KR20130065655A

KR20130065655A - 치료 방법

Info

Publication number: KR20130065655A
Application number: KR1020127029698A
Authority: KR
Inventors: 프레말 에이치. 파텔; 에이미 씨. 페터슨
Original assignee: 제넨테크, 인크.
Priority date: 2010-05-14
Filing date: 2011-05-16
Publication date: 2013-06-19
Also published as: SG185426A1; AU2011252804A1; JP2013529203A; EP2569014A4; WO2011143665A1; BR112012027873A2; CA2793545A1; CN103025353A; RU2012154025A; MX2012012992A; EP2569014A1; US20110287003A1

Abstract

본 발명은 항-c-Met 항체 및 탁산의 조합을 사용한 삼중 음성 전이성 유방암의 치료에 관한 것이다. 상기 조합은 항-VEGR 항체를 추가로 함유할 수 있다.

Description

치료 방법 {TREATMENT METHODS}

<관련 출원에 대한 상호 참조>

본원은 2010년 5월 14일에 출원된 미국 특허 출원 번호 61/345,044 및 2010년 5월 19일에 출원된 61/346,424를 우선권 주장하며, 이들의 내용은 본원에 참고로 포함된다.

<서열 목록>

본원은 EFS-Web을 통해 제출하였고 그 전문이 본원에 참고로 포함되는 서열 목록을 함유하고 있다. 2011년 5월 10일에 생성된 상기 ASCII 카피는 P4451R1-WO로 명명되며, 크기는 26,286 바이트이다.

<기술 분야>

본 발명은 일반적으로 분자 생물학 및 성장 인자 조절 분야에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 병리학적 상태, 예컨대 암의 치료를 위한 조합 요법에 관한 것이다.

암은 여전히 인간 건강에 가장 치명적인 위협 중 하나이다. 미국에서만도 매년 거의 130만명의 새로운 암 환자가 발생하고, 이는 심장 질환 다음으로 두번째로 높은 사망 원인이며, 사망자 4명 중 대략 1명에 해당한다. 유방암은 두번째로 가장 일반적인 형태의 암이며, 미국 여성에서 두번째 암 사망 원인이다. 또한, 암이 5년 이내에 제1 사망 원인으로서 심혈관 질환을 능가할 수 있다고 예측된다. 이러한 사망의 대부분은 고형 종양으로 인한 것이다. 특정 암의 경우에는 의학적 치료에 유의한 진보가 있었지만, 모든 암에 대한 전반적인 5년 생존율은 지난 20년 동안 약 10% 정도만 개선되었다. 암 또는 악성 종양은 제어되지 않는 방식으로 신속하게 전이 및 성장하기 때문에 적시에 이를 검출하고 치료하는 것은 극도로 어려운 일이다.

유방암은 미국에서 매년 많은 여성을 사망시키는 질환이다. 미국 암 학회(American Cancer Society)에 따르면, 2008년에는 대략 40,000명이 이 질환으로 사망할 것이다. 180,000건이 넘는 새로운 유방암 사례가 매년 진단되고, 8명의 여성 중 한 명에서 유방암이 발병할 것으로 추정된다. 이러한 수치는 유방암이 오늘날의 여성들에게 직면한 가장 위험한 질환 중 하나임을 나타낸다. 전이성 유방암은 일반적으로 불치병이며, 표준 화학요법 후에 겨우 몇명의 환자만이 장기간 생존을 달성한다. 문헌 [Greenberg et al., J. Clin. Oncol. 14:2197-2205 (1996)].

암은 여전히 가장 치명적인 위협 중 하나이기 때문에, 환자를 위한 추가의 암 치료가 요구된다. 하기 개시내용을 검토할 때 명백해질 것과 같이, 본 발명은 이러한 요구 및 다른 요구를 다루고 있다.

특허 출원 및 공보를 포함하여 본원에서 인용된 모든 참고문헌은 그 전문이 참고로 포함된다.

<발명의 개요>

한 측면에서, 본 발명은 에스트로겐 수용체 (ER)-음성, 프로게스테론 수용체 (PR)-음성 및 HER2-음성 (집합적으로 삼중-음성으로 지칭됨) 전이성 유방암 환자에게 유효량의 항-c-met 항체 및 탁산을 투여하는 것을 포함하는, 유방암의 치료 방법을 제공한다.

한 측면에서, 본 발명은 ER-음성, PR-음성 및 HER2-음성 (집합적으로 삼중-음성으로 지칭됨) 전이성 유방암 환자에게 유효량의 항-c-met 항체, 항-VEGF 항체 및 탁산을 투여하는 것을 포함하는, 유방암의 치료 방법을 제공한다.

한 측면에서, 본 발명은 ER-음성, PR-음성 및 HER2-음성 (ER-, PR- 및 HER2-; 또는 삼중-음성) 전이성 유방암 환자에게 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-c-met 항체 (예를 들어, MetMAb) 및 28-일 주기 중 제1일, 제8일 및 제15일에 IV 주입에 의해 90 mg/㎡의 용량으로 투여되는 파클리탁셀을 투여하여, 예를 들어 환자의 생존을 증가시키고/거나, 환자의 암 재발 위험을 감소시키고/거나 환자의 생존 가능성을 증가시키는 것을 포함하는, 유방암의 치료 방법을 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 전이성 삼중 음성 유방암 환자를 치료하여, 예를 들어 환자의 생존을 증가시키고/거나, 환자의 암 재발 위험을 감소시키고/거나 환자의 생존 가능성을 증가시키기 위해 탁산과 조합하여 항-c-met 항체 (예를 들어, 1가 항-c-met 항체, 예를 들어, MetMAb)를 프로모션하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 탁산은 파클리탁셀이다. 일부 실시양태에서, 치료는 삼중-음성 전이성 유방암 환자에게 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-c-met 항체 (예를 들어, MetMAb) 및 28-일 주기 중 제1일, 제8일 및 제15일에 IV 주입에 의해 90 mg/㎡의 용량으로 투여되는 파클리탁셀을 투여하는 것을 포함한다. 프로모션은 임의의 이용가능한 수단에 의해 수행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 프로모션은 항-c-met 항체의 시판 제제와 동봉된 포장 삽입물에 의해 이루어진다. 프로모션은 또한 탁산의 시판 제제와 동봉된 포장 삽입물에 의해 이루어질 수 있다. 프로모션은 의사 또는 건강 관리자에 대한 서면 또는 구두 커뮤니케이션으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 프로모션은 항-c-met 항체 및/또는 탁산을 사용한 요법을 받기 위한 지침을 제공하는 포장 삽입물에 의해 이루어진다. 일부 실시양태에서, 프로모션은 탁산의 존재 또는 부재 하에 항-c-met 항체를 사용한 환자의 치료로 이어진다. 일부 실시양태에서, 치료는 삼중-음성 전이성 유방암 환자에게 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-c-met 항체 (예를 들어, MetMAb) 및 28-일 주기 중 제1일, 제8일 및 제15일에 IV 주입에 의해 90 mg/㎡의 용량으로 투여되는 파클리탁셀을 투여하는 것을 포함한다.

추가 측면에서, 본 발명은 전이성 삼중 음성 유방암 환자를 치료하여, 예를 들어 환자의 생존을 증가시키고/거나, 환자의 암 재발 위험을 감소시키고/거나 환자의 생존 가능성을 증가시키기 위해 항-c-met 항체와 조합하여 탁산을 프로모션하는 방법을 제공하고, 여기서 탁산은 예를 들어 파클리탁셀일 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료는 삼중-음성 전이성 유방암 환자에게 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-c-met 항체 (예를 들어, MetMAb) 및 28-일 주기 중 제1일, 제8일 및 제15일에 IV 주입에 의해 90 mg/㎡의 용량으로 투여되는 파클리탁셀을 투여하는 것을 포함한다.

일부 측면에서, 본 발명은 예를 들어 삼중-음성 전이성 유방암을 갖는 환자의 생존을 증가시키고/거나, 환자의 암 재발 위험을 감소시키고/거나 환자의 생존 가능성을 증가시키기 위해 항-c-met 항체 및 탁산을 사용한 치료를 받기 위한 지침을 제공함으로써 삼중-음성 전이성 유방암을 갖는 환자를 지시하는 방법을 특징으로 한다. 일부 실시양태에서, 치료는 삼중-음성 전이성 유방암 환자에게 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-c-met 항체 (예를 들어, MetMAb) 및 28-일 주기 중 제1일, 제8일 및 제15일에 IV 주입에 의해 90 mg/㎡의 용량으로 투여되는 파클리탁셀을 투여하는 것을 포함한다.

본 발명은 인간 환자에서 삼중-음성 전이성 유방암을 치료하여, 예를 들어 생존을 증가시키고/거나, 환자의 암 재발 위험을 감소시키고/거나 환자의 생존 가능성을 증가시키기 위해 항-c-met 항체를 마케팅하는 것을 포함하는 영업 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 치료는 삼중-음성 전이성 유방암 환자에게 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-c-met 항체 (예를 들어, MetMAb) 및 28-일 주기 중 제1일, 제8일 및 제15일에 IV 주입에 의해 90 mg/㎡의 용량으로 투여되는 파클리탁셀을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서 방법은 인간 환자에서 삼중-음성 전이성 유방암을 치료하기 위해 탁산을 마케팅하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서 마케팅은 탁산의 존재 또는 부재 하에 항-c-met 항체를 사용한 환자의 치료로 이어진다.

또한, 인간 환자에서 삼중-음성 전이성 유방암을 치료하여, 예를 들어 생존을 증가시키고/거나, 환자의 암 재발 위험을 감소시키고/거나 환자의 생존 가능성을 증가시키기 위해 항-c-met 항체 및 탁산을 마케팅하는 것을 포함하는 영업 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 치료는 삼중-음성 전이성 유방암 환자에게 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-c-met 항체 (예를 들어, MetMAb) 및 28-일 주기 중 제1일, 제8일 및 제15일에 IV 주입에 의해 90 mg/㎡의 용량으로 투여되는 파클리탁셀을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서 마케팅은 탁산의 존재 또는 부재 하에 항-c-met 항체를 사용한 환자의 치료로 이어진다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 항-c-met 항체 (예를 들어, 1가 항-c-met 항체, 예를 들어, MetMAb) 및/또는 항-VEGF 항체 및/또는 탁산, 및 삼중-음성 전이성 유방암 환자를 치료하기 위한 지침을 갖는 포장 삽입물 또는 라벨을 포함하는 제조품을 제공한다. 일부 실시양태에서, 탁산은 파클리탁셀이다. 일부 실시양태에서, 치료는 삼중-음성 전이성 유방암 환자에게 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-c-met 항체 (예를 들어, MetMAb) 및 28-일 주기 중 제1일, 제8일 및 제15일에 IV 주입에 의해 90 mg/㎡의 용량으로 투여되는 파클리탁셀을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치료는 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-VEGF 항체 (예를 들어, 베바시주맙)를 투여하는 것을 추가로 포함한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 항-c-met 항체 (예를 들어, 1가 항-c-met 항체, 예를 들어, MetMAb) 및/또는 항-VEGF 항체 및/또는 탁산, 및 삼중-음성 전이성 유방암 환자를 치료하기 위한 지침을 갖는 포장 삽입물 또는 라벨을 포함하는 제조품의 제조 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 탁산은 파클리탁셀이다. 일부 실시양태에서, 치료는 삼중-음성 전이성 유방암 환자에게 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-c-met 항체 (예를 들어, MetMAb) 및 28-일 주기 중 제1일, 제8일 및 제15일에 IV 주입에 의해 90 mg/㎡의 용량으로 투여되는 파클리탁셀을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치료는 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-VEGF 항체 (예를 들어, 베바시주맙)를 투여하는 것을 추가로 포함한다.

한 측면에서, 본 발명은 ER-음성, PR-음성 및 HER2-음성 (ER-, PR- 및 HER2-; 또는 삼중-음성) 전이성 유방암 환자에게 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-c-met 항체 (예를 들어, MetMAb), 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-VEGF 항체 (예를 들어, 베바시주맙) 및 28-일 주기 중 제1일, 제8일 및 제15일에 IV 주입에 의해 90 mg/㎡의 용량으로 투여되는 파클리탁셀을 투여하여, 예를 들어 생존을 증가시키고/거나, 환자의 암 재발 위험을 감소시키고/거나 환자의 생존 가능성을 증가시키는 것을 포함하는, 유방암의 치료 방법을 제공한다. 또 다른 측면에서, 본 발명은 항-VEGF 항체의 투여를 포함하는 방법을 제공한다. 따라서, 일부 측면에서, 본 발명은 전이성 삼중 음성 유방암 환자를 치료하여, 예를 들어 환자의 생존을 증가시키고/거나, 환자의 암 재발 위험을 감소시키고/거나 환자의 생존 가능성을 증가시키기 위해 항-VEGF 항체(예를 들어, 베바시주맙) 및 탁산과 조합하여 항-c-met 항체 (예를 들어, 1가 항-c-met 항체, 예를 들어, MetMAb)를 프로모션하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 탁산은 파클리탁셀이다. 일부 실시양태에서, 치료는 삼중-음성 전이성 유방암 환자에게 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-c-met 항체 (예를 들어, MetMAb), 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-VEGF 항체 (예를 들어, 베바시주맙) 및 28-일 주기 중 제1일, 제8일 및 제15일에 IV 주입에 의해 90 mg/㎡의 용량으로 투여되는 파클리탁셀을 투여하는 것을 포함한다. 프로모션은 임의의 이용가능한 수단에 의해 수행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 프로모션은 항-c-met 항체의 시판 제제와 동봉된 포장 삽입물에 의해 이루어진다. 프로모션은 또한 항-VEGF 항체의 시판 제제와 동봉된 포장 삽입물에 의해 이루어질 수 있다. 프로모션은 또한 탁산의 시판 제제와 동봉된 포장 삽입물에 의해 이루어질 수 있다. 프로모션은 의사 또는 건강 관리자에 대한 서면 또는 구두 커뮤니케이션으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 프로모션은 항-c-met 항체, 항-VEGF 항체 및/또는 탁산을 사용한 요법을 받기 위한 지침을 제공하는 포장 삽입물에 의해 이루어진다. 일부 실시양태에서, 프로모션은 탁산 또는 항-VEGF 항체의 존재 또는 부재 하에 항-c-met 항체를 사용한 환자의 치료로 이어진다. 추가 측면에서, 본 발명은 전이성 삼중 음성 유방암 환자를 치료하기 위해 항-c-met 항체 (예를 들어, MetMAb) 및 탁산, 예컨대 파클리탁셀과 조합하여 항-VEGF 항체 (예를 들어, 베바시주맙)를 프로모션하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 치료는 삼중-음성 전이성 유방암 환자에게 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-c-met 항체 (예를 들어, MetMAb), 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-VEGF 항체 (예를 들어, 베바시주맙) 및 28-일 주기 중 제1일, 제8일 및 제15일에 IV 주입에 의해 90 mg/㎡의 용량으로 투여되는 파클리탁셀을 투여하는 것을 포함한다.

추가 측면에서, 본 발명은 전이성 삼중 음성 유방암 환자를 치료하여, 예를 들어 환자의 생존을 증가시키고/거나, 환자의 암 재발 위험을 감소시키고/거나 환자의 생존 가능성을 증가시키기 위해 항-c-met 항체 및 항-VEGF 항체와 조합하여 탁산을 프로모션하는 방법을 제공하고, 여기서 탁산은 예를 들어 파클리탁셀일 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료는 삼중-음성 전이성 유방암 환자에게 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-c-met 항체 (예를 들어, MetMAb), 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-VEGF 항체 (예를 들어, 베바시주맙) 및 28-일 주기 중 제1일, 제8일 및 제15일에 IV 주입에 의해 90 mg/㎡의 용량으로 투여되는 파클리탁셀을 투여하는 것을 포함한다.

일부 측면에서, 본 발명은 예를 들어 삼중-음성 전이성 유방암을 갖는 환자의 생존을 증가시키고/거나, 환자의 암 재발 위험을 감소시키고/거나 환자의 생존 가능성을 증가시키기 위해 항-c-met 항체, 항-VEGF 항체 및 탁산을 사용한 치료를 받기 위한 지침을 제공함으로써 삼중-음성 전이성 유방암을 갖는 환자를 지시하는 방법을 특징으로 한다. 일부 실시양태에서, 치료는 삼중-음성 전이성 유방암 환자에게 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-c-met 항체 (예를 들어, MetMAb), 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-VEGF 항체 (예를 들어, 베바시주맙) 및 28-일 주기 중 제1일, 제8일 및 제15일에 IV 주입에 의해 90 mg/㎡의 용량으로 투여되는 파클리탁셀을 투여하는 것을 포함한다.

본 발명은 인간 환자에서 삼중-음성 전이성 유방암을 치료하여, 예를 들어 생존을 증가시키고/거나, 환자의 암 재발 위험을 감소시키고/거나 환자의 생존 가능성을 증가시키기 위해 항-c-met 항체를 마케팅하는 것을 포함하는 영업 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 치료는 삼중-음성 전이성 유방암 환자에게 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-c-met 항체 (예를 들어, MetMAb), 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-VEGF 항체 (예를 들어, 베바시주맙) 및 28-일 주기 중 제1일, 제8일 및 제15일에 IV 주입에 의해 90 mg/㎡의 용량으로 투여되는 파클리탁셀을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서 방법은 인간 환자에서 삼중-음성 전이성 유방암을 치료하기 위해 항-VEGF 항체 및 탁산을 마케팅하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서 마케팅은 탁산 및/또는 항-VEGF 항체의 존재 또는 부재 하에 항-c-met 항체를 사용한 환자의 치료로 이어진다. 일부 실시양태에서, 마케팅은 탁산 또는 항-c-met 항체의 존재 또는 부재 하에 항-VEGF 항체를 사용한 환자의 치료로 이어진다. 또한, 인간 환자에서 삼중-음성 전이성 유방암을 치료하여, 예를 들어 생존을 증가시키고/거나, 환자의 암 재발 위험을 감소시키고/거나 환자의 생존 가능성을 증가시키기 위해 항-c-met 항체, 항-VEGF 항체 및 탁산을 마케팅하는 것을 포함하는 영업 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 치료는 삼중-음성 전이성 유방암 환자에게 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-c-met 항체 (예를 들어, MetMAb), 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-VEGF 항체 (예를 들어, 베바시주맙) 및 28-일 주기 중 제1일, 제8일 및 제15일에 IV 주입에 의해 90 mg/㎡의 용량으로 투여되는 파클리탁셀을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서 마케팅은 탁산 또는 항-VEGF 항체의 존재 또는 부재 하에 항-c-met 항체를 사용한 환자의 치료로 이어진다. 일부 실시양태에서, 마케팅은 탁산 또는 항-c-met 항체의 존재 또는 부재 하에 항-VEGF 항체를 사용한 환자의 치료로 이어진다.

일부 실시양태에서, 삼중-음성 전이성 유방암 환자는 삼중-음성 전이성 유방암을 위한 이전 치료 (예를 들어, 이전 항암 약물 요법)를 받지 않았다. 일부 실시양태에서, 삼중-음성 전이성 유방암 환자는 삼중 음성 전이성 유방암을 위한 이전 치료를 받았다. 일부 실시양태에서, 환자는 삼중-음성 전이성 또는 국부 재발성 유방암을 갖는다. 일부 실시양태에서, 삼중-음성 전이성 또는 국부 재발성 유방암 환자는 삼중-음성 전이성 또는 국부 재발성 유방암을 위한 이전 치료 (예를 들어, 이전 항암 약물 요법)를 받지 않았다. 일부 실시양태에서, 삼중-음성 전이성 또는 국부 재발성 유방암 환자는 삼중 음성 전이성 또는 국부 재발성 유방암을 위한 이전 치료를 받았다.

추가 실시양태에서, 항-c-met 항체 및 탁산은 공동으로 투여된다. 추가 실시양태에서, 항-c-met 항체 및 탁산은 임의의 순서로 연속적으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 항-c-met 항체의 투여는 탁산의 투여에 선행한다. 추가 실시양태에서, 항-c-met 항체 (예를 들어, MetMAb) 및 탁산 (예를 들어, 파클리탁셀)의 투여는 상승작용 효과를 일으킨다. 추가 실시양태에서, 항-c-met 항체 (예를 들어, MetMAb) 및 탁산 (예를 들어, 파클리탁셀)의 투여는 항-c-met 항체의 부재 하의 치료와 비교하여 인간 환자의 생존을 연장시킨다. 특정한 실시양태에서, 무진행 생존 (PFS) 및/또는 전체 생존 (OS)이 연장된다. 일부 실시양태에서, 치료는 탁산을 환자에게 투여하여 달성된 PFS 또는 OS보다 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20% 또는 그 초과만큼 PFS 또는 OS를 연장시킨다.

추가 실시양태에서, 항-c-met 항체, 항-VEGF 항체 및 탁산은 공동으로 투여된다. 추가 실시양태에서, 항-c-met 항체, 항-VEGF 항체 및 탁산은 임의의 순서로 연속적으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 항-c-met 항체의 투여는 항-VEGF 항체 및 탁산의 투여에 선행한다. 추가 실시양태에서, 항-c-met 항체 (예를 들어, MetMAb), 항-VEGF 항체 (예를 들어, 베바시주맙) 및 탁산 (예를 들어, 파클리탁셀)의 투여는 상승작용 효과를 일으킨다. 추가 실시양태에서, 항-c-met 항체 (예를 들어, MetMAb), 항-VEGF 항체 (예를 들어, 베바시주맙) 및 탁산 (예를 들어, 파클리탁셀)의 투여는 항-c-met 항체의 부재 하의 치료와 비교하여 인간 환자의 생존을 연장시킨다. 특정한 실시양태에서, 무진행 생존 (PFS) 및/또는 전체 생존 (OS)이 연장된다. 일부 실시양태에서, 치료는 항-VEGF 항체 및 탁산을 환자에게 투여하여 달성된 PFS 또는 OS보다 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20% 또는 그 초과만큼 PFS 또는 OS를 연장시킨다.

본 발명의 방법이 암 요법의 임의의 다른 수단의 부재 하에, 예를 들어 추가의 치료제 (화학요법제 포함)의 부재 하에 수행될 수 있을지라도, 방법은 화학요법제, 상이한 항-c-met 항체, 상이한 항-VEGF 항체, 종양 관련 항원에 대해 지시된 항체, 항호르몬 화합물, 심장보호제, 시토카인, 항혈관신생제, 티로신 키나제 억제제, COX 억제제, 비-스테로이드성 항염증성 약물, 파르네실 트랜스퍼라제 억제제, 종양태아성 단백질 CA 125에 결합하는 항체, Raf 또는 ras 억제제, 리포솜 독소루비신, 토포테칸, 상이한 탁산, 오심을 치료하는 의약, 피부 발진을 예방 또는 치료하는 의약 또는 표준 여드름 요법, 설사를 치료 또는 예방하는 의약, 체온-강하 의약, 및 조혈 성장 인자로 이루어진 군으로부터 선택된 추가의 치료제의 투여를 임의로 포함할 수 있다.

본 발명의 추가 측면에서, 본원의 임의의 실시양태에 따른 탁산, 예를 들어 탁솔(TAXOL)^® 파클리탁셀 (브리스톨-마이어스 스큅 온콜로지(Bristol-Myers Squibb Oncology), 뉴저지주 프린스톤), 탁소테레(TAXOTERE)^® 도세탁셀 (롱-프랑 로러(Rhone-Poulenc Rorer), 프랑스 안토니) 또는 크레모포르-무함유 아브락산(ABRAXANE)^TM, 파클리탁셀의 알부민-조작 나노입자 제제 (아메리칸 파마슈티칼 파트너스(American Pharmaceutical Partners), 일리노이주 샤움버그)이다. 일부 실시양태에서, 탁산은 각각의 28-일 주기 중 제1일, 제8일 및 제15일에 IV 주입에 의해 90 mg/㎡의 용량으로 투여되는 파클리탁셀이다. 두 가지 이상의 탁산은 항-c-met 항체 및 항-VEGF 항체의 투여와 조합하여 투여될 칵테일에 사용될 수 있다.

본 발명의 추가 측면에서, 본원의 임의의 실시양태에 따른 항체는 키메라, 인간화 또는 인간 항체를 포함하는 모노클로날 항체이다. 한 실시양태에서, 항체는 항체 단편, 예를 들어, Fv, Fab, Fab', scFv, 디아바디, 1-아암 항체 또는 F(ab')₂ 단편이다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 본원에 정의된 바와 같은 전장 항체, 예를 들어 무손상 IgG 항체 또는 다른 항체 클래스 또는 이소형이다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 네이키드 항체이다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 약물에 접합된다.

본 발명의 또 다른 측면에서, 항-c-met 항체는 1가, 1-아암 항체이다. 본원은 상기 항원 결합 아암을 포함하는 Fab 분자와 비교하여 상기 항체 단편의 안정성을 증가시키는 Fc 영역을 포함하는 1가 1-아암 항체를 인간에게 투여하는 것을 개시한다. 예를 들어, WO2005/063816을 참조한다. 전장 항체는 일부 경우에 심지어 그것이 Fab 단편으로서 길항작용 항체일지라도, 표적 항원에의 결합시 (바람직하지 않을 수 있는) 효능작용 효과를 나타낼 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 6,468,529를 참조한다. 이러한 현상은 길항작용 효과가 바람직한 치료 기능인 경우에 바람직하지 않은 것이다. 이러한 경우에, 1-아암 항체 (즉, 단일 항원 결합 아암을 포함하는 항체)의 1가 특성은 항체의 표적 분자에의 결합시에 길항작용 기능을 필요로 하고 항체의 2가성이 바람직하지 않은 효능작용 효과를 일으키는 병리학적 상태의 치료에 적합한 길항작용 기능을 일으키고/거나 보장한다. 또한, 본원에 기재된 바와 같은 Fc 영역을 포함하는 1-아암 항체는 유사한/실질적으로 동일한 항원 결합 특성을 갖는 Fab 형태와 비교하여 우수한 약동학 특성 (예컨대, 증진된 생체내 반감기 및/또는 감소된 제거율)을 특징으로 하며, 이에 따라 종래의 1가 Fab 항체를 사용하는데 있어서의 주요 문제점이 극복된다. 따라서, 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 Fc 영역을 포함하는 1-아암 항체 (즉, 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인이 단일 항원 결합 아암을 형성함)이며, 여기서 Fc 영역은 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드를 포함하고, 상기 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드는 복합체에 존재하며, 상기 항원 결합 아암을 포함하는 Fab 분자와 비교하여 상기 항체 단편의 안정성을 증가시키는 Fc 영역을 형성한다.

일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 항-c-met 항체 또는 그의 항체 단편이며, 여기서 항체는

(a) 서열

을 포함하는 중쇄 가변 도메인, CH1 서열 및 제1 Fc 폴리펩티드를 포함하는 제1 폴리펩티드;

(b) 서열

을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 CL1 서열을 포함하는 제2 폴리펩티드; 및

(c) 제2 Fc 폴리펩티드를 포함하는 제3 폴리펩티드

를 포함하고, 여기서 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인은 복합체로 존재하며, 단일 항원 결합 아암을 형성하고, 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드는 복합체에 존재하며, 상기 항원 결합 아암을 포함하는 Fab 분자와 비교하여 상기 항체 단편의 안정성을 증가시키는 Fc 영역을 형성한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리펩티드는 도 1에 도시된 Fc 서열 (서열 3)을 포함하고, 제2 폴리펩티드는 도 2에 도시된 Fc 서열 (서열 4)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리펩티드는 도 2에 도시된 Fc 서열 (서열 4)을 포함하고, 제2 폴리펩티드는 도 1에 도시된 Fc 서열 (서열 3)을 포함한다.

(a) 중쇄 가변 도메인을 포함하는 제1 폴리펩티드 (상기 폴리펩티드는 하기 서열:

을 포함함);

(b) 경쇄 가변 도메인을 포함하는 제2 폴리펩티드 (폴리펩티드는 하기 서열:

을 포함함); 및

Fc 서열을 포함하는 제3 폴리펩티드 (폴리펩티드는 하기 서열:

을 포함함)

를 포함하고, 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인은 복합체로 존재하며, 단일 항원 결합 아암을 형성하고, 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드는 복합체에 존재하며, 상기 항원 결합 아암을 포함하는 Fab 분자와 비교하여 상기 항체 단편의 안정성을 증가시키는 Fc 영역을 형성한다.

한 실시양태에서, 항-c-met 항체는 도 1에 도시된 CDR1-HC, CDR2-HC 및 CDR3-HC 서열 (서열 5, 6, 7) 중 하나 이상을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 도 1에 도시된 CDR1-LC, CDR2-LC 및 CDR3-LC 서열 (서열 8, 9, 10) 중 하나 이상을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄 가변 도메인은 도 1에 도시된 FR1-HC, FR2-HC, FR3-HC 및 FR4-HC 서열 (서열 11, 12, 13, 14)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 경쇄 가변 도메인은 도 1에 도시된 FR1-LC, FR2-LC, FR3-LC 및 FR4-LC 서열 (서열 15, 16, 17, 18)을 포함한다.

일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙 (교환가능하게 MetMAb로 지칭됨)이다.

본 발명의 방법에 사용하기에 적합한 다른 항-c-met 항체는 본원에 기재되고 당업계에 공지되어 있다. 항-간세포 성장 인자 (HGF) 항체는 또한 항-c-met 항체를 수반하는 (항-c-met 항체와 조합되거나 또는 항-c-met 항체를 대신함) 본 발명의 방법에 사용하기에 적합하다. 당업계에 공지된 바와 같이, HGF는 c-met 수용체에 대한 리간드이다.

일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 항체 단편 내에서 Fc 서열의 동종이량체화를 최소화하면서 이종이량체화는 촉진하는 적어도 하나의 특성을 포함한다. 이러한 특성(들)은 이뮤노글로불린 집단의 수율 및/또는 순도 및/또는 균질성을 개선시킨다. 한 실시양태에서, 항체는 WO2005/063816에 기재된 바와 같은 "노브" 및 "홀"을 구성하는 Fc 돌연변이를 포함한다. 예를 들어, 홀 돌연변이는 Fc 폴리펩티드의 T366A, L368A 및/또는 Y407V 중 하나 이상일 수 있고, 노브 돌연변이는 T366W일 수 있다.

