KR20120024262A - Compositions having antioxidant activity which comprise mixed extracts of natural substances - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 천연물의 혼합 추출물을 포함하는, 항산화 활성을 갖는 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 백일홍 줄기, 삼나무 줄기 껍질, 산돌배나무 줄기 껍질, 산사나무 줄기 껍질, 고로쇠나무 줄기 껍질, 밤나무 잎, 산딸나무 잎 및 비파나무 잎으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 2종 이상의 혼합 추출물을 포함하는, 항산화 활성을 갖는 조성물에 관한 것이다.
The present invention relates to a composition having an antioxidant activity, comprising a mixed extract of natural products, more specifically crape myrtle stem, cedar stem bark, hawthorn stem bark, hawthorn stem bark, cypress stem bark, chestnut leaf, wildberry It relates to a composition having an antioxidant activity, comprising two or more mixed extracts selected from the group consisting of tree leaves and loquat leaves.
자유 라디칼(free radical)은 화학적으로 매우 불안정한 상태의 화합물이기 때문에 주위에 있는 다른 화합물로부터 전자를 빼앗아 안정한 상태의 화합물이 되려는 성질이 강하다. 그 결과 자유 라디칼 주위에 있는 분자들은 쉽게 전자를 잃게 되어 산화적 손상을 입을 뿐만 아니라, 그 자체가 다시 자유 라디칼이 되어 주위의 화합물을 공격하는 일련의 반응이 연속적으로 일어나게 된다. 이들 자유 라디칼은 인체 내에서도 생명활동을 통하여 자연스럽게 생성되며, 대표적인 자유 라디칼로는 생명유지에 필요한 에너지 생산에 필수적인 산소(안정한 분자상태인 기저 삼중항 산소(ground state triplet oxygen)) 유래의 수퍼옥사이드 라디칼(superoxide radical(O2 -)), 하이드록실 라디칼(hydroxyl radical(HO?)), 과산화수소(hydrogen peroxide(H2O2)) 및 일중항 산소(singlet oxygen(1O2))와 같은 반응성이 매우 큰 자유 라디칼인 활성산소종(reactive oxygen species, ROS)이 있다. 이렇게 생성된 활성산소종은 인체를 구성하는 지방과 단백질 그리고 유전자를 산화적으로 손상시켜 노화는 물론 암을 비롯하여 뇌졸중, 파킨슨씨병 등의 뇌질환과 심장질환, 허혈, 동맥경화, 피부손상, 염증, 류마티스, 자가면역질환 등의 각종 질병을 일으키는 원인이 되는데, 인체에는 이러한 활성산소종으로부터 인체를 보호하기 위한 수단으로 수퍼옥사이드 디스뮤타아제(SOD: superoxide dismutase), 퍼옥시다아제(peroxidase), 카탈라아제(catalase) 및 글루타치온 퍼옥시다아제(glutathione peroxidase)와 같은 항산화 효소계를 갖추고 있다. 그러나 최근 들어 공해와 환경오염에 따른 각종 화학물질, 식품첨가물, 흡연, 음주, 자외선 및 정신적 스트레스 등의 각종 환경적 요인에 의하여 우리 몸의 밸런스가 무너지면서 인체의 정상적인 생명활동에 필요한 양보다 과다하게 활성산소종이 생성되어 인체의 자가 항산화 보호체계의 능력을 벗어나게 됨으로써 각종 질병의 발생 및 노화속도가 증가되고 있다.
Since free radicals are chemically very unstable compounds, they have a strong tendency to take electrons from other compounds around them and become stable compounds. As a result, molecules around free radicals easily lose electrons, causing oxidative damage, as well as a series of reactions that themselves become free radicals and attack surrounding compounds. These free radicals are naturally produced in the human body through life activities. Representative free radicals include superoxide radicals derived from oxygen (ground molecular triplet oxygen, which is a stable molecular state) which is essential for the production of energy necessary for life support. superoxide radical (O 2 -) in reactivity, such as a), hydroxyl radicals (? hydroxyl radical (HO)) , hydrogen peroxide (hydrogen peroxide (H 2 O 2 )) , and singlet oxygen (singlet oxygen (1 O 2) ) so There is a large free radical, reactive oxygen species (ROS). Oxygen species produced in this way oxidatively damage fats, proteins and genes that make up the human body, and cause aging, brain diseases such as stroke, Parkinson's disease, heart diseases, ischemia, arteriosclerosis, skin damage, inflammation, It causes various diseases such as rheumatism and autoimmune diseases. In human body, superoxide dismutase (SOD), peroxidase, catalase as a means of protecting the human body from these active oxygen species. And antioxidant enzyme systems such as glutathione peroxidase. However, in recent years, the balance of our body has been broken down by various environmental factors such as chemicals, food additives, smoking, drinking, ultraviolet rays and mental stress caused by pollution and environmental pollution. The generation of reactive oxygen species is beyond the ability of the human body's self-antioxidant protection system is increasing the rate of occurrence and aging of various diseases.
항산화 활성이란 이와 같이 생체 내에서 활성산소가 과도하게 생성되는 것을 방지할 뿐만 아니라 세포에 회복 불가능한 손상을 야기하는 산화현상을 방지하는 능력을 말한다. 이러한 항산화 활성을 지닌 물질을 항산화제라 하며 이들은 크게 인위적으로 합성된 합성 항산화제 및 자연계에 존재하는 천연 항산화제로 나뉜다. 지금까지 개발된 합성 항산화제로는, BHA(butylated hydroxyanisole), BHT(butylated hydroxytoluene) 및 NDGA(nordihydroguaiaretic acid) 등이 있으며, 천연 항산화제로는 수퍼옥사이드 디스뮤타아제, 퍼옥시다아제, 카탈라아제 및 글루타치온 퍼옥시다아제 등의 항산화효소와 아스코르브산(비타민C), 토코페롤(비타민E) 및 카로티노이드 등의 비효소적 항산화물질이 있다. 그러나 합성 항산화제는 온도에 약해 가열하면 쉽게 파괴될 뿐만 아니라 생체 내에서의 활성 산소 소거 작용이 충분하지 않고 인체 내에서도 알레르기나 암과 같은 각종 질환을 유발할 수 있다는 단점이 있어 인체에 장기간 사용이 제한되고 있다. 따라서 천연물로부터 항산화 활성은 높으면서도 인체에는 전혀 해가 없는 항산화 물질을 찾고자 하는 시도가 활발히 진행 중에 있다. 이와 같은 천연 항산화 소재로서 녹차, 가시오가피, 가죽나무, 감국, 감잎, 황금, 누리장나무, 찔레나무, 마름, 민들레, 홍화, 장목 등의 식물 추출물 등의 효과가 알려져 있으며, 이들을 이용한 식품 첨가물, 화장료 조성물 및 약학조성물 등이 연구 개발되고 있다. 그러나 이러한 노력에도 불구하고 자연계에는 아직도 알려지지 않은 무수한 항산화 물질이 존재하고 있으며 따라서 보다 우수한 항산화 활성을 지니는 천연 항산화 소재에 대한 연구 및 개발의 필요성은 날로 증대되고 있다.
