KR20130124550A

KR20130124550A - 신경질환의 예방 또는 치료를 위한 icam-1의 용도

Info

Publication number: KR20130124550A
Application number: KR1020137021968A
Authority: KR
Inventors: 양윤선; 오원일; 장종욱; 김지현
Original assignee: 메디포스트(주)
Priority date: 2011-02-02
Filing date: 2012-02-01
Publication date: 2013-11-14
Also published as: US20120196809A1; US8614191B2; JP2014508745A; WO2012105813A3; ES2658154T3; CA2825641C; EP2670421B1; CN103402535B; EP2670421A2; AU2012211519B2; KR101615161B1; EP2670421A4; AU2012211519A9; CA2825641A1; CN103402535A; AU2012211519A1; WO2012105813A2; JP5784754B2

Abstract

본 발명은 세포내 부착분자-1(intercellular adhesion molecule-1, ICAM-1) 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체를 활성성분으로 포함하는, 신경질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것으로서, 상기 조성물을 네프릴리신의 발현을 증가시켜 치매의 원인인 아밀로이드-베타(Aβ)를 제거할 수 있으므로, 알츠하이머 병을 포함하는 신경질환을 예방 또는 치료하는데 유용하다.

Description

신경질환의 예방 또는 치료를 위한 ICAM-1의 용도 {USE OF ICAM-1 FOR PREVENTION OR TREATMENT OF NEUROLOGICAL DISEASES}

본 출원은 2011년 2월 2일자로 출원된 미국 가출원 제61/438,809호 및 2011년 9월 30일자로 출원된 미국 가출원 제61/541,487호에 대한 우선권을 주장하며, 상기 모든 문헌들은 참조에 의해 본원에 통합된다.

알츠하이머 병(Alzheimer's disease)은 부분적으로는 아밀로이드-베타(amyloid-beta, Aβ) 단백질의 뇌내 축적에 기인하여 뇌 세포가 파괴되어 생기는 질병이다. 알츠하이머 병은 단계별로 진행되어 기억력, 추리력, 판단력 및 언어능력, 나아가 단순한 업무를 수행하는 능력까지도 점차적으로 파괴시킨다.

파킨슨 병(Parkinson's disease)은 도파민성 신경세포(dopaminergic neurons)로 알려진 특화된 뇌 세포가 파괴되어 발생한다. 도파민성 신경세포가 손실되면, 이에 한정되는 것은 아니지만 운동조절 상실을 포함한 임상학적 증상을 유발한다. 파킨슨 병의 발병 원인은 알려지지 않았다.

또한 우울증(Depression) 또는 주요우울장애(major depressive disorder)도 뇌 질환이다. 진단은 기분 저하, 낮은 자존감 및 다양한 활동에서의 흥미 또는 기쁨 감소를 포함하는 환자의 자가-보고 경험에 근거한다.

간질(Epilepsy)은 뇌의 신경 질환이다. 간질 환자는 빈번하고 예상치 못한 발작 증세를 경험한다. 간질 병력(epileptic episode)은 뇌에서의 비정상적으로 증가된 신경활성에 의해 표시된다.

다발성 경화증(Multiple sclerosis)은 뇌 및 척추의 엑손 주변을 둘러싸고 있는 미엘린의 염증에 의해서 발병한다. 탈수(Demyelination)는 시간이 흐르면서 다양한 물리적 및 인지 기능 상실을 유발한다

조증(Mania)은 일주일 또는 그 이상 지속되는 비정상적으로 상승되거나 또는 짜증을 잘 내는 기분 상태이다. 조증 병력이 있는 환자들은 신경 전달(neurotransmission)을 표적으로 하는 약물로 치료된다.

근위축성 측색 경화증(Amyotrophic lateral sclerosis)으로도 알려진 루게릭 병(Lou Gehrig's disease)은 척추 내 신경세포의 퇴화에 의해 발병하는 운동 신경질병의 한 형태이다. 상기 질병을 앓는 환자들은 근육 위축, 약화 및 호흡 곤란을 경험한다.

초기 치매(Incipient dementia) 또는 분리기억장애(Isolated memory impairment)로도 알려져 있는 경도인지장애(Mild cognitive impairment, MCI)는, 개인의 나이와 교육 수준에 근거하여 예상되는 것 이상의 인지장애의 발병 및 발달 현상을 수반하는 뇌-기능 증후군이나, 일상 활동에 방해될 만큼 심각한 것은 아니다. 이는 종종 정상적인 노화 및 치매 사이의 과도기 단계로 발견된다. MCI는 다양한 증상으로 존재할 수 있지만, 기억력 감퇴가 두드러진 증상일 경우 이는 "기억상실 MCI"로 불려지며, 알츠하이머 병의 전구 단계로서 빈번하게 나타난다. 많은 연구들은 이러한 사람들이 매년 약 10% 내지 15%의 비율로 알츠하이머 병으로 발전하는 경향이 있음을 제시한다.

다발-경색성 치매(Multi-infarct dementia)는 혈관성 치매 형태 중 하나이다. 혈관성 치매는 노인들에서 알츠하이머 병 다음으로 두 번째로 가장 흔한 치매의 형태이다. 다발-경색성 치매(MID)는 회복 불가능한 형태의 치매로 여겨지며, 발병은 다수의 작은 뇌졸중(stroke), 또는 때때로 다른 작은 뇌졸중이 이전 또는 이후에 수반되는 큰 뇌줄중에 의해 발생한다. 상기 용어는 뇌에서 혈관성 병변을 초래하는 모든 상이한 기작들에 의해 발생된 증후군 그룹을 지칭한다. 혈관성 치매는 적어도 부분적으로 예방할 수 있기 때문에, 초기 검진 및 정확한 진단이 중요하다.

루이체 치매(Lewy body dementia), 확산성 루이체 치매(diffuse Lewy body disease), 피질성 루이체 질환(cortical Lewy body disease) 및 루이형 노인성 치매(senile dementia of Lewy type)를 포함하는 다양한 명칭으로도 알려져 있는 루이소체 치매(Dementia with Lewy bodies, DLB)는 알츠하이머 병 및 파킨슨 병 모두에 밀접하게 연관된 치매의 형태이다. 사후 뇌 생체조직 검사에서 검출되는, 신경세포 내의 루이체, 알파-시누클레인 클럼프, 및 유비퀴틴 단백질의 존재에 의해서 해부학적으로 특징된다. 루이체 치매는 미국에서만 130만명에 영향을 미친다.

네프릴리신(neprilysin)은 아밀로이드-베타 펩타이드를 분해하는 효소이다. 네프릴리신의 결핍은 아밀로이드의 세포외 축적을 가속화시킨다. 네프릴리신 발현의 증가는 Aβ 펩타이드를 감소시킨다.

세포내 부착 분자-1(intercellular adhesion molecule-1, ICAM-1)은 ICAM-1 유전자에 의해 코딩되는 막 당단백질이다. 정상적으로 발달한 ICAM-1 유전자가 결핍된 마우스는 임신가능하고 보통의 과립구 증가증을 나타내지만, 화학적 자극에 대한 손상된 호중구 유쥬 및 염증 반응에서의 이상을 나타내었다.

발명의 요약

본 명세서에서는 ICAM-1(intercellular adhesion molecule-1) 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체를 활성성분으로 포함하는, 신경질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 기술한다. 일 실시양태에서, 상기 조성물의 ICAM-1 단백질은 서열번호: 1의 아미노산 서열 또는 이로부터 1번째 내지 27번째 아미노산 잔기에 해당하는 시그날 펩타이드가 제거된 아미노산 서열을 갖는다. 다른 실시양태에서, 상기 ICAM-1 단백질의 단편은 ICAM-1 단백질과 동등한 생물학적 활성을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 상기 ICAM-1 단백질의 변이체는 서열번호: 1의 아미노산 서열에서 하나 이상의 아미노산이 치환, 결실, 삽입 및/또는 부가된 아미노산 서열을 갖고, ICAM-1 단백질과 동등한 생물학적 활성을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 상기 ICAM-1 단백질의 변이체는 서열번호: 1의 아미노산을 갖는 ICAM-1 단백질과 90%, 93%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 가지며, ICAM-1 단백질과 동등한 생물학적 활성을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 상기 ICAM-1 단백질, 이의 단편 또는 변이체는 네프릴리신(NEP)의 발현을 유도하여 아밀로이드-베타(Aβ)의 분해를 촉진시킨다. 또 다른 실시양태에서, 상기 신경질환은 신경세포 내 아밀로이드-베타 플라크 형성, 신경세포 내 타우 단백질의 과인산화, 신경돌기의 손상, 신경세포 내의 네프릴리신의 발현 감소 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상에 의하여 유발되는 질환이다. 또 다른 실시양태에서, 상기 신경질환은 알츠하이머 병, 파킨슨 병, 우울증, 간질, 다발성 경화증, 조증, 루게릭병, 경도인지장애, 다발-경색성 치매 및 루이소체 치매로 이루어진 군으로부터 선택된다.

본 명세서에서는 ICAM-1 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체를 이를 필요로 하는 대상에 투여하는 것을 포함하는, 대상에서 신경질환을 예방 또는 치료하는 방법을 기술한다.

