KR20120087916A

KR20120087916A - 마크로시클릭 인테그라제 억제제

Info

Publication number: KR20120087916A
Application number: KR1020127009345A
Authority: KR
Inventors: 조한네스 윌헬무스 제이. 투링; 쟌-프랑수아 본판티; 제롬 미첼 클라우드 포틴
Original assignee: 엘랑코 애니멀 헬쓰 아일랜드 리미티드
Priority date: 2009-10-13
Filing date: 2010-10-13
Publication date: 2012-08-07
Also published as: AU2010305805A1; CN102574854B; ES2446720T3; IL218845A0; US8497270B2; EP2488521B1; CA2777664A1; BR112012008586A2; WO2011045330A1; JP5624148B2; MX2012004426A; CN102574854A; JP2013507423A; EP2488521A1; EA019558B1; EA201270540A1; AU2010305805B2; ZA201202516B; CA2777664C; US20120172367A1

Abstract

화학식 I의 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염, 그의 제약 제제 및 HIV 억제제로서의 용도.
<화학식 I>

상기 식에서,
- W는 NH-, -N(CH₃)- 또는 피페라진이고,
- X는 결합, -C(=O)- 또는 S(=O)₂-이고,
- Y는 C₃ _- ₇알킬렌이고,
- Z는 NH-C(=O)- 또는 -O-이다.

Description

마크로시클릭 인테그라제 억제제{MACROCYCLIC INTEGRASE INHIBITORS}

본 발명은 HIV (인간 면역결핍 바이러스) 복제 억제 특성을 갖는 나프티리딘 유도체, 이의 제조 및 이들 화합물을 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.

초기에, HIV 감염의 치료는 뉴클레오시드 유도체를 사용한 단일요법으로 이루어졌고 비록 바이러스 복제의 억압에는 성공했지만, 이들 약제는 약제 내성 균주의 출현으로 인해 그의 유효성을 급속히 상실하였다. 신속한 복제와 조합된 높은 돌연변이율은 HIV를 항바이러스요법에 대해 특히 도전적인 표적으로 만든다는 것이 명백해졌다. 몇몇 항-HIV제의 병용 요법의 도입은 치료 결과를 개선시켰다. 현재 치료의 표준은 소위 HAART(고활성 항레트로바이러스 요법: Highly Active Anti-Retroviral Therapy)이고, 이는 강력하고 지속적인 바이러스 억압을 제공한다. HAART는 전형적으로 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 역전사효소 억제제 (각각 NRTI 또는 NtRTI)의 비(non)-뉴클레오시드 역전사효소 억제제 (NNRTI), 프로테아제 억제제 (PI), 및 인테그라제 억제제 또는 침입 억제제와의 병용을 포함한다. 항레트로바이러스 요법의 현재 지침은 심지어 초기 치료에 대해서도 적어도 3중 병용 요법을 권장한다. 비록 HAART가 HIV를 검출불가능한 수준까지 억압할 수 있지만, 복약준수(compliance) 문제로 인해 내성이 출현될 수 있다. 내성 바이러스는 신규 감염 환자에게로 이월하여, 이들 약제-초회 환자에 대한 치료 선택법을 심각하게 제한하는 것으로 또한 밝혀져 있다.

따라서 항-HIV 약제로서 사용될 수 있는 신규하고 효과적인 화합물에 대한 지속적인 필요성이 있다. 특히, 야생형 바이러스에 대한 활성뿐만 아니라, 돌연변이 균주에 대한, 특히, 현재 승인되거나 거의 승인된 인테그라제 억제제, 예컨대 랄테그라비르(raltegravir) 또는 엘비테그라비르(elvitegravir)에 의해 선택된 돌연변이 균주에 대한 활성면에서도 더 효과적인 추가의 HIV 인테그라제 억제제가 필요하다. 랄테그라비르 요법 도중 가장 빈번히 발생하는 1차 돌연변이에는 N155H 및 Q148K/R/H가 포함되고, 드물게는 Y143R/C가 포함된다. N155 또는 Q148 돌연변이의 획득은 구조적으로 다양한 인테그라제 억제제에 대해 교차 내성을 생성하는 것으로 밝혀졌다.

약동학 및/또는 약력학 프로파일 면에서 이점을 제공하는, 특히 광대한 단백질 결합이 결여된 인테그라제 억제제가 필요하다. 추가의 인테그라제 억제제의 개발에 고려되어야 할 추가의 측면은 양호한 안전성 프로파일, 투약 및/또는 강화(boosting)의 필요의 결핍을 포함한다.

다른 HIV 인테그라제 억제제가 당분야에 공지되어 있다. 예를 들어, WO0255079, WO0230931, WO0230930 및 WO0230426 (모두 머크 앤드 캄퍼니 인코퍼레이티드(Merck & Co., Inc.)에 의함)에는 HIV 인테그라제의 억제제로서 유용한 아자- 및 폴리아자-나프탈레닐 카르복사미드가 개시되어 있다. WO0236734 (머크 앤드 캄퍼니 인코퍼레이티드에 의함)에는 추가로 HIV 인테그라제의 억제제로서 유용한 아자- 및 폴리아자-나프탈레닐 케톤이 개시되어 있다. 문헌 [Roggo et al., Journal of antibiotics (1996)]에는, 스피로디히드로벤조푸란락탐이 엔도텔린의 길항제로서 및 HIV-1 프로테아제의 억제제로서 개시되어 있다.

시오노기 앤드 캄퍼니(Shionogi & Co.)에 의한 EP0459449에는 푸라노[2,3-F]이소인돌이 알도스 환원효소 억제제로서 개시되어 있다. CS225002 (크레펠카 지리(Krepelka Jiri) 및 빌크코바 드라후제(Vlckova Drahuse)에 의함)에는 마우스 및 래트에서 종양을 억제할 수 있는 9-페닐-1H-벤조[f]이소인돌-1,3-디온 유도체가 개시되어 있다. 유사하게, CS210880 (크레펠카 지리, 반쿠로바 이바(Vancurova Iva) 및 로비크 지리(Roubik Jiri)에 의함)에는 특정 4-아릴나프탈렌-2,3-디카르복실산 이미드가 항신생물(antineoplastic) 활성 화합물로서 개시되어 있다. 크레펠카 등에 의한 논문 [Collect. Czech. Chem. Commun. (1982), 47(1), pp304-14]에는 1-치환 4-아릴나프탈렌-2,3-디카르복실산의 일부 N-치환 이미드의 합성 및 신생물 효과(neoplastic effect)가 개시되어 있다. 다환식 카르바모일피리돈은 또한 HIV 인테그라제의 억제제로서 스미스클라인 비참 코퍼레이션 (Smithkline Beecham Corp.) 및 시오노기에 의한 EP1874117에 개시되어 있다. 브리스톨 마이어스 스퀴브 (Bristol Myers Squibb)의 WO2005118593에는 일련의 이환식 헤테로사이클이 인테그라제 억제제로서 개시되어 있고, WO2004103278에는 일련의 아실 술폰아미드가 HIV 인테그라제의 억제제로서 개시되어 있다. 길리애드 사이언시즈 인코포레이티드 (Gilead Sciences Inc.)는 WO2005028478에서 일련의 아자-퀴놀리놀 포스포네이트 화합물을 인테그라제 억제제로서 및 WO2004035577에서 일련의 예비-체계화된(pre-organised) 삼환식 인테그라제 억제제를 개시하였다. 더욱이, 일련의 피리도피라진 및 피리미도피라진-디온 화합물이 이스티투토 디 리세르쉐 디 비올로지아 몰레콜라레 피 안젤레티 에스피에이(Istituto di Ricerche di Biologia Molecolare p Angeletti Spa)에 의해 WO2005087766에 개시되었다. 추가로, 테트라히드로-4H-피리도 (1,2-a) 피리미딘 및 관련 화합물들이 이스티투토 디 리세르쉐 디 비올로지아 몰레콜라레 피 안젤레티 에스피에이에 의해 WO2004058757에 개시되었다. 니뽄 다바코 산교 가부시키가이샤 (Japan Tobacco Inc)는 WO2004046115에서 4-옥시퀴놀린 화합물을 HIV 인테그라제 억제제로서 및 US20080207618에서 6-(헤테로사이클-치환 벤질)-4-옥소퀴놀린 화합물을 HIV 억제제로서 개시한 바 있다.

본 발명은 HIV 인테그라제 및 HIV 복제 억제 특성을 갖는 특정의 신규한 일련의 나프티리딘 유도체를 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명의 화합물은 구조, 항바이러스 활성 및/또는 약리 효능이 종래 기술의 화합물과 상이하다. 본 화합물은 야생형 바이러스에 대해서 뿐만 아니라, 돌연변이 균주에 대해서도, 특히, 약제- 또는 다제내성(multidrug-resistant) HIV 균주로서 언급되는, 하나 이상의 공지된 인테그라제 억제제에 대해 내성을 나타내는 균주에 대해서도 매우 활성인 것으로 밝혀졌다.

따라서, 한 측면에서, 본 발명은 화학식 I로 나타낼 수 있는, 그의 입체화학적 이성체 형태를 포함하는, 화학식 I의 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염에 관한 것이다.

<화학식 I>

상기 식에서,

- W는 -NH-, -N(CH₃)- 또는 피페라진이고,

- X는 결합, -C(=O)- 또는 -S(=O)₂-이고,

- Y는 C_3-7알킬렌이고,

- Z는 -NH-C(=O)- 또는 -O-이다.

분자 단편 또는 기에서 사용되는 모든 경우에, 파선 - - - 은 그 단편 또는 기를 분자의 나머지 부분과 연결시키는 결합을 나타낸다.

본원에서 사용된 바와 같이 C₃ _- ₇알킬렌은 기 또는 기의 부분으로서 3 내지 7개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 이가 포화 탄화수소 라디칼, 예컨대 프로필렌, 2-프로필, 1-부틸렌, 프로필렌, 헥실렌 또는 헵틸렌으로 정의된다. C₃ _- ₇알킬렌 중 관심 대상은 C₄ _- ₅알킬렌 또는 C₃ _- ₄알킬렌이고; C₄ _- ₅알킬렌은 4 또는 5개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 이가 포화 탄화수소 라디칼로 정의되고; C₃ _- ₄알킬렌은 3 또는 4개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 이가 포화 탄화수소 라디칼로 정의된다. 관심 대상은 알킬렌 라디칼이 직쇄인 경우이다.

라디칼이 화학식 I의 화합물의 정의에서 또는 본원에서 구체화된 임의의 하위군(subgroups)에 존재하는 모든 경우에, 상기 라디칼은 독립적으로 화학식 I의 화합물의 정의에서 상기 구체화된 바와 같거나 이하 구체화된 바와 같은 더 제한적인 정의에 있다.

정의에서 사용된 임의의 분자 부분 (moiety) 상의 라디칼 위치는 화학적으로 안정하기만 하면 이러한 부분 상의 어느 곳이나 상관 없음을 또한 주지하여야 한다. 예를 들어 부틸에는 1-부틸 및 2-부틸이 포함된다.

화학식 I의 화합물의 일부는 또한 그의 호변이성체 형태로 존재할 수 있다. 이러한 형태는 비록 상기 화학식에서 명시적으로 나타나 있지는 않지만 본 발명의 범주내에 포함시키고자 한다.

본 발명은 또한 본 발명의 화합물에 존재하는 원자의 임의의 동위원소를 포함하고자 한다. 예를 들어, 수소의 동위원소는 삼중수소 및 중수소를 포함하고, 탄소의 동위원소는 C-13 및 C-14를 포함한다.

이상 또는 이하에서 본원에서 사용되는 모든 경우에, 용어 "화학식 I의 화합물", " 본 화합물", "본 발명의 화합물" 또는 임의의 등가어(equivalent terms), 및 마찬가지로, 용어 "화학식 I의 화합물의 하위군", "본 화합물의 하위군", "본 발명의 화합물의 하위군" 또는 임의의 등가어는 화학식 I의 화합물, 또는 화학식 I의 화합물의 하위군, 뿐만 아니라 그의 염, 용매화물 및 입체이성체를 포함하는 것을 의미한다.

임의의 변수가 임의의 부분에서 1회 초과로 존재하는 경우, 각각의 정의는 독립적이다. 본원에서 구체화된 라디칼의 임의의 제한된 정의는 화학식 I의 화합물의 군 뿐만 아니라 본원에서 정의되고 언급된 임의의 하위군에도 적용되는 것을 의미한다.

화학식 I의 화합물의 하위군은,

- W가 -NH- 또는 -N(CH₃)-이거나,

- X가 결합 또는 -S(=O)₂-이거나,

- Y가 C₄ _- ₅알킬렌이거나,

- W가 피페라진인 경우 X가 -C(=O)-이고 Y가 C₃ _- ₄알킬이거나,

- Z가 -O-이거나,

- Z가 -NH-C(=O)-, 특히 여기서 -NH-C(=O)-의 질소가 Y에 결합되거나,

- -W-X-Y-Z- 링커(linker)가 8 또는 9개의 원자 길이이거나,

- -W-X-Y-Z-가

---NH-C₅ _- ₇알킬렌-NH-C(=O)---,

---N(CH₃)-S(=O)₂-C₄ _- ₅알킬렌-NH-C(=O)---,

---N(CH₃)-S(=O)₂-C₄ _- ₅알킬렌-O---,

로부터 선택되는 것인,

본원에서 정의된 바와 같은, 화학식 I의 화합물, 또는 화학식 I의 화합물의 하위군이다.

본 발명의 화합물이 형성할 수 있는 제약상 허용되는 부가염 형태는 적합한 산, 예를 들어 무기산, 예컨대 할로겐화수소산 (예를 들어 염산 또는 브로민화수소산), 황산, 헤미황산(hemisulphuric acid), 질산, 인산 등; 또는 유기산, 예컨대 메탄술폰산, 에탄술폰산, 벤젠술폰산, p-톨루엔술폰산 등을 사용하여 편리하게 제조할 수 있다. 역으로, 상기 산 부가염 형태를 적합한 염기로 처리하여 유리 염기 형태로 전환시킬 수 있다.

산성 프로톤을 함유하는 화학식 I의 화합물을 적합한 유기 및 무기 염기로 처리하여 그의 제약상 허용되는 금속 또는 아민 부가염 형태로 전환시킬 수 있다. 적합한 염기염 형태에는 예를 들어 암모늄염, 알칼리 및 알칼리토금속 염, 예를 들어 리튬, 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 칼슘 염 등, 유기 염기, 예를 들어 1급, 2급 및 3급 지방족 및 방향족 아민, 예컨대 메틸아민, 에틸아민, 프로필아민, 이소프로필아민, 4개의 부틸아민 이성체, 디메틸-아민, 디에틸아민, 디에탄올아민, 디프로필아민, 디이소프로필아민, 디-n-부틸아민, 피롤리딘, 피페리딘, 모르폴린, 트리메틸아민, 트리에틸아민, 트리프로필아민, 퀴누클리딘, 피리딘, 퀴놀린 및 이소퀴놀린과의 염, 벤자틴, N-메틸-D-글루카민, 2-아미노-2-(히드록시메틸)-1,3-프로판디올, 히드라바민 염, 및 아미노산, 예컨대 아르기닌, 리신 등과의 염이 포함된다. 역으로, 상기 염 형태를 산으로 처리하여 유리 산 형태로 전환시킬 수 있다.

