KR20120068898A - 감염성 질환의 예방, 제거 및 치료를 위한 현삼과 추출물 - Google Patents

감염성 질환의 예방, 제거 및 치료를 위한 현삼과 추출물 Download PDF

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Abstract

현삼과 식물에서 발견된 테르펜 및 지방산을 포함하는 항-바이러스 조성물이 기술되어 있다. 본 발명의 조성물은 상기 과의 식물에서 발생하는 다른 친지성 구성성분 및 글리코사이드의 아글리콘을 추가로 포함한다. 바람직하게, 본 조성물은 피크로리자 쿠로아 로일, 피크로리자 스크로풀라리플로라 펜넬 및 네오피크로리자 스크로풀라리플로라의 혼합물의 뿌리 및 근경의 추출에 의해 유래된다. 용매 및 용매 조합물들이 기술되어 있다. 본 조성물은 DNA 및 RNA 바이러스 둘 모두에 대해 및 진균, 박테리아, 기생충성 및 원충성 감염증 및 질환에 대해, 및 또한 간보호제, 항-고지혈증제, 항당뇨병제, 및 신장 보호제로서 효과적이다. 기술된 질환들에 대한 항체 및 백신은 동물 및 그 밖의 피검체에 본 조성물을 투여함으로써 제조될 수 있다.

Description

인간, 동물 및 생명공학 산업에서의 ＲＮＡ 바이러스 및 ＲＮＡ 바이러스에 의해 야기되는 감염증 또는 질환들의 예방, 제거 및 치료를 위한 현삼과 추출물 {PICRORHIZA KURROA EXTRACT FOR PREVENTION, ELIMINATION AND TREATMENT OF RNA VIRUSES AND INFECTION OR DISEASES CAUSED BY THE SAME IN HUMANS, ANIMALS AND IN BIOTECH INDUSTRY}
본 발명은 인간 및 동물 피검체에서의 감염증, 질병 및 질환의 예방, 제거, 치료 및 관리에서, 및 생명공학 산업에서 사용하기 위한 의학적, 기능성 식품 및 식품 조성물; 바이러스, 진균, 박테리아, 기생충 및 원충 미생물에 의해 야기된 감염증, 질병 및 질환의 상기 예방 등에서의 이의 용도 및 치료 방법; 현삼과(목)의 식물의 식물 제재의 추출에 의해 상기 조성물을 제조하는 방법 및 이의 분획; 및 이의 구성성분들의 혼합에 의해 상기 조성물을 제조하는 방법에 관한 것이다.
목 스크로풀라리에이씨(order Scrophulariaceae)의 식물은 전통적인 의학계에서 보고된 바와 같이 의학적 성질들을 갖는 것으로 알려져 있다. 이러한 식물들의 의학적 효능은 이러한 목의 식물들에 존재하는 여러 글리코사이드이 원인이다. 보다 다루기 쉬운 스크로풀라리에이씨 식물들은 종 피크로리자(Picrorrhiza)의 식물이다. 이러한 종의 세 가지 일원들은 이들의 안전성 및 독성의 부재로 인하여 특별히 고려된다. 이러한 것들은 피크로리자 쿠로아 로일, 피크로리자 스크로풀라리플로라 펜넬 및 네오피크로리자 스크로풀라리플로라이다.
피크로리자 쿠로아 (인도에서 카튜카(Katuka)로서 알려짐)는 인도에서 널리 발견되는 것이다. 이는 히말라야에서 해발 약 300 내지 500 미터에서 자란다. 이의 추출물은 이의 성지들에 대해 간 보호제 및 면역 조절제로서 알려져 있다. 이러한 식물의 뿌리는 통상적으로, 인도 아유르베다 시스템(Indian Ayurvedic system)에서 천식, 기관지염, 말라리어, 만성 이질, 바이러스 간염, 배탈, 전갈에 쏘임에 대한 약제, 식욕을 자극하고 소화를 개선시키기 위한 맛이 쓴 토닉(bitter tonic)으로서 사용되고 있다. 이는 이의 치료학적 가치에 대해서 간보호제로서 및 해열을 위한 것으로 알려져 있지만, 종래 기술에서는 간염 또는 다른 바이러스에 대해 작용하거나 단지 간 회복제(liver rejuvenant)인 지에 관련하여 기술되거나 증명된 바 없다.
이러한 식물은 또한 중국, 네팔, 부탄 및 다른 지역에서 자라는데, 이러한 식물의 뿌리 및 근경은 전통적으로 이질, 황달, 뼈의 스티밍(steaming of bone), 간보호 및 면역-조절 기능을 위해 사용되었다. 이러한 식물, 특히 뿌리에는 테르페노이드 및 글리코사이드가 풍부한 것으로 알려져 있다.
용어 피크로리자(Picrorhiza) 및 피크로르리자(Picrorrhiza)는 철자가 약간 상이한 것으로서 본 명세서에서 교호적으로 사용되고 동일한 물질인 것으로 의도된다. 이러한 종명 피크로리자 쿠로아(Picrorhiza kurrooa)는 간결함을 고려하여 하기에서 짧게 PK로서 칭하여 진다. 본 명세서에서, 머리글자 'PK'는 상기 피크로리자 종을 칭한다. 문맥에 따라서, 상기 철자들은 단지 하나의 종 또는 하나 초과의 종들을 동시에 칭할 수 있다. 철자 'P'는 용어 피크로리자의 약어로서 사용된다. 용어 '성분(principle)' 및 '인자'는 또한 본 명세서에서 교호적으로 사용되고 문맥에 의해 달리 요구되지 않는 한 동일한 것을 의미하는 것으로 의도된다.
본 명세서에서 '추출'에 대한 언급은 식물 제재의 추출 공정을 전체적으로 또는 식물 제재의 추출 공정에서 단계들 중 하나 (침출 또는 고체-액체 추출 단계)인 개별적인 추출 작업에 대한 것일 수 있다. 문맥에 대해 적절한 의미가 취해질 수 있다. 용어 '구성성분' 및 '구성요소'는 본원의 몇몇 곳에서 교호적으로 사용되며, 이의 의미는 문맥으로부터 아주 명확하다.
식물 제재는 본 발명의 추출 공정에 대한 출발 물질을 칭하는 것이며, 이러한 공정의 마지막에 나타나는 최종 생성물은 추출물로서 칭하여진다. 용어 '식물 제재'는 또한 이러한 공정에서 상이한 단계에서의 공정 중 식물 제재(plant-matter-in-process)를 칭하기 위해 사용된다. 공정의 다양한 단계들에서의 액체 스트림은 추출물 또는 용액 중 어느 하나로 칭하여진다. 문맥에 대한 적절한 의미가 취해질 수 있다.
PK에서의 유효 성분(active principle)은 종래 기술에서 글리코사이드인 쿠트코사이드(kutkoside)를 포함하는 쿠트킨(kutkin)으로서 칭하여진다. 이는 피크로사이드 I, II, III 및 다른 피크로사이드로 명명되는 이리도이드 글리코사이드를 추가로 포함한다. 아포시닌, 드로신 및 닌 쿠쿠르비타신 글리코사이드와 같은 수 개의 다른 유효 성분들이 확인되었으며, 이의 첫번째 명명된 것은 강력한 항염증제이고, 나머지 두 개는 또한 의학적 성질들을 갖는 것으로 보고되었다. 이러한 의학적 인자들은 상기 목(현삼과) 전체에 걸쳐 균일하게, 및 특히 P. 속(P. genus)의 모든 식물들에서 발생한다. 지금까지, PK 추출물의 상기 의학적 효능은 종래 기술에서 특정 유효 성분 (인자)에 기인한 것이 아니다.
현재, 특히 P.속, 및 일반적으로 현삼과(약칭하여 S.과)의 식물 제재는 친지성 구성성분 및 비-친지성 구성성분 둘 모두를 포함하는 것으로 알려져 있다. 상기 과의 친지성 화합물 및 구성성분들은 본원에서 약칭하여 LC로서 또한 칭하여지며, 유사하게, 상기 과의 비-친지성 구성성분 및 화합물은 NLC로서 칭하여진다. 이는 간결하게 하기 위한 것으로서 본 발명의 범위를 임의로 제한하지 않는다.
S.과의 상기 P.속 식물의 추출물에 관한 2009년 8월 12일자로 출원된 특허번호 1917/CHE/2009에 대한 본 출원인의 공동-계류중인 출원이 참조된다.
본 발명자들은, 전통적인 의학 실무 또는 현대의 종래 기술 중 어느 하나에 보고되거나 논의되거나 조사된 PK의 모든 상기 명명된 의학적 인자들이 주로 NLC이라는 것을 발견하였다. 종래 기술 (전통적인 의학 실무 포함)은 추출 용매로서 단지 물 및 알코올 (메탄올 및 에탄올)의 사용으로 한정되었다는 것이 주지될 수 있다. 본 발명자들은 일반적으로 말하면 상기 용매들이 상기 NLC를 추출하고 거의 모든 LC를 배제한다는 것에 주목한다. 그 결과, 종래 기술의 관심은 단지 NLC 및 이들의 의학적 성질들에 있는 것으로서 이러한 다른 구성성분들로 확장되지 않는다.
