KR102226252B1 - 리소좀을 포함하는 미백용 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 리소좀을 포함하는 미백 조성물에 관한 것이다.
Description
본 발명은 리소좀을 포함하는 미백 조성물에 관한 것이다.
사람의 피부색은 피부 내부의 멜라닌, 케라틴 및 헤모글라빈의 농도 및 분포에 따라 결정되고, 상기 유전적인 요인 외에도 자외선 등의 환경적 조건, 피로, 스트레스 등의 생리적 조건에 의해서도 영향을 받는다. 상기 피부색과 관련에 가장 큰 영향을 미치는 요소는 멜라닌이다.
멜라닌(흑색소, Melanin)은 인간 피부의 색을 나타내고 피부를 보호하고, 자외선(UV)에 의한 피부 손상을 막아주는 중요한 역할을 하는 대표적인 색소이다. 상기 멜라닌은 피부의 표피(epidermis)의 기저층(basal layer)에 있는 멜라노사이트 세포(melanocyte cells)에 의해 생산된다. 멜라닌은 아미노산의 일종인 티로신에 타이로시나제(tyrosinase, EC:1.14.18.1)가 작용하여 도파, 도파퀴논으로 바뀐 후 비효소적인 산화반응을 거쳐 만들어진다. 상기 타이로시네이즈는 구리원자를 포함하는 금속이온 함유 모노옥시제나제(a copper-containing monooxygenase)중 하나로, 상기한 바와 같이, 멜라닌 생합성 경로(melanin biosynthesis pathway)에 있어서 중요한 효소(key enzyme)이다. 상기 멜라노사이트 세포에 의해 합성된 멜라닌은 주변 각질세포로 전이되어 사람의 피부색을 나타낸다.
상기 멜라닌이 피부에서 필요 이상으로 과도하게 생성되면, 피부색을 어둡게 하고, 기미, 주근깨 또는 점 등을 발생시키고, 과색소침착증 등을 유발하여 미용상으로 좋지 않은 결과를 가져오게 된다. 따라서 피부 내의 멜라닌 색소의 합성을 저해시키면 피부색을 밝게 하여 피부 미백을 실현할 수 있을 뿐만 아니라 자외선, 호르몬 및 유전적인 원인에 기인하여 발생하는 기미, 주근깨 등의 피부 과색소 침착증을 개선할 수 있다.
최근, 미에 대한 관심과 자기관리에 대한 욕구의 증가와 함께 피부에 대한 관심이 증가되면서, 기미나 점과 같은 피부의 잡티제거를 위해 피부 미백에 대한 연구가 활발히 진행되고 있고, 또 다른 측면에서 야외에서의 레저 활동을 즐기는 인구의 증가로 자외선에 의한 멜라닌 색소 침착을 막고자 하는 요구가 증가하고 있다. 상기 멜라닌 색소의 생합성의 감소는 타이로시네이즈 활성을 저해하거나, 자외선(UV)에 의한 노출을 감소시키거나, 각질세포로의 멜라닌 이동을 저해함으로써 수행될 수 있다. 상기 방법들 중에서 기존 미백용 화장품과 관련해서는 타이로시네이즈를 저해할 수 있는 성분을 유효성분으로 사용하였다.
상기 미백용 화장품과 관련하여, 종래에는 화학성분인 하이드로퀴논이나 아스콜빈산, 코직산, 글루타치온과 같은 타이로시나제에 대해 저해 활성을 갖는 물질을 피부 외용 연고나, 크림, 에센스 등의 화장료에 배합함으로써 피부 미백을 실현하거나, 기미, 주근깨 등의 피부 과색소 침착증을 개선하였다. 그러나, 이러한 성분들은 주로 합성물질로 안전성에 대한 문제가 제기되고 있거나, 그 효능의 측면이나 화장품과 함께 사용하는 경우 변질 등의 문제가 제기되고 있다.
구체적으로, 하이드로퀴논은 피부 자극이 심하여 배합량을 극소량으로 제한해야 하는 문제점이 있을 뿐만 아니라, 최근 알러지(allergy) 유발이나 피부암 유도 등과 같은 문제가 제기되어 그 사용자체가 전면 금지되는 국가도 있고, 우리나라에서도 피부과의 처방이 필요한 약용으로 분류되어, 병원이나 약국에서 판매되는 외용 조성물에 한해서 전체 조성물 중 1% 미만의 농도를 첨가될 수 있는 것으로 규제되고 있다. 비타민 C 유도체인 아스콜빈산(ascorbic acid)은 산화되기 쉬워 이를 배합한 화장료는 변색이나 변취 등의 문제가 발생하여 제품의 질을 떨어뜨리고 그에 따라 미백 효과가 떨어지는 단점이 있다. 최근에는 이러한 문제를 해결하기 위하여, Ascorbyl-palmitate, Ascorbyl-dipalmitate, Ascorbyl stearare 또는 Ascorbyl magnesium phosphate 등의 유도체가 개발되고 있으나 특수한 기술을 사용하지 않으면 피부 속으로 침투가 어렵다는 문제가 단점으로 제시되고 있다. 코직산은 경구 투여시 발암 가능성이 있어 안전성에 대한 검증이 더 필요하며, 글루타치온, 시스테인 등의 티올계 화합물은 특유의 불쾌한 냄새를 가질 뿐만 아니라 경피 흡수에도 문제점이 있고, 이들의 배당체 및 유도체들도 극성이 높아 화장료의 배합 성분으로 사용하기 어려운 단점을 가지고 있다. 기존의 천연재료로부터 분리한 타이로시네이즈 저해 활성을 갖는 물질은 주로 페놀 구조(phenol structure)를 가지거나 금속 킬레이트 효소(metal chelating agent)로, 상기 저해 활성을 갖는 물질들은 활성이 낮음에도 불구하고, 높은 독성(high toxicity)과 불충분한 투과성(insufficient penetrative ability)으로 인하여 그 사용이 제한되고 있다.
