KR20120105922A

KR20120105922A - 육모촉진 및 탈모예방 개선용 외용제조성물

Info

Publication number: KR20120105922A
Application number: KR1020110023647A
Authority: KR
Inventors: 이병수
Original assignee: 두리화장품 주식회사
Priority date: 2011-03-17
Filing date: 2011-03-17
Publication date: 2012-09-26
Also published as: KR101229762B1

Abstract

본 발명은 한련초, 측백엽, 조협, 편백, 영지버섯 및 반하의 복합추출물을 유효성분으로 함유하는 육모촉진 및 탈모예방 개선용 외용제조성물에 관한 것으로, 상기 생약복합추출물은 장기간 피부에 사용하는 경우에도 안전하며, 특히 5알파-환원효소(5α-reductase) 억제효과가 우수하여 육모촉진 및 탈모예방 개선용 외용제조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

육모촉진 및 탈모예방 개선용 외용제조성물{External Composition for promoting hair growth and preventing alopecia}

본 발명은 복합생약추출물을 유효성분으로 함유하는 외용제조성물에 관한 것으로서, 구체적으로는 한련초, 측백엽, 조협, 편백, 영지버섯 및 반하의 복합추출물을 유효성분으로 포함하여 육모촉진 및 탈모예방 개선 효과를 가지는 외용제조성물에 관한 것이다.

각종 스트레스와 환경오염으로 인해 탈모를 호소하는 사람들이 증가하고 있으며, 이에 따라 탈모관련 제품의 생산 및 소비도 증가하고 있다. 탈모란 모낭의 성장주기중 성장기의 모낭에서 자라는 모발보다 퇴행기 또는 휴지기의 모낭에서 자라는 모발의 비율이 증가함에 따라 비정상적으로 빠지는 모발이 증가하는 것을 말하는데, 최근 외모를 중시하는 경향이 두드러지면서 탈모에 대한 관심도 증가하고 있다. 이러한 탈모의 원인으로는 혈액순환 불량설, 남성호르몬 작용 과잉설, 피지분비 과잉설, 과산화물과 세균 등에 의한 두피기능저하설, 유전적 요인, 노화, 스트레스 등이 논의되어 왔으나 아직까지 탈모에 대한 명확한 원인은 알려져 있지 않다. 일반적으로 탈모의 가장 정형적인 형태는 남성호르몬 작용 과잉으로 나타나는 남성형 탈모증으로 남성호르몬인 안드로겐(androgen) 의존적으로 발생하며, 대표적인 안드로겐으로는 테스토스테론(testosterone)과 디하이드로테스토스테론 (dihydrotestosterone; DHT)이 있는데 탈모환자들인 경우 디하이드로테스토스테론이 더 많다고 알려져 있다(Van Neste et al., Br J Dermatol. 143(3), pp804-810, 2000). 테스토스테론은 5알파-환원효소(5α-reductase)에 의해 디하이드로테스토스테론으로 전환되고, 이러한 전환은 Type 1과 Type 2의 2가지 형태의 5알파-환원효소중 Type 2의 5알파-환원효소에 의하여 일어나며, 전환된 디하이드로테스토스테론에 의해 진피유두와 모낭의 점진적인 축소화가 진행된다고 보고되었다(Whiting D., J Am Acad Dermatol. 28, pp755-763, 1993; Singlair R., Br Med J. 317, pp865-886, 1998).

이러한 탈모증의 치료 및 예방에 있어서 현재 가장 널리 사용되는 것은 미국 FDA의 승인을 받은 미녹시딜(minoxidil)함유제제이며 최근에는 Type 2의 5알파-환원효소 억제효과가 있는 피나스테라이드(finasteride)가 주성분인 프로페시아(Propecia)가 발매되어 사용되고 있다. 그러나 미녹시딜과 같은 화학물질을 주성분으로 하는 탈모방지 제품의 경우 피부 부작용등이 발생함에 따라 사용하는 데 많은 제약이 있다. 이에 따라 최근 한방성분들로 탈모방지를 소구하는 연구들이 진행 되어 뽕잎, 측백엽, 검은깨, 다시마, 미역의 추출물을 혼합하여 제조한 국소도포제용 발모제(대한민국 등록특허 제10-0476791), 자연산 상황버섯추출물을 함유하는 발모제조성물 및 이의 제조방법(대한민국 등록특허 제10-0348155), 모낭충 살균기능을 갖는 백두산, 대산, 황금의 추출물로 구성된 발모제조성물(대한민국 등록특허 제10-0487275)등이 발표되었다. 그러나 이러한 발모제 내지는 육모제들의 임상효과가 그다지 탁월하지 못하며 그 작용기전이 명확히 규명되지 못한 실정이다. 이에 따라 미녹시딜이나 프로페시아에 비하여 피부부작용이 적고, 탈모예방 개선 및 육모촉진 효과가 우수한 모발 제품을 탐색하는 연구가 활발히 진행되고 있다.

