KR20140059147A - 여성의 고혈압 발병 위험도 예측용 바이오마커 - Google Patents

여성의 고혈압 발병 위험도 예측용 바이오마커 Download PDF

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KR20140059147A
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김성주
박종근
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가톨릭대학교 산학협력단
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Abstract

본 발명은 레닌(renin) 유전자의 프로모터 영역에 위치한 rs6682082의 단일염기다형성(single nucleotide polymorphism, SNP)을 바이오마커로 포함하는 여성 고혈압 발병 위험도 예측용 조성물 및 여성 고혈압 발병 위험도 예측을 위한 정보를 제공하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 SNP는 고혈압 환자에서 뚜렷한 유전자형 빈도 차이를 보였을 뿐 아니라, 레닌 유전자상의 프로모터 영역에 위치하여 혈압 상승에 직접적인 역할을 하는 유전자이다. 또한 여성에 특이적이라는 특징이 있다. 따라서 여성의 고혈압 발병 가능성을 조기에 예측하여 고혈압 발병을 예방하는 데 중요하게 응용될 수 있을 것으로 기대된다.

Description

여성의 고혈압 발병 위험도 예측용 바이오마커{Biomarker for hypertension risk prediction in women}
본 발명은 여성의 고혈압 발병 위험도 예측용 바이오마커 및 이 바이오마커를 판별하여 여성의 고혈압 발병 위험도를 예측하기 위한 방법에 대한 것으로, 보다 구체적으로는 레닌(renin) 유전자의 프로모터 영역에 위치한 rs6682082의 단일염기다형성(single nucleotide polymorphism; SNP)의 대립유전자(allele)를 판별함으로써 여성 고혈압 발병 위험도 예측을 위한 정보를 제공하는 방법에 관한 것이다.
전 세계적으로 고혈압 유병률은 점점 증가하는 추세를 보여 2025년에는 29.2%(약 15억 6천만 명)에 육박할 것으로 추정되고 있으며, 국내에서도 식생활과 생활 패턴의 변화로 심혈관 질환과 관련하여 고혈압 질병이 증가하고 있다. 또한, 병에 대한 인지율도 1998년도에는 24.6%였으나, 2008년도에는 65.8%로 상승했으며, 치료율도 21.9%(1998년)에서 58.7%(2008년)로 상승하였다. 건강보험심사평가원과 국민건강보험공단이 공동으로 발간한 2007년 건강보험 통계연보에 따르면, 2003년과 2007년을 비교하여 4년 사이에 고혈압 관련 진료비는 63.3%로 증가하였다. 이와 같은 현상은 치료율과 인지율의 증가에 따라 고혈압치료제 시장규모도 꾸준히 증가하고 있으며, 한국인의 고혈압 증가에 따른 치료와 고혈압 연구에 대한 관심이 증대되고 있다는 것을 의미한다. 통계청의 주요 사망원인별 사망률 추이(2001년~2010년) 조사에 의하면 우리나라 국민의 사망원인은 암 > 순환기계통 질환 > 소화기 계통내분비 및 대사성 질환 순으로 밝혀졌는데, 고혈압은 순환기계통 질환 및 내분비, 대사성 질환과 밀접한 관계가 있어 사망원인에 미치는 영향이 매우 크다. 따라서 고혈압에 대한 연구의 중요성이 대두되었다.
고혈압의 주된 발병 원인으로는 말초 혈관 저항의 증가, 엔도세린(endothelin; ET)의 작용, 유리 산소라디칼의 증가와 nitric oxide의 작용, 인슐린 저항성에 따른 혈관의 수축 및 레닌-엔지오텐신 시스템(renin-agiotensin system) 이상 등이 알려져 있다. 이 중 최근에 연구가 활발히 진행되고 있는 레닌-엔지오텐신 시스템은 체내 혈압이 떨어지면 레닌(renin)이 엔지오텐시노겐(angiotensinogen)을 엔지오텐신 I(angiotensin I)으로 전환하고, 엔지오텐신 전환 효소(angiotensin converting enzyme; ACE)가 엔지오텐신 I(angiotensin I)을 활성호르몬인 엔지오텐신 II(angiotensin II)로 전환하여 체내 혈압 증가, 교감신경 활성화 및 전해질의 균형을 이루게 하는 역할을 하고 있다.
