KR20130027363A

KR20130027363A - 피페리틸마그놀올을 함유하는 항산화, 주름 개선, 미백, 항염 및 항균 효과를 가지는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR20130027363A
Application number: KR1020110090899A
Authority: KR
Inventors: 이정노; 손아랑; 유영경; 이강태; 이건국
Original assignee: 주식회사 코리아나화장품
Priority date: 2011-09-07
Filing date: 2011-09-07
Publication date: 2013-03-15
Also published as: KR101285797B1

Abstract

본 발명은 피부 노화를 방지하고, 피부 주름을 개선하며, 피부 미백을 증진시키고, 항염 및 항균 효과를 나타내는 화장료 조성물에 관한 것이다.

Description

피페리틸마그놀올을 함유하는 항산화, 주름 개선, 미백, 항염 및 항균 효과를 가지는 화장료 조성물{Cosmetic Composition comprising the piperitylmagnolol for anti-oxidant, anti-wrinkle, whitening, anti-inflammatory and anti-biotic effect}

피부의 노화는 스트레스, 질병, 환경 인자, 상처, 또는 나이가 들어감에 따라 발생하는 내적 노화 및 자외선과 같은 광에 노출되어 발생하는 광 노화로 구분될 수 있다.

피부의 노화는 활성화된 자유 라디칼에 의해 생체 내에 존재하는 항산화 방어막이 파괴되고, 그로 인해 피부의 주요 구성 물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산 등이 산화되어 피부 세포 및 조직이 파괴되어 발생할 수 있다.

특히, 단백질이 산화되면 피부의 결합 조직인 콜라겐(collagen), 히아루론산(hyaluronic acid), 엘라스틴(elastin), 프로테오글리칸(proteoglycan), 피브로넥틴(fibronectin) 등이 절단되어 심한 과다 염증 반응과 피부의 탄력에 지장을 주고, 이것이 더 심해질 경우에는 DNA의 변이에 의해 돌연변이, 암의 유발, 면역 기능 저하의 사태에 이르게 된다.

따라서, 피부 노화를 방지하기 위해서는 여러 원인에 의해 발생하는 자유라디칼을 소거함으로써 피부 손상을 방지할 필요가 있고, 또한, 이미 손상 받은 세포는 활발한 신진 대사를 통해 재생 및 증식시켜 피부를 회복시킬 필요가 있다.

또한, 피부 노화는 콜라겐 분해 효소인 기질 금속 단백질 분해 효소(Matrix Metalloproteinase; MMP, 이하 "MMP"라 함)에 의해서 촉진될 수 있다. 즉, 생체 내에서는 콜라겐과 같은 세포외 기질의 합성과 분해가 적절하게 조절되지만, 노화가 진행되면 콜라겐 합성이 감소하고 콜라겐 분해 효소인 MMP의 발현이 촉진되어 피부의 탄력이 저하되고 주름이 생기게 된다.

따라서, 피부 노화 및 주름 발생을 방지하기 위해서는 세포 내에서 활성화가 유도되는 MMP 발현을 조절하거나 그 활성을 억제할 필요가 있다.

나아가, 피부 주름을 개선하기 위해서는 콜라겐 합성을 증진시킬 필요가 있다.

한편, 피부 노화와 별개로 피부색이 변화하는 문제가 있는데, 이와 같은 피부색의 변화에 중요한 원인이 되는 것은 색소 침착이다.

일반적으로, 피부색에 영향을 미치는 색소로는 멜라닌, 멜라노이드, 카로틴, 헤모글로빈 등이 있는데, 이중 가장 중요한 색소는 멜라닌이다.

멜라닌은 자외선을 흡수 또는 산란시켜 자외선으로부터 피부가 손상되는 것을 방지하는데 큰 역할을 하며, 또한 활성 산소종을 제거하는 기능이 탁월하지만, 때로는 멜라닌 자체가 활성 산소를 발생시키기도 하며, 멜라닌 구조 내의 카테콜 또는 퀴논에 의해서 다른 물질을 환원시키거나 산화시키고, 멜라닌 자체가 자유 라디칼의 성질을 나타내기도 한다. 따라서, 피부 변색을 방지하기 위해서는 멜라닌 생성을 억제할 필요가 있다.

멜라닌은 아미노산의 일종인 티로신이 티로시나제에 의해 산화되어 디하이드록시 페닐알라닌 (dihydroxy phenylalanine)으로 전환되는 것을 시작으로 계속되는 일련의 산화 과정을 거쳐 갈색 (pheomelanin), 흑색 (eumelanin)의 중합체로 생합성된다. 이러한 멜라닌의 생합성 과정은 멜라노좀이라는 특수한 형태의 갈색 세포 내 소기관에서 진행되며, 생합성 과정을 통해 멜라닌 과립을 포함하게 되는 멜라노좀은 각질 세포의 핵 주변으로 이동하여 축적된다.

멜라닌의 합성, 멜라노좀의 수, 및 주위의 각질 세포로의 이동은 유전적인 영향이 크지만 부분적으로는 호르몬과 자외선 등에 의해 영향을 받으며, 그 밖에 세포내 조절 인자인 사이토카인 (cytokine), 구리, 아연, 철 등의 금속 이온 및 인터페론, 프로스타글란딘, 히스타민 등에 의해 영향을 받는 것으로 알려져 있다.

종래의 경우, 아스코르빈산 (일본 특개평 4-9320), 하이드로퀴논 (일본 특개평-192062), 코직산 (일본 특개소 56-7710), 알부틴 (일본 특개평 4-93150) 및 일부의 추출물 등이 멜라닌 생성에 관여하는 티로시나제의 저해 활성을 가지고 있어 미백 화장료로 이용되고 있으나, 화장품 제형 중에서의 안정성이 낮아 분해되어 착색되거나, 이취의 발생, 생체 레벨에서의 효능의 불분명 등의 문제로 인해서 그 사용이 제한되고 있는 실정이다.