이에, 본 발명자들은 상기의 문제점들을 극복하기 위하여 다양한 생약재들을 대상으로 실험을 하였으며, 한련초, 측백엽, 조협, 편백, 영지버섯 및 반하를 혼합추출하는 경우에 상승작용에 의하여 우수한 육모촉진 또는 탈모개선의 효과가 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서 본 발명은 생약재인 한련초, 측백엽, 조협, 편백, 영지버섯 및 반하 복합추출물을 유효성분으로 함유하여 장기간 인체에 사용하는 경우에도 안전하며, 육모촉진 및 탈모예방 개선효과가 우수한 외용제조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면, 한련초, 측백엽, 조협, 편백, 영지버섯 및 반하 복합추출물을 유효성분으로 함유하여 육모촉진 및 탈모방지 개선 효과를 가지는 외용제조성물이 제공된다. 상기 생약 복합추출물은 한련초, 측백엽, 조협, 편백, 영지버섯 및 반하를 각각 1~10 : 1~5 : 1~5 : 1~5 : 1~5 : 1~5의 중량비로 혼합한 후 추출되는 것임을 특징으로 하며, 바람직하게는 동일 중량비로 혼합한 후 추출되는 것이다. 상기 생약 복합추출물은 정제수, 탄소수 1 내지 4의 알코올, 에틸아세테이트, 글리세린, 프로필렌글리콜 및 부틸렌글리콜로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 용매로 추출하여 제조될 수 있다. 상기 생약복합추출물은 조성물 전체중량에 대하여 0.01 ~ 10 중량%의 비율로, 바람직하게는 0.05 ? 5 중량%, 보다 바람직하게는 0.1 ? 2 중량%의 비율로 함유되는 것이 바람직하다.

상기 육모촉진 또는 탈모 예방 및 개선용 조성물은 헤어토닉, 헤어컨디셔너, 헤어에센스, 헤어로션, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어트리트먼트, 헤어영양크림, 헤어왁스, 헤어팩, 헤어비누, 헤어무스 또는 헤어스프레이의 제형으로 제조될 수 있다. 또한, 상기 조성물은 액상, 크림상, 페이스트상 또는 고체상 등 제형의 피부외용제로 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 외용제조성물은 생약재의 복합추출물을 유효성분으로 함유하므로 안전하면서도, 효과적인 5α-환원효소(5α-reductase)의 활성 억제에 의해 남성호르몬인 안드로겐의 분비 촉진에 의해 발생하는 탈모증상을 개선하고 육모를 촉진하는 효과가 우수하여 모발용 외용제로 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 한련초, 측백엽, 조협, 편백, 영지버섯 및 반하의 복합추출물의 Rat vibrissa hair follicle 분리 배양을 이용한 모낭에서의 육모효과를 나타낸 도이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 한련초, 측백엽, 조협, 편백, 영지버섯 및 반하의 복합추출물의 5알파-환원효소(5α-reductase) 억제효과를 나타낸 도이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 한련초, 측백엽, 조협, 편백, 영지버섯 및 반하의 복합추출물의 발모효과를 나타내는 사진도이다.

본 발명은 특정비율로 혼합된 한련초, 측백엽, 조협, 편백, 영지버섯 및 반하 복합추출물을 유효성분으로 함유하는 육모촉진 및 탈모예방 개선 효과를 가지는 조성물에 관한 것이다. 특정비율로 혼합된 한련초, 측백엽, 조협, 편백, 영지버섯 및 반하의 추출물은 상승효과를 발휘하여 육모를 촉진하고 탈모를 예방 및 개선한다.

본 발명 조성물에 있어서 유효 성분으로서 첨가되는 이들 생약의 복합추출물은 이들 식물의 뿌리, 잎, 줄기, 열매 또는 이들의 혼합체로부터 추출될 수 있다. 한련초(Eclipta prostrata L.)는 국화과에 속하며, 높이 약 40cm 되는 한해살이 풀이다. 잎은 버들잎모양이다. 중부와 남부의 낮은 산과 들판에서 자란다. 휘발유, 타닌, 사포닌, 락톤, 니코틴, 에크리프틴, 비타민 A등의 성분을 가지고 있다. 한련초는 민간에서 피를 멈추고 고름을 뺀다고 하여 부스럼 및 여러 상처의 치료에 사용되며, 생즙은 수염이나 머리카락을 까맣게 물들이는데 사용되기도 하였다.