Antioxidant activity refers to the ability to prevent excessive generation of free radicals in vivo as well as to prevent oxidative phenomena that cause irreparable damage to cells. Substances having such antioxidant activity are called antioxidants and they are divided into synthetic antioxidants synthesized artificially and natural antioxidants present in nature. The synthetic antioxidants developed so far include butylated hydroxyanisole (BHA), butylated hydroxytoluene (BHT) and nordihydroguaiaretic acid (NDGA), and natural antioxidants include superoxide dismutase, peroxidase, catalase and glutathione peroxidase. Antioxidant enzymes and non-enzymatic antioxidants such as ascorbic acid (vitamin C), tocopherol (vitamin E) and carotenoids. However, synthetic antioxidants are not easily destroyed when heated due to weak temperature, and there is a lack of active oxygen scavenging effect in the living body and can cause various diseases such as allergy or cancer in the human body. have. Therefore, attempts are being made to find antioxidants from natural products that have high antioxidant activity and are harmless to the human body. Such natural antioxidants are known to have effects such as plant extracts such as green tea, prickly pear, leather, persimmon, persimmon leaf, golden, nectar, brier, dried, dandelion, safflower, and lumber. Food additives and cosmetic compositions using them are known. And pharmaceutical compositions are being researched and developed. Despite these efforts, however, there are countless antioxidants that are still unknown in nature, and thus, the need for research and development of natural antioxidant materials with better antioxidant activity is increasing day by day.
백일홍(Zinnia elegans)은 국화과의 한해살이 풀로서, 7-10월에 줄기 끝 또는 잎겨드랑이에서 꽃줄기가 나와 빨강, 노랑, 보라, 흰색, 옅은 노랑 등 여러 가지 빛깔로 피며, 번식력이 좋아 관상용으로 심는다. 삼나무(Cryptomeria japonica)는 낙우송과의 상록 교목으로서, 건축, 토목, 선박, 가구재의 재료나 방풍, 산림녹화용으로 사용되고 있다. 산돌배나무(Pyrus ussuriensis)는 장미과의 낙엽 활엽 교목으로 열매는 식용한다. 산사나무(Crataegus pinnatifida)는 장미과의 낙엽 활엽 소교목으로 전국의 산지에 서식하며 열매는 식용과 약용으로 이용된다. 고로쇠나무(Acer mono Max.)는 단풍나무과의 낙엽 활엽 관목으로 수액은 식용하며 수피는 약용으로 이용된다. 밤나무(Castanea crenata)는 참나무과의 낙엽 활엽 교목으로 열매와 열매의 내피(보늬)는 식용?또는 약용한다. 산딸나무(Cornus kousa)는 층층나무과의 낙엽 소교목으로 열매는 식용한다. 비파나무(Eriobotrya japonica)는 장미과의 상록 활엽 소교목으로 열매는 식용하며 잎은 약용으로 이용되며, 최근 비파나무 잎에서 항암물질이 보고된 바 있다. 하지만, 백일홍 줄기, 삼나무 줄기 껍질, 산돌배나무 줄기 껍질, 산사나무 줄기 껍질, 고로쇠나무 줄기 껍질, 밤나무 잎, 산딸나무 잎 및 비파나무 잎과 같이 이들 식물의 특정 부위에서 우수한 항산화 활성이 있다고 보고된 적은 없으며, 이들의 혼합 추출물 역시 항산화 활성이 보고된 바 없다.
Zinnia elegans is an annual plant of the Asteraceae. Flowers bloom from the end of stems or axillas in July-October and bloom in various colors including red, yellow, violet, white, and pale yellow. . Cedar (Cryptomeria japonica) is an evergreen tree of the larch family, and is used for materials of construction, civil engineering, ships, furniture, windbreak, and forest greening. Pyrus ussuriensis is a deciduous broad-leaved arborescent of the family Rosaceae, whose fruit is edible. Hawthorn (Crataegus pinnatifida) is a deciduous broad-leaved arborescent of the Rosaceae family, which inhabits mountain areas throughout the country, and its fruit is used for food and medicinal purposes. Acer mono Max. Is a deciduous broad-leaved shrub of the Maple family. The sap is edible and the bark is used for medicinal purposes. The chestnut tree (Castanea crenata) is a deciduous broad-leaved arboreous tree of the oak family, which is edible or medicinal. Cornus kousa is a deciduous arborescent of the dogwood family, whose fruit is edible. Loquat tree (Eriobotrya japonica) is an evergreen broad-leaved arborescent of the family Rosaceae, whose fruit is edible and its leaves are used for medicinal purposes. However, few have been reported to have good antioxidant activity at certain parts of these plants, such as crape myrtle, cedar bark, hawthorn bark, hawthorn bark, cypress bark, chestnut leaves, cornel leaves and loquat leaves. None of these mixed extracts have been reported to have antioxidant activity.
본 발명자들은 천연물 유래의 항산화 조성물을 개발하던 중, 상기 천연물들을 2종 이상 혼합하여 추출한 추출물이 강력한 항산화제인 트롤록스에 비해 우수한 항산화 활성이 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
The inventors of the present invention, while developing an antioxidant composition derived from natural products, confirmed that the extract extracted by mixing two or more of the natural products has superior antioxidant activity compared to trolox, a powerful antioxidant, and completed the present invention.
따라서, 본 발명의 목적은 천연물의 혼합 추출물을 포함하는, 항산화 활성을 갖는 조성물을 제공하는 것이다.
Accordingly, it is an object of the present invention to provide a composition having antioxidant activity, comprising a mixed extract of natural products.
상기 목적에 따라, 본 발명은 백일홍 줄기, 삼나무 줄기 껍질, 산돌배나무 줄기 껍질, 산사나무 줄기 껍질, 고로쇠나무 줄기 껍질, 밤나무 잎, 산딸나무 잎 및 비파나무 잎으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 2종 이상의 혼합 추출물을 포함하는, 항산화 활성을 갖는 조성물을 제공한다. According to the above object, the present invention is a mixture of two or more selected from the group consisting of crape myrtle stem, cedar stem bark, hawthorn stem bark, hawthorn stem bark, cypress stem bark, chestnut leaf, cornel leaf and loquat leaf It provides a composition having an antioxidant activity, including an extract.
또한, 본 발명은 상기 조성을 포함하는 식품, 화장품, 의약품 및 동물용 사료를 제공한다.
The present invention also provides a food, cosmetics, pharmaceuticals and animal feed comprising the composition.