P. 식물 제재에서의 주요 NLC는 이의 글리코사이드이다. 현재, 다양한 식물 글리코사이드의 광범위한 의학적 성질들은 밝혀졌다. 이러한 성질들은 광범위한 질환 및 질병들로 확장한다. 상이한 타입의 글리코사이드는 식물계에서 발견되었다. 종래 기술에서의 초점 및 관심(spotlight)은 적어도 의학적 성질들 및 효과들이 관련되어 있는 한, 완전히 P. 글리코사이드에 있다. 종래 기술은 S.과의 식물 중의 다른 구성성분들, 즉 상기 LC의 특성 및 규모, 및 이들의 의학적 중요성을 인식하지 못하는 것으로 나타났다. 종래 기술이 실질적으로 이들의 연구로부터 다른 용매들을 실질적으로 배제하였는 바, 이는 당연한 것이며, 이러한 용매들은 또한 LC를 다소의 범위로 추출하고 이러한 것들을 조사, 연구 및 의학적 철저한 검토하였다. 아마도, 이후에 종래 기술은 이들의 의학적 효능의 특성 및 정도를 분석할 것이다. 아마도 물 및 알코올 추출물이 현저한 의학적 효능을 나타내었고 조사를 위한 충분한 범위를 제공하였기 때문에, 이들의 관심이 다른 추출 용매로 확장되지 못하였고 이에 의해 S.과의 친지성 구성성분들로 확장되지 못하였을 것이다.
이들의 실험적 관찰들을 통해, 본 발명자들은, 상기 LC(S.과의 친지성 화합물)의 의학적 활성이 매우 높은 정도인 것을 입증하였다. 본 발명자들에 의해 최초로 관찰된 바에 따르면, 상기 LC의 의학적 효과의 범위 및 정도(quantum)가 상기 글리코사이드에 대조적으로 현저하고 놀랍게도 보다 높고 광범위하다. 본 발명은 최초로 상기 LC를 고려하고 예를 들어 항-바이러스 화합물로서의 이들의 매우 놀라운 의학적 중요성을 입증한 것이다. 본 발명은 또한 최초로, NLC의 존재가 LC의 의학적 효능을 손상시키고 감소시키는 경향이 있으며, 이에 따라 NLC를 실질적으로 배제하거나 최소량의 NLC 함량을 갖는 LC를 함유한 PK 추출물을 생산하는 것이 중요하다는 것을 입증하였다. 이를 위하여, 본 발명자들은 신규한 방법을 제공하고 우선적으로 상기 LC를 추출하는 적절한 용매를 확인하고 이의 추출 프로파일이 상기 NLC를 실질적으로 유지시키거나 추출물로의 이의 추출을 최소화하기 위한 것이다.
본 발명자들은 NLC가 LC의 의학적 효과를 방해하는(mask) 것으로 관찰하였다. 상기 LC를 함유한 추출물에서 임의의 NLC의 존재는 LC의 의학적 효능을 감소시키는 효과를 갖는다. S.과의 일부의 NLC가 LC와 반대의 작용을 가질 수 있다. 메카니즘이 어떠하든지 간에, 본 발명은 LC가 현저한 의학적 효과를 가지며 LC-추출물에는 이들의 전체 의학적 효능을 실현시키기 위해 바람직하게 NLC가 실질적으로 존재하지 않아야 한다는 것을 실험적으로 입증하였다.
이에 따라, 본 발명의 신규한 PK 추출물은 근본적인 방식으로, 본 발명의 추출물의 의학적 성분들이 종래 추출물의 의학적 성분들과 상이하다는 것을 종래 기술의 PK 추출물과 상이하다. 본 발명의 추출물의 의학적 성분들은 종래 기술의 조성물에 실질적으로 존재하지 않으며 종래 기술에서의 의학적 성분들은 본원에 기술된 이유로 인하여 본 발명의 추출물에서 실질적으로 방지된다. 본 발명의 추출물에서의 의학적 성분들은 S.과의 식물의 LC로서 종래 기술의 추출물의 경우에서와 같이 S.과 글리코사이드가 아니다.
본 발명의 추출물에서의 주요 의학적 인자들은 S.과 식물에서 발견된 지방산 및 테르펜, 및 S.과 글리코사이드로부터 발생한 아글리콘이다. 본 공정에서의 추출물에 추출된 상기 지방산, 테르펜 및 아글리콘은 종래 기술의 추출물에 존재하지 않는다. 공지된 바와 같이, PK 식물 중의 글리코사이드는 피크로사이드 I, II 및 III 등이다. 이에 따라, 종래 기술의 추출물은 주로 상기 피크로사이드 및 아포시닌으로 명명된 화합물로 이루어져 있지만, 본 발명의 추출물은 피크로사이드 및 다른 글리코사이드 및 또한 아포시닌 모두가 실질적으로 존재하지 않는다. 본래 식물 제재에 존재하는 상기 피크로사이드 보다는, 본 발명의 추출물에는 이로부터 유래된 아글리콘이 존재한다.
이에 따라, 본 발명의 공정은 단지 물리적 추출 방법이 아니라 화학적 변화를 도입한다는 것이 주지될 수 있다. 본 발명자들은 가수분해 및 에스테르화 반응이 추출 공정 동안에 일어나 추출물 중에 상기 아글리콘의 방출을 초래한다는 것을 관찰하였다. 이러한 가설은 보다 높은 의학적 효능은 본 발명자들의 실험적 조사에 의해 입증되었는 바, 어려움 없이(without commitment) 제안된다. 본 발명은 본 발명의 추출 공정이 물리적 변화 및 화학적 변화의 조합을 수반하도록 화학적 반응들이 추출 동안 일어난다는 실험적 증거를 갖는다. 본 발명은 헥산 추출물 및 또한 제 1 용매가 에탄올이고 제 2 용매가 헥산인 추출물을 제조하였다. 헥산 추출 과정에서의 수율은 약 35% 초과의 LC를 함유하는 것으로 확인되었다. HPLC 분석에서는 추출물 중에 아글리콘, 스테로이드 테르펜 및 장쇄 지방산 구조물의 존재가 나타났다. 추가적인 수율이 헥산 추출물 중에 이러한 아글리콘, 스테로이드 테르펜 및 장쇄 지방산의 존재에 해당한다고 추론된다. S.과의 식물 제재에 본래 존재하거나 상기 본래 존재하는 화합물들 중 일부를 포함하는 반응 생성물 어느 하나 인 이러한 화합물들은 에탄올-헥산 용매 시스템에 의해 얻어진 추출물에 실질적으로 존재하지 않는다. 에탄올-헥산 용매 시스템은 추출 동안에 이러한 성분들을 배제한다.
본 발명의 추출물은 S.과 식물에서 발견된 지방산들을 추가로 함유한다. S.과 글리코사이드는 종래 기술의 PK 추출물을 받아들이기 쉽지 않게 하는 맛이 매우 쓴 화합물이다. 반면, 본 발명의 PK 추출물은 쓴맛 인자가 거의 존재하지 않는 매우 받아들이기 쉬운 것이다. 여러 냄새 인자들은 물 및 알코올 추출물에서 나오며, 그 결과 종래 기술의 PK 추출물은 인간 및 동물 보시를 위해 이들의 수용성을 낮추는 강한 불쾌한 냄사를 갖는다. S.과에서의 상기 피크로사이드 및 다른 글리코사이드는 맛이 매우 쓴 화합물이다. 보다 적은 양의 다른 맛이 쓴 성분들은 또한 PK 식물에서 발견된다. 다른 한편으로, 본 발명의 추출물은 실질적으로 무취(orderless)이다. 대체로, 본 발명의 추출물은 독특하고 종래 기술 추출물과 상이한 패러다임이다.
본 발명의 추출물의 테르펜 및 다른 성분들의 의학적 작용의 메카니즘은 알려진 바 없고 종래 기술 추출물 성분들에 관한 이들의 의학적 작용의 우수성이 설명되지 않았다. 본 발명자들은 또한 상기 우수한 의학적 활성이 이들의 실험적 작업에 의해 실험적으로 입증된다는 것을 관찰하였다.
이에 따라, 종래 기술의 추출물의 단점은 S.과 식물의 상기 테르펜 및 다른 LC 보다 상당히 낮은 의학적 효능을 갖는 글리코사이드 성분의 존재이다. 글리코사이드의 의학적 효능의 범위는 또한 상기 테르펜 및 다른 LC의 의학적 효능에 비해 상당히 낮다. 이러한 것들이 간보호인 것으로 보고되었지만, 상기 글리코사이드는 항-바이러스 활성을 나타내지 않는다 [Herbal medicines for liver diseases in India, SP Thyagarajan, S Jayaram, V Gopalakrishnan, R Hari, P Jeyakumar, MS Sripathi, Journal of Gastroenterology and Hepatology Volume 17, pages S370-S376, December 2002]. 다른 한편으로, 상기 LC는 DNA 및 RNA 바이러스 둘 모두에 대해 강력한 항-바이러스 활성을 나타내며 이에 따라 이들의 작용이 보고된 제한된 상기 NLC의 간-보호 및 재생 작용에 비해 매우 넓다. 종래 기술의 추출물은 거의 불쾌한 것일 수 있는 맛이 매우 쓰며, 이들의 비수용성(unacceptability)은 이들의 강한 불쾌한 냄새 성분들로 더욱 확장된다.
종래 기술의 추출 공정의 단점들은, 이러한 공정이 물 및 두 가지 알코올, 즉 에탄올 및 메탄올로 한정되고 S.과의 LC를 함유하는 신규하고 보다 양호하고 의학적으로 더욱 유용한 효과적인 추출물을 수득하는 전범위의 용매로 확장하지 않는다는 것이다.
