KR20120034739A

KR20120034739A - 항-ｖｅｇｆ 항체 및 그의 용도

Info

Publication number: KR20120034739A
Application number: KR1020127001157A
Authority: KR
Inventors: 피오나 하딩; 요시코 아카마츠; 로버트 비 두브릿지; 데이비드 비. 파워스
Original assignee: 애보트 바이오테라퓨틱스 코포레이션
Priority date: 2009-06-17
Filing date: 2010-06-17
Publication date: 2012-04-12
Also published as: BRPI1012321A2; IL239604A0; UA104626C2; SG177265A1; CL2011003182A1; CN102482349B; US9079953B2; AU2010262836A1; CR20110653A; AU2010262836B2; RU2011150916A; PE20120622A1; WO2010148223A2; ZA201109098B; EP2894167B1; CO6480962A2; CA2765755C; IL216835A0; HK1211961A1; CA2765755A1

Abstract

본원은 혈관 내피 성장 인자("VEGF")에 대한 항체 및 이러한 항체의, 예를 들어 VEGF의 활성 및/또는 과생성과 연관된 질환 치료를 위한 용도에 관한 것이다.

Description

항-ＶＥＧＦ 항체 및 그의 용도{ANTI-VEGF ANTIBODIES AND THEIR USES}

1. 관련 출원에 대한 교차 참조 및 서열 목록

본 출원은 U.S.C §119(e) 하에 2009년 6월 17일 출원된 미국 가출원 제 61/218,005호의 혜택을 청구하며, 이를 전체로 참조하여 본원에 포함시킨다.

본 출원은 EFS-웹을 통해 제출된 서열목록을 포함하고 이를 전체로 참조하여 본원에 포함시킨다. 2010년 6월 15일 생성된, 상기 ASCII 사본은 명칭이 381493PC.txt이며 크기는 141,482바이트이다.

2. 본 발명의 분야

본 발명은 항-VEGF 항체, 항-VEGF 항체를 포함하는 약학 조성물, 이러한 항체의 치료 용도에 관한 것이다.

3. 배경기술

혈관생성(angiogenesis)은 종양 성장, 증식성 망막병증, 나이 관련 황반 변성증, 류마티스성 관절염(RA) 및 건선을 포함하는, 다양한 병적 상태에서 그 영향으로 인해 매력적인 치료 표적으로 부상하였다(Folkman et al., 1992, J. Biol. Chem. 267:10931-10934). 특이적 분자 혈관생성 인자의 제1 증거는 이식된 종양에 의해 유도되는 강력한 신생혈관 반응의 관찰을 기초로 하였다. 혈관생성이 대부분의 1차 종양의 성장 및 그 후속 전이에 필수적이라는 것은 이제 공지이다. 전환 성장 인자(TGF)-α, TGF-β, 간세포 성장 인자(HGF), 종양 괴사 인자-α, 안지오제닌, 인터루킨(IL)-8, 혈관 내피 성장 인자(VEGF, 또한 VEGFA 또는 혈관 침투성 인자(VPF)라고도 함)를 포함하여, 수많은 분자가 이후로 혈관생성의 양성 조절과 연관되었다(Ferrara et al., 2003, Nature Medicine 9:669-676).

VEGF 단백질은 정상 배아 혈관신생(배아 순환계의 새로운(de novo) 형성) 및 비정상적 혈관생성(이미 존재하는 혈관구조로부터 혈관 성장) 둘 모두에 관여하는 중요한 신호전달 단백질이다(Ferrara et al., 1996, Nature 380:439-442; Dvorak et al., 1995, Am. J. Pathol. 146:1029-1039). VEGF는 고형 종형 및 혈액학적 악성종양, 안내 신생혈관 증후군, 염증 및 뇌 부종, 및 여성 생식관 병변과 연관된다(Ferrara et al., 2003, Nature Medicine 9:669-676). VEGF mRNA는 폐, 유방, 위장관, 신장, 췌장 및 난소의 종양을 포함하여, 많은 인간 종양에서 과발현된다(Berkman et al., 1993, J. Clin. Invest. 91:153-159). 눈의 수양액 및 유리액 내 VEGF 증가는 다양한 망막병증과 연관있었다(Aiello et al., 1994, N. Engl. J. Med. 331:1480-1487). 나이 관련 황반 변성증(AMD)은 노인에서의 시력 상실의 주요 원인이며 신생혈관증식 및 혈관 누수가 원인이다. AMD를 앓는 환자에서 맥락막 신혈관막 내 VEGF의 국재화가 확인되었다(Lopez et al., 1996, Invest. Ophtalmo.Vis. Sci. 37:855-868).

VEGF 유전자 패밀리는 원형 구성원 VEGFA와, VEGFB, VEGFC, VEGFD, 및 태반 성장 인자(PLGF)를 포함한다. 인간 VEGFA 유전자는 7개 인트론에 의해 분리된 8새 엑손으로 구성된다. 6 이상의 다른 이소폼의 VEGF가 존재하는데, VEGF₁₂₁, VEGF₁₄₅, VEGF₁₆₂, VEGF₁₆₅, VEGF_165b, VEGF₁₈₃, VEGF₁₈₉, 및 VEGF₂₀₆이며, 여기서 첨자는 신호 절단 이후 남은 아미노산의 번호를 의미한다. 천연 VEGF는 45kDa의 동종이량체 헤파린-결합 당단백질이다(Ferrara et al., 2003, Nature Medicine 9:669-676). VEGF(특히 VEGFA)는 2개의 관련 수용체 티로신 키나아제, VEGFR-1(Flt-1이라고도 함) 및 VEGFR-2(Flk-1 또는 키나아제 도메인 영역(KDR) 또는 CD309라고도 함)에 결합한다. 각 수용체는 7개 세포외 영역과 1개의 경막 영역을 갖는다. VEGF는 또한 뉴로필린 NRP1(혈관 내피 세포 성장 인자 165 수용체(VEGF165R) 또는 CD304) 및 NRP2(혈관 내피 세포 성장 인자 165 수용체 2(VEGF165R2))에도 결합한다.

혈관생성 조절에서 그 중추적 역할을 고려해보면, VEGF는 치료 중재법을 위한 매력적인 표적을 제공한다. 또한, VEGF 또는 그 수용체 신호전달 시스템의 차단을 목적으로 하는 다양한 치료 전략이 현재 신생물성 질환의 치료를 위해 개발되고 있다. 항-VEGF 항체 베바시주맙은 rhuMAb VEGF 또는 Avastin？이라고도 하며, Genentech에서 만들고 판매하는 재조합 인간화 항-VEGF 단일클론 항체이다(Presta et al., 1997, Cancer Res. 57:4593-4599). 베바시주맙을 제작하기 위해, 쥐의 항-VEGF 단일클론 항체 A.4.6.1의 상보성-결정 영역(CDR)이 인간 프레임워크 및 IgG 불변 영역 상에 이식되었다. CDR 외부에 추가 돌연변이를 이후 분자에 도입하여, 결합성을 향상시킨, 그 아미노산 서열의 ?93%가 인간 IgG₁에서 유래되고 서열의 ?7%가 쥐 항체 A.4.6.1에서 유래된 항체를 생성시켰다. 베바시주맙은 분자 질량이 약 149,000 달톤이고 글리코실화된다.

라니비주맙은 베바시주맙에서 유도된 친화도 성숙된 Fab 단편이다. 라니비주맙은 VEGF에 대해 높은 친화도를 가지며, 또한 크기가 보다 작아, 망막을 보다 잘 침투할 수 있게 하여, AMD와 연관된 눈의 신혈관형성을 치료할 수 있게 한다(Lien and Lowman, In: Chernajovsky, 2008, Therapeutic Antibodies. Handbook of Experimental Pharmacology 181, Springer-Verlag, Berlin Heidelberg 131-150). 라니비주맙은 Genentech에서 개발하여 Lucentis？라는 상품명으로 판매되고 있다.

Avastin？을 포함하는 계획으로 암환자를 치료한 결과 고혈압, 단백뇨, 혈전색전증, 출혈 및 심장 독성을 포함하는, 부작용을 초래할 수 있다(Blowers & Hall, 2009, Br. J. Nurs. 18(6):351-6, 358). 또한, 인간화 항체임에도 불구하고, 베바시주맙은 인간에 투여시 면역 반응을 유발시킬 수 있다. 이러한 면역 반응은 순환계로부터 항체 또는 단편의 면역 복합체-매개 제거를 일으킬 수 있고, 요법에 부적합한 반복적 투여를 하게하여, 결국 환자에 대한 치료 혜택을 감쇠시키고 항체의 재투여를 제한한다.

따라서, 예를 들어, 저용량으로 투여할 수 있는, 베바시주맙보다 친화도가 높은 변이체, 또는 베바시주맙과 비교하여 면역원성 및 다른 부작용이 감소된 변이체를 생성함으로써, 상기 언급된 문제들 중 1 이상이 극복된 개선된 항-VEGF 항체 또는 단편을 제공할 필요성이 존재한다.

섹션 3 또는 본원의 임의의 다른 섹션에서 임의 참조문헌의 인용 또는 확인은 이러한 참조문헌이 본원에 대한 종래 기술로서 입수가능하다는 용인으로서 해석되어서는 안된다.

4. 요약

본 발명은 베바시주맙 또는 라니비주맙과 비교하여 VEGF에 대해 개선된 친화도 및/또는 감소된 면역원성을 갖는 항-VEGF 항체 베바시주맙의 변이체에 관한 것이다. 베바시주맙은 본원에서 (아미노 말단에서 카르복시 말단 순으로) CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3이라고 하는, 3개의 중쇄 CDR, 및 본원에서 (아미노 말단에서 카르복시 말단 순으로) CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3이라고 하는, 3개의 경쇄 CDR을 갖는다. 베바시주맙 CDR의 서열은 도 1A 및 1B에 도시하였으며, 그들의 넘버링은 표 1(중쇄 CDR 경우) 및 표 2(경쇄 CDR 경우)에 기재하였다. 관련 항체인, 라니비주맙은 베바시주맙의 친화도 성숙화를 통해 생성시켰다. 라니비주맙은 베바시주맙과 동일한 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3 및 CDR-H2 서열을 가지지만, 그 CDR-H1 및 CDR-H3 서열은 베바시주맙과는 서로 다르다. 라니비주맙의 중쇄 및 경쇄 서열은 도 1C에 도시하였고, CDR은 도 1D에 기재하였다.

본원의 항체는 대체로 베바시주맙 및 라니비주맙과 비교하여 1 이상의 중쇄 CDR에 1 이상의 아미노산 치환을 갖는다.

일정 측면에서, 항-VEGF 항체는 베바시주맙 또는 라니비주맙과 비교하여 CDR-H1에 N31F; CDR-H2에 K64S; CDR-H2에 K64Q; CDR-H2에 Y53F; CDR-H3에 H97E; CDR-H3에 H97D; CDR-H3에 H97P; CDR-H3에 Y98F; CDR-H3에 Y99E; CDR-H3에 Y99D; CDR-H3에 S100aG, 및 CDR-L2에 T51A에서 선택되는 1 이상의 치환을 포함한다. 다른 측면에서, 항-VEGF 항체는 표 8 및 9에서 선택되는 1 이상의 치환을 포함한다. 개선된 친화도 변이체 항체에 도입될 수 있는 추가 돌연변이는 후보 탈면역화 치환일 수 있으며, 예컨대 표 6에 기술된 것 및, 다른 돌연변이, 예를 들어, 표 10 및 11에 기술된 돌연변이를 포함하지만, 이에 제한되지 않는, VEGF에 대한 항체의 결합능을 파괴하지 않는, 치환, 또는 기지의 돌연변이, 예컨대 표 12-1 내지 12-9 및 13에 기술된 돌연변이일 수 있다. 도입시킬 수 있는 추가의 다른 돌연변이는 표 14-16에 기술된 돌연변이를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.

특정 구체예에서, 본원의 항-VEGF 항체는, 표 7에서 선택되는 치환, 및 경우에 따라 1 이상의 추가 돌연변이, 예를 들어, 후보 탈면역화 치환, 예컨대 표 6에 기술된 치환들과, 다른 돌연변이, 예를 들어 표 10 및 11에 기술된 돌연변이를 포함하나, 이에 제한되지 않는, VEGF에 대한 항체의 결합능을 파괴하지 않는 치환, 또는 공지의 돌연변이, 예컨대 표 12-1 내지 12-9 및 13에 기술된 돌연변이의 조합을 포함한다. 본원의 항-VEGF 항체에 도입될 수 있는 또 다른 돌연변이는 표 14-16에 기술된 돌연변이를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

다른 구체예에서, 본원의 항-VEGF 항체는 이하의 CDR 치환: K64S(CDR-H2), K64Q(CDR-H2), Y53F 및 K64Q(CDR-H2), H97E 및 Y98F(CDR-H3), 또는 T51A(CDR-L2) 중 1 이상을 포함한다. 항-VEGF 항체는 또한 경우에 따라 표 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12-1 내지 12-9, 또는 13-16의 1 이상에서 선택되는 1 이상의 추가 돌연변이 또는 돌연변이의 조합을 포함할 수 있다.

추가의 CDR 치환은 N31F(CDR-H1), H97E(CDR-H3), H97D(CDR-H3), H97P(CDR-H3), Y99E(CDR-H3), Y99D(CDR-H3), S100aG(CDR-H3)(여기서, CDR-H3 중 위치 3은 경우에 따라 티로신이 아님), T28P, N31F, N31G 및 N31M(CDR-H1), H97A, H97Q, H97S, H97T, S100aD, S100aE, 및 S100Av(CDR-H3), T30W, T30R 또는 T30Q(CDR-H1), Y53F, T58F, A61G, A61K, A61R, A61H, A61Y, K64G, K64E, R65L, R65T, R65A, R65E, 및 R65D (CDR-H2), 및 Y98F 및 Y100eF(CDR-H3)를 포함할 수 있다. CDR은 경우에 따라 표 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12-1 내지 12-9 및 13 중 1 이상에서 선택되는 1 이상의 추가 돌연변이 또는 돌연변이의 조합을 함유한다.

또 다른 추가 치환은 (a) CDR-H1에 N31F, CDR-H3에 H97D, CDR-H3에 Y99D 및 CDR-H3에 S100aG; (b) CDR-H1에 N31F, CDR-H3에 H97P, CDR-H3에 Y99D 및 CDR-H3에 S100aG; (c) CDR-H1에 N31F, CDR-H3에 H97P 및 CDR-H3에 Y99E; (d) CDR-H1에 N31F, CDR-H3에 H97E 및 CDR-H3에 Y99E; (e) CDR-H1에 N31F, CDR-H3에 H97D 및 CDR-H3에 Y99E; (f) CDR-H1에 N31F, CDR-H3에 H97E, CDR-H3에 Y99D 및 CDR-H3에 S100aG; (g) CDR-H1에 N31F, CDR-H3에 Y99D 및 CDR-H3에 S100aG; (h) CDR-H1에 N31F, CDR-H3에 H97P 및 CDR-H3에 Y99D; (i) CDR-H1에 N31F, CDR-H3에 H97D 및 CDR-H3에 S100aG; (j) CDR-H1에 N31F 및 CDR-H3에 S100aG; 또는 (k) CDR-H1에 N31F, CDR-H3에 H97P 및 CDR-H3에 S100aG에서 선택되는 치환의 조합을 포함하는 중쇄 CDR 치환을 포함할 수 있다. 추가의 선택적인 치환은 표 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12-1 내지 12-9 및 13 중 1 이상에서 선택되는 1 이상의 추가 돌연변이 또는 돌연변이의 조합을 포함할 수 있다.

또 다른 추가 중쇄 치환은 CDR-H2에 A61F, CDR-H2에 A61E, CDR-H2에 A61D, CDR-H2에 D62L, CDR-H2에 D62G, CDR-H2에 D62Q, CDR-H2에 D62T, CDR-H2에 D62K, CDR-H2에 D62R, CDR-H2에 D62E, CDR-H2에 D62H, CDR-H2에 K64S, CDR-H2에 K64V, CDR-H2에 K64Q, CDR-H2에 R65V, CDR-H2에 R65F, CDR-H2에 R65H, CDR-H2에 R65N, CDR-H2에 R65S, CDR-H2에 R65Q, CDR-H2에 R65K, CDR-H2에 R65I 및 CDR-H3에 Y98H에서 선택되는 1 이상의 치환을 포함할 수 있다. 경우에 따라, 1 이상의 추가 돌연변이 또는 돌연변이의 조합은 표 7, 8, 9, 10, 11, 12-1 내지 12-9 및 13의 1 이상에서 선택되는 바와 같이 포함될 수 있다.

일정 측면에서, 본원의 항체는 베바시주맙 또는 라니비주맙의 VH 및 VL 서열과 서열 동일성이 80% 이상(및 일정 구체예에서, 서열 동일성이 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상)인 VH 및 VL 서열을 가지며, 베바시주맙 또는 라니비주맙과 비교하여 1 이상의 CDR에 1 이상의 아미노산 치환을 포함한다. 다른 측면에서, 본원의 항체는 베바시주맙 또는 라니비주맙의 VH 및 VL 서열과의 서열 동일성이 80% 이상(및 일정 구체예에서, 서열 동일성이 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상)인 VH 및 VL 서열을 가지며, 베바시주맙 또는 라니비주맙과 비교하여 1 이상의 프레임워크 영역에 1 이상의 아미노산 치환을 포함한다. 특정 구체예에서, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 VH 및 VL 서열과 비교하여 중쇄 및 경쇄에 대한 서열 동일성 비율은 독립적으로 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상의 서열 동일성, 또는 99% 이상의 서열 동일성에서 선택된다. 일정 측면에서, 본원의 항체는 베바시주맙 또는 라니비주맙의 VH 및/또는 VL 서열과 95% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 VH 및/또는 VL 서열을 갖는다.

일정 측면에서, 본원의 항체는 베바시주맙 또는 라니비주맙과 비교하여 그들의 CDR에 최대 17개 아미노산 치환을 갖는다. 표적 결합능을 보유하는 17개 아미노산 치환을 갖는 변이 항체는 [Bostrom et al., 2009, Science 323:1610-14]에 의해 생성시켰다.

특정 구체예에서, 본원의 항-VEGF 항체는 독립적으로,

베바시주맙 또는 라니비주맙의 상응하는 CDR과 비교하여 최대 1개, 최대 2개, 최대 3개, 최대 4개, 최대 5개, 최대 6개, 최대 7개, 최대 8개, 최대 9개 또는 최대 10개의 CDR-H1 치환;

베바시주맙 또는 라니비주맙의 상응하는 CDR과 비교하여 최대 1개, 최대 2개, 최대 3개, 최대 4개, 최대 5개, 최대 6개, 최대 7개, 최대 8개, 최대 9개, 최대 10개, 최대 11개, 최대 12개, 최대 13개, 최대 14개, 최대 15개, 최대 16개, 최대 17개의 CDR-H2 치환;

베바시주맙 또는 라니비주맙의 상응하는 CDR과 비교하여 최대 1개, 최대 2개, 최대 3개, 최대 4개, 최대 5개, 최대 6개, 최대 7개, 최대 8개, 최대 9개, 최대 10개, 최대 11개, 최대 12개, 최대 13개 또는 최대 14개의 CDR-H3 치환;

베바시주맙 또는 라니비주맙의 상응하는 CDR과 비교하여 최대 1개, 최대 2개, 최대 3개, 최대 4개, 최대 5개, 최대 6개, 최대 7개, 최대 8개, 최대 9개, 최대 10개 또는 최대 11개의 CDR-L1 치환;

베바시주맙 또는 라니비주맙의 상응하는 CDR과 비교하여 최대 1개, 최대 2개, 최대 3개, 최대 4개, 최대 5개, 최대 6개 또는 최대 7개의 CDR-L2 치환; 및

베바시주맙 또는 라니비주맙의 상응하는 CDR과 비교하여 최대 1개, 최대 2개, 최대 3개, 최대 4개, 최대 5개, 최대 6개, 최대 7개, 최대 8개 또는 최대 9개의 CDR-L3 치환

을 갖는다.

본원은 또한 개질된 항-VEGF 항체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 일부 측면에서, 약학 조성물은 베바시주맙 또는 라니비주맙과 비교하여 감소된 면역원성 및/또는 VEGF에 대한 증가된 친화도를 갖는다.

본원은 본원의 항-VEGF 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산과, 그러한 핵산을 포함하는 벡터를 제공한다. 추가적으로, 항-VEGF 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 벡터로 형질전환된 원핵생물 세포 및 진핵생물 세포를 제공하고, 또한 그러한 뉴클레오티드 서열을 발현하도록 조작된 진핵생물(예컨대 포유동물) 숙주 세포를 제공한다. 본 발명은 또한 숙주 세포를 배양하여 항-VEGF 항체를 제조하는 방법을 제공한다.

본원의 항-VEGF 항체는 암(예를 들어, 결장 암종, 직장 암종, 비소세포 폐암, 및 유방 암), 망막 질환(예를 들어, 나이 관련 황반 변성증("AMD")), 및 면역 질환(예를 들어, 류마티스성 관절염)의 치료에 유용하다.

일정 측면에서, 본원의 항-VEGF 항체는 베바시주맙 또는 라니비주맙과 비교하여 감소된 용량, 예를 들어, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80% 또는 적어도 90% 적은 용량으로 사용될 수 있다.

본원에서 사용되는 부정 관사 및 정관사는 특허 출원에서 통용되는 바와 같이, 달리 명백하게 지적하지 않으면 1 이상을 의미하는 것으로 이해한다. 또한, 용어 "또는"은 본원에서, 특허 출원 분야에서 통상적으로 사용되는 이접적 접속사 "또는"이나 접속사 "및"을 의미하는데 사용된다.

본 명세서에 언급된 모든 출판물을 참조하여 본원에 포함시킨다. 본원에 포함된 임의의 문서, 법령, 재료, 장치, 물품 등은 오직 본원에 대한 배경을 제공하려는 목적이다. 이들의 일부 또는 전부가 종래 기술의 일부를 형성하거나 또는 본 출원의 우선일 전에 어디에든 존재했기 때문에 본원과 관련된 분야의 통상적인 일반 지식이라고 용인하는 것은 아니다. 본원의 특징 및 장점은 이하 구체예의 상세한 설명을 통해 더욱 분명해진다.

5. 표 및 도면의 간단한 설명
표 1은 베바시주맙의 중쇄 CDR 중 아미노산의 넘버링을 나타낸 것이다. CDR 1-3은 각각 서열번호 3-5로서 개시하였다.
표 2는 베바시주맙의 경쇄 CDR 중 아미노산의 넘버링을 나타낸 것이다. CDR 1-3은 각각 서열번호 6-8로서 개시하였다.
표 3은 면역원성을 테스트한 베바시주맙 VL 펩티드를 나타낸 것이다.
표 4는 면역원성을 테스트한 베바시주맙 VH 펩티드를 나타낸 것이다.
표 5는 베바시주맙 내 동정된 CD4⁺ T 세포 에피토프 영역을 나타낸 것이다. CDR 영역은 밑줄표시하였다.
표 6은 베바시주맙의 면역원성을 감소시키기 위한 CDR-H2 및 CDR-H3의 후보 돌연변이를 나타낸 것이다. 표 6에서의 아미노산의 넘버링은 베바시주맙 중쇄 내 Kabat 넘버링에 해당된다.
표 7은 표면 플라스몬 공명법을 통해 분석시 K_D가 개선되는 결과가 얻어진 베바시주맙 내 중쇄 CDR 아미노산 치환을 나타낸 것이다. Δk_on은 k_on(돌연변이체/WT)에서의 배수(fold) 개선도를 의미한다. Δk_off는 k_off(WT/돌연변이체)의 배수 개선도를 의미한다. ΔK_D는 야생형 대비 돌연변이체에서 K_D 개선도를 의미한다. 표 7에서 아미노산의 넘버링은 베바시주맙 중쇄에서의 Kabat 넘버링에 해당된다.
표 8은 예비 결합 실험이 VEGF에 대한 친화도 증가(데이타 도시하지 않음)를 의미하는 베바시주맙 중쇄 CDR 내 돌연변이를 나타낸 것이다. 표 8에서 아미노산의 넘버링은 베바시주맙 중쇄에서의 Kabat 넘버링에 해당된다.
표 9는 예비 실험이 VEGF에 대한 친화도 증가(떼이타 도시하지 않음)를 의미하는 베바시주맙 중쇄 CDR 내 돌연변이를 나타낸 것이다. 표 9에서 아미노산의 넘버링은 베바시주맙 중쇄에서의 Kabat 넘버링에 해당된다.
표 10은 결합에 영향을 주지않고, 본원의 항체에 도입될 수 있는 베바시주맙 중쇄 CDR 내 돌연변이를 나타낸 것이다. 표 10에서 아미노산의 넘버링은 베바시주맙 중쇄에서의 Kabat 넘버링에 해당된다.
표 11은 결함에 영향을 주지않고, 본원의 항체에 도입될 수 있는 베바시주맙 경쇄 CDR 내 돌연변이를 나타낸 것이다. 표 11에서 아미노산의 넘버링은 베바시주맙 경쇄에서의 Kabat 넘버링에 해당된다.
표 12-1 내지 12-9는 본원의 항체에 도입될 수 있는 베바시주맙 중쇄 CDR 내 기지 돌연변이를 나타낸 것이다. 표 12-1 내지 12-9의 각 열은 상이한 기지 변이체를 포함한다. 각 변이체에 대해, 기지 CDR 서열은 음영처리하였다. 표 12-1 내지 12-9에서 확인되는 각 변이체에 대한 서열 식별자는 각각 표 20-1 내지 20-9에 기재하였다. CDR-H1 컬럼은 CDR-H1의 부분 서열을 제공한다. CDR-H1의 마지막 아스파라긴은 도시하지 않았다. 이러한 부분 서열은 서열번호 411에 해당된다. CDR-H1 내 기지 돌연변이는 이러한 부분 서열에 대해 나타낸 것이지만, 돌연변이가 전체 길이 CDR에 대해 존재할 수 있음을 주의한다.
표 13은 본원의 항체에 도입될 수 있는 베바시주맙 경쇄 CDR 내 기지 돌열변이를 나타낸 것이다. 표 13의 각 열은 상이한 기지 변이체를 포함한다. 각 변이체에 대해 기지 CDR 서열은 음영표시하였다. 표 13에서 확인되는 각 변이체에 대한 서열 식별자는 표 20-10에 기재하였다.
표 14는 면역원성을 테스트한 베바시주맙 CDR2 VH 펩티드를 나타낸 것으로서, 서열번호 62로부터 변하지 않은 잔기는 블랭크 박스로 표시하였다. CD4+ T 세포 분석 결과를 또한 제공하였다.
표 15는 면역원성을 테스트한 베바시주맙 CDR3 VH 펩티드를 나타낸 것으로서, 서열번호 74로부터 변하지 않은 잔기는 블랭크 박스로 표시하였다. CD4+ T 세포 분석 결과를 또한 제공하였다.
표 16은 면역원성을 테스트한 베바시주맙 CDR2 VL 펩티드를 나타낸 것으로서, 서열번호 25로부터 변하지 않은 잔기는 블랭크 박스로 표시하였다. CD4+ T 세포 분석 결과를 또한 제공하였다.
표 17은 베바시주맙 내 3개 CD4+ T 세포 에피토프에 대해 선별된 에피토프 변형을 나타낸 것이다.
표 18은 단일 가변 영역 돌연변이체 및 그와 연관된 평균 형광발광 강도(MFI) 스코어를 나타낸 것이다.
표 19는 조합된 가변 영역 돌연변이체 및 그와 연관된 EC₅₀를 나타낸 것이다.
표 20-1 내지 20-10은 각각 기지의, 표 12-1 내지 12-9 및 표 13에 역러된 베바시주맙 변이체의 CDR에 상응하는 서열번호를 나타낸 것이다. N/A는 미지의 CDR 서열을 표시한 것이다.
도 1A-1D. 도 1A는 각각 베바시주맙 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열, 서열번호 1 및 서열번호 2를 나타낸 것으로, CDR 영역은 굵게, 밑줄표시하였다. 도 1B는 베바시주맙의 CDR 서열 및 상응하는 서열 식별자를 나타낸 것이다. 도 1C는 각각 라니비주맙 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열, 서열번호 9 및 서열번호 10을 나타낸 것으로서, CDR 영역은 굵게, 밑줄표시하였다. 도 1D는 라니비주맙의 CDR 서열 및 상응하는 서열 식별자를 나타낸 것이다.
도 2A-2B는 베바시주맙 VL 펩티드 반응을 나타낸 도면이다. 도 2A는 자극 지수가 2.95 이상인 각 VL 펩티드에 대한 도너(donor) 반응율을 나타낸 도면이다. N = 99 도너. 도 2B는 표준 오차를 더하거나 또는 뺀 각 펩티드에 대한 99 도너 모두에 대한 평균 자극 지수를 나타낸 도면이다.
도 3A-3B는 베바시주맙 VH 펩티드 반응을 나타낸 도면이다. 도 3A는 자극 지수가 2.95가 넘는 각 VH 펩티드에 대한 도너의 반응율을 나타낸 도면이다. N = 99 도너. 도 3B는 표준 오차를 더하거나 또는 뺀 각 펩티드에 대한 99 도너 모두에 대한 평균 자극 지수를 나타낸 도면이다.
도 4A-4C는 돌연변이체 베바시주맙 에피토프 펩티드에 대한 CD4+ T 세포 반응을 나타낸 도면이다. 미변형된 모에피토프 서열에 대한 평균 반응은 오픈 마크로 나타내었다. 큰 원은 표 17에서 언급된 선별된 변화를 나타낸다. 도 4A는 VH CDR2 펩티드에 대한 도면이다; 도 4B는 VH CDR3 펩티드에 대한 도면이다; 도 4C는 VL CDR2 펩티드에 대한 도면이다.