본 발명은 안정적이면서 피부 노화를 방지하고, 피부 주름을 개선할 수 있으며, 또한, 피부 미백에도 효과적인 새로운 성분을 유효 성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위해서, 본 발명은 다음의 화학식 1의 화합물을 유효 성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.

[화학식 1]

본 발명은 상기 화학식 1의 화합물을 유효 성분으로 포함하는 항산화 또는 피부 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명은 상기 화학식 1의 화합물을 유효 성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명은 상기 화학식 1의 화합물을 유효 성분으로 포함하는 항염증용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명은 상기 화학식 1의 화합물을 유효 성분으로 포함하는 항균용 화장료 조성물을 제공한다.

상기 화학식 1의 화합물은 상기 화장료 조성물의 전체 중량에 대하여 0.000001 ~ 30.0 중량%로 포함될 수 있다.

상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 클린징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 맛사지 크림 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형으로 이루어질 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 화학식 1의 화합물을 유효 성분으로 포함함으로써 다음과 같은 이점을 가진다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 우수한 항산화 활성 효과, MMP-1 생성 억제 효과, 콜라겐 합성 증진 효과, 및 피부 주름 개선 효과를 가지므로 피부 노화 방지 또는 피부 주름 개선 용도로 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 멜라닌 생성 억제 효과를 가지므로 피부 미백 용도로 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제 효과, 항염 효과 및 항균 효과를 가지므로, 항염 용도 및 항균 용도로 사용될 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 피부 자극을 완화시키는 효과가 있고, 피부 보습 효과를 가진다.

이하, 본 발명에 대해서 상세히 설명하기로 한다.

본 발명은 다음 화학식 1의 화합물을 유효 성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.

[화학식 1]

본 발명에 따른 화장료 조성물은 피부 노화 방지 또는 피부 주름 개선 용도로 사용될 수 있다. 구체적으로, 본 발명에 따른 화장료 조성물은, 후술하는 실험예 1 및 2에서 알 수 있듯이 항산화 효과를 나타내고, 후술하는 실험예 3에서 알 수 있듯이 MMP-1 생성 억제 효과를 나타내며, 후술하는 실험예 4에서 알 수 있듯이 콜라겐 합성 증진 효과를 나타내고, 후술하는 실험예 11에서 알 수 있듯이 피부 주름 개선 효과를 나타내므로, 피부 노화 방지 또는 피부 주름 개선 용도로 유용하게 사용될 수 있다.

즉, 본 발명에 따른 화장료 조성물은, 활성 산소 또는 자유 라디칼을 소거함으로써 피부 세포 및 조직이 산화되는 것을 방지하여 피부 노화를 방지할 수 있고 (실험예 1 및 2 참조), 또한, MMP-1 생성을 억제함으로써 콜라겐의 분해를 방지하여 피부 탄력이 저하되지 않도록 하고 주름이 생기지 않도록 할 수 있으며 (실험예 3 참조), 또한, 콜라겐 합성을 증진시킴으로써 피부 탄력이 저하되지 않도록 하고 피부 주름이 생기지 않도록 할 뿐만 아니라 피부 주름을 개선할 수 있으며 (실험예 4 참조), 이러한 피부 주름 개선 효과는 실험예 11에서도 확인할 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 피부 미백 용도로 사용될 수 있다. 구체적으로, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 멜라닌 생성 억제 효과를 나타내기 때문에, 피부 미백 용도로 유용하게 사용될 수 있다. 즉, 본 발명에 따른 화장료 조성물은, 색소 침착을 일으킬 수 있는 멜라닌 색소의 생성을 억제함으로써 피부 변색을 방지할 수 있다 (실험예 5 참조).

또한, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 항염증 용도로 사용될 수 있다. 구체적으로, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 후술하는 실험예 6에서 알 수 있듯이 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제 효과를 나타내고, 후술하는 실험예 7에서 알 수 있듯이 항염 효과를 나타내기 때문에, 피부의 항염 용도로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 항균 용도로 사용될 수 있다. 구체적으로, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 실험예 10에서 알 수 있듯이 항균 효과를 나타내기 때문에, 항균 용도로 유용하게 사용될 수 있다.

그 외에, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 후술하는 실험예 8에서 알 수 있듯이 피부 자극을 완화시키는 효과를 나타내고, 실험예 9에서 알 수 있듯이 피부 보습 효과를 나타내며, 따라서, 상술한 바와 같은 특정 효능 이외에도 다양한 효능을 보유하고 있어서 화장료로서 유용하게 사용될 수 있다.

상기 화학식 1의 화합물은 마그놀리아 오피시날리이스(magnolia officinalis Rehd), 마그놀리아 비로바(Magnolia biloba), 마칠러스 선버지(Machilus thunbergii), 오보바타(obovata Nakai) 의 수피, 지피 및 근피 등에서 분리할 수 있다.

즉, 마그놀리아 오피시날리이스(magnolia officinalis Rehd), 마그놀리아 비로바(Magnolia biloba), 마칠러스 선버지(Machilus thunbergii), 오보바타(obovata Nakai)의 수피, 지피 및 근피에 다양한 추출 용매, 예를 들어, 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올 (예컨대, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등), 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸 아세테이트, 부틸 아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 추출 용매를 가하여 환류 교반시킨 후 여과하고 그 여액을 감압 건조시키는 공정을 수회 반복하여 농축물을 얻은 후, 이를 에탄올 용액에 녹이고, n-헥산, CH₂Cl₂(메틸렌클로라이드), EA(에틸아세테이트), n-BuOH, 물 층으로 분획을 실시한다. 분획하여 얻은 노르말헥산 층을 실리카가 충진된 컬럼관에 로드하고 전개 용매로서 n-헥산과 에틸아세테이트를 10:1에서 3:1 구배로 흘러주면서 분획한다. 얇은 막 크로마토그래피로 정성 분석하여 Rf=0.35-5.0까지의 분획을 농축하며, 이 분획물을 세파덱스(sepadex) 20이 충진된 컬럼에 CHCl₃:MeOH (1:1)로 분획하였다. 이후 EA과 MeOH으로 재결정하여 본 발명의 화학식 1의 화합물을 얻는다.

