KR20120129820A - 의약 조성물 및 의약 조성물의 제조 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은, 열 안정성이 나쁜 알레르겐을 안정적으로 저장 및 전달할 수 있는 의약 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다. 본 발명은, 알레르겐과, 유기산염, 무기산염 및 pH 조절제로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1종을 함유하는 것을 특징으로 하는 의약 조성물이다.

Description

의약 조성물 및 의약 조성물의 제조 방법{PHARMACEUTICAL COMPOSITION AND METHOD FOR PRODUCING THE SAME}

본 발명은, 알레르기증의 예방 또는 치료제로서 유용한 의약 조성물에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 안정성이 우수하고, 저장 및 취급 등의 편리성이 우수한 알레르겐의 의약 조성물, 및 의약 조성물의 제조 방법에 관한 것이다.

꽃가루 알레르기 등의 알레르기성 질환에 대한 치료로는, 현재 항히스타민제를 이용하는 대처 요법이 그 대부분이지만, 최근 들어 알레르기성 질환을 근치 가능한 치료 방법으로서 감감작(減感作) 요법이 주목을 받고 있다.

감감작 요법은, 일반적으로 2 내지 3년 정도의 장기간 투여가 필요해서, 이러한 관점에서 간호자 및 환자의 QOL(quality of life)을 보다 향상시키는 제형이 필요한 것으로 생각되고 있다.

현재, 특이적 감감작 요법용 제제는, 피하 주사를 목적으로 한 주사제가 대부분이다.

그러나, 피하 주사에 의한 특이적 감감작 요법에서는, 아나필락시 쇼크의 위험성, 의료종사자에 의한 투여의 필요성, 장기간에 걸친 빈번한 통원 필요성, 주사에 의한 통증, 냉장 보관 등의 문제점이 있었다.

이에 대해, 최근, 구미에서는 설하 투여를 목적으로 한 액제 및 정제가 시판되어, 적은 부작용과 간편함에서 주목을 받고 있다.

그러나, 액제의 설하 투여에 의한 특이적 감감작 요법에서는, 투여량의 부정확성, 냉장 보관 등의 문제가 있었다.

또한, 정제의 설하 투여에 의한 특이적 감감작 요법에서는, 오음, 투여량의 조정이 어렵고, 휴대성이 나쁘며, 잔사에 의한 구강 내에 대한 위화감 등의 문제가 있었다.

또한, 알레르겐의 제제화에서는, 알레르겐을 안정적으로 보존시키는 것, 즉 생물학적 활성의 손실을 최소한으로 억제하는 것이 필수적이다.

이러한 알레르겐의 제제화 기술로서, 예를 들면, 특허문헌 1에는, 안정화제로서 글루코오스, 말툴로오스, 이소-말툴로오스, 락툴로오스, 수크로오스, 말토오스, 락토오스, 소르비톨, 이소-말토오스, 말티톨, 락티톨, 팔라티니트, 트레할로오스, 라피노오스, 스타키오스, 멜레지토오스 및 덱스트란으로 이루어지는 군에서 선택되는 유리 형성 폴리올을 포함한 생물학적 샘플을 높은 점성을 갖는 액체로서 보존할 수 있게 건조하는 것이 제안되어 있다. 또한 예를 들면, 특허문헌 1과 마찬가지의 기술로서, 예를 들면 특허문헌 2에는, 수크로오스 또는 트레할로오스를 제1 성분으로서 포함하고, 제2 성분으로서 만니톨, 라피노오스, 락티톨, 소르비톨 및 락토비온산으로 이루어지는 군에서 선택되는 이들 당을 포함한 생물학적 샘플의 고점도 액체가 제안되어 있다. 또한 예를 들면, 특허문헌 3에는, 단백질을 안정화 또는 가용화시키기 위한 방법으로서 당 폴리머 유도체를 접촉시키는 것이 제안되어 있으며, 해당 당 폴리머 유도체로서, 에리트로오스, 트레오스, 리보오스, 아라비노오스, 자일로오스, 릭소오스, 알로오스, 알트로오스, 글루코오스, 만노오스, 글로오스, 이도오스, 갈락토오스, 탈로오스, 프시코오스, 프룩토오스, 소르보오스, 타가토오스, 자일룰로오스, 리불로오스가 거론되어 있다. 또한 예를 들면, 특허문헌 4에는, 단백질제의 안정화를 위한 조성물로서, 계면 활성제, 2종류의 아미노산, 2당류 및 에틸렌디아민 4아세트산을 포함하는 것이 제안되어 있고, 2당류로서 수크로오스, 트레할로오스 또는 락토오스가 거론되어 있다. 또한 예를 들면, 특허문헌 5에는, 적어도 1종의 아미노산, 적어도 1종의 당 및 적어도 1종의 폴리아민을 포함하는 안정제 조성물이 제안되어 있고, 그 당으로서 글루코오스, 락토오스, 말톨, 트레할로오스, 소르비톨, 만니톨이 거론되어 있다. 또한 예를 들면, 특허문헌 6에는, 액체 백신을 안정화하는 방법으로서 트레할로오스의 첨가가 제안되어 있다.

또한, 알레르겐의 제제화 기술로서, 안정화제나 부형제를 첨가한 동결 건조제를 이용하는 방법이 제안되어 있다.

예를 들면 특허문헌 7에는, 안정화제로서, 젤라틴 및 만니톨 혹은 전분 및 만니톨을 포함하는 용액을 동결 건조함으로써, 티머시(timothy) 잔디 꽃가루 알레르겐을 안정화한 의약 조성물이 제안되어 있다. 인용 문헌 7에서, 매트릭스를 함유하는 용액을 고화하기 전에 알레르겐의 변성, 침전을 방지하고, 안정된 생성물을 확실하게 하기 위해서 pH를 조정하는 것이 바람직하다는 것이 제안되어 있으며, 용액의 pH는, 바람직하게는 3.5 내지 10, 보다 바람직하게는 4 내지 9, 가장 바람직하게는 6 내지 9인 것이 제안되어 있다. 또한 예를 들면, 특허문헌 8에는, 안정화제로서, 만니톨 및 pH 조절제로서 인산나트륨을 포함하는 용액을 동결 건조함으로써, 삼목 꽃가루 알레르겐 유래 펩티드를 안정화한 의약 조성물이 제안되어 있다. 또한 예를 들면, 특허문헌 9에는, 안정화제로서, 만니톨 및 pH 조절제로서 아세트산을 포함하는 용액을 동결 건조함으로써, 삼목 꽃가루 주요 알레르겐의 유전자 재조합 단백질을 안정화한 의약 조성물도 제안되어 있다. 그 밖에, 매크로골 4000, 폴리소르베이트 80 및 수크로오스를 포함하는 용액을 동결 건조함으로써, 가루응애 주요 알레르겐의 유전자 재조합 단백질을 안정화한 의약 조성물이 제안되어 있다.

그러나, 알레르겐은 열 안정성이 나빠, 종래의 알레르겐의 제제화 기술로는 알레르겐을 안정적으로 저장 및 전달하는 것이 곤란했다.

일본 특허 출원 공표 제2006-504801호 공보 일본 특허 출원 공표 제2007-535514호 공보 일본 특허 출원 공표 제2008-501639호 공보 일본 특허 출원 공표 제2006-528137호 공보 일본 특허 출원 공표 제2008-532977호 공보 일본 특허 출원 공표 제2002-540079호 공보 일본 특허 출원 공표 제2006-513269호 공보 일본 특허 제4179422호 일본 특허 제3932272호

본 발명은, 상기 현상을 감안하여, 열 안정성이 나쁜 알레르겐을 안정적으로 저장 및 전달할 수 있는 의약 조성물, 그 의약 조성물의 제조 방법을 제공하는 것을 과제로 한다.

본 발명자들은, 상기 과제를 해결하기 위해서 예의 검토한 결과, 안정화제로서, 유기산염, 무기산염 및 pH 조절제로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1종을 함유시켜서 pH를 조절함으로써, 열 안정성이 나쁜 알레르겐이라도 안정적으로 저장 및 전달시킬 수 있음을 발견하고, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

즉, 본 발명은, 알레르겐과, 유기산염, 무기산염 및 pH 조절제로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1종을 함유하는 것을 특징으로 하는 의약 조성물이다.

본 발명의 의약 조성물에 있어서, 상기 유기산염은, 락트산칼슘, 시트르산나트륨, 시트르산칼슘, 말산나트륨, 글리시르리진산 2칼륨(dipotassium glycyrrhizate), 글리시르리진산 2나트륨, 글루콘산칼슘, 글루콘산나트륨, 글루콘산마그네슘, 푸마르산스테아릴나트륨, 타르타르산나트륨, 타르타르산나트륨칼륨, 숙신산 2나트륨, 아세트산나트륨, L-아스파르트산나트륨, 및 L-아스코르브산나트륨으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1종을 포함하는 것이 바람직하다.

또한, 상기 무기산염은, 탄산칼슘, (무수)인산수소칼슘, 탄산마그네슘, 규산칼슘, 규산마그네슘, 메타규산알루민산마그네슘, 합성 규산알루미늄, 탄산수소나트륨, 인산수소나트륨, 인산 2수소나트륨, 탄산수소칼륨, 인산 2수소칼륨, 및 인산 2수소칼슘으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1종을 포함하는 것이 바람직하다.

또한, 본 발명의 의약 조성물은, 알레르겐은 삼목(Cryptomeria japonica) 꽃가루 알레르겐 단백질인 것이 바람직하다.

또한, 본 발명의 의약 조성물은, 젤라틴을 더 포함하는 것이 바람직하다.

또한, 본 발명의 의약 조성물은, 물을 더 포함하는 것이 바람직하다.

또한, 상기 pH 조절제는 pH를 5.5 내지 8.5의 범위 내로 조절하는 것인 것이 바람직하다.

또한, 본 발명의 의약 조성물은, pH 조절제는 아세트산, 인산 혹은 붕산 또는 이것들의 혼합물, 수산화나트륨, 및 탄산나트륨으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1종을 포함하는 것이 바람직하다.

또한, 본 발명의 의약 조성물은, 물을 포함하지 않는 것이 바람직하다.

또한, 본 발명의 의약 조성물은, 고형제, 액제 또는 젤리제인 것이 바람직하다.

또한, 본 발명의 의약 조성물은, 경구 투여용인 것이 바람직하다.

또한, 본 발명의 의약 조성물은, 감감작 요법용인 것이 바람직하다.

또한, 본 발명의 의약 조성물은, 피하 주사용인 것이 바람직하다.

또한, 본 발명은, 알레르겐과, 유기산염, 무기산염 및 pH 조절제로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1종을 물에 용해시켜서 알레르겐 함유 수용액을 얻는 공정, 및 상기 알레르겐 함유 수용액을 동결 건조시키는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는 의약 조성물의 제조 방법이기도 하다.

본 발명의 의약 조성물의 제조 방법은, 상기 알레르겐 함유 수용액에, 젤라틴을 더 용해시키는 것이 바람직하다.

또한, 상기 알레르겐 함유 수용액은, pH가 5.5 내지 8.5의 범위 내에 있는 것이 바람직하다.

본 발명의 의약품 조성물은, 알레르겐과, 안정화제로서 유기산염, 무기산염 및 pH 조절제로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1종을 함유하는 것이기 때문에, 열 안정성이 나쁜 것으로 알려져 있는 알레르겐의 안정적인 저장 및 전달이 가능하다. 본 발명의 의약 조성물은, 주사제 및 경구 액제 모두에 대한 응용이 가능하며, 이들 용액 형태의 제제뿐만 아니라, 겔화제로서 젤라틴을 첨가함으로써 안정된 경구 고형 제제의 조제가 가능하다.

또한, 젤라틴을 함유시킴으로써, 본 발명의 의약품 조성물은 젤리 형태 제제로 할 수가 있어, 환자가 자기 투여 가능하고, 주사에 의한 통증도 없으며, 분할함으로써 투여량의 조정도 가능하고, 휴대성도 우수하고, 잔사감도 없으며, 정제와의 제형 차별화에 의한 오음 방지도 우수하고, 간호자가 투여하기 쉬운 등, 환자 및 간호자의 QOL을 크게 향상시킬 수 있게 된다.

또한, 상기 젤리 형태 제제는, 안정화제로서 유기산염 및/또는 무기산염을 이용하거나, 또는 pH 조절제를 함유시켜서 pH를 조절하는 것이기 때문에, 열 안정성이 나쁜 것으로 알려져 있는 알레르겐을, 그 제조 공정 중에서 안정적으로 유지할 수 있다.

이하에, 본 발명을 상세하게 설명한다.

본 발명의 의약 조성물은, 알레르겐과, 유기산염, 무기산염 및 pH 조절제로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1종을 함유한다.

본 발명의 의약 조성물에 있어서, 상기 유기산염 및 무기산염은, 알레르겐의 안정성을 향상시키는 작용을 하는 재료다.

또한, 본 발명의 의약 조성물에 있어서, 상기 pH 조절제는 본 발명의 의약 조성물의 pH를 특정한 범위 내로 조절함으로써, 열 안정성이 나쁜 알레르겐이라도 안정적으로 저장 및 전달시킬 수 있게 조정하는 재료다.

본 발명의 의약 조성물에 있어서, 상기 유기산염으로는, 예를 들면 락트산칼슘, 시트르산나트륨, 시트르산칼슘, 말산나트륨, 글리시르리진산 2칼륨, 글리시르리진산 2나트륨, 글루콘산칼슘, 글루콘산나트륨, 글루콘산마그네슘, 푸마르산스테아릴나트륨, 타르타르산나트륨, 타르타르산나트륨칼륨, 숙신산 2나트륨, 아세트산나트륨, L-아스파르트산나트륨, 및 L-아스코르브산나트륨으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1종을 포함하는 것이 바람직하다.

또한, 본 발명에서는, 상기 유기산염으로는, 예를 들면 유기산과, 염화나트륨, 염화칼슘, 염화마그네슘, 염화칼륨 등과의 조합과 같이, 의약 조성물 중에서 상술한 유기산염과 동등한 유기산염이 되는 조합이 이용되어도 좋다.