6.1 항- VEGF 항체

본원은 항-VEGF 항체를 제공한다. 달리 언급하지 않으면, "항체"(Ab)는 특정 항원에 특이적으로 결합하거나, 또는 그와 면역학적으로 반응하는 면역글로불린 분자를 의미하고, 유전자 조작된, 폴리클론, 단일클론, 및 아니면 이에 제한되는 것은 아니고, 키메라 항체, 인간화 항체, 이종접합 항체(예를 들어, 이중특이적 항체, 디아바디, 트리아바디, 및 테트라바디 등)를 포함하는, 항체의 개질형, 및 예를 들어 Fab', F(ab')₂, Fab, Fv, rIgG, 및 scFv 단편을 포함한, 항원의 항원 결합 단편을 포함한다. 또한, 달리 언급하지 않으면, "단일클론 항체"(mAb)는 온전한 분자와, 단백질에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 단편(예컨대, Fab 및 F(ab')₂ 단편)를 포함함을 의미한다. Fab 및 F(ab')₂ 단편은 온전한 항체의 Fc 단편이 없고, 동물의 순환계에서 보다 신속하게 제거되며, 온전한 항체보다 비특이적 조직 결합이 덜 할 수 있다(Wahl et al., 1983, J. Nucl. Med. 24:316).

용어 "scFv"는 전형적인 항체에서 유래하는 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인이 결합되어 하나의 쇄를 형성된 단쇄 Fv 항체를 의미한다.

"VH"는 Fv, scFv 또는 Fab의 중쇄를 포함하여, 항체의 면역글로불린 중쇄의 가변 영역을 의미한다. "VL"은 Fv, scFv, dsFv 또는 Fab의 경쇄를 포함하여, 면역글로불린 경쇄의 가변 영역을 의미한다. 항체(Ab) 및 면역글로불린(Ig)은 동일한 구조적 특징을 갖는 당단백질이다. 항체는 특이적 표적에 대한 결합 특이성을 나타내지만, 면역글로불린은 표적 특이성이 결여된 항체와 다른 항체 유사 분자를 포함한다. 일반적으로 천연 항체 및 면역글로불린은 2개의 동일한 경(L)쇄 및 2개의 동일한 중(H)쇄로 구성된, 약 150,000 달톤의 이종사량체 당단백질이다. 각 중쇄는 아미노 말단에 가변 도메인(VH)과 후속하여 다수의 불변 도메인을 갖는다. 각각의 경쇄는 아미노 말단에 가변 도메인(VL) 및 카르복시 말단에 불변 도메인을 갖는다.

본원의 항-VEGF 항체는 인간 VEGF에 결합하여 세포에서 VEGF 수용체 활성을 억제한다.

본원의 항-VEGF 항체는 항체 베바시주맙(Avastin？이라고도 함) 및/또는 라니비주맙(Lucentis？)의 CDR과 서열면에서 관련있는 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다.

CDR은 또한 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 내 둘 모두에서의 초가변 영역으로도 알려져 있다. 가변 도메인 중 보다 높게 보존된 부분을 프레임워크(FR)라고 한다. 당분야에서 공지되어 있는 바와 같이, 항체의 초가변 영역을 그리는 아미노산 위치/경계는 당분야에 공지된 상황 및 다양한 정의에 따라, 다양할 수 있다. 가변 도메인 내 일부 위치는 하이브리드 초가변 위치로 여겨질 수 있는데 이 경우 이들 위치는 한 세트의 기준 하에서는 초가변 영역 내에 속할 수 있지만 다른 기준 세트 하에서는 초가변 영역 외부일 수 있다. 이들 위치중 1 이상은 또한 연장된 초가변 영역에 존재할 수 있다. 본원은 이들 하이브리드 초가변 위치에 변형을 포함하는 항체를 제공한다. 천연 중쇄 및 경쇄 각각의 가변 도메인은 대개 β-시트 구조를 연결하고, 일부 경우 그의 일부를 형성하는, 루프를 형성하는, 3개의 CDR에 의해 연결된, β-시트 구조를 채택함으로써, 4개 FR 영역을 포함한다. 각 쇄의 CDR은 FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4의 순서로 FR 영역에 의해 함께 밀접하게 가까이 존재하고 다른 쇄의 CDR과 함께 항체의 표적 결합 부위를 형성하는데 기여한다(예를 들어, Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institute of Health, Bethesda, Md. 1987)). 본원에서 사용되는, 면역글로불린 아미노산 잔기의 넘버링은 달리 언급하지 않으면 [Kabat et al.]의 면역글로불린 아미노산 잔기 넘버링에 따라 이루어진다.

베바시주맙의 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 서열은 각각 서열번호 1 및 서열번호 2에 나타내었다. 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 서열은 또한 도 1A에 도시하였다. 베바시주맙의 CDR 서열, 및 그 상응하는 식별자는 도 1B에 나타내었다. 서열번호 1 또는 서열번호 2를 코딩하는 임의의 뉴클레오티드 서열은 본원의 조성물 및 방법에서 사용될 수 있다.

라니비주맙의 중쇄 및 경쇄의 서열은 각각 서열번호 9 및 서열번호 10에 나타내었다. 중쇄 및 경쇄의 서열은 또한 도 1C에 도시하였다. 라니비주맙의 CDR의 서열, 및 그 상응하는 식별자는 도 1D에 나타내었다. 서열번호 9 또는 서열번호 10을 코딩하는 임의의 뉴클레오티드 서열은 본원의 조성물 및 방법에서 사용될 수 있다.

본원은 또한 베바시주맙 및 라니비주맙의 CDR 서열과 관련되는 CDR 서열을 포함하는 항-VEGF 항체 단편을 제공한다. 용어 "항체 단편"은 전체 길이 항체의 일부분, 대체로 표적 결합 또는 가변 영역을 의미한다. 항체 단편의 예에는 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편을 포함한다. "Fv" 단편은 완전한 표적 인식 및 결합 부위를 함유하는 최소 항체 단편이다. 이 영역은 치밀한, 비공유 회합된 1개 중쇄 및 1개 경쇄의 이량체(VH-VL 이량체)로 이루어진다. 이 구조에서 각 가변 도메인의 3개 CDR은 VH-VL 이량체의 표면 상에 표적 결합 부위가 한정되도록 상호작용한다. 흔히, 6개 CDR이 항체에 표적 결합 특이성을 부여한다. 그러나, 일부 예에서, 단일 가변 도메인(또는 표적에 특이적인 오직 3개 CDR을 포함하는 Fv의 절반)임에도 표적을 인식하고 결합하는 능력을 가질 수 있다. "단쇄 Fv" 또는 "scFv" 단편은 단일 폴리펩티드 쇄 내에 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함한다. 일반적으로, Fv 폴리펩티드는 표적 결합을 위해 scFv가 바람직한 구조를 형성할 수 있게 VH와 VL 도메인 사이에 폴리펩티드 링커를 더 포함한다. "단일 도메인 항체"는 표적에 대한 충분한 친화도를 나타내는 단일 VH 또는 VL 도메인으로 구성된다. 특정 구체예에서, 단일 도메인 항체는 카멜리드 항체이다(예를 들어, Riechmann, 1999, Journal of Immunological Methods 231:25-38).

Fab 단편은 경쇄의 불변 도메인 및 중쇄의 제1 불변 도메인(CH₁)을 포함한다. Fab' 단편은 항체 힌지 영역으로부터 1 이상의 시스테인을 포함하여 중쇄 CH_l 도메인의 카르복실 말단에 소수의 잔기가 부가되는 것에 의해 Fab 단편과는 다르다. F(ab') 단편은 F(ab')₂ 펩신 분해 산물의 힌지 시스테인에 이황화 결합을 절단하여 생성된다. 항체 단편의 부가적인 화학 커플링이 당분야의 숙련가에게 알려져 있다.

일정 구체예에서, 본원의 항-VEGF 항체는 단일클론 항체이다. 본원에서 사용되는 용어 "단일클론 항체"는 하이브리도마 방법으로 제조된 항체에만 한정되지 않는다. 용어 "단일클론 항체"는 임의의 진핵생물, 원핵생물 또는 파지 클론을 포함하여, 단일 클론에서 유도되는 항체를 의미하고 그것이 생성되는 방법을 의미하는 것이 아니다. 본원에서 유용한 단일클론 항체는 하이브리도마, 재조합체, 및 파지 디스플레이법 또는 이의 조합의 이용을 포함하여 당분야에 공지된 다양한 방법을 이용해 제조될 수 있다. 본원의 항-VEGF 항체는 키메라, 영장류화, 인간화 또는 인간 항체를 포함한다.

본원의 항-VEGF 항체는 키메라 항체일 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "키메라"는 비인간 면역글로불린, 예컨대 래트 또는 마우스 항체로부터 유래한 가변 서열과, 대체로 인간 면역글로불린 주형에서 선택된 인간 면역글로불린 불변 영역을 갖는 항체를 의미한다. 키메라 항체의 제조 방법은 당분야에서 공지이고, 예를 들어 다음의 문헌들을 참조하고, 이들을 전체로 참조하여 본원에 포함시킨다: Morrison, 1985, Science 229(4719):1202-7; Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214-221; Gillies et al., 1985, J. Immunol. Methods 125:191-202; 미국 특허 제5,807,715호; 제4,816,567호; 및 제4,816,397호.

본원의 항-VEGF 항체는 인간화된 것일 수 있다. 비인간(예를 들어, 쥐) 항체의 "인간화" 형태는 비인간 면역글로불린에서 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 면역글로불린, 면역글로불린 쇄 또는 이의 단편(예컨대 Fv, Fab, Fab', F(ab')₂ 또는 항체의 다른 표적 결합 서브도메인)이다. 대체로, 인간화 항체는 모든 1 이상, 대체로 2개의, 가변 도메인을 실질적으로 포함하게 되고, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 영역은 비인간 면역글로불린의 CDR 영역에 해당하며 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역은 인간 면역글로불린 서열의 FR 영역이다. 인간화 항체는 또한 대체로 인간 면역글로불린 공통 서열인, 면역글로불린 불변 영역(Fc)의 일부를 적어도 포함할 수 있다. 항체 인간화 방법은 당분야에 공지이고, 예를 들어 다음의 문헌들을 참조하며, 이들 모두를 전체로 참조하여 본원에 포함시킨다: Riechmann et al., 1988, Nature 332:323-7; 미국 특허 제5,530,101호; 제5,585,089호; 제5,693,761호; 제5,693,762호; 및 제6,180,370호(Queen et al.); EP239400; PCT 공개 특허출원 WO 91/09967; 미국 특허 제5,225,539호; EP592106; EP519596; Padlan, 1991, Mol. Immunol., 28:489-498; Studnicka et al., 1994, Prot. Eng. 7:805-814; Roguska et al., 1994, Proc. Natl. Acad. Sci. 91:969-973; 및 미국 특허 제5,565,332호.

본원의 항-VEGF 항체는 인간 항체일 수 있다. 완전하게 "인간" 항-VEGF 항체는 인간 환자의 치료적 처치에 바람직할 수 있다. 본원에서 사용되는 "인간 항체"는 인간 면역글로불린의 아미노산 서열을 갖는 항체를 포함하고, 인간 면역글로불린 라이브러리 또는 1 이상의 인간 면역글로불린으로 형질전환되고 내생성 면역글로불린은 발현하지 않는 동물에서 단리된 항체를 포함한다. 인간 항체는 인간 면역글로불린 서열에서 유래된 항체 라이브러리를 이용하는 파지 디스플레이 방법을 포함하는 당분야에 공지된 다양한 방법으로 제조될 수 있다. 예를 들어, 하기 다음의 문헌들을 참조하며, 이들 각각을 전체로 참조하여 본원에 포함시킨다: 미국 특허 제4,444,887호 및 제4,716,111호; 및 PCT 공개특허출원 WO 98/46645; WO 98/50433; WO 98/24893; WO 98/16654; WO 96/34096; WO 96/33735; 및 WO 91/10741. 인간 항체는 또한 기능성의 내생 면역글로불린은 발현할 수 없지만 인간 면역글로불린은 발현할 수 있는 형질전환 마우스를 이용해 생성될 수 있다. 예를 들어, 다음의 문헌들을 참조하며, 전체로 본원에 이들을 포함시킨다: PCT 공개특허출원 WO 98/24893; WO 92/01047; 　WO　96/34096; WO 96/33735; 미국 특허 출원 제5,413,923호; 제5,625,126호; 제5,633,425호; 제5,569,825호; 제5,661,016호; 제5,545,806호; 제5,814,318호; 제5,885,793호; 제5,916,771호; 및 제5,939,598호. 또한, 예컨대 Medarex(Princeton, NJ), Astellas Pharma(Deerfield, IL), Amgen(Thousand Oaks, CA) 및 Regeneron(Tarrytown, NY) 등의 회사들이 상기 기술된 것과 유사한 기술을 이용하여 선택 항원에 대한 인간 항체를 제공하고 있다. 완전하게 선택된 에피토프를 인식하는 인간 항체는 "유도 선별법(guided selection)"이라고 하는 기술을 이용해 생성될 수 있다. 이러한 접근법에서 선별된 비인간 단일클론 항체, 예를 들어 마우스 항체가 동일 에피토프를 인식하는 완전한 인간 항체의 선별을 유도하는데 사용된다(Jespers et al., 1988, Biotechnology 12:899-903).

본원의 항-VEGF 항체는 영장류화될 수 있다. 용어 "영장류화 항체"는 원숭이 가변 영역 및 인간 불변 영역을 포함하는 항체를 의미한다. 영장류화 항체의 제조 방법은 당분야에 공지이다. 예를 들어, 미국 특허 제5,658,570호; 제5,681,722호; 및 제5,693,780호를 참조할 수 있으며, 이들을 전체로 참조하여 본원에 포함시킨다.

본원의 항-VEGF 항체는 이중특이적 항체일 수 있다. 이중특이적 항체는 2 이상의 상이한 항원에 대한 결합 특이성을 갖는 단일클론, 보통은 인간 또는 인간화된, 항체이다. 본원에서, 결합 특이성 중 하나는 VEGF에 대한 것이고, 다른 하나는 임의의 다른 항원, 예를 들어 세포-표면 단백질, 수용체, 수용체 서브유닛, 조직-특이적 항원, 바이러스 유래 단백질, 바이러스 코딩된 엔벨로프 단백질, 박테리아 유도된 단백질, 또는 박테리아 표면 단백질 등에 대한 것일 수 있다. 특정 구체예에서, 본원의 항체는 VEGF 및 CD3 둘 모두에 대한 결합 특이성을 갖는 이중특이적 항체이다.

본원의 항-VEGF 항체는 유도체화 항체를 포함한다. 제한없이, 예를 들어, 유도체화 항체는 글리코실화, 아세틸화, PEG화, 인산화, 아미드화, 기지의 보호/차단 기에 의한 유도체화, 단백질가수분해 절단, 세포 리간드 또는 다른 단백질에 대한 결합(항체 접합체에 대한 설명 섹션 6.6 참조)에 의해 개질된다. 임의의 수많은 화학적 개질은 이에 제한되는 것은 아니고, 특이적 화학 절단, 아세틸화, 포밀화, 투니카마이신의 물질대사 합성 등을 포함하는 기지 방법으로 수행될 수 있다. 부가적으로, 유도체는 예를 들어, ambrx 방법을 이용하여, 1 이상의 비천연 아미노산을 함유할 수 있다(예를 들어, Wolfson, 2006, Chem. Biol. 13(10):1011-2).

본원의 또 다른 구체예에서, 항-VEGF 항체 또는 이의 단편은 그 서열이 상응하는 야생형 서열에 대해 1 이상의 불변 영역-매개 생물학적 이펙터 기능을 변경시키기 위해 개질된 항체 또는 항체 단편일 수 있다.

예를 들어, 일부 구체예에서, 본원의 항-VEGF 항체는 미개질 항체에 대해 1 이상의 불변 영역-매개 생물학적 이펙터 기능이 감소되도록, 예를 들어, Fc 수용체(FcγR)에 대한 결합이 감소되도록 개질될 수 있다. FcγR 결합은 FcγR 상호작용에 필수적인 특정 영역에서 항체의 면역글로불린 불변 영역 절편을 돌연변이시켜 감소시킬 수 있다(예를 들어, Canfild 및 Morrison, 1991, J. Exp. Med. 173:1483-1491; 및 Lund et al., 1991, J. Immunol. 147:2657-2662 참조). 항체의 FcγR 결합 능력 감소는 또한 FcγR 상호작용에 의존적인 다른 이펙터 기능, 예컨대 옵소닌화, 식세포작용 및 항원-의존적 세포 세포독성("ADCC")을 감소시킬 수 있다.

다른 구체예에서, 본원의 항-VEGF 항체는 미개질 항체에 대해 1 이상의 불변 영역-매개 생물학적 이펙터 기능이 획득되거나 또는 개선되도록, 예를 들어, FcγR 상호작용을 향상시키도록, 개질될 수 있다(예를 들어, US 2006/0134709 참조). 예를 들어, 본원의 항-VEGF 항체는 상응하는 야생형 불변 영역보다 높은 친화도로 FcγRIIA, FcγRIIB 및/또는 FcγRIIIA에 결합하는 불변 영역을 가질 수 있다.

따라서, 본원의 항체는 옵소닌화, 식세포작용 또는 ADCC의 감소 또는 증가를 일으키는 생물학적 활성이 변경될 수 있다. 이러한 변경은 당분야에 공지이다. 예를 들어, ADCC 활성을 감소시키는 항체의 개질은 미국 특허 제5,834,597호에 기술되어 있다. 예시적인 ADCC 저하 변이체는 잔기 236이 결실되고 잔기 234, 235 및 237(EU 넘버링 이용)이 알라닌으로 치환된 "돌연변이체 3"(미국 특허 제5,834,597호의 도 4 참조)에 상응한다.

일부 구체예에서, 본원의 항-VEGF 항체는 푸코스 수준이 낮거나 또는 결여되어 있다. 푸코스가 결여된 항체는, 특히 항체의 저용량에서, ADCC 활성 강화와 관련있었다. 예를 들어, 다음의 문헌들을 참조한다: Shields et al., 2002, J. Biol. Chem. 277:26733-26740; Shinkawa et al., 2003, J. Biol. Chem. 278:3466-73. 푸코스 결여 항체의 제조 방법은 래트 골수종 YB2/0 세포(ATCC CRL 1662)에서의 성장을 포함한다. YB2/0 세포는 폴리펩티드의 푸코실화에 필수적인 효소인, α-1,6-푸코실트랜스퍼라제를 코딩하는, FUT8 mRNA를 낮은 수준으로 발현한다.

또 다른 측면에서, 항-VEGF 항체 또는 이의 단편은 예를 들어, FcRn 상호작용에 관여하는 특정 영역에서 면역글로불린 불변 영역 절편을 돌연변이시킴으로써, 태아 Fc 수용체, FcRn에 대한 그들의 결합 친화도가 증가 또는 감소되도록 개질된 항체 또는 항체 단편일 수 있다(예를 들어, WO 2005/123780 참조). 특정 구체예에서, IgG 클래스의 항-VEGF 항체는 중쇄 불변 영역의 아미노산 잔기 250, 314 및 428 중 1 이상이 단독으로, 또는 이의 임의 조합으로, 예컨대 위치 250 및 428에, 또는 위치 250 및 314에, 또는 위치 314 및 428에, 또는 위치 250, 314 및 428에서, 위치 250 및 428과 특정 조합으로 치환되게 돌연변이시킨다. 위치 250의 경우, 아미노산 잔기 치환은 트레오닌 이외에, 이에 제한되는 것은 아니고, 알라닌, 시스테인, 아스파르트산, 글루탐산, 페닐알라닌, 글리신, 히스티딘, 이소루신, 리신, 루신, 메티오닌, 아스파라긴, 프롤린, 글루타민, 아르기닌, 세린, 발린, 트립토판 또는 티로신을 포함하는, 임의의 아미노산 잔기일 수 있다. 위치 314의 경우, 아미노산 잔기 치환은 루신 이외에, 이에 제한되는 것은 아니고, 알라닌, 시스테인, 아스파르트산, 글루탐산, 페닐알라닌, 글리신, 히스티딘, 이소루신, 리신, 메티오닌, 아스파라긴, 프롤린, 글루타민, 아르기닌, 세린, 트레오닌, 발린, 트립토판 또는 티로신을 포함하는, 임의의 아미노산 잔기일 수 있다. 위치 428의 경우, 아미노산 잔기 치환은 메티오닌 이외에, 이에 제한되는 것은 아니고, 알라닌, 시스테인, 아스파르트산, 글루탐산, 페닐알라닌, 글리신, 히스티딘, 이소루신, 리신, 루신, 아스파라긴, 프롤린, 글루타민, 아르기닌, 세린, 트레오닌, 발린, 트립토판 또는 티로신을 포함하는, 임의의 아미노산 잔기일 수 있다. 적절한 아미노산 치환의 특정 조합은 미국 특허 제7,217,797호의 표 1에서 확인할 수 있으며, 이러한 표는 전체적으로 참조하여 본원에 포함된다. 이러한 돌연변이는 FcRn에 대한 항체의 결합성을 증가시켜서, 항체를 분해로부터 보호하고 그 반감기를 증가시킨다.

또 다른 측면에서, 항-VEGF 항체는 예를 들어, 다음의 문헌에 기술된 바와 같이, 그 초가변 영역 중 1 이상에 삽입되는 1 이상의 아미노산을 갖는다: Jung and Pluckthun, 1997, Protein Engineering 10(9): 959-966; Yazaki et al., 2004, Protein Eng. Des Sel. 17(5):481-9. Epub 2004 Aug 17; 및 미국 특허출원 제2007/0280931호.

다양한 구체예에서, 항-VEGF 항체 또는 그의 단편은 이종성 숙주에서의 발현 증가를 위해 개질된 항체 또는 항체 단편일 수 있다. 일정 구체예에서, 항-VEGF 항체 또는 그의 단편은 이종성 숙주 세포로부터의 분비 및/또는 발현을 증가시키기 위해 개질된 항체 또는 항체 단편일 수 있다. 일부 구체예에서, 항-VEGF 항체 또는 그의 단편은 박테리아, 예컨대 이.콜라이(E.coli)에서의 발현을 증가시키기 위해 개질된다. 다른 구체예에서, 항-VEGF 항체 또는 그의 단편은 효모에서의 발현을 증가시키기 위해 개질된다(Kieke et al., 1999, Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 96:5651-5656). 또 다른 구체예에서, 항-VEGF 항체 또는 그의 단편은 곤충 세포에서의 발현을 증가시키기 위해 개질된다. 추가 구체예에서, 항-VEGF 항체 또는 그의 단편은 포유동물 세포, 예컨대 CHO 세포에서의 발현을 증가시키기 위해 개질된다.

일정 구체예에서, 항-VEGF 항체 또는 그의 단편은 생성 동안 항체의 안정성을 증가시키기 위해 개질된 항체 또는 항체 단편일 수 있다. 일부 구체예에서, 항체 또는 그의 단편은 비효소적 탈아미드화에 민감한 1 이상의 아미노산 예컨대 아스파라긴 또는 글루타민을 탈아미드화를 겪지 않는 아미노산으로 치환시키기 위해 개질시킬 수 있다(Huang et al., 2005, Anal. Chem. 77:1432-1439). 다른 구체예에서, 항체 또는 그의 단편은 산화에 민감한 1 이상의 아미노산, 예컨대 메티오닌, 시스테인 또는 트립토판을, 산화를 쉽게 겪지 않는 아미노산으로 치환시키기 위해 개질시킬 수 있다. 또 다른 구체예에서, 항체 또는 단편은 고리화에 민감한 1 이상의 아미노산, 예컨대 아스파라긴 또는 글루탐산을, 고리화를 쉽게 겪지않는 아미노산으로 치환시키기 위해 개질시킬 수 있다.

6.2 핵산 및 발현 시스템

본원은 본원의 항-VEGF 항체를 코딩하는 핵산 분자 및 숙주 세포를 포함한다.

본원의 항-VEGF 항체는 숙주 세포에서 면역글로불린 경쇄 및 중쇄 유전자를 재조합 발현시켜 제조할 수 있다. 항체를 재조합적으로 발현시키기 위해, 숙주 세포는 항체의 면역글로불린 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 DNA 단편을 보유한 1 이상의 재조합 발현 벡터로 형질감염되어 경쇄와 중쇄가 숙주 세포에서 발현되고, 경우에 따라 숙주 세포를 배양하는 배지로 분비되어, 그 배지로부터 항체를 회수할 수 있다. 예컨대 하기의 문헌들에 기술된 바와 같이, 표준 재조합 DNA 방법론을 사용해 항체 중쇄 및 경쇄 유전자를 얻고, 재조합 발현 벡터에 이들 유전자를 도입시켜, 이러한 벡터를 숙주 세포에 도입시킬 수 있다: Molecular Cloning; A Laboratory Manual, Second Edition (Sambrook, Fritsch and Maniatis (eds), Cold Spring Harbor, N. Y., 1989), Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel, F.M. et al., eds., Greene Publishing Associates, 1989) 및 미국 특허 제4,816,397호.

일 구체예에서, 항-VEGF 항체는 베바시주맙 또는 라니비주맙과 유사하지만, 1 이상의 CDR에 변화가 존재한다. 다른 구체예에서, 항-VEGF 항체는 베바시주맙 또는 라니비주맙과 유사하지만, 1 이상의 프레임워크 영역에 변화가 존재한다. 또 다른 구체예에서, 항-VEGF 항체는 베바시주맙 또는 라니비주맙과 유사하지만, 1 이상의 CDR 및 1 이상의 프레임워크 영역에 변화가 존재한다. 이러한 항체를 본원에서는 종합적으로 "베바시주맙-관련" 또는 "라니비주맙-관련" 서열이라고 하고, 종종 간단하게 본원의 항-VEGF 항체라고 한다. 항-VEGF 항체를 코딩하는 핵산을 생성하기 위해, 우선 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 코딩하는 DNA 단편을 얻는다. 이들 DNA는 예를 들어, 중합효소 연쇄 반응(PCR)을 이용하여, 경쇄 및 중쇄 가변 서열을 코딩하는 배선 DNA 또는 cDNA를 증폭 및 변형시켜 얻을 수 있다. 인간 중쇄 및 경쇄 가변 영역 유전자의 배선 DNA 서열은 당분야에서 공지이다(예를 들어, 이하 문헌 참조: "VBASE" human germline sequence database; see also Kabat, E. A. et al., 1991, sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; Tomlinson et al., 1992, J. Mol. Biol. 22T:116-198; and Cox et al., 1994, Eur. J. Immunol. 24:827-836; 이들 각 문헌의 내용을 참조하여 본원에 포함시킨다). 베바시주맙 또는 라니비주맙의 중쇄 또는 경쇄 가변 영역을 코딩하는 DNA 단편은 합성되어, 통상의 돌연변이유발법을 이용해 본원에 기술된 바와 같이 변이체를 생성시키기 위한 주형으로서 사용될 수 있다; 다르게, 변이체를 코딩하는 DNA 단편은 직접 합성될 수 있다.

