KR20140057632A - 아조 매개체 - Google Patents

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KR20140057632A
KR20140057632A KR1020147008166A KR20147008166A KR20140057632A KR 20140057632 A KR20140057632 A KR 20140057632A KR 1020147008166 A KR1020147008166 A KR 1020147008166A KR 20147008166 A KR20147008166 A KR 20147008166A KR 20140057632 A KR20140057632 A KR 20140057632A
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페터 크라츠쉬
미하엘 마르쿠안트
토마스 마이어
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Abstract

본 발명은 아조 화합물에 관한 것이며, 진단 방법에서 매개체로서의 이의 용도에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 이러한 아조 화합물을 포함하는 검출 시약, 키트 및 시험 요소에 관한 것이다.

Description

아조 매개체 {AZO MEDIATORS}
본 출원은 아조 화합물 및 진단 방법에서 매개체로서의 그의 용도에 관한 것이다. 또한, 본 출원은 그러한 아조 화합물을 포함하는 검출 시약, 키트 및 시험 요소에 관한 것이다.
진단 엘리먼트는 임상적으로 적절한 분석물 확인 방법의 중요한 구성요소이다. 이와 관련된 주된 초점은 특히 효소 기반 시스템을 사용하여 확인되는 분석물의 신속하고 정확한 측정이다. 이러한 과정에서 확인되는 분석물은 통상 촉매량으로 사용되는 적합한 효소, 조효소 및 임의로 매개체와 접촉되며, 이때 조효소가 물리화학적으로 변화 (예를 들어 산화 또는 환원) 되고, 그 뒤에 적합한 기술을 이용하여 탐지될 수 있다.
매개체가 부가적으로 사용되는 경우, 매개체는 분석물의 효소 전환 동안 물리화학적으로 변화된 조효소로부터 방출되는 산화환원 등가물을 통상적으로 광 인디케이터 또는 전극의 전도성 부품으로 전달하여 그 과정이 예를 들어 광학측정법으로 또는 전기화학적으로 탐지될 수 있다. 그 후 측정되는 값의 보정은 확인되는 분석물의 농도와의 직접적 관계를 산출한다.
분석물을 확인하는 시험 요소에서 사용되는 매개체는 선행 기술에서 공지되었고, 특히 칼륨 헥사시아노페레이트, 페로센 유도체, 퀴논, 옥사진, 페나진 및 티아진을 포함한다. 산화환원 등가물의 적합한 탐지 시스템으로의 직접 전달을 보장하고 특히 혈당의 전기화학적 확인에 사용될 수 있는 매개체에 대한 리뷰는 예를 들어 Takaminami (Materials Integration (2008), 21, 317-323) 및 Heller 등 (Chemical Reviews (2008), 108, 2482-2505) 에서 찾을 수 있다.
또다른 공지된 부류의 매개체는 US 5,206,147 및 US 5,286,362 에 공개된 니트로소아닐린을 포함한다. 산화환원 등가물의 직접 전달을 가능하게 하는 위에 기재된 매개체와 비교할 때, 니트로소아닐린은 실제 매개체의 전구체 화합물이 먼저 제조되고, 이것이 후속 단계에서 효과적 매개체로 환원되는 것을 특징으로 하며, 이는 블랭크 반응을 회피하는 장점을 갖는다.
그러나, 니트로소아닐린을 사용할 때의 문제점은 니트로소아닐린이 일반적으로 아족시 이량체를 형성하는 경향을 갖고, 아미노 기 및 메르캅토 기를 함유하는 물질에 대해 높은 반응성을 가지며 (J.A. Hinson; Advances in Experimental Medicine and Biology (1986), 197, 691-696), 이는 궁극적으로 원치 않는 부반응을 초래하고, 분석물 확인의 특이성 및 감도에 부정적으로 영향을 미칠 수 있다는 점이다.
따라서 본 발명이 기초하는 목적은 선행 기술의 단점이 적어도 부분적으로 제거된, 분석물의 정성적 및/또는 정량적 확인을 위한 매개체를 제공하는 것이었다. 특히 예를 들어 아스코르브산에 의한 매개체의 환원과 같은 블랭크 반응의 발생이 회피되는 동시에 예를 들어 매개체의 이량체와 같은 부산물 또는 매개체와 아미노 기 및/또는 메르캅토 기를 함유하는 물질과의 제어되지 않는 반응의 산물의 형성이 최소화되도록 매개체가 고안되어야 한다. 게다가 매개체는 니트로소아닐린에 비해 가수분해에 대한 저항성이 더 높아야 하며, 한편 수용가능한 반응 속도를 가져야 한다.
상기 목적은 본 발명에 따라 하기 일반식 (I) 의 아조 화합물을 이용하여 달성된다:
Figure pct00001
[식 중,
R1 은 OR7 및 NR7R8 을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고;
R2, R3, R4 및 R5 는 서로 독립적으로 H, 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬, 헤테로아릴, CN, COO-, 할로겐, O(알킬), O(아릴), NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴), N(아릴)2, NO2 및 SO3 - 를 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고, 이때 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬, 헤테로아릴, O(알킬), O(아릴), NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴) 또는 N(아릴)2 는 COO-, N(알킬)3 +, NH-C(=NH2)-NH2 +, OH, O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), OPO3 2 -, PO3 2 - 및 SO3 - 를 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 함유할 수 있고;
R6 은 C(=X)NR9R10, C(=X)NHOH 및 C(=X)R9 를 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기이고;
R7 은 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬 및 헤테로아릴을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고, 이때 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴은 COO-, N(알킬)3 +, NH-C(=NH2)-NH2 +, OH, O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), OPO3 2 -, PO3 2- 및 SO3 - 를 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 함유하고,
R8 은 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬 및 헤테로아릴을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고, 이때 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴은 COO-, N(알킬)3 +, NH-C(=NH2)-NH2 +, OH, O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), OPO3 2 -, PO3 2- 및 SO3 - 를 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 함유할 수 있거나, 또는
R7 및 R8 은 이들이 결합되어 있는 N 원자와 함께 5-원 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고, 상기 헤테로사이클은 N, O 및 S 를 포함하는 군으로부터 선택되는 추가의 헤테로원자 및 COO-, N(알킬)3 +, NH-C(=NH2)-NH2 +, OH, O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), OPO3 2 -, PO3 2 - 및 SO3 - 를 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 함유할 수 있고,
R9 및 R10 은 서로 독립적으로 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬 및 헤테로아릴을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고, 이때 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴은 CN, COO-, 할로겐, NH2, NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴), N(아릴)2, NH-C(=NH2)-NH2 +, NO2, OH, O(알킬), O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), O(아르알킬), O(아릴), OPO3 2 -, PO3 2 - 및 SO3 - 를 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 함유할 수 있거나, 또는
R9 및 R10 은 이들이 결합되어 있는 N 원자와 함께 5-원 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고, 상기 헤테로사이클은 N, O 및 S 를 포함하는 군으로부터 선택되는 추가의 헤테로원자 및/또는 CN, COO-, 할로겐, NH2, NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴), N(아릴)2, NH-C(=NH2)-NH2 +, NO2, OH, O(알킬), O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), O(아르알킬), O(아릴), OPO3 2 -, PO3 2 - 및 SO3 - 를 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 함유할 수 있거나, 또는
X 는 O 및 S 를 포함하는 군으로부터 선택되는 헤테로원자를 나타내고;
n 은 1 내지 6 의 정수를 나타내고;
단, R2, R3, R4 및 R5 를 포함하는 군으로부터 선택되는 2 개 이상의 잔기는 잔기 H 를 나타냄].
도 1: 0　mg/dl, 100　mg/dl, 200　mg/dl, 300　mg/dl, 400　mg/dl 및 500　mg/dl 의 글루코오스 농도에서 FAD-의존성 글루코오스 탈수소효소의 존재 하에 매개체 4-[비스-(2-히드록시에틸)-아미노]-벤젠디아조카르바미드 (7) 의 시클로볼타그램. 시간 단위 당 전압 변화: 100 mV/초.
도 2: 0　mg/dl, 100　mg/dl, 200　mg/dl, 300　mg/dl, 400　mg/dl 및 500　mg/dl 의 글루코오스 농도에서 NAD-의존성 글루코오스 탈수소효소 및 카르바NAD 의 존재 하에 매개체 4-[비스-(2-히드록시에틸)-아미노]-벤젠디아조카르바미드 (7) 을 사용하는 글루코오스의 전환의 동력학. 5 초, 10 초, 15 초 및 20 초의 시간 기간 후 전류를 200mV 의 적용된 전위에서 각 경우에 대해 측정하였다.
도 3: 다양한 환원제를 사용하는 4-[비스-(2-히드록시에틸)-아미노]-벤젠디아조카르바미드 (7) 의 환원의 동력학.
3A: 아스코르브산을 사용하는 환원 (확인을 보다 용이하게 하기 위해 측정 곡선을 화살표와 함께 표시함)
3B: 카르바NADH 를 사용하는 환원
3C: NADH 를 사용하는 환원.
본 출원의 범위 안에서 사용되는 용어 "알킬" 은 1-12 개의 탄소 원자 (1-12 개의 탄소 원자 중 임의의 하나에서 결합가를 가짐) 를 함유하는 포화, 선형 또는 분지형 탄화수소 잔기를 나타낸다. 알킬은 바람직하게는 1-8 개의 탄소 원자를 함유하는, 더욱 바람직하게는 1-6 개의 탄소 원자를 함유하는 탄화수소 잔기를 나타낸다. 특히 바람직한 알킬은 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, 이소-부틸, sec-부틸 및 tert-부틸을 포함한다.
