KR20120011697A - 리소좀을 유효성분으로 하는 미백 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 리소좀을 유효성분으로 하는 미백조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다. 특히 본 발명의 제조방법에 의해서 제조된 리소좀은 미백효과가 우수할 뿐만 아니라, 천연물질을 유효성분으로 하는 것으로 내성이나 안전성과 관련된 문제가 발생되지 아니하므로, 상기 미백 조성물은 미백 화장품을 포함한 다양한 용도로 널리 사용될 수 있다.

Description

리소좀을 유효성분으로 하는 미백 조성물{A WHITENING COMPOSITION COMPRISING LYSOSOME}

본 발명은 리소좀을 유효성분으로 포함하는 미백 조성물 및 그 제조방법에 관한 것이다.

사람의 피부색은 피부 내부의 멜라닌, 케라틴 및 헤모글라빈의 농도 및 분포에 따라 결정되어 지고, 상기 유전적인 요인 외에도 자외선 등의 환경적 조건, 피로, 스트레스 등의 생리적 조건에 의해서도 영향을 받는다. 상기 피부색과 관련에 가장 큰 영향을 미치는 요소는 멜라닌이다.

멜라닌(흑색소, Melanin)은 인간 피부의 색을 나타내고 피부를 보호하고, 자외선(UV)에 의한 피부 손상을 막아주는 중요한 역할을 하는 대표적인 색소이다. 상기 멜라닌은 피부의 표피(epidermis)의 기저층(basal layer)에 있는 멜라노사이트 세포(melanocyte cells)에 의해 생산된다. 멜라닌은 아미노산의 일종인 티로신에 타이로시나제(tyrosinase, EC:1.14.18.1)가 작용하여 도파, 도파퀴논으로 바뀐 후 비효소적인 산화반응을 거쳐 만들어진다. 상기 타이로시네이즈는 구리원자를 포함하는 금속이온 함유 모노옥시제나제(a copper-containing monooxygenase)중 하나로, 상기한 바와 같이, 멜라닌 생합성 경로(melanin biosynthesis pathway)에 있어서 중요한 효소(key enzyme)이다. 상기 멜라노사이트 세포에 의해 합성된 멜라닌은 주변 각질세포로 전이되어 사람의 피부색을 나타낸다.

상기 멜라닌이 피부에서 필요이상으로 과도하게 생성되면, 피부색을 어둡게 하고, 기미, 주근깨 또는 점 등을 발생시키고, 과색소침착증 등을 유발하여 미용상으로 좋지 않은 결과를 가져오게 된다. 따라서, 피부내의 멜라닌 색소의 합성을 저해시키면 피부색을 밝게 하여 피부 미백을 실현할 수 있을 뿐만 아니라 자외선, 호르몬 및 유전적인 원인에 기인하여 발생하는 기미, 주근깨 등의 피부 과색소 침착증을 개선할 수 있다.

최근 미에 대한 관심과 자기관리에 대한 욕구의 증가와 함께 피부에 대한 관심이 증가되면서, 기미나 점과 같은 피부의 잡티제거를 위해 피부 미백에 대한 연구가 활발히 진행되고 있고, 또 다른 측면에서 야외에서의 레저활동을 즐기는 인구의 증가로 자외선에 의한 멜라닌 색소 침착을 막고자 하는 요구가 증가하고 있다.

상기 멜라닌 색소의 생합성의 감소는 타이로시네이즈를 저해하거나, 자외선(UV)에 의한 노출을 감소시키거나, 멜라노사이트 세포를 저해함으로써 수행될 수 있다. 상기 방법들 중에서 기존 미백용 화장품과 관련해서는 타이로시네이즈를 저해할 수 있는 성분을 유효성분으로 사용하였다.

상기 미백용 화장품과 관련하여, 종래에는 화학성분인 하이드로퀴논이나 아스콜빈산, 코직산, 글루타치온과 같은 타이로시나제에 대해 저해 활성을 갖는 물질을 피부 외용 연고나, 크림, 에센스 등의 화장료에 배합함으로써 피부 미백을 실현하거나, 기미, 주근깨 등의 피부 과색소 침착증을 개선하였다.

그러나, 이러한 성분들은 주로 합성물질로 안전성에 대한 문제가 제기되고 있거나, 그 효능의 측면이나 화장품과 함께 사용하는 경우 변질 등의 문제가 제기되고 있다.

구체적으로, 하이드로퀴논은 피부 자극이 심하여 배합량을 극소량으로 제한해야 하는 문제점이 있을 뿐만 아니라, 최근 알러지(allergy) 유발이나 피부암 유도 등과 같은 문제가 제기되어 그 사용자체가 전면 금지되는 국가도 있고, 우리나라에서도 피부과의 처방이 필요한 약용으로 분류되어, 병원이나 약국에서 판매되는 외용 조성물에 한해서 전체 조성물 중 1% 미만의 농도를 첨가될 수 있는 것으로 규제되고 있다.

또한, 비타민 C 유도체인 아스콜빈산(ascorbic acid)은 산화되기 쉬워 이를 배합한 화장료는 변색,이나변취 등의 문제가 발생하여 제품의 질을 떨어뜨리고 그에 따라 미백 효과가 떨어지는 단점이 있다. 최근에는 이러한 문제를 해결하기 위하여, Ascorbyl-palmitate, Ascorbyl-dipalmitate, Ascorbyl stearare 또는 Ascorbyl magnesium phosphate 등의 유도체가 개발되고 있으나 특수한 기술을 사용하지 않으면 피부 속으로 침투가 어렵다는 문제가 단점으로 제시되고 있다.

또한, 코직산은 경구 투여시 발암 가능성이 있어 안전성에 대한 검증이 더 필요하며, 글루타치온, 시스테인 등의 티올계 화합물은 특유의 불쾌한 냄새를 가질 뿐만 아니라 경피 흡수에도 문제점이 있고, 이들의 배당체 및 유도체들도 극성이 높아 화장료의 배합 성분으로 사용하기 어려운 단점을 가지고 있다.

또한, 기존의 천연재료로부터 분리한 타이로시네이즈 저해 활성을 갖는 물질은 주로 페놀 구조(phenol structure)를 가지거나 금속 킬레이트 효소(metal chelating agent)로, 상기 저해 활성을 갖는 물질들은 활성이 낮음에도 불구하고, 높은 독성(high toxicity)과 불충분한 투과성(insufficient penetrative ability)으로 인하여 그 사용이 제한되고 있다.

따라서, 이제까지의 미백제보다 효능이 뛰어나고 좀 더 안전한 미백용 화장품의 유효성분 일 예로, 멜라닌 자체를 분해할 수 있는 성분 등에 대한 연구의 필요성이 증대되고 있다.

본 발명은 상기와 같은 종래기술의 문제점을 개선하기 위한 것으로, 본 발명은 피부 미백에 효과적이면서도 부작용이 거의 없는 천연 물질을 함유하는 피부 미백 조성물의 유효성분을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 리소좀을 유효성분으로 포함하는 미백 조성물을 제공한다.

또한, 상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 상기 미백 조성물 제조방법을 제공한다.

본 발명에 있어서, 진핵생물은 진핵세포를 가진 생물을 의미하며, 원핵생물에 대응되는 개념이다. 또한, 상기 진핵세포란 세포 내에 막으로 싸인 핵과 다양한 세포소기관을 가진 세포를 통칭하는 것으로, 원핵세포와 대응되는 개념이다. 상기 세포소기관의 예로는 미토콘드리아나 엽록체와 같이 외부의 원핵세포들이 세포 내로 공생체로 도입된 것을 생각되는 것과, 리소좀 등과 같이 각각 특정한 업무를 수행하도록 분화된 것으로 생각되는 소기관들이 있다. 상기 진핵세포의 핵에는 원핵세포의 DNA와 달리 필요없는 부분 즉, 단백질 서열을 암호화하지 않는 부분(인트론, intron)이 대단히 많이 존재하며, 따라서 단백질을 발현하기 위해서는 필요한 부분 즉, 단백질 서열을 암호화하는 부분(엑손, exon)을 이어서 mRNA를 만들고, 상기 mRNA를 통해 단백질을 발현하게 된다.

상기 진핵생물은 크게는 효모 등의 균류와 유즐동물이나 측생동물 등을 포함하는 후편모생물(Opisthokonta) 및 아메바조아(Amoebozoa)를 포함하는 단편모생물과 다세포 동물 및 식물을 포함한 쌍편모생물을 모두 포함하는 개념이다.

본 발명에 있어서, 리소좀(lysosome)이란 진핵세포 내에 가수 분해 효소를 많이 지니고 있어서, 세포 내 성분의 대사에 관계하는 것 외에 특히 식세포작용으로 외계 이물질의 세포내 소화에 중요한 역할을 수행하는 세포소기관이다. 상기 리소좀은 세포질 중에 위치하며, 상기 리소좀의 크기는 0.25μm 내지 0.5μm로 미토콘드리아보다 작다.