또한, 상기 무기산염으로는, 예를 들면 탄산칼슘, (무수)인산수소칼슘, 탄산마그네슘, 규산칼슘, 규산마그네슘, 메타규산알루민산마그네슘, 합성 규산알루미늄, 탄산수소나트륨, 인산수소나트륨, 인산 2수소나트륨, 탄산수소칼륨, 인산 2수소칼륨, 및 인산 2수소칼슘으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1종을 포함하는 것이 바람직하다.

또한 본 발명에서는, 상기 무기산염으로는, 예를 들면 무기산과, 염화나트륨, 염화칼슘, 염화마그네슘, 염화칼륨 등과의 조합과 같이, 의약 조성물 중에서 상술한 무기산염과 동등한 무기산염이 되는 조합이 이용되어도 좋다.

또한, 알레르겐은 통상 저pH 재료이기 때문에, 본 발명에서는, 알레르겐의 저pH를 유지할 수 있는 유기산염 및/또는 무기산염을 이용하는 것이 바람직하고, 구체적으로는 pH가 5.5 미만의 유기산염 및/또는 무기산염을 이용하는 것이 바람직하다.

상기 알레르겐의 저pH를 유지한 채, 그 알레르겐을 안정화할 수 있는 유기산염으로는, 예를 들면 락트산칼슘(pH4.8), 글리시르리진산 2칼륨(pH4.7), 타르타르산나트륨(pH3.8), 아스코르브산나트륨(pH5.0), 말산나트륨(pH5.4), 푸마르산스테아릴 나트륨(pH4.1) 등을 들 수 있다. 이들 유기산염은, 단독으로 이용되어도 좋고, 2종 이상이 병용되어도 좋다.

또한, 상기 알레르겐의 저pH를 유지한 채, 그 알레르겐을 안정화할 수 있는 무기산염으로는, 예를 들면 합성 규산알루미늄(pH4.6), 인산 2수소나트륨(pH4.4), 인산 2수소칼슘(pH4.1), 인산 2수소칼륨(pH4.4) 등을 들 수 있다. 이들 무기산염은, 단독으로 이용되어도 좋고, 2종 이상이 병용되어도 좋다.

상기 유기산염 및/또는 무기산염의 첨가량으로는, 예를 들면, 본 발명의 의약 조성물을 주사제로서 이용하는 경우, 0.1 내지 5중량％인 것이 바람직하다. 0.1 중량％ 미만이면, 알레르겐에 대한 안정화의 효과가 약하고, 한편, 5중량％를 초과하면, 유기산염, 무기산염의 성질에 따라 다르지만, 안전성상 문제가 될 가능성이 있다.

또한, 본 발명의 의약 조성물을 경구 액제로서 이용하는 경우, 상기 유기산염 및/또는 무기산염의 첨가량은, 0.1 내지 20중량％인 것이 바람직하다. 0.1 중량％ 미만이면, 알레르겐에 대한 안정화의 효과가 약하고, 한편, 20중량％를 초과하면, 유기산염, 무기산염의 성질에 따라 다르지만, 결정이 석출될 우려가 있다.

또한, 본 발명의 의약 조성물을 고형 제제로서 이용하는 경우, 상기 유기산염 및/또는 무기산염의 첨가량은, 0.1 내지 30중량％인 것이 바람직하다. 0.1 중량％ 미만이면, 알레르겐에 대한 안정화의 효과가 약하고, 한편, 30중량％를 초과하면, 유기산염, 무기산염의 물성이 고형 제제에 영향을 줄 가능성이 있다.

또한, 본 발명의 의약 조성물에 있어서, 상기 pH 조절제로는, pH를 후술하는 범위로 할 수 있는 것이 바람직하고, 또한, 경구 투여의 사용 실적이 있는 것이 바람직하다. 이러한 pH 조절제로는, 예를 들면, 의약품 첨가제로서 실적이 있는, 아디핀산, 암모니아수, 염산, 탄산나트륨, 희 염산, 시트르산 수화물, 글리신, 글루코노-δ-락톤, 글루콘산, 결정 인산 2수소나트륨, 숙신산, 아세트산, 아세트산암모늄, 아세트산나트륨 수화물, 디이소프로판올아민, 타르타르산, D-타르타르산, 수산화칼륨, 수산화칼슘, 수산화나트륨, 수산화마그네슘, 탄산수소나트륨, 탄산나트륨 수화물, 트리이소프로판올아민, 트리에탄올아민, 이산화탄소, 락트산, 락트산나트륨액, 빙초산, 푸마르산 1나트륨, 푸마르산, 프로피온산나트륨, 붕산, 붕산암모늄, 붕사, 말레산, 무수 시트르산, 무수 인산 1수소나트륨, 무수 인산 2수소나트륨, 메글루민, 메탄술폰산, 모노에탄올아민, 황산, 황산알루미늄칼륨 수화물, DL-말산, 인산, 인산 3나트륨, 인산 2칼륨, 인산 2수소칼륨, 인산 2수소나트륨 등을 들 수 있다. 이들 pH 조절제는 단독으로 이용되어도 좋고, 2종 이상이 병용되어도 좋다.

또한, 상기 pH 조절제는 본 발명의 의약 조성물의 제조상의 관점에서, 소량으로 pH의 조절이 가능한 것이 바람직하다.

이러한 pH 조절제로는, 의약품 첨가제로서 실적이 있는, 아디핀산, 암모니아수, 염산, 탄산나트륨, 희 염산, 시트르산 수화물, 글리신, 글루코노-δ-락톤, 글루콘산, 결정 인산 2수소나트륨, 숙신산, 아세트산, 아세트산암모늄, 아세트산나트륨 수화물, 디이소프로판올아민, 타르타르산, 수산화칼륨, 수산화칼슘, 수산화나트륨, 수산화마그네슘, 탄산수소나트륨, 탄산나트륨 수화물, 트리이소프로판올아민, 트리에탄올아민, 이산화탄소, 락트산, 락트산나트륨액, 빙초산, 푸마르산, 푸마르산 1나트륨, 프로피온산나트륨, 붕산, 붕산암모늄, 붕사, 말레산, 무수 시트르산, 무수 인산 1수소나트륨, 무수 인산 2수소나트륨, 메글루민, 메탄술폰산, 모노에탄올아민, 황산, 황산알루미늄칼륨 수화물, DL-말산, 인산, 인산 3나트륨, 인산 2칼륨, 인산 2수소칼륨, 인산 2수소나트륨 등을 들 수 있다. 이들 pH 조절제는 단독으로 이용되어도 좋고, 2종 이상이 병용되어도 좋다.

또한, 상기 pH 조절제는 단백질의 변성이나 응집을 억제하는 효과가 있는 유기산 및 유기산염도 적절하다. 이러한 pH 조절제로는, 예를 들면, 시트르산 수화물, 글리신, 글루코노-δ-락톤, 글루콘산, 숙신산, 아세트산, 아세트산나트륨 수화물, 타르타르산, 락트산, 빙초산, 푸마르산, 푸마르산 1나트륨, 프로피온산나트륨, 말레산, 무수 시트르산, 말산 등을 들 수 있다.

또한, 본 발명의 의약 조성물에서는, 상기 pH 조절제는 완충 능력이 후술하는 pH의 범위 내에서 최대가 되는 완충액이나, 단백질의 변성이나 응집을 억제하는 효과가 있는 유기산 혹은 유기산염을 포함하는 완충 용액이 바람직하다.

구체적으로는, 예를 들면 시트르산 완충액(시트르산 및 시트르산나트륨으로 이루어지는 혼합물), 아세트산 완충액(아세트산 및 아세트산나트륨으로 이루어지는 혼합물), 시트르산-인산 완충액(시트르산 및 인산수소 2나트륨으로 이루어지는 혼합물), 인산 완충액(인산 2수소나트륨 및 인산수소 2나트륨으로 이루어지는 혼합물) 등을 들 수 있다.

또한, 후술하는 pH의 범위 내이면 광역 완충액인 브리튼-로빈슨(Britton-Robinson) 완충액을 상기 pH 조절제로서 사용할 수도 있다.

상기 브리튼-로빈슨 완충액으로는, 본 발명의 의약 조성물이 후술하는 pH의 범위 내가 되는 것이면 특별히 한정되지 않지만, 예를 들면, 아세트산:인산:붕산=1:1:1(중량비)의 혼합물이 적절히 이용된다.

그 중에서도, 본 발명의 의약 조성물에서는, 아세트산, 인산 혹은 붕산 또는 이것들의 혼합물, 수산화나트륨, 및 탄산나트륨으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1종을 포함하는 pH 조절제가 적절히 이용된다.

또한, 상기 pH 조절제는 예를 들면 유기산과, 염화나트륨, 염화칼슘, 염화마그네슘, 염화칼륨 등과의 조합과 같이, 의약 조성물 중에서 상기 pH 조절제로서 예시한 유기산염과 동등한 유기산염이 되는 조합이 이용되어도 좋다.

상기 pH 조절제의 함유량으로는 특별히 한정되지 않고, 본 발명의 의약 조성물의 pH가, 후술하는 범위 내가 되도록 적절히 조정되는 것이 바람직하다.

본 발명에서 이용되는 상기 알레르겐이란, 알레르기 질환을 가지고 있는 사람의 항체와 특이적으로 반응하는 항원을 의미하며, 전형적으로는 단백질이다.

구체적으로는, 수목류의 꽃가루에서 유래하는 알레르겐(아카시아, 오리나무, 미국 물푸레, 너도밤나무, 자작나무, 단풍나무, 산 삼목, 적 삼목, 미루나무, 노송나무, 미국 느릅나무, 가을 느릅나무, 화백나무, 고무나무, 유칼리나무, 팽나무, 히코리, 미국 참피나무, 사탕단풍, 메스키트, 뽕나무, 참나무속, 올리브, 피칸, 후추나무, 소나무, 쥐똥나무, 러시아 올리브, 미국 플라타너스, 가죽나무, 검은 호두나무, 검은 버드나무 등), 초목류의 꽃가루에서 유래하는 알레르겐(목화, 우산잔디, 왕포아풀, 좀참새귀리, 옥수수, 넓은잎김의털, 색시옥수수, 메귀리, 새발풀, 외겨이삭, 호밀풀, 벼, 향기풀, 티머시, 비름, 명아주, 도꼬마리, 수영, 미역취, 대싸리, 흰명아주, 금잔화, 쐐기풀, 돌피, 질경이, 단풍잎돼지풀, 돼지풀, 나도돼지풀, 러시아 엉겅퀴, 산쑥, 금작화, 애기수영 등), 곤충 유래의 알레르겐(누에, 진드기, 꿀벌, 말벌, 개미, 바퀴벌레 등), 균류 유래의 알레르겐(알터나리아, 아스페르길루스, 보툴리누스, 칸디다, 세팔로스포륨, 커불라리아속, 에피코쿰균, 표피균, 푸사륨속, 헬민토스포륨속, 연쇄 클라도스포륨, 털곰팡이, 페니실륨, 포마속, 풀루라리아 풀루란스, 거미줄곰팡이 등), 동물의 체모 유래의 알레르겐(개, 고양이, 새 등), 집먼지 유래의 알레르겐, 음식물 유래의 알레르겐 등을 들 수 있으며, 알레르기 질환을 가지고 있는 사람의 항체와 특이적으로 반응하는 항원이면 특별히 한정되지 않는다.

여기서, 현재, 환자가 많은 삼목 꽃가루 알레르기증의 감감작 요법이 요구되고 있다. 이 때문에, 본 발명의 의약 조성물에 있어서, 상기 알레르겐으로는 삼목 꽃가루 알레르겐 단백질인 것이 바람직하다.

상기 삼목 꽃가루 알레르겐 단백질로는, 삼목 꽃가루에서 추출된 알레르기 질환을 가지고 있는 사람의 항체와 특이적으로 반응하는 항원성을 갖는 단백질, 그 단백질과 아미노산 레벨에서 상동성이 높은 단백질을 유효 성분으로 하여 이루어지는 군에서 선택되는 1종류 이상을 포함하는 것을 들 수 있다.

상기 삼목 꽃가루에서 추출된 항원성을 갖는 단백질로는, 삼목 꽃가루 특이적 IgE 항체의 산생을 유도할 수 있는, 삼목 꽃가루 중에 포함되는 단백질을 들 수 있다. 이 삼목 꽃가루 중에 포함되는 단백질은, 메이저 삼목 꽃가루 알레르겐 단백질과 마이너 삼목 꽃가루 알레르겐 단백질로 이루어진다.

또한, 꽃가루에 포함되는 몇 가지의 삼목 꽃가루 엑기스 중에서, 대다수의 환자가 강하게 감작되어 있는 성분을 메이저 삼목 꽃가루 알레르겐 단백질이라고 하고, 일부의 환자만이 감작되어 있는 성분을 마이너 삼목 꽃가루 알레르겐 단백질이라고 한다.

상기 삼목 꽃가루 알레르겐 단백질은, 그것들을 포함하는 액상이어도 좋고, 고체이어도 된다. 여기서, 액상인 것을 삼목 꽃가루 엑기스라고 부르며, 액상인 삼목 꽃가루 엑기스의 경우, 본 발명에서의 상술한 유기산염 및/또는 무기산염을 안정화제로서 사용하여, 본 발명의 의약 조성물을 그대로 주사제 또는 경구 액제로서 사용해도 좋고, 본 발명의 의약 조성물에 겔화제를 더 가해서 고형화하여 경구 고형 제제로 해도 좋다.

또한, 삼목 꽃가루 엑기스와 상기 유기산염 및/또는 무기산염을 혼합한 후에, 동결 건조 등의 조작을 함으로써 본 발명의 의약 조성물을 경구 고형 제제로 해도 좋다.

상기 삼목 꽃가루 엑기스로는, 특히 메이저 삼목 꽃가루 알레르겐 단백질인 Cryj1 및 Cryj2 및 그것들의 혼합물이 바람직하다. 또한, 본 발명에서는, 상기 Cryj1 및 Cryj2뿐만 아니라 마이너 삼목 꽃가루 알레르겐 단백질도 포함한 삼목 꽃가루 추출액인 삼목 꽃가루 엑기스 그대로, 혹은 희석한 것, 또는 동결 건조시킨 고형의 것도 바람직하다. 또한, 실제로 의약품으로서 토리이 약품 주식회사에서 상기 삼목 꽃가루 엑기스에 상당하는 치료용 표준화 알레르겐 엑기스 피하주 "토리이" 삼목 꽃가루 200JAU/mL, 및 치료용 표준화 알레르겐 엑기스 피하주 "토리이" 삼목 꽃가루 2000JAU/mL를 판매하고 있어, 해당 의약품을 이용해도 된다.