또한 화학식 1의 화합물은 유기합성 방법에 의한 방법으로 합성될 수 있다. 대표적인 논문인 J. Org . Chem . vol 6, No 6, 1995, 1856-1863 등에 인용된 반응식을 이용하여 3,9-dibromocamphor로부터 아실화 (endo selective acylation)을 시킨후 MOM group를 보호(protecting)시키고 탈보호(deprotecting)시키면서 sodium naphthalenide와 diethyl chlorophosphate 반응과 Lithium amonia 반응을 시켜 여러 단계를 거쳐 피페리틸마그놀올을 합성할 수 있다.

이러한 화학식 1의 화합물은 전체 화장료 조성물에 대하여 0.000001 내지 30.0 중량%로 포함될 수 있고, 보다 바람직하게는 0.0001 내지 10.0 중량%로 포함될 수 있으며, 가장 바람직하게는 0.001 내지 5.0 중량%로 포함될 수 있다.

상기 화학식 1의 화합물의 함량이 0.000001 중량% 미만일 경우에는 상술한 바와 같은 항산화 효과 등의 효과가 미미하여 피부 노화 방지 용도 등으로 사용할 수 없고, 상기 화학식 1의 화합물의 함량이 30.0 중량%를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 따른 뚜렷한 효능의 증가를 보이지 않아 경제성이 떨어질 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 유효 성분인 화학식 1의 화합물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대, 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

보다 상세하게는, 본 발명에 따른 화장료 조성물은, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 맛사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히, 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대, 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 클린싱, 특히, 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

이하, 구체적인 제조예를 통하여 본 발명에 대해서 보다 상세히 설명하기로 한다. 이들 제조예는 단지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 제조예로 한정되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 자명할 것이다.

제조예 1. 화학식 1 의 화합물의 분리 및 확인

본 발명에 사용된 화학식 1의 화합물은 다음과 같은 방법으로 분리 및 확인되었다.

음건한 마칠러스 선버지(Machilus thunbergii) 약 1.0 Kg에 70% 에탄올 5L를 가하여 환류 교반시킨 후 여과하고 상기 여액을 감압 건조하였다. 이를 2회 반복하여 농축물(마칠러스 선버지 크루드(achilus thunbergii crude) 추출물) 약 150g을 얻었다. 이를 30% 에탄올 수용액에 녹인 후, n-헥산, CH₂Cl₂(메틸렌클로라이드), EA(에틸아세테이트), n-BuOH, 물 층으로 분획을 실시하여 노르말헥산 층을 실리카 230-400 메쉬가 충진된 컬럼관에 로드하고 전개 용매로서 n-헥산과 에틸아세테이트을 10:1에서 3:1 구배로 흘러주면서 20 ㎖씩을 분획하였다.

얇은 막 크로마트그래프로 정성 분석하여 Rf=0.35-5.0까지의 분획을 농축하였으며, 이 분획물을 세파덱스(sepadex) 20이 충진된 컬럼에 CHCl₃:MeOH (1:1)로 분획하였다. 이후 EA과 MeOH으로 재결정하여 각각 약 500 mg을 얻었다. 상기의 분획에 의하여 NMR (및 mass)를 이용하여 구조를 분석하였다. 그 결과 상기 구성 성분은 화학식 1의 화합물로 확인되었다.

제조예 2. 화학식 1 의 화합물의 합성

1번 화합물 (+)-3,9-dibromocamphor 100 mmol과 2번 화합물 100mmol을 copper(I) iodide, t-butyllithium 1.2 eq, THF, hexane, -10 ℃, 2 시간 조건으로 반응시킨 후, DMSO, THF 용매로 하여 24시간 반응시켜 엔도 선택적으로 아실화 반응시켜 케톤 화합물인 화합물 3을 합성한다.

화합물 3에 diethyl chlorophosphate를 가한 후 -70℃에서 상온으로 반응시킨 후 HCl로 반응을 종결하여 약 86%의 수율로 화합물 4를 얻는다. 이 후 Lithium-ammonia condition 조건으로 -10℃에서 1시간, 상온에서 4시간동안 반응시켜 인산기를 탈보호시킨다. 이 후 NaH와 Hexamethylphoshporic triamide를 가하여 화합물 5를 합성한다.

화합물 5에 화합물을 6을 가한 후 t-BuLi, Zinc(II) chloride 조건을 이용하여 반응시켜 화합물 7을 만든다.

화합물 7의 MOM group를 산 조건에서 탈보호시켜 화합물 8을 합성한다.

마지막으로 N-(phenylseleno)phtalimide로 selenium oxidation 반응을 시켜 화학식 1번 화합물인 piperityl magnolol((-)-Monoterpenylmagnolol)를 합성한다.

이 제조예는 J.Org. Chem. vol 6, No 6, 1995, 1856-1863, J. of American Chemical Soc. 128, 26(2006), 8404-8405, Tetrahedron 67(16) 2949-2960등의 논문이 인용되었다.

이 화합물의 기기 분석 값은 다음과 같다.