본 발명의 혼합 추출물은 항산화 활성이 매우 우수하므로 노화 예방 또는 치료용 약학 조성물, 노화 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물, 기능성 화장품 또는 동물용 사료 등에 유용하게 사용될 수 있다.
Since the mixed extract of the present invention is very excellent in antioxidant activity, it can be usefully used for preventing or treating a pharmaceutical composition for aging prevention, functional food composition for preventing or improving aging, functional cosmetics or animal feed.
본 발명은 백일홍 줄기, 삼나무 줄기 껍질, 산돌배나무 줄기 껍질, 산사나무 줄기 껍질, 고로쇠나무 줄기 껍질, 밤나무 잎, 산딸나무 잎 및 비파나무 잎으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 2종 이상의 혼합 추출물을 포함하는, 항산화 활성을 갖는 조성물을 제공한다.
The present invention comprises two or more mixed extracts selected from the group consisting of crape myrtle stem, cedar stem bark, hawthorn stem bark, hawthorn stem bark, cypress stem bark, chestnut leaf, cornel leaf and loquat leaf, Provided are compositions having antioxidant activity.
상기 추출물은 초음파 추출법, 여과법 및 환류 추출법 등 당업계에 알려진 통상적인 추출방법에 의해 제조될 수 있다. 바람직하게는, 상기 추출물은 본 발명에 따른 천연물의 혼합 건조물을 물, C1~C4 알코올 또는 이들의 혼합 용매로 추출하거나, 보다 바람직하게는 물, 50% 에탄올 또는 50% 메탄올로 추출하여 제조될 수 있다. 또는, 각 천연물을 상기 방법으로 추출하여 얻어진 추출물을 혼합하여 혼합 추출물을 제조할 수도 있다.
The extract may be prepared by conventional extraction methods known in the art, such as ultrasonic extraction, filtration and reflux extraction. Preferably, the extract is prepared by extracting a mixture of natural products according to the invention with water, C 1 ~ C 4 alcohol or a mixed solvent thereof, or more preferably with water, 50% ethanol or 50% methanol Can be. Alternatively, a mixed extract may be prepared by mixing extracts obtained by extracting each natural product by the above method.
일례로, 건조시켜 세절한 백일홍 줄기, 삼나무 줄기 껍질, 산돌배나무 줄기 껍질, 산사나무 줄기 껍질, 고로쇠나무 줄기 껍질, 밤나무 잎, 산딸나무 잎 및 비파나무 잎으로 이루어진 군으로부터 2종 이상을 선택하여 혼합한 후, 물, 50% 에탄올 또는 50% 메탄올에 침지하여 초음파 처리 후 환류 추출하는 과정을 반복하여 추출할 수 있다. 바람직하게는, 건조 및 세절된 천연물 시료의 침지액을 초음파로 처리한 후, 환류 추출하는 것을 반복 처리하여 추출할 수 있다. 상기 초음파 조건은 15 내지 30 kHz, 바람직하기로는 20 kHz의 초음파를 이용하여, 50 내지 200 watts/liter, 바람직하기로는 100 watts/liter로, 15 내지 60분, 바람직하기로는 30분간 처리할 수 있으며, 환류 추출은 40 내지 100℃에서 1시간 동안 10회 반복할 수 있다. 추출 용매의 양과 시간은 실험 조건에 따라 달라질 수 있으며, 당업자가 자유로이 변경하여 수행할 수 있다. 이후에 여과, 감압 농축 또는 동결 건조 등의 과정을 추가로 거칠 수 있다.
For example, two or more selected from the group consisting of dried and finely cut crape myrtle stem, cedar stem bark, hawthorn stem bark, hawthorn stem bark, cypress stem bark, chestnut leaf, cornel leaf and loquat leaf Then, it can be extracted by repeating the extraction by refluxing after soaking in water, 50% ethanol or 50% methanol. Preferably, the immersion liquid of the dried and shredded natural product sample may be ultrasonically treated, followed by extraction by reflux extraction. The ultrasonic conditions may be treated with 15 to 30 kHz, preferably 20 kHz, 50 to 200 watts / liter, preferably 100 watts / liter, 15 to 60 minutes, preferably 30 minutes , Reflux extraction may be repeated 10 times for 1 hour at 40 to 100 ℃. The amount and time of the extraction solvent may vary depending on the experimental conditions, it can be carried out by those skilled in the art freely modified. Thereafter, the process of filtration, concentration under reduced pressure, or freeze drying may be further performed.
일 실시예에 있어서, 상기 혼합 추출물은 백일홍 줄기 및 산딸나무 잎의 혼합 추출물일 수 있다. 다른 실시예에 있어서, 상기 혼합 추출물은 삼나무 줄기 껍질, 산돌배나무 줄기 껍질 및 산사나무 줄기 껍질의 혼합 추출물일 수 있다. 또 다른 실시예에 있어서, 상기 혼합 추출물은 삼나무 줄기 껍질, 고로쇠나무 줄기 껍질 및 비파나무 잎의 혼합 추출물일 수 있다. 또 다른 실시예에 있어서, 상기 혼합 추출물은 백일홍 줄기 및 삼나무 줄기 껍질의 혼합 추출물일 수 있다. 또 다른 실시예에 있어서, 상기 혼합 추출물은 산딸나무 잎, 산돌배나무 줄기 껍질 및 비파나무 잎의 혼합 추출물일 수 있다. 또 다른 실시예에 있어서, 상기 혼합 추출물은 산돌배나무 줄기 껍질, 산사나무 줄기 껍질 및 고로쇠나무 줄기 껍질의 혼합 추출물일 수 있다. 또 다른 실시예에 있어서, 상기 혼합 추출물은 산딸나무 잎, 산돌배나무 줄기 껍질, 고로쇠나무 줄기 껍질 및 밤나무 잎의 혼합 추출물일 수 있다. 당업자라면, 상기 천연물을 다양한 성분 및 비율로 조합하여 혼합 추출물을 제조할 수 있으며, 이는 모두 본 발명의 범주에 속한다.
In one embodiment, the mixed extract may be a mixed extract of zinnia stem and cornel leaves. In another embodiment, the mixed extract may be a mixed extract of cedar stem bark, hawthorn stem bark and hawthorn stem bark. In another embodiment, the mixed extract may be a mixed extract of cedar stem bark, elder bark stem and loquat leaf. In another embodiment, the mixed extract may be a mixed extract of the crape myrtle stem and cedar stem bark. In another embodiment, the mixed extract may be a mixed extract of cornel leaves, wild berry stem bark and loquat leaves. In another embodiment, the mixed extract may be a mixed extract of hawthorn stem bark, hawthorn stem bark, and cypress stem bark. In another embodiment, the mixed extract may be a mixed extract of cornel leaves, hawthorn stem bark, crocus stem bark and chestnut leaves. Those skilled in the art can combine the natural products in various components and ratios to produce mixed extracts, all of which are within the scope of the present invention.
