CN103402535A - Icam-1在预防或治疗神经系统疾病中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种用于预防或治疗神经障碍的药物组合物，包含作为活性成分的ICAM-1蛋白(细胞间粘附分子-1)、或其片段或变体，其可增加脑啡肽酶表达从而去除引起痴呆的β淀粉样蛋白(Aβ)，因而有效用于预防或治疗包括阿尔茨海默病在内的神经系统疾病。

Description

ICAM-1在预防或治疗神经系统疾病中的应用

交叉引用

本申请要求2011年2月2日提交的申请号为61/438,809和2011年9月30日提交的申请号为61/541,487的美国临时申请的权益，以引用方式将其内容整体并入本文。

背景技术

阿尔茨海默病表现为脑细胞的破坏，这部分是由于β淀粉样蛋白(Aβ)在脑中的积累。阿尔茨海默病阶段性发展，并逐渐恶化记忆力、推理、判断和语言能力，以及执行简单任务的能力。

帕金森病表现为被称为多巴胺能神经元的特化脑细胞的破坏。多巴胺能神经元的损失导致的临床症状包括但不限于运动控制的缺失。帕金森病的起因未知。

抑郁症或重度抑郁症也是一种大脑疾病。基于患者的自我陈述经历进行诊断，包括情绪低落、自信心低落以及对各项活动失去兴趣。

癫痫是一种大脑的神经障碍。癫痫症患者患有频繁的、不可预知的抽搐。癫痫发作的特点是大脑中神经活性的异常升高。

多发性硬化症表现为脑轴突和脊髓周围的髓鞘发炎。髓鞘脱失导致各种身体机能和认知功能随着时间推移而丧失。

狂躁症是一种异常的情绪上升或急躁的情绪状态，通常持续一周或更长时间。已经用靶向神经传递的药物治疗患有狂躁症的患者。

卢格里克氏症(Lou Gehrig’s disease)，也被称为肌肉萎缩性侧索硬化症，是一种运动神经元疾病，表现为脊髓中神经元变性。患有这种病的患者会经历肌肉萎缩、虚弱以及呼吸困难。

轻度认知障碍(MCI,也被称为初期痴呆或孤立的记忆障碍)，是一种脑功能综合征，涉及除基于年龄和个体教育程度可预期的障碍之外的认知障碍的发作和演变，但并不显著到会影响到日程活动。经常发现它是正常老龄化和痴呆之间的过渡阶段。尽管MCI可呈现各种症状，然而，当失忆是一个主要的症状时，其被称为“遗忘型MCI”，并且常被看做是阿尔茨海默病的前驱期。研究表明，每年这些个体倾向于以每年约10%-15%的比例发展成很可能的阿尔茨海默病(probable Alzheimer’s disease)。

多发梗塞性痴呆是一种血管性痴呆。血管性痴呆是老年人中继阿尔茨海默病(AD)之后第二种最常见的痴呆形式。多发梗塞性痴呆(MID)被认为是痴呆的不可逆形式，并且它的发作是由许多小中风，或有时其他小中风之前或之后的一个大中风导致的。该术语是指一组由会导致大脑血管损害的不同机制所引发的一组综合征。早期检测和准确诊断是重要的，因为血管性痴呆至少部分是可预防的。

路易体痴呆(DLB,dementia with Lewy bodies)，也有许多其他名称，包括路易体痴呆(Lewy body dementia)，弥漫性路易体病，皮质路易体病以及路易体型老年痴呆病，是一种与阿尔茨海默病和帕金森病都非常近似的痴呆类型。解剖学特征在于神经元中出现路易氏小体、α-突触核蛋白块以及泛素，在死后的脑活组织检查中可检测到。仅在美国，路易体痴呆就影响130万人。

脑啡肽酶是降解β淀粉样肽的酶。脑啡肽酶的缺失加速了淀粉样蛋白的胞外积累。脑啡肽酶表达的增加减少了Aβ肽。

细胞间粘附分子-1(ICAM-1)是由ICAM1基因编码的膜糖蛋白。正常发育的缺失ICAM1基因的小鼠是可育的，并且有中度粒细胞增多症，但表现出针对化学刺激物的受损的嗜中性白细胞渗出以及炎症反应异常。

发明概述

本申请描述的是一种用于预防或治疗神经系统疾病的药物组合物，包含作为活性成分的ICAM-1蛋白(细胞间粘附分子-1)或其片段或变体。在一个实施方案中，所述组合物的ICAM-1蛋白具有SEQ.ID.NO.:1的氨基酸序列，或具有去除了其1-27位氨基酸残基所对应的信号肽的氨基酸序列。在另一个实施方案中，ICAM-1蛋白的片段具有与ICAM-1蛋白等同的生物活性。在另一个实施方案中，ICAM-1蛋白变体具有SEQ.ID.NO.:1的氨基酸序列且具有与ICAM-1蛋白等同的生物活性，其中一个或多个氨基酸被取代、缺失、插入和/或添加。在另一个实施方案中，ICAM-1蛋白变体所具有的氨基酸序列与ICAM-1蛋白所具有的SEQ.ID.NO.:1的氨基酸序列至少约90%、93%、95%、96%、97%、98%或99%相同，且所述ICAM-1蛋白变体具有与ICAM-1蛋白等同的生物活性。在另一个实施方案中，ICAM-1蛋白或其片段或变体诱导脑啡肽酶(NEP)的表达，从而促进β淀粉样蛋白(Aβ)的降解。在另一个实施方案中，神经系统疾病是由选自下述组中至少一种所引起的疾病：神经元中β淀粉样蛋白斑块的形成、神经元中tau蛋白高度磷酸化、神经突受损、神经元中脑啡肽酶的表达降低及其组合。在另一个实施方案中，神经系统疾病选自下组：阿尔茨海默病、帕金森病、抑郁症、癫痫症、多发性硬化症、狂躁症、卢格里克氏症、轻度认知障碍、多发梗塞性痴呆以及路易体痴呆。

本申请所述的是一种预防或治疗个体的神经系统疾病的方法，包括向有需要的个体施用ICAM-1蛋白或其片段或变体。

本申请所述的是一种增加神经元中脑啡肽酶表达的方法，包括将ICAM-1蛋白或其片段或变体与神经元共培养。

本申请所述的是一种增加个体中脑啡肽酶表达的方法，包括向所述个体施用ICAM-1蛋白(细胞间粘附分子-1)或其片段或变体。

本申请所述的是一种包含ICAM-1蛋白或其片段或变体的组合物，其中所述蛋白、其片段或其变体能增加神经元中脑啡肽酶的表达，从而去除引起痴呆的β淀粉样肽，因而可用于预防或治疗包括阿尔茨海默病在内的神经系统疾病。

