KR20140063244A - 누리장나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 누리장나무(Clerodendrum trichotomum) 추출물을 유효 성분으로 함유하는 미백 화장료 조성물에 관한 것으로서, 누리장나무 추출물을 유효 성분으로 화장료 조성물의 전체 중량에 대하여 0.001 ~ 30.0 중량%를 함유하는 것을 특징으로 한다. 본 발명에 따르면, 누리장나무 추출물은 멜라닌 생성과정 중의 일부 반응을 저해함으로써 멜라닌 생성을 억제하여 미백효능이 우수할 뿐만 아니라, 피부자극이 없어 제품으로서의 안정성 및 피부에서의 안전성 또한 우수하다.

Description

누리장나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물{Cosmetic composition comprising the extract of Clerodendrum trichotomum as active ingredient}

본 발명은 누리장나무 추출물을 유효 성분으로 함유하는 미백 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부의 흑화는 내적, 외적 요인에 대한 피부세포의 반응에 의하여 발생하는 것으로, 대표적인 요인은 피부가 자외선에 노출됨으로 인한 것이다. 즉, 피부가 자외선에 노출되면 티로시나제가 활성화되고, 이것은 피부조직에 존재하는 아미노산의 일종인 티로신에 작용하여 도파를 생성시키고, 다시 도파퀴논을 생성시키는 산화과정을 통해 피부 색소세포인 멜라노사이트(Melanocyte)내의 멜라노좀(Melanosome)에서 멜라닌이라는 중합체가 합성된다. 이 멜라닌은 피부의 각질형성 세포인 케라티노사이트(Keratinocyte)로 전달되며, 각질화 과정에 의해 피부 표면에 도달하여 자외선으로부터 피부를 보호하게 된다. 따라서, 멜라닌은 우리 인체에 없어서는 안되는 자외선 방어제이며 또한, 단백질, 지질, 핵산 등과 같은 생체성분을 변형시키는 다양한 라디칼을 제거하는데 효과적인 프리 라디칼 소거제의 역할을 담당한다.

그러나, 멜라닌이 국소적으로 과도하게 합성되거나 피부병변 및 노화에 따른 피부의 생리기능이 떨어지게 되면, 멜라닌이 피부 표면에 침착되어 기미, 주근깨 및 다양한 색소침착을 유발하게 된다.

이러한 피부흑화의 원인과 기작이 밝혀지면서, 피부흑화 과정에 관여하는 티로시나제(Tyrosinase)의 활성 저해효과를 갖는 물질들을 화장료에 배합하거나, 멜라닌 생성과정 중의 일부 반응을 저해함으로써 멜라닌의 생성을 감소시키는 방법이 일반적으로 사용되고 있다. 이러한 목적으로 사용되고 있는 대표적인 물질로는 아스코르빈산, 알부틴, 히드로퀴논 및 상백피추출물, 감초추출물 등의 식물 추출물이 있다. 그러나, 알부틴의 경우 우수한 티로시나제 활성 저해작용을 갖는 반면 화장품에 배합시 변색 및 경시변화에 따른 역가 저하 등 안정성에 문제점이 있으며, 또한 피부자극이 커 사용상 한계가 있다. 아스코르빈산은 티로시나제 활성 저해효과가 낮을뿐더러 분자 자체의 안정성이 낮아 멜라닌 생성 억제제로 적합하지 않으며, 히드로퀴논은 피부에 대한 자극이 높아 안전성 문제로 현재 화장품 배합시에 그 사용성이 제한되고 있다. 또한, 대부분의 식물 추출물들은 고농도에서만 비교적 높은 티로시나제 활성 저해 효과를 나타내며, 저농도에서는 저해 효과가 거의 나타나지 않는 등의 문제점을 갖고 있다. 특히, 기존 멜라닌 생성 억제제들의 가장 큰 문제점은, 실제 사람 피부에 대한 임상적인 실험시 미백효과가 미약하다는 점에 있다.