화합물 1

EI MS: M⁺= 402.257, UV (λ _max, nm) (MeOH):290(8500)

H- NMR(CDCl₃ ) δ:0.80, 0.88(ea.3H,d,6,H3-9'',10''), 1.70(3H,br s,H3-7''), 1.20-1.80(4H,m,H-4'',H-8'',H2-5''), 2.06(2H,m,H2-6''), 3.30(4H,d,6,H2-7,H2-7'), 3.60(1H,m,H-3''), 5.00(2H,br d,11,H-9,H-9'), 5.02(2H,br d,18,H-9,H-9'), 5.40(1H,br s,H-2''), 6.75-6.20(2H,m,H-8,H-8' )

C- NMR (CDCl₃) δ: 132.0, 129.0, 125.0, 148.9, 132.0, 129.0, 39.3, 137.3, 115.3, 132.4, 131.1, 125.0, 150.8, 116.4, 129.8, 39.3, 137.3, 115.3, 136.8, 124.3, 44.8, 41.0, 21.6, 30.1, 23.5, 27.0, 16.8, 21.6

실험예 1. NBT 법을 이용한 항산화 효과 측정

제조예 1에 따라 분리된 화학식 1의 화합물의 항산화 효과를 측정하기 위해 NBT법으로 항산화 활성을 측정하였다.

항산화 효과를 측정하기 위해서 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 생성되는 활성 산소를 NBT법에 의해 측정하고, 시료(화학식 1의 화합물)가 활성 산소를 제거하는 효과, 즉 활성 산소 소거 효과를 평가하였다. 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 생성되는 활성 산소가 니트로블루테트라졸리움(Nitro Blue Tetrazolium;NBT)과 반응하여 이것에 의해 생성되는 청색을 파장 560 nm에서 측정하는 것으로 활성 산소 소거율을 측정한다.

구체적인 측정 방법은 다음과 같다.

1) 바이알병에 2.4ml의 0.05M Na₂CO₃, 0.1ml의 3mM 크산틴 용액, 0.1ml의 3mM EDTA 용액, 0.1ml의 BSA 용액, 및 0.1ml의 0.72mM NBT 용액을 가하고, 여기에 시료 용액 0.1ml를 첨가한 후, 25℃에서 10분간 방치한다. 그 후, 0.1ml의 크산틴 옥시다제 용액을 가하여 빨리 교반하고, 25℃에서 20분간 배양한다. 그 후, 0.1ml의 6mM CuCl₂ 용액을 가하여 반응을 정지시키고, 560nm에서의 흡광도 St를 측정한다.

2) 시료 용액의 블랭크(Blank)는 상기 1)에서 0.1ml의 크산틴 옥시다제 용액 대신에 증류수를 사용하는 것을 제외하고는 상기 1)과 동일하게 조작하여 흡광도 So를 측정한다.

3) 공시험은 상기 1)에서 상기 시료 용액 대신에 증류수를 사용하는 것을 제외하고는 상기 1)과 동일하게 조작하여 흡광도 Bt를 측정한다.

4) 공시험의 블랭크(Blank)는 상기 3)에서 0.1ml의 크산틴 옥시다제 용액 대신에 증류수를 사용하는 것을 제외하고는 상기 3)과 동일하게 조작하여 흡광도 Bo를 측정한다.

활성 산소 소거율은 하기 수학식 1에 의하여 산출하였으며, 결과는 하기 표 1과 같다.

[수학식 1]

상기 수학식 1에서, St는 시료 용액의 효소 반응 후의 560nm에서의 흡광도이고, Bt는 공시험 용액의 효소 반응 후의 560nm에서의 흡광도이고, So는 시료 용액의 효소 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도이고, Bo는 공시험 용액의 효소 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도이다.

활성 산소 소거율(%)

처리 농도(ppm)	활성 산소 소거율(%)
	화합물 1	마그놀올
1	36.3	13.2
5	54.2	22.4
10	73.2	33.4
25	87.3	45.4
50	89.9	66.2

표 1에서 알 수 있듯이, 화학식 1의 화합물은 농도 의존적으로 항산화력이 증가하는 것을 알 수 있다. 특히, 50 ppm 이상에서는 항산화력이 90% 이상인 것을 알 수 있다. 또한 유사한 구조를 갖는 구조인 마그놀올과 활성 산소 소거율을 비교한 결과 더 우수한 것을 알 수 있었다.

실험예 2. DPPH 법을 이용한 항산화 효과 측정

제조예 1에 따라 분리된 화학식 1의 화합물의 항산화 효과를 측정하기 위해, DPPH법을 이용하여 항산화 활성을 측정하였다.

DPPH법은 DPPH(2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl) 프리라디칼이라는 유리기를 사용하여 환원력에 의한 항산화 활성을 측정하는 것이다. 시료(화학식 1의 화합물)에 의해 DPPH가 환원되어 흡광도가 감소하는 정도를 공시험액의 흡광도와 비교하여 파장 560nm에서 자유라디칼 소거율을 측정한다.

사용한 시약으로서는 2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl 프리라디칼(Aldrich Chem. Co., MW=618.76) 0.1 mM 용액으로서 61.88 mg을 메탄올에 용해하여 100ml로 한다.

구체적인 측정 방법은 다음과 같다.

1) 96-웰 플레이트에 0.1 mM DPPH 용액 0.10 ml 및 시료 용액 0.10ml를 가하여 빨리 교반하고 25℃에서 10분간 배양한다. 그 후, 560nm에서의 흡광도 St를 측정한다.

2) 시료 용액의 블랭크 (Blank)는 상기 1)에서 0.1mM DPPH 용액 대신 메탄올을 사용하는 것을 제외하고 상기 1)과 동일하게 조작하여 흡광도 So를 측정한다.

3) 공시험은 상기 1)에서 시료 용액 대신 증류수를 사용하는 것을 제외하고 상기 1)과 동일하게 조작하여 흡광도 Bt를 측정한다.

4) 공시험의 블랭크(Blank)는 상기 3)에서 상기 0.1mM DPPH 용액 대신 메탄올을 사용한 것을 제외하고 상기 3)과 동일하게 조작하여 흡광도 Bo를 측정한다.

자유 라디칼 소거율은 하기 수학식 2에 의하여 산출하였으며, 결과는 하기 표 2와 같다.