또 다른 측면에서, 본원의 임의의 실시양태에 따른 항-VEGF 항체는 하기 기재된 바와 같은 VEGF 특이적 길항제, 예를 들어 VEGF 수용체 분자 또는 키메라 VEGF 수용체 분자로 치환될 수 있다. 본 발명의 방법의 특정 실시양태에서, 항-VEGF 항체는 베바시주맙이다. 본 발명의 방법에 유용한 예시적인 항체는 베바시주맙 (아바스틴(AVASTIN)^®), G6 항체, B20 항체 및 그의 단편을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항-VEGF 항체는

하기 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역:

및 하기 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역:

을 갖는다.

본 발명의 또 다른 측면에서, 본원에 제공된 방법의 일부 실시양태에서, 환자의 암은 c-met를 발현한다. 일부 실시양태에서, 환자로부터의 혈청은 높은 수준의 IL8을 발현한다 (높은 수준의 IL8 발현, 예컨대 IL8 단백질 발현을 나타냄). 일부 실시양태에서, 환자로부터의 혈청은 약 150 pg/ml 초과의 IL8을 발현하거나, 또는 일부 실시양태에서 약 50 pg/ml 초과의 IL8을 발현한다. 일부 실시양태에서, 환자로부터의 혈청은 약 10 pg/ml, 20 pg/ml, 30 pg/ml 초과 또는 그보다 많은 IL8을 발현한다. IL8 혈청 농도를 결정하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 일부 실시양태에서, 환자로부터의 혈청은 높은 수준의 HGF를 발현한다 (높은 수준의 HGF 발현, 예컨대 HGF 단백질 발현을 나타냄). 일부 실시양태에서, 환자로부터의 혈청은 약 5,000, 10,000 또는 50,000 pg/ml 초과의 HGF를 발현한다.

도 1: MetMAb (오나르투주맙 또는 OA5D5v2)의 프레임워크 (FR), CDR, 제1 불변 도메인 (CL 또는 CH1) 및 Fc 영역 (Fc)의 아미노산 서열을 도시한다. 도시된 Fc 서열은 WO 2005/063816에 기재된 바와 같이, "홀" (캐비티) 돌연변이 T366S, L368A 및 Y407V를 포함한다.
도 2: WO 2005/063816에 기재된 바와 같이, "노브" (돌출부) 돌연변이 T366W를 포함하는 Fc 폴리펩티드의 서열을 도시한다. 한 실시양태에서, 이 서열을 포함하는 Fc 폴리펩티드는 도 1의 Fc 서열을 포함하는 Fc 폴리펩티드와 복합체를 형성하여 Fc 영역을 생성한다.
도 3: 환자 진단, 치료 코호트 및 투여된 주기를 도시한다. BEV = 베바시주맙; CR = 완전한 반응; * = 용량-제한 독성.
도 4: 모든 환자에서 최고 반응을 갖는 기준선으로부터의 종양 부담의 변화를 도시한다. SLD = 최장 직경의 합계; * = 용량-제한 독성으로 인한 데이터의 부재; ** = 수행되지 않음.

<상세한 설명>

I. 정의

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "간세포 성장 인자" 또는 "HGF"는, 달리 나타내지 않는 한, HGF/c-met 신호전달 경로의 활성화가 일어나도록 허용하는 조건 하에 상기 경로를 활성화시킬 수 있는 임의의 천연 또는 변이체 (천연 또는 합성 변이체) HGF 폴리펩티드를 지칭한다. 일반적으로 용어 "야생형 HGF"는 자연 발생 HGF 단백질의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다. 용어 "야생형 HGF 서열"은 일반적으로 자연 발생 HGF에서 발견되는 아미노산 서열을 지칭한다. c-met는 HGF에 대한 공지된 수용체이고, 이를 통해 HGF 세포내 신호전달이 생물학적으로 실시된다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "에스트로겐 수용체" 또는 "ER"은 달리 나타내지 않는 한 임의의 천연 또는 변이체 (천연이든 또는 합성이든) ER 폴리펩티드를 지칭한다. 용어 "야생형 ER"은 일반적으로 자연 발생 ER 단백질의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다. 용어 "야생형 ER 서열"은 일반적으로 자연 발생 ER에서 발견된 아미노산 서열을 지칭한다.

표현 "ErbB2" 및 "HER2"는 본원에서 교환가능하게 사용되고, 예를 들어 문헌 [Semba et al., PNAS (USA) 82:6497-6501 (1985) 및 Yamamoto et al. Nature 319:230-234 (1986)]에 기재된 인간 HER2 단백질 (진뱅크 (Genebank) 기탁 번호 X03363)을 지칭한다. 용어 "erbB2"는 인간 ErbB2를 코딩하는 유전자를 지칭하고, "neu"는 래트 p185^neu를 코딩하는 유전자를 지칭한다. 바람직한 HER2는 천연 서열 인간 HER2이다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "프로게스테론 수용체" 또는 "PR"은 달리 나타내지 않는 한 임의의 천연 본래 또는 변이체 (천연이든 또는 합성이든) PR 폴리펩티드를 지칭한다. 용어 "야생형 PR"은 일반적으로 자연 발생 PR 단백질의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다. 용어 "야생형 PR 서열"은 일반적으로 자연 발생 PR에서 발견된 아미노산 서열을 지칭한다.

"천연 서열" 폴리펩티드는 자연계로부터 유래된 폴리펩티드와 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 따라서, 천연 서열 폴리펩티드는 임의의 포유동물로부터의 자연 발생 폴리펩티드의 아미노산 서열을 가질 수 있다. 이러한 천연 서열 폴리펩티드는 자연계로부터 단리될 수 있거나, 또는 재조합 또는 합성 수단에 의해 생성될 수 있다. 용어 "천연 서열" 폴리펩티드는 구체적으로 폴리펩티드의 자연 발생 말단절단된 형태 또는 분비된 형태 (예를 들어, 세포외 도메인 서열), 폴리펩티드의 자연 발생 변이체 형태 (예를 들어, 대안적으로 스플라이싱된 형태) 및 자연 발생 대립유전자 변이체를 포함한다.

폴리펩티드 "변이체"는 천연 서열 폴리펩티드와 적어도 약 80%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 생물학적 활성 폴리펩티드를 의미한다. 이러한 변이체는 예를 들어 1개 이상의 아미노산 잔기가 폴리펩티드의 N- 또는 C-말단에 부가되거나 결실된 폴리펩티드를 포함한다. 통상적으로, 변이체는 천연 서열 폴리펩티드와 적어도 약 80%의 아미노산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 약 90%의 아미노산 서열 동일성, 보다 더 바람직하게는 적어도 약 95%의 아미노산 서열 동일성을 가질 것이다.

"항-c-met 항체"는 c-met에 충분한 친화도 및 특이성으로 결합하는 항체이다. 선택된 항체는 일반적으로 c-met에 대해 충분히 강력한 결합 친화도를 가질 것이고, 예를 들어 상기 항체는 인간 c-met에 100 nM 내지 1 pM의 K_d 값으로 결합할 수 있다. 항체 친화도는 예를 들어 표면 플라즈몬 공명 기반 검정 (예컨대 PCT 출원 공보 번호 WO2005/012359에 기재된 바와 같은 비아코어(BIAcore) 검정); 효소-연결된 면역흡착 검정 (ELISA); 및 경쟁 검정 (예를 들어, RIA)에 의해 결정할 수 있다. 특정 실시양태에서, 항-c-met 항체는 c-met 활성이 수반되는 질환 또는 상태를 표적화하고 이를 방해하는데 있어서 치료제로서 사용될 수 있다. 또한, 상기 항체를 대상으로 하여 다른 생물학적 활성 검정을 수행하여, 예를 들어 그의 치료제로서의 유효성을 평가할 수 있다. 이러한 검정은 당업계에 공지되어 있고, 표적 항원 및 항체의 의도된 용도에 따라 달라진다.

"티로신 키나제 억제제"는 c-met 수용체와 같은 티로신 키나제의 티로신 키나제 활성을 어느 정도까지 억제하는 분자이다.

단백질 "발현"은 유전자 내에 코딩된 정보의 메신저 RNA (mRNA)로, 이어서 단백질로의 전환을 지칭한다. 본원에서, 관심 단백질 (예컨대 c-met 단백질)을 "발현하는" 샘플 또는 세포는 단백질을 코딩하는 mRNA, 또는 그의 단편을 포함하는 단백질이 샘플 또는 세포 내에 존재하는 것으로 결정된 것이다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "인터류킨 8" 또는 "IL8" 또는 "IL-8"은, 달리 나타내지 않는 한, IL8 신호전달 경로의 활성화가 일어나도록 하는 조건 하에 상기 경로를 활성화할 수 있는 임의의 천연 또는 변이체 (천연이든 또는 합성이든) IL8 폴리펩티드를 지칭한다. 용어 "야생형 IL8"은 일반적으로 자연 발생 IL8 단백질의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다. 용어 "야생형 IL8 서열"은 일반적으로 자연 발생 IL8에서 발견되는 아미노산 서열을 지칭한다.

용어 "VEGF" 또는 "VEGF-A"는 문헌 [Leung et al. Science, 246:1306 (1989), 및 Houck et al. Mol. Endocrin., 5:1806 (1991)]에 기재된 바와 같은 165-아미노산 인간 혈관 내피 세포 성장 인자 및 관련된 121-, 189- 및 206-아미노산 인간 혈관 내피 세포 성장 인자, 및 그의 자연 발생 대립유전자 및 프로세싱된 형태를 지칭하기 위해 사용된다. VEGF-A는 VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E, VEGF-F 및 PlGF를 포함하는 유전자 패밀리의 일부이다. VEGF-A는 주로 2종의 고친화도 수용체 티로신 키나제인 VEGFR-1 (Flt-1) 및 VEGFR-2 (Flk-1/KDR)에 결합하며, 후자는 VEGF-A의 혈관 내피 세포 분열촉진 신호의 주요 전달자이다. 추가로, 뉴로필린-1이 헤파린-결합 VEGF-A 이소형에 대한 수용체로서 확인되었고, 이는 혈관 발생시에 소정의 역할을 할 수 있다. 용어 "VEGF" 또는 "VEGF-A"는 또한 비인간 종, 예컨대 마우스, 래트 또는 영장류로부터의 VEGF를 지칭한다. 때때로, 특정 종으로부터의 VEGF는 인간 VEGF의 경우에는 hVEGF, 또는 뮤린 VEGF의 경우에는 mVEGF와 같은 용어로 표시된다. 용어 "VEGF"는 또한 165-아미노산 인간 혈관 내피 세포 성장 인자의 아미노산 8 내지 109 또는 아미노산 1 내지 109를 포함하는 폴리펩티드의 말단절단된 형태 또는 단편을 지칭하기 위해 사용된다. VEGF의 임의의 상기 형태들에 대한 언급은 본 출원에서 예를 들어 "VEGF (8-109)", "VEGF (1-109)" 또는 "VEGF₁₆₅"에 의해 확인될 수 있다. "말단절단된" 천연 VEGF에 대한 아미노산 위치는 천연 VEGF 서열에 표시된 바와 같이 넘버링된다. 예를 들어, 말단절단된 천연 VEGF에서의 아미노산 위치 17 (메티오닌)은 또한 천연 VEGF에서의 위치 17 (메티오닌)이다. 말단절단된 천연 VEGF는 KDR 및 Flt-1 수용체에 대해 천연 VEGF와 대등한 결합 친화도를 갖는다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "VEGF 변이체"는 천연 VEGF 서열 중에 1개 이상의 아미노산 돌연변이를 포함하는 VEGF 폴리펩티드를 지칭한다. 임의로, 1개 이상의 아미노산 돌연변이는 아미노산 치환(들)을 포함한다. 본원에 기재된 VEGF 변이체의 약칭의 목적에서, 숫자는 추정 천연 VEGF (문헌 [Leung et al., 상기 문헌] 및 [Houck et al., 상기 문헌]에 제공됨)의 아미노산 서열을 따라 아미노산 잔기 위치를 지칭함을 주목한다.

"VEGF 생물학적 활성"은 임의의 VEGF 수용체에 대한 결합 또는 임의의 VEGF 신호전달 활성, 예컨대 정상적 및 비정상적 혈관신생 및 혈관형성 둘 다의 조절 (문헌 [Ferrara and Davis-Smyth (1997) Endocrine Rev. 18:4-25; Ferrara (1999) J. Mol. Med. 77:527-543]); 배아 혈관형성 및 혈관신생의 촉진 (문헌 [Carmeliet et al. (1996) Nature 380:435-439; Ferrara et al. (1996) Nature 380:439-442]); 및 여성 생식기에서의 순환적 혈관 증식 및 골 성장 및 연골 형성 조절 (문헌 [Ferrara et al. (1998) Nature Med. 4:336-340; Gerber et al. (1999) Nature Med. 5:623-628])을 포함한다. 혈관신생 및 혈관형성에 있어서 혈관신생 인자인 것 뿐만 아니라, 다면발현성 성장 인자로서 VEGF는 다른 생리적 과정에서 다양한 생물학적 효과, 예컨대 내피 세포 생존, 혈관 투과성 및 혈관확장, 단핵구 화학주성 및 칼슘 유입을 나타낸다 (문헌 [Ferrara and Davis-Smyth (1997), 상기 문헌] 및 [Cebe-Suarez et al. Cell. Mol. Life Sci. 63:601-615 (2006)]). 또한, 최근 연구는 몇가지 비-내피 세포형, 예컨대 망막 색소 상피 세포, 췌장관 세포 및 슈반 세포에 대한 VEGF의 분열촉진 효과를 보고하였다. 문헌 [Guerrin et al. (1995) J. Cell Physiol. 164:385-394; Oberg-Welsh et al. (1997) Mol. Cell. Endocrinol. 126:125-132; Sondell et al. (1999) J. Neurosci. 19:5731-5740].

"혈관신생 억제제" 또는 "항혈관신생제"는 혈관신생, 혈관형성, 또는 바람직하지 못한 혈관 투과성을 직접적으로 또는 간접적으로 억제하는, 저분자량 물질, 폴리뉴클레오티드, 폴리펩티드, 단리된 단백질, 재조합 단백질, 항체, 또는 그의 접합체 또는 융합 단백질을 지칭한다. 항혈관신생제는 혈관신생 인자 또는 그의 수용체에 결합하고 이것의 혈관신생 활성을 차단하는 작용제를 포함한다는 것을 이해해야 한다. 예를 들어, 항혈관신생제는 상기 정의된 바와 같은 혈관신생제에 대한 항체 또는 기타 길항제, 예를 들어 VEGF-A 또는 VEGF-A 수용체 (예를 들어, KDR 수용체 또는 Flt-1 수용체)에 대한 항체, 항-PDGFR 억제제, 예컨대 글리벡(GLEEVEC)^® (이마티닙 메실레이트)이다. 항혈관신생제는 또한 천연 혈관신생 억제제, 예를 들어 안지오스타틴, 엔도스타틴 등을 포함한다. 예를 들어, 문헌 [Klagsbrun and D'Amore, Annu. Rev. Physiol., 53:217-39 (1991); Streit and Detmar, Oncogene, 22:3172-3179 (2003)] (예를 들어, 악성 흑색종에서의 항혈관신생 요법을 열거한 표 3); [Ferrara & Alitalo, Nature Medicine 5:1359-1364 (1999); Tonini et al., Oncogene, 22:6549-6556 (2003)] (예를 들어, 공지된 항혈관신생 인자를 열거한 표 2); 및 [Sato. Int. J. Clin. Oncol., 8:200-206 (2003)] (예를 들어, 임상 시험에 사용된 항혈관신생제를 열거한 표 1)을 참조한다.

"VEGF 길항제"란 하나 이상의 VEGF 수용체에 대한 결합을 포함하는 VEGF 활성을 중화시키거나, 차단하거나, 억제하거나, 폐지하거나, 감소시키거나 또는 방해할 수 있는 분자 (펩티딜 또는 비-펩티딜)를 가리킨다. 특정 실시양태에서, VEGF 길항제는 VEGF의 발현 수준 또는 생물학적 활성을 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 초과만큼 감소시키거나 또는 억제한다. 한 실시양태에서, VEGF 길항제에 의해 억제된 VEGF는 VEGF(8-109), VEGF (1-109) 또는 VEGF₁₆₅이다. 본 발명의 방법에서 유용한 VEGF 길항제는 VEGF에 특이적으로 결합하는 펩티딜 또는 비-펩티딜 화합물, 예컨대 항-VEGF 항체 및 그의 항원-결합 단편, 폴리펩티드 또는 VEGF에 특이적으로 결합하는 그의 단편, 및 VEGF에 특이적으로 결합하여 하나 이상의 수용체에 대한 결합을 격리시키는 수용체 분자 및 유도체 (예를 들어, 가용성 VEGF 수용체 단백질, 또는 그의 VEGF 결합 단편, 또는 키메라 VEGF 수용체 단백질); 적어도 VEGF 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 분자의 단편에 상보적인 안티센스 핵염기 올리고머; 적어도 VEGF 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 분자의 단편에 상보적인 소형 RNA; VEGF를 표적으로 하는 리보자임; VEGF에 대한 펩티바디; 및 VEGF 압타머를 포함한다.

"항-VEGF 항체"는 VEGF에 충분한 친화도 및 특이성으로 결합하는 항체이다. 선택된 항체는 정상적으로, VEGF에 대한 충분히 강력한 결합 친화도를 가질 것이고, 예를 들어 이러한 항체는 100 nM 내지 1 pM의 K_d 값으로 hVEGF와 결합할 수 있다. 항체 친화도는 예를 들어 표면 플라즈몬 공명 기반 검정 (예컨대 PCT 출원 공보 번호 WO2005/012359에 기재된 바와 같은 비아코어 검정); 효소-연결된 면역흡착 검정 (ELISA); 및 경쟁 검정 (예를 들어, RIA)에 의해 결정할 수 있다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 항-VEGF 항체는 VEGF 활성이 관여하는 질환 또는 상태를 표적화하고 이를 방해하는데 있어 치료제로서 사용될 수 있다. 또한, 상기 항체를 대상으로 하여 다른 생물학적 활성 검정을 수행하여, 예를 들어 그의 치료제로서의 유효성을 평가할 수 있다. 이러한 검정은 당업계에 공지되어 있고, 표적 항원 및 항체의 의도된 용도에 따라 달라진다. 그 예는 HUVEC 억제 검정 (이하의 실시예에 기재된 바와 같음); 종양 세포 성장 억제 검정 (예를 들어, WO 89/06692에 기재된 바와 같음); 항체-의존성 세포성 세포독성 (ADCC) 및 보체 매개된 세포독성 (CDC) 검정 (미국 특허 5,500,362); 및 효능작용 활성 또는 조혈 검정 (WO 95/27062 참조)을 포함한다. 항-VEGF 항체는 통상적으로 다른 VEGF 동족체, 예컨대 VEGF-B 또는 VEGF-C에도 결합하지 않을 것이고, 다른 성장 인자, 예컨대 PlGF, PDGF 또는 bFGF에도 결합하지 않을 것이다.

특정 실시양태에서, 항-VEGF 항체는 하이브리도마 ATCC HB 10709에 의해 생산된 모노클로날 항-VEGF 항체 A4.6.1과 동일한 에피토프에 결합하는 모노클로날 항체; 문헌 [Presta et al. Cancer Res. 57:4593-4599 (1997)]에 따라 생성된 재조합 인간화 항-VEGF 모노클로날 항체를 포함한다. 한 실시양태에서, 항-VEGF 항체는 "rhuMAb VEGF" 또는 "아바스틴^®"이라고도 공지된 "베바시주맙 (BV)"이다. 이것은 돌연변이된 인간 IgG1 프레임워크 영역, 및 인간 VEGF의 그의 수용체에 대한 결합을 차단하는 뮤린 항-hVEGF 모노클로날 항체 A.4.6.1로부터의 항원-결합 상보성-결정 영역을 포함한다. 베바시주맙의 아미노산 서열의 대략 93% (대다수의 프레임워크 영역 포함)는 인간 IgG1로부터 유래되고, 서열의 약 7%는 뮤린 항체 A4.6.1로부터 유래된다. 베바시주맙은 분자량이 약 149,000 달톤이고 글리코실화된다. 베바시주맙은 전이성 직장결장암(CRC) 및 비소세포 폐암(NSCLC)을 치료하기 위해 화학치료 요법과 조합된 용도로 FDA에 의해 승인되었다. 문헌 [Hurwitz et al., N. Engl. J. Med. 350:2335-42 (2004); Sandler et al., N. Engl. J. Med. 355:2542-50 (2006)]. 최근, 베바시주맙은 다양한 암 징후를 치료하기 위해 많은 진행중인 임상 시험에서 연구되고 있다. 문헌 [Kerbel, J. Clin. Oncol. 19:45S-51S (2001); De Vore et al., Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. 19:485a. (2000); Hurwitz et al., Clin. Colorectal Cancer 6:66-69 (2006); Johnson et al., Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. 20:315a (2001); Kabbinavar et al. J. Clin. Oncol. 21:60-65 (2003); Miller et al., Breast Can. Res. Treat. 94:Suppl 1:S6 (2005)].

베바시주맙 및 다른 인간화 항-VEGF 항체는 2005년 2월 26일에 허여된 미국 특허 번호 6,884,879에 추가로 기재되어 있다. 추가의 항체는 PCT 공보 번호 WO2005/012359, PCT 공보 번호 WO2005/044853, 및 미국 특허 출원 60/991,302에 기재되어 있는 바와 같은 G6 또는 B20 시리즈 항체 (예를 들어, G6-31, B20-4.1)를 포함하며, 이들 특허 출원의 내용은 명백하게 본원에 참고로 포함된다. 추가의 항체에 대해 미국 특허 번호 7,060,269, 6,582,959, 6,703,020; 6,054,297; WO98/45332; WO 96/30046; WO94/10202; EP 0666868B1; 미국 특허 출원 공보 번호 2006009360, 20050186208, 20030206899, 20030190317, 20030203409, 및 20050112126; 및 문헌 [Popkov et al., Journal of Immunological Methods 288:149-164 (2004)]을 참조한다. 다른 항체는 잔기 F17, M18, D19, Y21, Y25, Q89, I91, K101, E103 및 C104를 포함하거나, 또는 대안적으로 잔기 F17, Y21, Q22, Y25, D63, I83 및 Q89를 포함하는 인간 VEGF 상의 기능적 에피토프에 결합하는 것을 포함한다.

본 발명에 따른 "G6 시리즈 항체"는 PCT 공보 번호 WO2005/012359 (그의 전체 개시내용은 명백하게 본원에 참고로 포함됨)의 도 7, 24-26 및 34-35 중 어느 하나에 따른 G6 항체 또는 G6-유래 항체의 서열로부터 유래된 항-VEGF 항체이다. 또한, PCT 공보 번호 WO2005/044853을 참조하고, 그의 전체 개시내용은 명백하게 본원에 참고로 포함된다. 한 실시양태에서, G6 시리즈 항체는 잔기 F17, Y21, Q22, Y25, D63, I83 및 Q89를 포함하는 인간 VEGF 상의 기능적 에피토프에 결합한다.

본 발명에 따른 "B20 시리즈 항체"는 PCT 공보 번호 WO2005/012359 (그의 전체 개시내용은 명백하게 본원에 참고로 포함됨)의 도 27-29 중 어느 하나에 따른 B20 항체 또는 B20-유래 항체의 서열로부터 유래된 항-VEGF 항체이다. 또한, PCT 공보 번호 WO2005/044853, 및 미국 특허 출원 60/991,302 (이들 특허 출원의 내용은 명백하게 본원에 참고로 포함됨)를 참조한다. 한 실시양태에서, B20 시리즈 항체는 잔기 F17, M18, D19, Y21, Y25, Q89, I91, K101, E103 및 C104를 포함하는 인간 VEGF 상의 기능적 에피토프에 결합한다.

본 발명에 따른 "기능적 에피토프"는 항체의 결합에 강력하게 기여하는 항원의 아미노산 잔기를 지칭한다. 이와 같이 강력하게 기여하는 항원 잔기 중 어느 하나를 돌연변이시키면 (예를 들어, 알라닌에 의한 야생형 VEGF의 돌연변이 또는 상동체 돌연변이) 항체의 결합이 파괴되어 항체의 상대적인 친화도 비 (IC50 돌연변이체 VEGF/IC50 야생형 VEGF)는 5를 초과할 것이다 (WO2005/012359의 실시예 2 참조). 한 실시양태에서, 상대적 친화도 비는 용액 결합 파지 디스플레이 ELISA로 결정된다. 간략하게, 96웰 맥시소르프(Maxisorp) 이뮤노플레이트 (눈크(NUNC))를 4℃에서 PBS 중 2 ug/ml 농도의 Fab 형태의 시험할 항체로 밤새 코팅한 후에 2시간 동안 실온에서 PBS, 0.5% BSA 및 0.05% 트윈20 (PBT)으로 차단한다. PBT 중 hVEGF 알라닌 점 돌연변이체 (잔기 8-109 형태) 또는 야생형 hVEGF (8-109)를 디스플레이하는 파지의 연속 희석액을 우선 실온에서 15분 동안 Fab-코팅된 플레이트에서 인큐베이션하고, 상기 플레이트를 PBS, 0.05% 트윈20 (PBST)으로 세척하였다. 결합된 파지는 PBT 중에서 1:5000으로 희석된 항-M13 모노클로날 항체 양고추냉이 퍼옥시다제 (아머샴 파마시아(Amersham Pharmacia)) 접합체로 검출하고, 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘 (TMB, 키르케가드 ＆ 페리 랩스(Kirkegaard ＆ Perry Labs), 메릴랜드주 게이더스버그 소재) 기질로 대략 5분 동안 발색시키며, 1.0 M H3PO4로 켄칭시킨 후에 450 nm에서 분광광도계로 판독한다. IC50 값의 비 (IC50,ala/IC50,wt)는 결합 친화도에 있어서의 감소 배수 (상대적 결합 친화도)를 나타낸다.

"면역접합체" (교환가능하게 "항체-약물 접합체" 또는 "ADC"로 지칭됨)는 하나 이상의 세포독성제, 예컨대 화학요법제, 약물, 성장 억제제, 독소 (예를 들어, 단백질 독소, 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 기원의 효소적으로 활성인 독소, 또는 이들의 단편), 또는 방사성 동위원소 (즉, 방사성접합체)에 접합된 항체를 의미한다.

본 명세서 및 특허청구범위에 걸쳐서, 이뮤노글로불린 중쇄 내의 잔기에 관한 넘버링은 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)] (명백하게 본원에 참고로 포함됨)에서와 같은 EU 인덱스의 넘버링이다. "카바트에서와 같은 EU 인덱스"는 인간 IgG1 EU 항체의 잔기 넘버링을 나타낸다.

용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되고, 모노클로날 항체 (전장 모노클로날 항체 포함), 폴리클로날 항체, 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체), 1가 항체, 다가 항체, 및 항체 단편을 특히 포함하며, 단 이들은 원하는 생물학적 활성을 나타낸다.

"항체 단편"은 무손상 항체의 일부만을 포함하며, 여기서 상기 일부는 바람직하게는, 무손상 항체 내에 존재하는 경우에 그 일부와 통상적으로 연관된 기능 중 적어도 하나, 바람직하게는 대부분 또는 전부를 보유한다. 한 실시양태에서, 항체 단편은 무손상 항체의 항원 결합 부위를 포함하기 때문에 항원과 결합하는 능력을 보유한다. 또 다른 실시양태에서, 항체 단편, 예를 들어 Fc 영역을 포함하는 항체 단편은, 무손상 항체 내에 존재하는 경우에 Fc 영역과 통상적으로 연관된 생물학적 기능들, 예를 들어 FcRn 결합, 항체 반감기 조정, ADCC 기능 및 보체 결합 중의 적어도 하나의 기능을 보유하고 있다. 한 실시양태에서, 항체 단편은 무손상 항체와 실질적으로 유사한 생체내 반감기를 갖는 1가 항체이다. 예를 들어, 이러한 항체 단편은 단편에 생체내 안정성을 부여해 줄 수 있는 Fc 서열과 연결된 항원 결합 아암을 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 본 발명의 항체는 WO 2005/063816에 기재된 바와 같은 1-아암 항체이다. 한 실시양태에서, 1-아암 항체는 WO2005/063816에 기재된 바와 같은 "노브" 및 "홀"을 구성하는 Fc 돌연변이를 포함한다. 예를 들어, 홀 돌연변이는 Fc 폴리펩티드의 T366A, L368A 및/또는 Y407V 중 하나 이상일 수 있고, 노브 돌연변이는 T366W일 수 있다.

"차단" 항체 또는 항체 "길항제"는 이것이 결합하는 항원의 생물학적 활성을 억제하거나 또는 감소시키는 것이다. 일부 실시양태에서, 차단 항체 또는 길항제 항체는 항원의 생물학적 활성을 완전히 억제한다.

달리 나타내지 않는 한, 표현 "다가 항체"는 본 명세서 전반에 걸쳐 3개 이상의 항원 결합 부위를 포함하는 항체를 지칭하기 위해 사용된다. 다가 항체를 바람직하게는 3개 이상의 항원 결합 부위를 갖도록 조작하고, 이것은 일반적으로 천연 서열 IgM 또는 IgA 항체가 아니다.

"Fv" 단편은 완전한 항원 인식 및 결합 부위를 함유하는 항체 단편이다. 이러한 영역은 1개의 중쇄 가변 도메인 및 1개의 경쇄 가변 도메인이 단단하게 회합된 이량체로 이루어지며, 이러한 연결은 예를 들어 scFv에서 특성상 공유 결합일 수 있다. 이러한 유형에서, 각각의 가변 도메인의 3개의 CDR이 상호작용하여 V_H-V_L 이량체 표면의 항원 결합 부위를 규정한다. 전체적으로, 6개의 CDR 또는 이것의 하위세트가 항체에 항원 결합 특이성을 부여한다. 그러나, 단일 가변 도메인 (또는 항원에 특이적인 3개의 CDR만을 포함하는 Fv의 절반)일지라도 일반적으로 전체 결합 부위보다 친화도가 낮긴 하지만 항원을 인식하고 결합하는 능력을 갖는다.