援引加入

本说明书中所提及的所有的出版物、专利以及专利申请以引文方式并入本申请，其并入的程度如同明确且单独指出通过引用并入每个单独出版物、专利或专利申请。

附图说明

所附的权利要求书中的特性用来阐述本发明的新颖性。通过参考以下详细描述的示例性实施方案和所附的附图，会更好地理解本发明的特征和优势，其中，所述实施方案利用了本发明的原则，其中：

图1所示为ICAM-1对小胶质细胞中脑啡肽酶表达的影响。

图2所示为ICAM-1对海马体中脑啡肽酶表达的影响。

图3所示为ICAM-1对β淀粉样蛋白42的作用。

图4A所示为ICAM-1蛋白的结构。图4B所示为实施例4制备的4个ICAM-1片段。

图5所示为4个编码实施例4制备的ICAM-1片段的ICAM-1基因。

图6所示为从用含ICAM-1基因的质粒转化的大肠杆菌(E.coli)获得的核酸。

发明详述

尽管在此已经显示和描述了本发明优选的实施方案，但对于本领域技术人员来说显而易见的是，这些实施方案仅以实施例的方式提供。在不脱离本发明前提下，本领域技术人员可进行各种变型、变化和替换。应当理解的是，在实施本发明过程中，可使用本申请所述的本发明实施方案的各种替代方案。所附的权利要求旨在定义本发明的范围，因此同样涵盖这些权利要求范围内的方法和结构及其等效物。

除非另有不同表征，本申请所用的技术和科学术语与本发明所属领域的普通技术人员公知的相同。

与参考数值有关的术语“约”包括该值的正负15%范围。例如，数量“约10”包括8.5～11.5的数量范围。

术语“β淀粉样蛋白(Aβ)”是指阿尔茨海默病患者脑中发现的淀粉样蛋白斑块的主要成分。Aβ可为包括衍生自跨膜糖蛋白淀粉样前体蛋白(APP)C-末端的氨基酸的肽。Aβ可通过β-分泌酶和γ-分泌酶的连续操作由APP制备。Aβ可为39～43个氨基酸，或40～42个氨基酸。Aβ可包含NCBI登录号:NP_000475氨基酸序列的672-713残基(Aβ42)或672-711残基(Aβ40)。Aβ可为人β淀粉样蛋白A4蛋白同种型前体。Aβ可源自哺乳动物。Aβ可源自人类或小鼠。Aβ可重组产生。

术语“tau蛋白”是指中枢神经系统的神经元中发现的微管相关蛋白。tau蛋白与微管蛋白相互作用从而稳定微管并促进微管的微管蛋白组装。大脑组织可包括6个不同的tau同种型。tau蛋白的高度磷酸化与阿尔茨海默病的发展有关。tau蛋白可以是高度可溶的。在人类中，tau蛋白可发现于神经元细胞中而不是非神经元细胞中。蛋白可参与轴突微管(axonal microtubule)的稳定。tau蛋白可为具有NCBI登录号:NP_005901氨基酸序列的微管相关蛋白tau同种型2。tau蛋白可源自哺乳动物。tau蛋白可源自人类或小鼠。tau蛋白可重组产生。

术语“脑啡肽酶”是指分解大量小分泌肽的锌依赖性金属蛋白酶。如果神经组织中的β淀粉样蛋白异常折叠并聚集，脑啡肽酶可分解引起阿尔茨海默病的β淀粉样蛋白。脑啡肽酶可为具有NCBI登录号:NP_000893氨基酸序列的肽。脑啡肽酶可源自哺乳动物。脑啡肽酶可源自人类或小鼠。脑啡肽酶可重组产生。

ICAM-1

本申请描述的是一种包含作为活性成分的ICAM-1蛋白(细胞间粘附分子-1)或其片段或变体的药物组合物。

在一个方面中，用于本申请所述的组合物和方法中的ICAM-1包括天然存在的ICAM-1。在一个实施方案中，天然存在的ICAM-1包括但不限于具有通常与动物有关的ICAM-1的野生型氨基酸序列的ICAM-1。在另一个实施方案中，天然存在的ICAM-1包括但不限于ICAM-1的天然存在的变体。在一个实施方案中，天然存在的变体为等位基因变体。在另一个实施方案中，天然存在的变体为多态性变体。在另一个方面中，用于本申请所述的组合物和方法中的ICAM-1包括ICAM-1的突变体。在一个实施方案中，突变体可为自然界发现的具有突变的ICAM-1。在另一个实施方案中，突变可为人为导入到ICAM-1中的突变。在一个实施方案中，突变可为导入到ICAM-1核酸序列中的突变，有或没有针对编码ICAM-1的核酸序列取代、缺失或插入一或多个氨基酸。