[수학식 2]

상기 수학식 2에서, St는 시료 용액의 자유 라디칼 소거 후의 560nm에서의 흡광도이고, Bt는 공시험 용액의 자유 라디칼 소거 후의 560nm에서의 흡광도이고, So는 시료 용액의 자유 라디칼 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도이고, Bo는 공시험 용액의 자유 라디칼 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도이다.

자유 라디칼 소거율(%)

처리 농도(ppm)	자유 라디칼 소거율(%)
	화합물 1	마그놀올
1	16.5	10.2
5	24.1	13.7
10	45.7	23.1
25	76.5	34.6
50	88.7	53.2

표 2에서 알 수 있듯이, DPPH에 의한 라디칼 소거 시험에서 화학식 1의 화합물은 농도 의존적으로 항산화력이 증가하는 것을 알 수 있다. 또한 유사한 구조를 갖는 구조인 마그놀올과 자유 라디칼 소거율을 비교한 결과 더 우수한 것을 알 수 있었다.

실험예 3. MMP -1 생성 억제 효과

제조예 1에 따라 분리된 화학식 1의 화합물에 대해서 콜라겐 분해 효소인 MMP-1 생성 억제 효과를 측정하였다.

인간 정상 피부 세포인 섬유아세포 (한국 세포주 은행, 대한민국)를 48-웰 마이크로 플레이트(Nunc, 덴마크)에 각 웰당 1× 10⁶세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지(Sigma, 미합중국) 및 37℃의 조건에서 24시간 동안 배양한 후, 상기 제조예 1에 따라 분리된 화학식 1의 화합물을 첨가한 무혈청 DMEM 배지 및 대조군으로 화학식 1의 화합물이 포함되지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 48시간 동안 추가로 배양하였다.

상기 추가 배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 MMP-1 분석 키트(Amersham, 미합중국)를 이용하여 새롭게 합성된 MMP-1의 양(ng/㎖)을 측정하고, 하기 수학식 3에 따라 MMP-1 생성 억제율을 계산하였으며, 그 결과는 표 3에 나타내었다.

[수학식 3]

MMP-1 생성 억제율(%)

처리 농도(ppm)	MMP-1 생성 억제율(%)
	화합물 1	마그놀올
1	12.0	-
5	15.2	-
10	33.8	-
25	45.6	-
50	73.2	-

표 3에서 알 수 있듯이, 화학식 1의 화합물은 농도 의존적으로 MMP-1의 활성을 감소시키는 것을 알 수 있다.또한 유사한 구조를 갖는 구조인 마그놀올과 MMP-1 억제율을 비교한 결과 더 우수한 것을 알 수 있었다.

실험예 4. 콜라겐 합성 증진 효과

인간 정상 상피 세포인 섬유아세포를 48-웰 마이크로 플레이트에 각 웰당 1 x 10⁶ 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지에서 24시간 동안 배양하였다. 그 후, 상기 제조예 1에 따라 분리된 화학식 1의 화합물을 첨가한 무혈청 DMEM 배지 및 대조군으로 화학식 1의 화합물이 포함되지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 48시간 동안 추가로 배양하였다.

추가 배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 콜라겐 키트(Takara, 일본)를 이용하여 프로콜라겐 (procollagen) 타입 I C-펩타이드 (PICP) 양을 측정하여 ng/㎖ 환산하였으며, 이에 의해 합성된 콜라겐 양을 측정하였다. 콜라겐 생성 증가율은 하기 수학식 4에 따라 계산하였으며, 그 결과는 표 4에 나타내었다.

[수학식 4]

콜라겐 생성 증가율(%)

처리 농도(ppm)	콜라겐 생성 증가율(%)
	화합물 1	마그놀올
1	13.6	-
5	25.8	-
10	82.5	5.7
25	114.4	19.9
50	134.7	27.4

표 4에서 알 수 있듯이, 화학식 1의 화합물의 콜라겐 생성 증가율이 농도 의존적으로 증가하는 것을 알 수 있다. 또한 유사한 구조를 갖는 구조인 마그놀올과 콜라겐 생성 증가율 을 비교한 결과 더 우수한 것을 알 수 있었다.

실험예 5. B16F1 멜라닌 형성 세포를 이용한 멜라닌 생성 억제효과

제조예 1에 따라 분리된 화학식 1의 화합물의 미백 효과를 확인하기 위해 B16F1 멜라닌 형성 세포에 대한 멜라닌 생성 억제 정도를 측정하여 미백 효과를 판단하였다.

실험예 5에 사용된 B16F1 멜라닌 형성 세포는 마우스에서 유래한 세포균주이며, 멜라닌이라는 흑색 색소를 분비하는 세포로서, ATCC(American Type Culture Collection)로부터 분양받아 사용하였다. 이 세포의 인공 배양 중에 시료를 처리하여 멜라닌 흑색 색소가 감소하는 정도를 비교 평가하였다.

B16F1 멜라닌 형성 세포의 멜라닌 생합성 억제 효과 측정은 다음과 같이 수행하였다.

B16F1 멜라닌 형성 세포를 6웰 플레이트에 각 웰당 2 X 10⁵ 농도로 분주하고 세포를 부착시킨 후 독성을 유발하지 않는 농도로 제조예 1에서 분리된 화학식 1의 화합물로 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 72시간 배양 후 세포를 트립신-EDTA로 떼어낸 후 세포수를 측정한 다음 원심 분리하여 세포를 회수하였다.

세포 내 멜라닌의 정량은 로탄(Lotan: Cancer Res., 40: 3345-3350, 1980)의 방법을 약간 변형하여 실시하였다. 구체적으로, 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후 균질화 버퍼액(50 mM 소듐 포스페이트, pH 6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF) 1ml를 첨가하여 5분간 와류하여 세포를 파쇄하였다. 원심 분리 (3,000 rpm, 10분)하여 얻은 세포 여액에 1N NaOH(10% DMSO)를 첨가하여 추출된 멜라닌을 용해한 후 마이크로 플레이트 판독기로 405 nm에서 멜라닌의 흡광도를 측정한 다음 멜라닌을 정량하여 시료의 멜라닌 생성 저해율(%)을 측정하였다.

