KR20130044222A

KR20130044222A - 우레탄, 요소, 아미딘 및 관련된 Ｘａ 인자의 억제제

Info

Publication number: KR20130044222A
Application number: KR1020127025881A
Authority: KR
Inventors: 드미트리 니콜라에비치 타라소프; 드미트리 빅토로비치 말라코프
Original assignee: 토브빈, 드미트리 게나디에비치
Priority date: 2010-03-03
Filing date: 2011-03-02
Publication date: 2013-05-02
Also published as: WO2011108963A1; HK1182700A1; US20130005778A1; BR112012021884B1; ZA201207345B; UA107106C2; HRP20192125T1; HUE047249T2; SI2542529T1; DK2542529T3; EA201000506A1; WO2011108963A8; EP2542529A1; CN102971294B; LT2542529T; BR112012021884B8; CN102971294A; CY1122645T1; JP2013521278A; NZ602769A

Abstract

본 발명은 분리된 상태 및 다른 단백질과 복합물인 경우 모두, Ⅹa 인자의 선택적 억제제로 유효한 새로운 종류의 화합물, 이들의 약제학적으로 허용가능한 염 및 약제학적으로 허용가능한 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 상기 화합물들은 급성 관동맥 증후군, 심근 경색, 불안정 협심증, 난치성 협심증, 후-혈전용해 치료 또는 후-관상동맥 형성술에 의해 발생하는 혈전증, 급성 허혈 매개된 뇌혈관 증후군, 색전성 뇌졸중, 혈전성 뇌졸중, 혈액 응고 장애에 수반하는 인간 및 다른 포유류의 다른 질병들과 같은 질병들을 치료 및 방지하기 위해서 사용될 수 있다.

Description

우레탄, 요소, 아미딘 및 관련된 Ｘａ 인자의 억제제 {URETHANES, UREAS, AMINDINES AND RELATED INHIBITORS OF FACTOR Ⅹa}

본 발명은, 분리된 경우 및 다른 단백질과 복합체로 모아졌을 때의 경우 모두에, 강력하고 매우 선택적인 Ⅹa 인자의 억제제인 새로운 종류의 화합물에 관한 것이다. 다른 관점에서, 본 발명은 인간 및 다른 포유류에서의 혈액 응고에 대한 강력하고 선택적인 억제제로서 유용한 새로운 종류의 화합물, 그들의 약제학적으로 허용가능한 염, 및 그들의 약제학적으로 허용가능한 조성물에 관한 것이다. 또 다른 관점에서, 본 발명은 인간 및 다른 포유류에서 응고 장애에 수반되는 질병을 치료하기 위하여 새로운 종류의 약제를 사용하는 새로운 방법에 관한 것이다.

출혈의 제어인 지혈(hemostasis)은, 외과적인 방법에 의하여 또는 혈관의 생리학적 상태, 또는 응고에 영향을 주어 유발된다. 본 발명은 특히 혈액 응고 및 부상, 염증, 질병, 선천결함, 기능 장애, 또는 다른 장애 이후에 인체의 기능을 유지하는 그 역할에 관한 것이다.

트롬빈은 상기 응고의 원인이 되는 주요 단백질이다.

트롬빈은 피브리노겐의 피브린으로의 전환에 촉매작용을 하는 능력으로 인해, 혈전증에 있어 주된 역할을 한다.

트롬빈의 직접 및 간접 억제제는 최근까지 다양한 항응고제 전략들의 초점이 되어 왔고, 그 예로 문헌[Claeson, G., "혈액 응고 시스템에 있어 트롬빈 및 다른 프로테아제들의 억제제 및 기질로서의 합성 펩티드 및 펩티도미메틱 (Synthetic Peptides and Peptidomimetics as Substrates and Inhibitors of Thrombin and Other Protease in the Blood Coagulation System)", Blood Coag. Fibrinol. 5, 411-436 (1994)]이 있다. 병원에서 쓰이는 항응고제의 몇몇 종류들은 트롬빈의 직접 혹은 간접 억제제(헤파린, 저분자량 헤파린, 쿠마린, 등)이다.

단백질(Ⅹa 인자)을 포함하는 프로트롬비나제(prothrombinase) 복합물은 효소전구체 프로트롬빈을 활성 트롬빈으로 전환시킨다. Ⅹa 인자는 세린 프로테아제의 종류에 속하며, 그들의 활성화로 인해 단백질 (인자) Ⅹ로부터 형성된다. 다양한 단백질 기질 및 특정 수용체에 작용하는 트롬빈과는 달리, Ⅹa 인자는 명백히 단일 기질, 즉 프로트롬빈에만 작용한다. Ⅹa인자의 한 분자는 트롬빈 138 분자까지 생성할 수 있으므로, 트롬빈의 형성의 억제제로서의 단백질 Ⅹa의 직접 억제제는 항응고제 전략에서 효율적인 약제로 사용될 수 있다. 따라서, 단백질 Ⅹa를 선택적으로 억제하는 약제는 응고와 수반되는 질병에 대한 체외 진단 시약, 또는 치료제로 유용할 수 있다는 것은 명백하다.

흡혈성 생물로부터 유래된 폴리펩타이드는 효과적인 Ⅹa 인자의 억제제일 수 있다. 미국 특허 4,588,587은 멕시칸 거머리, 헤멘테리아 오피시날리스(Mexican leech, Haementeria officinalis)의 타액의 항응고제 작용을 설명한다. 상기 타액의 활성 성분은 폴리펩타이드 Ⅹa 인자 억제제인 안티스타신(antistasin; ATS)이다. 진드기 항응고 펩타이드(tick anticoagulant peptide; TAP)라는 다른 강력하고 아주 특수한 Ⅹa 인자의 억제제는, 연진드기 올니티도로스 무바타(Ornithidoros moubata)의 홀 바디 추출물(whole body extract)로부터 분리되었다.

폴리펩타이드가 아닌 Ⅹa 인자 억제 화합물들 역시 다음 문헌들에 따라 준비되었다: Tidwell, R. R. 등., "합성 프로테아제 억제제를 사용한 항응고 전략. Ⅹa 억제제 대 트롬빈 억제제 (Strategies for Anticoagulation With Synthetic Protease Inhibitors. Ⅹa Inhibitors Versus Thrombin Inhibitors)", Thromb. Res., 19, 339-349 (1980); Turner, A. D. 등, "IⅩa 및 Ⅹa 인자 및 트롬빈의 비가역적 억제제로서의 p-아미디노 에스테르 (p-Amidino Esters as Irreversible Inhibitors of Factor IⅩa and Ⅹa and Thrombin)", Biochemistry, 25, 4929-4935 (1986); Hitomi, Y. 등, "항응고 시스템에의 신규 합성 프로테아제 억제제 (FUT-175)의 억제 효과 (Inhibitory Effect of New Synthetic Protease Inhibitor (FUT-175) on the Coagulation System)", Haemostasis, 15, 164-168 (1985); Sturzebecher, J. 등, "소 Ⅹa 인자 및 트롬빈의 합성 억제제. 그들의 항응고 효율의 비교 (Synthetic Inhibitors of Bovine Factor Ⅹa and Thrombin. Comparison of Their Anticoagulant Efficiency)", Thromb. Res., 54, 245-252 (1989); Kam, C. M. 등, "트립신 및 혈액 응고 세린 프로테아제에 대한 메커니즘 기반의 이소쿠마린 억제제: 신규 항응고제들 (Mechanism Based Isocoumarin Inhibitors for Trypsin and Blood Coagulation Serine Protease: New Anticoagulants)", Biochemistry, 27, 2547-2557 (1988); Hauptmann, J. 등, "항응고제의 비교 및 합성 트롬빈 및 Ⅹa 인자 억제제의 항혈전 효과 (Conzparisofz of the Anticoagulant and Antithrombotic Effects of Synthetic Thrombin and Factor Ⅹa Inhibitors)", Thromb. Haemost., 63, 220-223 (1990); 등.

다른 이들은, 아미디노 치환기를 갖는 질소 함유 헤테로환 화합물로, 상기 화합물의 두 작용기가 그의 두 활성 사이트에서 Ⅹa 인자에 결합할 수 있는 것과 같은, 작은 분자 유기 화합물인 Ⅹa 인자 억제제에 대해 보고하였다. 예를 들어, WO 98/28269는 말단 C (=NH)-NH2 기를 갖는 피라졸 화합물을 개시하고; WO 97/21437은 직쇄 혹은 측쇄의 알킬렌, -C (=O) 또는 -S (=O) 2 브릿징 기를 통해 나프탈렌기에 결합된 염기 라디칼로 치환된 벤즈이미다졸 화합물을 개시하고; WO 99/10316은 카복스아미드알킬렌아미노 브릿지를 통해 3-이미디노페닐기에 결합된 4-페닐-N-알킬아미디노-피페리딘을 갖는 화합물을 개시하고; EP 798295는 치환되거나 치환되지 않은 설폰아미드들을 통해 연결된 아미디노나프틸기에 결합된 4-페녹시-N-알킬아미디노-피페리딘기를 갖는 화합물을 개시한다.

그럼에도 불구하고, 지혈의 조절을 위한 효과적인 치료제, 혈전의 생성 및 재협착 및 염증과 같은 트롬빈에 의해 야기된 혈관계의 병리학적 변화의 방지 및 치료에 대한 필요가 있다. 특히, 단백질 Ⅹa를 선택적으로 억제하는 화합물에 대한 필요가 지속적으로 존재한다. 트롬빈에 비해 단백질 Ⅹa에 보다 높은 결합 정도를 갖는 화합물은 그들이 좋은 생체적합성 및/또는 용해성을 가질 경우 특히 바람직하다.

발명의 요약

본 발명의 첫번째 양상은 일반식 Ⅰ의 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 이성질체, 염, 수화물, 용매화물 및 전구약물 유도체로 나타내어지고,

상기 식에서:

R₁은 H, -Cl, -F, -Br, -OH, -Me, -OMe로부터 선택되고;

R₂는 CH 및 N으로부터 선택되며;

R₃ 및 R₄는 각각 독립적으로 H, -Cl, -F, -Br, -OH, -Me, -OMe로부터 선택되고;

R₅는 H 또는, 히드록실, 카복실, 또는 에스테르기를 임의적으로 포함하는 C₁-C₆ 알킬로부터 선택되며;

R₆는 다음으로부터 선택되고:

상기 식에서 X₁, X₂, X₃ 및 X₄는 각각 독립적으로 H 또는, 히드록실, 카복실, 또는 에스테르기를 임의적으로 포함하는 C₁-C₆ 알킬로부터 선택되며;

R₈, R₉, R₁₀는 각각 독립적으로 H, -Cl, -F, -Br, -OH, -Me, -OMe로부터 선택되고;

R₇은 H, -Cl, -F, -Br, -OH, -Me, -OMe 또는 다음으로부터 선택되고:

상기 식에서 Z₁, Z₂, Z₃, Z₄, Z₅, Z₆, Z₇, Z₈, Z₉ 및 Z₁₀은 각각 독립적으로 H이거나, 히드록실, 카복실, 또는 에스테르기를 임의적으로 포함하는 C₁-C₆ 알킬로부터 선택된다.