본 명세서에서는 ICAM-1 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체를 신경세포와 함께 배양하는 것을 포함하는, 신경세포에서 네프릴리신의 발현을 증가시키는 방법을 기술한다.

본 명세서에서는 ICAM-1 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체를 대상에 투여하는 것을 포함하는, 대상의 신경세포에서 네프릴리신의 발현을 증가시키는 방법을 기술한다.

본 명세서에서는 ICAM-1 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체를 포함하며, 이때 상기 단백질, 단편 또는 이의 변이체가 신경세포에서 네프릴리신의 발현을 증가시켜 치매의 원인인 아밀로이드-베타 펩타이드를 제거할 수 있으므로, 알츠하이머 병을 포함한 신경질환의 예방 또는 치료에 유용한 조성물을 기술한다.

참조통합

본 명세서에서 언급된 모든 간행물, 특허 및 특허 출원들은, 마치 각 간행물, 특허 또는 특허 출원들이 참조에 의해 통합되도록 구체적이고 개별적으로 나타내어지는 것과 동일한 정도로 참조에 의해 본 명세서에 통합된다.

본 발명의 신규한 특징은 첨부된 청구항에서 상세하게 제시된다. 본 발명의 특징 및 장점은 본 발명의 원리가 이용된 구체적인 실시양태를 제시한 하기 발명의 상세한 설명, 및 하기와 같은 첨부 도면을 참고함으로써 보다 잘 이해될 것이다:
도 1은 ICAM-1이 미세아교세포의 네프릴리신 발현에 미치는 효과를 나타낸 것이다.
도 2는 ICAM-1이 해마의 네프릴리신 발현에 미치는 효과를 나타낸 것이다.
도 3은 ICAM-1의 아밀로이드-베타42에 대한 효과를 나타낸 것이다.
도 4A는 ICAM-1 단백질의 구조를 나타낸 것이다. 도 4B는 실시예 4에서 제조한 4가지 ICAM-1 단편들을 나타낸 것이다.
도 5는 실시예 4에서 제조한 ICAM-1 단편들을 코딩하는 4가지 ICAM-1 유전자를 나타낸 것이다.
도 6은 ICAM-1 유전자를 포함하는 플라스미드로 형질전환된 대장균 균주로부터 수득한 핵산을 나타낸 것이다.

본 명세서에서 발명의 바람직한 실시양태가 나타내어지고 기술되었지만, 이러한 실시양태는 단지 예시의 수단으로 제공된다는 것이 당업자에게는 명백할 것이다. 당 분야의 숙련자는 본 발명을 벗어나지 않으면서 수많은 변형, 변화 및 대체를 발생시킬 것이다. 본 명세서에서 기술하는 발명의 실시양태에 대한 다양한 대안들이 발명을 수행하는 과정에서 이용될 수 있음을 이해해야 한다. 하기 청구항은 발명의 범위를 정의하고자 한 것이며, 이에 의해 이들 청구항의 범위 내의 방법 및 구조, 및 이들의 등가물을 포함하려는 것이다.

달리 특징되지 않는 한, 본원에서 사용된 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 분야의 통상의 기술자에 의해 공통적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다.

참고 수치와 관련된 용어 "약"은 그러한 수치로부터 플러스 또는 마이너스 15% 수치의 범위를 포함한다. 예를 들어, "약 10"의 양은 8.5 내지 11.5의 양을 포함한다.

용어 "아밀로이드-베타(Aβ)"는 알츠하이머 병 환자의 뇌에서 발견되는 아밀로이드 플라크의 주요 성분을 지칭한다. Aβ는 막통과 당단백질인 아밀로이드 전구체 단백질(APP)의 C-말단으로부터 유래한 아미노산을 포함하는 펩타이드일 수 있다. Aβ는 APP로부터 β-세크레타제 및 γ-세크레타제의 연속적인 작용에 의해 생산될 수 있다. Aβ는 39 내지 43개의 아미노산, 또는 40 내지 42개의 아미노산일 수 있다. Aβ는 NCBI 등록번호: NP_000475의 아미노산 서열에서 672번-713번 잔기(Aβ42) 또는 672번-711번 잔기(Aβ40)를 포함할 수 있다. Aβ는 인간 아밀로이드-베타 A4 단백질 이소폼(isoform) 전구체일 수 있다. Aβ는 포유동물 유래의 것일 수 있다. Aβ는 인간 또는 마우스 유래의 것일 수 있다. Aβ는 재조합에 의해 생산될 수 있다.

용어 "타우 단백질(tau protein)"은 중추신경계의 신경세포에서 발견되는 미세소관(microtubule)-연관 단백질을 지칭한다. 타우 단백질은 튜불린(tubulin)과 연결되어 미세소관을 안정화시키고 미세소관의 튜불린 조립을 촉진한다. 뇌 조직은 6개의 상이한 타우 이소폼을 포함할 수 있다. 타우 단백질의 과인산화는 알츠하이머 병의 발생과 관련이 있다. 타우 단백질은 높은 용해성을 가질 수 있다. 인간에서는 타우 단백질이 비-신경세포보다는 신경세포에서 발견될 수 있다. 타우 단백질은 엑손 미세소관의 안정화에 관여할 수 있다. 타우 단백질은 NCBI 등록번호: NP_005901의 아미노산 서열을 갖는 미세소관-연관 단백질 타우 이소폼2일 수 있다. 타우 단백질은 포유동물 유래의 것일 수 있다. 타우 단백질은 인간 또는 마우스 유래의 것일 수 있다. 타우 단백질은 재조합에 의해 생산될 수 있다.

용어 "네프릴리신"은 수많은 작은 분비 펩타이드를 분해하는 아연-의존성 메탈로프로테아제 효소(zinc-dependent metalloprotease enzyme)를 지칭한다. 네프릴리신은 신경세포 조직에서 아밀로이드-베타가 비정상적으로 폴딩되고 응집되는 경우, 알츠하이머 병을 유발하는 아밀로이드-베타를 분해할 수 있다. 네프릴리신은 NCBI 등록번호: NP_000893의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드일 수 있다. 네프릴리신은 포유동물 유래의 것일 수 있다. 네프릴리신은 인간 또는 마우스 유래의 것일 수 있다. 네프릴리신은 재조합에 의해 생산될 수 있다.

ICAM-1

본 명세서에서는 ICAM-1 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체를 활성성분으로 포함하는 약학 조성물을 기술한다.

일 구현예에서, 본 명세서에 기술된 조성물 및 방법에 유용한 ICAM-1은 자연적으로 생성된 ICAM-1을 포함한다. 일 실시양태에서, 자연적으로 생성된 ICAM-1은 보통은 동물과 연관된 ICAM-1의 야생형 아미노산 서열을 갖는 ICAM-1을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 다른 실시양태에서, 자연적으로 생성된 ICAM-1은 자연적으로 생성된 ICAM-1의 변이체를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 일 실시양태에서, 자연적으로 생성된 변이체는 대립 변이체이다. 다른 실시양태에서, 자연적으로 생성된 변이체는 다형성 변이체이다. 다른 구현예에서, 본 명세서에 기술된 조성물 및 방법에 유용한 ICAM-1은 ICAM-1 돌연변이를 포함한다. 일 실시양태에서, 돌연변이는 자연계에서 발견되는 돌연변이를 갖는 ICAM-1일 수 있다. 다른 실시양태에서, 돌연변이는 ICAM-1에 인공적으로 도입시킨 돌연변이일 수 있다. 일 실시양태에서, 돌연변이는 ICAM-1을 코딩하는 핵산 서열에 하나 이상의 아미노산을 치환, 결실 또는 삽입한 효과를 갖거나 갖지 않는, ICAM-1의 핵산 서열에 도입한 돌연변이일 수 있다.