본 출원의 범위 안에서 사용되는 용어 "시클로알킬" 은 3-12 개의 탄소 원자 (3-12 개의 탄소 원자 중 임의의 하나에서 결합가를 가짐) 를 함유하는 포화 또는 불포화, 시클릭 탄화수소 잔기를 나타낸다. 시클로알킬은 바람직하게는 3-10 개의 탄소 원자를 함유하는, 더욱 바람직하게는 3-8 개의 탄소 원자를 함유하는 시클릭 탄화수소 잔기를 나타낸다. 특히 바람직한 시클로알킬은 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로햅틸 및 시클로옥틸을 포함한다.
본 출원의 범위 안에서 사용되는 용어 "알케닐" 은 2-12 개의 탄소 원자 (2-12 개의 탄소 원자 중 임의의 하나에서 결합가를 가짐) 및 1 개 이상의 이중 결합을 함유하는 불포화, 선형 또는 분지형 탄화수소 잔기를 나타낸다. 알케닐은 바람직하게는 2-8 개의 탄소 원자를 함유하는, 더욱 바람직하게는 2-6 개의 탄소 원자를 함유하는 탄화수소 잔기를 나타낸다. 특히 바람직한 알케닐은 에테닐, 프로페닐 및 부테닐을 포함한다.
본 출원의 범위 안에서 사용되는 용어 "알키닐" 은 2-12 개의 탄소 원자 (2-12 개의 탄소 원자 중 임의의 하나에서 결합가를 가짐) 및 1 개 이상의 삼중 결합을 함유하는 불포화, 선형 또는 분지형 탄화수소 잔기를 나타낸다. 알키닐은 바람직하게는 2-8 개의 탄소 원자를 함유하는, 더욱 바람직하게는 2-6 개의 탄소 원자를 함유하는 탄화수소 잔기를 나타낸다. 특히 바람직한 알키닐은 에티닐, 프로피닐 및 부티닐을 포함한다.
본 출원의 범위 안에서 사용되는 용어 "아릴" 은 탄소 원자만을 고리 원자로서 함유하고, 3-14 개의 고리-형성 원자 중 임의의 탄소 원자에서 결합가를 갖는, 3-14 개의 고리 원자를 함유하는, 더욱 바람직하게는 6-10 개의 고리 원자를 함유하는 방향족 고리계를 나타낸다. 바람직한 아릴은 페닐, 나프틸, 안트라세닐 및 페난트레닐을 포함한다.
본 출원의 범위 안에서 사용되는 용어 "아르알킬" 은 하나 이상의 수소 원자가 위에 정의된 바와 같은 아릴 잔기로 치환되어 있는 위에 정의된 바와 같은 알킬 잔기를 나타낸다. 바람직한 아르알킬은 벤질 및 페네틸을 포함한다.
본 출원의 범위 안에서 사용되는 용어 "헤테로시클로알킬" 은 탄소 원자에 더하여 N, O 및 S 를 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 고리 원자로서 함유하고, 3-14 개의 고리-형성 원자 중 임의의 탄소 원자 또는 질소 원자에서 결합가를 갖는, 3-14 개의 고리 원자를 함유하는, 더욱 바람직하게는 5-7 개의 고리 원자를 함유하는 포화 또는 일부 불포화 고리계를 나타낸다. 바람직한 헤테로시클로알킬은 아제피닐, 디히드로푸릴, 디히드로피라닐, 이미다졸리디닐, 이미다졸리닐, 이소티아졸리디닐, 이속사졸리디닐, 모르폴리닐, 옥사졸리디닐, 피페라지닐, 피페리디닐, 피라졸리디닐, 피롤리디닐, 테트라히드로푸릴, 테트라히드로피라닐, 티아디아졸릴디닐, 티아졸리디닐 및 티오모르폴리닐을 포함한다.
본 출원의 범위 안에서 사용되는 용어 "헤테로아릴" 은 탄소 원자에 더하여 N, O 및 S 를 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 고리 원자로서 함유하고, 3-14 개의 고리-형성 원자 중 임의의 탄소 원자 또는 질소 원자에서 결합가를 갖는, 3-14 개의 고리 원자를 함유하는, 더욱 바람직하게는 5-6 개의 고리 원자를 함유하는 방향족 고리계를 나타낸다. 바람직한 헤테로아릴은 푸라닐, 이미다졸릴, 이소티아졸릴, 이속사졸릴, 옥사디아졸릴, 옥사졸릴, 피라졸릴, 피롤릴, 테트라졸릴, 티아디아졸릴, 티아졸릴, 티에닐, 트리아졸릴, 피라지닐, 피리다지닐, 피리딜, 피리미디닐 및 트리아지닐을 포함한다.
본 출원의 범위 안에서 사용되는 용어 "할로겐" 은 불소, 염소, 브롬 및 요오드를 포함한다.
바람직한 구현예에서, 본 발명에 따른 일반식 (I) 의 아조 화합물 중 R1 은 잔기 NR7R8 을 나타낸다.
본 발명의 또다른 바람직한 구현예에서, R2, R3, R4 및 R5 를 포함하는 군으로부터 선택되는 3 개 이상의 잔기는 잔기 H 를 나타내고, 한편 네번째 잔기는 H, 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬, 헤테로아릴, CN, COO-, 할로겐, O(알킬), O(아릴), NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴), N(아릴)2, NO2 및 SO3 을 포함하는 군으로부터 선택되는 임의의 잔기를 나타낼 수 있으며, 이때 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬, 헤테로아릴, O(알킬), O(아릴), NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴) 또는 N(아릴)2 은 위에 정의된 바와 같이 치환될 수 있다.
본 발명에 따른 일반식 (I) 의 아조 화합물 중 R2, R3, R4 및 R5 를 포함하는 군으로부터 선택되는 3 개 이상의 잔기가 잔기 H 를 나타내는 경우, R2 는 H 및 O(알킬)을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고, R3, R4 및 R5 는 각각 잔기 H 를 나타내는 것이 특히 바람직하게 여겨진다. 가장 바람직하게는 모든 잔기 R2, R3, R4 및 R5 가 H 를 나타낸다.
본 발명의 또다른 바람직한 구현예에서, R6 은 C(=X)NR9R10 및 C(=X)NHOH 를 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고, 이때 C(=X)NR9R10 이 가장 바람직하게 여겨진다. R6 은 가장 바람직하게는 잔기 C(=O)NR9R10 이다.
본 발명의 또다른 바람직한 구현예에서, R7 는 알킬 잔기를 나타내는데, 이때 알킬 잔기는 COO-, N(알킬)3 +, NH-C(=NH2)-NH2 +, OH, O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), OPO3 2 -, PO3 2 - 및 SO3 - 을 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 친수성 치환기를 포함하며, 그 결과로서 아조 화합물의 수용성이 개선될 수 있다. 상기 알킬은 더욱 바람직하게는 하나 이상의 OH 기, 특히 단일한 OH 기를 친수성 치환기(들)로서 포함한다.
본 발명의 추가의 바람직한 구현예에서, R8 는 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬 및 헤테로아릴을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고, 이때 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴은 COO-, N(알킬)3 +, NH-C(=NH2)-NH2 +, OH, O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), OPO3 2 -, PO3 2 - 및 SO3 - 을 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 친수성 치환기를 포함한다.
R8 은 더욱 바람직하게는 알킬 잔기를 포함하는데, 이때 알킬은 COO-, N(알킬)3 +, NH-C(=NH2)-NH2 +, OH, O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), OPO3 2-, PO3 2 - 및 SO3 - 을 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 친수성 치환기를 포함한다. 알킬은 더욱 바람직하게는 하나 이상의 OH 기, 특히 단일한 OH 기를 친수성 치환기(들)로서 포함한다.
가장 바람직한 구현예에서, R7 및/또는 R8 은, 특히 R7 및 R8 은 잔기 히드록시에틸을 나타낸다.
본 발명의 또다른 바람직한 구현예에서, R9 및 R10 은 서로 독립적으로 알킬 및 아릴을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고, 이때 알킬 또는 아릴은 OH, O(알킬) 및 O(아릴) 을 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 포함할 수 있다. 더욱 바람직하게는, R9 및 R10 은 서로 독립적으로 메틸, 에틸, 페닐, 히드록시메틸, 히드록시에틸, 히드록시페닐 및 메톡시페닐을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고, 이때 메틸, 에틸 및 히드록시에틸이 바람직한 것으로 간주된다.
본 발명의 대안적인 구현예에서, R9 및 R10 은 이들이 결합되어 있는 N 원자와 함께 5-원 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고, 이때 헤테로사이클은 N, O 및 S 를 포함하는 군으로부터 선택되는 추가의 헤테로원자 및/또는 CN, COO-, 할로겐, NH2, NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴), N(아릴)2, NH-C(=NH2)-NH2 +, NO2, OH, O(알킬), O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), O(아르알킬), O(아릴), OPO3 2 -, PO3 2 - 및 SO3 - 을 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 포함할 수 있다.
5- 또는 6-원 헤테로사이클이 치환되어 있는 경우, 상기 헤테로사이클은 COO-, N(알킬)3 +, NH-C(=NH2)-NH2 +, OH, O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), OPO3 2-, PO3 2 - 및 SO3 - 을 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 친수성 치환기를 포함하는 것이 바람직하다.