본원에 사용된 "항체 가변 도메인"은 상보성 결정 영역 (CDR; 즉, CDR1, CDR2 및 CDR3) 및 프레임워크 영역 (FR)의 아미노산 서열을 포함하는 항체 분자의 경쇄 및 중쇄의 일부를 지칭한다. V_H는 중쇄의 가변 도메인을 지칭한다. V_L은 경쇄의 가변 도메인을 지칭한다. 본 발명에서 사용되는 방법에 따라, CDR 및 FR에 대해 지정된 아미노산 위치는 카바트 (문헌 [Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1987 and 1991)])에 따라 규정될 수 있다. 항체 또는 항원 결합 단편의 아미노산 넘버링 역시 카바트에 따른다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "상보성 결정 영역" (CDR; 즉, CDR1, CDR2 및 CDR3)은 항원 결합에 필요한 항체 가변 도메인의 아미노산 잔기를 지칭한다. 각각의 가변 도메인은 전형적으로 CDR1, CDR2 및 CDR3으로 확인되는 3개의 CDR 영역을 갖는다. 각각의 상보성 결정 영역은 카바트에 의해 규정된 바와 같은 "상보성 결정 영역"으로부터의 아미노산 잔기 (즉, 대략 경쇄 가변 도메인 내의 잔기 24-34 (L1), 50-56 (L2) 및 89-97 (L3), 및 중쇄 가변 도메인 내의 잔기 31-35 (H1), 50-65 (H2) 및 95-102 (H3); 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)]) 및/또는 "초가변 루프"로부터의 아미노산 잔기 (즉, 대략 경쇄 가변 도메인 내의 잔기 26-32 (L1), 50-52 (L2) 및 91-96 (L3), 및 중쇄 가변 도메인 내의 잔기 26-32 (H1), 53-55 (H2) 및 96-101 (H3); 문헌 [Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)])를 포함할 수 있다. 일부 경우에, 상보성 결정 영역은 카바트에 따라 규정된 CDR 영역 및 초가변 루프 둘 다로부터의 아미노산을 포함할 수 있다. 예를 들어, 항체 4D5의 중쇄의 CDRH1은 아미노산 26 내지 35를 포함한다.

"프레임워크 영역" (이하, FR)은 CDR 잔기 이외의 가변 도메인 잔기이다. 각각의 가변 도메인은 전형적으로 FR1, FR2, FR3 및 FR4로 확인되는 4개의 FR을 갖는다. CDR이 카바트에 따라 정의되는 경우, 경쇄 FR 잔기는 대략 잔기 1-23 (LCFR1), 35-49 (LCFR2), 57-88 (LCFR3) 및 98-107 (LCFR4)에 위치하고, 중쇄 FR 잔기는 대략 중쇄 잔기에서 잔기 1-30 (HCFR1), 36-49 (HCFR2), 66-94 (HCFR3) 및 103-113 (HCFR4)에 위치한다. CDR이 초가변 루프의 아미노산 잔기를 포함하는 경우, 경쇄 FR 잔기는 대략 경쇄에서 잔기 1-25 (LCFR1), 33-49 (LCFR2), 53-90 (LCFR3) 및 97-107 (LCFR4)에 위치하고, 중쇄 FR 잔기는 대략 중쇄 잔기에서 잔기 1-25 (HCFR1), 33-52 (HCFR2), 56-95 (HCFR3) 및 102-113 (HCFR4)에 위치한다. 일부 경우에, CDR이 카바트에 의해 정의된 바와 같은 CDR의 아미노산과 초가변 루프의 아미노산 둘 다를 포함하는 경우에는 FR 잔기가 그에 따라 조정될 것이다. 예를 들어, CDRH1이 아미노산 H26-H35를 포함하는 경우, 중쇄 FR1 잔기는 위치 1-25에 존재하고 FR2 잔기는 위치 36-49에 존재한다.

"Fab" 단편은 경쇄의 가변 및 불변 도메인 및 중쇄의 가변 도메인 및 제1 불변 도메인 (CH1)을 함유한다. F(ab')₂ 항체 단편은 Fab 단편의 쌍 사이에서 이들의 카르복시 말단 근처에서 힌지 시스테인에 의해 일반적으로 공유결합에 의해 연결된 Fab 단편의 쌍을 포함한다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링 또한 당업계에 공지되어 있다.

본원에 사용된 바와 같은 어구 "항원 결합 아암"은 관심 표적 분자에 특이적으로 결합하는 능력을 갖는 본 발명의 항체 단편의 구성 부분을 지칭한다. 일반적으로 및 바람직하게는, 항원 결합 아암은 이뮤노글로불린 폴리펩티드 서열, 예를 들어 CDR 및/또는 이뮤노글로불린 경쇄 및 중쇄의 가변 도메인 서열의 복합체이다.

본원에 사용된 바와 같은 어구 "N-말단 절단된 중쇄"는 전장 이뮤노글로불린 중쇄의 전부가 아닌 부분을 포함하는 폴리펩티드로서, 결실된 부분이 통상적으로 중쇄의 N 말단 영역에 위치하는 것인 폴리펩티드를 지칭한다. 결실된 부분은 가변 도메인, CH1, 및 힌지 서열의 일부 또는 전부를 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 일반적으로, 야생형 힌지 서열이 존재하지 않는 경우에, N-말단 절단된 중쇄에서 나머지 불변 도메인(들)은 다른 Fc 서열 (즉, 본원에 기재된 바와 같은 "제1" Fc 폴리펩티드)에 연결될 수 있는 성분을 포함할 것이다. 예를 들어, 상기 성분은 디술피드 연결을 형성할 수 있는 변형된 잔기 또는 첨가된 시스테인 잔기일 수 있다.

본원에 사용된 용어 "Fc 영역"은 이뮤노글로불린 중쇄의 C-말단 폴리펩티드 서열을 포함하는 이량체 복합체를 일반적으로 나타내고, 여기서 C-말단 폴리펩티드 서열은 무손상 항체의 파파인 소화에 의해 수득가능한 것이다. Fc 영역은 천연 또는 변이체 Fc 서열을 포함할 수 있다. 이뮤노글로불린 중쇄의 Fc 서열의 경계는 달라질 수 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 서열은 통상적으로 약 위치 Cys226의 아미노산 잔기로부터 또는 약 위치 Pro230의 아미노산 잔기로부터 Fc 서열의 카르복실 말단까지 이르는 스트레치로 정의된다. Fc 서열의 C-말단 리신 (EU 넘버링 시스템에 따른 잔기 447)은 예를 들어 항체의 정제 동안, 또는 항체를 코딩하는 핵산의 재조합 조작에 의해 제거될 수 있다. 이뮤노글로불린의 Fc 서열은 일반적으로 CH2 도메인 및 CH3 도메인의 2개의 불변 도메인을 포함하고, 임의로 CH4 도메인을 포함한다. 본원에서의 "Fc 폴리펩티드"는 Fc 영역을 구성하는 폴리펩티드들 중 하나를 의미한다. Fc 폴리펩티드는 임의의 적합한 이뮤노글로불린, 예컨대 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 하위유형, IgA, IgE, IgD 또는 IgM으로부터 수득될 수 있다. 일부 실시양태에서, Fc 폴리펩티드는 야생형 힌지 서열의 일부 또는 모두를 (일반적으로 그의 N 말단에서) 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 폴리펩티드는 기능성 또는 야생형 힌지 서열을 포함하지 않는다.

"Fc 수용체" 또는 "FcR"은 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 기재하기 위해 사용된다. 예를 들어, FcR은 천연 서열 인간 FcR일 수 있다. 일반적으로, FcR은 IgG 항체에 결합하는 수용체 (감마 수용체)이고, FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII 서브클래스의 수용체를 포함하며, 이들은 이들 수용체의 대립유전자 변이체 및 대안적으로 스플라이싱된 형태를 포함한다. FcγRII 수용체는 FcγRIIA ("활성화 수용체") 및 FcγRIIB ("억제 수용체")를 포함하는데, 이들은 그의 세포질 도메인에서 주로 차이가 나는 유사한 아미노산 서열을 갖는다. 다른 이소형의 이뮤노글로불린이 특정 FcR에 의해 결합될 수 있다 (예를 들어, [Janeway et al., Immuno Biology: the immune system in health and disease, (Elsevier Science Ltd., NY) (4th ed., 1999)] 참조). 활성화 수용체 FcγRIIA는 그의 세포질 도메인에 면역수용체 티로신-기재의 활성화 모티프 (ITAM)를 함유한다. 억제 수용체 FcγRIIB는 그의 세포질 도메인 내에 면역수용체 티로신-기재의 억제 모티프 (ITIM)를 함유한다 (문헌 [Daeeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997)]에서 검토됨). FcR은 문헌 [Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991); Capel et al., Immunomethods 4:25-34 (1994); 및 de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995)]에서 검토된다. 추후로 확인될 것을 포함하여 다른 FcR이 본원의 용어 "FcR"에 포함된다. 이 용어는 모체 IgG를 태아에게 전달하는 것을 담당하는 신생아 수용체 FcRn을 또한 포함한다 (문헌 [Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976); 및 Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)]).

본원에 사용된 바와 같은 "힌지 영역", "힌지 서열", 및 그의 변이체는 당업계에 공지된 의미를 포함하고, 이는 예를 들어 문헌 [Janeway et al., Immuno Biology: the immune system in health and disease, (Elsevier Science Ltd., NY) (4th ed., 1999); Bloom et al., Protein Science (1997), 6:407-415; Humphreys et al., J. Immunol. Methods (1997), 209:193-202]에 설명되어 있다.

"단일-쇄 Fv" 또는 "scFv" 항체 단편은 단일 폴리펩티드 쇄 내에 존재하는, 항체의 V_H 및 V_L 도메인을 포함한다. 일반적으로, Fv 폴리펩티드는 scFv가 항원 결합을 위한 바람직한 구조를 형성할 수 있도록 하는, V_H 및 V_L 도메인 사이의 폴리펩티드 링커를 추가로 포함한다. scFv의 검토를 위해 문헌 [Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, Vol 113, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)]을 참조한다.

용어 "디아바디"는 동일 폴리펩티드 쇄 (V_H 및 V_L)로 경쇄 가변 도메인 (V_L)에 연결된 중쇄 가변 도메인 (V_H)을 포함하는, 2개의 항원-결합 부위를 갖는 소형 항체 단편을 지칭한다. 동일 쇄 상의 2개의 도메인 사이에서 쌍 형성을 허용하기에는 지나치게 짧은 링커를 사용함으로써, 상기 도메인은 또 다른 쇄의 상보적 도메인과 쌍을 형성하게 되어 2개의 항원-결합 부위를 생성하게 된다. 디아바디는 예를 들어 EP 404,097; WO 93/11161; 및 문헌 [Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)]에 보다 상세하게 기재되어 있다.

표현 "선형 항체"는 문헌 [Zapata et al., Protein Eng., 8(10):1057-1062 (1995)]에 기재된 항체를 지칭한다. 간략하게, 이들 항체는 상보적 경쇄 폴리펩티드와 함께 한 쌍의 항원 결합 영역을 형성하는 한 쌍의 병렬식 Fd 절편 (V_H-C_H1-V_H-C_H1)을 포함한다. 선형 항체는 이중특이적 또는 단일특이적일 수 있다.

수식어구 "모노클로날"은 항체의 특성을 실질적으로 동종인 항체 집단으로부터 수득된 것으로 나타내며, 임의의 특정한 방법을 통한 항체 생산이 필요하다는 것으로 해석되어서는 안된다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용될 모노클로날 항체는 예를 들어, 하이브리도마 방법 (예를 들어, 문헌 [Kohler and Milstein, Nature, 256:495-97 (1975); Hongo et al., Hybridoma, 14 (3): 253-260 (1995), Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988); Hammerling et al., in: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981)]), 재조합 DNA 방법 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,816,567 참조), 파지-디스플레이 기술 (예를 들어, 문헌 [Clackson et al., Nature, 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004); 및 Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004)] 참조), 및 인간 이뮤노글로불린 서열을 코딩하는 인간 이뮤노글로불린 로커스 또는 유전자의 일부 또는 전부를 갖는 동물에서 인간 또는 인간-유사 항체를 생산하는 기술 (예를 들어, WO 1998/24893; WO 1996/34096; WO 1996/33735; WO 1991/10741; 문헌 [Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 2551 (1993); Jakobovits et al., Nature 362: 255-258 (1993); Bruggemann et al., Year in Immunol. 7:33 (1993)]; 미국 특허 번호 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 및 5,661,016; [Marks et al., Bio/Technology 10: 779-783 (1992); Lonberg et al., Nature 368: 856-859 (1994); Morrison, Nature 368: 812-813 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnol. 14: 845-851 (1996); Neuberger, Nature Biotechnol. 14: 826 (1996); 및 Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93 (1995)] 참조)을 포함하는 다양한 기술에 의해 제조할 수 있다.

본원에서의 모노클로날 항체는 구체적으로 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 종으로부터 유래되거나 특정한 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성이고, 쇄(들)의 나머지 부분은 또 다른 종으로부터 유래되거나 또 다른 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성인 "키메라" 항체, 뿐만 아니라 바람직한 생물학적 활성을 나타내는 한은 이러한 항체의 단편을 포함한다 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,816,567; 문헌 [Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855 (1984)] 참조). 키메라 항체는 항체의 항원-결합 영역이 예를 들어 마카쿠 원숭이를 관심 항원으로 면역화시켜 생산된 항체로부터 유래된 프리마티즈드(PRIMATIZED)^® 항체를 포함한다.

"인간화" 형태의 비인간 (예를 들어, 뮤린) 항체는 비인간 이뮤노글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 항체이다. 대다수의 경우, 인간화 항체는 수용자의 초가변 영역의 잔기가 원하는 특이성, 친화도 및 능력을 갖는 마우스, 래트, 토끼 또는 비인간 영장류와 같은 비인간 종 (공여자 항체)의 초가변 영역의 잔기로 대체된 인간 이뮤노글로불린 (수용자 항체)이다. 일부 경우에, 인간 이뮤노글로불린의 Fv 프레임워크 영역 (FR) 잔기는 상응하는 비인간 잔기에 의해 치환된다. 추가로, 인간화 항체는 수용자 항체 또는 공여자 항체에서는 발견되지 않는 잔기를 포함할 수도 있다. 이러한 변형은 항체 성능이 추가로 개선되게 한다. 일반적으로, 인간화 항체는 적어도 1개, 전형적으로는 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이고, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 초가변 루프는 비인간 이뮤노글로불린의 것에 상응하고 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역은 인간 이뮤노글로불린 서열의 것이다. 임의로, 인간화 항체는 이뮤노글로불린 불변 영역 (Fc)의 적어도 일부, 전형적으로는 인간 이뮤노글로불린의 것을 또한 포함할 것이다. 보다 상세한 내용은 문헌 [Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); 및 Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)]을 참조한다.

"인간 항체"는 인간에 의해 생산된 항체의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 갖고/거나 본원에 개시된 바와 같은 인간 항체 제조 기술 중 임의의 것을 이용하여 제조된 것이다. 인간 항체의 이러한 정의에서 비인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화 항체는 명확하게 제외된다. 인간 항체는 다양한 당업계의 공지된 기술을 이용하여 생산될 수 있다. 한 실시양태에서, 인간 항체는 파지 라이브러리로부터 선택되는데, 이러한 파지 라이브러리는 인간 항체를 발현한다 (문헌 [Vaughan et al. Nature Biotechnology 14:309-314 (1996): Sheets et al. Proc. Natl. Acad. Sci. 95:6157-6162 (1998)); Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991)]). 인간 항체는 인간 이뮤노글로불린 로커스를 내인성 이뮤노글로불린 유전자가 부분적으로 또는 완전히 불활성화된 트랜스제닉 동물, 예를 들어 마우스에 도입시켜 제조될 수도 있다. 시험접종시에, 인간 항체 생산이 관찰되고, 이것은 유전자 재배열, 어셈블리 및 항체 레퍼토리를 비롯한 모든 면에서 인간에서 관찰되는 것과 매우 유사하다. 이러한 접근법은, 예를 들어 미국 특허 번호 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 5,661,016, 및 하기 과학 문헌 [Marks et al., Bio/Technology 10: 779-783 (1992); Lonberg et al., Nature 368: 856-859 (1994); Morrison, Nature 368:812-13 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnology 14: 845-51 (1996); Neuberger, Nature Biotechnology 14: 826 (1996); Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13:65-93 (1995)]에 기재되어 있다. 대안적으로, 인간 항체는 표적 항원에 대해 지시된 항체를 생성하는 인간 B 림프구를 불멸화시킴으로써 제조될 수 있다 (이러한 B 림프구는 개체로부터 회수될 수 있거나, 또는 시험관내 면역화되었을 수 있음). 예를 들어, 문헌 [Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boerner et al., J. Immunol., 147 (1):86-95 (1991)]; 및 미국 특허 번호 5,750,373을 참조한다.

"네이키드 항체"는 이종 분자, 예를 들어 세포독성 모이어티 또는 방사성표지에 접합되지 않은 항체이다.

"친화도 성숙" 항체는 변경(들)을 갖지 않는 모 항체와 비교하여 항원에 대한 항체의 친화도를 개선시키는, 1개 이상의 CDR에 1개 이상의 변경을 갖는 항체이다. 바람직한 친화도 성숙 항체는 표적 항원에 대해 나노몰 또는 심지어는 피코몰의 친화도를 가질 것이다. 친화도 성숙 항체는 당업계에 공지된 절차에 의해 제조된다. 문헌 [Marks et al. Bio/Technology 10:779-783 (1992)]에서는 VH 및 VL 도메인 셔플링에 의한 친화도 성숙을 설명하고 있다. CDR 및/또는 프레임워크 잔기의 무작위 돌연변이유발이 문헌 [Barbas et al. Proc Nat. Acad. Sci, USA 91:3809-3813 (1994); Schier et al. Gene 169:147-155 (1995); Yelton et al. J. Immunol. 155:1994-2004 (1995); Jackson et al., J. Immunol. 154(7):3310-9 (1995); 및 Hawkins et al., J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992)]에 기재되어 있다.

지정된 항체의 "생물학적 특징"을 갖는 항체는 이러한 항체를 동일 항원에 결합하는 다른 항체와 구별시켜 주는, 항체의 하나 이상의 생물학적 특징을 보유하는 항체이다.

관심 항체가 결합하는 항원 상의 에피토프에 결합하는 항체를 스크리닝하기 위해, 통상의 교차-차단 검정, 예컨대 문헌 [Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Ed Harlow and David Lane (1988)]에 기재된 검정을 수행할 수 있다.

항체의 "기능적 항원 결합 부위"는 표적 항원과 결합할 수 있는 부위이다. 항원 결합 부위의 항원 결합 친화도는 항원 결합 부위가 유래된 모 항체만큼 강력할 필요는 없지만, 항원에 결합하는 능력은 항원에 대한 항체 결합을 평가하는 것과 관련하여 공지된 다양한 방법 중 어느 하나로 측정가능해야 한다. 추가로, 본원에서의 다가 항체의 항원 결합 부위 각각의 항원 결합 친화도가 정량적으로 동일할 필요는 없다. 본원에서의 다량체 항체의 경우, 기능적 항원 결합 부위의 수는 미국 특허 출원 공보 번호 20050186208의 실시예 2에 기재된 바와 같은 초원심분리 분석을 이용하여 평가할 수 있다. 이러한 분석 방법에 따라, 다량체 항체에 대한 표적 항원의 상이한 비를 조합하고, 기능적 결합 부위의 상이한 수를 추정하여 복합체의 평균 분자량을 계산한다. 이러한 이론적 값을 수득된 실제 실험 값과 비교하여 기능적 결합 부위의 수를 평가한다.

"종-의존성 항체"는 제1 포유동물 종으로부터의 항원에 대한 결합 친화도가 제2 포유동물 종으로부터의 상기 항원의 상동체에 대한 결합 친화도보다 더 강한 항체이다. 통상적으로, 종-의존성 항체는 인간 항원에 "특이적으로 결합" (즉, 결합 친화도 (K_d) 값이 약 1 x 10^-7 M 이하, 바람직하게는 약 1 x 10^-8 M 이하, 가장 바람직하게는 약 1 x 10^-9 M 이하)하지만, 제2의 비-인간 포유동물 종으로부터의 상기 항원의 상동체에 대한 결합 친화도는 인간 항원에 대한 결합 친화도보다 적어도 약 50배 또는 적어도 약 500배 또는 적어도 약 1000배 더 약하다. 종-의존성 항체는 상기 정의된 것과 같은 다양한 유형의 항체의 어느 것일 수 있다. 한 실시양태에서, 종-의존성 항체는 인간화 또는 인간 항체이다.

본원에 사용된 바와 같이, "항체 돌연변이체" 또는 "항체 변이체"는 종-의존성 항체의 1개 이상의 아미노산 잔기를 변형시킨, 종-의존성 항체의 아미노산 서열 변이체를 지칭한다. 이러한 돌연변이체는 종-의존성 항체와 반드시 100% 미만의 서열 동일성 또는 유사성을 가져야 한다. 한 실시양태에서, 항체 돌연변이체는 종-의존성 항체의 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인의 아미노산 서열과 적어도 75%, 보다 바람직하게는 적어도 80%, 보다 바람직하게는 적어도 85%, 보다 바람직하게는 적어도 90%, 가장 바람직하게는 적어도 95%의 아미노산 서열 동일성 또는 유사성을 갖는 아미노산 서열을 가질 것이다. 본원에서, 이러한 서열과 관련된 동일성 또는 유사성은 서열을 정렬하고 필요한 경우에는 최대 서열 동일성 백분율을 달성하기 위한 갭을 도입한 후에 종-의존성 항체 잔기와 동일 (즉, 동일 잔기) 또는 유사한 (즉, 공통적인 측쇄 특성을 기반으로 할 때 동일 군으로부터의 아미노산 잔기, 이하 참조) 후보 서열 내의 아미노산 잔기의 백분율로서 정의된다. N-말단, C-말단 또는 내부 확장, 결실, 또는 가변 도메인 바깥쪽에서의 항체 서열 내로의 삽입 중 어떤 것도 서열 동일성 또는 상동성에 영향을 미치는 것으로 해석되지 않아야 한다.

"키메라 VEGF 수용체 단백질"은 적어도 2종의 상이한 단백질로부터 유래된 아미노산 서열을 갖는 VEGF 수용체 분자인데, 이중 적어도 하나는 VEGF 수용체 단백질로서 존재한다. 특정 실시양태에서, 키메라 VEGF 수용체 단백질은 VEGF와 결합하여 그의 생물학적 활성을 억제할 수 있다.

"단리된" 폴리펩티드 또는 "단리된" 항체는 그의 천연 환경의 성분으로 확인되어 이러한 천연 환경으로부터 분리 및/또는 회수된 것이다. 그의 천연 환경의 오염 성분은 폴리펩티드 또는 항체에 대한 진단적 또는 치료적 용도를 방해할 수도 있는 물질인데, 이에는 효소, 호르몬, 및 다른 단백질성 또는 비-단백질성 용질이 포함될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 폴리펩티드 또는 항체는 (1) 로우리 방법에 의한 측정시, 폴리펩티드 또는 항체의 95 중량% 초과, 가장 바람직하게는, 99 중량% 초과 수준까지, (2) 스피닝 컵 서열분석기를 사용하여 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15개의 잔기를 얻기에 충분한 수준까지 또는 (3) 쿠마시 블루 또는 바람직하게는 은 염색을 사용하여 환원 또는 비환원 조건 하에 SDS-PAGE에 의해 균질해질 때까지 정제될 것이다. 단리된 폴리펩티드 또는 항체에는 재조합 세포 내의 계내 폴리펩티드 또는 항체가 포함되는데, 이는 폴리펩티드의 천연 환경의 하나 이상의 성분이 존재하지 않을 것이기 때문이다. 그러나, 통상적으로 단리된 폴리펩티드 또는 항체는 적어도 1회의 정제 단계에 의해 제조될 것이다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "바이오마커" 또는 "마커"는 일반적으로 조직 또는 세포 내에서 또는 그 상에서의 그의 발현 또는 분비가 공지의 방법 (또는 본원에 개시된 방법)에 의해 검출될 수 있고, 치료 요법에 대한 세포, 조직 또는 개체의 반응성을 예측하거나 또는 예측하기 위해 (또는 예측을 돕기 위해) 사용될 수 있는, 유전자, mRNA, 단백질, 탄수화물 구조, 또는 당지질을 포함하는 분자를 지칭한다. "환자 샘플"은 암 환자로부터 얻은 유사한 세포의 집합체를 의미한다. 조직 또는 세포 샘플의 공급원은 신선한, 동결 및/또는 보존된 장기 또는 조직 샘플 또는 생검 또는 흡인물로부터의 고형 조직; 혈액 또는 임의의 혈액 구성분; 체액, 예를 들어 뇌척수액, 양수, 복수, 또는 간질액; 대상체의 임신 또는 발생 중의 임의의 시점으로부터의 세포일 수 있다. 조직 샘플은 자연에서 조직과 자연적으로 서로 혼합되지 않는 화합물, 예를 들어 보존제, 항응고제, 완충제, 고정제, 영양소, 항생제 등을 함유할 수 있다. 본원에서 종양 샘플의 예는 종양으로부터 유래하거나 종양-유사 특성을 나타내는 종양 생검, 순환 종양 세포, 혈청 또는 혈장, 순환 혈장 단백질, 복수액, 일차 세포 배양액 또는 세포주 뿐만 아니라 보존된 종양 샘플, 예컨대 포르말린-고정된, 파라핀-포매된 종양 샘플 또는 동결된 종양 샘플을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 한 실시양태에서 샘플은 3N MBC 종양 샘플을 포함한다.

의약 및 유사한 용어를 사용한 치료에 대한 환자의 "유효 반응" 또는 환자의 "반응성"은 암 의약의 투여시에 암 (예를 들어, 3N MBC)에 걸릴 위험이 있어나 또는 암을 앓고 있는 환자에게 부여된 임상적 또는 치료적 이점을 지칭한다. 이러한 이점은 다음 중 임의의 하나 이상을 포함한다: 생존 (전체 생존 및 무진행 생존 포함) 연장; 객관적 반응 (완전한 반응 또는 부분적 반응 포함) 생성; 또는 암의 징후 또는 증상의 개선 등. 한 실시양태에서, 바이오마커 (예를 들어, IHC를 이용하여 결정된 바와 같은, 예를 들어 c-met 발현)는 동일한 수준으로 바이오마커를 발현하지 않는 환자와 비교하여 의약 (예를 들어, 항-c-met 항체)로 치료하였을 때 더 큰 무진행 생존 (PFS)을 가질 것으로 예상되는 환자를 확인하는데 사용된다. 한 실시양태에서, 바이오마커는 동일한 수준으로 바이오마커를 발현하지 않는 환자와 비교하여 의약으로 치료하였을 때 더 큰 전체 생존 (OS)을 가질 것으로 예상되는 환자를 확인하는데 사용된다. 본원의 바이오마커(들)의 존재는 이러한 유효 반응을 효과적으로 예측하거나 또는 높은 민감도로 예측한다.

"치료"는 치유적 치료, 및 예방적 또는 방지적 조치를 둘 다 나타낸다. 치료를 필요로 하는 대상에는 이미 양성, 전암성 또는 비전이성 종양이 있는 대상 뿐만 아니라 암의 발생 또는 재발을 방지시키고자 하는 대상이 포함된다.

용어 "치료 유효량"은 포유동물에서 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하기 위한 치료제의 양을 지칭한다. 암의 경우에, 치료제의 치료 유효량은 암 세포의 수를 감소시킬 수 있고/거나; 원발성 종양 크기를 감소시킬 수 있고/거나; 말초 기관 내로의 암 세포 침윤을 억제 (즉, 어느 정도까지 느리게 하고 바람직하게는 정지)할 수 있고/거나; 종양 전이를 억제 (즉, 어느 정도까지 느리게 하고 바람직하게는 정지)할 수 있고/거나; 종양 성장을 어느 정도까지 억제할 수 있고/거나; 장애와 연관된 하나 이상의 증상을 어느 정도까지 완화할 수 있다. 약물은, 존재하는 암 세포의 성장을 방지하고/거나 존재하는 암 세포를 사멸시킬 수 있는 정도까지 세포증식 억제성 및/또는 세포독성일 수 있다. 암 요법의 경우, 생체내 효능은 예를 들어 생존 기간, 질환 진행까지의 시간 (TTP), 반응률 (RR), 반응 지속기간, 및/또는 삶의 질을 평가하여 측정될 수 있다.

용어 "암" 및 "암성"은 조절되지 않는 세포 성장을 전형적인 특징으로 하는 포유동물에서의 생리학적 상태를 지칭하거나 기재한다. 이 정의에는 양성 및 악성 암이 포함된다. "조기 암" 또는 "조기 종양"이란 침습성 또는 전이성이 아닌 암, 또는 0기, I기 또는 II기 암으로서 분류되는 암을 의미한다. 암의 예는 암종, 림프종, 모세포종 (수모세포종 및 망막모세포종 포함), 육종 (지방육종 및 활막 세포 육종 포함), 신경내분비 종양 (카르시노이드 종양, 가스트린종, 및 도세포암 포함), 중피종, 슈반세포종 (청신경종 포함), 수막종, 선암종, 흑색종, 및 백혈병 또는 림프성 악성종양을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 상기 암의 보다 특정한 예는 편평세포암 (예를 들어, 상피 편평세포암), 소세포 폐암 (SCLC), 비소세포 폐암 (NSCLC), 폐의 선암종 및 폐의 편평세포 암종을 포함하는 폐암, 복막암, 간세포성 암, 위장암을 포함하는 위암, 췌장암, 교모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간세포암, 유방암 (전이성 유방암 포함), 결장암, 직장암, 결장직장암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 타액선 암종, 신장장 또는 신암, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 간 암종, 항문 암종, 음경 암종, 고환암, 식도암, 담도의 종양, 및 두경부암을 포함한다. 일부 실시양태에서, 암은 예를 들어 국부 재발성 질환이 치유 의도를 갖는 절제로 다룰 수 없는 경우에 국부 재발성 또는 전이성 질환을 갖는 유방의 임의의 조직학적으로 확인된 삼중-음성 (ER-, PR-, HER2-) 선암종을 포함하는, 삼중-음성 전이성 유방암이다.