여기서, 상기 "JAU"는, "Japanese Allergy Units"의 약칭이며, 메이저 알레르겐 단백질인 Cryj1에 의해 표준화시킨 삼목 꽃가루 알레르겐의 역가를 의미한다.

상기 알레르겐의 배합량으로는, 그 성질 등에 따라 상이하지만, 본 발명의 의약 조성물의 전체 중량에 대하여 통상 1×10^-10 내지 60중량％이다. 1×10^-10중량％ 미만이면, 감감작 요법에 적합하지 않은 것이 되는 경우가 있고, 60중량％를 초과하면, 본 발명의 의약 조성물을 필름 형태 제제로 했을 때에, 필름 강도가 현저하게 저하하여, 필름의 보형성에 문제가 발생할 가능성이 있다.

특히, 상기 알레르겐이 삼목 꽃가루 알레르겐 단백질이며, 상기 유기산염 및/또는 무기산염을 함유하는 경우, 그 삼목 꽃가루 알레르겐 단백질의 배합량으로는, 그 성질 등에 따라 다르지만, 첨가하는 상기 유기산염 및/또는 무기산염에 대하여 1×10^-10 내지 100중량％인 것이 바람직하다. 100중량％를 초과하면, 보관 안정성상, 유기산염 및/또는 무기산염이 안정화제로서 충분한 효과를 나타낼 수 없을 우려가 있고, 1×10^-10중량％ 미만이면, 실용상 최적의 임상 효과를 얻을 수 없을 가능성이 있다.

본 발명의 의약 조성물은, 상기 pH 조절제를 함유하는 경우, pH가 5.5 내지 8.5의 범위인 것이 바람직하다. 상기 pH 조절제를 함유하는 본 발명의 의약 조성물의 pH가 5.5 미만 또는 8.5보다 큰 범위에서는, 알레르겐의 물리화학적 안정성이 현저하게 감소하여, 안전성상 문제가 된다. 또한, 상기 치료용 표준화 알레르겐 엑기스의 규격은, pH4 내지 5로 설정되어 있다. 본 발명의 의약 조성물의 pH는, 상술한 pH 조절제에 의해 상기 범위로 조정할 수 있다.

또한, 본 발명의 의약 조성물이 상기 유기산염 및/또는 무기산염을 함유하는 경우, pH가 5.0 내지 9.0의 범위 내에 있는 것이 바람직하다. 상기 유기산염 및/또는 무기산염을 함유하는 본 발명의 의약 조성물의 pH가 5.0 미만 또는 9.0보다 큰 범위에서는, 알레르겐의 물리화학적 안정성이 현저하게 감소하여, 안전성상 문제가 되는 경우가 있다. 보다 바람직하게는 pH가 6.0 내지 8.0이다. 또한, 상기 유기산염 및/또는 무기산염을 함유하는 본 발명의 의약 조성물은, 상기 pH의 범위로 하기 위해 상술한 pH 조절제를 함유하는 것이 바람직하다.

본 명세서에서 "pH"란, 다음 방법으로 측정되는 값을 의미한다.

측정 대상이 액제인 경우, pH 측정기(예를 들면, 호리바제작소사제, pH 미터)를 이용하여, 액제의 pH를 25±2℃의 온도하에서 직접 측정한다.

또한, 측정 대상이 고형제(젤리 형태 제제를 포함함)의 경우, 우선 1g의 고형 제제를 10mL 메스 플라스크에 취하고, 증류수로 희석한다. 고형제가 완전하게 용해할 때까지 30 내지 35℃의 항온하에서 교반하여 샘플 용액을 얻는다. pH 측정기(예를 들면, 호리바제작소사제, pH 미터)를 이용하여, 얻어진 샘플 용액의 pH를 25±2℃의 온도하에서 측정한다.

본 발명의 의약 조성물은, 물을 더 함유하는 것이 바람직하다.

상기 물을 더 함유함으로써, 본 발명의 의약 조성물을 후술하는 젤리 형태 제제로 하여 적절히 이용할 수 있다. 또한, 그 이유에 대해서는 후술한다.

또한, 본 발명의 의약 조성물은, 젤라틴을 함유하는 것이 바람직하다.

상기 젤라틴은, 겔화제 또는 안정화제로서 기능하는 것이며, 동물의 가죽이나 뼈에 포함되는 단백질을 효소에 의해 분해 추출한 것을 들 수 있고, 예를 들면 돼지, 소 및 물고기 유래의 것을 산 처리 또는 알칼리 처리한 것은 어느 것이든 사용할 수 있다.

상술한 알레르겐의 보관시 안정성의 관점에서, 상기 젤라틴으로는 알칼리 처리 젤라틴이 바람직하지만, 그 용해성의 관점에서는 수용성 젤라틴이 바람직하다.

또한, 최근의 BSE 문제의 관점에서, 상기 젤라틴으로는 물고기 유래 및 돼지 유래의 젤라틴이 바람직하다.

또한, 상기 젤라틴이 안정화제로서 첨가되는 경우, 그 첨가량은 많으면 많을수록 바람직하지만, 추구하는 최종 제형에 의존하는 것으로 생각된다.

예를 들면, 본 발명의 의약 조성물을 주사제로서 이용하는 경우, 상기 젤라틴의 첨가량으로는, 1 내지 3중량％인 것이 바람직하다. 1중량％ 미만이면, 알레르겐에 대한 안정화의 효과가 약하고, 3중량％를 초과하면, 그 점성 때문에 실용상 문제가 될 가능성이 있다.

또한, 본 발명의 의약 조성물을 경구 액제로서 이용하는 경우, 상기 젤라틴의 첨가량으로는 1 내지 10중량％인 것이 바람직하다. 1중량％ 미만이면, 알레르겐에 대한 안정화의 효과가 약하고, 10중량％를 초과하면, 그 점성 때문에 실용상 문제가 될 가능성이 있다.

또한, 본 발명의 의약 조성물을 경구 고형 제제로서 이용하는 경우, 상기 젤라틴의 첨가량으로는 1 내지 80중량％인 것이 바람직하다. 1중량％ 미만이면, 알레르겐에 대한 안정화의 효과가 약하고, 80중량％를 초과하면, 경구 투여시의 알레르겐의 방출성이 낮아져, 충분히 효과를 발휘하지 못할 가능성이 시사된다.

이렇게, 본 발명의 의약 조성물은, 주사제, 경구 액제, 경구 고형 제제를 조제하는 것이 가능한데, 이들 제형으로서 이용하는 경우, 상술한 재료 이외에, 희망에 따라 부형제, 결합제, 향료, 교미제, 감미제, 착색제, 방부제, 항산화제, 상술한 유기산염 및/또는 무기산염 이외의 안정화제, 계면 활성제 등을 적절히 사용해도 좋다. 이들 재료로는 특별히 한정되지 않으며, 종래 공지된 것을 사용할 수 있다.

또한, 본 발명의 의약 조성물의 바람직한 제형으로는, 예를 들면 고형제, 액제 또는 젤리제를 들 수 있다.

또한, 본 발명의 의약 조성물은, 피하 주사용, 경구 투여용, 또는 경구 투여용의 액제인 것이 바람직하다.

상기 경구 고형 제제에는, 정제, 코팅정, 산제, 과립제, 세립제, 구강내 붕괴정, 구강내 접착제, 젤리제, 필름제가 포함되며, 경구, 설하, 구강에 투여하는 고형 형태의 것이라면 특별히 한정되지 않는다.

또한, 본 발명의 의약 조성물은 감감작 요법용인 것이 바람직하다.

상기 감감작 요법용인 본 발명의 의약 조성물은 젤리 형태 제제인 것이 바람직하다.

상기 젤리 형태 제제로는, 상술한 본 발명의 의약 조성물에, 물과, 겔화제로서의 젤라틴을 함유하는 것을 들 수 있다.

상기 젤리 형태 제제는, 감작 시간의 제어가 필요한 구강내 감감작 요법용에 적절히 이용할 수 있으며, 특히 설하 감감작 요법에 적합한 것이다. 또한, 상기 젤리 형태 제제는, 젤라틴과 특정한 안정화제를 함유하기 때문에, 알레르겐, 특히 단백질이나 펩티드를 안정적으로 유지할 수 있다.

상기 젤리 형태 제제의 두께로는 특별히 한정되지 않지만, 30 내지 5000㎛인 것이 바람직하다. 30㎛ 미만이면, 시트 강도 및 제품의 취급성의 관점에서 문제가 될 가능성이 있고, 5000㎛를 초과하면, 구강 내, 특히 설하에 대해 투여했을 경우, 위화감을 느낄 우려가 있다.

또한, 상기 젤리 형태 제제의 크기로는 특별히 한정되지 않지만, 평면 면적이 0.5 내지 6.0cm²의 범위 내에 있는 것이 바람직하다. 0.5cm² 미만이면, 젤리 형태 제제를 집어서 투여할 때에 취급이 어려워질 우려가 있고, 6.0cm²를 초과하면, 구강 내, 특히 설하에 완전히 집어넣을 수 없을 우려가 있다.

또한, 상기 젤리 형태 제제의 평면 형상은 특별히 한정되지 않으며, 예를 들면 직사각형, 정사각형 등의 사각형, 5각형 등의 다각형, 원형, 타원형 등, 임의의 형상을 들 수 있다. 여기서 말하는 다각형은, 완전한 다각형 외에, 약간 각부에 R을 갖는 형상도 포함한다.

상기 젤리 형태 제제는, 겔화제로서의 젤라틴을 함유하는 것이다.

상기 젤라틴은, 상기 젤리 형태 제제의 기재를 구성하는 재료이며, 필름 형상 형성 능력 및 가식성을 갖는 것이다.

이러한 젤라틴을 포함함으로써, 상기 젤리 형태 제제는, 상온에서는 겔화하고, 구강 내의 체온 정도의 온도에서 용이하게 용해시킬 수 있다. 또한, 젤라틴은, 열 가역성 겔화제 중에서는 가장 저온에서 겔화를 일으키는 것이 가능해서, 상온 내지 40℃ 부근의 온도에서 제제를 제조할 수 있기 때문에, 열 안정성이 낮은 약품의 제조시의 안정성을 확보할 수 있다.

또한, 본 명세서에서 "가식성"이란, 경구적으로 투여 가능하고, 제제학적으로 허용되는 것임을 의미한다.

상기 젤라틴으로는, 상온의 물에 용해 가능한 수용성 젤라틴이라고 불리는 그레이드의 것이 바람직하다. 상기 수용성 젤라틴을 이용함으로써, 상온 부근에서의 젤리 형태 제제의 제조를 가능하게 하여, 후술하는 약품의 제조시의 안정성을 확보할 수 있다.

또한, 본 명세서에 말하는 "수용성 젤라틴"이란, 1g의 젤라틴이 20mL의 상온(30℃)의 물에 용해하는 젤라틴을 가리킨다.

또한, 상기 젤라틴은, 10중량％ 농도의 수용액으로 했을 때에 32℃에서 겔화하지 않고, 5℃ 부근에서는 겔화하는 특성을 갖는 것이 바람직하다. 이러한 특성을 갖는 젤라틴인 경우, 상기 수용성 젤라틴이 아니더라도, 분자량 및 젤라틴 중의 히드록시프롤린 함유량에 따라서는, 본 발명의 효과를 충분히 발휘하는 그레이드도 존재하기 때문이다.

상기 젤리 형태 제제에서 사용되는 젤라틴으로는, 동물의 가죽이나 뼈에 포함되는 단백질을 효소에 의해 분해 추출한 것을 들 수 있으며, 예를 들면 돼지, 소 및 물고기 유래의 것을 산 처리 또는 알칼리 처리한 것은 어느 것이든 사용할 수 있다.

그 중에서도, 상기 젤라틴으로는, 제조시에 상온에서 조제 가능하여, 열에 약한 약품의 제조시의 안정성의 관점에서, 물고기 또는 돼지 유래의 젤라틴이 바람직하다.

이와 같은 관점에서, 상기 젤라틴은, 평균 분자량이 9만을 초과하는 것이면, 아미노산 조성 중의 히드록시프롤린량이 5.2 내지 9.2몰％인 것이면 된다. 이러한 젤라틴으로는, 예를 들면 연어 유래 젤라틴(아미노산 조성 중의 히드록시프롤린량:5.4몰％), 잉어 유래 젤라틴(아미노산 조성 중의 히드록시프롤린량:7.6몰％), 틸라피아 유래 젤라틴(아미노산 조성 중의 히드록시프롤린량:8.0몰％) 등의 물고기 유래의 젤라틴을 들 수 있으며, 그 중에서도, 틸라피아 유래 젤라틴이 특히 바람직하다.

여기서, 상기 아미노산 조성은, 젤라틴을 가수분해한 후에 이온 교환 크로마토그래프법에 의해 분리하여, 닌히드린에 의해 검출하는 분석에 의해 얻어진다.

또한, 상기 방법에 의해 얻어지는 아미노산 조성 중의 히드록시프롤린량(몰％)의 구체예로는, 예를 들면 이하와 같다.

닭: 10.8％

타조: 10.4％

마우스: 8.7％

돼지: 9.4％

소: 9.5％

또한, 상기 젤라틴으로는, 평균 분자량이 5만 내지 9만인 것이면, 아미노산 조성 중의 히드록시프롤린량에 상관없이 바람직한 것이다.

여기서, 본 명세서에서 "평균 분자량"이란, 중량 평균 분자량을 의미하며, 겔 여과 크로마토그래프 분석에 의해 측정된다.

또한, 여기서 말하는 평균 분자량은, 젤라틴의 폴리펩티드쇄 3량체의 분자량이 아니라, 각각의 폴리펩티드쇄 단량체의 분자량을 의미한다.

