KR20120080178A - 라미닌332 산생 촉진 조성물 - Google Patents

라미닌332 산생 촉진 조성물 Download PDF

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Abstract

라미닌332의 산생을 촉진하는 작용을 갖는 신규 조성물로서, 일상적으로 사용할 수 있고, 안정적이며 또한 안전한 조성물을 개발한다. 본 발명은 D-알라닌 및 D-히드록시프롤린과 그 유도체 및/또는 염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종류 또는 2종류 이상의 화합물을 포함하는 라미닌332 산생 촉진 조성물을 제공한다. 피부 상태를 억제 및/또는 개선하기 위해서 사용되는 경우가 있다. 상기 피부 상태는 광노화, 주름, 피부 거칠음, 잔주름 및 건조를 포함하지만 이들에 한정되지 않는다. 상기 조성물은 피부 외용제 또는 식품으로서 사용되는 경우가 있다.

Description

라미닌332 산생 촉진 조성물{LAMININ-332 PRODUCTION ACCELERATING COMPOSITION}
본 발명은 D-알라닌 및 D-히드록시프롤린과 그 유도체 및/또는 염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종류 또는 2종류 이상의 화합물을 포함하는 라미닌332 산생 촉진 조성물과 상기 화합물을 투여하는 스텝을 포함하는 피부 장해를 억제 및/또는 개선하는 방법에 관한 것이다.
라미닌은 α쇄, β쇄 및 γ쇄로 이루어지는 3개쇄 단백질이며, 5종류의 α쇄, 3종류의 β쇄 및 3종류의 γ쇄의 조합으로 적어도 15종류의 아이소머의 존재가 알려져 있다. 그 중에서도 라미닌332(α3β3γ2, 이전의 명명법으로는 라미닌5)는 표피와 진피를 분리하는 기저막에 다량으로 존재하고, 피부의 구조 및 기능에 중요한 역할을 하는 것으로 여겨진다(비특허문헌 1). 라미닌332의 녹아웃 마우스는 표피와 진피가 분리되고, 수포를 형성하는 인간 유전성 질환인 결합부형 표피 수포증과 마찬가지의 표현형이 되어 라미닌332가 표피와 진피의 접착에 필수적인 것이 나타내어졌다(비특허문헌 2). 또한, 인간 선유아 세포를 포매한 콜라겐 겔 상에서 각화 세포를 배양한 피부 등가 모델에 라미닌332의 정제표품을 첨가하면 기저막 형성이 증강된다(비특허문헌 3). 표피 세포에서 산생되는 활성화 단백질 분해 효소 프라스민은 라미닌332의 α3 서브유닛의 아미노 말단 및 카르복실 말단의 펩티드와, β3 서브유닛의 아미노 말단의 펩티드를 절단한다. 절단 단편에는 각각 세포의 기질 접착 분자의 인식 부위와 7형 콜라겐의 결합 부위가 포함된다. 그래서 프라스민으로 소화된 라미닌332는 각질 세포와의 접착 능력이 감소한다. 또한, 프라스민으로 소화된 라미닌332는 7형 콜라겐과의 친화성이 쇠퇴한다. 그 때문에 자외선 조사 이외에 의한 피부의 노화에는 프라스민에 의한 라미닌332 소화와 이것에 의한 기저막의 기능 저하가 관여하는 것으로 여겨진다(비특허문헌 4).
따라서, 라미닌332의 산생을 촉진함으로써 자외선 조사 이외에 의한 피부의 노화를 억제 및/또는 개선할 수 있을 가능성이 있다. 라미닌332의 산생을 촉진하는 인자에 대해서는 α3 서브유닛의 유전자의 전사를 HIF1(비특허문헌 5) 및 Smad4(비특허문헌 6)가 유도하는 것이 최근 보고되었다. 그러나 HIF1은 산소 결핍이나 기계적 자극과 같은 환경 자극에 응답하는 전사 조절 인자이며, 호염증성 사이토카인에 의해서도 상향 조절된다. Smad4는 TGFβ의 시그널 전달에 관여하는 전사 조절 인자이다. 이들의 인자는 모두 분자량이 큰 단백질이며, 활성이 인산화 등에 의한 수식이나 다른 서브유닛의 회합 상태에 따라 조절되기 때문에 직접 생체 내에 투여하고 피부 조직 내의 표피 세포에 송달시켜서 라미닌332의 산생을 촉진하기 위해서 사용할 수 없다. 또한, 모두 광범한 인자에 의해 조절되어 라미닌332의 산생을 촉진하는 것 이외에 염증 반응 등의 생체의 기능에 큰 영향을 주는 인자이기 때문에 일상적으로 안전하게 사용할 수 없다.
Sugawara 외, Exp Dermatol. 17(6) ,473-80(2008) Aberdam 외, Nat. Genet. 6,299,(1994) Amano, S., SOFＷ J., 134:10(2008) Amano, S., J. Investig. Dermatol. Symp. Proc. 14:2-7(2009) Fitsialos, G. 외, J. Cell Sci., 121:2992(2008) Zboralski, D. 외, BMC Cancer, 8:215(2008)
그래서 라미닌332의 산생을 촉진할 수 있는 조성물로서, 일상적으로 사용할 수 있고, 안정적이며 또한 안전한 조성물을 개발할 필요가 있다.
본 발명은 D-알라닌 및 D-히드록시프롤린과 그 유도체 및/또는 염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종류 또는 2종류 이상의 화합물을 포함하는 라미닌332 산생 촉진 조성물을 제공한다.
본 발명의 라미닌332 산생 촉진 조성물은 피부 상태를 억제 및/또는 개선하기 위해서 사용되는 경우가 있다.
본 발명의 라미닌332 산생 촉진 조성물에 있어서 상기 피부 상태는 광노화, 주름, 피부 거칠음, 잔주름 및 건조를 포함하지만 이들에 한정되지 않는다.
본 발명의 라미닌332 산생 촉진 조성물은 의약품으로서 사용되는 경우가 있다.
본 발명의 라미닌332 산생 촉진 조성물은 피부 외용제로서 사용되는 경우가 있다.
본 발명의 라미닌332 산생 촉진 조성물은 식품으로서 사용되는 경우가 있다.
본 발명은 D-알라닌 및 D-히드록시프롤린과 그 유도체 및/또는 염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종류 또는 2종류 이상의 화합물을 포함하는 라미닌332 산생 촉진 조성물을 투여하는 스텝을 포함하고, 피부 상태를 억제 및/또는 개선하는 방법을 제공한다.
본 발명의 방법에 의해 억제 및/또는 개선되는 피부 상태는 광노화, 주름, 피부 거칠음, 잔주름 및 건조를 포함하지만 이들에 한정되지 않는다.
본 발명의 방법에 있어서 상기 라미닌332 산생 촉진 조성물은 의약품의 경우가 있다.
본 발명의 방법에 있어서 상기 라미닌332 산생 촉진 조성물은 피부 외용제의 경우가 있다.
본 발명의 방법에 있어서 상기 라미닌332 산생 촉진 조성물은 식품 조성물의 경우가 있다.
본 명세서에 있어서 D-알라닌 및 D-히드록시프롤린의 「염」이란 D-알라닌 및 D-히드록시프롤린의 라미닌332 산생의 촉진 효과를 손상하지 않는 것을 조건으로 해서 금속염, 아민염 등을 포함하는 어느 하나의 염을 말한다. 상기 금속염은 알칼리 금속염, 알칼리 토류 금속염 등을 포함하는 경우가 있다. 상기 아민염은 트리에틸아민염, 벤질아민염 등을 포함하는 경우가 있다.