측백엽(側柏葉)은 측백나무(Thuja orientalis L.)의 어린 가지와 잎을 말한다. 약리작용으로 출혈시간단축, 진해, 거담작용이 있고 혈압강하, 항균작용, 해수, 천식에 효과가 있음이 보고되었다. 이에 따라 측백엽(側柏葉)은 코피, 혈변, 소변출혈, 자궁출혈 등에 사용된다. 또한 해수천식, 가래, 탈모, 지루성피부염, 외상출혈 등에 사용된다.

조협은 콩과의 주엽나무(Gleditsia japonica Miquel var. koraiensis Nakai)의 열매이다. 조협이란 콩깍지가 나무에 열리기 때문에 붙은 이름이다. 이 약은 냄새가 거의 없고 매우 아리며 가루로 만들면 재채기를 일으킨다. 맛은 맵고 성질은 따듯하며 약간 독이 있다. 조협은 강한 거담작용이 있으며 폐결핵, 폐농양, 만성기관지염 등에 쓴다. 중풍으로 인한 정신혼몽, 인사불성, 전간 등에도 쓰며 종기, 피부궤양, 변비 등에도 사용된다. 약리작용은 위점막자극, 호흡기도내점액분비촉진, 항균작용, 중추신경마비 등이 보고되었다.

영지는 담자균류 민주름버섯목 구멍장이버섯과의 버섯이다. 여름에 활엽수 뿌리 밑동이나 그루터기에서 발생하여 땅 위에도 돋는다. 버섯갓과 버섯대 표면에 옻칠을 한 것과 같은 광택이 있는 1년생 버섯이다. 이뇨, 보간, 강장, 정신 안정, 관절염 및 기관지염에 효과가 있다고 알려져 왔으며, 혈압강하, 고지혈증 개선, 혈당강하, 면역증강 및 항종양 효과가 있다.

편백(Chamaecyparis obtusa)은 구과목 측백나무과의 상록교목으로, 노송나무라고도 한다. 보통 높이 40m 및 지름 2m에 달하며, 가지는 수평으로 자라고, 햇가지는 처지며, 수피는 적갈색이고, 세로로 찢어진다. 잎은 난상 능형이고, 질이 두껍고, 열매는 9 내지 10월에 갈색으로 익고, 꽃은 4월에 피며, 일가화로 암수가 각각 다른 가지에 달리고, 수꽃은 황색이다. 편백의 잎은 위장출혈로 인한 토혈과 복통을 그치게 하고, 미약하지만 임질에 이뇨작용을 보이며, 호흡기 질환으로 인한 기침에 활용된다. 본 발명에 있어서 편백은 잎, 가지, 씨, 꽃, 줄기 또는 뿌리가 사용되며, 바람직하게는 잎 또는 가지가 사용된다.

반하(半夏, Pinelliae Tuber)는 반하(Pinellia ternata Breitenbach, 천남성과 Araceae)의 덩이줄기로 주피를 완전히 제거한 것으로서, 괴근에는 정유, 소량의 지방, 전분, 니코틴(nicotine), 저액질, 아스파라긴산, 글루타민산, 아르기닌 등의 아미노산, β-시토스테롤, 콜린 등이 함유되어 있으며, 진해(鎭咳), 거담작용(祛痰作用)이 있으며, 진토작용(鎭吐作甬), 해독작용(解毒作用)을 한다.

상기 한련초, 측백엽, 조협, 편백, 영지버섯 및 반하를 특정 혼합비로 혼합 한 후, 추출 용매로서 정제수, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올과 같은 탄소수 1 내지 4의 알코올, 에틸아세테이트, 글리세린, 프로필렌글리콜 및 부틸렌글리콜로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 용매를 사용하여 통상적인 추출방법에 의하여 추출한다. 추출 방법으로는 중탕 추출, 환류냉각 추출, 초음파 추출 등의 추출 방법을 사용할 수 있다.

상기 복합추출물의 제조에 있어서 혼합비는 건조중량을 기준으로 상기 한련초, 측백엽, 조협, 편백, 영지버섯 및 반하가 각각 1~10 : 1~5 : 1~5 : 1~5 : 1~5 : 1~5의 비율로 혼합되는 것이다. 상기의 혼합비를 가지는 추출물이 우수한 활성을 나타내었다. 더욱 바람직하게는 동일 중량비로 혼합되는 것이다. 한편, 본 발명의 생약 복합 추출물은 상기와 같이 각각의 생약재를 혼합 후 추출할 수도 있고, 각각의 생약재 추출물을 얻은 후 혼합할 수도 있다.