본 발명의 또다른 바람직한 구현예에서, X 는 산소 원자를 나타낸다.
본 발명에 따른, 바람직하게는 2-(에틸-{3-메틸-4-[(피페리딘-1-일카르보닐)디아제닐]페닐}-아미노)에탄올이 아닌, 화학식 (I) 의 아조 화합물은 본래 니트로소아닐린 매개체와는 대조적으로 아족시 이량체를 형성할 수 없다. 나아가, 본 발명에 따른 아조 화합물은 예를 들어 효소를 이용하는 것과 같은, 아미노기 및/또는 머캅토기를 포함하는 물질로 인해 반응을 일으킬 수도 있는 임의의 반응성 니트로소기를 갖고 있지 않다.
한편, 니트로소아닐린과 같은 맥락에서, 화학식 (I) 의 아조 화합물은 실제 매개체가 후속 환원에 의해서만 형성되는 독보적인 전구체 화합물이다. 따라서, 한편으로는 본 발명에 따른 아조 화합물은 블랭크 반응을 피하면서 니트로소아닐린에 대한 공지된 유익함을 갖고 있을 뿐만 아니라, 동시에 니트로소아닐린을 이용해 분석물을 결정할 때에 관찰되는 것과 같은 바람직하지 않은 부반응들을 피할 수 있다.
그러한 측면에서, 본 발명은 또다른 국면에서는 화학식 (I) 의 아조 화합물의 진단 방법에서의 매개체로서의 용도에 관한 것이다:
Figure pct00002
[식 중,
R1 은 OH, OR7, SR7, NHR7 및 NR7R8 을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고;
R2, R3, R4 및 R5 는 서로 독립적으로 H, 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬, 헤테로아릴, CN, COO-, 할로겐, O(알킬), O(아릴), NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴), N(아릴)2, NO2 및 SO3 - 을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고, 이때 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬, 헤테로아릴, O(알킬), O(아릴), NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴) 또는 N(아릴)2 은 CN, COO-, 할로겐, NH2, NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴), N(아릴)2, NH-C(=NH2)-NH2 +, NO2, OH, O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), O(알킬), O(아르알킬), O(아릴), OPO3 2 -, PO3 2- 및 SO3 - 을 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 포함할 수 있고;
R6 는 CN, C(=X)NH2, C(=X)NHR9, C(=X)NR9R10, C(=X)NHOH 및 C(=X)R9 을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기이고;
R7 및 R8 는 서로 독립적으로 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬 및 헤테로아릴을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고, 이때 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴은 CN, COO-, 할로겐, NH2, NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴), N(아릴)2, NH-C(=NH2)-NH2 +, NO2, OH, O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), O(알킬), O(아르알킬), O(아릴), OPO3 2 -, PO3 2 - 및 SO3 -, 을 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 포함할 수 있거나, 또는
R7 및 R8 은 이들이 결합되어 있는 N 원자와 함께 5-원 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고, 이때 헤테로사이클은 N, O 및 S 를 포함하는 군으로부터 선택되는 추가의 헤테로원자 및/또는 CN, COO-, 할로겐, NH2, NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴), N(아릴)2, NH-C(=NH2)-NH2 +, NO2, OH, O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), O(알킬), O(아르알킬), O(아릴), OPO3 2 -, PO3 2- 및 SO3 - 을 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 포함할 수 있고,
R9 및 R10 은 서로 독립적으로 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬 및 헤테로아릴을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고, 이때 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴은 CN, COO-, 할로겐, NH2, NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴), N(아릴)2, NH-C(=NH2)-NH2 +, NO2, OH, O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), O(알킬), O(아르알킬), O(아릴), OPO3 2 -, PO3 2 - 및 SO3 - 을 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 포함할 수 있거나, 또는
R9 및 R10 은 이들이 결합되어 있는 N 원자와 함께 5-원 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고, 이때 헤테로사이클은 N, O 및 S 를 포함하는 군으로부터 선택되는 추가의 헤테로원자 및/또는 CN, COO-, 할로겐, NH2, NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴), N(아릴)2, NH-C(=NH2)-NH2 +, NO2, OH, O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), O(알킬), O(아르알킬), O(아릴), OPO3 2 -, PO3 2- 및 SO3 - 을 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 포함할 수 있고;
X 는 O 및 S 를 포함하는 군으로부터 선택되는 헤테로원자를 나타내고;
n 은 1 내지 6 의 정수를 나타냄].
매개체로 사용되는 아조 화합물의 바람직한 구현예와 관련하여, 본 발명의 아조 화합물의 설명과 연계하여 한 설명을 언급할 수 있다.
매개체로서의 그들의 기능에 있어서, 본원에 기재된 아조 화합물은 본래, 예를 들어 광학적 또는 전기화학적 검출 방법에서와 같이 시료 중의 분석물의 정량적 및/또는 정성적 검출을 가능하게 하는 모든 진단 방법에 이용될 수 있다. 그러한 맥락에서, 아조 화합물은 단량체로서 또는 중합체로서 존재할 수 있고, 유리된 형태로 뿐만 아니라 결합된 형태로 사용될 수 있다. 따라서, 특별하게는 예를 들어 전극 상에서와 같은 담지체 상에 아조 화합물을 고정하거나/고정하고 그들을 예를 들어 효소 또는 조효소와 같은 적합한 검출 시약의 여타 구성성분에 커플링시키는 것이 가능하다.
본원에 기재된 아조 화합물은 바람직하게는 매개체로서 작용하는 아조 화합물에 추가하여 예를 들어, 효소, 조효소 및 광학 인디케이터와 같은 추가적인 구성요소들을 포함할 수 있는 검출 시약의 형태로 사용된다.
따라서, 본 발명의 또다른 국면은 하기를 포함하는 분석물 결정을 위한 검출 시약에 관한 것이다:
(a) 플라빈-, 니코틴아미드- 또는 피롤로퀴놀린 퀴논-의존적 산화환원효소,
(b) 환원성 플라빈, 니코틴아미드 또는 피롤로퀴놀린 퀴논 조효소,
(c) 화학식 (I) 의 아조 화합물:
Figure pct00003
[식 중,
R1 은 OH, OR7, SR7, NHR7 및 NR7R8 을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고;
R2, R3, R4 및 R5 는 서로 독립적으로 H, 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬, 헤테로아릴, CN, COO-, 할로겐, O(알킬), O(아릴), NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴), N(아릴)2, NO2 및 SO3 - 을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고, 이때 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬, 헤테로아릴, O(알킬), O(아릴), NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴) 또는 N(아릴)2 은 CN, COO-, 할로겐, NH2, NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴), N(아릴)2, NH-C(=NH2)-NH2 +, NO2, OH, O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), O(알킬), O(아르알킬), O(아릴), OPO3 2 -, PO3 2- 및 SO3 - 을 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 포함할 수 있고;
R6 는 CN, C(=X)NH2, C(=X)NHR9, C(=X)NR9R10, C(=X)NHOH 및 C(=X)R9 을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기이고;
R7 및 R8 은 서로 독립적으로 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬 및 헤테로아릴을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고, 이때 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴은 CN, COO-, 할로겐, NH2, NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴), N(아릴)2, NH-C(=NH2)-NH2 +, NO2, OH, O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), O(알킬), O(아르알킬), O(아릴), OPO3 2 -, PO3 2 - 및 SO3 - 를 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 포함할 수 있거나, 또는
R7 및 R8 는 이들이 결합되어 있는 N 원자와 함께 5-원 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고, 이때 헤테로사이클은 N, O 및 S 를 포함하는 군으로부터 선택되는 추가의 헤테로원자 및/또는 CN, COO-, 할로겐, NH2, NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴), N(아릴)2, NH-C(=NH2)-NH2 +, NO2, OH, O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), O(알킬), O(아르알킬), O(아릴), OPO3 2 -, PO3 2- 및 SO3 - 를 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 포함할 수 있고;
R9 및 R10 은 서로 독립적으로 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬 및 헤테로아릴을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고, 이때 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴은 CN, COO-, 할로겐, NH2, NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴), N(아릴)2, NH-C(=NH2)-NH2 +, NO2, OH, O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), O(알킬), O(아르알킬), O(아릴), OPO3 2 -, PO3 2 - 및 SO3 - 를 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 포함할 수 있거나, 또는
R9 및 R10 는 이들이 결합되어 있는 N 원자와 함께 5-원 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고, 이때 헤테로사이클은 N, O 및 S 를 포함하는 군으로부터 선택되는 추가의 헤테로원자 및/또는 CN, COO-, 할로겐, NH2, NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴), N(아릴)2, NH-C(=NH2)-NH2 +, NO2, OH, O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), O(알킬), O(아르알킬), O(아릴), OPO3 2 -, PO3 2- 및 SO3 - 를 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 포함할 수 있고,
X 는 O 및 S 를 포함하는 군으로부터 선택되는 헤테로원자를 나타내고;
n 은 1 내지 6 의 정수를 나타냄], 및
(d) 임의적으로는 환원성 광학 지표.
본 발명에 따른 검출 시약 중 함유된 아조 화합물의 바람직한 구현 예에 관해서, 참고문헌은 본 발명에 따른 아조 화합물의 상세한 설명과 관련하여 제공된 설명에 제공되어 있다.