본 명세서에 있어서 D-알라닌 및 D-히드록시프롤린의 「유도체」란 D-알라닌 및 D-히드록시프롤린의 라미닌332 산생의 촉진 효과를 손상하지 않는 것을 조건으로 해서 D-알라닌 및 D-히드록시프롤린의 분자가 아미노기나 카르복실기나 측쇄 중에 있어서 어느 하나의 원자단과 공유 결합한 것을 나타낸다. 상기 어느 하나의 원자단은 N-페닐아세틸기, 4,4'-디메톡시트리틸(DMT)기 등과 같은 보호기와, 단백질, 펩티드, 당, 지질, 핵산 등과 같은 생체 고분자와, 폴리스티렌, 폴리에틸렌, 폴리비닐, 폴리에스테르 등과 같은 합성 고분자와, 에스테르기 등과 같은 관능기를 포함하지만 이들에 한정되지 않는다. 상기 에스테르기는 예를 들면 메틸에스테르, 에틸에스테르기 이외의 지방족 에스테르나 방향족 에스테르를 포함하는 경우가 있다.
아미노산에는 광학 이성체로서 L-체와 D-체가 있지만 천연의 단백질은 L-아미노산이 펩티드 결합한 것이며, 세균의 세포벽 등의 예외를 제외하고 L-아미노산만이 이용되어 있는 점에서 인간을 비롯한 포유류에는 L-아미노산만이 존재하고, L-아미노산만을 이용하고 있는 것으로 여겨져 왔다(키노우치 타다토시 외, 단백질 핵산 효소, 50:453-460(2005), 레닌저의 신생화학 [상] 제 2 판 pp132-147(1993) 히로카와 서점, 하퍼?생화학 원서 22판 pp21-30(1991) 마루젠). 따라서, 종전보다 학술적으로도 산업적으로도 아미노산으로서는 L-아미노산만이 전적으로 사용되어 왔다.
예외적으로 D-아미노산이 사용되는 케이스로서는 세균에 산생시키는 항생 물질의 원료로서 사용하는 경우 및 아미노산을 화학 합성했을 때에 등량 얻어지는 L-아미노산과 D-아미노산 혼합물로 L-아미노산만을 분취하는 비용을 생략하기 위해서 그대로 DL-아미노산 혼합물로서 D-아미노산을 사용하고 있는 식품 첨가물의 예가 있다. 그러나 생리 활성을 갖는 물질로서 D-아미노산만을 산업적으로 사용하고 있는 예는 종래 없었다.
D-세린이나 D-아스파르트산은 D체의 비율이 높은 점에서 비교적 연구가 진척되고 있다. D-세린은 대뇌, 해마에 국재되고, 뇌 내의 NMDA 수용체의 조절 인자로 밝혀져 있다. D-아스파르트산은 정소나 송과선에 국재가 확인되고, 호르몬 분비의 제어에 관여하고 있는 것이 나타내어져 있다(일본 특허 공개 2005-3558호 공보). 그러나 피부에 있어서의 D-알라닌 및 D-히드록시프롤린의 생리 작용은 밝혀져 있지 않다.
이하의 실시예에 나타내는 바와 같이 D-알라닌 및 D-히드록시프롤린이 라미닌332 산생량을 증대하는 효과는 지금까지 알려져 있지 않았다. 따라서, D-알라닌 및/또는 D-히드록시프롤린을 포함하는 본 발명의 라미닌332 산생 촉진 조성물은 신규 발명이다.
최근 ddY 마우스에 10mM의 D-아미노산 수용액을 2주일 자유 섭취시킨 후 각 기관에서 D-아미노산 농도를 측정한 결과 송과선에서는 송과선 1선당 3-1000pmol이며, 뇌조직에서는 습중량 1그램당 2-500㎚ol인 것이 보고되었다 (Morikawa, A. 외, Amino Acids, 32:13-20(2007)). 이것에 의거해서 이하에 설명하는 본 발명의 조성물에 포함되는 D-알라닌 및 D-히드록시프롤린의 1일 섭취량의 하한이 산출되었다.
본 발명의 D-알라닌은 이하의 실시예에 나타내는 바와 같이 배양 인간 표피 각화 세포에 대하여 0.1μM?1μM의 농도에서 라미닌332 산생을 촉진하는 효과를 갖는다. 따라서, 본 발명의 피부 증상 개선제와 피부 외용제와 식품 조성물에 포함되는 D-알라닌의 양은 이 농도 범위의 D-알라닌이 생체 피부 조직의 선유아 세포에 송달되는 것을 조건으로 해서 어떠한 함유량이어도 상관없다. 본 발명의 조성물이 외용제인 경우에 있어서의 D-알라닌의 함유량은 본 발명의 조성물 전체량 중 0.000015중량%?50중량%이거나 배합 가능한 최대 중량 농도까지의 범위이면 좋다. 즉, 상기 조성물이 외용제인 경우에 있어서의 D-알라닌의 함유량은 0.00003중량%?30중량%가 바람직하고, 0.0003중량%?3중량%가 가장 바람직하다. 본 발명의 조성물이 내복제인 경우에 있어서의 D-알라닌의 함유량은 0.00001중량%?100중량%의 범위이면 좋다. 본 발명의 조성물이 내복제인 경우에 있어서의 D-알라닌의 함유량은 0.00002중량%?80중량%가 바람직하고, 0.0002중량%?60중량%인 것이 가장 바람직하다. 또한, 본 발명의 조성물에 포함되는 D-알라닌의 1일 섭취량의 하한은 체중 1㎏당 0.01ng이면 좋고, 0.1ng이 바람직하고, 1ng이 보다 바람직하다.
본 발명의 D-히드록시프롤린은 이하의 실시예에 나타내는 바와 같이 배양 인간 표피 각화 세포에 대하여 0.1μM?1μM의 농도에서 라미닌332 산생을 촉진하는 효과를 갖는다. 따라서, 본 발명의 피부 증상 개선제와 피부 외용제와 식품 조성물에 포함되는 D-히드록시프롤린의 양은 이 농도 범위의 D-히드록시프롤린이 생체 피부 조직의 선유아 세포에 송달되는 것을 조건으로 해서 어떠한 함유량이어도 상관없다. 본 발명의 조성물이 외용제인 경우에 있어서의 D-히드록시프롤린의 함유량은 본 발명의 조성물 전체량 중 0.000015중량%?50중량%이거나 배합 가능한 최대 중량 농도까지의 범위이면 좋다. 즉, 상기 조성물이 외용제인 경우에 있어서의 D-히드록시프롤린의 함유량은 0.00003중량%?30중량%가 바람직하고, 0.0003중량%?3중량%가 가장 바람직하다. 본 발명의 조성물이 내복제인 경우에 있어서의 D-히드록시프롤린의 함유량은 0.00001중량%?100중량%의 범위이면 좋다. 본 발명의 조성물이 내복제인 경우에 있어서의 D-히드록시프롤린의 함유량은 0.00002중량%?80중량%가 바람직하고, 0.0002중량%?60중량%인 것이 가장 바람직하다. 또한, 본 발명의 조성물에 포함되는 D-히드록시프롤린의 1일 섭취량의 하한은 체중 1㎏당 0.01ng이면 좋고, 0.1ng이 바람직하고, 1ng이 보다 바람직하다.