본 발명의 일 실시예에 따르면, 한련초, 측백엽, 조협, 편백, 영지버섯 및 반하의 동량 건조물 또는 그 분쇄물을 상기 추출용매에 투입하고 필요에 따라 교반하면서 5~40℃에서 1~15일간 침적시키거나, 40~100℃에서 4~20시간 동안 가열하여 추출할 수 있다. 이 경우에 추출에 사용되는 용매의 양은 중량비로서 추출원료의 통상 5 내지 20배량인 것이 바람직하다.

본 발명의 일 실시예에 따른 생약복합추출물은 구체적으로는 하기의 예에 따라 제조될 수 있다. 먼저 한련초, 측백엽, 조협, 편백, 영지버섯 및 반하 식물을 동량 비율로 세절한 후, 추출용매로서 정제수, 에탄올, 메탄올, 프로판올, 부탄올, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 및 글리세린으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종의 용매를 5 내지 20배, 더욱 바람직하게는 10 내지 20배량 가하여 상온에서 또는 냉각 콘덴서가 장치되어 용매가 증발되는 것을 방지한 상태에서 교반 추출, 냉침추출, 열수추출, 초음파 추출, 환류냉각 추출, 가열추출 등의 추출방법, 바람직하게는 교반추출 또는 가열추출의 추출방법으로 추출하고, 여과하여 1 내지 10℃에서 1 내지 15일 동안 침적시킨다. 상기 과정을 1 내지 7회, 바람직하게는 1 내지 3회 반복하여 추출한 후 감압 농축하고 건조하여 본 발명의 일 실시예에 따른 생약 복합추출물을 수득할 수 있다.

본 발명의 육모촉진 및 탈모 예방 개선용 외용제조성물에서, 상기 육모촉진 및 탈모예방 개선은 탈모를 자극하는 신호 인자에 의해 활성화된 생체 대사과정을 통해 발생하는 어떠한 탈모증상의 완화, 예방, 또는 개선일 수 있으나, 바람직하게는 남성호르몬인 안드로겐의 분비 촉진에 의해 발생하는 탈모증상의 완화, 예방, 또는 개선인 것이며, 더욱 구체적으로는 5α-환원효소(5α-reductase)의 활성 억제에 의해 수행되는 탈모증상의 완화, 예방, 또는 개선인 것이다.

본 발명의 혼합추출물을 가지고 래트 진모 모낭(Rat vibrissa hair follicle) 분리 배양을 이용하여 모낭(hair follicle)에서의 육모효과와 진피유두세포(dermal papilla cell)증식효과 및 5알파-환원효소(5α-reductase)억제효과를 확인해 본 결과 육모촉진 및 탈모예방 효과가 우수함을 확인할 수 있었다. 본 발명의 혼합추출물은 그 자체적으로 육모촉진 및 탈모예방 개선효과를 가지므로 외용제조성물로 바로 이용될 수 있으며, 육모촉진 및 탈모예방에 효과가 있는 천연추출물들을 함유하는 다른 육모제조성물에 첨가하거나 이러한 천연추출물들을 추출하는데 사용하는 형태로도 이용이 가능하다.

상기 육모촉진 및 탈모 예방 개선용 외용제조성물은 헤어토닉, 헤어컨디셔너, 헤어에센스, 헤어로션, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어트리트먼트, 헤어영양크림, 헤어왁스, 헤어팩, 헤어비누, 헤어무스 또는 헤어스프레이의 제형으로 제조될 수 있다. 또한, 상기 조성물은 액상, 크림상, 페이스트상 또는 고체상 등 제형의 피부외용제로 사용될 수 있다.

본 발명의 생약복합추출물은 외용제조성물의 전 중량에 대하여 0.01 ? 10 중량%, 바람직하게는 0.05 ? 5 중량%, 보다 바람직하게는 0.1 ? 2 중량%의 비율로 함유된다. 본 발명 외용제조성물은 상기 생약복합 추출물에 추가로 지방, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 외용제에 통상 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.

[실시예]

이하, 하기의 실시예와 시험예들을 통하여 본 발명을 상세하게 설명하지만, 본 발명이 이 예들에 의하여 한정되는 것은 아니다.