이에, 본 발명자들은 기존의 멜라닌 생성 억제제들이 갖고 있는 문제점인 미약한 임상 미백효과를 극복하고 보다 우수한 멜라닌 생성 억제 효과를 갖는 미백 화장료를 제공하기 위하여, 한방약 또는 민간 요법에 이용되고 있는 천연 식물을 대상으로 미백 효능이 있는 물질에 대하여 예의 연구하던 중, 누리장나무 추출물이 우수한 멜라닌 생성 억제 효능을 나타낸다는 것을 발견하고, 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명의 목적은 우수한 미백효과를 나타내는 누리장나무 추출물을 함유하는 미백화장료 조성물을 제공하는 것이다.

따라서, 상기와 같은 본 발명의 목적은 누리장나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 미백 화장료 조성물에 의해 달성된다.

또한, 바람직하게는 상기 누리장나무 추출물은 상기 화장료 조성물의 전제 중량에 대하여 0.001~30.0중량%함유되는 것을 특징으로 한다.

또한, 바람직하게는, 상기 누리장나무 추출물은 (a) 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 부틸 아세테이트, 디에틸에테르, 디클로로메탄, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 추출용매를 이용한 용매 추출법, (b) 초임계 추출법, (c) 초음파 추출법 또는 (d) 발효공정을 이용하여 추출된 것을 특징으로 한다.

본 발명의 화장료 조성물 중 유효 성분으로 사용되는 누리장나무(Lagerstroemia indica)는 개나무, 노나무, 깨타리라고도 하며 냄새가 고약하여 구릿대나무라고도 한다. 누리장 나무는 산기슭이나 골짜기의 기름진 땅에서 자라며, 높이는 약 2m이다. 나무 껍질은 잿빛이다. 잎은 마주나고 달걀 모양이며 끝이 뾰족하다. 밑은 둥글고 가장자리에 톱니가 없으며 양면에 톨이 난다. 잎 길이 8~20cm, 나비 5~10cm로 겉에는 털이 없으나 뒷면에는 털이 나며 잎자루는 길이 3~10cm이다. 꽃은 양성화로 8~9월에 엷은 붉은색으로 핀다. 취산꽃차례로 새가지 끝에 달리며 강한 냄새가 난다. 꽃받침은 붉은빛을 띠고 5개로 깊게 갈라지며 그 조각은 달걀 모양 또는 긴 달걀 모양이다. 화관은 지름 3cm이고 5개로 갈라진다. 열매는 핵과로 둥글며 10월에 짙은 파란빛으로 익는다. 유사종으로 가지와 잎에 갈색 털이 빽빽이 나는 것을 털누리장나무(Var.ferrungineum), 잎 밑이 심장밑꼴이고 끝이 뾰족하며 꽃받침이 좁고 긴 것을 거문누리장나무(Var.esculentum)라고 한다. 어린잎은 나물로 먹고 꽃과 열매가 아름다워 관상용으로 심는다. 생약의 해주상산은 잔가지와 뿌리를 말린 것인데, 한방에서 기침, 감창에 사용한다. 한국(황해, 강원이남), 일본, 타이완, 중국 등지에 분포한다. 누리장나무 추출물을 포함하는 항균 조성물(대한민국 산림청 국립수목원장, 1020110122835)이 출원되어있다. 또한 누리장나무 잎 추출물로부터 아피게닌-7-오-베타-디-글루쿠로니드를 분리하는 방법 및 이 화합물을 함유하는 위염 및 역류성 식도염 질환 예방 및 치료를 위한 조성물(손의동, 1020020029417)이 등록되어 있다.

그러나, 이러한 누리장나무 추출물을 색소침착 제거를 목적으로 미백화장료에 사용한 예는 없다.

본 발명에 있어서, 누리장나무 추출물은 누리자안무의 다양한 기관 (예:잎, 뿌리, 줄기, 가지, 여린가지, 껍질 및 종자등)으로부터 추출하여 얻은 것을 의미하고, 바람직하게는 잎, 여린가지, 줄기, 가지, 껍질 또는 뿌리로부터 얻은 추출물이고, 보다 바람직하게는 잎, 여린가지 또는 뿌리로부터 얻은 추출물이며, 가장 바람직하게는 잎과 여린가지로부터 얻은 추출물을 의미한다.