특히 바람직한 것은 다음으로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 화합물들이다:

본 발명의 다른 양상은, 본 발명의 화합물의 치료적으로 유효한 양을 포함하는, 원하지 않는 혈전증으로 특징지어지는 포유류의 증상을 방지 또는 치료하기 위한 약제학적 조성물로 나타내어진다.

일반식(Ⅰ)의 화합물인 활성 성분 이외에, 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 담체, 용매, 또는 희석제를 더 포함하며, 이들은 Remington의 "약학의 과학 및 실무 (The Science and Practice of Pharmacy)", Kirk의 Othmer의 "화학 기술의 백과사전 (Encyclopedia of Chemical Technology)", 단행본 "치료의 약리학적 기초 (The Pharmacological Basis of Therapeutics), 3rd Edition"에 보고된 시약들일 수 있다.

본 발명의 또 하나의 양상은, 약제학적으로 유효한 양의 화학식(Ⅰ)의 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 원하지 않는 혈전증으로 특징지어지는 포유류의 증상을 방지 또는 치료하기 위한 방법으로 나타내어진다. 원하지 않는 혈전증으로 특징지어지는 포유류의 증상으로 특히 다음으로 잘 알려져 있다: 급성 관동맥 증후군, 심근 경색, 불안정 협심증, 난치성 협심증, 후-혈전용해 치료 또는 후-관상동맥 형성술에 수반된 혈전증, 혈전 매개된 뇌혈관 증후군, 색전성 뇌졸중, 혈전성 뇌졸중, 일과성허혈발작, 정맥 혈전증, 심부정맥 혈전증, 폐색전증, 응고장애, 파종성 혈관내 응고증, 혈전성 혈소판감소성 자반증, 폐색성 혈전 혈관염, 헤파린-유발된 혈소판감소증에 수반되는 혈전성 질환, 체외 순환에 수반되는 혈전성 합병증, 보형물 장치의 부착에 수반되는 혈전성 합병증.

본 발명의 또 하나의 양상은 화학식(Ⅰ)의 화합물을 투여하는 단계를 포함하는 생물학적 샘플의 응고를 방지하는 방법으로 나타내어진다.

발명의 개시

화합물들의 합성

일반식(Ⅰ)의 화합물은, 예를 들어 1,1'-카보닐디이미다졸 (CDI), 디시클로헥실카보디이미드 (DCC), N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카보디이미드 히드로클로라이드 (EDCI) 또는 다른 적절한 결합 시약과 같은, 적절한 결합 시약의 존재하에, 상응하는 아민(Ⅱ)과 상응하는 카복실산 유도체(Ⅲ)를 결합하는, 모든 적절한 방법으로 합성될 수 있다.

아미드 결합의 형성은 클로로안하이드라이드(Ⅳ) 및 아민(Ⅱ)의 반응으로도 달성될 수 있다. 클로로안하이드라이드(Ⅳ)는 SOCl₂ 또는 POCl₃와 같은 적절한 시약으로 처리함으로써 상응하는 카복실산(Ⅲ)로부터 얻을 수 있다.

상응하는 카복실산 클로로안하이드라이드(Ⅳ)는 아민(Ⅱ)과 쉽게 반응하여 타겟 화합물(Ⅰ)을 생산한다.

아민(Ⅱ)은 적절한 조건 하에서 상응하는 니트로화합물(Ⅴ)의 환원으로부터 얻어질 수 있다. 환원 시약으로, 예를 들어, SnCl₂ 또는 Ni-Raney의 촉매 수화물이 사용될 수 있다.

니트로화합물(Ⅴ)은 상응하는 아민(Ⅵ) 및 니트로 치환된 카복실산(Ⅶ)으로부터 합성될 수 있다.

일반적으로, 카복실산(Ⅶ)은 SOCl₂ 또는 POCl₂와 같은 적합한 시약으로 처리함으로써 상응하는 클로로안하이드라이드(Ⅷ)로 변형된다. 그러 후에 클로로안하이드라이드(Ⅷ)는 아민(Ⅵ)과 순조롭게 반응하여 니트로화합물(Ⅴ)을 생성한다. 아미드 결합 합성의 대체적인 방법은, DCC, EDCI, 및 CDI와 같은 적절한 결합 시약의 존재하에서 카복실산(Ⅶ)을 아민(Ⅵ)과 반응시키는 것일 수 있다.

대부분의 경우, 상기 언급된 반응들은 좋은 수율로 꽤 순조롭게 진행된다. 그러나 일부 R₅ 및 R₆ 라디칼로 치환된 카복실산(Ⅲ)은 아민(Ⅱ)과 반응하지 않는다. 이러한 경우 아미드 결합의 순조로운 형성을 위해 적절한 보호기가 사용되어야 하고 상응하는 기 R₅ 및 R₆는 아미드 결합 형성 이후에 분자에 도입되어야 한다.

카복실산(Ⅲa)의 요소 유도체는, 상응하는 메틸 또는 에틸 아미노에스테르(ⅩI)의 CDI, 그리고 그에 이어 아민 X₂X₃NH로의 처리에 의해 합성될 수 있다. 그런 후에 에틸 또는 메틸 에스테르들은 알칼리 매질에서 가수분해되어 목적하는 화합물을 생성한다:

대체적인 방법으로, 아미노산(Ⅲb)은 X₂=H의 경우에 이소시아네이트 또는 시안산 나트륨과의 반응에 의해 상응하는 요소 유도체 Ⅲc로 변형될 수 있다.

X₂=H의 경우, 상응하는 요소 유도체(Ⅲc)는 DCC, CDI, 및 EDCI의 존재하에서 아민(Ⅱ)과 반응하지 않는 것에 주의하여야 하고; 따라서 먼저 보호기 Y를 갖는, 보호된 아민(Ⅰa)을 합성하여야 할 필요성이 있다.

보호기로는, 예를 들어, 트리플루오로아세틸기가 사용될 수 있다. 보호된 아민(Ⅰa)은 적절한 결합 시약의 존재 하에서 아민(Ⅱ)과 결합함으로써 상응하는 보호된 아미노산(Ⅲd)으로부터 합성될 수 있다. 그런 후에 상기 보호기는 적절한 시약에 의해 제거되어야 하고; 트리플루오로아세틸기의 경우, NaOH가 이러한 목적을 위해 사용될 수 있다. 그런 후에 아민(Ⅰb)은 적절한 방법에 의해 상응하는 요소 유도체(Ⅰc)로 변형될 수 있다. 예를 들어, 아민(Ⅰb)의 CDI 및 아민 X₂X₃NH에 의한 연속적인 반응 또는, X₃=H의 경우, 상응하는 이소시아네이트 OCN-Z₂에 의한 반응.

상기 아민(Ⅰb)은 또한 건조 HCl 기체의 존재하에 니트릴 NC-CZ₂Z₃Z₄에 의한 반응으로 아미딘(Ⅰd)으로 변형될 수 있다. 아미닌(Ⅰd)은 더 나아가 적절한 알킬- 또는 아릴 할로겐화물 X1-Hal 또는 다른 적절한 이탈기를 함유하는 시약에 의해 아미딘(Ⅰe)으로 알킬화 또는 아릴화 될 수 있다.

실시예 1

반응 1

1.9 g의 2-니트로벤조산을 20 ml의 SOCl₂에서 칼슘 클로라이드 튜브가 구비된 환류 콘덴서로 4시간 동안 비등시키고; 얻은 용액을 냉각시키고, 회전식 증발기에서 증발시키고, 무수 THF로 2회 재증발시키고; 잔여물을 10 ml의 THF에서 용해시키고; 얻은 용액을 20 ml의 THF 중 1.5 g의 2-아미노-5-클로로피리딘의 교반된 용액에 30분 동안 적가한다. 15시간 내에, 반응 혼합물을 증발시키고; 잔여물을 30 ml의 클로로포름에서 용해시키고, NaHCO₃의 포화 수용액으로 린스하고; 클로로포름 추출물을 증발시키고; 잔여물을 30 내지 50 μm의 실리카겔로 충전된 40×150 mm 컬럼 상에 적용한다. 생성물을 클로로포름으로 용리한다. 검출을 UV 장치를 사용하여 280 nm의 파장에서 수행한다. UV 흡수 분획을 수집하고; 생성물의 순도를 클로로포름에서 박층 크로마토그래피 기술로 조절한다. 생성물의 R_f는 0.4이고; 개시 2-아미노-5-클로로피리딘의 R_f는 0.7이다. 클로로포름 중 2-니트로벤조산은 개시에 머무른다 (R_f < 0.1). N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-니트로벤즈아미드의 수율은 2.4 g이다. 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 278, M+Na 300.

반응 2

1.5 g의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-니트로벤즈아미드를 20 ml의 에틸아세테이트에서 용해시키고 0.3 ml의 농축 HCl로 산성화된 20 ml의 물 중 4 g의 SnCl₂의 용액과 혼합한다. 반응 혼합물을 1시간 동안 격렬히 교반하고, 가열하여 비등시키고, 추가 3시간 동안 비등시킨다. 그 다음, 반응 혼합물을 여과하고, 수성 분획을 CHCl₃로 추출하고, 상기 수성 분획을, 교반하면서 30 ml의 10%의 수성 암모니아 용액을 첨가하고, 밤새 정치하여 침전시킨다. 다음날, 침전물을 여과하고, 물 및 클로로포름으로 린스한다. 수성 분획을 클로로포름으로 추출하고; 추출물들을 합치고, 증발시킨다. 잔여물을 40 내지 60 μm의 실리카겔로 충전된 30×150 mm 컬럼 상에 적용한다. 생성물을 클로로포름으로 용리한다. 검출을 UV 장치를 사용하여 280 nm의 파장에서 수행하고; 생성물의 순도를 클로로포름에서 박층 크로마토그래피 기술로 조절한다. 생성물의 R_f는 0.6이고; 2-아미노-N-(5-클로로피리딘-2-일)벤즈아미드의 수율은 650 mg이다. 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 248, M+Na 270.

반응 3

1 g의 4-메틸아미노벤조산을 냉각시키며 3 ml의 트리플루오로아세트산 무수물과 혼합한다. 2시간 내에, 반응 혼합물을 증발시키고, 클로로포름으로 재증발시킨다. 잔여물을 클로로포름에서 용해시키고, 40 내지 60 μm의 실리카겔로 충전된 35×150 mm 컬럼 상에서 적용한다. 부산물을 클로로포름으로 용리하고, 표적 생성물을 1% 아세트산이 첨가된 9:1 클로로포름/이소프로판올 혼합물로 용리한다. 4-메틸아미노벤조산의 수율은 700 mg이다. R_f은 0.2-0.4이다. 음이온 중 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M-1 246.