B16F1 멜라닌 형성 세포의 멜라닌 생성 저해율(%)은 하기 수학식 5에 의하여 계산하였으며, 그 결과는 표 5에 나타내었다. 표 5에서 IC₅₀값은 멜라닌 생성을 50% 저해하는 물질의 농도를 의미한다. 이때 멜라닌 생성 저해 효과가 있는 것으로 알려진 물질인 하이드로퀴논과 알부틴을 양성 대조군으로 사용하였다.

[수학식 5]

상기 수학식 5에서, A는 시료를 첨가하지 않은 웰의 멜라닌 양이고, B는 시료를 첨가한 웰의 멜라닌 양이다.

멜라닌 생성 저해율(%)

처리 농도(ppm)	멜라닌 생성 저해율(%)
	화합물 1	알부틴	하이드로퀴논	마그놀올
1	17.18	-	10.3	-
5	29.74	5.7	24.1	6.6
10	57.56	15.3	50.7	17.9
25	79.64	24.1	66.8	23.5
50	85.78	50.7	75.2	31.9

표 5서 알 수 있듯이, 화학식 1의 화합물은 B16F1 멜라닌 형성 세포에서 멜라닌 생성을 크게 저해하며, 특히 양성 대조군으로 사용된 알부틴보다 효과가 뛰어나며 하이드로퀴논과 비슷한 효과를 보이는 것을 알 수 있다. 또한 유사한 구조를 갖는 구조인 마그놀올과 멜라닌 생성 저해율을 비교한 결과 더 우수한 것을 알 수 있었다.

실험예 6. 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제 효과

제조예 1에 따라 분리된 화학식 1의 화합물에 대하여, 자외선 조사에 의해 발현되는 염증성 사이토카인 발현 억제 효과를 평가하였다.

사람의 표피 조직에서 분리한 섬유아세포 (Fibroblast)를 24-웰 시험 플레이트에 5 X 10⁴개씩 넣고 24 시간 동안 부착시켰다. 각 웰을 PBS로 1회 세척하고 각 웰에 500㎕의 PBS를 넣었다. 이 섬유아세포에 자외선 B (UVB) 램프 (Model: F15T8, UV B 15W, Sankyo Dennki사, Japan)를 이용하여 자외선 10 mJ/㎠를 조사한 후 PBS를 덜어내고 세포 배양 배지 (DMEM에 FBS가 첨가되지 않은 배지) 350 ㎕를 첨가하였다.

여기에 시료인 화학식 1의 화합물을 처리한 후 5시간 동안 배양하였다. 배양 상층액을 150㎕ 취하여 IL-1α를 정량함으로써 화학식 1의 화합물의, 염증성 사이토카인 발현 억제 효과를 판단하였다. IL-1α의 양은 효소 면역 분석법 (Enzyme-linked Immunosorbent Assay)을 이용하여 정량화하였으며, 염증성 사이토카인 (IL-1α)의 발현 억제율은 하기 수학식 6에 의해 계산하였고, 그 결과는 표 6에 나타내었다.

[수학식 6]

상기 수학식 6에서, Bo은 자외선 조사하지 않고 시료 처리하지 않은 웰의 IL-1α생성량이고, Bt는 자외선 조사하고 시료를 처리하지 않은 웰의 IL-1α생성량이고, St는 자외선 조사하고 시료 처리한 웰의 IL-1α생성량이다.

염증성 사이토카인 발현 억제율(%)

처리 농도(ppm)	염증성 사이토카인 발현 억제율(%)
	화합물 1	마그놀올
1	5.1	3.2
5	13.2	9.8
10	36.7	17.5
25	56.4	23.4
50	76.6	45.7

표 6에서 알 수 있듯이, 화학식 1의 화합물은 자외선에 의한 염증성 사이토카인인 IL-1α의 생성을 억제하는 것을 알 수 있다. 또한 유사한 구조를 갖는 구조인 마그놀올과 염증성 사이토카인 발현 억제를 비교한 결과 더 우수한 것을 알 수 있었다.

제조예 3. 화학식 1의 화합물을 함유하는 화장료 조성물의 제조

화학식 1의 화합물을 포함하는 화장료 조성물에 대한 효과를 측정하기 위해, 화학식 1의 화합물을 포함하는 화장료(실시예 1), 화학식 1의 화합물 대신에 보습제로서 글리세린, 1,3부틸렌글리콜 및 솔비톨을 포함하는 조성물(비교예 1), 이를 모두를 포함하지 않는 조성물(비교예 2) 및 화학식 1의 화합물 대신에 마그놀올을 포함하는 조성물(비교예 3)을 하기 표 7과 같이 제조하였다. 표 7에서 함량 단위는 중량%이다.

성분	실시예 1	비교예 1	비교예 2	비교예 3
화학식 1의 화합물	2.0	-	-	-
글리세린		5.0	-	-
1,3부틸렌글리콜	-	2.5	-	-
솔비톨	-	2.5	-	-
마그놀올	-	-	-	2.0
EDTA-2Na	0.02	0.02	0.02	0.02
정제수	to 100	to 100	to 100	to 100
세토스테아릴알코올	2.0	2.0	2.0	2.0
글리세릴스테아레이트	1.5	1.5	1.5	1.5
마이크로크리스탈린	0.7	0.7	0.7	0.7
스쿠알란	5.0	5.0	5.0	5.0
유동파라핀	3.0	3.0	3.0	3.0
트리옥타노인	5.0	5.0	5.0	5.0
폴리솔베이트	1.2	1.2	1.2	1.2
솔비탄스테아레이트	0.5	0.5	0.5	0.5
토코페릴아세테이트	0.2	0.2	0.2	0.2
사이클로메치콘	3.0	3.0	3.0	3.0
BHT	0.05	0.05	0.05	0.05
향,방부제	적량	적량	적량	적량