화합물의 제조

본 발명에 따른 화합물은 일반적으로 일련의 단계로 제조할 수 있고, 이의 각각은 당업자에게 공지되어 있다. 특히, 본 특허 출원의 화합물은 하기 제조 방법 중 하나 이상에 따라 제조할 수 있다. 하기 반응식에서, 달리 명시되지 않는 한, 사용된 모든 변수는 화학식 I의 화합물에 대해 정의된 바와 같다.

본 발명의 화학식 I을 갖는 마크로사이클은 화학식 II의 "개방" 전구체를 포함하는 고리화(cyclization) 반응에 따라 제조할 수 있고, 여기서 1,6-나프티리딘의 8-히드록실 관능기가 보호기 (PG)에 의해 보호되거나, 또는 대안으로, 유리 히드록실 관능기로서 보호되지 않은 상태를 유지하고 사용된다. 상기 히드록실 관능기에 대한 적합한 보호기의 예는 C₁ _- ₄알킬, 벤질, 아릴 술포닐, 및 벤조일이다. 상기 고리화는 반응식 1에 도시된 바와 같이, 나프티리딘 골격(scaffold)의 7-위치에서의 카르복실산 관능기를 포함하는 아미드 결합의 형성을 통해 수행될 수 있고, 탈수 시약의 존재를 필요로 한다. 통상 사용되는 예는 HBTU (O-벤조트리아졸-N,N,N',N'-테트라메틸 우로늄 헥사플루오로포스페이트), EDCI (1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드)(1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드), EDAC (1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필) 카르보디이미드 히드로클로라이드), 또는 FDPP (펜타플루오로페닐 디페닐포스피네이트)이다. 특정한 실시양태에서 상기 탈수 시약은 HBTU 또는 FDPP이다. 반응은 전형적으로, 화학식 II의 개방 전구체를 상기 탈수제 및 과량의 3급 아민, 예컨대 디이소프로필 에틸 아민 등을 함유하는 혼합물에 서서히 가함으로써 수행한다. 유용한 용매는 비양성자성 용매, 예컨대 CH₂Cl₂, 또는 더 바람직하게는 극성 비양성자성 용매, 예컨대 DMF이다. 특정 환경하에서는 HOBT (히드록시벤조트리아졸)를 첨가제로서 사용하는 것이 유리하다. 바람직한 실시양태에서 고리화 반응은 개방 전구체 (II)의 저농도에서, 예컨대 1 내지 10 mM의 범위에서, 특히 4 mM에서 수행한다.

또 다른 실시양태에서, 거대고리화(macrocyclization) 반응은 예를 들어 Z가 식 -NH-C(=O)-의 아미드 결합을 나타내는 화학식 I의 화합물의 제조에서 링커 영역 -W-X-Y-Z-에서 수행할 수 있고, 여기서 화학식 IIa의 중간체를 앞서 기재한 바와 같은 방법론을 사용하여 고리화시켜 마크로시클릭 아미드 결합을 형성시킨다.

반응식 1에 제시된 바와 같은 화학식 III의 화합물의 8-히드록실기의 탈보호는 다양한 조건을 사용하여 수행할 수 있고, 특정한 보호기 PG에 좌우된다. 한 실시양태에서 PG가 벤질인 경우, 화학식 III의 마크로사이클은 0℃ 내지 80℃의 온도에서 트리플루오로 아세트산으로 처리할 수 있다. 임의로, 디클로로메탄과 같은 비양성자성 공용매를 유리하게 사용할 수 있다. 생성된 벤질 탄소양이온 (benzylic carbocation)을 트래핑하는 작용제, 예를 들어 트리이소프로필 실란 등을 적용하는 것이 또한 유리할 수 있다. 제2 실시양태에서, PG가 Me인 경우, 화학식 III의 마크로사이클은 극성 비양성자성 용매, 예컨대 아세토니트릴 등, 및 방향족 무극성 용매, 예컨대 톨루엔 등으로 이루어진 용매 혼합물 중에서 아이오딘화나트륨 및 테트라클로로 실란으로 처리할 수 있다. 상기 변환은 유리하게는 0℃ 내지 실온의 온도 범위에서 수행한다. 대안으로, 상기 탈보호는 저온에서, 예컨대 -78℃에서 비양성자성 용매, 예컨대 디클로로메탄 등 중에서 붕소 시약, 예컨대 삼브로민화붕소 (BBr₃)를 사용하여 수행한다. 제3 실시양태에서, PG가 파라 톨릴 술포닐인 경우, 화학식 III의 마크로사이클은 상응하는 알콜 용매 중 나트륨 알콕시드, 예를 들어 메탄올 중 나트륨 메톡시드로 실온에서 처리할 수 있다. 임의로 극성 비양성자성 공용매, 예컨대 DMF 등을 적용할 수 있다.

화학식 II의 화합물은 화학식 IV의 화합물로부터, 화학식 IIa의 화합물은 화학식 VI의 화합물로부터, 각각 반응식 2 및 반응식 2a에 기재되고 제시된 바와 같은 적합한 탈보호 방법을 사용하여 수득한다.

화학식 XI의 화합물로부터 시작하여 화학식 IV 또는 VI의 중간체 화합물의 (하위군)을 수득하는 다양한 방법은 반응식 3, 4, 4a, 4b, 4c, 5a, 5b 및 5c에 기재되고 제시되어 있다.

화학식 XI의 나프티리딘은 상이한 보호기 (PG)로 제조할 수 있다. PG의 선택은 앞서 정의된 바와 같은 특정한 관능기 A, B, C 및 D에 좌우된다. PG는 반응식 1에 나타낸 바와 같이, 화학식 XIa의 히드록실 나프티리딘에 부착된다. PG가 벤질 또는 C₁ _- ₄알킬인 경우, 상기 나프티리딘 (XIa)을 극성 비양성자성 용매, 예컨대 DMF 등 중에서 무기 염기, 예컨대 탄산세슘 등으로 처리한 다음, C₁ _- ₄알킬 할라이드, 예컨대 메틸 아이오다이드 또는 벤질 브로마이드를 가하여 화학식 XI의 중간체를 수득한다. 이 반응은 가장 유리하게는 실온에서 수행한다. 대안으로, PG가 파라 톨릴 술포닐인 경우, 상기 나프티리딘 (XIa)을 3급 아민 염기, 예컨대 트리에틸 아민 등의 존재하에 파라 톨루엔 술포닐 클로라이드로 처리한다. 적합한 용매는 염소화 탄화수소, 예컨대 클로로포름 등이고, 반응 온도는 20℃ 내지 50℃이어야 한다.

<반응식 1>

화학식 II의 개방 전구체는 반응식 2에 나타낸 바와 같이, 화학식 IV의 보호된 전구체로부터 시작하여 두 단계로 제조할 수 있다: 먼저, 화학식 IV의 카르복실산 에스테르를 비누화하여 화학식 V의 상응하는 카르복실산을 수득한다. 이러한 변환은 금속 수산화물 (M-OH), 예컨대 수산화칼륨, 수산화나트륨 또는 수산화리튬을 사용하여 수행할 수 있다. 반응은 수성 환경에서 수행하고, 가장 유리하게는 하나 이상의 수 혼화성 유기 공용매, 예컨대 메탄올, 에탄올 또는 THF 등의 존재하에 수행한다. 제2 단계에서, 아민 Boc 보호기를 제거하여 화학식 II의 마크로사이클 전구체를 수득하였다. 이는 화학식 V의 Boc 중간체를 임의로 트리이소프로필 실란의 존재하에, 비양성자성 용매, 예컨대 디클로로메탄 등 중에서 트리플루오로 아세트산 함유 용액으로 처리함으로써 달성할 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 상기 변환은 0℃ 내지 실온에서 수행한다. 대안으로, 상기 탈보호는 (V)를 극성 비양성자성 용매, 예컨대 디옥산 중 염산의 용액으로, 특히 디옥산 중 HCl의 4N 용액으로 처리하여 수행할 수 있다.

<반응식 2>

화학식 IIa의 개방 전구체는 반응식 2a에 나타낸 바와 같이, 화학식 VI의 보호된 전구체로부터 시작하여 두 단계로 제조할 수 있다:

<반응식 2a>

먼저, 화학식 VI의 카르복실산 에스테르를 비누화하여 화학식 VII의 상응하는 카르복실산을 수득한다. 이러한 변환은 금속 수산화물 (M-OH), 예컨대 수산화칼륨, 수산화나트륨 또는 수산화리튬을 사용하여 수행할 수 있다. 반응은 수성 환경에서 수행하고, 가장 유리하게는 하나 이상의 수 혼화성 유기 공용매, 예컨대 메탄올, 에탄올 또는 THF 등의 존재하에 수행한다. 제2 단계에서, 아민 Boc 보호기를 제거하여 화학식 IIa의 마크로사이클 전구체를 수득하였다. 이는 화학식 VII의 Boc 중간체를 임의로 트리이소프로필 실란의 존재하에, 비양성자성 용매, 예컨대 디클로로메탄 등 중에서 트리플루오로 아세트산 함유 용액으로 처리함으로써 달성할 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 상기 변환은 0℃ 내지 실온에서 수행한다.

화학식 VI의 전구체는 반응식 3에 도시된 바와 같이, 화학식 VIII의 나프티리딘으로부터 두 단계로 제조할 수 있다. 제1 단계는 중간체 (VIII)의 비누화를 포함하고, 이는 금속 수산화물 (M-OH), 예컨대 수산화칼륨 또는 수산화나트륨과의 반응에 의해 수행할 수 있다. 반응은 수성 환경에서 수행하고, 가장 유리하게는 하나 이상의 수 혼화성 유기 공용매, 예컨대 메탄올 등의 존재하에 수행한다. 카르복실산 (IX)의 화학식 VI의 아미드로의 추가 전환은 당분야의 공지된 절차, 예컨대, 비양성자성 용매, 예컨대 CH₂Cl₂ 중 통상의 아미드 커플링 시약, 예컨대 HBTU (O-벤조트리아졸-N,N, N' , N'-테트라메틸 우로늄 헥사플루오로포스페이트), EDCI (1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드), 또는 EDAC (1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필) 카르보디이미드 히드로클로라이드)의 존재하에, 아민 염기 첨가제, 예컨대 디이소프로필 에틸 아민의 존재하에, 화학식 X의 1급 아민의 염산염, 예컨대 C₁ _- ₂알킬이 메틸인 경우의 메틸 2-(아미노메틸)-5-플루오로벤조에이트 히드로클로라이드로의 처리를 사용하여 행한다. 특정 환경하에서는 HOBT (히드록시벤조트리아졸)를 첨가제로서 사용하는 것이 유리하다.

<반응식 3>

화학식 VIIIf의 중간체는 앞서 정의된 바와 같은 관능기 W 및 X의 성질에 의존하여, 몇 가지 방법으로 제조할 수 있다. 제1 실시양태에서, W가 -NH-이고, X가 결합인 경우, 반응식 4에 나타낸 바와 같은 반응을 사용할 수 있다. 이 반응에서 적합한 보호기 (PG)는 Me 및 Bn이다. 상기 변환은 일-보호된(mono-protected) 비스-아민 링커 (XII)의 사용을 포함한다. 더 특히, 상기 보호기는 Boc기이다. 상기 링커는 극성 비양성자성 용매, 예컨대 DMA 중 브로마이드 (XI)와 3급 아민, 예컨대 디이소프로필 에틸 아민 등의 혼합물을 아민 (XII)으로 처리함으로써 도입할 수 있다. 이 반응을 가장 유리하게는 온도 범위 80 내지 160℃에서, 특히 140℃에서 수행하여 화학식 VIIIf의 카르복실산 에스테르를 수득한다.

<반응식 4>

제2 실시양태에서, W가 피페라지닐이고, X가 결합인 경우, 반응식 4a에 나타낸 바와 같은 순서를 따를 수 있다. 제1 단계에서, 피페라진을 화학식 XI의 나프티리딘에 혼입한다. 이는 극성 비양성자성 용매, 예컨대 DMA 중 브로마이드 (XI)와 3급 아민, 예컨대 디이소프로필 에틸 아민 등의 혼합물을 피페라진으로 처리함으로써 행할 수 있다. 이 반응을 가장 유리하게는 온도 범위 80 내지 140℃에서, 특히 110℃에서 수행하여 화학식 XIII의 피페라진을 수득한다. 제2 단계에서, 상기 피페라진 (XIII)을 화학식 XIV의 브로모 함유 링커로 처리한다. 예를 들어, Y가 C₄알킬인 경우, 상기 링커는 tert-부틸 4-브로모부틸카르바메이트이다. 이러한 변환은 무기 염기, 예컨대 탄산칼륨 등의 존재를 필요로 한다. 반응을 유리하게는 극성 비양성자성 용매, 예컨대 DMA 등 중에서 수행하여 화학식 VIIIa의 나프티리딘을 수득한다.

<반응식 4a>

제3 실시양태에서, W가 -N(CH₃)-이고, X가 -S(=O)₂-이고, Y가 C₃ _- ₇알킬렌이고, Z가 -NH-C(=O)-인 경우, 화학식 XI의 보호된 브로모 나프티리딘을 사용하여, 반응식 4b에 기재된 바와 같은 반응을 후속적으로 행할 수 있다. 적합한 보호기는 메틸 또는 토실이다. 화학식 VIIIb의 관능화된 나프티리딘은 브로모 나프티리딘 (XI)을 화학식 XV의 보호된 아미노 관능화된 링커와 반응시켜 제조한다. 리간드, 예컨대 2,2'-비피리딘의 존재하에 구리(I) 염기, 예컨대 산화구리(I)를 사용하는 것이 이 반응에 유리하다. 유용한 용매는 극성 비양성자성 용매, 예컨대 DMA, NMP 등이다. 이 반응은 승온, 전형적으로 80℃ 내지 140℃의 범위, 특히 120℃를 필요로 한다.

<반응식 4b>

특정 경우에 나프티리딘의 8-히드록시 관능기의 보호기 (PG) 변환을 수행하는 것이 유리하다. 이러한 방책의 예는 반응식 4c에 나타낸 바와 같이, (VIIIc) 중의 토실기의 (VIIIe) 중의 벤질기로의 상호변환이다. 탈보호 단계는 토실레이트 (VIIIc)를 상응하는 알콜 용매 중 나트륨 알콕시드, 예를 들어 메탄올 중 나트륨 메톡시드로 처리하는 것을 포함한다. 반응 온도는 20 내지 60℃이다. 임의로 극성 비양성자성 공용매, 예컨대 DMF 등을 적용할 수 있다. 화학식 VIIIe의 벤질 옥시 나프티리딘을 수득하기 위한 재-보호는 (VIIId)를 극성 비양성자성 용매, 예컨대 DMF 등 중에서 무기 염기, 예컨대 탄산세슘 등으로 처리한 다음, 벤질 할라이드, 예컨대 벤질 브로마이드를 가함으로써 수행할 수 있다. 이 반응을 가장 유리하게는 실온에서 수행한다.

<반응식 4c>

화학식 IV의 마크로사이클 전구체는 앞서 정의된 바와 같은 관능기 W, X 및 Z의 성질에 의존하여, 몇 가지 방법으로 제조할 수 있다.