반응 4

3000 mg의 2-아미노-N-(5-클로로피리딘-2-일)벤즈아미드, 250 mg의 4-메틸아미노벤조산의 트리플루오로아세테이트, 및 250 mg의 EDCI를 1 ml의 THF과 혼합하고, 3일 동안 교반한다. 그 다음, 혼합물을 증발시키고, 40 내지 60 μm의 실리카겔로 충전된 25×150 mm 컬럼 상에 적용한다. 생성물을 클로로포름으로 용리한다; R_f=0.5. N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[(4-메틸(트리플루오로아세틸)아미노페닐카보닐)아미노]벤즈아미드의 수율은 430 mg이다. 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 477, M+Na 499.

반응 5

400 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[(4-메틸-(트리플루오로아세틸)아미노페닐카보닐)-아미노]벤즈아미드를 5 ml의 이소프로판올에 용해시키고, 2 ml의 10% NaOH을 첨가한다. 반응 혼합물을 3시간 동안 교반하고; 그 다음, 과잉 알칼리를 HCl의 5% 수용액으로 중화하고; 반응 혼합물을 증발시키고, 40 내지 60 μm의 실리카겔로 충전된 25×150 mm 컬럼 상에 적용한다. 생성물을 클로로포름으로 용리한다; R_f=0.4. N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[(4-메틸아미노페닐카보닐)아미노]벤즈아미드의 수율은 320 mg이다. 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 381, M+Na 403.

반응 6

300 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[(4-메틸-아미노페닐카보닐)아미노]벤즈아미드를 가열하면서 5 ml의 아세토니트릴에서 용해시킨다. 얻은 용액을 얼음 상에서 냉각시키고, 그 다음, 건조 기상 HCl를 거기에 통과시킨다. 30분 내에 용액을 냉각기에 넣고, 5℃에서 48시간 동안 정치한다. 그 다음, 격렬히 교반하면서 반응 혼합물에 NaHCO₃를 첨가한다. 새로운 양의 NaHCO₃을 가스 방출이 멈출 때까지 첨가한다. 통상적으로 상기 절차는 약 0.5 g의 NaHCO₃를 필요로 한다. 과량을 HCl로 중화시 얻은 용액을 5 ml의 물로 희석하고, 클로로포름으로 3회 추출한다. 클로로포름 추출물들을 합치고, 증발시킨다. 잔여물을 물에서 용해시키고, C2 (RP2)의 역상으로 충전된 20×250 mm 컬럼 상에 적용한다. 상기 컬럼을 100 ml의 물로 린스하고; 그 다음, 0 내지 50%의 에틸 알콜 구배에 의한 용리를 1% 아세트산의 백그라운드에 대해서 수행한다. 생성물의 수율은 약 30%의 에틸 알코올에 대한 것이다. 순도 조절을 9:1 디옥산/수성 암모니아 시스템에서 TLC 기술로 수행한다; Rf=0.2. N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[(4-에탄이미도일-메틸아미노페닐카보닐)아미노]벤즈아미드의 수율은 200 mg이다. 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 422, M+Na 444.

실시예 2

실시예 1과 유사하게, 실시예 1의 반응 1에 기재된 절차에 따라, 800 mg의 5-메틸-2-니트로벤조산으로 650 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-5-메틸-2-니트로벤즈아미드를 얻는다. R_f=0.45 (클로로포름). 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 292, M+Na 314.

실시예 1의 반응 2에 기재된 절차에 따라, 600 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-5-메틸-2-니트로벤즈아미드로 350 mg의 2-아미노-N-(5-클로로피리딘-2-일)-5-메틸벤즈아미드를 얻는다. R_f=0.65 (클로로포름). 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 262, M+Na 284.

실시예 1의 반응 4에 기재된 절차에 따라, 300 mg의 2-아미노-N-(5-클로로피리딘-2-일)-5-메틸벤즈아미드 및 4-메틸아미노벤조산의 250 mg의 트리플루오로아세테이트로 430 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[(4-메틸(트리플루오로아세틸)아미노페닐카보닐)아미노]-5-메틸-벤즈아미드를 얻는다. R_f=0.55 (클로로포름). 양전하 이온에서의 질량 스펙트럼 m+H 491.

트리플루오로아세틸의 제거를 실시예 1의 반응 5에 기재된 절차에 따라 수행한다. 400 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[(4-메틸(트리플루오로아세틸)아미노페닐카보닐)-아미노]-5-메틸-벤즈아미드로 300 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[(4-메틸아미노페닐카보닐)아미노]5-메틸벤즈아미드를 얻는다. R_f=0.5 (클로로포름). 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 395, M+Na 417.

아미딘의 합성을 실시예 1의 반응 6에 기재된 절차에 따라 수행한다. 반응은 250 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[(4-메틸아미노페닐카보닐)-아미노]-5-메틸벤즈아미드를 포함한다. 상기 반응으로 130 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[(4-에탄이미도일-메틸-아미노페닐카보닐)아미노]5-메틸벤즈아미드를 얻는다. 9:1 디옥산/수성 암모니아 시스템에서 TLC. R_f=0.2 (클로로포름). 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 436, M+Na 458.

실시예 3

실시예 1과 유사하게, 실시예 1의 반응 1에 기재된 절차에 따라, 900 mg의 5-클로로-2-니트로벤조산으로 750 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-5-클로로-2-니트로벤즈아미드를 얻는다. R_f=0.3 (클로로포름). 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 312, M+Na 334.

실시예 1의 반응 2 에 기재된 절차에 따라, 700 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-5-클로로-2-니트로벤즈아미드로 350 mg의 2-아미노-N-(5-클로로피리딘-2-일)-5-클로로벤즈아미드를 얻는다. R_f=0.6 (클로로포름). 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 282, M+Na 304.

실시예 1의 반응 4에 기재된 절차에 따라, 300 mg의 2-아미노-N-(5-클로로피리딘-2-일)-5-클로로벤즈아미드 및 250 mg의 4-메틸아미노벤조산의 트리플루오로아세테이트로 430 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[(4-메틸(트리플루오로아세틸)아미노페닐카보닐)아미노]-5-클로로-벤즈아미드를 얻는다. R_f=0.5 (클로로포름). 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 511, M+Na 533.

트리플루오로아세틸의 제거를 실시예 1의 반응 5에 기재된 절차에 따라 수행한다. 400 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[(4-메틸(트리플루오로아세틸)아미노페닐카보닐)아미노]-5-클로로-벤즈아미드로 300 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[(4-메틸아미노페닐카보닐)아미노]-5-클로로벤즈아미드를 얻는다. R_f=0.45 (클로로포름). 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 415, M+Na 437.

아미딘의 합성을 실시예 1의 반응 6에 기재된 절차에 따라 수행한다. 이 반응은 250 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[(4-메틸아미노페닐카보닐)-아미노]-5-클로로벤즈아미드를 포함한다. 이 반응으로 130 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[(4-에탄이미도일-메틸-아미노페닐카보닐)아미노]-5-클로로벤즈아미드를 얻는다. R_f=0.2 (9:1 디옥산/수성 암모니아). 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 456, M+Na 478.

실시예 4

실시예 1과 유사하게, 실시예 1의 반응 1에 기재된 절차에 따라, 1.5 g의 5-메톡시-2-니트로벤조산으로 1.1 g의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-5-메톡시-2-니트로벤즈아미드를 얻는다. R_f=0.5 (클로로포름). 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 308, M+Na 330.

실시예 1의 반응 2에 기재된 절차에 따라, 1 g의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-5-메톡시-2-니트로벤즈아미드로 300 mg의 2-아미노-N-(5-클로로피리딘-2-일)-5-메톡시벤즈아미드를 얻는다. R_f=0.7 (클로로포름). 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 278, M+Na 300.

실시예 1의 반응 4에 기재된 절차에 따라, 250 mg의 2-아미노-N-(5-클로로피리딘-2-일)-5-메톡시벤즈아미드 및 220 mg의 4-메틸아미노벤조산의 트리플루오로아세테이트로 310 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[(4-메틸(트리플루오로아세틸)아미노페닐카보닐)아미노]-5-메톡시벤즈아미드를 얻는다. R_f=0.6 (클로로포름). 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 507, M+Na 529.

트리플루오로아세틸의 제거를 실시예 1의 반응 5에 기재된 절차에 따라 수행한다. 280 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[(4-메틸(트리플루오로아세틸)아미노페닐카보닐)-아미노]-5-메톡시벤즈아미드로 200 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[(4-메틸아미노페닐카보닐)아미노]5-메톡시벤즈아미드를 얻는다. R_f=0.5 (클로로포름). 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 411, M+Na 433.

아미딘의 합성을 실시예 1의 반응 6에 기재된 절차에 따라 수행한다. 이 반응은 170 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[(4-메틸아미노페닐카보닐)-아미노]-5-메톡시벤즈아미드를 포함한다. 상기 반응으로 110 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[(4-에탄이미도일-메틸-아미노페닐카보닐)아미노]5-메톡시벤즈아미드를 얻는다. R_f=0.2 (9:1 디옥산/수성 암모니아). 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 452, M+Na 474.

실시예 5

반응 1

1 g의 아미노살리실산을 20 ml의 수성 디옥산에서 용해시킨다. 상기 용액에 900 mg의 디-tert-부틸디카보네이트 및 3 ml의 NaOH의 10% 수용액을 첨가한다. 24시간 내에, 반응 혼합물을 증발시키고, 4-tert-부톡시카보닐아미노살리실산을 에탄올로부터 재결정화에 의해 정제한다. 수율은 1.1 g이다.

반응 2

0.5 g의 4-tert-부톡시카보닐아미노살리실산, 0.6 g의 N-(3-클로로프로필)-아세트아미드, 및 0.5 g의 K₂CO₃의 혼합물을 110℃로 가열하고; 1시간 내에, 상기 반응 혼합물을 냉각시키고, 물로 희석하고, 클로로포름으로 추출하고; 상기 추출물을 증발시키고, 40 내지 60 μm의 실리카겔로 충전된 30×150 mm 컬럼 상에 적용하고; 생성물을 9:1 클로로포름/에탄올 혼합물로 용리한다. R_f=0.5 (9:1 클로로포름/에탄올). 2-[3-(아세틸아미노)프로폭시]-4-[(tert-부톡시카보닐)아미노]벤조산의 수율은 400 mg이다.

반응 3

370 mg의 2-[3-(아세틸아미노)프로폭시]-4-[(tert-부톡시카보닐)아미노]벤조산을 3 ml의 에탄올에서 용해시키고, 100 μl의 10% HCl을 첨가한다. 2시간 내에, 반응 혼합물을 증발시키고, 생성물을 에탄올로부터 재결정화에 의해 정제한다. R_f=0.45 (9:1 클로로포름/에탄올). 2-[3-(아세틸아미노)프로폭시]-4-아미노벤조산의 수율은 300 mg이다.