또한, 본 발명의 누리장나무 추출물은 당업계에 공지된 통상의 방법에 따라, 즉 통상적인 온도와 압력의 조건 하에서, 통상적인 용매를 사용하여 제조될 수 있으나, 바람직하게는 (a)물, 탄소수 1~4의 무수 또는 함수 저급알코올(예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 프로필렌글리콜, 1,3 - 부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸 아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로러메탄, 클로로포름, 핵산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 용매를 이용한 용매 추출법, (b)이산화탄소에 의한 감압 및 고온에 의한 추출법 또는 (c)초음파 추출법을 이용하여 추출한다.

본 발명에서 누리장나무 추출물은 다양한 추출용매, 예를 들어, 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올 (예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸 아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출 용매를 사용하여 얻을 수 있으며, 바람직하게는 에탄올, 70%(v/v) 에탄올 또는 물을 사용하여 얻어진 것이고, 가장 바람직하게는 70%(v/v) 에탄올을 사용하여 얻어진 것이다.

한편, 본 발명의 누리장나무 추출물은 상기한 추출 용매뿐만 아니라, 다른 추출 용매를 이용하여도 실질적으로 동일한 효과를 나타내는 추출물이 얻어질 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 것이다.

또한, 본 발명의 누리장나무 추출물은 상술한 추출 용매에 의한 추출물뿐만 아니라, 통상적인 정제 및 발효 과정을 거친 추출물도 포함한다. 예컨대, 이산화탄소에 의한 감압, 고온에 의한 초임계추출법에 의한 추출, 초음파를 이용한 추출법에 의한 추출, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피 (크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리하거나 자연 상태나 각종 미생물을 이용한 발효산물에 의한 추출물 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 및 추출방법을 통해 얻어진 활성 분획도 본 발명의 추출물에 포함된다.

또한, 본 발명은 상기 추출물이 상온에서 냉침, 가열 여과하여 얻어진 액상물, 추가로 용매를 감압농축 또는 동결 건조하여 얻은 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.

상기 이산화탄소에 의한 감압, 고온에 의한 초임계추출법에 의한 추출법은 초임계 유체 추출법(supercritical fluid extraction)을 의미하는 것으로, 일반적으로 초임계 유체는 기체가 고온 고압 조건에서 임계점에 도달하였을 때 갖는 액체 및 기체의 성질을 지니고 있으며, 화학적으로 비극성 용매와 유사한 극성을 지니고 있으며 이러한 특성으로 인해 초임계 유체는 지용성 물질의 추출에 사용되고 있다(J. Chromatogr. A. 1998;479:200-205).

이산화탄소는 초임계 유체기기의 작동으로 압력 및 온도가 임계점까지 이르는 과정을 거치면서 액체 및 기체 성질을 동시에 지닌 초임계 유체가 되고 그 결과 지용성 용질에 대한 용해도가 증가한다. 초임계 이산화탄소가 일정량의 시료를 함유한 추출 용기를 통과하게 되면 시료에 함유된 지용성 물질은 초임계 이산화탄소에 추출되어 나온다.

지용성 물질을 추출한 후 추출 용기에 남아있는 시료에 다시 소량의 공용매가 함유된 초임계 이산화탄소를 흘려 통과시키면 순수한 초임계 이산화탄소만으로는 추출되지 않았던 성분들이 추출되어 나오게 할 수 있다.

본 발명의 초임계추출법에 사용되는 초임계 유체는 초임계 이산화탄소 또는 이산화탄소에 추가적으로 공용매를 혼합한 혼합유체를 사용함으로써 효과적으로 유효 성분을 추출할 수 있다.

이러한 공용매는 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 헥산 및 디에틸에테르로 이루어진 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 사용할 수 있다.

추출된 시료는 대부분 이산화탄소를 함유하고 있는데 이산화탄소는 실온에서 공기 중으로 휘발되므로 상기 방법으로 얻은 추출물을 화장료 조성물로서 사용할 수 있으며, 공용매는 감압증발기로 제거할 수 있다.

또한 상기 초음파 추출법은 초음파 진동에 의해 발생되는 에너지를 이용하는 추출방법으로, 초음파가 수용성 용매 속에서 시료에 포함된 불용성인 용매를 파괴시킬 수 있으며, 이때 발생되는 높은 국부온도로 인하여 주위에 위치하는 반응물 입자들의 운동에너지를 크게 하기 때문에 반응에 필요한 충분한 에너지를 얻게 되고, 초음파 에너지의 충격효과로 높은 압력을 유도하여 시료에 함유된 물질과 용매의 혼합 효과를 높여주어 추출효율을 증가시키게 된다.

