KR20130055037A

KR20130055037A - 덴드로비움속 난초의 꽃 기관 특이적 프로모터

Info

Publication number: KR20130055037A
Application number: KR1020110118016A
Authority: KR
Inventors: 구자춘; 황성수; 김기남; 김희서; 박광우; 최경; 구자정
Original assignee: 대한민국(산림청 국립수목원장)
Priority date: 2011-11-14
Filing date: 2011-11-14
Publication date: 2013-05-28

Abstract

본 발명은 서열번호1 중 번역개시코돈 ATG 상위 4477bp을 포함하는 것을 특징으로 하는 덴드로비움(Dendrobium)속 난초의 꽃 기관 특이적 프로모터에 관한 것이다.

Description

덴드로비움속 난초의 꽃 기관 특이적 프로모터{Promoter for Flower Organ of Dendrobium}

본 발명은 덴드로비움속 난초의 꽃기관 특이적 프로모터에 관한 것이다. 보다 상세하게는 서열번호1 중 번역개시코돈 ATG 상위 4477bp 염기서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 덴드로비움(Dendrobium)속 난초의 꽃 기관 특이적 프로모터에 관한 것이다.

프로모터에는 외래 유전자의 발현을 항시 발현하는 항구성 프로모터, 식물체의 전신 및 특별한 조직에만 국한시켜 형질전환 목적을 달성하는데 이용되는 특이성 프로모터들로 구분되는 데 이들은 그 기능에 따라서 다음과 같이 분류할 수 있다.

첫째로 항구성 전신발현 프로모터를 들 수 있다. 식물 항구성 프로모터로는 꽃양배추 모자이크 바이러스(CaMV: cauliflower mosaic virus)의 35S RNA 유전자의 프로모터가 대표적인 쌍떡잎식물용 프로모터로 사용되고 있고, 벼 등의 외떡잎식물용 항구성 프로모터로는 벼 액틴(actin) 및 옥수수 유비퀴틴(ubiquithin) 유전자 프로모터들이 주로 이용되어 왔으며, 최근 벼 시토크롬 C유전자(OsOc1)의 프로모터가 국내 연구진에 의해 개발되어 사용중에 있다(국내 특허등록 제429335호에 기재). 이들은 식물형질전환 기본 운반체 내에 선발마커로 이용되는 항생제나 제초제 저항성 유전자 및 리포터 유전자의 발현을 유도하기 위해 이미 내재되어 있으며, 연구적인 측면에서 목적하는 유전자의 식물체내 기능을 밝히고자 시도할 때 우선적으로 고려되는 프로모터들이다.

둘째로, 종자 특이 프로모터를 들 수 있다. 대표적인 예로서 벼 주요 저장 단백질 유전자의 프로모터들로서 황금쌀(golden rice) 개발에 사용된 벼 글루테린(glutelin) 프로모터가 현재까지 외떡잎 식물의 종자 특이적 발현을 유도하는 경우에 많이 사용되고 있고, 쌍떡잎 식물의 종자 특이적 발현을 유도하는데 주로 사용되는 프로모터로는 콩 유래 렉틴(lectin) 프로모터, 배추 유래 나핀(napin) 프로모터 및 애기장대의 종자에서 감마 토코페롤 메틸기 전이효소(γ-tocopherol methyl transferase:γ-TMT) 유전자 발현을 유도함으로써 비타민 E 생성을 증진시킨 연구에 사용된 당근 유래 DC-3 프로모터, 들깨 유래 올레오신(oleosin) 프로모터의 종자 특이발현 유도 사례가 있다. 상기 종자 특이적 프로모터들은 주로 종자 자체가 식량이나 식품 또는 식품의 원료로 사용되는 주요 작물에서 유용 단백질 축적 및 유용 물질 생성 등을 목적으로 주로 사용되고 있다.