在一个方面中，用于本申请描述的组合物和方法中的ICAM-1包括编码动物ICAM-1的多肽序列。编码ICAM-1的动物可包括但不限于：智人(Homo sapiens)、小鼠(Mus musculus)、褐家鼠(Rattusnorvegicus)、牛(Bos taurus)、黑猩猩(Pan troglodytes)、家犬(Canis lupusfamiliaris)、野猪(Sus scrofa)、家兔(Oryctolagus cuniculus)、猕猴(Macaca mulatta)、白颊长臂猿(Nomascus leucogenys)、灰仓鼠(Cricetulus griseus)、大猩猩(Gorilla gorilla)、苏门答腊猩猩(Pongoabelii)、普通狨(Callithrix jacchus)和大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)。在这些动物中发现的各种ICAM-1肽序列可在公共数据库中获取，包括国家生物技术信息中心(NCBI)。在一个实施方案中，用于本申请所述的组合物和方法中的ICAM-1为具有GenBank登录号所对应的序列的动物ICAM-1。用于本申请所述的组合物和方法中的ICAM-1的GenBank登录号包括但不限于：P13597.1、Q00238.1、CAA41977.1、AAB19978.1、P05362.2、NP_037099.1、NP_000192.2、NP_776773.1、NP_001009946.1、P33729.2、Q5NKV4.1、Q28806.2、Q95132.1、NP_001040600.1、DAA28002.1、Q5NKV9.1、Q5NKV6.1、AAA92551.1、NP_034623.1、NP_998981.1、AAA37875.1、AAF80287.1、NP_001003291.1、AAD13617.1、NP_001009731.1、ACJ49146.1、AAB51145.1、BAD04920.1、1IAM_A、1MQ8_C、1MQ8_A、3TCX_b、3TCX_a、3TCX_Z、3TCX_Y、3TCX_X、3TCX_W、3TCX_V、3TCX_U、3TCX_T、3TCX_S、3TCX_R、3TCX_Q、3TCX_P、3TCX_O、3TCX_N、3TCX_M、3TCX_L、3TCX_K、3TCX_J、3TCX_I、3TCX_H、3TCX_G、3TCX_F、3TCX_E、3TCX_D、3TCX_C、3TCX_B、3TCX_A、2OZ4_H、2OZ4_L、2OZ4_A、1P53_B、1P53_A、1MQ8_D、1MQ8_B、1IC1_B、1IC1_A、CAA30051.1、1D3E_I、1D3E_4、1D3E_3、1D3E_2、1D3E_1、1D3L_A、NP_037021.1、1DGI_4、1DGI_3、1DGI_2、1DGI_1、1DGI_R、NP_034624.1、NP_001032869.2、NP_001186763.1、NP_542413.1、NP_001069.1、P90489.1、NP_579840.1、3EO9_H、3EO9_L、3EOB_J、3EOB_B、3EOB_A、3EOB_I、3EOB_H、3EOB_L、3EOA_J、3EOA_B、3EOA_A、3EOA_I、3EOA_H、3EOA_L、BAA00759.1、CAA36507.1、NP_999056.1、NP_036843.1、AAA84866.1、3HI6_Y、3HI6_X、3HI6_L、3HI6_H、3HI6_B、3HI6_A、3HI5_L、3HI5_H、AAA37876.1、1MJN_A、AAA35415.1、1MQA_A、1MQ9_A、NP_001139280.1、NP_000623.2、NP_000425.1、EAW72950.1、EAW72949.1、NP_938033.1、NP_005408.1、NP_002219.1、P29533.1、P19320.1、Q9UMF0.3、P13598.2、NP_035823.3、NP_937882.1、NP_003871.1、NP_001107852.1、NP_002200.2、NP_001093259.1、NP_001093258.1、NP_001093257.1、NP_000864.2、NP_001093256.1、NP_038900.1、NP_058577.1、NP_001126200.1、NP_001095120.1、NP_001094628.1、NP_001094501.1、NP_776909.1、NP_612405.2、EHH50108.1、EHH14990.1、NP_001075621.1、EHB02165.1、XP_003479223.1、XP_003409421.1、AEH17929.1、NP_001003298.1、ADS87907.1、ADS87821.1、ADS11235.1、XP_002928199.1、XP_001135527.2、XP_003260168.1、XP_003260167.1、XP_003260166.1、AED70916.1、1YO4_A、1Z7Z_I、1VCA_B、1VCA_A、BAE25364.1、BAE37132.1、BAJ20764.1、AAA61269.1、AAA52709.1、AAA42332.1、AAA40545.1、AAA51917.1、XP_002801716.1、XP_001107860.1、XP_001107924.1、DAA31477.1、DAA31439.1、XP_002751186.1、XP_002751185.1、XP_002751184.1、AAO52742.1、AAG30280.1、AAC97931.1、AAH89812.1、AAH81837.1、EFB17343.1、AAH11159.2、AAH29823.1、AAA61270.1、AAY99622.1、AAI51460.1、AAM96190.1、AAH85003.1、AAH68490.2、AAH17276.3、AAA16921.1、1D3I_I、ACP59454.1、CAJ18580.1、ACE87430.1、ACE86744.1、CAH92063.1、ABS85192.1、BAF84421.1、BAD96986.1、EDL82023.1、EDL78334.1、EDL12389.1、EDL12388.1、CAA34621.1、CAA45254.1、CAA47989.1、AAX04663.1、AAQ80666.1、AAE84809.1、AAE84808.1、BAB19782.1、BAB19650.1、226347、CAA37218.1、CAA33630.1、Q28260.1、NP_776975.1、NP_000946.2、P29534.1、AAB46863.1、NP_997404.1、NP_997403.1、NP_065393.1、NP_722550.1、NP_008939.1、NP_999564.1、EAW94220.1、EAW94219.1、EAW94218.1、EAW94217.1、EAW94216.1、NP_035012.2、NP_001171744.1、NP_059430.2、NP_001020083.1、NP_000566.3、NP_001703.2、NP_006524.1、NP_004753.1、P15941.3、P20701.3、Q86YJ5.2、P09450.1、NP_065109.1、NP_032223.2、NP_004045.1、Q82122.4、NP_001192273.1、NP_001171745.1、NP_001171742.1、NP_001535.1、XP_542074.2、NP_003250.3、NP_004193.1、NP_001025459.1、NP_001003301.1、NP_999011.1、NP_071614.1、NP_003114.1、NP_001164621.1、NP_001117196.1、NP_001117195.1、NP_001091731.1、NP_031645.2、NP_001007726.1、NP_999187.1、NP_620234.1、NP_032442.1、EHH59189.1、EHH29618.1、NP_001075902.1、NP_001034221.1、NP_446310.1、Q28730.1、NP_071772.1、NP_001009166.1、NP_001189482.1、Q60625.1、NP_076381.1、XP_003514828.1、XP_003512840.1、EHB03341.1、XP_003123268.1、XP_003123292.3、NP_001727.1、NP_032345.2、NP_004219.3、NP_059431.1、P10922.4、AEN34099.1、AEN34098.1、EGW02598.1、ADT46952.1、ADS73661.1、ADS58865.1、ADS30919.1、NP_001165550.1、ADT46951.1、ADS58866.1、ADS11236.1、AAC50959.1、NP_987103.1、AEL21381.1、AEH21939.1、AEH17956.1、AEH17955.1、AEH17954.1、AEH17953.1、AEH17952.1、AEH17951.1、AEH17950.1、AEH17949.1、AEH17948.1、AEH17947.1、AEH17946.1、AEH17945.1、AEH17944.1、AEH17943.1、AEH17942.1、AEH17941.1、AEH17940.1、AEH17939.1、AEH17938.1、AEH17937.1、AEH17936.1、AEH17935.1、AEH17934.1、AEH17933.1、AEH17932.1、AEH17931.1、AEH17930.1、AEF79448.1、AEF79447.1、AEF79446.1、AEF79445.1、AEF79444.1、AEF79443.1、AEF75643.1、XP_002921422.1、XP_003262690.1、XP_003262689.1、XP_003262688.1、XP_001922015.3、XP_002661307.2、XP_694556.3、1RMF_L、1Z7Z_5、1Z7Z_4、1Z7Z_3、1Z7Z_2、1Z7Z_1、1RMF_H、3BN3_B、2P28_B、2P28_A、2P26_A、1ZXQ_A、1UOT_P、1VSC_B、1VSC_A、BAE31310.1、BAE31287.1、BAE31286.1、BAE30990.1、BAE40221.1、BAE29272.1、BAE29266.1、BAE29079.1、BAE29059.1、BAE42944.1、BAE30219.1、BAE22394.1、BAE42504.1、BAE42493.1、BAC26834.1、BAJ20559.1、AAA64832.1、AAA83030.1、AAA67204.1、AAA18478.1、AAA52708.1、AAA40546.1、XP_002828698.1、XP_002827759.1、XP_002807841.1、AAA67349.1、XP_233737.5、XP_001077293.2、AAB36305.1、AAQ14910.1、AAQ14909.1、AAQ14908.1、AAQ14907.1、AAQ14906.1、AAQ14901.1、AAQ14898.1、AAQ14897.1、AAQ14896.1、AAF18980.1、AAH15969.1、EFB12989.1、AAI13141.1、AAH30132.2、AAH08626.1、ADA18203.1、ADA18202.1、AAP36234.1、AAP35500.1、AAO30128.1、AAH26338.1、AAS89259.1、AAH03097.1、AAF81280.1、AAB17532.1、AAA69862.1、AAA80011.1、AAB60661.1、AAA16920.1、AAA36035.1、EAW84091.1、EAW84086.1、1H2Q_P、1H2P_P、1H03_Q、1H03_P、1IJ9_A、1D3I_4、1D3I_3、1D3I_2、1D3I_1、1A5F_H、1A5F_L、1A6T_D、1A6T_C、1A6T_B、1A6T_A、ACQ15346.1、ACQ15344.1、ACP57322.1、CAY39147.1、CAY39146.1、CAY39145.1、CAX14828.1、CAX14826.1、CAQ14148.1、CAQ14147.1、CAQ14145.1、CAG46633.1、CAG46611.1、BAG73299.1、CAJ18510.1、CAJ18454.1、1Z7S_4、1Z7S_3、1Z7S_2、1Z7S_1、BAG60348.1、BAG35520.1、ABM85957.1、ABM84711.1、DAA06142.1、DAA06141.1、CAP72055.1、BAF85799.1、BAD96939.1、BAD93115.1、ABU37676.1、ABU37675.1、ABU37674.1、EDL78332.1、EDL25153.1、EDL25151.1、CAM73181.1、ABM92232.1、ABM82769.1、AAQ14922.1、AAQ14905.1、AAQ14904.1、AAQ14902.1、ABL30031.1、ABL13876.1、CAA40441.1、CAL47730.1、CAE84094.1、CAE84091.1、CAA34622.1、AAX42182.1、AAX42181.1、AAX29641.1、AAX29640.1、AAX37087.1、AAX36636.1、AAX04661.1、AAQ80664.1、AAQ71936.1、AAQ70987.1、AAQ53651.1、AAQ53650.1、AAQ53649.1、AAQ53648.1、AAQ53647.1、AAQ53646.1、CAD97562.1、CAD97565.1、AAE22204.1、AAE22202.1、AAE20921.1、AAE20920.1、AAE20919.1、AAE10139.1、AAC89984.1、AAC89982.1、AAC87796.1、AAC87794.1、AAC19905.1、AAC19903.1、AAC19660.1、225938、AAA55744.1、NP_570116.2、Q5NKV2.1、Q5NKV1.1、NP_570118.1、P41323.1、NP_001029170.1、2V7D_S、2V7D_R、2V7D_Q、2V7D_P、2V7D_D、2V7D_C、2V7D_B、2V7D_A、2JF1_T、2JF1_A、AAE18933.1、AAE18932.1、AAE18931.1、AAE18930.1、AAE18929.1、AAE18928.1、AAE18927.1、AAE18926.1、AAE18925.1、AAE18924.1、AAE18923.1、AAE18922.1、AAE18921.1、AAE18920.1、AAE18919.1、AAE18918.1、AAE18917.1、AAE18916.1、AAE18915.1、3M6F_A、AAA60393.1以及AAA60392.1。