상기 리소좀은 세포 내 소기관인 미토콘드리아와 달리 한 겹의 막구조로 싸여 있으며, 이 내부는 약산성에서 최적 pH를 가지는 가수분해효소 일 예로, 산성 탈인산가수분해효소, 리보핵산 가수분해효소, 가텝신, β-글루클로리타아제 또는 아릴설퍼타아제 등을 많이 지니고 있는 것으로 알려져 있다.

상기 리소좀은 세포 분해물 또는 세포 마쇄액을 원심분리하는 방법으로 수행하는 세포 원심분획법에 의할 경우, 미토콘드리아와 마이크로솜의 중간으로 분획된다.

본 발명자들은 부작용이나 내성 등의 안정성에 대한 문제가 없는 천연물질 유래의 미백활성을 갖는 물질을 연구하던 중, 진핵세포의 리소좀은 기존의 타이로시네이즈를 저해하거나 멜라노사이트 세포를 저해하는 것으로 알려진 물질과 달리 멜라닌 자체를 분해할 수 있을 뿐만 아니라, 하이드로퀴논이나 코직산과 같이 안전성에 문제가 있거나, 글루타치온 또는 시스테인 등의 티올계 화합물과 같이 불쾌한 냄새 등으로 인한 제형상의 문제가 있지 아니한 것을 확인하고, 나아가 상기 리소좀의 멜라닌 분해활성과 관련하여, 특히 pH 7의 조건에서 효모로부터 분리된 리소좀의 분해물을 동결시킨 동결 건조물이 최적의 멜라닌 분해 활성을 가진다는 것을 확인하였고, 상기 결과로부터 진핵세포의 세포 소기관인 리소좀이 효능 및 안전성의 측면에서 미백화장품의 유효성분으로 적절하다는 것을 최종적으로 확인하여, 본 발명을 완성하였다.

이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.

본 발명은 리소좀을 유효성분으로 포함하는 미백 조성물 및 그 제조방법에 관한 것이다.

본 발명은 리소좀을 유효성분으로 포함하는 미백 조성물에 관한 것이다.

상기 리소좀은 진핵생물, 일 예로 효모 등과 같은 미생물 또는 동물의 진핵세포로부터 분리한 것일 수 있다. 상기 동물은 가금류를 포함한 조류, 또는 소나 인간과 같은 포유류 동물일 수 있고, 멜라닌 분해 활성의 측면에서 바람직하게는 소나 인간과 같은 포유류 또는 조류, 더욱 바람직하게는 포유류일 수 있다. 상기 가금류는 닭, 메추리, 타조 또는 오리 등일 수 있고, 분해효율의 측면에서 상기 가금류는 가금류의 알, 구체적으로 달걀, 메추리알, 타조알 및 오리알로 이루어진 군중에서 선택된 1종 이상일 수 있다.

상기 리소좀은 멜라닌 분해 활성이란 측면 및 제품생산용이성과 경제성이란 측면을 고려하면 효모로부터 분리된 리소좀일 수 있다.

상기 리소좀은 진핵세포로부터 세포분획법을 통하여 수득한 것일 수 있다.

구체적으로, 상기 리소좀을 수득하는 방법은 원심분획법일 수 있고, 보다 구체적으로 상기 진핵세포 또는 가금류의 알, 일 예로 계란의 흰자를 균질화하는 단계 및 상기 균질화시킨 진핵세포 또는 상기 균질화시킨 계란의 흰자로부터 원심분리를 수행하여 리소좀을 수득하는 단계를 포함하는 방법일 수 있다.

상기 균질화하는 단계는 균질기 또는 호모게나이저를 이용하는 방법으로 수행할 수 있다.

상기 균질화하는 단계에 있어서, 상기 진핵세포를 균질화시키는 경우에는 상기 균질기 또는 호모게나이저 외에 시료인 세포를 마쇄할 수 있는 분쇄기 또는 마쇄할 수 있는 방법이라면 그 종류가 제한되지 아니한다.

상기 균질화하는 단계에 있어서, 상기 가금류의 알을 균질화시키는 경우에는 상기 균질화를 수행하는 대상은 가금류의 알의 흰자일 수 있다. 이러한 측면에서, 상기 균질화하는 단계는 가금류의 알로부터 흰자를 분리하는 과정 및 상기 분리된 흰자를 균질화하는 과정을 포함하는 방법일 수 있다. 상기 균질화하는 과정을 수행하여 상기 가금류의 알의 흰자의 점성을 제거할 수 있으며, 이러한 측면에서 상기 균질화하는 과정은 상기 균질기 또는 호모게나이저를 이용하여 7,000 rpm 내지 12,000 rpm, 바람직하게는 8,000 rpm 내지 11,000 rpm, 더욱 바람직하게는 9,000 rpm 내지 10,000 rpm의 조건에서 30초 내지 5분, 바람직하게는 1분 내지 3분 동안 수행할 수 있다. 상기 균질화하는 과정은 단백질 손상방지를 위하여, 저온에서 수행할 수 있으며, 일 예로 상기 가금류의 알의 흰자를 얼음에 넣은 상태로 균질기 또는 호모게나이저를 이용하여 균질화하는 방법으로 수행할 수 있다.

상기 균질화시킨 진핵세포 또는 상기 균질화시킨 계란의 흰자로부터 원심분리를 수행하여 리소좀을 수득하는 단계는 상기 균질화시킨 진핵세포 또는 상기 균질화시킨 계란의 흰자를 18,000 x g 내지 22,000 x g 및 3℃ 내지 5℃의 조건으로 20분 내지 40분간 원심분리한 후, 상층액을 제거하고 하층액을 수득하는 과정 및 상기 하층액을 450 x g 내지 550 x g 및 3℃ 내지 5℃의 조건으로 3분 내지 7분간 원심분리한 후, 상층액을 수득하는 과정을 포함할 수 있다.

따라서, 상기 리소좀은 원심분획법에 의해 수득된 것일 수 있다.

상기 리소좀이란 멜라닌 분해 효율을 증가시킨다는 측면에서 리소좀 분해물일 수 있다.

상기 리소좀 분해물은 리소좀의 막을 제거 또는 분해한 것일 수 있다. 이러한 측면에서, 상기 리소좀 분해물은 리소좀의 막을 제거 또는 분해하는 과정 및 상기 막을 제거 또는 분해한 리소좀을 원심분리하여 상층액을 수득하는 과정을 통해 수득될 수 있다.

상기 리소좀의 막을 제거 또는 분해하는 과정은 용제를 이용하거나 초음파처리 또는 호모게나이저 처리로 수행할 수 있다. 이러한 측면에서, 상기 리소좀 분해물은 용제를 이용한 분해물, 초음파처리(sonication)를 이용한 분해물 또는 호모게나이저(homogenizer)를 이용한 분해물일 수 있다.

상기 초음파처리의 경우에는 일 예로, 10 내지 30% pulse, 바람직하게는 15 내지 25% pulse에서 on/off의 간격을 3초 내지 20초, 바람직하게는 5초 내지 15초, 더욱 바람직하게는 7초 내지 12초 간격으로 1회 내지 20회, 바람직하게는 3회 내지 10회 반복하는 방법으로 수행할 수 있다.

상기 호모게나이저를 이용한 처리의 경우에는 일 예로 플라스틱 호모게나이저를 이용하여 수행할 수 있고, 10회 내지 30회 정도 마찰을 하는 방법으로 수행할 수 있다.

상기 초음파 처리 또는 호모게나이저를 이용한 처리에 있어서, 상기 균질화시킨 계란의 흰자의 경우에는 수분이 많이 포함되어 있으므로 상기 균질화시킨 계란의 흰자를 그대로 사용할 수 있으나, 상기 균질화시킨 진핵세포의 경우에는 상기 진핵세포에 액체, 일 예로 증류수 또는 pH 조절을 위한 성분이 포함된 용액이나 완충액(buffer)를 첨가하여 수행하는 것이 바람직하다.

상기 용제를 이용한 분해물은 상기 수득한 리소좀에 용제(detergent)를 이용하여 리소좀의 막을 분해시킨 것 즉, 용제 분해물일 수 있다.

상기 용제는 구체적으로 NP-40(Nonidet-P40), Triton X-100, DTT(Dithiothreitol) 및 PMSF(phenylmethanesulfonylfluoride or phenylmethylsulfonyl fluoride)로 이루어진 군 중에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 상기 NP-40(Nonidet-P40) 또는 Triton X-100 등은 상기 성분에 완충액이 포함된 것일 수 있다. 일 예로, 상기 NP-40은 NP-40 완충액(Nonidet-P40 buffer)일 수 있고, 상기 Triton X-100은 Triton X-100 완충액일 수 있다.

상기 리소좀 분해물은 멜라닌 분해 효율 및 생산효율과 생산비용 등의 경제성을 고려할 때, 상기 수득한 리소좀, 구체적으로 세포분획법으로 수득한 리소좀을 용제와 반응시켜 수득한 것일 수 있다.