일 구현예에서, 본 명세서에 기술된 조성물 및 방법에 유용한 ICAM-1은 동물의 ICAM-1을 코딩하는 폴리펩타이드 서열을 포함한다. ICAM-1을 코딩하는 동물은 인간(Homo sapiens), 생쥐(Mus musculus), 집쥐(Rattus norvegicus), 소(Bos taurus), 침팬지(Pan troglodytes), 개(Canis lupus familiaris), 돼지(Sus scrofa), 집토끼(Oryctolagus cuniculus), 뱅골 원숭이(Macaca mulatta), 긴팔 원숭이(Nomascus leucogenys), 중국 햄스터(Cricetulus griseus), 고릴라(Gorilla gorilla), 수마트라 오랑우탄(Pongo abelii), 마모셋 원숭이(Callithrix jacchus), 및 자이언트 팬더(Ailuropoda melanoleuca)를 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 이러한 동물들에서 발견되는 다양한 ICAM-1 펩타이드 서열은 생물정보센터(NCBI)를 포함하여 공공 데이터베이스에서 이용가능하다. 일 실시양태에서, 본 명세서에 기술된 조성물 및 방법에 유용한 ICAM-1은 유전자은행 등록번호(GenBank Accession Number)에 상응하는 서열을 갖는 동물 ICAM-1이다. 본 명세서에 기술된 조성물 및 방법에 유용한 ICAM-1의 유전자은행 등록번호는, P13597.1, Q00238.1, CAA41977.1, AAB19978.1, P05362.2, NP_037099.1, NP_000192.2, NP_776773.1, NP_001009946.1, P33729.2, Q5NKV4.1, Q28806.2, Q95132.1, NP_001040600.1, DAA28002.1, Q5NKV9.1, Q5NKV6.1, AAA92551.1, NP_034623.1, NP_998981.1, AAA37875.1, AAF80287.1, NP_001003291.1, AAD13617.1, NP_001009731.1, ACJ49146.1, AAB51145.1, BAD04920.1, 1IAM_A, 1MQ8_C, 1MQ8_A, 3TCX_b, 3TCX_a, 3TCX_Z, 3TCX_Y, 3TCX_X, 3TCX_W, 3TCX_V, 3TCX_U, 3TCX_T, 3TCX_S, 3TCX_R, 3TCX_Q, 3TCX_P, 3TCX_O, 3TCX_N, 3TCX_M, 3TCX_L, 3TCX_K, 3TCX_J, 3TCX_I, 3TCX_H, 3TCX_G, 3TCX_F, 3TCX_E, 3TCX_D, 3TCX_C, 3TCX_B, 3TCX_A, 2OZ4_H, 2OZ4_L, 2OZ4_A, 1P53_B, 1P53_A, 1MQ8_D, 1MQ8_B, 1IC1_B, 1IC1_A, CAA30051.1, 1D3E_I, 1D3E_4, 1D3E_3, 1D3E_2, 1D3E_1, 1D3L_A, NP_037021.1, 1DGI_4, 1DGI_3, 1DGI_2, 1DGI_1, 1DGI_R, NP_034624.1, NP_001032869.2, NP_001186763.1, NP_542413.1, NP_001069.1, P90489.1, NP_579840.1, 3EO9_H, 3EO9_L, 3EOB_J, 3EOB_B, 3EOB_A, 3EOB_I, 3EOB_H, 3EOB_L, 3EOA_J, 3EOA_B, 3EOA_A, 3EOA_I, 3EOA_H, 3EOA_L, BAA00759.1, CAA36507.1, NP_999056.1, NP_036843.1, AAA84866.1, 3HI6_Y, 3HI6_X, 3HI6_L, 3HI6_H, 3HI6_B, 3HI6_A, 3HI5_L, 3HI5_H, AAA37876.1, 1MJN_A, AAA35415.1, 1MQA_A, 1MQ9_A, NP_001139280.1, NP_000623.2, NP_000425.1, EAW72950.1, EAW72949.1, NP_938033.1, NP_005408.1, NP_002219.1, P29533.1, P19320.1, Q9UMF0.3, P13598.2, NP_035823.3, NP_937882.1, NP_003871.1, NP_001107852.1, NP_002200.2, NP_001093259.1, NP_001093258.1, NP_001093257.1, NP_000864.2, NP_001093256.1, NP_038900.1, NP_058577.1, NP_001126200.1, NP_001095120.1, NP_001094628.1, NP_001094501.1, NP_776909.1, NP_612405.2, EHH50108.1, EHH14990.1, NP_001075621.1, EHB02165.1, XP_003479223.1, XP_003409421.1, AEH17929.1, NP_001003298.1, ADS87907.1, ADS87821.1, ADS11235.1, XP_002928199.1, XP_001135527.2, XP_003260168.1, XP_003260167.1, XP_003260166.1, AED70916.1, 1YO4_A, 1Z7Z_I, 1VCA_B, 1VCA_A, BAE25364.1, BAE37132.1, BAJ20764.1, AAA61269.1, AAA52709.1, AAA42332.1, AAA40545.1, AAA51917.1, XP_002801716.1, XP_001107860.1, XP_001107924.1, DAA31477.1, DAA31439.1, XP_002751186.1, XP_002751185.1, XP_002751184.1, AAO52742.1, AAG30280.1, AAC97931.1, AAH89812.1, AAH81837.1, EFB17343.1, AAH11159.2, AAH29823.1, AAA61270.1, AAY99622.1, AAI51460.1, AAM96190.1, AAH85003.1, AAH68490.2, AAH17276.3, AAA16921.1, 1D3I_I, ACP59454.1, CAJ18580.1, ACE87430.1, ACE86744.1, CAH92063.1, ABS85192.1, BAF84421.1, BAD96986.1, EDL82023.1, EDL78334.1, 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BAG73299.1, CAJ18510.1, CAJ18454.1, 1Z7S_4, 1Z7S_3, 1Z7S_2, 1Z7S_1, BAG60348.1, BAG35520.1, ABM85957.1, ABM84711.1, DAA06142.1, DAA06141.1, CAP72055.1, BAF85799.1, BAD96939.1, BAD93115.1, ABU37676.1, ABU37675.1, ABU37674.1, EDL78332.1, EDL25153.1, EDL25151.1, CAM73181.1, ABM92232.1, ABM82769.1, AAQ14922.1, AAQ14905.1, AAQ14904.1, AAQ14902.1, ABL30031.1, ABL13876.1, CAA40441.1, CAL47730.1, CAE84094.1, CAE84091.1, CAA34622.1, AAX42182.1, AAX42181.1, AAX29641.1, AAX29640.1, AAX37087.1, AAX36636.1, AAX04661.1, AAQ80664.1, AAQ71936.1, AAQ70987.1, AAQ53651.1, AAQ53650.1, AAQ53649.1, AAQ53648.1, AAQ53647.1, AAQ53646.1, CAD97562.1, CAD97565.1, AAE22204.1, AAE22202.1, AAE20921.1, AAE20920.1, AAE20919.1, AAE10139.1, AAC89984.1, AAC89982.1, AAC87796.1, AAC87794.1, AAC19905.1, AAC19903.1, AAC19660.1, 225938, AAA55744.1, NP_570116.2, Q5NKV2.1, Q5NKV1.1, NP_570118.1, P41323.1, NP_001029170.1, 2V7D_S, 2V7D_R, 2V7D_Q, 2V7D_P, 2V7D_D, 2V7D_C, 2V7D_B, 2V7D_A, 2JF1_T, 2JF1_A, AAE18933.1, AAE18932.1, AAE18931.1, AAE18930.1, AAE18929.1, AAE18928.1, AAE18927.1, AAE18926.1, AAE18925.1, AAE18924.1, AAE18923.1, AAE18922.1, AAE18921.1, AAE18920.1, AAE18919.1, AAE18918.1, AAE18917.1, AAE18916.1, AAE18915.1, 3M6F_A, AAA60393.1, 및 AAA60392.1를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

일 구현예에서, 본 명세서에 기술된 조성물 및 방법에 유용한 ICAM-1은 글리코실화된다. 다른 구현예에서, 본 명세서에 기술된 조성물 및 방법에 유용한 ICAM-1은 비-글리코실화된다. 일 실시양태에서, 글리코실화는 자연적으로 발생될 수 있다. 다른 구현예에서 글리코실화는 당 기술분야에 일반적으로 알려진 재조합 DNA 기술을 통해 ICAM-1에 인공적으로 도입될 수 있다.

일 구현예에서, 본 명세서에 기술된 조성물 및 방법에 유용한 ICAM-1은 자연적으로 변형된다. 일 실시양태에서 자연적 변형은 번역후 변형(post-translational modification)이다. 일 실시양태에서, ICAM-1은 ICAM-1의 시그날 펩타이드 부분을포함하는 폴리펩타이드를 포함한다. 다른 실시양태에서, ICAM-1은 ICAM-1의 시그날 펩타이드 부분이 결실된 폴리펩타이드를 포함한다.

일 구현예에서, 본 명세서에 기술된 조성물 및 방법에 유용한 ICAM-1은 서열번호: 1의 아미노산 서열(Genbank 등록번호: AAQ14901)을 갖는다:

다른 구현예에서, ICAM-1은 아미노산 서열 AAQ14901에 상응하되, 서열번호: 1의 아미노산 서열의 1 내지 27번째 아미노산 잔기에 상응하는 시그날 펩타이드가 결실된 펩타이드이다. 다른 실시양태에서, ICAM-1은 침팬지 ICAM-1 단백질이다. 다른 실시양태에서, ICAM-1은 서열번호: 10의 아미노산 서열(Genbank 등록번호: AAQ14896)을 갖는다.

일 실시양태에서, 본 명세서에 기술된 조성물 및 방법에 유용한 ICAM-1은 ICAM-1 단백질의 단편이다. 일 실시양태에서, ICAM-1 단백질의 단편은 ICAM-1 단백질과 동등한 생물학적 활성을 갖는다. 다른 실시양태에서, ICAM-1 단백질의 단편은 ICAM-1 단백질과 동등한 생물학적 활성을 갖지 않는다. 또 다른 실시양태에서, ICAM-1 단백질의 단편은 생물학적 불활성 상태이다.