在一个方面中，用于本申请所述的组合物和方法中的ICAM-1被糖基化。在另一个方面中，用于本申请所述的组合物和方法中的ICAM-1未被糖基化。在一个实施方案中，糖基化可天然发生。在另一实施方案中，通过本领域公知的重组DNA技术将糖基化人为导入到ICAM-1中。

在一个方面中，用于本申请所述的组合物和方法中的ICAM-1是经过天然修饰的。在一个实施方案中，天然修饰为翻译后的修饰。在一个实施方案中，ICAM-1包含含有ICAM-1的信号肽部分的多肽。在另一个实施方案中，ICAM-1包含缺乏ICAM-1的信号肽部分的多肽。

在一个方面中，用于本申请所述的组合物和方法中的ICAM-1具有SEQ.ID.NO.:1的氨基酸序列(Genbank登录号AAQ14901)：MAPSSPRPALPALLVLLGALFPGPGNAQTSVSPSKVILPRGGSVLVTCSTSCDQPKLLGIETPLPKKELLLPGNNRKVYELSNVQEDSQPMCYSNCPDGQSTAKTFLTVYWTPERVELAPLPSWQPVGKNLTLRCQVEGGAPRANLTVVLLRGEKELKREPAVGEPAEVTTTVLVRRDHHGANFSCRTELDLRPQGLELFENTSAPYQLQTFVLPATPPQLVSPRVLEVDTQGTVVCSLDXLFPVSEAQVHLALGDQRLNPTVTYGNDSFSAKASVSVTAEDEGTQRLTCAVILGNQSQETLQTVTIYSFPAPNVILTKPEVSEGTEVTVKCEAHPRAKVTLNGVPAQPLGPRAQLLLKATPEDNGRSFSCSATLEVAGQLIHKNQTRELRVLYGPRLDERDCPGNWTWPENSQQTPMCQAWGNPLPELKCLKDGTFPLPIGESVTVTRDLEGTYLCRARSTQGEVTREVTVNVLSPRYEIVIITVVAAAVIMGTAGLSTYLYNRQRKIKKYRLQQAQKGTPMKPNTQATPP(SEQ.ID.NO.:1)。在另一个实施方案中，ICAM-1为对应于AAQ14901氨基酸序列但缺乏对应于SEQ.ID.NO.:1的1至27位氨基酸残基的信号肽的肽。在另一个实施方案中，ICAM-1为黑猩猩ICAM-1蛋白。在另一个实施方案中，ICAM-1具有SEQ.ID.NO.:10的氨基酸序列(Genbank登录号AAQ14896)。

在一个实施方案中，用于本申请所述的组合物和方法中的ICAM-1为ICAM-1蛋白的片段。在一个实施方案中，ICAM-1蛋白的片段具有与ICAM-1蛋白等同的生物活性。在另一个实施方案中，ICAM-1蛋白的片段不具有与ICAM-1蛋白等同的生物活性。在另一个实施方案中，ICAM-1蛋白的片段无生物活性。