구체적으로, 상기 리소좀 분해물을 수득하는 방법은 상기 리소좀을 용제와 반응시키는 단계 및 원심분리하여 상층액을 수득하는 단계를 포함하는 방법일 수 있고, 보다 구체적으로 상기 리소좀에 용제를 첨가하고 혼합시키는 단계; 상기 리소좀을 용제와 -4℃ 내지 4℃에서 반응시키는 단계 및 상기 용제와 반응시킨 리소좀을 원심분리한 후, 상층액을 수득하는 단계를 포함하는 방법일 수 있다. 상기 원심분리는 3℃ 내지 5℃에서 수행할 수 있다.

상기 리소좀을 용제와 반응시키는 단계는 10분 내지 50분, 20분 내지 40분 또는 25분 내지 35분 동안 수행할 수 있다. 상기 리소좀과 용제를 반응시키는 단계는 상기 리소좀에 용제를 첨가한 후, 5분 내지 20분, 바람직하게는 7분 내지 15분 동안 볼텍싱(vortexing)을 하는 방법으로 수행할 수 있다.

상기 원심분리는 9,000 x g 내지 16,000 x g, 바람직하게는 11,000 x g 내지 15,000x g, 더욱 바람직하게는 12,000 x g 내지 14,000 및 3℃ 내지 5℃의 조건으로 3분 내지 30분, 바람직하게는 5분 내지 20분간 원심분리한 후, 상층액을 수득하는 방법으로 수행할 수 있다.

상기 리소좀을 효모를 이용하여 수득하는 경우에는 상기 효모의 배양과정에서 과산화수소(H₂0₂) 또는 6-하이드록시도파민(6-hydroxydopamine)를 처리하여 리소좀 분해물의 멜라닌 분해능을 향상시킬 수 있음을 실험을 통하여 확인하였다.

이러한 측면에서, 리소좀 분해물의 제조방법은 다음과 같을 수 있다.

상기 리소좀 분해물의 제조방법은 진핵세포를 배양하는 단계; 상기 진핵세포를 균질화시키는 단계; 상기 균질화된 진핵세포로부터 리소좀을 수득하는 단계; 상기 수득된 리소좀의 막을 분해하는 단계 및 상기 막을 분해한 리소좀을 원심분리하여 상층액을 수득해서 리소좀 분해물을 수득하는 단계를 포함하는 방법일 수 있다.

상기 진핵세포는 진핵생물의 세포, 일 예로 효모 등과 같은 미생물 또는 동물의 진핵세포로부터 분리한 것일 수 있고, 바람직하게는 효모일 수 있다.

상기 진핵세포를 배양하는 단계는 진핵세포의 배양배지에 과산화수소(H₂0₂) 또는 6-하이드록시도파민(6-hydroxydopamine)를 첨가하고 배양하는 방법으로 수행할 수 있다. 상기 산화수소(H₂0₂) 또는 6-하이드록시도파민(6-hydroxydopamine)의 첨가 함량은 10mM 내지 30mM, 바람직하게는 15mM 내지 25mM일 수 있다. 상기 배양 단계는 상기 산화수소(H₂0₂) 또는 6-하이드록시도파민(6-hydroxydopamine)를 첨가한 후, 16시간 내지 32시간, 바람직하게는 20시간 내지 28시간, 더욱 바람직하게는 22시간 내지 26시간 동안 배양하는 방법으로 수행할 수 있다.

상기 진핵세포를 균질화시키는 단계는 상기 배양한 진핵세포를 균질기 또는 호모게나이저(homogenzer)를 이용하여 수행할 수 있으며, 상기 균질화 대상인 진핵세포를 마쇄할 수 있는 분쇄기 또는 마쇄할 수 있는 다른 방법을 통해 수행할 수 있다. 상기 균질기 또는 호모게나이저를 이용하는 균질화 조건은 7,000 rpm 내지 12,000 rpm, 바람직하게는 8,000 rpm 내지 11,000 rpm, 더욱 바람직하게는 9,000 rpm 내지 10,000 rpm의 조건에서 30초 내지 5분, 바람직하게는 1분 내지 3분 동안 수행할 수 있다. 또한, 상기 균질화하는 단계는 단백질 손상방지를 위하여, 저온에서 수행할 수 있으며, 일 예로 상기 가금류의 알의 흰자를 얼음에 넣은 상태로 균질기 또는 호모게나이저를 이용하여 균질화하는 방법으로 수행할 수 있다.

상기 균질화된 진핵세포로부터 리소좀을 수득하는 단계는 상기 균질화시킨 진핵세포를 18,000 x g 내지 22,000 x g, 바람직하게는 19,000 x g 내지 21,000 x g 및 3℃ 내지 5℃의 조건으로 20분 내지 40분, 바람직하게는 25분 내지 35분 동안 원심분리한 후, 상층액을 제거하고 하층액을 수득하는 과정 및 상기 하층액을 400 x g 내지 600 x g, 바람직하게는 450 x g 내지 550 x g 및 3℃ 내지 5℃의 조건으로 3분 내지 7분, 바람직하게는 4분 내지 6분 동안 원심분리한 후, 상층액을 수득하는 과정을 포함할 수 있다.

상기 수득된 리소좀의 막을 분해하는 단계는 용제(detergent)를 이용하거나 초음파처리 또는 호모게나이저 처리로 수행할 수 있다.

상기 용제를 이용하여 리소좀의 막을 분해하는 방법은 상기 수득된 리소좀에 용제를 첨가하고 반응시키는 방법으로 수행할 수 있다. 상기 용제는 NP-40(Nonidet-P40), Triton X-100, DTT(Dithiothreitol) 및 PMSF(phenylmethanesulfonylfluoride or phenylmethylsulfonyl fluoride)로 이루어진 군 중에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 상기 NP-40(Nonidet-P40) 또는 Triton X-100 등은 상기 성분에 완충액 등이 더욱 포함된 것일 수 있다. 일 예로, 상기 NP-40은 NP-40 완충액(Nonidet-P40 buffer)일 수 있고, 상기 Triton X-100은 Triton X-100 완충액일 수 있다.

상기 리소좀을 용제와 반응시키는 단계는 상기 리소좀에 용제를 첨가하고 혼합시키는 과정 및 상기 리소좀을 용제와 -4℃ 내지 4℃에서 반응시키는 과정을 포함하는 방법으로 수행할 수 있다. 상기 리소좀과 용제의 반응은 10분 내지 50분, 20분 내지 40분 또는 25분 내지 35분 동안 수행할 수 있다. 상기 리소좀과 용제를 반응시키는 단계는 상기 리소좀에 용제를 첨가한 후, 볼텍싱(vortexing)을 하는 방법으로 수행할 수 있다.

상기 리소좀 분해물을 수득하는 단계는 상기 막을 분해한 리소좀을 원심분리하여 상층액을 수득하는 방법으로 수행할 수 있다. 상기 원심분리는 3℃ 내지 5℃에서 수행할 수 있다.

구체적으로, 상기 원심분리는 9,000 x g 내지 16,000 x g, 바람직하게는 11,000 x g 내지 15,000x g, 더욱 바람직하게는 12,000 x g 내지 14,000 및 3℃ 내지 5℃의 조건으로 3분 내지 30분, 바람직하게는 5분 내지 20분간 수행할 수 있다.

상기 리소좀 분해물은 화장품에 사용되기 위한 안정성의 향상이란 측면에서 인산완충액(phosphate buffer)과 혼합하여 사용될 수 있다. 구체적으로, 상기 리소좀 분해물을 인산완충액에 현탁하여 사용할 수 있다. 이러한 측면에서 상기 리소좀 분해물은 상기 리소좀 분해물 및 인산완충액 혼합물일 수 있으며, 상기 미백 조성물은 상기 리소좀 및 상기 인산완충액 혼합물을 유효성분으로 포함할 수 있다.

또한, 상기 리소좀은 바람직하게는 상기 리소좀 분해물, 더욱 바람직하게는 상기 리소좀 분해물과 인산완충액을 혼합한 혼합물, 더더욱 바람직하게는 상기 리소좀 분해물과 인산완충액을 혼합한 혼합물의 동결 건조물일 수 있다.

또한, 멜라닌에 대한 분해활성은 미백 효과와 직접적인 연관이 있는 것이므로, 미백효과란 측면에서 상기 미백 조성물의 pH은 pH 6.8 내지 pH 7.2인 것이 바람직하다.

상기 멜라닌이란 흑갈색의 색소로서 피부, 털 또는 눈 등에 존재한다. 일정량 이상의 자외선을 흡수하는 방식으로 자외선의 침투를 차단하여 인체를 보호하고, 체온을 유지해주며, 상기 멜라닌의 양에 의해 피부색이 결정된다.