초음파 추출법에 사용할 수 있는 추출용매는 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 헥산 및 디에틸에테르로 이루어진 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 사용할 수 있다. 추출된 시료는 진공 여과하여 여과액을 회수한 후 감압증발기로 제거하고, 동결 건조하는 통상의 추출물 제조방법을 통해 추출물을 얻을 수 있다.

본 발명에 따른 누리장나무 추출물은 발효과정을 거친 추출물도 포함하는데, 누리장나무의 발효추출물은 다음과 같이 제조할 수 있다. 누리장나무를 100~500메쉬 정도로 미세하게 파쇄 한 다음 통상적인 미생물 배양액을 1~50g/L를 첨가하고 효모균주 또는 유산균등의 미생물을 10,000~100,000 cfu/L의 양으로 첨가한다. 배양온도는 30~37℃의 통상적인 미생물 배양조건으로 배양한다. pH는 5~7로 호기적 또는 통상 혐기(anaerobic)적인 조건으로 약 5내지 10일간 배양한다. 이후 숙성 및 여과를 통해 얻을 수 있다.

본 발명에 따르면, 상기 누리장나무 추출물은 화장료 조성물의 전체 중량에 대해서 0.001 ~ 30.0 중량% 함유되며, 더욱 바람직하게는, 상기 누리장나무 추출물은 화장료 조성물의 전체 중량에 대해서 0.01 ~ 10 중량% 함유되는 것을 특징으로 한다. 상기 추출물의 함량이 0.001 중량% 미만인 경우에는 피부 개선 효과가 나타나지 않으며, 30.0 중량%를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 대한 피부 개선 효과 증대 정도가 미미하며, 제형상의 안전 및 안정성에 문제가 있으며 경제적이지도 못하다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서 상기 유효 성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이 등으로 제형화 될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 제형 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클렌징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비 함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 화장료 조성물은 단독 또는 중복하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.(문맥상 순서 변경)

본 발명의 누리장나무 추출물을 포함하는 화장료 조성물을 이용하는 화장방법을 수행하면, 멜라닌 생성 억제 효과를 통해 피부 미백효과를 얻을 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

실시예 1: 누리장나무 추출물 제조

세절하여 음건한 누리장나무 1kg 분쇄하고, 이 분쇄물에 70% 에탄올 5L를 부가한 다음 냉각콘덴서가 부착된 추출기에서 80℃온도에서 3시간 동안 가열하여 추출하였다. 이 추출물을 300메쉬 여과포로 여과한 다음 와트만 2번 여과지로 여과하고, 냉각콘덴서가 달린 증류장치로 60℃온도에서 감압 농축하여 11.5g의 추출물을 얻었다.

비교예 1~2

정제수로 세척하고 건조한 상지(비교예1), 기존에 티로시나제 활성효과가 있는 것으로 알려진 알부틴(비교예2)을 비교물질로 하였다.

실험예 1: 누리장나무 추출물의 티로시나제 활성 억제 효과

먼저 기질인 티로신을 0.05M 인산나트륨 완충용액(pH6.8)에 녹여 0.1mg/ml의 용액(기질액)을 준비하고, 누리장나무 추출물(실시예1) 100mg을 50% 1,3-부틸렌글리콜 10ml에 용해시키고, 다시 완충용액에 희석하여 10,50,100, 200,500,1000ug/ml로 조절하여 추출물 시료액을 준비하였다. 기질액 0.5ml을 시험관에 넣은 다음, 추출물 시료액 0.5ml를 가하고 37℃ 항온조에서 10분간 반응시킨 후, 버섯류(mushroom)로부터 추출한 200U/ml 티로시나제 용액(SIGMA사 제품)0.5ml씩을 가하여 교반한 다음, 다시 7℃ 항온조에서 10분간 반응시켰다. 이 반응액이 든 시험관을 얼음위에 놓아 급냉시켜 반응을 중지시키고 분광광도계(spectrophotometer)로 475nm에서 흡광도를 측정하였다.

하기 수학식에 따라 농도별 티로시나제 활성 저해 율을 계산한 후, 그 결과를 표1에 나타내었다.