상기 일 실시예에 따른 혼합 추출물은 백일홍 줄기 30 내지 70 중량부, 바람직하게는 50 중량부 및 산딸나무 잎 30 내지 70 중량부, 바람직하게는 50 중량부를 혼합하여 추출함으로써 얻을 수 있다. 상기 다른 실시예에 따른 혼합 추출물은 삼나무 줄기 껍질 30 내지 70 중량부, 바람직하게는 50 중량부, 산돌배나무 줄기 껍질 15 내지 35 중량부, 바람직하게는 25 중량부 및 산사나무 줄기 껍질 15 내지 35 중량부, 바람직하게는 25 중량부를 혼합하여 추출함으로써 얻을 수 있다. 상기 또 다른 실시예에 따른 혼합 추출물은 삼나무 줄기 껍질 35 내지 45 중량부, 바람직하게는 40 중량부, 고로쇠나무 줄기 껍질 35 내지 45 중량부, 바람직하게는 40 중량부 및 비파나무 잎 10 내지 30 중량부, 바람직하게는 20 중량부를 혼합하여 추출함으로써 얻을 수 있다. 상기 또 다른 실시예에 따른 혼합 추출물은 백일홍 줄기 30 내지 70 중량부, 바람직하게는 50 중량부 및 삼나무 줄기 껍질 30 내지 70 중량부, 바람직하게는 50 중량부를 혼합하여 추출함으로써 얻을 수 있다. 상기 또 다른 실시예에 따른 혼합 추출물은 산딸나무 잎 15 내지 35 중량부, 바람직하게는 25 중량부, 산돌배나무 줄기 껍질 30 내지 70 중량부, 바람직하게는 50 중량부 및 비파나무 잎 15 내지 35 중량부, 바람직하게는 25 중량부를 혼합하여 추출함으로써 얻을 수 있다. 상기 또 다른 실시예에 따른 혼합 추출물은 산돌배나무 줄기 껍질 15 내지 35 중량부, 바람직하게는 25 중량부, 산사나무 줄기 껍질 15 내지 35 중량부, 바람직하게는 25 중량부 및 고로쇠나무 줄기 껍질 30 내지 70 중량부, 바람직하게는 50 중량부를 혼합 혼합하여 추출함으로써 얻을 수 있다. 상기 또 다른 실시예에 따른 혼합 추출물은 산딸나무 잎 15 내지 25 중량부, 바람직하게는 20 중량부, 산돌배나무 줄기 껍질 25 내지 35 중량부, 바람직하게는 30 중량부, 고로쇠나무 줄기 껍질 25 내지 35 중량부, 바람직하게는 30 중량부 및 밤나무 잎 15 내지 25 중량부, 바람직하게는 20 중량부를 혼합하여 추출함으로써 얻을 수 있다.
The mixed extract according to the embodiment may be obtained by mixing 30 to 70 parts by weight, preferably 50 parts by weight, and 30 to 70 parts by weight, preferably 50 parts by weight of wild berry stem. The mixed extract according to the other embodiment is 30 to 70 parts by weight, preferably 50 parts by weight, 15 to 35 parts by weight of hawthorn stem bark, preferably 25 parts by weight and 15 to 35 parts by weight of hawthorn stem bark Part, preferably 25 parts by weight can be obtained by mixing. The mixed extract according to another embodiment is 35 to 45 parts by weight, preferably 40 parts by weight of cedar stem bark, 35 to 45 parts by weight, preferably 40 parts by weight and 10 to 30 parts by weight of loquat leaf Part, preferably 20 parts by weight can be obtained by mixing. The mixed extract according to another embodiment may be obtained by mixing 30 to 70 parts by weight, preferably 50 parts by weight, and 30 to 70 parts by weight, preferably 50 parts by weight of cedar stalk stem. Mixed extract according to another embodiment is 15 to 35 parts by weight of cornel leaves, preferably 25 parts by weight, 30 to 70 parts by weight of wild berry stem bark, preferably 50 parts by weight and 15 to 35 parts by weight of loquat leaves Part, preferably 25 parts by weight can be obtained by mixing. The mixed extract according to another embodiment is 15 to 35 parts by weight, preferably 25 parts by weight, hawthorn stem bark 15 to 35 parts by weight, preferably 25 parts by weight and hawthorn stem bark 30 to 20% 70 parts by weight, preferably 50 parts by weight can be obtained by mixing and extracting. The mixed extract according to another embodiment is 15 to 25 parts by weight, preferably 20 parts by weight, wild berry stem bark 25 to 35 parts by weight, preferably 30 parts by weight, hawthorn stem bark 25-35 It can be obtained by mixing by weight, preferably 30 parts by weight and 15 to 25 parts by weight, preferably 20 parts by weight of chestnut leaves.
본 발명에 따른 천연물 혼합 추출물은 DPPH법으로 전자공여능을, 펜톤(Fenton) 반응으로 하이드록실 라디칼 소거활성을 각각 측정한 결과 강력한 항산화제인 트롤록스(trolox, 비타민 E의 수용성 유도체)에 비하여 우수한 자유 라디칼 소거 활성을 나타낸다(표 2 및 3 참조).
The natural product mixed extract according to the present invention has excellent free radicals compared to trolox (a water-soluble derivative of vitamin E), which is a powerful antioxidant as a result of measuring the electron donating ability by DPPH method and the hydroxyl radical scavenging activity by the Fenton reaction. Scavenging activity is shown (see Tables 2 and 3).
따라서 본 발명에 따른 천연물의 혼합 추출물은 일반적인 항산화용 의약품 제제의 형태로 사용될 수 있다. 상기 의약품 제제는 경구 또는 비경구 투여 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 천연물의 혼합 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(Calcium carbonate), 수크로스(Sucrose) 또는 락토오스(Lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.Therefore, the mixed extract of natural products according to the present invention can be used in the form of a general antioxidant pharmaceutical preparations. The pharmaceutical preparation may be administered in an oral or parenteral dosage form, and when formulated, it may be prepared using diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrating agents, surfactants, etc. which are commonly used. Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, and such solid preparations include at least one excipient such as starch, calcium carbonate in a mixed extract of the natural product of the present invention. Sucrose (Sucrose) or lactose (Lactose), gelatin and the like are mixed and prepared. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium styrate talc are also used. Oral liquid preparations include suspensions, solvents, emulsions, and syrups, and may include various excipients, such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives, in addition to commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin. . Formulations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, freeze-dried preparations, and suppositories. As the non-aqueous solvent and the suspension solvent, propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate, and the like can be used. As the base of the suppository, witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, glycerogelatin and the like can be used.