상기 젤리 형태 제제에 있어서, 상기 젤라틴의 함유량은, 그 젤리 형태 제제의 전체 중량에 기초하여 바람직하게는 2 내지 40중량％, 보다 바람직하게는 3 내지 30중량％이다. 2중량％ 미만이면, 상온에서는 겔화하지 않을 가능성이 있고, 한편, 40중량％를 초과하면, 상기 젤리 형태 제제의 구강 내에서의 용해성이 매우 느려져, 사용상 문제가 될 우려가 있다.

상기 젤리 형태 제제는, 상기 가식성 고분자인 젤라틴 외에, 본 발명의 효과를 저해하지 않는 범위라면, 물에만 가용인 가식성 고분자 또는 물이나 유기 용매에도 용해하지 않는 가식성 고분자(이하, 이것들을 통합해서 기타 가식성 고분자라고도 함)를 적량 조합해서 이용할 수도 있다.

상기 기타 가식성 고분자의 배합량은, 상기 젤리 형태 제제의 전체 중량 기준으로 바람직하게는 0.1 내지 10중량％이다.

또한, 상기 젤리 형태 제제는 물을 함유한다.

상기 물은, 상기 젤리 형태 제제의 용해를 보조하는 작용을 갖는 재료다.

또한, 상기 젤리 형태 제제 내의 수분 함유량을 제어함으로써, 젤리 형태 제제의 용해 시간을 용이하게 제어할 수 있다. 따라서, 상기 젤리 형태 제제는, 구강 내에서 용해시켜 복용하는 경우에도, 구강 내, 특히 설하에서 천천히 용해시켜 약물을 서방시키는 경우에도 모두 알맞은 것이다.

본 발명에서는, 젤리 형태 제제의 전체 중량에 기초하여, 물의 함유량은 바람직하게는 1 내지 60중량％, 보다 바람직하게는 5 내지 50중량％이다. 1중량％ 미만이면, 구강 내에서의 용해성이 매우 나빠져 사용상 문제가 될 가능성이 있고, 한편, 60중량％를 초과하면, 상온에서의 물성면의 보관 안정성이 나빠질 우려가 있다.

또한, 상기 젤리 형태 제제는, 물성 및 용해성을 향상시키는 첨가제, 예를 들면, 당, 당 알코올 및 당 지방산으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1종을 더 포함하는 것이 바람직하다.

상기 당으로는, 예를 들면 이하에 나타내는 단당, 2당, 3 내지 6당을 들 수 있다.

단당류로는, 예를 들면 에리트로오스, 트레오스 등의 알도테트로오스, 리보오스, 릭소오스, 자일로오스, 아라비노오스 등의 알도펜토오스, 알로오스, 탈로오스, 글로오스, 글루코오스, 알트로오스, 만노스, 갈락토오스, 이도오스 등의 알도헥소오스, 에리트룰로오스 등의 케토테트로오스, 자일룰로오스, 리불로오스 등의 케토펜토오오스, 프시코오스, 프룩토오스, 소르보오스, 타가토오스 등의 케토헥소오스 등을 들 수 있다. 이당류로는, 예를 들면 트레할로오스, 코지비오스, 니게로오스, 말토오스, 이소말토오스 등의 α-디글루코시드, 이소트레할로오스, 소포로오스, 라미나리비오스, 셀로비오스, 겐티오비오스당의 β-디글루코시드, 네오트레할로오스 등의 α,β-디글루코시드 외에, 락토오스, 수크로오스, 이소말툴로오스(파라티노오스) 등을 들 수 있다. 3당류로는, 예를 들면 라피노오스 등을 들 수 있다. 3당 내지 6당의 올리고당으로는, 예를 들면 프룩토올리고당, 갈락토올리고당, 자일로올리고당, 이소말토올리고당, 키틴 올리고당, 키토산 올리고당, 올리고글루코사민, 덱스트린, 시클로덱스트린 등의 환형상 올리고당 등을 들 수 있다.

또한, 단당의 알코올로는, 예를 들면 에리트리톨, D-트레이톨, L-트레이톨 등의 테트리톨, D-아라비니톨, 자일리톨 등의 펜티톨, D-이디톨, 갈락티톨(둘시톨), D-글루시톨(소르비톨), 만니톨 등의 헥시톨, 이노시톨 등의 시클리톨 등을 들 수 있다. 또한, 2당의 알코올로는, 예를 들면 말티톨, 락티톨, 환원 팔라티노오스(이소말트) 등을 들 수 있고, 올리고당의 알코올로는, 펜타에리트리톨, 환원 맥아당 시럽 등을 들 수 있다.

상기 젤리 형태 제제에 있어서, 상기 당 또는 당 알코올은 치환되어 있어도 좋고, 또한, 1종으로 또는 2종 이상 혼합해서 이용할 수도 있다.

상기 당 또는 당 알코올은, 상기 젤리 형태 제제가 구강 내에서 용이하게 용해하는 관점, 또한 제조 공정에서 크게 용액의 점성을 변화시키지 않는다는 관점에서, 단당류 내지 3당류 또는 이것들의 당 알코올인 것이 바람직하다.

또한, 상기 당 지방산으로는, 예를 들면 소르비탄 지방산 에스테르, 자당 지방산 에스테르 등을 들 수 있다.

상기 소르비탄 지방산 에스테르로는, 예를 들면 모노올레인산 소르비탄, 트리올레인산 소르비탄, 세스퀴올레인산 소르비탄, 야자유 지방산 소르비탄, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르 등을 들 수 있다.

또한, 상기 자당 지방산 에스테르로는, 예를 들면 자당 스테아린산 에스테르, 자당 올레인산 에스테르, 자당 팔미트산 에스테르, 자당 미리스트산 에스테르, 자당 베헤닌산 에스테르, 자당 에루카산 에스테르, 자당 혼합 지방산 에스테르 등을 들 수 있다.

이들 당 지방산은, 단백질이나 펩티드의 안정화제로서의 효과 이외에, 소포제로서도 기능하기 때문에, 매우 유용하다.

또한, 상기 젤리 형태 제제의 물성을 향상시키는 첨가제로서, 폴리에틸렌글리콜 또는 그 유도체, 셀룰로오스를 더 함유하는 것이 바람직하다.

상기 폴리에틸렌글리콜로는, 그 평균 분자량이 200 내지 2만인 것이 바람직하고, 평균 분자량이 400 내지 8000인 것이 보다 바람직하다. 평균 분자량이 200 미만이면, 가소성이 높고, 사용상 필요한 충분한 물성을 얻을 수 없을 가능성이 있으며, 평균 분자량이 2만을 초과하면, 용해시의 점성이 높아져, 구강 내에서 위화감을 느끼게 할 가능성이 있다. 또한, 여기서 말하는 평균 분자량은, 제15개정 일본약국방 각 조 매크로골 400에 기재되어 있는 평균 분자량 시험에 의해 구해진다.

상기 셀룰로오스로는, 결정 셀룰로오스, 분말 셀룰로오스가 바람직하고, 결정 셀룰로오스가 보다 바람직하다.

이러한 셀룰로오스는, 평균 입자 직경이 0.01 내지 100㎛인 것이 바람직하고, 0.01 내지 50㎛인 것이 보다 바람직하다. 평균 입자 직경이 0.01㎛ 미만이면, 조제 중의 용액 중에서 응집하기 쉬워져, 오히려 물성을 손상시킬 우려가 있다. 평균 입자 직경이 100㎛를 초과하면, 조제 중의 용액 중에서 침강하기 쉬워질 우려가 있고, 또한, 구강 내 투여시에 잔사감이 남아 위화감을 느끼게 할 가능성이 있다. 여기서 말하는 평균 입자 직경은, 레이저 산란식 입도 분포 측정 장치로 구한 50％ 평균 입자 직경을 의미한다.

상기 젤리 형태 제제에 있어서, 상술한 첨가제의 양은, 상기 젤리 형태 제제의 전체 중량에 기초하여 바람직하게는 1 내지 80중량％, 보다 바람직하게는 5 내지 70중량％이다. 1중량％ 미만이면, 사용상 충분한 물성을 담보할 수 없을 가능성이 있고, 한편, 80중량％를 초과하면, 첨가한 첨가제에 의해 젤리 형태 제제의 물성의 제어가 곤란해질 우려가 있다.

또한, 상기 젤리 형태 제제는, 기재를 구성하는 성분으로서 상술한 재료 이외에, 희망에 따라 향료, 교미제, 감미제, 착색제, 방부제, 항산화제, 다른 안정화제, 계면 활성제 등을 적절히 사용해도 좋다. 이들 재료로는 특별히 한정되지 않고, 종래 공지된 것을 사용할 수 있다.

상기 젤리 형태 제제는, 상술한 바와 같이, 젤라틴을 포함하는 것이기 때문에, 상온에서는 겔화하고, 구강 내의 체온 정도의 온도에서 용이하게 용해시킬 수 있으며, 또한, 젤라틴과 특정한 첨가제를 함유함으로써, 유의하게 사용상의 물성을 향상시키는 것이 가능하다. 또한, 알레르겐 단백질을, 특히 삼목 꽃가루 알레르겐 단백질을 안정적으로 유지할 수 있다.

또한, 상기 젤리 형태 제제는, 그 수분 함유량을 제어함으로써 그 용해 시간을 용이하게 제어할 수 있기 때문에, 감작 시간의 제어가 필요한 구강 내, 특히 설하 감감작 요법에 적합하다.

상기 젤리 형태 제제는, 물론 그대로의 상태로 삼켜도 좋고, 구강 내에서 바로 용해시켜 삼켜도 좋다. 또한, 구강 내에서의 용해 시간을 제어하여, 구강 점막이나 설하 점막으로부터의 흡수를 기대하는 것도 가능하다. 체온 정도의 온도에서 모두 용해시킬 수 있기 때문에, 잔사감이 없다는 관점, 또한, 그 형태가 시트 형태이며, 그 표면적이 정제 등에 비해 커서, 환자 및 간호자도 손가락으로 집기 쉽다는 관점에서, 환자 및 간호자의 QOL을 크게 향상시킬 수 있다.

상술한 젤리 형태 제제는, 예를 들면 물, 젤라틴, 유기산염 및/또는 무기산염, 및 알레르겐을 혼합해서 혼합 용액을 조제하는 공정과, 상기 혼합 용액을 이용해서 박막을 형성하는 공정을 갖고, 상기 혼합 용액을 조제하는 공정에서 첨가 수분량을 조절하거나, 또는 상기 박막을 형성하는 공정 후에, 상기 박막을 건조시켜서, 얻어지는 의약 조성물에 함유되는 물의 양을 조절하는 방법에 의해 제조할 수 있다.

상기 혼합 용액을 조제하는 공정에서는, 예를 들면, 우선 소정량의 물에 젤라틴, 유기산염 및/또는 무기산염을, 또한, 필요에 따라서 기타 첨가제를 상온 또는 가열에 의해 용해시키고, 또한, 용해하지 않는 첨가제에 관해서는 균일하게 분산시킨다. 상기 알레르겐이 열에 안정한 경우, 그 알레르겐은, 상기 젤라틴 등과 더불어서 첨가하여 혼합 용액을 조제한다. 한편, 열에 불안정한 알레르겐인 경우에는, 상기 젤라틴 등을 용해시켜서 젤라틴 용액을 조제한 후, 그 젤라틴 용액을 상온 내지 35℃ 부근까지 식힌 후에 알레르겐을 첨가하고, 교반 혼합해서 혼합 용액을 조제한다. 또한, 상기 알레르겐은, 후술하는 혼합 용액을 분주(分注) 또는 전연(展延)할 때에 첨가해도 좋다.

또한, 상기 혼합 용액의 조제시에 거품이 발생한 경우에는, 하룻밤 방치나 진공 또는 감압 탈포를 행하면 좋다.

또한, 상기 박막을 형성하는 공정에서는, 예를 들면 상기 혼합 용액의 소정량을 28 내지 32℃의 온도하에서 희망하는 크기의 플라스틱제 블리스터 케이스 내에 분주하고, 분주 후 바로 냉각 고착화시켜서 박막을 형성한다. 해당 분주 방식 대신에, 상기 혼합 용액을 박리 필름 상에 적당량 전연하여, 냉각 고화함으로써 박막을 형성해서, 희망하는 크기로 재단해도 좋다.

본 공정에서 형성하는 박막은, 상술한 젤리 형태 제제와 동등한 크기를 갖는 것이 바람직하다.

상기 젤리 형태 제제의 제조 방법에서는, 상기 혼합 용액을 조제하는 공정에서 첨가 수분량을 조절하거나, 또는, 상기 박막을 형성하는 공정 후에, 상기 박막을 건조시켜서, 얻어지는 젤리 형태 제제에 함유되는 물의 양을 조절한다.

즉, 상기 물의 양의 조절을, 혼합 용액을 조제하는 공정에서 첨가 수분량을 조절함으로써 행하는 경우, 상기 박막을 형성함으로써 본 발명의 젤리 형태 제제를 제조할 수 있다.

한편, 상기 물의 양의 조절을, 상기 박막을 형성하는 공정 후에, 상기 박막을 건조시켜서 행하는 경우, 상기 박막을 건조시킴으로써 상기 젤리 형태 제제를 제조할 수 있다.

상기 박막을 건조시키는 방법으로는, 예를 들면 냉풍 건조 공정 또는 냉각 감압 건조 공정을 행하는 방법을 들 수 있다.

상기 젤리 형태 제제의 제조 방법은, 알레르겐의 열 안정성의 향상을 도모할 수 있는 유기산염 및/또는 무기산염, 또는 pH 조절제를 사용하기 때문에, 제조 과정에서의 알레르겐의 불활성화 손실을 방지할 수 있고, 특히 열 안정성이 낮은 알레르겐 단백질이라도, 고온(상온 내지 40℃)에서 조제 가능하다는 점이 매우 유용하다.

또한, 얻어진 의약 조성물은, 필요에 따라 밀봉 포장하여 제품으로 하는 것이 바람직하다.

또한, 본 발명의 의약 조성물은, 물을 포함하지 않는 것도 바람직하다.

본 발명의 의약 조성물이 물을 포함하지 않음으로써, 예를 들면, 의약 조성물을 이용해서 이루어지는 일반적인 젤리 형태 제제에서는 필요한 멸균 공정이나 방부제의 첨가가 불필요하게 되어, 제조 비용면에서의 이점이 있으며, 또한, 수분 제한이 필요한 환자를 위한 영양 보조식에 적용하는 경우에도 적합하다.