레닌 유전자의 돌연변이는 여러 가지 질환과 연관성이 있음이 밝혀져 있다. 일 예로, 레닌 유전자 변이가 신장 관련 질환과 연관성이 있음이 보고된 바 있으며(루이신16삭제;Leu16del, 루이신16아르기닌;Leu16Arg), 레닌 유전자의 돌연변이와 고혈압과의 연관성도 보고된 바 있다. 또한 미국인 집단에서 레닌 유전자의 이형성(dimorphisms)인 BglI과 MboI의 haplotype과 본태성고혈압과의 연관성이 보고되었으며, 레닌 유전자의 3개의 단일염기다형(인트론4;T+17int4G, 인트론7;VNTR, 엑손9;G1051A)을 분석하여 일본인 집단에서 G1051A가 고혈압과 연관성이 있음이 밝혀졌다. 뿐만 아니라, 레닌의 AA와 AG 유전자형에 비하여 GG 유전자형에 따라 레닌의 혈장 농도가 차이를 보인다고 보고되었다.
최근, 서구식 식생활 및 생활 패턴의 변화에 따라 고혈압과 같은 생활습관에 의한 질환을 앓는 자가 급격히 증가하고 있는 추세이지만, 환경적인 요인의 통제를 통한 질병 억제에는 한계가 있으므로 이를 효과적으로 극복하기 위해서는 근본적인 유전적인 요인들에 대한 이해가 요구되고 있다. 최근에는 단일염기다형성(single nucleotide polymorphism, SNP) 분석 기술의 개발 등으로 유전자형에 따른 질병 발병의 연관성이 밝혀지고 있으며 이에 대한 연구가 전세계적으로 활발히 진행되고 있다. 따라서 국내에서도 한국인의 유전자형에 따른 질병 발병의 연관성을 밝히고, 이에 대한 정보를 확보한다면 질병 발병률을 현저히 낮출 수 있을 것으로 기대되고 있다.
이러한 배경에 기초하여, 본 발명자들은 여성에게 특이적인 본태성고혈압의 위험성을 조기에 진단할 수 있는 신규단일염기다형성에 대하여 연구한 결과 레닌 유전자 상에서 rs6682082 SNP의 염기서열이 고혈압 발병 위험도에 큰 영향을 준다는 사실을 발견하여 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명은 상기와 같은 배경에서 안출된 것으로, 레닌(renin) 유전자의 프로모터 영역에 위치한 rs6682082를 바이오마커로 포함하는 여성 고혈압 발병 위험도 예측용 조성물 및 여성 고혈압 발병 위험도 예측을 위한 정보를 제공하는 방법 등을 제공함을 목적으로 한다.
그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
본 발명은 레닌(renin) 유전자의 프로모터 영역에 위치한 rs6682082을 바이오마커로 포함하는, 여성 고혈압 발병 위험도 예측용 조성물을 제공한다.
본 발명은 레닌(renin) 유전자의 프로모터 영역에 위치한 rs6682082의 대립유전자를 판별하는 단계를 포함하는, 여성의 고혈압 발병 위험도 예측을 위한 정보를 제공하는 방법을 제공한다.
상기에서 rs는 reference sequence의 약자로, 뒤의 숫자는 NCBI dbSNP 데이터베이스에서 제공하는 단일염기다형성을 나타내는 고유번호이다.
본 발명의 일 구현예로, 상기 여성은 한국인인 것을 특징으로 한다. 그러나 본 발명은 한국인 외의 민족성(ethnicity)을 가진 여성에도 적용될 수 있으며, 한국인에 제한되지 않는다. 본 발명은 한국인에서 채취한 샘플로 실험을 수행하여 완성하였으나, 본 발명과 같이 유전자의 프로모터 영역에 위치한 SNP의 경우 유전자의 발현을 조절할 수 있으며 이는 민족성이나 인종에 관계없이 발현조절에 관여하는 것이 분자생물학적으로 밝혀져 있다. 인종이 아니라 genetic factor가 유전자의 발현에 중요하다는 것을 보여주는 사실을 뒷받침하는 내용은 Evaluation of Genetic Variation Contributing to Differences in GeneExpression between Populations AJHG Volume 82, Issue 3, 3 March 2008, Pages 631640에 기재되어 있다.