멜라닌이 비정상적으로 적게 생산되는 경우에 백반증과 같은 피부 병변이 유발되는 한편, 반대로 외부 환경 요인 등에 의해 과잉 생산되는 경우 기미, 주근깨와 같은 색초 침착 및 피부 잡티의 원인이 되어 미용적인 문제가 발생할 뿐만 아니라 피부암과도 밀접한 관련이 있어 질병의 원인이 될 수 있다.

따라서, 상기 멜라닌을 분해할 수 있는 본 발명의 미백 조성물은 미백용 피부외용 약학 조성물 또는 미백용 화장료 조성물로 응용될 수 있다.

본 발명의 제조방법에 의해 제조된 상기 리소좀 분해물은 멜라닌 분해 활성이 우수할 뿐만 아니라, 인산완충액과 함께 적용하는 경우 안정성도 인정되며, 무엇보다 기존 진핵세포에 존재하는 리소좀을 이용하는 것이므로 부작용이나 독성 등의 안전성이 문제되지 아니하므로, 상기 미백 조성물은 여러 측면에서 우수한 상품성을 갖는다.

이러한 측면에서, 본 발명은 리소좀을 유효성분으로 포함하는 미백용 피부 외용 약학 조성물일 수 있다. 상기 리소좀은 바람직하게는 상기 리소좀 분해물일 수 있다. 상기 약학 조성물은 유효성분으로 상기 리소좀 또는 상기 리소좀 분해물에 인산완충액을 더욱 포함할 수 있다. 보다 구체적으로, 상기 리소좀 또는 상기 리소좀 분해물은 상기 인산완충액에 현탁된 것일 수 있다.

또한, 상기 리소좀 또는 상기 리소좀 분해물은 바람직하게는 상기 리소좀 분해물과 인산완충액을 혼합한 혼합물의 동결 건조물일 수 있다.

또한, 상기 미백용 피부 외용 약학 조성물은 바람직하게는 pH가 pH 6.8 내지 pH 7.2인 것일 수 있다.

상기 미백용 피부 외용 약학 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 상기 유효성분을 0.1 중량% 내지 50 중량%로 포함한다.

상기 미백용 피부 외용 약학 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.

상기 미백용 피부 외용 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 제형화될 수 있으며, 바람직하게는 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제로 제형화될 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다.

상기 미백용 피부 외용 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등일 수 있다.

상기 미백용 피부 외용 약학 조성물이 제제화되는 경우에는 통상적으로 사용되는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제 또는 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제가 이용될 수 있다.

상기 미백용 피부 외용 약학 조성물의 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함될 수 있다.

상기 비수성용제 또는 현탁제로는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 또한, 상기 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 61(tween 61), 카카오지, 라우린지 또는 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

상기 미백용 피부 외용 약학 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 일 예로, 본 발명의 조성물은 유효성분을 기준으로 1일 0.000001 내지 100㎎/㎏으로, 바람직하게는 0.001 내지 10㎎/㎏으로 투여할 수 있다. 그러나, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. 상기 미백용 피부 외용 약학 조성물의 외용투여는 하루에 한번 투여되거나 수 회 나누어 투여될 수도 있다.

또한, 다른 측면에서 본 발명은 리소좀을 유효성분으로 포함하는 미백용 화장료 조성물일 수 있다. 상기 리소좀은 바람직하게는 상기 리소좀 분해물일 수 있다. 상기 약학 조성물은 유효성분으로 상기 리소좀 또는 상기 리소좀 분해물에 인산완충액을 더욱 포함할 수 있다. 보다 구체적으로, 상기 리소좀 또는 상기 리소좀 분해물은 상기 인산완충액에 현탁된 것일 수 있다.

또한, 상기 리소좀 또는 상기 리소좀 분해물은 바람직하게는 상기 리소좀 또는 상기 리소좀 분해물과 인산완충액을 혼합한 혼합물의 동결 건조물일 수 있다.

상기 동결 건조물은 동결건조기를 이용하여 제조할 수 있으며, 구체적으로 상기 리소좀 분해물의 동결 과정은 500 rpm 내지 1,500 rpm, 바람직하게는 700 rpm 내지 1,200 rpm 및 3℃ 내지 5℃의 조건에서 2시간 내지 10시간, 바람직하게는 4시간 내지 8시간 동안 수행할 수 있고, 상기 건조 효율을 위하여 진공조건에서 수행될 수 있다. 보다 구체적으로 상기 리소좀 분해물을 튜브(tube)에 넣고 동결건조기(Speed-Vec)를 이용하여 1000 rpm 및 4℃의 조건과 진공조건에서 건조시키는 방법으로 수행할 수 있다.

또한, 상기 미백용 화장료 조성물은 바람직하게는 pH가 pH 6.8 내지 pH 7.2인 것일 수 있다.

상기 미백용 화장료 조성물의 유효성분인 리소좀 또는 리소좀 분해물은 멜라닌 분해 활성이 우수하고 안전성이 인정되어, 미백 효과를 갖는 화장품 및 세안제 등에 다양하게 이용될 수 있다. 상기 유효성분을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 각종 크림, 로션, 스킨 등과 같은 화장품류와 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트, 미용액 등이 있다.

상기 미백용 화장료 조성물은 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당류, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 더욱 포함할 수 있다.

상기 수용성 비타민은 본 발명의 효과를 유지할 수 있고, 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 포함될 수 있으며, 구체적으로 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산 또는 비타민 C이거나, 이들의 염(티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등) 또는 이들의 유도체(아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)일 수 있다. 상기 수용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득될 수 있다.

상기 유용성 비타민은 본 발명의 효과를 유지할 수 있고, 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 포함될 수 있으며, 구체적으로 비타민 A, 카로틴, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 E(D-알파 토코페롤, D-알파 토코페롤, D-알파 토코페롤) 등일 수 있고, 그들의 유도체(팔미틴산아스코르빈, 스테아르산아스코르빈, 디팔미틴산아스코르빈, 아세트산-알파 토코페롤, 니코틴산-알파 토코페롤비타민 E, D-판토테닐알코올, D-판토테닐알코올, 판토테닐에틸에테르 등)일 수 있다. 상기 유용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득될 수 있다.

상기 고분자 펩티드는 본 발명의 효과를 유지할 수 있고, 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 포함될 수 있으며, 구체적으로 콜라겐, 가수 분해 콜라겐, 젤라틴, 엘라스틴, 가수 분해 엘라스틴 또는 케라틴 등일 수 있다. 상기 고분자 펩티드는 미생물의 배양액으로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득된 후, 정제과정을 거쳐 취득할 수 있으며, 통상 돼지나 소 등의 진피, 누에의 견섬유 등의 천연물로부터 정제하여 사용할 수도 있다.

상기 고분자 다당류는 본 발명의 효과를 유지할 수 있고, 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 포함될 수 있으며, 구체적으로 히드록시에틸셀룰로오스, 크산탄검, 히알루론산나트륨 또는 콘드로이틴 황산 등일 수 있고, 그들의 염(나트륨염 등)등 일 수 있다. 상기 콘드로이틴 황산 또는 그 염 등은 통상 포유동물이나 어류로부터 정제하여 사용할 수 있다.

상기 스핑고 지질은 본 발명의 효과를 유지할 수 있고, 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 포함될 수 있으며, 구체적으로 세라미드, 피토스핑고신, 스핑고당지질일 수 있다. 상기 스핑고 지질은 통상 포유류, 어류, 패류, 효모 또는 식물 등으로부터 통상의 방법에 의해 정제하거나 화학 합성법에 의해 수득될 수 있다.

상기 해초 엑기스는 본 발명의 효과를 유지할 수 있고, 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 포함될 수 있으며, 구체적으로 갈조 엑기스, 홍조 엑기스, 녹조 엑기스 등일 수 있고, 상기 해초 엑기스에는 상기 해초 엑기스로부터 정제된 칼라기난, 아르긴산, 아르긴산나트륨, 아르긴산칼륨 등도 포함된다. 상기 해초 엑기스는 해초로부터 통상의 방법에 의해 정제하여 수득될 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물에는 통상 화장료에 배합되는 다른 성분이 더욱 포함될 수 있다. 보다 상세하게, 상기 통상 화장료에 배합되는 다른 성분은 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기안료 및 무기안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한제 또는 정제수 등일 수 있다.

상기 유지 성분은 구체적으로 에스테르계 유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물 유지 또는 식물 유지 등일 수 있다.