항-VEGF VH 및 VL 절편을 코딩하는 DNA 단편이 얻어지면, 이들 DNA 단편은 예를 들어, 가변 영역 유전자를 전체 길이 항체 쇄 유전자, Fab 단편 유전자 또는 scFv 유전자로 전환시키기 위해, 표준 재조합 DNA 기술에 의해 더욱 조작될 수 있다. 이러한 조작법에서, VL- 또는 VH-코딩 DNA 단편은 다른 단백질, 예컨대 항체 불변 영역 또는 탄성 링커를 코딩하는 다른 DNA 단편에 작동적으로 연결된다. 본원에서 사용되는, 용어 "작동적으로 연결"은 2개의 DNA 단편이 연결되어 이 2개의 DNA 단편에 의해 코딩되는 아미노산 서열이 인프레임으로 남게되는 것을 의미하려는 것이다.

VH 영역을 코딩하는 단리된 DNA는 중쇄 불변 영역(CH_l, CH₂, CH₃ 및경우에 따라 CH₄)을 코딩하는 다른 DNA 분자에 VH-코딩 DNA를 작동적으로 연결시킴으로써 전체 길이 중쇄 유전자로 전환시킬 수 있다. 인간 중쇄 불변 영역 유전자의 서열은 당분야에 공지되어 있고(예를 들어, 이하 문헌 참조: Kabat, E.A. et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242), 이들 영역을 포함하는 DNA 단편은 표준 PCR 증폭법에 의해 얻을 수 있다. 중쇄 불변 영역은 IgG₁, IgG₂, IgG₃, IgG₄, IgA, IgE, IgM 또는 IgD 불변 영역일 수 있지만, 일정 구체예에서는, IgG₁ 또는 IgG₄ 불변 영역이다. Fab 단편 중쇄 유전자의 경우, VH-코딩 DNA는 오직 중쇄 CH₁ 불변 영역만을 코딩하는 다른 DNA 분자에 작동적으로 연결될 수 있다.

VL 영역을 코딩하는 단리된 DNA는 경쇄 불변 영역, CL을 코딩하는 다른 DNA 분자에 VL-코딩 DNA를 작동적으로 연결시킴으로써 전체 길이 경쇄 유전자(또한 Fab 경쇄 유전자)로 전환시킬 수 있다. 인간 경쇄 불변 영역 유전자의 서열은 당분야에 공지되어 있고(예를 들어, 이하 문헌 참조: Kabat, E. A. et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition (U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242)), 이들 영역을 포함하는 DNA 단편은 표준 PCR 증폭법으로 얻을 수 있다. 경쇄 불변 영역은 카파 또는 람다 불변 영역일 수 있지만, 일정 구체예에서는, 카파 불변 영역이다. scFv 유전자를 생성시키기 위해, VH- 및 VL-코딩 DNA 단편은 탄성 링커를 코딩하는 다른 단편, 예를 들어 아미노산 서열(Gly₄~Ser)₃을 코딩하는 다른 단편에 작동적으로 연결되어, VH 및 VL 서열은 탄성 링커에 의해 VL과 VH 영역이 연결된, 연속되는 단일쇄 단백질로서 발현될 수 있다(예를 들어, 이하 문헌 참조: Bird et al., 1988, Science 242:423-426; Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; McCafferty et al., 1990, Nature 348:552-554).

본원의 항-VEGF 항체를 발현하기 위해, 상기에 기술된 바와 같이 얻은, 부분 또는 전체길이 경새 및 중쇄를 코딩하는 DNA는 발현 벡터에 삽입되어 이 유전자가 전사 및 번역 제어 서열에 작동적으로 연결된다. 여기서, 용어 "작동적으로 연결"은 항체 유전자가 벡터에 결찰되어 벡터 내 전사 및 번역 제어 서열이 항체 유전자의 전사 및 번역을 조절하는 그 목적 기능을 실시한다는 것을 의미하고자 한다. 발현 벡터 및 발현 제어 서열은 사용되는 발현 숙주 세포와 상용성이도록 선택된다. 항체 경쇄 유전자 및 항체 중쇄 유전자는 개별 벡터로 삽입되거나, 보다 전형적으로는, 양 유전자가 동일 발현 벡터에 삽입된다.

항체 유전자는 표준 방법(예를 들어, 항체 유전자 단편 및 벡터 상의 상보적 제한효소 부위의 결찰, 또는 제한효소 부위가 존재하지 않으면 블런트 말단 결찰)에 의해 발현 벡터로 삽입된다. 본원의 항-VEGF 항체의 경쇄 또는 중쇄 서열을 삽입하기 전에, 발현 벡터는 이미 항체 불변 영역 서열을 보유할 수 있다. 예를 들어, 항-VEGF VH 및 VL 서열을 전체 길이 항체 유전자로 전환시키는 한 접근법은, VH 절편이 벡터 내 CH 절편(들)에 작동적으로 연결되고 VL 절편이 벡터내 CL 절편에 작동적으로 연결되도록, 각각 중쇄 불변 및 경쇄 불변 영역을 이미 코딩하는 발현 벡터에 그들을 삽입시키는 것이다. 부가적으로 또는 다르게, 재조합 발현 벡터는 숙주 세포로부터 항체 쇄의 분비를 촉진하는 신호 펩티드를 코딩할 수 있다. 항체 쇄 유전자는 신호 펩티드가 인프레임으로 항체 쇄 유전자의 아미노 말단에 연결되도록 벡터에 클로닝될 수 있다. 신호 펩티드는 면역글로불린 신호 펩티드 또는 이종성 신호 펩티드(즉, 비면역글로불린 단백질 유래의 신호 펩티드)일 수 있다.

항체 쇄 유전자이외에도, 본원의 재조합 발현 벡터는 숙주 세포 내 항체 쇄 유전자의 발현을 제어하는 조절 서열을 보유한다. 용어 "조절 서열"은 항체 쇄 유전자의 전사 또는 번역을 제어하는 프로모터, 인핸서 및 다른 발현 제어 성분(예를 들어, 폴리아데닐화 신호)을 포함시키고자 한다. 이러한 조절 서열은, 예를 들어 다음의 문헌에 기술되어 있다: Goeddel, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185(Academic Press, San Diego, CA, 1990). 조절 서열의 선별을 포함하여, 발현 벡터의 디자인은 형질전환되는 숙주 세포, 목적 단백질의 발현도 등의 인자들에 따라 좌우될 수 있음을 당분야의 숙련가는 이해할 것이다. 포유동물 숙주 세포 발현에 적절한 조절 서열은 포유동물 세포에서 고수준의 단백질 발현을 유도하는 바이러스 성분들, 예컨대 사이토메갈로바이러스(CMV)(CMV 프로모터/인핸서), 원숭이 바이러스 40(SV40)(예컨대 SV40 프로모터/인핸서), 아데노바이러스(예를 들어, 아데노바이러스 주요 후기 프로모터(AdMLP)) 및 폴리오마에서 유래하는 프로모터 및/또는 인핸서를 포함한다. 바이러스 조절 성분, 및 그 서열에 대한 추가 설명은, 예를 들어, 이하 문헌들을 참조한다: 예를 들어, 미국 특허 제5,168,062호(Stinski), 미국 특허 제4,510,245호(Bell et al.) 및 미국 특허 제4,968,615호(Schaffner et al.).

항체 쇄 유전자 및 조절 서열 이외에도, 본원의 재조합 발현 벡터는 숙주 세포에서 벡터의 복제(예를 들어, 복제 원점)를 조절하는 서열 및 선별 마커 유전자 등과 같은 추가 서열을 보유할 수 있다. 선별 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포의 선별을 용이하게 한다(예를 들어, 미국 특허 제4,399,216호, 제4,634,665호 및 제5,179,017호, 모두 Axel et al.). 예를 들어, 전형적으로, 선별 마커 유전자는 G418, 푸로마이신, 블라스티시딘, 하이그로마이신 또는 메토트렉세이트 등과 같은 약물에 대한 내성을 벡터가 도입된 숙주 세포에 부여한다. 적절한 선별 마커 유전자는 디히드로폴레이트 리덕타제(DHFR) 유전자(메토트렉세이트 선별/증폭을 이용하는 DHFR^- 숙주 세포에서 사용) 및 neo 유전자(G418 선별용)를 포함한다. 경쇄 및 중쇄 발현을 위해, 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 발현 벡터(들)은 표준 방법에 의해 숙주 세포를 형질감염시킨다. 다양한 형태의 용어 "형질감염"은 원핵생물 또는 진핵생물 숙주 세포로 외생성 DNA를 도입하는데 통상적으로 사용되는 다양한 기술들, 예를 들어, 전기천공, 리포펙션, 칼슘-인산 침전법, DEAE-덱스트란 형질감염 등을 포함시키려는 것이다.

원핵생물 또는 진핵생물 숙주 세포에서 본원의 항체를 발현시키는 것이 가능하다. 일정 구체예에서, 항체의 발현은 적합하게 폴딩되고 면역학적으로 활성인 항체의 최적 분비를 위해, 진핵생물 세포, 예를 들어 포유동물 숙주 세포에서 실시한다. 본원의 재조합 항체의 발현을 위한 예시적인 포유동물 숙주 세포는 중국 햄스터 난소(CHO) 세포(예를 들어 [Kaufman and Sharp, 1982, Mol. Biol. 159:601-621]에 기술된 바와 같은, DHFR 선별 마커를 이용하는, [Urlaub and Chasin, 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220]에 기술된 DHFR^- CHO 세포 포함), NS0 골수종 세포, COS 세포, 293 세포 및 SP2/0 세포를 포함한다. 항체 유전자를 코딩하는 재조합 발현 벡터를 포유동물 숙주 세포에 도입할 경우, 항체는 숙주 세포에서 항체가 발현되거나 또는 숙주 세포를 성장시키는 배양 배지로 항체가 분비되는데 충분한 시간 동안 숙주 세포를 배양하여 생성된다. 항체는 표준 단백질 정제법을 이용해 배양 배지로부터 회수될 수 있다. 숙주 세포는 또한 온전한 항체의 일부, 예컨대 Fab 단편 또는 scFv 분자를 생성시키는데 사용될 수 있다. 상기 기술된 방법에 대한 별법이 본원의 범주에 포함됨을 이해한다. 예를 들어, 본원의 항-VEGF 항체의 경쇄 또는 중쇄(둘 모두는 아님)를 코딩하는 DNA로 숙주 세포를 형질감염시키는 것이 바람직할 수 있다.

재조합 DNA 방법인 또한 VEGF에 결합하는데 필수적이지 않은 경쇄나 중쇄 또는 둘 모두를 코딩하는 DNA의 일부 또는 전부를 제거하는데 사용될 수 있다. 이러한 절단형 DNA 분자로부터 발현된 분자도 역시 본원의 항체에 포함된다.

또한, 표준 화학 가교법에 의하여 제2 항체에 본원의 항체를 가교시킴으로써 한 중쇄 및 한 경쇄는 본원의 항체이고 다른 경쇄 및 중쇄는 VEGF 이외의 항원에 특이적인 이중기능성 항체를 제조할 수 있다. 이중기능성 항체는 또한 이중기능성 항체를 코딩하도록 조작된 핵산을 발현하여 생성시킬 수 있다.

일정 구체예에서, 이중 특이적 항체, 즉 동일한 결합 부위를 이용하여 VEGF 및 미관련 항원에 결합하는 항체는 경쇄 및/또는 중쇄 CDR 내 아미노산 잔기를 돌연변이시킴으로써 제조할 수 있다. 다양한 구체예에서, 2개 항원, 에컨대 HER2 및 VEGF에 결합하는 이중특이적 항체는 항원 결합 부위의 주변부 내 아미노산 잔기를 돌연변이시킴으로써 생성시킬 수 있다(예를 들어, 이하 문헌 참조: Bostrom et al., 2009, Science 323:1610-1614). 이중 기능성 항체는 이중 특이적 항체를 코딩하도록 조작된 핵산을 발현시켜 생성시킬 수 있다.

본원의 항-VEGF 항체의 재조합 발현을 위해, 숙주 세포는 본원의 2가지 발현 벡터로 공동형질감염될 수 있는데, 제1 벡터는 중쇄 유래 폴리펩티드를 코딩하고 제2 벡터는 경쇄 유래 폴리펩티드를 코딩하는 것이다. 대체로, 각각 이들 2가지 벡터는 개별적인 선별 마커를 함유한다. 다르게, 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드 둘 모두를 코딩하는 단일 벡터를 사용할 수 있다.

항-VEGF 항체의 1 이상의 부분을 코딩하는 핵산이 생성되면, 추가의 변경 또는 돌연변이를 코딩 서열에 도입시켜, 예를 들어 상이한 CDR 서열을 갖는 항체, Fc 수용체에 대한 친화도가 감소된 항체, 또는 상이한 서브클래스의 항체를 코딩하는 핵산을 생성시킬 수 있다.

본원의 항-VEGF 항체는 또한 화학 합성법으로도 제조할 수 있다(예를 들어, 이하 문헌에 기술된 방법에 의함: Solid Phase Peptide Synthesis, 2^nd ed., 1984 The Pierce Chemical Co., Rockford, Ill.). 변이체 항체는 또한 무세포 플랫폼을 이용해 생성시킬 수 있다(예를 들어, Chu et al., Biochemia No. 2, 2001 (Roche Molecular Biologicals) 참조).

본원의 항-VEGF 항체가 재조합 발현에 의해 생성되면, 면역글로불린 분자의 정제를 위해 당분야 알려져 있는 임의의 방법, 예를 들어, 크로마토그래피(예컨대, 이온 교환법, 친화도, 특히 단백질 A 또는 단백질 G 선별 이후 VEGF에대한 친화도에 의한 크로마토그래피, 및 크기별 컬럼 크로마토그래피), 원심분리, 차등 가용화법, 또는 단백질 정제를 위한 임의의 다른 표준법에 의해 정제할 수 있다. 또한, 본원의 항-VEGF 항체 또는 이의 단편을 본원에 기술되거나 아니면 당분야에 공지된 이종성 폴리펩티드 서열에 융합시켜 정제를 용이하게 할 수 있다.

단리되면, 항-VEGF 항체는, 필요할 경우, 예를 들어, 고성능 액체 크로마토그래피(예를 들어, Fisher, Laboratory Techniques In Biochemistry and Molecular Biology(Work and Burdon, eds., Elsevier, 1980) 참조), 또는 Superdex^TM 75 컬럼(Pharmacia Biotech AB, Uppsala, Sweden) 상에서의 겔 침투 크로마토그래피에 의해 추가 정제될 수 있다.

6.3 항- VEGF 항체의 생물학적 활성

일정 구체예에서, 본원의 항-VEGF 항체는 일정한 생물학적 활성, 예컨대 VEGF에 대한 결합 또는 VEGF 활성 중화에 대해 베바시주맙 또는 라니비주맙과 경쟁하는 활성을 갖는다.

따라서, 일정 구체예에서, 본원의 항-VEGF 항체는 VEGF에 대한 결합에 대해 베바시주맙 또는 라니비주맙과 경쟁한다. VEGF와의 결합에 대해 경쟁하는 능력은 경쟁 분석법을 이용해 테스트할 수 있다. 경쟁 분석의 일례에서, VEGF는 고체 표면, 예를 들어, 마이크로웰 플레이트상에, VEGF 용액(예를 들어, PBS 중 1 ㎍/㎖의 농도로 밤새 4℃에서)과 플레이트를 접합시킴으로써, 부착된다. 플레이트를 세척(예를 들어, PBS 중 0.1% Tween 20) 및 차단(예를 들어, Superblock, Thermo Scientific, Rockford, IL)시킨다. ELISA 완충액(예를 들어, PBS 중 1% BSA 및 0.1% Tween 20) 중 연속 희석(예를 들어, 2.8 ㎍/㎖, 8.3 ㎍/㎖, 또는 25 ㎍/㎖의 농도)된 경쟁성 항-VEGF 항체("테스트" 항체) 또는 포화이하량의 비오틴화 베바시주맙(80 ng/㎖) 또는 등량의 비오틴화 라니비주맙 및 미표지된 베바시주맙(또는 경우에 따라서는 라니비주맙)("기준" 항체)의 혼합물을 웰에 부가하고 플레이트를 가볍게 진탕하면서 1시간 동안 항온반응시킨다. 플레이트를 세척하고, ELISA 완충액에 희석된 1 ㎍/㎖ HRP-접합된 스트렙타비딘을 각 웰에 부가하고 플레이트를 1시간 동안 항원반응시켰다. 플레이트를 세척하고 결합된 항체는 기질(예를 들어, TMB, Biofx Laboratories Inc., Owings Mills, MD)을 부가하여 검출하였다. 반응은 중지 완충액(예를 들어, Bio FX Stop Reagents, Biofx Laboratories Inc., Owings Mills, MD)을 부가하여 종료하고 흡광도는 마이크로플레이트 판독기(예를 들어, VERSAmax, Molecular Devices, Sunnyvale, CA)를 이용해 650 nm에서 측정하였다. 이러한 경쟁 분석시 펀차를 또한 이용하여 본원의 항-VEGF 항체와 베바시주맙 또는 라니비주맙 간 경쟁성을 테스트할 수 있다. 예를 들어, 일정 측면에서, 항-VEGF 항체는 기준 항체로 사용되고 베바시주맙 또는 라니비주맙은 테스트 항체로서 사용된다. 추가적으로, 가용성 VEGF 대신, 배양중인 세포(예를 들어, 포유동물 세포)의 표면 상에서 발현된 막 결합 VEGF가 사용될 수 있다. 경쟁 분석용 다른 형태가 당분야에 공지되어 있고 그를 적용할 수 있다.

다양한 구체예에서, 본원의 항-VEGF 항체는, 항-VEGF 항체가 0.08 ㎍/㎖, 0.4 ㎍/㎖, 2 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖, 50 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖의 농도 또는 상기 값 중 임의 값 사이 범위 농도(예를 들어, 2 ㎍/㎖ 내지 10 ㎍/㎖의 농도)로 사용될 경우, 표지된 베바시주맙 또는 라니비주맙의 결합을 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 상기 값 중 임의 값 사이 범위의 비율만큼 감소시킨다(예를 들어, 본원의 항-VEGF 항체는 표지된 베바시주맙 또는 라니비주맙의 결합을 50% 내지 70% 만큼 감소시킴).

다른 구체예에서, 베바시주맙 또는 라니비주맙은, 베바시주맙 또는 라니비주맙을 0.4 ㎍/㎖, 2 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖, 50 ㎍/㎖, 250 ㎍/㎖의 농도 또는 상기 값의 임의 값 사이 범위의 농도(예를 들어, 2 ㎍/㎖ 내지 10 ㎍/㎖ 범위의 농도)로 사용시 본원의 표지된 항-VEGF 항체의 결합을 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 상기 값의 임의 값 사이 범위의 비율(예를 들어, 베바시주맙 또는 라니비주맙은 본원의 표지된 항-VEGF 항체의 결합을 50% 내지 70% 만큼 감소시킴)만큼 감소시킨다.

다른 측면에서, 본원의 항-VEGF 항체는 다양한 시험관 내 분석에서 VEGF 활성, 예컨대 세포 증식 또는 세포 이동을 억제(또는 중화)시킨다. 예를 들어, 일 구체예에서, 분석된 VEGF 활성은 내피 세포("EC") 증식의 유도이다(예를 들어, [Qin et al., 2006, J. Biol. Chem. 281:32550-32558]의 프로토콜 참고). 다른 구체예에서, 분석된 VEGF 활성은 EC 이동의 유도이다(예를 들어, [Liang et al., 2007, Nat. Protoc. 2:329-333]에 기술된 시험관 내 스크랫치 분석 프로토콜 참고). 특정 구체예에서, 항-VEGF 항체는 불멸화된 소 망막 내피 세포에서 VEGF₁₆₅에 의해 유도된 치밀 이음부의 탈국재화 및 VEGF에 의해 자극된 증식 및 세포 이동 반전능력에 대해 테스트한다(Deissler et al., 2008, British Journal of Ophthalmology 92:839-843). 또 다른 구체예에서, VEGF 활성의 중화는 리포터 분석을 이용해 분석한다(예를 들어, 이하 문헌 참조: Yohno et al., 2003, Biological & Pharmaceutical Bulletin 26(4):417-20 및 미국 특허 제6,787,323호).

VEGF 중화 분석에 대한 다른 형식은 공지되어 있고 여기서 적용될 수 있다.

다양한 구체예에서, 본원의 항-VEGF 항체는, 항-VEGF 항체가 2 ng/㎖, 5 ng/㎖, 10 ng/㎖, 20 ng/㎖, 0.1 ㎍/㎖, 0.2 ㎍/㎖, 1 ㎍/㎖, 2 ㎍/㎖, 5 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖, 20 ㎍/㎖의 농도, 또는 상기 값의 임의 값 사이 범위의 농도(예를 들어, 1 ㎍/㎖ 내지 5 ㎍/㎖ 범위의 농도)로 사용시, VEGF를 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 상기 값의 임의 값 범위의 비율(예를 들어, 본원의 항-VEGF 항체는 VEGF 활성을 50% 내지 70% 만큼 중화시킴)만큼 중화시킨다.

일부 구체예에서, 본원의 항-VEGF 항체는 VEGF 중화에 있어, 베바시주맙 또는 라니비주맙이 효과적인 것보다 적어도 0.7-배, 0.8-배, 적어도 0.9-배, 적어도 1-배, 적어도 1.1-배, 적어도 1.25-배, 적어도 1.5-배, 적어도 2-배, 적어도 5-배, 적어도 10-배, 적어도 20-배, 적어도 50-배, 적어도 100-배, 적어도 200-배, 적어도 500-배, 적어도 1000-배로 효과적이거나, 또는 상기 값의 임의 쌍 사이 범위로 베바시주맙 또는 라니비주맙에 대해 VEGF 중화에 효과적이다(예를 들어, VEGF 중화에서, 베바시주맙 또는 라니비주맙이 효과적인 것보다 0.9-배 내지 5-배 또는 2-배 내지 50-배 효과적).

6.4 항- VEGF 항체의 동역학적 특성

일정 구체예에서, 본원의 항-VEGF 항체는 VEGF에 대해 높은 결합성을 갖는다. 특정 구체예에서, 본원의 항-VEGF 항체는 비(specific) 회합 속도 상수(association rate constant)(k_on 또는 k_a 값), 해리 속도 상수(k_off 또는 k_d 값), 친화 상수(K_A 값), 해리 상수(K_D 값) 및/또는 IC₅₀ 값을 갖는다. 다양한 구체예에서, 항-VEGF 항체와 VEGF 수용체의 상호작용에 대한 결합 상수는 예를 들어, [Karlsson et al., 1991, J. Immunol. Methods 145:229-240]에 개시된 방법에 따라, 표면 플라스몬 공명을 이용해 측정할 수 있다. 일정 측면에서, 이러한 값들은 다음의 구체예에서 선택된다.

특정 구체예에서, 본원의 항-VEGF 항체는, 적어도 10⁴ M^-1s^-1, 적어도 5 X 10⁴ M^-1s^-1, 적어도 10⁵ M^-1s^-1, 적어도 5 X 10⁵ M^-1s^-1, 적어도 10⁶ M^-1s^-1, 적어도 5 X 10⁶ M^-1s^-1, 적어도 10⁷ M^-1s^-1, 적어도 5 X 10⁷ M^-1s^-1, 적어도 10⁸ M^-1s^-1, 적어도 5 X 10⁸ M^-1s^-1, 적어도 10⁹ M^-1s^-1의 k_on 또는 상기 값의 임의 쌍 사이의 임의 범위의 k_on(예를 들어, 5 X 10⁵내지 5 X 10⁶ M^-1s^-1 또는 10⁷ 내지 10⁸ M^-1s^-1)으로 VEGF에 결합한다.

다른 구체예에서, 본원의 항-VEGF 항체는 10^-3s^-1 이하, 5 X 10^-4s^-1 이하, 10^-4s^-1 이하, 5 X 10^-5s^-1 이하, 10^-5s^-1 이하, 5　X 10^-6s^-1 이하, 10^-6s^-1 이하, 5　X 10^-7s^-1 이하, 10^-7s^-1 이하, 5　X 10^-8s^-1 이하, 10^-8s^-1 이하의 k_off 속도로, 또는 상기 값의 임의 쌍 사이의 임의 범위의 k_off 속도(예를 들어, 5 X 10^-4 내지 10^-6s^-1, 또는 10^-3 내지 5 X 10^-5s^-1)로 VEGF에 결합한다.

다른 구체예에서, 본원의 항-VEGF 항체는 적어도, 적어도 10⁸ M^-1, 적어도 5 X 10⁹ M^-1, 적어도 10¹⁰ M^-1, 적어도 5 X 10¹⁰ M^-1, 10¹¹ M^-1, 적어도 5 X 10¹¹ M^-1, 적어도 10¹² M^-1, 적어도 5 X 10¹² M^-1, 적어도 10¹³ M^-1, 적어도 5 X 10¹³ M^-1, 적어도 10¹⁴ M^-1, 적어도 5 X 10¹⁴ M^-1, 적어도 10¹⁵ M^-1의 K_A(k_on/k_off) 또는 상기 값의 임의 쌍 사이의 임의 범위의 K_A(예를 들어, 5 X 10⁹M^-1 내지 10¹¹M^-1, 또는 10¹¹M^-1 내지 5 X 10¹⁴M^-1)로 VEGF에 결합한다.

다른 구체예에서, 본원의 항-VEGF 항체는 10^-8 M 이하, 5 X 10^-9 M 이하, 10^-9 M 이하, 5 X 10^-10 M 이하, 10^-10 M 이하, 5 X 10^-11 M 이하, 10^-11 M 이하, 5 X 10^-12 M 이하, 10^-12 M 이하, 5 X 10^-13 M 이하, 10^-13 M 이하, 5 X 10^-14 M 이하, 10^-14 M 이하, 5 X 10^-15 M 이하, 10^-15 M 이하의 K_D(k_off/k_on), 또는 상기 값의 임의 쌍 사이의 임의 범위의 K_D(예를 들어, 5 X 10^-9 내지 5 X 10^-12 M, 또는 5 X 10^-11 M내지 5 X 10^-13M)로 VEGF에 결합한다.

특정 구체예에서, K_D(k_off/k_on) 값은 본원에 기술되거나 또는 당분야에 공지된 분석법, 예를 들어 ELISA, 등온 적정 열량측정법(ITC), 형광발광 편광 분석법 또는 임의의 다른 바이오센서 예컨대 BIAcore를 통해 측정된다.

일부 구체예에서, 본원의 항-VEGF 항체는 5 X 10⁷ nM 미만, 10⁷ nM 미만, 5 X 10⁶ nM 미만, 10⁶ nM 미만, 5 X 10⁵ nM 미만, 10⁵ nM 미만, 5 X 10⁴ nM 미만, 10⁴ nM 미만, 5 X 10³ nM 미만, 10³ nM 미만, 5 X 10² nM 미만, 100 nM 미만, 90 nM 미만, 80 nM 미만, 70 nM 미만, 65 nM 미만, 60 nM 미만, 50 nM 미만, 40 nM 미만, 30 nM 미만, 25 nM 미만, 20 nM 미만, 15 nM 미만, 12 nM 미만, 10 nM 미만, 5 nM 미만, 1 nM 미만, 5 X 10^-1 nM 미만, 10^-1 nM 미만, 5 X 10^-2 nM 미만, 10^-2 nM 미만, 5 X 10^-3 nM 미만, 10^-3 nM 미만, 5 X 10^-4 nM 미만, 또는 10^-4 nM 미만의 IC₅₀ 값, 또는 상기 값의 임의 쌍 사이 임의 범위의 IC₅₀ 값(예를 들어, 5 X 10⁷ 내지 50 nM, 또는 15 nM 내지 5 X 10^-3nM)으로 VEGF에 결합하여 VEGF가 VEGF 수용체(Flt-1 또는 Flk-1)에 결합하는 것을 억제한다. IC₅₀은 본원에 기술되거나 또는 당분야에 공지된 방법, 예를 들어, ELISA에 따라서 측정할 수 있다.