제1 실시양태에서, W가 피페라지닐이고, X가 -C(=O)-이고, Z가 산소 원자인 경우, 반응식 5a에 나타낸 바와 같은 반응을 후속적으로 행하여 화학식 IVa의 마크로사이클 전구체를 수득할 수 있다: 화학식 XIII의 피페라진을, 비양성자성 용매, 예컨대 CH₂Cl₂ 중 통상의 아미드 커플링 시약, 예컨대 HBTU (O-벤조트리아졸-N,N,N',N'-테트라메틸 우로늄 헥사플루오로포스페이트), EDCI (1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드), 또는 EDAC (1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필) 카르보디이미드 히드로클로라이드)의 존재하에, 아민 염기 첨가제, 예컨대 디이소프로필 에틸 아민의 존재하에 화학식 XVI의 카르복실산으로 처리한다.

<반응식 5a>

제2 실시양태에서, W가 -N(CH₃)-이고, X가 -S(=O)₂-이고, Y가 C₃ _- ₇알킬렌이고, Z가 -NH-C(=O)-인 경우, 화학식 VIIIb의 Boc-아미노 관능화된 나프티리딘으로부터 시작하여, 반응식 5b에 기재한 바와 같은 순서를 후속적으로 행하여 화학식 IVb의 마크로사이클 전구체를 수득할 수 있다. 먼저, TFA로 처리함으로써 (VIIIb) 중 Boc-아미노기의 탈보호를 수행하여 화학식 XVIII의 아민을 수득할 수 있다. 임의로, 할로겐화 탄화수소를 공용매로서 사용할 수 있고, 반응 온도는 0 내지 20℃이다. 대안으로, 상기 탈보호는 극성 비양성자성 용매, 예컨대 디옥산 중 HCl을 사용하여 수행할 수 있다. 제2 단계에서, 화학식 XVIII의 아민을, 비양성자성 용매, 예컨대 CH₂Cl₂ 중, 또는 대안으로 극성 비양성자성 용매, 예컨대 DMF 등 중 통상의 아미드 커플링 시약, 예컨대 HBTU (O-벤조트리아졸-N,N, N' , N'-테트라메틸 우로늄 헥사플루오로포스페이트), EDCI (1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드), 또는 EDAC (1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필) 카르보디이미드 히드로클로라이드)의 존재하에, 아민 염기 첨가제, 예컨대 디이소프로필 에틸 아민의 존재하에 카르복실산 (XVII)으로 처리한다.

<반응식 5b>

제3 실시양태에서, W가 -N(CH₃)-이고, X가 -S(=O)₂-이고, Y가 C₃ _- ₇알킬렌이고, Z가 산소 원자인 경우, 화학식 XI의 브로모 나프티리딘으로부터 시작하여, 반응식 5c에 도시된 바와 같은 반응을 사용하여 화학식 IVc의 마크로사이클 전구체를 수득할 수 있다. 적합한 보호기는 메틸 또는 토실이다. 화학식 IVc의 마크로사이클 전구체는 브로모 나프티리딘 (XI)을 화학식 XIX의 술폰아미드 함유 링커와 반응시켜 제조한다. 리간드, 예컨대 2,2'-비피리딘의 존재하에 구리(I) 염기, 예컨대 산화구리(I)를 사용하는 것이 이 반응에 유리하다. 유용한 용매는 극성 비양성자성 용매, 예컨대 DMA, NMP 등이다. 반응은 승온, 전형적으로 80℃ 내지 140℃의 범위, 특히 120℃를 필요로 하고, 일반적으로 불활성 분위기 하에 수행된다.

<반응식 5c>

반응식 1 내지 5c에 기재된 바와 같은 고급(advanced) 중간체 및 마크로사이클을 조립하기 위하여, 반응식 7a 내지 9에 도시된 바와 같은 구성 요소(building block)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 구성 요소는 하기에 제공된 바와 같은 설명에 따라 제조할 수 있다:

화학식 XV의 Boc-아미노 관능화된 링커는 반응식 7a에 도시된 바와 같이, 화학식 XV'의 아미노 술폰아미드로부터 제조할 수 있다. 전형적으로, 염소화 탄화수소 용매, 예컨대 디클로로메탄 등 중 아민 (XV')의 용액을 Boc 무수물로 실온에서 처리한다.

<반응식 7a>

화학식 XV'의 아미노 관능화된 링커는 클로로 술폰아미드 (XVa')로부터 상이한 방법으로 제조할 수 있고, 앞서 정의한 바와 같은 Y의 성질에 좌우된다. 예를 들어, Y가 C₃ _- ₄알킬인 경우, 화학식 XVb의 링커를 초래하며, 반응식 7b에 도시된 바와 같은 순서를 따를 수 있다. 클로로 술폰아미드 (XVa')를 먼저 극성 비양성자성 용매, 예컨대 DMF 등 중 아이오딘화나트륨으로 실온에서 처리한다. 그 다음, 나트륨 아지드를 가하고, 혼합물을 20 내지 70℃의 온도 범위에서, 특히 60℃에서 반응시켜, 아지드 (XVc)를 수득한다. 다음 단계에서, 아지드를 환원시켜 아민 (XVd)을 수득한다. 이러한 변환은 아지드 (XVc)를 수소 분위기 하에, 전형적으로 1 atm에서, 양성자성 용매, 예컨대 메탄올 등 중에 도입함으로써 수행할 수 있다. 촉매, 예컨대 탄소상 팔라듐 등의 사용은 상기 수소화 반응을 달성하는데 필수적이다.

<반응식 7b>

또 다른 실시양태에서, Y가 펜틸렌인 경우, 화학식 XVd의 링커를 초래하며, 반응식 7c에 도시된 바와 같은 순서를 따를 수 있다. 클로로 술폰아미드 (XVa)를 먼저 극성 비양성자성 용매, 예컨대 DMF 등 중 아이오딘화나트륨으로 실온에서 처리한다. 그 다음, 시안화나트륨을 가하고, 혼합물을 20 내지 70℃의 온도 범위에서, 특히 60℃에서 반응시켜, 니트릴 (XVe)을 수득한다. 다음 단계에서, 니트릴을 환원시켜 아민 (XVd)을 수득한다. 이러한 변환은 니트릴 (XVe)을 수소 분위기 하에, 전형적으로 1 atm에서, 암모니아의 존재하에 양성자성 용매, 예컨대 메탄올 등 중에 도입함으로써 수행할 수 있다. 촉매, 예컨대 탄소상 팔라듐 등의 사용은 상기 수소화 반응을 달성하는데 필수적이다. 대안으로, (XVe) 중 니트릴 관능기의 환원은 실온에서 극성 비양성자성 용매, 예컨대 THF 등 중 보란 디메틸술피드 착체로 처리함으로써 수행하여 1급 아민 (XVd)을 수득할 수 있다.

<반응식 7c>

<반응식 7d>

화학식 XVe의 니트릴은 또한 반응식 7d에 도시된 바와 같이 클로라이드 (XVa)로부터 세 단계로 제조할 수 있다. 제1 단계는 술폰아미드 관능기의 적합한 보호기, 예컨대 Boc로의 보호를 포함한다. 이는 클로라이드 (XVa)를 실온에서 극성 비양성자성 용매, 예컨대 DMF 등 중 Boc₂O로 처리함으로써 수행하여 Boc 보호된 클로라이드 (XVf)를 수득할 수 있다. 임의로, 양성자성 공용매, 예컨대 메탄올 등을 사용할 수 있다. 제2 단계는 (XVa) 중 클로라이드의 시안화물에 의한 친핵성 치환을 포함한다. 이는 클로라이드 (XVa)를 실온 내지 150℃에서, 특히 80℃에서, 극성 비양성자성 용매, 예컨대 아세토니트릴 등 중 무기 시안화물 염, 예컨대 시안화칼륨으로 처리함으로써 수행할 수 있다. 이러한 변환에서 크라운 에테르, 특히 18-크라운-6을 사용하여 화학식 XVg의 니트릴을 수득하는 것이 유리하다. 제3 단계에서, (XVg) 중 Boc-아미노기의 탈보호는 TFA로 처리함으로써 달성하여 화학식 XVe의 시안화물을 수득할 수 있다. 임의로, 할로겐화 탄화수소를 공용매로서 사용할 수 있고, 반응 온도는 0 내지 20℃이다. 대안으로, 상기 탈보호는 극성 비양성자성 용매, 예컨대 디옥산 중 HCl을 사용하여 수행할 수 있다.

화학식 XVI의 카르복실산은 반응식 8에 도시된 바와 같이, (2-(벤질옥시)-4-플루오로페닐)메탄아민 (XVIa)으로부터 네 단계로 제조할 수 있다. 제1 단계에서 아민 (XVIa)을 Boc기로 보호한다. 이는 디옥산 및 물로 이루어진 용매 혼합물 중 아민 (XVIa)을 탄산나트륨의 존재하에 Boc 무수물로 처리함으로써 수행하여 Boc 보호된 화합물 (XVIb)을 수득할 수 있다. 이 반응은 0　내지 20℃의 온도 범위에서 수행할 수 있다.

제2 단계에서 (XVIb)중 벤질기는 수소 분위기 하에, 전형적으로 1 atm에서, 임의로 비양성자성 공용매, 예컨대 에틸 아세테이트 등의 존재하에, 양성자성 용매, 예컨대 에탄올 등 중의 반응에 의해 환원적으로 제거된다. 촉매, 예컨대 탄소상 팔라듐 등의 사용은 상기 수소화 반응을 달성하는데 필수적이고, 이로써 페놀 (XVIc)이 수득된다.

제3 단계에서 페놀 (XVIc)을 무기 염기, 예컨대 탄산칼륨 등의 존재하에 화학식 XX의 할로 관능화된 카르복실산 에스테르와 반응시킨다. 이러한 변환은 극성 비양성자성 용매, 예컨대 DMA 등 중에서, 20 내지 80℃의 온도 범위에서, 특히 60℃에서 수행할 수 있고, 이로써 화학식 XVId의 카르복실산 에스테르가 수득된다.

제4 단계에서, 화학식 XVId의 카르복실산 에스테르를 비누화하여 화학식 XVI의 상응하는 카르복실산을 수득한다. 이러한 변환은 금속 수산화물 (M-OH), 예컨대 수산화칼륨 또는 수산화나트륨과의 반응에 의해 수행할 수 있다. 반응은 수성 환경에서 수행하고, 가장 유리하게는 하나 이상의 수 혼화성 유기 공용매, 예컨대 메탄올 등, 및 임의로 THF의 존재하에 수행한다.

<반응식 8>

화학식 XIX의 술폰아미드 구성 요소는 반응식 9a에 나타낸 바와 같이 페놀 (XVIc) 및 화학식 XV"의 술폰아미드로부터 제조할 수 있다. 화학식 XV"의 술폰아미드는 이탈기 A를 함유하고, 이는 할로, 특히 아이오도, 또는 대안으로 토실레이트일 수 있다. 페놀 (XVIc)을 무기 염기, 예컨대 탄산칼륨 등의 존재하에 (XV")와 반응시킨다. 이러한 변환은 극성 비양성자성 용매, 예컨대 DMF 또는 DMSO 등 중에서, 20 내지 80℃의 온도 범위에서, 특히 50 내지 60℃에서 수행할 수 있고, 이로써 화학식 XIX의 술폰아미드를 수득한다.

<반응식 9a>

화학식 XV"의 술폰아미드 링커는 상이한 방법을 사용하여 제조할 수 있고, 이는 Y의 성질에 좌우된다. 예를 들어, Y가 C₃ _- ₄알킬인 경우, 화학식 XVa"의 아이오도 술폰아미드는 반응식 9b에 나타낸 바와 같이, 상응하는 클로로 술폰아미드 (XVa')를 아이오딘화나트륨과 반응시켜 제조할 수 있다. 이러한 변환은 환류 온도에서 아세톤 중에서 수행한다.

<반응식 9b>

또 다른 예에서, Y가 C₅알킬 (즉 펜틸렌)인 경우, 토실레이트 (XVb")를 반응식 9c에 나타낸 바와 같이, 니트릴 (XVe)로부터 세 단계로 제조할 수 있다. 제1 단계에서 니트릴 (XVe)을 카르복실산 (XVc")으로 가수분해한다. 이는 아세트산과 염산의 혼합물 중에서, 바람직하게는 환류 온도에서 가열함으로써 수행할 수 있다. 제2 단계에서 (XVc") 중의 카르복실산 관능기를 화학식 XVd"의 상응하는 알콜로 환원시킨다. 이는 0 내지 20℃의 온도에서 극성 비양성자성 용매, 예컨대 THF 등 중 보란으로 처리함으로써 수행할 수 있다. 제3 단계에서 (XVd") 중 히드록실 관능기를, 알콜 (XVd")을 실온에서 3급 아민, 예컨대 트리에틸 아민 등의 존재하에, 무극성 용매, 예컨대 디클로로메탄 등 중 토실 클로라이드와 반응시킴으로써, 토실레이트기로 관능화시켜 (XVb")를 수득한다.

<반응식 9c>

화학식 XVm 및 XVn의 링커 전구체는 화학식 XVh의 브로모 알콜로부터 시작하여 반응식 9d에 개요된 바와 같이 제조할 수 있다. 제1 단계에서 (XVh) 중 알콜을 화학식 XVi의 카르복실산 에스테르로서 보호한다. 상기 알콜 (XVh)을 3급 아민 염기, 예컨대 트리에틸 아민 등의 존재하에, 할로겐화 용매, 예컨대 디클로로메탄 등 중 아실 클로라이드, 예컨대 아세틸 클로라이드 또는 피발로일 클로라이드 등으로 처리한다. 이 반응은 0℃ 내지 실온에서 수행할 수 있다. 제2 단계에서, 화학식 XVi의 브로모 에스테르를 화학식 XVj의 상응하는 (아미노 이미노메틸)티오 에테르로 전환시킨다. 이러한 변환은 양성자성 용매, 예컨대 에탄올 등 중 티오우레아와 브로모에스테르 (XVi)의 혼합물을, 70 내지 100℃의 온도에서 가열함으로써 수행한다. 제3 단계에서 화학식 XVj의 (아미노 이미노메틸)티오 에테르를 0℃의 온도에서 용매로서 물 중 염소로 처리함으로써 화학식 XVk의 술포닐 클로라이드를 제조한다. 제4 단계에서 술포닐 클로라이드 (XVk)의 혼합물을 물과 할로겐화 탄화수소, 예컨대 디클로로메탄 등으로 이루어진 2상 용매 시스템 중에서 메틸 아민 HCl 염으로 처리함으로써, 화학식 XVk의 술포닐 클로라이드를 화학식 XVm의 상응하는 메틸 술폰아미드로 전환시킨다. 상기 변환은 무기 염기, 예컨대 탄산칼륨 등의 존재하에, 10 내지 20℃의 온도에서 수행한다. 제5 단계에서 화학식 XVm의 메틸 술폰아미드의 에스테르 보호기를 금속 수산화물, 예컨대 수산화나트륨으로 처리하여 제거한다. 반응은 수성 환경에서 수행하고, 가장 유리하게는 하나 이상의 수 혼화성 유기 공용매, 예컨대 메탄올, 에탄올 또는 THF 등의 존재하에 수행하여 화학식 XVn의 메틸 술폰아미드 알콜을 수득한다.

<반응식 9d>

화학식 I의 화합물은 특히 인간의 후천성 면역 결핍 증후군 (AIDS)의 병인체인 HIV에 대해 항레트로바이러스 특성 (인테그라제 억제 특성)을 나타낸다. HIV 바이러스는 인간 T-4 세포를 우선적으로 감염시키고 이들을 파괴하거나 그의 정상 기능, 특히 면역계의 조화를 변화시킨다. 그 결과, 감염된 환자는 T-4 세포의 수가 계속 감소되며, 더욱이 이는 비정상적으로 거동한다. 따라서, 면역학적 방어 체계가 감염 및 신생물에 대항하는 것이 불가능하고, HIV 감염 대상체는 통상 폐렴과 같은 기회 감염으로, 또는 암으로 사망한다.