상기 에스테르계 유지는 일 예로, 트리-2-에틸헥산산글리세릴, 2-에틸헥산산세틸, 미리스틴산이소프로필, 미리스틴산부틸, 팔미틴산이소프로필, 스테아르산에틸, 팔미틴산옥틸, 이소스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 리놀레산에틸, 리놀레산이소프로필, 올레인산에틸, 미리스틴산이소세틸, 미리스틴산이소스테아릴, 팔미틴산이소스테아릴, 미리스틴산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 세바신산디에틸, 아디핀산디이소프로필, 네오펜탄산이소알킬, 트리(카프릴, 카프린산)글리세릴, 트리-2-에틸헥산산트리메틸롤프로판, 트리이소스테아르산트리메틸롤프로판, 테트라-2-에틸헥산산펜타엘리슬리톨, 카프릴산세틸, 라우린산데실, 라우린산헥실, 미리스틴산데실, 미리스틴산미리스틸, 미리스틴산세틸, 스테아르산스테아릴, 올레인산데실, 리시노올레인산세틸, 라우린산이소스테아릴, 미리스틴산이소트리데실, 팔미틴산이소세틸, 스테아르산옥틸, 스테아르산이소세틸, 올레인산이소데실,올레인산옥틸도데실, 리놀레산옥틸도데실, 이소스테아르산이소프로필, 2-에틸헥산산세토스테아릴, 2-에틸헥산산스테아릴, 이소스테아르산헥실, 디옥탄산에틸렌글리콜, 디올레인산에틸렌글리콜, 디카프린산프로필렌글리콜, 디(카프릴,카프린산)프로필렌글리콜, 디카프릴산프로필렌글리콜, 디카프린산네오펜틸글리콜, 디옥탄산네오펜틸글리콜, 트리카프릴산글리세릴, 트리운데실산글리세릴, 트리이소팔미틴산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴, 네오펜탄산옥틸도데실, 옥탄산이소스테아릴, 이소노난산옥틸, 네오데칸산헥실데실, 네오데칸산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 이소스테아르산옥틸데실, 폴리글리세린올레인산에스테르, 폴리글리세린이소스테아르산에스테르, 시트르산트리이소세틸, 시트르산트리이소알킬, 시트르산트리이소옥틸, 락트산라우릴, 락트산미리스틸, 락트산세틸, 락트산옥틸데실, 시트르산트리에틸, 시트르산아세틸트리에틸, 시트르산아세틸트리부틸, 시트르산트리옥틸, 말산디이소스테아릴, 히드록시스테아르산 2-에틸헥실, 숙신산디2-에틸헥실, 아디핀산디이소부틸, 세바신산디이소프로필, 세바신산디옥틸, 스테아르산콜레스테릴, 이소스테아르산 콜레스테릴, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 올레인산콜레스테릴, 올레인산디히드로콜레스테릴, 이소스테아르산 피트스테릴, 올레인산피트스테릴, 1,2-스테알로일히드록시스테아르산이소세틸, 1,2-스테알로일히드록시스테아르산 스테아릴 또는 1,2-스테알로일히드록시스테아르산이소스테아릴 등일 수 있다.

상기 탄화 수소계 유지는 일 예로 스쿠알렌, 유동 파라핀, 알파-올레핀올리고머, 이소파라핀, 세레신, 파라핀, 유동 이소파라핀, 폴리부덴, 마이크로크리스탈린왁스 또는 와셀린 등일 수 있다.

상기 실리콘계 유지는 일 예로 폴리메틸실리콘, 메틸페닐실리콘, 메틸시클로폴리실록산, 옥타메틸폴리실록산, 데카메틸폴리실록산, 도데카메틸시클로실록산, 디메틸실록산메틸세틸옥시실록산 공중합체, 디메틸실록산메틸스테알록시실록산 공중합체, 알킬 변성 실리콘유 또는 아미노 변성 실리콘유 등일 수 있다.

상기 불소계 유지는 퍼플루오로폴리에테르 등일 수 있다.

상기 동물 유지 또는 식물 유지는 아보카도유, 아르몬드유, 올리브유, 참깨유, 쌀겨유, 새플라워유, 대두유, 옥수수유, 유채유, 행인유, 팜핵유, 팜유, 피마자유, 해바라기유, 포도종자유, 면실유, 야자유, 쿠쿠이너트유,소맥배아유, 쌀 배아유, 시아버터, 월견초유, 마커데이미아너트유, 메도홈유, 난황유, 우지, 마유, 밍크유, 오렌지라피유, 호호바유, 캔데리러왁스, 카르나바왁스, 액상 라놀린 또는 경화피마자유 등일 수 있다.

상기 계면활성제는 구체적으로 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제 또는 양성 계면활성제일 수 있다.

상기 음이온성 계면 활성제는 일 예로, 지방산비누, 알파-아실술폰산염, 알킬술폰산염, 알킬알릴술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, POE 알킬에테르황산염, 알킬아미드황산염, 알킬인산염, POE 알킬인삼염, 알킬아미드인산염, 알킬로일알킬타우린염, N-아실아미노산염, POE 알킬에테르카르복실산염, 알킬술포숙신산염, 알킬술포아세트산나트륨, 아실화 가수분해 콜라겐펩티드염 또는 퍼플루오로알킬인산에스테르 등일 수 있다.

상기 양이온성 계면 활성제는 일 예로, 염화알킬트리메틸암모늄, 염화스테아릴트리메틸암모늄, 브롬화스테아릴트리메틸암모늄, 염화세토스테아릴트리메틸암모늄, 염화디스테아릴디메틸암모늄, 염화스테아릴디메틸벤질암모늄, 브롬화베헤닐트리메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 스테아르산디에틸아미노에틸아미드, 스테아르산디메틸아미노프로필아미드 또는 라놀린 유도체 제4급 암모늄염 등일 수 있다.

상기 양성 계면 활성제는 일 예로, 카르복시베타인형, 아미드베타인형, 술포베타인형, 히드록시술포베타인형, 아미드술포베타인형, 포스포베타인형, 아미노카르복실산염형, 이미다졸린 유도체형 또는 아미드아민형의 양성 계면 활성제 등일 수 있다.

상기 안료는 유기안료, 무기안료 및 이들의 복합 안료 등일 수 있다.

상기 무기안료는 일 예로 규산, 무수규산, 규산마그네슘, 탤크, 세리사이트, 마이카, 카올린, 벵갈라, 클레이, 벤토나이트, 티탄피막운모, 옥시염화비스무트, 산화지르코늄, 산화마그네슘, 산화아연, 산화티탄, 산화알루미늄, 황산칼슘, 황산바륨, 황산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 산화철, 군청, 산화크롬, 수산화크롬, 칼라민 및 이들의 복합체 등일 수 있다.

상기 유기안료는 일 예로 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 비닐수지, 요소수지, 페놀수지, 불소수지, 규소수지, 아크릴수지, 멜라민수지, 에폭시수지, 폴리카보네이트수지, 디비닐벤젠스티렌 공중합체, 실크파우더, 셀룰로오스, CI 피그먼트옐로우, CI 피그먼트 오렌지 및 이들의 복합체 등일 수 있다.

상기 유기 분체는 일 예로 스테아르산칼슘 등의 금속비누; 세틸린산아연나트륨, 라우릴린산아연, 라우릴린산칼슘 등의 알킬인산금속염; N-라우로일-베타-알라닌칼슘, N-라우로일-베타-알라닌아연, N-라우로일글리신칼슘 등의 아실아미노산 다가금속염; N-라우로일-타우린칼슘, N-팔미토일-타우린칼슘 등의 아미드술폰산 다가금속염; N-엡실론-라우로일-L-리진, N-엡실론-팔미토일리진, N-알파-파리토일올니틴, N-알파-라우로일아르기닌, N-알파-경화우지지방산아실아르기닌 등의 N-아실염기성아미노산; N-라우로일글리실글리신 등의 N-아실폴리펩티드; 알파-아미노카프릴산, 알파아미노라우린산 등의 알파-아미노지방산; 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 나일론, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리스티렌, 사불화에틸렌 등일 수 있다.

상기 미백용 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 유액, 크림, 화장수, 팩, 파운데이션, 로션, 미용액, 모발화장료 등으로 제조될 수 있다.

구체적으로, 상기 미백용 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저로 이루어진 군 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 미백용 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 미백용 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로 플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 미백용 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용될 수 있고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 미백용 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 미백용 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

