagccgg agccacccaa gcccgtgcca tgctactacc cagctcctcc 540
ctgctactac ccgccggcga cggtggtctg cagcgacgag ccgagcccct gctccatcat 600
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agtagtacag tacatcgatc gagtgaacga aatatatcat ttgctgtttc ctcacttaat 720
tggaaatgaa aactacaaca cttggatata tcatttgctg tttcctcgct tgctgt 776
<210> 308
<211> 118
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 308
Met Gln Gln Lys Ile Val Ile Lys Val Ser Met Pro Cys Glu Lys Ser
1 5 10 15
Arg Ser Lys Ala Met Ala Leu Val Ala Arg Ala Ser Gly Val Asn Ser
20 25 30
Met Glu Val Thr Gly Asp Gly Lys Asp Arg Leu Gln Val Val Gly Asp
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Gly Val Asp Pro Val Cys Leu Val Ala Cys Leu Arg Arg Lys Ile Gly
50 55 60
Tyr Ala Glu Ile Val Gln Val Glu Glu Val Lys Asp Lys Lys Pro Glu
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Glu Lys Gln Pro Glu Pro Pro Lys Pro Val Pro Cys Tyr Tyr Pro Ala
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Pro Pro Cys Tyr Tyr Pro Pro Ala Thr Val Val Cys Ser Asp Glu Pro
100 105 110
Ser Pro Cys Ser Ile Met
115
<210> 309
<211> 569
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 309
Ala Thr Cys Cys Ala Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala Cys Ala Cys Ala
1 5 10 15
Cys Ala Gly Thr Thr Ala Gly Cys Ala Thr Ala Thr Cys Ala Gly Thr
20 25 30
Ala Gly Thr Cys Gly Thr Thr Cys Ala Cys Ala Gly Thr Thr Ala Gly
35 40 45
Cys Ala Thr Ala Thr Cys Ala Gly Thr Gly Cys Ala Thr Cys Ala Thr
50 55 60
Ala Ala Ala Cys Thr Thr Gly Ala Cys Cys Thr Thr Gly Gly Cys Thr
65 70 75 80
Cys Gly Ala Thr Cys Gly Thr Ala Cys Ala Ala Thr Cys Cys Ala Thr
85 90 95
Cys Ala Cys Ala Ala Cys Thr Ala Ala Ala Gly Ala Thr Ala Gly Thr
100 105 110
Gly Gly Ala Ala Ala Thr Gly Gly Gly Gly Cys Ala Cys Cys Ala Cys
115 120 125
Cys Ala Cys Ala Ala Gly Ala Ala Cys Gly Ala Cys Gly Ala Cys Ala
130 135 140
Ala Gly Gly Cys Cys Gly Cys Gly Gly Cys Gly Gly Cys Gly Gly Cys
145 150 155 160
Cys Gly Gly Cys Gly Gly Cys Gly Ala Cys Cys Ala Cys Cys Gly Cys
165 170 175
Ala Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Gly Cys Ala Cys Cys
180 185 190
Ala Cys Ala Ala Gly Cys Ala Cys Ala Thr Gly Gly Ala Gly Cys Ala
195 200 205
Gly Cys Thr Thr Gly Cys Cys Ala Ala Gly Cys Thr Cys Gly Gly Cys
210 215 220
Gly Cys Cys Gly Thr Cys Gly Cys Cys Gly Cys Cys Gly Gly Ala Gly
225 230 235 240
Cys Ala Thr Ala Cys Gly Cys Cys Ala Thr Gly Cys Ala Cys Gly Ala
245 250 255
Gly Ala Ala Gly Cys Ala Cys Ala Ala Gly Gly Cys Gly Ala Ala Gly
260 265 270
Ala Ala Gly Gly Ala Ala Cys Cys Gly Gly Ala Gly Ala Ala Thr Gly
275 280 285
Cys Gly Cys Gly Gly Thr Cys Gly Cys Ala Cys Ala Gly Gly Gly Thr
290 295 300
Gly Ala Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Ala Thr Cys Gly Cys Cys
305 310 315 320
Gly Cys Cys Ala Cys Cys Ala Thr Cys Gly Cys Cys Gly Cys Cys Gly
325 330 335
Gly Cys Ala Gly Cys Gly Thr Cys Gly Gly Cys Cys Thr Cys Gly Cys
340 345 350
Cys Ala Thr Cys Cys Ala Cys Gly Ala Gly Cys Ala Thr Cys Ala Cys
355 360 365
Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Gly Ala Ala Gly Cys Thr Ala
370 375 380
Ala Gly Ala Ala Gly Cys Ala Thr Gly Gly Cys Cys Ala Thr Cys Ala
385 390 395 400
Cys Cys Ala Thr Thr Ala Gly Cys Thr Ala Cys Cys Thr Ala Cys Cys
405 410 415
Cys Thr Ala Thr Cys Ala Cys Thr Ala Cys Thr Thr Ala Cys Thr Gly
420 425 430
Gly Ala Cys Thr Ala Gly Thr Gly Thr Gly Thr Cys Thr Ala Thr Thr
435 440 445
Thr Ala Thr Thr Thr Gly Ala Thr Thr Ala Thr Thr Ala Cys Cys Ala
450 455 460
Thr Gly Cys Ala Thr Gly Thr Ala Cys Thr Cys Thr Thr Ala Gly Cys
465 470 475 480
Thr Ala Gly Cys Ala Thr Ala Thr Cys Gly Gly Cys Thr Gly Thr Ala
485 490 495
Thr Thr Thr Thr Thr Gly Thr Cys Gly Ala Cys Gly Gly Ala Thr Ala
500 505 510
Cys Ala Thr Gly Thr Ala Cys Ala Thr Cys Ala Thr Cys Thr Ala Thr
515 520 525
Cys Thr Ala Thr Thr Thr Thr Thr Cys Thr Thr Ala Ala Thr Ala Ala
530 535 540
Thr Ala Ala Thr Gly Thr Gly Ala Thr Thr Gly Ala Thr Thr Gly Thr
545 550 555 560
Gly Thr Thr Ala Cys Ala Gly Thr Thr
565
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<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 310
Met Gly His His His Lys Asn Asp Asp Lys Ala Ala Ala Ala Ala Gly
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Gly Asp His Arg Lys Glu Glu Lys His His Lys His Met Glu Gln Leu
20 25 30
Ala Lys Leu Gly Ala Val Ala Ala Gly Ala Tyr Ala Met His Glu Lys
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His Lys Ala Lys Lys Glu Pro Glu Asn Ala Arg Ser His Arg Val Lys
50 55 60
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His Glu His His Lys Lys Lys Glu Ala Lys Lys His Gly His His His
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<210> 311
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 311
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taattaggga agatgatagg atggggagat gtgtacaagg tggtgggggc aatggcgccg 180
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atgtccagga ctggcacggg gatgtccatg ttcagcatgg ggttgttcat ggggcagcag 960
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gccggtccgc tcgccacgct cgtcggcgcc gccgccctcg gcctccgcgg cgacgtcctg 1080
cacctcgcca tcatacaggc cgcactgcct caatcgattg cttccttcgt tttcgcaaag 1140
gagtatgggc ttcatgccga tgtactcagc acggcggtta tattcggaac attgatctct 1200
ctgccgattc tgattgcata ttacgcggtt ctgggctttg tctaacatgc atttacagca 1260
cggcatgctt acttatatta gatttgcttc ggtccaacaa aaattatctc gagataccga 1320