본 발명의 화합물은 또한 약제- 및 다제내성 HIV 균주에 대해, 특히 승인된 인테그라제 억제제 중 하나 이상, 특히 랄테그라비르 및/또는 엘비테그라비르에 대해 획득된 내성을 갖는 HIV 균주에 대해 활성을 나타낸다. 주요 랄테그라비르 관련 내성 돌변변이에는 N155H 및 Q148K/R/H가 포함된다.

화학식 I의 화합물 또는 그의 임의의 하위군, 그의 제약상 허용되는 부가염, 및 그의 입체이성체 형태는 이들의 항레트로바이러스 특성, 특히 이들의 항-HIV 특성으로 인해 HIV에 감염된 개체의 치료 및 이러한 감염의 예방에 유용하다. 본 발명의 화합물은 또한 그의 존재가 효소 프로테아제에 의해 매개되거나 이에 의존하는 바이러스에 감염된 온혈 동물의 치료에 사용할 수 있다. 본 발명의 화합물을 사용하여 예방하거나 치료될 수 있는 병태, 특히 HIV와 관련된 병태에는, AIDS, AIDS-관련 증후군(ARC), 진행성 전신성 림프절종창(progressive generalized lymphadenopathy: PGL), 뿐만 아니라 레트로바이러스에 의해 유발된 만성 중추신경계 질환, 예컨대, HIV 매개 치매 및 다발성 경화증이 포함된다.

따라서 본 발명의 화합물 또는 그의 임의의 하위군을 상기 언급한 병태에 대한 의약으로서 사용할 수 있다. 의약 또는 치료 방법으로서의 상기 용도는 HIV 및 다른 병원성 레트로바이러스, 특히 HIV-1과 관련된 병태에 대항하기 위한 유효량을 HIV-감염 대상체에 투여하는 것을 포함한다. 특히, 화학식 I의 화합물은 HIV 감염의 치료 또는 예방용 약제의 제조에 사용할 수 있다.

추가 측면에서 본 발명은 바이러스 감염, 특히 HIV 감염을 앓는 인간을 치료하거나 인간이 당해 감염을 앓지 않도록 예방하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 유효량의 화학식 I의 화합물, 그의 제약상 허용되는 부가염, 제약상 허용되는 용매화물, 또는 그의 가능한 입체이성체 형태를 인간에 투여하는 것을 포함한다.

본 발명은 또한 치료 유효량의 화학식 I의 화합물 및 제약상 허용되는 담체 또는 희석제를 포함하는 바이러스 감염을 치료하기 위한 조성물을 제공한다.

본 발명의 화합물 또는 그의 임의의 하위군은 투여 목적용으로 다양한 제약 형태로 제형화할 수 있다. 적합한 조성물로서 전신 투여 약제용으로 통상 사용되는 모든 조성물을 들 수 있다. 본 발명의 제약 조성물을 제조하기 위하여, 활성 성분으로서 임의로 부가염 형태로의, 유효량의 특정한 화합물을 제약상 허용되는 담체와 친밀한 혼합물로 배합하고, 이러한 담체는 투여용으로 목적된 제제의 형태에 따라 매우 다양한 형태를 취할 수 있다. 이들 제약 조성물은 바람직하게는 특히 경구, 직장, 경피, 또는 비경구 주사 (parenteral injection)에 의한 투여용으로 일원화된 투여 형태 (unitary dosage form)이다. 예를 들어, 조성물을 경구 투여 형태로 제조하는 경우에, 통상의 제약 매질을 어느 것이나 사용할 수 있고, 예를 들어, 경구 액체 제제, 예컨대 현탁제, 시럽제, 엘릭시르제, 유제 및 액제의 경우 물, 글리콜, 오일, 알콜 등; 또는 분말제, 환제, 캡슐제 및 정제의 경우 고체 담체, 예컨대 전분, 당, 카올린, 희석제, 윤활제, 결합제, 붕해제 등이다. 정제 및 캡슐제는 이들의 투여의 용이성 때문에 가장 유리한 경구 투여 단위 형태를 대표하고, 이 경우에 고체 제약 담체가 명백하게 사용된다. 비경구 조성물용으로, 담체는, 예를 들어 용해성을 보조하기 위해 다른 성분을 포함시킬 수도 있긴 하지만, 통상 적어도 대부분 멸균수를 포함할 것이다. 예를 들어 주사액을 제조할 수 있고, 여기서 담체는 식염액, 글루코스 용액, 또는 식염액과 글루코스 용액의 혼합물을 포함한다. 주사용 현탁액을 또한 제조할 수 있고, 이 경우 적합한 액체 담체, 현탁화제 등을 사용할 수 있다. 사용 직전 액체 형태 제제로 전환시킬 수 있는 고체 형태 제제가 또한 포함된다. 경피 투여에 적합한 조성물에서, 담체는 적은 비율로 임의의 성질을 갖는 적합한 첨가제와 임의로 배합된, 침투 촉진제 및/또는 적합한 습윤제를 임의로 포함하고, 이러한 첨가제는 피부에 상당한 유해 영향을 초래하지는 않는 것이다. 상기 첨가제는 피부로의 투여를 촉진시키고/시키거나 목적 조성물을 제조하는데 도움을 줄 수 있다. 이들 조성물은 다양한 방법으로 투여할 수 있고, 예를 들어 경피 첩포(patch)로서, 스팟-온(spot-on)으로서, 연고제로서이다.

본 발명의 화합물은 또한 흡입 또는 취입(insufflation)에 의한 투여에 대해 당분야에서 사용되는 방법 및 제형에 의해 상기 방법으로 투여될 수 있다. 따라서, 일반적으로 본 발명의 화합물은 액제, 현탁제 또는 건조 분말의 형태로 폐로 투여될 수 있다. 경구 또는 비강 흡입 또는 취입을 통한 액제, 현탁제 또는 건조 분말의 전달용으로 개발된 시스템은 어느 것이나 본 화합물의 투여용으로 적합하다.

투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 앞서 언급한 제약 조성물을 단위 투여 형태로 제형화하는 것이 특히 유리하다. 본원에서 사용된 바와 같은 단위 투여 형태는 일원화된 투여량으로서 적합한 물리적 불연속 단위를 나타내는 것이고, 각 단위는 목적하는 치료 효과를 생성하도록 산출된 예정량의 활성 성분을 필요한 제약 담체와 함께 함유한다. 이러한 단위 투여 형태의 예는 (분할 또는 코팅 정제를 포함하는) 정제, 캡슐제, 환제, 분말 포입(powder packet), 웨이퍼, 좌제, 주사액 또는 현탁제 등, 및 그의 분리된 배수체(segregated multiple)이다.

HIV-감염 치료의 당업자는 본원에서 제시된 시험 결과로부터 1일 유효량을 결정할 수 있을 것이다. 일반적으로 1일 유효량은 0.01 mg/kg 내지 50 mg/kg 체중, 더 바람직하게는 0.1　mg/kg 내지 10 mg/kg 체중일 것으로 고려된다. 필요한 용량을 2, 3, 4 또는 그 초과의 분할-용량(sub-dose)으로 적합한 간격으로 하루에 걸쳐 투여하는 것이 적합할 수 있다. 상기 분할-용량을 예를 들어, 단위 투여 형태당 1 내지 1000 mg, 특히 5 내지 200 mg의 활성 성분을 함유하는 단위 투여 형태로서 제형화할 수 있다.

정확한 투여량 및 투여 빈도는 당업자에게 익히 공지된 바와 같이, 사용된 특정한 화학식 I의 화합물, 치료될 특정한 병태, 치료될 병태의 중증도, 특정한 환자의 연령, 체중 및 전반적인 신체 상태 뿐만 아니라 개체가 섭취하고 있을 수 있는 다른 약물에 좌우된다. 더욱이, 상기 1일 유효량은 치료 대상체의 반응에 따라 및/또는 본 발명의 화합물을 처방하는 의사의 평가에 따라 저하시키거나 증가시킬 수 있음이 명백하다. 따라서 이상에서 언급한 1일 유효량 범위는 단지 지침이고 본 발명의 범주 또는 용도를 전혀 제한하고자 하는 것이 아니다.

또한, 하나 이상의 추가의 항레트로바이러스 화합물과 화학식 I의 화합물의 배합물을 또한 의약으로서 사용할 수 있다. 따라서, 본 발명은 또한 (a) 화학식 I의 화합물, 및 (b) 하나 이상의 추가의 항레트로바이러스 화합물을, 항-HIV 치료에서 동시, 분리 또는 연속 사용용 복합 제제(combined preparation)로서 함유하는 제품에 관한 것이다. 상이한 약제를 분리 제제 또는 단일 제제로, 제약상 허용되는 담체와 함께 배합시킬 수 있다. 상기 다른 항레트로바이러스 화합물은 임의의 공지된 항레트로바이러스 화합물, 예컨대 뉴클레오시드 역전사효소 억제제 (NRTI), 예를 들어 지도부딘(zidovudine) (AZT), 디다노신(didanosine) (ddI), 잘시타빈(zalcitabine) (ddC), 라미부딘(lamivudine) (3TC), 스타부딘(stavudine) (d4T), 엠트리시타빈(emtricitabine) (FTC), 아바카비르(abacavir) (ABC), 암독소비르(amdoxovir) (DAPD), 엘부시타빈(elvucitabine) (ACH-126,443), 아프리시타빈(apricitabine) (AVX 754, (-)-dOTC), 포잘부딘 티독실 (fozalvudine tidoxil) (FZT, HDP-990003), 포스파지드(phosphazide), KP-1461, 라시비르(racivir) (PSI-5004), MIV-210, 및 GS-9131; 비-뉴클레오시드 역전사효소 억제제 (NNRTI), 예컨대 델라비르딘 (delavirdine) (DLV), 에파비렌즈(efavirenz) (EFV), 네비라핀(nevirapine) (NVP), 다피비린(dapivirine) (TMC120), 에트라비린(etravirine) (ETR, TMC125), 릴피비린(rilpivirine) (TMC278), IDX899, RDEA-806, UK-453601, RDEA-427, 및 UC-781; 뉴클레오티드 역전사효소 억제제 (NtRTI), 예를 들어 테노포비르(tenofovir) 및 그의 전구약물 테노포비르 디소프록실 푸마레이트 (TDF); 프로테아제 억제제, 예를 들어 리토나비르(ritonavir) (RTV), 사퀴나비르(saquinavir) (SQV), 로피나비르(lopinavir) (ABT-378, LPV), 인디나비르(indinavir) (IDV), 암프레나비르(amprenavir) (VX-478), 넬피나비르(nelfinavir) (AG-1343), 아타자나비르(atazanavir) (BMS 232,632), 다루나비르(darunavir) (TMC114), 포삼프레나비르(fosamprenavir) (GW433908 또는 VX-175), 브레카나비르(brecanavir) (GW-640385, VX-385), 티프라나비르(tipranavir) (PNU-140690), DG-17, SPI256, PPL-100 (MK 8122), 및 TMC310911; 침입 억제제 (이는 융합 억제제 (예를 들어 엔푸비르티드(enfuvirtide) (T-20) 시푸비르티드(sifuvirtide), HRG-214, 알부비르티드(albuvirtide), SUC-HAS, 및 maC46/M87o ), 부착(attachment) 억제제, 세포내 콜레스테롤 및 코르티코스테로이드 생합성의 조절자 (예를 들어 SP-01A), 및 보조 수용체(co-receptor) 억제제를 포함하고, 후자는 CCR5 길항제 (예를 들어 CCR5mAb004, 마라비록(maraviroc) (UK-427,857), PRO-140, TAK-220, TAK-652, PF232798, 비크리비록(vicriviroc) (SCH-D, SCH-417,690), GSK-706769, 니페비록(nifeviroc), 및 SCH-532706) 및 CXR4 길항제 (예를 들어 AMD-070)를 포함하고, 침입 억제제의 추가 예는 TNX-355, INCB 9471, BMS-488043, 노나킨(nonakine), 및 VGV-1임); 성숙 억제제, 예를 들어 베비리매트(bevirimat) (PA-457) 및 비베콘(vivecon); 및 바이러스 인테그라제의 억제제, 예를 들어 랄테그라비르 (MK-0518), 엘비테그라비르 (JTK-303, GS-9137), BMS-538158, S-349572, JTK-656 S-247303, 및 GS-265744일 수 있다.

하기 실시예는 본 발명을 설명하고자 하는 것이고 이로써 그의 범주를 제한하고자 하는 것이 아니다.

실시예

A. 화학식 I의 화합물의 화학적 합성

실시예 1 - 메틸 8-( 벤질옥시 )-5- 브로모 -1,6- 나프티리딘 -7- 카르복실레이트

벤질 브로마이드 (2.53 ml, 21.2 mmol)를 DMF (30 ml) 중 메틸 5-브로모-8-히드록시-1,6-나프티리딘-7-카르복실레이트 (3.0 g; 10.6 mmol)와 탄산세슘 (6.9　g; 21.2 mmol)의 혼합물에 실온에서 교반하에 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 물 및 에틸 아세테이트를 가하였다. 유기상을 분리하고, 물 및 포화 NaCl 용액으로 세척하였다. 유기상을 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시켰다. 조 물질을 실리카겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피로 정제하였다 (구배 헥산-에틸 아세테이트 10:1에서 2:1로 용리).

생성물 분획을 수집하고, 용매를 증발시켰다.

수율: 3.3 g (83%).

실시예 2 - 에틸 2- 시아노 -5- 플루오로벤조에이트

시안화아연 (26.5 g; 0.225 mol) 및 Pd2(dba)3 (1.9 g; 3.4 mmol)를 DMF (71 ml) 중 에틸 2-브로모-5-플루오로벤조에이트 (27.9 g; 0.112 mol)의 용액에 가하였다. 트리페닐 포스핀 (2.9 g; 11 mmol)을 가한 다음 반응 혼합물을 130℃에서 질소 분위기 하에 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 H₂O (300 ml)에 부은 다음 EtOAc (200 ml)로 추출하였다. 유기층을 분리하고, H₂O (2　x 100 ml), 염수 (100 ml)로 세척하고, 건조시키고 (MgSO₄), 여과하고, 용매를 증발시켰다.

잔류물을 실리카겔 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하였다 (용리액: 헥산/EtOAc (5/1, v/v)). 생성물 분획을 수집하고, 용매를 증발시켰다.

수율: 20 g (93%; 오렌지색 고체).

실시예 3 - 에틸 2-(( tert - 부톡시카르보닐아미노 ) 메틸 )-5- 플루오로벤조에이트

THF (414 ml) 중 에틸 2-시아노-5-플루오로벤조에이트 (실시예 2; 20 g; 0.10 mol), Boc₂O (24　ml; 0.11 mol), 중탄산나트륨 (9.4 g; 0.11 mol) 및 라니 니켈 (2 g)의 혼합물을 H2의 3 bar 압력하에 50℃에서 24시간 동안 수소화하였다. H2의 흡수 후, 촉매를 셀라이트 패스(Celite path)상에서 여과로 제거하고 셀라이트를 THF로 세척하였다. 여액을 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하였다 (용리액: 헥산/EtOAc (5/1, v/v)). 생성물 분획을 수집하고, 용매를 증발시켰다. 수율: 15.9 g (52%)

실시예 4 - 에틸 2-( 아미노메틸 )-5- 플루오로벤조에이트 히드로클로라이드

농축 HCl (37%; 16 ml)을 THF (96 ml) 중 에틸 2-((tert-부톡시카르보닐아미노)메틸)-5-플루오로벤조에이트 (실시예 3; 15.9 g; 53.6 mmol)의 용액에 적가하였다. 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 가열하였다. 혼합물을 농축 건조시켰다. 잔류물을 에탄올 (200 ml) 중에 용해시키고, 다시 농축하였다. 고체를 에테르 (100 ml)로부터 분쇄하였다. 침전물을 여과하고, 디에틸 에테르 (2 x 50 ml)로 세척하였다.