반응 4

270 mg의 2-[3-(아세틸아미노)프로폭시]-4-아미노벤조산을 300 μl의 40% 포름알데하이드, 2 ml의 물 중 400 mg의 NaOH의 용액, 및 400 mg의 아연 분말과 함께 혼합한다. 반응 혼합물을 교반하고, 60℃에서 4시간 동안 정치하고; 그 다음, 이를 여과하고, 침전물을 수성 에탄올로 린스하고; 여과물을 수성 HCl로 최대 pH 4-5로 산성화하고, 증발시키고, 잔여물을 40 내지 60 μm의 실리카겔로 충전된 25×150 mm 컬럼 상에 적용한다. 생성물을 9:1 클로로포름/에탄올 시스템에서 용리한다. R_f=0.5. 2-[3-(아세틸아미노)프로폭시]-4-메틸아미노)벤조산의 수율은 150 mg이다.

반응 5

130 mg의 2-[3-(아세틸아미노)프로폭시]-4-메틸아미노)벤조산을, 500 mg의 NaOH를 함유하는 2 ml의 수성 에탄올에 용해시킨다. 혼합물을 앰플에 넣어 밀봉하고, 이를 10시간 동안 100℃까지 가열한다. 앰플을 냉각시키고, 개봉하고, 과잉 알칼리를 희석된 HCl로 pH 8-9로 중화하고; 그 다음, 얻은 용액을 증발시킨다. 잔여물을 40 내지 60 μm의 실리카겔로 충전된 20×150 컬럼 상에 적용한다. 생성물을 클로로포름으로 용리한다. R_f=0.3. 2-[3-아미노프로폭시]-4-(메틸아미노)벤조산의 수율은 100 mg이다.

반응 6

90 mg의 2-[3-아미노프로폭시]-4-(메틸아미노)벤조산을 1 ml의 트리플루오로아세트산 무수물과 혼합한다. 1시간 내에, 반응 혼합물을 증발시키고, 잔여물을 40 내지 60 μm의 실리카겔로 충전된 20×150 컬럼 상에 적용한다. 생성물을 9:1 클로로포름/에탄올 시스템에서 용리한다. 2-[3-(트리플루오로아세틸아미노)프로폭시]-4-[트리플루오로아세틸-(메틸)아미노]벤조산의 수율은 100 mg이다.

반응 7

80 mg의 2-아미노-N-(5-클로로피리딘-2-일)벤즈아미드, 100 mg의 2-[3-(트리플루오로아세틸아미노)프로폭시]-4-[트리플루오로아세틸-(메틸)아미노]벤조산 및 80 mg의 EDCI를 1 ml의 THF에서 혼합하고, 48시간 동안 교반한다. 그 다음, 반응 혼합물을 증발시키고, 잔여물을 실리카겔을 갖는 컬럼 상에 적용하고, 생성물을 메틸렌 클로라이드로 용리한다. R_f=0.5 (메틸렌 클로라이드). N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-{4-트리플루오로아세틸(메틸)아미노]-2-[3-(트리플루오로아세틸아미노)프로폭시]페닐-카보닐아미노}벤즈아미드의 수율은 80 mg이다.

반응 8

70 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-{4-트리플루오로아세틸(메틸)아미노]-2-[3-(트리플루오로아세틸아미노)프로폭시]페닐카보닐아미노}벤즈아미드를 100 μl의 3M NaOH 및 1 ml의 에탄올의 혼합물에서 용해시키고, 1시간 동안 교반하고; 그 다음, 용액을 중화시키고, 잔여물을 증발시키고, 생성물을 실리카겔상 크로마토그래피 기술로 정제한다. 생성물을 메틸렌 클로라이드로 용리한다. R_f=0.4. N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[4-메틸아미노-2-(3-아미노프로폭시)-페닐카보닐아미노]-벤즈아미드의 수율은 55 mg이다.

반응 9

50 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[4-메틸아미노-2-(3-아미노프로폭시)-페닐카보닐아미노] 벤즈아미드를 2 ml의 아세토니트릴에서 가열하면서 용해시킨다. 얻은 용액을 얼음 상에서 냉각시키고, 그 다음, 건조 기상 HCl를 거기에 통과시킨다. 30분 내에, 용액을 냉각기에 넣고, 5℃에서 48시간 동안 정치한다. 그 다음, 반응 혼합물에 NaHCO₃을 첨가하고, 철저히 교반한다. 새로운 양의 NaHCO₃을 가스 방출이 멈출 때까지 첨가한다. 과잉 HCl의 중화 후에 얻은 용액을 5 ml의 물로 희석하고, 클로로포름으로 3회 추출한다. 클로로포름 처리된 추출물을 증발시킨다. 잔여물을 물에 용해시키고, 1% 수성 NaOH로 pH 9까지 적정한다. 용액을 25℃에서 3시간 동안 정치하고; 그 다음, 이를 중화시키고, 증발시키고, 잔여물을 역상 C2 (RP2)로 충전된 20×250 컬럼 상에 적용한다. 상기 컬럼을 100 ml의 물로 세정하고; 그 다음, 1% 수성 아세트산의 백그라운드에 대해서 에틸 알콜 0 내지 50%의 구배로 용리를 수행한다. 생성물의 수율은 약 30%의 에틸 알코올에 대한 것이다. 순도 조절은 8:2 이소프로판올/수성 암모니아 시스템에서 TLC 기술로 수행한다. R_f=0.5. N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[4-(에탄이미도일메틸아미노)-2-(3-아미노프로폭시)페닐카보닐-아미노]벤즈아미드의 수율은 20 mg이다. 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 495, M+Na 517.

실시예 6

반응 1

95 mg의 2-아미노-N-(5-클로로피리딘-2-일)-5-메틸벤즈아미드, 120 mg의 2-[3-(트리플루오로아세틸아미노)-프로폭시]-4-[트리플루오로아세틸(메틸)아미노]벤조산, 및 80 mg의 EDCI를 1 ml의 THF과 혼합하고, 48시간 동안 교반한다. 그 다음, 반응 혼합물을 증발시키고, 잔여물을 실리카겔을 갖는 컬럼 상에 적용하고, 생성물을 메틸렌 클로라이드로 용리한다. R_f=0.5. N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[4-(트리플루오로아세틸(메틸)아미노-2-(3-트리플루오로아세틸아미노)프로폭시)페닐카보닐아미노]-5-메틸벤즈아미드의 수율은 85 mg이다.

반응 2

80 mg의 N-(클로로피리딘-2-일)-2-[4-(트리플루오로아세틸(메틸)아미노)2-(3-(트리플루오로아세틸아미노)-프로폭시)페닐카보닐아미노]-5-메틸벤즈아미드를 100 μl의 3M의 수성 NaOH 및 1 ml의 에탄올의 혼합물에서 용해시키고, 1시간 동안 교반하고; 그 다음, 용액을 중화시키고, 잔여물을 증발시키고; 생성물을 실리카겔상 TLC 기술로 정제한다. 생성물을 메틸 클로라이드로 용리한다. R_f=0.4. N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[4-메틸아미노-2-(3-아미노프로폭시)페닐카보닐아미노]-5-메틸벤즈아미드의 수율은 65 mg이다.

반응 3

60 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[4-메틸아미노-2-(3-아미노프로폭시)-페닐카보닐아미노]-5-메틸벤즈아미드를 2 ml의 아세토니트릴에서 가열하면서 용해시킨다. 얻은 용액을 얼음 상에서 냉각시키고, 건조 기상 HCl를 거기에 통과시킨다. 30분 내에, 용액을 냉각기에 넣고, 50℃에서 48시간 동안 정치한다. 그 다음, 반응 혼합물에 NaHCO₃을 첨가하고, 철저히 교반한다. 새로운 양의 NaHCO₃을 가스 방출이 멈출 때까지 첨가한다.과잉의 HCl의 중화시에 얻은 용액을 5 ml의 물로 희석하고, 클로로포름으로 3회 추출한다. 클로로포름 처리된 추출물들을 합치고, 증발시킨다. 잔여물을 물에서 용해시키고, 1% NaOH로 pH=9로 적정한다. 용액을 25℃에서 3시간 동안 정치하고, 중화시키고, 증발시키고, 잔여물을 역상 C2 (RP2)로 충전된 2-x250 컬럼 상에 적용한다. 컬럼을 100 ml의 물로 세정하고, 그 다음, 1% 수성 아세트산의 백그라운드에 대해서 0 내지 50%의 에틸 알콜 구배로 용리를 수행한다. 생성물의 수율은 약 30%의 에틸 알코올에 대한 것이다. 순도를 8:2 이소프로판올/수성 암모니아 시스템에서 TLC 기술로 조절한다. R_f=0.5. N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[4-에탄이미도일메틸아미노)-2-(3-아미노프로폭시)페닐카보닐-아미노]-5-메틸-벤즈아미드의 수율은 30 mg이다. 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 509, M+Na 531.

실시예 7

반응 1

95 mg의 2-아미노-N-(5-클로로피리딘-2-일)-5-클로로벤즈아미드, 90 mg의 2-[3-(트리플루오로아세틸아미노)프로폭시]-4-[트리플루오로아세틸(메틸아미노)벤조산, 및 80 mg의 EDCI를 1 ml의 THF과 혼합하고, 48시간 동안 교반한다. 그 다음, 반응 혼합물을 증발시키고, 잔여물을 실리카겔을 함유하는 컬럼 상에 적용하고, 생성물을 메틸렌 클로라이드로 용리한다. R_f=0.5 (메틸렌 클로라이드). N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[4-(트리플루오로아세틸(메틸)아미노)-2-(3-(트리플루오로아세틸아미노)-프로폭시)페닐카보닐아미노]-5-클로로벤즈아미드의 수율은 85 mg이다.

반응 2

80 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[4-(트리플루오로아세틸(메틸)아미노)-2-(3-(트리플루오로아세틸아미노)-프로폭시)페닐카보닐아미노]-5-클로로벤즈아미드를 100 μl의 3M 수성 NaOH 및 1 ml의 에탄올의 혼합물에서 용해시키고, 1시간 동안 교반하고; 그 다음, 용액을 중화시키고, 잔여물을 증발시키고, 생성물을 실리카겔상 크로마토그래피 기술로 정제한다. 생성물을 메틸렌 클로라이드로 용리한다. R_f=0.4. N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[4-메틸아미노-2-(3-(아세틸아미노)프로폭시)페닐카보닐아미노]-5-클로로벤즈아미드의 수율은 65 mg이다.