상기 rs6682082가 A인 경우가 G인 경우보다 레닌유전자 프로모터의 활성도가 높으며 특이적 전사인자와의 결합력도 높다. 따라서 rs6682082의 대립유전자형이 A인 경우가 G 인 경우 보다 레닌의 발현이 높을 것으로 예측된다. 또한 특이적으로 rs6682082의 AA 유전자형과 AG 유전자형의 빈도가 대조군 대비 여성 본태성고혈압 환자에서 더 높으며 이들 유전자형을 가지고 있는 여성의 평균혈압이 GG 유전자형의 여성의 혈압보다 높은 것으로 밝혀졌다. 따라서 rs6682082의 유전자형이 AA, AG인 경우가 GG 인 경우보다 고혈압 발병 위험이 높은 것으로 예측할 수 있다.
본 발명의 일 구현예로서, 상기 판별 단계는 시퀀싱 분석, 마이크로어레이(microarray)에 의한 혼성화, 대립유전자 특이적 PCR(allele specific PCR), 다이나믹 대립유전자 특이적 혼성화 기법(dynamic allele-specific hybridization, DASH), TaqMan 기법, SnapShot 기법 또는 PCR 연장 분석에 의하여 수행되는 것을 특징으로 하는 방법이 될 수 있다. 그러나 이에 제한되지 않으며, rs6682082를 판별할 수 있는 방법이면 어느 것이든 이용 가능하다.
또한 본 발명은 레닌(renin) 유전자의 프로모터 영역에 위치한 rs6682082의 대립유전자를 판별하기 위한 프라이머 또는 프로브를 포함하는, 여성 고혈압 발병 위험도 예측용 조성물을 제공한다.
rs6682082 주위의 염기서열 정보에 대해서는 NCBI dbSNP에서 얻을 수 있다. 따라서 본 발명에서 프라이머 및 프로브는 당업자가 rs6682082 SNP 전후의 염기서열을 포함하여 임의의 길이로 다양하게 제작할 수 있음이 자명하다.
다만, 가장 바람직하게는 본 발명의 일 구현예로서, 상기 프라이머는 서열번호 1의 염기서열로 표시되는 전방향 프라이머 및 서열번호 2의 염기서열로 표시되는 역방향 프라이머일 수 있다.
본 발명의 다른 구현예로서, 상기 프로브는 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 또는 서열번호 7의 염기서열로 표시되는 것일 수 있다.
이에 더하여, 본 발명은 상기 조성물을 포함하는 여성 고혈압 발병 위험도 예측용 키트를 제공한다. 본 발명의 용어 키트는 각종 전처리에 필요한 물질 및 분석에 필요한 물질 등을 모두 포함하는 구성으로 상용화할 수 있는 세트를 의미하는 것으로, 당업계에 알려진 일반적인 방법에 의해 구성될 수 있다.
본 발명의 바이오마커는 본태성고혈압 환자에서 뚜렷한 빈도 차이를 보였을 뿐 아니라, 레닌 유전자상의 프로모터 영역에 위치하여 혈압 상승에 직접적인 역할을 하는 마커이다. 또한 여성에 특이적이라는 특징이 있다. 따라서 여성의 고혈압 발병 가능성을 조기에 예측하여 고혈압 발병을 예방하는 데 중요하게 응용될 수 있을 것으로 기대된다.
도 1은 레닌(renin)의 프로모터 유전자의 프로모터 활성도 분석을 나타낸 도이다.
도 2는 rs6682082가 포함된 레닌(renin) 프로모터 유전자의 전사 조절인자를 분석한 도이다.
도 3은 폐경 후 여성에서 rs6682082의 유전자형에 따른 혈압(수축기혈압과 확장기혈압)의 연관성을 분석한 도이다.
도 4는 염색체상에서 rs6682082의 위치를 나타낸 도이다.
본 발명에서는 통계학적인 분석을 통해 rs6682082 와 고혈압과의 연관성을 제시하였으며, 고혈압에 영향을 줄 수 있는 여러 변수의 보정을 통해 rs6682082의 유전형과 고혈압과의 독립적인 연관성을 제시하였다.