본 발명의 천연물의 혼합 추출물의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도에 따라 그 범위가 다양하며, 일일 투여량은 천연물의 혼합 추출물의 양을 기준으로 0.1 내지 100 ㎎/㎏이고, 바람직하게는 30 내지 80 ㎎/㎏이고, 더욱 바람직하게는 50 내지 60 mg/kg이며, 하루 1 ~ 3 회 투여될 수 있다.The dosage of the mixed extract of the natural product of the present invention varies depending on the weight, age, sex, health condition, diet, time of administration, administration method, excretion rate and severity of the disease of the patient, the daily dosage is natural 0.1 to 100 mg / kg, preferably 30 to 80 mg / kg, more preferably 50 to 60 mg / kg, based on the amount of the mixed extract, can be administered 1-3 times a day.
본 발명의 추출물은 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.The extract of the present invention may be used alone or in combination with methods using surgery, radiation therapy, hormone therapy, chemotherapy and biological response modifiers.
또한, 본 발명은 천연물의 혼합 추출물은 식품 형태로 제공될 수 있다. In addition, the present invention, the mixed extract of the natural product may be provided in a food form.
본 발명에 따른 천연물의 혼합 추출물을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합량은 그의 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 발명의 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.When the mixed extract of the natural product according to the present invention is used as a food additive, the extract may be added as it is or used with other food or food ingredients, and may be appropriately used according to a conventional method. The amount of the active ingredient to be mixed may be suitably determined according to the purpose of its use (prevention, health or therapeutic treatment). Generally, in the preparation of food or beverages, the composition of the present invention is added in an amount of up to 15 parts by weight, preferably up to 10 parts by weight based on the raw materials. However, in the case of long-term intake for health and hygiene or health control, the amount may be below the above range, and the active ingredient may be used in an amount above the above range because there is no problem in terms of safety. .
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.There is no particular limitation on the kind of food. Examples of the food to which the above substances can be added include dairy products including meat, sausage, bread, chocolate, candy, snack, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gums, ice cream, various soups, drinks, tea, Alcoholic beverages, and vitamin complexes, all of which include healthy foods in a conventional sense.
본 발명의 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 0.01 ~ 0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 ~ 0.03 g 이다.The health beverage composition of the present invention may contain various flavors or natural carbohydrates as an additional ingredient such as ordinary beverages. Such natural carbohydrates are monosaccharides such as glucose and fructose, disaccharides such as maltose and sucrose, and polysaccharides such as dextrin and cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol and erythritol. Examples of sweeteners include natural sweeteners such as tau martin and stevia extract, synthetic sweeteners such as saccharin and aspartame, and the like. The proportion of the natural carbohydrate is generally about 0.01 to 0.04 g, preferably about 0.02 to 0.03 g per 100 ml of the composition of the present invention.
상기 외에 본 발명의 추출물은 여러가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 추출물 또는 분획물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부당 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.In addition to the above, the extract of the present invention contains various nutrients, vitamins, electrolytes, flavoring agents, coloring agents, pectic acid and salts thereof, alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusting agents, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonic acid. Carbonating agents and the like used in beverages. In addition, the extract or fraction of the present invention may contain a flesh for the production of natural fruit juices, fruit juice drinks and vegetable drinks. These components can be used independently or in combination. The proportion of such additives is not critical but is generally selected in the range of 0.01 to 0.1 parts by weight per 100 parts by weight of the composition of the present invention.
아울러, 본 발명에 따른 천연물의 혼합 추출물은 화장품 형태로 제공될 수 있다. In addition, the mixed extract of the natural product according to the present invention may be provided in a cosmetic form.
본 발명에 따른 천연물의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하여 제조되는 화장품은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조할 수 있다. 유화 제형의 화장품으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다.Cosmetics prepared by containing the mixed extract of natural products according to the present invention as an active ingredient can be prepared in the form of a general emulsion formulation and solubilized formulation. Cosmetics of the emulsified formulations include nutrient cosmetics, creams, essences, etc., and cosmetics of the solubilized formulations are flexible cosmetics.
적합한 화장품의 제형으로는 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.Suitable cosmetic formulations include, for example, emulsions, suspensions, microemulsions, microcapsules, microgranules or ionic (liposomes), nonionic vesicles obtained by dispersing an oil phase in a solution, gel, solid or pasty anhydrous product, aqueous phase, for example. It may be provided in the form of a dispersant, cream, skin, lotion, powder, ointment, spray or cone stick. It may also be prepared in the form of a foam or in the form of an aerosol composition further containing a compressed propellant.
또한, 상기 화장품은 본 발명의 추출물 또는 분획물에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.
In addition to the extracts or fractions of the present invention, the cosmetics may contain fatty substances, organic solvents, solubilizers, thickening and gelling agents, emollients, antioxidants, suspending agents, stabilizers, foaming agents, fragrances, surfactants, Commonly used in water, ionic or nonionic emulsifiers, fillers, metal ion sequestrants and chelating agents, preservatives, vitamins, blockers, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic or lipophilic active agents, lipid vesicles or cosmetics And any other ingredients that may be used, such as auxiliaries commonly used in the cosmetic field.
나아가, 본 발명에 따른 천연물의 혼합 추출물은 동물용 사료의 형태로 제공될 수 있다. 상기 동물용 사료는 임의의 적절한 형태, 예컨대 건조 형태, 반-습윤 형태 또는 습윤 형태일 수 있고, 이는 냉장 또는 장기 보존되는 애완동물 사료 제품일 수 있다. 상기 동물용 사료는 본 발명에 따른 천연물의 혼합 추출물 이외에, 임의의 탄수화물원, 단백질원 및 지질원을 함유할 수 있다. 상기 동물용 사료는 당해분야에 널리 알려진 통상의 제조방법, 즉 압출 성형(extrusion cooking)이나, 굽기 (baking) 및 기타 적당한 가공법을 이용하에 제조될 수 있다. 동물용 사료를 압출 성형할 경우, 보통 키블(kibble) 형태로 제공될 수 있다. 습윤 식품 또는 습윤 애완동물 사료의 경우, 육류 모방 제품 형태로 제공될 수 있다. 청크 타입(chunk type) 제품의 제조를 위한 다른 방법 또한, 예컨대 스팀 오븐에서 조리시 사용할 수 있다. 이와 다르게, 적절한 육재료를 유화하여 고기 유화물을 제조하고, 적절한 겔화제를 가하고, 고기 유화물을 가열한 후 캔 또는 기타 용기에 담아서 로프 타입(loaf type) 제품을 제조할 수 있다.