본 발명자들은 세포주를 통해 상기 친지성 성분들을 주로 포함하는 PK 추출물의 사용이 간염 및 DNA 및 RNA 타입의 다른 바이러스들의 활동을 능동적으로 억제한다는 것을 실험적으로 입증하였다. 이는 바이러스 구조물을 추가로 파괴하는데, 이는 매우 효과적인 항-바이러스 조성물인 확증(confirmation)을 제공하는 것이다.
공지된 바와 같이, 세포막의 구조에 포함되는 인지질은 콜린 포스페이트에 의해 특징되는, 두 개의 고도의 친지성 (지방-친화) 알킬 사슬 및 다른 단부에 고도의 친수성 (물-친화) 이온기를 포함한다. 본 발명자들은, 이러한 것이 PK 추출물에서의 친지성 부분 및 다른 구조들이 바이러스 질환의 치료에서 약학적으로 더욱 활성적이게 하는 것으로 사료된다. 본 발명자들에 의한 시험관내 조사들은 독립 실험실에 의해 확인되었다. 본 발명자들은, PK 친지성 화합물이 B형 간염, 인플루엔자, 레트로바이러스, 예를 들어 HIV 및 다른 바이러스들을 포함한 DNA 및 RNA 바이러스에 대한 매우 높은 항-바이러스 성질들을 갖는다는 것을 확인하였다.
본 발명자들은 상기 S.과의 식물에서 발견된 하나 이상의 테르펜과 상기 과의 식물에서 발견된 하나 이상의 지방산의 조합물(혼합물)이 다수의 바이러스, 진균, 박테리아, 기생충성 및 원충성 감염증, 질병 및 질환에 대해 매우 효과적인 신규한 강력한 항-바이러스 조성물이라는 것을 관찰하였다. 상기 신규한 조성물은 DNA 및 RNA 바이러스 둘 모두에 대해 효과적이다. 이러한 측면에서, 이는 연구 및 산업, 특히 공학적 발효 산업에서 생화학적 및 생명공학적 공정들에 적용된다. 본 발명의 신규한 조성물은 상기 과의 식물에서 발견된 글리코사이드의 하나 이상의 아글리콘을 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물의 구성성분들은 식물 기원, 또는 합성 또는 부분-합성 기원일 수 있다. 상기 조성물은 상기 구성성분들의 혼합 공정에 의해 제조될 수 있거나 식물 제재로부터 일부 또는 전부 얻어질 수 있다.
본 발명은 일반적으로 상기 S.과 식물 제재, 및 특히 P.속의 식물 제재를 추출한다. 이러한 추출물들은 HPLC(고성능 액체 크로마토그래피)에 의해 분획되어 여러 분획들을 수득한다. 상기 분획들이 또한, 이러한 분획들 중 각각이 S.과 식물의 상기 테르펜 및 지방산들을 포함하도록, 본 발명의 조성물들을 구성한다는 것이 관찰된다. 상기 분획은 하기에서 추가로 기술된다.
본 발명자들은, 인간 또는 동물 피검체에 본 발명의 상기 추출물 또는 조성물이 투여될 때, 항원 및 항체가 신체의 면역 공정에 의해 생성된다는 것을 발견하였다. 이러한 공정의 메카니즘이 전부 알려져 있지는 않지만, 본 발명자들은, 항체 및 관련된 종들 및 물질들, 예를 들어 항원, 면역원, 면역 혈청, 항-혈청, 혈청, 면역글로불린들이 상기 피검체에서 생성되고 사용되는 인간, 동물, 조류 또는 수중 동물 피검체, 즉 본 발명의 조성물의 추출물이 투여된 피검체의 혈청으로부터 분리될 수 있다는 것을 입증하였다. 이에 따라 분리된 항체 및 관련된 종들은 예방 또는 치료를 필요로 하는 피검체에 투여하기 위한 백신, 어주번트 및 다른 포뮬레이션들을 포뮬레이트하기 위해 사용될 수 있다. 상기 항체, 관련된 종들 및 물질들은 본원에서 총괄하여 '면역계 관련 종들'이라 칭한다.
이에 따라, 본 발명의 목적은 현삼과(목)의 식물들의 식물 제재에서 발견된 테르펜 및 지방산들의 혼합물을 포함하는 조성물을 제공하기 위한 것이다.
본 발명의 다른 목적은 친지성인 PK 추출물로서, PK 식물 제재의 친지성 성분들이 실질적으로 이의 주요 성분들이고 바람직하게 상기 테르펜 및 지방산들인 PK 추출물을 제공하기 위한 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 실질적으로 PK의 모든 친지성 성분들이 추출물에 충실히 존재하는 PK 추출물을 제공하기 위한 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 PK의 비-친지성 성분들이 실질적으로 부재하거나 최소인 PK 추출물을 제공하기 위한 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 맛이 쓴 성분들, 특히 PK 글리코사이드 및 PK에 존재하는 불쾌한 냄사 성분들이 실질적으로 부재하거나 최소인 PK 추출물을 제공하기 위한 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 친지성 인자들이 주성분들이며 PK의 비-친지성 인자들이 실질적으로 부재이거나 최소인, PK 추출물을 제조하는 추출 방법을 제공하기 위한 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 PK 식물 제재에 본래 존재하는 전체 세트의 친지성 인자들이 추출물이 충실히 형성되며 상기 가수분해 및 에스테르화 반응이 진행되고 또한 조장되도록 하는 상기 추출 방법을 제공하기 위한 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 본래 식물 제재에서 테르펜 및 지방산들의 추출이 최대화되며 글리코사이드에서 아글리콘으로의 최대 전환 및 이의 후속 추출이 용매들의 적합한 선택 및 추출 파라미터들의 선택에 의해 달성되는, PK 추출물을 제조하기 위한 추출 방법을 제공하기 위한 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 PK 추출은 추출물을 얻기 위해 수행될 수 있으며, 이의 주성분들이 상기 친지성 화합물이며, 실질적으로 추출될 PK 식물 제재에 본래 존재하는 비-친지성 성분들 및/또는 맛이 쓰고 불쾌한 냄새의 성분들의 추출을 실질적으로 방지하거나 최소화하는, 한 세트의 용매를 제공하기 위한 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 추출물을 수득하기 위해 PK 추출을 수행할 수 있는 용매의 세트로서, 이러한 용매의 주성분들은 상기 친지성 화합물이며, 추출될 PK 식물 제재에 본래 존재하는 비-친지성 성분들 및/또는 맛이 쓰고 불쾌한 냄새가 나는 성분들의 추출을 실질적으로 방지하거나 최소화하는 용매의 세트를 제공하기 위한 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 인간, 동물, 조류, 수중 동물 및 다른 피검체들에 본 발명의 조성물을 투여함으로써 상기 면역계 관련 종류들을 수득하고 이를 얻기 위한 방법을 고안하기 위한 것이다.
이에 따라, 본 발명에 따르면, 현삼과 식품에서 발견된 하나 이상의 테르펜 및 상기 과에서 발견된 하나 이상의 지방산을 포함하는, 인간 및 동물 피검체에서의 바이러스, 진균, 박테리아, 기생충성 및 원충성 감염증, 질병 및 질환의 예방, 제거, 치료 및 관리에서 사용하기 위한, 및 간보호제, 항고지혈증제, 항당뇨병제 및 신장 보호제로서의 그밖의 적용에서 사용하기 위한 의학적, 기능성 식품 또는 식품 조성물이 제공된다.
이에 따라, 본 발명에 따르면, 피검체에 적절한 시간에 걸쳐 적절한 용량의, 현삼과 식물에서 발견된 하나 이상의 테르펜 및 상기 과에서 발견된 하나 이상의 지방산을 포함하는 조성물을 투여한 후에 임의적으로 적절한 시간에 걸쳐 적합한 유지 용량의 상기 조성물을 투여함으로써, 인간 및 동물 피검체에서의 바이러스, 진균, 박테리아, 기생충성 및 원충성 감염증, 질병 및 질환의 예방, 제거, 치료 및 관리를 위한, 및 약제학적, 생화학적, 생명공학적 및 발효 연구 및 산업에서의, 치료 방법이 또한 제공된다.
본 발명에 따르면, 현삼과 식물에서 발견된 하나 이상의 테르펜을 상기 과에서 발견된 하나 이상의 지방산과 혼합함으로써 인간 및 동물 피검체에서의 바이러스, 진균, 박테리아, 기생충성 및 원충성 감염증, 질병 및 질환의 예방, 제거, 치료 및 관리에서 사용하기 위한 및 그밖의 적용에서 사용하기 위한 의학적, 기능성 식품 및 식품 조성물을 제조하는 방법이 또한 제공된다.
이에 따라, 본 발명에 따르면, 인간 및 동물에서 바이러스, 진균, 박테리아, 기생충 및 원충에 의해 야기되는 감염증, 질병 및 질환의 예방, 제거 및 치료에서 사용하기 위한 면역계 관련 종, 예를 들어 림프구, 혈청, 항-혈청, 혈장, 항체, 항원, 펩티드, 효소, 면역 혈청, 면역글로블린, 면역원 및 어주번트로서, 상기 종이 상기 피검체에 이의 면역계에 의해 상기 종을 형성시키기 위해 본 발명의 조성물을 투여함으로써 인간, 동물, 조류 또는 수중 동물 피검체에서 생성되며, 상기 종이 상기 예방, 제거 및 치료에서 사용하기 위해 후속적으로 분리되고 수확되는, 면역계 관련 종이 또한 제공된다.