일 구현예에서, 네프릴리신 발현에 대한 ICAM-1의 효과는 ICAM-1의 생물학적 활성을 측정하기 위해 사용된다. 일 실시양태에서, 상기 효과는 네프릴리신 발현 의 증가 수준이다. 다른 실시양태에서, 상기 효과는 네프릴리신 발현 감소이다. 일 실시양태에서 ICAM-1 단편의 생물학적 활성은 비교를 위한 표준으로 사용되는 다른 ICAM-1의 활성의 백분율로서 측정된다. 비교를 위한 ICAM-1 표준은 전장 ICAM-1, 절삭된 ICAM-1, 돌연변이된 ICAM-1, 번역 후 변형된 ICAM-1, 또는 비교되는 ICAM-1과 상이한 ICAM-1의 단편일 수 있다. 본 명세서에 기술된 임의의 ICAM-1 단백질 또는 폴리펩타이드가 비교용 단백질로서 사용될 수 있다. 생물학적 활성의 차이의 백분율은 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%, 105%, 110%, 115%, 120%, 125%, 130%, 135%, 140%, 145%, 150%, 155%, 160%, 165%, 170%, 175%, 180%, 185%, 190%, 195%, 또는 200%일 수 있다. 일 실시양태에서, ICAM-1 단편의 생물학적 활성은 비교를 위한 표준으로 사용되는 다른 ICAM-1의 활성의 증가 또는 감소 배수로서 측정된다. 증가 또는 감소 배수는 약 2배, 2.5배, 3배, 4배, 5배, 7배, -배, 10배, 20배, 30배, 50배, 100배, 200배, 500배, 800배, 또는 1000배일 수 있다.

일 실시양태에서, ICAM-1 단편은 서열번호: 1의 28 내지 483번째 아미노산 서열을 포함한다. 다른 실시양태에서, ICAM-1 단편은 서열번호: 1의 28 내지 380번째 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서 ICAM-1 단편은 서열번호: 1의 28 내지 300번째 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서 ICAM-1 단편은 서열번호: 1의 28 내지 200번째 아미노산 서열을 포함한다.

본원에서는 신경질환의 치료에 유용한 서열번호: 1의 ICAM-1 변이체를 기술한다. 일 실시양태에서, 서열번호: 1의 변이체는 하나 이상의 아미노산이 치환, 결실 또는 삽입된 폴리펩타이드이다. 다른 실시양태에서, 변이체의 서열번호: 1에 대한 서열 상동성은 80%, 82%, 85%, 87%, 89%, 90%, 93%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상이다. 다른 실시양태에서, 변이체의 세포외 도메인의 서열번호: 1의 세포외 도메인에 대한 서열 상동성은 80%, 82%, 85%, 87%, 89%, 90%, 93%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상이다. 다른 실시양태에서, 변이체의 세포내 도메인의 서열번호: 1의 세포내 도메인에 대한 서열 상동성은 80%, 82%, 85%, 87%, 89%, 90%, 93%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상이다. 다른 실시양태에서, 변이체의 막통과 도메인의 서열번호: 1의 막통과 도메인에 대한 서열 상동성은 80%, 82%, 85%, 87%, 89%, 90%, 93%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상이다.

일 구현예에서, 본 명세서에 기술된 조성물 및 방법은 ICAM-1의 하나 이상의 단리된 폴리펩타이드를 포함한다. 일 실시양태에서, ICAM-1의 하나 이상의 단리된 폴리펩타이드는 상이한 아미노산 서열의 ICAM-1들이다. 다른 실시양태에서, ICAM-1의 하나 이상의 단리된 폴리펩타이드는 번역 후 변형 과정에 의해 상이하게 가공된 ICAM-1이다.

다른 구현예에서, 본 명세서에 기술된 조성물 및 방법은 세포에 부착된 하나 이상의 ICAM-1 폴리펩타이드를 포함한다. 일 실시양태에서, 하나 이상의 ICAM-1 폴리펩타이드는 세포에 공유결합으로 부착되어 있다. 다른 실시양태에서, 상기 폴리펩타이드는 세포막에 박혀있다. 상기 세포는 포유동물 세포, 박테리아 세포, 곰팡이 세포 또는 곤충 세포를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 일 실시양태에서, 세포는 인간 세포이다. 다른 실시양태에서 세포는 인간 줄기세포이다. 또 다른 실시양태에서, 세포는 인간 중간엽 줄기세포이다. 또 다른 실시양태에서, 세포는 인간 기질세포이다. 또 다른 실시양태에서, 세포는 제대혈 세포이다. 본 명세서에 기술된 조성물 및 방법에 유용한 제대혈 세포는, 제대, 제대혈, 양막 주머니(amniotic sac) 및 태반에서 정상적으로 발견되는 세포, 또는 이로부터 배양된 세포를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

다른 구현예에서, 본 명세서에 기술된 조성물 및 방법은 하나 이상의 ICAM-1 폴리펩타이드 및 ICAM-1 폴리펩타이드 분비 세포를 포함한다.

다른 구현예에서, 본 명세서에 기술된 조성물 및 방법은 다른 생물학적 물질과 결합된 하나 이상의 ICAM-1 폴리펩타이드를 포함한다. 생물학적 물질은 결합된 폴리펩타이드를 분리 또는 확인하는데 유용한 다양한 작은 펩타이드, 다른 단백질, 화학적 수단(당 기술분야에서는 "태그"로 알려짐)을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

일 구현예에서, 본 명세서에 기술된 ICAM-1 폴리펩타이드는 기관, 조직 또는 세포로부터 분리된 것이다. 일 실시양태에서, ICAM-1은 중간엽 줄기세포(MSCs) 또는 이의 배양액으로부터 분리된 것이다. 중간엽 줄기세포의 원료의 예로는 인간의 배낭(embryonic yolk sac), 태반, 제대, 제대혈, 피부, 말초혈액, 골수, 지방 조직, 근육, 간, 신경 조직, 골막, 태아막, 활액막, 활액, 양막, 반월상연골, 전십자 인대, 관절 연골세포, 유치, 혈관주위세포, 지주골, 슬개골하 지방괴, 비장 및 흉선을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 일 실시양태에서, MSC의 원료는 제대혈-유래 MSC 또는 골수-유래 MSC이다.

본 명세서에서는 제대혈로부터 MSC를 분리하는 방법을 기술한다. 일 실시양태에서, ICAM-1은 제대혈-유래 MSC를 배양하여 분리된다. 일 실시양태에서, 제대혈-유래 MSC는 원심분리로 분리된다. 다른 실시양태에서, 제대혈-유래 MSC는 형광-활성화 세포 분리법으로 분리된다. 다른 실시양태에서, 제대혈-유래 MSC는 마그네틱 비드를 포함한 다양한 태그를 사용하여 분리된다. 다른 실시양태에서, 제대혈-유래 MSC는 MSC-특이적 항체를 사용하여 분리된다. 일부 구현예에서, 기타 세포 단리 및 구분법이 사용될 수 있다. 당업계에 공지된 이러한 방법들로는 크기, 무게 또는 세포의 형태, 세포 표면 분자의 형태의 차이, 화합물, 단백질 또는 기타 세포에 대한 저항 또는 어트랙션(attraction), 및 비-MSC로부터 MSC를 구별해 내는데 유용한 기타 물리적 또는 화학적 성질에 의해 분리하는 방법을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

일 구현예에서, ICAM-1은 재조합 DNA 기술에 의해 생산된다. 일 실시양태에서, ICAM-1 또는 이의 단편을 코딩하는 핵산은 적절한 재조합 발현 시스템으로 클로닝된다. 일 실시양태에서, 재조합 발현 시스템은 박테리아 발현 시스템이다. 다른 실시양태에서, 재조합 발현 시스템은 곤충-세포 발현 시스템이다. 다른 실시양태에서, 재조합 발현 시스템은 포유동물 발현 시스템이다. 일 실시양태에서, 박테리아 재조합 발현 시스템은 pET 벡터 발현 시스템이다. 일 실시양태에서, 본 명세서에 기술된 ICAM-1을 발현하는데 유용한 pET 벡터는 pET-28a 플라스미드 DNA이다. 다른 실시양태에서, 본 명세서에 기술된 조성물에 유용한 박테리아 재조합 발현 시스템은 서열번호: 2의 핵산 서열(GenBank 등록번호: NM_000201)을 갖는 ICAM-1, 또는 이의 단편을 코딩하는 핵산을 포함하는 pET 벡터이다:

일 실시양태에서, ICAM-1을 발현하는데 유용한 박테리아 세포는 대장균(E. coli) BL21 변이체이다. 일 실시양태에서, 변이체는 대장균 BL21(DE3)이다. 일 실시양태에서, 재조합 ICAM-1의 박테리아 발현은 형질전환된 박테리아 세포를 IPTG로 처리함으로써 유도된다.

본원에서는 신경질환의 예방 또는 치료에 유용한 약학 조성물을 기술한다. 일 실시양태에서, 신경질환은 신경세포 내 아밀로이드-베타 플라크 형성, 신경세포 내 타우 단백질의 과인산화, 신경돌기의 손상, 신경세포 내의 네프릴리신의 발현 감소 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상에 의하여 유발되는 질환이다. 다른 실시양태에서, 신경질환은 알츠하이머 병, 파킨슨 병, 우울증, 간질, 다발성 경화증, 조증, 루게릭병, 경도인지장애, 다발-경색성 치매 및 루이소체 치매로 이루어진 군으로부터 선택된다.