在一个方面中，ICAM-1对脑啡肽酶表达的影响被用于测定ICAM-1的生物活性。在一个实施方案中，其影响为增加脑啡肽酶的表达水平。在另一个实施方案中，其影响为降低脑啡肽酶的表达。在一个实施方案中，以另一个作为比较标准的ICAM-1的活性百分比来测定ICAM-1片段的生物活性。用于比较的标准ICAM-1可为全长ICAM-1、短截的ICAM-1、突变的ICAM-1、翻译后修饰的ICAM-1或与被比较的ICAM-1不同的ICAM-1片段。本申请所述的任何ICAM-1蛋白或多肽都可以作为比较蛋白。生物活性差异的百分比可为约5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%、105%、110%、115%、120%、125%、130%、135%、140%、145%、150%、155%、160%、165%、170%、175%、180%、185%、190%、195%或200%。在一个实施方案中，以另一个作为比较标准的ICAM-1的活性增加或减少的倍数来测定ICAM-1片段的生物活性。增加或减少的倍数约可为2倍、2.5倍、3倍、4倍、5倍、7倍、倍、10倍、20倍、30倍、50倍、100倍、200倍、500倍、800倍或1000倍。

在一个实施方案中，ICAM-1片段包含SEQ.ID.NO.:1的第28至483位氨基酸。在另一个实施方案中，ICAM-1片段包含SEQ.ID.NO.:1的第28至380位氨基酸。在另一个实施方案中，ICAM-1片段包含SEQ.ID.NO.:1的第28至300位氨基酸。在另一个实施方案中，ICAM-1片段包含SEQ.ID.NO.:1的第28至200位氨基酸。

本申请所述的是一种用于治疗神经障碍的SEQ.ID.NO.:1的ICAM-1变体。在一个实施方案中，SEQ.ID.NO.:1的变体为具有一或多个氨基酸取代、缺失或插入的多肽。在另一个实施方案中，变体与SEQ.ID.NO.:1的序列同一性至少为80%、82%、85%、87%、89%、90%、93%、95%、96%、97%、98%或99%。在另一个实施方案中，变体的胞外结构域与SEQ.ID.NO.:1的序列同一性至少为80%、82%、85%、87%、89%、90%、93%、95%、96%、97%、98%或99%。在另一个实施方案中，变体的胞内结构域与SEQ.ID.NO.:1的序列同一性至少为80%、82%、85%、87%、89%、90%、93%、95%、96%、97%、98%或99%。在另一个实施方案中，变体的跨膜结构域与SEQ.ID.NO.:1的序列同一性至少为80%、82%、85%、87%、89%、90%、93%、95%、96%、97%、98%或99%。

在一个方面中，本申请所述的组合物和方法包含一种或多种分离的ICAM-1多肽。在一个实施方案中，一种或多种分离的ICAM-1多肽为不同氨基酸序列的ICAM-1。在另一个实施方案中，一种或多种分离的ICAM-1多肽为翻译后修饰过程差异加工的ICAM-1。

在另一个方面中，本申请所述的组合物和方法含有一种或多种连接于细胞上的ICAM-1多肽。在一个实施方案中，一种或多种多肽为共价连接于细胞上。在另一个实施方案中，多肽包埋于细胞膜内。细胞包括但不限于哺乳动物细胞、细菌细胞、真菌细胞或昆虫细胞。在一个实施方案中，细胞为人类细胞。在另一个实施方案中，细胞为人类干细胞。在另一个实施方案中，细胞为人类间充质干细胞。在另一个实施方案中，细胞为人类基质细胞。在另一个实施方案中，细胞为脐带血细胞。用于本申请所述的组合物和方法中的脐带血细胞包括但不限于：通常见于或培养自通常见于脐带、脐带血、羊膜囊以及胎盘的细胞。

在另一个方面中，本申请所述的组合物和方法包含一种或多种ICAM-1多肽以及分泌ICAM-1多肽的细胞。

在另一个方面中，本申请所述的组合物和方法包含一种或多种与另一个生物材料缀合的ICAM-1多肽。生物材料包括但不限于：各种小肽、另一种蛋白、用于分离或鉴定缀合的多肽的化学物(在本领域常称为标签)。

在一个方面中，本申请所述的ICAM-1多肽分离自有机体、组织或细胞。在一个实施方案中，ICAM-1分离自间充质干细胞(MSC)或其培养物。间充质干细胞来源的实例包括但不限于：胚卵黄囊、胎盘、脐带、脐带血、皮肤、外周血、骨髓、脂肪组织、肌肉、肝脏、神经组织、骨膜、胎膜、滑膜、滑液、羊膜、半月板、前交叉韧带、关节软骨、乳牙、周细胞、骨小梁、膝盖骨以下的脂肪垫、脾脏和胸腺。在一个实施方案中，MSC的来源为脐带血衍生的MSC或骨髓衍生的MSC。

本申请描述了一种从脐带血中分离MSC的方法。在一个实施方案中，通过收获脐带血衍生的MSC分离CAM-1。在一个实施方案中，通过离心分离脐带血衍生的MSC。在另一个实施方案中，通过荧光激活细胞分选术分离脐带血衍生的MSC。在另一个实施方案中，用各种标签包括磁珠在内，分离脐带血衍生的MSC。在另一个实施方案中，用MSC特异性抗体分离脐带血衍生的MSC。在某些方面中，可使用其他细胞分开或分离的方法。这些方法在本领域是公知的，并包括但不限于根据下述进行分离：细胞大小、重量或形状，细胞表面分子类型差异，对化学物、蛋白或其他细胞的阻力或吸引力，以及用于区分MSC与非MSC的其他物理或化学特性。