이에 따라, 본 발명에 따르면, 인간 및 동물에서 바이러스, 진균, 박테리아, 기생충 및 원충에 의해 야기되는 감염증, 질병 및 질환의 예방, 제거 및 치료에서 사용하기 위한 면역계 관련 종, 예를 들어 림프구, 혈청, 항-혈청, 혈장, 항체, 항원, 펩티드, 효소, 면역 혈청, 면역글로블린, 면역원 및 어주번트를 생산하는 방법으로서, 현삼과 식물에서 발견된 테르펜 및 지방산을 포함하는 조성물을 제공하고; 이의 면역계에 의해 상기 종들을 생성시키기 위해 상기 조성물은 인간, 동물, 조류 또는 수중 동물 피검체에 투여하고; 상기 종들을 상기 예방, 제거 및 치료에서 사용하기 위해 혈청 및 항-혈청으로부터 수확하고 분리함을 포함하는 방법이 또한 제공된다.
이에 따라, 본 발명에 따르면, 현삼과 식물에서 발견된 하나 이상의 테르펜을 상기 과에서 발견된 하나 이상의 지방산과 혼합함으로써, 인간 및 동물 피검체에서의 바이러스, 진균, 박테리아, 기생충성 및 원충성 감염증, 질병 및 질환의 예방, 제거, 치료 및 관리에서 사용하기 위한 및 그 밖의 적용에서 사용하기 위한 의학적, 기능성 식품 및 식품 조성물을 제조하는 방법이 또한 제공된다.
이에 따라, 본 발명의 조성물 및 본 발명의 PK 추출물은 필수적으로 S.과의 식물의 테르펜 성분들을 포함한다. 하기의 상세한 설명에서, 본 발명의 조성물에 대한 언급은 또한 본 발명의 추출물에 대한 언급인 것으로 여겨질 수 있고 문맥에서 문제가 되지 않는 한 반대의 경우로도 여겨질 수 있다. 이러한 것들은 S.과의 하나의 상기 테르펜 또는 테르펜들의 임의 혼합물을 포함할 수 있다. 이러한 것들은 또한 필수적으로 S.과 식물의 하나 이상의 지방산(들)을 포함한다. 상기 테르펜 및 지방산의 조합은 치료학적 상승작용을 나타낸다. 이러한 상승작용은 또한 세 개의 성분 시스템에 의해 나타난다: 상기 테르펜, 지방산 및 아글리콘. 바람직하게, 테르펜은 단일의 주요 LC 성분이며, 테르펜 및 지방산은 함께 조성물/추출물에서 상기 친지성 성분의 주요 부분을 형성한다. 상기 추출물 및 조성물은 또한 바람직하게 S.과 식물에 존재하는 글리코사이드의 아글리콘을 포함한다. 세 개의 글리코사이드는 반응을 추출 조건 하에서 반응 (가수분해와 같은 반응) 및/또는 분해를 일으키고 이후에 본 발명의 용매들에 의해 추출물로 추출되는 이들의 개개 아글리콘을 수득한다. 바람직하게, 상기 테르펜, 지방산 및 아글리콘의 합친 양은 LC 전체로서, 80 중량% 이상이다. 바람직하게, 본 발명의 추출물에는 상기 맛이 쓴 글리코사이드가 존재하지 않으며, 추출물 중에서 그 밖의 NLC의 양은 전체적으로 추출물의 0.01 중량% 내지 20 중량%이다. 바람직하게, 상기 글리코사이드, 쿠트키사이드, 피크로사이드 및 아포시닌 및 드로신의 양은 함께 추출물의 20 중량%를 초과하지 않는다. 바람직하게 추출물의 10% 미만은 수용성이다. 상기에서 제공된 파라미터는 문맥에 의해 달리 요구되지 않는 한, 본 발명의 상기 조성물 및 추출물 둘 모두에 적용 가능하다.
본 발명의 범위 내에서, 본 발명의 조성물의 상기 구성성분들은 식물 기원 또는 합성 또는 그 밖의 기원 또는 이들의 조합의 일부 또는 전부일 수 있다. 본 발명의 조성물은 실질적으로 단지 상기 테르펜 및 지방산을 포함할 수 있지만, 추가적으로 충진제 및 다른 중성 재료(neutral material)를 포함할 수 있다. 상기 필수적인 테르펜 및 지방산 이외에, 상기 조성물은 추가적인 치료학적, 영양적, 식품 또는 그 밖의 인자들, 또는 맛, 칼라, 질감, 풍미, 벌크 등을 개질시키기 위한 인자들을 포함할 수 있고, 추가적인 치료학적 작용을 제공할 수 있다. 상기 조성물은 본 발명의 범위 내에서 S.과 식물의 임의 다른 구성성분들을 함유할 수 있다.
특히 본 발명의 조성물의 상기 필수 구성성분들을 포함하는 S.과 식물의 하나 이상의 일원들과 같은 식물 추출물은 본 발명의 조성물을 구성한다.
본 발명의 범위 내에서, 본 발명의 상기 PK 추출물은 상기 S.과 식물 중의 임의의 종의 추출물일 수 있다. 본 발명의 추출 목적은 임의의 상기 식물 종 또는 그 밖의 식물 제재로 용이하고 간단하게 확장 가능하다는 것이 주지될 것이다. 동일하고, 용이하고, 간단하게 상기 공정은 상기 종들의 임의 혼합물에 대한 것으로 형성될 수 있다. 바람직하게, 추출물은 상기에 기술된 세 가지의 종들의 혼합물로부터 형성된 것이다: 피크로리자 쿠로아 로일, 피크로리자 스크로풀라리플로라 펜넬 및 네오피크로리자 스크로풀라리플로라. 이러한 세 가지 종들은 독성의 관점에서 바람직하다.
본 발명의 범위 내에서, 본 발명의 상기 추출물은 상기 테르펜, 지방산 및 글리코사이드 또는 상기 S.과의 유사한 구성성분들을 포함하는 임의의 다른 식물 제재로부터 일부 또는 전부 유도될 수 있다. 본 발명의 추출 방법은 S.과 식물과는 다른 식물 종, 또는 식물 종들의 혼합물로 용이하고 간단하게 확장 가능하다는 것이 주지될 것이다.
추출을 위해 사용되는 식물 제재는 뿌리, 근경, 줄기, 잎, 꽃, 나무껍질, 씨앗 등과 같은 식물의 임의의 부분일 수 있다. 본 발명의 범위 내에서, 상기 부분들의 임의 혼합물 또는 조합물이 추출될 수 있다. 바람직하게, 추출되는 식물 제재는 뿌리 또는 근경 중 어느 하나, 바람직하게 이들 두 부분의 혼합물이다. 상기 부분들의 임의의 다른 혼합물이 또한 본 발명의 범위 내에 속한다.
본 발명의 추출 방법은 고체-액체 추출 공정이다. 상술된 바와 같이, 식물 제재는 S.과 식물 중 임의 식물일 수 있다. 본 발명의 범위 내에서, 이는 상이한 상기 식물들로부터의 식물 제재의 혼합물일 수 있다. 바람직하게, 식물 제재는 종 피크로리자 쿠로아 로일 또는 피크로리자 스크로풀라리플로라 펜넬 또는 네오피크로리자 스크로풀라리플로라, 또는 상기 세 가지 종의 임의 혼합물 또는 조합물로부터의 식물 제재이다.
상기 제조 단계들은 임의적인 것으로서, 이의 하나 이상의 단계들은 요망되는 경우 조정될 수 있다. 추출은 습윤 또는 건조 식물 제재에 대해 추출될 수 있다. 바람직하게, 이러한 제재는 태양 건조 또는 공정 건조 중 어느 하나에 의해 사전 건조된다. 바람직하게, 식물 제재는 절단되고 잘게 썰어져서 추출 단계에서 보다 양호한 고체-액체 접촉을 확보하기 위해 크기를 감소시킨다. 바람직하게, 식물 제재는 찧고 약 1 내지 5 mm 크기 이하의 크기 범위로 분쇄된다. 바람직하게, 블랭칭(blanching) 작업이 수행된다.
추출은 본 발명의 범위 내에서, 일-단계 또는 다중 단계일 수 있다. 후자의 경우에, 상이한 식물 재료 및 추출물 (용액 스트림)은 합쳐지고 상이한 배열로 배치되어 반대방향, 같은 방향, 시리즈, 평행 및 하이브리드 조합을 제공한다. 이러한 관찰들은 또한 추가 가공 작업을 위해 상기 추출물/용액의 혼합 및 조합에 적용된다.