다른 구체예에서, 본원의 항-VEGF 항체는 5 X 10⁷ nM 미만, 10⁷ nM 미만, 5 X 10⁶ nM 미만, 10⁶ nM 미만, 5 X 10⁵ nM 미만, 10⁵ nM 미만, 5 X 10⁴ nM 미만, 10⁴ nM 미만, 5 X 10³ nM 미만, 10³ nM 미만, 5 X 10² nM 미만, 100 nM 미만, 90 nM 미만, 80 nM 미만, 70 nM 미만, 65 nM 미만, 60 nM 미만, 50 nM 미만, 40 nM 미만, 30 nM 미만, 25 nM 미만, 20 nM 미만, 15 nM 미만, 12 nM 미만, 10 nM 미만, 5 nM 미만, 1 nM 미만, 5 X 10^-1 nM 미만, 10^-1 nM 미만, 5 X 10^-2 nM 미만, 10^-2 nM 미만, 5 X 10^-3 nM 미만, 10^-3 nM 미만, 5 X 10^-4 nM 미만, 또는 10^-4 nM 미만의 IC₅₀ 값, 또는 상기 값의 임의 쌍 사이 임의 범위의 IC₅₀ 값(예를 들어, 5 X 10⁷ 내지 50 nM, 또는 15 nM 내지 5 X 10^-3nM)으로 생물분석법에서 VEGF에 결합하여 VEGF 활성(예를 들어, EC 증식 또는 이동)을 중화시킨다. 항-VEGF 항체의 IC₅₀를 측정하는데 사용될 수 있는 예시적인 중화 분석법은 이하 섹션 6.3에 기술한다.

일정 구체예에서, 항-VEGF 항체는 대략 1 pM 내지 대략 1 μM의 IC₅₀ 값으로, VEGF에 결합하여 VEGF가 Flt-1, Flk-1 또는 둘 모두에 결합하는 것을 억제하거나, 또는 VEGF 중화 분석에서 VEGF 활성을 억제한다. 특정 구체예에서, 항-VEGF 항체는 10 pM?100 nM, 100 pM?10 nM, 200 pM?5 nM, 300 pM?4 nM, 500 pM?3 nM, 750 pM?2 nM, 1 nM?20 nM, 500 pM?40 nM, 50 pM?50 nM, 250 pM?100 nM, 및 100 nM?1 μM의 IC₅₀ 값, 또는 상기 값의 임의 쌍 사이의 임의 범위 IC₅₀(예를 들어, 10 pM 내지 50 nM, 또는 750 pM 내지 2nM)로, VEGF에 결합하여 VEGF가 Flt-1, Flk-1 또는 둘 모두에 결합하는 것을 억제하거나, 또는 VEGF 중화 분석에서 VEGF 활성을 억제한다.

상기 구체예들의 일정 측면에서, IC₅₀ 는 0.001 μM, 0.005 μM, 0.01 μM, 0.05 μM, 0.1 μM, 0.5 μM, 1 μM, 10 μM, 20 μM, 30 μM, 40 μM, 50 μM, 60 μM, 70 μM, 80 μM, 90 μM, 100 μM, 200 μM, 300 μM, 400 μM, 500 μM, 600 μM, 700 μM, 800 μM, 900 μM, 1000 μM 농도 또는 상기 값의 임의 쌍 사이의 임의 범위 농도(예를 들어, 0.01 내지 50 μM, 또는 10 μM 내지 100 μM)로 VEGF 존재 하에 측정된다.

일정 구체예에서, 본원의 항체의 동역학적 특성은, 비교 분석에서 베바시주맙 또는 라니비주맙과 견줄만하거나, 또는 그보다 개선된다. 예를 들어, 일정 구체예에서, 본원의 항-VEGF 항체는 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_on의 대략 0.5x 내지 1000x 범위의 k_on 속도, 예를 들어 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_on의 0.5x의 k_on, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_on의 0.75x의 k_on, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_on의 0.9x의 k_on, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_on의 1x의 k_on, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_on의 1.1x의 k_on, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_on의 1.2x의 k_on, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_on의 1.3x의 k_on, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_on의 1.4x의 k_on, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_on의 1.5x의 k_on, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_on의 1.75x의 k_on, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_on의 2x의 k_on, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_on의 2.25x의 k_on, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_on의 2.5x의 k_on, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_on의 3x의 k_on, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_on의 4x의 k_on, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_on의 5x의 k_on, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_on의 7.5x의 k_on, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_on의 10x의 k_on, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_on의 15x의 k_on, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_on의 20x의 k_on, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_on의 50x의 k_on, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_on의 75x의 k_on, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_on의 100x의 k_on, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_on의 150x의 k_on, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_on의 200x의 k_on, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_on의 200x의 k_on 또는 상기 값의 임의 쌍 사이 범위의 k_on, 예를 들어, 베바시주맙 또는 라니비주맙의의 k_on의 2x-75x, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_on의 5x-100x, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_on의 0.5x-1000x, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_on의 0.75x-200x의 k_on 등으로 VEGF에 결합한다.

일정 구체예에서, 본원의 항-VEGF 항체는 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_off의 0.001x 내지 3x 범위의 k_off 속도, 예를 들어, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_off의 0.002x의 k_off, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_off의 0.005x의 k_off, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_off의 0.0075x의 k_off, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_off의 0.01x의 k_off, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_off의 0.025x의 k_off, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_off의 0.05x의 k_off, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_off의 0.075x의 k_off, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_off의 0.1x의 k_off, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_off의 0.25x의 k_off, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_off의 0.5x의 k_off, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_off의 0.75x의 k_off, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_off의 0.9x의 k_off, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_off의 1x의 k_off, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_off의 1.1x의 k_off, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_off의 1.25x의 k_off, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_off의 1.5x의 k_off, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_off의 1.75x의 k_off, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_off의 4x의 k_off, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_off의 3x의 k_off, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_off의 2x의 k_off, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_off의 3x의 k_off, 또는 상기 값의 임의 쌍 사이 범위의 k_off, 예를 들어, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_off의 0.01x 내지 1.1x의 k_off, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_off의 0.05x-1.25x의 k_off, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 k_off의 0.1x-0.9x의 k_off 등으로 VEGF에 결합한다.

다른 구체예에서, 본원의 항-VEGF 항체는 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_A(k_on/k_off)의 0.25x 내지 1000x 범위의 K_A, 예를 들어, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_A의 0.5x의 K_A, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_A의 0.75x의 K_A, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_A의 1x의 K_A, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_A의 2x의 K_A, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_A의 4x의 K_A, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_A의 10x의 K_A, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_A의 15x의 K_A, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_A의 20x의 K_A, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_A의 30x의 K_A, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_A의 40x의 K_A, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_A의 50x의 K_A, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_A의 100x의 K_A, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_A의 250x의 K_A, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_A의 500x의 K_A, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_A의 750x의 K_A, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_A의 1000x의 K_A 또는 상기 값의 임의 쌍 사이 범위의 K_A, 예를 들어, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_A의 0.75x-10 5x의 K_A, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_A의 1x-100x의 K_A, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_A의 10x-20x의 K_A, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_A의 4x-50x의 K_A, 또는 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_A의 2x-20x의 K_A, 또는 본원에 개시된 k_on 및 k_off 속도로부터 산출될 수 있는 임의 값 또는 범위로, VEGF에 결합한다.

다른 구체예에서, 본원의 항-VEGF 항체는 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_D(k_off/k_on)의 0.001x 내지 10x 범위의 K_D, 예를 들어, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_D의 0.001x의 K_D, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_D의 0.005x의 K_D, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_D의 0.01x의 K_D, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_D의 0.05x의 K_D, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_D의 0.075x의 K_D, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_D의 0.1x의 K_D, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_D의 0.2x의 K_D, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_D의 0.3x의 K_D, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_D의 0.4x의 K_D, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_D의 0.5x의 K_D, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_D의 0.6x의 K_D, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_D의 0.7x의 K_D, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_D의 0.8x의 K_D, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_D의 0.9x의 K_D, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_D의 1x의 K_D, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_D의 1.5x의 K_D, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_D의 2x의 K_D, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_D의 4x의 K_D, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_D의 7.5x의 K_D, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_D의 10x의 K_D 또는 상기 값의 임의 쌍 사이 범위의 K_D 값, 예를 들어, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_D의 0.01x-2x의 K_D, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_D의 0.1x-1.5x의 K_D, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_D의 0.7x-4x의 K_D, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 K_D의 0.2x-2x의 K_D 또는 본원에 개시된 k_on 및 k_off 속도로부터 산출될 수 있는 임의 값 또는 범위인 K_D로 VEGF에 결합한다.

일부 구체예에서, 본원의 항-VEGF 항체는 베바시주맙 또는 라니비주맙의 IC₅₀ 값의 0.001x 내지 10x 범위의 IC₅₀, 예를 들어, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 IC₅₀의 0.001x의 IC₅₀, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 IC₅₀의 0.005x의 IC₅₀, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 IC₅₀의 0.01x의 IC₅₀, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 IC₅₀의 0.05x의 IC₅₀, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 IC₅₀의 0.075x의 IC₅₀, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 IC₅₀의 0.1x의 IC₅₀, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 IC₅₀의 0.2x의 IC₅₀, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 IC₅₀의 0.3x의 IC₅₀, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 IC₅₀의 0.4x의 IC₅₀, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 IC₅₀의 0.5x의 IC₅₀, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 IC₅₀의 0.6x의 IC₅₀, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 IC₅₀의 0.7x의 IC₅₀, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 IC₅₀의 0.8x의 IC₅₀, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 IC₅₀의 0.9x의 IC₅₀, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 IC₅₀의 1x의 IC₅₀, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 IC₅₀의 1.5x의 IC₅₀, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 IC₅₀ 2x의 IC₅₀, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 IC₅₀의 4x의 IC₅₀, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 IC₅₀의 7.5x의 IC₅₀, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 IC₅₀의 10x의 IC₅₀ 또는 상기 값의 임의 쌍 사이 범위의 IC₅₀, 예를 들어, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 IC₅₀의 0.01x-2x의 IC₅₀, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 IC₅₀의 0.1x-1.5x의 IC₅₀, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 IC₅₀의 0.7x-4x의 IC₅₀, 베바시주맙 또는 라니비주맙의 IC₅₀의 0.2x-2x의 IC₅₀로 VEGF에 결합하여 VEGF가 Flt-1, Flk-1 또는 둘 모두에 결합하는 것을 억제하거나, 또는 VEGF의 활성을 중화시킨다. 일정 구체예에서, 단일 CDR 치환은 베바시주맙 또는 라니비주맙과 비교하여 IC₅₀에 상기의 차이를 일으킬 수 있는 한편, 본원의 항-VEGF 항체는 베바시주맙 또는 라니비주맙과 비교하여 이러한 치환 및 최대 16개의 추가 CDR 치환을 포함한다.

6.5 항- VEGF 항체의 감소된 면역원성

일정 측면에서, 본원은 베바시주맙 또는 라니비주맙과 비교하여 감소된 면역원성을 갖는 항-VEGF 항체를 제공한다. 본원은 베바시주맙의 CDR과 비교하여 CDR 및/또는 프레임워크 영역에 단일 또는 복수개 아미노산 치환을 갖는 항-VEGF 항체를 제공하며, 여기서 1 이상의 치환은 베바시주맙 또는 라니비주맙과 비교하여 항체의 면역원성을 감소시킨다. 일정 구체예에서, 감소된 면역원성은 1 이상의 T 세포 에피토프를 제거 또는 완화시키는 결과를 일으키는 1 이상의 아미노산 치환에 의한 것이다.

일정 측면에서, 감소된 면역원성을 갖는 본원의 항-VEGF 항체는 베바시주맙 또는 라니비주맙과 비교하여 견줄만하거나 또는 개선된 생물학적 활성, 예를 들어 VEGF에 대한 친화도 또는 VEGF 활성 중화성을 갖는다. 이러한 특성들은, 예를 들어, 상기 섹션 6.3에 기술된 방법에 의해 테스트될 수 있다.

일정 구체예에서, 본원의 항-VEGF 항체의 면역우너성은 베바시주맙 또는 라니비주맙 항체에 비해 감서된다. 이러한 항체는 대체로 서열번호 25, 서열번호 62 및/또는 서열번호 74에 상응하는 영역 내 중쇄 및/또는 경쇄 가변 영역에 대해 변이 서열을 갖는다. 항체는 대체로 서열번호 25, 서열번호 62 및 서열번호 74에 상응하는 1, 2 또는 모든 3 서열 내에 1, 2 또는 3 아미노산 치환을 갖지만, 1, 2 또는 모든 3 영역 내 최대 4 또는 5개 치환이 본원에서 고려된다.

본원에서 사용되는 바와 같이, "감소된 면역원성"을 갖는 변이체는 각각 서열번호 25, 서열번호 62 또는 서열번호 74의 펩티드와 비교하여 말초혈 단핵구 세포에서 감소된 증식 반응을 유발하는, 서열번호 25, 서열번호 62 및/또는 서열번호 74에 상응하는 영역 내 변이 서열을 갖는 항-VEGF 항체를 의미한다. 증식 반응을 평가하는데 사용될 수 있는 예시적은 증식 분석법은 이하 섹션 7에 기재한다. 감소된 증식 반응은 반응자 비율, 자극 지수, 또는 둘 모두의 관점에서 반영될 수 있다.

다른 구체예에서, 서열번호 25, 서열번호 62 또는 서열번호 74의 서열을 갖는 펩티드와 비교하여, 변이 서열은 적어도 25% 적은 반응자, 적어도 30% 적은 반응자, 적어도 35% 적은 반응자, 적어도 40% 적은 반응자, 적어도 45% 적은 반응자, 적어도 50% 적은 반응자, 적어도 60% 적은 반응자, 적어도 65% 적은 반응자, 적어도 70% 적은 반응자, 적어도 75% 적은 반응자, 적어도 80% 적은 반응자, 적어도 85% 적은 반응자, 적어도 90% 적은 반응자, 적어도 95% 적은 반응자, 100% 적은 반응자, 또는 상기 임의 값 사이 범위의 반응자 감소, 예를 들면, 25%-75% 적은 반응자, 50%-90% 적은 반응자, 60%-100% 적은 반응자, 70%-90% 적은 반응자를 발생시킨다.

다른 구체예에서, 변이 서열은 각각 서열번호 25, 서열번호 62 또는 서열번호 74의 펩티드에 의해 유발되는 자극 지수보다 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 또는 적어도 40% 적은 자극 지수를 발생시키거나, 또는 서열번호 25, 서열번호 62, 또는 서열번호 74의 펩티드와 비교하여 상기 임의 값 사이 범위 만큼, 예를 들어, 5%-20% 이하, 10%-30% 이하, 25%-35% 이하, 30%-40% 이하 만큼 감소된 자극 지수를 발생시킨다.

베바시주맙 또는 라니비주맙과 비교하여 면역원성이 감소된 후보 항-VEGF 항체의 예시적인 구체예는 표 6에 개시된 1 이상의 CDR 치환 또는 치환의 조합을 포함한다. 경우에 따라, 베바시주맙 또는 라니비주맙과 비교하여 면역원성이 감소된 항-VEGF 항체는 1 이상의 추가 치환, 예컨대 표 7-13 중 어느 표 내 CDR 돌연변이를 단독으로 또는 조합하여 포함한다.

베바시주맙 또는 라니비주맙과 비교하여 면역원성이 감소된 후보 항-VEGF 항체의 추가 예시적인 구체예는 표 14-16에 기재된 1 이상의 CDR 치환 또는 치환의 조합을 포함한다. 베바시주맙 또는 라니비주맙과 비교하여 면역원성이 감소된 항-VEGF 항체의 일부 바람직한 구체예가 표 19에 제공된다.

6.6 항체 접합체

본원의 항-VEGF 항체는, 예를 들어, VEGF에 대한 결합이 공유 결합에 의해 방해받지 않도록, 항체에 임의 유형의 분자를 공유 결합시켜 개질된 항체 접합체를 포함한다.

일정 측면에서, 본원의 항-VEGF 항체는 이펙터 모이어티 또는 표지에 접합될 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "이펙터 모이어티"는 예를 들어, 항신생물제, 약물, 톡신, 생물학적 활성 단백질, 예를 들면, 효소, 다른 항체 또는 항체 단편, 합성 또는 천연 발생 중합체, 핵산(예를 들어, DNA 및 RNA), 방사성핵종, 특히 방사성요오드, 방사성동위원소, 킬레이트화 금속, 나노입자 및 수용체 그룹 예컨대 형광발광 화합물 또는 NMR이나 ESR 발광계로 검출될 수 있는 화합물을 포함한다.

일례에서, 항-VEGF 항체는 이펙터 모이어티, 예컨대 세포독성제, 방사성핵종 또는 약물 모이어티에 접합되어 소정의 생물학적 반응이 개질될 수 있다. 이펙터 모이어티는 단백질 또는 폴리펩티드, 예컨대 제한없이, 예를 들어 톡신(예컨대 아브린, 리신 A, 슈도모나스 외독소, 또는 디프테리아 독소 등), 신호전달 분자(예컨대, α-인터페론, β-인터페론, 신경 성장 인자, 혈소판 유래 성장 인자 또는 조직 플라스미노겐 활성인자), 혈전제 또는 항-혈관생성제(예를 들어, 안지오스타틴 또는 엔도스타틴) 또는 생물학적 반응 개질제 예컨대 사이토카인 또는 성장 인자(예를 들어, 인터루킨-1(IL-1), 인터루킨-2(IL-2), 인터루킨-6 (IL-6), 그래뉼로사이트 마크로파지 콜로니 자극 인자(GM-CSF), 그래뉼로사이트 콜로니 자극 인자(G-CSF), 또는 신경 성장 인자(NGF))일 수 있다.

다른 예에서, 이펙터 모이어티는 세포독소 또는 세포독성제일 수 있다. 세포독소 및 세포독성제의 예로는 탁솔, 사이토칼라신 B, 그라미시딘 D, 에티듐 브로마이드, 에메틴, 미토마이신, 에토포시드, 테노포시드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 콜키신, 독소루비신, 다우노라비신, 디히드록시 안트라신 디온, 미톡산트론, 미트라마이신, 악티노마이신 D,1-데히드로테스토스테론, 글루코코르티코이드, 프로카인, 테트라카인, 리도카인, 프로프라놀롤 및 푸로마이신 및 이의 유사체 또는 동종체 등이 포함된다.

이펙터 모이어티는 또한, 이에 제한없이, 항대사물질(예를 들어, 메토트렉세이트, 6-머캅토퓨린, 6-티오구아닌, 사이타라빈, 5-플루오로우라실 데카르바진), 알킬화제(예를 들어, 메클로레타민, 티오에파 클로람부실, 멜팔란, 카르무스틴(BSNU) 및 로무스틴(CCNU), 사이클로토스파미드, 부설판, 디브로모만니톨, 스트렙토조토신, 미토마이신 C5 및 시스-디클로로디아민 플래티넘 (II)(DDP) 시스플라틴), 안트라사이클린(예를 들어, 다우노루비신(이전에 다우노마이신) 및 독소루비신), 항생제(예를 들어, 닥티노마이신(이전에 악티노마이신), 블레오마이신, 미트라마이신, 안트라마이신(AMC), 칼리케아미신 또는 두오카르마이신), 및 항유사분열제(예를 들어, 빈크리스틴 및 빈블라스틴)를 포함한다.

다른 이펙터 모이어티는 방사성핵종, 예컨대 이에 제한되는 것은 아니고, ¹¹¹In 및 ⁹⁰Y, Lu¹⁷⁷, 비스무쓰²¹³, 칼리포늄²⁵², 이리듐¹⁹² 및 텅스텐¹⁸⁸/레늄¹⁸⁸ 및 약물, 예컨대 이에 제한되지 안으나, 알킬포스포콜린, 토포이소머라제 I 억제제, 탁소이드 및 수라민을 포함한다.

이러한 이펙터 모이어티를 항체에 접합시키는 방법은 당분야에 공지이다(예를 들어, Hellstrom et al., Controlled Drug Delivery, 2nd Ed., at pp. 623-53 (Robinson et al., eds., 1987)); Thorpe et al., 1982, Immunol. Rev. 62:119-58, 및 Dubowchik et al., 1999, Pharmacology and Therapeutics 83:67-123).

일례에서, 항-VEGF 항체 또는 이의 단편은 다른 단백질(또는 이의 일부분; 예를 들어 단백질의 적어도 10, 20 또는 50 아미노산 부분)에, 항체의 N 말단 또는 C 말단을 통해 또는 내부적으로, 공유 결합(예를 들어, 펩티드 결합)에 의해 융합된다. 항체, 또는 이의 단편은 항체의 불변 도메인의 N 말단에서 다른 단백질에 연결될 수 있다. 재조합 DNA 방법을 사용하여, 예를 들어 WO　86/01533 및 EP0392745에 기술된 바와 같이, 이러한 융합체를 생성시킬 수 있다. 다른 예에서, 이펙터 분자는 생체 내에서 반감기를 증가시킬 수 있고/있거나, 상피 장벽을 가로질러 면역계로의 항체 전달을 증강시킬 수 있다. 이러한 유형의 적합한 이펙터 분자의 예로는, 중합체, 알부민, 알부민 결합 단백질 또는 알부민 결합 화합물, 예컨대 WO 2005/117984에 기술된 것들이 포함된다.

일정 측면에서, 항-VEGF 항체는 소형 분자 독소에 접합된다. 일정한 예시 구체예에서, 본원의 항-VEGF 항체는 돌라스타틴 또는 돌라스타틴 펩티드 유사체 또는 유도체, 예를 들어, 오리스타틴(미국 특허 제5,635,483호 및 제5,780,588호)에 접합된다. 돌라스타틴 또는 오리스타틴 약물 모이어티는 그 N(아미노) 말단, C(카르복실) 말단을 통하거나 또는 내부적으로 항체에 부착될 수 있다(WO 02/088172). 예시적인 오리스타틴 구체예는 N-말단 연결된 모노메틸우리스타틴 약물 모이어티 DE 및 DF를 포함하고, 예컨대 미국 특허 제 7,498,298호에 개시된 것이며, 이 문헌을 전체로 참조하여 본원에 포함시킨다(예를 들어, 링커 및 링커에 접합된 MMAE 및 MMAF 등과 같은 모노메틸발린 화합물의 제조 방법 등을 개시하고 있음).

다른 예시적인 구체예에서, 소형 분자 독소는 이에 제한되지 않으나, 칼리케아미신, 마이탄신(미국 특허 제5,208,020호), 트리코텐, 및 CC1065를 포함한다. 본원의 일 구체예에서, 항체는 1 이상의 마이탄신 분자(예를 들어, 항체 분자 당 약 1 내지 약 10 마이탄신 분자)에 접합된다. 마이탄신은, 예를 들어 May-SH3로 환원되어 항체와 반응할 수 있는 May-SS-Me로 전환되어(Chari et al., 1992, Cancer Research 52: 127-131) 마이탄시노이드-항체 또는 마이탄시노이드-Fc 융합 접합체를 생성할 수 있다. 또한 사용될 수 있는 칼리케아미신의 구조 유사체는 이에 제한되는 것은 아니고, γ₁ ¹,γ₃ ¹, N-아세틸-γ₁ ¹, PSAG, 및 θ₁ ¹을 포함한다(Hinman et al., 1993, Cancer Research 53:3336-3342; Lode et al., 1998, Cancer Research 58:2925-2928; 미국 특허 제5,714,586호; 미국 특허 제5,712,374호; 미국 특허 제5,264,586호; 미국 특허 제5,773,001호).

본원의 항체는 또한 표적 전달을 위해 리포솜에 접합될 수 있다(예를 들어, Park et al., 1997, Adv. Pharmacol. 40:399-435; Marty & Schwendener, 2004, Methods in Molecular Medicine 109:389-401).

일례에서, 본원의 항체는 폴리(에틸렌글리콜)(PEG) 모이어티에 부착될 수 있다. 일 특정 예에서, 항체는 항체 단편이고 PEG 부분은 항체 단편에 위치하는 임의의 이용가능한 아미노산 측쇄 또는 말단 아미노산 작용기, 예를 들어 임의의 유리 아미노, 이미노, 티올, 히드록실 또는 카르복실 기를 통해 부착될 수 있다. 이러한 아미노산은 항체 단편에 천연적으로 존재하거나 또는 재조합 DNA 방법을 이용해 단편으로 조작될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제5,219,996호를 참조한다. 복수 부위를 사용해 2개 이상의 PEG 분자를 부착시킬 수 있다. PEG 모이어티는 항체 단편에 위치하는 1 이상의 시스테인 잔기의 티올 기를 통해 공유 결합될 수 있다. 티올기가 부착 지점으로서 사용되는 경우, 적절하게 활성화된 이펙터 모이어티(예를 들어, 티올 선택적 유도체 예컨대 말레이미드 및 시스테인 유도체)가 사용될 수 있다.

특정 예에서, 항-VEGF 항체 접합체는 예를 들어, EP0948544에 개시된 방법에 따라, PEG와, 즉 PEG(폴리(에틸렌글리콜)가 공유 결합된, 개질 Fab' 단편이다. 또한, 이하의 문헌들을 참조한다: Poly(ethyleneglycol) Chemistry, Biotechnical and Biomedical Applications, (J. Milton Harris (ed.), Plenum Press, New York, 1992); Poly(ethyleneglycol) Chemistry and Biological Applications, (J. Milton Harris and S. Zalipsky, eds., American Chemical Society, Washington D.C., 1997); 및 Bioconjugation Protein Coupling Techniques for the Biomedical Sciences, (M. Aslam 및 A. Dent, eds., Grove Publishers, New York, 1998); 및 Chapman, 2002, Advanced Drug Delivery Reviews 54:531-545. PEG는 힌지 영역 내 시스테인에 결합될 수 있다. 일례에서, PEG-개질 Fab' 단편은 개질된 힌지 영역 내에 단일 티올 기에 공유 결합된 말레이미드 기를 갖는다. 리신 잔기는 말레이미드 기에 공유 결합될 수 있고 리신 잔기 상의 아민 기 각각에 분자량이 대략 20,000 Da인 메톡시폴리(에틸렌글리콜)중합체가 부착될 수 있다. Fab' 단편에 부착된 PEG의 총 분자량은 따라서, 대략 40,000 Da이다.

본원에서 사용시 단어 "표지"는 본원의 항-VEGF 항체에 직접 또는 간접 접합될 수 있는 검출가능한 화합물 또는 조성물을 의미한다. 표지는 자체로 검출가능하거나(예를 들어, 방사성동위원소 표지 또는 형광발광 표지), 효소 표지인 경우에는, 검출가능한 기질 화합물 또는 조성물의 화학적 변화를 촉매할 수 있다. 유용한 형광발광 모이어티는 이에 제한되는 것은 아니고, 플루오레세인, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민, 5-디메틸아민-1-나프탈렌설포닐 클로라이드, 파이코에리쓰린 등을 포함한다. 유용한 효소 표지는 이에 제한되는 것은 아니고, 알칼리 포스파타아제, 홀스래디쉬 퍼옥시다아제, 글루코스 옥시다아제 등을 포함한다.

특히, 진단 목적에 유용한 추가의 항-VEGF 항체 접합체를 이하 섹션 6.7에 기술한다.

6.7 항- VEGF 항체의 진단 용도

예를 들어, 비오틴화, 홀스래디쉬 퍼옥시다제, 또는 임의의 다른 검출가능한 모이어티(섹션 6.6에 기술된 것들 포함)에 의해 개질된 항체들을 포함하여, 본원의 항-VEGF 항체는 진단 목적으로 유리하게 사용될 수 있다.

구체적으로, 항-VEGF 항체는 이에 제한되는 것은 아니고, 시험관 내 및 생체 내 진단 방법을 포함하여, VEGF를 정제 또는 검출하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 이들 항체는 생물학적 샘플에서 VEGF의 농도를 양적으로 그리고 질적으로 측정하기 위한 면역분석법에서 이용된다. 이하 문헌을 참조하며, 이를 전체로 참조하여 본원에 포함시킨다: Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, Second Edition(Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988).