셋째로 뿌리 특이 발현 프로모터이다. 아직 상용화된 사례는 없으나 애기장대 퍼옥시다제(peroxidase, prxEa)가 분리되어 뿌리 특이적 발현을 확인하였고, 최근 고구마 유래의 매즈 유전자(ibMADS)와 당 유도성 에이디피 글루코즈 파이로포스파타제(ADP-glucose pyrophosphatase, AGPase) 유전자가 분리되어 해당 프로모터가 뿌리에서 특이 발현을 유도하며 당근, 무에서 뿌리 특이적 일시적 발현을 유도함을 확인하여 특허 등록(대한민국 등록번호 제10-0604186호, 제10-0604191호)된 바 있다. 이들 프로모터는 식량이나 식품, 또는 식품의 원료로 사용되는 주요 뿌리작물에서 농업적 형질 개량이나 유용 단백질 축적 및 유용 물질 생성 등을 목적으로 주로 사용이 기대될 수 있다.

넷째로, 잎 등의 기타 조직 특이 프로모터를 들 수 있다. 잎 등의 광합성 조직에서만 강력한 유전자의 발현을 유도하는 벼와 옥수수 유래의 알비씨에스(rbcS: ribulose bisphosphate carboxylase/oxygenase small subunit)프로모터, 아그로박테리움 유래의 식물 뿌리 발현을 유도하는 RolD 프로모터, 감자 유래 괴경 특이 발현 유도 파타틴(patatin) 프로모터, 토마토 유래의 과실 성숙 특이 발현 유도 피디에스(PDS: phytoene synthase) 프로모터가 있다.

마지막으로 화분과 약에 특이적으로 발현하는 프로모터로 단백질 합성을 억제하는 유전자를 연결하여 inbred 라인을 만들거나 특정 목적을 위하여 웅성불임 등을 유도하기 위한 목적으로 화분 특이 프로모터가 개발되었고 꽃의 웅성기관 약의 융단조직 특이 BcA9 프로모터를 세포에 독성을 갖는 Bt 단백질 유전자의 발현을 유도케 함으로써 웅성불임 작물을 개발한 바 있다.

한편, 이러한 프로모터들은 개발자의 의도에 따라서 보다 정밀한 유전자 발현 조절을 위하여 더욱 다양한 기능을 갖는 외래 유전자 형질전환 식물체 개발이 요구되고 있으나, 아직 국내 개발된 프로모터의 이용이 부진한 것이 현실이다.

본 발명의 목적은 다른 기관에는 영향을 미치지 않으면서 덴드로비움속 난초의 꽃 기관의 형질을 선택적으로 조절하기 위한 덴드로비움속 난초의 꽃 기관 특이적인 프로모터를 제공하는데 있다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위해서 본 발명은 서열번호1 중 번역개시코돈 ATG 상위 4477bp 염기서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 덴드로비움(Dendrobium)속 난초의 꽃 기관 특이적 프로모터를 제공한다.

또한, 본 발명은 상기의 프로모터를 포함하는 발현 벡터를 제공하며, 이러한 발현 벡터로 형질전환된 것을 특징으로 하는 식물체를 제공한다.

또한, 본 발명은 서열번호2의 프로모터 서열을 포함하는 발혁벡터로 형질전환 시키는 것을 특징으로 하는 덴드로비움속 난초의 꽃기관 형질 조절 방법을 제공한다.

본 발명에 따르면, 다른 기관에는 영향을 미치지 않으면서 덴드로비움 난초류의 꽃 기관의 형질을 선택적으로 조절할 수 있다.