본 발명에 따른 검출 시약 중 사용된 효소는 원칙적으로 각 출원의 목적에 대해 당업자에게 적합한 것으로 보이는, 임의의 목적하는 플라빈-, 니코틴아미드- 또는 피롤로퀴놀린 퀴논-의존성 산화환원효소일 수 있다. 상기 플라빈-, 니코틴아미드- 또는 피롤로퀴놀린 퀴논-의존성 산화환원효소는 바람직하게는 플라빈-, 니코틴아미드- 또는 피롤로퀴놀린 퀴논-의존성 탈수소효소, 예를 들어 알코올 탈수소효소, 글루코오스 탈수소효소, 글루코오스-6-포스페이트 탈수소효소, 글리세롤 탈수소효소, 락테이트 탈수소효소 또는 말레이트 탈수소효소가다.
본 발명의 보다 더 바람직한 구현예에서, 플라빈-, 니코틴아미드- 또는 피롤로퀴놀린 퀴논-의존성 글루코오스 탈수소효소 또는 글루코오스-6-포스페이트 탈수소효소가 플라빈-, 니코틴아미드- 또는 피롤로퀴놀린 퀴논-의존성 산화환원효소로서 사용된다. 가장 바람직하게는 검출 시약은 니코틴아미드-의존성 글루코오스 탈수소효소 또는 글루코오스-6-포스페이트 탈수소효소를 함유한다.
효소의 첨가에서, 본 발명에 따른 검출 시약은 또한 각 경우에 사용되는 효소를 고려하여 적합한 방식으로 당업자에 의해 선택될 수 있는 환원성 플라빈, 니코틴아미드 또는 피롤로퀴놀린 퀴논 조효소를 함유한다. 환원성 플라빈, 니코틴아미드 또는 피롤로퀴놀린 퀴논 조효소는 바람직하게는 FAD, FMN, NAD+, NADP+, PQQ 또는 그의 유도체이고, 이때 NAD+, NADP+ 및 그의 유도체가 바람직한 것으로 간주된다.
NAD+ 또는 NADP+ 의 유도체가 사용되는 경우, 이들은 바람직하게는 안정화된 니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드 (포스페이트) 화합물, 즉, 원형의 니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드 (포스페이트) 의 화학적 유도체이다. 특히 카르바시클릭 유사체, 예를 들어 카르바NAD+ 및 카르바NADP+ 를 포함하는, 본 발명에 관해서 안정화된 니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드 (포스페이트) 화합물이 본원에 참고문헌으로 명백하게 제공되는 개시에 관하여 그 중에서도 문헌 [Slama (Biochemistry (1988), 27, 183-193)], [Blackburn et al. (Chemical Communications (1996), 2765-2766)], US　5,801,006, WO　98/33936, WO　01/49247 및 WO　2007/012494 에 기재되어 있다.
가장 바람직한 구현예에서, 환원성 플라빈, 니코틴아미드 또는 피롤로퀴놀린 퀴논 조효소는 NAD+, NADP+, 카르바NAD+ 또는 카르바NADP+ 이다.
효소, 조효소 및 아조 화합물 뿐 아니라 본 발명에 따른 검출 시약은 원하는 경우에 검출 시약에 대한 필요에 따라 당업자에 의해 선택될 수 있는 환원성 광학 지표를 추가로 함유할 수 있다. 환원 가능하고, 그의 광학적 특성, 예를 들어 색깔, 형광, 반사율, 투과, 분극 및/또는 굴절률에 대해서 시각적으로 및/또는 기계적으로 검출가능한 변화를 겪는 임의의 물질이 광학 지표로서 사용될 수 있다. 본 발명의 관점에서 바람직한 광학 지표는 환원성 헤테로다중산, 특히 2,18-인몰리브덴산을 포함한다.
본 발명에 따른 검출 시약은 광학적으로 또는 전기화학적으로 검출될 수 있는 임의의 생물학적 또는 화학적 물질의 정성적 및/또는 정량적 측정에 사용될 수 있다. 분석물은 바람직하게는 말산, 알코올, 아스코르브산, 콜레스테롤, 글루코오스, 글리세롤, 요소, 3-히드록시부티레이트, 락트산, 피루베이트 및 트리글리세리드를 포함하는 군으로부터 선택되고, 이때, 글루코오스가 바람직하다.
측정될 분석물은 임의의 공급원으로부터 유래될 수 있지만 바람직하게는 전혈, 혈장, 혈청, 림프액, 담즙액, 뇌척수액, 세포외 조직액, 유린 및 선 분비물, 예를 들어 타액 또는 땀을 포함하지만 이들로만 한정되지는 않는 체액 중에 존재한다. 그러나, 본 발명에 따른 검출 시약은 바람직하게는 전혈, 혈장 및 혈청을 포함하는 군으로부터 선택되는 샘플 중 분석물의 양 및/또는 존재를 결정하기 위해 사용된다.
추가의 양태에서, 본 발명은 본 발명에 따른 검출 시약 및 시험 요소를 포함하는 분석물을 측정하기 위한 키트에 관한 것이다. 본 발명의 바람직한 구현예에서, 시험 요소는 예를 들어 샘플을 적용하기 위한 적용 영역, 검출 시약과 분석물을 반응시키기 위한 반응 영역, 샘플 중 분석물의 양 및/또는 존재를 결정하기 위한 검출 영역, 및 임의적으로는 폐기 영역을 포함할 수 있는 광학적 또는 전기화학적 센서로서 고안된다.
본 발명의 범주 내에서 사용될 수 있는 시험 요소는 특히 수성 또는 비-수성 용액의 형태로 적용될 수 있는 분석물을 함유하는 샘플에서의 시험 요소를 포함한다. 본 출원의 관점에서 바람직한 시험 요소는 시험 테이프, 시험 디스크, 시험 패드 및 시험 스트립을 포함하고, 이때 시험 스트립이 특히 바람직한 것으로 간주된다. 본 발명에 따라 사용된 시험 요소의 구체적인 예는 본원에 참고문헌으로 명백하게 제공되는 개시에 관하여 그 중에서도 US　5,271,895, US　6,207,000, US　6,540,890, US　6,755,949, US　7,008,799, US　7,025,836, US　7,067,320, US　2003/0031592　A1 및 US　2006/0003397　A1 에 기재되어 있다.
추가의 양태에서, 본 발명은 본 발명에 따른 검출 시약을 포함하는 분석물을 측정하기 위한 시험 요소에 관한 것이다. 본 발명의 바람직한 구현예에 있어서, 시험 요소는 예를 들어 샘플을 적용하기 위한 적용 영역, 검출 시약과 분석물을 반응시키기 위한 본 발명에 따른 검출 시약을 함유하는 반응 영역, 샘플 중 분석물의 양 및/또는 존재를 결정하기 위한 검출 영역, 및 임의적으로는 폐기 영역을 포함할 수 있는 광학적 또는 전기화학적 센서로서 고안된다. 본 발명에 따른 시험 요소의 추가의 바람직한 구현예와 관련하여, 참고문헌은 본 발명에 따른 키트의 상세한 설명과 관련하여 이루어진 설명으로 이루어져 있다.
추가의 양태에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는, 분석물을 측정하기 위한 방법에 관한 것이다:
(a) 본 발명에 따른 검출 시약, 본 발명에 따른 키트 또는 본 발명에 따른 시험 요소를 분석물을 함유하는 샘플과 접촉시키는 단계, 및
(b) 분석물의 양 및/또는 존재를 결정하는 단계.
본 발명에 따른 방법의 범주 내에서, 분석물을 함유하는 샘플을 우선 본 발명에 따른 검출 시약, 키트 또는 시험 요소와 접촉시키고, 그에 따라 분석물을 플라빈-, 니코틴아미드- 또는 피롤로퀴놀린 퀴논-의존성 산화환원효소에 의해 산화시키고, 환원성 플라빈, 니코틴아미드 또는 피롤로퀴놀린 퀴논 조효소를 환원시키고, 환원된 플라빈, 니코틴아미드 또는 피롤로퀴놀린 퀴논 조효소의 전자를 전극의 전도성 부품 또는 임의적으로는 본 광학 지표상에서 매개체로서 사용되는 아조 화합물에 의해 이동시킨다.
분석물을 정성적 및/또는 정량적으로 측정하기 위해, 적합한 검출 장치의 사용에 의해 및/또는 당업자에 의해 수동으로 판독 및/또는 평가될 수 있는 측정가능한 신호를 생성하는 효소 반응을 검출하기 위한, 선행 기술로부터 공지된 모든 방법이 사용될 수 있다. 본 발명의 범주 내에서, 분석물은 바람직하게는 광학적으로 또는 전기화학적으로 측정되고, 이때 광학적 기술은 특히 광도법 및 형광측정법을 포함한다.
본 발명은 하기 도 및 실시예에 의해서 보다 상세하게 설명된다.
실시예
실시예 1: 본 발명에 따른 아조 화합물의 합성
별도의 진술이 없는 한 사용된 화학물질은 산업적으로 이용가능하고, 가장 높은 산업적 품질의 화학물질이다.
2-[(2- 히드록시에틸 )-(4- 니트로페닐 )-아미노]-에탄올 (3) 의 합성
Figure pct00004
1-플루오로니트로벤젠 (1) (1.00　ml, 9.38　mmol) 및 디에탄올아민 (2) (2.73　ml, 28.5　mmol) 을 20.0　ml DMSO 에서 용해시키고, 140　℃ 에서 4 시간 동안 환류시켰다. 그 후, 감압 하에 용매를 제거하고 (3 mbar, 80 ℃), 잔류한 오렌지색 오일을 에틸 아세테이트 및 물의 혼합물에서 용해시켰다. 유기상을 분리하고, 물로 수 회 세척하고, MgSO4 를 사용하여 건조시켰다. 감압 하에 용매를 제거한 후, 1.35 g (63%) 의 표제 화합물을 수득하였다.