또한 rs6682082가 레닌 유전자의 프로모터 영역에 위치하고 있으므로 레닌 유전자의 전사 조절에 영향을 주는지 여부를 프로모터 활성도 분석 및 EMSA를 이용해 확인하였다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
[실시예]
실시예 1. rs6682082 와 고혈압과의 연관성을 분석하기 위한 집단의 구성
연세대학교 의료원 심혈관계질환 유전체 연구센터와 국립 보건원에서 진단 마커의 분석을 위한 시료를 분양받아 본 발명에 활용하였다. 고혈압 진단 마커 분석을 위해서 대조군 집단 1329명과 본태성고혈압 환자 집단 646명으로 구성된 총 1975명의 한국인 인구 집단을 구성하였다. 성별에 따른 구성으로는 남성은 전체 970명 중 대조군 집단 676명과 본태성고혈압 환자 집단 294명이었고, 여성의 경우는 대조군 집단 653명과 본태성고혈압 환자 집단 352명이었다. 혈압 측정은 내원한 환자를 적어도 10분 이상의 휴식을 취하게 한 후, 3분 간격으로 두 번 측정하여 평균을 구하여 측정하였으며, 수축기 혈압 140mmHg(SBP) 이상 또는 확장기 혈압 90mmHg(DBP) 이상의 경우를 고혈압으로 정의하였다. 그리고 참여자의 의무기록과 설문조사를 통하여 연령, 성별, 흡연 및 여성의 경우 폐경 유무를 조사하였으며, 체질량지수(BMI), 총콜레스테롤(TCHO), 중성지방(TG), 고밀도콜레스테롤(HDL), 저밀도 콜레스테롤(LDL), 혈당 등을 함께 측정하였다. 측정 결과는 하기 표 1에 나타내었다.
Variables Male Female
Normotensives Hypertensives P Normotensives Hypertensives P
Number 676 294 653 352
Age (y) 52.07±9.77 51.66±9.89 0.5423 51.26±9.91 51.88±8.44 0.3023
onSBP*
(mmHg)		 108.08±12.48 161.68±21.20 0.0000 111.51±12.17 159.49±23.62 0.0000
onDBP*
(mmHg)		 69.97±8.94 103.64±13.96 0.0000 71.06±7.65 100.27±16.73 0.0000
BMI*
(kg/m2)		 22.63±2.48 25.35±2.88 0.0000 22.86±2.77 24.74±3.28 0.0000
TG
(mg/dl)		 133.24±79.55 162.00±78.73 0.0000 117.25±64.30 140.45±69.46 0.0000
TCHOL
(mg/dl)		 193.61±35.68 197.78±36.74 0.0976 201.22±36.78 203.35±41.19 0.4024
HDL-C
(mg/dl)		 48.26±11.88 42.91±10.73 0.0000 52.08±12.17 48.43±11.96 0.0000
LDL-C
(mg/dl)		 118.69±33.81 122.46±33.53 0.1100 125.70±34.43 126.82±35.86 0.6260
Glu
(mg/dl)		 88.66±16.37 85.57±14.42 0.0068 85.57±14.42 85.50±16.38 0.0000
Data values are means standard deviation and numbers ; SBP, systolic blood pressure; DBP, diastolic blood pressure; BMI, body mass index; TG, triglyceride; TCHOL, total cholesterol; HDL-C, high-density lipoprotein cholesterol; LDL-C, low-density lipoprotein cholesterol; FPG, fasting plasma glucose.
Age difference was not significant. SBP, DBP were BP prior to medication.
P-value was estimated by Student's t-test.
실시예 2. 집단에서의 DNA 추출 및 유전자 동정
본 발명에서 활용을 위해 집단 내 채취한 말초혈액에서 genomic DNA를 genomic DNA purification kit(promega社)을 사용하여 추출하였다. rs6682082의 유전자형을 분석하기 위해 Applied Biosystems SNaPshot 분석을 실시하였다. 특이적인 oligonucleotide 프라이머쌍과 probe은 다음과 같다.
Foward : 5'-TGT TTC CCA GCC TAA AAT AAT-3' (서열번호 1)
Reverse : 5'-ACA GGT TAT CTA AAT GGG CTT C-3' (서열번호 2)
probe : 5'-TCA CAC TAC AGA AAG TTT TTC TTT G-3' (서열번호 3)
분석에는 Applied Biosystems사의 오토매틱 DNA 분석기(ABI 3730Xl DNA analyzer)를 이용하였다.
실시예 3. 통계학적 분석을 통한 rs6682082 와 고혈압과의 연관성 분석
rs6682082는 쌍으로 이루어진 상동염색체에서 동형접합체인 AA(아데닌,아데닌)와 GG(구아닌,구아닌), 또는 이형접합체인 AG(아데닌,구아닌)의 3가지 유전자형으로 존재한다. rs6692082의 SNP와 고혈압의 연관성을 조사하기 위하여, 사례-대조 연구를 위한 Ⅹ2(카이자승) 검정과 로지스틱 회귀 분석을 이용한 통계학적 분석을 수행하였다.