일 구현예에서, 본 명세서에 기술된 ICAM-1 폴리펩타이드는 대상에 투여되어 신경질환의 진행에 개입한다. 일 실시양태에서, 본 명세서에 기술된 ICAM-1 폴리펩타이드는 알츠하이머 병을 앓는 대상에 투여되어 알츠하이머 병의 진행을 느리게 하거나 또는 멈추거나 또는 역전시킨다. 일 실시양태에서, 1회 용량의 ICAM-1 폴리펩타이드는 대상에 1회 투여된다. 다른 실시양태에서, 1회 용량의 ICAM-1 폴리펩타이드는 장기간 동안 일정한 간격으로 대상에 투여된다. 간격은 며칠, 몇 주, 몇 달 또는 몇 년일 수 있다. 다른 실시양태에서, ICAM-1 폴리펩타이드의 최초 용량이 상기 대상에 투여된 후 대상의 임상학적 결과에 따라 이후의 용량은 감소되거나 또는 증가된다. 임상학적 결과는 자가 평가, 임상학적 치매 점수화와 같은 임상 설문, 또는 정신 상태 검사를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아닌 신경심리테스트에 의해 측정된다.

본 명세서에 기술된 조성물은 국부적 투여 또는 전신적 투여를 통해 전달될 수 있다. 일 실시양태에서, 본 명세서에 기술된 조성물은 신경질환의 예방 또는 치료를 위한 유효량으로 투여된다. 일 실시양태에서, 유효량은 임상실험에 의해 결정된다. 유효 용량은 신경학적 상태의 유형, 제조 공정, 제형, 투여 경로 및 부형제의 유형을 포함하는 다양한 상황에 근거하여 다양화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

경도인지장애를 가진 치매 전 증후군 환자는 신경심리검사를 이용하여 진단될 수 있다. 1년 동안 경도인지장애를 가진 환자의 약 12%가 알츠하이머 병으로 발전된다는 보고가 있다. 놀랍게도, 경도인지장애를 가진 환자가 어떠한 치료도 없이 6년 동안 방치되면 80%가 알츠하이머 병으로 진전한다는 보고가 있다. 따라서, 본 발명에 따른 ICAM-1 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체를 경도인지장애를 갖는 환자에게 투여하면 알츠하이머 병의 진행을 막거나 진행을 늦출 수 있다.

일 구현예에서, 본 명세서에 기술된 조성물은 알츠하이머 병, 파킨슨 병, 우울증, 간질, 다발성경화증, 조증, 루게릭 병, 경도인지장애, 다발경색성 치매 또는 루이소체 치매의 예방 또는 치료에 효과적인 다른 개선제 또는 치료제와 조합하여 투여된다. 일 실시양태에서, 본 명세서에 기술된 조성물은 부수적으로 다른 개선 조성물 또는 치료제와 함께 투여된다. 다른 실시양태에서, 본 명세서에 기술된 조성물은 알츠하이머 병, 파킨슨 병, 우울증, 간질, 다발성경화증, 조증, 루게릭 병, 경도인지장애, 다발경색성 치매 또는 루이소체 치매에 효과적인 것으로 공지된 다른 개선 조성물을 포함하도록 제제화된다.

본 명세서에 기술된 조성물은 상기 활성성분 이외에 약학적으로 허용가능한 첨가제를 포함할 수 있다. 주사제 또는 국부 투여용 제제와 같은 비경구 투여용 제제가 사용될 수 있다. 예를 들어, 상기 비경구 투여용 제제는 필요에 따라서 물 또는 그 이외의 약학적으로 허용가능한 용매를 사용한 무균성 용액 또는 현탁액제의 주사제의 형태로 사용될 수 있다. 예를 들면, 단위 용량 형태는 약학적으로 허용되는 담체 혹은 매체, 예를 들어 멸균수, 생리식염수, 식물유, 유화제, 현탁제, 계면활성제, 안정제, 부형체, 비히클(vehicle), 방부제 및 결합제를 이용하여 제조될 수 있다. 상기 비경구 투여는 국부적 투여 및 전신적 투여를 포함할 수 있다. 상기 국부적 투여는 직접적으로 병변 또는 병변 주변, 예를 들면 병변인 뇌 또는 척추, 그 주변 또는 그 반대쪽 부위에 직접적으로 투여하는 것일 수 있다. 상기 국부적 투여는 비강-투여 및 경동맥 투여를 포함할 수 있다. 상기 전신적 투여는 척수액, 정맥 또는 동맥에 약학 제제를 투여함으로써 수행될 수 있다. 상기 척수액은 뇌척수액을 포함한다. 상기 동맥은 병변에 혈액을 공급하는 부위일 수 있다. 일 실시양태에서, 상기 투여는 예를 들어 더글라스 콘치올카(Douglas Kondziolka, Pittsburgh, Neurology, vol. 55, pp. 565-569, 2000)에 기재된 방법에 따라 이루어질 수 있으며, 이의 전체가 본원에 통합된다. 일 실시양태에서, 대상의 두개골을 지름 약 1cm 구멍이 생기도록 절개한 다음, HBSS (Hank's balanced salt solution)와 혼합된 ICAM-1 현탁액을 긴 바늘이 달려 있는 주사기 및 표적 부위에 상기 현탁액을 주입하기 위한 틀(stereotactic frame)을 이용하여 주입한다. 상기 ICAM-1의 1일 용량은 500 내지 1000 ng/kg 체중 범위일 수 있으며, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다.

본원에서는 ICAM-1 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체를 신경세포와 함께 배양하는 것을 포함하는, 신경세포에서의 네프릴리신의 발현을 증가시키는 방법을 기술한다. 일 실시양태에서, 네프릴리신 발현은 ICAM-1을 신경세포와 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 9일 또는 12일 미만 동안 배양함으로써 증가된다. 다른 실시양태에서, 네프릴리신 발현은 ICAM-1을 신경세포와 12일 이상 배양함으로써 증가된다. 일 실시양태에서, ICAM-1은 신경세포를 포함하는 배지에 첨가되어 함께 배양된다. 다른 실시양태에서, ICAM-1 발현 세포는 신경세포를 포함하는 배지에 첨가되어 함께 배양된다. 다른 실시양태에서, ICAM-1 또는 ICAM-1 발현세포 및 신경세포는, 배양액 내의 세포에 의해 분비되거나 또는 배양 장치의 각 구획에 첨가된, 단백질, 리간드 또는 그 외 세포내 산물이 아닌 영양분의 흐름을 가능하게 하는 배양 장치의 별도의 구획에서 공동 배양된다.

본원에서는 ICAM-1 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체를 대상에 투여하는 것을 포함하는 대상에서 네프릴리신의 발현을 증가시키는 방법을 기술한다. 일 실시양태에서, 상기 투여는 국부적 투여이다. 다른 실시양태에서, 상기 투여는 전신적 투여이다. 일 실시양태에서, 네프릴리신의 발현을 증가시키는 유효량이 투여된다. 일 실시양태에서, 유효량의 ICAM-1을 포함하는 제제는 물, 배양 배지, 버퍼 및 부형제로 이루어진 군으로부터 선택되는 첨가제를 추가로 포함한다.

실시예

이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다. 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위를 한정하려는 것은 아니다.

실시예 1: ICAM-1 단백질이 NEP 발현에 미치는 시험관내 효능

서열번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 재조합 ICAM-1 단백질을 R&D SYSTEMS(미국)로부터 입수하였고, BV2 세포를 서울대학교로부터 입수하였다. BV2 세포는 마우스 미세아교세포(microglial cell)를 v-raf/v-myc 재조합 레트로바이러스로 감염시켜 불멸화시킨 세포로서, 활성화된 미세아교세포의 특성을 발현한다. 상기 BV2 세포를 무혈청 DMEM 배지에서 배양한 다음, ICAM-1 재조합 단백질을 5, 10 및 50 ng/mL의 농도로 각각 처리하고, 24시간 후에 세포를 회수하였다. 상기 회수된 각 군의 세포를 초음파 파쇄기(Branson Ultrasonics Corp.)를 이용하여 분쇄하고, 버퍼(9.8 M 우레아, 4% CHAPS, 130 mM 디티오트레이톨, 40mM Tris-HCl, 및 0.1% 도데실 황산나트륨(sodium dodecyl sulfate, SDS))를 사용하여 이로부터 각각의 단백질 추출물을 얻었다. 상기 추출된 단백질을 브래드포드 분석 키트(Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA)를 이용하여 정량하고, 단백질 추출물 20 μg을 SDS-PAGE에서 분리한 다음 니트로셀룰로오스 막으로 전기이동하였다. 각 니트로셀룰로오스 막을 1차 항체(항-NEP 항체; R&D Systems, Minneapolis, MN)와 하룻밤 동안 반응시킨 후, PBS로 3회 수세하고, 2차 항체(항-염소 IgG; Santa Cruz사, 미국)와 반응시켰다. 이어, 상기 단백질을 ECL 키트(Amersham)를 이용하여 검출하였다. 정량 확인을 위한 내부 대조군(internal control)으로 베타-액틴을 사용하였다.

그 결과를 도 1의 좌측에 나타내었다. 도 1 좌측 상단은 면역블럿 결과를 나타내며, 도 1 좌측 하단은 덴시토미터로 측정한, 대조군(비처리군)에 대한 각 밴드의 상대적 세기를 나타낸 것이다(n=3, P<0.05).