따라서 이제까지의 미백제보다 효능이 뛰어나고 좀 더 안전한 미백용 화장품의 유효성분 일예로, 멜라닌 자체를 분해할 수 있는 성분 등에 대한 연구의 필요성이 증대되고 있다. 이에, 본 발명자들은 멜라닌 자체를 분해할 수 있는 성분을 개발하기 위해 노력한 결과, 글루타티온 퍼옥시다아제를 포함하는 플라즈미드를 형질 전환한 효모에서 분리한 리소좀이 미백에 효과 있다는 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 미백용 리소좀을 제조하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은, 상기 리소좀을 포함하는 미백용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명은 상술한 문제점을 해결하기 위한 것으로, 하기의 단계를 포함하는 미백용 리소좀을 제조하는 방법을 제공하는 것이다:
i) 서열번호 1, 서열번호 2 및 서열번호 3으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 서열번호의 아미노산 서열로 이루어진 글루타치온 퍼옥시다아제(Glutathione PeroXidase; GPX)를 코딩하는 염기서열을 벡터에 재조합하는 단계;
ii) 상기 재조합된 벡터를 효모 세포에 형질 전환하는 단계; 및
iii) 상기 효모 형질 전환체에서 리소좀을 추출하는 단계.
상기 벡터는 pYES 2일 수 있다.
상기 효모 세포는 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae), 사카로마이세스 바야누스(S. bayanus), 사카로마이세스 파라독서스 (S. paradoxus), 사카로마이세스 미카테(S.mikatae), 및 사카로마이세스 쿠드리아브제비(S. kudriavzevii)로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상일 수 있다.
상기 재조합 된 벡터를 효모에 형질 도입하는 단계 다음에 상기 효모 형질전환체를 배양하는 단계를 추가할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 서술한 리소좀을 포함하는 미백용 조성물을 제공할 수 있다.
본 발명의 글루타치온 퍼옥시다아제를 포함하는 벡터를 형질 전환한 효모에서 분리한 리소좀은 효모에서 분리한 리소좀보다 멜라닌 분해활성이 증가하는 효과가 있다. 상기 글루타치온 퍼옥시다아제의 종류에 따라 멜라닌의 분해활성이 차이가 있고, 특히 GPX 2를 포함하는 벡터를 형질 전환한 효모에서 분리한 리소좀이 GPX 1 및 GPX 3를 포함하는 벡터를 형질 전환한 효모에서 분리한 리소좀 보다 멜라닌 분해 활성이 증가하는 효과가 있다. 상기 GPX의 유전자를 포함하는 벡터를 형질 전환한 효모에서 분리한 리소좀을 피부 미백을 포함한 멜라닌과 관련된 다양한 용도에서 적용할 수 있는 효과가 있다.
도 1은 본 발명의 YES2::GPX1::CFP, pYES2::GPX2::CFP, pYES2::GPX3::CFP의 개열 지도이다.
도 2는 GPX1(MBTL-GC1), GPX2 (MBTL-GC20, GPX3(MBTL-GC3)의 각각 유전자를 전기영동을 확인한 결과이다.
도 3은 MBTL-GC1, MBTL-GC2, MBTL-GC3의 재조합 벡터를 제조하는 방법을 정리한 모식도이다.
도 4는 형질 전환된 효모 내 GPX1, GPX2, GPX3 단백질의 발현을 표지된 형광 단백질을 공초점 레이저 주사 현미경으로 확인한 결과이다.
도 5는 효모로부터 리소좀과 효소를 추출하여 미백 기능성 소재를 생산하는 방법을 나타낸 모식도이다.
도 6은 GPX1, GPX2, GPX3을 포함하는 벡터를 형질 전환한 효모, 및 기본 벡터를 형질 전환한 효모에서 추출한 리소좀을 1mg/ml의 농도로 멜라닌 100ppm에 처리한 뒤 10일간 반응시키고 초기값(day 0)과 나중값 (day 10)을 비교한 결과이다.