60 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[4-메틸아미노-2-(3-(아세틸아미노)프로폭시)페닐-카보닐-아미노]-5-클로로벤즈아미드를 2 ml의 아세토니트릴에서 가열하면서 용해시킨다. 얻은 용액을 얼음 상에서 냉각시키고, 건조 기상 HCl를 거기에 통과시킨다. 30분 내에, 용액을 냉각기에 넣고, 5℃에서 48시간 동안 정치한다. 그 다음, 반응 혼합물에 NaHCO₃를 혼합하고, 철저히 교반한다. 새로운 양의 NaHCO₃을 가스 방출이 멈출 때까지 첨가한다. 과잉의 HCl의 중화시에 얻은 용액을 5 ml의 물에서 희석하고, 클로로포름으로 3회 추출한다. 클로로포름 처리된 추출물을 합치고, 증발시킨다. 잔여물을 물에서 용해시키고, 1% 수성 NaOH로 pH=9까지 적정한다. 용액을 25℃에서 3시간 동안 정치하고, 중화시키고, 증발시키고, 잔여물을 역상 C2 (RP2)로 충전된 20×250 컬럼 상에 적용한다. 컬럼을 100 ml의 물로 세정하고; 그 다음, 1% 수성 아세트산의 백그라운드에 대해서 0 내지 50%의 에틸 알콜 구배로 용리를 수행한다. 생성물의 수율은 약 30%의 에틸 알코올에 대한 것이다. 순도를 8:2 이소프로판올/수성 암모니아 시스템에서 TLC 기술로 조절한다. R_f=0.5. N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[4-(에탄이미도일메틸아미노)-2-(3-아미노프로폭시)페닐카보닐아미노]-5-클로로벤즈아미드의 수율은 30 mg이다. 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 528, M+Na 550.

실시예 8

반응 1

90 mg의 2-아미노-N-(5-클로로피리딘-2-일)-5-메톡시벤즈아미드, 100 mg의 2-[3-트리플루오로아세틸아미노)프로폭시]-4-[트리플루오로아세틸(메틸아미노)]벤조산, 및 90 mg의 EDCI를 1 ml의 THF과 혼합하고, 48시간 동안 교반한다. 그 다음, 반응 혼합물을 증발시키고, 잔여물을 실리카겔을 갖는 컬럼 상에 적용하고, 생성물을 메틸렌 클로라이드로 용리한다. R_f=0.5 (메틸렌 클로라이드). N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[4-(트리플루오로아세틸(메틸)아미노)-2-(3-(트리플루오로아세틸아미노)프로폭시)페닐카보닐아미노]-5-메톡시벤즈아미드의 수율은 85 mg이다.

반응 2

80 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[4-(트리플루오로아세틸(메틸)아미노)-2-(3-(트리플루오로아세틸아미노)프로폭시)페닐카보닐아미노]-5-메톡시벤즈아미드를 100 μl의 3 M 수성 NaOH 및 1 ml의 에탄올의 혼합물에 용해시키고, 1시간 동안 교반하고; 그 다음, 용액을 중화시키고, 잔여물을 증발시키고, 생성물을 실리카겔상 크로마토그래피 기술로 정제한다. 생성물을 메틸렌 클로라이드로 용리한다. R_f=0.4. N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[4-(메틸아미노-2-(3-아미노프로폭시)페닐카보닐아미노]-5-메톡시벤즈아미드의 수율은 65 mg이다.

60 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[4-(메틸아미노-2-(3-아미노프로폭시)페닐카보닐아미노]-5-메톡시벤즈아미드를 가열하면서 2 ml의 아세토니트릴에서 용해시킨다. 얻은 용액을 얼음으로 냉각시키고, 건조 기상 HCl를 거기에 통과시킨다. 30분 내에, 용액을 냉각기에 넣고, 5℃에서 48시간 동안 정치한다. 그 다음, 반응 혼합물에 NaHCO₃를 가스 방출이 멈출 때까지 첨가한다. 과잉의 HCl의 중화시 얻은 용액을 5 ml의 물에 용해시키고, 클로로포름으로 3회 추출한다. 클로로포름 처리된 추출물을 합치고, 증발시킨다. 잔여물을 물에서 용해시키고, 1% 수성 NaOH로 pH = 9까지 적정한다. 용액을 25℃에서 3시간 동안 정치하고; 그 다음, 용액을 중화시키고, 증발시키고, 잔여물을 역상 C2 (RP2)로 충전된 20×250 컬럼 상에 적용한다. 컬럼을 100 ml의 물로 세정하고, 1% 수성 아세트산의 백그라운드에 대해서 에틸 알콜 0 내지 50%의 구배로 용리를 수행한다. 생성물의 수율은 약 30%의 에틸 알코올에 대한 것이다. 생성물의 순도를 8:2 이소프로판올/수성 암모니아 시스템에서 TLC 기술로 조절한다. R_f=0.5. N-(5-클로로피리딘-2-일)2-[4(에탄이미도일메틸아미노)-2-(3-아미노프로폭시)페닐카보닐-아미노]-5-메톡시벤즈아미드의 수율은 30 mg이다. 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 525, M+Na 547.

실시예 9

반응 1

1.5 g의 4-메틸아미노-6-플루오로살리실산을 20 ml의 수성 디옥산에서 용해시킨다. 용액을 2 g의 디-tert-부틸디카보네이트 및 3 ml의 NaOH 10% 수용액과 함께 첨가한다. 24시간 내에, 상기 반응 혼합물을 증발시키고, 4-tert-부톡시카보닐(메틸아미노)-6-플루오로살리실산을 에탄올로부터 재결정화로 정제한다. 수율은 1.6 g이다.

반응 2

1.5 g의 4-4-tert-부톡시카보닐(메틸아미노)-6-플루오로살리실산, 1.6 g의 N-(3-클로로프로필)-트리플루오로아세트아미드, 및 1.5 g의 K₂CO₃의 혼합물을 110℃로 가열하고; 1시간 내에 반응 혼합물을 냉각시키고, 물로 희석하고, 클로로포름으로 추출하고, 추출물을 40 내지 60 μm의 실리카겔로 충전된 30×150 컬럼 상에 적용하고; 생성물을 9:1 클로로포름/에탄올 혼합물로 용리한다. R_f=0.5 (클로로포름/에탄올 혼합물). 2-[3-(트리플루오로아세트아미노)프로폭시]-4-[(tert-부톡시카보닐)메틸아미노]-6-플루오로벤조산의 수율은 390 mg이다.

반응 3

370 mg의 2-[3-(트리플루오로아세트아미노)프로폭시]-4-[(tert-부톡시카보닐)메틸아미노]-6-플루오로벤조산을 3 ml의 에탄올에서 용해시키고, 100 μl의 10% HCl을 첨가했다. 2시간 내에 반응 혼합물을 증발시키고, 생성물을 에탄올로부터 재결정화로 정제한다. R_f=0.45 (9:1 클로로포름/에탄올). 2-[3-트리플루오로아세틸아미노)프로폭시]-4-메틸아미노-6-플루오로벤조산의 수율은 280 mg이다.

반응 4

270 mg의 2-[3-(트리플루오로 아미노)프로폭시]-4-메틸아미노-6-플루오로벤조산을 1 ml의 트리플루오로아세트산 무수물과 혼합한다. 1시간 내에 반응 혼합물을 증발시키고, 잔여물을 40 내지 60 μm의 실리카겔로 충전된 20×150 컬럼 상에 적용하고; 생성물을 9:1 클로로포름/에탄올 혼합물로 용리한다. 2-[3-(트리플루오로아세틸아미노)프로폭시]-4-[트리플루오로아세틸-(메틸)아미노]-6-플루오로벤조산의 수율은 280 mg이다.

반응 5

250 mg의 2-아미노-N-(5-클로로피리딘-2-일)-5-메틸벤즈아미드, 280 mg의 2-[3-(트리플루오로아세틸아미노)프로폭시]-4-[트리플루오로아세틸(메틸)아미노]-6-플루오로벤조산, 및 300 mg의 EDCI를 2 ml의 THF와 혼합하고, 48시간 동안 교반한다. 그 다음, 반응 혼합물을 증발시키고, 잔여물을 그 내에 실리카겔을 갖는 컬럼 상에 적용하고, 생성물을 메틸렌 클로라이드로 용리한다. R_f=0.5 (메틸렌 클로라이드). N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[4-(트리플루오로아세틸(메틸)아미노)-2-(3-트리플루오로아세틸아미노)프로폭시)-6-플루오로페닐 카보닐아미노]-5-메틸벤즈아미드의 수율은 270 mg이다.

반응 6

250 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[4-(트리플루오로아세틸(메틸)아미노)-2-3-(트리플루오로아세틸아미노)프로폭시)-6-플루오로페닐카보닐아미노]-5-메틸벤즈아미드를 300 μl의 3M 수성 NaOH 및 2 ml의 에탄올의 혼합물에서 용해시키고, 1시간 동안 교반하고; 그 다음, 용액을 중화시키고, 잔여물을 증발시키고, 생성물을 실리카겔상 크로마토그래피 기술로 정제한다. 생성물을 메틸렌 클로라이드로 용리한다. R_f=0.4. N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[4-메틸아미노-2-(3-아미노프로폭시)-6-플루오로페닐카보닐아미노]-5-메틸벤즈아미드의 수율은 160 mg이다.

반응 7

150 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[4-메틸아미노-2-(3-아미노프로폭시)-6-플루오로페닐카보닐아미노]-5-메틸벤즈아미드를 가열하면서 5 ml의 아세토니트릴에서 용해시킨다. 얻은 용액을 얼음 내에서 냉각시키고; 그 다음, 건조 기상 HCl를 거기에 통과시킨다. 30분 내에, 용액을 냉각기에 넣고, 5℃에서 48시간 동안 정치한다. 반응 혼합물에 NaHCO₃를 첨가하고, 철저히 교반한다. 새로운 양의 NaHCO₃을 가스 방출이 멈출 때까지 첨가한다. 과잉의 HCl의 중화시 얻은 용액을 10 ml의 물에서 희석하고, 클로로포름으로 3회 추출한다. 클로로포름 처리된 추출물을 합치고, 증발시킨다. 잔여물을 물에서 용해시키고, 1% 수성 NaOH로 pH = 9까지 적정한다. 상기 용액을 25℃에서 3시간 동안 정치하고, 증발시키고, 잔여물을 역상 C2 (FP2)로 충전된 20×250 컬럼 상에 적용한다. 컬럼을 100 ml의 물로 세정하고; 그 다음, 용리를 1% 수성 아세트산의 백그라운드에 대해서 0 내지 50%의 에틸 알콜 구배로 수행한다. 생성물의 수율은 약 30%의 에틸 알코올에 대한 것이다. 생성물 순도를 3:5:2 아세토니트릴/디옥산/수성 암모니아 시스템에서 TLC 기술로 조절한다. R_f=0.5. N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[4-(에탄이미도일메틸아미노)-2-(3-아미노프로폭시)-6-플루오로페닐카보닐아미노]-5-메틸벤즈아미드의 수율은 70 mg이다. 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 527, M+Na 549.

실시예 10

반응 1

250 mg의 2-아미노-N-(5-클로로피리딘-2-일)-5-클로로벤즈아미드, 290 mg의 2-[3-(트리플루오로아세틸아미노)프로폭시]-4-[트리플루오로아세틸(메틸)아미노]-6-플루오로벤조산, 및 280 mg EDCI를 1 ml의 THF과 혼합하고, 48시간 동안 교반한다. 그 다음, 반응 혼합물을 증발시키고, 잔여물을 실리카겔로 충전된 컬럼 상에 적용하고, 생성물을 메틸렌 클로라이드로 용리한다. R_f=0.5 (메틸렌 클로라이드). N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[4-트리플루오로아세틸(메틸)아미노-2-(3-(트리플루오로아세틸아미노)프로폭시)-6-플루오로페닐카보닐아미노]-5-클로로벤즈아미드의 수율은 270 mg이다.