본 발명의 조성물은 D-알라닌 및 D-히드록시프롤린, D-알라닌 및 D-히드록시프롤린의 염 및/또는 생체 내에서 약물 대사 효소 이외에 의해 D-알라닌을 방출할 수 있는 유도체에 첨가하고, D-알라닌 및 D-히드록시프롤린의 라미닌332 산생의 촉진 효과를 손상하지 않는 것을 조건으로 해서 1종류 또는 2종류 이상의 약학적으로 허용되는 첨가물을 더 포함하는 경우가 있다. 상기 첨가물은 희석제 및 팽창제와 결합제 및 접착제와 활제와 유동 촉진제와 가소제와 붕괴제와 담체 용매와 완충제와 착색료와 향료와 감미료와 방부제 및 안정화제와 흡착제와 당업자에게 알려진 기타 의약품 첨가제를 포함하지만 이들에 한정되지 않는다.
본 발명의 조성물은 유효 성분으로서 D-알라닌 및 D-히드록시프롤린, D-알라닌 및 D-히드록시프롤린의 염 및/또는 생체 내에서 약물 대사 효소 이외에 의해 D-알라닌 및 D-히드록시프롤린을 방출할 수 있는 유도체만을 사용해서 조제하는 것도 가능하지만 통상 본 발명의 효과를 손상하지 않는 범위에서 의약부외품을 포함하는 화장품이나 의약품 등의 피부 외용제 등에 사용되는 것 이외의 성분을 필요에 따라 적당히 배합할 수 있다. 상기 이외의 성분(임의 배합 성분)으로서는 예를 들면 오일 성분, 계면활성제, 분말, 색재, 물, 알코올류, 증점제, 킬레이트제, 실리콘류, 산화 방지제, 자외선 흡수제, 보습제, 향료, 각종 약효 성분, 방부제, pH 조정제, 중화제 등을 들 수 있다.
본 발명의 피부 상태를 억제 및/또는 개선하기 위해서 사용되는 라미닌332 산생 촉진 조성물(이하, 「피부 상태 개선제」라고 한다)의 제형은 예를 들면 연고, 크림, 유액, 로션, 팩, 젤제, 부착제 등의 외용제와, 예를 들면 분말, 과립, 소프트 캡슐, 정제 등의 경구제와, 예를 들면 경비(經鼻) 스프레이 등의 경비제와, 주사제를 포함하는 종래의 의약부외품 조성물 및 의약품 조성물에 사용하는 것이면 어느 것이어도 상관없다.
본 발명의 피부 외용제의 제형은 예를 들면 연고, 크림, 유액, 로션, 팩, 젤제, 부착제 등을 포함하는 종래의 피부 외용제에 사용하는 것이면 어느 것이어도 상관없다.
본 발명의 식품 조성물은 D-알라닌 및 D-히드록시프롤린, D-알라닌 및 D-히드록시프롤린의 염 및/또는 생체 내에서 약물 대사 효소 이외에 의해 D-알라닌 및 D-히드록시프롤린을 방출할 수 있는 유도체에 첨가해서 D-알라닌 및 D-히드록시프롤린의 라미닌332 산생의 촉진 효과를 손상하지 않는 것을 조건으로 해서 조미료, 착색료, 보존료 이외의 식품으로서 허용되는 성분을 포함하는 경우가 있다.
본 발명의 식품 조성물은 예를 들면 캔디, 쿠키, 된장, 프렌치 드레싱, 마요네즈, 프렌치 브레드, 간장, 요구르트, 후리카케, 조미료?낫토의 소스, 낫토, 모로미 흑초 등 종래 식품 조성물에 사용하는 것이면 어느 것이어도 좋고, 상기 예시에 한정되는 것은 아니다.
도 1은 KC 세포에 대한 D-알라닌의 영향을 나타내는 그래프이다.
도 2는 KC 세포에서의 라미닌332 산생에 대한 D-알라닌의 효과를 나타내는 그래프이다.
도 3은 HaCaT 세포에 대한 D-알라닌의 영향을 나타내는 그래프이다.
도 4는 HaCaT 세포에 대한 D-히드록시프롤린의 영향을 나타내는 그래프이다.
도 5는 HaCaT 세포에서의 라미닌332 산생에 대한 D-알라닌의 효과를 나타내는 그래프이다.
도 6은 HaCaT 세포에서의 라미닌332 산생에 대한 D-히드록시프롤린의 효과를 나타내는 그래프이다.
도 7은 HaCaT 세포에서의 라미닌332 산생에 대한 다양한 농도의 D-알라닌의 효과를 나타내는 그래프이다.
도 8은 HaCaT 세포에서의 라미닌332 산생에 대한 다양한 농도의 D-히드록시프롤린의 효과를 나타내는 그래프이다.
도 9는 HaCaT 세포에서의 라미닌332 산생에 대한 다양한 농도의 D-아스파르트산의 효과를 나타내는 그래프이다.
도 10은 HaCaT 세포에서의 라미닌332 산생에 대한 다양한 농도의 D-아스파라긴의 효과를 나타내는 그래프이다.
도 11은 HaCaT 세포에서의 라미닌332 산생에 대한 다양한 농도의 D-프롤린의 효과를 나타내는 그래프이다.
도 12는 HaCaT 세포에서의 라미닌332 산생에 대한 다양한 농도의 D-세린의 효과를 나타내는 그래프이다.
이하에 설명하는 본 발명의 실시예는 예시만을 목적으로 하고, 본 발명의 기술적 범위를 한정하는 것은 아니다. 본 발명의 기술적 범위는 특허청구범위의 기재에 의해서만 한정된다.
본 명세서에 있어서 언급되는 모든 문헌은 그 전체가 인용에 의해 본 명세서에 받아들여진다.
실시예 1
1. 알라닌 및 히드록시프롤린 첨가에 의한 라미닌332 산생 촉진
1-1. 재료와 방법
(1) 세포
세포는 인간 표피 세포로부터 유래된 HaCaT 세포(H. Hans 외, Experimental Cell Research 239:399(1998))와 인간 각화 세포로부터 유래된 KC 세포(산코 쥰야쿠(주), 제조원:LONZA Ｗalkersville Inc.)가 사용되었다. 상기 세포는 24웰 플레이트에 1웰당 4×104개가 되도록 파종되고, 세포 배양용 배지(D-MEM(1g/L글루코오스), 와코 쥰야쿠)에 BSA를 0.1% 첨가한 배지(이하, 「통상 배지」라고 한다)를 사용해서 37℃, 5% CO2 및 포화 수증기 분위기 하에서 24시간 배양되었다.
(2) 알라닌 및 히드록시프롤린의 첨가
그 후 상기 세포는 L- 또는 D-알라닌의 1μM나 L- 및 D-알라닌을 함께 0.5μM씩이나 L- 또는 D-히드록시프롤린의 1μM나 L- 및 D-히드록시프롤린을 함께 0.5μM씩을 상기 통상 배지에 첨가한 배지로 바뀌어 24시간 배양되었다. 알라닌 및 히드록시프롤린을 첨가하지 않는 상기 통상 배지가 음성대조에서서 사용되었다. 본 실시예에서 사용된 D-히드록시프롤린은 4-시스-D-히드록시프롤린이었다.