tacctcacgg taccgataac tcatctgctc agctagatcc aacgatcgaa aataatttgg 1380
taccgtgagg taccggtatt tcgagatact ttttgttgga cgataacaaa cctctaatta 1440
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ttgctacct 1629
<210> 312
<211> 415
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 312
Met Gly Arg Cys Val Gln Gly Gly Gly Gly Asn Gly Ala Ala Val Leu
1 5 10 15
Arg Ala Gly Ala Arg Val Arg Val Gly Glu Val Val Glu Val Leu His
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Gly Gly Ala Val Arg Arg His Gln His His Gly Gly Leu Leu Leu His
35 40 45
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100 105 110
Ala Gln Gln His Ala Arg Arg Arg Arg Ala Ala Ala Arg Arg His Val
115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
Leu Gly Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Ala Gly Gly Asp Val Val
165 170 175
Val Val Ala Ala Gly Glu Ala Glu Arg Arg Arg Asp Glu Arg Arg Arg
180 185 190
Arg Arg Gly Ala Gly Arg Arg Arg Arg Arg Pro Ala Thr Val Leu Gly
195 200 205
Asp Gly Glu Asp Gly Gly Ala Glu Ala Gly Glu Glu Pro Glu Arg Val
210 215 220
Arg Gln Arg Ser Arg Arg Arg Val Gly Val His Arg Val Gln Val Ala
225 230 235 240
Pro Glu Leu Ala Gly Asp Arg Asp Gly Val Ala Ala Gly Asp Val Gln
245 250 255
Asp Trp His Gly Asp Val His Val Gln His Gly Val Val His Gly Ala
260 265 270
Ala Gly Glu Gly Asp Ser Val Arg Gly Gly Ala Asp Gly Ala Gly Asp
275 280 285
Gly Ala Ala Val Arg Arg Arg Ser Ala Arg His Ala Arg Arg Arg Arg
290 295 300
Arg Pro Arg Pro Pro Arg Arg Arg Pro Ala Pro Arg His His Thr Gly
305 310 315 320
Arg Thr Ala Ser Ile Asp Cys Phe Leu Arg Phe Arg Lys Gly Val Trp
325 330 335
Ala Ser Cys Arg Cys Thr Gln His Gly Gly Tyr Ile Arg Asn Ile Asp
340 345 350
Leu Ser Ala Asp Ser Asp Cys Ile Leu Arg Gly Ser Gly Leu Cys Leu
355 360 365
Thr Cys Ile Tyr Ser Thr Ala Cys Leu Leu Ile Leu Asp Leu Leu Arg
370 375 380
Ser Asn Lys Asn Tyr Leu Glu Ile Pro Ile Pro His Gly Thr Asp Asn
385 390 395 400
Ser Ser Ala Gln Leu Asp Pro Thr Ile Glu Asn Asn Leu Val Pro
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<210> 313
<211> 2380
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 313
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atctatagtc tacagctaca agcacggatt ctctggattc gctgcaatgc tcaccgaatc 300
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taaagcacac acgacccgga gctgggattt tcttggactt aattactatg aacaatcaaa 420
tctcctgaag aaggcaaact atggtgaaga tgtcattgtt ggcgtcatcg attcagggat 480
atggcctaca tcacgaagct ttgatgtaac ggctatggcc ctgtgccagc acgatggaag 540
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<211> 310
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 314
Met Ala Trp Lys Thr Ser Ala Thr Cys Ile Cys Arg Leu Val Asp Tyr
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Val Val Lys Ile Ser Arg Val Val Ser Val Val Gly Asn Gly Val Leu
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Ala Pro Arg Ile Ala Met Phe Ser Ser Arg Gly Pro Ser Asn Glu Phe
50 55 60
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Ala Ala Val Gly Asp Ser Tyr Lys Phe Met Ser Gly Thr Ser Met Ala
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Val Thr Asp Arg Phe Gly Met Pro Ile Gln Ala Glu Gly Ala Pro Arg
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Lys Ile Ala Asp Pro Phe Asp Phe Gly Gly Gly Gln Ile Asp Pro Asp
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Lys Ser Ile Asp Pro Gly Leu Val Tyr Asp Ile Asp Pro Lys Glu Tyr
165 170 175
Thr Lys Phe Phe Asn Cys Thr Leu Thr Leu Gly Pro Lys Asp Asp Cys
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Glu Ser Tyr Val Gly Gln Leu Tyr Gln Leu Asn Leu Pro Ser Ile Val
195 200 205
Val Pro Asp Leu Lys Asp Ser Val Thr Val Trp Arg Thr Val Thr Asn
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Val Gly Gly Glu Glu Gly Thr Tyr Lys Ala Ser Ile Glu Ala Pro Ala
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Gly Val Arg Ile Ser Val Glu Pro Ser Ile Ile Thr Phe Thr Lys Gly
245 250 255
Gly Ser Arg Asn Ala Thr Phe Lys Val Thr Phe Thr Ala Arg Gln Arg
260 265 270
Val Gln Ser Gly Tyr Thr Phe Gly Ser Leu Thr Trp Leu Asp Gly Val
275 280 285
Thr His Ser Val Arg Ile Pro Ile Val Val Arg Thr Ile Ile Gln Asp
290 295 300
Phe Val Ser Asp Thr Ser
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 315
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<211> 491
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 316
Met Ala Ile Lys Asp Glu Gln Gln Pro Leu His Ile Leu Phe Phe Pro
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Phe Leu Ala Pro Gly His Leu Ile Pro Ile Ala Asp Met Ala Ala Leu
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Phe Ala Ala Arg Gly Val Arg Cys Thr Ile Leu Thr Thr Pro Val Asn
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Asp Val Gly Leu Pro Pro Gly Phe Glu Ser Gly Thr Ala Leu Thr Thr
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Gln Asp Asp Arg Asp Lys Phe Phe Leu Gly Ile Arg Leu Leu His Glu
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Pro Phe Asp Arg Tyr Leu Ser Glu His His Val Asp Ala Ala Val Val
115 120 125
Asp Ser Phe Phe Arg Trp Ala Ala Asp Ala Ala Ala Glu His Gly Val
130 135 140
Pro Arg Leu Gly Phe Leu Gly Thr Ser Val Phe Ala Arg Ala Cys Thr
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Asn Ser Met Leu Arg Asn Asn Pro Leu Glu Thr Ala Pro Asp Asp Pro