본원은 또한 진단제에 접합된 항체 또는 이의 단편을 포함한다. 항체는 진단적으로, 예를 들어, 특정 세포, 조직 또는 혈청에서 목적 표적의 발현을 검출하거나; 또는 예를 들어 소정 치료 계획의 효율을 결정하기 위해 임상 검사 과정의 일부로서 면역학적 반응의 발생 또는 진행을 모니터링하는데 사용될 수 있다. 검출은 검출가능한 기질에 항체를 커플링시켜 용이하게 할 수 있다. 검출가능한 기질의 예로는 각종 효소, 보결분자단, 형광발광재, 발광재, 생물발광재, 방사능재, 양전자 방출 단층촬영을 이용한 양전자 방출 금속, 및 비방사능 상자성 금속 이온이 포함된다. 검출가능한 기질은 당분야에 공지된 방법을 이용해 중간체(예를 들어, 당분야에 공지된 링커)를 통해, 간접적으로 또는 항체(또는 이의 단편)에 직접 커플링 또는 접합될 수 있다. 효소 표지의 예로는 루시페라아제(예를 들어, 반딧불이 루시페라아제 및 박테리아 루시페라아제; 미국 특허 제4,737,456호), 루시페린, 2,3-디히드로프탈라진디온, 말레이트 데히드로게나아제, 우레아제, 퍼옥시다아제 예컨대 폴스래디쉬 퍼옥시다아제(HRPO), 알칼리 포스파타아제, β-갈락토시다아제, 아세틸콜린에스테라아제, 글루코아밀라아제, 라이소자임, 사카라이드 옥시다아제(예를 들어, 글루코스 옥시다아제, 갈락토스 옥시다아제 및 글루코스-6-포스페이트 데히드로게나아제), 복소환 옥시다아제(예컨대 우리카아제 및 크산틴 옥시다아제), 락토퍼옥시다아제, 미크로퍼옥시다아제 등이 포함된다. 적절한 부결분자단 착체의 예에는 스트렙타비딘/비오틴 및 아비딘/비오틴이 포함되고; 적절한 형광발광재의 예에는 엄벨리페론, 플루오레세인, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민, 디클로로티아지닐아민 플루오레세인, 단실 클로라이드 또는 파이코에리쓰린이 포함되며; 발광재의 예에는 루미놀이 포함되고; 생물발광재의 예에는 루시페라아제, 루시페린, 및 애쿠오린이 포함되며; 적절한 방사능재의 예에는 ¹²⁵I, ¹³¹I, ¹¹¹In 또는 ⁹⁹Tc이 포함된다.

본원은 VEGF의 발현 검출을 위해 제공되고, 이는 본원의 1 이상의 항-VEGF 항체(경우에 따라 검출가능한 모이어티에 접합됨)를 이용해 생물학적 샘플(개체의 세포, 조직, 또는 체액)을 접촉시키는 단계, 및 샘플이 VEGF 발현에 양성인지 여부를 검출하거나, 또는 대조군 샘플과 비교하여 샘플 발현이 변경(예를 들어, 감소 또는 증가)되었는지 여부를 검출하는 단계를 포함한다.

본 발명의 방법을 이용해 진단할 수 있는 질환은 이에 제한되지 않으나, 본원에 기술된 질환들을 포함한다. 일정 구체예에서, 조직 또는 체액은 말초혈, 말초혈 백혈구, 생검 조직 예컨대 폐 또는 피부 생검, 및 조직이다.

6.8 항- VEGF 항체를 이용한 치료 방법

6.8.1 임상적 장점

본원의 항-VEGF 항체는 병적 혈관생성으로 특징되는 다양한 신생물 또는 비신생물성 병태를 치료하는데 사용될 수 있다.

본원의 항체는 암 및 양성 종양을 포함하여, 혈광생성이 종양 성장에서 중요한 역할을 하는 종양의 치료에 유용하다. 본원에서 치료되는 암의 예에는, 제한없이, 암종, 림프종, 아세포종, 육종, 및 백혈병이 포함된다. 그러한 암의 보다 구체적인 예에는 평편세포 암, 페암,(소세포 폐암, 비소세포 폐암, 페의 선암종, 폐의 편평 암종), 복막암, 간세포암, 위암(위장암 포함), 췌장암, 교모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간암, 유방암, 결장암, 지결장암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 타액선 암종, 신장암, 간암, 전립선암, 음문암, 갑상선암, 간 암종 및 다양한 유형의 두경부암, 및 B-세포 림프종(저급/낭성 비호지킨 림프종(NHL); 소형 림프성(SL) NHL; 중급/낭성 NHL; 중급 미만성 NHL; 고급 면역아세포 NHL; 고급 림프아세포 NHL; 고급 소형 비절단 세포 NHL; 벌키 질환 NHL; 외투 세포 림프종; AIDS-관련 림프종; 및 발덴스트롬 마크로글로불리네마); 만성 림프성 백혈병(CLL); 급성 림프아세포 백혈병(ALL); 모발(Hairy) 세포 백혈병; 만성 골수아세포 백혈병; 및 이식후 림프증식성 질환(PTLD), 및 모반증과 연관된 비정상적 혈관 증식증, 부종(예컨대 뇌종양과 연관된 것), 메이그스 증후군이 포함된다. 보다 구체적으로, 본원의 항체로 치료할 수 있는 암은 유방암, 직결장암, 징장암, 비소세포 폐암, 비호지킨 림프종(NHL), 신장세포암, 전립선암, 간암, 췌장암, 연조직 육종, 카포시 육종, 카르시노이드 암종, 두경부암, 흑색종, 난소암, 중피종, 및 다발성 골수종을 포함한다. 일부 구체예에서, 본원의 항-VEGF 항체는 인간 환자에서 직결장암을 치료하는데 사용된다.

본원은 종양 성장을 지원하는 영상분을 제공하는데 요구되는 종양 혈관의 진행 억제를 목적으로하는 암 치료 전략, 항-혈관생성 요법을 포함한다. 혈관생성은 1자 종양 성장 및 전이 둘 모두를 포함하므로, 본원에 의해 제공되는 항혈관생성 치료는 1차 부위에서 종양의 신생 성장을 억제하고 2차 부위에서 종양의 전이를 저지할 수 있다.

본원의 항체로 치료할 수 있는 비신생성 병태는 망막 질환(예를 들면, 나이 관련 황반 변성) 및 면역 및 염증성 질환(예를 들면, 류마티스성 관절염, 건선, 아테롬성동맥경화, 당뇨병 및 미숙아 망막병증, 수정체후섬유 증식증, 혈관신생성 녹내장, 나이 관련 황반 변성, 갑상선 과형성증(그레이브 질환 포함), 각막 및 다른 조직 이식을 포함하는 다른 증식성 망막병증, 만성 염증, 폐 염증, 신증후군, 임신중독증, 복수증, 심낭 삼출증(예컨대 심막염과 연관된 것), 및 흉막 삼출증)을 포함한다.

따라서, 본원은 임의의 상기 질환의 치료를 필요로하는 환자에서 임의이 상기 질환을 치료하는 방법을 제공하고, 이 방법은 환자에게 본원의 항-VEGF 항체를 투여하는 것을 포함한다. 경우에 따라, 상기 투여는 반복되며, 예를 들어, 1일, 2일, 3일, 5일, 1주, 2주, 3주, 1개월, 5주, 6주, 7주, 8주, 2개월 또는 3개월 후에 반복된다. 반복 투여는 동일 용량이거나 또는 다른 용량일 수 있다. 투여는 1회, 2회, 3회, 4회, 5회, 6회, 7회, 8회, 9회, 10회, 또는 그 이상 반복될 수 있다. 예를 들면, 일정 투약 계획에 따라 환자는 장기간, 예를 들어 6개월, 1년 또는 그 이상 동안 항-VEGF 요법을 받는다. 환자에 투여되는 항-VEGF 항체의 양은 일정 구체예에서, 치료 유효량이다. 본원에서 사용되는 VEGF 항체의 "치료 유효"량은 단일 용량으로서 또는 치료 계획 동안, 예를 들어 1주, 2주, 3주, 1개월, 3개월, 6개월 1년, 또는 그 이상의 기간 동안 투여될 수 있다. 예시적인 치료 계획은 이하 섹션 6.11에 기술한다.

본원에 따라서, 질환 치료는 임의의 임상 병기 또는 징후로 임의 형태의 질환을 갖는다고 이미 진단받는 환자의 치료; 질환의 증상 또는 징후의 개시 또는 진행 또는 악화 또는 심화의 지연; 및/또는 질환 중증도 감소를 포함한다.

본원의 항-VEGF 항체가 투여되는 "피험체" 또는 "환자"는 바람직하게 포유동물 예컨대 비영장류(예를 들면, 소, 돼지, 말, 고양이, 개, 래트 등) 또는 영장류(예를 들면, 원숭이 또는 인간)이다. 일정 구체예에서, 피험체 또는 환자는 인간이다. 일정 측면에서, 인간은 소아 환자이다. 다른 측면에서, 인간은 성인 환자이다.

6.9 약학 조성물 및 투여 경로

본원의 항-VEGF 항체, 및 경우에 따라 1 이상의 추가 치료제, 예컨대 이하 섹션 6.10에 기술된 병용 치료제를 포함하는 조성물이 제공된다. 일반적으로 조성물은 보통 약학적으로 허용되는 담체를 포함하게 되는 멸균된, 약학 조성물의 일부로서 제공된다. 이 조성물은 임의의 적합한 형태일 수 있다(환자에 투여되는 목적 방법에 따름).

본원의 항-VEGF 항체는 다양한 경로, 예컨대 경구, 경피, 피하, 비강내, 정맥내, 근육내, 안내, 국소적, 척추강내 및 뇌실내로 투여될 수 있다. 임의의 주어진 상황에서 가장 적합한 투여 경로는 구체적인 항체, 피험체, 및 질환의 성질 및 중증도 및 피험체의 신체 상태에 따라 좌우된다.

망막 질환 이외의 징후를 치료하기 위한, 본원의 항-VEGF 항체의 유효량은 단일(예를 들어, 볼러스) 투여, 복수 투여 또는 연속 투여 당 약 0.1?약 75 mg/kg 범위이거나, 또는 단일(예를 들어, 볼러스) 투여, 복수 투여 또는 연속 투여 당 0.01-5000 ㎍/㎖의 혈청 농도를 얻을 수 있는 범위, 또는 치료하려는 병태, 투여 경루 및 피험체의 연령, 체중 및 상태에 따라 임의의 유효 범위 또는 그 범위내 값일 수 있다. 일정 구체예에서, 예를 들어, 암 치료를 위해 각 용량은 체중 1 kg 당 약 0.1 mg?약 50 mg, 예를 들면, 체중 1 kg 당 약 3 mg?약 25 mg 범위일 수 있다. 항체는 수용액으로서 제제화되고 피하 주사로 투여될 수 있다.

망막 질환(예를 들면, 나이 관련 황반 변성(AMD))의 치료를 위해, 이러한 용량은 적절하게 항-VEGF 항체 투여 눈에서 수양액 내 농도가 1-50 ㎍/㎖이 되게 한다. AMD의 치료를 위해, 각 용량은 0.1 mg?약 1 mg, 예를 들어 약 0.25?약 0.5 mg일 수 있다. 항체는 수용액으로서 제제화되어 유리체내 주사에 의해 투여될 수 있다.

약학 조성물은 용량 당 본원의 항-VEGF 항체의 예정량을 함유하는 단위 투약형으로 편리하게 존재할 수 있다. 이러한 단위형은 예를 들면 제한없이 0.1 mg?5 g, 예를 들면 1 mg?1 g, 또는 10?50 mg을 함유할 수 있다. 본원에서 사용하기 위한 약학적으로 허용되는 담체는 예를 들면 치료하려는 병태 또는 투여 경로에 따라 다양한 형태를 취할 수 있다.

본원의 항-VEGF 항체의 치료 제제는 원하는 순도의 항체를 당분야에서 통상 이용되는 선택적인 약학적 허용 담체, 부형제 또는 안정제(모두 본원에서는 "담체"라고 함), 즉 완충제, 안정화제, 보존제, 등장화제, 비이온성 계면활성제, 항산화제, 및 각종 첨가제와 혼합하여, 수용액 또는 동결건조 제제로서 보관용으로 제조될 수 있다. 이하 문헌을 참조한다: Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition(Osol, ed. 1980). 이러한 첨가제는 적용되는 용량 및 농도에서 수용자에게 무독성이어야만 한다.

완충제는 생리적 조건과 비슷한 범위로 pH를 유지하는 것을 돕는다. 이들은 약 2 mM 내지 약 50 mM 범위의 농도로 존재할 수 있다. 본원에서 사용하기 적합한 완충제는 유기산 및 무기산 및 이의 염 예컨대 시트레이트 완충제(예를 들어, 모노나트륨 시트레이트-디나트륨 시트레이트 혼합물, 시트르산-트리나트륨 시트레이트 혼합물, 시트르산-모노나트륨 시트레이트 혼합물 등), 숙시네이트 완충제(예를 들어, 숙신산-모노나트륨 숙시네이트 혼합물, 숙신산-수산화나트륨 혼합물, 숙신산-디나트륨 숙시네이트 혼합물 등), 타르트레이트 완충제(예를 들어, 타르타르산-타르타르산나트륨 혼합물, 타르타르산-타르타르산칼륨 혼합물, 타르타르산-수산화나트륨 혼합물 등), 푸마레이트 완충제(예를 들어, 푸마르산-모노나트륨 푸마레이트 혼합물, 푸마르산-디나트륨 푸마레이트 혼합물, 모노나트륨 푸마레이트-디나트륨 푸마레이트 혼합물 등), 글루코네이트 완충제(예를 들어, 글루콘산-글루콘산나트륨 혼합물, 글루콘산-수산화나트륨 혼합물, 글루콘산-글루콘산칼륨 혼합물 등), 옥살레이트 완충제(예를 들어, 옥살산-옥살란나트륨 혼합물, 옥살란-수산화나트륨 혼합물, 옥살란-옥살산칼륨 혼합물 등), 락테이트 완충제(예를 들어, 락트산-락트산나트륨 혼합물, 락트산-수산화나트륨 혼합물, 락트산-락트산칼륨 혼합물 등), 및 아세테이트 완충제(예를 들어, 아세트산-아세트산나트륨 혼합물, 아세트산-수산화나트륨 혼합물 등)를 포함한다. 부가적으로, 포스페이트 완충제, 히스티딘 완충제 및 트리메틸아민 염 예컨대 트리스가 사용될 수 있다.

보존제가 미생물 성장을 지연시키기 위해 부가될 수 있고, 0.2%-1% (w/v) 범위의 양으로 부가될 수 있다. 본원에서 사용하기 적합한 보존제는 페놀, 벤질알콜, 메타-크레졸, 메틸 파라벤, 프로필 파라벤, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드, 벤즈알코늄 할라이드(예를 들어, 클로라이드, 브로마이드 및 요오다이드), 헥사메토늄 클로라이드, 및 알킬 파라벤 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤, 카테콜, 레소르시놀, 시클로헥사놀, 및 3-펜탄올을 포함한다. 등장화제는 때때로 "안정화제"로도 알려져 있으며 이는 본원의 액체 조성물의 등장성을 보장하기 위해 부가될 수 있고, 다가 당알콜, 예를 들어, 3가 또는 고급 당알콜, 예컨대 글리세린, 에리쓰리톨, 아라비톨, 크실리톨, 솔미톨 및 만니톨 등을 포함할 수 있다. 안정화제는 광범위한 부형제 카테고리들을 의미하는데, 그 기능이 벌크화제부터 치료제를 가용화시키거나 또는 용기벽에 부착이나 변성을 방지하는 첨가제까지 다양할 수 있다. 전형적인 안정화제는 다가 당알콜(상기 열거한 것); 아미노산, 예컨대 아르기닌, 리신, 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 알라닌, 오르니틴, L-루신, 2-페닐알라닌, 글루탐산, 트레오닌, 등, 유기당 또는 당알콜, 예컨대 락토스, 트레할로스, 스타키요스, 만니톨, 솔비톨, 크실리톨, 리비톨, 마이오이니시톨, 갈락티톨, 글리세롤 등, 예를 들어 사이클리톨 예컨대 이노시톨; 폴리에틸렌글리콜; 아미노산 중합체; 황 함유 환원제, 예컨대 우레아, 글루타티온, 티옥트산, 나트륨 티오글리콜레이트, α-모노티오글리세롤 및 나트륨 티오설페이트; 저분자량 폴리펩티드(예를 들어, 10개 잔기 이하의 펩티드); 단백질 예컨대 인간 혈청 알부민, 소혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈 단당류, 예컨대 크실로스, 만노스, 프룩토스, 글루코스; 이당류 예컨대 락토스, 말토스, 수크로스 및 삼당류 예컨대 라피노스; 및 다당류 예컨대 덱스트란을 포함한다. 안정화제는 활성 단백질의 중량부 당 0.1 내지 10,000 중량부 범위로 존재할 수 있다.

비이온성 계면활성제 또는 세제("습윤제"라고도 알려짐)가 첨가되어 치료제의 가용화를 돕고, 교반에 의한 응집으로부터 치료제 단백질을 보호하며, 또한 단백질의 변성이 일어나지 않고 전단응력 표면에 제형이 노출될 수 있게 한다. 적절한 비이온성 계면활성제는 폴리솔베이트(20, 80 등), 폴리옥사머(184, 188 등), Pluronic 폴리올, 폴리옥시에틸렌 솔비탄 모노에테르(TWEEN？-20, TWEEN？-80 등) 등을 포함한다. 비이온성 계면활성제는 약 0.05 mg/㎖ 내지 약 1.0 mg/㎖의 범위, 예를 들어 약 0.07 mg/㎖ 내지 약 0.2 mg/㎖의 범위로 존재할 수 있다.

추가적인 각종 부형제에는 벌크화제(예를 들어, 전분), 킬레이트화제(예를 들어, EDTA), 항산화제(예를 들어, 아스코르브산, 메티오닌, 비타민 E), 및 공용매 등이 포함된다.

본원의 제제는 또한 본원의 항-VEGF 항체에 부가하여 병용 치료제를 함유할 수 있다. 적절한 병용 치료제의 예는 이하 섹션 6.10에 제공한다.

피하 투여를 위한 투약 스케줄은 질환 유형, 질환 중증도, 및 항-VEGF 항체에 대한 환자 감응도를 포함한 다수의 인자에 따라 6개월 마다 1회 내지 1일 단위 등 다양할 수 있다.

투여되는 본원의 항-VEGF 항체는 특정 항체, 질환 유형(예를 들어, 암, 염증 등), 피험체, 질환 중증도, 피험체의 신체 상태, 치료 계획(예를 들어, 병용 치료제의 사용 여부 등), 및 선택된 투여 경로에 따라 다양하며; 적절한 용량은 당분야의 숙련가가 쉽게 결정할 수 있다.

본원의 항-VEGF 항체의 최적량 및 개별 용량 간격은 치료하려는 병태의 성질 및 정도, 투여 형태, 경로 및 부위, 치료하려는 특정 피험체의 연령 및 상태에 따라 결정되고, 의사가 최종적으로 사용되는 적정 용량을 결정하게 된다는 점은 당분야의 숙련가가 인지하는 바이다. 이러한 투약은 적절하다면 자주 반복될 수 있다. 부작용이 일어나면 투약량 및/또는 빈도는 정상적인 임상 실시에 따라 변경되거나 또는 줄일 수 있다.

6.10 병용 요법

본원의 항-VEGF 항체를 활용할 수 있는 병용 방법을 이하에 기술한다. 본원의 병용 방법은 2 이상의 작용물(agent)을 환자에 투여하는 것을 포함하고, 제1 작용물은 본원의 항-VEGF 항체이고, 제2 작용물은 병용 치료제이다. 항-VEGF 항체 및 병용 치료제(들)는 동시에, 순차적으로 또는 개별적으로 투여될 수 있다.

본 발명의 병용 치료 방법은, 치료적으로 유효한 양으로 단독 투여되는 항-VEGF 항체 또는 병용 치료제가 제공하지 못하는, 부과 효과 이상을 생성시켜, 치료 잇점을 제공한다.

본 발명의 방법에서, 본원의 항-VEGF 항체 및 병용 치료제는 동시에 또는 연속적으로, 동시발생적으로 투여될 수 있다. 본원에서 사용시, 본원의 항-VEGF 항체 및 병용 치료제는 이들이 환자에게 동일한 날에 투여되면, 예를 들어 동일 환자 방문 동안 투여되면 연속적으로 투여된다고 할 수 있다. 연속 투여는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8 시간 떨어져 실시될 수 있다. 대조적으로, 본원의 항-VEGF 항체 및 병용 치료제는 이들이 다른 날 환자에 투여되면, 예를 들어, 본원의 항-VEGF 항체 및 병용 치료제가 1-일, 2-일 또는 3-일, 1주, 2주 또는 1개월 간격으로 투여될 수 있으면 개별적으로 투여된다고 한다. 본원의 방법에서 본원의 항-VEGF 항체의 투여는 병용 치료제의 투여에 앞서 또는 후속하여 실시될 수 있다.

비제한적인 예로서, 본원의 항-VEGF 항체 및 병용 치료제는 일정 기간 동안 동시발생적으로 투여되고, 이후 본원의 항-VEGF 항체 및 병용 투여제를 교대하는 2차 시기가 후속될 수 있다.

본원의 항-VEGF 항체와 병용 치료제를 투여하는 것의 잠재적인 상승 효과 때문에, 이러한 작용물은 작용물들 중 하나 또는 둘 모두가 단독으로 투여되는 경우, 치료적으로 유효하지 않은 양으로 투여될 수 있다.

일정 측면에서, 병용 치료제는 항혈관생성제, 항류마티스제, 항염증제, 화학요법제, 방사선치료제, 면역억제제 또는 세포독성제이다.

다양한 질환을 치료하는데 사용시, 본원의 항-VEGF 항체는 동일 또는 유사 질환에 적절한 다른 치료제와 병용할 수 있다는 것을 고려한다. 암 치료에 사용시, 본원의 항체는 통상적인 암 요법, 예컨대 수술, 방사선요법, 화학요법 또는 이의 조합과 병용할 수 있다.

일부 다른 측면에서, 본원의 항체와의 병용 종양 요법에 유용한 다른 치료제는 종양 성장에 관여하는 인자, 예컨대 EGFR, ErbB2(Her2라고도 알려짐), ErbB3, ErbB4, 또는 TNF-α의 길항제, 예를 들어 항체를 포함한다.

때때로, 암 및 면역 질환의 치료를 위해, 또한 환제에 1 이상의 사이토카인을 치료하는 것이 유용할 수 있다. 바람직한 구체예예서, VEGF 항체는 성장 억제제와 공동투여된다.

성장 억제제의 적합한 용량은 현재 사용되는 용량이고 성장 억제제와 항-VEGF 항체의 조합 작용(상승적)에 기인하여 낮아질 수 있다.

암, 면역 질환 및 망막 질환 치료를 위해, 항염증제가 본원의 항-VEGF 항체와 병용하여 적절하게 사용될 수 있다. 항염증제는 제한없이, 아세트아미노펜, 디펜히드라민, 메페리딘, 덱사메타손, 펜타사 메살라진, 아사콜, 코데인 포스페이트, 베노릴레이트, 펜부펜, 나프로신, 디클로페낙, 에토돌락 및 인도메타신, 아스피린 및 이부프로펜을 포함한다.

암 치료를 위해, 화학요법제가 본원의 항-VEGF 항체와 조합하여 적절하게 사용될 수 있다. 화학요법제는, 제한없이, 방사능 분자, 세포 생존능에 유해한 임의의 제제를 포함하는 세포독소 또는 세포독성제라고도 하는 톡신, 제제, 화학요법 화합물을 함유하는 리포솜 또는 다른 소포체를 포함한다. 적절한 화학요법제의 예로는 이에 제한되는 것은 아니고, 1-데히드로테스토스테론, 5-플루오로우라실 데카르바진, 6-머캅토퓨린, 6-티오구아닌, 악티노마이신 D, 아드리아마이신, 알데스류킨, 항-α5β1 인테그린 항체, 알킬화제, 알로퓨리놀 나트륨, 알트레타민, 아미포스틴, 아나스트로졸, 안트라마이신(AMC), 항유사분열제, 시스디클로로디아민 플래티늄(II)(DDP) 시스플라틴), 디아미노 디클로로 플라티늄, 안트라사이클린, 항생제, 항대사물질제, 아스파라기나아제, BCG 생백신(방광내), 베타메타손 나트롬 포스페이트 및 베타메타손 아세테이트, 비칼루타미드, 블레오마이신 설페이트, 부설판, 칼슘 류코우오린, 칼리케아미신, 카페시타빈, 칼보플라틴, 로무스틴((CCNU), 카르무스틴(BSNU), 클로람부실, 시스플라틴, 클라드리빈, 콜키신, 접합된 에스트로겐, 사이클로포스파미드, 사이클로토스파미드, 사이타라빈, 사이타라빈, 사이토칼라신 B 사이톡산, 다카라바진, 닥티노마이신, 닥티노마이신(이전에 악티노마이신), 다우니루비신 HCL, 다우노루비신 사이트레이트, 데닐루킨 디프티톡스, 덱스라족산, 디프로모만니톨, 디히드록시 안트라신 디온, 도세탁셀, 돌라세트론 메실레이트, 독소루비신 HCL, 드로나비놀, 이.콜라이(E. coli) L-아스파라기나아제, 에올로식시맙, 에메틴, 에포에틴-α, 어위니아 L-아스파라기나아제, 에스테르화 에스트로겐, 에스트라디올, 에스트라무스틴 포스페이트 나트륨, 에티디움 프로마이드, 에티닐 에스트라디올, 에티드로네이트, 에토폭시드 시트로로룸 인자, 에토폭시드 포스페이트, 필그라스팀, 플록수리딘, 플루코나졸, 플루다라빈 포스페이트, 플루오로우라실, 플루타미드, 폴린산, 젬시타빈 HCL, 글루코코르티코이드, 고세렐린 아세테이트, 그라미시딘 D, 그라니세트론 HCL, 히드록시우레아, 이다루비신 HCL, 이포스파미드, 인터페론 α-2b, 이리노테칸 HCL, 레트로졸, 류코보린 칼슘, 류프롤리드 아세테이트, 레바미솔 HCL, 리도카인, 로무스틴, 마이탄시노이드, 메클로레타민 HCL, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 메게스트롤 아세테이트, 멜팔란 HCL, 머캅티퓨린, 메스나, 메토트렉세이트, 메틸테스토스테론, 미트라마이신, 미토마이신 C, 미토탄, 미톡산트론, 닐루타미드, 옥트레오티드 아세테이트, 온단세트론 HCL, 팍클리탁셀, 파미드로네이트 디나트륨, 펜토스타틴, 필로카르핀 HCL, 플리마이신, 카르무스틴 이식물과 폴리페프로산 20, 포르피머 나트륨, 프로카인, 프로카르바진 HCL, 프로프라놀롤, 리툭시맙, 사르그라모스팀, 스트렙토조토신, 타목시펜, 탁솔, 페니포시드, 테노포시드, 테스톨락톤, 테트라카인, 티오에파 클로람부실, 티오구아닌, 티오테파, 토포테칸 HCl, 토레미펜 시트레이트, 트라스투주맙, 트레티노인, 발루비신, 빈블라스틴 설페이트, 및 비노렐빈 타르트레이트가 포함된다.

예컨대 [Carmeliet and Jain, 2000, Nature 407:249-257]에 열거된 것을 포함하여, 임의의 항혈관생성제가 본원의 항-VEGF 항체와 함께 사용될 수 있다. 일정 구체예에서, 항혈관생성제는 다른 VEGF 길항제 또는 VEGF 수용체 길항제 예컨대 VEGF 변이체, 가용성 VEGF 수용체 단편, VEGF 또는 VEGFR을 차단할 수 있는 앱타머, 중화 항-VEGFR 항체, VEGFR 티로신 키나아제의 저분자량 억제제 및 이의 임의 조합 등이다. 다르게, 또는 부가적으로, 2 이상의 항-VEGF 항체는 환자에게 공동투여될 수 있다.