N,N - 비스 (2- 히드록시에틸 )-4- 아미노아닐린 디히드로클로라이드 (4) 의 합성
Figure pct00005
2-[(2-히드록시에틸)-(4-니트로페닐)-아미노]-에탄올 (3) (1.35　g, 5.97　mmol) 을 100　ml 농축 HCl (37%)에서 용해시키고, 주석　(II) 클로라이드 디하이드레이트 (8.07　g, 26.5　mmol) 를 첨가하고, 105　℃ 에서 1.5 시간 동안 환류시켰다. 그 후, 얼음 상에서 냉각시키면서 암모니아 용액 (H2O 중 25%) 의 첨가에 의해 혼합물을 pH 8.5 로 조정하였고, 그동안 무색의 고체가 침전되었다. 에틸 아세테이트를 사용하여 수성 현탁액을 수 회 추출한 다음, Na2SO4 를 사용하여 배합된 유기상을 건조시키고, 원래 부피의 1/4 로 증발시키고, 3.00 ml 농축 HCl (37%) 을 첨가하였다. 감압 하에 용매를 제거한 후, 높은 진공에서 잔류물을 건조시켜, 590.0 mg (37%) 의 표제 화합물을 수득하였다.
4-[ 비스 -(2- 히드록시에틸 )-아미노]- 벤젠디아조시아나이드 (6) 의 합성
Figure pct00006
N,N-비스(2-히드록시에틸)-4-아미노아닐린 디히드로클로라이드 (4) (50.0　mg, 0.186　mmol) 를 1.80　ml 물에서 용해시키고, 0　℃ 로 냉각시켰다. 그 후, H2O (1.90　ml) 중 아질산나트륨 (38.5　mg, 0.558　mmol) 의 용액을 상기 용액에 30 분의 기간에 걸쳐 적가하였고, 그 결과 혼합물은 적색에서 녹갈색으로 색깔이 변하였다. 그 후, 냉각시키면서 H2O (0.60 ml) 중 KCN (36.3 mg, 0.558　mmol) 의 용액을 30 분의 기간에 걸쳐 반응 혼합물에 적가하였고, 그동안 색깔이 적갈색으로 변하였다. 상기 온도에서 45 분 동안 교반한 다음, 에틸아세트를 사용하여 반응 혼합물을 수 회 추출하였다. Na2SO4 를 사용하여 배합된 유기상을 건조시키고, 감압 하에 용매를 제거하였다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 크로마토그래피 (용리액: CHCl3/MeOH　=　92:8)에 의해 정제하여 31.4　mg (72%) 의 표제 화합물을 암적색 결정으로서 수득하였다.
4-[ 비스 -(2- 히드록시에틸 )-아미노]- 벤젠디아조카르바미드 (7) 의 합성
Figure pct00007
4-[비스-(2-히드록시에틸)-아미노]-벤젠디아조시아나이드 (6) (43.9　mg, 0.201　mmol) 을 15.0　ml 암모니아 용액 (H2O 중 30-33%) 에서 용해시키고, 실온에서 3 시간 동안 교반하였다. 감압 하에 용매를 제거한 후, 분취용 HPLC (Hypersil ODS; 0.1　M 트리에틸암모늄 아세테이트 완충액/아세토니트릴 구배) 를 사용하여 잔류물을 정제하여 24.4　mg (38%) 의 표제 화합물을 상응하는 아세테이트 염의 형태로 암적색, 흡습성 결정으로서 수득하였다.
4-[ 비스 -(2- 히드록시에틸 )-아미노]- 벤젠디아조디메틸카르바미드 (8) 의 합성
Figure pct00008
4-[비스-(2-히드록시에틸)-아미노]-벤젠디아조시아나이드 (6) (10.2 mg, 0.044 mmol) 를 2.00 ml H2O 에서 용해시켰다. 그 후, 디메틸아민 (THF 중 2M, 2.00 ml, 52.2　mmol) 을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 4 시간 동안 교반하였다. 감압 하에 용매를 제거한 후, 분취용 HPLC (Hypersil ODS; 0.1　M 트리에틸암모늄 아세테이트 완충액/아세토니트릴 구배) 를 사용하여 잔류물을 정제하여 7.1 mg (47%) 의 표제 화합물을 상응하는 모노아세테이트 염의 형태로 암적색, 흡습성 결정으로서 수득하였다.
4-[ 비스 -(2- 히드록시에틸 )-아미노]- 벤젠디아조 - 비스 -(2- 히드록시에틸 )-카르바미드 (9) 의 합성
Figure pct00009
4-[비스-(2-히드록시에틸)-아미노]-벤젠디아조시아나이드 (6) (6.50 g, 27.75 mmol) 을 520 ml H2O 에 현탁시켰다. 이후 현탁액에 디에탄올아민 (2) (13.26 ml, 138.7 mmol) 을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 72 시간 동안 교반하였다. 감압 하에 용매를 제거한 후, 잔여물을 실리카 겔 상의 컬럼 크로마토그래피 (용리액: CH2Cl2/MeOH =　85:15　+　2%　NEt3) 에 의해 2 회 정제한 후, 또한 Sephadex LH20 상의 컬럼 크로마토그래피 (용리액: H2O) 에 의해 추가 정제하였다. 동결 건조 이후, 4.10 g (43%) 의 표제 화합물을 적색, 비정질 고체로서 수득하였다.
4-(2-(4-( 비스 -(2- 히드록시에틸 )-아미노)- 페닐 )- 디아조카르보닐 )-모르폴린 (11) 의 합성
Figure pct00010
4-[비스-(2-히드록시에틸)-아미노]-벤젠디아조시아나이드 (6) (100.0　mg, 0.427 mmol) 을 4.00 ml H2O/MeOH (1:1) 에 현탁시켰다. 이후, 모르폴린 (744 ㎕, 8.54 mmol) 을 현탁액에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16 시간 동안 교반하였다. 감압 하의 용매 제거 이후, 잔여물을 실리카 겔 상의 컬럼 크로마토그래피 (용리액: CH2Cl2/MeOH　=　70:30　+　2%　NEt3) 에 의해 2 회 정제하여, 12.5 mg (9%) 의 표제 화합물을 암적색 결정으로서 수득하였다.
2-(4-( 비스 -(2- 히드록시에틸 )-아미노)- 페닐 )-N-히드록시- 디아젠 - 카르복 사미드 ( 13 ) 의 합성
Figure pct00011
4-[비스-(2-히드록시에틸)-아미노]-벤젠디아조시아나이드 (6) (100.0　mg, 0.427 mmol) 를 4.00 ml H2O/MeOH (1:1) 에 현탁시켰다. 이후 현탁액에 히드록실아민 (12) (131 ㎕, 2.14 mmol) 을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 3 시간 동안 교반하였다. 감압 하에 용매를 제거한 후, 잔여물을 실리카 겔 상의 컬럼 크로마토그래피 (용리액: CH2Cl2/MeOH　=　85:15　+　2%　NEt3) 에 의해 2 회 정제하여, 53.1　mg (46%) 의 표제 화합물을 오렌지색 고체로서 수득하였다.
4- 메톡시 - 벤젠디아조시아나이드 ( 16 ) 의 합성
Figure pct00012
p-아니시딘 (14) (2.50　g, 20.30　mmol) 을 수성 HCl (1M, 40.0 ml) 에 용해시키고, 0 ℃ 로 냉각시켰다. 이후, 이러한 용액에 120　ml H2O 중 나트륨 니트라이트 (4.20 g, 60.90 mmol) 의 용액을 30 분에 걸쳐 적가하였고, 그 결과 반응 혼합물은 적갈색으로 바뀌었다.
이후, 계속해서 냉각시키면서 30 분에 걸쳐 60.0　ml H2O 중 KCN (3.97　g, 60.90　mmol) 의 용액을 반응 혼합물에 적가하였고, 그동안 오렌지-황색 고체가 침전되었고, 이를 여과하고, 1M HCl 로 1 회 및 H2O 로 2 회 세척하였다. 고체를 에틸 아세테이트 중에 용해시키고, 유기 상을 물 및 포화 NaCl 용액으로 매번 1 회 세척하였다. Na2SO4 로 유기 상을 건조시키고 감압 하에 용매를 제거한 후, 잔여물을 실리카 겔 상의 컬럼 크로마토그래피 (용리액: n-헥산/CH2Cl2/EtOAc =　80:10:10) 에 의해 정제하여, 850.0　mg (26%) 의 표제 화합물을 오렌지-갈색 결정으로 수득하였다.
4- 메톡시 - 벤젠디아조 - 비스 (2- 히드록시에틸 )- 카르바미드 ( 17 ) 의 합성
Figure pct00013
4-메톡시-벤젠디아조시아나이드 (16) (100.0　mg, 0.621　mmol) 을 2.00　ml H2O 과 4.00　ml MeOH 의 혼합물에 현탁시켰다. 이후 현탁액에 디에탄올아민 (2) (297 ㎕, 3.103 mmol) 을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 72 시간 동안 교반하였다. 감압 하에 용매를 제거한 후에, 잔여물을 실리카 겔 상의 컬럼 크로마토그래피 (용리액: CH2Cl2/MeOH　=　92:8) 에 의해 정제하여, 82.3　mg (49%) 의 표제 화합물을 오렌지색 고체로서 수득하였다.