在一个方面中，通过重组DNA技术产生ICAM-1。在一个实施方案中，将编码ICAM-1或其片段的核酸克隆到合适的重组表达系统。在一个实施方案中，重组表达系统为细菌表达系统。在另一个实施方案中，重组表达系统为昆虫细胞表达系统。在另一个实施方案中，重组表达系统为哺乳动物表达系统。在一个实施方案中，细菌重组表达系统为pET载体表达系统。在一个实施方案中，用于表达本申请所述的ICAM-1的pET载体为pET-28a质粒DNA。在另一个实施方案中，用于本申请所述组合物的细菌重组表达系统为含有编码ICAM-1的核酸的pET载体，ICAM-1具有SEQ.ID.NO.:2(GenBank登录号NM_000201)的核苷酸序列：caagcttagcctggccgggaaacgggaggcgtggaggccgggagcagcccccggggtcatcgccctgccaccgccgcccgattgctttagcttggaaattccggagctgaagcggccagcgagggaggatgaccctctcggcccgggcaccctgtcagtccggaaataactgcagcatttgttccggaggggaaggcgcgaggtttccgggaaagcagcaccgccccttggcccccaggtggctagcgctataaaggatcacgcgccccagtcgacgctgagctcctctgctactcagagttgcaacctcagcctcgctatggctcccagcagcccccggcccgcgctgcccgcactcctggtcctgctcggggctctgttcccaggacctggcaatgcccagacatctgtgtccccctcaaaagtcatcctgccccggggaggctccgtgctggtgacatgcagcacctcctgtgaccagcccaagttgttgggcatagagaccccgttgcctaaaaaggagttgctcctgcctgggaacaaccggaaggtgtatgaactgagcaatgtgcaagaagatagccaaccaatgtgctattcaaactgccctgatgggcagtcaacagctaaaaccttcctcaccgtgtactggactccagaacgggtggaactggcacccctcccctcttggcagccagtgggcaagaaccttaccctacgctgccaggtggagggtggggcaccccgggccaacctcaccgtggtgctgctccgtggggagaaggagctgaaacgggagccagctgtgggggagcccgctgaggtcacgaccacggtgctggtgaggagagatcaccatggagccaatttctcgtgccgcactgaactggacctgcggccccaagggctggagctgtttgagaacacctcggccccctaccagctccagacctttgtcctgccagcgactcccccacaacttgtcagcccccgggtcctagaggtggacacgcaggggaccgtggtctgttccctggacgggctgttcccagtctcggaggcccaggtccacctggcactgggggaccagaggttgaaccccacagtcacctatggcaacgactccttctcggccaaggcctcagtcagtgtgaccgcagaggacgagggcacccagcggctgacgtgtgcagtaatactggggaaccagagccaggagacactgcagacagtgaccatctacagctttccggcgcccaacgtgattctgacgaagccagaggtctcagaagggaccgaggtgacagtgaagtgtgaggcccaccctagagccaaggtgacgctgaatggggttccagcccagccactgggcccgagggcccagctcctgctgaaggccaccccagaggacaacgggcgcagcttctcctgctctgcaaccctggaggtggccggccagcttatacacaagaaccagacccgggagcttcgtgtcctgtatggcccccgactggacgagagggattgtccgggaaactggacgtggccagaaaattcccagcagactccaatgtgccaggcttgggggaacccattgcccgagctcaagtgtctaaaggatggcactttcccactgcccatcggggaatcagtgactgtcactcgagatcttgagggcacctacctctgtcgggccaggagcactcaaggggaggtcacccgcaaggtgaccgtgaatgtgctctccccccggtatgagattgtcatcatcactgtggtagcagccgcagtcataatgggcactgcaggcctcagcacgtacctctataaccgccagcggaagatcaagaaatacagactacaacaggcccaaaaagggacccccatgaaaccgaacacacaagccacgcctccctgaacctatcccgggacagggcctcttcctcggccttcccatattggtggcagtggtgccacactgaacagagtggaagacatatgccatgcagctacacctaccggccctgggacgccggaggacagggcattgtcctcagtcagatacaacagcatttggggccatggtacctgcacacctaaaacactaggccacgcatctgatctgtagtcacatgactaagccaagaggaaggagcaagactcaagacatgattgatggatgttaaagtctagcctgatgagaggggaagtggtgggggagacatagccccaccatgaggacatacaactgggaaatactgaaacttgctgcctattgggtatgctgaggccccacagacttacagaagaagtggccctccatagacatgtgtagcatcaaaacacaaaggcccacacttcctgacggatgccagcttgggcactgctgtctactgaccccaacccttgatgatatgtatttattcatttgttattttaccagctatttattgagtgtcttttatgtaggctaaatgaacataggtctctggcctcacggagctcccagtcctaatcacattcaaggtcaccaggtacagttgtacaggttgtacactgcaggagagtgcctggcaaaaagatcaaatggggctgggacttctcattggccaacctgcctttccccagaaggagtgatttttctatcggcacaaaagcactatatggactggtaatggttacaggttcagagattacccagtgaggccttattcctcccttccccccaaaactgacacctttgttagccacctccccacccacatacatttctgccagtgttcacaatgacactcagcggtcatgtctggacatgagtgcccagggaatatgcccaagctatgccttgtcctcttgtcctgtttgcatttcactgggagcttgcactatgcagctccagtttcctgcagtgatcagggtcctgcaagcagtggggaagggggccaaggtattggaggactccctcccagctttggaagcctcatccgcgtgtgtgtgtgtgtgtatgtgtagacaagctctcgctctgtcacccaggctggagtgcagtggtgcaatcatggttcactgcagtcttgaccttttgggctcaagtgatcctcccacctcagcctcctgagtagctgggaccataggctcacaacaccacacctggcaaatttgattttttttttttttccagagacggggtctcgcaacattgcccagacttcctttgtgttagttaataaagctttctcaactgccaaa(SEQ.ID.NO.:2)。在一个实施方案中，用于表达ICAM-1的细菌细胞为大肠杆菌(E.coli)BL21变体。在一个实施方案中，变体为大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)。在一个实施方案中，用IPTG处理转化的细菌细胞诱导细菌表达重组ICAM-1。

本申请描述了一种用于预防或治疗神经障碍的药物组合物。在一个实施方案中，神经障碍是由选自下述组中任意一种引起的疾病：在神经元中形成β淀粉样蛋白斑块、神经元中tau蛋白高度磷酸化、神经突受损、神经元中脑啡肽酶的表达降低及其组合。在另一个实施方案中，神经障碍选自下述组：阿尔茨海默病、帕金森病、抑郁症、癫痫症、多发性硬化症、狂躁症、卢格里克氏症、轻度认知障碍、多发梗塞性痴呆以及路易体痴呆。

在一个方面中，向个体施用本申请所述的ICAM-1多肽，以干扰神经障碍的进展。在一个实施方案中，向患有阿尔茨海默病的个体施用本申请所述的ICAM-1多肽，以延缓、停止或逆转阿尔茨海默病的进展。在一个实施方案中，将一剂ICAM-1多肽向个体施用一次。在另一个实施方案中，将一剂ICAM-1多肽向个体按有规律的间隔施用一段时间。间隔可为几天、几周、几个月或几年。在另一个实施方案中，向个体施用初始剂量的ICAM-1多肽，以后的剂量根据个体的临床结果减少或增加。通过神经心理学测试来测定临床结果，包括但不限于自我评价、临床调查表，如临床痴呆得分或智力状态检查。

本申请所述的组合物可通过局部给药或系统给药送递。在一个实施方案中，以预防或治疗神经障碍的有效量施用本申请所述的组合物。在一个实施方案中，有效量通过临床试验测定。有效剂量根据情况不同而不同，包括但不限于神经疾病的类型、制备工艺、剂型、给药途径以及赋形剂类型。