도 1은 석곡의 cDNA를 주형으로 얻어진 엑틴 유전자 일부분의 염기서열을 도시한다.
도 2는 5' RACE로 증폭하여 얻어진 엑틴 유전자의 DNA 염기서열을 도시한다. (ATG: 엑틴의 개시코돈)
도 3은 확보된 엑틴유전자를 이용하여 제작된 역방향 PCT의 네스티드 프라이머(nested primer)를 도시한다.
도4는 엑틴 유전자에 대한 physical map을 도시한다.
도 5는 I-PCR로 증폭된 엑틴 유전자의 염기서열의 일부와 그 상위 프로모터 영역을 포함하는 EcoRI 게놈 DNA 절편의 염기서열 및 이로부터 유추한 아미노산 서열을 도시한다. (밑줄: EcoRI 자리, 아미노산 서열 유추부위: 개시 ATG 코돈 이하 엑손 부위, 1388bp~1463bp, 1858bp~1937bp: 인트론부위)
도 6은 5' 말단을 중심으로 제작된 2차 I-PCR 프라이머 지도를 도시한다.
도 7은 엑틴 유전자와 프로모터의 physical map 을 도시한다.
도8은 엑틴 유전자와 프로모터의 DNA 염기서열을 도시한다.(2975bp~3092bp,4467bp~4540bp, 4615bp~5006bp, 5087bp~5462bp는 엑손부위, 소문자는 인트론부위, 밑줄은 프로모터 클로닝에 사용한 프라이머와 제한효소를 각각 나타낸다.)
도 9는 엑틴 유전자 프로모터(ACT1pro)와 GUS 표지유전자를 포함하는 식물 형질전환용 벡터 지도를 도시한다.
도 10은 아그로박테리움 침윤(Agrobacterium infiltration)를 이용한 엑틴 유전자 프로모터의 활성 조사 결과를 도시한다.(엑틴유전자 프로모터::GUS(pACT::GUS), CaMV35S 프로모터::GUS(p35S::GUS), 그리고 프로모터가 없는 GUS(GUS 대조군), Scale bar, 5 mm.))

본 발명은 도 8의 서열번호1 중 번역개시코돈 ATG 상위 4477bp 염기서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 덴드로비움(Dendrobium)속 난초의 꽃 기관 특이적 프로모터를 제공한다.

본 발명의 꽃 기관 특이적 발현 프로모터는 서열번호1 중 번역개시코돈 ATG 상위 4477bp 염기서열을 포함하며, 서열번호2의 염기서열로 특징지어질 수 있다. 또한 본 발명의 꽃 기관 특이적 발현 프로모터는 상기 서열번호 2의 일부 염기가 치환, 결실 또는 부가되더라도 꽃 기관 특이적 발현 프로모터 활성을 나타내는 경우, 이러한 변형 염기서열도 포함할 수 있다.

보다 구체적으로 변형 염기서열은 서열번호 2의 염기서열과 70% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더 더욱 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 가지는 염기 서열을 포함할 수 있다. 폴리뉴클레오티드에 대한 "서열 상동성의 %"는 두 개의 최적으로 배열된 서열과 비교 영역을 비교함으로써 확인되며, 비교 영역에서의 폴리뉴클레오티드 서열의 일부는 두 서열의 최적 배열에 대한 참고 서열(추가 또는 삭제를 포함하지 않음)에 비해 추가 또는 삭제(즉, 갭)를 포함할 수 있다. 상기 %는 동일한 핵산 염기가 두 서열 모두에 존재하는 위치의 수를 확인하여 정합 위치의 수를 산출하고, 그 정합 위치의 수를 비교 영역 내의 위치의 총 수로 나누고, 그 결과에 100을 곱하여 서열 상동성 %를 산출함으로써 계산된다. 비교를 위한 서열의 최적 배열은 공지된 연산방식의 컴퓨터에 의한 임플러먼테이션에 의해(예를 들면, GAP, BESTFIT, FASTA 및 TFAST in the Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group (GCG), 575 Science Dr., Madison, WI, or BlastN and BlastX available from the National Center for Biotechnology Information), 또는 검사에 의해 이루어질 수 있다.

본 발명의 “덴드로비움 속 난초”는 석곡, 고귀석곡, 덴드로비움 핌브리아툼, 덴드로비움 덴시플로룸 등의 덴드로비움을 모두 포함할 수 있으며, 바람직하게는 석곡일 수 있다.

상기의 덴드로비움속 난초의 꽃 기관 특이적 프로모터를 포함하는 발현벡터는 바람직한 일 예로써, pACT::GL3300일 수 있으나 반드시 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 본 발명은 서열번호2의 프로모터 서열을 포함하는 발현벡터로 형질전환된 것을 특징으로 하는 재조합된 식물체를 제공할 수 있다.