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Asp Ala Val Val Pro Leu Pro Gly Leu Pro His Cys Val Glu Leu Arg
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Arg Ser Gln Met Met Asp Pro Lys Lys Arg Pro Asp His Trp Glu Lys
195 200 205
Phe Gln Ser Leu Asp Ala Ala Asp Gln Arg Ser Phe Gly Glu Val Phe
210 215 220
Asn Ser Phe His Glu Leu Glu Pro Asp Tyr Val Glu His Tyr Arg Thr
225 230 235 240
Thr Leu Gly Arg Arg Val Trp Leu Val Gly Pro Val Ala Leu Ala Asn
245 250 255
Lys Asp Val Ala Val Arg Gly Thr Ser Glu Leu Ser Pro Asp Ala Asp
260 265 270
Gly Tyr Leu Arg Trp Leu Asp Ala Lys Pro Arg Gly Ser Val Val Tyr
275 280 285
Val Ser Phe Gly Thr Leu Ser Ser Phe Ser Pro Ala Glu Met Arg Glu
290 295 300
Leu Ala Arg Gly Leu Asp Leu Ser Gly Lys Asn Phe Val Trp Val Ile
305 310 315 320
Asn Gly Ala Asp Ala Asp Ala Ser Glu Trp Met Pro Glu Gly Phe Ala
325 330 335
Glu Leu Ile Ala Pro Arg Gly Glu Arg Gly Leu Thr Ile Arg Gly Trp
340 345 350
Ala Pro Gln Met Leu Ile Leu Asn His Pro Ala Val Gly Gly Phe Val
355 360 365
Thr His Cys Gly Trp Asn Ser Thr Leu Glu Ala Val Thr Ala Gly Val
370 375 380
Pro Met Val Thr Trp Pro Arg Tyr Ala Asp Gln Phe Tyr Asn Glu Lys
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Leu Ile Thr Glu Val Leu Glu Val Gly Val Gly Val Gly Ser Met Asp
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Phe Ala Ser Lys Leu Glu Asn Arg Arg Val Ile Ile Gly Gly Glu Val
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Val Ala Gly Ala Ile Gly Arg Val Met Gly Asp Gly Glu Glu Gly Glu
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Ala Ile Arg Lys Lys Ala Thr Glu Leu Gly Val Lys Ala Arg Gly Ala
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
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420 425 430
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435 440 445
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835 840 845
Leu Ala Leu Ser Asn Cys Arg Gln Leu Lys Pro Ala Pro Glu Leu Phe
850 855 860
Glu Leu Leu Val His Leu Gln Ser Phe Ser Leu Cys Gly Cys Ser Trp
865 870 875 880
Asp Thr Leu Pro Asp Asn Met Glu Gln Leu Met Ser Leu Gln Asn Leu
885 890 895
Met Ile Tyr Leu Cys Thr Asn Leu Leu Ser Leu Pro Thr Leu Pro Arg
900 905 910
Ser Leu Ala His Leu Val Ile Gly Asn Cys Asp Pro Trp Phe Thr Arg
915 920 925
Ser Cys Gln Thr Ile Ala His Glu Asn Trp Gln Lys Val Gln His Ile
930 935 940
Pro Asn Lys Glu Ile Phe Cys Asp Gly Ala Leu Phe Ala Ile Leu Arg
945 950 955 960
Gln Arg Asn His
<210> 319
<211> 3051
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 319
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accacagcta caacctacag cttacagtgt ccgcaaaatt gtaacattgt gtccttccat 120
cggcaacaat ggcggcctcg gtggagtaca agctggctcc gcacccgtgg gcgagcaatg 180
ctccgtcgag caacctcgac ttgttcccgt ccggcggcgg caagcgccgt tcgggctccg 240
agaccgactc cgacgacgag gacagcatac caccggactg gaggtcgctg taccacccgc 300
ggctggaggt ggcggagccg gccgtcaagg acccccgcga cgaggccacc tccgacgcgt 360
gggtgcgtcg ccacccggcg ctcgtccggc tcaccggcaa gcacccgttc aactccgagc 420
cgccgctgcc gcgcctcatg tcgcacggct tcatcacgcc ggcgccgctc cactacgtgc 480
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tcgtcaagcg ccccgcgagg ctcaacatgg agcagctcgt gaccgggttc gaggccgtgg 600
agctccccgt cacgctggtg tgcgcgggca accggcgcaa ggagcagaac atggtgcgcc 660
agaccgtggg cttcaactgg ggccccggcg ccatctccac ctccgtgtgg cgcggcgtgc 720
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actaccatta ccgcgacaac cgcgtcctcc cgtctcacgt cgacgccgag ctcgccaatg 1080
ccgaagcttg gtggtacaag ccggagtaca tgataaacga gctgaacata aactcggtga 1140
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acaagaagag cctgtcctac aacgtgcgcc tgttccggtt cgcgctgccg tcgccggacc 2100
agaagctcgg gctaccggtc ggcaagcacg tgtacgtgtg cgcgtcgatc ggcggcaagc 2160
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<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 320
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Asn Ala Pro Ser Ser Asn Leu Asp Leu Phe Pro Ser Gly Gly Gly Lys
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Arg Arg Ser Gly Ser Glu Thr Asp Ser Asp Asp Glu Asp Ser Ile Pro
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Pro Asp Trp Arg Ser Leu Tyr His Pro Arg Leu Glu Val Ala Glu Pro
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Ala Val Lys Asp Pro Arg Asp Glu Ala Thr Ser Asp Ala Trp Val Arg
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Arg His Pro Ala Leu Val Arg Leu Thr Gly Lys His Pro Phe Asn Ser
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Glu Pro Pro Leu Pro Arg Leu Met Ser His Gly Phe Ile Thr Pro Ala
100 105 110
Pro Leu His Tyr Val Arg Asn His Gly Ala Val Pro Lys Ala Asp Trp
115 120 125
Ser Thr Trp Ala Val Glu Val Thr Gly Leu Val Lys Arg Pro Ala Arg
130 135 140
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Val Thr Leu Val Cys Ala Gly Asn Arg Arg Lys Glu Gln Asn Met Val
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Arg Gln Thr Val Gly Phe Asn Trp Gly Pro Gly Ala Ile Ser Thr Ser
180 185 190
Val Trp Arg Gly Val Arg Leu Arg Asp Val Leu Arg Trp Cys Gly Val
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Met Gly Ala Ser Ala Gly Ala Ala Asn Val Cys Phe Glu Gly Ala Glu
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Glu Val Ala Met Asp Pro Ala His Asp Val Ile Leu Ala Tyr Met Gln
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Val Pro Gly Phe Ile Gly Gly Arg Met Val Lys Trp Leu Lys Arg Ile