"전이"는 암이 그의 원발성 부위로부터 신체 내 다른 부위로 확산되는 것을 의미한다. 암 세포는 원발성 종양으로부터 분리되어, 림프관 및 혈관 내로 침투하고, 혈류를 통하여 순환하여 신체 내 그 밖의 정상 조직의 원위 중심에서 성장 (전이)할 수 있다. 전이는 국부 또는 원위일 수 있다. 전이는 원발성 종양으로부터의 종양 세포 분리가 우발적으로 발생하고 혈류를 통해 이동하여 원위 부위에서 중단되는 순차적 과정이다. 이러한 새로운 부위에서 상기 세포는 혈액 공급을 확립시키고 성장하여 생명을 위협하는 종괴를 형성할 수 있다. 종양 세포 내에서의 자극성 및 억제성 분자 경로로 둘 다가 이러한 거동을 조절하고, 종양 세포와 원위 부위의 숙주 세포 사이의 상호작용이 또한 유의하다.

본원에서 "질환 진행까지의 시간" 또는 "TTP"는 초기 치료 (예를 들어, 항-c-met 항체, 예를 들어 MetMAb를 사용함) 시점으로부터 암이 진행되거나 악화될 때까지의, 일반적으로 주 또는 개월 단위로 측정된 시간을 지칭한다. 상기 진행은 숙련된 임상의가 평가할 수 있다. 삼중-음성 전이성 유방암의 경우에, 예를 들어, 진행은 RECIST로 평가할 수 있다.

"TTP 연장"은 비치료 환자와 비교하여 (즉, 항-c-met 항체, 예컨대 MetMAb로 치료받지 않은 환자와 비교하여) 및/또는 승인된 항종양제로 치료받은 환자와 비교하여 치료된 환자에서 질환 진행까지의 시간을 증가시키는 것을 의미한다.

"생존"은 살아남은 환자를 나타내고, 전체 생존 및 무진행 생존을 포함한다.

"전체 생존"은 진단 또는 치료 시점으로부터 1년, 5년 등과 같은 정해진 기간 동안 생존한 환자를 지칭한다.

"무진행 생존"은 암이 진행되거나 악화되지 않으면서 생존한 환자를 지칭한다.

"생존 연장"은 비치료 환자와 비교하여 (즉, 항-c-met 항체, 예컨대 MetMAb로 치료받지 않은 환자와 비교하여) 및/또는 승인된 항종양제로 치료받은 환자와 비교하여 치료된 환자에서 전체 또는 무진행 생존을 증가시키는 것을 의미한다.

"객관적 반응"은 완전한 반응 (CR) 또는 부분적 반응을 포함하는 측정가능한 반응을 지칭한다.

"완전한 반응" 또는 "CR"은 치료에 반응하여 모든 암 징후가 소멸된 것을 의도한다. 이것은 항상 암이 치유되었음을 의미하지는 않는다.

"부분적 반응"은 치료에 반응하여 하나 이상의 종양 또는 병변의 크기, 또는 신체 내의 암의 정도가 감소된 것을 지칭한다.

"원발성 종양" 또는 "원발성 암"은 본래의 암을 의미하고, 대상체 신체 내 또 다른 조직, 기관 또는 위치에 위치하는 전이성 병변이 아니다.

"대상체"는 인간 또는 비인간 포유동물, 예컨대 소, 말, 개, 양 또는 고양이를 포함하나 이에 제한되지 않는 포유동물을 의미한다. 바람직하게는, 대상체는 인간이다. 환자 역시 본원에서의 대상체이다.

용어 "항암 요법"은 암 치료에 유용한 요법을 지칭한다. 항암 치료제의 예는, 예를 들어 화학요법제, 성장 억제제, 세포독성제, 방사선 요법에 사용되는 작용제, 항혈관신생제, 아폽토시스 작용제, 항-튜불린 작용제, 및 암을 치료하기 위한 기타 작용제, 항-CD20 항체, 혈소판 유래 성장 인자 억제제 (예를 들어, 글리벡^TM (이마티닙 메실레이트)), COX-2 억제제 (예를 들어, 셀레콕시브), 인터페론, 시토카인, 표적 ErbB2, ErbB3, ErbB4, PDGFR-베타, BlyS, APRIL, BCMA 수용체(들) 중 하나 이상에 결합하는 길항제 (예를 들어, 중화 항체), TRAIL/Apo2, 및 기타 생물활성제 및 유기 화학 작용제 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 이들의 조합이 또한 본 발명에 포함된다.

본원에 사용된 용어 "세포독성제"는 세포의 기능을 억제 또는 방지하고/거나 세포의 파괴를 유발하는 물질을 지칭한다. 상기 용어는 방사성 동위원소 (예를 들어, I¹³¹, I¹²⁵, Y⁹⁰ 및 Re¹⁸⁶), 화학요법제, 및 독소, 예를 들어 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 기원의 효소 활성 독소, 또는 그의 단편을 포함하는 것으로 의도된다.

"화학요법제"는 암의 치료에 유용한 화학적 화합물이다. 화학요법제의 예는암의 치료에 유용한 화학적 화합물을 포함한다. 화학요법제의 예는 알킬화제, 예컨대 티오테파 및 시톡산(CYTOXAN)^® 시클로스포스파미드; 알킬 술포네이트, 예컨대 부술판, 임프로술판 및 피포술판; 아지리딘, 예컨대 벤조도파, 카르보쿠온, 메트우레도파 및 우레도파; 에틸렌이민 및 메틸아멜라민 (알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드 및 트리메틸올로멜라민 포함); 아세토게닌 (특히, 불라타신 및 불라타시논); 캄프토테신 (합성 유사체 토포테칸 포함); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065 (그의 아도젤레신, 카르젤레신 및 비젤레신 합성 유사체 포함); 크립토피신 (특히, 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴; 듀오카르마이신 (합성 유사체인 KW-2189 및 CB1-TM1 포함); 엘레우테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕티인; 스폰지스타틴; 질소 머스타드, 예컨대 클로람부실, 클로르나파진, 클로로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥시드 히드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비친, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드; 니트로소우레아, 예컨대 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴 및 라니무스틴; 항생제, 예컨대 에네디인 항생제 (예를 들어, 칼리케아미신, 특히 칼리케아미신 감마1I 및 칼리케아미신 오메가I1 (예를 들어, 문헌 [Agnew, Chem Intl. Ed. Engl., 33: 183-186 (1994)] 참조); 다이네미신 (다이네미신 A 포함); 비스포스포네이트, 예컨대 클로드로네이트; 에스페라미신; 뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련 발색단백질 에네디인 항생 발색단, 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카르미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 아드리아마이신(ADRIAMYCIN)^® 독소루비신 (모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신 포함), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신, 예컨대 미토마이신 C, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 푸로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항대사물, 예컨대 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실 (5-FU); 엽산 유사체, 예컨대 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체, 예컨대 플루다라빈, 6-메르캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체, 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록스우리딘; 안드로겐, 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤; 항아드레날, 예컨대 아미노글루테티미드, 미토탄, 트리로스탄; 엽산 보충제, 예컨대 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르니틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 질산갈륨; 히드록시우레아; 렌티난; 로니다이닌; 메이탄시노이드, 예컨대 메이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미톡산트론; 모피단몰; 니트라에린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 포도필린산; 2-에틸히드라지드; 프로카르바진; PSK^® 폴리사카라이드 복합체 (JHS 내츄럴 프로덕츠(JHS Natural Products), 오레곤주 유진); 라족산; 리족신; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센 (특히, T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드 ("Ara-C"); 시클로포스파미드; 티오테파; 탁산, 예를 들어 탁솔^® 파클리탁셀 (브리스톨-마이어스 스큅 온콜로지, 뉴저지주 프린스톤), 크레모포르-무함유 아브락산^TM, 파클리탁셀의 알부민-조작 나노입자 제제 (아메리칸 파마슈티칼 파트너스, 일리노이주 샤움버그) 및 탁소테레^® 도세탁셀 (롱-프랑 로러, 프랑스 안토니); 클로란부실; 겜자르(GEMZAR)^® 겜시타빈; 6-티오구아닌; 메르캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 유사체, 예컨대 시스플라틴 및 카르보플라틴; 빈블라스틴; 백금; 에토포시드 (VP-16); 이포스파미드; 미톡산트론; 빈크리스틴; 나벨빈(NAVELBINE)^® 비노렐빈; 노반트론; 테니포시드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 젤로다; 이반드로네이트; 이리노테칸 (캄프토사르, CPT-11) (이리노테칸을 5-FU 및 류코보린과 함께 사용하는 치료 요법 포함); 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴 (DMFO); 레티노이드, 예컨대 레티노산; 카페시타빈; 콤브레스타틴; 류코보린 (LV); 옥살리플라틴 (옥살리플라틴 치료 요법 (FOLFOX) 포함); 세포 증식을 감소시키는 PKC-알파, Raf, H-Ras, EGFR (예를 들어, 에를로티닙 (타르세바(Tarceva)^TM) 및 VEGF-A의 억제제 및 상기의 것 중 임의의 것의 제약상 허용되는 염, 산 또는 유도체를 포함한다.

또한, 상기 정의에는 종양에 대한 호르몬 작용을 조절하거나 억제하는 작용을 하는 항호르몬 작용제, 예컨대 항에스트로겐 및 선택적 에스트로겐 수용체 조절제 (SERM), 예를 들어 타목시펜 (놀바덱스(NOLVADEX)^® 타목시펜 포함), 랄록시펜, 드롤록시펜, 4-히드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤, 및 파레스톤(FARESTON)ㆍ토레미펜; 부신에서의 에스트로겐 생산을 조절하는 효소 아로마타제를 억제하는 아로마타제 억제제, 예컨대 예를 들어 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티미드, 메가세(MEGASE)^® 메게스트롤 아세테이트, 아로마신(AROMASIN)^® 엑세메스탄, 포르메스타니, 파드로졸, 리비소르(RIVISOR)^® 보로졸, 페마라(FEMARA)^® 레트로졸, 및 아리미덱스(ARIMIDEX)^® 아나스트로졸; 및 항안드로겐, 예컨대 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프롤리드 및 고세렐린; 뿐만 아니라 트록사시타빈 (1,3-디옥솔란 뉴클레오시드 시토신 유사체); 안티센스 올리고뉴클레오티드, 특히 이상 세포 증식과 관련된 신호전달 경로에서의 유전자 발현을 억제하는 것, 예컨대 예를 들어 PKC-알파, Raf 및 H-Ras; 리보자임, 예컨대 VEGF 발현 억제제 (예를 들어, 안지오자임(ANGIOZYME)^® 리보자임) 및 HER2 발현 억제제; 백신, 예컨대 유전자 요법 백신, 예를 들어 알로벡틴(ALLOVECTIN)^® 백신, 류벡틴(LEUVECTIN)^® 백신, 및 박시드(VAXID)^® 백신; 프로류킨(PROLEUKIN)^® rIL-2; 루르토테칸(LURTOTECAN)^® 토포이소머라제 1 억제제; 아바렐릭스(ABARELIX)^® rmRH; 비노렐빈 및 에스페라미신 (미국 특허 번호 4,675,187 참조), 및 이들 중 임의의 것의 제약상 허용되는 염, 산 또는 유도체가 포함된다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "전구약물"은 모 약물과 비교하여 종양 세포에 덜 세포독성이고, 효소에 의해 활성화되거나 전환되어 더욱 활성인 모 형태가 될 수 있는, 제약상 활성 물질의 전구체 또는 유도체 형태를 지칭한다. 예를 들어, 문헌 [Wilman, "Prodrugs in Cancer Chemotherapy" Biochemical Society Transactions, 14, pp. 375-382, 615th Meeting Belfast (1986) 및 Stella et al., "Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery," Directed Drug Delivery, Borchardt et al., (ed.), pp. 247-267, Humana Press (1985)]을 참조한다. 본 발명의 전구약물은 포스페이트-함유 전구약물, 티오포스페이트-함유 전구약물, 술페이트-함유 전구약물, 펩티드-함유 전구약물, D-아미노산-변형된 전구약물, 글리코실화 전구약물, β-락탐-함유 전구약물, 임의로 치환된 페녹시아세트아미드-함유 전구약물 또는 임의로 치환된 페닐아세트아미드-함유 전구약물, 5-플루오로시토신, 및 더욱 활성이고 세포독성이 없는 약물로 전환될 수 있는 다른 5-플루오로우리딘 전구약물을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 본 발명에 사용하기 위한 전구약물 형태로 유도체화될 수 있는 세포독성 약물의 예는 상기 기재된 화학요법제를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

본원에서, 용어 "공동으로"는 투여의 적어도 일부가 시간상 중첩되는, 2종 이상의 치료제의 투여를 지칭하기 위해 사용된다. 따라서, 공동 투여는 1종 이상의 다른 작용제(들)를 불연속적으로 투여한 후에 연속하여 1종 이상의 작용제(들)를 투여하는 경우의 투여 요법을 포함한다.

"방사선 요법"은, 정상적으로 기능하거나 세포를 파괴시키는 능력이 완전히 제한되도록 세포에 대한 충분한 손상을 유도시키기 위해 지정된 감마선 또는 베타선을 사용하는 것을 의미한다. 당업계에는 투여량 및 치료의 지속시간을 결정하는 수많은 방법이 공지되어 있음을 이해할 것이다. 전형적인 치료는 1회 투여로 제공되며, 전형적인 투여량은 하루 당 10 내지 200 유닛 (Gray)의 범위이다.

"감소시키거나 또는 억제하는"은 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그 초과의 전체 감소를 일으키는 능력을 의미한다. 감소 또는 억제는 치료할 장애의 증상, 전이물의 존재 또는 크기, 또는 원발성 종양의 크기를 지칭할 수 있다.

"생존 연장" 또는 "생존 가능성의 증가"는 비치료 환자와 비교하여 (예를 들어, 항-c-met 항체로 치료받지 않은 환자와 비교하여), 또는 대조군 치료 프로토콜, 예컨대 유방암 관리에 사용되는 것과 같은 화학요법제 단독에 의한 치료와 비교하여 치료받은 환자에서 PFS 및/또는 OS를 증가시키는 것을 의미한다. 생존은 치료 개시 후 또는 최초 진단 후 적어도 약 1개월, 2개월, 4개월, 6개월, 9개월, 또는 적어도 약 1년, 또는 적어도 약 2년, 또는 적어도 약 3년, 또는 적어도 약 4년, 또는 적어도 약 5년, 또는 적어도 약 10년 등 동안 모니터링된다.

본 발명의 방법에서, 환자를 "지시하는"이라는 용어는 임의의 수단에 의하지만 바람직하게는 서면, 예컨대 포장 삽입물 또는 기타 서면 프로모션 재료의 형태로 이루어지는, 적용가능한 요법, 의약, 치료, 치료 요법 등에 관한 지침을 제공하는 것을 의미한다.

본 발명의 방법과 관련하여, 용어 "프로모션하는"은 포장 삽입물 형태와 같은 서면을 비롯한 임의의 수단을 이용하여 특정한 약물, 약물 조합물, 또는 치료 양식을 제공하거나 광고하거나 판매하거나 설명하는 것을 의미한다. 본원에서의 프로모션은 적응증, 예컨대 유방암의 치료를 위해 치료제(들), 예컨대 항-c-met 항체, 항-VEGF 항체 및 탁산, 또는 예컨대 항-c-met 항체 및 탄산을 프로모션하는 것을 지칭하며, 이러한 프로모션은 대상체 집단 내 통계적으로 유의한 치료 효능 및 허용되는 안전성과 연관된 것으로 입증되어야 미국 식품 의약품국 (FDA)의 승인을 받게 된다.

용어 "마케팅"은 본원에서 제품 (예를 들어, 약물)의 프로모션, 판매 또는 유통을 기재하기 위해 사용된다. 마케팅은 구체적으로 제품을 상품화할 목적으로 하는 포장, 광고 및 임의의 영업 활동을 포함한다.

대상체의 "집단"은 임상 시험에서와 같이, 또는 유방암 요법과 같은 특정 적응증에 대한 FDA 승인 후에 종양학자가 관찰하는 바와 같이 암을 갖는 대상체의 군을 지칭한다.

용어 "정맥내 주입"은 약물을 대략 5분 초과, 바람직하게는 대략 30 내지 90분의 시간에 걸쳐 동물 또는 인간 환자의 정맥으로 도입하는 것을 지칭하지만, 본 발명에 따르면 정맥내 주입은 이와 달리 10시간 이하 동안 투여된다.

용어 "정맥내 볼루스" 또는 "정맥내 투입"은 신체가 약물을 대략 15분 이하, 바람직하게는 5분 이하로 수용하도록 동물 또는 인간의 정맥내로 약물을 투여하는 것을 지칭한다.

용어 "피하 투여"는 약물 용기로부터 비교적 느린 속도의 지속적인 전달에 의해 동물 또는 인간 환자의 피부 아래쪽으로, 바람직하게는 피부와 기저 조직 사이의 포켓 내로 약물이 도입되는 것을 지칭한다. 포켓은 피부를 기저 조직으로부터 핀칭 또는 드로잉하여 생성될 수 있다.

용어 "피하 주입"은 30분 이하 또는 90분 이하를 포함하나 이에 제한되지 않는 기간의 시간 동안 약물 용기로부터 비교적 느린 속도의 지속적인 전달에 의해 동물 또는 인간 환자의 피부 아래쪽으로, 바람직하게는 피부와 기저 조직 사이의 포켓 내로 약물이 도입되는 것을 지칭한다. 임의로, 주입은 동물 또는 인간 환자의 피부 아래쪽에 이식된 약물 전달 펌프의 피하 이식에 의해 이루어질 수 있는데, 이러한 펌프는 예정량의 약물을 소정 기간의 시간, 예컨대 30분, 90분, 또는 치료 요법의 길이에 걸친 기간 동안 전달한다.

용어 "피하 볼루스"는 동물 또는 인간 환자의 피부 아래쪽으로의 약물 투여를 지칭하고, 여기서 볼루스 약물 전달은 바람직하게는 대략 15분 미만, 보다 바람직하게는 5분 미만, 가장 바람직하게는 60초 미만이다. 투여는 바람직하게는 피부와 기저 조직 사이의 포켓 내에서 이루어지고, 포켓은 예를 들어 피부를 기저 조직으로부터 핀칭 또는 드로잉하여 생성된다.

치료제

본 발명은 예를 들어 환자에서 병리학적 상태, 예컨대 삼중-음성 전이성 유방암을 치료하기 위한 조합 요법에서의 항-c-met 항체 및 탁산의 사용을 특징으로 한다. 본 발명은 또한 예를 들어 환자에서 병리학적 상태, 예컨대 삼중-음성 전이성 유방암을 치료하기 위한 조합 요법에서의 항-c-met 항체의 사용, VEGF 길항제 (예컨대 항-VEGF 항체) 및 탁산의 사용을 특징으로 한다.

항-c-met 항체

본 발명의 방법에 유용한 항-c-met 항체에는 충분한 친화도 및 특이성으로 c-met에 결합하고 하나 이상의 c-met 활성을 감소시키거나 억제할 수 있는 임의의 항체가 포함된다. 항-c-met 항체는 c-met 활성화, 하류 분자 신호전달 (예를 들어, 미토겐 활성화 단백질 키나제 (MAPK) 인산화), 세포 증식, 세포 이동, 세포 생존, 세포 형태발생 및 혈관신생을 포함하지만 이에 제한되지 않는 하나 이상의 측면의 HGF/c-met-연관 효과를 조정하는데 사용될 수 있다. c-met에 대한 리간드 (예를 들어, HGF) 결합, c-met 인산화 및/또는 c-met 다량체화의 파괴가 포함되는 임의의 생물학적으로 관련된 메카니즘에 의해 이러한 효과들이 조정될 수 있다.

선택된 항체는 통상적으로 c-met에 대해 충분히 강력한 결합 친화도를 가질 것이고, 예를 들어 상기 항체는 인간 c-met에 100 nM 내지 1 pM의 Kd 값으로 결합할 수 있다. 항체 친화도는 예를 들어 표면 플라즈몬 공명 기반 검정 (예컨대 PCT 출원 공보 번호 WO2005/012359에 기재된 바와 같은 비아코어 검정); 효소-연결된 면역흡착 검정 (ELISA); 및 경쟁 검정 (예를 들어, RIA)에 의해 결정할 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 항-c-met 항체는 c-met/HGF 활성이 수반되는 질환 또는 상태를 표적화하고 이를 방해하는 것에서 치료제로서 사용될 수 있다. 또한, 상기 항체를 대상으로 하여 다른 생물학적 활성 검정을 수행하여, 예를 들어 그의 치료제로서의 유효성을 평가할 수 있다. 이러한 검정은 당업계에 공지되어 있고, 표적 항원 및 항체의 의도된 용도에 따라 달라진다.

항-c-met 항체 (1-아암 항체로서 제공될 수 있음)는 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Martens, T, et al. (2006) Clin Cancer Res 12(20 Pt 1):6144]; US 6,468,529; WO2006/015371; WO2007/063816을 참조한다. 본원은 인간에서 Fc 영역을 포함하는 1-아암 항체인 오나르투주맙 (교환가능하게 "MetMAb"로 지칭됨)의 투여를 개시한다. MetMAb의 서열은 도 1 및 2에 제시된다. MetMAb (또한 OA5D5v2 및 오나르투주맙으로 지칭됨)는 또한, 예를 들어 WO2006/015371; 문헌 [Jin et al., Cancer Res (2008) 68:4360]에 기재되어 있다. MetMAb의 생물학적으로 유사한 버전의 투여가 또한 본 발명에서 고려된다. 예시적인 항-c-met 항체는 또한 본원에 기재되고 예시된다.

항-간세포 성장 인자 (HGF) 항체의 사용이 또한 본 발명에서 고려된다. HGF는 c-met 수용체에 대한 리간드이다. 항-HGF 항체는 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Kim KJ, et al. Clin Cancer Res. (2006) 12(4):1292-8]; WO2007/115049; WO2009/002521; WO2007/143098; WO2007/017107; WO2005/017107; L2G7; AMG-102 (릴로투무맙), AV-299를 참조한다. 항-HGF 항체는 항-c-met 항체에 더하여 또는 항-c-met 항체 대신에 투여될 수 있다.

일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 또는 당업계에 공지되어 있는 1-아암 형식의 항-c-met 항체의 용도를 제공한다. 따라서, 한 측면에서, 항-c-met 항체는 Fc 영역을 포함하는 1-아암 항체이며 (즉, 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인이 단일 항원 결합 아암을 형성함), 여기서 Fc 영역은 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드를 포함하고, 상기 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드는 복합체에 존재하며, 상기 항원 결합 아암을 포함하는 Fab 분자와 비교하여 상기 항체 단편의 안정성을 증가시키는 Fc 영역을 형성한다. 길항제 기능을 필요로 하고 항체의 2가성이 바람직하지 않은 효능 효과를 야기하는 병리학적 상태를 치료하는 경우, 1-아암 항체 (즉, 단일 항원 결합 아암을 포함하는 항체)의 1가 특성은 항체의 표적 분자에의 결합시에 길항제 기능을 야기하고/거나 보장한다. 또한, Fc 영역을 포함하는 1-아암 항체는 유사한/실질적으로 동일한 항원 결합 특성을 갖는 Fab 형태와 비교하여 우수한 약동학적 속성 (예컨대 증진된 생체내 반감기 및/또는 감소된 제거율)을 특징으로 하며, 이에 따라 종래의 1가 Fab 항체를 사용하는데 있어서의 주요 문제점이 극복된다. 1-아암 항체는, 예를 들어 WO2005/063816; 문헌 [Martens et al., Clin Cancer Res (2006), 12: 6144]에 개시되어 있다.

일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 항-c-met 항체 또는 그의 항체 단편이며, 여기서 항-c-met 항체는

을 포함함);

을 포함함); 및

을 포함함)

한 실시양태에서, 항-c-met 항체는 도 1에 도시된 CDR1-HC, CDR2-HC 및 CDR3-HC 서열 (서열 5-7) 중 하나 이상을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 도 1에 도시된 CDR1-LC, CDR2-LC 및 CDR3-LC 서열 (서열 8-10) 중 하나 이상을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄 가변 도메인은 도 1에 도시된 FR1-HC, FR2-HC, FR3-HC 및 FR4-HC 서열 (서열 11-14)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 경쇄 가변 도메인은 도 1에 도시된 FR1-LC, FR2-LC, FR3-LC 및 FR4-LC 서열 (서열 15-18)을 포함한다.

다른 실시양태에서, 항체는 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 기탁 번호 ATCC HB-11894 (하이브리도마 1A3.3.13) 또는 HB-11895 (하이브리도마 5D5.11.6)로 기탁된 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 모노클로날 항체의 CDR 서열 중 하나 이상을 포함한다.

한 측면에서, 항-c-met 항체는 (a) (i) 서열 A1-A17 (여기서, A1-A17은 KSSQSLLYTSSQKNYLA (서열 23)임)을 포함하는 CDR-L1; (ii) 서열 B1-B7 (여기서, B1-B7은 WASTRES (서열 24)임)을 포함하는 CDR-L2; (iii) 서열 C1-C9 (여기서, C1-C9는 QQYYAYPWT (서열 25)임)를 포함하는 CDR-L3; (iv) 서열 D1-D10 (여기서, D1-D10은 GYTFTSYWLH (서열 26)임)을 포함하는 CDR-H1; (v) 서열 E1-E18 (여기서, E1-E18은 GMIDPSNSDTRFNPNFKD (서열 27)임)을 포함하는 CDR-H2; 및 (vi) 서열 F1-F11 (여기서, F1-F11은 XYGSYVSPLDY (서열 28)이고, X는 R이 아님)을 포함하는 CDR-H3으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4 또는 5개의 초가변 영역 (CDR) 서열; 및 (b) 적어도 1개의 변이체 CDR (여기서, 변이체 CDR 서열은 서열 23, 24, 25, 26, 27 또는 28에 도시된 서열의 적어도 1개의 잔기의 변형을 포함함)을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 항체의 CDR-L1은 서열 23의 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, CDR-L2는 서열 24의 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, CDR-L3은 서열 25의 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, CDR-H1은 서열 26의 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, CDR-H2는 서열 27의 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, CDR-H3은 서열 28의 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, CDR-H3은 TYGSYVSPLDY (서열 29)를 포함한다. 한 실시양태에서, CDR-H3은 SYGSYVSPLDY (서열 30)를 포함한다. 한 실시양태에서, (본원에 기재된 조합에서) 이러한 서열을 포함하는 항체는 인간화 또는 인간 항체이다.

한 측면에서, 본 발명은 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 CDR을 포함하는 항체를 제공하고, 여기서 각각의 CDR은 서열 23, 24, 25, 26, 27, 28 및 29로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나 또는 이로 본질적으로 이루어지고, 서열 23은 CDR-L1에 상응하고, 서열 24는 CDR-L2에 상응하고, 서열 25는 CDR-L3에 상응하고, 서열 26은 CDR-H1에 상응하고, 서열 27은 CDR-H2에 상응하고, 서열 26, 27 또는 28은 CDR-H3에 상응한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 항체는 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 여기서 각각은 순서대로 서열 23, 24, 25, 26, 27 및 29를 포함한다. 한 실시양태에서, 항체는 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 여기서 각각은 순서대로 서열 23, 24, 25, 26, 27 및 30을 포함한다.

변이체 CDR은 CDR 내에 1개 이상의 잔기의 변형을 가질 수 있다. 한 실시양태에서, CDR-L2 변이체는 하기 위치: B1 (M 또는 L), B2 (P, T, G 또는 S), B3 (N, G, R 또는 T), B4 (I, N 또는 F), B5 (P, I, L 또는 G), B6 (A, D, T 또는 V) 및 B7 (R, I, M 또는 G)의 임의의 조합에서 1-5개 (1, 2, 3, 4 또는 5개) 치환을 포함한다. 한 실시양태에서, CDR-H1 변이체는 하기 위치: D3 (N, P, L, S, A, I), D5 (I, S 또는 Y), D6 (G, D, T, K, R), D7 (F, H, R, S, T 또는 V) 및 D9 (M 또는 V)의 임의의 조합에서 1-5개 (1, 2, 3, 4 또는 5개) 치환을 포함한다. 한 실시양태에서, CDR-H2 변이체는 하기 위치: E7 (Y), E9 (I), E10 (I), E14 (T 또는 Q), E15 (D, K, S, T 또는 V), E16 (L), E17 (E, H, N 또는 D) 및 E18 (Y, E 또는 H)의 임의의 조합에서 1-4개 (1, 2, 3 또는 4개) 치환을 포함한다. 한 실시양태에서, CDR-H3 변이체는 하기 위치: F1 (T, S), F3 (R, S, H, T, A, K), F4 (G), F6 (R, F, M, T, E, K, A, L, W), F7 (L, I, T, R, K, V), F8 (S, A), F10 (Y, N) 및 F11 (Q, S, H, F)의 임의의 조합에서 1-5개 (1, 2, 3, 4 또는 5개) 치환을 포함한다. 각각의 위치 다음의 괄호 내의 문자(들)는 예시적인 치환 (즉, 대체) 아미노산을 나타내고; 당업자에게 명백한 바와 같이, 본원에서 설명되는 맥락에서 다른 아미노산의 치환 아미노산으로서의 적합성은 당업계에 공지된 및/또는 본원에서 설명된 기술을 사용하여 통상적으로 평가될 수 있다. 한 실시양태에서, CDR-L1은 서열 23의 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 변이체 CDR-H3 내의 F1은 T이다. 한 실시양태에서, 변이체 CDR-H3 내의 F1은 S이다. 한 실시양태에서, 변이체 CDR-H3 내의 F3은 R이다. 한 실시양태에서, 변이체 CDR-H3 내의 F3은 S이다. 한 실시양태에서, 변이체 CDR-H3 내의 F7은 T이다. 한 실시양태에서, 항체는 F1이 T 또는 S이고, F3이 R 또는 S이고, F7이 T인 변이체 CDR-H3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체는 F1이 T이고, F3이 R이고, F7이 T인 변이체 CDR-H3을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체는 F1이 S인 변이체 CDR-H3을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체는 F1이 T이고, F3이 R인 변이체 CDR-H3을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체는 F1이 S이고, F3이 R이고, F7이 T인 변이체 CDR-H3을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체는 F1이 T이고, F3이 S이고, F7이 T이고, F8이 S인 변이체 CDR-H3을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체는 F1이 T이고, F3이 S이고, F7이 T이고, F8이 A인 변이체 CDR-H3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 변이체 CDR-H3 항체는 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1 및 CDR-H2를 추가로 포함하고, 여기서 각각은 순서대로 서열 1, 2, 3, 4 및 5에 도시된 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이들 항체는 인간 하위군 III 중쇄 프레임워크 컨센서스 서열을 추가로 포함한다. 이들 항체의 한 실시양태에서, 프레임워크 컨센서스 서열은 위치 71, 73 및/또는 78에서 치환을 포함한다. 이들 항체의 일부 실시양태에서, 위치 71은 A이고/거나, 73은 T이고/거나 78은 A이다. 이들 항체의 한 실시양태에서, 이들 항체는 인간 κI 경쇄 프레임워크 컨센서스 서열을 추가로 포함한다.