(3) 라미닌332 산생량의 정량
배양 종료 후에 배지를 회수하여 3000rpm으로 5분간 원심 분리하고, 상청액 중의 라미닌332 농도가 ELISA법(Amano, S. 외, J.Immunol.Methods, 224:161(1999))을 사용해서 측정되었다. 상기 ELISA법은 라미닌5의 α3쇄에 대한 단일 클론 항체인 BM165와, 라미닌5의 β3쇄에 대한 단일 클론 항체인 6F12의 바이오틴화 콘주게이트를 사용하는 샌드위치 ELISA법으로 호스래디쉬 퍼옥시다아제(horseradish peroxidase) 표식 아비진D(Vector Labs사, 카탈로그 번호 A-2004)에 의해 검출된다. PBS가 대조로서 사용되었다.
(4) 생세포수의 정량
배지 회수 후 세포는 PBS로 세정되고, alamarBlue(상표, Biosource, 바이오 소스?인터내셔날)가 최종 농도 10%가 되도록 첨가되었다. 2시간 후 Ahmed S. A. 외, (J. Immunol. Method. 170,211-224(1994)) 및 제조자의 지시서에 따라 여기 파장 544㎚, 형광 파장 590㎚으로 alamarBlue액의 형광 강도가 측정되었다.
1-2. 결과
(1) KC 생세포수의 정량
도 1은 KC 세포의 증식으로의 알라닌 첨가의 영향을 조사한 실험 결과를 나타낸다. 각 실험 조건의 오차 막대는 동일 조건으로 3회 반복한 실험 결과의 측정값의 표준편차를 나타낸다.
KC 세포에 있어서 음성대조의 alamarBlue(상표)의 형광 강도의 상대값(이하, 동일)은 50이었다. 1μM의 L-알라닌 첨가 배지와 1μM의 D-알라닌 첨가 배지와 0.5μM씩의 L- 및 D-알라닌 첨가 배지로 배양된 KC 세포의 형광 강도는 각각 40, 45 및 50이었다. KC 세포에서는 음성대조에 비해 알라닌 첨가 배지로 배양된 세포의 alamarBlue(상표)의 형광 강도는 Tukey-Kramer 검정에서 유의차는 없었다. 그래서 L- 및 D-알라닌은 KC 세포에 대하여 세포 독성이 없는 것이 나타내어졌다.
(2) KC 세포의 라미닌332 산생
도 2에 KC 세포에서의 라미닌332 산생에 대한 알라닌 첨가의 효과를 조사한 실험 결과를 나타낸다. 도 2의 그래프의 세로축은 각 웰의 배양 상청액 중의 라미닌332 농도에 비례하는 ELISA 측정의 흡광도를 각 웰의 세포수에 비례하는 alamarBlue(상표)의 형광 강도로 나눈 몫(이하, 「세포수당 라미닌332 농도의 상대값」이라고 한다)을 나타낸다. 각 실험 조건의 오차 막대는 동일 조건으로 3회 반복한 실험 결과의 계산값의 표준편차를 나타낸다. 또한, 아스테리스크(＊＊)는 Tukey-Kramer 검정에서 p가 1% 미만인 것을 나타낸다.
세포수당 라미닌332 농도의 상대값은 음성대조에서 0.35이었다. 1μM의 L-알라닌 첨가 배지와 1μM의 D-알라닌 첨가 배지와 0.5μM씩의 L- 및 D-알라닌 첨가 배지로 배양된 KC 세포의 세포수당 라미닌332 농도의 상대값은 각각 0.40, 0.50 및 0.45이었다. 1μM의 D-알라닌 첨가와 음성대조 사이에서는 Tukey-Kramer 검정에서 p가 1% 미만이 되어 유의의 차가 있었다. 그래서 D-알라닌 첨가에 의한 KC 세포에서의 라미닌332 산생 촉진이 증명되었다.
(3) HaCaT 생세포수의 정량
도 3 및 도 4는 HaCaT 세포의 증식으로의 알라닌 및 히드록시프롤린의 첨가의 영향을 조사한 실험 결과를 나타낸다. 이하 D-히드록시프롤린(D-Hyp)은 4-시스-D-히드록시프롤린을 나타낸다. 각 실험 조건의 오차 막대는 동일 조건으로 3회 반복한 실험 결과의 측정값의 표준편차를 나타낸다.
HaCaT 세포에 있어서 음성대조의 alamarBlue(상표)의 형광 강도는 300이었다. 1μM의 L-알라닌 첨가 배지와 1μM의 D-알라닌 첨가 배지와 0.5μM씩의 L- 및 D-알라닌 첨가 배지로 배양된 HaCaT 세포의 형광 강도는 모두 250이었다(도 3). 1μM의 L-히드록시프롤린 첨가 배지와 1μM의 D-히드록시프롤린 첨가 배지와 0.5μM씩의 L- 및 D-히드록시프롤린 첨가 배지로 배양된 HaCaT 세포의 형광 강도는 모두 280이었다(도 4). HaCaT 세포에서도 음성대조에 비해 알라닌 및 D-히드록시프롤린의 첨가 배지로 배양된 세포의 alamarBlue(상표)의 형광 강도는 Tukey-Kramer 검정에서 유의차는 없었다. 그래서 L- 및 D-알라닌과 L- 및 D-히드록시프롤린은 HaCaT 세포에 대해서도 세포 독성이 없는 것이 나타내어졌다.
(4) 알라닌 첨가에 의한 HaCaT 세포의 라미닌332 산생
도 5에 HaCaT 세포에서의 라미닌332 산생에 대한 알라닌 첨가의 효과를 조사한 실험 결과를 나타낸다. 도 5의 그래프의 세로축은 각 웰의 배양 상청액 중의 세포수당 라미닌332 농도의 상대값을 나타낸다. 각 실험 조건의 오차 막대는 동일 조건으로 3회 반복한 실험 결과의 계산값의 표준편차를 나타낸다. 또한, 아스테리스크(＊＊)는 Scheffe's F-검정에서 p가 1% 미만이며, 아스테리스크(＊)는 p가 5% 미만인 것을 나타낸다.
세포수당 라미닌332 농도의 상대값은 음성대조에서 0.04이었다. 1μM의 L-알라닌 첨가 배지와 1μM의 D-알라닌 첨가 배지와 0.5μM씩의 L- 및 D-알라닌 첨가 배지로 배양된 HaCaT 세포의 세포수당 라미닌332 농도의 상대값은 각각 0.07, 0.11 및 0.10이었다. 1μM의 D-알라닌 첨가와 음성대조 사이에서는 Scheffe's F-검정에서 p가 1% 미만이 되고, D-알라닌 및 L-알라닌의 0.5μM씩 혼합 첨가와 음성대조 사이에서는 Scheffe's F-검정에서 p가 5% 미만이 되고, 1μM의 D-알라닌과 1μM의 L-알라닌 사이에서는 Scheffe's F-검정에서 p가 5% 미만이 되어 모두 유의의 차가 있었다. 그래서 KC 세포와 마찬가지로 HaCaT 세포이어도 D-알라닌 첨가에 의한 라미닌332 산생 촉진이 증명되었다.
(5) 히드록시프롤린 첨가에 의한 HaCaT 세포의 라미닌332 산생
도 6에 HaCaT 세포에서의 라미닌332 산생에 대한 히드록시프롤린 첨가의 효과를 조사한 실험 결과를 나타낸다. 도 6의 그래프의 세로축은 각 웰의 배양 상청액 중의 세포수당 라미닌332 농도의 상대값을 나타낸다. 각 실험 조건의 오차 막대는 동일 조건으로 3회 반복한 실험 결과의 계산값의 표준편차를 나타낸다.