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Ile Val Ala Ser Ser Glu Ser Glu Ser Tyr Tyr His Tyr Arg Asp Asn
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Trp Trp Tyr Lys Pro Glu Tyr Met Ile Asn Glu Leu Asn Ile Asn Ser
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Asn Thr Gln Pro Glu Lys Leu Ile Trp Asn Leu Met Gly Met Met Asn
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Asn Cys Trp Phe Arg Val Lys Thr Lys Thr Cys Arg Pro His Lys Gly
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Gly Gly Trp Met Ala Arg Gln Lys His Leu Glu Thr Ser Glu Ser Ala
485 490 495
Val Ser Thr Leu Lys Arg Ser Thr Ser Thr Pro Phe Leu Asn Thr Ala
500 505 510
Thr Thr Gln Tyr Thr Met Ser Glu Val Arg Arg His Thr Thr Pro Glu
515 520 525
Ser Ala Trp Ile Ile Val His Gly His Val Tyr Asp Cys Thr Gly Phe
530 535 540
Leu Lys Asp His Pro Gly Gly Ala Asp Ser Ile Met Ile Asn Ala Gly
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Thr Asp Cys Thr Glu Glu Phe Asp Ala Ile His Ser Asp Lys Ala Arg
565 570 575
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580 585 590
Asp Tyr Ser Pro Gln Ser Ser Ser Ala Asp Leu Thr Ser Ile Val Glu
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Asp Gln Lys Leu Gly Leu Pro Val Gly Lys His Val Tyr Val Cys Ala
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Ser Ile Gly Gly Lys Leu Cys Met Arg Ala Tyr Thr Pro Thr Ser Ser
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Val Asp Glu Val Gly Tyr Ile Glu Leu Leu Ile Lys Ile Tyr Phe Lys
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Asp Tyr Leu Pro Leu Gly Ala Thr Ile Asp Ile Lys Gly Pro Ile Gly
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His Ile Glu Tyr Ala Gly Arg Gly Ala Phe Thr Val Asn Gly Glu Arg
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Arg Phe Ala Arg Arg Leu Ala Met Val Ala Gly Gly Thr Gly Ile Thr
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Pro Val Tyr Gln Val Ile Gln Ala Val Leu Trp Asp Gln Pro Asp Asp
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Gly Thr Glu Met His Val Val Tyr Ala Asn Arg Thr Glu Asp Asp Met
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Leu Leu Arg Glu Glu Ile Asp Arg Trp Ala Ala Ala His Pro Ala Arg
805 810 815
Leu Lys Val Trp Tyr Val Val Ser Lys Val Ala Arg Pro Glu Asp Gly
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Leu Pro Pro Gly Asp Gly Glu Thr Leu Ala Leu Val Cys Gly Pro Pro
850 855 860
Ala Met Val Glu Cys Thr Val Arg Pro Gly Leu Glu Lys Met Gly Tyr
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Asp Leu Asp Lys Ser Cys Leu Val Phe
885
<210> 321
<211> 1215
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 321
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<212> PRT
<213> Oryza sativa
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Met Gln Gln Gly Arg Gly Arg Arg Arg Met Met Gln Gly Ser Ser Tyr
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Tyr Ala Val Leu Gly Val His Pro Gly Ala Ser Ala Ala Glu Ile Arg
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Ala Ala Tyr His Arg Leu Ala Met Lys Trp His Pro Asp Lys Ile Thr
35 40 45
Ser Gly Arg Val Asp Ala Glu Glu Ala Lys Ser Arg Phe Gln Gln Val
50 55 60
His Glu Ala Tyr Gln Val Leu Ser Asp Glu Lys Arg Arg Ala Leu Tyr
65 70 75 80
Asp Ser Gly Met Tyr Asp Pro Leu Asp Asp Asp Gln Glu Glu Asp Val
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Glu Gly Phe His Asp Phe Leu Gln Glu Met Val Ser Leu Met Ala Thr
100 105 110
Val Gly Arg Glu Glu Pro Val Tyr Cys Leu Asp Glu Leu Arg Ser Met
115 120 125
Leu Asp Gly Met Met Gln Asp Phe Ala Ser Ser Glu Leu Pro Ser Pro
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Ser Gly Gly Phe Phe Ala Gly Ala Pro Ser Ser Pro Phe Ala Asp Thr
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Gly Ala Ala Gln Gln Gln Arg Gly Val Gly Ser Ala Ser Ala Arg Ala
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His Ala His Pro Gln Val Val Gly Asn Ser Ala Cys Leu Ser Arg Met
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Ala Phe Ser Ser Tyr
195
<210> 323
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 323
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caagaaaggt ggtgttagtg atctggctga tgagattgct gctgcaggac caaatttctg 1980
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tatatatatt aaaagctatt tcagagtgat gt 2252
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Pro Gln Val Val Glu Asp Arg His Arg Leu Gln Leu Gln Ser Ile Ser
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tatgccaatg gcgtcggcga caaggagatg cagttcaagc cgtggttcaa ccccaccgat 420
ggctaccaca actacaccgt ctcctggacc gcttgcatga ttgtgtggta catcgacggg 480
acacccatcc gagtgttccg caactatgaa aaaagcaacg gtgtggcgtt cccaatgaag 540
cggccgatgt atgggtactc gagcatatgg gcggcggagg attgggcaac acagggtggc 600
cgtgtgaagg ctgactggtc caaggcacct tttgtcgcga actaccatgg cctcaacatc 660
aatgtatgcg agtgctctac tacctctggt ggaggcaaca gttgtgctgc aaaatgtgct 720
tcaacctata atagcaagtc atcagtatgc cagttgagtg attcagagct cgcacggatg 780
cggaaagtgc aggatgagta taggatctac aactattgcg ttgatcccaa gagatacaac 840
ggatctgtac cagtcgagtg tagcctacca caatag 876
<210> 326
<211> 291
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 326
Met Gly Arg Leu Ser Leu Leu Leu Val Val Phe Thr Ala Ala Ala Ala
1 5 10 15
Val Val Gly Leu Ala Gly Ala Ser Phe Arg Asp Glu Cys Asp Ile Pro
20 25 30
Trp Glu Pro Gln Asn Ala Arg Phe Thr Asp Asp Gly Asn Gly Leu Ser