한 실시양태에서, 항체는 B6이 V인 변이체 CDR-L2를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 변이체 CDR-L2 항체는 CDR-L1, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 추가로 포함하고, 여기서 각각은 순서대로 서열 23, 25, 26, 27 및 28에 도시된 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 변이체 CDR-L2 항체는 CDR-L1, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 추가로 포함하고, 여기서 각각은 순서대로 서열 23, 25, 26, 27 및 29에 도시된 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 변이체 CDR-L2 항체는 CDR-L1, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 추가로 포함하고, 여기서 각각은 순서대로 서열 23, 25, 26,27 및 30에 도시된 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이들 항체는 인간 하위군 III 중쇄 프레임워크 컨센서스 서열을 추가로 포함한다. 이들 항체의 한 실시양태에서, 프레임워크 컨센서스 서열은 위치 71, 73 및/또는 78에서 치환을 포함한다. 이들 항체의 일부 실시양태에서, 위치 71은 A이고/거나 73은 T이고/거나 78은 A이다. 이들 항체의 한 실시양태에서, 이들 항체는 인간 κI 경쇄 프레임워크 컨센서스 서열을 추가로 포함한다.

한 실시양태에서, 본 발명의 항체는 E14가 T이고, E15가 K이고, E17이 E인 변이체 CDR-H2를 포함한다. 한 실시양태에서, 항체는 E17이 E인 변이체 CDR-H2를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 변이체 CDR-H3 항체는 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1 및 CDR-H3을 추가로 포함하고, 여기서 각각은 순서대로 서열 23, 24, 25, 26 및 28에 도시된 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 변이체 CDR-H2 항체는 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1 및 CDR-H3을 추가로 포함하고, 여기서 각각은 순서대로 서열 23, 24, 25, 26 및 29에 도시된 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 변이체 CDR-H2 항체는 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1 및 CDR-H3을 추가로 포함하고, 여기서 각각은 순서대로 서열 23, 24, 25, 26 및 30에 도시된 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이들 항체는 인간 하위군 III 중쇄 프레임워크 컨센서스 서열을 추가로 포함한다. 이들 항체의 한 실시양태에서, 프레임워크 컨센서스 서열은 위치 71, 73 및/또는 78에서 치환을 포함한다. 이들 항체의 일부 실시양태에서, 위치 71은 A이고/거나, 73은 T이고/거나 78은 A이다. 이들 항체의 한 실시양태에서, 이들 항체는 인간 κI 경쇄 프레임워크 컨센서스 서열을 추가로 포함한다.

다른 실시양태에서, c-met 항체는 c-met Sema 도메인 또는 그의 변이체의 적어도 일부에 특이적으로 결합한다. 한 예에서, 길항체 항체는 LDAQT (서열 33) (예를 들어, c-met의 잔기 269-273), LTEKRKKRS (서열 34) (예를 들어, c-met의 잔기 300-308), KPDSAEPM (서열 35) (예를 들어, c-met의 잔기 350-357) 및 NVRCLQHF (서열 36) (예를 들어, c-met의 잔기 381-388)로 이루어진 군으로부터 선택된 서열 중 적어도 하나에 특이적으로 결합한다. 한 실시양태에서, 길항제 항체는 LDAQT (서열 33) (예를 들어, c-met의 잔기 269-273), LTEKRKKRS (서열 34) (예를 들어, c-met의 잔기 300-308), KPDSAEPM (서열 35) (예를 들어, c-met의 잔기 350-357) 및 NVRCLQHF (서열 36) (예를 들어, c-met의 잔기 381-388)로 이루어진 군으로부터 선택된 서열 중 적어도 하나의 일부 또는 전부에 의해 형성된 입체형태적 에피토프에 특이적으로 결합한다. 한 실시양태에서, 길항제 항체는 서열 LDAQT (서열 33), LTEKRKKRS (서열 34), KPDSAEPM (서열 35) 및/또는 NVRCLQHF (서열 36)와 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% 서열 동일성 또는 유사성을 갖는 아미노산 서열에 특이적으로 결합한다.

한 측면에서, 항-c-met 항체는 항체 단편 내의 Fc 서열의 동종이량체화를 최소화하면서 이종이량체화는 촉진하는 적어도 하나의 특성을 포함한다. 이러한 특성(들)은 이뮤노글로불린 집단의 수율 및/또는 순도 및/또는 균질성을 개선시킨다. 한 실시양태에서, 항체는 WO2005/063816; 문헌 [Ridgeway, J et al., Prot Eng (1996) 9:617-21; Zhu Z et al. Prot Sci (1997) 6:781-8]에 기재된 바와 같은 "노브" 및 "홀"을 구성하는 Fc 돌연변이를 포함한다. 예를 들어, 홀 돌연변이는 Fc 폴리펩티드의 T366A, L368A 및/또는 Y407V 중 하나 이상일 수 있고, 노브 돌연변이는 T366W일 수 있다.

항-VEGF 항체 및 VEGF 길항제

항체 생산에 사용될 VEGF 항원은, 예를 들어 VEGF₁₆₅ 분자 뿐만 아니라 바람직한 에피토프를 함유하는 VEGF의 다른 이소형 또는 그의 단편일 수 있다. 본 발명의 항-VEGF 항체 생성에 유용한 다른 형태의 VEGF는 당업자에게 명백할 것이다.

인간 VEGF는 소 VEGF cDNA를 혼성화 프로브로 사용하여 인간 세포로부터 제조된 cDNA 라이브러리를 처음 스크리닝하여 수득하였다. 문헌 [Leung et al. (1989) Science, 246:1306]. 이로써 확인된 cDNA 중 하나가 소 VEGF와 95% 초과의 상동성을 갖는 165-아미노산 단백질을 코딩하며, 이러한 165-아미노산 단백질은 전형적으로 인간 VEGF (hVEGF) 또는 VEGF₁₆₅라 지칭된다. 인간 VEGF의 분열촉진 활성은 포유동물 숙주 세포에서의 인간 VEGF cDNA 발현으로 확인되었다. 인간 VEGF cDNA로 형질감염된 세포에 의해 조건화된 배지는 모세관 내피 세포의 증식을 촉진시켰지만, 대조군 세포는 그렇지 않았다. 문헌 [Leung et al. (1989) Science, 상기 문헌].

후속 치료 용도를 위해 혈관 내피 세포 성장 인자가 천연 공급원으로부터 단리 및 정제될 수 있었지만, 여포 세포 내의 비교적 낮은 농도의 단백질 및 VEGF를 회수하는데 드는 노력과 비용 둘 다의 면에서 높은 비용은 상업상 이용할 수 없는 것으로 밝혀졌다. 따라서, 재조합 DNA 기술을 통해 VEGF를 클로닝하고 발현시키기 위한 추가의 노력이 있어 왔다. (예를 들어, 문헌 [Ferrara, Laboratory Investigation 72:615-618 (1995)], 및 여기에 인용된 참고문헌 참조).

VEGF는 여러 조직에서 대안적인 RNA 스플라이싱으로 인한 다양한 동종이량체 형태 (단랑체 당 121, 145, 165, 189 및 206개 아미노산)로서 발현된다. VEGF₁₂₁은 헤파린과 결합하지 않는 가용성 미토겐이고, VEGF가 보다 긴 형태를 가질수록 점진적으로 더 높은 친화도로 헤파린과 결합한다. VEGF의 헤파린 결합 형태는 플라스민에 의해 카르복시 말단에서 절단되어 확산가능한 형태(들)의 VEGF를 방출시킬 수 있다. 플라스민 절단 후에 확인된 카르복시 말단 펩티드의 아미노산 서열분석은 Arg₁₁₀-Ala₁₁₁이다. 동종이량체로서 단리된 아미노 말단 "코어" 단백질인 VEGF (1-110)은 중화 모노클로날 항체 (예를 들어, 4.6.1 및 3.2E3.1.1이라 지칭되는 항체) 및 가용성 형태의 VEGF 수용체에 무손상 VEGF₁₆₅ 동종이량체와 유사한 친화도로 결합한다.

또한, 태반 성장 인자 (PIGF), VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D 및 VEGF-E를 비롯하여 VEGF와 구조적으로 관련이 있는 여러 분자가 최근 확인된 바 있다. 문헌 [Ferrara and Davis-Smyth (1987) Endocr. Rev., 상기 문헌]; [Ogawa et al. J. Biological Chem. 273:31273-31281(1998); Meyer et al. EMBO J., 18:363-374(1999)]. 수용체 티로신 키나제, Flt-4 (VEGFR-3)는 VEGF-C 및 VEGF-D에 대한 수용체로 확인되었다. 문헌 [Joukov et al. EMBO. J. 15:1751(1996); Lee et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:1988-1992(1996); Achen et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95:548-553]. VEGF-C는 림프 혈관신생의 조절에 관여하는 것을 밝혀졌다. 문헌 [Jeltsch et al. Science 276:1423-1425(1997)].

2종의 VEGF 수용체, Flt-1 (VEGFR-1라고도 지칭됨) 및 KDR (VEGFR-2라고도 지칭됨)이 확인되었다. 문헌 [Shibuya et al. (1990) Oncogene 8:519-527; de Vries et al. (1992) Science 255:989-991; Terman et al. (1992) Biochem. Biophys. Res. Commun. 187:1579-1586]. 뉴로필린-1은 헤파린-결합 VEGF 이소형에 결합할 수 있는 선택적 VEGF 수용체인 것으로 밝혀졌다 (문헌 [Soker et al. (1998) Cell 92:735-45]). Flt-I 및 KDR 둘 다 수용체 티로신 키나제 (RTK) 패밀리에 속한다. RTK는 다양한 생물학적 활성을 갖는 막횡단 수용체의 거대 패밀리를 포함한다. 현재, 적어도 열아홉 (19) 종의 별개의 RTK 서브패밀리가 확인되어 있다. 수용체 티로신 키나제 (RTK) 패밀리는 다양한 세포 유형의 성장 및 분화에 중요한 수용체를 포함한다 (문헌 [Yarden and Ullrich (1988) Ann. Rev. Biochem. 57:433-478; Ullrich and Schlessinger (1990) Cell 61:243-254]). RTK의 내인성 기능은 리간드 결합시에 활성화되며, 이로써 수용체 및 여러 세포 기질의 인산화 및 이후에 다양한 세포 반응이 일어난다 (문헌 [Ullrich & Schlessinger (1990) Cell 61:203-212]). 따라서, 수용체 티로신 키나제 매개된 신호 전달은 특정 성장 인자 (리간드)와의 세포외 상호작용에 의해 개시되고, 전형적으로는 이후에 수용체 이량체화, 내인성 단백질 티로신 키나제 활성의 자극 및 수용체 트랜스-인산화가 일어난다. 이에 따라 세포내 신호 전달 분자를 위한 결합 부위가 생성되고, 적절한 세포 반응을 용이하게 하는 세포질 신호전달 분자의 스펙트럼을 갖는 복합체가 형성된다. (예를 들어, 세포 분열, 분화, 대사 효과, 세포외 미세환경의 변화) (문헌 [Schlessinger and Ullrich (1992) Neuron 9:1-20] 참조). 구조적으로, Flt-1 및 KDR 둘 다 세포외 도메인 내에 7개의 이뮤노글로불린-유사 도메인, 단일 막횡단 영역, 및 키나제-삽입 도메인이 개재된 컨센서스 티로신 키나제 서열을 갖는다. 문헌 [Matthews et al. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:9026-9030; Terman et al. (1991) Oncogene 6:1677-1683].

본 발명의 방법에 유용한 항-VEGF 항체는 VEGF에 충분한 친화도 및 특이성으로 결합하고 VEGF의 생물학적 활성을 감소시키거나 또는 억제할 수 있는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다. 항-VEGF 항체는 일반적으로 다른 VEGF 동족체, 예컨대 VEGF-B 또는 VEGF-C에도 결합하지 않을 것이고, 다른 성장 인자, 예컨대 PlGF, PDGF 또는 bFGF에도 결합하지 않을 것이다.

본 발명의 특정 실시양태에서, 항-VEGF 항체는 하이브리도마 ATCC HB 10709에 의해 생산된 모노클로날 항-VEGF 항체 A4.6.1과 동일한 에피토프에 결합하는 모노클로날 항체; 문헌 [Presta et al. (1997) Cancer Res. 57:4593-4599]에 따라 생성된 재조합 인간화 항-VEGF 모노클로날 항체를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 한 실시양태에서, 항-VEGF 항체는 "rhuMAb VEGF" 또는 "아바스틴^®"이라고도 공지된 "베바시주맙 (BV)"이다. 이것은 돌연변이된 인간 IgG1 프레임워크 영역, 및 인간 VEGF의 그의 수용체에 대한 결합을 차단하는 뮤린 항-hVEGF 모노클로날 항체 A.4.6.1로부터의 항원-결합 상보성-결정 영역을 포함한다. 베바시주맙의 아미노산 서열의 대략 93% (대다수의 프레임워크 영역 포함)는 인간 IgG1로부터 유래되고, 서열의 약 7%는 뮤린 항체 A4.6.1로부터 유래된다.

베바시주맙 및 다른 인간화 항-VEGF 항체는 2005년 2월 26일에 허여된 미국 특허 번호 6,884,879에 추가로 기재되어 있다. 추가의 항체는 PCT 공보 번호 WO2005/012359, PCT 공보 번호 WO2005/044853, 및 미국 특허 출원 공보 US2009-0142343에 기재되어 있는 바와 같은 G6 또는 B20 시리즈 항체 (예를 들어, G6-31, B20-4.1)를 포함하며, 이들 특허 출원의 내용은 명백하게 본원에 참고로 포함된다. 추가의 항체에 대해 미국 특허 번호 7,060,269, 6,582,959, 6,703,020; 6,054,297; WO98/45332; WO 96/30046; WO94/10202; EP 0666868B1; 미국 특허 출원 공보 번호 2006009360, 20050186208, 20030206899, 20030190317, 20030203409, 및 20050112126; 및 문헌 [Popkov et al., Journal of Immunological Methods 288:149-164 (2004)]을 참조한다. 다른 항체는 잔기 F17, M18, D19, Y21, Y25, Q89, I91, K101, E103 및 C104를 포함하거나, 또는 대안적으로 잔기 F17, Y21, Q22, Y25, D63, I83 및 Q89를 포함하는 인간 VEGF 상의 기능적 에피토프에 결합하는 것을 포함한다.

본 발명의 한 실시양태에서, 항-VEGF 항체는 하기 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역:

및 하기 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역:

을 갖는다.

본 발명에 따른 "B20 시리즈 항체"는 PCT 공보 번호 WO2005/012359 (그의 전체 개시내용은 명백하게 본원에 참고로 포함됨)의 도 27-29 중 어느 하나에 따른 B20 항체 또는 B20-유래 항체의 서열로부터 유래된 항-VEGF 항체이다. 또한, PCT 공보 번호 WO2005/044853, 및 미국 특허 출원 공보 US2009-0142343을 참조하고, 이들 특허 출원의 내용은 본원에 명백하게 참고로 포함된다. 한 실시양태에서, B20 시리즈 항체는 잔기 F17, M18, D19, Y21, Y25, Q89, I91, K101, E103 및 C104를 포함하는 인간 VEGF 상의 기능적 에피토프에 결합한다.

본 발명에 따른 "기능적 에피토프"는 항체의 결합에 강력하게 기여하는 항원의 아미노산 잔기를 지칭한다. 이와 같이 강력하게 기여하는 항원 잔기 중 어느 하나를 돌연변이시키면 (예를 들어, 알라닌에 의한 야생형 VEGF의 돌연변이 또는 상동체 돌연변이) 항체의 결합이 파괴되어 항체의 상대적인 친화도 비 (IC50 돌연변이체 VEGF/IC50 야생형 VEGF)는 5를 초과할 것이다 (WO2005/012359의 실시예 2 참조). 한 실시양태에서, 상대적 친화도 비는 용액 결합 파지 디스플레이 ELISA로 결정된다. 간략하게, 96웰 맥시소르프 이뮤노플레이트 (눈크)를 4℃에서 PBS 중 2 ug/ml 농도의 Fab 형태의 시험할 항체로 밤새 코팅한 후에 2시간 동안 실온에서 PBS, 0.5% BSA 및 0.05% 트윈20 (PBT)으로 차단한다. PBT 중 hVEGF 알라닌 점 돌연변이체 (잔기 8-109 형태) 또는 야생형 hVEGF (8-109)를 디스플레이하는 파지의 연속 희석액을 우선 실온에서 15분 동안 Fab-코팅된 플레이트에서 인큐베이션하고, 상기 플레이트를 PBS, 0.05% 트윈20 (PBST)으로 세척하였다. 결합된 파지는 PBT 중에서 1:5000으로 희석된 항-M13 모노클로날 항체 양고추냉이 퍼옥시다제 (아머샴 파마시아) 접합체로 검출하고, 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘 (TMB, 키르케가드 ＆ 페리 랩스, 메릴랜드주 게이더스버그 소재) 기질로 대략 5분 동안 발색시키며, 1.0 M H3PO4로 켄칭시킨 후에 450 nm에서 분광광도계로 판독한다. IC50 값의 비 (IC50,ala/IC50,wt)는 결합 친화도에 있어서의 감소 배수 (상대적 결합 친화도)를 나타낸다.

가장 잘 특성화된 2종의 VEGF 수용체는 VEGFR1 (또한, Flt-1이라고도 공지됨) 및 VEGFR2 (또한, KDR 및 FLK-1 (뮤린 상동체)이라고도 공지됨)이다. 각각의 VEGF 패밀리 구성원에 대한 각각의 수용체의 특이성은 다양하지만, VEGF-A는 Flt-1 및 KDR 둘 다에 결합한다. 전장 Flt-1 수용체는 7개의 Ig 도메인을 갖는 세포외 도메인, 막횡단 도메인, 및 티로신 키나제 활성을 지닌 세포내 도메인을 포함한다. 세포외 도메인은 VEGF의 결합에 관여하고, 세포내 도메인은 신호 전달에 관여한다.

VEGF에 특이적으로 결합하는 VEGF 수용체 분자 또는 그의 단편은 본 발명의 방법에 사용되어 VEGF 단백질에 결합하고 이를 봉쇄시킴으로써 이것의 신호전달을 막을 수 있다. 특정 실시양태에서, VEGF 수용체 분자 또는 그의 VEGF 결합 단편은 가용성 형태, 예컨대 sFlt-1이다. 가용성 형태의 수용체는 VEGF와 결합함으로써 VEGF 단백질의 생물학적 활성에 대한 억제 효과를 발휘하여 VEGF 단백질이 표적 세포 표면 상에 존재하는 그의 천연 수용체와 결합하는 것을 방해한다. 또한, VEGF 수용체 융합 단백질이 포함되는데, 이것의 예는 아래에 기재되어 있다.

키메라 VEGF 수용체 단백질은 적어도 2종의 상이한 단백질로부터 유래된 아미노산 서열을 갖는 수용체 분자로서, 이 중 적어도 1종은 VEGF와 결합하여 그의 생물학적 활성을 억제할 수 있는 VEGF 수용체 단백질 (예를 들어, flt-1 또는 KDR 수용체)이다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 키메라 VEGF 수용체 단백질은 오직 2종의 상이한 VEGF 수용체 분자로부터 유래된 아미노산 서열로 이루어지지만, flt-1 및/또는 KDR 수용체의 세포외 리간드-결합 영역으로부터의 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개의 모든 Ig-유사 도메인을 포함하는 아미노산 서열이 다른 무관한 단백질로부터의 아미노산 서열, 예를 들어 이뮤노글로불린 서열에 연결될 수 있다. Ig-유사 도메인과 조합되는 다른 아미노산 서열은 당업자에게 매우 명백할 것이다. 키메라 VEGF 수용체 단백질의 예는, 예를 들어 가용성 Flt-1/Fc, KDR/Fc, 또는 FLt-1/KDR/Fc (VEGF 트랩으로서 공지되기도 함)를 포함한다. (예를 들어, PCT 출원 공보 번호 WO97/44453 참조).

본 발명의 가용성 VEGF 수용체 단백질 또는 키메라 VEGF 수용체 단백질은 막횡단 도메인을 통해 세포의 표면에 고정되지 않는 VEGF 수용체 단백질을 포함한다. 이와 같이 가용성 형태의 VEGF 수용체 (키메라 수용체 단백질 포함)은 VEGF에 결합하여 이것을 불활성화시키면서도 막횡단 도메인을 포함하지 않기 때문에 일반적으로는 해당 분자가 발현되는 세포의 세포막과 회합되지 않는다.

요법

본 발명은 항-c-met 항체 및 화학요법제 (예를 들어, 탁산, 예컨대 파클리탁셀)의 조합된 활성으로부터 유익한 효과를 제공하도록 의도된 특정 치료 요법의 일부로서의 이러한 치료제의 조합 사용을 특징으로 한다. 본 발명은 또한 항-c-met 항체, 항-VEGF 항체 및 화학요법제 (예를 들어, 탁산, 예컨대 파클리탁셀)의 조합된 활성으로부터 유익한 효과를 제공하도록 의도된 특정 치료 요법의 일부로서의 이러한 치료제의 조합 사용을 특징으로 한다. 조합의 유익한 효과는 치료제의 조합으로부터 생성된 약동학 또는 약력학 공동-작용을 포함하나 이에 제한되지 않는다.

한 실시양태에서, 본 발명은 ER-음성, PR-음성 및 HER2-음성 (ER-, PR- 및 HER2-; 또는 삼중-음성) 전이성 유방암 환자에게 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-c-met 항체 (예를 들어, MetMAb) 및 28-일 주기 중 제1일, 제8일 및 제15일에 IV 주입에 의해 90 mg/㎡의 용량으로 투여되는 파클리탁셀을 투여하는 것을 포함하는, 유방암의 치료 방법을 제공한다.

한 실시양태에서, 본 발명은 ER-음성, PR-음성 및 HER2-음성 (ER-, PR- 및 HER2-; 또는 삼중-음성) 전이성 유방암 환자에게 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-c-met 항체 (예를 들어, MetMAb), 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-VEGF 항체 (예를 들어, 베바시주맙) 및 28-일 주기 중 제1일, 제8일 및 제15일에 IV 주입에 의해 90 mg/㎡의 용량으로 투여되는 파클리탁셀을 투여하는 것을 포함하는, 유방암의 치료 방법을 제공한다.

본 발명은 항-c-met 항체의 활성으로부터 유리한 효과를 제공하도록 의도된 특정 치료 요법의 일부로서의 이러한 치료제의 사용을 특징으로 한다. 따라서, 한 측면에서, 본 발명은 대상체에게 항-c-met 항체를 2주마다 약 10 mg/kg의 용량으로 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 대상체에게 (a) 항-c-met 항체를 2주마다 약 10 mg/kg의 용량으로; 및 (b) VEGF 길항제 (예컨대 항-VEGF 항체)를 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다.

본 발명의 방법이 암 요법의 임의의 다른 수단의 부재 하에, 예를 들어 추가의 치료제 (화학요법제 포함)의 부재 하에 수행될 수 있을지라도, 방법은 화학요법제, 상이한 항-c-met 항체, 상이한 항-VEGF 항체, 종양 연관 항원에 대해 지시된 항체, 항호르몬 화합물, 심장보호제, 시토카인, 항혈관신생제, 티로신 키나제 억제제, COX 억제제, 비-스테로이드성 항염증성 약물, 파르네실 트랜스퍼라제 억제제, 종양태아성 단백질 CA 125에 결합하는 항체, Raf 또는 ras 억제제, 리포솜 독소루비신, 토포테칸, 상이한 탁산, 오심을 치료하는 의약, 피부 발진을 예방 또는 치료하는 의약 또는 표준 여드름 요법, 설사를 치료 또는 예방하는 의약, 체온-강하 의약, 및 조혈 성장 인자로 이루어진 군으로부터 선택된 추가의 치료제의 투여를 임의로 포함할 수 있다.

본 발명의 항체 (및 임의의 추가 치료제)는 비경구, 폐내 및 비내를 비롯한 임의의 적합한 수단에 의해 투여될 수 있고, 국부 치료를 위해 바람직하다면, 병변내 투여될 수 있다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다. 투여는 임의의 적합한 경로, 예를 들어 부분적으로는 투여가 단기적인지 장기적인지에 따라 정맥내 또는 피하 주사와 같은 주사에 의해 수행될 수 있다. 다양한 시점에 걸쳐 단일 또는 다중 투여 등을 비롯한 다양한 투여 계획으로는 본원에서 볼루스 투여 및 펄스 주입이 고려된다.

항체 및 다른 치료제는 우수 의료 실무와 일치하는 방식으로 제제화되고 투약되고 투여될 것이다. 이와 관련하여 고려할 요인은 치료할 특정한 장애, 치료받을 특정한 포유동물, 개별 환자의 임상적 상태, 장애의 원인, 작용제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 스케줄, 및 의료 전문인에게 공지된 다른 요인을 포함한다. 본 발명의 치료제를, 문제의 장애를 예방 또는 치료하기 위해 현재 사용되고 있는 한 가지 이상의 작용제와 함께 반드시 제제화할 필요는 없지만, 임의로 제제화한다. 이러한 다른 작용제의 유효량은 제제 내에 존재하는 항체의 양, 장애 또는 치료의 유형, 및 상기 논의된 다른 요인들에 따라 달라진다. 이는 일반적으로 상기 기재된 바와 동일한 투여량 및 투여 경로로, 또는 본원에 기재된 투여량의 약 1 내지 99%로, 또는 실험적으로/임상적으로 적절한 것으로 결정된 임의의 투여량 및 경로에 의해 사용된다.

억제제가 항체인 경우에, 항체는 면역접합체일 수 있다. 바람직하게는, 그가 결합하는 접합된 억제제 및/또는 항원은 세포에 의해 내재화되어, 그가 결합하는 암 세포를 사멸시키는 접합체의 치료 효능을 증가시킨다. 바람직한 실시양태에서, 세포독성제는 암 세포 내의 핵산을 표적으로 하거나 방해한다. 이러한 세포독성제의 예는 메이탄시노이드, 칼리케아미신, 리보뉴클라아제 및 DNA 엔도뉴클레아제를 포함한다.

질환의 유형 및 중증도에 따라서, 예를 들어 1회 이상의 개별 투여이든지 아니면 연속 주입이든지에 관계없이, VEGF-특이적 길항제 약 1 μg/kg 내지 100 mg/kg (예를 들어, 0.1-20 mg/kg)이 환자에게 투여하기 위한 초기 후보 투여량이다. 상기 언급된 요인에 따라, 전형적인 1일 투여량은 약 1 μg/kg 내지 약 100 mg/kg 또는 그 초과의 범위일 수 있다. 특히 바람직한 투여량은 예를 들어 5 mg/kg, 7.5 mg/kg, 10 mg/kg 및 15 mg/kg을 포함한다. 수일 이상에 걸친 반복 투여의 경우, 치료는 상태에 따라서 상기 기재되거나 당업계에 공지된 방법으로 측정시에 암이 치료될 때까지 지속된다. 그러나, 다른 투여 요법이 유용할 수 있다. 한 예에서, VEGF-특이적 길항제가 항체인 경우, 본 발명의 항체는 약 5 mg/kg 내지 약 15 mg/kg의 용량 범위 (5 mg/kg, 7.5 mg/kg, 10 mg/kg 또는 15 mg/kg를 포함하나 이에 제한되지 않음)로 매주, 2주마다 또는 3주마다 1회 투여된다. 본 발명의 요법의 진행은 통상의 기술 및 검정에 의해 용이하게 모니터링된다.

한 예에서, 항-c-met 항체 (예를 들어, MetMAb)는 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여된다. 또 다른 예에서, 항-c-met 항체 (예를 들어, MetMAb)는 3주마다 15 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 15 마이크로그램/ml 이상의 혈청 최저 농도를 달성하기에 충분한 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 3주 기간에 걸쳐 약 15 mg/kg의 총 용량으로 투여된다.

요법의 지속기간은 의학적으로 나타나는 한 계속되거나 바람직한 치료 효과 (예를 들어, 본원에 기재된 효과)가 달성될 때까지 계속될 것이다.

일부 실시양태에서, 예를 들어, 요법 전 및/또는 요법 동안 및/또는 요법 후에, 본원에서의 환자가 진단 시험에 적용된다. 일반적으로, 진단 시험이 수행되면, 샘플은 치료를 필요로 하는 환자로부터 얻을 수 있다. 대상체에 암이 존재하는 경우, 샘플은 종양 샘플, 또는 다른 생물학적 샘플, 예를 들어 비제한적으로 혈액, 소변, 타액, 복수액, 또는 혈청 및 혈장과 같은 유도체 등을 비롯한 생물학적 유체일 수 있다.

일부 실시양태에서, 바이오마커, 예컨대 ER, PR, HER2, EGFR 및 시토케라틴의 발현 패턴은 특징적인 하위유형으로 유방암을 계층화하는데 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, HER2 상태는 면역조직화학 및/또는 형광 계내 혼성화 (FISH) 검정에 의해 확인될 것이다. 일부 실시양태에서, 하기 중 임의의 것을 만족시키는 환자는 HER2 음성으로 분류될 것이다:

IHC 음성 (IHC 0 또는 1+ 스코어)

IHC 양성 (IHC 2+ 또는 3+ 스코어; 정의는 부위에 따라 달라질 수 있음) 및 FISH 음성 (HER2/CEP17 비 < 1.8 또는 HER2 유전자 카피/핵 < 4)

FISH 음성 (HER2/CEP17 비 < 1.8)

FISH 음성 (HER2 유전자 카피/핵 < 4)

ER 및 PR 상태를 결정할 수 있다.