반응 2

180 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[4-트리플루오로아세틸(메틸)아미노-2-(3-트리플루오로아세틸아미노)프로폭시)6-플루오로페닐카보닐아미노]-5-클로로벤즈아미드를 400 μl의 3M NaOH 및 2 ml의 에탄올의 혼합물에서 용해시키고, 1시간 동안 교반하고; 그 다음, 용액을 중화시키고, 잔여물을 증발시키고, 생성물을 실리카겔상 크로마토그래피 기술로 정제한다. 생성물을 메틸렌 클로라이드로 용리한다. R_f=0.4. N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[4-메틸아미노-2-(3-아미노프로폭시)-6-플루오로페닐카보닐아미노]-5-클로로벤즈아미드의 수율은 160 mg이다.

반응 3

150 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[4-메틸아미노-2-(3-아미노-프로폭시)-6-플루오로페닐카보닐아미노]-5-클로로벤즈아미드를 가열하면서 5 ml의 아세토니트릴에서 용해시킨다. 얻은 용액을 얼음에서 냉각시키고, 건조 기상 HCl를 거기에 통과시킨다. 30분 내에, 용액을 냉각기에 넣고, 5℃에서 48시간 동안 정치한다. 그 다음, 반응 혼합물에 NaHCO₃를 첨가하고, 철저히 교반한다. 새로운 양의 NaHCO₃을 가스 방출이 멈출 때까지 첨가한다. 과잉의 HCl의 중화 후에 얻은 용액을 10 ml의 물로 희석하고, 클로로포름으로 3회 추출한다. 클로로포름 처리된 추출물을 합치고, 증발시킨다. 잔여물을 물에서 용해시키고, 1% 수성 NaOH로 pH = 9까지 적정한다. 용액을 25℃에서 3시간 동안 정치하고, 중화시키고, 증발시키고, 잔여물을 역상 C2 (RP2)로 충전된 20×250 컬럼 상에 적용한다. 컬럼을 100 ml의 물로 세정하고; 그 다음, 1% 수성 아세트산에 대해서 0 내지 50%의 에틸 알콜 구배로 용리를 수행한다. 생성물의 수율은 약 30%의 에틸 알코올에 대한 것이다. 생성물 순도를 3:5:2 아세토니트릴/디옥산/수성 암모니아 시스템에서 TLC 기술로 조절한다. R_f=0.5. N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[2-(3-아미노프로폭시)-6-플루오로-4(에탄아미도일메틸아미노)페닐카보닐아미노]-5-클로로벤즈아미드의 수율은 60 mg이다. 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 547, M+Na 569

실시예 11

반응 1

0.5 mg의 4-메틸아미노-2-플루오로벤조산을 1 ml의 트리플루오로아세트산 무수물과 혼합한다. 1시간 내에 반응 혼합물을 증발시키고, 잔여물을 40 내지 60 μm의 실리카겔로 충전된 20×150 컬럼 상에 적용한다. 생성물을 9:1 클로로포름/에탄올 시스템에서 용리한다. 2-플루오로-4-[트리플루오로아세틸 (메틸)아미노]벤조산의 수율은 470 mg이다.

반응 2

450 mg의 2-아미노-N-(5-클로로피리딘-2-일)-5-메틸벤즈아미드, 480 mg의 2-플루오로-4-[트리플루오로아세틸(메틸)아미노]벤조산, 및 500 mg의 EDCI를 3 ml의 THF에서 혼합하고 48시간 동안 교반한다. 그 다음, 반응 혼합물을 증발시키고, 잔여물을 실리카겔을 함유하는 컬럼 상에 적용하고, 생성물을 메틸렌 클로라이드로 용리한다. R_f=0.5 (메틸렌 클로라이드). N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[2-플루오로-4-트리플루오로아세틸(메틸)아미노페닐카보닐 아미노]5-메틸벤즈아미드의 수율은 470 mg이다.

반응 3

450 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[2-플루오로-4-트리플루오로아세틸(메틸)아미노페닐카보닐아미노]5-메틸벤즈아미드를 300 μl의 3 M 수성 NaOH 및 3 ml의 에탄올의 혼합물에서 용해시키고, 1시간 동안 교반하고; 그 다음, 용액을 중화시키고, 잔여물을 증발시키고, 생성물을 실리카겔상 크로마토그래피 기술로 정제한다. 생성물을 메틸렌 클로라이드로 용리한다. R_f=0.2. N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[2-플루오로-4-메틸아미노페닐카보닐아미노]-5-메틸벤즈아미드의 수율은 380 mg이다.

반응 4

350 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[2-플루오로-4-메틸아미노페닐카보닐아미노]-5-메틸벤즈아미드를 가열하면서 5 ml의 아세토니트릴에서 용해시킨다. 얻은 용액을 얼음으로 냉각시키고, 건조 기상 HCl를 거기에 통과시킨다. 30분 내에, 용액을 냉각기에 넣고, 5℃에서 48시간 동안 정치한다. 그 다음, 반응 혼합물에 NaHCO₃를 첨가하고, 철저히 교반한다. 새로운 양의 NaHCO₃을 가스 방출이 멈출 때까지 첨가한다. 과잉의 HCl의 중화 후에 얻은 용액을 10 ml의 물로 희석하고, 클로로포름으로 3회 추출한다. 클로로포름 처리된 추출물을 합치고, 증발시킨다. 잔여물을 물에 용해시키고, 1% 수성 NaOH로 pH = 9까지 적정한다. 용액을 25℃에서 3시간 동안 정치하고, 중화시키고, 증발시키고, 잔여물을 역상 C2 (RP2)로 충전된 20×250 컬럼 상에 적용한다. 컬럼을 100 ml의 물로 세정하고; 그 다음, 1% 수성 아세트산의 백그라운드에 대해서 0 내지 50%의 에틸 알콜 구배로 용리를 수행한다. 생성물의 수율은 약 30%의 에틸 알코올에 대한 것이다. 생성물 순도를 9:1 디옥산/수성 암모니아 시스템에서 TLC 기술로 조절한다. R =0.2. N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[2-플루오로-4-에탄이미도일(메틸)아미노)페닐카보닐아미노]5-메틸벤즈아미드의 수율은 160 mg이다. 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 454, M+Na 476.

실시예 12

반응 1

350 mg의 2-아미노-N-(5-클로로피리딘-2-일)-5-클로로벤즈아미드, 370 mg의 2-플루오로-4-[트리플루오로-아세틸(메틸아미노)]벤조산, 및 390 mg의 EDCI를 2 ml의 THF에서 혼합하고, 48시간 동안 교반한다. 그 다음, 반응 혼합물을 증발시키고, 잔여물을 실리카겔을 갖는 컬럼 상에 적용하고, 생성물을 메틸렌 클로라이드로 용리한다. R_f=0.5 (메틸렌 클로라이드). N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[2-플루오로-4-트리플루오로아세틸(메틸)아미노페닐카보닐아미노]-5-클로로벤즈아미드의 수율은 370 mg이다.

반응 2

350 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[2-플루오로-4-트리플루오로아세틸(메틸)아미노페닐카보닐아미노]-5-클로로벤즈아미드를 300 μl의 수성 NaOH 및 3 ml의 에탄올의 혼합물에서 용해시키고, 1시간 동안 교반하고; 그 다음, 용액을 중화시키고, 잔여물을 증발시키고, 생성물을 실리카겔상 크로마토그래피 기술로 정제한다. 생성물을 메틸렌 클로라이드로 용리한다. R_f=0.4. N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[2-플루오로-4-메틸아미노페닐카보닐아미노]-5-클로로벤즈아미드의 수율은 320 mg이다.

반응 3

300 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[2-플루오로-4-메틸아미노페닐카보닐아미노]-5-클로로벤즈아미드를 가열하면서 5 ml의 아세토니트릴에서 용해시킨다. 얻은 용액을 얼음에서 냉각시키고, 건조 기상 HCl를 거기에 통과시킨다. 30분 내에, 용액을 냉각기에 넣고, 5℃에서 48시간 동안 정치한다. 그 다음, 반응 혼합물에 NaHCO₃를 첨가하고, 철저히 교반한다. 새로운 양의 NaHCO₃을 가스 방출이 멈출 때까지 첨가한다. 과잉의 HCl의 중화 후에 얻은 용액을 10 ml의 물로 희석하고, 클로로포름으로 3회 추출한다. 클로로포름 처리된 추출물을 합치고, 증발시킨다. 잔여물을 물에서 용해시키고, 1% NaOH로 pH = 9까지 적정한다. 용액을 25℃에서 3시간 동안 정치하고, 중화시키고, 증발시키고, 잔여물을 역상 C2(RP2)로 충전된 2-x250 컬럼 상에 적용한다. 컬럼을 100 ml의 물로 세정하고; 그 다음, 수성 아세트산의 백그라운드에 대해서 0 내지 50%의 에틸 알콜 구배로 용리를 수행한다. 생성물의 수율은 약 30%의 에틸 알코올에 대한 것이다. 생성물 순도를 9:1 디옥산/수성 암모니아 시스템에서 TLC 기술로 조절한다. R_f=0.2. N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[2-플루오로-4-(에탄이미도일(메틸)아미노)페닐카보닐아미노]-5-클로로벤즈아미드의 수율은 140 mg이다. 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 474, M+Na 496.

실시예 13

반응 1

90 mg의 2-[3-(아세틸아미노)프로폭시]-4-(메틸아미노)벤조산을 1 ml의 트리플루오로아세트산 무수물과 혼합한다. 1시간 내에 반응 혼합물을 증발시키고, 잔여물을 40 내지 60 μm의 실리카겔로 충전된 20×150 컬럼 상에 적용한다. 생성물을 9:1 클로로포름/에탄올 시스템에서 용리한다. 2-[3-(아세틸아미노)프로폭시]-4-[트리플루오로아세틸(메틸)아미노)]벤조산의 수율은 100 mg이다.

반응 2

90 mg의 2-아미노-N-(5-클로로피리딘-2-일)-5-메틸벤즈아미드, 95 mg의 2-[3-(아세틸아미노)프로폭시]-4-[트리플루오로아세틸(메틸)아미노]벤조산, 및 80 mg의 EDCI를 1 ml의 THF에서 혼합하고, 48시간 동안 교반한다. 그 다음, 반응 혼합물을 증발시키고, 잔여물을 실리카겔을 함유하는 컬럼 상에 적용하고, 생성물을 메틸렌 클로라이드로 용리한다. R_f=0.5 (메틸렌 클로라이드). N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[4-(트리플루오로아세틸(메틸)아미노)-2-3-(아세틸아미노)프로폭시]페닐카보닐아미노]-5-메틸벤즈아미드의 수율은 80 mg이다.