실험예 7. 화장료 조성물의 항염증 효과 (귀 부종 실험)

상기 제조예 3에서 제조한 화장료 조성물 (실시예 1 및 비교예 1, 3)을 이용하여 항염증 효과를 측정하였다. 건강한 쥐 12마리를 대상으로 3그룹으로 나누어 1개 시료당 4마리씩 실험하였다. 우선 쥐의 양쪽 귀를 알코올(에탄올)로 잘 닦아준 다음, 시료를 각각 4 ㎕씩 발라주었다. 1시간 경과 후에 왼쪽 귀에는 아세톤 20 ㎕를 발라주며, 오른쪽 귀에는 염증 유발 물질인 아라키돈산을 발라주었다. 다시 1시간 경과 후 마이크로미터를 이용하여 양쪽 귀의 두께를 2회씩 반복 측정하여 평균치를 구한 후, 하기 수학식 7에 따라 항염증 효과를 계산하였고, 그 결과를 표 8에 나타내었다.

[수학식 7]

항염증 효과(%) = (B-A) / B × 100

상기 수학식 7에서, A는 실험군에서 부풀은 두께이고, B는 대조군 (정제수)에서 부풀은 두께이다.

시료	부풀은 정도		항염증 효과(%)
시료	증가된 두께	대조군과의 차이 (B-A)	항염증 효과(%)
대조군(정제수)	2.84(B)	-
비교예 1	2.83(A)	0.01	0.35
실시예 1	1.30(A)	1.54	54.22
비교예 3	2.45(A)	0.39	13.73

상기 표 8에서 알 수 있듯이, 본 발명의 화학식 1의 화합물을 포함한 실시예 1의 화장료 조성물이 비교예 1의 화장료 조성물에 비하여 월등히 우수한 항염 효과를 나타냄을 알 수 있다. 또한 유사한 구조를 갖는 구조인 마그놀올(비교예 3)과 항염 효과를 비교한 결과 더 우수한 것을 알 수 있었다.

실험예 8. 피부 자극성 시험

실시예 1 및 비교예 1, 3에 따른 화장료 조성물에 자극원으로 락틱산 0.3%를 첨가하여 pH가 5.5가 되도록 시료를 준비한 다음, 건강한 성인 남,여 30명을 대상으로 양팔 하박부에 5 × 20 ㎝ 부위로 0.3% 락틱산 용액 단독, 및 상기 준비한 시료를 각각 약 0.1g을 24시간 동안 첩포한 후 제거하고 1시간 및 24시간이 경과한 다음, 하기의 판정 기준에 의하여 육안으로 피부 상태 변화를 판독하였다.

자극율은 하기 수학식 8에 따라 계산하였고, 그 결과는 하기 표 9에 나타내었다.

판정 기준

-: 홍반이나 특이한 현상 없음,

+-: 주위보다 약간 붉어짐,

+: 주위보다 현저히 붉어짐,

++: 주위보다 심하게 붉어지고 부풀음.

[수학식 8]

[(+-)수×1 + (+)수×2 + (++)수×3]

자극율 = -------------------------------------× 100

(전체수)×3

시료	판정결과				자극율 (%)
시료	++	+	+-	-
실시예 1+락틱산 0.3%	-	-	1	28	3.33
비교예 1+락틱산 0.3%	3	15	11	1	56.66
락틱산0.3%	7	15	8	-	65.55
비교예 3+락틱산0.3%	4	18	8	-	62.22

상기 표 9에서 알 수 있듯이, 본 발명에 따른 실시예 1의 화장료 조성물은 락틱산에 의한 자극 완화 효과에서 비교예 1의 화장료 조성물에 비하여 큰 자극 완화 효과를 보이는 것을 알 수 있다. 또한 유사한 구조를 갖는 구조인 마그놀올(비교예 3)과 자극 완화 효과를 비교한 결과 더 우수한 것을 알 수 있었다.

실험예 9. 보습 효과

상기 제조예 3에서 제조한 화장료 조성물(실시예 1과, 비교예 1, 2, 3)에 대한 임상 보습 효과를 다음과 같이 측정하였다.

설문 조사를 통하여 피부가 건조하다고 느끼는 건강한 성인 남녀 60 명을 무작위로 20 명씩 3개 그룹(A, B, C)으로 나눈 후, A 그룹에는 각각 실시예 1의 제형을, B와 C 그룹에는 비교예 1과 2의 제형을 각각 1일 2회씩 8주간 안면에 도포하게 하였다. 보습 효과는 실사용 시험 시작 후부터 매 2주간, 그리고 종료 후의 개선 효과를 Corneometer CM 820 (Corage+Khazaka, Germany)를 이용하여 평가하였고, 그 결과는 하기 표 10에 나타내었다.

	사용전	사용 2주 후	사용 4주 후
실시예 1	22.4	40.8	51.2
비교예 1	23.6	28.6	30.6
비교예 2	21.7	29.4	30.4
비교예 3	22.4	28.8	29.4

상기 표 10에서 알 수 있듯이, 일반 다른 보습제를 포함한 화장료(비교예 1,2)에 비하여 화학식 1의 화합물을 포함한 화장료(실시예 1)의 보습 효과가 우수함을 알 수 있다. 또한 유사한 구조를 갖는 구조인 마그놀올(비교예 3)과 보습 효과를 비교한 결과 더 우수한 것을 알 수 있었다.

제조예 4. 방부제 실험을 위한 화학식 1의 화합물을 포함하는 화장료 조성물 제조

하기 표 11의 조성과 같이, 화학식 1의 화합물을 포함하는 화장료(실시예 2), 화학식 1의 화합물을 포함하지 않는 화장료(비교예 4), 및 화학식 1의 화합물 대신에 방부제로 메칠파라벤과 이미다졸리디닐우레탄을 포함하는 화장료(비교예 5)를 제조하였다. 표 11에서 함량 단위는 중량%이다.