수율: 8.5 g (81%; 무색 고체로서).

실시예 5 - 4- 클로로 -N- 메틸부탄 -1-술폰아미드

0℃에서 디클로로메탄 (250 ml) 중 4-클로로부탄-1-술포닐 클로라이드 (117 mmol) 및 트리에틸 아민 (117　mmol)의 용액에 THF (117 mmol) 중 메틸 아민의 2M 용액을 적가하였다. 혼합물을 밤새 교반하면서 실온으로 가온하였다. 유기 용액을 H₂O로 세척하고, CH₂Cl₂로 추출하고, MgSO₄ 상에서 건조시킨 다음 여과하였다. 용액을 농축시켰다. 생성물을 추가 정제 없이 사용하였다.

실시예 6 - 4- 아지도 -N- 메틸부탄 -1-술폰아미드

DMF (180 ml) 중 4-클로로-N-메틸부탄-1-술폰아미드 (실시예 5; 180 mmol), 및 아이오딘화나트륨 (198 mmol)의 용액을 10분 동안 실온에서 교반하였다. 나트륨 아지드 (397 mmol)를 가하고, 반응 혼합물을 60℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 여과하였다. 유기상을 AcOEt/물로 추출하였다. 조 혼합물을 농축시키고 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

실시예 7 - 4-아미노-N- 메틸부탄 -1-술폰아미드

메탄올 (200 ml ) 중 4- 아지도 -N- 메틸부탄 -1-술폰아미드 ( 실시예 6; 202 mmol)의 용액에 Pd/C (20 mmol Pd)를 가하였다. 혼합물을 수소 분위기 하에 두고 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 농축하였다. 조 생성물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

실시예 8 - tert -부틸 4-(N- 메틸술파모일 ) 부틸카르바메이트

디클로로메탄 (350 ml) 중 4-아미노-N-메틸부탄-1-술폰아미드 (실시예 7; 183 mmol)의 용액에 Boc₂O (183 mmol)를 나누어 가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 조 생성물을 농축시키고 칼럼 크로마토그래피 (CH₂Cl₂:MeOH 100:1)로 정제하여 목적(target) 물질을 62% 수율로 수득하였다.

실시예 9 - 4- 시아노 -N- 메틸부탄 -1-술폰아미드

DMF (175 ml) 중 4-클로로-N-메틸부탄-1-술폰아미드 (실시예 5; 86.7 mmol), 및 아이오딘화나트륨 (95.4 mmol)의 용액을 10분 동안 실온에서 교반하였다. 시안화나트륨 (191 mmol)을 가하고, 혼합물을 60℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 여액을 AcOEt/물로 추출하였다. 조 생성물을 농축시키고 추가 정제 없이 다음 단계(실시예 10 및 20)에서 사용하였다 .

실시예 10 - 5-아미노-N- 메틸펜탄 -1-술폰아미드

메탄올/7N NH₃ (180 ml) 중 4-시아노-N-메틸부탄-1-술폰아미드 (실시예 9; 91.2 mmol)와 Pd/C (10 mol%, 1 g)의 혼합물을 수소 분위기 하에 두었다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 농축하였다. 조 생성물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

실시예 11 - tert -부틸 5-(N- 메틸술파모일 ) 펜틸카르바메이트

디클로로메탄 (92 ml) 중 5-아미노-N-메틸펜탄-1-술폰아미드 (실시예 10; 42.6 mmol)의 용액에, Boc₂O (42.6 mmol)를 나누어 가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 조 생성물을 농축시키고 칼럼 크로마토그래피 (CH₂Cl₂:MeOH 100:1)로 정제하여 목적 물질을 50% 수율로 수득하였다.

실시예 12 - 메틸 5- 브로모 -8-( 토실옥시 )-1,6- 나프티리딘 -7- 카르복실레이트

트리에틸 아민 (15.9 mmol)을 클로로포름 (22 ml) 중 메틸 5-브로모-8-히드록시-1,6-나프티리딘-7-카르복실레이트 (10.6 mmol)의 현탁액에 5분에 걸쳐 20 내지 50℃에서 가하였다. 토실 클로라이드 (12.7 mmol)를 온도를 40℃에서 2시간 동안 유지하면서 5분에 걸쳐 가하였다. 혼합물을 15분에 걸쳐 20℃로 냉각하였다. MeOH를 30분에 걸쳐 가한 다음, MeOH:물의 혼합물을 30분에 걸쳐 가하였다. 생성된 오프 화이트(off-white) 결정성 고체를 여과로 수집하고 건조시켜 목적 화합물을 50% 수율로 수득하였다.

실시예 13 - 메틸 8-( 벤질옥시 )-5-(피페라진-1-일)-1,6- 나프티리딘 -7- 카르복실레이트

디이소프로필 에틸 아민 (42.9 mmol)을 실온에서 DMA (270 ml) 중 메틸 8-(벤질옥시)-5-브로모-1,6-나프티리딘-7-카르복실레이트 (실시예 1; 10.7 mmol)의 용액에 가하였다. 반응을 5분 동안 교반하였다. 피페라진 (16.1 mmol)을 가하고, 반응 혼합물을 110℃에서 12시간 동안 가열하였다.

반응물을 냉각하고, 물 및 에틸 아세테이트를 가하였다. 유기층을 분리하고, 물 (x2) 및 염수로 세척하였다. 유기층을 건조시키고 (MgSO₄), 여과하고, 증발시켰다.

잔류물을 SiO₂ 상에서 플래쉬-크로마토그래피 (Hex/AcOEt 10:1 내지 1:1)로 정제하여, 표제 화합물 (1.5 g)을 담황색 고체로서 수득하였다.

실시예 14 - Tert -부틸 2-( 벤질옥시 )-4- 플루오로벤질카르바메이트

(2-(벤질옥시)-4-플루오로페닐)메탄아민을 1,4-디옥산 (22 ml)에 용해시켰다. 물 (6 ml) 및 1M Na₂CO₃ 용액 (55 ml)을 가하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각하였다. Boc₂O를 적가하였다. 그 후의 혼합물을 실온으로 가온하고 실온에서 24시간 동안 교반하였다.

반응 혼합물을 여과하고, CH₂Cl₂ 및 물 (x2)로 세척하였다. 상을 분리하고, 유기층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과한 다음 농축하여 조 목적 화합물을 황색 고체 (5.75 g)로서 수득하였다. 이 물질을 별도의 실험으로부터의 배치(batch)와 합하고, 추가로 SiO₂ 상에서 칼럼 크로마토그래피 (헥산/AcOEt, 8/1, v/v)로 정제하여 목적 화합물 (97% 순도)을 무색 고체로서 수득하였다.

실시예 15 - Tert -부틸 4- 플루오로 -2- 히드록시벤질카르바메이트

EtOH (80 ml) 및 에틸 아세테이트 (240 ml) 중 tert-부틸 2-(벤질옥시)-4-플루오로벤질카르바메이트 (실시예 14; 9 mmol)의 용액을 25℃에서10% Pd/C (0.4 gr)상에서 수소 1 atm으로 24시간 동안 처리하였다. 촉매를 셀라이트를 통해 여과로 제거하고, EtOH로 세척하고, 여액을 농축하여 표제 화합물 (2.2 g)을 황색 고체로서 수득하였다.

실시예 16 - 에틸 5-(2-(( tert - 부톡시카르보닐아미노 ) 메틸 )-5- 플루오로페녹시 )- 펜타노에이트

에틸 5-브로모펜타노에이트 (14.9 mmol)를 DMA (37 ml) 중 tert-부틸 4-플루오로-2-히드록시벤질카르바메이트 (실시예 15; 12.4 mmol)와 탄산칼륨 (16.1 mmol)의 혼합물에 15분에 걸쳐 적가하였다. 반응물을 60℃에서 4시간 동안 가열한 다음, 또 다른 양의 에틸 5-브로모-펜타노에이트 (4.5 mmol) 및 탄산칼륨 (4.8 mmol)을 가하고, 60℃에서 2시간 동안 가열하였다. 용매를 증발시켰다. 잔류물을 AcOEt 중에 용해시키고, 여과하였다. 여액을 AcOEt (x3)로 세척하고, 진공 중에 농축하였다. 잔류물을 SiO₂ 상에서 칼럼 크로마토그래피 (헥산/AcOEt, 8/1, v/v)로 정제하여 목적 화합물 (4.1 gr, 96% 순도)을 수득하였다.

실시예 17 - 5-(2-(( Tert - 부톡시카르보닐아미노 ) 메틸 )-5- 플루오로페녹시 ) 펜탄산

에틸 5-(2-((tert-부톡시카르보닐아미노)메틸)-5-플루오로페녹시)펜타노에이트 (실시예 16; 1.6 mmol)를 THF (6 ml), 메탄올 (6 ml) 및 물 (6　ml)의 혼합물에 용해시켰다. 수산화나트륨 (5.0 mmol)을 가하고, 2시간 동안 교반하였다. 유기 용매를 진공 하에 제거하고, 수성 잔류물을 1 N HCl을 사용하여 pH 3으로 산성화하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기상을 진공 하에 제거하여 표제 화합물 (0.55 gr)을 수득하고, 이를 다음 단계 (실시예 5.1)에서 그대로 사용하였다.

실시예 18 - 4-아이 오도 -N- 메틸부탄 -1-술폰아미드

아세톤 (600 ml) 중 을 밤새 환류 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각하고 여과하였다. 여액을 진공 중에 농축하여 표제 화합물 (40 g)을 수득하고, 이를 다음 단계 (실시예 19)에서 그대로 사용하였다 .

실시예 19 - Tert -부틸 4- 플루오로 -2-(4-(N- 메틸술파모일 ) 부톡시 ) 벤질카르바메이트

DMF (60 ml) 중 tert-부틸 4-플루오로-2-히드록시벤질카르바메이트 (실시예 15; 12.2 mmol), 4-아이오도-N-메틸부탄-1-술폰아미드 (실시예 18; 18.3 mmol) 및 탄산칼륨 (61 mmol)의 혼합물을 80℃에서 10시간 동안 교반하였다.

반응 혼합물을 여과하고, 잔류물을 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여액을 농축하고, 물을 가하였다.

혼합물을 에테르로 추출하고, 유기층을 분리하고, MgSO₄ 상에서 건조시킨 다음, 여과하고, 농축하여 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 별도의 실험으로부터의 또 다른 배치와 합한 다음 RP 조제용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하였다 (용리액: MeOH/ H₂O 50/50에서 80/20, 0.1% CF₃COOH).

순수 분획을 수집하고 포화 NaHCO₃ 용액을 가하였다.

용매를 진공 하에 농축한 다음 디클로로메탄으로 추출하였다.

유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하여 목적 화합물 (1.1 gr, 13% 수율)을 수득하였다.

실시예 20 - 5-(N- 메틸술파모일 ) 펜탄산

4-시아노-N-메틸부탄-1-술폰아미드 (실시예 9; 100 mmol), 아세트산 (100 ml) 및 농축 염산 (100 ml)의 혼합물을 5시간 동안 환류한 다음 진공 중에 농축하였다. 잔류물을 THF에 도입(taken on)한 다음 여과하였다. 여액을 농축하고, 잔류물을 디클로로메탄으로 세척하여 순수 생성물 (11 g; 58% 수율)을 수득하였다.

실시예 21 - 5-히드록시-N-메틸펜탄-1-술폰아미드

THF (50 ml) 중 5-(N-메틸술파모일)펜탄산 (실시예 20; 26 mmol)의 냉각 용액에 THF (77 mmol) 중 보란의 용액을 0℃에서 가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고 3시간 동안 환류하였다. 메탄올을 가하고, 혼합물을 진공 중에 농축하여 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (SiO₂; 용리액: 석유 에테르/에틸 아세테이트 100/0에서 20/80)로 정제하여 순수 표제 화합물 (1.2 gr; 26% 수율)을 수득하였다.

실시예 22 - 5-(N- 메틸술파모일 ) 펜틸 4- 메틸벤젠술포네이트

THF (15 ml) 중 5-히드록시-N-메틸펜탄-1-술폰아미드 (실시예 21; 6.4 mmol) 및 트리에틸 아민 (19.2 mmol)의 용액에 THF (5 ml) 중 파라 톨루엔술포닐 클로라이드 (5.9　mmol)를 실온에서 가하고, 반응 혼합물을 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO₃ 용액, 이어서 염수로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (SiO₂; 용리액: 석유 에테르/에틸 아세테이트 100/0에서 50/50)로 정제하여 순수 표제 화합물 (0.9 gr; 41% 수율)을 수득하였다.

실시예 23 - Tert -부틸 4- 플루오로 -2-(5-(N- 메틸술파모일 ) 펜틸옥시 ) 벤질카르바메이트

DMSO (20 ml) 중 5-(N-메틸술파모일)펜틸 4-메틸벤젠술포네이트 (실시예 22; 2.6　mmol), tert-부틸 4-플루오로-2-히드록시벤질카르바메이트 (실시예 15; 2.1 mmol) 및 탄산칼륨 (6.3 mmol)의 혼합물을 50℃에서 질소 분위기 하에 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 디클로로메탄에 도입하고 여과하였다. 여액을 포화 NaHCO₃ 용액 및 염수로 세척하였다. 유기층을 진공 중에 농축한 다음 메틸 t-부틸 에테르를 가하였다. 혼합물을 염수로 세척하고, 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 중에 농축하여 조 생성물을 수득하였다.

조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (SiO₂; 용리액: 석유 에테르/에틸 아세테이트 100/0에서 50/50)로 정제하여 순수 표제 화합물 (0.7 gr; 82% 수율)을 수득하였다.

실시예 1.1 - 메틸 8-( 벤질옥시 )-5-(6-( tert - 부톡시카르보닐아미노 ) 헥실아미노 )-1,6-나 프티 리딘-7- 카르복실레이트

메틸 8-(벤질옥시)-5-브로모-1,6-나프티리딘-7-카르복실레이트 (실시예 1; 5.50 g; 14.7 mmol)를 DMA (300 ml)에 용해시켰다. DIPEA (5.14 ml; 29.5 mmol)를실온에서 가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 실온에서 교반하였다. tert-부틸 6-아미노헥실카르바메이트 (4.95 ml; 22.1 mmol)를 가하고, 반응 혼합물을 100℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 냉각하였다. 물 및 에틸 아세테이트를 가하였다. 유기층을 분리하고, 물 (x 2) 및 염수로 세척하였다. 유기층을 건조시키고 (MgSO₄), 여과하고, 용매를 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔 상에서 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (용리액: 헥산/EtOAc 10:1에서 1:1)로 정제하였다. 생성물 분획을 수집하고, 용매를 증발시켰다.