Furthermore, the mixed extract of natural products according to the present invention may be provided in the form of animal feed. The animal feed may be in any suitable form, such as dry form, semi-wet form or wet form, which may be a refrigerated or long-term preserved pet food product. The animal feed may contain any carbohydrate source, protein source and lipid source, in addition to the mixed extract of the natural product according to the present invention. The animal feed can be prepared using conventional manufacturing methods well known in the art, namely extrusion cooking, baking and other suitable processing methods. When extruding animal feed, it can usually be provided in kibble form. For wet foods or wet pet foods, they may be provided in the form of meat mimic products. Other methods for the production of chunk type products can also be used for cooking, for example in steam ovens. Alternatively, meat emulsions may be prepared by emulsifying the appropriate meat material, the appropriate gelling agent may be added, and the meat emulsion may be heated and placed in cans or other containers to produce a loaf type product.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 이들 실시예에 의하여 본 발명의 범위가 국한되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. These examples are only for illustrating the present invention in detail, and the scope of the present invention is not limited by these examples.
실시예Example
1: 백일홍 줄기 및 산딸나무 잎의 혼합 추출물 제조 1: Preparation of Mixed Extract of Crape Myrtle and Cornel Leaves
건조시켜 세절(1× 2cm)한 백일홍 줄기 50 중량부 및 산딸나무 잎 50 중량부를 혼합하여 혼합물 무게 5배의 증류수에 24시간 동안 침지시켰다. 그리고 나서, 상기 혼합물을 환류장치가 부착된 플라스크에 넣고 20 kHz의 초음파를 이용하여 100 watts/liter로 30분간 처리한 후, 100℃에서 1시간 동안 환류 시키면서 추출하는 초음파처리환류추출 과정을 10회 반복하였다. 상기 추출액을 여과 및 감압 농축하여 혼합 추출물 A(수율 11.6%)를 제조하였다.
50 parts by weight of dried (1 × 2 cm) crape myrtle stem and 50 parts by weight of cornel leaves were mixed and immersed in distilled water of 5 times the mixture weight for 24 hours. Then, the mixture was placed in a flask equipped with a reflux apparatus, treated with 100 watts / liter for 30 minutes using ultrasonic waves at 20 kHz, and then subjected to 10 times of ultrasonic reflux extraction, which was extracted while refluxing at 100 ° C. for 1 hour. Repeated. The extract was filtered and concentrated under reduced pressure to prepare a mixed extract A (yield 11.6%).
실시예Example
2: 삼나무 줄기 껍질, 산돌배나무 줄기 껍질 및 2: cedar trunk bark, hawthorn trunk bark and
산사나무Hawthorn
줄기 껍질의 혼합 추출물 제조 Preparation of Mixed Extract of Stem Bark
건조시켜 세절(1× 2cm)한 삼나무 줄기 껍질 50 중량부, 산돌배나무 줄기 껍질 25 중량부 및 산사나무 줄기 껍질 25 중량부를 혼합한 다음, 실시예 1에서와 같은 방법으로 혼합 추출물 B(수율 12.3%)를 제조하였다.
50 parts by weight of dried (1 × 2 cm) cedar stem bark, 25 parts by weight of hawthorn stem bark, and 25 parts by weight of hawthorn stem bark were mixed, and then mixed extract B (yield 12.3%) in the same manner as in Example 1. ) Was prepared.
실시예Example
3: 삼나무 줄기 껍질, 고로쇠나무 줄기 껍질 및 비파나무 잎의 혼합 추출물 제조 3: Preparation of mixed extracts of cedar trunk bark, cypress trunk bark and loquat leaf
건조시켜 세절(1× 2cm)한 삼나무 줄기 껍질 40 중량부, 고로쇠나무 줄기 껍질 40 중량부 및 비파나무 잎 20 중량부를 혼합한 다음, 실시예 1에서와 같은 방법으로 혼합 추출물 C(수율 11.5%)를 제조하였다.
40 parts by weight of dried cedar stem bark (1 × 2 cm), 40 parts by weight of cypress stem bark, and 20 parts by weight of loquat leaf were mixed and mixed extract C (yield 11.5%) in the same manner as in Example 1. Was prepared.
실시예Example
4: 백일홍 줄기 및 삼나무 줄기 껍질의 혼합 추출물 제조 4: Preparation of Mixed Extract of Crape Myrtle and Cedar Stem Bark
건조시켜 세절(1× 2cm)한 백일홍 줄기 50 중량부 및 삼나무 줄기 껍질 50 중량부를 혼합한 다음, 실시예 1에서와 같은 방법으로 혼합 추출물 D(수율 11.4%)를 제조하였다.
50 parts by weight of dried chopped (1 × 2 cm) crape myrtle stem and 50 parts by weight of cedar stem bark were mixed, and a mixed extract D (yield 11.4%) was prepared in the same manner as in Example 1.
실시예Example
5: 산딸나무 잎, 산돌배나무 줄기 껍질 및 비파나무 잎의 혼합 추출물 제조 5: Preparation of mixed extract of cornel leaves, hawthorn stem bark and loquat leaves
건조시켜 세절(1× 2cm)한 산딸나무 잎 25 중량부, 산돌배나무 줄기 껍질 50 중량부 및 비파나무 잎 25 중량부를 혼합한 다음, 실시예 1에서와 같은 방법으로 혼합 추출물 E(수율 11.0%)를 제조하였다.
25 parts by weight of dried, shredded (1 × 2 cm) cornel leaves, 50 parts by weight of berry stem bark and 25 parts by weight of loquat leaf, and then mixed extract E (yield 11.0%) in the same manner as in Example 1. Was prepared.
실시예Example
6: 산돌배나무 줄기 껍질, 6: hawthorn stem bark,
산사나무Hawthorn
줄기 껍질 및 고로쇠나무 줄기 껍질의 혼합 추출물 제조 Preparation of Mixed Extract of Stem Bark and Cypress Bark
건조시켜 세절(1× 2cm)한 산돌배나무 줄기 껍질 25 중량부, 산사나무 줄기 껍질 25 중량부 및 고로쇠나무 줄기 껍질 50 중량부를 혼합한 다음, 실시예 1에서와 같은 방법으로 혼합 추출물 F(수율 11.7%)를 제조하였다.
25 parts by weight of dried and shredded (1 × 2 cm) hawthorn stem bark, 25 parts by weight of hawthorn stem bark, and 50 parts by weight of buckthorn stem bark, and then mixed extract F (yield 11.7) in the same manner as in Example 1. %) Was prepared.
실시예Example
7: 산딸나무 잎, 산돌배나무 줄기 껍질, 고로쇠나무 줄기 껍질 및 밤나무 잎의 혼합 추출물 제조 7: Manufacture of a mixed extract of cornel leaves, hawthorn stem bark, elder bark bark and chestnut leaves
건조시켜 세절(1× 2cm)한 산딸나무 잎 20 중량부, 산돌배나무 줄기 껍질 30 중량부, 고로쇠나무 줄기 껍질 30 중량부 및 밤나무 잎 20 중량부를 혼합한 다음, 실시예 1에서와 같은 방법으로 혼합 추출물 G(수율 11.3%)를 제조하였다.