세포수당 라미닌332 농도의 상대값은 음성대조에서 0.04이었다. 1μM의 L-히드록시프롤린 첨가 배지와 1μM의 D-히드록시프롤린 첨가 배지와 0.5μM씩의 L- 및 D-히드록시프롤린 첨가 배지로 배양된 HaCaT 세포의 세포수당 라미닌332 농도의 상대값은 각각 0.05, 0.065 및 0.06이었다.
실시예 2
2. 다양한 아미노산 첨가에 의한 라미닌332 산생량의 비교
2-1. 재료와 방법
세포는 HaCaT 세포가 사용되고, 실시예 1과 마찬가지로 배양되었다. 그 후 상기 세포는 10㎚, 100㎚ 및 1000㎚의 L- 또는 D-알라닌이나 L- 또는 D-히드록시프롤린이나 L- 또는 D-아스파르트산이나 L- 또는 D-아스파라긴이나 L- 또는 D-프롤린이나 L- 또는 D-세린 중의 아미노산을 통상 배지에 첨가한 배지로 바뀌어 24시간 배양되었다. 상기 아미노산을 첨가하지 않은 상기 통상 배지가 음성대조에서서 사용되었다. 본 실시예에서 사용된 D-히드록시프롤린은 4-시스-D-히드록시프롤린이었다. 라미닌332 산생량은 실시예 1과 마찬가지로 측정되었다. 또한, 이하의 실험에서는 아미노산 첨가에 의한 세포 독성은 어느 농도에서도 확인되지 않았기 때문에 각각의 실험 조건으로 세포의 라미닌332 산생량이 비교되었다.
2-2. 결과
(1) 알라닌 첨가
도 7에 HaCaT 세포에서의 라미닌332 산생에 대한 다양한 농도의 알라닌의 첨가 효과를 조사한 실험 결과를 나타낸다. 도 7의 그래프의 세로축은 각 웰의 배양 상청액 중의 라미닌332 농도(ng/mL)를 나타낸다. 각 실험 조건의 오차 막대는 동일 조건으로 4회 반복한 실험 결과의 계산값의 표준편차를 나타낸다.
라미닌332 농도는 음성대조에서 1.7ng/mL이었다. 10㎚, 100㎚ 및 1000㎚의 L-알라닌 첨가 배지 및 D-알라닌 첨가 배지로 배양된 HaCaT 세포의 라미닌332 농도는 각각 1.7ng/mL 및 1.7ng/mL와, 2.3ng/mL 및 3.4ng/mL와, 2.8ng/mL 및 4.8ng/mL이었다. 이상의 결과로부터 D-알라닌은 100ng/mL 이상의 농도에서 라미닌332 산생을 촉진하는 것이 나타내어졌다.
(2) 히드록시프롤린 첨가
도 8에 HaCaT 세포에서의 라미닌332 산생에 대한 다양한 농도의 히드록시프롤린의 첨가 효과를 조사한 실험 결과를 나타낸다. 도 8의 그래프의 세로축은 각 웰의 배양 상청액 중의 라미닌332 농도(ng/mL)를 나타낸다. 각 실험 조건의 오차 막대는 동일 조건으로 4회 반복한 실험 결과의 계산값의 표준편차를 나타낸다.
라미닌332 농도는 음성대조에서 1.5ng/mL이었다. 10㎚, 100㎚ 및 1000㎚의 L-히드록시프롤린 첨가 배지 및 D-히드록시프롤린 첨가 배지로 배양된 HaCaT 세포의 라미닌332 농도는 각각 1.5ng/mL 및 1.5ng/mL와, 2.3ng/mL 및 3.3ng/mL와, 2.7ng/mL 및 4.4ng/mL이었다. 이상의 결과로부터 D-히드록시프롤린은 100ng/mL 이상의 농도에서 라미닌332 산생을 촉진하는 것이 나타내어졌다.
(3) 아스파르트산 첨가
도 9에 HaCaT 세포에서의 라미닌332 산생에 대한 다양한 농도의 아스파르트산의 첨가 효과를 조사한 실험 결과를 나타낸다. 도 9의 그래프의 세로축은 각 웰의 배양 상청액 중의 라미닌332 농도(ng/mL)를 나타낸다. 각 실험 조건의 오차 막대는 동일 조건으로 4회 반복한 실험 결과의 계산값의 표준편차를 나타낸다.
라미닌332 농도는 음성대조에서 1.7ng/mL이었다. 10㎚, 100㎚ 및 1000㎚의 L-아스파르트산 첨가 배지 및 D-아스파르트산 첨가 배지로 배양된 HaCaT 세포의 라미닌332 농도는 각각 1.8ng/mL 및 1.9ng/mL와, 1.8ng/mL 및 1.9ng/mL와, 2.0ng/mL 및 1.7ng/mL이었다. 이상의 결과로부터 L- 및 D-아스파르트산은 라미닌332 산생을 촉진하지 않는 것이 나타내어졌다.
(4) 아스파라긴 첨가
도 10에 HaCaT 세포에서의 라미닌332 산생에 대한 다양한 농도의 아스파라긴의 첨가 효과를 조사한 실험 결과를 나타낸다. 도 10의 그래프의 세로축은 각 웰의 배양 상청액 중의 라미닌332 농도(ng/mL)를 나타낸다. 각 실험 조건의 오차 막대는 동일 조건으로 4회 반복한 실험 결과의 계산값의 표준편차를 나타낸다.
라미닌332 농도는 음성대조에서 1.5ng/mL이었다. 10㎚, 100㎚ 및 1000㎚의 L-아스파라긴 첨가 배지 및 D-아스파라긴 첨가 배지로 배양된 HaCaT 세포의 라미닌332 농도는 각각 1.6ng/mL 및 1.5ng/mL와, 1.5ng/mL 및 1.5ng/mL와, 1.6ng/mL 및 1.5ng/mL이었다. 이상의 결과로부터 L- 및 D-아스파라긴은 라미닌332 산생을 촉진하지 않는 것이 나타내어졌다.
(5) 프롤린 첨가
도 11에 HaCaT 세포에서의 라미닌332 산생에 대한 다양한 농도의 프롤린의 첨가 효과를 조사한 실험 결과를 나타낸다. 도 11의 그래프의 세로축은 각 웰의 배양 상청액 중의 라미닌332 농도(ng/mL)를 나타낸다. 각 실험 조건의 오차 막대는 동일 조건으로 4회 반복한 실험 결과의 계산값의 표준편차를 나타낸다.
라미닌332 농도는 음성대조에서 1.8ng/mL이었다. 10㎚, 100㎚ 및 1000㎚의 L-프롤린 첨가 배지 및 D-프롤린 첨가 배지로 배양된 HaCaT 세포의 라미닌332 농도는 각각 1.8ng/mL 및 2.0ng/mL와, 1.9ng/mL 및 1.9ng/mL와, 1.9ng/mL 및 1.9ng/mL이었다. 이상의 결과로부터 L- 및 D-프롤린은 라미닌332 산생을 촉진하지 않는 것이 나타내어졌다.
(6) 세린 첨가
도 12에 HaCaT 세포에서의 라미닌332 산생에 대한 다양한 농도의 세린의 첨가 효과를 조사한 실험 결과를 나타낸다. 도 12의 그래프의 세로축은 각 웰의 배양 상청액 중의 라미닌332 농도(ng/mL)를 나타낸다. 각 실험 조건의 오차 막대는 동일 조건으로 4회 반복한 실험 결과의 계산값의 표준편차를 나타낸다.