3-1.Ⅹ 2 ( 카이자승 ) 검정
통계학적 도구(SAS Ver 9.2, 및 Excel 등)를 활용하여 Χ2(카이자승) 검정분석을 시행하였다. 검정 결과는 하기 표 2에 나타내었다.
Genotype
/Allele 		Male Female
Normotensives
(n=676)		 Hypertensives
(n=294)		 P Normotensives
(n=653) 		Hypertensives
(n=352)		 P
AA 9
(0.013)		 9
(0.031)		 0.1752 5
(0.008)		 1
(0.003)		 0.0188*
AG 150
(0.222)		 67
(0.228)		 116
(0.178)		 87
(0.247)
GG 517
(0.765)		 218
(0.741)		 532
(0.815)		 264
(0.750)
AA,AG 159
(0.235)		 76
(0.259)		 0.4364 121
(0.185)		 88
(0.250)		 0.0159
A 168
(0.124)		 85
(0.145)		 0.2224 126
(0.096)		 89
(0.126)		 0.0383
G 1184
(0.876)		 503
(0.855)		 1180
(0.904)		 615
(0.874)
HWE 0.6113 0.1780 0.6284 0.0256
*Fisher's exact test was employed for this P value.
HWE : Hardy-Weinberg equilibrium
표 2에 나타난 바와 같이, rs6682082는 남성에서는 본태성고혈압과 연관성이 발견되지 않았으나 여성에서는 본태성고혈압과의 연관성이 발견되었다(co-dominance: p=0.0188, A-dominance : p=0.0159). 유전자형뿐만 아니라 대립유전자도 여성의 본태성고혈압과 연관성이 있는 것으로 밝혀졌다 (p=0.0383).
3-2. 로지스틱 회귀 분석
또한 로지스틱 회귀 분석을 통해 rs6682082의 유전자형에 따른 고혈압 위험도 분석을 실시하였다. 그 결과는 하기 표 3에 나타내었다.
Genotype Male Female
OR 95%CI P OR 95%CI P
A-Dominance 1.096 0.764 1.571 0.6179 1.493 1.069 2.086 0.0187
A-Recessive 2.007 0.714 5.643 0.1867 0.416 0.047 3.69 0.4308
A-Dominance;AA+AG vs. GG, A-recessive;AA vs. AG+GG Adjusted for BMI, creatinine, HDL, TG and Glucose
표 3에 나타난 바와 같이, 로지스틱 회귀 분석시 여성의 rs6682082의 유전자형에 따라 고혈압 위험도에 차이가 있는 것으로 분석되었다. rs6682082에 대하여 A-dominance분석에서 OR:1.493 (95%CI 1.069-2.086, p=0.0187)으로 분석되었다. 본 분석결과는 표1에서 언급한 임상변수 중 고혈압군과 일반군에서 차이를 보이는 임상변수(BMI, creatinine, HDL, TG, Glucose)에 대하여 보정한 결과이다. 이는 rs6682082의 유전자형이 여성 본태성고혈압의 독립적인 위험인자이며 GG 유전자형에 비해 AA 와 AG 유전자형을 가진 여성군이 고혈압에 대한 위험도가 높다는 것을 의미한다.
실시예 4. rs6682082 의 유전자형에 따른 프로모터의 활성도 분석
rs6682082는 레닌 유전자의 프로모터 영역에 위치하고 있기 때문에, rs6682082의 유전자형에 따라 레닌 유전자의 발현정도가 달라 궁극적으로 혈압 상승에 영향을 미칠 것으로 추정되어 이를 동정 하였다. rs6682082의 유전자형에 따라 레닌 유전자 프로모터의 활성이 차이가 있는지 확인하기 위하여 하기의 실험을 수행하였다.