35 40 45
Leu Ser Leu Val Ser Asn Tyr Ser Gly Cys Met Leu Arg Thr Lys Lys
50 55 60
Gln Phe Ile Phe Gly Ser Val Ser Thr Leu Ile Gln Leu Val Pro Gly
65 70 75 80
Asn Ser Ala Gly Thr Val Thr Thr Tyr Tyr Thr Ser Ser Val Gly Asp
85 90 95
Asn His Asp Glu Ile Asp Phe Glu Phe Leu Gly Asn Glu Thr Gly Gln
100 105 110
Pro Tyr Thr Ile His Thr Asn Ile Tyr Ala Asn Gly Val Gly Asp Lys
115 120 125
Glu Met Gln Phe Lys Pro Trp Phe Asn Pro Thr Asp Gly Tyr His Asn
130 135 140
Tyr Thr Val Ser Trp Thr Ala Cys Met Ile Val Trp Tyr Ile Asp Gly
145 150 155 160
Thr Pro Ile Arg Val Phe Arg Asn Tyr Glu Lys Ser Asn Gly Val Ala
165 170 175
Phe Pro Met Lys Arg Pro Met Tyr Gly Tyr Ser Ser Ile Trp Ala Ala
180 185 190
Glu Asp Trp Ala Thr Gln Gly Gly Arg Val Lys Ala Asp Trp Ser Lys
195 200 205
Ala Pro Phe Val Ala Asn Tyr His Gly Leu Asn Ile Asn Val Cys Glu
210 215 220
Cys Ser Thr Thr Ser Gly Gly Gly Asn Ser Cys Ala Ala Lys Cys Ala
225 230 235 240
Ser Thr Tyr Asn Ser Lys Ser Ser Val Cys Gln Leu Ser Asp Ser Glu
245 250 255
Leu Ala Arg Met Arg Lys Val Gln Asp Glu Tyr Arg Ile Tyr Asn Tyr
260 265 270
Cys Val Asp Pro Lys Arg Tyr Asn Gly Ser Val Pro Val Glu Cys Ser
275 280 285
Leu Pro Gln
290
<210> 327
<211> 1637
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 327
gaagtgcaaa cgtgcagcag cagaggcagc aacacctccc ctgttcttgc tctgtttcct 60
cactctgttg gtacacaaca aaaagaagaa gcttaattag gtggtttttg atctgatcac 120
gcgccatggt ggcgatcacg gcgccgagct ccatcgagca catcccgctg gtgaggtgcc 180
ccaagggcgc caatgccggg ccgcaagctg tcatcccgtg catcgacctg tcggcaccgg 240
gcgcggcggc ggcggtggcc gacgcgtgcc gcaccctggg gttcttcaag gcgaccaacc 300
acggcgtccc cgcggggctc gccgacgcgt tggagtcgag cgccatggcg ttcttcgcgc 360
tcccgcacca ggagaagctc gacatgtccg gccccgcccg gcccctcggc tacggcagca 420
agagcatcgg gtcgaacggc gacgtggggt ggctggagta cctcctcctc tcggccggcg 480
ccgcctcgtc cggcggcgcg gcgctgccgg cggcgctgag ggcggcggtg gaggcgtaca 540
cgggggcggt gaggggggtg gggtgcaggg tgatggagct gatggcggag gggctggggc 600
tgggggcgtc ggaggagggg aggtgcgtgc tgcggcggat ggtggtgggg tgcgagggca 660
gcgacgagat gctgcgggtg aaccactacc cgccgtacct cctcccgccg ggccgcgacc 720
gggacgagtg cggcgtgacg ggcttcgggg agcacacgga cccacagatc atctccgtgc 780
tcaggtccaa ctgcaccgcg ggcctccaga tcctcctccg cggagactac tcctcccctg 840
cccgctgggt ccccgtgccc cccgaccccg attccttctt cgtcaacgtc ggcgactccc 900
tccaagtgtt gacgaatggg aggttcagga gcgtgaagca cagggtgttg gcgccggagg 960
gggaggagtc gaggctgtcg gtgatctact tcggcgggcc agcggcgtcg cagcggatcg 1020
cgccgctgga gcaggtgatg cgggaggggg agcagagcct gtacagggag ttcacctggg 1080
gggagtacaa gaaggccgcc tacaagacgc gcctcggcga caaccgcctc ggcccctacg 1140
agctgcagca cgccgctgcc aacgatgagg ccgcgacgaa gaaataaatc gatcaacccg 1200
acgactgtga acaactgtga agtgttactg tactagtgta gttagctccg tggtactggt 1260
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taacccattt ctggtaacta aaggccgccg ttgccttggc ttgcttggcc agcccaaaac 1380
tggcactggc gagctgcctc ctcctgcatg cctctgctgt gcagtagtgc agcagtactc 1440
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ccgccccttt tgtagcatgg tttttaccgg ctgggcggtc ggcaggtgca gtagtagcta 1620
atgatgctta ctgcgcc 1637
<210> 328
<211> 353
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 328
Met Val Ala Ile Thr Ala Pro Ser Ser Ile Glu His Ile Pro Leu Val
1 5 10 15
Arg Cys Pro Lys Gly Ala Asn Ala Gly Pro Gln Ala Val Ile Pro Cys
20 25 30
Ile Asp Leu Ser Ala Pro Gly Ala Ala Ala Ala Val Ala Asp Ala Cys
35 40 45
Arg Thr Leu Gly Phe Phe Lys Ala Thr Asn His Gly Val Pro Ala Gly
50 55 60
Leu Ala Asp Ala Leu Glu Ser Ser Ala Met Ala Phe Phe Ala Leu Pro
65 70 75 80
His Gln Glu Lys Leu Asp Met Ser Gly Pro Ala Arg Pro Leu Gly Tyr
85 90 95
Gly Ser Lys Ser Ile Gly Ser Asn Gly Asp Val Gly Trp Leu Glu Tyr
100 105 110
Leu Leu Leu Ser Ala Gly Ala Ala Ser Ser Gly Gly Ala Ala Leu Pro
115 120 125
Ala Ala Leu Arg Ala Ala Val Glu Ala Tyr Thr Gly Ala Val Arg Gly
130 135 140
Val Gly Cys Arg Val Met Glu Leu Met Ala Glu Gly Leu Gly Leu Gly
145 150 155 160
Ala Ser Glu Glu Gly Arg Cys Val Leu Arg Arg Met Val Val Gly Cys
165 170 175
Glu Gly Ser Asp Glu Met Leu Arg Val Asn His Tyr Pro Pro Tyr Leu
180 185 190
Leu Pro Pro Gly Arg Asp Arg Asp Glu Cys Gly Val Thr Gly Phe Gly
195 200 205
Glu His Thr Asp Pro Gln Ile Ile Ser Val Leu Arg Ser Asn Cys Thr
210 215 220
Ala Gly Leu Gln Ile Leu Leu Arg Gly Asp Tyr Ser Ser Pro Ala Arg
225 230 235 240
Trp Val Pro Val Pro Pro Asp Pro Asp Ser Phe Phe Val Asn Val Gly
245 250 255
Asp Ser Leu Gln Val Leu Thr Asn Gly Arg Phe Arg Ser Val Lys His
260 265 270
Arg Val Leu Ala Pro Glu Gly Glu Glu Ser Arg Leu Ser Val Ile Tyr
275 280 285
Phe Gly Gly Pro Ala Ala Ser Gln Arg Ile Ala Pro Leu Glu Gln Val
290 295 300
Met Arg Glu Gly Glu Gln Ser Leu Tyr Arg Glu Phe Thr Trp Gly Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Lys Ala Ala Tyr Lys Thr Arg Leu Gly Asp Asn Arg Leu Gly
325 330 335
Pro Tyr Glu Leu Gln His Ala Ala Ala Asn Asp Glu Ala Ala Thr Lys
340 345 350
Lys
<210> 329
<211> 852
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 329
gatccatcga tctcccccca accaaaaatc tctctctcaa tccatcgatc cattaattca 60
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gtttggtgga gatttgttga gttcagatgt atatacacac acagatgtaa tataattctt 840
tcattcatag cc 852
<210> 330
<211> 170
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 330
Met Lys His Pro Arg Gln Glu Glu Glu Val Ser Leu Ala Leu Ala Leu
1 5 10 15