상술한 바와 같이, 본 발명의 유효성분인 리소좀 분해물은 멜라닌 자체에 대한 분해활성이 뛰어날 뿐만 아니라 인간을 포함한 진핵생물에 포함되어 있는 세포 소기관을 유효성분으로 하는 것이므로 부작용 등의 문제가 발생되지 아니하고, 안전성도 인정되고, 친환경적이라는 장점이 있으므로, 피부 미백을 포함한 멜라닌과 관련된 다양한 용도에 응용될 수 있을 것이다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 리소좀과 리소좀 분해물의 멜라닌 분해 효율을 비교한 그래프로, 붉은색 삼각형(▲)은 대조군인 멜라닌만을 첨가한 것이고, 초록색 사각형(■)은 멜라닌에 1mg의 리소좀을 첨가한 것이며, 파란색 역삼각형(▼)은 멜라닌에 1mg의 리소좀 분해물을 첨가한 것이고, 검은색 마름모(◆)는 멜라닌에 2mg의 리소좀을 첨가한 것이며, 노란색 원(●)은 멜라닌에 2mg의 리소좀 분해물을 첨가한 것이고, 그래프의 가로축은 반응시간을 나타내며, 그래프의 세로축은 멜라닌 농도(ppm)를 나타낸다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 리소좀 분해물의 pH에 따른 멜라닌 분해 효율을 나타낸 그래프로, 파란색 사각형은(■) 시료를 투여하지 않은 대조군을 의미하고, 붉은색 원(●)은 시료를 투여한 실험군을 의미하며, 도 2a는 pH 5.0에서의 멜라닌 분해 효율을 나타낸 그래프이고, 도 2b는 pH 6.0에서의 멜라닌 분해 효율을 나타낸 그래프이며, 도 2c는 pH 7.0에서의 멜라닌 분해 효율을 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 pH 7.0에서 리소좀 분해물 및 리소좀 분해물의 동결 건조물의 멜라닌 분해 활성을 나타낸 그래프로, 회색 원(●)은 시료를 투여한 실험군을 의미하고, 파란색 사각형은(■) 리소좀 분해물을 투여한 실험군을 의미하며, 붉은색 삼각형(▲)은 리소좀 분해물의 동결 건조물을 투여한 실험군을 의미한다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 리소좀을 분리한 세포의 종류(source)에 따른 멜라닌 분해 활성을 나타낸 그래프로, 붉은색 원(●)은 효묘(Yeast)로부터 분리한 리소좀 분해물의 동결 건조물을 투여한 실험군을 의미하고, 파란색 사각형은(■)은 인간의 세포(HeLa Cell)로부터 분리한 리소좀의 분해물을 투여한 실험군을 의미하며, 초록색 삼각형(▲)은 계란의 흰자로부터 분리한 리소좀의 분해물을 투여한 실험군을 의미한다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 효모의 리소좀 활성에 따른 리소좀 분해물의 멜라닌 분해 활성을 나타낸 그래프로, 검은색 원(●)은 시료를 투여하지 않은 대조군을 의미하고, 파란색 삼각형은(▲)은 효모에 50mM NH₄Cl을 처리하여 리소좀의 활성을 저해시킨 후 추출한 리소좀 분해물을 투여한 실험군을 의미하고, 초록색 원(●)은 효모에 아무것도 처리하지 않고 추출한 리소좀 분해물을 투여한 실험군을 의미하며, 붉은색 삼각형(▼)은 효모에 H₂O₂를 처리하여 리소좀을 활성화시킨 후 추출한 리소좀 분해물을 투여한 실험군을 의미한다.

이하, 본 발명의 바람직한 실시예를 기재한다. 다만, 하기의 실시예는 본 발명의 바람직한 일 실시예일 뿐, 본 발명이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예 1: 리소좀 분해물의 제조

실험에 사용된 리소좀은 4종류의 진핵생물로부터 수득하였다.

보다 구체적으로 상기 진핵생물은 계란, 효모(Saccharomyces cerevisiae s2805), 소의 대동맥 혈관내피 세포(BAEC, Bovine Aortic Endothelial Cell) 및 인간의 자궁 경부암 세포(HeLa Cell)를 이용하였다.

상기 효모는 배지를 이용하여 조건에서 정지기(stationary phase)까지 배양하였고, 상기 동물세포인 BAEC 및 HeLa Cell은 각각 배지를 이용하여 조건에서 90% confluency까지 배양하였다.

상기 계란의 경우 노른자를 분리하여 얻은 흰자를 균질화시켜 점성이 없어진 것을 사용하였다. 상기 흰자의 균질화는 호모게나이저(UL TRA-TUR RAX T25, Jarke&Kunkel)를 이용하여 수행하였다. 우선, 단백질 손상방지를 위하여, 비커에 얼음(ice)을 넣은 상태로 상기 호모게나이저를 이용하여 9500 rpm의 조건에서 2분간 균질화시켜 흰자의 점성을 제거하였다. 상기 과정에 의해 점성이 제거된 흰자를 이후 실험에 사용하였다.

또한, 상기 효모, 상기 BAEC 및 상기 HeLa Cell의 균질화도 상기 호모게나이저를 이용하여 수행하였다. 상기 진핵세포의 균질화는 호모게나이저(UL TRA-TUR RAX T25, Jarke&Kunkel)를 이용하여 수행하였다. 구체적으로, 상기 배양한 효모, BAEC 및 HeLa Cell을 얼음(ice)에 넣은 상태로 상기 호모게나이저를 이용하여 9500 rpm의 조건에서 2분간 균질화시켰다.

상기 점성이 제거된 흰자와 상기 균질화시킨 진핵세포로부터 원심 분획법을 이용하여 리소좀을 분리하였다.

보다 구체적으로, 상기 점성이 제거된 흰자와 상기 균질화시킨 진핵세포를 각각 원심분리 튜브(eppendorf tube)에 넣고, 20,000×g 및 4℃의 조건에서 30분간 원심분리를 수행하였다. 상기 원심분리 후, 상층액을 제거하고 하층액을 수득하였다. 상기 수득된 하층액을 다시 500×g 및 4℃의 조건에서 5분간 원심분리한 후, 상층액만을 분리하여, 리소좀을 수득하였다.

리소좀의 분해물은 상기 수득된 침전물에 포함되어 있는 계란의 리소좀과 상층액에 포함되어 있는 진핵세포의 리소좀, 즉 상기 수득된 리소좀에 용제를 첨가하여 제조하였다.

보다 구체적으로, 상기 수득한 리소좀이 포함된 상기 상층액에 %농도(NP-40 buffer 중량/전체 리소좀 반응물의 부피)를 기준으로 NP-40 buffer(0.1% NP-40, 5mM DTT, 0.1M PMSF, sigma)를 상기 침전물 또는 상층액 대비 0.05% 첨가한 뒤, 10분 동안 볼텍싱(vortexing)하였다. 상기 볼텍싱 후, 상기 리소좀에 NP-40 buffer 첨가물을 얼음에 넣어 30분간 반응시켰다. 상기 NP-40 buffer을 첨가하여 리소좀 막을 깬 반응물을 13,000×g 및 4℃의 조건에서 10분간 원심분리를 수행한 후, 상층액만을 분리하여 리소좀 분해물을 제조하였다.

실시예 2: 리소좀과 리소좀 분해물의 미백활성의 측정

상기 실시예 1에서 수득한 리소좀과 상기 실시예 1에서 수득한 리소좀 분해물의 미백활성을 비교하기 위하여, 인산완충액(phosphate buffer)에 녹인 멜라닌에 상기 실시예 1에서 수득한 리소좀과 상기 실시예 1에서 제조된 리소좀 분해물 중 계란의 흰자로부터 수득한 리소좀의 분해물을 반응시켜, 멜라닌 분해 효율을 분석하였다.

상기 리소좀과 상기 리소좀 분해물의 첨가량(mg)은 상기 액체 상태의 리소좀 및 상기 리소좀 분해물의 단백질 농도를 측정하는 방법(Bradford assay)에 의해 정량된 단백질 농도를 나타내는 단위이다. 상기 단백질 농도를 측정하는 방법(Bradford assay)은 UV-Visible spectrophotometer를 이용하여 595nm에서 흡광도를 측정하여, standard물질인 BSA(Bovine Serum Albumin)의 농도와 비교하는 방법으로 수행하였다.

우선, 멜라닌을 0.1M의 인산완충액(pH 6.0)에 100 ppm의 함량으로 용해시켰다. 상기 멜라닌을 100 ppm의 함량으로 녹인 각각의 멜라닌 인산완충액 용액 500 μl에 상기 리소좀 또는 상기 리소좀 분해물을 각각 1 mg 또는 2 mg 첨가하고 볼텍싱한 후, 실온(15℃)에서 30시간 동안 반응시켰다.

우선, 멜라닌 인산완충액 용액에 각각의 시료를 첨가하고 볼텍싱한 후, 실온에서 30시간 동안 반응시키면서, 6시간, 18시간 및 30시간 반응시키는 동안, 각각 멜라닌 함량을 460 nm에서 OD값(Optical Density) 측정하고, 최초 첨가량을 기준으로 한 상대값으로 환산하여 도 1에 나타내었다. 대조군(control, 붉은색 삼각형(▲))의 경우, 상기 리소좀 분해물을 첨가하지 않고, 리소좀 분해물 대신 동일한 량의 인산완충액을 첨가하였다.

상기 도 1에서 나타낸 바와 같이, 리소좀 자체를 처리한 경우에도 대조군에 비해 약간의 멜라닌 분해능이 나타났고, 첨가량의 증가에 따라 멜라닌 분해능이 증가하였으나, 전체적인 분해효율은 2%(1 mg 첨가군) 또는 10%(2 mg 첨가군)인 것으로 확인되었다. 반면, 리소좀 분해물의 경우 리소좀에 비해 현저하게 우수한 멜라닌 분해능을 갖는 것으로 확인되었다. 구체적으로, 1 mg의 리소좀 분해물을 첨가한 경우에 약 12% 정도의 멜라닌 분해능을 나타내었고, 2 mg의 리소좀 분해물을 첨가한 경우에 약 40% 정도의 멜라닌 분해능을 나타내었다.