일부 실시양태에서, 대상체의 암은 c-met를 발현한다. c-met 발현의 결정 방법은 당업계, 예를 들어 IHC 및 FISH에 공지되어 있다. IHC 방법을 이용하여, 각각의 마커에 특이적인 항체 또는 항혈청, 바람직하게는 폴리클로날 항혈청, 가장 바람직하게는 모노클로날 항체가 발현을 검출하기 위해 사용된다. 항체는 예를 들어, 방사성 표지, 형광 표지, 합텐 표지, 예컨대 비오틴 또는 효소, 예컨대 양고추냉이 퍼옥시다제 또는 알칼리성 포스파타제를 사용하는 항체 자체의 직접적인 표지에 의해 검출할 수 있다. 대안적으로, 비표지된 1차 항체를 1차 항체에 특이적인 항혈청, 폴리클로날 항혈청 또는 모노클로날 항체를 포함하는 표지된 2차 항체와 함께 사용한다.

일부 실시양태에서, 대상으로부터의 혈청은 IL8을 발현하고, 일부 실시양태에서 표준 수준 이상의 IL8을 발현한다. 일부 실시양태에서, 대상체로부터의 혈청은 약 150 pg/ml 초과의 IL8을 발현하거나, 또는 일부 실시양태에서 약 50 pg/ml 초과의 IL8을 발현한다. 일부 실시양태에서, 대상체로부터의 혈청은 약 10 pg/ml, 20 pg/ml, 30 pg/ml 또는 그 초과의 IL8을 발현한다. IL8 혈청 농도의 결정 방법은 당업계에 공지되어 있다.

일부 실시양태에서, 대상체로부터의 혈청은 HGF를 발현하고, 일부 실시양태에서 표준 수준 이상의 HGF를 발현한다. 일부 실시양태에서, 대상체로부터의 혈청은 약 5,000, 10,000, 또는 50,000 pg/ml 초과의 HGF를 발현한다.

일부 실시양태에서, 예를 들어 c-met 길항제로 치료받은, 및 일부 실시양태에서는 추가로 VEGF 길항제 및 탁산 (예컨대 파클리탁셀)으로 치료받은 환자의 종양 또는 혈청으로부터의 샘플에서 감소된 mRNA 또는 단백질 발현은, 예를 들어 치료에 대한 반응 또는 c-met 길항제 활성의 예후가 된다. 일부 실시양태에서, 여러 혈관신생 인자, 예컨대 인터류킨 8 (IL8), 혈관 내피 세포 성장 인자 A (VEGFA), EPH 수용체 A2 (EphA2), 안지오포이에틴-유사4 (Angptl4) 및 에프린 B2 (EFNB2)의 감소된 발현은 예를 들어 치료에 대한 반응 또는 c-met 길항제 활성의 예후가 된다. 발현의 감소는 비치료 샘플과 비교하거나, 정상 값을 참고하거나, 또는 c-met 길항제로 치료 (또는 c-met 길항제, VEGF 길항제 및 탁산으로 치료)하기 이전의 환자의 발현 수준과 비교하여 결정할 수 있다.

일부 실시양태에서, 예를 들어 환자의 종양 또는 혈청으로부터의 샘플에서 감소된 HGF 또는 IL8 발현은, 예를 들어 치료에 대한 반응 또는 c-met 길항제 (및 일부 실시양태에서는 c-met 길항제, VEGF 길항제 및 탁산) 활성의 예후가 된다. 한 실시양태에서, 혈청에서 IL8 발현의 50% 초과의 감소 또는 70% 초과의 감소 (예를 들어, 치료 이전의 환자에서의 IL8 발현 수준과 비교하여)는 치료에 대한 반응을 나타낸다. 발현의 감소는 비치료 샘플과 비교하거나, 정상 값을 참고하거나, 또는 c-met 길항제로 치료 (또는 c-met 길항제 및 VEGF 길항제로 치료)하기 이전의 환자의 발현 수준과 비교하여 결정할 수 있다.

일부 실시양태에서, 예를 들어 c-met 길항제로 치료받은, 및 일부 실시양태에서는 추가로 VEGF 길항제로 치료받은 환자의 종양 또는 혈청으로부터의 샘플에서 증가된 mRNA 또는 단백질 발현은, 예를 들어 치료에 대한 반응 또는 c-met 길항제 (및 일부 실시양태에서는 c-met 길항제, VEGF 길항제 및 탁산에 대한 반응) 활성의 예후가 된다. 발현의 감소는 비치료 샘플과 비교하거나, 정상 값을 참고하거나, 또는 c-met 길항제로 치료 (또는 c-met 길항제 및 VEGF 길항제로 치료)하기 이전의 환자의 발현 수준과 비교하여 결정할 수 있다.

일부 실시양태에서, FDG-PET 영상화는 예를 들어 치료에 대한 반응 또는 c-met 길항제 활성의 예후가 된다.

본원에서 샘플은 고정된 샘플, 예를 들어 포르말린 고정된, 파라핀-포매된 (FFPE) 샘플, 또는 동결된 샘플일 수 있다.

제제

본원에 기재된 항체의 제약 제제는 바람직한 정도의 순도를 갖는 상기 항체를 1종 이상의 임의의 제약상 허용되는 담체 (문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)])와 혼합하여 동결건조 제제 또는 수용액의 형태로 제조한다. 제약상 허용되는 담체는 일반적으로 사용되는 투여량 및 농도에서 수용자에게 비독성이고, 완충제, 예컨대 포스페이트, 시트레이트, 및 기타 유기산; 항산화제, 예를 들어 아스코르브산 및 메티오닌; 보존제 (예컨대, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량 (약 10개 잔기 미만) 폴리펩티드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 이뮤노글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신; 모노사카라이드, 디사카라이드 및 기타 탄수화물, 예를 들어 글루코스, 만노스 또는 덱스트린; 킬레이트화제, 예컨대 EDTA; 당, 예컨대 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염 형성 반대이온, 예컨대 나트륨; 금속 착체 (예를 들어, Zn-단백질 착체); 및/또는 비-이온성 계면활성제, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 본원에서 예시적인 제약상 허용되는 담체는 간질성 약물 분산제, 예컨대 가용성 중성-활성 히알루로니다제 당단백질 (sHASEGP), 예를 들어 인간 가용성 PH-20 히알루로니다제 당단백질, 예컨대 rHuPH20 (힐레넥스(HYLENEX)^®, 백스터 인터내셔널, 인크.(Baxter International, Inc.))을 추가로 포함한다. 특정 예시적인 sHASEGP 및 사용 방법 (rHuPH20 포함)은 미국 특허 공보 번호 2005/0260186 및 2006/0104968에 기재되어 있다. 한 측면에서, sHASEGP는 콘드로이티나제와 같은 하나 이상의 추가의 글리코사미노글리카나제와 조합된다.

예시적인 동결건조된 항체 제제는 미국 특허 번호 6,267,958에 기재되어 있다. 수성 항체 제제는 미국 특허 번호 6,171,586 및 WO2006/044908에 기재된 것을 포함하고, 후자의 제제는 히스티딘-아세테이트 완충제를 포함한다.

또한, 본원에서 제제는 치료되는 특정한 적응증에 필요한 하나 초과의 활성 성분, 바람직하게는 서로 유해한 영향을 주지 않는 보완적 활성을 갖는 것을 함유할 수 있다. 이러한 활성 성분은 의도하는 목적에 효과적인 양으로 조합되어 적합하게 존재한다.

한 실시양태에서, 베바시주맙은 치료 용도를 위해 4 ml 또는 16 ml의 베바시주맙을 전달하기 위한 100 mg 및 400 mg 보존제-무함유 1회용 바이알에 제공된다 (25 mg/ml). 100 mg 생성물은 240 mg α,α-트레할로스 이수화물, 23.2 mg 인산나트륨 (일염기성, 일수화물), 4.8 mg 인산나트륨 (이염기성, 무수물), 1.6 mg 폴리소르베이트 20, 및 주사용수, USP 중에 제제화된다. 400 mg 생성물은 960 mg α,α-트레할로스 이수화물, 92.8 mg 인산나트륨 (일염기성, 일수화물), 19.2 mg 인산나트륨 (이염기성, 무수물), 6.4 mg 폴리소르베이트 20, 및 주사용수, USP 중에 제제화된다. 또한, 베바시주맙에 대한 라벨을 참조한다. 베바시주맙은 현재 상업적으로 입수가능하다. 본원의 제제는 또한 치료할 특정한 적응증에 필요한 하나 초과의 활성 화합물, 바람직하게는 서로 유해한 영향을 주지 않는 보완적 활성을 갖는 것을 함유할 수 있다. 이러한 분자는 의도된 목적에 효과적인 양으로 조합되어 적합하게 존재한다.

활성 성분은 예를 들어 콜로이드성 약물 전달 시스템 (예를 들어, 리포솜, 알부민 마이크로스피어, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐)에서 또는 마크로에멀젼에서 코아세르베이션 기술 또는 계면 중합에 의해 제조되는 마이크로캡슐, 예를 들어 각각 히드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐 내에 봉입될 수 있다. 이러한 기술은 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)]에 개시되어 있다.

지속-방출 제제를 제조할 수 있다. 지속-방출 제제의 적합한 예는 항체를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함하고, 이 매트릭스는 성형품, 예를 들어 필름 또는 마이크로캡슐의 형태이다.

생체내 투여에 사용되는 제제는 일반적으로 멸균되어야 한다. 멸균은 예를 들어 멸균 여과막을 통한 여과에 의해 쉽게 달성할 수 있다.

효능

본 발명의 치료법의 주요 이점은 유의한 독성이나 역효과를 유발하지 않고 인간 환자에서 현저한 항암 효과를 일으켜 환자가 치료로부터 전반적으로 이점을 얻을 수 있다는 것이다. 본 발명의 치료 효능은 암 치료의 평가에 통상적으로 사용되는 다양한 종점, 예를 들어 (비제한적으로) 종양 퇴행, 종양 중량 또는 크기 수축, 진행까지의 시간, 생존 기간, 무진행 생존, 전반적인 반응률, 반응의 지속기간 및 삶의 질로 측정될 수 있다. 본 발명의 치료제는 원발성 종양의 수축 없이도 전이성 확산을 억제할 수 있거나, 또는 단순히 종양증식억제 효과를 발휘할 수도 있다. 본 발명에 사용되는 항혈관신생제가 종양 혈관계를 표적으로 하고 반드시 신생물성 세포 자체를 표적으로 하는 것은 아니기 때문에, 이들은 특징적인 클래스의 항암 약물을 나타내고, 따라서 약물에 대한 임상 반응의 특징적인 척도 및 정의를 필요로 할 수 있다. 예를 들어, 2차원 분석에서 50% 초과의 종양 수축이 반응을 선언하는 표준 컷-오프로 사용될 수 있다. 따라서, 예를 들어 혈관신생의 혈장 또는 소변 마커의 측정 및 방사선 영상화를 통한 반응의 측정을 포함하는, 요법의 효능을 결정하는 새로운 접근법을 임의로 이용할 수 있다.

항체 제조

추가의 측면에서, 상기 임의의 실시양태에 따른 항체는 하기 섹션 1-7에 기재된 바와 같은 임의의 특징을 단독으로 또는 조합하여 포함할 수 있다:

1. 항체 친화도

특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 ≤ 1 μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM 또는 ≤ 0.001 nM (예를 들어, 10^-8 M 이하, 예를 들어 10^-8 M 내지 10^-13 M, 예를 들어 10^-9 M 내지 10^-13 M)의 해리 상수 (Kd)를 갖는다.

한 실시양태에서, Kd는 하기 검정에서 기재된 바와 같이 관심 항체의 Fab 버전 및 그의 항원을 사용하여 수행된 방사성표지된 항원 결합 검정 (RIA)에 의해 측정된다. 항원에 대한 Fab의 용액 결합 친화도는 비표지 항원의 적정 시리즈의 존재 하에 Fab를 최소 농도의 (¹²⁵I)-표지 항원과 평형화시킨 다음, 결합된 항원을 항-Fab 항체-코팅된 플레이트로 포획함으로써 측정된다 (예를 들어, 문헌 [Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881(1999)] 참조). 검정 조건을 확립하기 위해, 마이크로타이터(MICROTITER)^® 멀티-웰 플레이트 (써모 사이언티픽(Thermo Scientific))를 50 mM 탄산나트륨 (pH 9.6) 중의 5 μg/ml의 포획 항-Fab 항체 (카펠 랩스(Cappel Labs))로 밤새 코팅한 후, PBS 중의 2% (w/v) 소 혈청 알부민으로 2 내지 5시간 동안 실온 (대략 23℃)에서 차단하였다. 비-흡착 플레이트 (눈크 #269620)에서는 100 pM 또는 26 pM [¹²⁵I]-항원을 관심 Fab의 연속 희석물과 혼합한다 (예를 들어, 문헌 [Presta et al., Cancer Res. 57:4593-4599 (1997)]의 항-VEGF 항체, Fab-12의 평가와 일치함). 이어서, 관심 Fab를 밤새 인큐베이션하지만, 평형에 도달하는 것을 확실하게 하기 위해 더 오랜 시간 (예를 들어, 약 65시간) 동안 계속 인큐베이션할 수 있다. 그 후, 혼합물을 포획 플레이트로 옮겨 실온에서 (예를 들어, 1시간 동안) 인큐베이션한다. 이어서, 용액을 제거하고, 플레이트를 PBS 중의 0.1% 폴리소르베이트 20 (트윈-20^®)으로 8회 세척하였다. 플레이트를 건조시킬 때, 150 μl/웰의 섬광제 (마이크로신트-20(MICROSCINT-20)™; 팩커드(Packard))를 첨가하고, 플레이트를 탑카운트(TOPCOUNT)™ 감마 계수기 (팩커드)로 10분 동안 계수한다. 최대 결합의 20% 이하를 제공하는 각 Fab의 농도를 선택하여 경쟁 결합 검정에 사용한다.

또 다른 실시양태에 따르면, Kd는 예를 들어 약 10의 반응 단위 (RU)로 고정된 항원 CM5 칩을 사용하여 25℃에서 비아코어^®-2000 또는 비아코어^®-3000 (비아코어, 인크., 뉴저지주 피스카타웨이)을 사용하는 표면 플라즈몬 공명 검정을 사용하여 측정된다. 간략하게, 카르복시메틸화 덱스트란 바이오센서 칩 (CM5, 비아코어, 인크.)을 공급업체의 지침에 따라 N-에틸-N'-(3-디메틸아미노프로필)-카르보디이미드 히드로클로라이드 (EDC) 및 N-히드록시숙신이미드 (NHS)로 활성화시킨다. 항원을 10 mM 아세트산나트륨 (pH 4.8)을 사용하여 5 μg/ml (약 0.2 μM)로 희석한 후에 커플링된 단백질 대략 10 반응 단위 (RU)가 달성되도록 5 μl/분의 유량으로 주사한다. 항원 주사 후, 미반응 기를 차단하기 위해 1M 에탄올아민을 주입한다. 동역학적 측정을 위해, Fab의 2배 연속 희석물 (0.78 nM 내지 500 nM)을 약 25 μl/분의 유량으로 25℃에서 0.05% 폴리소르베이트 20 (트윈-20™) 계면활성제를 함유하는 PBS (PBST) 내에 주사한다. 간단한 일-대-일 랭뮤어 결합 모델 (비아코어^® 평가 소프트웨어 버전 3.2)을 이용하여 회합 및 해리 센서그램을 동시에 피팅시켜 회합 속도 (k_on) 및 해리 속도 (k_off)를 계산한다. 평형 해리 상수 (Kd)는 k_off/k_on의 비로 계산한다. 예를 들어, 문헌 [Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999)]을 참조한다. 상기 표면-플라즈몬 공명 검정에 의한 온-레이트가 10⁶ M^-1s^-1을 초과하는 경우, 온-레이트는 분광측정계, 예컨대 정지-유동 설치 분광광도계 (아비브 인스트루먼츠(Aviv Instruments)) 또는 교반 큐벳이 장착된 8000-시리즈 SLM-아민코(AMINCO)™ 분광광도계 (써모스펙트로닉(ThermoSpectronic))에서 측정할 때 증가하는 농도의 항원의 존재 하에 PBS (pH 7.2) 중 20 nM의 항-항원 항체 (Fab 형태)의 25℃에서의 형광 방출 강도 (여기 = 295 nm, 방출 = 340 nm, 16 nm 통과 대역)의 증가 또는 감소를 측정하는 형광 켄칭 기술을 이용하여 결정할 수 있다.

2. 항체 단편

특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 항체 단편이다. 항체 단편은 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')₂, Fv, 1-아암 항체 및 scFv 단편, 및 하기 기재된 다른 단편을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 특정 항체 단편의 검토를 위해, 문헌 [Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003)]을 참조한다. scFv 단편의 검토를 위해, 예를 들어, 문헌 [Pluckthuen, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994)]; 또한 WO 93/16185; 및 미국 특허 번호 5,571,894 및 5,587,458을 참조한다. 샐비지 수용체 결합 에피토프 잔기를 포함하고 증가된 생체내 반감기를 갖는 Fab 및 F(ab')₂ 단편의 논의에 대해, 미국 특허 번호 5,869,046을 참조한다. 다른 1가 항체 형태는 예를 들어 WO2007048037, WO2008145137, WO2008145138 및 WO2007059782에 기재되어 있다. 1-아암 항체는 예를 들어 WO2005/063816에 기재되어 있다. 디아바디는 2가 또는 이중특이적일 수 있는 2개의 항원-결합 부위를 갖는 항체 단편이다. 예를 들어, EP 404,097; WO 1993/01161; 문헌 [Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003); 및 Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)]을 참조한다. 트리아바디 및 테트라바디는 또한 문헌 [Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)]에 기재되어 있다.

단일-도메인 항체는 항체의 중쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부 또는 경쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부를 포함하는 항체 단편이다. 특정 실시양태에서, 단일-도메인 항체는 인간 단일-도메인 항체이다 (도만티스, 인크.(Domantis, Inc.), 매사추세츠주 월섬; 예를 들어 미국 특허 번호 6,248,516 B1 참조).

항체 단편은 본원에 기재된 바와 같은 무손상 항체의 단백질분해적 소화 뿐만 아니라 재조합 숙주 세포 (예를 들어, 이. 콜라이(E. coli) 또는 파지)에 의한 생산을 포함하나 이에 제한되지 않는 다양한 기술에 의해 제조될 수 있다.

3. 키메라 및 인간화 항체

특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 키메라 항체이다. 특정 키메라 항체는 예를 들어 미국 특허 번호 4,816,567; 및 문헌 [Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)]에 기재되어 있다. 한 예에서, 키메라 항체는 비-인간 가변 영역 (예를 들어, 마우스, 래트, 햄스터, 토끼 또는 비-인간 영장류, 예컨대 원숭이로부터 유래된 가변 영역) 및 인간 불변 영역을 포함한다. 추가의 예에서, 키메라 항체는 클래스 또는 서브클래스가 모 항체의 것으로부터 변화된 "클래스 스위칭" 항체이다. 키메라 항체는 그의 항원-결합 단편을 포함한다.

특정 실시양태에서, 키메라 항체는 인간화 항체이다. 전형적으로, 비-인간 항체는 모 비-인간 항체의 특이성 및 친화도를 유지하면서 인간에 대한 면역원성이 감소하도록 인간화된다. 일반적으로, 인간화 항체는 CDR, 예를 들어 CDR (또는 그의 부분)이 비-인간 항체로부터 유래되고, FR (또는 그의 부분)이 인간 항체 서열로부터 유래된 하나 이상의 가변 도메인을 포함한다. 인간화 항체는 또한 임의로 인간 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 것이다. 일부 실시양태에서, 인간화 항체의 일부 FR 잔기는, 예를 들어 항체 특이성 또는 친화도를 복원하거나 또는 향상시키기 위해, 비-인간 항체 (예를 들어, CDR 잔기가 유래된 항체)로부터의 상응하는 잔기로 치환된다.

인간화 항체 및 그의 제조 방법은 예를 들어 문헌 [Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)]에서 검토되었고, 예를 들어 문헌 [Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); Queen et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989)]; 미국 특허 번호 5,821,337, 7,527,791, 6,982,321, 및 7,087,409; [Kashmiri et al., Methods 36:25-34 (2005)] (SDR (a-CDR) 그라프팅 기재); [Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991)] ("리서페이싱" 기재); [Dall'Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005)] ("FR 셔플링" 기재); 및 [Osbourn et al., Methods 36:61-68 (2005) 및 Klimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000)] (FR 셔플링에 대한 "가이드 선택" 접근법 기재)에 추가로 기재되어 있다.

인간화에 사용될 수 있는 인간 프레임워크 영역은 "최적-적합" 방법을 사용하여 선택된 프레임워크 영역 (예를 들어, 문헌 [Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993)] 참조); 경쇄 또는 중쇄 가변 영역의 특정한 하위군의 인간 항체의 컨센서스 서열로부터 유래된 프레임워크 영역 (예를 들어, 문헌 [Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); 및 Presta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993)] 참조); 인간 성숙 (체세포 성숙) 프레임워크 영역 또는 인간 배선 프레임워크 영역 (예를 들어, 문헌 [Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)] 참조); 및 FR 라이브러리 스크리닝으로부터 유래된 프레임워크 영역 (예를 들어, 문헌 [Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997) 및 Rosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)] 참조)을 포함하나 이에 제한되지 않는다.

4. 인간 항체

특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 인간 항체이다. 인간 항체는 다양한 당업계의 공지된 기술을 이용하여 생산될 수 있다. 인간 항체는 일반적으로 문헌 [van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001) 및 Lonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008)]에 기재되어 있다.

인간 항체는 항원 챌린지에 반응하여 인간 가변 영역을 갖는 무손상 인간 항체 또는 무손상 항체를 생산하도록 변형된 트랜스제닉 동물에게 면역원을 투여하여 제조할 수 있다. 이러한 동물은 전형적으로 내인성 이뮤노글로불린 로커스를 대체하거나 또는 염색체외에 존재하거나 동물의 염색체로 무작위적으로 통합된 인간 이뮤노글로불린 로커스의 전부 또는 일부를 함유한다. 이러한 트랜스제닉 마우스에서, 내인성 이뮤노글로불린 로커스는 일반적으로 불활성화된다. 트랜스제닉 동물로부터 인간 항체를 수득하는 방법의 검토를 위해, 문헌 [Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005)]을 참조한다. 또한, 예를 들어 미국 특허 번호 6,075,181 및 6,150,584 (제노마우스(XENOMOUSE)^TM 기술 기재); 미국 특허 번호 5,770,429 (HuMab^® 기술 기재); 미국 특허 번호 7,041,870 (K-M 마우스(K-M MOUSE)^® 기술 기재), 및 미국 특허 출원 공보 번호 US 2007/0061900 (벨로시마우스(VelociMouse)^® 기술 기재)을 참조한다. 이러한 동물에 의해 생성된 무손상 항체로부터의 인간 가변 영역은 예를 들어 상이한 인간 불변 영역과 조합시켜 추가로 변형될 수 있다.

인간 항체는 또한 하이브리도마-기반의 방법에 의해 제조될 수 있다. 인간 모노클로날 항체의 생산을 위한 인간 골수종 및 마우스-인간 이종골수종 세포주가 기재되어 있다. (예를 들어, 문헌 [Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987); 및 Boerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991)] 참조.) 또한, 인간 B-세포 하이브리도마 기술을 통해 생성된 인간 항체가 문헌 [Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)]에 기재되어 있다. 추가의 방법은, 예를 들어 미국 특허 번호 7,189,826 (하이브리도마 세포주로부터의 모노클로날 인간 IgM 항체 생산 기재) 및 문헌 [Ni, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (2006)] (인간-인간 하이브리도마 기재)에 기재된 것을 포함한다. 인간 하이브리도마 기술 (트리오마(Trioma) 기술)은 또한 문헌 [Vollmers and Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005) 및 Vollmers and Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185-91 (2005)]에 기재되어 있다.

인간 항체는 또한 인간-유래 파지 디스플레이 라이브러리로부터 선택된 Fv 클론 가변 도메인 서열을 단리하여 생성될 수 있다. 이어서, 이러한 가변 도메인 서열은 바람직한 인간 불변 도메인과 조합될 수 있다. 항체 라이브러리로부터 인간 항체를 선택하기 위한 기술은 아래 기재된다.

5. 라이브러리-유래 항체

본 발명의 항체는 바람직한 활성 또는 활성들을 갖는 항체에 대해 조합 라이브러리를 스크리닝하여 단리될 수 있다. 예를 들어, 파지 디스플레이 라이브러리를 생성하고, 바람직한 결합 특성을 갖는 항체에 대하여 이러한 라이브러리를 스크리닝하는 다양한 방법이 당업계에 공지되어 있다. 이러한 방법은 예를 들어 문헌 [Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001)]에서 검토되고, 예를 들어 문헌 [McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks and Bradbury, in Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004); 및 Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004)]에 추가로 기재되어 있다.

특정 파지 디스플레이 방법에서, VH 및 VL 유전자의 레퍼토리는 개별적으로 폴리머라제 연쇄 반응 (PCR)에 의해 클로닝되고, 파지 라이브러리에 무작위적으로 재조합되며, 이는 이어서 문헌 [Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994)]에 기재된 바와 같이 항원-결합 파지에 대해 스크리닝될 수 있다. 파지는 전형적으로 항체 단편을 단일-쇄 Fv (scFv) 단편 또는 Fab 단편으로 디스플레이한다. 면역화된 공급원으로부터의 라이브러리는 하이브리도마를 구축할 필요 없이 면역원에 대한 고-친화도 항체를 제공한다. 대안적으로, 나이브 레퍼토리를 클로닝 (예를 들어, 인간으로부터)하여, 문헌 [Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993)]에 기재된 바와 같이 어떠한 면역화도 없이 광범위한 비-자가 및 또한 자가 항원에 대한 항체의 단일 공급원을 제공할 수 있다. 최종적으로, 문헌 [Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992)]에 기재된 바와 같이, 줄기 세포로부터의 재배열되지 않은 V-유전자 절편을 클로닝하고, 고도로 가변성인 CDR3 영역을 코딩하고 시험관내 재배열이 달성되도록 무작위 서열을 함유하는 PCR 프라이머를 사용함으로써, 나이브 라이브러리를 또한 합성적으로 제조할 수 있다. 인간 항체 파지 라이브러리를 기재하고 있는 특허 공보는 예를 들어 미국 특허 번호 5,750,373, 및 미국 특허 공보 번호 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936 및 2009/0002360을 포함한다.

인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체 또는 항체 단편은 본원에서 인간 항체 또는 인간 항체 단편으로 여겨진다.

6. 다중특이적 항체

특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 다중특이적 항체, 예를 들어 이중특이적 항체이다. 다중특이적 항체는 적어도 2개의 상이한 부위에 대해 결합 특이성을 갖는 모노클로날 항체이다. 특정 실시양태에서, 결합 특이성 중 하나는 항원에 대한 것이고, 다른 하나는 임의의 다른 항원에 대한 것이다. 특정 실시양태에서, 이중특이적 항체는 항원의 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있다. 이중특이적 항체는 또한 항원을 발현하는 세포에 세포독성제를 위치시키는데 사용될 수 있다. 이중특이적 항체는 전장 항체 또는 항체 단편으로서 제조될 수 있다.

다중특이적 항체를 제조하기 위한 기술은 상이한 특이성을 갖는 2개의 이뮤노글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 재조합 공동-발현 (문헌 [Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983))], WO 93/08829, 및 [Traunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991)] 참조), 및 "노브-인-홀(knob-in-hole)" 조작 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,731,168 참조)을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 다중특이적 항체는 또한 항체 Fc-이종이량체 분자를 제조하기 위한 정전기 스티어링 효과의 조작 (WO 2009/089004A1); 2개 이상의 항체 또는 단편의 가교 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,676,980, 및 문헌 [Brennan et al., Science, 229: 81 (1985)] 참조); 이중특이적 항체를 생산하기 위한 류신 지퍼의 사용 (예를 들어, 문헌 [Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992)] 참조); 이중특이적 항체 단편의 제조를 위한 "디아바디" 기술의 사용 (예를 들어, 문헌 [Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)] 참조); 및 단일-쇄 Fv (sFv) 이량체의 사용 (예를 들어, 문헌 [Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)] 참조); 및 예를 들어 문헌 [Tutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991)]에 기재된 바와 같은 삼중특이적 항체의 제조에 의해 제조될 수 있다.

"옥토퍼스 항체"를 비롯하여, 3개 이상의 기능적 항원 결합 부위를 갖는 조작된 항체가 또한 본원에 포함된다 (예를 들어, US 2006/0025576A1 참조).

본원의 항체 또는 단편은 또한 항원 뿐만 아니라 또 다른 상이한 항원에 결합하는 항원 결합 부위를 포함하는 "이중 작용 FAb" 또는 "DAF"를 포함한다 (예를 들어, US 2008/0069820 참조).

7. 항체 변이체

특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체의 아미노산 서열 변이체가 고려된다. 예를 들어, 항체의 결합 친화도 및/또는 다른 생물학적 특성을 개선시키는 것이 바람직할 수 있다. 항체의 아미노산 서열 변이체는 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열에 적절한 변경을 도입하거나 펩티드 합성에 의해 제조할 수 있다. 이러한 변형은 예를 들어 항체의 아미노산 서열 내 잔기의 결실 및/또는 삽입 및/또는 치환을 포함한다. 최종 구축물이 바람직한 특성, 예를 들어 항원-결합을 보유하도록, 최종 구축물에 도달하기 위해 결실, 삽입 및 치환의 임의의 조합이 이루어질 수 있다.

치환, 삽입 및 결실 변이체

특정 실시양태에서, 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 항체 변이체가 제공된다. 치환 돌연변이유발을 위한 관심 부위는 CDR 및 FR을 포함한다. 보존적 치환은 "보존적 치환"의 표제 하에 표 1에 제시된다. 보다 더 실질적인 변화는 "예시적인 치환"의 표제 하의 표 1에 아미노산 측쇄 클래스에 관하여 아래 추가로 기재된 바와 같이 제공된다. 아미노산 치환은 관심 항체에 도입되고, 생성물은 바람직한 활성, 예를 들어 유지/개선된 항원 결합, 감소된 면역원성 또는 개선된 ADCC 또는 CDC에 대해 스크리닝될 수 있다.

아미노산은 공통적인 측쇄 특성에 따라 분류될 수 있다:

(1) 소수성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile;

(2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;

(3) 산성: Asp, Glu;

(4) 염기성: His, Lys, Arg;

(5) 사슬 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro;

(6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.

비-보존적 치환은 이들 클래스 중의 하나의 구성원을 또 다른 클래스로 교환하는 것을 수반할 것이다.