라미닌332 농도는 음성대조에서 1.7ng/mL이었다. 10㎚, 100㎚ 및 1000㎚의 L-세린 첨가 배지 및 D-세린 첨가 배지로 배양된 HaCaT 세포의 라미닌332 농도는 각각 1.8ng/mL 및 1.8ng/mL와, 1.9ng/mL 및 1.8ng/mL와, 1.9ng/mL 및 1.8ng/mL이었다. 이상의 결과로부터 L- 및 D-세린은 라미닌332 산생을 촉진하지 않는 것이 나타내어졌다.
결론
실시예 1 및 2의 실험 결과로부터 라미닌332 산생 촉진 효과는 D-알라닌 및 D-히드록시프롤린에서 확인되었지만 아스파르트산, 아스파라긴, 프롤린 및 세린에서는 확인되지 않았다. 그래서 D-알라닌 및 D-히드록시프롤린은 기저막의 구조 및 기능에 중요한 역할을 하는 라미닌332의 산생을 촉진함으로써 피부 상태를 억제 및/또는 개선할 수 있는 것으로 시사되었다.
실시예 3
본 발명에 의거해서 D-알라닌 및/또는 D-히드록시프롤린을 포함하는 유액제제, 부착제, 정제, 소프트 캡슐, 과립, 드링크, 캔디, 쿠키, 된장, 프렌치 드레싱, 마요네즈, 프렌치 브레드, 간장, 요구르트, 후리카케, 조미료?낫토의 소스, 낫토, 모로미 흑초, 크림, 보디용 크림, 젤제, 필오프 마스크, 함침 마스크, 유액, 화장수 및 에어로졸제의 배합예를 이하에 나타낸다. 이들의 배합예는 예시를 목적으로 해서 열거되는 것이며, 본 발명의 기술적 범위를 한정하는 것을 의도하는 것은 아니다.
배합예 1(유액제제)
(조성물) 배합량(중량%)
D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린 0.42
베헤닐알코올 0.2
세타놀 0.5
글리세린모노지방산 에스테르 1.8
경화 피마자유POE(60) 1.0
백색 바셀린 2.0
유동 파라핀 10.0
미리스틴산 이소프로필 3.0
메틸폴리실록산(6cs) 1.5
농 글리세린 13.0
디프로필렌글리콜 2.0
카르복시비닐폴리머 0.25
히알루론산 나트륨 0.005
수산화 칼륨 적량
락트산 적량
에데트산 나트륨 적량
에틸파라벤 적량
정제수 잔여
----------------------------------------------------------------------
100.000
배합예 2(부착제)
(조성물) 배합량(중량%)
D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린 0.3
폴리아크릴산 3.0
폴리아크릴산 나트륨 2.5
젤라틴 0.5
카르복시메틸셀룰로오스나트륨 4.0
폴리비닐알코올 0.3
농 글리세린 14.0
1,3-부틸렌글리콜 12.0
수산화 알루미늄 0.1
에데트산 나트륨 0.03
메틸파라벤 0.1
정제수 잔여
----------------------------------------------------------------------
100.00
배합예 3(정제)
(조성물) 배합량(㎎/1정 중)
D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린 360.5
유당 102.4
카르복시메틸셀룰로오스칼슘 29.9
히드록시프로필셀룰로오스 6.8
스테아린산 마그네슘 5.2
결정 셀룰로오스 10.2
----------------------------------------------------------------------
515.0
배합예 4(정제)
(조성물) 배합량(㎎/1정 중)
수크로오스에스테르 70
결정 셀룰로오스 74
메틸셀룰로오스 36
글리세린 25
D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린 475
N-아세틸글루코사민 200
히알루론산 150
비타민 E 30
비타민 B6 20
비타민 B2 10
α-리포산 20
코엔자임Q10 40
세라미드(곤약 추출물) 50
L-프롤린 300
----------------------------------------------------------------------
1500
배합예 5(소프트 캡슐)
(조성물) 배합량(㎎/1캡슐 중)
식용 대두유 530
두충 추출물 50
인삼 추출물 50
D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린 100
로열젤리 50
마카 30
GABA 30
밀납 60
젤라틴 375
글리세린 120
글리세린 지방산 에스테르 105
----------------------------------------------------------------------
1500
배합예 6(소프트 캡슐)
(조성물) 배합량(㎎/1캡슐 중)
현미 배아유 659
D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린 500
레스베라트롤 1
연꽃 배아 추출물 100
엘라스틴 180
DNA 30
엽산 30
----------------------------------------------------------------------
1500
배합예 7(과립)
(조성물) 배합량(㎎/1포 중)
D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린 400
비타민 C 100
대두 이소플라본 250
환원 유당 300
대두 올리고당 36
에리스리톨 36
덱스트린 30
향료 24
시트르산 24
----------------------------------------------------------------------
1200
배합예 8(드링크)
(조성물) 배합량(g/60mL 중)
두충 추출물 1.6
인삼 추출물 1.6
D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린 1.6
환원 맥아당 물엿 28
에리스리톨 8
시트르산 2
향료 1.3
N-아세틸글루코사민 1
히알루론산 Na 0.5
비타민 E 0.3
비타민 B6 0.2
비타민 B2 0.1
α-리포산 0.2
코엔자임Q10 1.2
세라미드(곤약 추출물) 0.4
L-프롤린 2
정제수 잔여
----------------------------------------------------------------------
60
배합예 9(캔디)
(조성물) 배합량(중량%)
설탕 50
물엿 48
D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린 1
향료 1
----------------------------------------------------------------------
100
배합예 10(쿠키)
(조성물) 배합량(중량%)
박력분 45.0
버터 17.5
과립 설탕(granulated sugar) 20.0
D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린 4.0
계란 12.5
향료 1.0
----------------------------------------------------------------------
100.0
배합예 10(쿠키)의 제조 방법
버터를 교반하면서 과립 설탕을 서서히 첨가하고, 계란 및 향료와 D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린을 첨가해서 교반했다. 충분히 혼합한 후 균일하게 휘저은 박력분을 첨가해서 저속으로 교반하고, 괴상으로 냉장고에 재웠다. 그 후 성형하여 170℃에서 15분간 소성해서 쿠키로 했다.
배합예 11(된장)
(조성물) 배합량(g)
대두 1000
쌀누룩 1000
소금 420
D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린 158
물 잔여
----------------------------------------------------------------------
4000
배합예 11(된장)의 제조 방법
쌀누룩과 소금을 잘 혼합한다. 세정한 대두를 3배량의 물에 밤새 담근 후에 물을 제거하고, 새로운 물을 첨가하면서 푹 끓여 체에 붓는다. 국물(종수)을 모아 D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린을 10%w/v가 되도록 용해한다. 다 삶은 콩을 바로 갈아서 으깨어 소금을 섞은 쌀누룩을 첨가하고, 상기 D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린을 용해한 종수를 첨가하면서 점토 정도의 단단함이 될 때까지 골고루 혼합한다. 경단상으로 둥글게 한 것을 통에 간극이 없도록 구석구석까지 확실히 채워 넣고, 표면을 평평하게 해서 랩으로 덮어 밀봉한다. 3개월 후에 용기를 옮기고, 표면을 평평하게 해서 랩으로 덮는다. 또한, D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린을 종수에 첨가하는 대신 D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린을 많이 산생하는 쌀누룩을 사용해도 좋다. 상기 쌀누룩을 얻기 위해서는 일본 특허 공개 2008-185558에 기재된 방법으로 D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린을 정량함으로써 선발할 수 있다. 또한, 시판된 된장에 D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린 또는 그 염을 첨가해도 좋다.