일정 구체예에서, 호르몬 요법이 본원의 항-VEGF 항체와 함께 사용될 수 있다. 일부 구체예에서, 호르몬 요법제는 암 세포 성장을 촉진하는 에스트로겐 및/또는 프로게스테론을 억제하는 1 이상의 작용물, 예컨대 선택적 에스트로겐-수용체 조절인자 예컨대 탐옥시펜, 아로마타아제 억제제 예컨대 아나스트로졸(Arimidex？) 또는 레트로졸(Femara), 아로마타아제 불활성인자 예컨대 엑세메스탄(Aromasin？), 에스트로겐 생성을 억제하는 작용물 예컨대 고세렐린(Zoladex)을 포함한다. 다른 구체예에서, 호르몬 요법은 난소로부터 호르몬 생성을 억제하는 1 이상의 작용물이다.

일부 측면에서, 항-VEGF 항체는 소형 분자 단백질 티로신 키나아제(PTK) 억제제와 함께 사용될 수 있다. 일부 구체예에서, PTK 억제제는 VEGF 수용체 티로신 키나아제에 특이적이다. 다른 구체예에서, PTK 억제제는 티로신 키나아제의 VEGF 수용체 패밀리(예를 들면, VEGFR-1, VEGFR-2) 중 하나 이상에 결합된다. 다른 구체예에서, 본 발명의 조성물 및 방법에 유용한 단백질 티로신 키나아제 억제제는 수용체 티로신 키나아제의 VEGF 패밀리에 선택적으로 결합하고, 또한 다른 단백질 패밀리 HER2, HER3, HER4, PDGFR, 및/또는 Raf의 티로신 키나아제 도메인에 결합하는 PTK 억제제를 포함한다.

일부 구체예에서, 티로신 키나아제는 수용체 티로신 키나아제로서, 즉 세포외 리간드 결합 도메인을 가지며 1 이상의 리간드 결합에 의해 활성화되는, 거대 단백질의 세포내 도메인이다. 일정 구체예에서, 단백질 티로신 키나아제는 비수용체 티로신 키나아제이다. 본원의 방법에서 사용하기 위한 PTK 억제제는 제한없이, 제피티닙(ZD-1839, Iressa？), 엘로티닙(OSI-1774, Tarceva™), 카네르티닙(CI-1033), 반데타닙(ZD6474, Zactima？), 티르포스틴 AG-825(CAS 149092-50-2), 라파티닙(GW-572016), 소라페닙(BAY43-9006), AG-494(CAS 133550-35-3), RG-13022(CAS 149286-90-8), RG-14620(CAS 136831-49-7), BIBW 2992(Tovok), 티르포스틴 9(CAS 136831-49-7), 티르포스틴 23(CAS 118409-57-7), 티르포스틴 25(CAS 118409-58-8), 티르포스틴 46(CAS 122520-85-8), 티르포스틴 47(CAS 122520-86-9), 티르포스틴 53(CAS 122520-90-5), 부테인(1-(2,4-디히드록시페닐)-3-(3,4-디히드록시페닐)-2-프로펜-1-온2',3,4,4'-테트라히드록시칼콘; CAS 487-52-5), 커큐민((E,E)-1,7-비스(4-히드록시-3-메톡시페닐)-1,6-헵타디엔-3,5-디온; CAS 458-37-7), N4-(1-벤질-1H-인다졸-5-일)-N6,N6-디메틸-피리도[3,4-d]-피리미딘-4,6-디아민(202272-68-2), AG-1478, AG-879, 시클로프로판카르복실산-(3-(6-(3-트리플루오로메틸-페닐아미노)-피리미딘-4-일아미노)-페닐)-아미드(CAS 879127-07-8), N8-(3-클로로-4-플루오로페닐)-N2-(1-메틸피페리딘-4-일)-피리미도[5,4-d]피리미딘-2,8-디아민 2HCl(CAS 196612-93-8), 4-(4-벤질옥시아닐리노)-6,7-디메톡시퀴나졸린(CAS 179248-61-4), N-(4-((3-클로로-4-플루오로페닐)아미노)피리도[3,4-d]피리미딘-6-일)2-부틴아미드(CAS 881001-19-0), EKB-569, HKI-272, 및 HKI-357를 포함한다.

특정 구체예에서, 본원의 항-VEGF 항체는 정맥내 5-플루오로우라실계 화학요법과 병용하여 사용된다. 이러한 병용요법은 특히 결장 또는 직장의 전이성 암종이 있는 환자의 1차 또는 2차 치료에 적합하다.

다른 특정 구체예에서, 본원의 항-VEGF 항체는 카르보플라틴 및 팍클리탁셀과 병용하여 사용된다. 이러한 병용법은 특히 절제불가한, 국소 진행형, 재발성 또는 전이성 비편평, 비소세포 폐암을 갖는 환자의 1차 치료에 적합하다.

또 다른 특정 구체예에서, 본원의 항-VEGF 항체는 박클리탁셀과 병용하여 사용된다. 이러한 병용법은 특히 전이성 HER2-음성 유방암에 대한 화학요법을 받지 않은 환자의 치료에 적합하다.

망막 질환의 치료를 위해, 본원의 항-VEGF 항체는 항-혈소판 유래 성장 인자(PDGF) PEG화 앱타머; 보체 캐스캐이드의 C5 성분을 표적화하는 PEG 앱타머, ARC1905; 및 α5β1 인테그린 경막 수용체를 표적화하는 단일클론 항체, 볼록시시맙; Visudyne？(PDT); 또는 Macugen？, 앱타머(페갑타닙 나트륨)과 병용하여 사용될 수 있다.

6.11 치료 계획

본원은 본원의 항-VEGF 항체의 투여를 포함하는 치료 계획을 제공한다. 치료 계획은 환자의 연령, 체중, 및 질환 병태에 따라 다양할 수 있다. 치료 계획은 2주 내지 무기한 동안 계속될 수 있다. 특정 구체예에서, 치료 계획은 2주 내지 6개월, 3개월 내지 5년, 6개월 내지 1 또는 2년, 8개월 내지 18개월 등 동안 계속된다. 치료 계획은 비가변적 용량 계획 또는 북수의 가변적 용량 계획일 수 있다.

이하 기술된 예시적인 투약 계획을 위해, 항-VEGF 항체는 피하 주사용 멸균된, 보존제 무함유 용액으로서 투여될 수 있다.

전이성 직결장암의 치료를 위해, 본원의 항-VEGF 항체는 볼러스-IFL(이리노테칸, 5-플루오로우라실 및 류코보린 치료제)와 함께 2주 마다 0.5?15 mg/kg의 용량으로 정맥내 투여된다. 특정 구체예에서, 용량은 볼러스-IFL와 함께 2주마다 1-4 mg/kg, 2-6 mg/kg, 0.5-3 mg/kg, 1-10 mg/kg, 3-4.8 mg/kg 또는 1-4.5 mg/kg이다.

전이성 직결장 암의 치료를 위한 다른 구체예에서, 본원의 항-VEGF 항체는 FOLFOX4(옥살리플라틴, 류코보린, 및 플루오로우라실 치료제)와 함께 2주마다 1-30 mg/kg의 용량이 정맥내 투여된다. 특정 구체예에서, 용량은 FOLFOX4와 함께 2주 마다 2-9 mg/kg, 3-12 mg/kg, 1-7.5 mg/kg, 2-20 mg/kg, 6-9.75 mg/kg 또는 4-9.5 mg/kg이다.

비편평 비소세포 폐암의 치료를 위해, 본원의 항-VEGF 항체는 카르보플라틴/팍클리탁셀과 함께 3주마다 2-40 mg/kg의 용량이 정맥내 투여된다. 특정 구체예에서, 용량은 카르보플라틴/팍클리탁셀과 함께 3주마다 5-14 mg/kg, 4-20 mg/kg, 10-17.5 mg/kg, 7-14 mg/kg, 10-30 mg/kg 또는 3-30 mg/kg이다.

전이성 유방암의 치료를 위해, 본원의 항-VEGF 항체는 팍클리탁셀과 함께 2주마다 0.5-20 mg/kg의 용량으로 정맥내 투여된다. 특정 구체예에서, 용량은 팍클리탁셀과 함께 2주마다 1-4 mg/kg, 2-6 mg/kg, 0.5-3 mg/kg, 1-10 mg/kg, 3-4.8 mg/kg 또는 1-4.5 mg/kg이다.

전이성 유방암의 치료를 위해, 본원의 항-VEGF 항체는 단일요법제로서 2주마다 0.5-20 mg/kg의 용량으로 정맥내 투여된다. 특정 구체예에서, 용량은 단일요법제로서 2주마다 1-4 mg/kg, 2-6 mg/kg, 0.5-3 mg/kg, 1-10 mg/kg, 3-4.8 mg/kg 또는 1-4.5 mg/kg이다.

나이 관련 황반 변성증(AMD)의 치료를 위해, 본원의 항-VEGF 항체는 1개월(대략 28일) 당 1회 유리체내 주사에 의해 0.1-1 mg의 용량이 투여된다. 특정 구체예에서, 용량은 1개월(대략 28일) 당 1회 유리체내 주사에 의해 0.1-0.4 mg, 0.2-0.6 mg, 0.1-0.25 mg, 0.25-0.5 mg, 0.25-0.75 mg, 또는 0.3-0.45 mg이다. 특정 구체예에서, 본원의 항-VEGF 항체로 치료되는 환자는 습식 AMD를 갖는다. 다른 특정 구체예에서, 환자는 건식 AMD를 갖는다.

6.12 진단 및 약학 키트

본원은 본원의 항-VEGF 항체(항체 접합체 포함)를 함유하는 약학 키트를 포함한다. 약학 키트는 본원의 항-VEGF 항체(예를 들어, 동결건조형 또는 수용액으로서) 및 이하 중 1 이상을 포함하는 팩키지이다:

. 예를 들어, 상기 섹션 6.10에 기술된 바와 같은 병용 치료제;

. 항-VEGF 항체 투여용 디바이스, 예를 들어, 펜, 바늘 및/또는 시린지; 및

. 항체가 동결건조형인 경우 항체를 재현탁하기 위한 약학 등급수 또는 완충액.

일정 측면에서, 항-VEGF 항체의 각 단위 용량이 개별적으로 포장되고, 키트는 1 이상의 단위 용량(예를 들어, 2회 단위 용량, 3회 단위 용량, 4회 단위 용량, 5회 단위 용량, 8회 단위 용량, 10회 단위 용량, 또는 그 이상)을 함유한다. 특정 구체예에서, 1 이상의 단위 용량은 각각 시린지 또는 펜에 수용된다.

본원의 항-VEGF 항체(항체 접합체 포함)를 함유하는 진단 키트가 또한 본원에 포함된다. 진단 키트는 본원의 항-VEGF 항체(예를 들어, 동결건조형 또는 수용액으로서) 및 진단 분석 수행에 유용한 1 이상의 시약을 포함하는 팩키지이다. 항-VEGF 항체가 효소로 표지된 경우, 키트는 효소가 필요로하는 보조인자 및 기질(예를 들어, 검출가능한 발색단 또는 형광단을 제공하는 기질 전구체)을 포함할 수 있다. 또한, 다른 첨가제, 예컨대 안정화제, 완충제(예를 들어, 차단 완충제 또는 용해 완충제) 등을 포함할 수 있다. 일정 구체예에서, 진단 키트에 포함되는 항-VEGF 항체는 고체 표면 상에 고정되거나, 또는 항체가 고정될 수 있는 표면(예를 들어, 슬라이드)이 키트에 포함된다. 다양한 시약의 상대량은 분석 감도를 실질적으로 최적화하는 시약 용액 내 농도를 제공하도록 광범위하게 다양할 수 있다. 특정 구체예에서, 항체 및 1 이상의 시약은 용해시 적정 농도의 시약 용액을 제공하게 되는 부형제를 포함하여, 일반적으로 동결건조된, 건조 분말로서 제공된다(개별적으로 또는 조합하여).

7. 실시예 1: 베바시주맙의 T-세포 에피토프의 동정

7.1 재료 및 방법

7.1.1 펩티드

펩티드는 Mimotopes(Adelaide, Australia)의 멀티-핀 포맷을 이용해 합성하였다. 베바시주맙 경쇄 및 중쇄 V 영역의 서열은 총 69 펩티드에 대해 12개 아미노산(표 3 및 4)이 중첩되는 15-머 펩티드로서 합성하였다. 도착된 펩티드는 동결건조된 것이고 대략 1-2 mg/㎖으로 DMSO(Sigma-Aldrich)에 재현탁하였다. 스톡 펩티드는 -20℃에 냉동시켰다.

7.1.2 인간 말초혈 단핵 세포

커뮤니티 도너의 버피 코트 산물을 스탠포드 혈액 센터(Palo Alto, CA)에서 구매하였다. 버피 코트를 칼슘 또는 마그네슘을 함유하지 않는 DPBS와 1:1(v:v)로 희석하였다. 희석된 버피 코트 물질(25-35 mL)을 12.5 mL의 FicollPaque-PLUS(GE Healthcare)를 함유하는 50 mL 코니칼 원심분리 튜브(Sarsted 또는 Costar) 바닥에 깔았다. 샘플을 실온에서 30분간 900 g에서 원심분리하였다. 말초혈 단핵 세포(PBMC)를 계면으로부터 회수하였다. DPBS를 부가하여 최종 부피가 50 mL이 되게 하였고 세포를 350 g에서 5분간 원심분리하였다. 펠렛화된 세포를 DPBS에 재현탁하고 계측하였다.

7.1.3 수지상 세포

수지상 세포의 단리를 위해, T75 배양 플라스크(Costar)에 총 부피 30 mL AIM V 배지(Invitrogen) 중 10⁸개의 신선하게 단리된 PBMC를 파종하였다. 과량의 PBMC는 5 x 10⁷ 세포/㎖로 90% 태아소 혈청(FCS), 10% DMSO 중에서 -80℃에 냉동시켰다. T75 플라스크는 2시간 동안 5% CO₂에 37℃에서 항온반응시켰다. 미부착 세포를 제거하고, 부착된 단층은 DPBS로 세척하였다. 단핵구로부터 수지상 세포를 분화시키기 위해, 800 units/㎖의 GM-CSF(R&D Systems) 및 500 units/㎖의 IL-4(R&D Systems)를 함유하는 30 mL의 AIM V 배지를 부가하였다. 플라스크는 5일 동안 항온반응시켰다. 5일에, IL-1α(Endogen) 및 TNF-α(Endogen)를 50 pg/㎖ 및 0.2 ng/㎖로 부가하였다. 플라스크는 2일 이상 동안 항온반응시켰다. 7일에, 수지상 세포는 10 mM EDTA 및 16.5?33 ㎍/㎖ 미토마이신 C의 최종 농도가 되도록 0.5?1.0 mg 미토마이신 C(Sigma-Aldrich)를 함유하는 100 mM EDTA 3 mL을 부가하여 회수하였다. 플라스크는 추가 시간 동안 37℃ 및 5% CO₂에서 항온반응시켰다. 수지상 세포를 회수하고 AIM V 배지로 2-3회 세척하였다.

7.1.4 세포 배양

7일에, 이전에 냉동된 자가 PBMC를 37℃ 수조에서 신속하게 해동시켰다. 세포를 즉시 DPBS 또는 AIM V 배지에 희석하고 350 g에서 5분간 원심분리하였다. CD4+ 세포를 자성 비드(Easy-Sep CD4+ kit, Stem Cell Technologies)를 이용한 음성 선별을 통해 농축시켰다. 자가 CD4+ T 세포 및 수지상 세포는 96웰 둥근 바닥 플레이트(Costar 9077)의 웰 당 2 x 10⁴ 수지 세포 당 2 x 10⁵ CD4+ T 세포로 하여 공동배양하였다. 펩티드를 대략 5 ㎍/㎖로 부가하였다. 대조군 웰은 DMSO(Sigma) 비히클을 단독으로 0.25% v:v로 함유하였다. 양성 대조군은 0.25%의 DMSO 및 1 ㎍/㎖의 파상풍 톡소이드(List Biologicals or CalBioChem)를 함유시켰다. 배양물을 5일간 항온배양하였다. 5일에, 웰 당 0.25 μCi의 삼중 티미딘(Amersham or GE Healthcare)을 부가하였다. 6일에 배양물을 팩커드 필터메이트 세포 회수기를 이용해 필터매트에 회수하였다. Wallac MicroBeta 1450 섬광 계측기(Perkin Elmer)를 이용해 섬광 계측을 수행하였다.

7.1.5 데이타 분석

평균 백그라운드 CPM 값은 6 내지 12회 반복물에서 얻은 개별 실험을 평균내어 계산하였다. 4개의 양성 대조군 웰의 CPM 값을 평균내었다. 각 펩티드의 이중실험 또는 삼중실험 웰을 평균내었다. 양성 대조군 및 펩티드 웰에 대한 자극 지수 값은 평균 대조군값으로 평균 실험 CPM 값을 나누어 계산하였다. 데이타세트에 포함시키기 위해, 파상풍 톡소이드 양성 대조군 웰에 3.0이 넘는 자극 지수가 요구되었다. 자극 지수가 2.95 또는 그 이상으로 나오는 임의의 펩티드에 대한 반응을 주목하였다. 99명의 도너 그룹에서 얻은 말초혈 샘플을 이용해 펩티드를 테스트하였다. 모든 펩티드에 대한 반응을 수집하였다. 테스트한 각 펩티드에 대해, 2.95 이상의 자극 지수로 반응하는 도너 세트의 비율을 계산하였다. 또한, 모든 도너에 대한 평균 자극 지수를 계산하였다.

7.2 결과

7.2.1 베바시주맙 VH 및 VL 영역 내 CD4 + T 세포 에피토프의 동정

CD4⁺ T 세포 에피토프 펩티드는 99 도너 세트 내에서 펩티드에 대한 반응율을 분석하여 동정하였다. 평균 반응율 및 표준 편차는 베바시주맙 중쇄 및 경쇄 V 영역을 설명하는 테스트된 모든 펩티드에 대해 계산하였다. 3 표준 편차를 더한 평균 백그라운드 반응 이상의 반응율을 잠재적인 CD4⁺ T 세포 에피토프로 고려하였다. 베바시주맙 경쇄 V 영역에 대해, 32 펩티드를 테스트하였고(표 3) 그 결과 평균 백그라운드 반응율이 2.1 ± 2.7%였다. 백그라운드 보다 높은 3 표준 편차는 10.2%로 확인되었다. 위치 13의 한 펩티드(Q40-T54)는 베바시주맙 경쇄 펩티드 데이타 세트에서 이러한 수준의 반응을 나타냈고, 반응율은 15.2%였다(도 2A). 베바시주맙 중쇄 V 영역의 경우, 37개 펩티드를 테스트하였다(표 4). 평균 백그라운드 반응율은 2.8 ± 3.1%였다. 백그라운드보다 높은 3 표준 편차는 12.1%였다. 베바시주맙 중쇄 데이타세트 내 한 펩티드, #18(N52-R56)는 반응율이 16.2%였다(도 3A). 중쇄 데이타세트 중 위치 #30에서의 제2 펩티드는 반응율이 9.1%였고, 높은 자극 지수때문에 에피토프로 여겨졌다(이하 참조).

평균 자극 지수는 데이타세트 내 모든 펩티드에 대해 계산하였다. 경쇄 펩티드 13은 1.82 ± 0.24 s.e.m.의 높은 평균 자극 지수를 가졌다(도 2B). 중쇄 펩티드 #18은 평균 자극 지수 값이 2.16 ± 0.35 s.e.m.였다(도 3B). 위치 #30의 펩티드는 상승된 평균 자극 지수와 높은 평균 반응율에 기인하여 평균 자극 지수가 1.45 ± 0.18 s.e.m.로 되돌아갔다(도 3B). 위치 #30의 펩티드는 이 항체 V 영역의 CD4⁺ T 세포 에피토프 함량 결정때 포함시켰다. 이들 자극 지수 값 모두는 2 데이타세트 내 모든 펩티드에 대한 평균 자극 지수보다 상당히 높았다(모든 69 중쇄 및 경쇄 펩티드에 대해 1.14 ± 0.07).

이들 데이타는 베바시주맙 V 영역 내에 3개의 CD4+ T 세포 에피토프 영역이 존재함을 시사한다(표 5). VL 영역에서, 에피토프는 CDR2로부터 2 아미노산 및 프레이워크 2를 포함하는 펩티드 위치 13에서 확인되었다. 서열은 인간화 동안 서열에 합입된 쥐 복귀 돌연변이(V46)를 포함한다. 표 5에서, CDR-유래 아미노산은 밑줄표시하였다. 중쇄에서, 2 에피토프 펩티드 영역이 동정되었다. 위치 #18에서 보다 강한 에피토프는 CDR2 모두를 포함한다. 제2 에피토프 펩티드 영역은 프레임워크 3 및 CDR3 아미노산 둘 모두를 포함한다.

7.2.2 베바시주맙 변이체 항체의 면역원성 감소 변이체

베바시주맙에 대해 돌연변이 분석을 실시하였다(이하 실시예 2 참조). 돌연변이 분석과 함께 수행된 항원-결합 실험을 기초로, VEGF에 대한 항체의 친화도를 유의하게 감소시키니 않는 CDR-H2 및 CDR-H3 영역 내 후보 아미노산 치환 세트를 동정하였다(표 6). 이들 아미노산 치환은 단독으로 그리고 조합하여 테스트되어, 야생형 항체와 비교해 면역원성이 감소된 베바시주맙 변이체를 동정하였다.

8. 실시예 2: VEGF 에 대한 친화도가 증가된 베바시주맙 변이체의 동정

베바시주맙 항체에 대해 종합적인 돌연변이 분석을 실시하여 베바시주맙과 비교해 VEGF에 대한 친화도가 증가된 돌연변이체를 동정하였다. 베바시주맙과 비교해 VEGF에 대한 친화도가 증가된 후보 고친화도 돌연변이체를 BIAcore 분석하여 그들 결함 특성을 확인하였다.

8.1 재료 및 방법

8.1.1 BIAcore

15개 변이 베바시주맙 VH 영역 컨스트럭트를 비변형 VL 영역과 함께 인간 IgG₁-포함 플라스미드에 클로닝하고, 일시적 형질감염에 의해 293T/17 세포주에서 발현시키고, 항체를 단백질 A 또는 단백질 G 친화성을 통해 정제하였다. VEGF에 대한 항체의 친화도(R&D systems, Minneapolis, MN)는 BIAcore 2000 및 3000 표면 플라스몬 공명 시스템(BIAcore, GE Healthcare, Piscataway, NJ)을 이용해 확인하였다. 다클론 염소 항-인간 Fc 항체(Jackson Immunoresearch)를 먼저 표준 BIAcore 아민 커플링 시약(N-에틸-N'-디메틸아미노-프로필카르보디이미드, EDC; N-히드록시숙신이미드, NHS; 및 에탄올아민 HCl, pH 8.5)을 이용해 바이오센서 표면에 고정시킨 후, 5 ㎕/분의 낮은 유속에서 평행 표면 상의 항-VEGF 항체(베바시주맙 및 베바시주맙 변이체)의 포획을 실시하였다. RL은 낮게 유지하여 VEGF의 이량체 성질로 인한 결합력(avidity)를 최소화시켰다. 음성 대조군으로서 제공하기 위해 기준 표면에서 항체 포획을 하지 않았다. 이후, VEGF를 모든 유세포에 50 ㎕/분의 유속으로 2분간 주입하여 회합을 모니터링한 후 25분간 HBS-P 러닝 완충액(10 mM HEPES, 150 mM 염화나트륨, 0.005% P-20, pH 7.4)을 주입하여 해리상을 모니터링하였다. 각 사이클에서, 0 nM 내지 512 nM 범위이고 4배씩 증가되는 6가지 다른 VEGF 농도의 VEGF를 표면 상에 주입하였다. 표면은 각 사이클 종료시 2회의 간단한 펄스로 100 ㎕/분의 유속에서 1.5% H₃PO₄를 이용해 재생시켰다. 결합 데이타는 1:1 랑뮤어 모델에 적합화시켜서 BIABIAevaluate 소프트웨어로부터 결합 상수를 추출했다. 기준 표면 및 완충액 단독 대조군으로부터 백그라운드 반응을 제거하기 위해 각 분석에 이중 기준을 적용하였다. 모든 결합 동역학 데이타는 적어도 3회 개별 측정으로 분석하였다.

8.2 결과

결화는 야생형에 대한 배수 증가로서 그리고 절대 수치로서 나타냈다. 열거된 거의 모든 변이체가 베바시주맙 또는 야생형과 비교시 개선된 회합율(k_on) 및 해리율(k_off)을 가졌다. 변이체에 대한 최종 친화도 값은 0.1 nM 범위 내였고 서열번호 82에 상응하는 변이체에 대해 0.08 nM 정도로 낮게 도달하였다. 이러한 값들은 이들 실험에서 측정된 친화도가 1.9 nM인 베바시주맙과 대조적이다.

표 8 및 9는 예비 결합 실험에서 베바시주맙보다 VEGF에 대한 친화도가 더 높았던 추가 중쇄 변이체를 보여준다(데이타 도시하지 않음). 표 10은 예비 실험에서 베바시주맙과 유사한 VEGF에 대한 친화도를 갖는 것으로 확인된 중쇄 변이체를 나타낸 것이다(데이타 도시하지 않음). 표 11은 예비 실험에서 베바시주맙과 유사한 VEGF 친화도를 갖는 것으로 나타난 경쇄 변이체를 나타낸 것이다(데이타 도시하지 않음).

9. 실시예 3: 탈면역화된 변이체 펩티드의 선별

베바시주맙의 면역원성 영역에 상응하는 변이체 펩티드(실시예 1 참조)를 생성시켰다(표 14-16). 실질적으로 VEGF에 대한 베바시주맙의 결합 친화도를 감소시키지 않는 CDR 변형이 동정된, 실시예 2에 기술된 종합 돌연변이 분석을 기준으로 변이체 펩티드를 선별하였다.

총 77개 펩티드를 합성하였고 항원-결합 실험을 기준으로 테스트하였으며, 모 15-머 펩티드 각각의 2 합성물이 포함된다. 총 93 도너를 섹션 7.1에 기술한 방법을 이용해 모 펩티드 및 변이 펩티드를 사용하여 테스트하였고 결과를 도 4a-4c에 도시하였다. 구체적으로, 도 4a-4c는 돌연변이체 베바시주맙 에피토프 펩티드에 대한 CD4+ T 세포 반응을 보여준다. 미변형 모 에피토프 서열에 대한 평균 반응은 오픈 마크로 표시하였다. 큰 원형은 표 17에 나타낸 선별 펩티드를 의미한다(이하 참조). 도 4a는 VH CDR2 펩티드를 도시한 것이고; 도 4b는 VH CDR3 펩티드를 도시한 것이며; 도 4c는 VL CDR2 펩티드를 도시한 것이다. 선별된 펩티드에 대한 면역원성은 표 17에 나타냈다.

중쇄 가변 영역 CDR2 펩티드의 경우, 이 실험에서 모 펩티드에 대한 평균 반응율이 5.38% 및 6.45%였다. 3개의 돌연변이체 펩티드는 모 펩티드와 비교하여 전체적인 반응율 및 평균 자극 지수가 감소된 것으로 확인되었다.

이 실험에서 중쇄 가변 영역 CDR3 에피토프 펩티드에 대한 모 펩티드 반응율은 7.53% 및 6.45%였다. 모 펩티드와 비교하여 전체적인 반응을 감소시키는 것으로 확인된 단일 돌연변이 펩티드 서열이 발견되었다.

마지막으로, 이 실험에서 경쇄 가변 영역 CDR2 펩티드 모 반응율은 25.8% 및 15%였다. 모 펩티드와 비교하여 전체 면역원성을 감소시키는 것으로 확인된 한 돌연변이 펩티드가 동정되었다.

탈면역화 돌연변이가 베바시주맙과 비교해 VEGF에 대한 친화도를 유지시키는지를 확인하기 위해, 유세포측정법을 사용해 변형된 에피토프 펩티드에 돌연변이가 도입된 변이 항체의 결합 특성을 비교하였다(단일 또는 이중 아미노산 변형으로서 및 베바시주맙). 몇몇 탈면역화 돌연변이는 베바시주맙과 비교하여 VEGF에 대한 친화도가 유사하거나 또는 증가되었다.