본 발명의 방법에서 구성된 용매는 비수성이다. 이는 바람직하게 비극성이지만 극성 및 그 밖의 용매들이 본 발명위 범위 내에 속한다. 바람직하게, 이는 비-알코올성이지만 4개 이상의 C-원자의 사슬 길이의 일가 알코올은 극성임에도 불구하고 이러한 알코올이 사용될 수 있다. 용매는 바람직하게 구조물에서 4개 이상의 C-원자의 탄화수소 사슬 또는 시클릭 또는 고리 부분의 탄화수소 사슬 중 어느 하나이다. 본 발명의 범위를 제한하지 않는 한, 용매는, 하기 리스트 중 하나일 수 있지만, 이로 제한되지 않는다: 디클로로메탄, 헥산, n-헥산, c-헥산, 톨루엔, t-BuOMe, Et20, 메틸 이소-부틸 케톤, 비닐아세테이트, 에틸 아세테이트, t-부탄올, DMA, i-프로판올, 포름산, 포름아미드, 메틸 에틸 케톤, N,N-디메틸포름아미드, acetic acid, 아세톤, 아세토니트릴, 벤젠, 1-부탄올, 2-부탄올, 2-부타논, 1 -부틸 알코올, 카본 테트라클로라이드, 클로로벤젠, 클로로포름, 시클로헥삼, 1,2-디클로로에탄, 디에틸 에테르, 디에틸렌 글리콜, 디글림(디에틸렌 글리콜 디메틸 에테르), 1,2-디메톡시-에탄(글림, DME), 디메틸에테르, 디메틸-포름아미드(DMF), 디메틸 설폭사이드(DMSO), 디옥산, 에탄올, 에틸 아세테이트, 에틸렌 글리콜, 글리세린, 헵탄, 헥사메틸포스포라미드(HMPA), 헥사메틸포스포러스 트리아미드(HMPT), 메탄올, 메틸 t-부틸 에테르(MTBE), 메틸렌 클로라이드, N-메틸-2-피롤리디논(N P), 니트로메탄, 펜탄, 원유 에테르, 리그로인, 1-프로판올, 2-프로판올, 피리딘, 테트라히드로푸란(THF), 트리에틸 아민, o-, m- 및 p-자일렌, 화이트 스피릿, 식물성 오일, 원유 나프타, 터펜틴, 산소첨가된 용매(예를 들어, 알코올, 글리콜 에테르, 메틸 아세테이트, 에틸 아세테이트, 케톤, 에스테르, 글리콜 ether, 글리콜 에스테르); 방향족 화합물 및 다른 탄화수소, 알코올, 에스테르, 에테르, 케톤, 아민, 및 니트레이트화된 및 할로겐화된 탄화수소를 포함하는 용매로서 사용되는 유기 화합물, 무기 용매, 예를 들어 암모니아, 황산, 설퍼릴 클로라이드 플루오라이드, 계면활성제, 세정제, pH 완충제, 물 및 중수.
본 발명의 범위 내에서, 추출은 상기 용매들 중 임의의 둘 이상의 용매 혼합물과 함께 수행될 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 범위 내에서, 추출은 상기 리스트로부터 선택된 두 개 이상의 용매들을 이용하여 연속적으로 수행될 수 있다. 대안적으로, 추출은 일련의 용매에 의해 또는 용매 혼합물에 의해 이루어질 수 있다.
본 발명의 추출 방법은 식물 제재를 적합한 용매(들)와 접촉시키는 고체-액체 추출 단계를 포함한다. 본 발명의 추출물은 본 발명의 방법 또는 본 발명의 범위 내에서의 다른 방법에 의해 생성될 수 있다. 본 발명의 범위 내에서, 본 발명의 추출물은 하기와 같은 추출 단계를 수행하기 위한 임의의 공지된 수단에 의해 제조될 수 있다: 용매 추출, 흡수성 겔 추출, 액화 가스(예를 들어, CO2) 추출, 효소 공정, 막 여과, 액체-액체 추출, 액체-고체 추출, 수지 추출, 역상 추출, 크로마토그래피 등.
본 발명의 범위 내에서, 증발 또는 다른 수단에 의한 용매의 제거 후의 본 발명의 추출 생성물은 건조되거나 그라인딩, 스크리닝, 밀링, 혼합, 과립화, 부형제 상에 흡착, 등과 같은 그 밖의 작업으로 수행될 수 있다. 추출물은 나노입자, 나노 겔의 형태를 가질 수 있거나 백신 또는 어주번트를 구성하기 위해 가공될 수 있다.
본 발명의 범위 내에서, 본 발명의 추출물은 상기 S.과 식물 또는 그 밖의 식물의 하나 이상의 하기 구성성분들을 추가로 함유할 수 있다: 글리코사이드 에스테르, 글리코사이드 에테르, 지방족 화합물, 방향족 화합물, 글리코시드 카복실레이트, 스테로이드 글리코사이드, 장쇄 지방산, 아글리콘, 아실화된 아글리콘, 지방 알코올, 지방산, 스테로이드 에스테르, 스테로이드 지방산, 스테로이드 알코올, 스테롤, 테르페노이드, 스테로이드 트리테르펜, 산화된 트리테르펜, 에스테르 of 트리테르펜, 트리테르펜의 산, 트리테르펜의 알코올, 쿠쿠르비타신, 5개 내지 40개의 탄소 원자를 갖는 테르페노이드 부분, 장쇄 히드록실 지방산 부분, 수지 산, 스테로이드 골격 상에 형성된 트리테르페노이드.
본 발명의 범위 내에서, 추출물은 경구, 정맥내, 근육내, 피하, 복막, 직장, 비강, 경피, 피부, 설하, 질 또는 다른 경로들에 의해 투여하기 위한 임의의 공지된 형태로 존재할 수 있다. 이는 또한 임의의 공지된 의학적 염 형태일 수 있고, 칼라, 풍미, 맛, 질감, 벌크 등을 위한 첨가제를 포함할 수 있다. 본 발명의 추출물은 또한 추가적인 효능 또는 조합 치료학적 효과 중 어느 하나 또는 둘 모두를 제공하는 첨가된 첨가제로서 추가적인 치료학적 인자들을 함유할 수 있다. 상기 첨가제는 치료학적 작용을 갖는 기능성 식품 또는 식품 조성물을 수득하기 위한 영양 인자들일 수 있다. 이러한 첨가제의 예에는 당, 비타민, 미네랄, 아미노산, 금속, 오일, 지방산, 알코올, 용매 및 그 밖의 식물 추출물이 있다. 본 발명의 추출물은 고형 조성물, 또는 적합한 염기에 또는 임의의 공지된 부형제 상에 흡착된 상기 친지성 성분들의 용액일 수 있다. 본 발명의 추출물은 이의 성질, 형태, 모양, 칼라, 질감을 개질시키고 이의 효능 및 수용성을 증가시키기 위해 임의적으로 추가로 가공될 수 있다. 상기 추출물의 임의의 이러한 개질된 형태는 본 발명의 범위 내에 속한다. 이러한 개질 공정의 예에는 추출물의 표준화, 상이한 분획을 얻어기 위한 분획화, 균질화, 보강, 흡수를 증가시키기 위한 효소 공정 등이 있다. 언급된 바와 같이, 추출과 관련한 관찰들은 또한 문맥에서 달리 요구되지 않는 한 본 발명의 조성물에 적용 가능하다.
본 발명의 추출물은 본 발명의 범위 내에서 분획의 형태를 지닐 수 있다. 추출물은 HPLC-고성능 액체 크로마토그래피, 가스 크로마토그래피(GC) 등과 같은 임의의 공지된 수단에 의해 분획화될 수 있다. 본 발명의 범위 내에서, 임의의 상기 분획 또는 이들의 혼합물은 본 발명의 추출물을 구성할 수 있다.
본 발명자들은 HPLC 절차에 의한 분확화를 수행하였고 이러한 분획을 NMR 분석하였다.
바람직하게, 본 발명의 추출 방법에서 적용된 용매는 비-극성 탄화수소 용매이다. 더욱 바람직하게, 용매는 n-헥산이다.
본 발명은 하기 적용에서 본 발명의 조성물 및 추출물의 사용을 조사하였다:
1. 임의의 간염 바이러스 및 독소에 대항, 및 간보호제로서,
2. 항고지혈증제, 항당뇨병제 및 신장 보호제로서,
3. 연구 및 산업에서 생화학적, 약제학적 및 생명공학 공정에서 박테리아 감염증에 대항
4. 임의의 RNA 바이러스, 특히 인플루엔자 바이러스 및 레트로바이러스에 대한 효능을 확립,
5. DNA 바이러스, 특히 목 헤르페스비리다에(Herpesviridae)의 포진 바이러스에 대한 효능을 확립,
6. 간 질환 및 독소 및 그 밖의 기관들의 질환에 대한 예방으로서,
7. 일반적으로 바이러스에 대한 예방으로서,
8. 일반적으로 임의의 바이러스, 박테리아, 진균 또는 원충에 대항,
9. 백신 및 백신에 대한 어주번트로서, 및
10. 언급된 임의의 제제들에 의해 야기된 임의 감염증, 질병 및 질환에 대항.
상술된 적용과 관련하여 본 발명자들에 의해 수행된 복용량의 범위는 1회 용량 당 약 1 mg 내지 1회 용량 당 약 1000 mg이며, 여기서 중량은 상기 테르펜 및 지방산의 합친 양을 칭하는 것이다.
본 발명의 보다 명확한 이해를 제공하기 위하여, 하기에는 본 발명의 몇몇 구체예들이 기술되는데, 이는 본 발명의 범위를 한정하지 않는다.
구체예 1:
1. 상기 PK 식물의 뿌리 및 근경을 입수하고 태양 건조시켰다. 손으로 외부 입자들을 제거하였다.
2. 상기 식물 제재를 스프링클러(sprinkler)를이용하여 물로 세척하여 모래 및 먼지를 제거하였다.
3. 이후에, 상기 식물 제재를 진공 하에서 공기 건조시켜 수분을 제거하였다.
4. 이후에, 상기 식물 제재를 손으로 분쇄하고 분쇄된 제재를 공기 건조시켜 소량의 수분을 제거하였다.