상기 결과에서 보는 바와 같이, 대조군(비처리군)에 비해 ICAM-1 처리군에서 NEP의 발현이 증가하는 것으로 나타났다. 또한, ICAM-1 단백질의 농도에 따라 NEP의 발현 수준도 증가하였다.

한편, ICAM-1 단백질의 시간별 처리에 따른 효능을 살펴보기 위하여, BV2 세포를 ICAM-1 단백질(20 ng/mL)로 12, 24 및 36시간 동안 각각 처리한 후, 상기와 동일한 방식으로 NEP의 발현을 분석하였다.

그 결과를 도 1의 우측에 나타내었다. 상기 결과에서 보는 바와 같이, NEP의 발현은 ICAM-1 단백질의 처리시간에 비례하여 증가하였다.

실시예 2: ICAM-1 단백질이 NEP 발현에 미치는 생체내 효능

ICAM-1 단백질이 NEP 발현에 미치는 효능을 살펴보기 위하여, 마취한 정상 마우스(B6C3F1/J, 13주령, 30g)의 양쪽 해마에 뇌정위 기구(Stereotaxic apparatus)를 이용하여 PBS 5 μl(n=4), 혹은 PBS (5μl)에 용해된 ICAM-1 단백질 500 또는 1000 ng/kg (n=4/군)을 투여하였다. 7일 후, 마우스를 희생시키고 뇌조직을 얻었다. 상기 실시예 1과 동일한 방식으로, 얻어진 뇌조직을 파쇄하여 단백질 추출물을 얻은 후, NEP 발현을 분석하였다.

그 결과를 도 2에 나타내었다. 도 2에서 보는 바와 같이, 대조군(비처리군)에 비해 ICAM-1 처리군에서 NEP의 발현이 증가하였다. 특히, ICAM-1 1000 ng/kg 처리군에서의 NEP 발현 수준이 대조군(PBS)에 비해 2배 이상 증가하였다(P=0.005).

실시예 3: ICAM-1의 아밀로이드-베타42에 대한 효과

ICAM-1이 아밀로이드-베타42의 분해에 미치는 효과를 확인하기 위하여, 하기 실험을 수행하였다. 구체적으로, 무혈청 DMEM 배지에서 배양한 BV2 세포를 ICAM-1 단백질 (5 또는 10 ng/mL) 및 아밀로이드-베타42 (10 μM)와 동시에 전처리한 후, 24시간 동안 추가 배양하였다. 상기 배양 배지 중의 아밀로이드-베타42의 양을 ELISA 키트 (Wako Pure Chemical Industries Ltd., 일본)를 이용하여 측정하였다. 그 결과를 도 3에 나타내었다.

도 3에서 보는 바와 같이, ICAM-1 단백질 처리군에서 대조군과 비교하여 Aβ42의 양이 현저히 감소하였다. 특히, ICAM-1-처리군에서 ICAM-1 단백질의 농도에 따라 Aβ42의 양이 감소하였다. 상기 결과는 ICAM-1 단백질에 의해 발현이 유도된 NEP가 Aβ42를 분해하였음을 나타낸다.

실시예 4: ICAM-1 단편 제조 및 이의 활성 평가

ICAM-1 활성을 나타내는 활성 도메인을 확인하기 위하여, 시그날 펩타이드를 제거하고 ICAM-1 도메인들의 위치에 따라 4개의 단편들을 디자인하였다(도 4). ICAM-1 유전자의 정확한 증폭을 유도하기 위한 사전-PCR에서는 전장 ICAM-1 유전자 증폭용 프라이머, 및 각 유전자 단편들을 증폭시키기 위한 서열에 제한효소 NdeI(NEB, USA) 및 BamHI(NEB, USA)의 인식 부위를 삽입한 프라이머들을 합성하였다.

Pfu-PCR의 조건은 다음과 같다: 94℃, 30초; 58~60℃, 45초; 72℃, 30초로 40 사이클. 이렇게 얻어진 ICAM-1 단편들과 pET-28a 플라스미드 DNA(Novagen^®, USA)를 NdeI과 B amHI으로 절단하였다. 상기 프라이머 서열, 어닐링 온도, 및 PCR 산물의 크기를 하기 표 1에 나타내었다.

표적 유전자	프라이머 서열	어닐링 온도(℃)	PCR 산물 크기 (bp)
ICAM-1	5'-CCCCCAGGTGGCTAGCGCTA-3' (서열번호: 3) 5'-GTGCCCAAGCTGGCATCCGT-3' (서열번호: 4)	58	2153
A 단편	5'-CCGCCGCATATGCAGACATCTGTGTCCCCC-3'(서열번호: 5) 5'-CCCCCCCCCCGGGGATCCTCATCAGATGACAATCTC-3'(서열번호: 6)	60	1404
B 단편	5'-CCGCCGCATATGCAGACATCTGTGTCCCCC-3'(서열번호: 5) 5'-CATTCGGGATCCTCATCACTGGCCGGCCACCTC-3'(서열번호: 7)	60	1089
C 단편	5'-CCGCCGCATATGCAGACATCTGTGTCCCCC-3'(서열번호: 5) 5'-CGGGGATCCTCATCACTCCTGGCTCTGGTTCCC-3'(서열번호: 8)	60	846
D 단편	5'-CCGCCGCATATGCAGACATCTGTGTCCCCC-3'(서열번호: 5) 5'-CGGCGGGGATCCTCATCAAAACAGCTCCAGCCC-3'(서열번호: 9)	60	549

상기 제조된 단편 A는 ICAM-1 단백질의 아미노산 서열에서 28 내지 483번째 아미노산을 코딩하며; 단편 B는 28 내지 380번째; 단편 C는 28 내지 300번째; 단편 D는 28 내지 200번째 아미노산을 코딩한다.

상기 제조된 ICAM-1 단편들의 크기를 2% 아가로스 겔(Invitrogen, USA)에서 전기영동하여 확인하였다. 상기 전기영동 결과를 도 5에 나타내었다. 도 5에서 보는 바와 같이, 4개의 단편이 정확한 크기로 제조되었음을 알 수 있었다.

상기 단편들을 겔 추출 키트(QIAGEN, USA)로 정제하고, NdeI/BamHI로 처리한 pET-28a 플라스미드 DNA (Novagen^®, USA)와 혼합한 후, T4 DNA 리가아제(NEB, USA)를 이용하여 라이게이션하였다. 상기 라이게이션된 플라스미드로 대장균BL21(DE3)(Sigma, USA)을 형질전환시킨 다음, 형질전환체를 LB 아가 배지(BD, USA)에서 배양하였다. 증식된 단일 콜로니들을 집어 PCR 튜브에 넣고 PCR 반응을 수행하였다. 증폭된 삽입체(insert)를 상기와 같이 전기영동으로 확인하여(도 6), 콜로니를 선택하였다. 선택된 콜로니들을 LB Broth(BD, USA)에서 배양하고, QIAGEN^® 플라스미드 정제 키트(QIAGEN, USA)를 이용하여 정제하여 DNA를 수득하였다. 정제된 DNA를 NdeI 및 BamHI로 잘라준 다음, EtBr이 있는 2% 아가로스 겔에서 목적 유전자를 포함하는 단일 콜로니를 확인하였다. 상기 DNA를 PCR 정제 키트(QIAGEN, USA)로 정제하고, 삽입된 단편의 정확한 서열을 확인하였다. DNA 서열이 확인된 콜로니들을 LB Broth에서 IPTG(Promega, USA) 유도 하에 배양하였다. 생성된 배양물을 원심분리하고, 침전된 세포에 8M 우레아(pH 8.0)를 처리하여 세포를 용해시켰다. 재조합 단백질의 N-말단에 부착된 6XHis 및 니켈-니트릴로트리아세트산 (nickel-nitrilotriacetic acid, Ni-NTA)간의 결합 원리에 따라 Ni-NTA 아가로스(QIAGEN, USA)를 이용하여 재조합 단백질을 분리한 뒤, SDS PAGE와 웨스턴 블롯에 의해 확인하였다.

제조 실시예 1: 주사제

주사제를 제조하기 위하여, ICAM-1 단백질 100mg을 물에 용해시킨 후, 0.9% 멸균식염수 10mL와 혼합하였다. 상기 혼합물을 주사용으로 적합한 복용 단위(unit) 형태로 통합시켰다.

제조 실시예 2: 흡입제

흡입 전달용 제제를 제조하기 위하여, ICAM-1 단백질 20mg을 무수 시트르산 50mg 및 0.9% 염화나트륨 용액 100mL와 혼합하였다. 상기 혼합물을 흡입 투여에 적합한 흡입 전달 단위, 예컨대 분무기(nebulizer)로 통합시켰다.

제조 실시예 3: 비강 전달제

비강 분무 용액을 제조하기 위하여, ICAM-1 단백질 10g을 0.05M 인산완충용액 30mL (pH 4.4)과 혼합하였다. 상기 용액을 각 분무 적용 시 100μl가 전달되도록 고안된 비강 투여기 내에 위치시켰다.