한 실험에서, 표면 결합형의 베바시주맙 변이체를 발현하는 일시적 형질감염 293c18 세포를 3 nM의 Alexa647-접합된 rHuVEGF(Invitrogen Cat #PHG0143) 및 1:400 희석한 염소-항-인간-카파-RPE(Southern Biotech Cat#2063-09)로 염색하였다. DakoCytomation CyAn ADP 유세포측정기를 이용한 유세포측정법으로 데이타를 모으고 Treestar's FloJo 분석 프로그램을 이용해 분석하였다. 이 실험에서 측정된 평균 형광발광 강도(MFI)는 표 18에 기재하였다.

다른 실험에서, VEGF에 대한 베바시주맙 및 변이 항체 결합의 EC₅₀를 측정하였다. 5 μM 내지 0.01 μM로 VEGF를 연속 2배 희석하여, 상기 기술된 바와 같이 Alexas647-접합된 rHu VEGF와 베바시주맙 및 그 변이체를 이용해 항체 적정 그래프를 만들었다. EC₅₀ 값은 표 19에 나타냈다.

10. 특정 구체예 , 참조문헌의 인용

본원에서 인용되는 모든 공개물, 특허, 특허 출원 및 다른 문헌들은 각 개별 공개물, 특허, 특허 출원 또는 다른 문서들이 모든 목적을 위해 참조되어 포함된다고 개별적으로 표시된 것과 동일한 정도로 모든 목적을 위해 그들 전체를 참조하여 본원에 포함된다. 다양한 특정 구체예를 예시하고 기술하였지만, 본 발명의 범주를 벗어나지 않고 다양한 변화를 가할 수 있음은 자명하다.

[표 12-1]

[표 12-2]

[표 12-3]

[표 12-4]

[표 12-5]

[표 12-6]

[표 12-7]

[표 12-8]

[표 12-9]

[표 14-1]

[표 14-2]

[표 20-1]

[표 20-2]

[표 20-3]

[표 20-4]

[표 20-5]

[표 20-6]

[표 20-7]

[표 20-8]

[표 20-9]

[표 20-10]

SEQUENCE LISTING <110> FACET BIOTECH CORPORATION <120> ANTI-VEGF ANTIBODIES AND THEIR USES <130> 381493-223WO (104004) <140> <141> <150> 61/218,005 <151> 2009-06-17 <160> 412 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 1 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe 50 55 60 Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 2 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 2 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile 35 40 45 Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 3 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 3 Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly Met Asn 1 5 10 <210> 4 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 4 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 5 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 5 Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 6 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 6 Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 7 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 7 Phe Thr Ser Ser Leu His Ser 1 5 <210> 8 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 8 Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp Thr 1 5 <210> 9 <211> 231 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 9 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Asp Phe Thr His Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe 50 55 60 Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Gly Thr Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 195 200 205 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 210 215 220 Ser Cys Asp Lys Thr His Leu 225 230 <210> 10 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 10 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile 35 40 45 Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 11 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 11 Gly Tyr Asp Phe Thr His Tyr Gly Met Asn 1 5 10 <210> 12 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 12 Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Gly Thr Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 13 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 13 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 1 5 10 15 <210> 14 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 14 Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg 1 5 10 15 <210> 15 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 15 Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile 1 5 10 15 <210> 16 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 16 Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser 1 5 10 15 <210> 17 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 17 Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln 1 5 10 15 <210> 18 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 18 Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser 1 5 10 15 <210> 19 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 19 Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu 1 5 10 15 <210> 20 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 20 Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr 1 5 10 15 <210> 21 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 21 Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys 1 5 10 15 <210> 22 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 22 Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 1 5 10 15 <210> 23 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 23 Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys 1 5 10 15 <210> 24 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 24 Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile 1 5 10 15 <210> 25 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 25 Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile Tyr Phe Thr 1 5 10 15 <210> 26 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 26 Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile Tyr Phe Thr Ser Ser Leu 1 5 10 15 <210> 27 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 27 Ala Pro Lys Val Leu Ile Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly 1 5 10 15 <210> 28 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 28 Val Leu Ile Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser 1 5 10 15 <210> 29 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 29 Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 1 5 10 15 <210> 30 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 30 Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly 1 5 10 15 <210> 31 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 31 His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr 1 5 10 15 <210> 32 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 32 Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 <210> 33 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 33 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 1 5 10 15 <210> 34 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 34 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu 1 5 10 15 <210> 35 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 35 Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 1 5 10 15 <210> 36 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 36 Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala 1 5 10 15 <210> 37 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 37 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr 1 5 10 15 <210> 38 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 38 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 1 5 10 15 <210> 39 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 39 Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr 1 5 10 15 <210> 40 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 40 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp 1 5 10 15 <210> 41 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 41 Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp Thr Phe Gly 1 5 10 15 <210> 42 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 42 Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr 1 5 10 15 <210> 43 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 43 Tyr Ser Thr Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu 1 5 10 15 <210> 44 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 44 Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 1 5 10 15 <210> 45 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 45 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 1 5 10 15 <210> 46 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 46 Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu 1 5 10 15 <210> 47 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 47 Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser 1 5 10 15 <210> 48 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 48 Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala 1 5 10 15 <210> 49 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 49 Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr 1 5 10 15 <210> 50 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 50 Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr 1 5 10 15 <210> 51 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 51 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly 1 5 10 15 <210> 52 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 52 Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly Met Asn Trp 1 5 10 15 <210> 53 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 53 Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly Met Asn Trp Val Arg Gln 1 5 10 15 <210> 54 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 54 Thr Phe Thr Asn Tyr Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly 1 5 10 15 <210> 55 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 55 Asn Tyr Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 1 5 10 15 <210> 56 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 56 Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 1 5 10 15 <210> 57 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 57 Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Trp Ile 1 5 10 15 <210> 58 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 58 Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Trp Ile Asn Thr Tyr 1 5 10 15 <210> 59 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 59 Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu 1 5 10 15 <210> 60 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 60 Glu Trp Val Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr 1 5 10 15 <210> 61 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 61 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp 1 5 10 15 <210> 62 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 62 Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys Arg 1 5 10 15 <210> 63 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 63 Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys Arg Arg Phe Thr 1 5 10 15 <210> 64 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 64 Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu 1 5 10 15 <210> 65 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 65 Ala Ala Asp Phe Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser 1 5 10 15 <210> 66 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 66 Phe Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr 1 5 10 15 <210> 67 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 67 Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr Leu 1 5 10 15 <210> 68 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 68 Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn 1 5 10 15 <210> 69 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 69 Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg 1 5 10 15 <210> 70 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 70 Lys Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 1 5 10 15 <210> 71 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 71 Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 1 5 10 15 <210> 72 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 72 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 1 5 10 15 <210> 73 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 73 Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Tyr 1 5 10 15 <210> 74 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 74 Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Tyr Pro His Tyr 1 5 10 15 <210> 75 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 75 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser 1 5 10 15 <210> 76 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 76 Tyr Tyr Cys Ala Lys Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp 1 5 10 15 <210> 77 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 77 Ala Lys Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 <210> 78 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 78 Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly 1 5 10 15 <210> 79 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 79 Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr 1 5 10 15 <210> 80 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 80 Ser His Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 1 5 10 15 <210> 81 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 81 Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 15 <210> 82 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 82 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Phe Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe 50 55 60 Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Tyr Pro Asp Tyr Asp Gly Gly Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 83 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 83 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Phe Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe 50 55 60 Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Tyr Pro Pro Tyr Asp Gly Gly Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 84 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 84 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Phe Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe 50 55 60 Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Tyr Pro Pro Tyr Glu Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 85 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 85 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Phe Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe 50 55 60 Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Tyr Pro Glu Tyr Glu Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 86 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 86 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Phe Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe 50 55 60 Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Tyr Pro Asp Tyr Glu Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 87 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 87 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Phe Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe 50 55 60 Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Tyr Pro Glu Tyr Asp Gly Gly Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 88 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 88 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Phe Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe 50 55 60 Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Tyr Pro His Tyr Asp Gly Gly Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 89 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 89 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Phe Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe 50 55 60 Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Tyr Pro Pro Tyr Asp Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 90 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 90 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Phe Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe 50 55 60 Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Tyr Pro Asp Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 91 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 91 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Phe Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe 50 55 60 Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 92 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 92 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe 50 55 60 Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Tyr Pro Pro Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 93 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 93 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe 50 55 60 Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Tyr Pro Glu Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 94 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 94 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Phe Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe 50 55 60 Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Gly Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 95 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 95 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe 50 55 60 Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Tyr Pro Asp Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 96 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 96 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Phe Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe 50 55 60 Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Tyr Pro Pro Tyr Tyr Gly Gly Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 97 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 97 Asn Thr Phe Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys Arg 1 5 10 15 <210> 98 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 98 Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Phe Asp Phe Lys Arg 1 5 10 15 <210> 99 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 99 Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Glu Asp Phe Lys Arg 1 5 10 15 <210> 100 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 100 Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys Arg 1 5 10 15 <210> 101 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 101 Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Gly Phe Lys Arg 1 5 10 15 <210> 102 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 102 Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Leu Phe Lys Arg 1 5 10 15 <210> 103 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 103 Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Gln Phe Lys Arg 1 5 10 15 <210> 104 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 104 Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Thr Phe Lys Arg 1 5 10 15 <210> 105 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 105 Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Lys Phe Lys Arg 1 5 10 15 <210> 106 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 106 Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Arg Phe Lys Arg 1 5 10 15 <210> 107 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 107 Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Glu Phe Lys Arg 1 5 10 15 <210> 108 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 108 Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala His Phe Lys Arg 1 5 10 15 <210> 109 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 109 Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Ser Arg 1 5 10 15 <210> 110 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 110 Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Val Arg 1 5 10 15 <210> 111 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 111 Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Gln Arg 1 5 10 15 <210> 112 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 112 Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys Val 1 5 10 15 <210> 113 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 113 Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys Phe 1 5 10 15 <210> 114 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 114 Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys His 1 5 10 15 <210> 115 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 115 Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys Asn 1 5 10 15 <210> 116 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 116 Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys Ser 1 5 10 15 <210> 117 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 117 Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys Gln 1 5 10 15 <210> 118 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 118 Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys Lys 1 5 10 15 <210> 119 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 119 Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys Ile 1 5 10 15 <210> 120 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 120 Asn Thr Phe Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Phe Asp Phe Lys Arg 1 5 10 15 <210> 121 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 121 Asn Thr Phe Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Glu Asp Phe Lys Arg 1 5 10 15 <210> 122 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 122 Asn Thr Phe Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys Arg 1 5 10 15 <210> 123 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 123 Asn Thr Phe Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Gly Phe Lys Arg 1 5 10 15 <210> 124 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 124 Asn Thr Phe Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Leu Phe Lys Arg 1 5 10 15 <210> 125 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 125 Asn Thr Phe Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Gln Phe Lys Arg 1 5 10 15 <210> 126 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 126 Asn Thr Phe Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Thr Phe Lys Arg 1 5 10 15 <210> 127 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 127 Asn Thr Phe Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Lys Phe Lys Arg 1 5 10 15 <210> 128 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 128 Asn Thr Phe Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Arg Phe Lys Arg 1 5 10 15 <210> 129 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 129 Asn Thr Phe Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Glu Phe Lys Arg 1 5 10 15 <210> 130 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 130 Asn Thr Phe Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala His Phe Lys Arg 1 5 10 15 <210> 131 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 131 Asn Thr Phe Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Ser Arg 1 5 10 15 <210> 132 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 132 Asn Thr Phe Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Val Arg 1 5 10 15 <210> 133 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 133 Asn Thr Phe Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Gln Arg 1 5 10 15 <210> 134 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 134 Asn Thr Phe Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys Val 1 5 10 15 <210> 135 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 135 Asn Thr Phe Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys Phe 1 5 10 15 <210> 136 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 136 Asn Thr Phe Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys His 1 5 10 15 <210> 137 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 137 Asn Thr Phe Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys Asn 1 5 10 15 <210> 138 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 138 Asn Thr Phe Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys Ser 1 5 10 15 <210> 139 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 139 Asn Thr Phe Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys Gln 1 5 10 15 <210> 140 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 140 Asn Thr Phe Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys Lys 1 5 10 15 <210> 141 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 141 Asn Thr Phe Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys Ile 1 5 10 15 <210> 142 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 142 Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Tyr Pro Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 143 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 143 Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Tyr Pro Glu Tyr 1 5 10 15 <210> 144 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 144 Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Tyr Pro Pro Tyr 1 5 10 15 <210> 145 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 145 Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Tyr Pro His Phe 1 5 10 15 <210> 146 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 146 Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Tyr Pro Asp Phe 1 5 10 15 <210> 147 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 147 Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Tyr Pro Glu Phe 1 5 10 15 <210> 148 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 148 Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Tyr Pro Pro Phe 1 5 10 15 <210> 149 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 149 Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Phe Thr 1 5 10 15 <210> 150 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 150 Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile Tyr Asp Thr 1 5 10 15 <210> 151 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 151 Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile Tyr Ser Thr 1 5 10 15 <210> 152 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 152 Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile Tyr Gly Thr 1 5 10 15 <210> 153 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 153 Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile Tyr Ala Thr 1 5 10 15 <210> 154 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 154 Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile Tyr Phe Ala 1 5 10 15 <210> 155 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 155 Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile Tyr Asp Ala 1 5 10 15 <210> 156 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 156 Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile Tyr Ser Ala 1 5 10 15 <210> 157 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 157 Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile Tyr Gly Ala 1 5 10 15 <210> 158 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 158 Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile Tyr Ala Ala 1 5 10 15 <210> 159 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 159 Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Thr 1 5 10 15 <210> 160 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 160 Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Thr 1 5 10 15 <210> 161 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 161 Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Thr 1 5 10 15 <210> 162 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 162 Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Thr 1 5 10 15 <210> 163 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 163 Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Phe Ala 1 5 10 15 <210> 164 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 164 Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala 1 5 10 15 <210> 165 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 165 Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala 1 5 10 15 <210> 166 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 166 Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala 1 5 10 15 <210> 167 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 167 Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala 1 5 10 15 <210> 168 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 168 Gly Tyr Asp Phe Thr Asn Tyr Gly Met 1 5 <210> 169 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 169 Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly Ile 1 5 <210> 170 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 170 Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr Gly Met 1 5 <210> 171 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 171 Ala Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly Met 1 5 <210> 172 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 172 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser 1 5 10 <210> 173 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 173 Gly Tyr Asp Phe Thr His Tyr Gly Ile 1 5 <210> 174 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 174 Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly Ala 1 5 <210> 175 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 175 Gly Tyr Asp Phe Gly His Tyr Gly Ile 1 5 <210> 176 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 176 Gly Tyr Glu Phe Gln His Tyr Gly Ile 1 5 <210> 177 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 177 Gly Tyr Asp Phe Ser His Tyr Gly Ile 1 5 <210> 178 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 178 Gly Tyr Glu Phe Ser His Tyr Gly Ile 1 5 <210> 179 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 179 Gly Tyr Glu Phe Thr His Tyr Gly Ile 1 5 <210> 180 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 180 Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr Gly Ile 1 5 <210> 181 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 181 Gly Tyr Asp Phe Thr Asn Tyr Gly Ile 1 5 <210> 182 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 182 Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly Met Ala 1 5 10 <210> 183 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 183 Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Ala Met 1 5 <210> 184 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 184 Gly Tyr Thr Phe Thr Ala Tyr Gly Met 1 5 <210> 185 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 185 Gly Tyr Thr Phe Ala Asn Tyr Gly Met 1 5 <210> 186 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 186 Gly Tyr Thr Ala Thr Asn Tyr Gly Met 1 5 <210> 187 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 187 Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Tyr Gly Met 1 5 <210> 188 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 188 Gly Ala Thr Phe Thr Asn Tyr Gly Met 1 5 <210> 189 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 189 Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Ala Gly Met 1 5 <210> 190 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 190 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Glu Phe Thr 1 5 10 15 Arg <210> 191 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 191 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Val Asp Glu Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 192 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 192 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Glu Glu Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 193 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 193 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Pro Glu Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 194 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 194 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Gln Glu Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 195 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 195 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Thr Thr Tyr Ala His Asp Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 196 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 196 Trp Ile Asn Thr Tyr Asn Gly Glu Thr Thr Tyr Ala Pro Asp Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 197 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 197 Trp Ile Asn Thr Tyr Asn Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Pro Asp Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 198 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 198 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Ser Thr Tyr Ala Gln Asp Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 199 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 199 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Asn Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Asp Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 200 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 200 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys 1 5 10 15 Glu <210> 201 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 201 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Glu Glu Phe Thr 1 5 10 15 Arg <210> 202 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 202 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala His Glu Phe Thr 1 5 10 15 Arg <210> 203 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 203 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Pro Asp Phe Thr 1 5 10 15 Arg <210> 204 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 204 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala His Glu Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 205 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 205 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Pro Glu Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 206 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 206 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Gln Glu Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 207 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 207 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Thr Thr Tyr Ala His Asp Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 208 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 208 Trp Ile Asn Thr Tyr Asn Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Pro Asp Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 209 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 209 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Pro Asp Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 210 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 210 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Ser Thr Tyr Ala Gln Asp Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 211 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 211 Trp Ile Asn Thr Asn Asn Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 212 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> Any amino acid <400> 212 Trp Ile Asn Thr Xaa Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 213 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 213 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Lys Phe 1 5 10 15 Lys Asp Arg <210> 214 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 214 Val Ile Ser Gly Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 215 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 215 Trp Ile Asn Thr Trp Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 216 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 216 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys 1 5 10 15 Ala <210> 217 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 217 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Ala 1 5 10 15 Arg <210> 218 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 218 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Ala Lys 1 5 10 15 Arg <210> 219 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 219 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Ala Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 220 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 220 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 221 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 221 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 222 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 222 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Ala Tyr Ala Ala Asp Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 223 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 223 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 224 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 224 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Ala Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 225 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 225 Trp Ile Asn Thr Trp Thr Gly Gln Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 226 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 226 Trp Ile Asn Thr Trp Thr Gly Thr Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 227 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 227 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Ala Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 228 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 228 Trp Ile Asn Thr Tyr Ala Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 229 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 229 Trp Ile Asn Thr Trp Asp Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 230 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 230 Trp Ile Asn Thr Ala Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 231 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 231 Trp Ile Asn Thr Trp Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 232 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 232 Trp Ile Asn Ala Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 233 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 233 Trp Ile Ala Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 234 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 234 Trp Ala Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 235 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 235 Ala Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 236 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 236 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Ala Ala Ala Asp Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 237 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 237 Tyr Pro Lys Tyr Tyr Gly Lys Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 238 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 238 Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Gly Arg Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 239 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 239 Tyr Pro His Tyr Tyr Val Asn Glu Arg Lys Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 240 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 240 Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Gly Thr Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 241 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 241 Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Thr Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 242 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 242 Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Leu 1 5 10 <210> 243 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 243 Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Arg Ser Gln Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 244 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 244 Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Gly Cys His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 245 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 245 Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Thr Thr His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 246 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 246 Asp Pro His Tyr Tyr Gly Ser Tyr His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 247 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 247 Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Tyr His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 248 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 248 Arg Pro His Tyr Tyr Gly Ala Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 249 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 249 Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ala Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 250 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 250 Tyr Pro His Tyr Tyr Ser Gly Glu Arg Glu Ser Ser His Trp Tyr Phe 1 5 10 15 Asp Val <210> 251 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 251 Tyr Pro His Tyr Tyr Ala Arg Glu Gly Gly Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 252 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 252 Tyr Pro His Tyr Tyr Ser Val Glu Gly Gly Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 253 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 253 Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Gly Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 254 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 254 Tyr Pro His Tyr Tyr Gln Ser Glu Gly Arg Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 255 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 255 Tyr Pro His Tyr Tyr His Thr Arg Gly Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe 1 5 10 15 Asp Val <210> 256 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 256 Tyr Pro His Tyr Tyr Leu Thr Asp His Lys Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 257 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 257 Tyr Pro His Tyr Tyr Arg Gly Asp Arg Lys Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 258 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 258 Tyr Pro His Tyr Tyr Glu Lys Gln Arg Lys Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 259 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 259 Tyr Pro His Tyr Tyr Ser Asp Glu Lys Lys Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 260 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 260 Tyr Pro His Tyr Tyr Leu Lys Asp Gly Lys Lys Ser His Trp Tyr Phe 1 5 10 15 Asp Val <210> 261 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 261 Tyr Pro His Tyr Tyr Lys Glu Asp Lys Lys Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 262 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 262 Tyr Pro His Tyr Tyr Leu Arg Asp Lys Lys Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 263 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 263 Tyr Pro His Tyr Tyr Leu Ser Asp Lys Lys Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 264 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 264 Tyr Pro His Tyr Tyr Arg Arg Asp Lys Lys Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 265 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 265 Tyr Pro His Tyr Tyr Ser His Gln Lys Arg Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 266 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 266 Tyr Pro His Tyr Tyr Thr Tyr Asp Lys Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 267 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 267 Tyr Pro His Tyr Tyr Arg Gly Gln Arg Lys Ser Ser His Trp Tyr Phe 1 5 10 15 Asp Val <210> 268 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 268 Tyr Pro His Tyr Tyr Glu Lys Glu Arg Lys Ser Ser His Trp Tyr Phe 1 5 10 15 Asp Val <210> 269 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 269 Tyr Pro His Tyr Tyr Gln Asp Glu Lys Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 270 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 270 Tyr Pro His Tyr Tyr Glu Arg Asp Gly Lys Ser Ser His Trp Tyr Phe 1 5 10 15 Asp Val <210> 271 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 271 Tyr Pro His Tyr Tyr Arg Asn Glu Lys Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 272 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 272 Tyr Pro His Tyr Tyr Gln Arg Asn Gly Lys Ser Ser His Trp Tyr Phe 1 5 10 15 Asp Val <210> 273 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 273 Tyr Pro His Tyr Tyr Arg Thr Glu Lys Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 274 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 274 Tyr Pro His Tyr Tyr Val Asn Asp Lys Thr Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 275 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 275 Tyr Pro His Tyr Tyr Leu Lys Asp Gly Met Ser Ser His Trp Tyr Phe 1 5 10 15 Asp Val <210> 276 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 276 Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Asn Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 277 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 277 Tyr Pro His Tyr Tyr Pro Ser Pro Arg Gly Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 278 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 278 Tyr Pro His Tyr Tyr Gln Asn Glu Gly Pro Ser Ser His Trp Tyr Phe 1 5 10 15 Asp Val <210> 279 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 279 Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Gly Arg Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 280 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 280 Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Arg Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 281 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 281 Tyr Pro His Tyr Tyr Arg Asp Glu Arg Glu Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 282 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 282 Tyr Pro His Tyr Tyr Ser His Glu Arg Lys Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 283 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 283 Tyr Pro His Tyr Tyr Leu Lys Asp Arg Lys Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 284 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 284 Tyr Pro His Tyr Tyr Leu Asn Glu Arg Lys Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 285 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 285 Tyr Pro His Tyr Tyr Ser Asn Glu Arg Lys Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 286 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 286 Tyr Pro His Tyr Tyr Val Asn Glu Arg Lys Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 287 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 287 Tyr Pro His Tyr Tyr Val Thr Asp Arg Lys Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 288 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 288 Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Asn His Arg Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 289 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 289 Tyr Pro His Tyr Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Ser Ser His Trp Tyr Phe 1 5 10 15 Asp Val <210> 290 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 290 Tyr Pro His Tyr Tyr Leu Lys Asp Arg Arg Ser Ser His Trp Tyr Phe 1 5 10 15 Asp Val <210> 291 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 291 Tyr Pro His Tyr Tyr Gln Arg Asp Arg Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 292 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 292 Tyr Pro His Tyr Tyr Arg Asp Glu Arg Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 293 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 293 Tyr Pro His Tyr Tyr Glu Arg Asp Gly Arg Ser Ser His Trp Tyr Phe 1 5 10 15 Asp Val <210> 294 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 294 Tyr Pro His Tyr Tyr Leu Arg Asp Gly Arg Ser Ser His Trp Tyr Phe 1 5 10 15 Asp Val <210> 295 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 295 Tyr Pro His Tyr Tyr Arg Asn Glu Arg Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 296 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 296 Tyr Pro His Tyr Tyr Ser His Glu Arg Val Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 297 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 297 Tyr Pro His Tyr Tyr Gln Lys Gln Ser Lys Ser Ser His Trp Tyr Phe 1 5 10 15 Asp Val <210> 298 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 298 Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Gly Thr Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 299 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 299 Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Thr Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 300 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 300 Tyr Pro His Tyr Tyr Val Glu Glu Thr Glu Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 301 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 301 Tyr Pro His Tyr Tyr Val Gly Glu Thr Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 302 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Any amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> Any amino acid <400> 302 Tyr Pro Xaa Tyr Tyr Gly Xaa Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 303 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 303 Tyr Pro His Tyr Tyr Leu Ala Asp Arg Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 304 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 304 Tyr Pro His Tyr Tyr Val Gly Glu Gln Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 305 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 305 Tyr Pro His Tyr Tyr Val Gly Glu Thr Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 306 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 306 Tyr Pro His Tyr Tyr Leu Lys Asp Lys Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 307 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 307 Tyr Pro His Tyr Tyr Leu Lys Asp Arg Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 308 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 308 Tyr Pro His Tyr Tyr Ala Lys Glu Arg Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 309 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 309 Tyr Pro His Tyr Tyr Leu Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 15 <210> 310 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 310 Tyr Pro His Tyr Tyr Lys Asn Asp Lys Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 311 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 311 Tyr Pro His Tyr Tyr Leu Asn Asp Lys Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 312 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 312 Tyr Pro His Tyr Tyr Val Asn Glu Arg Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 313 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 313 Tyr Pro His Tyr Tyr Ala Arg Asp Arg Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 314 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 314 Tyr Pro His Tyr Tyr Tyr Arg Asp Arg Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 315 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 315 Tyr Pro Tyr Tyr Asn Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 316 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 316 Pro Pro Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 317 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 317 Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 318 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 318 Tyr His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 319 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 319 Tyr Tyr His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 320 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 320 Thr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 321 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 321 Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 322 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 322 Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Arg Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 323 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 323 Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Arg Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 324 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 324 Tyr Pro His Tyr Tyr Val Asn Glu Arg Lys Ser His Trp Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 325 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 325 Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Gly Thr Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 326 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 326 Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Gly Thr Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 327 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 327 Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Ala 1 5 10 <210> 328 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 328 Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 329 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 329 Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Ala Val 1 5 10 <210> 330 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 330 Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Ala Asp Val 1 5 10 <210> 331 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 331 Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Ala Phe Asp Val 1 5 10 <210> 332 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 332 Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Ala Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 333 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 333 Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser Ala Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 334 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 334 Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ala His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 335 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 335 Tyr Pro Tyr Tyr Arg Gln Lys Gly His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 336 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 336 Tyr Pro Tyr Tyr Arg Gln Arg Gly His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 337 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 337 Tyr Pro Tyr Tyr Arg Asp Ala Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 338 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 338 Tyr Pro Tyr Tyr Arg Asn Ala Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 339 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 339 Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Gly Ala Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 340 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 340 Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ala Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 341 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 341 Tyr Pro Tyr Tyr Arg Gly Glu Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 342 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 342 Tyr Pro Tyr Tyr Arg Lys Gly Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 343 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 343 Tyr Pro Tyr Tyr Arg Ser Gly Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 344 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 344 Tyr Pro Tyr Tyr Lys Gly Gly Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 345 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 345 Tyr Pro Tyr Tyr Ile Ala Lys Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 346 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 346 Tyr Pro Tyr Tyr Ile Asn Lys Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 347 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 347 Tyr Pro Tyr Tyr Arg Asp Asn Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 348 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 348 Tyr Pro Tyr Tyr Arg Gln Asn Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 349 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 349 Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Asn Gln Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 350 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 350 Tyr Pro Tyr Tyr Ile Glu Arg Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 351 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 351 Tyr Pro Tyr Tyr Thr Asn Arg Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 352 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 352 Tyr Pro Tyr Tyr Thr Thr Arg Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 353 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 353 Tyr Pro Tyr Tyr Thr Gly Arg Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 354 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 354 Tyr Pro Tyr Tyr Lys Asn Thr Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 355 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 355 Tyr Pro Tyr Tyr Arg Asn Thr Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 356 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 356 Tyr Pro Tyr Tyr Thr Asn Thr Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 357 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 357 Tyr Pro Tyr Tyr Arg Gly Thr Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 358 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 358 Tyr Pro Tyr Tyr Trp Gly Thr Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 359 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 359 Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Gly Thr Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 360 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 360 Tyr Pro His Tyr Tyr Ala Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 361 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 361 Tyr Pro Tyr Tyr Lys Glu Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 362 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 362 Tyr Pro Tyr Tyr Arg Asn Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 363 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 363 Tyr Pro Tyr Tyr Arg Gln Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 364 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 364 Tyr Pro His Tyr Ala Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 365 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 365 Tyr Pro Tyr Tyr Glu Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 366 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 366 Tyr Pro Tyr Tyr Thr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 367 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 367 Tyr Pro His Ala Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 368 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 368 Tyr Pro Ala Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 369 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 369 Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 370 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 370 Ala Ala His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 371 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 371 Ala Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 372 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 372 Ala Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 373 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 373 Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 374 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 374 Ser Ala Ala Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 375 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 375 Ser Ala Ser Ala Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 376 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 376 Ser Ala Ser Gln Ala Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 377 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 377 Ser Ala Ser Gln Asp Ala Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 378 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 378 Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ala Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 379 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 379 Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Ala Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 380 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 380 Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Ala Leu Asn 1 5 10 <210> 381 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 381 Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Ala Asn 1 5 10 <210> 382 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 382 Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 383 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 383 Arg Ala Asn Glu Gln Leu Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 384 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 384 Arg Ala Asn Glu Gln Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 385 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 385 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 386 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 386 Ala Thr Ser Ser Leu His Ser 1 5 <210> 387 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 387 Phe Ala Ser Ser Leu His Ser 1 5 <210> 388 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 388 Phe Thr Ala Ser Leu His Ser 1 5 <210> 389 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 389 Phe Thr Ser Ala Leu His Ser 1 5 <210> 390 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 390 Phe Thr Ser Ser Ala His Ser 1 5 <210> 391 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 391 Phe Thr Ser Ser Leu Ala Ser 1 5 <210> 392 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 392 Phe Thr Ser Ser Leu His Ala 1 5 <210> 393 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 393 Ala Ala Ser Ser Leu Glu Ser 1 5 <210> 394 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 394 Gln Gln Tyr Ser Thr Val Phe Trp Thr 1 5 <210> 395 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 395 Gln Gln Tyr Asn Ser Thr Pro Trp Thr 1 5 <210> 396 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 396 Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Trp Thr 1 5 <210> 397 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 397 Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Trp Thr 1 5 <210> 398 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 398 Gln Gln Tyr Ser Ala Val Pro Trp Thr 1 5 <210> 399 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 399 Gln Gln Tyr Ser Asn Val Pro Trp Thr 1 5 <210> 400 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 400 Gln Gln Tyr Ser Ser Val Pro Trp Thr 1 5 <210> 401 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 401 Ala Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp Thr 1 5 <210> 402 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 402 Gln Ala Tyr Ser Thr Val Pro Trp Thr 1 5 <210> 403 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 403 Gln Gln Ala Ser Thr Val Pro Trp Thr 1 5 <210> 404 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 404 Gln Gln Tyr Ala Thr Val Pro Trp Thr 1 5 <210> 405 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 405 Gln Gln Tyr Ser Ala Val Pro Trp Thr 1 5 <210> 406 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 406 Gln Gln Tyr Ser Thr Ala Pro Trp Thr 1 5 <210> 407 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 407 Gln Gln Tyr Ser Thr Val Ala Trp Thr 1 5 <210> 408 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 408 Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Ala Thr 1 5 <210> 409 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 409 Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp Ala 1 5 <210> 410 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 410 Gln Gln Tyr Asn Ser Leu Pro Trp Thr 1 5 <210> 411 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 411 Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly Met 1 5 <210> 412 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 412 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15