可使用神经心理学测试诊断表现出轻度认知障碍的痴呆前综合征(pre-dementia syndrome)。据报道，每年约有12%的患有轻度认知障碍的患者发展成阿尔茨海默病。意外的是，在缺少任何治疗的情况下，6年后，约有80%的患有轻度认知障碍的患者发展成阿尔茨海默病。因此，当将本发明的ICAM-1蛋白或其片段或变体施用到患有轻度认知障碍的患者时，可预防或延迟向阿尔茨海默病的发展。

在一个方面中，与有效预防或治疗阿尔茨海默病、帕金森病、抑郁症、癫痫症、多发性硬化症、狂躁症、卢格里克氏症、轻度认知障碍、多发梗塞性痴呆或路易体痴呆的其他治疗方法或疗法结合，施用本申请所述的组合物。在一个实施方案中，伴随其他治疗组合物或疗法施用本申请所述的组合物。在另一个实施方案中，将本申请所述的组合物制备成含有已知对阿尔茨海默病、帕金森病、抑郁症、癫痫症、多发性硬化症、狂躁症、卢格里克氏症、轻度认知障碍、多发梗塞性痴呆或路易体痴呆有效的其他治疗组合物。

除有效成分外，本申请所述的药物组合物还可含有药学上可接受的添加剂。可使用肠胃外给药的制剂，如注射制剂或局部给药制剂。例如，可以以无菌溶液或悬浮液的形式，如果需要，使用水或其他药学上可接受的溶剂，使用肠胃外给药的制剂。例如，可使用药学上可接受的载体或介质，如无菌水、盐水、植物油、乳化剂、悬浮剂、表面活性剂、稳定剂、赋形剂、媒介物、防腐剂以及结合剂，来制备单位剂量制剂。肠胃外给药可包括局部给药和系统给药。可直接向受伤害区域或受伤害区域的周围区域，如脑或脊髓、或其周围区域或其相反区域施用药物组合物来实现局部给药。局部给药可包括鼻内给药以及动脉内给药。可通过向脊髓液、静脉或动脉施用药物组合物来实现系统给药。脊髓液包括脑脊液。动脉可为向受伤害部位供血的区域。在一个实施方案中，根据Douglas Kondziolka,Pittsburgh,Neurology,Vol.55,pp.565-569,2000公开的方法进行给药，其整体并入本申请。在一个实施方案中，将个体的头盖骨切开，产生一个约1cm的洞，利用将悬浮液注射到靶区域的长针注射器和立体定位架(stereotacticframe)，通过该洞注射Hank's平衡盐溶液(HBSS)中的ICAM-1。ICAM-1的剂量可为每天500～1000ng/kg(体重)，其可以以单次量或分剂量进行施用。

本申请描述了一种增加神经元中脑啡肽酶表达的方法，包括将ICAM-1蛋白(细胞间粘附分子-1)或其片段或变体与神经元共培养。在一个实施方案中，通过将ICAM-1与神经元培养短于1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、9天或12天，增加了脑啡肽酶的表达。在另一个实施方案中，通过与神经元培养超过12天，增加了脑啡肽酶的表达。在一个实施方案中，将ICAM-1添加到含有神经元的培养基中，并进行共培养。在另一个实施方案中，将表达ICAM-1的细胞添加到含有神经元的培养基中，并进行共培养。在另一个实施方案中，将ICAM-1或表达ICAM-1的细胞和神经元共培养于培养装置的分隔室内，该培养装置允许除培养物中细胞分泌的或添加到每个培养装置分隔室的蛋白、配体或其他细胞产物以外的营养物流动。

本申请描述了一种增加个体中脑啡肽酶表达的方法，包括向个体施用ICAM-1蛋白(细胞间粘附分子-1)或其片段或变体。在一个实施方案中，施用为局部给药。在另一个实施方案中，施用为系统给药。在一个实施方案中，施用增加脑啡肽酶表达的有效量。在一个实施方案中，包含有效量的ICAM-1的制剂还包含选自下组的添加剂：水、培养基、缓冲液和赋形剂。

实施例

接下来会对本发明进行详细描述。下述实施例仅作为说明的目的不用来限定本发明的范围。

实施例1：ICAM-1蛋白对NEP表达的体外效力

从R&D SYSTEMS(USA)获取具有SEQ.ID.NO.:1的氨基酸序列的重组ICAM-1蛋白，从首尔大学(Seoul Ntional University,Korea)获取BV2细胞。BV2细胞为用v-raf/v-myc重组逆转录病毒感染小鼠的小胶质细胞而制备的永生化细胞，其表达活化的小胶质细胞特性。将BV2细胞培养于无血清的DMEM培养基中，并分别用浓度为5、10和50ng/mL的ICAM-1重组蛋白进行处理，24小时后收获细胞。用超声波仪(Branson Ultrasonics Corp.)裂解各组收获的细胞，用缓冲液(9.8M尿素，4%CHAPS，130mM二硫苏糖醇，40mM Tris-HCl，0.1%十二烷基硫酸钠(SDS))从中获取蛋白提取物。用考马斯亮兰染色试剂盒(Bradford assay kit)(Bio-Rad Laboratories,Hercules,CA)对提取的蛋白进行定量，并将20μg蛋白提取物在SDS-PAGE进行解析，并电转移到硝酸纤维素膜上。将每张硝酸纤维素膜和一抗(抗NEP抗体；R&DSystems,Minneapolis,MN)孵育过夜，用PBS洗涤三次，并和二抗(抗羊IgG;Santa Cruz,USA)进行孵育。然后，通过ECL试剂盒(Amersham)显示蛋白。β-肌动蛋白作为定量的内参。

结果如图1左侧所示。图1左上角的照片是免疫印迹的结果，图1左下角的图表表示用光密度计测定的每个条带相对于对照(无处理)的强度(n=3,P<0.05)。

从结果中可以看出，与对照(无处理组)相比，ICAM-1处理组的NEP表达增加。此外，NEP的表达水平与ICAM-1蛋白的浓度成比例。

同时，为了根据处理时间评价ICAM-1蛋白效力，分别用ICAM-1蛋白(20ng/mL)将BV2细胞处理12、24和36小时，然后如上所述分析NEP表达。

结果如图1右侧所示。从结果中可以看出，NEP表达的增强与ICAM-1蛋白处理时间成比例。

实施例2：ICAM-1蛋白对NEP表达的体内效力

为了评价ICAM-1蛋白对NEP表达的效力，通过立体定位器将5μL PBS(n=4)或者PBS溶液中的500或1000ng/kg的ICAM-1蛋白(5μL)(n=4/组)施用到每个被麻醉的普通小鼠(B6C3F1/J,13周龄,30g)的海马体内。7天后，处死小鼠，收集脑组织。，将脑组织裂解，获取蛋白提取物，并按实施例1所述分析提取物的NEP表达。