치환 변이체의 한 가지 유형은 모 항체 (예를 들어, 인간화 또는 인간 항체)의 하나 이상의 초가변 영역 잔기를 치환하는 것을 포함한다. 일반적으로, 추가 연구를 위해 선택된 생성된 변이체(들)는 모 항체와 비교하여 특정 생물학적 특성 (예를 들어, 상승된 친화도, 감소된 면역원성)의 변형 (예를 들어, 개선)을 가질 것이고/거나 모 항체의 특정 생물학적 특성을 실질적으로 유지할 것이다. 예시적인 치환 변이체는 예를 들어 본원에 기재된 것과 같은 파지 디스플레이-기반의 친화도 성숙 기술을 이용하여 편리하게 생성될 수 있는 친화도 성숙 항체이다. 간략하게, 하나 이상의 CDR 잔기가 돌연변이화되고, 변이체 항체가 파지 상에 디스플레이되고, 특정한 생물학적 활성 (예를 들어, 결합 친화도)에 대해 스크리닝된다.

변경 (예를 들어, 치환)은 예를 들어 항체 친화도를 개선시키기 위해 CDR에서 이루어질 수 있다. 이러한 변경은 CDR "핫스팟", 즉 체세포 성숙 과정 (예를 들어, 문헌 [Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008] 참조), 및/또는 SDR (a-CDR) 동안 결합 친화도에 대해 시험된 생성된 변이체 VH 또는 VL로 높은 빈도에서 돌연변이화를 수행하는 코돈에 의해 코딩되는 잔기에서 이루어질 수 있다. 2차 라이브러리로부터의 구축 및 재선택에 의한 친화도 성숙은 예를 들어 문헌 [Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001)]에 기재되어 있다. 친화도 성숙의 일부 실시양태에서, 다양성은 임의의 다양한 방법 (예를 들어, 오류-유발 PCR, 쇄 셔플링, 또는 올리고뉴클레오티드-유도된 돌연변이유발)에 의한 성숙을 위해 선택된 가변 유전자로 도입된다. 이어서, 2차 항체를 생성한다. 이어서, 바람직한 친화도를 갖는 임의의 항체 변이체를 확인하게 위해 라이브러리를 스크리닝한다. 다양성을 도입하는 다른 방법은 CDR-지시된 접근법과 관련되며, 여기서 여러 CDR 잔기 (예를 들어, 한 번에 4 내지 6개 잔기)가 무작위화된다. 항원 결합과 관련된 CDR 잔기는 예를 들어 알라닌 스캐닝 돌연변이유발 또는 모델링을 이용하여 구체적으로 확인될 수 있다. 특히, CDR-H3 및 CDR-L3이 종종 표적화된다.

특정 실시양태에서, 치환, 삽입 또는 결실은 이러한 변경이 항원에 결합하는 항체의 능력을 실질적으로 감소시키지 않는 한, 하나 이상의 CDR 내에서 일어날 수 있다. 예를 들어, 결합 친화도를 실질적으로 감소시키지 않는 보존적 변경 (예를 들어, 본원에 제공된 바와 같은 보존적 치환)이 CDR에서 이루어질 수 있다. 이러한 변경은 CDR "핫스팟" 또는 SDR의 외부일 수 있다. 상기에서 제공된 변이체 VH 및 VL 서열의 특정 실시양태에서, 각각의 CDR은 변경되지 않거나, 또는 1, 2 또는 3개 이하의 아미노산 치환을 함유한다.

문헌 [Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085]에 기재된 바와 같이, 돌연변이유발을 위해 표적화될 수 있는 항체의 잔기 또는 영역의 확인에 유용한 방법은 "알라닌 스캐닝 돌연변이유발"이라고 지칭된다. 이 방법에서, 잔기 또는 표적 잔기들의 군이 확인되고 (예를 들어, 하전된 잔기, 예컨대 arg, asp, his, lys 및 glu), 중성 또는 음으로 하전된 아미노산 (예를 들어, 알라닌 또는 폴리알라닌)으로 대체되어 항체와 항원과의 상호작용에 영향을 미치는지 여부를 결정한다. 추가의 치환은 초기 치환에 대한 기능적 감수성을 입증하는 아미노산 위치에 도입될 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 항체와 항원 사이의 접촉점을 확인하기 위해 항원-항체 복합체의 결정 구조를 분석하는 것이 유익할 수 있다. 이러한 접촉 잔기 및 이웃하는 잔기는 치환을 위한 후보로 표적화되거나 또는 제거될 수 있다. 변이체는 그들이 바람직한 특성을 함유하는지 여부를 결정하기 위해 스크리닝될 수 있다.

아미노산 서열 삽입은 길이 범위가 1개의 잔기 내지 100개 이상의 잔기를 함유하는 폴리펩티드에 이르는 아미노- 및/또는 카르복실-말단 융합, 뿐만 아니라 단일 또는 다수 아미노산 잔기의 서열내 삽입을 포함한다. 말단 삽입의 예는 N-말단 메티오닐 잔기를 갖는 항체를 포함한다. 항체 분자의 다른 삽입 변이체는 효소 (예를 들어, ADEPT의 경우) 또는 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 폴리펩티드가 상기 항체의 N- 또는 C-말단에 융합된 것을 포함한다.

글리코실화 변이체

특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 항체가 글리코실화되는 정도를 증가시키거나 감소시키도록 변경된다. 항체에 대한 글리코실화 부위의 부가 또는 결실은 하나 이상의 글리코실화 부위가 생성되거나 제거되도록 아미노산 서열을 변경함으로써 편리하게 달성될 수 있다.

항체가 Fc 영역을 포함하는 경우, 이에 부착된 탄수화물이 변경될 수 있다. 포유동물 세포에 의해 생산된 천연 항체는 전형적으로 Fc 영역의 CH2 도메인의 Asn297에 대한 N-연결에 의해 일반적으로 부착되는 분지형 이분지 올리고사카라이드를 포함한다. 예를 들어, 문헌 [Wright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997)]을 참조한다. 올리고사카라이드는 다양한 탄수화물, 예를 들어 만노스, N-아세틸 글루코사민 (GlcNAc), 갈락토스 및 시알산 뿐만 아니라 이분지 올리고사카라이드 구조의 "줄기" 내의 GlcNAc에 부착된 푸코스를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체 내의 올리고사카라이드의 변형은 특정 개선된 특성을 갖는 항체 변이체를 제조하기 위해 이루어질 수 있다.

한 실시양태에서, Fc 영역에 (직접 또는 간접적으로) 부착된 푸코스가 결여된 탄수화물 구조를 갖는 항체 변이체가 제공된다. 예를 들어, 이러한 항체에서 푸코스의 양은 1% 내지 80%, 1% 내지 65%, 5% 내지 65% 또는 20% 내지 40%일 수 있다. 푸코스의 양은 예를 들어 WO 2008/077546에 기재된 바와 같이 MALDI-TOF 질량 분광측정법에 의해 측정된 Asn 297에 부착된 모든 당구조물 (예를 들어, 복합체, 하이브리드 및 고만노스 구조물)의 합과 비교하여 Asn297에서 당 쇄 내의 푸코스의 평균적인 양을 계산하여 결정된다. Asn297은 Fc 영역의 약 위치 297 (Fc 영역 잔기의 Eu 넘버링)에 위치한 아스파라긴 잔기를 나타내지만; Asn297은 또한 항체의 부가적 서열 변형에 의해 위치 297의 약 ±3 아미노산 상류 또는 하류, 즉 위치 294와 300 사이에 위치할 수 있다. 이러한 푸코실화 변이체는 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 공보 번호 US 2003/0157108 (Presta, L.); US 2004/0093621 (교와 핫꼬 고교 캄파니, 리미티드(Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd))를 참조한다. "탈푸코실화" 또는 "푸코스-결핍" 항체 변이체에 대한 문헌의 예는 하기를 포함한다: US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO2005/053742; WO2002/031140; 문헌 [Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)]. 탈푸코실화 항체를 생산할 수 있는 세포주의 예는 단백질 푸코실화가 결핍된 Lec13 CHO 세포 (문헌 [Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)]; 미국 특허 출원 번호 US 2003/0157108 A1 (Presta, L); 및 WO 2004/056312 A1 (Adams et al., 특히 실시예 11)), 및 녹아웃 세포주, 예컨대 알파-1,6-푸코실트랜스퍼라제 유전자, FUT8, 녹아웃 CHO 세포 (예를 들어, 문헌 [Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006)]; 및 WO2003/085107 참조)가 포함된다.

이등분된 올리고사카라이드를 갖는 항체 변이체가 추가로 제공되는데, 예를 들어 항체의 Fc 영역에 부착된 이분지 올리고사카라이드가 GlcNAc에 의해 이등분된다. 이러한 항체 변이체는 푸코실화가 감소될 수 있고/거나 ADCC 기능이 개선될 수 있다. 이러한 항체 변이체의 예가, 예를 들어 WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.); 미국 특허 번호 6,602,684 (Umana et al.); 및 US 2005/0123546 (Umana et al.)에 기재되어 있다. Fc 영역에 부착된 올리고사카라이드 내에 적어도 1개의 갈락토스 잔기를 갖는 항체 변이체가 또한 제공된다. 이러한 항체 변이체는 개선된 CDC 기능을 가질 수 있다. 이러한 항체 변이체는 예를 들어 WO 1997/30087 (Patel et al.); WO 1998/58964 (Raju, S.); 및 WO 1999/22764 (Raju, S.)에 기재되어 있다.

Fc 영역 변이체

특정 실시양태에서, 하나 이상의 아미노산 변형이 본원에 제공된 항체의 Fc 영역에 도입되어 Fc 영역 변이체가 생성될 수 있다. Fc 영역 변이체는 하나 이상의 아미노산 위치에서 아미노산 변형 (예를 들어, 치환)을 포함하는 인간 Fc 영역 서열 (예를 들어, 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 Fc 영역)을 포함할 수 있다.

특정 실시양태에서, 본 발명은 모든 이펙터 기능은 아니지만, 일부 이펙터 기능을 보유하고 있으므로, 생체내에서의 항체의 반감기가 중요하긴 하지만 특정의 이펙터 기능 (예컨대 보체 및 ADCC)이 불필요하거나 해로운 많은 적용 분야에 대한 바람직한 후보가 되는 항체 변이체를 고려한다. CDC 및/또는 ADCC 활성의 감소/고갈을 확인하기 위해 시험관내 및/또는 생체내 세포독성 검정을 수행할 수 있다. 예를 들어, 항체에 FcγR 결합은 없지만 (따라서, 아마도 ADCC 활성이 결여될 것임), FcRn 결합 능력은 보유하고 있는 것을 확인하기 위해서 Fc 수용체 (FcR) 결합 검정을 수행할 수 있다. ADCC를 매개하는 주요 세포인 NK 세포는 FcγRIII만을 발현하는 반면에, 단핵구는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII을 발현한다. 조혈 세포상에서의 FcR 발현은 문헌 [Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)]의 페이지 464, 표 3에 요약되어 있다. 관심 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위한 시험관내 검정의 비제한적 예가 미국 특허 번호 미국 특허 번호 5,500,362 (예를 들어, 문헌 [Hellstrom, I. et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986) 및 Hellstrom, I et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985)] 참조); 5,821,337 (문헌 [Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)] 참조)에 기재되어 있다. 대안적으로, 비-방사성 검정 방법을 이용할 수 있다 (예를 들어, 유동 세포측정법을 위한 악티(ACTI)™ 비-방사성 세포독성 검정 (셀테크놀로지, 인크.(CellTechnology, Inc.), 캘리포니아주 마운틴 뷰); 및 사이토톡스(CytoTox) 96^® 비-방사성 세포독성 검정 (프로메가(Promega), 위스콘신주 매디슨) 참조). 이러한 검정에 유용한 이펙터 세포는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 및 자연 킬러 (NK) 세포를 포함한다. 대안적으로 또는 추가로, 관심 분자의 ADCC 활성은 생체내에서, 예를 들어 문헌 [Clynes et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998)]에 개시된 바와 같은 동물 모델에서 평가할 수 있다. 또한, C1q 결합 검정을 수행하여, 항체가 C1q에 결합할 수 없고, 따라서 CDC 활성이 결여되었는지를 확인할 수 있다. 예를 들어, WO 2006/029879 및 WO 2005/100402의 C1q 및 C3c 결합 ELISA를 참조한다. 보체 활성화를 평가하기 위해 CDC 검정을 수행할 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M.S. et al., Blood 101:1045-1052 (2003); 및 Cragg, M.S. and M.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)] 참조). FcRn 결합 및 생체내 제거율/반감기 결정은 또한 당업계에 공지된 방법을 이용하여 수행할 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Petkova, S.B. et al., Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)] 참조).

감소된 이펙터 기능을 갖는 항체는 Fc 영역 잔기 238, 265, 269, 270, 297, 327 및 329 중 하나 이상의 치환을 갖는 것을 포함한다 (미국 특허 번호 6,737,056). 이러한 Fc 돌연변이체는 아미노산 위치 265, 269, 270, 297 및 327 중 2개 이상에 치환을 갖는 Fc 돌연변이체 (잔기 265 및 297의 알라닌으로의 치환을 갖는, 소위 "DANA" Fc 돌연변이체 포함)를 포함한다 (미국 특허 번호 7,332,581).

FcR에 대해 개선되거나 또는 감소된 결합을 갖는 특정 항체 변이체가 기재된다. (예를 들어, 미국 특허 번호 6,737,056; WO 2004/056312, 및 문헌 [Shields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)] 참조.)

특정 실시양태에서, 항체 변이체는 ADCC를 개선시키는 하나 이상의 아미노산 치환, 예를 들어 Fc 영역의 위치 298, 333 및/또는 334 (잔기의 EU 넘버링)에서의 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다.

일부 실시양태에서, 예를 들어 미국 특허 번호 6,194,551, WO 99/51642, 및 문헌 [Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)]에 기재된 바와 같이, 변경된 (즉, 개선된 또는 감소된) C1q 결합 및/또는 보체 의존성 세포독성 (CDC)을 나타내는 변경들이 Fc 영역에서 만들어진다.

모체 IgG를 태아에게 전달하는 것을 담당하는 신생아 Fc 수용체 (FcRn) (문헌 [Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) 및 Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)])에의 결합이 개선되고 반감기가 증가된 항체가 US2005/0014934A1 (Hinton et al.)에 기재되어 있다. 이들 항체는 FcRn에의 Fc 영역의 결합을 개선시키는 하나 이상의 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다. 이러한 Fc 변이체는 Fc 영역 잔기: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 또는 434 중 하나 이상에서의 치환, 예를 들어 Fc 영역 잔기 434의 치환 (미국 특허 번호 7,371,826)을 갖는 것을 포함한다.

Fc 영역 변이체의 다른 예에 관해서는 또한 문헌 [Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988)]; 미국 특허 번호 5,648,260; 미국 특허 번호 5,624,821; 및 WO 94/29351을 참조한다.

시스테인 조작된 항체 변이체

특정 실시양태에서, 항체의 하나 이상의 잔기를 시스테인 잔기로 치환시킨 시스테인 조작된 항체, 예를 들어 "티오MAb"를 제조하는 것이 바람직할 수 있다. 특정한 실시양태에서, 이와 같이 치환된 잔기는 항체의 접근가능한 부위에서 일어난다. 이들 잔기를 시스테인으로 치환함으로써 반응성 티올 기가 항체의 접근가능한 부위에 배치되게 되고, 이것을 이용하여 항체를 본원에 추가로 기재한 바와 같이 다른 모이어티, 예컨대 약물 모이어티 또는 링커-약물 모이어티에 접합시켜 면역접합체를 생성할 수 있다. 특정 실시양태에서, 임의의 하나 이상의 하기 잔기가 시스테인으로 치환될 수 있다: 경쇄의 V205 (카바트 넘버링); 중쇄의 A118 (EU 넘버링); 및 중쇄 Fc 영역의 S400 (EU 넘버링). 시스테인 조작된 항체는, 예를 들어 미국 특허 번호 7,521,541에 기재된 바와 같이 생성될 수 있다.

항체 유도체

특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 당업계에 공지되고 쉽게 입수가능한 추가의 비단백질성 잔기를 함유하도록 추가로 변형될 수 있다. 항체의 유도체화에 적합한 모이어티는 수용성 중합체를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 수용성 중합체의 비제한적 예는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜의 공중합체, 카르복시메틸셀룰로스, 덱스트란, 폴리비닐 알콜, 폴리비닐 피롤리돈, 폴리-1,3-디옥솔란, 폴리-1,3,6-트리옥산, 에틸렌/말레산 무수물 공중합체, 폴리아미노산 (단독중합체 또는 랜덤 공중합체), 및 덱스트란 또는 폴리(n-비닐 피롤리돈)폴리에틸렌 글리콜, 프로프로필렌 글리콜 단독중합체, 폴리프로필렌 옥시드/에틸렌 옥시드 공중합체, 폴리옥시에틸화 폴리올 (예를 들어, 글리세롤), 폴리비닐 알콜, 및 그의 혼합물을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데히드가 물에서의 안정성으로 인해 제조에 이점을 가질 수 있다. 중합체는 임의의 분자량을 가질 수 있고, 분지형 또는 비분지형일 수 있다. 항체에 부착된 중합체의 수는 변할 수 있고, 1개 초과의 중합체가 부착될 경우, 중합체들은 동일하거나 상이한 분자일 수 있다. 일반적으로, 유도체화에 사용되는 중합체의 수 및/또는 유형은 개선될 항체의 특정한 특성 또는 기능, 항체 유도체가 규정된 조건 하에 요법에서 사용될 것인지의 여부 등을 포함하나 이에 제한되지 않는 고려사항을 기반으로 결정될 수 있다.

또 다른 실시양태에서, 항체, 및 방사선 노출에 의해 선택적으로 가열될 수 있는 비단백질성 모이어티의 접합체가 제공된다. 한 실시양태에서, 비단백질성 모이어티는 탄소 나노튜브이다 (문헌 [Kam et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605 (2005)]). 방사선은 임의의 파장일 수 있고, 통상적인 세포에는 해를 끼치지 않지만 항체-비단백질성 모이어티에 근접한 세포는 사멸시키는 온도로 비단백질성 모이어티를 가열하는 파장을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.

재조합 방법 및 조성물

항체는 재조합 방법 및 조성물을 이용하여, 예를 들어 미국 특허 번호 4,816,567에 기재된 바와 같이 생산할 수 있다. 한 실시양태에서, 항체를 코딩하는 단리된 핵산이 제공된다. 이러한 핵산은 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및/또는 VH를 포함하는 아미노산 서열 (예를 들어, 항체의 경쇄 및/또는 중쇄)을 코딩할 수 있다. 추가 실시양태에서, 이러한 핵산을 포함하는 하나 이상의 벡터 (예를 들어, 발현 벡터)가 제공된다. 추가 실시양태에서, 이러한 핵산을 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 이러한 한 실시양태에서, 숙주 세포는 (1) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 벡터, 또는 (2) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 제1 벡터 및 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 제2 벡터 (예를 들어, 이들로 형질감염된 것)를 포함한다. 1-아암 항체의 생산은 예를 들어 WO2005/063816에 기재되어 있다.

한 실시양태에서, 숙주 세포는 진핵, 예를 들어 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포 또는 림프성 세포 (예를 들어, Y0, NS0, Sp20 세포)이다. 한 실시양태에서, 상기에 제공된 바와 같은 항체를 코딩하는 핵산을 포함하는 숙주 세포를 항체가 발현하는데 적합한 조건 하에 배양하는 것, 및 숙주 세포 (또는 숙주 세포 배양 배지)로부터 항체를 임의로 회수하는 것을 포함하는 항체를 제조하는 방법이 제공된다.

항체의 재조합 생산을 위해, 예를 들어 상기 기재된 바와 같은 항체를 코딩하는 핵산을 단리하고, 추가의 클로닝 및/또는 숙주 세포에서의 발현을 위해 하나 이상의 벡터에 삽입한다. 이러한 핵산은 통상적인 절차를 이용하여 용이하게 단리하고 서열분석할 수 있다 (예를 들어, 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용하는 것에 의함).

항체-코딩 벡터의 클로닝 또는 발현에 적합한 숙주 세포는 본원에 기재된 원핵 또는 진핵 세포를 포함한다. 예를 들어, 특히 글리코실화 및 Fc 이펙터 기능이 필요하지 않을 경우, 항체를 박테리아에서 생산할 수 있다. 박테리아에서의 항체 단편 및 폴리펩티드의 발현에 대해서는, 예를 들어 미국 특허 번호 5,648,237, 5,789,199 및 5,840,523을 참조한다. (또한, 이. 콜라이에서의 항체 단편의 발현이 기재되어 있는 문헌 [Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254] 참조.) 발현 후에, 가용성 분획에서 박테리아 세포 페이스트로부터 항체를 단리할 수 있고, 추가로 정제할 수 있다.

원핵생물 뿐만 아니라, 진핵 미생물, 예컨대 글리코실화 경로가 "인간화"되어 항체를 부분적으로 또는 전체적으로 인간 글리코실화 패턴으로 생산되게 하는, 진균 및 효모 균주를 비롯한 사상 진균 또는 효모가 항체 코딩 벡터의 클로닝 또는 숙주 발현에 적합하다. 문헌 [Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004), 및 Li et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)]을 참조한다.

글리코실화 항체의 발현에 적합한 숙주 세포는 또한 다세포 유기체 (무척추동물 및 척추동물)로부터 유래된다. 무척추동물 세포의 예는 식물 및 곤충 세포를 포함한다. 다수의 바큘로바이러스 균주가 곤충 세포와 함께, 특히 스포도프테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda) 세포를 형질감염시키는데 사용될 수 있는 것으로 확인되어 있다.

식물 세포 배양물을 또한 숙주로서 이용할 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 5,959,177, 6,040,498, 6,420,548, 7,125,978 및 6,417,429 (트랜스제닉 식물에서 항체를 생산하기 위한 플랜티바디스(PLANTIBODIES)^TM 기술을 기재함)를 참조한다.

척추동물 세포를 또한 숙주로서 이용할 수 있다. 예를 들어, 현탁액 중에서 성장시키는데 적합한 포유동물 세포주가 유용할 수 있다. 유용한 포유동물 숙주 세포주의 다른 예는 SV40에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 세포주 (COS-7); 인간 배아 신장 세포주 (예를 들어, 문헌 [Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)]에 기재된 바와 같은 293 또는 293 세포); 새끼 햄스터 신장 세포 (BHK); 마우스 세르톨리 세포 (예를 들어, 문헌 [Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)]에 기재되어 있는 TM4 세포); 원숭이 신장 세포 (CV1); 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포 (VERO-76); 인간 자궁경부 암종 세포 (HELA); 개 신장 세포 (MDCK); 버팔로 래트 간 세포 (BRL 3A); 인간 폐 세포 (W138); 인간 간 세포 (Hep G2); 마우스 유방 종양 (MMT 060562); 예를 들어 문헌 [Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)]에 기재된 TRI 세포; MRC 5 세포; 및 FS4 세포이다. 다른 유용한 포유동물 숙주 세포주는 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포, 예를 들어 DHFR^- CHO 세포 (문헌 [Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)]); 및 골수종 세포주, 예컨대 Y0, NS0 및 Sp2/0을 포함한다. 항체 생산에 적합한 특정 포유동물 숙주 세포주의 검토를 위해, 예를 들어 문헌 [Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003)]을 참조한다.

면역접합체

본 발명은 또한 하나 이상의 세포독성제, 예컨대 화학요법제 또는 약물, 성장 억제제, 독소 (예를 들어, 단백질 독소, 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 기원의 효소 활성 독소 또는 그의 단편) 또는 방사성 동위원소에 접합된 본원의 항체를 포함하는 면역접합체를 제공한다.

한 실시양태에서, 면역접합체는 항체가 메이탄시노이드 (미국 특허 번호 5,208,020, 5,416,064 및 유럽 특허 EP 0 425 235 B1 참조); 아우리스타틴, 예컨대 모노메틸아우리스타틴 약물 모이어티 DE 및 DF (MMAE 및 MMAF) (미국 특허 번호 5,635,483 및 5,780,588 및 7,498,298 참조); 돌라스타틴; 칼리케아미신 또는 그의 유도체 (미국 특허 번호 5,712,374, 5,714,586, 5,739,116, 5,767,285, 5,770,701, 5,770,710, 5,773,001 및 5,877,296; 문헌 [Hinman et al., Cancer Res. 53:3336-3342 (1993); 및 Lode et al., Cancer Res. 58:2925-2928 (1998)] 참조); 안트라시클린, 예컨대 다우노마이신 또는 독소루비신 (문헌 [Kratz et al., Current Med. Chem. 13:477-523 (2006); Jeffrey et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters 16:358-362 (2006); Torgov et al., Bioconj. Chem. 16:717-721 (2005); Nagy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:829-834 (2000); Dubowchik et al., Bioorg. & Med. Chem. Letters 12:1529-1532 (2002); King et al., J. Med. Chem. 45:4336-4343 (2002)]; 및 미국 특허 번호 6,630,579 참조); 메토트렉세이트; 빈데신; 탁산, 예컨대 도세탁셀, 파클리탁셀, 라로탁셀, 테세탁셀 및 오르타탁셀; 트리코테센; 및 CC1065를 포함하나 이에 제한되지 않는 하나 이상의 약물에 접합된 항체-약물 접합체 (ADC)이다.

또 다른 실시양태에서, 면역접합체는 효소 활성 독소 또는 그의 단편 (디프테리아 A 쇄, 디프테리아 독소의 비결합 활성 단편, 외독소 A 쇄 (슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa)로부터 유래됨), 리신 A 쇄, 아브린 A 쇄, 모데신 A 쇄, 알파-사르신, 알레우리테스 포르디이(Aleurites fordii) 단백질, 디안틴 단백질, 피토라카 아메리카나(Phytolaca americana) 단백질 (PAPI, PAPII 및 PAP-S), 모모르디카 카란티아(momordica charantia) 억제제, 쿠르신, 크로틴, 사파오나리아 오피시날리스(sapaonaria officinalis) 억제제, 겔로닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신 및 트리코테센을 포함하나 이에 제한되지 않음)에 접합된 본원에 기재된 항체를 포함한다.

또 다른 실시양태에서, 면역접합체는 방사성접합체를 형성하기 위해 방사성 원자에 접합된 본원에 기재된 바와 같은 항체를 포함한다. 다양한 방사성 동위원소가 방사성접합체의 생산을 위해 이용가능하다. 그 예는 At²¹¹, I¹³¹, I¹²⁵, Y⁹⁰, Re¹⁸⁶, Re¹⁸⁸, Sm¹⁵³, Bi²¹², P³², Pb²¹², 및 Lu의 방사성 동위원소를 포함한다. 방사성접합체는 검출용으로 사용되는 경우에 섬광조영 연구를 위한 방사성 원자, 예를 들어 tc99m 또는 I123을 포함하거나, 핵 자기 공명 (NMR) 영상화 (자기 공명 영상화, mri로도 공지됨)용 스핀 표지, 예컨대 다시 아이오딘-123, 아이오딘-131, 인듐-111, 플루오린-19, 탄소-13, 질소-15, 산소-17, 가돌리늄, 망가니즈 또는 철을 포함할 수 있다.

항체 및 세포독성제의 접합체는 다양한 이관능성 단백질 커플링제, 예컨대 N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오) 프로피오네이트 (SPDP), 숙신이미딜-4-(N-말레이미도메틸) 시클로헥산-1-카르복실레이트 (SMCC), 이미노티올란 (IT), 이미도에스테르의 이관능성 유도체 (예컨대, 디메틸 아디피미데이트 HCl), 활성 에스테르 (예컨대, 디숙신이미딜 수베레이트), 알데히드 (예컨대, 글루타르알데히드), 비스-아지도 화합물 (예컨대, 비스(p-아지도벤조일) 헥산디아민), 비스-디아조늄 유도체 (예컨대, 비스-(p-디아조늄벤조일)-에틸렌디아민), 디이소시아네이트 (예컨대, 톨루엔 2,6-디이소시아네이트), 및 비스-활성 플루오린 화합물 (예컨대, 1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠)을 사용하여 제조할 수 있다. 예를 들어, 리신 면역독소는 문헌 [Vitetta et al., Science 238:1098 (1987)]에 기재된 바와 같이 제조할 수 있다. 탄소-14-표지된 1-이소티오시아네이토벤질-3-메틸디에틸렌 트리아민펜타아세트산 (MX-DTPA)은 방사성뉴클레오티드를 항체에 접합시키기 위한 예시적인 킬레이트화제이다. WO 94/11026을 참조한다. 링커는 세포 내에서 세포독성 약물의 방출을 용이하게 하는 "절단가능한 링커"일 수 있다. 예를 들어, 산-불안정성 링커, 펩티다제-감수성 링커, 광분해성 링커, 디메틸 링커 또는 디술피드-함유 링커 (문헌 [Chari et al., Cancer Res. 52:127-131 (1992)]; 미국 특허 번호 5,208,020)가 사용될 수 있다.

본원의 면역접합체 또는 ADC는 상업적으로 입수가능한 (예를 들어, 피어스 바이오테크놀로지, 인크.(Pierce Biotechnology, Inc.; 미국 일리노이주 록포드)로부터의) 가교-링커 시약 (BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, 술포-EMCS, 술포-GMBS, 술포-KMUS, 술포-MBS, 술포-SIAB, 술포-SMCC, 및 술포-SMPB, 및 SVSB (숙신이미딜-(4-비닐술폰)벤조에이트)를 포함하나 이에 제한되지 않음)으로 제조된 상기 접합체를 명백하게 고려하나 이에 제한되지 않는다.

다음은 본 발명의 방법 및 조성물의 예이다. 상기 제시된 일반적인 설명을 기초로 하여 다양한 다른 실시양태를 실시할 수 있음이 이해된다.

실시예

실시예 1: 국부 진행성 또는 전이성 고형 종양을 갖는 환자에서 정맥내 투여된, 수용체 c-met에 대한 1가 길항제 항체인 MetMAb의 안전성 및 약리학의 I상 개방 표지 용량-증가 연구

본 실시예는 난치성이거나 또는 진료 표준이 존재하지 않는 진행성 고형 악성종양을 갖는 환자에서 3주마다 (Q3W) IV 주입에 의해 투여한 MetMAb의 I상 개방 표지 용량-증가 연구를 기재한다. 이 용량-증가 시험은 15mg/kg IV Q3W의 베바시주맙과 두 가지 상이한 용량의 MetMAb의 조합을 시험하였다.