Ser Thr Asp Cys Ser Ser Thr Ala Ser Asp Ser Ser Ala Ala Ala Ala
20 25 30
Gly Gly Ala Ala Arg Arg Lys Arg Ala Arg Arg Arg Ser Val Val Ala
35 40 45
Thr Ser Gly Glu Gly Glu Phe Val Cys Lys Thr Cys Ser Arg Ala Phe
50 55 60
Pro Thr Phe Gln Ala Leu Gly Gly His Arg Thr Ser His Leu Arg Gly
65 70 75 80
Arg Ser Asn Gly Leu Asp Leu Gly Ala Ile Gly Asp Lys Ala Ile Arg
85 90 95
Leu His Arg Ala Ala Asp Lys Glu His Arg Asp Lys His Glu Cys His
100 105 110
Ile Cys Gly Leu Gly Phe Glu Met Gly Gln Ala Leu Gly Gly His Met
115 120 125
Arg Arg His Arg Glu Glu Met Ala Ala Ala Gly Gly Gly Ser Ser Ala
130 135 140
Asp Asp Trp Val Trp Arg Cys Asp Ala Arg Pro Glu Gly Ile Ala Ala
145 150 155 160
Glu Pro Pro Val Leu Leu Glu Leu Phe Ala
165 170
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<211> 1241
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 331
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ccggcgacgc gcgccgcctc atcgtccgcc tgctcgtcgt cgacccggcc aagcgcatct 780
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<210> 332
<211> 348
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 332
Met Val Glu Gln Leu Arg Arg Glu Ile Ser Ile Met Arg Met Val Arg
1 5 10 15
His Pro Asn Val Val Gly Ile Arg Glu Val Leu Ala Ser Arg Ala Arg
20 25 30
Val Phe Val Val Met Glu Tyr Ala Arg Gly Gly Glu Leu Phe Ala Lys
35 40 45
Val Ala Arg Gly Arg Leu Thr Glu Glu His Ala Arg Arg Tyr Phe Gln
50 55 60
Gln Leu Val Ala Ala Val Gly Phe Cys His Gly Arg Gly Val Ala His
65 70 75 80
Arg Asp Leu Lys Pro Glu Asn Leu Leu Leu Asp Glu Glu Gly Arg Leu
85 90 95
Lys Val Thr Asp Phe Gly Leu Ala Ala Leu Pro Glu Gln Leu Arg Gln
100 105 110
Asp Gly Leu Leu His Thr Gln Cys Gly Thr Pro Ala Tyr Val Ala Pro
115 120 125
Glu Val Leu Arg Lys Arg Gly Tyr Asp Gly Ala Arg Ala Asp Leu Trp
130 135 140
Ser Cys Gly Val Val Leu Tyr Val Leu Leu Cys Gly Phe Leu Pro Phe
145 150 155 160
Gln His Glu Asn Tyr Ala Lys Met Tyr Gln Lys Ile Phe Lys Ala Glu
165 170 175
Tyr Gln Val Pro Pro Trp Val Ser Gly Asp Ala Arg Arg Leu Ile Val
180 185 190
Arg Leu Leu Val Val Asp Pro Ala Lys Arg Ile Ser Ile Pro Glu Ile
195 200 205
Met Arg Thr Pro Trp Phe Lys Lys Gly Phe Val Pro Pro Val Pro Thr
210 215 220
Ser Pro Val Ser Pro Lys Lys Trp Glu Glu Asp Asp Val Leu Leu Asp
225 230 235 240
Gly Gly Asp Ser Gly Ala Met Ser Pro Arg Thr Cys Asn Ala Phe Gln
245 250 255
Leu Ile Ser Ser Met Ser Ser Gly Phe Asp Leu Ser Gly Met Phe Glu
260 265 270
Ser Glu Gln Lys Ala Ala Thr Val Phe Thr Ser Arg Ala Pro Ala Ala
275 280 285
Thr Val Ile Gln Lys Leu Glu Ala Val Gly Arg Ser Leu Gly Tyr Ser
290 295 300
Ala Thr Arg Gly Lys Gly Trp Lys Leu Arg Leu Glu Ala Thr Ala Ser
305 310 315 320
Val Gln Arg Asp Val Lys Ser Val Gly Cys Ile Ser Phe Ser Phe Phe
325 330 335
Ala Arg Gly Tyr Val Gln Ala Lys Ser Arg Asp Val
340 345
<210> 333
<211> 1408
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 333
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atcttcagag aatttacttc acaataacga gatgagatga ttgggttgca tgatcacgac 1080
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taatttctgt tgcaaatctg caagcaatgg catagctagg caaggcaaca gagaacagaa 1200
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tataaacata tgacaggaaa ctactccgcg ttggaggggt aagaaatggg actctgcatt 1380
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<211> 320
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<213> Oryza sativa
<400> 334
Met Ala Thr Ala Glu Gln Leu Gln Arg Arg Glu Arg Val Leu Arg Ile
1 5 10 15
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Ala Thr Phe Asp Thr Ile Ala Met Glu Pro Asp Leu Lys Lys Ser Ile
35 40 45
Val Asp Asp Leu Asp Arg Phe Leu Lys Arg Lys Glu Tyr Tyr Arg Arg
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Ile Gly Lys Ala Trp Lys Arg Gly Tyr Leu Leu His Gly Pro Pro Gly
65 70 75 80
Thr Gly Lys Ser Ser Leu Val Ala Ala Met Ala Asn Tyr Leu Arg Phe
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Asn Leu Tyr Asp Leu Asp Leu Ser Glu Val Arg Val Asn Ala Ala Leu
100 105 110
Gln Arg Leu Leu Ile Ser Met Pro Asn Lys Ser Ile Leu Val Ile Glu
115 120 125
Asp Ile Asp Cys Cys Phe Asp Ala Asn Pro Arg Glu Ala His Lys Ile
130 135 140
Thr Thr Ala Ala Leu Asp Gln Ala Glu Asp Phe Asp Phe Ser Ser Ser
145 150 155 160
Asp Ser Asp Asp Ala Val Gly Ala Pro Pro Arg Ala Arg Arg Ala Gly
165 170 175
Asp Leu Gln Gln Gln Lys Leu Thr Leu Ser Gly Leu Leu Asn Phe Ile
180 185 190
Asp Gly Leu Trp Ser Thr Ser Gly Glu Glu Arg Val Ile Val Phe Thr
195 200 205
Thr Asn Tyr Lys Glu Arg Leu Asp Pro Ala Leu Leu Arg Pro Gly Arg
210 215 220
Met Asp Met His Val Tyr Met Gly Tyr Cys Gly Trp Glu Ala Phe Lys
225 230 235 240
Thr Leu Ala His Asn Tyr Phe Leu Val Gly Asp His Pro Leu Phe Pro
245 250 255
Glu Ile Arg Gln Leu Leu Ala Gly Val Glu Val Thr Pro Ala Glu Val
260 265 270
Ser Glu Met Leu Leu Arg Ser Glu Asp Ala Asp Ala Ala Leu Arg Gly
275 280 285
Leu Val Glu Phe Leu Arg Glu Arg Thr Arg Arg Arg Ala Arg Gln Glu
290 295 300
Ala Ala Ile Asp Asp Asn Gln Val Val Ala Glu Lys Gly Asn Ala Ala
305 310 315 320
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<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 335
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gaggagaaga gaagagaaga ggatcggaag agatggccgg cggcggcgtg gaggacacgt 180
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aggagaagaa gctcatgcac aacctccgca actacaccgt ccccctccag cgctacatcg 420