5. 이러한 제재의 배치를 계량하고 반응기(추출 용기)에 채웠다.
6. 헥산을 첨가하고 고체-액체 혼합물을 가열하였다 (대안적인 임의의 다른 비-극성 용매).
7. 상기 가열된 혼합물을 계속 교반하였다.
8. 상기 반응을 포함한 추출 공정을 약 24 시간 동안 진행하였다.
9. 상기 식물 제재 및 용액을 분리하였다.
10. 상기 용액을 진공 하에서 다른 용기로 옮겼다.
11. 상기 용액을 3회 여과하여 현탁된 제재 및 용해되지 않은 제재를 제거하고, 이후에 상기 용액을 반응 용기(증발기)로 보내고, 여기서 용매를 진공 하에서 증발시켰다. 증발 동안에 온도를 70℃ 미만으로 유지시켰다.
12. 상기 용매를 회수하고, 추출에서 재사용하기 위해 보내었다.
13. 증발로부터 얻어진 고체 잔류물을 진공 하, 조절된 대기에서 공기 건조시켰다. 건조된 물질은 본 발명의 추출물 생성물이며, 이를 시험을 위해 보내었다.
구체예 2:
1. 구체예 1에서와 같은 단계 1 및 2.
2. PK 식물 제재를 기계적 수단을 이용하여 작은 조각들로 분쇄하였다.
3. 배치를 측정하고, 반응기(추출 용기)에 로딩하였다.
4. 용매인, 펜탄 및 에틸 아세테이트의 혼합물을 상기 반응기에 채웠다.
(다른 방법: 펜탄, 에틸 아세테이트, 아세톤, n-헥산, 에테르, 클로로포름 및 테트라히드로푸란의 임의 혼합물)
5. 반응기 함유물을 가열시키고, 연속적으로 교반하였다. 추출을 약 36 시간 동안 수행하였다.
6. 식물 제재 및 용액의 분리를 수행하였다.
7. 상기 용액을 진공 하에서 다른 용기로 옮겼다.
8. 상기 용액을 3회 여과하고, 투명한 액체를 진공 하, 약 80℃에서 증발시켰다.
9. 용매를 회수하였다.
10. 증발로부터의 고체 잔류물을 수집하고 진공 하, 질소(대안적으로 이산화탄소) 분위기에서 공기 건조시켰다.
11. 상기 건조된 생성물은 본 발명의 생성물 추출물이다. 이를 시험을 위해 보내었다.
구체예 3:
1. 구체예 1의 단계 1 및 2와 동일.
2. PK 식물 제재를 페이스트로 삶고 충분한 양의 물과 혼합하였다.
3. 유기산(대안적으로, 무기산)을 첨가하여 글리코사이드의 에스테르화 반응을 위해 pH를 낮추었다.
4. 약 24 시간 동안 연속적으로 교반하였다.
5. 이러한 단계에서, n-헥산 용매(대안적으로, 원유 에테르)를 첨가하고, 교반하면서 약 4 시간 동안 계속 추출하였다.
6. 상기 용액을 디켄팅하고 여과하였다.
7. 진공 하, 약 75℃에서 가열시킴으로써 용액으로부터 용매를 증발시켰다.
8. 반-고형 잔류물을 수집하고 진공 하, 약 영하 80℃에서 동결시키고 추가로 가공하여 분말 형태로 수득하였다.
9. 상기 분말은 본 발명의 추출물 생성물이며, 이를 시험을 위해 보내었다.
구체예 4:
1. 구체예 1의 단계 1 및 2와 동일.
2. PK 식물 제재를 페이스트로 분쇄하고 스팀 증류하였다.
3. 상기 스팀을 응축시키고, 스팀 증류 후 잔류 용액을 수집하였다.
4. 효소 에스테라제를 첨가하였다. pH 및 온도를 조절하고 상기 용액을 약 6 시간 동안 교반하였다.
5. 진공 하에서 온도를 100℃로 상승시켜 효소를 변성시켰다.
6. 이후에, 용액을 냉각시켰다.
7. 원유 에테르를 첨가하고, 혼합물을 약 4 시간 동안 교반하였다.
8. 상기 용액을 여과하여 효소 파편 및 용해되지 않은 입자들을 제거하였다.
9. 상기 용액을 원유 에테르 층과 수층으로 분리하였다.
10. 상기 원유 에테르를 진공 하에서 가열하여 용매를 증발시켰다.
11. 고체 잔류물을 수집하였으며, 이는 본 발명의 추출물 생성물이다.
12. 추출물 생성물을 공기 건조시키고 시험을 위해 보내었다.
13. 수층으로부터 물을 증발시켰다. 증발을 진공 하에서 수행하였다. 잔류물은 PK 식물 제재 중의 수용성 성분들을 함유한다.
구체예 5:
1. 구체예 1의 단계 1, 2 및 3과 동일.
2. The PK 식물 제재를 기계적 수단을 이용하여 작은 조각들로 분쇄하였다.
3. 배치를 계량하고 추출기 반응기에 로딩하였다.
4. 측정된 양의 용매 에탄올(다른 용매: 메탄올)을 상기 반응기에 채웠다.
5. 반응기 함유물을 교반하면서 요망되는 수준으로 가열하고, 약 24 시간 동안 이러한 조건으로 유지시켰다.
6. 상기 용액을 진공 하에서 다른 반응기 용기로 옮겼다.
7. 상기 용액을 3회 여과하였다.
8. 물을 상기 용액에 첨가하고, 약 1 시간 동안 교반하였다.
9. 용매 n-헥산 (대안적으로, 펜탄)을 첨가하고, 상기 함유물을 약 5 시간 동안 교반하였다.
10. 상기 용액을 약 4 시간 동안 정치시켰다.
11. 진공 하에서 증류를 수행하여 용매를 증발시켜 본 발명의 추출물 생성물을 고체 또는 반-고체 형태로 회수하였다.
12. 물 및 알코올을 함유한 밸런스 액체(Balance liquid)를 증발시켜 용매를 회수하였다.
13. 생성물을 진공 하, 질소 분위기(대안적으로 CO2 분위기)에서 공기 건조시키고, 시험 및 미생물 시험을 위해 보내었다.
구체예 6:
1. 구체예 1의 단계 1 내지 3과 동일.
2. 구체예 5의 항목 2와 동일.
3. PK 식물 제재의 배치를 계량하고 추출기 반응기에 로딩하였다.
4. 상기 반응기에 요망되는 양의 n-헥산 (이러한 구체예에 대한 대안적인 용매: 펜탄, 1,4-디옥산 ,디에틸에테르 및 원유 에테르)으로 채웠다.
5. 반응기 함유물을 요망되는 수준으로 가열하고, 약 24 시간 동안 교반하였다.
6. 상기 용액을 진공 하에서 다른 용기로 옮기고 3회 여과하였다.
7. 상기 용액을 진공 하에 용매를 증발시키기 위해 가열하여, 본 발명의 추출물 생성물을 고체 또는 반-고체 형태로 수득하였다.
8. 잔류 용매를 진공하, 질소 분위기 (대안적으로 CO2 분위기)에서 공기 건조시켜 생성물로부터 제거하였다.
9. 생성물을 물리적 성질을 위한 시험 및 미생물 평가를 위해 보내었다.
본원에 기술된 것과는 다른 구체예들 및 변형예들은 당업자에 의해 실현 가능하며, 이러한 구체예들 및 변형예들은 본 발명의 범위 및 사상 내에 속한다.
참고문헌:
Figure pct00001

Claims (54)

  1. 현삼과(Scrophulariaceae family) 식물에서 발견된 하나 이상의 테르펜 및 상기 과에서 발견된 하나 이상의 지방산을 포함하는, 인간 및 동물 피검체에서의 바이러스, 진균, 박테리아, 기생충성 및 원충성 감염증, 질병 및 질환의 예방, 제거, 치료 및 관리에서 사용하기 위한, 및 간보호제, 항고지혈증제, 항당뇨병제 및 신장보호제로서의 다른 적용에서 사용하기 위한, 의학적, 기능성 식품 또는 식품 조성물.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 현삼과 식물에서 발견된 하나 이상의 다른 친지성 성분들을 추가로 포함하는 조성물.
  3. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 추가 성분이 상기 과의 식물에서 발견된 하나 이상의, 글리코사이드의 아글리콘을 포함하는 조성물.
  4. 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 친지성 성분이 조성물의 20 중량% 이상을 이루는 조성물.
  5. 제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 주요 친지성 성분이 하나 이상의 상기 지방산 및 테르펜이며, 상기 지방산 및 테르펜 모두의 양이 상기 친지성 성분의 약 50 중량% 초과인 조성물.
  6. 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 있어서, 비-친지성 성분이 약 20 중량%를 초과하지 않는 조성물.
  7. 제 1항 내지 제 6항 중 어느 한 항에 있어서, 수용성 성분의 양이 상기 친지성 성분의 양의 약 10 중량%를 초과하지 않는 조성물.
  8. 제 1항 내지 제 7항 중 어느 한 항에 있어서, 맛이 쓰고 냄새나는 성분들의 양이 약 0.5 중량% 이하인 조성물.
  9. 제 1항 내지 제 8항 중 어느 한 항에 있어서, 보완적 또는 보충적 치료 효능을 제공하고/거나 영양, 식품, 칼라, 맛, 질감, 냄새, 풍미, 벌크(bulk) 및 다른 특징들을 위한 추가 인자들인 하나 이상의 추가 성분들을 추가로 포함하는 조성물.