또한, 본 명세서에서 "물을 포함하지 않는다"란, 실질적으로 물을 포함하지 않는 경우를 포함하며, 예를 들면, 본 발명의 의약 조성물의 전체 중량 기준으로 물의 함유량이 5중량％ 이하, 바람직하게는 2.5중량％ 이하, 보다 바람직하게는 1중량％ 이하인 것을 의미한다.

본 발명의 의약 조성물이 물을 포함하지 않는 경우, 본 발명의 의약 조성물은, 상기 젤라틴을 함유하고 케이크라고 불리는 다공성 고형이며, 동결 건조법에 의해, 알레르겐을 함유하는 수용액의 용매인 수분을 승화시킴으로써 형성되는 동결 건조 제제인 것이 바람직하다.

본 발명의 의약 조성물인 동결 건조 제제는, 상온 내지 60℃ 정도에서는 물리적으로 안정적이다.

또한, 주 기재가 젤라틴이기 때문에, 본 발명의 의약 조성물은, 구강 내의 체온 정도의 온도와 수분량으로 용이하게 용해시킬 수 있고, 특정의 첨가제를 함유함으로써 유의하게 사용상의 물성을 향상시키는 것이 가능하다.

또한, 알레르겐 단백질을, 특히 삼목 꽃가루 알레르겐 단백질을 안정적으로 유지할 수 있다.

본 발명의 의약 조성물은, 물론 그대로의 상태로 삼켜도 좋고, 구강 내에서 바로 용해시켜 삼켜도 좋다. 또한, 구강 내에서의 용해 시간을 제어하여, 구강 점막이나 설하 점막으로부터의 흡수를 기대하는 것도 가능하다.

또한, 본 발명의 의약 조성물은, 체온 정도의 온도로 모두 용해시킬 수 있기 때문에, 잔사감이 없다는 관점, 또한, 물리적으로 안정적이어서, 환자 및 간호자도 손가락으로 잡기 쉽다는 관점에서, 환자 및 간호자의 QOL을 크게 향상시킬 수 있다.

본 발명의 의약 조성물의 물리적 강도에 대해서는 특별히 한정되지 않지만, 예를 들면 포장, 저장, 수송 및 환자에 의한 제제의 취급시에, 균열?깨짐 등 물리적인 붕괴가 나타나지 않을 정도가 바람직하다. 또한, 손으로 집었을 경우, 체온 정도의 접촉으로는 제제의 용해, 성상 악화가 일체 나타나지 않는다.

또한, 본 발명의 의약 조성물을 이용해서 얻어지는 제제는, 물리적 안정성을 갖는 한편, 수분의 공존하에서는 신속하게 붕괴되고, 예를 들면 입 안에서 타액과의 접촉시에 신속하게 붕괴될 것이 필요하다. 바람직하게는 90초 이내, 보다 바람직하게는 60초 이내에 구강 내에서 붕괴되는 것이다.

또한, 본 발명의 의약 조성물의 크기로는 특별히 한정되지 않지만, 평면 면적이 0.5 내지 6.0cm²의 범위 내에 있는 것이 바람직하다. 0.5cm² 미만이면, 본 발명의 의약 조성물을 이용해서 얻어진 제제를 집어서 투여할 때에 취급이 어려워질 우려가 있고, 6.0cm²를 초과하면 구강 내, 특히 설하에 완전하게 집어넣을 수 없을 우려가 있다.

상술한 본 발명의 의약 조성물은, 예를 들면 알레르겐과, 유기산염, 무기산염 및 pH 조절제로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1종을 물에 용해시켜서 알레르겐 함유 수용액을 얻는 공정, 및 상기 알레르겐 함유 수용액을 동결 건조시키는 공정을 포함하는 방법에 의해 제조할 수 있다.

이러한 본 발명의 의약 조성물의 제조 방법도 또한, 본 발명의 하나다.

본 발명의 의약 조성물의 제조 방법은, 알레르겐 함유 수용액을 조제하는 공정을 갖는다.

본 공정에서는, 예를 들면, 우선 소정량의 물에, 유기산염, 무기산염 및 pH 조절제로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1종을, 또한, 필요에 따라서 그 밖의 첨가제를 상온 또는 가열에 의해 용해시키고, 또한, 용해하지 않는 첨가제에 관해서는 균일하게 분산시킨다. 상기 알레르겐이 열에 안정적인 것인 경우, 그 알레르겐은, 상기 유기산염 등과 더불어서 첨가하여 알레르겐 함유 수용액을 조제한다. 한편, 열에 불안정한 알레르겐인 경우에는, 상기 유기산염 등을 용해시킨 용액을 조제한 후, 그 용액을 상온 내지 35℃ 부근까지 식힌 후에 알레르겐을 첨가하고, 교반 혼합해서 알레르겐 함유 수용액을 조제한다. 또한, 상기 알레르겐은, 후술하는 알레르겐 함유 수용액을 분주 또는 전연할 때에 첨가해도 좋다.

또한, 상기 알레르겐 함유 수용액의 조제시에 거품이 발생한 경우에는, 하룻밤 방치나 진공 또는 감압 탈포를 행하면 좋다.

상기 알레르겐 함유 수용액을 조제하는 공정에서, 그 알레르겐 함유 수용액에, 젤라틴을 더 용해시키는 것이 바람직하다. 상기 알레르겐 함유 수용액에 젤라틴을 용해시킴으로써, 상술한 젤라틴 제제를 제조할 수 있다.

또한, 상기 알레르겐 함유 수용액을 얻는 공정에서 얻어진 알레르겐 함유 수용액은, pH가 5.5 내지 8.5의 범위 내가 되도록 하는 것이 바람직하다. 또한, 상기 알레르겐 수용액이 상기 유기산염 및/또는 무기산염을 함유하는 경우, pH가 5.0 내지 9.0인 것이 바람직하다.

상기 알레르겐 함유 수용액의 pH가 상기 범위 내에 있음으로써, 알레르겐의 물리화학적 안정성이 현저하게 감소하는 것을 방지하여, 안전성을 확보할 수 있다.

상기 알레르겐 함유 수용액의 pH를 상기 범위로 조정하는 방법으로는, 상술한 pH 조절제의 첨가량을 조정하는 방법을 들 수 있다.

또한, 상기 알레르겐 함유 수용액을 동결 건조시키는 공정에서는, 예를 들면, 상기 알레르겐 함유 수용액의 소정량을, 28℃ 내지 35℃의 온도하에서 희망하는 크기의 동결 건조용 블리스터 내에 분주하고, 분주 후 바로 동결 건조시키는 것이 바람직하다.

또한, 얻어진 의약 조성물은, 필요에 따라 밀봉 포장하여 제품으로 하는 것이 바람직하다.

상기의 방법으로 얻어진 본 발명의 의약 조성물은, 상술한 바와 같이 동결 건조 제제이며, 경구 고형 제제로서 적절하지만, 동결 건조 후의 사용 적성, 주사용수에 대한 용해성이 양호하고, 또한, 장기간에 걸쳐 알레르겐의 안정성을 지속할 수 있으므로, 주사제로서 혹은 경점막 투여(경비, 경구, 설하)되는 제제로서 이용하는 것도 가능하다.

이하의 실시예에 의해 본 발명을 구체적으로 설명하지만, 본 발명은 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.

(실험예 1 내지 4)

860 중량부의 정제수에, 수용성 젤라틴(물고기)(CSF, 니피사제) 10 중량부를 가하여, 30 내지 40℃의 온도에서 용해시켰다. 용해 후에는 실온으로 냉각시켜 겔화하지 않았음을 확인했다. 별도 20 중량부의 정제수에 삼목 꽃가루 추출물 건조 분말(LSL사제) 0.1 중량부를 가하여 실온에서 용해시켰다. 그리고 앞의 젤라틴 용액에 전량 가해서 신속하게 혼합하고, 다시 겔화하지 않았음을 확인했다.

pH 조절제(수산화나트륨)를 이용하여 표 1에 나타낸 pH로 조정하고, 정제수를 더 가해서 전량을 1000 중량부로 하여 알레르겐 함유 젤라틴 수용액을 얻었다. 얻어진 알레르겐 함유 젤라틴 수용액을 35℃의 쉐이커에 세팅해서 교반을 행하고, 30분 경과 후와 60분 경과 후의 알레르겐 활성을 이하의 방법으로 측정했다.

계속해서, 알레르겐 함유 젤라틴 수용액을 실온으로 되돌리고, 겔화하지 않았음을 확인한 후, 신속하게 동결 건조용 바이알에 1.0g씩 분주해서 동결 건조시켜, 의약 함유 조성물을 얻었다. 얻어진 의약 함유 조성물의 보관 안정성 시험으로서, 40±2℃에서 14일간 보관하고, 7일 경과 후와 14일 경과 후의 알레르겐 활성을 이하의 방법으로 측정했다. 결과를 표 2에 나타냈다.

(실험예 5 내지 12)

실험예 1 내지 4와 마찬가지의 수순으로 동결 건조시킨 의약 함유 조성물을 얻었다. 또한, 실험예 5 내지 8에서는 돼지뼈 젤라틴(AEP, 니피사제), 실험예 9 내지 12에서는 알칼리 처리 소 젤라틴(AD4, 니피사제)을 이용했다. pH는 각각 적절한 pH 조절제를 이용하여 표 1에 나타낸 값으로 조정했다. 또한, 실험예 1 내지 4와 마찬가지로 알레르겐 함유 젤라틴 수용액 및 보관 안정성 시험 후의 알레르겐 활성을 측정했다.

(비교 실험예 1 내지 6)

실험예 1 내지 4와 마찬가지의 수순으로 동결 건조시킨 의약 함유 조성물을 얻었다. 또한, 비교 실험예 1 내지 2에서는 수용성 젤라틴(물고기)(CSF, 니피사제), 비교 실험예 3 내지 4에서는 돼지뼈 젤라틴(AEP, 니피사제), 비교 실험예 5 내지 6에서는 알칼리 처리 소 젤라틴(AD4, 니피사제)을 이용했다. pH는 각각 적절한 pH 조절제를 이용하여 표 1에 나타낸 값으로 조정했다. 또한, 실험예 1 내지 4와 마찬가지로 알레르겐 함유 젤라틴 수용액 및 보관 안정성 시험 후의 알레르겐 활성을 측정했다.

(알레르겐 활성 평가 방법)

삼목 꽃가루 항원 ELISA "Cryj1"(생화학 바이오 비즈니스사제)을 이용하여, 삼목 꽃가루의 주요 알레르겐의 하나인 Cryj1의 알레르겐 활성을 측정했다. 해당 측정 키트는 일본 삼목(Cryptomeria japonica) 꽃가루 항원의 하나인 Cryj1에 특이적인 모노클로날 항체(013, 053)를 이용한 샌드위치 ELISA법을 원리로 하고 있으며, Cryj1을 특이적으로 측정하는 것이 가능하다.

키트 부속의 반응 완충액 100μL에 표준 용액 또는 샘플 20μL를 첨가하고, 상온에서 60분간 일시 반응을 행한 후, HRP 표지 항체 용액 100μL를 가해서 60분간 2차 반응을 행하였다. 여기에 효소 기질 용액 100μL를 가하여, 상온 차광하에서 30분간 반응을 행하고, 마지막으로 반응 정지 용액 100μL를 가했다. 그 후, 450nm의 자외 흡수 강도를 측정했다. 각 Cryj1 농도의 표준 용액에서의 흡수 강도를 바탕으로 검량선을 구하고, 이에 따라 각 샘플의 Cryj1 알레르겐 활성(ng/mL)을 측정했다.

보관 안정성 시험의 샘플링 후(7일 경과 후, 14일 경과 후), 및 제조 직후(30분 경과 후, 60분 경과 후)의 Cryj1 알레르겐 활성％를 구했다. 해당 Cryj1 알레르겐 활성％를 하기와 같이 스코어화함으로써 평가를 행하였다.

5: 90％ 이상, 105％ 미만

4: 75％ 이상, 90％ 미만

3: 60％ 이상, 75％ 미만

2: 45％ 이상, 60％ 미만

1: 30％ 이상, 45％ 미만

0: 30％ 미만

표 2에 나타낸 바와 같이, 삼목 꽃가루 알레르겐의 최적 pH 영역으로서 5.0 내지 9.0, 보다 바람직하게는 6.0 내지 8.0인 것이 나타났다.

또한, pH가 4.0 이하, 또는 10.0 이상인 경우, 신속하게 삼목 꽃가루 알레르겐이 실활됨이 시사되었다. 또한, 어느 샘플 용액이든 동결 건조 제제화한 경우, 40℃, 14일간 보관에서는 현저한 알레르겐 함량의 감소가 나타나지 않았다.

(실험예 13)

860 중량부의 정제수에, 수용성 젤라틴(물고기)(CSF, 니피사제) 10 중량부를 가하여, 30 내지 40℃의 온도에서 용해시켰다. 용해 후에는 실온으로 되돌리고, 겔화하지 않았음을 확인했다. 별도 20 중량부의 정제수에 삼목 꽃가루 추출물 건조 분말(LSL사제) 0.1 중량부를 가하여 실온에서 용해시켰다. 그리고, 앞선 젤라틴 용액에 전량 가해서 신속하게 혼합하고, 다시 겔화하지 않았음을 확인했다. pH 조절제(수산화나트륨)를 이용하여 pH=7.0으로 조정하고, 정제수를 더 가해서 전량을 1000 중량부로 했다. 그 후, 신속하게 동결 건조용 바이알에 1.0g씩 분주하여, 동결 건조해서 의약 함유 조성물을 얻었다. 얻어진 의약 함유 조성물을 40±2℃에서 보관하고, 7일 경과 후, 14일 경과 후, 30일 경과 후 및 120일 경과 후의 알레르겐 활성을 상술한 방법으로 측정했다. 그 결과를 표 4에 나타냈다.