수율: 33%; 담황색 고체

실시예 1.2 - 8-( 벤질옥시 )-5-(6-( tert - 부톡시카르보닐아미노 ) 헥실아미노 )-1,6- 나프티리딘 -7- 카르복실산

메틸 8-(벤질옥시)-5-(6-(tert-부톡시카르보닐아미노)헥실아미노)-1,6-나프티리딘-7-카르복실레이트 (실시예 1.1; 0.58 g; 1.08 mmol)를 물 (2　ml)과 메탄올 (2 ml)의 혼합물에 용해시켰다. NaOH (100 mg; 2.7 mmol)를 실온에서 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. H₂O 및 HCl 2 N을 pH가 4 내지 5에 이를 때까지 가하였다. 혼합물을 EtOAc (2 x)로 추출하였다. 유기층을 분리하고, 건조시키고 (MgSO₄), 여과하고, 용매를 증발시켰다.

수율: 563 mg (95%).

실시예 1.3 - 에틸 2-((8-( 벤질옥시 )-5-(6-( tert - 부톡시카르보닐아미노 ) 헥실아미노 )-1,6- 나프티리딘 -7- 카르복사미도 ) 메틸 )-5- 플루오로벤조에이트

8-(벤질옥시)-5-(6-(tert-부톡시카르보닐아미노)헥실아미노)-1,6-나프티리딘-7-카르복실산 (실시예 1.2; 0.42 g; 0.85 mmol)을 디클로로메탄 (9　ml)에 용해시켰다. DIPEA (0.58 ml; 3.42 mmol) 및 HBTU (0.39 g; 1.03 mmol)를 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반하였다. 에틸 2-(아미노메틸)-5-플루오로벤조에이트 히드로클로라이드 (실시예 4; 0.24 g; 1.03 mmol)를 실온에서 나누어 가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 CH₂Cl₂로 희석하고 포화 Na₂CO₃ 수용액 (2 x) 및 H₂O로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 건조시키고 (MgSO₄), 여과하고, 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔 상에서 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (용리액: 헥산/EtOAc 10:1에서 1:1)로 정제하였다. 분획을 수집하고, 용매를 증발시켰다.

수율: 0.643 g

실시예 1.4 - 2-((8-( 벤질옥시 )-5-(6-( tert - 부톡시카르보닐아미노 ) 헥실아미노 )-1,6-나 프티 리딘-7- 카르복사미도 ) 메틸 )-5- 플루오로벤조산

에틸 2-((8-(벤질옥시)-5-(6-(tert-부톡시카르보닐아미노)헥실아미노)-1,6-나프티리딘-7-카르복사미도)메틸)-5-플루오로벤조에이트 (실시예 1.3; 0.64 g; 0.96 mmol)를 에탄올 (4 ml)에 용해시켰다. 1N NaOH (1.5 ml)의 용액을 실온에서 가하였다. 반응의 완료 후, HCl 1 N을 pH가 2 내지 3에 이를 때까지 가하였다. 용매를 가압하에 증발시켰다. 잔류물을 EtOAc에 용해시키고, H₂O 및 염수로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 건조시키고 (MgSO₄), 여과하고, 용매를 감압하에 증발시켰다.

수율: 0.592 g (96%; 추가 정제 없이 다음 반응 단계에서 사용).

실시예 1.5 - 2-((5-(6- 아미노헥실아미노 )-8-( 벤질옥시 )-1,6- 나프티리딘 -7- 카르복사미도 ) 메틸 )-5- 플루오로벤조산 , TFA 염

CH₂Cl₂ (3.6 ml), 트리플루오로 아세트산 (3.6 ml) 및 트리이소프로필 실란 (0.075　ml)의 용액을 제조하였다.

2-((8-(벤질옥시)-5-(6-(tert-부톡시카르보닐아미노)헥실아미노)-1,6-나프티리딘-7-카르복사미도)메틸)-5-플루오로벤조산 (실시예 1.4; 0.48 g; 0.74 mmol)을 디클로로메탄 (4 ml)에 용해시키고, 0℃로 냉각하였다. 이 저온 용액에 상기 제조된 용액을 가하고, 반응 혼합물을 교반하고, 1시간 동안 0℃에서 실온으로 점차 가온하였다. 용매를 감압하에 증발시키고, 잔류물을 톨루엔 (2 x)으로 공비 증류시켰다. 생성된 잔류물을 고-진공하에 건조시키고, 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

수율: 0.420g (96%).

실시예 1.6 - 거대고리화

DMF (40 ml) 중 2-((5-(6-아미노헥실아미노)-8-(벤질옥시)-1,6-나프티리딘-7-카르복사미도)메틸)-5-플루오로벤조산, TFA 염 (실시예 1.5; 0.42 g; 0.74 mmol)의 용액을 DMF (150 ml) 중 HBTU (0.84 g; 2.22 mmol) 및 DIPEA (3.77 ml; 22.2 mmol)의 용액에 실온에서 4시간에 걸쳐 서서히 가하였다. 반응 혼합물을 농축하였다. NH₄OH (3 ml)를 가하고, 혼합물을 30분 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 건조될 때까지 증발시켰다. 잔류물을 디클로로메탄 및 포화 NaHCO₃ 수용액 (x 2)에 분배하였다. 층을 분리하였다. 유기층을 건조시키고 (MgSO₄), 여과하고, 용매를 증발시켰다. 조 물질을 실리카겔 상에서 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (용리액: CH₂Cl₂/MeOH 80:1에서 20:1)로 정제하였다. 생성물 분획을 수집하고, 용매를 증발시켰다. 잔류물을 아세토니트릴로부터 분쇄하고, 생성물을 여과로 수집하고 건조시켰다.

수율: 0.080 g (무색 결정).

실시예 2.1 - 메틸 5-(5-( tert - 부톡시카르보닐아미노 )-N- 메틸펜틸술폰아미도 )-8-(토 실옥시 )-1,6- 나프티리딘 -7- 카르복실레이트

DMF (22　ml) 중 메틸 5-브로모-8-(토실옥시)-1,6-나프티리딘-7-카르복실레이트 (실시예 12; 10.3 mmol), tert-부틸 5-(N-메틸술파모일)펜틸카르바메이트 (실시예 11; 12.4　mmol), 2,2'-비피리딘 (12.4 mmol) 및 산화구리(I) (12.4 mmol)의 혼합물을 질소 스트림하에 1분 동안 교반하여 탈기하고 4시간 동안 120℃로 가열하였다. 갈색 현탁액이 소량의 용해되지 않은 산화구리(I)로 인해 암적색 용액이 되었다. 혼합물을 클로로포름으로 희석하고, 셀라이트를 가하고, 생성된 혼합물을 셀라이트의 플러그(plug)를 통해 여과하였다. 플러그를 클로로포름으로 세척하고, 합해진 여액을 물 중 EDTA의 용액과 함께 30분 동안 격렬하게 교반하고 그동안 질소를 서서히 버블링(bubbling)하였다. 상부 수성 상은 녹색이 된 반면 하부 유기상은 황색이 되었다. 유기상을 물 중 EDTA의 용액으로 세척하였다. 유기상을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 농축하였다. 잔류물을 SiO₂ 칼럼 크로마토그래피 (5:1에서 1:1, 헥산:에틸 아세테이트)로 정제하여 목적 생성물을 70% 수율로 수득하였다.

실시예 2.2 - 메틸 5-(5-( tert - 부톡시카르보닐아미노 )-N-메틸펜틸 술폰아미도 )-8-히드록시-1,6-나프티리딘-7-카르복실레이트

메틸 5-(5-(tert-부톡시카르보닐아미노)-N-메틸펜틸술폰아미도)-8-(토실옥시)-1,6-나프티리딘-7-카르복실레이트 (실시예 2.1; 8.68 mmol)를 DMF (17　ml)에 40℃에서 용해시키고, MeOH (4.1 ml; 21.7　mmol) 중 NaOMe의 33% 용액에 1 내지 2분에 걸쳐 25℃에서 옮겼다. 생성된 황색 균질 혼합물을 50℃로 가열하였다. 혼합물을 15분에 걸쳐 25℃로 냉각하고 25℃에서 15분 동안 숙성시켰다. 아세트산 (1 ml)을 1분에 걸쳐 가한 다음, 물을 가하였다. 슬러리를 30분 동안 숙성시키고 여과하였다. 여과 케이크를 물로 세척하고, 건조시켜 목적 화합물을 61% 수율로 수득하였다.

실시예 2.3 - 메틸 8-( 벤질옥시 )-5-(5-( tert - 부톡시카르보닐아미노 )-N- 메틸펜틸 - 술폰아미도 )-1,6- 나프티리딘 -7- 카르복실레이트

DMF (11 ml) 중 메틸 5-(5-(tert-부톡시카르보닐아미노)-N-메틸펜틸술폰아미도)-8-히드록시-1,6-나프티리딘-7-카르복실레이트 (실시예 2.2; 5.44 mmol), 및 Cs₂CO₃ (10.9　mmol)의 현탁액에 벤질 브로마이드 (10.9 mmol)를 가하였다. 혼합물을 밤새 교반하였다. 조 혼합물을 AcOEt/물로 추출하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 농축하였다. 생성물을 SiO₂ 칼럼 크로마토그래피 (1:1, AcOEt:Hex)로 정제하여, 목적 화합물을 75% 수율로 수득하였다.

실시예 2.4 - 8-( 벤질옥시 )-5-(5-( tert - 부톡시카르보닐아미노 )-N- 메틸펜틸술폰아미도 )-1,6- 나프티리딘 -7- 카르복실산

실온에서 메탄올 (8　ml) 및 물 (8 ml) 중 메틸 8-(벤질옥시)-5-(5-(tert-부톡시카르보닐아미노)-N-메틸-펜틸술폰아미도)-1,6-나프티리딘-7-카르복실레이트 (실시예 2.3; 4.05 mmol)의 용액에 수산화나트륨 (16.2 mmol)을 가하였다. 반응을 50℃에서 가열하였다. 에틸 아세테이트를 가하고, pH가 6 내지 7이 될 때까지 수성 상을 HCl 1N으로 처리하였다. 에틸 아세테이트를 다시 가하고, 층을 분리하고, 유기상을 MgSO₄로 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 94% 수율로 수득하고, 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

실시예 2.5 - 에틸 2-((8-( 벤질옥시 )-5-(5-( tert - 부톡시카르보닐아미노 )-N- 메틸 - 펜틸술폰아미도 )-1,6- 나프티리딘 -7- 카르복사미도 ) 메틸 )-5- 플루오로벤조에이트

디클로로메탄 (38 ml) 중 8-(벤질옥시)-5-(5-(tert-부톡시카르보닐아미노)-N-메틸펜틸술폰아미도)-1,6-나프티리딘-7-카르복실산 (실시예 2.4; 3.82 mmol)의 용액에 HBTU (4.58 mmol) 및 DIPEA (15.8 mmol)를 가하였다. 혼합물을 5분 동안 실온에서 교반하였다. 에틸 2-(아미노메틸)-5-플루오로벤조에이트 히드로클로라이드 (실시예 4; 4.58 mmol)를 실온에서 나누어 가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 생성물을 CH₂Cl₂로 추출하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 농축하였다. 조 생성물을 SiO₂ 칼럼 크로마토그래피 (AcOEt:Hex, 1:1)로 정제하여 목적 화합물을 71% 수율로 수득하였다.

실시예 2.6 - 2-((5-(5-아미노-N- 메틸펜틸술폰아미도 )-8-히드록시-1,6- 나프티리딘 -7-카 르복사미 도) 메틸 )-5- 플루오로벤조산 , HCl 염

에탄올 중 에틸 2-((8-(벤질옥시)-5-(5-(tert-부톡시카르보닐아미노)-N-메틸펜틸술폰아미도)-1,6-나프티리딘-7-카르복사미도)메틸)-5-플루오로벤조에이트 (실시예 2.5; 2.71 mmol)의 용액에 농축 HCl (37%; 1.1 ml)를 실온에서 가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 3일 동안 가열하였다. 용매를 증발시키고, 조 생성물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

실시예 3.1 - 메틸 5-(4-( tert - 부톡시카르보닐아미노 )-N- 메틸부틸술폰아미도 )-8-(토 실옥시 )-1,6- 나프티리딘 -7- 카르복실레이트

표제 화합물을 메틸 5-브로모-8-(토실옥시)-1,6-나프티리딘-7-카르복실레이트 (실시예 12; 10.3　mmol) 및 tert-부틸 4-(N-메틸술파모일)부틸카르바메이트 (실시예 8)로부터 시작하여 실시예 2.1에 기재된 바와 유사한 방식으로 제조하여 목적 화합물 (3.43 gr)을 수득하였다.

실시예 3.2 - 메틸 5-(4-아미노-N- 메틸부틸술폰아미도 )-8-( 토실옥시 )-1,6- 나프티리딘 -7- 카르복실레이트

디클로로메탄 (5 mL) 중 메틸 5-(4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-N-메틸부틸술폰아미도)-8-(토실옥시)-1,6-나프티리딘-7-카르복실레이트 (실시예 3.1; 5.52 mmol)의 용액에 트리플루오로 아세트산 (5 mL)을 0℃에서 가하였다. 첨가 후 반응물을 실온으로 가온하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 톨루엔 (3x)으로 공증발시켰다. 생성된 잔류물을 진공 하에 건조시키고, 추가 정제 없이 다음 단계 (실시예 3.3)에서 사용하였다.

실시예 3.3 - 메틸 5-(4-(2-(( tert - 부톡시카르보닐아미노 ) 메틸 )-5- 플루오로 - 벤즈아미도 )-N- 메틸부틸술폰아미도 )-8-( 토실옥시 )-1,6- 나프티리딘 -7- 카르복실레이트

디클로로메탄 (5 mL) 중 메틸 5-(4-아미노-N-메틸부틸술폰아미도)-8-(토실옥시)-1,6-나프티리딘-7-카르복실레이트 (실시예 3.2; 5.52 mmol)의 용액에 DIPEA (18.7 mmol) 및 HBTU (5.63 mmol)를 가하였다. 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반하였다. 2-((t ert-부톡시카르보닐아미노)메틸)-5-플루오로벤조산 (4.69 mmol)을 실온에서 나누어 가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 용매를 증발시켰다. 잔류물을 1M Na₂CO₃ 용액으로 세척하였다. 수성 상을 디클로로메탄으로 추출하고, 건조시킨 다음 농축하였다. 조 생성물을 SiO₂ 칼럼 크로마토그래피 (5:1에서 1:1 헥산:에틸 아세테이트)로 정제하여 목적 화합물을 49% 수율로 수득하였다.

실시예 3.4 - 5-(4-(2-(( Tert - 부톡시카르보닐아미노 ) 메틸 )-5- 플루오로벤즈아미도 )-N-메 틸부틸술폰아미 도)-8-( 토실옥시 )-1,6- 나프티리딘 -7- 카르복실산

THF와 물의 1:1 혼합물 (5.5 mL) 중 메틸 5-(4-(2-((tert-부톡시카르보닐아미노)메틸)-5-플루오로-벤즈아미도)-N-메틸부틸술폰아미도)-8-(토실옥시)-1,6-나프티리딘-7-카르복실레이트 (실시예 3.3; 2.75 mmol)의 용액에 수산화리튬 (4.13 mmol)을 실온에서 가하였다. 반응을 종료시킨 후, 에틸 아세테이트 및 물을 가하였다. pH가 5 내지 6이 될 때까지 수층을 HCl 1N으로 처리하였다. 수층을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 농축하여, 목적 물질을 41% 수율로 수득하였다.