  10. 제 1항 내지 제 9항 중 어느 한 항에 있어서, 경구, 정맥내, 근육내, 피하, 복막, 직장, 비강, 경피, 피부, 설하, 질 또는 다른 경로들을 통한 투여를 위해 적합한 형태인 조성물.
  11. 제 1항 내지 제 10항 중 어느 한 항에 있어서, 의학적 활성 성분이 임의의 의학적으로 허용되는 염의 형태인 조성물.
  12. 제 1항 내지 제 11항 중 어느 한 항에 있어서, 분말, 시럽, 드링크, 정제, 캐플릿, 소프트젤, 캡슐, 나노젤, 나노-입자, 주사액, 비경구, 경피 패치, 흡수젤, 비강 스프레이, 질 젤, 부형제 상에 흡착된 형태 등의 형태인 조성물.
  13. 제 1항 내지 제 12항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 성분들이 식물 제재로부터 일부 또는 전부 유래된 조성물.
  14. 제 13항에 있어서, 상기 식물 제재(plant matter)가 상기 현삼과 식물의 하나 이상의 식물, 및 바람직하게 상기 과의 피크로리자 속의 하나 이상의 식물을 포함하는 조성물.
  15. 제 14항에 있어서, 상기 피크로리자 속의 상기 식물들이 종 피크로리자 쿠로아 로일(Picrorhiza kurrooa Royle), 피크로리자 스크로풀라리플로라 펜넬(Picrorhiza scrophulariflora Pennell) 및 네오피크로리자 스크로풀라리플로라(Neopicrorhiza scrophulariiflora), 또는 이들의 임의 혼합물 중 하나이고, 바람직하게 상기 세 개의 종들의 혼합물인 조성물.
  16. 제 15항에 있어서, 상기 구성성분들이 유래되는 식물 부분이 잎, 줄기, 근경, 뿌리, 꽃, 나무껍질, 씨앗 또는 다른 식물 부분으로부터, 바람직하게 뿌리 또는 근경으로부터, 더욱 바람직하게 이들의 혼합물로부터 선택되는 조성물.
  17. 제 13항 내지 제 16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 현삼과 식물의 구성성분들에서 발견되거나 이로부터 유래된 하나 이상의 다른 화합물들, 예를 들어 글리코사이드 에스테르, 글리코사이드 에테르, 지방족 화합물, 방향족 화합물, 글리코시드 카복실레이트, 스테로이드 글리코사이드, 장쇄 지방산, 아글리콘, 아실화된 글리코사이드, 지방 알코올, 지방산, 스테로이드 에스테르, 스테로이드 지방산, 스테로이드 알코올, 스테롤, 테르페노이드, 스테로이드 트리테르펜, 산화된 트리테르펜, 트리테르펜의 에스테르, 트리테르펜의 산, 트리테르펜의 알코올, 쿠쿠르비타신, 5 내지 40개 C 원자를 갖는 테르페노이드 부분, 테르펜 및 이들의 지방산, 에스테르, 스테롤, 스테로이드, 알코올, 염, 탄수화물, 산, 사포닌, 알칼로이드, 페놀, 탄닌, 리그닌, 플라보노이드, 호르몬, 안료, 카테킨, 단백질, 펩티드, 산화된 형태, 탄화수소, 장쇄 히드록실 지방산 부분, 수지 산, 스테로이드 골격 상에 형성된 트리테르페노이드를 추가로 포함하는 조성물.
  18. 제 13항 내지 제 17항 중 어느 한 항에 있어서, 식물 제재로부터 일부 또는 전부 유래된 상기 구성성분들이 상기 식물 제재의 추출에 의해 얻어진 추출물의 분획화에 의해 얻어진, 하나 이상의 분획, 또는 이들의 혼합물을 포함하며, 상기 분획화가 임의의 공지된 수단, 바람직하게 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)에 의해 이루어지는 조성물.
  19. 제 13항 내지 제 18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 식물 제재의 추출을 위해 채택된 용매, 용매 혼합물 또는 용매 시리즈가 디클로로메탄, 헥산, n-헥산, c-헥산, 톨루엔, t-BuOMe, Et20, 메틸 이소-부틸 케톤, 비닐아세테이트, 에틸 아세테이트, t-부탄올, DMA, i-프로판올, 포름산, 포름아미드, 메틸 에틸 케톤, N,N-디메틸포름아미드, 아세트산, 아세톤, 아세토니트릴, 벤젠, 1-부탄올, 2-부탄올, 2-부타논, 1-부틸 알코올, 카본 테트라클로라이드, 클로로벤젠, 클로로포름, 시클로헥삼, 1,2-디클로로에탄, 디에틸 에테르, 디에틸렌 글리콜, 디글림(디에틸렌 글리콜 디메틸 에테르), 1,2-디메톡시-에탄(글림, DME), 디메틸에테르, 디메틸-포름아미드(DMF), 디메틸 설폭사이드(DMSO), 디옥산, 에탄올, 에틸 아세테이트, 에틸렌 글리콜, 글리세린, 헵탄, 헥사메틸포스포라미드(HMPA), 헥사메틸포스포러스 트리아미드(HMPT), 메탄올, 메틸 t-부틸 에테르(MTBE), 메틸렌 클로라이드, N-메틸-2-피롤리디논(NMP), 니트로메탄, 펜탄, 원유 에테르, 리그로인, 1 -프로판올, 2-프로판올, 피리딘, 테트라히드로푸란(THF), 트리에틸 아민, o-, m- 및 p-자일렌, 화이트 스피릿(white spirit), 식물성 오일, 원유 나프타, 터펜틴, 산소첨가된 용매(예를 들어, 알코올, 글리콜 에테르, 메틸 아세테이트, 에틸 아세테이트, 케톤, 에스테르, 글리콜 에테르, 글리콜 에스테르); 방향족 화합물 및 다른 탄화수소를 포함한 용매로서 사용되는 유기 화합물, 알코올, 에스테르, 에테르, 케톤, 아민, 및 니트레이트화된 및 할로겐화된 탄화수소, 무기 용매, 예를 들어 암모니아, 황산, 설퍼릴 클로라이드 플루오라이드, 계면활성제, 세정제, pH 완충제, 물 및 중수로부터 선택되지만 이로 제한되지 않는 조성물.
  20. 제 19항에 있어서, 채택된 상기 용매가 n-헥산인 조성물.
  21. 제 1항 내지 제 20항 중 어느 한 항에 있어서, 백신 또는 백신에 대한 어주번트의 형태인 조성물.
  22. 실질적으로 본원에 기술된 바와 같은, 현삼과의 식물에서 발견된 하나 이상의 테르펜, 및 상기 과에서 발견된 하나 이상의 지방산을 포함하는, 인간 및 동물 피검체에서의 바이러스, 진균, 박테리아, 기생충성 및 원충성 감염증, 질병 및 질환의 예방, 제거, 치료 및 관리에서 사용하기 위한, 및 다른 적용에서 사용하기 위한, 의학적, 기능성 식품 또는 식품 조성물.
  23. 임의의 바이러스, 진균, 박테리아, 기생충 및 원충에 의해 야기된 인간 및 동물 피검체에서의 감염증, 질병 및 질환의 예방, 제거, 치료, 및 관리에서의, 제 1항 내지 제 22항 중 어느 한 항에 따른 조성물의 용도.
  24. 감염증 및 질환이 RNA 기반 바이러스에 의해 야기되는, 제 1항 내지 제 22항 중 어느 한 항에 따른 조성물의 용도.
  25. 감염증 및 질환이 DNA 기반 바이러스에 의해 야기되는, 제 1항 내지 제 22항 중 어느 한 항에 따른 조성물의 용도.
  26. 감염증 및 질환이 포진, 간염 바이러스, 인플루엔자, 구강인두 칸디다증, 접합균증, 스포로트릭스증, 결핵균, 폐렴 연쇄구균, 장관출혈성 대장균(EHEC), 열원충 기생충 등 중 하나인, 제 1항 내지 제 22항 중 어느 한 항 중 어느 한 항에 따른 조성물의 용도.
  27. 인간 및 동물 피검체에성의 간보호제, 신장보호제, 저지혈증제, 항당뇨병제로서의 제 1항 내지 제 22항 중 어느 한 항에 따른 조성물의 용도.
  28. 인간 및 동물 피검체에서 임의의 바이러스, 진균, 박테리아 및 원충 및 다른 질환들에 대한 예방성 전구약물 제제로서 제 1항 내지 제 22항 중 어느 한 항에 따른 조성물의 용도.
  29. 인간 및 동물에서의 바이러스, 진균, 박테리아, 및 원충에 의해 야기된 감염증, 질병 및 질환의 예방, 제거, 및 치료에서 사용하기 위한 림프구, 백신, 혈청, 항혈청, 혈장, 항체, 항원, 펩티드, 효소, 면역 혈청, 면역글로블린, 면역원 및 어주번트와 같은 면역계 관련 종을 제조하기 위한 제 1항 내지 제 22항 중 어느 한 항에 따른 조성물의 용도로서,
    상기 종들이 이의 면역계에 의해 상기 종들의 생산을 야기시키기 위해 피검체에 상기 조성물을 투여함으로써 인간, 동물, 조류 또는 수중 동물 피검체에서 발생되며, 상기 종들이 후속하여 상기 예방, 제거 및 치료에서 사용하기 위해 분리되고 수확되는, 용도.