제조예 1: 한련초 추출물의 제조

경동시장에서 구입한 한련초를 세절하여 1kg을 70%(중량%) 에탄올 10L에 넣고 상온에서 5일간 교반 추출한 후 250메쉬 여과포로 여과하고, 4℃에서 7일간 방치하여 숙성시킨 후 와트만 여과지(N0.5)로 여과하여 추출물 9.0L(고형분 91.5 g)를 얻었다.

제조예 2: 측백엽 추출물의 제조

경동시장에서 구입한 측백엽 1kg을 70%(중량%) 에탄올 10L에 넣고 상온에서 5일간 교반 추출한 후 250메쉬 여과포로 여과하고, 4℃에서 7일간 방치하여 숙성시킨 후 와트만 여과지(N0.5)로 여과하여 추출물 8.9L(고형분 68.8 g)를 얻었다.

제조예 3: 조협 추출물의 제조

경동시장에서 구입한 조협 1kg을 70%(중량%) 에탄올 10L에 넣고 상온에서 5일간 교반 추출한 후 250메쉬 여과포로 여과하고, 4℃에서 7일간 방치하여 숙성시킨 후 와트만 여과지(N0.5)로 여과하여 추출물 9.2L(고형분 81.2 g)를 얻었다.

제조예 4: 한련초, 측백엽, 조협 혼합 추출물의 제조

경동시장에서 구입한 한련초, 측백엽, 조협 각각 500g을 70%(중량%) 에탄올 10L에 넣고 상온에서 5일간 교반 추출한 후 250메쉬 여과포로 여과하고, 4℃에서 7일간 방치하여 숙성시킨 후 와트만 여과지(N0.5)로 여과하여 추출물 9.0L(고형분 162.5 g)를 얻었다.

제조예 5: 한련초, 측백엽, 조협, 편백, 영지버섯, 반하 혼합 추출물의 제조

경동시장에서 구입한 한련초, 측백엽, 조협, 편백, 영지버섯, 반하 각각 500g을 70%(중량%) 에탄올 10L에 넣고 상온에서 5일간 교반 추출한 후 250메쉬 여과포로 여과하고, 4℃에서 7일간 방치하여 숙성시킨 후 와트만 여과지(N0.5)로 여과하여 추출물 8.8L(고형분 232.1 g)를 얻었다.

시험예 1: Rat vibrissa hair follicle의 분리배양을 이용한 육모효과 확인

상기 제조예들에서 얻은 생약 추출물의 탈모 방지 및 육모 효과를 알아보기 위하여 문헌에 기재된 장기배양법(Organ culture method)을 이용하여 하기와 같이 실험을 수행하였다(Jindo and Tsuboi, Jpn. J. Dermatol., 107, pp769-779, 1997; Imai et al., Arch. Dermatol. Res., 284, pp466-471, 1993; Jindo et al., J. Dermatol. 20, pp756-762, 1993; Philpott et al., J. Cell Sci., 97, pp463-471, 1990).

생후 3주령인 위스타 랫(Wistar rat, 샘타코, korea) 수컷을 에틸에테르(ethyl ether)로 마취한 후 경추도살 하였다. Rat왼쪽과 오른쪽 mystacial pads를 분리하여 100units/ml 페니실린(penicillin)-100㎍/ml 스트렙토마이신(streptomycin; Gibco Inc, NY, USA)이 함유된 E/P완충용액[(50% Earle′s balanced salts solution; EBSS, Sigma MO, USA)+(50% Phosphate-buffered saline; PBS, Sigma MO, USA)]에 넣었다. 해부현미경으로 관찰하며 모낭(vibrissa follicle)을 조심스럽게 분리하였다. E/P완충용액을 넣은 페트리접시에 분리된 모낭을 넣고, 37℃, 5% CO₂ 항온기에서 잠시 배양하였다. 24well plate의 각 well당 2mM L-glutamine(Gibco Inc, NY, USA), 10㎍/ml 인슐린(Sigma MO, USA), 50nM 하이드로코티손(hydrocortisone; Sigma MO, USA)과 100units/ml 페니실린-스트렙토마이신을 포함하는 500㎕의 William E medium(Gibco Inc, NY, USA)을 넣고, well당 하나씩의 모낭을 넣어서 37℃, 5% CO₂ 항온기에서 3일마다 배지를 교환하면서 배양하였다. 배양중인 모낭(vibrissa follicle)의 형태는 현미경(Olympus, Japan)으로 관찰하였다. 콘트롤로 정제수를 사용하였고, 양성대조군으로는 미녹시딜 설페이트(minoxidil sulfate)를 1μM의 농도로 처리하였으며, 상기 제조예 1, 2, 3, 4, 5에서 얻어진 추출물을 10μM의 농도로 처리하여 21일후의 모낭의 길이 변화를 이미지 분석처리기(Image analyzer)로 촬영하여 대조군의 평균길이와 비교하여 성장 정도를 측정하였고, 그 결과를 도 1에 나타내었다. 도 1에서 확인되는 바와 같이 상기 제조예의 추출물이 콘트롤에 비하여 개선된 육모효과를 나타냄을 관찰할 수 있었다. 특히 한련초, 측백엽, 조협, 영지버섯, 편백 및 반하의 혼합 추출물은 양성 대조군인 미녹시딜보다 동등하거나 우수한 육모효과를 나타내었다. 이로써 상기 생약제들의 혼합에 따라 상승효과를 나타냄을 확인할 수 있었다.