실시예 3.5 - 5-(4-(2-( 아미노메틸 )-5- 플루오로벤즈아미도 )-N- 메틸부틸술폰아미도 )-8-( 토실옥시 )-1,6- 나프티리딘 -7- 카르복실산 , TFA 염

표제 화합물을, 5-(4-(2-((tert-부톡시카르보닐아미노)메틸)-5-플루오로벤즈아미도)-N-메틸부틸술폰아미도)-8-(토실옥시)-1,6-나프티리딘-7-카르복실산 (실시예 3.4; 1.1 mmol)으로부터 시작하여 실시예 3.2에 기재된 바와 유사한 방식으로 제조하였다.

실시예 3.6 - 거대고리화

목적 화합물을, 5-(4-(2-(아미노메틸)-5-플루오로벤즈아미도)-N-메틸부틸술폰아미도)-8-(토실옥시)-1,6-나프티리딘-7-카르복실산, TFA 염 (실시예 3.5; 1.57 mmol)으로부터 시작하여 실시예 1.6에 기재된 바와 유사한 방식으로 제조하였다. 조 생성물을 정제 없이 탈보호 단계 (화합물 7)에서 바로 사용하였다.

실시예 4.1 - 메틸 8-( 벤질옥시 )-5-(4-(4-( tert - 부톡시카르보닐아미노 )부틸)- 피페 라진-1-일)-1,6- 나프티리딘 -7- 카르복실레이트

DMA (10 ml) 중 메틸 8-(벤질옥시)-5-(피페라진-1-일)-1,6-나프티리딘-7-카르복실레이트 (실시예 13; 1.3 mmol)의 용액에 탄산칼륨 (2.6 mmol), 이어서 tert-부틸 4-브로모부틸카르바메이트 (1.3 mmol)를 가하고, 반응을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 물 및 에틸 아세테이트를 가하였다. 합해진 유기층을 물로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하여, 조 목적 화합물 (0.89 g)을 수득하였다.

실시예 4.2 - 8-( 벤질옥시 )-5-(4-(4-( tert - 부톡시카르보닐아미노 )부틸)피페라진-1-일)-1,6- 나프티리딘 -7- 카르복실산

메탄올 (2.5 ml)과 물 (2.5 ml)의 혼합물 중 메틸 8-(벤질옥시)-5-(4-(4-(tert-부톡시카르보닐아미노)부틸)-피페라진-1-일)-1,6-나프티리딘-7-카르복실레이트 (실시예 4.1; 1.2 mmol)의 용액에 수산화나트륨 (2.5 mmol)을 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 pH가 6에 이를 때까지 물 및 2N HCl로 켄칭하였다. 혼합물을 AcOEt (2x)로 추출하였다. 유기층을 건조시키고 (MgSO₄), 여과하여 고체 (400 mg)를 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

실시예 4.3 - 에틸 2-((8-( 벤질옥시 )-5-(4-(4-( tert - 부톡시카르보닐아미노 )부틸)-피페라진-1-일)-1,6- 나프티리딘 -7- 카르복사미도 ) 메틸 )-5- 플루오로벤조에이트

8-(벤질옥시)-5-(4-(4-(tert-부톡시카르보닐아미노)부틸)피페라진-1-일)-1,6-나프티리딘-7-카르복실산 (실시예 4.2; 1.4 mmol)을 디클로로메탄 (14　ml)에 용해시켰다. DIPEA (5.4 mmol) 및 HBTU (1.6 mmol)를 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반하였다. 에틸 2-(아미노메틸)-5-플루오로벤조에이트 히드로클로라이드 (실시예 4; 1.6 mmol)를 실온에서 나누어 가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 CH₂Cl₂로 희석하고 포화 Na₂CO₃ 수용액 (2 x) 및 H₂O로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 건조시키고 (MgSO₄), 여과하고, 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔 상에서 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (용리액: 헥산/EtOAc 10:1에서 1:1)로 정제하여 0.97 gr의 표제 화합물을 수득하였다.

실시예 4.4 - 2-((8-( 벤질옥시 )-5-(4-(4-( tert - 부톡시카르보닐아미노 )부틸)피페라진-1-일)-1,6- 나프티리딘 -7- 카르복사미도 ) 메틸 )-5- 플루오로벤조산

에틸 2-((8-(벤질옥시)-5-(4-(4-(tert-부톡시카르보닐아미노)부틸)피페라진-1-일)-1,6-나프티리딘-7-카르복사미도)메틸)-5-플루오로벤조에이트 (실시예 4.3; 1.4 mmol)를 THF (4.5 ml) 및 물 (4.5 ml)에 용해시켰다. 고체 LiOH 수화물 (1.6 mmol)을 실온에서 가하였다. 반응 혼합물을 24시간 동안 교반하고, 그 후 2N HCl을 pH가 6 내지 7에 이를 때까지 가하였다. 혼합물을 EtOAc로 2회 추출하고 합해진 유기 분획을 황산마그네슘으로 건조시켰다. 표제 화합물 함유 조 물질 (0.27 gr)을 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

실시예 4.5 - 2-((5-(4-(4- 아미노부틸 )피페라진-1-일)-8-히드록시-1,6- 나프티리딘 -7-카 르복사미 도) 메틸 )-5- 플루오로벤조산 , TFA 염

2-((8-(벤질옥시)-5-(4-(4-(tert-부톡시카르보닐아미노)부틸)피페라진-1-일)-1,6-나프티리딘-7-카르복사미도)메틸)-5-플루오로벤조산 (실시예 4.4; 0.39 mmol)을 디클로로메탄 (1.6 ml)에 용해시키고, 0℃로 냉각하였다. 이 저온 용액에 TFA (1.6 ml)와 디클로로메탄 (1.6 ml)의 혼합물을 가하고, 반응 혼합물을 교반하고 1시간 동안 0℃에서 실온으로 점차 가온하였다. 용매를 감압하에 증발시키고, 잔류물을 톨루엔 (2 x)으로 공비 증류시켰다. 생성된 잔류물 (0.42 g)을 고-진공하에 건조시키고, 추가 정제 없이 다음 단계 (화합물 8)에서 사용하였다.

실시예 5.1 - 메틸 8-( 벤질옥시 )-5-(4-(5-(2-(( tert - 부톡시카르보닐아미노 ) 메틸 )-5-플 루오로페녹 시) 펜타노일 )피페라진-1-일)-1,6- 나프티리딘 -7- 카르복실레이트

디클로로메탄 (10 ml) 중 메틸 8-(벤질옥시)-5-(피페라진-1-일)-1,6-나프티리딘-7-카르복실레이트 (실시예 13; 1.3 mmol), 5-(2-((tert-부톡시카르보닐아미노)메틸)-5-플루오로페녹시)펜탄산 (실시예 17; 1.6 mmol) 및 디이소프로필 에틸아민 (3.9 mmol)의 용액에 HBTU (2.0 mmol)를 가하였다. 혼합물을 밤새 교반하였다. 혼합물을 포화 NaHCO₃, 10% 시트르산 및 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시켰다. 용매를 진공 하에 제거하였다. 잔류물을 SiO₂ 상에서 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (용리액: 메탄올/ CH₂Cl₂, 1:100)로 정제하여 표제 화합물 (800 mg)을 수득하였다.

실시예 5.2 - 8-( 벤질옥시 )-5-(4-(5-(2-(( tert - 부톡시카르보닐아미노 ) 메틸 )-5- 플루오로페녹시 ) 펜타노일 )피페라진-1-일)-1,6- 나프티리딘 -7- 카르복실산

메틸 8-(벤질옥시)-5-(4-(5-(2-((tert-부톡시카르보닐아미노)메틸)-5-플루오로페녹시)펜타노일)피페라진-1-일)-1,6-나프티리딘-7-카르복실레이트 (실시예 5.1; 1.1 mmol)를 THF (6 ml), 메탄올 (6 ml) 및 물 (6 ml)의 혼합물에 용해시켰다. 수산화나트륨 (7.5 mmol)을 가하고, 2일 동안 교반하였다. 유기 용매를 진공 하에 제거하고, 잔류물을 디에틸 에테르로 세척하였다. 수성 잔류물을 1 N HCl을 사용하여 pH 8 내지 9로 산성화하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 세척하였다. 수성 상을 1 N HCl을 사용하여 pH 3 내지 4로 산성화하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기층을 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에거 건조시켰다. 용매를 진공 하에 제거하여 표제 화합물 (0.4 gr)을 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

실시예 5.3 - 5-(4-(5-(2-( 아미노메틸 )-5- 플루오로페녹시 ) 펜타노일 )피페라진-1-일)-8-( 벤질옥시 )-1,6- 나프티리딘 -7- 카르복실산 , TFA 염

표제 화합물을, 8-(벤질옥시)-5-(4-(5-(2-((tert-부톡시카르보닐아미노)메틸)-5-플루오로페녹시)펜타노일)피페라진-1-일)-1,6-나프티리딘-7-카르복실산 (실시예 5.2)으로부터 실시예 1.5에 기재된 바와 유사한 방법으로 제조하였다.

실시예 5.4 - 5-(4-(5-(2-( 아미노메틸 )-5- 플루오로페녹시 ) 펜타노일 )피페라진-1-일)-8-( 벤질옥시 )-1,6- 나프티리딘 -7- 카르복실산 , TFA 염의 거대고리화

DMF (20 ml) 중 5-(4-(5-(2-(아미노메틸)-5-플루오로페녹시)펜타노일)피페라진-1-일)-8-(벤질옥시)-1,6-나프티리딘-7-카르복실산, TFA 염 (실시예 5.3; 0.59 mmol) 및 디이소프로필 에틸아민 (1.8 mmol)의 용액을 DMF (140 ml) 중 디이소프로필 에틸아민 (1.8 mmol) 중 펜타플루오로페닐 디페닐포스피네이트 (0.71 mmol)와 디이소프로필 에틸아민 (0.4 ml)의 혼합물에 30분 동안 적가하였다. 혼합물을 36시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하고 잔류물을 CH₂Cl₂에 용해시키고, 포화 NaHCO₃, 10% 시트르산, 포화 NaHCO₃ 및 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시켰다. 용매를 진공 하에 제거하고, 고체 잔류물을 에테르로 세척하여 분말로서 300 mg을 수득하고, 이를 다음 단계 (화합물 10)에서 그대로 사용하였다 .

실시예 6.1 - 메틸 5-(4-(2-(( tert - 부톡시카르보닐아미노 ) 메틸 )-5- 플루오로페녹시 )-N- 메틸부틸술폰아미도 )-8- 메톡시 -1,6- 나프티리딘 -7- 카르복실레이트

NMP (30 ml) 중 메틸 5-브로모-8-메톡시-1,6-나프티리딘-7-카르복실레이트 (2.4 mmol), tert-부틸 4-플루오로-2-(4-(N-메틸술파모일)부톡시)벤질카르바메이트 (실시예 19; 2.6　mmol), 2,2'-비피리딘 (3.1 mmol) 및 산화구리(I) (3.1 mmol)의 혼합물을 120℃에서 질소 분위기 하에 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 디클로로메탄으로 희석하고 여과하였다. 여액을 10% 2-[2-(비스(카르복실레이토메틸)아미노)에틸-(카르복실레이토메틸)아미노]아세테이트 (EDTA) 이나트륨 염 용액, 포화 NaHCO₃ 용액 및 염수로 세척하였다.

유기층을 진공 중에 농축한 다음 메틸 t-부틸 에테르를 가하였다. 혼합물을 염수로 세척하고, 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 중에 농축하여 조 생성물을 수득하였다.

조 생성물을 SiO₂ 상에서 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (용리액: 석유 에테르/에틸 아세테이트 100/0에서 60/40)로 정제하여 표제 화합물 (0.48 g, 30% 수율)을수득하였다.

실시예 6.2

표제 화합물을, 메틸 5-(4-(2-((tert-부톡시카르보닐아미노)메틸)-5-플루오로페녹시)-N-메틸부틸술폰아미도)-8-메톡시-1,6-나프티리딘-7-카르복실레이트 (실시예 6.1)로부터 실시예 5.2, 5.3 및 5.4에 기재된 바와 유사한 절차에 따라서 3 단계 공정으로 제조하였다.

실시예 7.1 - 메틸 5-(5-(2-(( tert - 부톡시카르보닐아미노 ) 메틸 )-5- 플루오로페녹시 )-N- 메틸펜틸술폰아미도 )-8- 메톡시 -1,6- 나프티리딘 -7- 카르복실레이트

표제 화합물을, tert-부틸 4-플루오로-2-(5-(N-메틸술파모일)펜틸옥시)벤질카르바메이트 (실시예 23) 및 5-브로모-8-메톡시-1,6-나프티리딘-7-카르복실레이트를 사용하여 실시예 6.1에 대해 기재된 바와 유사한 방법으로 제조하였다.

실시예 7.2

표제 화합물을, 메틸 5-(5-(2-((tert-부톡시카르보닐아미노)메틸)-5-플루오로페녹시)-N-메틸펜틸술폰아미도)-8-메톡시-1,6-나프티리딘-7-카르복실레이트 (실시예 7.1)로부터 실시예 5.2, 5.3 및 5.4에 기재된 바와 유사한 절차에 따라서 3 단계 공정으로 제조하였다.

화합물 1

실시예 1.6으로부터의 마크로사이클 (80 mg; 0.15 mmol)을 1,4-디옥산 (5 ml) 중 4N HCl에 용해시키고, 혼합물을 40℃에서 1시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축하였다. 잔류물을 메탄올로부터 분쇄하고, 고체 생성물을 여과하고, 건조하였다.

화합물 2

메틸 8-(벤질옥시)-5-브로모-1,6-나프티리딘-7-카르복실레이트 (실시예 1) 및 N-tert-부톡시카르보닐-1,3-디아미노-프로판으로부터 시작하여 실시예 1.1 내지 1.6에 대해 기재된 바와 유사한 방식으로 화합물 2의 O-벤질 보호된 전구체를 제조하였다. 화합물 2를 수득하기 위한 탈-벤질화는 다음과 같이 수행하였다. O-벤질 전구체 마크로사이클을 디클로로메탄 (3.6 ml)에 용해시키고, 0℃로 냉각하였다. 이 혼합물에 트리플루오로 아세트산 (3.6 ml), 트리이소프로필 실란 (0.075 ml) 및 디클로로메탄 (3.6 ml)으로 이루어진 새로이 제조한 용액을 가하였다. 그 후의 혼합물을 1시간에 걸쳐 실온으로 가온하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축하였다. 잔류물을 디클로로메탄에 용해시키고, 포화 NaHCO₃로 세척하였다. 수성 상을 디클로로메탄 (2x)으로 추출하였다. 합해진 유기층을 건조시키고 (MgSO₄), 여과하고, 용매를 증발시켰다. 조 물질을 실리카겔 상에서 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (용리액: CH₂Cl₂/MeOH 50:1에서 10:1)로 정제하였다. 생성물 분획을 수집하고, 용매를 증발시켰다. 잔류물을 디에틸 에테르로부터 분쇄하고, 생성물을 여과로 수집하고 건조시켰다.