또한, 누리장나무 추출물 대신에 완충용액을 0.5ml를 사용한 것을 대조군으로 하여 동일한 방법에 의해 흡광도를 측정하였으며, 이로부터 티로시나제 활성 억제능을 계산하였다.

실험예 2. 누리장나무 추출물과 종래 미백물질의 티로시나제 활성 저해효과의 비교

누리장나무 추출물의 티로시나제 활성 저해효과를 종래 미백물질로 개발된 상지, 알부틴 미치 알부틴의 티로시나제 활성 저해효과와 비교하였다.

누리장나무 추출물(실시예1)과 종래의 미백물질(비교예1~2)의 티로시나제 활성 저해효과를 실험예 1과 동일한 방법으로 측정하였으며, 그 결과를 하기의 표2에 나타내었다.

상기 표2에서 알 수 있는 바와 같이, 티로시나제 활성을 50% 저해하는 누리장나무 추출물의 농도는 57.9ug/ml로, 상지추출물(비교예1)이 약 12.76ug/ml, 알부틴(비교예3)이 약 45.8ug/ml인 것을 고려할 때, 누리장나무 추출물의 티로시나제 활성 억제효과는 높은 것을 확인할 수 있었다.

실험예 3. 누리장나무 추출물의 B16F1 멜라닌형성세포를 이용한 멜라닌 생성 억제효과

본 실험예 3는 누리장나무 추출물의 미백 효과를 확인하기 위해 B16F1 멜라닌 형성 세포에 대한 멜라닌 생성 억제 정도를 보고 미백 효과를 판단한 것이다. 본 실험예 3에 사용된 B16F1 멜라닌 형성 세포는 마우스에서 유래한 세포균주이며, 멜라닌이라는 흑색 색소를 분비하는 세포이다.

이 세포의 인공 배양 중에 시료를 처리하여 멜라닌 흑색 색소가 감소하는 정도를 비교 평가하였다. 본 실험예에 사용된 B16F1 멜라닌 형성 세포는 ATCC(American Type Culture Collection)로부터 분양받아 사용하였다.

B16F1 멜라닌 형성 세포의 멜라닌 생합성 억제 효과 측정은 다음과 같이 행하였다.

B16F1 멜라닌 형성 세포를 6웰 플레이트에 각 웰당 2 X 10⁵ 농도로 분주하고 세포를 부착시킨 후 독성을 유발하지 않는 농도로 실시예1에 따른 누리장나무 추출물을 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 72시간 배양 후 세포를 트립신-EDTA로 떼어낸 후 세포수를 측정한 다음 원심분리하여 세포를 회수하였다. 세포 내 멜라닌의 정량은 로탄(Lotan: Cancer Res., 40: 3345-3350, 1980)의 방법을 약간 변형하여 실시하였다. 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후 균질화 버퍼액(50 mM 소듐 포스페이트, pH 6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF) 1ml를 첨가하여 5분간 와류하여 세포를 파쇄하였다. 원심분리 (3,000 rpm, 10분)하여 얻은 세포 여액에 1N NaOH(10% DMSO)를 첨가하여 추출된 멜라닌을 용해한 후 마이크로 플레이트 판독기로 405 nm에서 멜라닌의 흡광도를 측정한 다음 멜라닌을 정량하여 시료의 멜라닌 생성 저해율(%)을 측정하였다. B16F1 멜라닌 형성 세포의 멜라닌 생성 저해율을 (%)은 하기 수학식 2에 의하여 계산하였으며, 그 결과를 표 3에 기재하였다.

A : 시료를 첨가하지 않은 웰의 멜라닌 양

B : 시료를 첨가한 웰의 멜라닌 양

상기 표 3의 결과에서 알 수 있듯이, 멜라닌을 생성하는 세포인 멜라노사이트의 세포 배양에서는 누리장나무 추출물의 멜라닌 생성 억제능이 우수함을 알 수 있다.

제조예. 누리장나무 추출물을 함유하는 미백화장료 조성물 제조

이하, 상기 실시예1에서 얻은 누리장나무 추출물을 2.0중량%의 양으로 함유하는 미백화장료 조성물(제조예1) 및 알부틴을 2.0중량%의 양으로 함유하는 에센스 제형의 미백화장료 조성물(비교제조예1)을 제조한 후, 미백효능 시험을 실시하였다.