용어 "재조합"은 세포가 이종의 핵산을 복제하거나, 상기 핵산을 발현하거나 또는 펩티드, 이종의 펩티드 또는 이종의 핵산에 의해 암호된 단백질을 발현하는 세포를 지칭하는 것이다. 재조합 세포는 상기 세포의 천연 형태에서는 발견되지 않는 유전자 또는 유전자 절편을, 센스 또는 안티센스 형태 중 하나로 발현할 수 있다. 또한 재조합 세포는 천연 상태의 세포에서 발견되는 유전자를 발현할 수 있으며, 그러나 상기 유전자는 인위적인 수단에 의해 세포 내 재도입된 것이다.

용어 "벡터"는 세포 내로 전달하는 DNA 단편(들), 핵산 분자를 지칭할 때 사용된다. 벡터는 DNA를 복제시키고 숙주세포에서 독립적으로 재생산될 수 있다. 용어 "전달체"는 흔히 "벡터"와 호환하여 사용된다. 용어 "발현 벡터"는 목적한 코딩 서열과, 특정 숙주 생물에서 작동가능하게 연결된 코딩 서열을 발현하는데 필수적인 적정 핵산 서열을 포함하는 재조합 DNA 분자를 의미한다.

또한 본 발명은 서열번호2의 프로모터 서열을 포함하는 발혁벡터로 형질전환 시키는 것을 특징으로 하는 덴드로비움속 난초의 꽃 기관 형질 조절 방법을 제공할 수 있다.

이하, 본 발명을 제조예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 제조예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 제조예에 의해 한정되는 것은 아니다.

제조예 1. 석곡의 부분적 엑틴 cDNA 클로닝

석곡으로부터 엑틴 cDNA를 클로닝하기 위하여 총 RNA의 분리를 수행하였다. 개화 후 3 일째 꽃 기관을 채취한 다음 액체 질소를 이용하여 샘플을 파쇄한 후 easy-spin^TM II Plant RNA Extraction Kit를 사용하여, 제작사의 매뉴얼에 따라 수행하였다. cDNA 합성은 일반적으로 전장클로닝(full-length cloning)이 가능한 Clonetech사의 SMARTer^TM PCR cDNA 라이브러리 키트의 매뉴얼을 이용하였고, 합성된 cDNA 풀은 Enzynomic사의 pTOP V2-TA 벡터에 클로닝하여 cDNA라이브러리를 구축하였다.

먼저 석곡의 엑틴(Actin) 유전자를 찾기 위해서 기존의 보고된 단자엽 식물 및 덴드로비움(Dendrobium) 속 식물의 엑틴 유전자의 염기서열을 비교하여 degenerated primer를 디자인하여 석곡의 cDNA를 주형으로 PCR을 수행하였다. 사용된 프라이머셋트는 5‘-GARAARATGACNCARATHATG-3‘와 5’-TCNACRTCRCAYTTCATDAT-3’ 이다. PCR 은 94℃에서 30초, 50℃에서 30초, 72℃에서 1분 반응을 40회 반복하여 수행하였다. 증폭된 PCR 산물은 전기영동을 통해 회수하여 Genotech 사에 의뢰하여 염기서열을 분석을 수행하였다(도1).

제조예 2. 엑틴 유전자의 5' RACE 수행

엑틴 유전자의 잠재적 전사 개시점을 알기 얻어진 석곡의 cDNA 라이브러리를 Clonetech사의 SMARTer II A 프라이머와 엑틴 유전자-특이적 역방향 프라이머(5‘-AACCTGTCGTGCGGCCACTAGCATATAGGG-3’)를 이용하여 PCR을 수행하였다. PCR은 94℃에서 30초, 50℃에서 30초, 72℃에서1분 동안 모두 35회전을 수행하였다. 특이적으로 증폭된 PCR 산물은 전기영동을 통해 회수하여 Genotech 사에 의뢰하여 염기서열을 분석하였으며, 도2에 기재된 엑틴 유전자의 DNA 염기서열을 얻었다.

제조예 3. 역방향 PCR ( inverse - PCR , I- PCR )을 이용한 잠재적 엑틴 프로모터 클로닝

확보한 엑틴 유전자의 염기서열(도2)를 바탕으로 네스티드 프라이머(nested priemr)를 제작하였다. PCR에 사용한 프라이머는 표1과 같다(도 3).