시험예 2: 5알파-환원효소(5α-reductase) 억제효과 확인

상기 시험예의 결과를 토대로 상기 추출물 처리에 의한 모낭의 육모 효과가 5α-환원효소(5α-reductase) 활성 억제에 의한 것인지 알아보기 위하여 래트 전립선(Rat prostate) 5α-환원효소를 이용하여 첨가한 [³H] 테스토스테론([³H]Testosterone, T)이 [³H] 디히드로테스토스테론([³H]Dihydrotestosterone, DHT)으로 전환되는 양을 측정하였다

생후 7~8주령인 위스타 랫 수컷을 에틸에테르로 흡입마취한 후 경추도살하고 전립선을 떼어내서 액체질소로 급랭하였다. 전립선의 무게를 측정하여 0.32mM 수크로오스(sucrose;Amresco Inc, USA)와 1mM 디티오트레이톨(Dithiothreitol; Sigma, USA)을 함유한 pH 6.5의 20mM photassium phosphate buffer를 1g당 5ml씩 가하였다. 전립선을 호모게나이저(homogenizer)로 분쇄한 후 1000rpm으로 10분간 원심분리하여 여과하였다. 상층액을 회수하여 초원심분리기(Ultra centrifuge; Beckman, USA)로 원심분리한 후, 침전물을 회수하여 20mM photassium phosphate buffer를 가하여 녹였으며, 이것을 5알파-환원효소 분획으로 사용하였다. 단백질농도는 BSA(Bovine serum albumin)를 표준화하여 Bio-Rad protein assay kit(Bio-Rad, USA)를 사용하여 정량하였다. 에펜도르프튜브(Eppendorf tube)에 상기의 5알파-환원효소 분획 250㎍과 120nCi[1,2,6,7-3H]-testosterone, 200μM NADPH(Calbiochem, US), 제조예 1~5의 추출물을 pH 6.6의 40mM potassium phosphate buffer로 첨가해서 500㎕로 만들었다. 37℃에서 30분 동안 반응시킨 후 1ml의 초산에틸을 넣고 1000rpm에서 10분간 원심분리 하였다. 상층액만을 회수하여 감압건조한 후, 50㎕의 초산에틸을 가하여 녹이고, TLC(Thin layer chromatography, Merck, Germany)판에 점적하였다. 전개용매로는 50:50(초산에틸:사이클로헥산)을 사용하였다. 테스토스테론(Testosterone)은 UV램프(UVGL-58, Upland, USA)를 사용하여 254nm에서 확인하였고, 디하이드로테스토스테론(dihydrotestosterone ; DHT)은 10% 황산을 뿌린 후 가열하여 확인하였다. TLC판에서 테스토스테론 및 디하이드로테스토스테론 부위를 오려내어 신틸레이션 바이알(scintilation vial)에 넣고 5ml의 cocktail을 넣은 후, LSC(Liquid scintilation counter, Packard Instruments, USA)를 사용하여 cpm(counter per minute)을 측정하였다. 5알파-환원효소 활성에 의한 테스토스테론의 전환율을 DHT/(testosterone+DHT)의 비로 계산하여 대조군에 대한 %로 나타내었다(도 2). 도 2에서 확인되는 바와 같이 상기 제조예의 추출물에 의하여 5알파-환원효소의 활성이 감소하였으며, 특히 제조예 5의 추출물에 의하여 대조군과 비교하여 5알파-환원효소 활성이 크게 감소하였다.