  30. 피검체에 적절한 시간에 걸쳐, 적절한 용량의, 현삼과 식물에서 발견된 하나 이상의 테르펜 및 상기 과에서 발견된 하나 이상의 지방산을 포함하는 조성물을 투여한 후에, 적절한 시간에 걸쳐 적합한 유지 용량의 상기 조성물을 투여함을 포함하여, 인간 및 동물 피검체에서, 및 약제학적, 생화학적, 생명공학적 및 발효 연구 및 산업에서 바이러스, 진균, 박테리아, 기생충성 및 원충성 감염증, 질병 및 질환의 예방, 제거, 치료 및 관리를 위한 치료 방법.
  31. 제 30항에 있어서, 상기 감염증, 질병 및 질환이 DNA 바이러스에 의해 야기되는 치료 방법.
  32. 제 30항에 있어서, 상기 감염증, 질병 및 질환이 RNA 바이러스에 의해 야기되는 치료 방법.
  33. 제 30항 내지 제 32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 감염증, 질병 및 질환이 포진, 간염 바이러스, 인플루엔자, 구강인두 칸디다증, 접합균증, 스포로트릭스증, 결핵균, 폐렴 연쇄구균, 장관출혈성 대장균(EHEC), 열원충 기생충 등 중 하나인 치료 방법.
  34. 제 30항 내지 제 33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 분말, 시럽, 드링크, 정제, 캐플릿, 소프트젤, 캡슐, 나노젤, 나노-입자, 주사액, 비경구, 경피 패치, 흡수젤, 비강 스프레이, 질 젤, 부형제 상에 흡착된 것 등과 같은 공지된 형태들 중 하나이고, 경구, 정맥내, 근육내, 피하, 복막, 직장, 비강, 경피, 피부, 설하, 질 등과 같은 공지된 경로들 중 하나에 의해 투여되는 치료 방법.
  35. 제 30항 내지 제 34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 상기 과의 식물들의 하나 이상의 다른 구성성분들 및/또는 이들이 임의의 유도체 화합물을 추가로 포함하는 치료 방법.
  36. 제 30항 내지 제 34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용량이 약 10 mg 내지 약 1000 mg의 상기 테르펜 및 상기 지방산의 조합물인 치료 방법.
  37. 본원에 기술된 바와 같이, 적절한 시기에 걸쳐, 피검체에 적절한 용량의 현삼과 식물에서 발견된 하나 이상의 테르펜 및 상기 과에서 발견된 하나 이상의 지방산을 포함하는 조성물을 투여한 후에, 실질적으로 적절한 시간에 걸쳐 적합한 유지 용량의 상기 조성물을 투여함을 포함하여, 인간 및 동물 피검체에서 및 약제학적, 생화학적, 생명공학적 및 발효 연구 및 산업에서의 바이러스, 진균, 박테리아, 기생충성 및 원충성 감염증, 질병 및 질환의 예방, 제거, 치료 및 관리를 위한, 치료 방법.
  38. 인간 및 동물에서 바이러스, 진균, 박테리아 및 원충에 의해 야기된 감염증, 질병 및 질환의 예방, 제거 및 치료에서 사용하기 위한 림프구, 혈청, 항-혈청, 혈장, 항체, 항원, 펩티드, 효소, 면역 혈청, 면역글로블린, 면역원 및 어주번트와 같은 면역계 관련 종으로서, 상기 종들이 피검체에 이의 면역계에 의해 상기 종의 생산을 야기시키기 위해 제 1항 내지 제 22항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 투여함으로써 인간, 동물, 조류 또는 수중 동물 피검체에서 발생되며, 상기 종들이 상기 예방, 제거 및 치료에서 사용하기 위해, 백색으로서 또는 그 밖의 달리 사용하기 위해 후속하여 분리되고 수확되는, 면역계 관련 종.
  39. 인간 및 동물에서 바이러스, 진균, 박테리아, 및 원충에 의해 야기된 감염증, 질병 및 질환의 예방, 제거 및 치료에서 사용하기 위한 림프구, 혈청, 항-혈청, 혈장, 항체, 항원, 펩티드, 효소, 면역 혈청, 면역글로블린, 면역원 및 어주번트와 같은 면역계 관련 종을 생산하는 방법으로서,
    현삼과 식물에서 발견된 테르펜 및 지방산을 포함하는 조성물을 제공하는 단계, 및 이의 면역계에 의해 상기 종들의 발생을 야기시키기 위해 인간, 동물, 조류 또는 수중 동물 피검체에 상기 조성물을 투여하는 단계, 상기 예방, 제거 및 치료에서 사용하기 위한 이의 혈청 및 항-혈청으로부터 상기 종들을 수확하고 분리하는 단계를 포함하는, 면역계 관련 종을 생산하는 방법.
  40. 제 39항에 있어서, 상기 조성물이 상기 과의 식물에서 발견된 하나 이상의 글리코사이드의 아글리콘을 추가로 포함하는, 면역계 관련 종을 생산하는 방법.
  41. 제 39항 또는 제 40항에 있어서, 상기 조성물이 상기 과의 식물에서 발견된 하나 이상의 다른 친지성 구성성분들을 추가로 포함하는 면역계 관련 종을 생산하는 방법.
  42. 제 39항 내지 제 41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 상기 과의 식물에서 발견된 하나 이상의 다른 구성성분들, 또는 이들의 임의의 유도체를 추가로 포함하는 면역계 관련 종을 생산하는 방법.
  43. 제 39항 내지 제 42항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물의 하나 이상의 구성성분들이 일부 또는 전부 식물 기원인 면역계 관련 종을 생산하는 방법.
  44. 제 43항에 있어서, 상기 식물 기원 구성성분들이 현삼과 식물, 바람직하게 상기 과의 피크로리자 속의 식물, 및 더욱 바람직하게 피크로리자 쿠로아 로일, 피크로리자 스크로풀라리플로라 펜넬 및 네오피크로리자 스크로풀라리플로라의 하나 이상의 종, 및 더더욱 바람직하게 상기 세 가지 종들의 혼합물의 부분들의 추출에 의해 유래되는, 면역계 관련 종을 생산하는 방법.
  45. 제 43항 또는 제 44항에 있어서, 상기 추출되는 부분들이 하나 이상의 잎, 줄기, 근경, 뿌리, 꽃, 나무껍질, 씨앗 등, 및 바람직하게 뿌리 또는 근경, 및 더욱 바람직하게 이들의 혼합물로부터인, 면역계 관련 종을 생산하는 방법.
  46. 제43항 내지 제 45항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 구성성분들이 제 19항에 기술된 용매의 리스트로부터 선택된 용매, 용매 시리즈 또는 용매 혼합물, 및 바람직하게 n-헥산을 이용하여 식물 제재를 추출함으로써 수득되는, 면역계 관련 종을 생산하는 방법.
  47. 제 39항 내지 제 46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 종들이 백신 또는 이의 어주번트를 수득하기 위해 포뮬레이션되는 면역계 관련 종을 생산하는 방법.
  48. 제 39항 내지 제 47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 피검체가 바람직하게, 상기 종들이 작용하도록 요구되는 감염증, 질병 또는 질환에 의해 감염되기 전인 면역계 관련 종을 생산하는 방법.
  49. 실질적으로 본원에 기술된 바와 같이, 인간 및 동물에서 바이러스, 진균, 박테리아, 및 원충에 의해 야기된 감염증, 질병 및 질환의 예방, 제거 및 치료에서 사용하기 위한 림프구, 혈청, 항-혈청, 혈장, 항체, 항원, 펩티드, 효소, 면역 혈청, 면역글로블린, 면역원 및 어주번트와 같은 면역계 관련 종을 생산하는 방법.
  50. 현삼과 식물에서 발견된 하나 이상의 테르펜을 상기 과에서 발견된 하나 이상의 지방산과 혼합함으로써, 인간 및 동물 피검체에서의 바이러스, 진균, 박테리아, 기생충성 및 원충성 감염증, 질병 및 질환의 예방, 제거, 치료 및 관리에서 사용하기 위한, 및 다른 적용들에서 사용하기 위한, 의학적, 기능성 식품 및 식품 조성물을 제조하는 방법.
  51. 제 50항에 있어서, 상기 과의 식물에서 발견된 하나 이상의 글리코사이드의 아글리콘을 상기 청구항에 기술된 성분들과 혼합함을 추가로 포함하는 방법.
  52. 제 50항 또는 제 51항에 있어서, 상기 S. 과의 하나 이상의 다른 친지성 성분들을 상기 청구항들에서 기술된 성분들과 혼합함을 추가로 포함하는 방법.
  53. 제 50항 내지 제 52항 중 어느 한 항에 있어서, 추가 보완적 및/또는 보충적 치료 활성을 위한; 맛, 칼라, 풍미, 질감, 냄새, 벌크 및 다른 특징들을 위한; 활성 성분들의 용해 및 개질/전환을 위한; 및 다른 목적들을 위한 하나 이상의 추가 성분들을 혼합시킴을 추가로 포함하는 방법.
  54. 실질적으로 분원에 기술된 구성성분들의 혼합함으로써, 인간 및 동물 피검체에서의 바이러스, 진균, 박테리아, 기생충성 및 원충성 감염증, 질병 및 질환의 예방, 제거, 치료 및 관리에서 사용하기 위한, 및 다른 적용에서 사용하기 위한 의학적, 기능성 식품 및 식품 조성물을 제조하는 방법.
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