20 parts by weight of dried and shredded (1 × 2 cm) cornel leaves, 30 parts by weight of hawthorn stem bark, 30 parts by weight of buckthorn stem bark and 20 parts by weight of chestnut leaf, followed by mixing in the same manner as in Example 1 Extract G (yield 11.3%) was prepared.
상기 혼합 추출물 제조를 위한 조성을 하기 표 1에 정리하였다. The composition for preparing the mixed extract is summarized in Table 1 below.
실험예Experimental Example
1: One:
DPPHDPPH
자유 freedom
라디칼Radical
소거활성 측정 Scavenging activity measurement
상기 실시예 1 내지 7에서 얻어진 혼합 추출물의 항산화 활성을 살펴보기 위하여, 자유 라디칼 소거활성을 DPPH(1,1-디페닐-2-피크릴하이드라질)를 이용하여 측정하였다. 구체적으로, 실시예 1 내지 7의 혼합 추출물을 농도별로 증류수에 용해시킨 뒤, 100% 에탄올에 용해시킨 DPPH 용액(200μM) 4.9 mL에 상기 시료 100 μL를 가하여 잘 혼합하였다. 그리고 나서, 25℃에서 20분간 반응시킨 후 525㎚에서 반응액의 흡광도를 측정하였다. 대조군으로 100% 에탄올 용액을 사용하였으며, 비교군으로는 표준 항산화제인 1% 트롤록스(trolox) 용액을 사용하였다. DPPH 용액은 시험 당일에 제조하여 사용하였다. 각 시료의 흡광도 결과로부터 하기 식을 이용하여 DPPH 자유 라디칼 소거활성(%)을 계산하였다. In order to examine the antioxidant activity of the mixed extract obtained in Examples 1 to 7, free radical scavenging activity was measured using DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl). Specifically, the mixed extracts of Examples 1 to 7 were dissolved in distilled water by concentration, and then 100 μL of the sample was added to 4.9 mL of DPPH solution (200 μM) dissolved in 100% ethanol and mixed well. Then, after reacting at 25 ° C. for 20 minutes, the absorbance of the reaction solution was measured at 525 nm. A 100% ethanol solution was used as a control and a 1% trolox solution, a standard antioxidant, was used as a comparative group. DPPH solution was prepared and used on the day of testing. From the absorbance results of each sample, DPPH free radical scavenging activity (%) was calculated using the following equation.
[수학식 1][Equation 1]
DPPH 자유 라디칼 소거활성(%) = 100 × [1-(시료의 흡광도/대조군의 흡광도)]
DPPH free radical scavenging activity (%) = 100 × [1- (absorbance of sample / absorbance of control)]
각 혼합 추출물의 자유 라디칼 소거활성을 DPPH 자유 라디칼 소거활성이 50%가 되는데 필요한 시료의 농도(IC50, ㎍/㎖)로 하여, 하기 표 2에 나타내었다. Table 2 shows the free radical scavenging activity of each mixed extract as the sample concentration (IC 50 , μg / ml) required for the DPPH free radical scavenging activity to be 50%.
상기 표 2에서 보는 바와 같이, 본 발명의 혼합 추출물들은 강력한 항산화제인 토코페롤(비타민 E)의 수용성 유도체인 트롤록스에 비해 약 2배 정도의 높은 유리 라디칼 소거 활성을 나타내었다.
As shown in Table 2, the mixed extracts of the present invention showed about 2 times higher free radical scavenging activity than trolox, which is a water-soluble derivative of tocopherol (vitamin E), a powerful antioxidant.
실험예 2: 하이드록실 라디칼 소거활성 측정 시험Experimental Example 2: Test for hydroxyl radical scavenging activity
상기 실시예 1 내지 7에서 얻어진 혼합 추출물의 항산화 활성을 살펴보기 위하여, 하이드록실 라디칼 소거활성을 펜톤(Fenton) 반응을 이용하여 측정하였다. 구체적으로, 100 mM 인산완충액(pH 7.4) 1 mL에, 증류수에 농도별로 용해시킨 상기의 혼합 추출물 시료 0.2 mL 및 50 mM FeSO4H2O 용액 0.2 mL, 50 mM EDTA 용액 0.2 mL, 50 mM 2-데옥시리보오스 용액 0.2 mL 및 50 mM 과산화수소 0.2 mL을 잘 혼합하여 37℃에서 3시간 동안 반응시켰다. 그 후 1 mL의 2.8% 트리클로로아세트산(TCA) 용액을 첨가하여 반응을 중지시키고, 1 mL의 1% 티오바르비투르산(TBA)/50 mM 수산화나트륨(NaOH)을 첨가하여 100℃에서 15분간 가열시킨 후 급속 냉각하여 530㎚에서 반응액의 흡광도를 측정하였다. 각 시료의 흡광도 결과로부터 하기 식을 이용하여 하이드록실(OH) 라디칼 소거활성(%)을 계산하였다. In order to examine the antioxidant activity of the mixed extract obtained in Examples 1 to 7, the hydroxyl radical scavenging activity was measured using a Fenton reaction. Specifically, 0.2 mL of the mixed extract sample and 0.2 mL of 50 mM FeSO 4 H 2 O solution, 0.2 mL of 50 mM EDTA solution, 50 mM 2, which were dissolved in 1 mL of 100 mM phosphate buffer (pH 7.4) by concentration in distilled water. 0.2 mL of deoxyribose solution and 50 mM hydrogen peroxide 0.2 mL was mixed well and reacted at 37 ° C for 3 hours. The reaction was then stopped by addition of 1 mL of 2.8% trichloroacetic acid (TCA) solution and 1 mL of 1% thiobarbituric acid (TBA) / 50 mM sodium hydroxide (NaOH) for 15 minutes at 100 ° C. After heating, the solution was rapidly cooled and the absorbance of the reaction solution was measured at 530 nm. From the absorbance results of each sample, the hydroxyl (OH) radical scavenging activity (%) was calculated using the following equation.
[수학식 2][Equation 2]
하이드록실 라디칼 소거활성(%)= [1-(AS-Ab)/(AC-Ab)]Hydroxyl radical scavenging activity (%) = [1- (A S -A b ) / (A C -A b )]
상기 식에서, AS는 시료의 흡광도이고, AC는 증류수의 흡광도이며, Ab는 시료를 첨가하기 전에 먼저 트리클로로아세트산(TCA) 용액을 첨가하여 반응을 중지시킨 후 시료와 동일한 방법으로 측정한 흡광도이다.
Where A S is the absorbance of the sample, A C is the absorbance of the distilled water, and A b is the same method as the sample after stopping the reaction by adding trichloroacetic acid (TCA) solution before adding the sample. Absorbance.