(실험예 14 내지 20)

실험예 13과 마찬가지의 수순으로 의약 함유 조성물을 얻었다. 또한 실험예 14에서는 물고기 젤라틴(FGS-230, 니피사제), 실험예 15에서는 수용성 젤라틴(돼지)(CS, 니피사제), 실험예 16에서는, 산 처리 돼지 젤라틴(AP-200F, 니피사제), 실험예 17에서는 알칼리 처리 돼지 젤라틴(BP-200F, 니피사제), 실험예 18에서는 돼지뼈 젤라틴(AEP, 니피사제), 실험예 19에서는 소 젤라틴(CP-1045, 젤라이스사제), 실험예 20에서는 알칼리 처리 소 젤라틴(AD4, 니피사제)을 이용했다.

표 4에 나타낸 바와 같이, 의약 함유 조성물의 기재로서 젤라틴을 이용한 실험예에 관한 의약 함유 조성물은, 알레르겐의 활성 저하가 그다지 나타나지 않았다. 또한, 어느 젤라틴을 이용해도 삼목 꽃가루 알레르겐을 안정화할 수 있음이 나타났다. 또한, 유기산염을 포함하지 않기 때문에, 장기간(120일) 경과하면 약간 알레르겐의 활성이 저하했다.

(실험예 21)

960 중량부의 정제수에, 락트산칼슘(락트산칼슘 수화물(과립), 다이헤이화학산업사제) 10 중량부를 가하여 실온에서 용해시켰다. 별도 20 중량부의 정제수에 삼목 꽃가루 추출물 건조 분말(LSL사제) 0.1 중량부를 가하여 실온에서 용해시켰다. 그리고, 앞선 용액에 전량을 가해서 신속하게 혼합하여 의약 함유 수용액을 얻었다. 얻어진 의약 함유 수용액의 pH를 측정했다. 그리고, 해당 의약 함유 수용액을 동결 건조용 바이알에 1.0g씩 분주해서 동결 건조하여 의약 함유 조성물을 얻었다. 얻어진 의약 함유 조성물을 40±2℃에서 보관하고, 7일 경과 후 및 14일 경과 후의 알레르겐 활성을 측정했다. 결과를 표 6에 나타냈다.

(실험예 22 내지 31, 비교 실험예 7, 8)

표 5에 나타낸 바와 같이, 실험예 21과 마찬가지의 수순으로 의약 함유 조성물을 얻었다. 첨가제는, 각각 글리시르리진산 2칼륨(와코쥰야쿠공업사제), 시트르산나트륨(와코쥰야쿠공업사제), 말산나트륨(DL-말산 2나트륨 n수화물, 와코쥰야쿠공업사제), 글루콘산칼슘(와코쥰야쿠공업사제), 숙신산 2나트륨(와코쥰야쿠공업사제), 타르타르산나트륨칼륨(타르타르산나트륨칼륨 4수화물, 와코쥰야쿠공업사제), 타르타르산나트륨(L-타르타르산나트륨, 와코쥰야쿠공업사제), L-아스코르브산나트륨(와코쥰야쿠공업사제), 글루콘산나트륨(후소화학공업사제), L-아스파르트산나트륨(교와발효 바이오사제), 타르타르산수소칼륨(L-타르타르산수소칼륨, 고마츠야사제), 푸마르산 1나트륨(모노푸마르, 니혼쇼쿠바이사제)을 이용했다.

표 6에 나타낸 바와 같이, pH=5.0 내지 9.0(1중량％ 농도의 의약 함유 수용액)을 나타내는 유기산염이, 높은 알레르겐 안정성을 나타냄을 알았다. 그 중에서도 락트산칼슘, 글리시르리진산 2칼륨, 시트르산나트륨, 글루콘산칼슘, 글루콘산나트륨 및 L-아스파르트산나트륨이 높은 알레르겐 안정성을 나타냄을 발견했다.

또한, 삼목 꽃가루 알레르겐의 가장 바람직한 pH 영역은 6 내지 8이지만, 높은 안정성을 나타낸 유기산염이 반드시 최적 pH 영역이 아닌 것이나, 거의 동일한 pH임에도 불구하고 안정성이 상이한 것이 있음을 알았다.

이상의 점에서, 유기산염의 알레르겐 안정화 효과는 반드시 수용액의 pH에 의존하는 것은 아님이 시사되었다.

(실시예 1)

850 중량부의 정제수에, 수용성 젤라틴(물고기)(CSF, 니피사제) 10 중량부 및 락트산칼슘(락트산칼슘 수화물(과립), 다이헤이화학산업사제) 5 중량부를 가하고, 30 내지 40℃의 온도에서 용해시켜 젤라틴 용액을 얻었다. 용해 후에는 실온으로 되돌리고, 겔화하지 않았음을 확인했다. 별도 20 중량부의 정제수에 삼목 꽃가루 추출물 건조 분말(LSL사제) 0.1 중량부를 가해서 실온에서 용해시켰다. 그리고 앞선 젤라틴 용액에 전량 가해서 신속하게 혼합하고, 다시 겔화하지 않았음을 확인했다. pH 조절제(수산화나트륨)를 이용하여 pH=7.0으로 조정하고, 정제수를 더 가해서 전량을 1000 중량부로 하여 알레르겐 함유 젤라틴 수용액을 얻었다. 그 후, 신속하게 동결 건조용 바이알에 1.0g씩 분주해서 동결 건조하여 의약 조성물을 얻었다. 얻어진 의약 조성물을 집어서 사용상의 적성을 평가했다.

다음으로, 5℃, 25℃ 혹은 30℃의 정제수를 5.0g 가하여, 의약 조성물이 용해하는 모습을 실온에서 관찰하고, 이하의 기준으로 평가했다. 또한 별도로, 의약 조성물을 40±2℃에서 보관하고, 30일 경과 후, 60일 경과 후, 90일 경과 후 및 120일 경과 후의 알레르겐 활성을 측정했다. 결과를 표 8, 9에 나타냈다.

◎: 30초 이내에 완전하게 용해함

○: 30초 내지 1분 정도로 완전하게 용해함

△: 완전하게 용해할 때까지 1분 이상을 필요로 함

(실시예 2 내지 11)

표 7에 나타낸 바와 같이, 실시예 1과 마찬가지의 수순으로 의약 조성물을 얻었다. 유기산염은, 각각 글리시르리진산 2칼륨(와코쥰야쿠공업사제), 시트르산나트륨(와코쥰야쿠공업사제), 글루콘산나트륨(후소화학공업사제), L-아스파르트산나트륨(교와발효 바이오사제), 말산나트륨(DL-말산 2나트륨 n수화물, 와코쥰야쿠공업사제), 글루콘산칼슘(와코쥰야쿠공업사제), 숙신산 2나트륨(와코쥰야쿠공업사제), 타르타르산나트륨칼륨(타르타르산나트륨칼륨 4수화물, 와코쥰야쿠공업사제), 타르타르산나트륨(L-타르타르산나트륨, 와코쥰야쿠공업사제), L-아스코르브산나트륨(와코쥰야쿠공업사제)을 이용했다. 실시예 1과 마찬가지의 평가를 행하였다.

(실시예 12 내지 22)

표 7에 나타낸 바와 같이, 실시예 1과 마찬가지의 수순으로 의약 조성물을 얻었다. 젤라틴은 돼지뼈 젤라틴(AEP, 니피사제), 유기산염은, 각각 락트산칼슘(락트산칼슘 수화물(과립), 다이헤이화학산업사제), 글리시르리진산 2칼륨(와코쥰야쿠공업사제), 시트르산나트륨(와코쥰야쿠공업사제), 글루콘산나트륨(후소화학공업사제), L-아스파르트산나트륨(교와발효 바이오사제), 말산나트륨(DL-말산 2나트륨 n수화물, 와코쥰야쿠공업사제), 글루콘산칼슘(와코쥰야쿠공업사제), 숙신산 2나트륨(와코쥰야쿠공업사제), 타르타르산나트륨칼륨(타르타르산나트륨칼륨 4수화물, 와코쥰야쿠공업사제), 타르타르산나트륨(L-타르타르산나트륨, 와코쥰야쿠공업사제), L-아스코르브산나트륨(와코쥰야쿠공업사제)을 이용했다. 얻어진 의약 조성물에 대해서 실시예 1과 마찬가지의 평가를 행하였다. 또한, 실시예 14에서는, pH 조절제로서 염산을 이용하여 pH의 조절을 행하였다.

표 8, 9에 나타낸 바와 같이, 실시예에서 얻어진 의약 조성물은, 모두 문제없이 집을 수 있어 사용상 문제가 없는 것이었다.

또한, 실시예에서 얻어진 의약 조성물의 물에 대한 용해성에 관해서, 물을 첨가한 경우에는 바로 의약 조성물이 붕괴되어, 원형을 유지하지 않았다. 5℃의 물에서는 의약 조성물이 완전하게 용해할 때까지 1분 이상을 필요로 했다. 25℃의 물에서는 30초 내지 1분 정도로 완전히 용해했다. 30℃의 물에서는 30초 이내에 완전히 용해했다.

또한, 보관 안정성의 결과, 40℃에서 120일간 보관한 경우, 알레르겐 함량이 전혀 저하하지 않았다.

(실시예 23)

수용성 젤라틴(물고기)(CSF, 니피사제) 50.0 중량부에, 치료용 표준화 알레르겐 엑기스 피하주 "토리이" 삼목 꽃가루 2000JAU/mL(토리이 약품사제) 50.0 중량부, 탄산칼슘(와코쥰야쿠공업제) 10 중량부를 가해서 교반 혼합하여 의약 조성물을 얻었다. 이 의약 조성물을 30±2℃에서 2주일 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 후술하는 방법으로 측정했다.

(실시예 24 내지 31)

표 10의 조성으로, 실시예 23과 마찬가지의 수순으로 실시예 24 내지 31에 관한 의약 조성물을 조제했다. 이들 의약 조성물을 30±2℃에서 2주일 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 후술하는 방법으로 측정했다.

첨가제는, 각각 무수 인산수소칼슘(후지칼린 F, 후지화학공업사제), 탄산마그네슘(탄산마그네슘(염기성), 나칼라이테스크사제), 규산칼슘(와코쥰야쿠공업사제), 규산마그네슘(교와화학공업사제), 메타규산알루민산마그네슘(노이실린 FL2, 후지화학공업사제), 합성 규산알루미늄(교와화학공업사제), 인산수소나트륨(인산수소 2나트륨 12수화물, 와코쥰야쿠공업사제), 인산 2수소칼륨(와코쥰야쿠공업사제)을 이용했다.

(비교예 1)

치료용 표준화 알레르겐 엑기스 피하주 "토리이" 삼목 꽃가루 2000JAU/mL(토리이 약품사제) 50.0 중량부를 의료용 조성물로 하여 30±2℃에서 2주일 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 후술하는 방법으로 측정했다.

(비교예 2)

수용성 젤라틴(물고기)(CSF, 니피사제) 50.0 중량부에 치료용 표준화 알레르겐 엑기스 피하주 "토리이" 삼목 꽃가루 2000JAU/mL(토리이 약품사제) 50.0 중량부를 가해서 교반 혼합하여 의약 조성물을 얻었다. 이 의약 조성물을 30±2℃에서 2주일 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 후술하는 방법으로 측정했다.

(비교예 3)

수용성 젤라틴(물고기)(CSF, 니피사제) 50.0 중량부에 치료용 표준화 알레르겐 엑기스 피하주 "토리이" 삼목 꽃가루 2000JAU/mL(토리이 약품사제) 50.0 중량부, 염화칼슘(염화칼슘 2수화물, 와코쥰야쿠공업사제) 10 중량부를 가해서 교반 혼합하여 의약 조성물을 얻었다. 이 의약 조성물을 30±2℃에서 2주일 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 후술하는 방법으로 측정했다.

(비교예 4, 5)

표 1의 조성으로, 비교예 3과 마찬가지의 수순으로 의약 조성물을 조제했다. 이 의약 조성물을 30±2℃에서 2주일 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 후술하는 방법으로 측정했다. 첨가제는 각각 염화마그네슘(시그마사제), 염화칼륨(와코쥰야쿠공업사제)을 이용했다.

(실시예 32)

수용성 젤라틴(물고기)(CSF, 니피사제) 50.0 중량부에 치료용 표준화 알레르겐 엑기스 피하주 "토리이" 삼목 꽃가루 2000JAU/mL(토리이 약품사제) 50.0 중량부, 락트산칼슘(락트산칼슘 수화물(과립), 다이헤이화학산업사제) 10 중량부를 가해서 교반 혼합하여 의약 조성물을 얻었다. 이 의약 조성물을 30±2℃에서 2주일 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 후술하는 방법으로 측정했다.

(실시예 33 내지 50)

표 11의 조성으로, 실시예 32와 마찬가지의 수순으로 의약 조성물을 조제했다. 이 의약 조성물을 30±2℃에서 2주일 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 후술하는 방법으로 측정했다. 첨가제는, 각각 시트르산나트륨(와코쥰야쿠공업사제), 시트르산칼슘(와코쥰야쿠공업사제), 말산나트륨(DL-말산 2나트륨 n수화물, 와코쥰야쿠공업사제), 글리시르리진산 2칼륨(와코쥰야쿠공업사제), 글리시르리진산 2나트륨(와코쥰야쿠공업사제), 글루콘산칼슘(글루콘산칼슘 1수화물, 와코쥰야쿠공업사제), 글루콘산나트륨(와코쥰야쿠공업사제), 글루콘산마그네슘(D-글루콘산 헤미마그네슘염, 와코쥰야쿠공업사제), 푸마르산스테아릴나트륨(PRUV, JRS Pharma사제), 타르타르산나트륨(와코쥰야쿠공업사제), 타르타르산나트륨칼륨(타르타르산나트륨칼륨 4수화물, 와코쥰야쿠공업사제), 숙신산 2나트륨(와코쥰야쿠공업사제), 아세트산나트륨(와코쥰야쿠공업사제), L-아스코르브산나트륨(와코쥰야쿠공업사제), L-아스파르트산나트륨(와코쥰야쿠공업사제), 에데트산 2나트륨(와코쥰야쿠공업사제), 알긴산나트륨(키미카알긴, 키미카사제), 카르복시메틸셀룰로오스나트륨(MP Biomedicals사제)을 이용했다.