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agcgcattct tggccttgga gatcttggtt gtcagggaat gggtattcct gtcggcaaac 720
tgtctctgta cactgccctt ggaggagttc gcccatcagc ttgccttcca atcacaattg 780
atgttggtac caacaatgag tcactgctca acgacgaatt ctacattgga ctcaagcaac 840
gccgtgctac cggagaggaa taccacgagc ttcttgagga gtttatgacc gcagttaagc 900
aaaactacgg cgagaaagtg ctcgttcagt ttgaagactt tgccaaccac aatgcttttg 960
acttgcttgc aaagtacagc aagagccacc ttgtcttcaa cgacgacatt cagggaacag 1020
catcagtggt cctcgcaggt ctgattgcgg cgctcaaggt ggtcggtgga actcttgcag 1080
atcacactta cctgttcctt ggcgccggtg aggctggaac tggcatcgca gagctcattg 1140
ccctcgagat gtcaaagcag acggagattc cgatcaatga ttgccggaag aaggtgtggc 1200
tggtggactc gagggggctg atcgtggagt cgaggaagga gtcgctgcag cacttcaagc 1260
agccattcgc gcacgagcac gagccggtga agacgctgct ggaggccgtg cagtccatca 1320
agccgaccgt gctcatcggc acttccggcg tcggcaagac attcacccag gaggtcgtcg 1380
aggccatggc cgccttcaac gagaaacctg tcatcttcgc gctctccaac ccgacgtcgc 1440
actcggaatg caccgcggag gaggcataca cctggaccaa gggaagtgcg gtgttcgcga 1500
gcgggagccc gttcgacgcg gtggagtacg aggggaagac gtacgtgccg gggcaatcga 1560
acaacgccta catcttcccg gggttcgggc tgggcgtggt gatctcgggc gccatccgcg 1620
tccacgacga catgctgctg gcggcgtcgg aggcgctggc ggagcaggtg agcgaggaca 1680
acttcgccag ggggctcatc ttcccgccct tcaccaacat ccgcaagatc tccgcacaca 1740
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gcagagatgc ttacttagtg g 2241
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<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 336
Met Ala Gly Gly Gly Val Glu Asp Thr Tyr Gly Glu Asp Arg Ala Thr
1 5 10 15
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20 25 30
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35 40 45
Ala Glu Arg Asp Ala His Tyr Leu Arg Gly Leu Leu Pro Pro Ser Ile
50 55 60
Val Ser Gln Glu Leu Gln Glu Lys Lys Leu Met His Asn Leu Arg Asn
65 70 75 80
Tyr Thr Val Pro Leu Gln Arg Tyr Ile Ala Met Met Asp Leu Gln Glu
85 90 95
Arg Asn Glu Arg Leu Phe Tyr Lys Leu Leu Ile Asp Asn Val Glu Glu
100 105 110
Leu Leu Pro Val Val Tyr Thr Pro Thr Val Gly Glu Ala Cys Gln Lys
115 120 125
Tyr Gly Ser Ile Tyr Arg Arg Pro Gln Gly Leu Tyr Ile Ser Leu Lys
130 135 140
Asp Lys Gly Lys Ile Leu Glu Val Leu Lys Asn Trp Pro Glu Arg Ser
145 150 155 160
Ile Gln Val Ile Val Val Thr Asp Gly Glu Arg Ile Leu Gly Leu Gly
165 170 175
Asp Leu Gly Cys Gln Gly Met Gly Ile Pro Val Gly Lys Leu Ser Leu
180 185 190
Tyr Thr Ala Leu Gly Gly Val Arg Pro Ser Ala Cys Leu Pro Ile Thr
195 200 205
Ile Asp Val Gly Thr Asn Asn Glu Ser Leu Leu Asn Asp Glu Phe Tyr
210 215 220
Ile Gly Leu Lys Gln Arg Arg Ala Thr Gly Glu Glu Tyr His Glu Leu
225 230 235 240
Leu Glu Glu Phe Met Thr Ala Val Lys Gln Asn Tyr Gly Glu Lys Val
245 250 255
Leu Val Gln Phe Glu Asp Phe Ala Asn His Asn Ala Phe Asp Leu Leu
260 265 270
Ala Lys Tyr Ser Lys Ser His Leu Val Phe Asn Asp Asp Ile Gln Gly
275 280 285
Thr Ala Ser Val Val Leu Ala Gly Leu Ile Ala Ala Leu Lys Val Val
290 295 300
Gly Gly Thr Leu Ala Asp His Thr Tyr Leu Phe Leu Gly Ala Gly Glu
305 310 315 320
Ala Gly Thr Gly Ile Ala Glu Leu Ile Ala Leu Glu Met Ser Lys Gln
325 330 335
Thr Glu Ile Pro Ile Asn Asp Cys Arg Lys Lys Val Trp Leu Val Asp
340 345 350
Ser Arg Gly Leu Ile Val Glu Ser Arg Lys Glu Ser Leu Gln His Phe
355 360 365
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405 410 415
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420 425 430
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435 440 445
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450 455 460
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Gly Val Val Ile Ser Gly Ala Ile Arg Val His Asp Asp Met Leu Leu
485 490 495
Ala Ala Ser Glu Ala Leu Ala Glu Gln Val Ser Glu Asp Asn Phe Ala
500 505 510
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515 520 525
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530 535 540
Ser Arg Leu Pro Arg Pro Asp Asp Leu Val Lys Tyr Ala Glu Ser Cys
545 550 555 560
Met Tyr Thr Pro Ala Tyr Arg Cys Tyr Arg
565 570
Claims (26)
- 서열번호 4로 표시된 NAC5 폴리펩티드 또는 서열번호 2로 표시된 NAC1 폴리펩티드를 코딩하는 핵산, 또는 서열번호 4 또는 서열번호 2에 대해 적어도 80%의 서열 동일성을 갖는 이의 상동체의 식물로의 도입 및 발현을 포함하는, 비생물학적 스트레스 조건 하에서 자란 식물의 수확량 관련 형질 향상 및/또는 뿌리 형태를 변형시키는 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 핵산은 조직 특이적 프로모터, 바람직하게는 뿌리 특이적 프로모터, 더 바람직하게는 RCc3 프로모터, 더욱 바람직하게는 벼 유래의 RCc3 프로모터에 작동 가능하게 연결된 것을 특징으로 하는 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 핵산은 항시성 (constitutive) 프로모터, 바람직하게는 GOS2 프로모터, 더 바람직하게는 벼 유래의 GOS2 프로모터에 작동 가능하게 연결된 것을 특징으로 하는 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 향상된 수확량 관련 형질은 증가된 종자 또는 곡물 수확량을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 뿌리 형태는 하기의 어느 하나 이상의 증가 또는 변화를 포함하거나, 하기의 어느 하나 이상의 증가 또는 변화 때문인 것을 특징으로 하는 방법: 생체 중량 또는 건조 중량 형태의 뿌리 생물량의 증가, 증가된 뿌리의 수, 증가된 뿌리 직경, 확대된 뿌리, 확대된 중심주 (stele), 확대된 통기 조직 (aerenchyma), 증가된 통기 조직 형성, 확대된 수피 (cortex), 확대된 수피 (cortical) 세포, 확대된 목질부, 변형된 분지, 향상된 침투 (penetration) 능력, 확대된 외피 (epidermis), 어린줄기에 대한 뿌리 비율의 증가.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 향상된 수확량 관련 형질은 가뭄 스트레스 또는 염분 스트레스 조건 하에서 얻어지는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 NAC5 또는 NAC1 폴리펩티드는 서열번호 5 내지 서열번호 15로 표시된 모티프의 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 NAC5 또는 NAC1을 코딩하는 핵산은 식물 유래, 바람직하게는 단자엽 식물 유래, 더 바람직하게는 벼과 (family Poaceae) 유래, 더욱 바람직하게는 벼속 (genus Oryza) 유래, 가장 바람직하게는 벼 (Oryza sativa) 유래인 것을 특징으로 하는 방법.