<110> MEDIPOST CO., LTD <120> USE OF ICAM-1 FOR PREVENTION OR TREATMENT OF NEUROLOGICAL DISEASES <130> PCB102007MED <150> US 61/438,809 <151> 2011-02-02 <150> US 61/541,487 <151> 2011-09-30 <160> 10 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 532 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Ala Pro Ser Ser Pro Arg Pro Ala Leu Pro Ala Leu Leu Val Leu 1 5 10 15 Leu Gly Ala Leu Phe Pro Gly Pro Gly Asn Ala Gln Thr Ser Val Ser 20 25 30 Pro Ser Lys Val Ile Leu Pro Arg Gly Gly Ser Val Leu Val Thr Cys 35 40 45 Ser Thr Ser Cys Asp Gln Pro Lys Leu Leu Gly Ile Glu Thr Pro Leu 50 55 60 Pro Lys Lys Glu Leu Leu Leu Pro Gly Asn Asn Arg Lys Val Tyr Glu 65 70 75 80 Leu Ser Asn Val Gln Glu Asp Ser Gln Pro Met Cys Tyr Ser Asn Cys 85 90 95 Pro Asp Gly Gln Ser Thr Ala Lys Thr Phe Leu Thr Val Tyr Trp Thr 100 105 110 Pro Glu Arg Val Glu Leu Ala Pro Leu Pro Ser Trp Gln Pro Val Gly 115 120 125 Lys Asn Leu Thr Leu Arg Cys Gln Val Glu Gly Gly Ala Pro Arg Ala 130 135 140 Asn Leu Thr Val Val Leu Leu Arg Gly Glu Lys Glu Leu Lys Arg Glu 145 150 155 160 Pro Ala Val Gly Glu Pro Ala Glu Val Thr Thr Thr Val Leu Val Arg 165 170 175 Arg Asp His His Gly Ala Asn Phe Ser Cys Arg Thr Glu Leu Asp Leu 180 185 190 Arg Pro Gln Gly Leu Glu Leu Phe Glu Asn Thr Ser Ala Pro Tyr Gln 195 200 205 Leu Gln Thr Phe Val Leu Pro Ala Thr Pro Pro Gln Leu Val Ser Pro 210 215 220 Arg Val Leu Glu Val Asp Thr Gln Gly Thr Val Val Cys Ser Leu Asp 225 230 235 240 Xaa Leu Phe Pro Val Ser Glu Ala Gln Val His Leu Ala Leu Gly Asp 245 250 255 Gln Arg Leu Asn Pro Thr Val Thr Tyr Gly Asn Asp Ser Phe Ser Ala 260 265 270 Lys Ala Ser Val Ser Val Thr Ala Glu Asp Glu Gly Thr Gln Arg Leu 275 280 285 Thr Cys Ala Val Ile Leu Gly Asn Gln Ser Gln Glu Thr Leu Gln Thr 290 295 300 Val Thr Ile Tyr Ser Phe Pro Ala Pro Asn Val Ile Leu Thr Lys Pro 305 310 315 320 Glu Val Ser Glu Gly Thr Glu Val Thr Val Lys Cys Glu Ala His Pro 325 330 335 Arg Ala Lys Val Thr Leu Asn Gly Val Pro Ala Gln Pro Leu Gly Pro 340 345 350 Arg Ala Gln Leu Leu Leu Lys Ala Thr Pro Glu Asp Asn Gly Arg Ser 355 360 365 Phe Ser Cys Ser Ala Thr Leu Glu Val Ala Gly Gln Leu Ile His Lys 370 375 380 Asn Gln Thr Arg Glu Leu Arg Val Leu Tyr Gly Pro Arg Leu Asp Glu 385 390 395 400 Arg Asp Cys Pro Gly Asn Trp Thr Trp Pro Glu Asn Ser Gln Gln Thr 405 410 415 Pro Met Cys Gln Ala Trp Gly Asn Pro Leu Pro Glu Leu Lys Cys Leu 420 425 430 Lys Asp Gly Thr Phe Pro Leu Pro Ile Gly Glu Ser Val Thr Val Thr 435 440 445 Arg Asp Leu Glu Gly Thr Tyr Leu Cys Arg Ala Arg Ser Thr Gln Gly 450 455 460 Glu Val Thr Arg Glu Val Thr Val Asn Val Leu Ser Pro Arg Tyr Glu 465 470 475 480 Ile Val Ile Ile Thr Val Val Ala Ala Ala Val Ile Met Gly Thr Ala 485 490 495 Gly Leu Ser Thr Tyr Leu Tyr Asn Arg Gln Arg Lys Ile Lys Lys Tyr 500 505 510 Arg Leu Gln Gln Ala Gln Lys Gly Thr Pro Met Lys Pro Asn Thr Gln 515 520 525 Ala Thr Pro Pro 530 <210> 2 <211> 3249 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2 caagcttagc ctggccggga aacgggaggc gtggaggccg ggagcagccc ccggggtcat 60 cgccctgcca ccgccgcccg attgctttag cttggaaatt ccggagctga agcggccagc 120 gagggaggat gaccctctcg gcccgggcac cctgtcagtc cggaaataac tgcagcattt 180 gttccggagg ggaaggcgcg aggtttccgg gaaagcagca ccgccccttg gcccccaggt 240 ggctagcgct ataaaggatc acgcgcccca gtcgacgctg agctcctctg ctactcagag 300 ttgcaacctc agcctcgcta tggctcccag cagcccccgg cccgcgctgc ccgcactcct 360 ggtcctgctc ggggctctgt tcccaggacc tggcaatgcc cagacatctg tgtccccctc 420 aaaagtcatc ctgccccggg gaggctccgt gctggtgaca tgcagcacct cctgtgacca 480 gcccaagttg ttgggcatag agaccccgtt gcctaaaaag gagttgctcc tgcctgggaa 540 caaccggaag gtgtatgaac tgagcaatgt gcaagaagat agccaaccaa tgtgctattc 600 aaactgccct gatgggcagt caacagctaa aaccttcctc accgtgtact ggactccaga 660 acgggtggaa ctggcacccc tcccctcttg gcagccagtg ggcaagaacc ttaccctacg 720 ctgccaggtg gagggtgggg caccccgggc caacctcacc gtggtgctgc tccgtgggga 780 gaaggagctg aaacgggagc cagctgtggg ggagcccgct gaggtcacga ccacggtgct 840 ggtgaggaga gatcaccatg gagccaattt ctcgtgccgc actgaactgg acctgcggcc 900 ccaagggctg gagctgtttg agaacacctc ggccccctac cagctccaga cctttgtcct 960 gccagcgact cccccacaac ttgtcagccc ccgggtccta gaggtggaca cgcaggggac 1020 cgtggtctgt tccctggacg ggctgttccc agtctcggag gcccaggtcc acctggcact 1080 gggggaccag aggttgaacc ccacagtcac ctatggcaac gactccttct cggccaaggc 1140 ctcagtcagt gtgaccgcag aggacgaggg cacccagcgg ctgacgtgtg cagtaatact 1200 ggggaaccag agccaggaga cactgcagac agtgaccatc tacagctttc cggcgcccaa 1260 cgtgattctg acgaagccag aggtctcaga agggaccgag gtgacagtga agtgtgaggc 1320 ccaccctaga gccaaggtga cgctgaatgg ggttccagcc cagccactgg gcccgagggc 1380 ccagctcctg ctgaaggcca ccccagagga caacgggcgc agcttctcct gctctgcaac 1440 cctggaggtg gccggccagc ttatacacaa gaaccagacc cgggagcttc gtgtcctgta 1500 tggcccccga ctggacgaga gggattgtcc gggaaactgg acgtggccag aaaattccca 1560 gcagactcca atgtgccagg cttgggggaa cccattgccc gagctcaagt gtctaaagga 1620 tggcactttc ccactgccca tcggggaatc agtgactgtc actcgagatc ttgagggcac 1680 ctacctctgt cgggccagga gcactcaagg ggaggtcacc cgcaaggtga ccgtgaatgt 1740 gctctccccc cggtatgaga ttgtcatcat cactgtggta gcagccgcag tcataatggg 1800 cactgcaggc ctcagcacgt acctctataa ccgccagcgg aagatcaaga aatacagact 1860 acaacaggcc caaaaaggga cccccatgaa accgaacaca caagccacgc ctccctgaac 1920 ctatcccggg acagggcctc ttcctcggcc ttcccatatt ggtggcagtg gtgccacact 1980 gaacagagtg gaagacatat gccatgcagc tacacctacc ggccctggga cgccggagga 2040 cagggcattg tcctcagtca gatacaacag catttggggc catggtacct gcacacctaa 2100 aacactaggc cacgcatctg atctgtagtc acatgactaa gccaagagga aggagcaaga 2160 ctcaagacat gattgatgga tgttaaagtc tagcctgatg agaggggaag tggtggggga 2220 gacatagccc caccatgagg acatacaact gggaaatact gaaacttgct gcctattggg 2280 tatgctgagg ccccacagac ttacagaaga agtggccctc catagacatg tgtagcatca 2340 aaacacaaag gcccacactt cctgacggat gccagcttgg gcactgctgt ctactgaccc 2400 caacccttga tgatatgtat ttattcattt gttattttac cagctattta ttgagtgtct 2460 tttatgtagg ctaaatgaac ataggtctct ggcctcacgg agctcccagt cctaatcaca 2520 ttcaaggtca ccaggtacag ttgtacaggt tgtacactgc aggagagtgc ctggcaaaaa 2580 gatcaaatgg ggctgggact tctcattggc caacctgcct ttccccagaa ggagtgattt 2640 ttctatcggc acaaaagcac tatatggact ggtaatggtt acaggttcag agattaccca 2700 gtgaggcctt attcctccct tccccccaaa actgacacct ttgttagcca cctccccacc 2760 cacatacatt tctgccagtg ttcacaatga cactcagcgg tcatgtctgg acatgagtgc 2820 ccagggaata tgcccaagct atgccttgtc ctcttgtcct gtttgcattt cactgggagc 2880 ttgcactatg cagctccagt ttcctgcagt gatcagggtc ctgcaagcag tggggaaggg 2940 ggccaaggta ttggaggact ccctcccagc tttggaagcc tcatccgcgt gtgtgtgtgt 3000 gtgtatgtgt agacaagctc tcgctctgtc acccaggctg gagtgcagtg gtgcaatcat 3060 ggttcactgc agtcttgacc ttttgggctc aagtgatcct cccacctcag cctcctgagt 3120 agctgggacc ataggctcac aacaccacac ctggcaaatt tgattttttt tttttttcca 3180 gagacggggt ctcgcaacat tgcccagact tcctttgtgt tagttaataa agctttctca 3240 actgccaaa 3249 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> ICAM-1 forward primer <400> 3 cccccaggtg gctagcgcta 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> ICAM-1 reverse primer <400> 4 gtgcccaagc tggcatccgt 20 <210> 5 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> A to D fragments forward primer <400> 5 ccgccgcata tgcagacatc tgtgtccccc 30 <210> 6 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> A fragment reverse primer <400> 6 cccccccccc ggggatcctc atcagatgac aatctc 36 <210> 7 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> B fragment reverse primer <400> 7 cattcgggat cctcatcact ggccggccac ctc 33 <210> 8 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C fragment reverse primer <400> 8 cggggatcct catcactcct ggctctggtt ccc 33 <210> 9 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> D fragment reverse primer <400> 9 cggcggggat cctcatcaaa acagctccag ccc 33 <210> 10 <211> 532 <212> PRT <213> Chimpanzee <400> 10 Met Ala Pro Ser Ser Pro Arg Pro Ala Leu Pro Ala Leu Leu Val Leu 1 5 10 15 Leu Gly Ala Leu Phe Pro Gly Pro Gly Asn Ala Gln Thr Ser Val Ser 20 25 30 Pro Pro Lys Val Ile Leu Pro Arg Gly Gly Ser Val Gln Val Thr Cys 35 40 45 Ser Thr Ser Cys Asp Gln Pro Asp Leu Leu Gly Ile Glu Thr Pro Leu 50 55 60 Pro Lys Lys Glu Leu Leu Leu Gly Gly Asn Asn Trp Lys Val Tyr Glu 65 70 75 80 Leu Ser Asn Val Gln Glu Asp Ser Gln Pro Met Cys Tyr Ser Asn Cys 85 90 95 Pro Asp Gly Gln Ser Thr Ala Lys Thr Phe Leu Thr Val Tyr Trp Thr 100 105 110 Pro Glu Arg Val Glu Leu Ala Pro Leu Pro Ser Trp Gln Pro Val Gly 115 120 125 Lys Asp Leu Thr Leu Arg Cys Gln Val Glu Gly Gly Ala Pro Arg Ala 130 135 140 Asn Leu Thr Val Val Leu Leu Arg Gly Glu Lys Glu Leu Lys Arg Glu 145 150 155 160 Pro Ala Val Gly Glu Pro Ala Glu Val Thr Thr Thr Val Leu Val Glu 165 170 175 Arg Asp His His Gly Ala Asn Phe Ser Cys Arg Thr Glu Leu Asp Leu 180 185 190 Arg Pro Gln Gly Leu Gln Leu Phe Glu Asn Thr Ser Ala Pro His Gln 195 200 205 Leu Gln Thr Phe Val Leu Pro Ala Thr Pro Pro Gln Leu Val Ser Pro 210 215 220 Arg Val Leu Glu Val Asp Thr Gln Gly Thr Val Val Cys Ser Leu Asp 225 230 235 240 Gly Leu Phe Pro Val Leu Glu Ala Gln Val His Leu Ala Leu Gly Asp 245 250 255 Gln Arg Leu Asn Pro Thr Val Thr Tyr Gly Asn Asp Ser Phe Ser Ala 260 265 270 Lys Ala Ser Val Ser Val Thr Ala Glu Asp Glu Gly Thr Gln Arg Leu 275 280 285 Thr Cys Ala Val Ile Leu Gly Asn Gln Ser Arg Glu Thr Leu Gln Thr 290 295 300 Val Thr Ile Tyr Ser Phe Pro Ala Pro Asn Val Ile Leu Thr Lys Pro 305 310 315 320 Glu Val Ser Glu Gly Thr Glu Val Thr Val Lys Cys Glu Ala His Pro 325 330 335 Arg Ala Lys Val Thr Leu Asn Gly Val Pro Ala Gln Pro Val Gly Pro 340 345 350 Arg Val Gln Leu Leu Leu Lys Ala Thr Pro Glu Asp Asn Gly Arg Ser 355 360 365 Phe Ser Cys Ser Ala Thr Leu Glu Val Ala Gly Gln Leu Ile His Lys 370 375 380 Asn Gln Thr Arg Glu Leu Arg Val Leu Tyr Gly Pro Arg Leu Asp Glu 385 390 395 400 Arg Asp Cys Pro Gly Asn Trp Thr Trp Pro Glu Asn Ser Gln Gln Thr 405 410 415 Pro Met Cys Gln Ala Ser Gly Asn Pro Leu Pro Glu Leu Lys Cys Leu 420 425 430 Lys Asp Gly Thr Phe Pro Leu Pro Val Gly Glu Ser Val Thr Val Thr 435 440 445 Arg Asp Leu Glu Gly Thr Tyr Leu Cys Arg Ala Arg Ser Thr Gln Gly 450 455 460 Glu Val Thr Arg Lys Val Thr Val Asn Val Leu Ser Pro Arg Tyr Glu 465 470 475 480 Ile Val Ile Ile Thr Val Val Ala Ala Ala Val Ile Met Gly Thr Ala 485 490 495 Gly Leu Ser Thr Tyr Leu Tyr Asn Arg Gln Arg Lys Ile Arg Lys Tyr 500 505 510 Arg Leu Gln Gln Ala Gln Lys Gly Thr Pro Met Lys Pro Asn Thr Gln 515 520 525 Ala Thr Pro Pro 530