성분	실시예	비교예
성분	2	4	5
정제수	To 100	To 100	To 100
글리세린	4.0	4.0	4.0
부틸렌글라이콜	2.0	2.0	2.0
프로필렌글라이콜	2.0	2.0	2.0
EDTA-2Na	0.02	0.02	0.02
폴리소르베이트 60	1.0	1.0	1.0
글리세릴스테아레이트	1.5	1.5	1.5
밀납	4.0	4.0	4.0
마카데미아넛 오일	5.0	5.0	5.0
스쿠알란	3.0	3.0	3.0
향료	미량	미량	미량
화학식 1의 화합물	0.2	-	-
메칠파라벤	-	-	0.2
이미다졸리디닐우레아	-	-	0.2

실험예 10: 항균력 실험

제조예 4에 따라 제조된 화장료를 이용하여 박테리아 및 곰팡이에 대한 항균 효과를 측정하였다.

먼저, 박테리아의 경우, 상기 실시예 2의 화장료와, 비교예 4 및 5의 화장료 각각 20-30g에 대장균(Escherichia coli ; ATCC 8739), 슈도모나스 애루지노사(Pseudomonas aeruginosa ; ATCC9027) 및 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus ; ATCC6538)의 혼합 균액을 시료당 초기 농도가 10⁷cfu/g 되도록 첨가 혼합하였다. 이들을 30-32℃ 항온조에서 4주간 배양하면서 1, 7, 14, 21 및 28일 간격으로 각 화장료를 1 g씩 취하여 생균수를 측정하였다.

다음, 곰팡이의 경우, 칸디다 알비칸스(Candida albicans ;ATCC10231), 페니실리움 씨트리눔(Penicillium citrinum ; KCTC2123) 및 아스퍼질러스 나이거(Aspergillus niger ; ATCC16404)의 혼합 균액을 시료당 10⁷cfu/g이 되도록 첨가 혼합한 후 25℃ 항온조에서 배양하면서 7일 간격으로 변취 유무와 시료 표면의 균사 및 포자 발생 유무를 관찰하였다.

그 결과를 하기의 표 12에 나타내었다.

화장료	박테리아(cfu/g)						곰팡이
화장료	초기균수	1일차	7일차	14일차	21일차	28일차	곰팡이
실시예 2	1x10⁷	41000	300	200	<100	<100	-
비교예 4	1x10⁷	54000000	30000000	>1x10⁸	>1x10⁸	>1x10⁸	+++
비교예 5	1x10⁷	40000	300	<100	<100	<100	-

판정 기준

- : 8주간 변취 및 균사와 포자 발생이 없고 양호,

+ :４주 이내에 기벽이나 뚜껑에 곰팡이 발생,

++ :４주 이내에 변취 및 표면 일부에 곰팡이 발생,

+++ :　4주 이내에 변취 및 표면 전체에 곰팡이 발생.

상기 표 12에서 알 수 있듯이, 방부제를 사용하지 않은 비교예 4의 화장료 조성물은 4주 이내에 변취 및 표면 전체에 곰팡이가 발생하고, 1일만 지나도 박테리아 균이 현저하게 증가하는 것을 알 수 있다. 그러나, 화학식 1의 화합물을 포함하는 실시예 2의 화장료 조성물은 박테리아 및 곰팡이에 대해 현저한 항균 효과를 나타내었으며, 화학식 1의 화합물(실시예 2) 및 기존의 방부제(비교예 5)를 각각 0.2% 및 0.4%씩 사용한 후 28일이 경과한 후에는 화학식 1의 화합물 0.2%를 사용한 실시예 2가 기존의 방부제 0.4%를 사용한 비교예 5와 유사한 방부력이 보였으며, 따라서, 화학식 1의 화합물이 기존의 방부제에 비하여 훨씬 우수한 방부력을 확보함을 알 수 있었다.

실험예 11. 피부 주름 개선 효과

본 발명의 화학식 1의 화합물을 포함하는 화장료의 피부 주름 개선 효과에 대한 임상 실험을 실시하였다. 임상 실험은 각 화장료의 실제 사용 테스트를 통하여 평가하였다.

실험자 (20세 - 35세의 여성) 30명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 실시예 1을, 얼굴 왼쪽 부위에는 비교예 1을 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 도포하였다.

실험 완료 후 피부 주름 개선 효과는 제품 사용 전과 2개월간 사용 후의 각 피검자의 주름 개선 효과를 숙련된 의사의 육안 관찰을 통하여 평가하였다. 실험 결과는 하기의 표 13에 나타낸 바와 같다.

	주름 개선 효과			유효율(%)
	우수	약간	없음
실시예1	24	6	0	100%
비교예1	4	6	20	33%

표 13에서 알 수 있듯이, 본 발명의 실시예 1에 따른 화장료 조성물이 비교예1에 따른 화장료 조성물에 비하여 높은 주름 개선 효과를 보여주었다. 또한 본 발명의 실시예 1에 따른 화장료 조성물을 피부에 도포한 피검자들의 피부에서는 피부자극을 관찰할 수 없었다.

Claims

하기의 화학식 1의 화합물을 유효 성분으로 포함하는 항산화용 화장료 조성물.
[화학식 1]
하기의 화학식 1의 화합물을 유효 성분으로 포함하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
[화학식 1]
하기의 화학식 1의 화합물을 유효 성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물.
[화학식 1]
하기의 화학식 1의 화합물을 유효 성분으로 포함하는 항염증용 화장료 조성물.
[화학식 1]
하기의 화학식 1의 화합물을 유효 성분으로 포함하는 항균용 화장료 조성물.
[화학식 1]
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 1의 화합물은 상기 화장료 조성물의 전체 중량에 대하여 0.000001 ~ 30.0 중량%로 포함되어 있는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 클린징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 맛사지 크림 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형으로 이루어진 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.