Gaussia luciferase 플라스미드(NEB社) backbone에 rs6682082 부분을 포함하는 레닌유전자 프로모터 부위(-2876 ~ -7 bp)를 클로닝 해 삽입하여 리포터인 luciferase의 발현을 조절할 수 있는 리포터 constructor를 제작하였다. 이 때, A 대립유전자 클론, G 대립유전자 클론, rs6682082가 A 대립유전자이나 그 외 부분의 염기서열은 G 대립유전자와 동일한 G(A) 클론 등 세 가지 construct를 제작하였다. G(A) 클론은 G 대립유전자 클론을 활용하여 site directed mutagenesis 방법으로 G를 A로 치환하여 제작하였다. 각 클론의 프로모터 활성도를 luciferase assay를 이용하여 측정한 결과, G 대립유전자에 비해 A 대립유전자가 약 2.4배 높은 활성도를 보였고(p=0.0333), G(A) 클론도 G 대립유전자에 비해 약 2.05배의 활성도를 보였다(p=0.0143). 실험 결과는 도 1에 나타내었다.
실시예 5. Electrophoretic Mobility Shift Assay( EMSA )
rs6682082의 대립유전자에 따라 레닌 유전자의 프로모터 활성도에 차이가 있음을 실시예 4에서 확인했으므로, 대립유전자에 따라 이 SNP를 인식하는 전사인자의 존부 및 결합친화력 (binding affinity)에 차이가 있는지 조사하기 위해 하기의 실험을 수행하였다.
EMSA 실험은 calu-6(human, caucasian, lung, carcinoma, anaplastic)세포의 nuclear extract를 NE-PER Nuclear and cytoplasmic extraction reagents(thermo scientific)를 사용하여 추출한 후, rs6682082 SNP를 포함하는 25bp oligonucleotide 프로브와 반응하여 실행하였다. rs6682082 SNP를 포함하는 프로브의 염기서열은 다음과 같으며 조사대상의 염기서열은 밑줄로 표시하였다.
A 유전자형 5`-GCT ACC AAA AAC A CAA AGA AAA ACT-3`(서열번호 4)
5`-AGT TTT TCT TTG T GTT TTT GGT AGC-3`(서열번호 5)
G 유전자형 5`-GCT ACC AAA AAC G CAA AGA AAA ACT-3`(서열번호 6)
5`-AGT TTT TCT TTG C GTT TTT GGT AGC-3`(서열번호 7)
특이적인 프로브에 [32P]-ATP 동위원소를 end-labeling으로 표지한 후 calu-6 핵추출물과 반응시킨 조성물을 아크릴아마이드 젤에서 분리하였다. 전기영동 후 X-lay 필름에 감광하여 단백질 추출물과 상호작용한 프로브의 위치 및 강도를 분석하였다. 각각의 유전자형 프로브에 서로 다른 반응물을 첨가하여 프로브의 특이성을 동정하였다. 각 실험에 첨가된 반응물은 도 2의 상단에 + 로 표시하였다. 그 결과 단백질 추출물이 첨가되지 않은 반응물에서는 프로브만 검출되었지만(도 2의 free probe로 표시된 화살표) 핵추출물이 첨가된 나머지 반응물에서는 단백질이 결합된 프로브가 천천히 이동하여 분자량이 큰 밴드(도 2의 shifted band로 표시된 화살표)로 검출되었다. multi gauge V3.0 프로그램 (FUGIFILM社)으로 조사한 결과 밴드의 강도가 A 대립유전자가 G 대립유전자보다 1.65배 높은 것으로 분석되었다. 이 결과는 rs6682082 DNA 염기서열을 인식하는 전사인자가 존재하며, 이때 전사인자와의 친화도는 G 대립유전자에 비해 A 대립유전자가 높은 것으로 분석되었다(도 2).
상기 결과는 실시예 4에서 A 대립유전자의 promoter 활성도가 더 높은 것과 일맥상통하는 결과로, 이 전사인자가 레닌유전자의 발현을 활성화시키는 인자(transcriptional activator)로서 rs6682082의 유전자형에 따라 레닌유전자 전사를 조절하는 기능을 수행할 가능성을 시사한다.
실시예 6. rs6682082 유전자형이 혈압에 미치는 영향 분석
rs6682082의 유전자형이 혈압에 직접적으로 연관성이 있는지 여부를 조사하기 위해 하기의 실험을 수행하였다
전체 여성 집단 내에서 폐경 전후를 구별하고 SAS 9.2 통계 프로그램을 사용하여 각 유전자형에 따른 혈압(수축기 혈압, 확장기 혈압) 수치의 차이를 검정하였으며, 폐경 전과 폐경 후 여성 각각 332명, 448명을 대상으로 혈압 측정을 수행하였다.