Claims

서열번호 3(CDR-H1), 서열번호 4(CDR-H2), 서열번호 5(CDR-H3), 서열번호 6(CDR-L1), 서열번호 7(CDR-L2) 및 서열번호 8(CDR-L3)에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함하는 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편으로서, CDR-H2는 치환 K64S, 및 경우에 따라 표 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12-1 내지 12-9, 또는 13-16 중 1 이상에서 선택되는 1 이상의 추가 돌연변이 또는 돌연변이의 조합을 포함하고, 6개의 CDR은 함께 항체 베바시주맙 또는 항체 라니비주맙의 CDR 서열과 비교하여 최대 17개 아미노산 치환을 갖는 것인 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편.
서열번호 3(CDR-H1), 서열번호 4(CDR-H2), 서열번호 5(CDR-H3), 서열번호 6(CDR-L1), 서열번호 7(CDR-L2) 및 서열번호 8(CDR-L3)에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함하는 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편으로서, CDR-H2는 치환 K64Q, 및 경우에 따라 표 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12-1 내지 12-9, 또는 13-16 중 1 이상에서 선택되는 1 이상의 추가 돌연변이 또는 돌연변이의 조합을 포함하고, 6개의 CDR은 함께 항체 베바시주맙 또는 항체 라니비주맙의 CDR 서열과 비교하여 최대 17개 아미노산 치환을 갖는 것인 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편.
서열번호 3(CDR-H1), 서열번호 4(CDR-H2), 서열번호 5(CDR-H3), 서열번호 6(CDR-L1), 서열번호 7(CDR-L2) 및 서열번호 8(CDR-L3)에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함하는 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편으로서, CDR-H2는 치환 Y53F 및 K64Q, 및 경우에 따라 표 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12-1 내지 12-9, 또는 13-16 중 1 이상에서 선택되는 1 이상의 추가 돌연변이 또는 돌연변이의 조합을 포함하고, 6개의 CDR은 함께 항체 베바시주맙 또는 항체 라니비주맙의 CDR 서열과 비교하여 최대 17개 아미노산 치환을 갖는 것인 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편.
서열번호 3(CDR-H1), 서열번호 4(CDR-H2), 서열번호 5(CDR-H3), 서열번호 6(CDR-L1), 서열번호 7(CDR-L2) 및 서열번호 8(CDR-L3)에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함하는 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편으로서, CDR-H3은 치환 H97E 및 Y98F, 및 경우에 따라 표 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12-1 내지 12-9, 또는 13-16 중 1 이상에서 선택되는 1 이상의 추가 돌연변이 또는 돌연변이의 조합을 포함하고, 6개의 CDR은 함께 항체 베바시주맙 또는 항체 라니비주맙의 CDR 서열과 비교하여 최대 17개 아미노산 치환을 갖는 것인 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편.
서열번호 3(CDR-H1), 서열번호 4(CDR-H2), 서열번호 5(CDR-H3), 서열번호 6(CDR-L1), 서열번호 7(CDR-L2) 및 서열번호 8(CDR-L3)에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함하는 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편으로서, CDR-L2는 치환 T51A, 및 경우에 따라 표 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12-1 내지 12-9, 또는 13-16 중 1 이상에 선택되는 1 이상의 추가 돌연변이 또는 돌연변이의 조합을 포함하고, 6개의 CDR은 함께 항체 베바시주맙 또는 항체 라니비주맙의 CDR 서열과 비교하여 최대 17개 아미노산 치환을 가지며, 상기 VEGF 항체 중 CDR-L2는 표 13에 기재된 CDR-L2 서열로 이루어지지 않은 것인 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편.
서열번호 3(CDR-H1), 서열번호 4(CDR-H2), 서열번호 5(CDR-H3), 서열번호 6(CDR-L1), 서열번호 7(CDR-L2) 및 서열번호 8(CDR-L3)에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 6개의 상보성 결정 영역("CDR")을 포함하는 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편으로서, 상기 CDR-H1은 치환 N31F, 및 경우에 따라 표 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12-1 내지 12-9 및 13 중 1 이상에서 선택되는 1 이상의 추가 돌연변이 또는 돌연변이의 조합을 포함하고, 6개의 CDR은 함께 항체 베바시주맙 또는 항체 라니비주맙의 CDR 서열과 비교하여 최대 17개 아미노산 치환을 가지며, 상기 VEGF 항체 중 CDR-H1은 표 12-1 내지 12-9에 기재된 CDR-H1 서열로 이루어지지 않은 것인 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편.
서열번호 3(CDR-H1), 서열번호 4(CDR-H2), 서열번호 5(CDR-H3), 서열번호 6(CDR-L1), 서열번호 7(CDR-L2) 및 서열번호 8(CDR-L3)에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 6개의 CDR을 포함하는 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편으로서, 상기 CDR-H3은 치환 H97E, 및 경우에 따라 표 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12-1 내지 12-9 및 13 중 1 이상에서 선택되는 1 이상의 추가 돌연변이 또는 돌연변이이 조합을 포함하고, 6개의 CDR은 함께 항체 베바시주맙 또는 항체 라니비주맙의 CDR 서열과 비교하여 최대 17개 아미노산 치환을 가지며, 상기 VEGF 항체 중 CDR-H3은 표 12-1 내지 12-9에 기재된 CDR-H3 서열로 이루어지지 않은 것인 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편.
서열번호 3(CDR-H1), 서열번호 4(CDR-H2), 서열번호 5(CDR-H3), 서열번호 6(CDR-L1), 서열번호 7(CDR-L2) 및 서열번호 8(CDR-L3)에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 6개의 CDR을 포함하는 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편으로서, 상기 CDR-H3은 치환 H97D, 및 경우에 따라 표 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12-1 내지 12-9 및 13 중 1 이상에서 선택되는 1 이상의 추가 돌연변이 또는 돌연변이의 조합을 포함하고, 6개의 CDR은 항체 베바시주맙 또는 항체 라니비주맙의 CDR 서열과 비교하여 최대 17개 아미노산 치환을 가지며, 상기 VEGF 항체 중 CDR-H3은 표 12-1 내지 12-9에 기재된 CDR-H3 서열로 이루어지지 않은 것인 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편.
서열번호 3(CDR-H1), 서열번호 4(CDR-H2), 서열번호 5(CDR-H3), 서열번호 6(CDR-L1), 서열번호 7(CDR-L2) 및 서열번호 8(CDR-L3)에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 6개의 CDR을 포함하는 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편으로서, 상기 CDR-H3은 치환 H97P, 및 경우에 따라 표 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12-1 내지 12-9 및 13 중 1 이상에서 선택되는 1 이상의 추가 돌연변이 또는 돌연변이의 조합을 포함하고, 6개의 CDR은 함께 항체 베바시주맙 또는 항체 라니비주맙의 CDR 서열과 비교하여 최대 17개 아미노산 치환을 가지며, 상기 VEGF 항체 중 CDR-H3은 표 12-1 내지 12-9에 기재된 CDR-H3으로 이루어지지 않은 것인 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편.
서열번호 3(CDR-H1), 서열번호 4(CDR-H2), 서열번호 5(CDR-H3), 서열번호 6(CDR-L1), 서열번호 7(CDR-L2) 및 서열번호 8(CDR-L3)에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 6개의 CDR을 포함하는 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편으로서, 상기 CDR-H3은 치환 Y99E, 및 경우에 따라 표 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12-1 내지 12-9 및 13 중 1 이상에서 선택되는 1 이상의 추가 돌연변이 또는 돌연변이의 조합을 포함하고, 6개의 CDR은 함께 항체 베바시주맙 또는 항체 라니비주맙의 CDR 서열과 비교하여 최대 17개 아미노산 치환을 가지며, 상기 VEGF 항체 중 CDR-H3은 표 12-1 내지 12-9에 기재된 CDR-H3 서열로 이루어지지 않은 것인 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편.
서열번호 3(CDR-H1), 서열번호 4(CDR-H2), 서열번호 5(CDR-H3), 서열번호 6(CDR-L1), 서열번호 7(CDR-L2) 및 서열번호 8(CDR-L3)에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 6개의 CDR을 포함하는 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편으로서, 상기 CDR-H3은 치환 Y99D, 및 경우에 따라 표 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12-1 내지 12-9 및 13 중 1 이상에서 선택되는 1 이상의 추가 돌연변이 또는 돌연변이의 조합을 포함하고, 6개의 CDR은 함께 항체 베바시주맙 또는 항체 라니비주맙의 CDR 서열과 비교하여 최대 17개 아미노산 치환을 가지며, 상기 VEGF 항체 중 CDR-H3은 표 12-1 내지 12-9에 기재된 CDR-H3 서열로 이루어지지 않은 것인 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편.
서열번호 3(CDR-H1), 서열번호 4(CDR-H2), 서열번호 5(CDR-H3), 서열번호 6(CDR-L1), 서열번호 7(CDR-L2) 및 서열번호 8(CDR-L3)에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 6개의 CDR을 포함하는 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편으로서, 상기 CDR-H3은 치환 S100aG, 및 경우에 따라 표 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12-1 내지 12-9 및 13 중 1 이상에서 선택되는 1 이상의 추가 돌연변이 또는 돌연변이의 조합을 포함하고, 6개의 CDR은 함께 항체 베바시주맙 또는 항체 라니비주맙의 CDR 서열과 비교하여 최대 17개 아미노산 치환을 가지며, 상기 VEGF 항체 중 CDR-H3은 표 12-1 내지 12-9에 기재된 CDR-H3 서열로 이루어지지 않은 것인 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편.
서열번호 3(CDR-H1), 서열번호 4(CDR-H2), 서열번호 5(CDR-H3), 서열번호 6(CDR-L1), 서열번호 7(CDR-L2) 및 서열번호 8(CDR-L3)에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함하는 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편으로서, 상기 CDR-H3은 치환 S100aG, 및 경우에 따라 표 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12-1 내지 12-9 및 13 중 1 이상에서 선택되는 1 이상의 추가 돌연변이 또는 돌연변이의 조합을 포함하고, 6개의 CDR은 함께 항체 베바시주맙 또는 항체 라니비주맙의 CDR 서열과 비교하여 최대 17개 아미노산 치환을 가지며, 상기 VEGF 항체의 CDR-H3 내 위치 3이 티로신이 아닌 것인 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편.
서열번호 3(CDR-H1), 서열번호 4(CDR-H2), 서열번호 5(CDR-H3), 서열번호 6(CDR-L1), 서열번호 7(CDR-L2) 및 서열번호 8(CDR-L3)에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함하는 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편으로서, CDR-H1은 T28P, N31F, N31G 및 N31M에서 선택되는 1 이상의 치환, 및 경우에 따라 표 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12-1 내지 12-9 및 13 중 1 이상에서 선택되는 1 이상의 추가 돌연변이 또는 돌연변이의 조합을 포함하고, 6개의 CDR은 항체 베바시주맙 또는 항체 라니비주맙의 CDR 서열과 비교하여 최대 17개 아미노산 치환을 가지며, 상기 VEGF 항체 중 CDR-H1은 표 12-1 내지 12-9에 기재된 CDR-H1 서열로 이루어지지 않은 것인 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편.
서열번호 3(CDR-H1), 서열번호 4(CDR-H2), 서열번호 5(CDR-H3), 서열번호 6(CDR-L1), 서열번호 7(CDR-L2) 및 서열번호 8(CDR-L3)에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함하는 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편으로서, CDR-H3은 H97A, H97Q, H97S, H97T, S100aD, S100aE 및 S100aV에서 선택되는 1 이상의 치환, 및 경우에 따라 표 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12-1 내지 12-9 및 13 중 1 이상에서 선택되는 1 이상의 추가 돌연변이 또는 돌연변이의 조합을 포함하고, 6개의 CDR은 함께 항체 베바시주맙 또는 항체 라니비주맙의 CDR 서열과 비교하여 최대 17개 아미노산 치환을 가지며, 상기 VEGF 항체 중 CDR-H3은 표 12-1 내지 12-9에 기재된 CDR-H3 서열로 이루어지지 않은 것인 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편.
서열번호 3(CDR-H1), 서열번호 4(CDR-H2), 서열번호 5(CDR-H3), 서열번호 6(CDR-L1), 서열번호 7(CDR-L2) 및 서열번호 8(CDR-L3)에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함하는 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편으로서, CDR-H1은 치환 T30W, T30R 또는 T30Q, 및 경우에 따라 표 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12-1 내지 12-9 및 13 중 1 이상에서 선택되는 1 이상의 추가 돌연변이 또는 돌연변이의 조합을 포함하고, 6개의 CDR은 함께 항체 베바시주맙 또는 항체 라니비주맙의 CDR 서열과 비교하여 최대 17개 아미노산 치환을 가지며, 상기 VEGF 항체 중 CDR-H1은 표 12-1 내지 12-9에 기재된 CDR-H1 서열로 이루어지지 않은 것인 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편.
서열번호 3(CDR-H1), 서열번호 4(CDR-H2), 서열번호 5(CDR-H3), 서열번호 6(CDR-L1), 서열번호 7(CDR-L2) 및 서열번호 8(CDR-L3)에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함하는 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편으로서, CDR-H2는 Y53F, T58F, A61G, A61K, A61R, A61H, A61Y, K64G, K64E, R65L, R65T, R65A, R65E 및 R65D에서 선택되는 1 이상의 치환, 및 경우에 따라 표 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12-1 내지 12-9 및 13 중 1 이상에서 선택되는 1 이상의 추가 돌연변이 또는 돌연변이의 조합을 포함하며, 6개의 CDR은 함께 항체 베바시주맙 또는 항체 라니비주맙의 CDR 서열과 비교하여 최대 17개 아미노산 치환을 가지며, 상기 VEGF 항체 중 CDR-H2는 표 12-1 내지 12-9에 기재된 CDR-H2 서열로 이루어지지 않은 것인 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편.
서열번호 3(CDR-H1), 서열번호 4(CDR-H2), 서열번호 5(CDR-H3), 서열번호 6(CDR-L1), 서열번호 7(CDR-L2) 및 서열번호 8(CDR-L3)에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함하는 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편으로서, CDR-H3은 Y98F 및 Y100eF에서 선택되는 1 이상의 치환, 및 경우에 따라 표 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12-1 내지 12-9 및 13 중 1 이상에서 선택되는 1 이상의 추가 돌연변이 또는 돌연변이의 조합을 포함하고, 6개의 CDR은 함께 항체 베바시주맙 또는 항체 라니비주맙의 CDR 서열과 비교하여 최대 17개 아미노산 치환을 가지며, 상기 VEGF 항체 중 CDR-H3은 표 12-1 내지 12-9에 기재된 CDR-H3 서열로 이루어지지 않은 것인 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편.
서열번호 3(CDR-H1), 서열번호 4(CDR-H2), 서열번호 5(CDR-H3), 서열번호 6(CDR-L1), 서열번호 7(CDR-L2) 및 서열번호 8(CDR-L3)에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함하는 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편으로서, 중쇄 CDR은
(a) CDR-H1에 N31F, CDR-H3에 H97D, CDR-H3에 Y99D, 및 CDR-H3에 S100aG;
(b) CDR-H1에 N31F, CDR-H3에 H97P, CDR-H3에 Y99D, 및 CDR-H3에 S100aG;
(c) CDR-H1에 N31F, CDR-H3에 H97P, 및 CDR-H3에 Y99E;
(d) CDR-H1에 N31F, CDR-H3에 H97E, 및 CDR-H3에 Y99E;
(e) CDR-H1에 N31F, CDR-H3에 H97D, 및 CDR-H3에 Y99E;
(f) CDR-H1에 N31F, CDR-H3에 H97E, CDR-H3에 Y99D, 및 CDR-H3에 S100aG;
(g) CDR-H1에 N31F, CDR-H3에 Y99D, 및 CDR-H3에 S100aG;
(h) CDR-H1에 N31F, CDR-H3에 H97P, 및 CDR-H3에 Y99D;
(i) CDR-H1에 N31F, CDR-H3에 H97D, 및 CDR-H3에 S100aG;
(j) CDR-H1에 N31F 및 CDR-H3에 S100aG;
(k) CDR-H1에 N31F, CDR-H3에 H97P, 및 CDR-H3에 S100aG
에서 선택되는 치환의 조합을 포함하고,
상기 항체 또는 결합 단편은 경우에 따라 표 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12-1 내지 12-9 및 13에서 선택되는 1 이상의 추가 돌연변이 또는 돌연변이의 조합을 포함하며, 6개의 CDR은 함께 항체 베바시주맙 또는 항체 라니비주맙의 CDR 서열과 비교하여 최대 17개 아미노산 치환을 갖는 것인 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편.
제19항에 있어서, (a) 내지 (k)에서 선택되는 치환의 조합 이외에, 중쇄 CDR은 항체 베바시주맙의 중쇄 CDR 서열과 비교하여 또는 항체 라니비주맙의 중쇄 CDR 서열과 비교하여 추가 돌연변이를 포함하지 않는 것인 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편.
제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 6개의 CDR은 함께 항체 베바시주맙 또는 항체 라니비주맙의 CDR 서열과 비교하여 최대 16개, 최대 15개, 최대 14개, 최대 13개, 최대 12개, 최대 11개, 최대 10개, 최대 9개, 최대 8개, 최대 7개, 최대 6개, 최대 5개, 또는 최대 4개 아미노산 치환을 갖는 것인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 임의의 개별 CDR은 항체 베바시주맙 또는 항체 라니비주맙의 상응하는 CDR 서열과 비교하여 3개가 넘지 않게 아미노산 치환을 갖는 것인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 임의의 개별 CDR은 항체 베바시주맙 또는 항체 라니비주맙의 상응하는 CDR 서열과 비교하여 2개가 넘지 않는 아미노산 치환을 갖는 것인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 각각 단일클론 항체 또는 단일클론 항체의 항-VEGF 결합 단편인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 각각 인간 또는 인간화 항체, 또는 인간 또는 인간화 항체의 항-VEGF 결합 단편인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, IgG인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제26항에 있어서, IgG₁인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제26항에 있어서, IgG₂인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, ADCC 활성을 증가시키는 Fc 영역 내 1 이상의 돌연변이를 포함하는 것인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 푸코실화되지 않은 것인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, FcγR에 대한 결합을 증가시키는 Fc 영역 내 1 이상의 돌연변이를 포함하는 것인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, FcRn에 대한 결합을 증가시키는 Fc 영역 내 1 이상의 돌연변이를 포함하는 것인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, ADCC 활성을 감소시키는 Fc 영역 내 1 이상의 돌연변이를 포함하는 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 1 이상의 돌연변이 이외에, 서열번호 1에 상응하는 V_H 서열 및 서열번호 2에 상응하는 V_L 서열을 갖는 것인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 1 이상의 돌연변이 이외에, 서열번호 9에 상응하는 중쇄 서열 및 서열번호 10에 상응하는 경쇄 서열을 갖는 것인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 1에 상응하는 V_H 서열 및 서열번호 2에 상응하는 V_L 서열을 갖는 항체의 친화도보다 1.5배 내지 50배 높은 친화도를 갖는 것인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 9에 상응하는 중쇄 서열 및 서열번호 10에 상응하는 경쇄 서열을 갖는 항체의 친화도보다 1.5배 내지 50배 높은 친화도를 갖는 것인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제36항에 있어서, 서열번호 1에 상응하는 V_H 서열 및 서열번호 2에 상응하는 V_L 서열을 갖는 항체의 친화도보다 2배 내지 30배 높은 친화도를 갖는 것인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제37항에 있어서, 서열번호 9에 상응하는 중쇄 서열 및 서열번호 10에 상응하는 경쇄 서열을 갖는 항체의 친화도보다 2배 내지 30배 높은 친화도를 갖는 것인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제36항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 친화도는 바이오센서를 통해 분석된 K_D 측정치인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 정제된 것인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제41항에 있어서, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상 또는 98% 이상의 균질도로 정제되는 것인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
서열번호 3(CDR-H1), 서열번호 4(CDR-H2), 서열번호 5(CDR-H3), 서열번호 6(CDR-L1), 서열번호 7(CDR-L2) 및 서열번호 8(CDR-L3)에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 6개의 상보성 결정 영역("CDR")을 포함하는 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편으로서, 중쇄는 CDR-H2에 A61F, CDR-H2에 A61E, CDR-H2에 A61D, CDR-H2에 D62L, CDR-H2에 D62G, CDR-H2에 D62Q, CDR-H2에 D62T, CDR-H2에 D62K, CDR-H2에 D62R, CDR-H2에 D62E, CDR-H2에 D62H, CDR-H2에 K64S, CDR-H2에 K64V, CDR-H2에 K64Q, CDR-H2에 R65V, CDR-H2에 R65F, CDR-H2에 R65H, CDR-H2에 R65N, CDR-H2에 R65S, CDR-H2에 R65Q, CDR-H2에 R65K, CDR-H2에 R65I, 및 CDR-H3에 Y98H에서 선택되는 1 이상의 치환, 및 경우에 따라 표 7, 8, 9, 10, 11, 12-1 내지 12-9 및 13 중 1 이상에서 선택되는 1 이상의 추가 돌연변이 또는 돌연변이의 조합을 포함하고, 6개의 CDR은 함께 항체 베바시주맙 또는 항체 라니비주맙의 CDR 서열과 비교하여 최대 17개 아미노산 치환을 갖는 것인 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편.
제43항에 있어서, 6개의 CDR은 함께 항체 베바시주맙 또는 항체 라니비주맙의 CDR 서열과 비교하여 최대 16개, 최대 15개, 최대 14개, 최대 13개, 최대 12개, 최대 11개, 최대 10개, 최대 9개, 최대 8개, 최대 7개, 최대 6개, 최대 5개, 또는 최대 4개 아미노산 치환을 갖는 것인 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편.
제43항 또는 제44항에 있어서, 임의의 개별 CDR은 항체 베바시주맙의 상응하는 CDR 서열과 비교하여 3개가 넘지 않는 아미노산 치환을 갖는 것인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제43항 또는 제44항에 있어서, 임의의 개별 CDR은 항체 베바시주맙의 상응하는 CDR 서열과 비교하여 2개가 넘지 않는 아미노산 치환을 갖는 것인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제43항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 각각 단일클론 항체 또는 단일클론 항체의 항-VEGF 결합 단편인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제43항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 각각 인간 또는 인간화 항체, 또는 인간 또는 인간화 항체의 항-VEGF 결합 단편인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제43항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, IgG인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제49항에 있어서, IgG₁인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제49항에 있어서, IgG₂인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제43항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, ADCC 활성을 증가시키는 Fc 영역 내 1 이상의 돌연변이를 포함하는 것인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제43항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 푸코실화되지 않은 것인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제43항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, FcγR에 대한 결합을 증가시키는 Fc 영역 내 1 이상의 돌연변이를 포함하는 것인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제43항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, FcRn에 대한 결합을 증가시키는 Fc 영역 내 1 이상의 돌연변이를 포함하는 것인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제43항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, ADCC 활성을 감소시키는 Fc 영역 내 1 이상의 돌연변이를 포함하는 것인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제43항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 1 이상의 돌연변이이외에, 서열번호 1에 상응하는 V_H 서열 및 서열번호 2에 상응하는 V_L 서열을 갖는 것인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제43항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 정제된 것인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제58항에 있어서, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상 또는 98% 이상의 균질도로 정제되는 것인 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편.
제1항 내지 제59항 중 어느 한 항에 따른 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편을 포함하는 항체-약물 접합체.
제1항 내지 제59항 중 어느 한 항에 따른 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편 또는 제60항에 따른 항체-약물 접합체, 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학 조성물.
제1항 내지 제36항 또는 제43항 내지 제57항 중 어느 한 항에 따른 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산.
제62항의 핵산을 포함하는 벡터.
제63항에 따른 벡터로 형질전환된 원핵 숙주 세포.
제63항에 따른 벡터로 형질전환된 진핵 숙주 세포.
제62항의 뉴클레오티드 서열을 발현하도록 조작된 진핵 숙주 세포.
제66항에 있어서, 포유동물 숙주 세포인 진핵 숙주 세포.
(a) 제66항 또는 제67항의 진핵 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 (b) 항-VEGF 항체 또는 항체의 항-VEGF 결합 단편을 회수하는 단계를 포함하는, 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편의 제조 방법.
암의 치료 방법으로서, 이를 필요로 하는 인간 환자에게, 제1항 내지 제59항 중 어느 한 항에 따른 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편, 제60항에 따른 항체-약물 접합체, 또는 제61항에 따른 약학 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는 치료 방법.
제69항에 있어서, 암은 결장의 전이성 암종, 직장의 전이성 암종, 비평편 비소세포 폐암, 또는 전이성 HER2-음성 유방암인 치료 방법.
제70항에 있어서, 암은 절제 불가능한, 국소 진행형의, 재발성 또는 전이성, 비평편 비소세포 폐암인 치료 방법.
나이 관련 황반 변성을 치료하는 방법으로서, 이를 필요로 하는 인간 환자에게 제1항 내지 제59항 중 어느 한 항에 따른 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편, 제60항에 따른 항체-약물 접합체, 또는 제61항에 따른 약학 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는 치료 방법.
면역 질병을 치료하는 방법으로서, 이를 필요로 하는 인간 환자에게 제1항 내지 제59항 중 어느 한 항에 따른 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 결합 단편, 제60항에 따른 항체-약물 접합체, 또는 제61항에 따른 약학 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는 치료 방법.
제73항에 있어서, 면역 질병은 류마티스성 관절염 또는 그레이브 질환인 치료 방법.