Nested primer	서열
iACT5	5‘-AACCTGTCGTGCGGCCACTAGCATATAGGG-3‘
iACT 3-1	5‘-CTCCTTGATGAAGATCCTCACTGAGAGAGG-3‘
iACT 3-2	5‘-GCCATCCTTCGATTGGATCTTGCGAGCCG-3‘

얻어진 석곡의 게놈 DNA를 EcoRI 제한효소로 자른 후 T4 DNA 연결효소를 이용해 게놈 DNA 단편을 self-ligation 하여 주형으로 사용하였다.

PCR은 94℃에서 30초, 65℃에서 30초, 72℃에서 3분 동안 모두 35회전을 수행하였다. 특이적으로 증폭된 PCR 산물은 전기영동을 통해 회수한 뒤 염기서열을 결정하였다. 얻어진 염기서열은 cDNA 서열과 비교하여 인트론 부위와 엑손부위를 결정하였다. (도4, 도 5)

제조예4 . 2차 역방향 PCR (I- PCR ) 수행

역방향 PCR을 통해 확보한 엑틴 유전자의 5' 지역 염기서열은 잠재적 전장 cDNA 의 염기서열과 비교한 결과 유사성이 없는 것으로 나타났으며, 따라서 이 부위는 인트론(intron) 지역으로 추정되었다. 따라서 더 상류(upstream) 지역을 찾기 위해 확보한 5' 지역 염기서열을 기초로 2차 I-PCR을 수행하였다(DNA walking). 이때 게놈 DNA는 제한효소 EcoRV로 잘라 self-ligation 하여 사용하였고 사용된 네스티드 프라이머(nested primer)는 표2와 같다(도 6).

Nested Primer	서열
iACT 5-3	5‘-AAAGTAAGTCGCCTTATACCAAGGGCG-3‘
iACT 5-4	5‘-CTCTAAAACAAGCCAAAACCCTCGCAG-3‘
iACT 3-5	5‘-TCAAGGGTGGATCTGGAGCTACCA-3‘
iACT 3-6	5‘-CCTGTTTGAATCGCGTTTGTAGCA-3‘

2차 I-PCR을 통해 특이적으로 증폭된 밴드는 전기영동을 통해 회수한 뒤 염기서열을 분석하였다 (도8).

제조예5 . 엑틴 프로모터의 분석

2차 I-PCR을 통해 얻어진 엑틴 프로모터의 분석을 위해 엑틴 프로모터를 GUS-루시퍼라아제 퓨전(GUS-luciferase fusion)(Koo et al., 2007)에 클로닝하였다.

엑틴 프로모터는 -2974에서 +93에 해당되는 부위를 PCR을 통해 증폭하여 GUS-Luciferase와 fusion 시켰고 vector의 이름을 pACT::GL3300으로 명명하였다(도9) -2974에서 +93에 해당하는 부위는 도8의 서열의 1부터 3067bp 부위(서열번호2)이며, 2975bp 부분이 전사 개시점으로 추정되었다.