- 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 NAC5 또는 NAC1을 코딩하는 핵산은 표 16에 열거된 폴리펩티드 중 어느 하나를 코딩하거나, 상기 핵산의 일부이거나, 상기 핵산과 혼성화가 가능한 핵산인 것을 특징으로 하는 방법.
- 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산 서열은 표 16에 제시된 어느 하나의 폴리펩티드의 오쏘로그 (orthologue) 또는 패럴로그 (paralogue)를 코딩하는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산은 서열번호 4로 표시된 NAC5 폴리펩티드를 코딩하거나, 서열번호 2로 표시된 NAC1 폴리펩티드를 코딩하는 것을 특징으로 하는 방법.
- 표 16에 제시된 NAC5 폴리펩티드 또는 NAC1 폴리펩티드 또는 이의 상동체, 패럴로그 또는 오쏘로그를 코딩하는 재조합 핵산을 포함하는 것을 특징으로 하는, 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항의 방법에 의해 수득 가능한 식물체, 또는 식물체의 일부, 또는 식물 세포.
- 하기를 포함하는 유전자 구축물 (construct):
(i) 표 16에 제시된 NAC5 폴리펩티드 또는 NAC1 폴리펩티드 또는 이의 상동체, 패럴로그 또는 오쏘로그를 코딩하는 핵산;
(ii) 하나 이상의 조직 특이적 프로모터를 포함하는 (i)의 핵산 서열의 발현을 유도할 수 있는 하나 이상의 조절 서열; 및 선택적으로
(iii) 전사 종결 서열. - 제13항에 있어서, 상기 핵산은 식물 유래의 항시성 프로모터에, 바람직하게는 식물 유래의 중간 강도의 항시성 프로모터에, 더 바람직하게는 GOS2 프로모터에, 가장 바람직하게는 벼 유래의 GOS2 프로모터에 작동 가능하게 연결된 것을 특징으로 하는 구축물.
- 제13항에 있어서, 상기 조직 특이적 프로모터는 바람직하게는 뿌리 특이적 프로모터, 더 바람직하게는 RCc3 프로모터인 것을 특징으로 하는 구축물.
- 대조구 식물에 비하여 향상된 수확량 관련 형질, 바람직하게는 증가된 종자 수확량 및/또는 증가된 생물량 및/또는 변형된 뿌리 형태를 갖는 식물을 제조하는 방법에 대한 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 유전자 구축물의 용도.
- 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 유전자 구축물로 형질전환된 식물, 식물의 일부 또는 식물 세포.
- 하기 단계를 포함하는, 대조구 식물에 비하여 향상된 수확량 관련 형질, 바람직하게는 대조구 식물에 비하여 증가된 및/또는 증가된 종자 수확량 및/또는 증가된 생물량을 갖는 형질전환 식물의 제조 방법:
(i) 표 16에 제시된 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 또는 이의 상동체, 패럴로그 또는 오쏘로그를 식물 세포 또는 식물에 도입 및 발현하는 단계; 및
(ii) 비생물적 스트레스 조건 하에서, 증가된 종자 수확량 및 변형된 뿌리 형태를 갖는 상기 (i)단계의 식물 세포 또는 식물을 배양하는 단계. - 제18항에 있어서, 상기 핵산은 조직 특이적 프로모터, 바람직하게는 뿌리 특이적 프로모터, 더 바람직하게는 RCc3 프로모터, 더욱 바람직하게는 벼 유래의 RCc3 프로모터에 작동 가능하게 연결된 것을 특징으로 하는 방법.
- 제18항에 있어서, 상기 핵산은 항시성 프로모터, 바람직하게는 GOS2 프로모터, 더 바람직하게는 벼 유래의 GOS2 프로모터에 작동 가능하게 연결된 것을 특징으로 하는 방법.
- 표 16에 제시된 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드 또는 이의 상동체, 패럴로그 또는 오쏘로그를 코딩하는 핵산의 조절된 발현으로 인하여 대조구 식물에 비해 향상된 수확량 관련 형질을 갖는 형질전환 식물.
- 제12항, 제17항 또는 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 식물은 비트, 사탕무 또는 알팔파와 같은 작물; 또는 사탕수수와 같은 단자엽 식물; 또는 벼, 옥수수, 밀, 보리, 기장, 호맥 (rye), 라이밀 (triticale), 수수 (sorghum), 에머밀 (emmer), 스펠트밀 (spelt), 외알밀 (소맥, einkorn), 테프 (teff), 마일로 (milo) 또는 귀리 같은 곡물인 것을 특징으로 하는 형질전환 식물 또는 상기 형질전환 식물로부터 유래된 형질전환 식물 세포.
- 수확 가능한 부분은 바람직하게는 뿌리 생물량 및/또는 종자인 것을 특징으로 하는, 제22항에 따른 식물의 수확 가능한 부분.
- 제22항에 따른 식물 및/또는 제23항에 따른 식물의 수확 가능한 부분 유래의 산물.
- 대조구 식물에 비해 식물에서 수확량 관련 형질을 향상시키기 위한, 표 16에 제시된 NAC1 또는 NAC5 폴리펩티드 또는 이의 상동체, 패럴로그 또는 오쏘로그를 코딩하는 핵산의 용도.
- 제12항, 제17항, 제21항 또는 제22항 중 어느 한 항에 따른 식물의 재배 단계 및 종자를 포함하는 상기 식물 또는 식물의 일부로부터 또는 종자를 포함하는 상기 식물 또는 식물의 일부를 이용하여 산물을 생산하는 단계를 포함하는, 산물의 제조 방법.
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