배합예 12(프렌치 드레싱)
(조성물) 배합량(g)
샐러드 오일 27.0
식초 30.0
염화나트륨 0.9
D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린 1.1
후추 1.0
----------------------------------------------------------------------
60.0
배합예 12(프렌치 드레싱)의 제조 방법
식초에 염화나트륨과 D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린을 첨가한 후에 잘 교반해서 용해한다. 샐러드 오일을 첨가해서 잘 교반하여 후추를 첨가한다.
배합예 13(마요네즈)
(조성물) 배합량(g)
샐러드 오일 134.0
식초 5
염화나트륨 0.9
D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린 1
난황 18
설탕 0.2
후추 0.9
----------------------------------------------------------------------
160.0
배합예 13(마요네즈)의 제조 방법
난황(실온)에 식초, 염화나트륨 및 후추와 D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린을 첨가하고 거품기로 충분히 교반한다. 샐러드 오일을 조금씩 첨가하면서 계속 교반해서 에멀전으로 한다. 최후에 설탕을 첨가해서 교반한다.
배합예 14(프렌치 브레드)
(조성물) 배합량(g)
강력분 140
박력분 60
염화나트륨 3
설탕 6
D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린 2
드라이 이스트 4
미지근한 물 128
----------------------------------------------------------------------
343
배합예 14(프렌치 브레드)의 제조 방법
미지근한 물에 설탕 1g 및 드라이 이스트를 넣어서 예비 발효시킨다. 강력분, 박력분, 염화나트륨, 설탕 5g과 D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린을 보울에 넣고, 그 중에 예비 발효시킨 이스트를 넣는다. 충분히 반죽한 후에 구상으로 해서 30℃에서 1차 발효시킨다. 생지를 다시 반죽하고나서 휴지시킨 후에 적당한 틀에 정형하고 전자 발효기를 사용해서 최종 발효시킨다. 쿠프를 넣어서 220℃의 오븐에서 30분간 베이킹한다.
배합예 15(간장)
(조성물) 배합량(g)
시판된 간장 900
D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린 100
----------------------------------------------------------------------
1000
배합예 15(간장)의 제조 방법
시판된 간장에 D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린이나 그들의 염을 첨가해서 잘 교반한다. 또한, D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린이나 그들의 염을 첨가하는 대신 D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린을 많이 산생하는 누룩을 사용해서 간장을 양조해도 좋다. 상기 누룩을 얻기 위해서는 일본 특허 공개 2008-185558에 기재된 방법으로 D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린을 정량함으로써 선발할 수 있다.
배합예 16(요구르트)
(조성물) 배합량(g)
우유 880
L.불가리쿠스균 50
S.테르모필루스균 50
D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린 20
----------------------------------------------------------------------
1000
배합예 16(요구르트)의 제조 방법
40℃?45℃에서 발효시킨다. 다른 시판된 종균을 사용해도 좋고, 시판된 요구르트에 D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린이나 그들의 염을 첨가해도 좋다. 또한, D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린이나 그들의 염을 첨가하는 대신 D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린을 많이 산생하는 균을 사용해도 좋다. 상기 균을 얻기 위해서는 일본 특허 공개 2008-185558에 기재된 방법으로 D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린을 정량함으로써 선발할 수 있다.
배합예 17(후리카케)
(조성물) 배합량(g)
D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린 50
김 15
L-글루탐산 Na 10
염화나트륨 2
볶은 참깨 10
고등어 가다랭이포 10
설탕 1
간장 2
----------------------------------------------------------------------
100
배합예 18(조미료?낫토의 소스)
(조성물) 배합량(g)
시판된 낫토의 소스 9
D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린 1
----------------------------------------------------------------------
10
배합예 19(낫토)
(조성물) 배합량(g)
시판된 낫토 19.9
D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린 0.1
----------------------------------------------------------------------
20
배합예 19(낫토)의 제조 방법
시판된 낫토에 D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린이나 그들의 염을 첨가해서 잘 교반한다. 또한, D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린이나 그들의 염을 첨가하는 대신 D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린을 많이 산생하는 균을 사용해서 낫토를 만들어도 좋다. 상기 균을 얻기 위해서는 일본 특허 공개 2008-185558에 기재된 방법으로 D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린을 정량함으로써 선발할 수 있다.
배합예 20(모로미 흑초)
(조성물) 배합량(g)
시판된 모로미 흑초 900
D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린 100
----------------------------------------------------------------------
1000
배합예 20(모로미 흑초)의 제조 방법
시판된 모로미 흑초에 D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린이나 그들의 염을 첨가해서 잘 교반한다. D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린이나 그들의 염을 첨가하는 대신 D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린을 많이 산생하는 균을 사용해서 식초, 흑초, 모로미를 만들어도 좋다. 상기 균을 얻기 위해서는 일본 특허 공개 2008-185558에 기재된 방법으로 D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린을 정량함으로써 선발할 수 있다.
배합예 21(크림)
(조성물) 배합량(중량%)
유동 파라핀 3
바셀린 1
디메틸폴리실록산 1
스테아릴알코올 1.8
베헤닐알코올 1.6
글리세린 8
디프로필렌글리콜 5
마카다미아 너트 오일 2
경화유 3
스쿠알란 6
스테아린산 2
히드록시스테아린산 콜레스테릴 0.5
2-에틸헥산산 세틸 4
폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 0.5
자기 유화형 모노스테아린산 글리세린 3
수산화 칼륨 0.15
헥사메타인산 나트륨 0.05
트리메틸글리신 2
α-토코페롤 2-L-아스코르브산 인산 디에스테르칼륨 1
아세트산 토코페롤 0.1
D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린 4
파라벤 적량
에데트산 3나트륨 0.05
4-t-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄 0.05
디파라메톡시계피산 모노-2-에틸헥산산 글리세릴 0.05
색제 적량
카르복시비닐폴리머 0.05
정제수 잔여
----------------------------------------------------------------------
100.00
배합예 22(보디용 크림)
(조성물) 배합량(중량%)
디메틸폴리실록산 3
데카메틸시클로펜타실록산 13
도데카메틸시클로헥사실록산 12
폴리옥시에틸렌?메틸폴리실록산 공중합체 1
에탄올 2
이소프로판올 1
글리세린 3
디프로필렌글리콜 5
폴리에틸렌글리콜6000 5
헥사메타인산 나트륨 0.05
아세트산 토코페롤 0.1