<110> NATIONAL ARBORETUM, KOREA FOREST SERVICE <120> Promoter for Flower Organ of Dendrobium <160> 2 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 5462 <212> DNA <213> Dendrobium monilliforme <400> 1 atgcatacat acccatcaat aatatcacat taaaattttc aattcaaagt cgaaaagaaa 60 cacagcaatg atcacgagaa attaatacat gcggagactg gacacagaga actgttcgat 120 ttatcttttt gttcatcacc gtgtttttac tattcacaaa aacaaaactg aatgattttg 180 tatctaatct cacacaaaat aatctctgca tgaccacatc tataatgaaa tgtttcttca 240 aaaaaaccca atcgggctat tcctcagctt taaatacagc gccctatgac cttaacattc 300 ttcttgagtc gtcattttcc agcgacagtt gtgatgccat tctatcagaa ttttttgact 360 tgcgggcctg caagcagagc tgccagcctg ttctccacaa cacgagcatt ataggcctaa 420 aatgttttat tattactgta agtattagta taaacagatc atgtgccatg tgattgcatt 480 ggtcaagcac taagaggggt ttaaatatat atattttatt tttgctatca tgattttttt 540 atttagtagt taatagatta aaagcttcat ttgggacgat ttttcgactt catcctaaaa 600 tatcttttta gtataaaatt aaaattttgt actataaagc tattttaaga agcagtaaga 660 aaattgttct aaaagaagtc tgaggattta 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aaacagagaa aagatgacac 4920 agataatgtt cgagactttc aatgtgcctg ccatgtatgt tgccattcaa gctgttcttt 4980 ccctatatgc tagtggccgc acgacaggtt tgtatcttca ttagtctttc tgctatcaca 5040 ttttcatctt cagatggtct cccactgaaa cttttgcttg cttgtaggta ttgtgcttga 5100 ttctggtgat ggtgttagcc atacagtccc tatttatgag ggttatgcac tcccccatgc 5160 catccttcga ttggatcttg cgagccgaga tctcacagac tccttgatga agatcctcac 5220 tgagagagga tattctttca ccactactgc agagcgtgaa attgtcaggg acatcaagga 5280 gaagctagcc tatgttgccc ttgattatga gcaggagttg gaaacctcca agagcagctc 5340 ttccatagaa aagagctatg aactccctga tggtcaggtt attactattg gagctgggag 5400 atttaggtgc ccagaagttc tcttccagcc atctctgatt ggaatggaag ctgctggaat 5460 tc 5462 <210> 2 <211> 3067 <212> DNA <213> Dendrobium monilliforme <400> 2 atgcatacat acccatcaat aatatcacat taaaattttc aattcaaagt cgaaaagaaa 60 cacagcaatg atcacgagaa attaatacat gcggagactg gacacagaga actgttcgat 120 ttatcttttt gttcatcacc gtgtttttac tattcacaaa aacaaaactg aatgattttg 180 tatctaatct cacacaaaat aatctctgca tgaccacatc tataatgaaa tgtttcttca 240 aaaaaaccca atcgggctat tcctcagctt taaatacagc gccctatgac cttaacattc 300 ttcttgagtc gtcattttcc agcgacagtt gtgatgccat tctatcagaa ttttttgact 360 tgcgggcctg caagcagagc tgccagcctg ttctccacaa cacgagcatt ataggcctaa 420 aatgttttat tattactgta agtattagta taaacagatc atgtgccatg tgattgcatt 480 ggtcaagcac taagaggggt ttaaatatat atattttatt tttgctatca tgattttttt 540 atttagtagt taatagatta aaagcttcat ttgggacgat ttttcgactt catcctaaaa 600 tatcttttta gtataaaatt aaaattttgt actataaagc tattttaaga agcagtaaga 660 aaattgttct aaaagaagtc tgaggattta tttggtacgg ctttcttctc acttattaaa 720 gcaatttctt agttattttt ttttaaattt aaatttttgc gctaaaagtt gcttcataaa 780 acaataagaa aactctcaca aagtaagcct aaggctttat ttgggatggt tttcttactg 840 cttcttgaat tagctttcta gtacaaaaat tttaattgca agaagtaaga aagccttccc 900 aaacgaaccc ttataattta tgtcggacgc ctacctttct ttataaagat gatcgtaaat 960 ttgttgaaaa gaaaattatt