반응 3

70 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[4-(트리플루오로아세틸(메틸)아미노)-2-(3-(아세틸아미노)프로폭시)페닐카보닐아미노]-5-메틸벤즈아미드를 100 μl의 3M 수성 NaOH 및 1 ml의 에탄올의 혼합물에서 용해시키고, 1시간 동안 교반하고; 그 다음, 용액을 중화시키고, 잔여물을 증발시키고, 생성물을 실리카겔상 크로마토그래피 기술로 정제한다. 생성물을 메틸렌 클로라이드로 용리한다. R_f=0.4. N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[4-메틸아미노-2-(3-(아세틸아미노)프로폭시)페닐카보닐아미노]-5-메틸벤즈아미드의 수율은 55 mg이다.

반응 4

50 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[4-메틸아미노-2-(3-(아세틸아미노)프로폭시)페닐카보닐아미노]-5-메틸벤즈아미드를 가열하면서 2 ml의 아세토니트릴에서 용해시킨다. 얻은 용액을 얼음에서 냉각시키고, 건조 수성 HCl을 거기에 통과시킨다. 30분 내에 용액을 냉각기에 넣고, 5℃에서 48시간 동안 정치한다. 그 다음, 반응 혼합물에 NaHCO₃를 첨가하고, 철저히 교반한다. 새로운 양의 NaHCO₃을 가스 방출이 멈출 때까지 첨가한다. 과잉의 HCl의 중화 후에 얻은 용액을 5 ml의 물에서 희석하고, 클로로포름으로 3회 추출한다. 클로로포름 처리된 추출물을 합치고고, 증발시킨다. 잔여물을 물에서 용해시키고, 1% 수성 NaOH로 pH = 9까지 적정한다. 용액을 25℃에서 3시간 동안 정치하고, 중화시키고, 증발시키고, 잔여물을 역상 C2 (RP2)로 충전된 20×250 컬럼 상에 적용한다. 컬럼을 100 ml의 물로 세정하고, 용리를 1% 수성 아세트산의 백그라운드에 대하여 0 내지 50%의 에틸 알코올 구배로 수행한다. 생성물의 수율은 약 30%의 에틸 알코올에 대한 것이다. 생성물 순도를 9:1 디옥산/수성 암모니아 시스템에서 TLC 기술로 조절한다. R_f=0.3. N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[4-(에탄이미도일메틸아미노)-2-(3-(아세틸아미노)프로폭시)페닐카보닐아미노]-5-메틸벤즈아미드의 수율은 20 mg이다. 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 551, M+Na 573.

실시예 14

반응 1

100 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[(4-메틸아미노페닐카보닐)아미노]-5-메틸벤즈아미드 및 150 mg의 나트륨 시아네이트를 1 ml의 THF에서 혼합하고, 300 μm의 아세트산을 첨가한다. 반응 혼합물을 24시간 동안 교반한다. 그 다음, 반응 혼합물을 증발시키고, 잔여물을 실리카겔을 함유하는 컬럼 상에 적용하고, 생성물을 클로로포름으로 용리한다. R_f=0.25 (클로로포름). N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[(4-카바모일(메틸)아미노페닐카보닐)아미노]-5-메틸벤즈아미드의 수율은 70 mg이다.

반응 2

60 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[(4-카바모일(메틸)아미노페닐카보닐)아미노]-5-메틸벤즈아미드를 2 ml의 THF에서 용해시키고, 용액에 200 μl의 디메틸설페이트를 첨가했다. 반응 혼합물을 24시간 동안 교반하고, 증발시키고, 잔여물에 대해 실리카겔상 크로마토그래피 분리를 수행한다. N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[(4-(이미노(메톡시)메틸)(메틸)아미노페닐카보닐)아미노] 5-메틸벤즈아미드의 수율은 클로로포름으로 용리한다. 수율은 40 mg이다. R_f=0.4 (클로로포름). 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 452, M+Na 474.

실시예 15

반응 1

250 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[(4-메틸아미노페닐-카보닐)아미노]-5-메틸벤즈아미드, 290 mg의 4-벤질-3,5-디메틸-1H 피라졸-1-카복사미딘 하이드로클로라이드, 및 130 μl의 트리에틸아민을 아세토니트릴에서 혼합하고, 60℃에서 24시간 동안 정치한다. 그 다음, 반응 혼합물을 증발시키고, 역상 C2 상의 크로마토그래피 기술로 분리한다. 생성물을 1% 수성 아세트산의 백그라운드에 대하여 에탄올 구배로 용리한다. 2-[4-카밤이미도일메틸아미노]페닐카보닐아미노]-N-(5-클로로피리딘-2-일)5-메틸벤즈아미드의 수율은 150 mg이다.

반응 2

120 mg의 2-[4-카밤이미도일메틸아미노]페닐카보닐아미노]-N-(5-클로로피리딘-2-일)5-메틸벤즈아미드를 2 ml의 THF에서 용해시키고, 100 μl의 메틸 아이오다이드 및 150 mg의 K₂CO₃를 첨가한다. 반응 혼합물을 50℃로 가열하고, 10시간 동안 정치한다. 그 다음, 반응 혼합물을 증발시키고, 잔여물을 역상 C2 상의 크로마토그래피 기술로 분리한다. 2-[4-(메틸(N-메틸카밤이미도일)-아미노)]페닐카보닐아미노]-N-(5-클로로피리딘-2-일)-5-메틸벤즈아미드의 수율은 70 mg이다. R_f=0.3 (8:2 디옥산/수성 암모니아). 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 451, M+Na 473.

실시예 16

반응 1

250 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[(4-메틸아미노페닐-카보닐)아미노]-5-클로로벤즈아미드, 290 mg의 4-벤질-3,5-디메틸-1H 피라졸-1-카복사미딘 하이드로클로라이드, 및 130 μl의 트리에틸아민을 아세토니트릴에 혼합하고, 60℃에서 24시간 동안 정치한다. 그 다음, 반응 혼합물을 증발시키고, 역상 C2 상의 크로마토그래피 기술로 분리한다. 생성물을 1% 수성 아세트산의 백그라운드에 대하여 에탄올 구배로 용리한다. 2-[4-카밤이미도일메틸아미노]페닐카보닐아미노]-N-(5-클로로피리딘-2-일)5-클로로벤즈아미드의 수율은 150 mg이다.

반응 2

120 mg의 2-[4-카밤이미도일메틸아미노]페닐카보닐아미노]-N-(5-클로로피리딘-2-일)5-클로로벤즈아미드를 2 ml의 THF에서 용해시키고, 100 μl의 메틸 아이오다이드 및 150 mg의 K₂CO₃를 첨가한다. 반응 혼합물을 50℃로 가열하고, 10시간 동안 정치한다. 그 다음, 반응 혼합물을 증발시키고, 잔여물을 역상 C2 상의 크로마토그래피 기술로 분리한다. 2-[4-(메틸(N-메틸카밤이미도일)-아미노)]페닐카보닐아미노]-N-(5-클로로-피리딘-2-일)5-클로로벤즈아미드의 수율은 70 mg이다. R_f=0.3 (8:2 디옥산/수성 암모니아). 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 471, M+Na 493.

실시예 17

반응 1

10 ml의 THF 중 750 mg의 4-메틸아미노벤조산의 용액에 700 μl의 메틸이소시아네이트를 첨가한다. 반응 혼합물을 실온에서 72시간 동안 교반하고, 증발시키고, 물로 재증발시켰다. 생성물을 이소프로판올로부터 재결정화한다. 4-[메틸(메틸카바모일)아미노]벤조산의 수율은 700 mg이다.

반응 2

300 mg의 4-[메틸(메틸카바모일)아미노]벤조산, 250 mg의 2-아미노-N-(5-클로로피리딘-2-일)-5-클로로벤즈아미드, 및 2 ml의 THF 중 300 mg의 EDCI를 72시간 동안 교반한다. 그 다음, 반응 혼합물을 증발시키고, 잔여물을 실리카겔상 크로마토그래피 기술로 분리한다. 컬럼을 클로로포름 및 그 다음, 9:1 클로로포름/에탄올로 세정한다. R_f=0.5 (클로로포름). N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[(4메틸(메틸카바모일)아미노페닐카보닐)아미노]-5-클로로벤즈아미드의 수율은 280 mg이다. R_f=0.3 (8:2 디옥산/수성 암모니아). 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 472, M+Na 494.

실시예 18

240 mg의 4-[메틸(메틸카바모일)아미노]벤조산, 220 mg의 2-아미노-N-(5-클로로피리딘-2-일)-5-메틸벤즈아미드, 및 2 ml의 THF 중 250 mg의 EDCI를 48시간 동안 교반한다. 그 다음, 반응 혼합물을 증발시키고, 잔여물을 크로마토그래피 기술로 분리한다. N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-[(4-메틸(메틸카바모일)아미노페닐-카보닐)아미노-5-메틸벤즈아미드의 수율은 250 mg이다. R_f=0.55 (클로로포름). 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 452, M+Na 474.

반응 1

0.5 g의 4-[tert-부톡시카보닐(메틸)아미노]살리실산, 0.6 g의 N-(3-클로로프로필)-트리플루오로아세틸아미드, 및 0.5 g의 K₂CO₃의 혼합물을 110℃로 가열한다. 1시간 내에 반응 혼합물을 냉각시키고, 물로 희석하고, 클로로포름으로 추출하고; 추출물을 증발시키고, 40 내지 60 μm의 실리카겔로 충전된 30×150 컬럼 상에 적용하고; 생성물을 9:1 클로로포름/에탄올 혼합물로 용리한다. R_f=0.5 (9:1 클로로포름/에탄올). 2-[3-(트리플루오로아세틸아미노)-프로폭시]-4-[(tert-부톡시카보닐)(메틸)아미노]벤조산의 수율은 350 mg이다.

반응 2

320 mg의 2-[3-(트리플루오로아세틸아미노)-프로폭시]-4-[(tert-부톡시카보닐)(메틸)아미노]벤조산을 2 ml의 에탄올에서 용해시키고, 200 μl의 10% 수성 HCl을 첨가하고, 용액을 3시간 동안 교반하고, 그 다음, 반응 혼합물을 중화시키고, 증발시키고, 잔여물을 9:1 클로로포름/에탄올 혼합물에서 실리카겔상 크로마토그래피 기술로 분리한다. 2-[3-(트리플루오로아세틸아미노)-프로폭시]-4-(메틸)아미노벤조산의 수율은 250 mg이다.

반응 3

220 mg의 2-[3-(트리플루오로아세틸아미노)-프로폭시]-4-(메틸)아미노벤조산을 5 ml의 THF에서 용해시키고, 300 μl의 메틸이소시아네이트를 첨가한다. 78시간 내에 반응 혼합물을 증발시키고, 잔여물을 9:1 클로로포름/에탄올 혼합물에서 실리카겔상 크로마토그래피 기술로 분리한다. 4-[메틸(메틸카바모일)아미노]-2-[3-(트리플루오로아세틸-아미노)프로폭시벤조산의 수율은 230 mg이다.