2-[(2- 히드록시에틸 )-(2- 메톡시 -4- 니트로페닐 )-아미노]-에탄올 ( 19 ) 의 합성
Figure pct00014
2-플루오로-5-니트로아니솔 (18) (2.00　g, 8.62　mmol) 및 디에탄올아민 (2) (2.48　ml, 28.48　mmol) 을 20.0 ml DMSO 에 용해시키고, 140 ℃ 에서 2 시간 동안 및 160 ℃ 에서 4 시간 동안 환류시켰다. 이후, 용매를 감압 (3 mbar, 80 ℃) 하에 제거하였고, 그 결과 CH2Cl2 와 H2O 의 혼합물에 용해된 적갈색 오일이 남았다. 수성 상을 2M HCl 을 사용해 pH1 로 산성화시키고, CH2Cl2 로 수 회 추출하였다. 여과 이후, 수성 상을 2M NaOH 를 사용해 pH12 로 조절하고, 또다시 CH2Cl2 로 추출하였다. 합쳐진 유기 상을 Na2SO4 로 건조시키고, 용매를 감압 하에 제거하여, 오렌지색 오일을 수득하였다. 실리카 겔 상에서의 잔여물의 크로마토그래피 정제 (용리액: EtOAc/MeOH　=　95:5) 는 136.5　mg (6%) 의 표제 화합물을 산출하였다.
2-[(4-아미노-2- 메톡시페닐 )-2-(2- 히드록시에틸 )-아미노]-에탄올 디히드 로클로라이드 ( 20 ) 의 합성
Figure pct00015
2-[(2-히드록시에틸)-(2-메톡시-4-니트로페닐)-아미노]-에탄올 (19) (136.9　mg, 0.534　mmol) 을 10.0 ml 의 농축 HCl (37%) 에 용해시키고, 주석 (II) 클로라이드 디히드레이트 (723.2　mg, 3.205　mmol) 를 첨가하고, 이를 110 ℃ 에서 2 시간 동안 환류하였다. 이후 혼합물을 얼음에서 냉각시키면서 암모니아 용액 (H2O 중 25%) 을 첨가함으로써 pH 8.6 으로 조절하였고, 그 결과 무색 고체가 침전되었다. 에틸 아세테이트를 사용해 수성 현탁액을 수 회 추출한 후, 합쳐진 유기 상을 Na2SO4 로 건조시키고, 본래 부피의 4 분의 1 까지 증발시키고, 1.00 ml 농축 HCl (37%) 을 첨가하였다. 감압 하에 용매를 제거하고 높은 진공 하에 잔여물을 건조시킨 후, 114.6　mg (71%) 의 표제 화합물 (20) 을 수득하였다.
4-[ 비스 -(2- 히드록시에틸 )-아미노]-2- 메톡시 - 벤젠디아조시아나이드 ( 22 ) 의 합성
Figure pct00016
2-[(4-아미노-2-메톡시페닐)-2-(2-히드록시에틸)-아미노]-에탄올 디히드로클로라이드 (20) (55.6　mg, 0.186　mmol) 을 1.80 ml H2O 에 용해시키고, 0 ℃ 로 냉각시켰다. 이러한 용액에 1.90 ml H2O 중 나트륨 니트라이트 (38.5　mg, 0.558　mmol) 의 용액을 30 분에 걸쳐 적가하였고, 그 결과 반응 혼합물은 갈색으로 바뀌었다. 이후, 냉각시키면서 이에 0.60 ml H2O 중 KCN (36.3　mg, 0.558　mmol) 의 용액을 30 분에 걸쳐 첨가하였고, 그 결과 색채가 암적색으로 바뀌었다. 이러한 온도에서 45 분 교반한 후에, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 수 회 추출하였다. 합쳐진 유기 상을 Na2SO4 로 건조시키고, 용매를 감압 하에 제거하였다. 실리카 겔 상에서의 잔여물의 크로마토그래피 정제 (용리액: CH2Cl2/MeOH　=　90:10) 는 29.7 mg (60 %) 의 표제 화합물을 암적자색 결정으로서 산출하였다.
실시예 2: 본 발명에 따른 아조 화합물의 산화환원 거동의 측정
화학식 (I) 의 아조 화합물이 진단 방법에서의 매개체로서 사용될 수 있을 정도에 대한 평가의 일부로서 본 발명에 따른 아조 화합물의 전형적 대표물의 산화환원 거동을 조사하였다.
이러한 목적을 위해, 먼저 4-[비스-(2-히드록시에틸)-아미노]-벤젠디아조카르바미드 (7) 의 용액 (0.2M 칼륨 포스페이트 완충액 pH 7.0, 0.9% NaCl, 0.5% Triton X-100 중 5 mM) 을 제조하였다. FAD-의존성 글루코오스 데히드로게나아제 (20 mg/ml) 를 첨가한 후, 이러한 용액 40 ㎕ 에 10 ㎕ 의 글루코오스 용액 (농도: 0 mg/dl, 100　mg/dl, 200 mg/dl, 300 mg/dl, 400 mg/dl 및 500 mg/dl) 을 첨가하고, 5 분 동안 예비인큐베이션하였다.
이후, Ag/AgCl 에 대한 시클로볼타그램 기록하였다. 이를 위해, 먼저 전위를 계속해서 0 mV 로부터 -800 mV 로 바꾸고, 이후 +800 mV 로 되돌리고, 마지막으로 -100 mV 로 바꾸었고, 흐른 전류를 측정하였다. 시간 단위 당 전위 변화는 100 mV/sec 이었다. 이러한 측정 결과를 도 1 에 나타냈다.
도 1 에 나타나 있는 바와 같이, 시클로볼타그램은 100 내지 200 mV 범위에서 산화 피크 크기의 분명한 눈금을 나타내고 있다. 이러한 결과는 상기 물질이 전류 또는 쌍전류 글루코오스 측정에서 매개체로서 사용될 수 있다는 것을 나타낸다.
실시예 3: 본 발명에 따른 아조 화합물을 사용한 글루코오스 전환의 운동학
화학식 (I) 의 아조 화합물의 산화환원 거동을 평가하기 위한 추가 실험에서, 상이한 농도의 글루코오스 용액 전환의 운동학을 예로서 NAD-의존성 글루코오스 데히드로게나아제, 카르바NAD 및 4-[비스-(2-히드록시에틸)-아미노]-벤젠디아조카르바미드 (7) 의 존재 하에 시험하였다.
이러한 목적을 위해, 먼저 4-[비스-(2-히드록시에틸)-아미노]-벤젠디아조카르바미드 (7) 및 카르바NAD 의 용액 (각각 0.2M 칼륨 포스페이트 완충액 pH 7.0, 0.9% NaCl, 0.1% Triton X-100 중 25 mM) 을 제조하였다. NAD-의존성 글루코오스 데히드로게나아제 (20 mg/ml) 의 첨가 이후, 이러한 용액 40 ㎕ 에 10 ㎕ 의 글루코오스 용액 (농도: 0 mg/dl, 100　mg/dl, 200 mg/dl, 300 mg/dl, 400 mg/dl 및 500 mg/dl) 을 각각의 경우에 첨가하였고, 그 결과 카르바NADH 가 효소/글루코오스 반응에 의해 형성되었고, 이는 결국 매개체의 환원을 산출하였다.
글루코오스의 첨가 직후 (즉, 예비인큐베이션 없이) 전환의 운동학을 전류적으로 측정하였다. 이러한 목적을 위해, 200 mV 의 전위를 적용하였고, 매개체의 산화환원으로 인해 흐르는 전류를 5, 10, 15 및 20 초의 기간 후에 기록하였다. 측정 결과를 도 2 에 나타냈다.
글루코오스 농도와 각 경우에 측정된 전류 사이의 대략적 선형 상관 관계는, 짧은 반응 시간 예를 들어 5 초의 반응 시간에 의해 이미 분명하게 나타난다. 이에 따라, 기록된 곡선은 실시예 2 에서 얻어진 결과에 의해 개요되는 전류 글루코오스 측정에 대한 보정 선으로서 사용될 수 있다.
실시예 4: 본 발명에 따른 아조 화합물의 환원의 운동학
화학식 (I) 의 아조 화합물의 산화환원 거동을 평가하기 위한 추가 실험에서, 4-[비스-(2-히드록시에틸)-아미노]-벤젠디아조카르바미드 (7) 의 환원의 운동학을 3 개의 상이한 환원제를 사용하여 시험하였다.
이러한 목적을 위해, 4-[비스-(2-히드록시에틸)-아미노]-벤젠디아조카르바미드 (7) 의 용액 (0.1 M 트리에틸암모늄 아세테이트 완충액 pH 7 중 0.05 M) 1.00 ml 를 각각의 경우에 15 등가의 환원제 [아스코르브산, 카르바NADH (2나트륨 염으로서) 또는 NADH (2나트륨 염으로서); 각각 0.1 M 트리에틸암모늄 아세테이트 중 용액으로서] 와 함께 석영 큐벳에서 반응시켰다. 개별적 반응 조건을 아래 표 1 에 요약하였다.