따라서, 멜라닌 분해능에 대한 실험결과를 기초로 확인된 바에 의하면, 미백활성이란 측면에서 리소좀에 비하여 리소좀 분해물이 바람직한 것으로 판단된다.

실시예 3: pH 에 따른 미백활성의 측정

상기 수득한 리소좀 분해물의 미백활성 및 최적 반응 pH를 측정하기 위하여, 인산완충액(phosphate buffer)에 녹인 멜라닌에 상기 실시예 1에서 제조된 리소좀 분해물 중 계란의 흰자로부터 수득한 리소좀의 분해물을 반응시켜, 멜라닌 분해 효율을 분석하였다.

우선, 멜라닌을 pH가 다른 0.1M의 인산완충액에 녹였다. 보다 구체적으로, 0.1M의 인산완충액의 pH를 달리 한 3종류의 인산완충액(pH 5.0, pH 6.0 및 pH 7.0)에 멜라닌을 100 ppm의 함량으로 용해시켰다. 상기 멜라닌을 100 ppm의 함량으로 녹인 각각의 멜라닌 인산완충액 용액 500 μl에 상기 리소좀 분해물을 100 μg 첨가하고 볼텍싱한 후, 실온(15℃)에서 1일간 반응시켰다.

상기 리소좀 분해물의 첨가량(μg)은 상기 액체 상태의 리소좀 분해물의 단백질 농도를 측정하는 방법(Bradford assay)에 의해 정량된 단백질 농도를 나타내는 단위이다. 상기 단백질 농도를 측정하는 방법(Bradford assay)은 UV-Visible spectrophotometer를 이용하여 595nm에서 흡광도를 측정하여, standard물질인 BSA(Bovine Serum Albumin)의 농도와 비교하는 방법으로 수행하였다.

상기 1일간의 반응을 수행한 후, 다시 리소좀 분해물을 100 μg을 첨가하고 볼텍싱한 후, 실온에서 반응시키는 과정을 반복하여 총 첨가된 리소좀 분해물이 1 mg이 되도록 총 10회 리소좀 분해물을 첨가되도록 반응을 수행하였다. 매번 리소좀 분해물을 첨가하고 1일간의 반응을 수행한 후, 매일 멜라닌 함량을 460 nm에서 OD값(Optical Density) 측정하고, 최초 첨가량을 기준으로 한 상대값으로 환산하여 도 2a 내지 도 2c에 나타내었다. 대조군(control)의 경우, 상기 리소좀 분해물을 첨가하지 않고, 리소좀 분해물 대신 멜라닌 인산완충액 용액과 동일 pH의 인산완충액을 첨가하였다.

상기 도 2a 내지 도 2c에서 나타낸 바와 같이, 2일 또는 3일이 경과한 이후부터는 멜라닌 농도가 감소되는 것이 확인되었다. 상기 도 2a에 나타낸 바와 같이, pH 5의 반응액에서 반응시킨 경우, 9일이 경과하였을 때 초기 멜라닌 농도의 약 40% 정도가 분해되었고, 10일이 경과하였을 때 초기 멜라닌 농도의 약 55% 정도로 멜라닌 함량이 감소되었다. 또한, 상기 도 2b에 나타낸 바와 같이, pH 6의 반응액에서 반응시킨 경우, 3일이 경과하면서부터 멜라닌이 감소되어, 6일이 경과하였을 때 초기 멜라닌 농도의 약 20% 정도가 분해되었고, 8일이 경과하였을 때 초기 멜라닌 농도의 약 35% 정도가 분해되었으며, 10일 경과하였을 때 초기 멜라닌 농도의 약 50% 정도로 멜라닌 함량이 감소되었다.

또한, 상기 도 2c에 나타낸 바와 같이, pH 7의 반응액에서 반응시킨 경우, 2일이 경과하면서부터 멜라닌이 감소되어, 5일이 경과하였을 때 초기 멜라닌 농도의 약 30% 정도가 분해되었고, 10일 경과하였을 때 초기 멜라닌 농도의 약 40% 정도로 멜라닌 함량이 감소되었으며, 리소좀 분해물을 1 mg 첨가한 후, 20일을 더 경과시켜, 30일이 경과한 시점에서 초기 멜라닌 농도의 약 5% 정도로 멜라닌 함량이 감소되는 것이 확인되었다.

상기 도 2에 의하면, 리소좀 분해물은 멜라닌 분해능이 우수하고, 특히 pH 7에서 멜라닌 분해능이 가장 우수한 것으로 확인되었다. 특히, 10일 경과한 시점에서의 멜라닌 분해능을 비교하면, pH 5 또는 pH 6에 비하여 pH 7에서 약 125% 내지 약 140%의 멜라닌 분해능이 있어 pH 7에서의 멜라닌 분해능이 다른 pH 조건에 비하여 현저하게 우수한 것으로 확인되었다. 상기 결과에 의하면, 리소좀 또는 리소좀 분해물을 미백용 조성물 일 예로, 미백용 외용 조성물이나 화장료 조성물에 사용하는 경우 상기 조성물의 pH를 pH 7로 조절하는 것이 멜라닌 분해 효율이란 측면에서 바람직한 것으로 판단된다.

실시예 4: 동결건조 여부에 따른 미백활성의 측정

리소좀 분해물의 가공 여부 즉, 동결건조 과정을 수행하는지 여부에 따른 상기 수득한 리소좀 분해물의 미백활성 즉 멜라닌 분해 효율을 분석하였다.

우선, 상기 실시예 1에서 수득한 리소좀 분해물 중 계란의 흰자로부터 수득한 리소좀의 분해물과 상기 리소좀 분해물의 동결 건조물을 각각 멜라닌과 반응시킨 후, 멜라닌 분해 효율을 확인하였다.

상기 리소좀 분해물의 동결 건조물은 상기 리소좀 분해물 100 μg을 1.7 ml 튜브(tube)에 넣고 동결건조기(Speed-Vec)를 이용하여 1000 rpm 및 4℃의 조건과 진공조건에서 6시간 동안 건조시켰다.

상기 리소좀 분해물 100 μg을 건조시킨 리소좀 분해물의 동결 건조물과 리소좀 분해물 100 μg을 상기 실시예 2에서 제조한 멜라닌 반응액 구체적으로, 0.1M의 인산완충액(pH 7.0)에 멜라닌을 100 ppm의 함량으로 용해시켜 제조한 멜라닌 인산완충액 용액 500 μl에 첨가하고 실시예 2의 방법과 같이 매일 상기 리소좀 분해물의 동결 건조물 100 μg과 상기 리소좀 분해물 100 μg을 첨가하면서 총 10회 리소좀 분해물을 첨가하고, 총 20일 동안 멜라닌 함량을 460 nm에서 OD값(Optical Density) 측정하였으며, 그 결과를 도 3에 나타내었다. 대조군(control)의 경우, 상기 리소좀 분해물을 첨가하지 않고, 리소좀 분해물 대신 멜라닌 인산완충액 용액과 동일 pH의 인산완충액을 첨가하였다.

상기 도 3에 나타낸 바와 같이, 리소좀 분해물 및 리소좀 분해물의 동결 건조물 모두 멜라닌 분해 활성이 있는 것이 확인되었다. 상기 리소좀 분해물의 동결 건조물에 비하여, 상기 리소좀 분해물이 반응 초기에서는 더 높은 멜라닌 분해 활성이 있는 것이 확인되었으나, 10일이 경과한 시점을 기준으로는 상기 리소좀 분해물의 동결 건조물이 더 우수한 멜라닌 분해능을 나타내었다. 특히, 6일이 경과하는 시점부터 리소좀 분해물의 경우 잔존 멜라닌 함량이 거의 일정하게 유지되었으나, 멜라닌 분해물의 동결 건조물의 경우 20일이 경과한 시점까지 계속해서 멜라닌 함량이 감소하는 것이 확인되어, 멜라닌 분해물의 동결 건조물의 멜라닌 분해 활성이 유지되는 것으로 확인되었다.

식품 등과 같이 경구 투여하는 경우에 비하여 화장료 조성물 등과 같이 유통기한이 긴 외용 조성물의 특성을 고려하면, 상기 결과로부터 리소좀 또는 리소좀 분해물을 미백용 조성물에 사용한다는 측면에서 상기 리소좀 분해물은 리소좀 분해물의 동결 건조물인 것이 멜라닌 분해 활성의 유지란 측면에서 바람직한 것으로 판단된다.

실시예 5: 진핵세포 종류( Source )에 따른 미백활성의 측정

리소좀을 분리해 낸 진핵세포의 종류(source)에 따른 상기 수득한 리소좀 분해물의 미백활성 즉 멜라닌 분해 효율을 분석하였다.

우선, 상기 실시예 1에서 수득한 리소좀 분해물인 계란, 효모, BAEC 및 HeLa Cell로부터 수득한 리소좀의 분해물을 각각 멜라닌과 반응시킨 후, 멜라닌 분해 효율을 확인하였다.