화합물 3

이 화합물은, 메틸 8-(벤질옥시)-5-브로모-1,6-나프티리딘-7-카르복실레이트 (실시예 1) 및 N-tert-부톡시카르보닐-1,3-디아미노부탄으로부터 시작하여 실시예 1.1 내지 1.6 및 화합물 2에 대해 기재된 바와 유사한 방식으로 제조되었다. 생성된 화합물을 YMC-팩(Pack) ODS-AQ C18 칼럼 (4.6 x 50 mm)과 함께 탈기제, 오토샘플러, 칼럼 오븐 및 UV 검출기를 갖춘 2원 펌프를 포함하는 에질리언트(Agilent) 1100 시리즈 액체 크로마토그래피 시스템을 사용하는 역상 HPLC로 특성화하였다. 칼럼 온도는 35℃이었다. 이동상을 2.6　ml/분의 유량으로 유지시키고 구배는 4.80분 내 95% 물 및 5% 아세토니트릴에서 95% 아세토니트릴로 진행시키고 후자는 1.20분 동안 유지하였다. 칼럼으로부터의 유동(flow)을 MS 분광계로 분할하였다. MS 검출기는 전기분무 이온화 공급원을 갖도록 구성된 것이었다. 모세관 전압은 3 kV이었고, 4중극 온도를 100℃에서 유지하였고, 탈용매화 온도는 300℃이었다. 질소를 분무기 가스로서 사용하였다. 질량 스펙트럼은 100에서 1400까지의 스캐닝으로부터 획득하였다. 주입량은 10 μl이었다. 데이타 획득은 에질리언트 켐스테이션 (Agilent Chemstation) 데이타 시스템을 사용하여 수행하였다. Rt: 2.6분 ;　MH⁺:　410

화합물 4

이 화합물은, 메틸 8-(벤질옥시)-5-브로모-1,6-나프티리딘-7-카르복실레이트 (실시예 1) 및 N-tert-부톡시카르보닐-1,3-디아니노펜탄으로부터 시작하여 실시예 1.1 내지 1.6 및 화합물 1에 대해 기재된 바와 유사한 방식으로 제조되었고, HCl 염으로서 단리되었다.

화합물 5

이 화합물은, 메틸 8-(벤질옥시)-5-브로모-1,6-나프티리딘-7-카르복실레이트 (실시예 1) 및 N-tert-부톡시카르보닐-1,3-디아미노헵탄으로부터 시작하여 실시예 1.1 내지 1.6 및 화합물 1에 대해 기재된 바와 유사한 방식으로 제조되었다. 화합물 5는 HCl 염으로서 단리되었다. 생성된 화합물을 화합물 3에 대해 기재한 방법을 사용하여 역상 HPLC에 의해 특성화하였다. Rt: 3.3분.　　 MH⁺:452

화합물 6

DMF (70 ml) 중 2-((5-(5-아미노-N-메틸펜틸술폰아미도)-8-히드록시-1,6-나프티리딘-7-카르복사미도)메틸)-5-플루오로벤조산, HCl 염 (실시예 2.6; 1.94 mmol)의 용액에 DMF (250 mL) 중 HBTU (5.77 mmol) 및 트리에틸 아민 (58 mmol)의 용액을 실온에서 서서히 적가하였다. HPLC는 완전한 전환을 나타내었다. 메탄올 중 NH₃의 용액을 가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 용매를 증발시켰다. 잔류물을 역 크로마토그래피로 정제하여 목적 화합물을 4% 수율로 수득하였다.

화합물 7

실시예 3.6에서 수득한 조 마크로사이클 (1.6 mmol)을 DMF (8　mL)에 용해시키고, 약 1 내지 2분에 걸쳐 메탄올 중 NaOMe의 30% 용액에 실온에서 옮겼다. 반응 혼합물을 아세트산 (3 mL)으로 켄칭하고, 용매를 진공 중에 증발시키고, 잔류물을 역상 HPLC로 정제하여 표제 화합물을 14% 수율로 마지막 두 단계에 걸쳐 수득하였다.

화합물 8

DMF (40 ml) 중 조 2-((5-(4-(4-아미노부틸)피페라진-1-일)-8-(히드록시)-1,6-나프티리딘-7-카르복사미도)메틸)-5-플루오로벤조산 TFA 염 (실시예 4.5; 0.39 mmol)의 용액을 DMF (90 ml) 중 HBTU (1.2 mmol) 및 DIPEA (11.8 mmol)의 용액에 실온에서 4시간에 걸쳐 서서히 가하였다. 30% 암모니아 용액 (3 ml)을 반응 혼합물에 가하고, 휘발성 물질을 진공 중에서 제거하였다. 잔류물을 디클로로메탄 및 포화 NaHCO₃ 수용액 (x 2)에 분배하였다. 층을 분리하였다. 유기층을 건조시키고 (MgSO₄), 여과하고, 용매를 증발시켰다. 조 물질을 조제용 HPLC로 정제하여 목적 물질을 분말 (56 mg)로서 수득하였다.

화합물 9

이 화합물은 실시예 4.1 내지 4.5 및 화합물 8에 대해 기재된 바와 유사한 방식으로 제조되었다.

화합물 10

실시예 5.4로부터의 보호된 마크로사이클 (0.2 gr)을 TFA (5 ml)에 용해시키고, 2시간 동안 환류하였다. 용매를 진공 하에 제거하였다. 잔류물을 포화 NaHCO₃로 15분 동안 분쇄하고, 고체를 여과로 수집하였다. 침전물을 조제용 TLC (용리액: CH₂Cl₂/메탄올, 10:1)로 정제하였다. 잔류물을 조제용 HPLC (C18, 용리액: MeOH/H₂O/TFA, 50:50:0.5)로 정제하였다. 수집된 분획을 합하고, 진공 하에 농축시키고, 포화 NaHCO₃로 pH 7 내지 8로 염기성화하고 CH₂Cl₂로 추출하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 잔류물을 CH₃CN으로부터 재결정화하여 표제 화합물을 고체 (6 mg)로서 수득하였다.

화합물 11

아세토니트릴 (2 ml) 및 톨루엔 (2 ml) 중 실시예 6.2에서 수득된 마크로사이클 (0.42 mmol) 및 아이오딘화나트륨 (0.92 mmol)의 용액에 SiCl₄ (0.92 mmol)를 0℃에서 질소 분위기 하에 가하였다. 반응의 완료 후, 물 (10 ml) 및 메탄올 (10 ml)을 가한 다음, CH₂Cl₂ (3* 10 ml)로 추출하였다. 합해진 유기층을 염수 (15 ml)로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에 증발시켰다.

잔류물을 에틸 에테르 및 CH₃CN으로 세척하였다. 여과에 의해 표제 화합물 (42 mg)을 수득하였다.

화합물 12

이 화합물은 출발 물질로서 실시예 7.2를 사용하여, 화합물 11에 기재된 바와 유사한 방식으로 제조되었다.

B. 화학식 I의 화합물의 생물학적 활성

검정 1 - HIV 복제 야생형, N155H 돌연변이체, 및 Q148R 돌연변이체에 대한 억제 활성

MT4 세포를 증강 녹색 형광 단백질 (enhanced green fluorescent protein: EGFP)의 발현을 위한 프로모터로서 HIV LTR에 대한 코딩 서열을 포괄하는 선택가능한 구조물(construct)로 형질감염시키고 영구 형질감염 세포를 후속적으로 선택함으로써 MT4-LTR-EGFP 세포를 수득하였다. CMV-EGFP 리포터 유전자를 가진 영구 형질감염 MT4 세포를 선택하여 MT4-사이토메갈로바이러스(CMV)-EGFP 세포를 수득하였다. 세포주를 10% 열-불활성화된 소 태아 혈청, 2 mM L-글루타민, 0.1% NaHCO₃, 및 항생물질 (0.02% 겐타마이신 및 0.8% G418)로 보충된 RPMI 1640 배지에 유지시키고, 가습 인큐베이터에서 5% CO₂ 분위기로 37℃에서 인큐베이션하였다.

퀵체인지(QuikChange) 부위-특이적 돌연변이 키트 (site-directed mutagenesis kit) (스트라타젠 (Stratagene), 미국 캘리포니아주 라 졸라) 및 고성능 액체 크로마토그래피-정제된 프라이머 (젠셋 올리고스 (Genset Oligos), 미국 캘리포니아주 라 졸라)를 사용하여 HIV-1 클론 HXB2D IN 코딩 서열을 함유하는 pUC19-5'HXB2D 벡터 (pHXB2D의 XbaI-SalI 단편)에서 N155H 및 Q148R 돌연변이체 인테그라제 코딩 서열을 구축하였다. 변경된 플라스미드 서열을 디데옥시리보스 서열분석으로 확인하였다.

부위 특이적 돌연변이체 (SDM) 바이러스 스톡 생성용으로, MT4 세포를 형질감염 전날 250,000개 세포/ml의 밀도로 계대배양하였다. 세포를 펠릿화하고 인산 완충 염수에 3.1 x 10⁶개 세포/ml의 농도로 재현탁시켰다. 0.8-ml 분량 (2.5 x 10⁶개 세포/ml)을 각각의 형질감염용으로 사용하였다. 형질감염은 0.4-cm 전극 큐벳 (바이오-래드(Bio-Rad))을 갖춘 바이오-래드 유전자 주입기(Bio-Rad Gene Pulser) (바이오-래드, 미국 캘리포니아주 허큘리스)로 수행하였다. 세포를 10 ㎍의 SalI-선형화된(linearized) pUC19-3'HXB2D (pHXB2D의 SalI-XbaI 단편) 및 5 ㎍의 SalI-분해된(digested) SDM을 이용하여 250 μF 및 300 V에서 전기천공한 다음, 실온에서 30분 인큐베이션하였다. 그 다음, 10 밀리리터의 신선한 배양 배지를 형질감염 세포의 현탁액에 가하고, 37℃에서 5% CO₂를 갖는 가습 분위기 중에서 인큐베이션을 수행하였다. 세포 배양물에서의 세포변성 효과 (CPE)의 출현을 모니터링하였다. 바이러스 브레이크스루 (전(full) CPE)에서, 형질감염 후 8 내지 10일에서 원심분리하여 배양 상등액을 전형적으로 수확하고 후속 약제 감수성 결정용으로 -80℃에서 저장하였다.

여러 억제제의 항바이러스 활성을 세포-기반 HIV-1 복제 검정으로 결정하였다. 억제제의 존재 또는 부재하에 HIV-1 (IIIB 또는 부위-특이적 돌연변이 균주 N155H 또는 Q148R; 0.0025의 감염 다중도 [MOI])으로 MT4-LTR-EGFP 세포 (150,000개 세포/ml)를 감염시켰다. 인큐베이션 3일 후, HIV 복제의 억제를 EGFP 형광성을 측정하여 정량하고, 세포 배양에서 HIV-1 복제의 50% 억제용으로 필요한 억제제 농도 (IIIB EC₅₀ - 표 1 참조)로서 나타내었다.

검정 2 -세포성 세포독성 활성

상이한 농도의 화학식 I의 화합물의 존재 또는 부재하에 배양된 모의(mock)-감염된 MT4-CMV-EGFP 세포 (150,000개 세포/ml)에 대해 검정 1의 실험과 병행하여 억제제의 세포독성을 결정하였다. 인큐베이션 3일 후, 세포 증식의 억제를 EGFP 형광성을 측정하여 정량하고, 세포의 성장을 50% 억제하는 화합물 농도 (CC₅₀ - 표 1 참조)로서 나타내었다.

검정 3 - 인간 혈청의 존재 하에 HIV 복제 야생형에 대한 억제 활성

50% 인간 혈청의 존재 하에서의 항바이러스 검정용으로 MT-4-LTR-EGFP 세포를 RPMI1640 배지 중 0.001 내지 0.01의 CCID50/세포의 MOI로 HIV-1 LAI (IIIB)로 감염시켰다. 1시간 인큐베이션 후, 세포를 세척하고, 10% 소 태아 혈청 (FCS), 또는 50% 인간 혈청의 존재하에 화합물의 일련의 희석액을 함유하는 96-웰 플레이트에 도말하였다. 4일 인큐베이션 후, 50% 인간 혈청의 존재하에 EC₅₀ (EC₅₀/HS - 표 1 참조)을 (문헌 [Fields, R. D., and M. V. Lancaster (1993) Am. Biotechnol. Lab. 11:48-50]에 기재된 바와 같이) 레자주린을 사용하여 세포 생존 검정으로 결정하였다.

검정 4 - 3 dQ 검정

HIV 인테그라제 매개 3'-가공의 억제를 생화학적 검정으로 결정하였다. 이를 위해, 짧은 (약 20 bp) 이중가닥 U5 LTR 기질을 10 mM Tris pH 8.0, 100 mM NaCl 중 5 μM 5'- TGTGGAAAATCTCTAGCAGT-3'-alx488 (서열 1)과 7 μM 답실(dabcyl)-5'-ACTGCTAGAGATTTTCCACA-3' (서열 2)의 혼성화 (95℃로 가열하고 30'에 걸쳐 RT로 점차 냉각함)에 의해 생성시켰다. 상이한 농도의 시험 화합물의 존재 또는 부재하에 반응 완충액 (25 mM MOPS pH 7.2, 10 mM DTT, 10 mM MgCl₂, 15 mM 글루탐산칼륨 및 2.5% DMSO) 중 150 nM 재조합 HIV-1 인테그라제, 100 nM 재조합 LEDGF 및 50　nM U5 LTR 기질의 인큐베이션에 의해 인테그라제 억제를 결정하였다. 37℃에서 2시간 후 1/5배 부피의 0.5% SDS를 가하여 반응을 중지시키고 형광성을 측정하고 (488 nm에서 여기(excitation), 538 nm에서 방출) HIV 인테그라제의 50% 억제에 필요한 억제제 농도 (IC₅₀ - 표 1 참조)로서 나타내었다.

SEQUENCE LISTING <110> Eli Lilly and Company <120> MACROCYCLIC INTEGRASE INHIBITORS <130> X-19428 <140> EP09172853.5 <141> 2009-10-13 <160> 2 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Human immunodeficiency virus <400> 1 tgtggaaaat ctctagcagt 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Human immunodeficiency virus <400> 2 actgctagag attttccaca 20

Claims

화학식 I의 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염.
<화학식 I>

상기 식에서,
- W는 -NH-, -N(CH₃)- 또는 피페라진이고,
- X는 결합, -C(=O)- 또는 -S(=O)₂-이고,
- Y는 C₃ _- ₇알킬렌이고,
- Z는 -NH-C(=O)- 또는 -O-이다.
제1항에 있어서, W가 -NH- 또는 -N(CH₃)-인 화합물.
제1항 또는 제2항에 있어서, X가 결합 또는 -S(=O)₂-인 화합물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, Y가 C₄ _- ₅알킬렌인 화합물.
제1항에 있어서, W가 피페라진인 경우 X가 -C(=O)-이고 Y가 C₃ _- ₄알킬인 화합물.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, Z가 -O-인 화합물.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, Z가 -NH-C(=O)-이고, 특히 -NH-C(=O)-의 질소가 Y에 결합되어 있는 화합물.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, -W-X-Y-Z- 링커가 8 또는 9개의 원자 길이인 화합물.
제1항에 있어서, -W-X-Y-Z-가
---NH-C₅ _- ₇알킬렌-NH-C(=O)---,
---N(CH₃)-S(=O)₂-C₄ _- ₅알킬렌-NH-C(=O)---,
---N(CH₃)-S(=O)₂-C₄ _- ₅알킬렌-O---,

로부터 선택되는 것인 화합물.
하기 화학식의 화합물.
항바이러스 유효량의 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 및 담체를 포함하는 제약 조성물.
HIV 복제의 억제제로서의 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 용도.