Para-P : 프로필파라옥시안산옥시에스테르

실험예 4. 누리장나무 추출물의 미백 효능 시험

본 발명의 누리장나무 추출물을 함유하는 화장료의 피부 미백 효능에 대한 임상실험을 실시하였다. 임상시험은 각 화장료의 실제 사용 테스트를 통하여 평가하였다.

본 발명의 미백화장료 조성물의 임상 미백효능을 시험하기 위하여, 색소침착증을 가지고 있는 건강한 성인 여성 40명을 무작위로 20명씩 2개 그룹(A 및 B)으로 나눈 후, A 그룹을 대상으로는 제조예1 화장료 조성물을, B그룹을 대상으로는 비교제조예1의 미백화장료 조성물을 각각 1일 2회씩 8주간 도포하였다. 이후, 피부색의 변화을 스펙트로포토미터(Minolta CM600-d)를 이용하여 색의 밝기 변화(L)를 측정하고, 복수의 숙련자에 의한 객관적 육안관찰과 피검자에 의한 주관적 육안관찰을 실시하여 미백효과를 측정하였다.

그 결과를 하기 표5에 나타내었다. 이때 미백효능 정도를 다음의 7등급으로 분류하여 평가하였다.

*미백효능 평가 기준:

-3 : 매우악화 -2:악화 -1:약간 악화 0: 변화 없음

1 : 약간 개선 2: 개선 3: 매우 개선

상기 표 5에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 누리장나무 추출물을 함유하는 미백화장료 조성물을 도포한 A그룹의 평균 L값은 3.30(p<0.01)이며, 알부틴을 함유한 미백화장료 조성물을 도포한 B그룹의 평균 L값은 2.03(p<0.05)이었고, 숙련자에 의한 미백 평가에서 A그룹은 1.4, B그룹은 0.60이었으며, 피검자에 의한 미백 평가에서는 A그룹은 1.1, B그룹은 0.6으로 나타났다.

실험예5 . 제형의 안정성 시험

본 발명의 미백화장료 제형의 안정성을 시험하기 위하여, 제조예1 및 비교제조예1을 45℃로 일정하게 유지되는 항온조에서 불투명 초자 용기에 담아 2주동안 보관하고, 또한 4℃로 일정하게 유지되는 완전히 차광된 냉장고 내에서 불투명 초자용기에 담아 2주동안 보관한 후 변색 정도를 비교측정하였다.

그 결과를 하기 표 6에 나타내었다. 이때 제품 변색 정도는 다음의 6등급으로 분류하여 평가하였다.

*제품 변색 평가 기준

0: 변화없음 1: 극히 조금 변함 2:조금 변함 3: 조금 심하게 변함 4: 심하게 변함 5:극히 심하게 변함

상기 표 6에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 누리장나무 추출물을 함유하는 미백화장료는 변색이 거의 되지 않아, 제형으로서의 안정성이 큼을 알 수 있다.

실험예 6.피부 자극시험

본 발명의 미백화장료의 피부자극 정도를 시험하기 위하여, 제조예1 및 비교제조예1를 건강한 성인 남,녀 20명을 대상으로 등부위에 5 x 20cm 크기로 각 시료의 일정량(20ul)을 24시간 동안 첩포한 후 제거하고 1시간, 24시간 경과 후 육안으로 피부상태 변화를 판독하였으며, 그 결과를 표 7에 나타내었다.

상기 피부자극성 실험결과에 나타난바와 같이, 본 발명의 누리장나무 추출물의 제조예1 및 비교제조예1에 비해 자극이 낮음을 확인할 수 있었다.

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현 예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (3)

1. 누리장나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 미백 화장료 조성물.
2. 제 1항에 있어서, 누리장나무 추출물은 상기 화장료 조성물의 전체 중량에 대하여 0.001 ~ 30.0 중량% 함유되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
3. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 누리장나무 추출물은 (a) 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 부틸 아세테이트, 디에틸에테르, 디클로로메탄, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 추출용매를 이용한 용매 추출법, (b) 초임계 추출법, (c) 초음파 추출법 또는 (d) 미생물로부터의 발효나 자연발효대사를 이용하여 추출된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.