(비교예 6)

수용성 젤라틴(물고기)(CSF, 니피사제) 50.0 중량부에 치료용 표준화 알레르겐 엑기스 피하주 "토리이" 삼목 꽃가루 2000JAU/mL(토리이 약품사제) 50.0 중량부, 락트산(일본약국방 락트산, 고마츠야사제) 10 중량부를 가해서 교반 혼합하여 의약 조성물을 얻었다. 이 의약 조성물을 30±2℃에서 2주일 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 후술하는 방법으로 측정했다.

(비교예 7 내지 16)

표 12의 조성으로 비교예 6과 마찬가지의 수순으로 의약 조성물을 조제했다. 이 의약 조성물을 30±2℃에서 2주일 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 후술하는 방법으로 측정했다. 첨가제는, 각각 시트르산(일본약국방 시트르산 수화물, 고마츠야사제), 말산(DL-말산, 와코쥰야쿠공업사제), 글리시르리진산(와코쥰야쿠공업사제), 글루콘산(50％ 글루콘산 용액, 와코쥰야쿠공업사제), 푸마르산(와코쥰야쿠공업사제), 타르타르산(일본약국방 타르타르산, 고마츠야사제), 숙신산(후소화학공업사제), 아세트산(와코쥰야쿠공업사제), L-아스코르브산(와코쥰야쿠공업사제), L-아스파르트산(와코쥰야쿠공업사제)을 이용했다.

(실시예 51)

치료용 표준화 알레르겐 엑기스 피하주 "토리이" 삼목 꽃가루 2000JAU/mL(토리이 약품사제) 50.0 중량부, 락트산칼슘(락트산칼슘 수화물(과립), 다이헤이화학산업사제) 10 중량부를 가해서 교반 혼합하여 의약 조성물을 얻었다. 이 의약 조성물을 30±2℃에서 2주일 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 후술하는 방법으로 측정했다.

(실시예 52 내지 57)

표 13의 조성으로 실시예 51과 마찬가지의 수순으로 의약 조성물을 조제했다. 이 의약 조성물을 30±2℃에서 2주일 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 후술하는 방법으로 측정했다. 첨가제는, 각각 탄산칼슘(와코쥰야쿠공업사제), 탄산마그네슘(탄산마그네슘(염기성), 나칼라이테스크사제), 규산마그네슘(교와화학공업사제), 인산수소나트륨(인산수소 2나트륨 12수화물, 와코쥰야쿠공업사제), 시트르산나트륨(와코쥰야쿠공업사제), 말산나트륨(DL-말산 2나트륨 n수화물, 와코쥰야쿠공업제)을 이용했다.

(실시예 58)

수용성 젤라틴(물고기)(CSF, 니피사제) 50.0 중량부에 정제수 25.0 중량부를 가하고, 또한 정제 삼목 꽃가루 항원 Cryj1(생화학 바이오 비즈니스제) 0.05 중량부, 락트산칼슘(락트산칼슘 수화물(과립), 다이헤이화학산업제) 10 중량부를 가해서 교반 혼합했다. 이 혼합물을 30±2℃에서 2주일 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 측정했다.

(실시예 59 내지 64)

표 14의 조성으로, 실시예 58과 마찬가지의 수순으로 조제했다. 이 혼합물을 30±2℃에서 2주일 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 측정했다. 첨가제는, 각각 탄산칼슘(와코쥰야쿠공업제), 탄산마그네슘(탄산마그네슘(염기성), 나칼라이테스크제), 규산마그네슘(교와화학공업제), 인산수소나트륨(인산수소 2나트륨 12수화물, 와코쥰야쿠공업제), 시트르산나트륨(와코쥰야쿠공업제), 말산나트륨(DL-말산나트륨 n수화물, 와코쥰야쿠공업사제)을 이용했다.

(비교예 17)

수용성 젤라틴(물고기)(CSF, 니피사제) 50.0 중량부에 정제수 25.0 중량부를 가하고, 또한 정제 삼목 꽃가루 항원 Cryj1(생화학 바이오 비즈니스사제) 0.05 중량부를 가해서 교반 혼합하여 의약 조성물을 얻었다. 이 의약 조성물을 30±2℃에서 2주일 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 후술하는 방법으로 측정했다.

(비교예 18)

정제 삼목 꽃가루 항원 Cryj1(생화학 바이오 비즈니스제) 0.05 중량부에 정제수 25.0 중량부를 가해서 교반 혼합하여 의약 조성물을 얻었다. 이 의약 조성물을 30±2℃에서 2주일 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 후술하는 방법으로 측정했다.

(실시예 65)

수용성 젤라틴(물고기)(CSF, 니피사제) 50.0 중량부에 정제수 25.0 중량부를 가하고, 또한 삼목 꽃가루 추출물 동결 건조 분말(LSL사제) 0.1 중량부, 락트산칼슘(락트산칼슘 수화물(과립), 다이헤이화학산업사제) 10 중량부를 가해서 교반 혼합하여 의약 조성물을 얻었다. 이 의약 조성물을 30±2℃에서 2주일 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 후술하는 방법으로 측정했다.

(실시예 66 내지 71)

표 15의 조성으로, 실시예 65와 마찬가지의 수순으로 의약 조성물을 조제했다. 이 의약 조성물을 30±2℃에서 2주일 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 후술하는 방법으로 측정했다. 첨가제는, 각각 탄산칼슘(와코쥰야쿠공업사제), 탄산마그네슘(탄산마그네슘(염기성), 나칼라이테스크사제), 규산마그네슘(교와화학공업사제), 인산수소나트륨(인산수소 2나트륨 12수화물, 와코쥰야쿠공업사제), 시트르산나트륨(와코쥰야쿠공업사제), 말산나트륨(DL-말산 2나트륨 n수화물, 와코쥰야쿠공업사제)을 이용했다.

(비교예 19)

수용성 젤라틴(물고기)(CSF, 니피사제) 50.0 중량부에 정제수 25.0 중량부를 가하고, 또한 삼목 꽃가루 추출물 동결 건조 분말(LSL사제) 0.1 중량부를 가해서 교반 혼합하여 의약 조성물을 얻었다. 이 의약 조성물을 30±2℃에서 2주일 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 후술하는 방법으로 측정했다.

(비교예 20)

삼목 꽃가루 추출물 동결 건조 분말(LSL사제) 0.1 중량부에 정제수 25.0 중량부를 가해서 교반 혼합하여 의약 조성물을 얻었다. 이 의약 조성물을 30±2℃에서 2주일 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 후술하는 방법으로 측정했다.

(실시예 72)

수용성 젤라틴(물고기)(CSF, 니피사제) 50.0 중량부에 치료용 표준화 알레르겐 엑기스 피하주 "토리이" 삼목 꽃가루 2000JAU/mL(토리이 약품사제) 50.0 중량부, 시트르산(일본약국방 시트르산 수화물, 고마츠야사제) 0.1 중량부를 가해서 교반 혼합했다. 이 혼합물을 30±2℃에서 2주일 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 후술하는 방법으로 측정했다. 또한, 치료용 표준화 알레르겐 엑기스 피하주 "토리이" 삼목 꽃가루 2000JAU/mL(토리이 약품사제)는, NaCl을 함유하고 있기 때문에, 얻어진 혼합물 중에는 시트르산 Na가 생성되어 있었다.

(실시예 73 내지 75)

표 16의 조성으로, 실시예 72와 마찬가지의 수순으로 의약 조성물을 조제했다. 이 의약 조성물을 30±2℃에서 2주일 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 후술하는 방법으로 측정했다.

(실시예 76)

정제수 20.0 중량부에 폴리소르베이트 80(NIKKOL TO-10MV, 닛코케미칼즈사제) 0.1 중량부, 중쇄 지방산 트리글리세리드(코코나드 MT, 카오사제) 0.1 중량부, p-옥시벤조산메틸(파라옥시벤조산메틸, 우에노제약사제) 0.1 중량부를 가하여 초음파로 10분간 교반 용해했다. 그 용액에 수용성 젤라틴(물고기)(CSF, 니피사제) 12.0 중량부를 가해서 35℃에서 30분간 교반하여 젤라틴 용액을 얻었다. 별도로, 치료용 표준화 알레르겐 엑기스 피하주 "토리이" 삼목 꽃가루 2000JAU/mL(토리이 약품사제) 55.0 중량부를 취하고, D-소르비톨(NEOSORB P60W, ROQUETTE사제) 8.0 중량부, 탄산칼슘(와코쥰야쿠공업사제) 3.0 중량부, 시트르산나트륨(와코쥰야쿠공업사제) 1.0 중량부, 아스파르탐(아지노모토 KK 아스파르탐, 아지노모토사제) 0.1 중량부를 가해서 교반 혼합하여 의약 조성물을 얻었다. 그 의약 조성물을 앞서 조제한 젤라틴 용액에 전량 첨가하고, 또한 체리 플레이버(타카사고 향료사제) 0.1 중량부를 가하여, 35℃하에서 20분간 혼합한 후, 5cm² 플라스틱제 블리스터 케이스(크리오몰드(각형) 3호, 사쿠라파인테크사제)에 2.0g씩 분주해서, 2 내지 8℃하에서 하루종일 냉각 고착화하여 젤리 형태 제제를 얻었다. 이 젤리 형태 제제를 30±2℃에서 6개월간 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 후술하는 방법으로 측정했다.

(실시예 77, 78)

표 17의 조성으로, 실시예 76과 마찬가지의 수순으로 젤리 형태 제제를 조제했다.

얻어진 젤리 형태 제제를 30±2℃에서 3개월간 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 후술하는 방법으로 측정했다. 첨가제는, 락트산칼슘(락트산칼슘 수화물(과립), 다이헤이화학산업제)을 이용했다.

(실시예 79)

정제수 20.0 중량부에 폴리소르베이트 80(NIKKOL TO-10MV, 닛코케미칼즈사제) 0.1 중량부, 중쇄 지방산 트리글리세리드(코코나드 MT, 카오사제) 0.1 중량부, p-옥시벤조산메틸(파라옥시벤조산메틸, 우에노제약사제) 0.1 중량부를 가해서 초음파로 10분간 교반 용해했다. 그 용액에 수용성 젤라틴(물고기)(CSF, 니피사제) 12.0 중량부를 가해서 35℃에서 30분간 교반하여 젤라틴 용액을 얻었다. 별도로, 치료용 표준화 알레르겐 엑기스 피하주 "토리이" 삼목 꽃가루 2000JAU/mL(토리이 약품사제) 55.0 중량부를 취하고, D-소르비톨(NEOSORB P60W, ROQUETTE사제) 8.0 중량부, 탄산칼슘(와코쥰야쿠공업사제) 3.0 중량부, 시트르산나트륨(와코쥰야쿠공업사제) 1.0 중량부, 아스파르탐(아지노모토 KK 아스파르탐, 아지노모토사제) 0.1 중량부를 가해서 교반 혼합하여 의약 조성물을 얻었다. 그 의약 조성물을 앞서 조제한 젤라틴 용액에 전량 첨가하고, 또한 체리 플레이버(타카사고 향료사제) 0.1 중량부를 가하여 35℃하에서 20분간 혼합한 후, 인산(와코쥰야쿠사제)을 가해서 pH를 7.0으로 조정하고, 5분간 더 혼합했다. 그 후, 5cm² 플라스틱제 블리스터 케이스(크리오몰드(각형) 3호, 사쿠라파인테크사제)에 2.0g씩 분주해서, 2 내지 8℃하에서 하루종일 냉각 고착화하여 젤리 형태 제제를 얻었다. 이 젤리 형태 제제를 30±2℃에서 6개월간 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 후술하는 방법으로 측정했다.

(실시예 80, 81)

표 17의 조성으로, 실시예 79와 마찬가지의 수순으로 젤리 형태 제제를 조제했다.

얻어진 젤리 형태 제제를 30±2℃에서 3개월간 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 후술하는 방법으로 측정했다.

(시험 방법)

2주일 보관 후의 의약 조성물에서의, 삼목 꽃가루의 알레르겐 단백질인 Cryj1의 잔존 알레르겐 활성을 측정함으로써, 각종 의약 조성물이 Cryj1 단백질의 안정성(특히 열 안정성)에 관해서 기여하는지의 여부를 이하의 방법으로 평가했다. 결과를 표 18 내지 25에 나타냈다.

(잔존 Cryj1 알레르겐 활성 평가 방법)

삼목 꽃가루 항원 ELISA "Cryj1"(생화학 바이오 비즈니스사제)을 이용하여, 삼목 꽃가루의 주요 알레르겐의 하나인 Cryj1의 알레르겐 활성을 측정했다. 해당 측정 키트는, 일본 삼목(Cryptomeria japonica) 꽃가루 항원의 하나인 Cryj1에 특이적인 모노클로날 항체(013, 053)를 이용한 샌드위치 ELISA법을 원리로 하고 있으며, Cryj1을 특이적으로 측정하는 것이 가능하다. 키트 부속의 반응 완충액 100μL에 표준 용액 또는 샘플 20μL를 첨가하고, 상온에서 60분간 일시 반응을 행한 후, HRP 표지 항체 용액 100μL를 가해서 60분간 2차 반응을 행하였다. 여기에 효소 기질 용액 100μL를 가해서 상온 차광하에서 30분간 반응을 행하고, 마지막으로 반응 정지 용액 100μL를 가했다. 그 후, 450nm의 자외 흡수 강도를 측정했다. 각 Cryj1 농도의 표준 용액에서의 흡수 강도를 바탕으로 검량선을 구하고, 이에 따라 각 샘플의 Cryj1 알레르겐 활성(ng/mL)을 측정했다.

각 샘플에 대한 Cryj1 첨가량의 초기값을 100％로 하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성(％)을 구했다. 해당 잔존 Cryj1 알레르겐 활성(％)을 하기와 같이 스코어화함으로써 평가를 행하였다.