[표 1]
Figure pct00017
4-[비스-(2-히드록시에틸)-아미노]-벤젠디아조카르바미드 (7) 의 예상된 환원의 운동학을 환원제를 첨가한 직후에 500 nm (사용된 매개체의 산화 형태의 최대 흡수) 에서의 흡수의 감소를 기준으로 UV 분광학에 의해 기록하였다 (UV-분광기: SPECORD 210, 소프트웨어: WinASPECT Version 2.2.2.0, Analytik Jena AG). 이러한 측정 결과를 도 3A, 3B 및 3C 에 나타냈다.
도 3A 는 아스코르브산의 존재 하의 반응 시간 경과를 나타내고, 이러한 환원제에 대한 4-[비스-(2-히드록시에틸)-아미노]-벤젠-디아조카르바미드 (7) 의 무감응을 설명한다. 실제로, 심지어 1800 초 이후 시간경과에 있어서 매개체 (산화 형태) 의 양의 유의한 감소가 없다. 측정 기간 이후 심지어 더 많은 과량의 아스코르브산의 첨가도 동일한 결과를 산출한다.
도 3 B 및 3C 는 카르바NADH 및 NADH 에 의한 4-[비스-(2-히드록시에틸)-아미노]-벤젠디아조카르바미드 (7) 의 환원의 반응 시간경과를 나타낸다. 도면에 의해 나타난 바와 같이, 카르바NADH 및 NADH 는 매개체의 환원을 야기하고, 두 곡선의 비교는 비교자가 인공적 조효소 카르바NADH 보다 실질적으로 더 높은 환원 비율을 추론하게끔 한다.

Claims (17)

  1. 하기 일반식 (I) 의 아조 화합물:
    Figure pct00018

    [식 중,
    R1 은 OR7 및 NR7R8 을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고;
    R2, R3, R4 및 R5 는 서로 독립적으로 H, 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬, 헤테로아릴, CN, COO-, 할로겐, O(알킬), O(아릴), NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴), N(아릴)2, NO2 및 SO3 - 를 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고, 이때 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬, 헤테로아릴, O(알킬), O(아릴), NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴) 또는 N(아릴)2 는 COO-, N(알킬)3 +, NH-C(=NH2)-NH2 +, OH, O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), OPO3 2 -, PO3 2 - 및 SO3 - 를 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 함유할 수 있고;
    R6 은 C(=X)NR9R10, C(=X)NHOH 및 C(=X)R9 를 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고;
    R7 은 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬 및 헤테로아릴을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고, 이때 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴은 COO-, N(알킬)3 +, NH-C(=NH2)-NH2 +, OH, O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), OPO3 2 -, PO3 2- 및 SO3 - 를 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 함유하고,
    R8 은 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬 및 헤테로아릴을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고, 이때 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴은 COO-, N(알킬)3 +, NH-C(=NH2)-NH2 +, OH, O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), OPO3 2 -, PO3 2- 및 SO3 - 를 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 함유할 수 있거나, 또는
    R7 및 R8 은 이들이 결합되어 있는 N 원자와 함께 5-원 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고, 이때 헤테로사이클은 N, O 및 S 를 포함하는 군으로부터 선택되는 추가의 헤테로원자 및 COO-, N(알킬)3 +, NH-C(=NH2)-NH2 +, OH, O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), OPO3 2 -, PO3 2 - 및 SO3 - 를 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 함유할 수 있고,
    R9 및 R10 은 서로 독립적으로 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬 및 헤테로아릴을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고, 이때 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴은 CN, COO-, 할로겐, NH2, NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴), N(아릴)2, NH-C(=NH2)-NH2 +, NO2, OH, O(알킬), O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), O(아르알킬), O(아릴), OPO3 2 -, PO3 2 - 및 SO3 - 를 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 함유할 수 있거나, 또는
    R9 및 R10 은 이들이 결합되어 있는 N 원자와 함께 5-원 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고, 이때 헤테로사이클은 N, O 및 S 를 포함하는 군으로부터 선택되는 추가의 헤테로원자 및/또는 CN, COO-, 할로겐, NH2, NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴), N(아릴)2, NH-C(=NH2)-NH2 +, NO2, OH, O(알킬), O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), O(아르알킬), O(아릴), OPO3 2 -, PO3 2 - 및 SO3 - 를 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 함유할 수 있거나, 또는
    X 는 O 및 S 를 포함하는 군으로부터 선택되는 헤테로원자를 나타내고;
    n 은 1 내지 6 의 정수를 나타내고;
    단, R2, R3, R4 및 R5 를 포함하는 군으로부터 선택되는 2 개 이상의 잔기는 잔기 H 를 나타냄].
  2. 제 1 항에 있어서,
    R1 이 잔기 NR7R8 을 나타내는
    것을 특징으로 하는 아조 화합물.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    R2, R3, R4, 및 R5 를 포함하는 군으로부터 선택되는 3 개 이상의 잔기가 잔기 H 를 나타내는
    것을 특징으로 하는 아조 화합물.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
    R2 가 H 및 O(알킬)을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고,
    R3, R4 및 R5 가 각각 잔기 H 를 나타내는
    것을 특징으로 하는 아조 화합물.
  5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
    R6 이 잔기 C(=X)NR9R10, 특히 잔기 C(=O)NR9N10 를 나타내는
    것을 특징으로 하는 아조 화합물.
  6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,
    R8 이 COO-, N(알킬)3 +, NH-C(=NH2)-NH2 +, OH, O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), OPO3 2 -, PO3 2 - 및 SO3 - 를 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 나타내는
    것을 특징으로 하는 아조 화합물.
  7. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    R7 및/또는 R8 이 잔기 히드록시에틸을 나타내는
    것을 특징으로 하는 아조 화합물.
  8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,
    R9 및/또는 R10 이 알킬 및 아릴을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고, 이때 알킬 또는 아릴은 OH, O(알킬) 및 O(아릴)을 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 함유할 수 있거나; 또는
    R9 및 R10 이 이들이 결합되어 있는 N 원자와 함께 5-원 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고, 이때 헤테로사이클은 N, O 및 S 를 포함하는 군으로부터 선택되는 추가의 헤테로원자를 함유할 수 있는
    것을 특징으로 하는 아조 화합물.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,
    R9 및/또는 R10 이 메틸, 에틸, 페닐, 히드록시메틸, 히드록시에틸, 히드록시페닐 및 메톡시페닐을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내는
    것을 특징으로 하는 아조 화합물.
  10. 진단 방법에서의 매개체로서, 하기 일반식 (I) 의 아조 화합물의 용도:
    Figure pct00019

    [식 중,
    R1 은 OH, OR7, SR7, NHR7 및 NR7R8 을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고;
    R2, R3, R4 및 R5 는 서로 독립적으로 H, 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬, 헤테로아릴, CN, COO-, 할로겐, O(알킬), O(아릴), NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴), N(아릴)2, NO2 및 SO3 - 을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고, 이때 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬, 헤테로아릴, O(알킬), O(아릴), NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴) 또는 N(아릴)2 은 CN, COO-, 할로겐, NH2, NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴), N(아릴)2, NH-C(=NH2)-NH2 +, NO2, OH, O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), O(알킬), O(아르알킬), O(아릴), OPO3 2 -, PO3 2- 및 SO3 - 을 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 함유할 수 있고;
    R6 는 CN, C(=X)NH2, C(=X)NHR9, C(=X)NR9R10, C(=X)NHOH 및 C(=X)R9 을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고;
    R7 및 R8 는 서로 독립적으로 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬 및 헤테로아릴을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고, 이때 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴은 CN, COO-, 할로겐, NH2, NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴), N(아릴)2, NH-C(=NH2)-NH2 +, NO2, OH, O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), O(알킬), O(아르알킬), O(아릴), OPO3 2 -, PO3 2 - 및 SO3 - 을 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 함유할 수 있거나; 또는
    R7 및 R8 은 이들이 결합되어 있는 N 원자와 함께 5-원 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고, 이때 헤테로사이클은 N, O 및 S 를 포함하는 군으로부터 선택되는 추가의 헤테로원자 및/또는 CN, COO-, 할로겐, NH2, NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴), N(아릴)2, NH-C(=NH2)-NH2 +, NO2, OH, O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), O(알킬), O(아르알킬), O(아릴), OPO3 2 -, PO3 2- 및 SO3 - 을 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 함유할 수 있고;
    R9 및 R10 은 서로 독립적으로 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬 및 헤테로아릴을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고, 이때 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴은 CN, COO-, 할로겐, NH2, NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴), N(아릴)2, NH-C(=NH2)-NH2 +, NO2, OH, O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), O(알킬), O(아르알킬), O(아릴), OPO3 2 -, PO3 2 - 및 SO3 - 을 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 함유할 수 있거나; 또는
    R9 및 R10 은 이들이 결합되어 있는 N 원자와 함께 5-원 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고, 이때 헤테로사이클은 N, O 및 S 를 포함하는 군으로부터 선택되는 추가의 헤테로원자 및/또는 CN, COO-, 할로겐, NH2, NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴), N(아릴)2, NH-C(=NH2)-NH2 +, NO2, OH, O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), O(알킬), O(아르알킬), O(아릴), OPO3 2 -, PO3 2- 및 SO3 - 을 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 함유할 수 있고;
    X 는 O 및 S 를 포함하는 군으로부터 선택되는 헤테로원자를 나타내고;
    n 은 1 내지 6 의 정수를 나타냄].