그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 폐경 후 여성에서 rs6682082 유전자형과 혈압의 강한 연관성이 관측되었다. 즉, 수축기 혈압에서 AA, AG 유전자형의 평균은 168.05±2.95 mmHg 인 반면, GG 유전자형의 평균은 160.57±1.50mmHg 인 것으로 나타나 유전자형에 따라 유의한 차이가 있음을 확인하였다(p=0.0031). 또한, 확장기 혈압의 경우도 AA, AG 유전자형의 평균은 105.32±2.37 mmHg 인 반면, GG 유전자형의 평균은 100.39±1.14mmHg 인 것으로 나타나 유전자형에 따라 유의한 차이가 있음을 확인하였다(p=0.0176). 따라서 폐경 후 여성에서 GG 유전자형 집단에 비해 AA와 AG 유전자형을 가진 집단이 수축기, 확장기 혈압 모두에서 유의하게 높은 차이가 있는 것으로 나타났다.
상기 결과는 rs6682082의 AA와 AG 유전자형이 폐경 후 여성에서 혈압 상승의 유전적 원인이 될 수 있다는 것을 강력히 시사하고 있다.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해되어야 한다.
<110> CATHOLIC UNIVERSITY INDUSTRY ACADEMIC COOPERATION FOUNDATION <120> Biomarker for hypertension risk prediction in women <130> PB13-11661 <150> KR 10-2012-0125614 <151> 2012-11-07 <160> 7 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> rs6682082 forward primer <400> 1 tgtttcccag cctaaaataa t 21 <210> 2 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> rs6682082 reverse primer <400> 2 acaggttatc taaatgggct tc 22 <210> 3 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> rs6682082 probe <400> 3 tcacactaca gaaagttttt ctttg 25 <210> 4 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> rs6682082 EMSA probe for A genotype <400> 4 gctaccaaaa acacaaagaa aaact 25 <210> 5 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> rs6682082 EMSA probe for A genotype <400> 5 agtttttctt tgtgtttttg gtagc 25 <210> 6 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> rs6682082 EMSA probe for G genotype <400> 6 gctaccaaaa acgcaaagaa aaact 25 <210> 7 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> rs6682082 EMSA probe for G genotype <400> 7 agtttttctt tgcgtttttg gtagc 25

Claims (7)

  1. 레닌(renin) 유전자의 프로모터 영역에 위치한 rs6682082를 바이오마커로 포함하는, 여성 고혈압 발병 위험도 예측용 조성물.
  2. 레닌(renin) 유전자의 프로모터 영역에 위치한 rs6682082의 대립유전자를 판별하는 단계를 포함하는, 여성의 고혈압 발병 위험도 예측을 위한 정보를 제공하는 방법.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 판별하는 단계는 시퀀싱 분석, 마이크로어레이(microarray)에 의한 혼성화, 대립유전자 특이적 PCR(allele specific PCR), 다이나믹 대립유전자 특이적 혼성화 기법(dynamic allele-specific hybridization, DASH), TaqMan 기법, SnapShot 기법 및 PCR 연장 분석으로 이루어진 군으로부터 선택되는 기법에 의하여 수행되는 것을 특징으로 하는, 방법.
  4. 레닌(renin) 유전자의 프로모터 영역에 위치한 rs6682082의 대립유전자를 판별하기 위한 프라이머 또는 프로브를 포함하는, 여성 고혈압 발병 위험도 예측용 조성물.
  5. 제4항에 있어서,
    상기 프라이머는 서열번호 1의 염기서열로 표시되는 전방향 프라이머 및 서열번호 2의 염기서열로 표시되는 역방향 프라이머인 것을 특징으로 하는, 여성 고혈압 발병 위험도 예측용 조성물.
  6. 제4항에 있어서,
    상기 프로브는 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 및 서열번호 7의 염기서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 여성 고혈압 발병 위험도 예측용 조성물.
  7. 제4항의 조성물을 포함하는, 여성 고혈압 발병 위험도 예측용 키트.
KR1020130134459A 2012-11-07 2013-11-06 여성의 고혈압 발병 위험도 예측용 바이오마커 KR20140059147A (ko)

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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RU2572336C1 (ru) * 2014-12-17 2016-01-10 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") Способ прогнозирования уровня артериального давления у больных гипертонической болезнью
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RU2703559C1 (ru) * 2019-06-17 2019-10-21 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования Читинская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения российской федерации Способ прогнозирования риска развития эссенциальной артериальной гипертензии

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