시험예 3:발모효과 시험

실험동물

생후 5주된 암컷 C57BL/6 마우스(㈜ 중앙실험동물)를 1주간 동물 사육실 환경에 적응 시킨 후 실험에 사용하였다. 동물 사육실은 온도 23±3℃, 12 시간씩 밤낮을 유지하였다. 실험동물은 격리용 마우스 케이지에서 사육하였고, 실험용 사료를 자유로이 급여하였다. 실험군은 6개의 군으로 설정하여 대조군(시료 무처리군), 양성 대조군(3% minoxidil(현대약품) 도포군), 제조예 1 내지 5 추출물 도포군으로 하였다. 한 실험군에 각 6마리의 마우스를 실험에 이용하였다.

시료 도포 및 육모 효능 관찰

검역 및 순화 기간 중 이상이 발견되지 않은 건강한 동물만을 대상으로 순화종료 시점(P42~43day)에 electric clipper(ER143 / Panasonic / Japan)를 이용하여 1차 제모 후 shaving form (Gillette foamy sensitive / Gillette (35735378)/ Australia)을 바르고 shaving razor(Gillette Venus / Gillette (46239951)/ U.S)를 이용하여 가로로 등쪽 경부에서 꼬리 기시부까지의 길이와 세로로 등쪽 정중선을 기준으로 좌?우 각각 1 cm 이상의 폭에 대하여 2차 제모를 실시하여 등쪽 피부색이 균질한 핑크색을 보이는 개체만을 선별하여 실험에 사용하였다. 군 분리는 제모 다음날 실시하도록 하며 제모과정에서 찰과 및 심한 발적이 발생하지 않은 동물만을 이용하여 체중 기준으로 Z배열법에 따라 군 분리하였다.

제모부위에 붓을 댄 후 시험물질 200 ul을 micropipette을 이용하여 붓끝에 분주한 후 상하 방향으로 제모부위 전체에 균질하게 1일 1회 21일간 도포하였다.

제모 당일을 0 week로 하여 0, 1, 2, 3, 4 week로 총 5회에 걸쳐 디지털 카메라(Canon EOS 30D / Canon / Japan)를 이용하여 사진촬영을 하였다(도 3). 사진촬영에 사용되는 동물은 dimethyl ether를 이용하여 가볍게 마취하여 사진촬영 하였다.

하기 표 1의 평가기준에 따라 발모상태를 평가하였다.

모발성장정도	점수화	판정
0~20%	-	효과 없음
21~40%	±	미약
41~60%	+	양호
61~80%	++	우수함
81%이상	+++	매우 우수함

사진 평가에서 얻어진 image file를 대상으로 평가 시점별로 Image Analysis Software(ImagePartner / SaramSoft / Korea)를 이용하여 전체 제모면적 중 모발이 성장한 부분의 비율을 백분율(%)로 산출하여 표 2에 나타내었다.

피모 재성장면적(Hair regrowth rate)(%)=피모가 자란 면적/전체 제모한 면적×100

group	hair regrowth area(%)(mean ± S.D.)
group	0 week	2 weeks	4 weeks
Control	0	34.24±15.56	85.57±4.23
3% Minoxidil	0	42.78±16.35	96.03±2.65
제조예 1	0	32.44±7.17	77.36±7.78
제조예 2	0	23.67±11.24	71.23±13.24
제조예 3	0	15.12±4.98	68.76±5.27
제조예 4	0	28.45±6.28	86.44±4.45
제조예 5	0	56.55±14.19	94.56±7.88

실험동물의 제모한 날을 0일로 시작하여 시험종료일 28일까지 투여하는 동안 7일 간격으로 찍은 사진으로 등의 육모의 정도를 Image J를 사용하여 분석하였다.

분석결과 생리식염수만을 도포한 대조군에서 2주째 평균 34.24±15.56% 면적에서 4주째 평균 85.57±4.23%　면적이 나타났다. 양성 대조물질인 Minoxidil은 2주째 평균 42.78±16.35% 면적에서 4주째 평균 96.03±2.65% 면적으로 모낭의 빠른 성장이 나타났다. 시험물질 제조예 1의 경우 2주째 평균 32.44±7.17%, 4주째에 77.36±7.78%로 증가하였으며, 제조예 2의 경우 2주째 평균 23.67±11.24% 면적에서 4주째 평균 71.23±13.24%로 증가하였다. 제조예 3의 경우 2주째 평균 15.12±4.98%에서 4주째에 평균 68.76±5.27%로 나타났으며, 제조예 4의 경우 2주째 평균 28.45±6.28%, 4주째에 86.44±4.45%로 증가하였다. 제조예 5의 경우 2주째 평균 56.55±14.19%, 4주째에 94.56±7.88%로 증가하였다.