gtaaaaaata acttcttatt accaaatttt attgaaagta 1020 gtaaaaaaaa aaaaatcaat tatatattat ttggaaattg aaataaagtc atgcgattga 1080 caactctcat tatattaaaa aggtatgttt gccatcatga gctacattaa ggacagcgtt 1140 tcatgtcagt tatgggcaag ttaaaggcat cattagatca tagacgctca aataattaat 1200 tattcgaagt gagttgaacg gtccagatca agctgagttc ttgagctaat catatgcaaa 1260 ggactaaaca aattaagtag attttggact aataataatc acttaatttt ctaaaatgag 1320 acatatttgt atatataatt acttcatttt cattgatgaa aagtctttta aataatagtt 1380 agtcacatca tttagataaa ttaagagata aataatatga tggttatctt gatttaatgg 1440 gccatatttg tgaaaatgct ttatttttag tttcattgca cgacatatat gtgacactca 1500 ataatggatc tgtaaaaatt tgcttatagt tttttaattg ctaattaaaa tacatttatt 1560 catattttgt agataaatac attatctaat aattaaatat ttgtttccta aaaggggaca 1620 atatgttaat tggtaaattt ttctttatgc tctctagtag gaacttttat ttggtccggt 1680 cacaggacgt atctctaggt tcggccgcca gtacaattgc accacgcgtt ctcactattt 1740 accgcgcgcc ccgacaaccc gacccggaac ggacccatga tggctagata tttctcgatt 1800 ttgccaggta ttgctcgata ttactcggta ttgctaggta ttggtcgatt ttgcttgaga 1860 ataaccaata ccgaccaaat accgaccaaa taccgagcaa atactgagtt gtaccgagtt 1920 tttctagaaa aactcggtac aactctgtat tacctcgata ttggtcttca cagagcggta 1980 tttctcgtta ttgccatgca atacctagca atacctagca aacaccgagt aatacatcgc 2040 aatgcgcgaa catagcattc tcgggtttcg gtatgggtca agtcgtcggg ccgcacgata 2100 gagagcaaga gcatgtggcg acatgttatt ggcggacgaa cgtagctcta cgtccggtca 2160 gaggacgtaa taattgttcc tctagtagag ttgagcaaaa aattatgtgt tgcgtgctaa 2220 aaaaatttga gtccatagag tttatgcttt acatcttagg atgtacaaac attcagcacg 2280 aacagttgca atttagtggc tcattagtgt attaattagg gatctgatta ttacataacg 2340 ttgaaaattt gattaattca ttgattagga aagcattgat tgacttttca cttttatttg 2400 cgtttcaaat ttgaaaataa gggcctaagt ggtgttggat gtaagagagc tagaaagagc 2460 caattgtaac ttatttttct tcacattata gtgaaattag cgtctcccca tgcacgtaga 2520 catatatgcc gaaccacgta aatcgtcatg ctctttatgt tgattgtgct ttgattctta 2580 ttttgtttat gctatttgga caacataatt aatatttttt gtacaacgct tgcttccctt 2640 ttgattcttt caccttaagc aaactataga tgtggcaaaa gttttacaat ttttttttct 2700 gcaaaaaata aatatatgat accctacgag gcaaagttaa ctaactagat taacaagtaa 2760 taaaaaattg tttaagtaaa taaaagccca atggccaaca tgccagctcg tggagccctt 2820 gtggtccttc aagattggac cgcgatctta acgaggagga gagcccgaaa tcctaaggcc 2880 taagcccgtc ttgctcaatt atttccacaa ctgattcctc ttctcacttg accaaccgct 2940 cgatctataa attgcccagt ttcctcacat ttatgccctg ctagtcggct gctccgacga 3000 cggactcgct tctaggtctt gagggcttaa ggtctacata gaagaggagg aaggcggctt 3060 tgaatcg 3067

Claims

서열번호1의 번역개시코돈 ATG 상위 4477bp 염기서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 덴드로비움(Dendrobium)속 난초의 꽃 기관 특이적 프로모터.
제1항에 있어서, 상기 덴드로비움속 난초는 석곡(Dendrobium monile)인 것을 특징으로 하는 덴드로비움속 난초의 꽃 기관 특이적 프로모터.
제1항 또는 제2항 중 어느 한 항의 프로모터를 포함하는 발현벡터.
제3항에 있어서, 상기 발현벡터는 pACT::GL3300인 것을 특징으로 하는 발현벡터.
서열번호2의 프로모터 서열을 포함하는 발현벡터로 형질전환된 것을 특징으로 하는 식물체
서열번호2의 프로모터 서열을 포함하는 발혁벡터로 형질전환 시키는 것을 특징으로 하는 덴드로비움속 난초의 꽃기관 형질 조절 방법.
제6항에 있어서, 상기 텐드로비움 속 난초는 석곡인 것을 특징으로 하는 꽃기관 형질 조절 방법.