상기 각각의 진핵세포로부터 수득한 리소좀 분해물을 매일 100 μg씩 상기 실시예 2에서 제조한 멜라닌 반응액 구체적으로, 0.1M의 인산완충액(pH 7.0)에 멜라닌을 100 ppm의 함량으로 용해시켜 제조한 멜라닌 인산완충액 용액 500 μl에 첨가시키고, 16일 동안 반응시킨 후에 멜라닌 함량을 460 nm에서 OD값(Optical Density) 측정하였으며, 그 결과를 도 4에 나타내었다.

상기 도 4에 나타낸 바와 같이, 리소좀 분해물은 진핵세포의 종류에 관계없이 모두 멜라닌 분해활성을 갖는 것으로 확인되었다. 또한, 계란과 동물세포인 인간(HeLa Cell)로부터 분리한 리소좀 분해물에 비하여 효모로부터 분리한 리소좀 분해물이 우수한 멜라닌 분해활성을 갖는 것으로 확인되었다. 구체적으로, 계란, 동물세포에서 분리한 리소좀 분해물을 100μg을 16일 동안 처리하였을 때, OD₄₆₀이 1.0 정도 나온 반면, 효모에서 분리한 리소좀의 경우 100μg을 매일 16일 동안 첨가하였을 때, OD₄₆₀이 0.6 정도로 나와 멜라닌 분해활성이 높은 것으로 확인되었다.

상기한 결과로부터, 본 발명의 멜라닌 분해활성을 갖는 미백 조성물의 유효성분으로는 효모로부터 분리한 리소좀이 더욱 바람직한 것으로 평가되었다.

실시예 6: 리소좀의 활성에 따른 미백활성 측정

상기 실시예 5에서 가장 분해활성이 우수한 것으로 확인된 효모로부터 분리한 리소좀 분해물의 미백활성 즉 멜라닌 분해효율을 효모 배양 조건과 관련하여 분석하였다.

우선, 상기 실시예 1의 효모를 배양한 후, 효모 배양액에 20mM H₂O₂와 50mM NH₄Cl을 각각 처리하였다. 상기 시료를 첨가한 후, 24시간 동안 더 배양하였다. 대조군으로 시료의 첨가 없이 동일한 조건으로 배양한 효모를 사용하였다.

상기 각각의 조건으로 배양한 효모를 이용하여 상기 실시예 1의 방법으로 리소좀 분해물을 제조한 후, 각각 멜라닌과 반응시켜 멜라닌 분해 효율을 확인하였다. 구체적으로, 상기 효모의 리소좀의 분해물, 상기 20mM H₂O₂을 처리하고 배양한 효모의 리소좀 분해물 및 상기 50mM NH₄Cl을 처리하고 배양한 효모의 리소좀 분해물 각 100 μg을 40일 동안 매일 0.1M의 인산완충액(pH 7.0)에 멜라닌을 100 ppm의 함량으로 용해시켜 제조한 멜라닌 인산완충액 용액 500 μl에 첨가시키고, 반응시킨 후에 멜라닌 함량을 460 nm에서 OD값 (Optical Density) 측정하였으며, 그 결과를 도 5에 나타내었다.

상기 도 5에 나타낸 바와 같이, 효모에 H₂O₂를 처리한 후 분리한 리소좀 분해물 100 μg을 매일 40일 처리하였을 때, 아무것도 처리하지 않거나 NH₄Cl을 처리하여 리소좀 분해물을 추출한 것에 비하여 약 2.5배 내지 3.0배 높은 맬라닌 분해 효율을 보였다.

상기 결과에 의하면, 본 발명의 유효성분인 리소좀이 갖는 우수한 멜라닌 분해활성에 의해 결과적으로 체내에서 생성된 멜라닌을 제거하여, 미백 효과 및 피부의 잡티 제거 효과를 유도할 수 있을 것으로 예상되므로, 본 발명의 미백 조성물 구체적으로, 포유류의 세포로부터 분리된 리소좀 분해물의 동결 건조물이 포함된 pH 7.0의 미백 조성물은 멜라닌의 분해 또는 미백 효과가 요구되는 다양한 용도에 응용될 수 있을 것으로 예상된다.

제조예 : 리소좀 분해물을 이용한 미백 조성물의 제제

상기 미백활성이 확인된 리소좀 분해물, 보다 구체적으로 효모부터 분리한 리소좀 분해물과 인산완충액을 혼합한 혼합물의 동결 건조물이 포함된 미백 조성물의 다양한 제제를 하기 표의 조성으로 제조하였다.

제조예 1. 유연 화장수의 제조

번 호	성분명(원 료)	단위(중량 %)
1	효모 리소좀 분해물의 동결 건조물	0.5
2	글리세린	3.0
3	부틸렌글리콜	2.0
4	폴리옥시에칠렌(60) 경화피마자유	0.5
5	에탄올	6.0
6	향료, 방부제, 색소	적량
7	정제수	잔량
합 계(Total)		100.0

제조예 2. 영양로션 제조

번 호	성분명(원 료)	단위(중량 %)
1	효모 리소좀 분해물의 동결 건조물	0.5
2	글리세린	3.0
3	부틸렌글리콜	2.0
4	카보머	0.1
5	트리에탄올아민	0.1
6	스쿠알란	4.0
7	유동파라핀	3.0
8	카프릴릭/카프릭 글리세라이드	4.0
9	스테아린산	1.0
10	에틸알코올	1.0
11	글리세릴모노스테아레이트	0.5
12	폴리솔베이트60	1.5
13	솔비탄세스퀴올레이트	0.5
14	글리세릴스테아레이트/PEG-100 스테아레이트	1.0
15	향료, 방부제, 색소	적량
16	정제수	잔량
합 계(Total)		100.0

제조예 3. 영양크림의 제조

번 호	성분명(원 료)	단위(중량 %)
1	효모 리소좀 분해물의 동결 건조물	0.2
2	글리세린	5.0
3	부틸렌글리콜	5.0
4	카보머	0.2
5	트리에탄올아민	0.2
6	스쿠알란	5.0
7	유동파라핀	3.5
8	카프릴릭/카프릭 글리세라이드	4.5
9	스테아린산	1.5
10	에틸알코올	2.0
11	밀납	1.0
12	바세린	2.0
13	글리세릴모노스테아레이트	1.0
14	폴리솔베이트60	1.5
15	솔비탄세스퀴올레이트	0.5
16	글리세릴스테아레이트/PEG-100 스테아레이트	1.5
17	향료, 방부제, 색소	적량
18	정제수	잔량
합 계(Total)		100.0

제조예 4. 에센스의 제조

번 호	성분명(원 료)	단위(중량 %)
1	효모 리소좀 분해물의 동결 건조물	0.2
2	시토 스테롤	1.70
3	폴리글리세릴-2-올레이트	1.50
4	세라마이드	0.7
5	세테아레스-4	1.2
6	콜레스테롤	1.5
7	디세틸포스페이트	0.4
8	농글리세린	5.0
9	선플라우어오일	15.0
10	카르복시비닐폴리머	0.2
11	산탄검	0.2
12	방부제	미량
13	향료	미량
14	정제수	잔량
합 계(Total)		100.0

제조예 5. 친수성 연고제의 제조

번 호	성분명(원 료)	단위(중량 %)
1	효모 리소좀 분해물의 동결 건조물	0.5
2	백색 바세린	25.0
3	스테아릴 알콜	22.0
4	에칠(또는 메칠) p-옥시벤조에이트	0.25
5	프로필렌 글리콜	12.0
6	라우릴 황산 나트륨	1.5
7	프로필 p-옥시벤조에이트	0.15
8	향료, 방부제, 색소 등 기타 부형제	잔량

Claims (9)

1. 리소좀(lysosome)을 유효성분으로 포함하는 미백 조성물.
2. 제1항에 있어서,
   상기 리소좀은 동물의 효모로부터 분리된 세포 소기관인 것을 특징으로 하는 미백 조성물.
3. 제1항에 있어서,
   상기 리소좀은 리소좀 분해물인 것을 특징으로 하는 미백 조성물.
4. 제3항에 있어서,
   상기 리소좀 분해물은 리소좀에 NP-40(Nonidet-P40) 또는 Triton X-100을 반응시켜 제조한 것을 특징으로 하는 미백 조성물.
5. 제1항에 있어서,
   상기 미백 조성물은 인산완충액을 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 미백 조성물.
6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 리소좀은 리소좀 동결 건조물인 것을 특징으로 하는 미백 조성물.
7. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 미백 조성물은 pH가 pH 6.8 내지 pH 7.2인 것을 특징으로 하는 미백 조성물.
8. 리소좀(lysosome)을 유효성분으로 포함하는 미백용 피부 외용 약학 조성물
9. 리소좀(lysosome)을 유효성분으로 포함하는 미백용 화장료 조성물.

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