D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린 5
펜넬 추출물 0.1
하마멜리스 추출물 0.1
인삼 추출물 0.1
L-멘솔 적량
파라옥시벤조산 에스테르 적량
에데트산 3나트륨 0.05
디모르폴리노피리다지논 0.01
트리메톡시계피산 메틸비스(트리메틸실록시)
실릴이소펜틸 0.1
황산화 철 적량
티타늄산 코발트 적량
디메틸디스테아릴암모늄헥토라이트 1.5
폴리비닐알코올 0.1
히드록시에틸셀룰로오스 0.1
트리메틸실록시규산 2
향료 적량
정제수 잔여
----------------------------------------------------------------------
100.00
배합예 23(젤제)
(조성물) 배합량(중량%)
디메틸폴리실록산 5
글리세린 2
1,3-부틸렌글리콜 5
폴리에틸렌글리콜1500 3
폴리에틸렌글리콜20000 3
옥탄산 세틸 3
시트르산 0.01
시트르산 나트륨 0.1
헥사메타인산 나트륨 0.1
글리시리진산 디칼륨 0.1
D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린 2
아세트산 토코페롤 0.1
황금(黃芩) 추출물 0.1
바위취 추출물 0.1
에데트산 3나트륨 0.1
크산탄검 0.3
아크릴산?메타크릴산 알킬 공중합체(페뮤렌TR-2) 0.05
한천 분말 1.5
페녹시에탄올 적량
디부틸히드록시톨루엔 적량
정제수 잔여
----------------------------------------------------------------------
100.00
배합예 24(필오프 마스크)
(조성물) 배합량(중량%)
에탄올 10
1,3-부틸렌글리콜 6
폴리에틸렌글리콜4000 2
올리브유 1
마카다미아 너트 오일 1
히드록시스테아린산 피토스테릴 0.05
락트산 0.05
락트산 나트륨 0.1
L-아스코르브산 황산 에스테르 2나트륨 0.1
α-토코페롤 2-L-아스코르브산 인산 디에스테르칼륨 0.1
D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린 10
피쉬콜라겐 0.1
콘드로이틴황산 토륨 0.1
카르복시메틸셀룰로오스나트륨 0.2
폴리비닐알코올 12
파라옥시벤조산 에스테르 적량
향료 적량
정제수 잔여
----------------------------------------------------------------------
100.00
배합예 25(함침 마스크)
(조성물) 배합량(중량%)
글리세린 1
1,3-부틸렌글리콜 8
크실리톨 2
폴리에틸렌글리콜1500 2
로즈마리 오일 0.01
세이지 오일 0.1
시트르산 0.02
시트르산 나트륨 0.08
헥사메타인산 나트륨 0.01
히드록시프로필-β-시클로덱스트린 0.1
D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린 0.5
자작나무 추출물 0.1
라벤더 오일 0.01
크산탄검 0.05
카르복시비닐폴리머 0.15
파라옥시벤조산 에스테르 적량
정제수 잔여
----------------------------------------------------------------------
100.00
배합예 26(유액)
(조성물) 배합량(중량%)
유동 파라핀 7
바셀린 3
데카메틸시클로펜타실록산 2
베헤닐알코올 1.5
글리세린 5
디프로필렌글리콜 7
폴리에틸렌글리콜1500 2
호호바 오일 1
이소스테아린산 0.5
스테아린산 0.5
베헤닌산 0.5
테트라 2-에틸헥산산 펜타에리스리톨 3
2-에틸헥산산 세틸 3
모노스테아린산 글리세린 1
모노스테아린산 폴리옥시에틸렌글리세린 1
수산화 칼륨 0.1
헥사메타인산 나트륨 0.05
글리시리진산 스테아릴 0.05
D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린 1
로열젤리 추출물 0.1
효모 추출물 0.1
아세트산 토코페롤 0.1
아세틸화 히알루론산 나트륨 0.1
에데트산 3나트륨 0.05
4-t-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄 0.1
파라메톡시계피산 2-에틸헥실 0.1
카르복시비닐폴리머 0.15
파라벤 적량
향료 적량
정제수 잔여
----------------------------------------------------------------------
100.00
배합예 27(유액)
(조성물) 배합량(중량%)
디메틸폴리실록산 2
베헤닐알코올 1
바틸알코올 0.5
글리세린 5
1,3-부틸렌글리콜 7
에리스리톨 2
경화유 3
스쿠알란 6
테트라 2-에틸헥산산 펜타에리스리톨 2
이소스테아린산 폴리옥시에틸렌글리세릴 1
모노스테아린산 폴리옥시에틸렌글리세린 1
D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린 0.3
수산화 칼륨 적량
헥사메타인산 나트륨 0.05
페녹시에탄올 적량
카르복시비닐폴리머 0.1
정제수 잔여
----------------------------------------------------------------------
100.00
배합예 28(화장수)
(조성물) 배합량(중량%)
에틸알코올 5
글리세린 1
1,3-부틸렌글리콜 5
폴리옥시에틸렌폴리옥시프로필렌데실테트라데실에테르 0.2
헥사메타인산 나트륨 0.03
트리메틸글리신 1
폴리아스파르트산 나트륨 0.1
α-토코페롤 2-L-아스코르브산 인산 디에스테르칼륨 0.1
티오타우린 0.1
D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린 8
EDTA 3나트륨 0.1
카르복시비닐폴리머 0.05
수산화 칼륨 0.02
페녹시에탄올 적량
향료 적량
정제수 잔여
----------------------------------------------------------------------
100.00
배합예 29(화장수)
(조성물) 배합량(중량%)
에탄올 10
디프로필렌글리콜 1
폴리에틸렌글리콜1000 1
폴리옥시에틸렌메틸글루코시드 1
호호바 오일 0.01
트리 2-에틸헥산산 글리세릴 0.1
폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 0.2
디이소스테아린산 폴리글리세릴 0.15
N-스테아로일-L-글루탐산 나트륨 0.1
시트르산 0.05
시트르산 나트륨 0.2
수산화 칼륨 0.4
글리시리진산 디칼륨 0.1
염산 아르기닌 0.1
L-아스코르브산 2-글루코시드 2
D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린 0.5
에데트산 3나트륨 0.05
파라메톡시계피산 2-에틸헥실 0.01
디부틸히드록시톨루엔 적량
파라벤 적량
해양 심층수 3
향료 적량
정제수 잔여
----------------------------------------------------------------------
100.00
배합예 30(에어로졸 요소 외용제 원액)
(조성물) 배합량(중량%)
에탄올 15.0
폴리옥시에틸렌 경화 피마자유50 1.5
디펜히드라민 1.0
디부카인 2.0
아세트산 토코페롤 0.5
D-알라닌 또는 D-히드록시프롤린 0.1
이소스테아린산 0.1
1,3-부틸렌글리콜 3.0
폴리에틸렌글리콜400 3.0
캠퍼 0.05
요소 20.0
정제수 잔여
----------------------------------------------------------------------
100.00
배합예 31(에어로졸 요소 분사제)
(조성물) 배합량(중량%)
에어로졸 요소 외용제 원액 65.0
디메틸에테르 35.0
----------------------------------------------------------------------
100.00
배합예 31(에어로졸 요소 분사제)의 충전 방법
에어로졸 요소 외용제 원액 및 디메틸에테르를 내면 디프론(등록상표) 코팅 처리 내압 에어로졸 알루미늄캔에 충전해서 에어로졸제를 조제한다.

Claims (6)

  1. D-알라닌 및 D-히드록시프롤린과 그 유도체 및/또는 염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종류 또는 2종류 이상의 화합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 라미닌332 산생 촉진 조성물.
  2. 제 1 항에 있어서,
    피부 상태를 억제 및/또는 개선하기 위해서 사용되는 것을 특징으로 하는 라미닌332 산생 촉진 조성물.
  3. 제 2 항에 있어서,
    상기 피부 상태는 광노화, 주름, 피부 거칠음, 잔주름 및 건조로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 라미닌332 산생 촉진 조성물.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
    의약품으로서 사용되는 것을 특징으로 하는 라미닌332 산생 촉진 조성물.
  5. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
    피부 외용제로서 사용되는 것을 특징으로 하는 라미닌332 산생 촉진 조성물.
  6. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
    식품으로서 사용되는 것을 특징으로 하는 라미닌332 산생 촉진 조성물.
KR1020127007175A 2009-09-30 2010-05-14 라미닌332 산생 촉진 조성물 KR20120080178A (ko)

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