Claims

세포내 부착분자-1(intercellular adhesion molecule-1, ICAM-1) 단백질, 이의 단편 또는 이의 변이체를 활성성분으로 포함하는, 신경질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
제1항에 있어서,
상기 ICAM-1 단백질이 서열번호: 1의 아미노산 서열 또는 이로부터 1번째 내지 27번째 아미노산 잔기에 해당하는 시그날 펩타이드가 제거된 아미노산 서열을 갖는, 약학 조성물.
제1항에 있어서,
상기 ICAM-1 단백질의 단편이 ICAM-1 단백질과 동등한 생물학적 활성을 갖는, 약학 조성물.
제1항에 있어서,
상기 ICAM-1 단백질의 변이체가 서열번호: 1의 아미노산 서열에서 하나 이상의 아미노산이 치환, 결실, 삽입 및/또는 부가된 아미노산 서열을 갖고, ICAM-1 단백질과 동등한 생물학적 활성을 갖는, 약학 조성물.
제1항에 있어서,
상기 ICAM-1 단백질의 변이체가 서열번호: 1의 아미노산을 갖는 ICAM-1 단백질과 90%, 93%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 가지며, ICAM-1 단백질과 동등한 생물학적 활성을 갖는, 약학 조성물.
제1항에 있어서,
상기 ICAM-1 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체가 네프릴리신(neprilysin, NEP)의 발현을 유도하여 아밀로이드-베타(Aβ)의 분해를 촉진시키는, 약학 조성물.
제1항에 있어서,
상기 신경질환이 신경세포 내 아밀로이드-베타 플라크 형성, 신경세포 내 타우 단백질의 과인산화, 신경돌기의 손상, 신경세포 내의 네프릴리신의 발현 감소 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상에 의하여 유발되는 질환인, 약학 조성물.
제1항에 있어서,
상기 신경질환이 알츠하이머 병, 파킨슨 병, 우울증, 간질, 다발성 경화증, 조증, 루게릭 병, 경도인지장애, 다발-경색성 치매 및 루이소체 치매로 이루어진 군으로부터 선택되는, 약학 조성물.
ICAM-1 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체를 이를 필요로 하는 대상에 투여하는 것을 포함하는, 대상에서 신경질환을 예방 또는 치료하는 방법.
ICAM-1 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체를 신경세포와 함께 공동-배양하는 것을 포함하는, 신경세포에서 네프릴리신의 발현을 증가시키는 방법.
ICAM-1 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체를 대상에 투여하는 것을 포함하는, 대상의 신경세포에서 네프릴리신의 발현을 증가시키는 방법.