  11. 하기를 포함하는 분석물을 결정하기 위한 검출 시약:
    (a) 플라빈-, 니코틴아미드- 또는 피롤로퀴놀린 퀴논-의존적 산화환원효소,
    (b) 환원성 플라빈, 니코틴아미드 또는 피롤로퀴놀린 퀴논 조효소,
    (c) 하기 일반식 (I) 의 아조 화합물:
    Figure pct00020

    [식 중,
    R1 은 OH, OR7, SR7, NHR7 및 NR7R8 을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고;
    R2, R3, R4 및 R5 는 서로 독립적으로 H, 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬, 헤테로아릴, CN, COO-, 할로겐, O(알킬), O(아릴), NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴), N(아릴)2, NO2 및 SO3 - 을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고, 이때 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬, 헤테로아릴, O(알킬), O(아릴), NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴) 또는 N(아릴)2 은 CN, COO-, 할로겐, NH2, NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴), N(아릴)2, NH-C(=NH2)-NH2 +, NO2, OH, O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), O(알킬), O(아르알킬), O(아릴), OPO3 2 -, PO3 2- 및 SO3 - 을 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 함유할 수 있고;
    R6 는 CN, C(=X)NH2, C(=X)NHR9, C(=X)NR9R10, C(=X)NHOH 및 C(=X)R9 을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고;
    R7 및 R8 은 서로 독립적으로 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬 및 헤테로아릴을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고, 이때 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴은 CN, COO-, 할로겐, NH2, NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴), N(아릴)2, NH-C(=NH2)-NH2 +, NO2, OH, O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), O(알킬), O(아르알킬), O(아릴), OPO3 2 -, PO3 2 - 및 SO3 - 를 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 함유할 수 있거나; 또는
    R7 및 R8 는 이들이 결합되어 있는 N 원자와 함께 5-원 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고, 이때 헤테로사이클은 N, O 및 S 를 포함하는 군으로부터 선택되는 추가의 헤테로원자 및/또는 CN, COO-, 할로겐, NH2, NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴), N(아릴)2, NH-C(=NH2)-NH2 +, NO2, OH, O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), O(알킬), O(아르알킬), O(아릴), OPO3 2 -, PO3 2- 및 SO3 - 를 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 함유할 수 있고;
    R9 및 R10 은 서로 독립적으로 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬 및 헤테로아릴을 포함하는 군으로부터 선택되는 잔기를 나타내고, 이때 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴은 CN, COO-, 할로겐, NH2, NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴), N(아릴)2, NH-C(=NH2)-NH2 +, NO2, OH, O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), O(알킬), O(아르알킬), O(아릴), OPO3 2 -, PO3 2 - 및 SO3 - 를 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 함유할 수 있거나; 또는
    R9 및 R10 는 이들이 결합되어 있는 N 원자와 함께 5-원 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고, 이때 헤테로사이클은 N, O 및 S 를 포함하는 군으로부터 선택되는 추가의 헤테로원자 및/또는 CN, COO-, 할로겐, NH2, NH(알킬), N(알킬)2, N(알킬)3 +, NH(아릴), N(아릴)2, NH-C(=NH2)-NH2 +, NO2, OH, O-(CH2CH2)n-OH, O-(CH2CH2)n-O(알킬), O(알킬), O(아르알킬), O(아릴), OPO3 2 -, PO3 2- 및 SO3 - 를 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 함유할 수 있고;
    X 는 O 및 S 를 포함하는 군으로부터 선택되는 헤테로원자를 나타내고;
    n 은 1 내지 6 의 정수를 나타냄], 및
    (d) 임의적으로는 환원성 광학 지표.
  12. 제 11 항에 있어서,
    플라빈-, 니코틴아미드- 또는 피롤로퀴놀린 퀴논-의존성 산화환원효소가 플라빈-, 니코틴아미드- 또는 피롤로퀴놀린 퀴논-의존성 탈수소효소, 특히 플라빈-, 니코틴아미드- 또는 피롤로퀴놀린 퀴논-의존성 글루코오스 탈수소효소 또는 글루코오스-6-포스페이트 탈수소효소인
    것을 특징으로 하는 검출 시약.
  13. 제 11 항 또는 제 12 항에 있어서,
    환원성 플라빈, 니코틴아미드 또는 피롤로퀴놀린 퀴논 조효소가 FAD, FMN, NAD+, NADP+, PQQ 또는 이의 유도체, 특히 NAD+, NADP+, 카르바NAD+ 또는 카르바NADP+ 인
    것을 특징으로 하는 검출 시약.
  14. 하기를 포함하는 분석물을 결정하기 위한 키트:
    (a) 제 11 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 따른 검출 시약, 및
    (b) 시험 요소, 특히 광학 또는 전기화학 센서로서 설계되는 시험 요소.
  15. 제 11 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 따른 검출 시약을 포함하는 분석물을 결정하기 위한 시험 요소.
  16. 제 15 항에 있어서,
    광학 또는 전기화학 센서로서 설계되는
    것을 특징으로 하는 시험 요소.
  17. 하기 단계를 포함하는, 분석물을 결정하는 방법:
    (a) 분석물을 함유하는 샘플을, 제 11 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 따른 검출 시약, 제 14 항에 따른 키트, 또는 제 15 항 또는 제 16 항에 따른 시험 요소와 접촉시키는 단계, 및
    (b) 분석물의 존재 및/또는 양을 결정하는 단계.
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102372113B1 (ko) 2016-10-05 2022-03-07 에프. 호프만-라 로슈 아게 다중 분석물 진단 테스트 엘리먼트들을 위한 검출 시약들 및 전극 배열들, 그리고 그것을 사용하는 방법들

Family Cites Families (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE1242236B (de) * 1965-06-01 1967-06-15 Basf Ag Verfahren zur Herstellung von Arylazocarbonylverbindungen
DE3732871A1 (de) * 1987-09-30 1989-04-20 Behringwerke Ag Chromogene substrate
JPH01207247A (ja) * 1988-02-12 1989-08-21 Nagase Sangyo Kk がん検出・診断試薬
DE3826922A1 (de) * 1988-08-09 1990-02-22 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur kolorimetrischen bestimmung eines analyten mittels enzymatischer oxidation
DE4003194A1 (de) * 1990-02-03 1991-08-08 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren und sensorelektrodensystem zur elektrochemischen bestimmung eines analyts oder einer oxidoreduktase sowie verwendung hierfuer geeigneter verbindungen
US5286362A (en) 1990-02-03 1994-02-15 Boehringer Mannheim Gmbh Method and sensor electrode system for the electrochemical determination of an analyte or an oxidoreductase as well as the use of suitable compounds therefor
US5271895A (en) 1991-02-27 1993-12-21 Boehringer Mannheim Corporation Test strip
JPH10203028A (ja) * 1997-01-24 1998-08-04 Fuji Photo Film Co Ltd 熱転写記録材料
US5801006A (en) 1997-02-04 1998-09-01 Specialty Assays, Inc. Use of NADPH and NADH analogs in the measurement of enzyme activities and metabolites
JPH10265691A (ja) * 1997-03-25 1998-10-06 Fuji Photo Film Co Ltd アゾ色素
DE19753847A1 (de) 1997-12-04 1999-06-10 Roche Diagnostics Gmbh Analytisches Testelement mit Kapillarkanal
DE19753848A1 (de) 1997-12-04 1999-06-10 Roche Diagnostics Gmbh Modifikation von Oberflächen zur Steigerung der Oberflächenspannung
DE19815684A1 (de) 1998-04-08 1999-10-14 Roche Diagnostics Gmbh Verfahren zur Herstellung von analytischen Hilfsmitteln
DE19849008A1 (de) 1998-10-23 2000-04-27 Roche Diagnostics Gmbh Spreitschichten, Netzmittel zu ihrer Herstellung und deren Verwendung in Teststreifen
US6380380B1 (en) 1999-01-04 2002-04-30 Specialty Assays, Inc. Use of nicotinamide adenine dinucleotide (NAD) and nicotinamide adenine dinucliotide phosphate (NADP) analogs to measure enzyme activities metabolites and substrates
US6540890B1 (en) 2000-11-01 2003-04-01 Roche Diagnostics Corporation Biosensor
AT410601B (de) 2000-12-29 2003-06-25 Hoffmann La Roche Sensor zur lumineszenz-optischen bestimmung eines analyten sowie reagens, das nach dem fret-prinzip arbeitet
US6755949B1 (en) 2001-10-09 2004-06-29 Roche Diagnostics Corporation Biosensor
DE102004007983A1 (de) 2004-02-18 2005-09-08 Roche Diagnostics Gmbh Testelement mit Einschicht-Reaktionsfilm
DE102005035461A1 (de) 2005-07-28 2007-02-15 Roche Diagnostics Gmbh Stabile NAD/NADH-Derivate
KR101551985B1 (ko) * 2007-03-09 2015-09-09 리가가쿠 겐큐쇼 모노뉴클레오시드 또는 모노뉴클레오티드로부터 유도되는 구조를 갖는 화합물, 핵산, 표지 물질, 핵산 검출 방법 및 키트
US20110264026A1 (en) * 2008-11-24 2011-10-27 Raghavan Rajagopalan Azo Derivatives and Uses Thereof in Phototherapy
GB0823265D0 (en) * 2008-12-20 2009-01-28 Convatec Technologies Inc Antimicrobial Composition
WO2011024487A1 (ja) * 2009-08-31 2011-03-03 パナソニック株式会社 センサ及び濃度測定方法
EP2360232A1 (en) * 2010-02-12 2011-08-24 Unilever Plc, A Company Registered In England And Wales under company no. 41424 of Unilever House Surfactant ratio in laundry detergents comprising a dye

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