각 혼합 추출물의 하이드록실 라디칼 소거활성을 하이드록실 라디칼 소거활성이 50%가 되는데 필요한 시료의 농도(IC50, ㎍/㎖)로 하여, 하기 표 3에 나타내었다.The hydroxyl radical scavenging activity of each mixed extract was shown in Table 3 below with the concentration of the sample (IC 50 , μg / ml) required for the hydroxyl radical scavenging activity to be 50%.
상기 표 3에서 보는 바와 같이, 본 발명의 혼합 추출물들은 강력한 항산화제인 토코페롤(비타민 E)의 수용성 유도체인 트롤록스에 비해 약 1.3 내지 1.4배 정도의 높은 하이드록실 라디칼 소거활성을 나타내었다.As shown in Table 3, the mixed extracts of the present invention exhibited about 1.3 to 1.4 times higher hydroxyl radical scavenging activity than trolox, which is a water-soluble derivative of the powerful antioxidant tocopherol (vitamin E).
상기 결과들은 본 발명에 따른 혼합 추출물이 항산화 활성이 매우 높음을 보여준다.The results show that the mixed extract according to the present invention has very high antioxidant activity.
Claims (14)
Antioxidant activity comprising at least two mixed extracts selected from the group consisting of crape myrtle stem, cedar stem bark, hawthorn stem bark, hawthorn stem bark, cypress stem bark, chestnut leaf, cornel leaf and loquat leaf Having a composition.
The composition of claim 1, wherein the mixed extract is extracted using water, C 1 -C 4 alcohol, or a mixed solvent thereof.
The composition of claim 1, wherein the mixed extract is prepared by immersing the mixture in an extraction solvent, treating with ultrasound, and then refluxing the mixture.
The composition according to claim 1, wherein the mixed extract is a mixed extract of 30 to 70 parts by weight of crape myrtle stem and 30 to 70 parts by weight of cornel leaves.
The composition according to claim 1, wherein the mixed extract is a mixed extract of 30 to 70 parts by weight of cedar stem bark, 15 to 35 parts by weight of hawthorn stem bark and 15 to 35 parts by weight of hawthorn stem bark.
The composition according to claim 1, wherein the mixed extract is a mixed extract of 35 to 45 parts by weight of cedar stem bark, 35 to 45 parts by weight of cypress stem bark and 10 to 30 parts by weight of loquat leaf.
The composition of claim 1, wherein the mixed extract is a mixed extract of 30 to 70 parts by weight of crape myrtle stem and 30 to 70 parts by weight of cedar stem bark.
The composition according to claim 1, wherein the mixed extract is a mixed extract of 15 to 35 parts by weight of cornel leaves, 30 to 70 parts by weight of wild berry stem bark and 15 to 35 parts by weight of loquat leaves.
The composition according to claim 1, wherein the mixed extract is a mixed extract of 15 to 35 parts by weight of hawthorn stem bark, 15 to 35 parts by weight of hawthorn stem bark and 30 to 70 parts by weight of cypress stem bark.
According to claim 1, wherein the mixed extract is 15 to 25 parts by weight of the cornel leaves, 25 to 35 parts by weight of the bark berry stem bark, 25 to 35 parts by weight of the buckthorn stem bark and 15 to 25 parts by weight of chestnut leaves Characterized in that the composition.
Food comprising the composition of claim 1.
A cosmetic comprising the composition of claim 1.
A pharmaceutical product comprising the composition of claim 1.
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Cited By (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103446246A (en) * | 2013-08-20 | 2013-12-18 | 天津药业集团新郑股份有限公司 | Process for extracting effective ingredients from myrtle roots |
KR20160027682A (en) * | 2014-09-02 | 2016-03-10 | 고려대학교 산학협력단 | Dental caries preventive and halitosis deodorant comprising chestnut inner shell as an active ingredient and preparation method thereof |
KR20180049355A (en) | 2016-10-31 | 2018-05-11 | 가천대학교 산학협력단 | Pharmaceutical composition for preventing or treating of atopic dermatitis comprising pyrus genus plant extract as an active indredient |
KR101871318B1 (en) | 2017-06-29 | 2018-06-29 | 대한민국 | Antiobesitic composition comprising extract of Castanea crenata |
KR20200038064A (en) * | 2018-10-02 | 2020-04-10 | 주식회사 삼정트레이딩 | Cosmetic composition composed of including extracts magnolia bark rind extract drynaria fortunei and cosmetics using the same |
KR20220064447A (en) * | 2020-11-11 | 2022-05-19 | 재단법인 경기도경제과학진흥원 | Composition for Improving Skin Wrinkles and Whiteninig Skin Using an Extract of Pyrus calleryana |
KR20220068350A (en) | 2020-11-19 | 2022-05-26 | 광주여자대학교 산학협력단 | Cosmetic composition for UV-A blocking and antioxidant using complex plant extracts of Eriobotrya japonica leaves and Camellia sinensis as active ingredients |
KR20230037801A (en) | 2021-09-10 | 2023-03-17 | 광주여자대학교 산학협력단 | Anti-oxidizing cosmetic composition containing coffee tree leaf powder extract as an active ingredient |
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Cited By (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103446246A (en) * | 2013-08-20 | 2013-12-18 | 天津药业集团新郑股份有限公司 | Process for extracting effective ingredients from myrtle roots |
KR20160027682A (en) * | 2014-09-02 | 2016-03-10 | 고려대학교 산학협력단 | Dental caries preventive and halitosis deodorant comprising chestnut inner shell as an active ingredient and preparation method thereof |
KR20180049355A (en) | 2016-10-31 | 2018-05-11 | 가천대학교 산학협력단 | Pharmaceutical composition for preventing or treating of atopic dermatitis comprising pyrus genus plant extract as an active indredient |
KR101871318B1 (en) | 2017-06-29 | 2018-06-29 | 대한민국 | Antiobesitic composition comprising extract of Castanea crenata |
KR20200038064A (en) * | 2018-10-02 | 2020-04-10 | 주식회사 삼정트레이딩 | Cosmetic composition composed of including extracts magnolia bark rind extract drynaria fortunei and cosmetics using the same |
KR20220064447A (en) * | 2020-11-11 | 2022-05-19 | 재단법인 경기도경제과학진흥원 | Composition for Improving Skin Wrinkles and Whiteninig Skin Using an Extract of Pyrus calleryana |
KR20220068350A (en) | 2020-11-19 | 2022-05-26 | 광주여자대학교 산학협력단 | Cosmetic composition for UV-A blocking and antioxidant using complex plant extracts of Eriobotrya japonica leaves and Camellia sinensis as active ingredients |
KR20230037801A (en) | 2021-09-10 | 2023-03-17 | 광주여자대학교 산학협력단 | Anti-oxidizing cosmetic composition containing coffee tree leaf powder extract as an active ingredient |
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