육모면적을 기준으로 양성대조군인 미녹시딜군과 제조예 5는 (+++)로 매우 우수한 것으로 나타났으며, 제조예 4는 (++)로 우수하게 나타났고, 제조예 1, 2, 3의 경우에는 비교 우위가 나타나지 않았다.

실시예 1:헤어토닉의 제조

하기의 표 3과 같은 조성을 가지는 헤어토닉을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

번 호	원 료	함 량(중량%)
1	제조예 5의 추출물	5.00
2	피마자유	5.00
3	레조시놀	0.10
4	멘톨	0.05
5	판테놀	0.20
6	살리실산	0.10
7	토코페릴 아세테이트	0.10
8	염산피리독신	0.10
9	색소	적량
10	조합향료	적량
11	에탄올	적량
12	정제수	잔량
	계	100.00

실시예 2: 헤어샴푸의 제조

하기의 표 4와 같은 조성을 가지는 헤어 샴푸를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

번호	조성	함량(%)
1	암모늄라우릴설페이트(ALS)	20.00
2	암모늄라우레스설페이트(ALES)	20.00
3	코카마이드미파	적량
4	디소듐이디티에이	0.03
5	한방추출물	30.00
6	카보머	적량
7	에탄올	적량
8	제조예 5의 추출물	5.00
9	혼합추출물	6.00
10	코카마이드프로필베타인	6.00
11	디메치콘(50%)	2.00
12	메칠파라벤	적량
13	DL-판테놀	적량
14	토코페릴아세테이트	적량
15	트리에탄올아민	적량
16	조합향료	적량
17	멘톨	적량
18	디메치콘(70%)	2.00
19	메칠클로로이소치아졸리논 메칠이소치아졸리논 혼합액 (MC/IMI)	0.03
20	정제수	잔량
	계	100.00

실시예 3: 헤어 컨디셔너

하기의 표 5와 같은 조성을 가지는 헤어 컨디셔너를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

번 호	원 료	함 량(%)
1	제조예 5의 추출물	5.00
2	세탄올	3.50
3	자기유화형 모노스테아린산글리세린	1.50
4	프로필렌 글라이콜	2.50
5	염화스테아릴메틸벤질 암모늄(25%)	7.00
6	파라옥시안식향산메틸	0.30
7	색소	적량
8	조합향료	적량
9	정제수	잔량
	계	100.00

실시예 4: 헤어로션

하기의 표 6과 같은 조성을 가지는 헤어로션을 제조하였다.

번 호	원 료	함 량(%)
1	제조예 5의 추출물	5.00
2	레조시놀	2.00
3	멘톨	2.00
4	판테놀	0.50
5	피록톤올아민	0.10
6	색소	적량
7	조합향료	적량
8	정제수	잔량
	계	100.00

실시예 5: 헤어비누

하기의 표 7과 같은 조성을 가지는 헤어비누를 제조하였다.

번 호	원 료	함 량(%)
1	제조예 5의 추출물	0.10
2	이산화티탄	0.20
3	폴리에틸렌글라이콜	0.80
4	글리세린	0.50
5	에틸렌디아민테트라아세트산	0.05
6	나트륨	1.00
7	색소	적량
8	비누향	적량
9	화장비누베이스(수분13%, 중량부)	잔량
	계	100.00

Claims

한련초, 측백엽, 조협, 편백, 영지버섯 및 반하의 복합추출물을 유효성분으로 함유하는 육모촉진 및 탈모 예방 개선용 외용제조성물.
제1항에 있어서, 상기 복합추출물은 한련초, 측백엽, 조협, 편백, 영지버섯 및 반하를 각각 1~10 : 1~5 : 1~5 : 1~5 : 1~5 : 1~5의 중량비로 혼합한 후 추출되는 것임을 특징으로 하는 외용제조성물.
제1항에 있어서, 상기 복합추출물은 정제수, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 에틸아세테이트, 글리세린, 프로필렌글리콜 및 부틸렌글리콜로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 용매로 추출하여 제조되는 것임을 특징으로 하는 외용제조성물.
제1항에 있어서, 상기 복합추출물은 외용제조성물 전체 중량에 대하여 0.01~10중량% 포함되는 것을 특징으로 하는 외용제조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 외용제조성물은 헤어토닉, 헤어컨디셔너, 헤어에센스, 헤어로션, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어트리트먼트, 헤어영양크림, 헤어왁스, 헤어팩, 헤어비누, 헤어무스 또는 헤어스프레이로 이루어지는 군으로부터 선택되는 제형인 것임을 특징으로 하는 외용제조성물.