5: 90％ 이상, 105％ 미만

4: 75％ 이상, 90％ 미만

3: 60％ 이상, 75％ 미만

2: 45％ 이상, 60％ 미만

1: 45％ 미만

표 18 내지 25에 나타낸 바와 같이, 알레르겐, 유기산염 및/또는 무기산염을 함유하는 실시예에 따른 의약 조성물 및 젤리 형태 제제는, 잔존 Cryj1 알레르겐 활성의 스코어가 모두 우수한 결과를 나타냈다. 또한, 실시예 59에 따른 의약 조성물은, 첨가한 시트르산량이 많아, 치료용 표준화 알레르겐 엑기스 피하주 "토리이" 삼목 꽃가루 2000JAU/mL에 포함되는 염화나트륨량을 상회하여, 의약 조성물 중에서 생성된 시트르산나트륨에 의한 안정화 효과보다, 시트르산에 의한 불안정화 효과가 더 강해짐으로써, 약간 잔존 Cryj1 알레르겐 활성이 낮아진 것으로 생각되었다.

한편, 비교예에 따른 의약 조성물은, 잔존 Cryj1 알레르겐 활성의 스코어가 모두 1 내지 2였다.

(실험예 32 내지 34)

치료용 표준화 알레르겐 엑기스 피하주 "토리이" 삼목 꽃가루 200JAU/mL(토리이 약품사제) 1.0mL에, 탄산나트륨(와코쥰야쿠공업사제)을 표 26에 나타낸 양(mg)으로 가해서 교반 혼합하여 의약 조성물을 얻었다. 이 의약 조성물을 40±2℃에서 2주일 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 후술하는 방법으로 측정했다.

(비교 실험예 9)

치료용 표준화 알레르겐 엑기스 피하주 "토리이" 삼목 꽃가루 200JAU/mL(토리이 약품사제) 1.0mL를 의료용 조성물로 하여, 40±2℃에서 2주일 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 후술하는 방법으로 측정했다.

(비교 실험예 10, 11)

치료용 표준화 알레르겐 엑기스 피하주 "토리이" 삼목 꽃가루 200JAU/mL(토리이 약품사제) 1.0mL에 탄산나트륨(와코쥰야쿠공업사제)을 표 26에 나타낸 양(mg)으로 가해서 교반 혼합하여 의약 조성물을 얻었다. 이 의약 조성물을 40±2℃에서 2주일 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 후술하는 방법으로 측정했다.

(실험예 35 내지 37)

치료용 표준화 알레르겐 엑기스 피하주 "토리이" 삼목 꽃가루 2000JAU/mL(토리이 약품사제) 1.0mL에 탄산나트륨(와코쥰야쿠공업사제)을 표 27에 나타낸 양(mg)으로 가해서 교반 혼합하여 의약 조성물을 얻었다. 이 의약 조성물을 40±2℃에서 2주일 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 후술하는 방법으로 측정했다.

(비교 실험예 12)

치료용 표준화 알레르겐 엑기스 피하주 "토리이" 삼목 꽃가루 2000JAU/mL(토리이 약품사제) 1.0mL를 의료용 조성물로 하여, 40±2℃에서 2주일 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 후술하는 방법으로 측정했다.

(비교 실험예 13 내지 15)

치료용 표준화 알레르겐 엑기스 피하주 "토리이" 삼목 꽃가루 2000JAU/mL(토리이 약품사제) 1.0mL에 탄산나트륨(와코쥰야쿠공업사제)을 표 27에 나타낸 양(mg)으로 가해서 교반 혼합하여 의약 조성물을 얻었다. 이 의약 조성물을 40±2℃에서 2주일 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 후술하는 방법으로 측정했다.

(실험예 76 내지 80, 비교 실험예 16, 17)

아세트산, 인산 및 붕산(모두 와코쥰야쿠공업사제)을 이용해서 80mM 브리튼-로빈슨 완충 용액(BR 완충 용액)을 조제했다. 수산화나트륨 용액(와코쥰야쿠공업사제)을 이용하여, 조제한 BR 완충 용액의 pH를 표 28에 나타낸 값으로 조절했다.

다음으로, 삼목 꽃가루 추출물의 동결 건조 분말(삼목 꽃가루 추출물-Cj, LSL사제) 2mg에 정제수 2.9mL를 가하여, 충분히 용해시켜서 알레르겐 용액을 얻었다. 또한, 얻어진 알레르겐 용액은 5mM 붕산 완충 용액(pH=8.0)이 되는 것이 첨부 문서에 기재되어 있다. 이 알레르겐 용액 125.0 중량부에, 글리세린 250.0 중량부를 가하여 교반 혼합했다. 여기에 표 28에 나타낸 pH로 조절한 BR 완충 용액의 125.0 중량부를 각각 가해서 충분히 교반 혼합하여 의약 조성물을 얻었다. 이 의약 조성물을 40±2℃에서 2주일 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 후술하는 방법으로 측정했다.

(실험예 43 내지 46, 비교 실험예 18 내지 21)

표 29에 나타낸 배합량의 정제수에, 소포제로서 폴리소르베이트 80 및 중쇄 지방산 트리글리세리드(CCTG) 0.1 중량부, 방부제로서 p-히드록시벤조산메틸(메틸파라벤) 0.1 중량부를 가해서 초음파 용해 및 분산을 행하였다. 여기에, 탄산나트륨을 표 29에 나타낸 배합량으로 가해서 용해시켰다.

다음으로, 수용성(물고기) 젤라틴(CSF, 니피사제) 10 중량부를 가하여 30 내지 40℃의 온도에서 용해시키고, 28 내지 32℃의 항온하에서 쉐이커에 세팅해서 젤라틴 용액으로 했다. 별도로, 삼목 꽃가루 알레르겐 엑기스 원액 2000JAU/mL를 50 중량부 취하고, D-소르비톨 10 중량부를 2 내지 8℃하에서 용해시켜, 25 내지 30℃의 온도가 되도록 가온한 후, 미리 준비해 둔 젤라틴 용액에 전량 가해서 28 내지 32℃하에서 신속하게 혼합하여, 5cm² 플라스틱제 블리스터 케이스(크리오몰드(각형) 3호, 사쿠라파인테크사제)에 1g씩 분주하고, 2 내지 8℃하에서 하루종일 냉각 고착화시켜서 젤리 형태 제제를 얻었다. 이 젤리 형태 제제를 25±2℃에서 2개월간 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 후술하는 방법으로 측정했다.

(비교 실험예 22)

치료용 표준화 알레르겐 엑기스 피하주 "토리이" 삼목 꽃가루 2000JAU/mL(토리이 약품사제) 50.0 중량부를 의약 조성물로 하여, 25±2℃에서 2개월간 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 후술하는 방법으로 측정했다.

(실험예 47 내지 50, 비교 실험예 23, 24)

표 30에 나타낸 조성으로 한 것 외에는 실험예 43과 마찬가지의 수순으로 젤리 형태 제제를 얻었다. 얻어진 젤리 형태 제제를 25±2℃에서 2개월간 보관하고, 보관 후의 잔존 Cryj1 알레르겐 활성을 후술하는 방법으로 측정했다.

또한, 실험예 47 내지 50, 비교 실험예 23, 24에서는 돼지 젤라틴(AEP, 니피사제)을 이용했다.

(시험 방법)

실험예 및 비교 실험예에서 조제한 의약 조성물 또는 젤리 형태 제제의 pH를 측정했다.

또한, 삼목 꽃가루의 알레르겐 단백인 Cryj1의 알레르겐 활성을 측정함으로써, 각종 의약 조성물이 Cryj1 단백의 안정성(특히 열 안정성)에 관해서 기여하는지의 여부를 평가했다. 각각의 시험 방법을 이하에 기재하고, 결과를 표 31 내지 33에 나타낸다.

(pH 측정 방법)

pH 측정기(호리바제작소사제, pH 미터)를 이용하여, 조제한 의약 조성물(실험예 32 내지 42 및 비교 실험예 9 내지 17)의 pH를 25±2℃의 온도하에서 측정했다.

또한, 젤리 형태 제제(실험예 43 내지 50 및 비교 실험예 18 내지 21, 23, 24) 1g 혹은 의약 조성물(비교 실험예 22) 0.5mL를, 10mL 메스 플라스크에서 증류수로 희석했다. 젤리 형태 제제의 경우, 그 제제가 완전히 용해할 때까지 30 내지 35℃의 항온하에서 교반하여 샘플 용액을 각각 조제했다. 그리고, pH 측정기(호리바제작소사제, pH 미터)를 이용하여, 얻어진 샘플 용액의 pH를 25±2℃의 온도하에서 측정했다.

(알레르겐 활성 평가 방법)

삼목 꽃가루 항원 ELISA "Cryj1"(생화학 바이오 비즈니스사제)을 이용하여, 삼목 꽃가루의 주요 알레르겐의 하나인 Cryj1의 알레르겐 활성을 측정했다. 해당 측정 키트는, 일본 삼목(Cryptomeria japonica) 꽃가루 항원의 하나인 Cryj1에 특이적인 모노클로날 항체(013, 053)를 이용한 샌드위치 ELISA법을 원리로 하고 있으며, Cryj1을 특이적으로 측정하는 것이 가능하다. 키트 부속의 반응 완충액 100μL에 표준 용액 또는 샘플 20μL를 첨가하고, 상온에서 60분간 일시 반응을 행한 후, HRP 표지 항체 용액 100μL를 가해서 60분간 2차 반응을 행하였다. 여기에 효소 기질 용액 100μL를 가하여 상온 차광하에서 30분간 반응을 행하고, 마지막으로 반응 정지 용액 100μL를 가했다. 그 후, 450nm의 자외 흡수 강도를 측정했다. 각 Cryj1 농도의 표준 용액에서의 흡수 강도를 바탕으로 검량선을 구하고, 이에 따라 각 샘플의 Cryj1 알레르겐 활성(ng/mL)을 측정했다.

각 샘플에 대한 Cryj1 첨가량의 초기값을 100％로 하고, 해당 초기값에 대한 1일 후, 7일 후 및 14일 후의 Cryj1 알레르겐 활성(％)을 구했다. 해당 Cryj1 알레르겐 활성(％)을 하기와 같이 스코어화함으로써 평가를 행하였다.

5: 90％ 이상, 105％ 미만

4: 75％ 이상, 90％ 미만

3: 60％ 이상, 75％ 미만

2: 45％ 이상, 60％ 미만

1: 30％ 이상, 45％ 미만

0: 30％ 미만

표 31 내지 33에 나타낸 바와 같이, 실험예에 따른 의약 조성물은, pH를 5.5 내지 8.5의 범위로 조절함으로써, 조정 후 14일 경과해도 알레르겐 활성의 평가에서 3 이상을 확보할 수 있었다.

한편, pH가 5.5 내지 8.5의 범위를 벗어나는 비교 실험예에 따른 의약 조성물은, 실험예에 따른 의약 조성물에 비해 알레르겐 활성의 평가에서 뒤떨어지는 것이었다.

표 34, 35에 나타낸 바와 같이, 실험예에 따른 젤리 형태 제제는, pH를 5.5 내지 8.5의 범위로 조절함으로써, 알레르겐 활성의 평가가 모두 5로 매우 우수하여, 의약 조성물에 따른 실험예에 비해 더욱 안정화시킬 수 있었다.

한편, pH가 5.5 내지 8.5의 범위를 벗어나는 비교 실험예에 따른 젤리 형태 제제는, 모두 실험예에 따른 젤리 형태 제제에 비해 알레르겐 활성의 평가에서 뒤떨어지는 것이었다.

본 발명의 의약 조성물은, 알레르기증의 예방 또는 치료제로서 유용하며, 특히 열 안정성이 나쁜 알레르겐의 안정성이 우수하여, 저장 및 전달에 있어서 유용하다.

Claims (16)

1. 알레르겐과, 유기산염, 무기산염 및 pH 조절제로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1종을 함유하는 것을 특징으로 하는, 의약 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 유기산염은, 락트산칼슘, 시트르산나트륨, 시트르산칼슘, 말산나트륨, 글리시르리진산 2칼륨, 글리시르리진산 2나트륨, 글루콘산칼슘, 글루콘산나트륨, 글루콘산마그네슘, 푸마르산스테아릴나트륨, 타르타르산나트륨, 타르타르산나트륨칼륨, 숙신산 2나트륨, 아세트산나트륨, L-아스파르트산나트륨, 및 L-아스코르브산나트륨으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1종을 포함하는, 의약 조성물.
3. 제1항에 있어서, 상기 무기산염은, 탄산칼슘, (무수)인산수소칼슘, 탄산마그네슘, 규산칼슘, 규산마그네슘, 메타규산알루민산마그네슘, 합성 규산알루미늄, 탄산수소나트륨, 인산수소나트륨, 인산 2수소나트륨, 탄산수소칼륨, 인산 2수소칼륨, 및 인산 2수소칼슘으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1종을 포함하는, 의약 조성물.
4. 제1항에 있어서, 알레르겐은 삼목 꽃가루 알레르겐 단백질인, 의약 조성물.
5. 제1항에 있어서, 젤라틴을 더 포함하는, 의약 조성물.
6. 제1항에 있어서, 물을 더 포함하는, 의약 조성물.
7. 제1항에 있어서, pH 조절제는 pH를 5.5 내지 8.5의 범위 내로 조절하는 것인, 의약 조성물.
8. 제1항에 있어서, pH 조절제는 아세트산, 인산 혹은 붕산 또는 이것들의 혼합물, 수산화나트륨, 및 탄산나트륨으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1종을 포함하는, 의약 조성물.
9. 제1항에 있어서, 물을 포함하지 않는 것을 특징으로 하는, 의약 조성물.
10. 제1항에 있어서, 고형제, 액제 또는 젤리제인, 의약 조성물.
11. 제1항에 있어서, 경구 투여용인, 의약 조성물.
12. 제1항에 있어서, 감감작 요법용인, 의약 조성물.
13. 제1항에 있어서, 피하 주사용인, 의약 조성물.
14. 알레르겐과, 유기산염, 무기산염 및 pH 조절제로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1종을 물에 용해시켜서 알레르겐 함유 수용액을 얻는 공정, 및
    상기 알레르겐 함유 수용액을 동결 건조시키는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는, 의약 조성물의 제조 방법.
15. 제14항에 있어서, 알레르겐 함유 수용액에, 젤라틴을 더 용해시키는, 의약 조성물의 제조 방법.
16. 제14항에 있어서, 알레르겐 함유 수용액은, pH가 5.5 내지 8.5의 범위 내에 있는, 의약 조성물의 제조 방법.