结果如图2所示。从图2中可以看出，与对照(无处理组)相比，ICAM-1处理组的NEP表达增加。特别是，1000ng/kg的ICAM-1处理组的NEP表达水平是对照组(PBS)的两倍还多(P=0.005)。

实施例3：ICAM-1对β淀粉样蛋白42的影响

为了研究ICAM-1对淀粉样-β蛋白42降解的影响，进行如下实验。具体而言，将培养于无血清DMEM培养基上的BV2细胞同时用ICAM-1蛋白(5或10ng/mL)和β淀粉样蛋白42(10μM)进行预处理，再培养42小时。用ELISA试剂盒(Wako Pure Chemical Industries Ltd.Japan)测定培养基中β淀粉样蛋白42的水平。结果如图3所示。

从图3中可以看出，与对照组比，用ICAM-1蛋白处理的组Aβ42显著减少。特别是，就ICAM-1处理组而言，Aβ42的减少与ICAM-1蛋白的浓度成比例。结果表明，ICAM-1蛋白诱导的NEP降解了Aβ42。

实施例4:制备ICAM-1片段并评价它们的活性

为了研究负责ICAM-1活性的活性结构域，基于去除信号肽的ICAM-1结构域位点设计了4个片段(图4)。在用于诱导精确扩增ICAM-1基因的pre-PCR中，合成了扩增全长ICAM-1基因的引物，并合成了扩增单个基因片段的引物，在所述片段中插入了限制酶NdeI(NEB,USA)和BamHI(NEB,USA)的识别位点。

Pfu-PCR条件如下：40个循环，94°C30s；58～60°C45s；72°C40s。将因此获得的ICAM-1片段以及pET-28a质粒DNA(

USA)用NdeI和BamHI进行消化。引物序列、退火温度以及PCR产物大小如表1所示。

表1

因此制备的片段A编码ICAM-1蛋白氨基酸序列中的第28至483位氨基酸；片段B编码第28至380位氨基酸；片段C编码第28至300位氨基酸；片段D编码第28至200位氨基酸。

通过在2%琼脂糖凝胶(Invitrogen,USA)上进行电泳验证制备的ICAM-1片段大小。电泳结果如图5所示。从图5中可以看出，验证了4个片段具有准确的大小。

用凝胶回收试剂盒(Gel Extraction Kit)(QIAGEN,USA)纯化片段，并与NdeI/BamHI处理的pET-28a质粒DNA(

USA)混合，然后用T4DNA连接酶(NEB,USA)进行连接。用连接的质粒转化E.coli BL21(DE3)(Sigman,USA)，并将转化子培养于LB琼脂培养基(BD,USA)。挑取增殖的单个菌落，置于各PCR管中，然后进行PCR反应。通过如上电泳确认扩增的插入片段(图6)，从而选择菌落。所选的菌落培养于LB培养基中(BD,USA)，并用

质粒纯化试剂盒(QIAGEN,USA)纯化以获得DNA。将纯化的DNA用NdeI和BamHI进行消化，然后用EtBr.在2%琼脂糖凝胶上再次验证含有所需基因的单个菌落。用PCR纯化试剂盒(QIAGEN,USA)纯化DNA，并验证插入片段的准确序列。将DNA序列经过验证的菌落培养于含IPTG(Promega,USA)的LB培养基中。将所得的培养物进行离心，用8M尿素(pH8.0)处理沉淀的细胞，以使细胞裂解。基于连接于重组蛋白N-末端的6个组氨酸(6X His)与Ni-NTA之间的结合，用Ni-NTA(镍-次氮基氨三乙酸)琼脂糖(QIAGEN,USA)分离重组蛋白，并通过SDS-PAGE和蛋白质印迹(western blot)进行验证。

制备实施例1：注射用制剂

为制备注射用制剂，将100mg ICAM-1蛋白溶于水中，然后与10ml0.9%的无菌盐水进行混合。将混合物并入适合注射的单位剂量剂型(dosage unit form)。

制备实施例2：吸入用制剂

为制备吸入给药制剂，将20mg ICAM-1蛋白与50mg无水柠檬酸以及100ml0.9%氯化钠溶液进行混合。将混合物并入吸入送递单元，如适合吸入给药的喷雾剂。

制备实施例3：鼻腔给药制剂

为制备鼻腔喷雾溶液，将10g ICAM-1蛋白与30ml0.05M磷酸缓冲液(pH4.4)进行混合。将溶液置于经设计每次应用喷雾100μl的鼻腔给药装置中。

Claims (11)

1.用于治疗或预防神经系统疾病的药物组合物，包含作为活性成分的ICAM-1蛋白(细胞间粘附分子-1)或其片段或变体。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其中，所述ICAM-1蛋白具有SEQ.ID.NO.:1的氨基酸序列，或具有去除了其第1-27位氨基酸残基所对应的信号肽的氨基酸序列。

3.如权利要求1所述的药物组合物，其中，所述ICAM-1蛋白的片段具有与ICAM-1蛋白等同的生物活性。

4.如权利要求1所述的药物组合物，其中，所述ICAM-1蛋白变体具有SEQ.ID.NO.:1的氨基酸序列且具有与ICAM-1蛋白等同的生物活性，其中一个或多个氨基酸被取代、缺失、插入和/或添加。

5.如权利要求1所述的药物组合物，其中，所述ICAM-1蛋白变体的氨基酸序列与ICAM-1蛋白所具有的SEQ.ID.NO.:1的氨基酸序列至少约90%、93%、95%、96%、97%、98%或99%相同，且所述ICAM-1蛋白变体具有与ICAM-1蛋白等同的生物活性。

6.如权利要求1所述的药物组合物，其中，所述ICAM-1蛋白或其片段或变体诱导脑啡肽酶(NEP)的表达，从而促进β淀粉样蛋白(Aβ)的降解。

7.如权利要求1所述的药物组合物，其中，所述神经系统疾病是由选自下述组中至少一种所引起的疾病：神经元中β淀粉样蛋白斑块的形成、神经元中tau蛋白高度磷酸化、神经突受损、神经元中脑啡肽酶的表达降低及其组合。

8.如权利要求1所述的药物组合物，其中，所述神经系统疾病选自下述组：阿尔茨海默病、帕金森病、抑郁症、癫痫症、多发性硬化症、狂躁症、卢格里克氏症、轻度认知障碍、多发梗塞性痴呆以及路易体痴呆。

9.一种预防或治疗个体的神经系统疾病的方法，包括向有需要的个体施用ICAM-1蛋白或其片段或变体。

10.一种增加神经元中脑啡肽酶表达的方法，包括将ICAM-1蛋白或其片段或变体与所述神经元共培养。

11.一种增加个体中脑啡肽酶表达的方法，包括向所述个体施用ICAM-1蛋白或其片段或变体。

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