연구 설계.

베바시주맙 (15 mg/kg Q3W)을 두 가지 용량의 MetMAb (10 또는 15 mg/kg Q3W) 중 하나와 투여하였다. 제1 코호트에서, 3명의 환자가 3주마다 1회 MetMAb (10 mg/kg) 및 베바시주맙 (15 mg/kg)을 IV 투여받았다. 제2 코호트에서, 6명의 환자가 3주마다 1회 MetMAb (15 mg/kg, 제안된 II상 용량) 및 베바시주맙 (15 mg/kg)을 IV 투여받았다.

연구 목적. 본 연구의 목적은 3주마다 정맥내 투여되는 15mg/kg의 베바시주맙과 조합된 MetMAb의 안전성 및 허용성을 결정하는 것을 포함하였다.

제외 기준:

ㆍ 출산 가능성이 있는 환자는 효과적인 피임을 이용하여야 한다.

ㆍ 연구 및 후속 절차를 따른 능력이 없음.

ㆍ 불충분하게 제어된 고혈압 (심장 수축기 혈압 > 150 mmHg 및/또는 심장 확장기 혈압 > 100 mmHg로 규정됨).

ㆍ 고혈압성 위기 또는 고혈압성 뇌병증의 이전 병력.

ㆍ 뉴욕 심장 학회 (NYHA) 클래스 II 또는 그 초과의 CHF.

ㆍ 제1일 이전 6개월 이내의 심근경색 또는 불안정형 협심증의 병력.

ㆍ 연구 등록 이전 6개월 이내의 졸중 또는 일과성 허혈 발작 (TIA)의 병력.

ㆍ 제1일 이전 6개월 이내의 중요한 혈관 질환 (예를 들어, 수술적 회복을 필요로 하는 대동맥류 또는 최근의 말초 동맥 혈전증).

ㆍ 제1일 이전 1개월 이내의 객혈 (에피소드 당 ≥ 1/2 티스푼의 밝은 적색 혈액)의 병력.

ㆍ 출혈성 소질 또는 중요한 응고병증의 증거 (치료적 항응고의 부재).

ㆍ 제1일 이전 28 일 이내의 주요 수술 절차, 개방 생검 또는 중요한 외상성 손상 또는 연구 과정 동안 주요 수술 절차에 대한 필요의 예상.

ㆍ 제1일 이전 7일 이내의 혈관 접근 장치의 배치를 제외한 코어 생검 또는 다른 부수적 수술 절차.

ㆍ 제1일 이전 6개월 이내의 복부 누공 또는 위장 천공의 병력.

ㆍ 중증의, 비-치유 상처, 활성 궤양 또는 비치료 골절.

ㆍ 스크리닝시 ≥ 1.0의 UPC 비에 의해 입증된 바와 같은, 스크리닝시의 단백뇨.

ㆍ 베바시주맙의 임의의 성분에 대한 공지된 과민증.

ㆍ 임신 (임신 테스트 양성) 또는 수유부.

시험 약물

MetMAb를 동결건조 분말 또는 멸균 액체로 공급하였다. 동결건조 분말로 제공된 MetMAb (400 mg)를 I상 연구에서 1회용 50-cc 바이알에 공급하였다. 재구성을 위한 용액은 멸균 주사용수였고, 재구성 부피는 20.0 mL로, 10 mM 히스티딘 숙시네이트, 106 mM (4%) 트레할로스 2수화물, 0.02% 폴리소르베이트 20 (pH 5.7) 중 20 mg/ml MetMAb의 최종 농도로 수득하였다. 멸균 액체로 제공된 MetMAb를 1회용 15-cc 바이알에 공급하였다. 각각의 바이알은 10 mM 히스티딘 아세테이트, 120 mM 트레할로스, 0.02% 폴리소르베이트 20 (pH 5.4) 중 60 mg/ml의 농도로 10 ml 중에 600 mg의 MetMAb를 함유하였다. 각각의 환자에 대한 MetMAb의 전체 용량은 용량 수준 배정 및 주기 1의 제1일 이전 14일째 또는 14일 이내의 환자의 체중에 따라 달라졌다.

베바시주맙은 비경구 투여를 위해 준비된 투명한 내지 약간 유백색의 멸균 액체로 제넨테크, 인크.에 의해 공급되었다. 400-mg 또는 100-mg (25 mg/mL) 유리 바이알은 각각 인산나트륨, 트레할로스, 폴리소르베이트 20 및 멸균 주사용수, USP로 이루어진 비히클과 베바시주맙을 함유하였다. 바이알은 보존제를 함유하지 않았고, 단지 1회용이었다. 베바시주맙 용량은 스크리닝시 환자의 체중을 기준으로 하고, 연구 전반에 걸쳐 동일하게 유지되었다.

결과

이러한 Ib상 연구에서, 베바시주맙과 MetMAb의 조합은 일반적으로 시험된 모든 용량에서 잘 허용되었다. 환자 인구통계는 표 2에 나타낸다.

본 시험 및 이전에 기재된 1a상 용량 증가 시험 (문헌 [Salgia R et al. Complete results from a Phase Ia dose escalation and dose expansion study of single agent MetMab, a monovalent antagonist antibody to the receptor met, administered intravenously in patients with locally advanced or metastatic solid tumors. AACR 2010, Abstract 2774]; 또한 WO2010/045345 참조)에서 환자에 대한 이전 치료 요법의 수는 표 3에 나타낸다.

도 5는 본 시험 ("MetMAb + Bev") 및 이전에 기재된 1상 시험 ("MetMAb") (문헌 [Salgia R, et al. AACR 2010, Abstract 2774])에 대한 환자 진단, 치료 코호트 및 투여된 주기를 도시한다.

이전에 기재된 1상 시험 (문헌 [Salgia R, et al. AACR 2010, Abstract 2774])과 조합된 본 시험의 약동학 분석은 MetMAb의 최종 반감기가 11일이고, 제거율은 약 7 (+/2.0) mL/일/kg임을 보여주었다. 이 제거율은 종래의 2가 항체의 것보다 대략 2배 더 빠르다. MetMAb는 베바시주맙과 겉보기 PK 상호작용을 갖지 않았다. 환자의 12%는 MetMAb에 대한 항-치료 항체 (ATA)에 대해 양성이었고, 이 때 모든 ATA 반응은 주로 MetMAb의 프레임워크를 향해 지시된다 (5% 비치료 가양성 비율로 확인된 검정; (검정 민감도는 143 ng/mL이었음; 최소 보고가능한 적정 값은 1.4임).

안전성 결과는 표 4에 나타낸다.

등급 3-5 약물-관련 독성이 관찰되지 않았다. 등급 1 객혈 (<1 tsp)의 한 용량-제한 독성 (DLT)이 제2 코호트의 한 환자 (폐로 전이된 위암, 사건 시점에서 중심 괴사를 나타냄)에서 관찰되었다. 등급 2 약물-관련 독성은 말초 부종 및 저알부민혈증을 포함하였다. 가장 빈번하게 관찰되는 독성 (>30 %)은 피로 (56%), 부종 (33%) 및 체중 증가 (33%)를 포함하였다.

도 6은 본 연구 ("단계 3") 및 이전에 보고된 1상 연구 ("1 및 2상") (문헌 [Salgia R, et al. AACR 2010, Abstract 2774])에서의 모든 환자에서 최고 반응을 갖는 기준선으로부터의 종양 부담의 변화를 도시한다. 최고 반응은 ≥ 6 주기를 투여한 3명의 환자에서 안정한 질환이었다.

결론: MetMAb 및 베바시주맙의 조합은 일반적으로 각각의 작용제에 대해 15mg/kg IV q3W의 제안된 용량에서 안전하고 잘 허용된다. 약물-관련 등급 4 독성이 관찰되지 않았다.

실시예 2: 전이성, 삼중-음성 유방암을 갖는 환자에서 파클리탁셀 및 베바시주맙과 조합된 MetMAb의 안전성 및 효능을 평가하는 II상 연구 (OAM4861g)

전이성 유방암은 여성에서 가장 흔한 침습성 악성종양이고, 여성에서 두번째로 가장 흔한 암 사망의 원인이며, 대부분의 환자가 진단 2년 이내에 이들의 질환에 굴복하였다 (문헌 [Greenberg et al. 1996]). 감독, 역학 및 최종 결과 (SEER) 데이터베이스에 따라, 미국에서 2009년에 192,000명이 넘는 여성이 유방암으로 진단되고, 40,000명 초과의 여성이 유방암으로 사망하였다 (SEER 2009). 침습성 유방암 발생의 수명 확률은 8명 중 1명이다.

전이성 유방암을 갖는 환자를 위한 치료 알고리즘은 임상적, 병리학적 및 조직학적 특성, 예컨대 인간 표피 성장 인자 2 (HER2) 증폭, 호르몬 수용체 (ER, PR) 상태, 호르몬제의 이전 반응 및 및/또는 실패, 전이성 질환의 수 및 특정 부위, 및 전이 및 보조 설정 둘 다에서의 치료 이력을 포함하는 여러 인자를 기반으로 한다. 안트라시클린, 탁산, 겜시타빈, 카페시타빈 및 비노렐빈을 비롯한 다수의 세포독성 화학요법제는 전이성 유방암에서 활성을 나타내었다. 이러한 작용제를 사용하여 나타난 반응률 및 무진행 간격은 이전 요법의 정도/유형 및 전이성 질환의 정도에 따라 달라진다. 일반적으로, 안트라시클린-기반 조합 요법 및 탁산 (파클리탁셀 및 도세탁셀)은 최대 활성을 나타낼 것으로 여겨진다. 안트라시클린의 반복 과정과 함께 제한적으로 조합된 보조 설정에서 안트라시클린을 함유하는 요법을 많이 이용하는 경우, 탁산이 현재 국부 재발성 또는 전이성 질환을 갖는 환자를 위해 가장 통상적으로 사용되는 작용제이다.

삼중-음성 유방암은 공격성 특징, 예컨대 높은 증식률을 가질 가능성이 더 높고, 침습성 표현형을 나타낸다. 전이성 삼중 음성 유방암을 갖는 환자는 불량한 임상적 결과 및 1년 미만의 중앙 생존기간을 나타낸다. 대부분 (모두는 아님)의 기저-유사 유방암은 IHC 테스트에 의해 삼중-음성이고, 그 결과로 삼중-음성 상태는 기저-유사 유방암의 조직병리학적 규정으로 사용될 수 있다. 국립 암 연구소 (NCI)에 현재 등록된 모든 최근의 기저-유사 유방암 시험은 적합한 환자를 확인하기 위해 삼중 바이오마커 (ER, PR 및 HER2)를 이용한다.

전신 독성을 피하면서 질환 진행을 지연시키는 신규 치료는 이러한 환자의 치료에서 유의한 진보를 나타낼 것이다.

유방암 세포주의 거대 패널의 분석은 Met가 루미날 또는 HER2-양성 세포주와 비교하여 기저 세포주에서 선택적으로 발현된다는 것을 보여주었으며, 이는 Met 발현 및 활성화가 삼중-음성 유방암의 개시 및 진행에 중요할 수 있음을 제안한다.

본 실시예는 질환 진행 이전 또는 그 동안 투여된 단일-작용제 화학요법 또는 일차 설정에서 투여된 사전-특정된 조합 또는 순서의 세포독성제로 규정된 요법과 함께, 치료를 받은 적이 없거나 (일차) 또는 한 가지 종래의 세포독성 화학치료 요법 후에 진행된 (이차) 전이성 또는 국부 재발성 삼중-음성 유방암을 갖는 환자에서 파클리탁셀과 조합하여 투여된 MetMAb, 및 베바시주맙 + 파클리탁셀 대 위약 + 베바시주맙 + 파클리탁셀과 조합하여 투여된 MetMAb의 효능을 예비 평가하고 그의 안전성 및 허용성을 평가하도록 설계된 무작위화, II상, 이중-맹검, 다중심, 위약-제어 시험을 기재한다. 대략 40개의 다국적 지역으로부터의 대략 180명의 환자 (대략 이전 치료를 받은 적이 없는 120명의 환자 및 이차 요법을 받은 60명의 환자)는 1:1:1 비로 3개의 치료군으로 무작위 분류될 것이다. 모든 환자는 측정가능한 또는 비-측정가능한 전이성 또는 국부 재발성 질환을 갖는, 유방의 조직학적으로 확인된 삼중-음성 선암종을 가져야 한다.

목적:

본 연구의 주요 목적은 이전 전신 요법을 받은 적이 없거나 일차 요법 후에 진행된 전이성 또는 국부 재발성 삼중-음성 유방암을 갖는 환자에서, 조사자-평가된 무진행 생존에 의해 측정된 바와 같이, 위약 + 베바시주맙 + 파클리탁셀과 비교하여 MetMAb + 베바시주맙 + 파클리탁셀 및 MetMAb + 위약 + 파클리탁셀의 임상적 이익을 평가하는 것이다. PFS는 무작위화로부터 질환 진행 또는 재발까지의 시간 (고형 종양에서의 반응 평가 기준 [RECIST], 버전 1.1을 사용하여 지역 방사선전문의 및/또는 조사자에 의해 평가된 바와 같음) 또는 임의의 원인으로 인한 연구 중 사망 (마지막 연구 처리의 30일 이내의 사망으로 규정됨) 중 먼저 일어난 시점으로 규정된다.

이 연구의 2차 목적은 다음을 포함한다:

이전 전신 요법을 받은 적이 없거나 일차 요법 후에 진행된 전이성 또는 국부 재발성 삼중-음성 유방암을 갖는 환자에서, 조사자-평가된 무진행 생존에 의해 측정된 바와 같이, 위약 + 베바시주맙 + 파클리탁셀과 비교하여 MetMAb + 베바시주맙 + 파클리탁셀 및 MetMAb + 위약 + 파클리탁셀의 임상적 이익을 평가하는 것.

이전 전신 요법을 받은 적이 없거나 일차 요법 후에 진행된 전이성 또는 국부 재발성 삼중-음성 유방암을 갖는 환자에서 위약 + 베바시주맙 + 파클리탁셀과 비교하여 MetMAb + 베바시주맙 + 파클리탁셀 및 MetMAB + 위약 + 파클리탁셀의 전체 반응률 및 반응 지속기간을 결정하는 것. 바람직한 반응은 ≥ 4 주 (RECIST를 사용하여 지역 방사선전문의 및/또는 조사자에 의해 평가된 바와 같음) 유지된 완전한 또는 부분적 반응으로 규정된다. 반응의 지속 기간은 초기 완전한 또는 부분적 반응으로부터 질환 진행까지의 시간 (RECIST를 사용하여 지역 방사선전문의 및/또는 조사자에 의해 평가된 바와 같음) 또는 임의의 원인으로 인한 연구 중 사망 (마지막 연구 처리의 30일 이내의 사망으로 규정됨) 중 먼저 일어난 시점으로 규정된다.

이전 전신 요법을 받은 적이 없거나 일차 요법 후에 진행된 전이성 또는 국부 재발성 삼중-음성 유방암을 갖는 환자에서 위약 + 베바시주맙 + 파클리탁셀과 비교하여 MetMAb + 베바시주맙 + 파클리탁셀 및 MetMAB + 위약 + 파클리탁셀의 전체 생존 이점을 평가하는 것. 전체 생존은 무작위화로부터 임의의 원인으로 인한 사망까지의 시간으로 규정된다.

위약 + 베바시주맙 + 파클리탁셀과 비교하여 MetMAb + 베바시주맙 + 파클리탁셀 및 MetMAB + 위약 + 파클리탁셀의 안전성 및 허용성을 특성화하는 것.

MetMab, 베바시주맙 및 파클리탁셀의 약물 노출을 평가하는 것.

연구의 포함 기준은 다음을 포함한다:

서명된 피험자 동의서

연령 ≥ 18세.

0 또는 1의 동부 종양학 협력 그룹 (ECOG) 수행 상태.

측정가능하거나 비-측정가능한 전이성 또는 국부 재발성 질환을 갖는, 유방의 조직학적으로 확인된 ER-, PR- 및 HER2-음성 (삼중-음성) 선암종.

출산 가능성이 있는 여성의 경우, 허용되고 효과적인 피임 방법의 사용

연구 및 후속 절차에 따를 능력 및 수용력.

연구의 제외 기준은 다음을 포함한다:

전이성 유방암을 위한 두 가지 이상의 처방을 사용한 이전 요법.

주기 1의 제1일 이전 3주 이내의 임의의 전신 항암 요법.

주기 1의 제1일 이전 30일 이내의 주요 수술 절차 (CNS 수술 제외), 개방 생검 또는 중요한 외상성 손상, 또는 연구 과정 동안 주요 수술 절차에 대한 필요의 예상.

주기 1의 제1일 이전 7일 이내의 부수적 수술 절차, 예컨대 미세-바늘 흡인 또는 코어 생검.

전이성 유방암을 위한 탁산을 사용한 이전 요법.

베바시주맙, 소라페닙, 수니티닙을 사용한 이전 요법, 또는 유방암 진단 후의 다른 추정 VEGF 경로-표적화 요법.

HGF 또는 MET 경로를 표적화하는 실험 처리에 대한 이전 노출.

호르몬 및/또는 트라스투주맙을 사용한 이전 요법.

치료된 뇌 전이를 제외한, 공지된 뇌 또는 다른 CNS 전이.

항-고혈압 약물치료의 존재 또는 부재 하의, 심장 수축기 압력 > 150 mmHg 및/또는 심장 확장기 압력 > 100 mmHg에 의해 규정된 제어되지 않은 고혈압.

초기 혈압 증가를 갖는 환자는 항-고혈압 약물치료의 개시 또는 조정이 엔트리 기준을 만족시키기 위해 혈압을 낮춘다면 적합하다.

불안정형 협심증.

고혈압성 위기 또는 고혈압성 뇌병증의 이전 병력.

뉴욕 심장 학회 등급 ≥ II 울혈성 심부전.

주기 1의 제1일 이전 6개월 이내의 심근경색의 병력.

주기 1의 제1일 이전 6개월 이내의 졸중 또는 일과성 허혈 발작의 병력.

주기 1의 제1일 이전 6 개월 이내의 임상적으로 중요한 말초 혈관 질환 (예를 들어, 수술적 회복을 필요로 하는 대동맥류 또는 최근의 말초 동맥 혈전증).

출혈성 소질 또는 응고병증의 증거.

주기 1의 제1일 이전 6개월 이내의 복부 누공, 위장 천공 또는 복부내 농양의 병력.

사전-의약 치료로 제어되지 않은 모노클로날 항체 요법에 대한 아나필락시스성 반응의 병력.

주기 1의 제1일 이전 1개월 이내의 객혈의 병력 (에피소드 당 ≥ 1/2 티스푼의 밝은 적색 혈액).

베바시주맙의 임의의 성분에 대한 공지된 과민증.

심각한 비-치유 상처, 활성 궤양 또는 비치료 골절.

시험 약물. MetMAb는 c-met에 대해 지시된 공지의 재조합, 인간화, 1가 모노클로날 항체이다. MetMAb는 1회용 15-cc 바이알에 멸균 액체로 공급될 것이다. 각각의 바이알은 10 mM 히스티딘 아세테이트, 120 mM 트레할로스 및 0.02% 폴리소르베이트 20 (pH 5.4) 중 60 mg/mL의 농도로 10 mL에 600 mg의 MetMAb를 함유한다.

베바시주맙은 IV 주입용 용액을 위한 투명 내지 약간 유백색의 무색 내지 옅은 갈색의 멸균 액체 농축액이다. 베바시주맙은 각각 4 mL 또는 16 mL의 베바시주맙 (각 바이알마다 25 mg/mL)을 함유하는 5-mL (100-mg) 또는 20-mL (400-mg) 유리 바이알에 공급될 것이다. 바이알은 베바시주맙을 포스페이트, 트레할로스, 폴리소르베이트 20 및 멸균 주사용수 (SWFI), USP와 함께 함유한다. 바이알은 보존제를 함유하지 않고, 단지 1회용으로 적합하다.

탁솔^® 포장 삽입물은 파클리탁셀을 위한 제제에 대한 정보를 언급한다.

위약은 250 cc 0.9% NSS (염수 IV 용액, 0.9%)로 이루어질 것이다.

연구 처리:

약동학 모델링은 2주마다 10 mg/kg의 MetMAb 용량이 3주마다 15 mg/kg의 MetMAb 용량과 비교하여 동등한 노출을 일으킬 것으로 예상된다는 것을 보여주었다.

MetMAb 및 베바시주맙은 각 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 2주마다 IV 주입에 의해 10 mg/kg의 용량으로 각각 투여될 것이다. 파클리탁셀은 각 28-일 주기 중 제1일, 제8일 및 제15일에 IV 주입에 의해 90 mg/㎡의 용량으로 투여될 것이다. 3개 모두가 동일한 날에 투여되는 경우 약물의 투여의 순서는 다음과 같다: 1) 파클리탁셀, 2) 베바시주맙 및 3) MetMAb/위약.

MetMAb의 용량은 스크리닝 또는 기준선에서의 환자의 체중을 기준으로 할 것이고, 연구 전반에 걸쳐 동일하게 유지될 것이다. 베바시주맙의 용량은 스크리닝시 환자의 체중을 기준으로 할 것이고, 연구 전반에 걸쳐 동일하게 유지될 것이다. 파클리탁셀의 투약 목적을 위한 신체 표면적의 계산은 처방 정보에 따라 만들어져야 한다.

결과

삼중-음성 전이성 유방암 환자에 대한 (1) 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 MetMAb (예를 들어, 제1일 또는 스크리닝시의 대상체의 중량을 기준으로 함); 및 (2) 28-일 주기 중 제1일, 제8일 및 제15일에 IV 주입에 의한 90 mg/㎡의 용량의 파클리탁셀의 투여는 질환 진행까지의 시간 (TTP) 및/또는 무진행 생존 및 생존을 연장시켰다. 삼중-음성 전이성 유방암 환자에 대한 (1) 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 MetMAb (예를 들어, 제1일 또는 스크리닝시의 대상체의 중량을 기준으로 함); (2) 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 2주마다 IV 주입에 의한 10 mg/kg의 용량의 베바시주맙, 및 (3) 28-일 주기 중 제1일, 제8일 및 제15일에 IV 주입에 의한 90 mg/㎡의 용량의 파클리탁셀의 투여는 질환 진행까지의 시간 (TTP) 및/또는 무진행 생존 및 생존을 연장시켰다.

상기 본 발명이 이해를 명확하게 하고자 하는 목적으로 설명 및 실시예로 어느 정도 상세하게 기재되었으나, 상기 설명 및 실시예가 본 발명의 범주를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.

SEQUENCE LISTING <110> GENENTECH, INC. <120> TREATMENT METHODS <130> P4451R1 WO <140> <141> <150> 61/346,424 <151> 2010-05-19 <150> 61/345,044 <151> 2010-05-14 <160> 38 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 1 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Met Ile Asp Pro Ser Asn Ser Asp Thr Arg Phe Asn Pro Asn Phe 50 55 60 Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Tyr Arg Ser Tyr Val Thr Pro Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 2 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic 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Claims

에스트로겐 수용체 (ER)-음성, 프로게스테론 수용체 (PR)-음성 및 HER2-음성 (집합적으로, 삼중-음성) 전이성 유방암 환자에게 유효량의 항-c-met 항체 및 탁산을 투여하는 것을 포함하는, 유방암의 치료 방법.
제1항에 있어서, 환자에게 유효량의 항-VEGF 항체를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
ER-음성, PR-음성 및 HER2-음성 전이성 유방암 환자에게 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-c-met 항체 및 28-일 주기 중 제1일, 제8일 및 제15일에 IV 주입의 의해 90 mg/㎡의 용량으로 투여되는 파클리탁셀을 투여하는 것을 포함하는, 유방암의 치료 방법.
제3항에 있어서, 항-VEGF 항체를 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
제1항에 있어서, 항-c-met 항체 및 탁산의 투여가 공동 투여인 방법.
제1항에 있어서, 항-c-met 항체 및 탁산의 투여가 임의의 순서로의 연속 투여인 방법.
제1항에 있어서, 항-c-met 항체의 투여가 탁산의 투여에 선행하는 것인 방법.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 항-c-met 항체가 1가인 방법.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 항-c-met 항체가 단일 항원 결합 아암을 포함하고, Fc 영역을 포함하며, 여기서 Fc 영역은 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드를 포함하고, 상기 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드는 복합체에 존재하며, 상기 항원 결합 아암을 포함하는 Fab 분자와 비교하여 상기 항체 단편의 안정성을 증가시키는 Fc 영역을 형성하는 것인 방법.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 항-c-met 항체가 항체 또는 그의 항체 단편이고, 상기 항체는
(a) 서열

을 갖는 중쇄 가변 도메인, CH1 서열 및 제1 Fc 폴리펩티드를 포함하는 제1 폴리펩티드;
(b) 서열

을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 CL1 서열을 포함하는 제2 폴리펩티드; 및
(c) 제2 Fc 폴리펩티드를 포함하는 제3 폴리펩티드
를 포함하고, 여기서 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인은 복합체로 존재하며, 단일 항원 결합 아암을 형성하고, 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드는 복합체에 존재하며, 상기 항원 결합 아암을 포함하는 Fab 분자와 비교하여 상기 항체 단편의 안정성을 증가시키는 Fc 영역을 형성하는 것인 방법.
제10항에 있어서, 제1 폴리펩티드가 도 1에 도시된 Fc 서열 (서열 3)을 포함하고, 제2 폴리펩티드가 도 2에 도시된 Fc 서열 (서열 4)을 포함하는 것인 방법.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 항-c-met 항체가 오나르투주맙과 동일한 에피토프에 결합하는 것인 방법.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 항-c-met 항체가 인간화된 것인 방법.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 항-c-met 항체가 오나르투주맙인 방법.
제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-VEGF 항체가 하이브리도마 ATCC HB 10709에 의해 생산된 모노클로날 항-VEGF 항체 A4.6.1과 동일한 에피토프에 결합하는 것인 방법.
제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 항-VEGF 항체가 인간화 항체인 방법.
제16항에 있어서, 항-VEGF 항체가 인간화 A4.6.1 항체 또는 그의 단편인 방법.
제16항에 있어서, 항-VEGF 항체가 베바시주맙인 방법.
제16항에 있어서, 항-VEGF 항체가
하기 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역:

및 하기 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역:

을 갖는 것인 방법.
제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 탁산이 파클리탁셀인 방법.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 전이성 삼중 음성 유방암 환자가 이전에 전이성 삼중 음성 유방암 환자를 위한 치료를 받은 적이 있는 것인 방법.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 전이성 삼중 음성 유방암 환자가 이전에 전이성 삼중 음성 유방암 환자를 위한 치료를 받은 적이 없는 것인 방법.
전이성 삼중 음성 유방암 환자의 치료를 위해 탁산과 조합하여 항-c-met 항체를 프로모션하는 방법.
제23항에 있어서, 추가로 항-VEGF 항체와 조합하는 방법.
제23항에 있어서, 치료가 삼중-음성 전이성 유방암 환자에게 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-c-met 항체 및 28-일 주기 중 제1일, 제8일 및 제15일에 IV 주입에 의해 90 mg/㎡의 용량으로 투여되는 파클리탁셀을 투여하는 것을 포함하는 것인 방법.
제24항에 있어서, 치료가 삼중-음성 전이성 유방암 환자에게 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-c-met 항체, 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-VEGF 항체 (예를 들어, 베바시주맙) 및 28-일 주기 중 제1일, 제8일 및 제15일에 IV 주입에 의해 90 mg/㎡의 용량으로 투여되는 파클리탁셀을 투여하는 것을 포함하는 것인 방법.
제23항에 있어서, 프로모션이 포장 삽입물에 의해 이루어지는 것이며, 여기서 포장 삽입물은 항-c-met 항체를 사용한 암 치료를 받기 위한 지침을 제공하는 것인 방법.
제23항에 있어서, 프로모션이 항-c-met 항체의 시판 제제와 동봉된 포장 삽입물에 의해 이루어지는 것인 방법.
제23항에 있어서, 프로모션이 탁산의 시판 제제와 동봉된 포장 삽입물에 의해 이루어지는 것인 방법.
제23항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 프로모션이 의사 또는 건강 관리자에 대한 서면 커뮤니케이션에 의해 이루어지는 것인 방법.
제23항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 프로모션이 의사 또는 건강 관리자에 대한 구두 커뮤니케이션에 의해 이루어지는 것인 방법.
제23항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 프로모션이 항-c-met 항체 또는 항-c-met 항체를 사용한 대상체의 치료로 이어지는 것인 방법.
삼중-음성 전이성 유방암을 갖는 환자의 생존을 증가시키고/거나, 환자의 암 재발 위험을 감소시키고/거나 환자의 생존 가능성을 증가시키기 위해 항-c-met 항체를 사용한 치료를 받기 위한 지침을 제공함으로써 삼중-음성 전이성 유방암을 갖는 환자를 지시하는 방법.
제33항에 있어서, 치료가 삼중-음성 전이성 유방암 환자에게 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-c-met 항체, 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-VEGF 항체 및 28-일 주기 중 제1일, 제8일 및 제15일에 IV 주입에 의해 90 mg/㎡의 용량으로 투여되는 파클리탁셀을 투여하는 것을 포함하는 것인 방법.
항-c-met 항체 및/또는 탁산, 및 삼중-음성 전이성 유방암 환자를 치료하기 위한 지침을 갖는 포장 삽입물 또는 라벨을 포함하는 제조품.
제35항에 있어서, 항-VEGF 항체를 추가로 포함하는 제조품.
제35항 또는 제36항에 있어서, 탁산이 파클리탁셀인 제조품.
제35항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 치료가 삼중-음성 전이성 유방암 환자에게 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-c-met 항체 (예를 들어, MetMAb) 및 28-일 주기 중 제1일, 제8일 및 제15일에 IV 주입에 의해 90 mg/㎡의 용량으로 투여되는 파클리탁셀을 투여하는 것을 포함하는 것인 제조품.
제36항 또는 제38항에 있어서, 치료가 28-일 주기 중 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 항-VEGF 항체 (예를 들어, 베바시주맙)를 투여하는 것을 추가로 포함하는 것인 제조품.
제35항 내지 제39항 중 어느 한 항의 제조품을 제조하는 방법.