반응 4

200 mg의 4-[메틸(메틸카바모일)아미노]-2-[3-(트리플루오로아세틸-아미노)프로폭시벤조산 (377), 140 mg의 2-아미노-N-(5-클로로피리딘-2-일)-5-메틸벤즈아미드 (262), 및 2 ml의 THF 중 150 mg의 EDCI를 48시간 동안 교반한다. 그 다음, 반응 혼합물을 증발시키고, 잔여물을 크로마토그래피 기술로 분리한다. N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-{[4-메틸(메틸카바모일)-아미노]-2-[3-(트리플루오로아세틸-아미노)프로폭시]페닐카보닐}아미노]-5-메틸벤즈아미드의 수율은 210 mg이다. R_f=0.5 (클로로포름).

반응 5

190 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-{[4-메틸(메틸카바모일)-아미노]-2-[3-(트리플루오로아세틸-아미노)프로폭시]페닐카보닐}아미노]-5-메틸벤즈아미드를 2 ml의 에탄올에서 용해시키고, 200 ml의 10% 수성 NaOH를 첨가했다. 2시간 내에 반응 혼합물을 증발시키고, 실리카겔상 크로마토그래피 기술로 분리한다. R_f=0.45 (클로로포름). N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-{[4-메틸(메틸카바모일)-아미노]-2-[3-아미노프로폭시]페닐카보닐}아미노]-5-메틸벤즈아미드의 수율은 160 mg이다. 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 525, M+Na 547.

실시예 20

반응 1

200 g의 -[4-메틸(메틸카바모일)-아미노-2-[3-(트리플루오로아세틸-아미노)]프로폭시벤조산, 140 mg의 2-아미노-N-(5-클로로피리딘-2-일)-5-클로로벤즈아미드, 및 2 ml의 THF 중 150 mg의 EDCI를 48시간 동안 교반한다. 그 다음, 반응 혼합물을 증발시키고, 잔여물을 크로마토그래피 기술로 분리한다. N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-{[4-메틸(메틸카바모일)-아미노]-2-[3-트리플루오로아세틸-아미노)프로폭시]페닐카보닐}아미노]-5-클로로벤즈아미드의 수율은 210 mg이다. R_f=0.5 (클로로포름).

반응 2

190 mg의 N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-{[4-메틸(메틸카바모일)-아미노]-2-[3-트리플루오로아세틸-아미노)프로폭시]페닐카보닐}아미노]-5-클로로벤즈아미드를 2 ml의 에탄올에서 용해시키고, 200 ml의 10% 수성 NaOH를 첨가한다. 2시간 내에 반응 혼합물을 증발시키고, 실리카겔상 크로마토그래피 기술로 분리한다. R_f=0.45 (클로로포름). N-(5-클로로피리딘-2-일)-2-{[4-메틸(메틸카바모일)-아미노]-2-[3-아미노프로폭시]페닐카보닐}아미노]-5-클로로벤즈아미드의 수율은 160 mg이다. 질량 스펙트럼 (MALDI-VP): M+H 545 M+Na 567.

시험관내 인자 Ⅹa에 대한 물질의 활성

상기 실시예에서 묘사된 일부 화합물에 대해, 시험관내 인자 Ⅹa에 대한 이들 물질의 활성 상수-K_i를 측정했다. 측정을, 단백질에 의한 기질 S-2222의 분해의 초기 속도의 관점에서 동력학적으로 수행했다. 측정을 실온에서 2 ml 직사각형 석영 큐벳(cuvette)에서 수행했다. 반응에서 다음 용액을 사용하였다: 50 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 2.5 mM CaCl₂, 및 0.1% PEG 6000, pH 7.5, Ⅹa 인자 0.04-1 nm, S-2222 164 μM. 표준 최소자승법을, 단백질 및 기질의 일정 농도에 대한 K_m을 측정하기 위해 사용했다. 반응 전에, 용액 중 단백질 및 활성 시약은 10분 동안 자동온도 제어 하에 있었고; 그 다음, 기질을 첨가하고, 반응을 개시했다. 반응 속도를 405 nm의 파장에서 광 흡수의 변화로부터 Specord M80 기기로 측정했다. IC₅₀ 값을, 억제제(활성 시약)의 농도에 대한 실험적으로 얻은 초기 속도 의존으로부터 측정했다. K_i 값을 단백질, 기질, 및 억제제의 농도로부터 계산했다; (1)Jordan, S.P.,; Waxman, L.; Smith, D.E.; Vlasik, G.P. Biochemistry 1990, 29, 11095 및 (2)Morrison, J.F. Biochim. Biophys. Acta 1969, 185, 269에서 기재된 방법에 의한 IC₅₀ 값. 그 결과는 표 1에 보여진다.

시험관내 단백질 Ⅹa에 대한 화합물의 활성 상수 K_i.

물질	Ki, nM
실시예 1	2.0
실시예 2	0.5
실시예 3	0.3
실시예 4	1.0
실시예 5	0.5
실시예 6	0.5
실시예 7	0.5
실시예 8	0.5
실시예 9	0.4
실시예 10	0.4
실시예 11	0.8
실시예 12	1.0
실시예 13	0.5
실시예 14	2.0
실시예 15	0.5
실시예 16	0.5
실시예 17	0.15
실시예 18	0.15
실시예 19	0.2
실시예 20	0.2

시험관내 프로트롬빈 시간에 대한 인간 혈장에서의 물질의 활성

상기 실시예에서 묘사된 일부 화합물에 대해, 인간 혈장에서 이들 화합물의 농도를 측정했고, 여기서 혈장의 프로트롬빈 시간은 그러한 양의 2배이다- 2PT. 측정을, Diahem P kit (NPO Renam, www.renam.ru)를 사용하여 키트의 사용자를 위한 설명서에 기재된 방법에 의해 수행했다. 활성 화합물을 키트에 제공된 혈장에서 용해시키고, 3분 동안 인큐베이팅했다. 측정을 Sysmex CA 50 기기로 수행했다. 각각의 농도에 대해, 3회 측정하고, 결과의 평균을 내었다. 결과는 표 2에 보여진다.

혈장에서 단백질 Ⅹa에 대한 화합물의 활성 상수 K_i.

물질	2xPT, μM
실시예 1	0.5
실시예 2	0.08
실시예 3	0.12
실시예 4	0.1
실시예 5	0.2
실시예 6	0.2
실시예 7	0.2
실시예 8	0.2
실시예 9	0.15
실시예 10	0.15
실시예 11	0.09
실시예 12	0.09
실시예 13	1.5
실시예 14	5.0
실시예 15	1.5
실시예 16	1.5
실시예 17	2.0
실시예 18	3.0
실시예 19	1.0
실시예 20	1.0

Claims

화학식 Ⅰ의 화합물, 및 이의 약제학적으로 허용가능한 이성질체, 염, 수화물, 용매화물 및 전구약물 유도체.
[화학식 Ⅰ]

상기 식에서:
R₁은 H, -Cl, -F, -Br, -OH, -Me, -OMe로부터 선택되고;
R₂는 CH 및 N으로부터 선택되며;
R₃ 및 R₄는 각각 독립적으로 H, -Cl, -F, -Br, -OH, -Me, -OMe로부터 선택되고;
R₅는 H 또는, 히드록실, 카복실산, 또는 카복실산 에스테르기로 임의적으로 치환된 C₁-C₆ 알킬로부터 선택되며;
R₆는 다음으로부터 선택되고:

상기 식에서:
X₁, X₂, X₃ 및 X₄는 각각 독립적으로 H 이거나, 히드록실, 카복실산 또는 카복실산 에스테르기로 임의적으로 치환된 H 또는 C₁-C₆ 알킬이고;
R₈, R₉, R₁₀는 각각 독립적으로 H, -Cl, -F, -Br, -OH, -Me, -OMe로부터 선택되고;
R₇은 H, -Cl, -F, -Br, -OH, -Me, -OMe 또는 다음으로부터 선택되고:

상기 식에서 Z₁, Z₂, Z₃, Z₄, Z₅, Z₆, Z₇, Z₈, Z₉ 및 Z₁₀은 각각 독립적으로 H이거나, 히드록실, 카복실산 또는 카복실산 에스테르기로 임의적으로 치환된 C₁-C₆ 알킬이다.
청구항 1에 있어서, 다음의 화학식을 갖는 화합물.
청구항 1에 있어서, 다음의 화학식을 갖는 화합물.
청구항 1에 있어서, 다음의 화학식을 갖는 화합물.
청구항 1에 있어서, 다음의 화학식을 갖는 화합물.
청구항 1에 있어서, 다음의 화학식을 갖는 화합물.
청구항 1에 있어서, 다음의 화학식을 갖는 화합물.
청구항 1에 있어서, 다음의 화학식을 갖는 화합물.
청구항 1에 있어서, 다음의 화학식을 갖는 화합물.
청구항 1에 있어서, 다음의 화학식을 갖는 화합물.
청구항 1에 있어서, 다음의 화학식을 갖는 화합물.
청구항 1에 있어서, 다음의 화학식을 갖는 화합물.
청구항 1에 있어서, 다음의 화학식을 갖는 화합물.
청구항 1에 있어서, 다음의 화학식을 갖는 화합물.
청구항 1에 있어서, 다음의 화학식을 갖는 화합물.
청구항 1에 있어서, 다음의 화학식을 갖는 화합물.
청구항 1에 있어서, 다음의 화학식을 갖는 화합물.
청구항 1에 있어서, 다음의 화학식을 갖는 화합물.
청구항 1에 있어서, 다음의 화학식을 갖는 화합물.
청구항 1에 있어서, 다음의 화학식을 갖는 화합물.
청구항 1에 있어서, 다음의 화학식을 갖는 화합물.
청구항 1 내지 21 중 어느 하나의 항의 화합물의 치료적으로 유효한 양을 포함하는, 원하지 않는 혈전증으로 특징지어지는 포유류의 증상을 방지 또는 치료하기 위한 약제학적 조성물.
청구항 1 내지 21 중 어느 하나의 항의 화합물의 치료적으로 유효한 양을 상기 포유류에 투여하는 것을 포함하는, 원하지 않는 혈전증으로 특징지어지는 포유류의 증상을 방지 또는 치료하는 방법.
청구항 23에 있어서, 상기 증상이 다음으로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 방법:
급성 관동맥 증후군, 심근 경색, 불안정 협심증, 난치성 협심증, 후-혈전용해 치료 또는 후-관상동맥 형성술에서 발생하는 관상폐색혈전증, 혈전 매개된 뇌혈관 증후군, 색전성 뇌졸중, 혈전성 뇌졸중, 일과성허혈발작, 정맥 혈전증, 심부정맥 혈전증, 폐색전증, 응고장애, 파종성 혈관내 응고증, 혈전성 혈소판감소성 자반증, 폐색성 혈전 혈관염, 헤파린-유발된 혈소판감소증에 수반되는 혈전성 질환, 체외 순환에 수반되는 혈전성 합병증, 보형물 장치의 부착에 수반되는 혈전성 합병증.
청구항 1 내지 21 중 어느 하나의 항의 화합물을 투여하는 단계를 포함하는 생물학적 샘플의 응고를 방지하는 방법.