도 2는 GPX1(MBTL-GC1), GPX2 (MBTL-GC20, GPX3(MBTL-GC3)의 각각 유전자를 전기영동을 확인한 결과이다.
도 3은 MBTL-GC1, MBTL-GC2, MBTL-GC3의 재조합 벡터를 제조하는 방법을 정리한 모식도이다.
도 4는 형질 전환된 효모 내 GPX1, GPX2, GPX3 단백질의 발현을 표지된 형광 단백질을 공초점 레이저 주사 현미경으로 확인한 결과이다.
도 5는 효모로부터 리소좀과 효소를 추출하여 미백 기능성 소재를 생산하는 방법을 나타낸 모식도이다.
도 6은 GPX1, GPX2, GPX3을 포함하는 벡터를 형질 전환한 효모, 및 기본 벡터를 형질 전환한 효모에서 추출한 리소좀을 1mg/ml의 농도로 멜라닌 100ppm에 처리한 뒤 10일간 반응시키고 초기값(day 0)과 나중값 (day 10)을 비교한 결과이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
이제까지의 미백제보다 효능이 뛰어나고 좀 더 안전한 미백용 화장품의 유효성분 일예로, 멜라닌 자체를 분해할 수 있는 성분 등에 대한 연구의 필요성이 증대되고 있다. 이에, 본 발명자들은 멜라닌 자체를 분해할 수 있는 성분을 개발하기 위해 노력한 결과, 글루타티온 퍼옥시다아제를 포함하는 플라즈미드를 형질 전환한 효모에서 분리한 리소좀이 미백에 효과 있다는 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 상술한 문제점을 해결하기 위한 것으로, 하기의 단계를 포함하는 미백용 리소좀을 제조하는 방법을 제공하는 것이다:
i) 서열번호 1, 서열번호 2 및 서열번호 3으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 서열번호의 아미노산 서열로 이루어진 글루타치온 퍼옥시다아제(Glutathione PeroXidase; GPX)를 코딩하는 염기서열을 벡터에 재조합하는 단계;
ii) 상기 재조합된 벡터를 효모 세포에 형질 전환하는 단계; 및
iii) 상기 효모 형질 전환체에서 리소좀을 추출하는 단계.
본 발명은 진핵 미생물인 Saccharomyces cerevisiae에 글루타치온 퍼옥시다아제 (Glutathione PeroXidase; GPX) 단백질을 생산하기 위해, 글라타치온 퍼옥시다제를 포함하는 플라즈미드를 제조하였다 (도 1). 상기 플라즈미드를 DNA sequencing와 전기영동을 통하여 각 유전자의 사이즈와 서열을 확인한 결과 일차하는 것을 확인 하였다 (도 2). 상기 벡터를 전기 형질 전환 주입법(electro transformation)을 이용하여 대장균 (Escherichia coli, Strain DH5-alpha) 에 삽입하였다. 벡터가 형질 전환된 대장균은 암피실린을 포함하는 항균배지로 선별하였다 (도 3). 상기 대장균에 삽입하여 대량으로 제조한 벡터를 Saccharomyces cerevisiae에 형질 전환하였고, 형질 전환된 효모를 형광 현미경을 이용하여 재조합 효모 내에서 글루타티온 퍼옥시다아제의 생산을 확인하였다 (도 4). GPX 1, GPX 2, GPX 3, mock을 형질 전환된 효모에서 분리하여 리소좀을 분리하였다 (도 5). 상기 분리한 리소좀을 멜라닌 용액을 처리한 결과, GPX1, GPX2, GPX3가 과생산된 효모로부터 추출한, 3개의 미백 기능성 소재는 각각 53, 65, 49%의 멜라닌을 분해했으며 대조군인 Mock은 45%의 멜라닌을 분해하였다. 대조군과 비교해봤을 때, GPX1, GPX2, GPX3는 각각 17.8, 44.4, 8.9%으로 멜라닌 분해 능력이 증가하는 것을 확인하였다. 특히 GPX 2는 다른 GPX 1 및 GPX 3보다 미백 기능에 뛰어난 효과를 보였다 (도 6).
상기 벡터는 pYES 2일 수 있다.
상기 효모 세포는 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae), 사카로마이세스 바야누스(S. bayanus), 사카로마이세스 파라독서스 (S. paradoxus), 사카로마이세스 미카테(S.mikatae), 및 사카로마이세스 쿠드리아브제비(S. kudriavzevii)로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상일 수 있다.
상기 재조합 된 벡터를 효모에 형질 도입하는 단계 다음에 상기 효모 형질전환체를 배양하는 단계를 추가할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 서술한 리소좀을 포함하는 미백용 조성물을 제공할 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예 1. Glutathione PeroXidase (GPX) 유전자를 포함하는 재조합 벡터 (pYES2::GPX1::CFP, pYES2::GPX2::CFP, pYES2::GPX3::CFP) 의 제작
진핵 미생물인 Saccharomyces cerevisiae (wild type strain, 2805)의 Glutathione PeroXidase (GPX) 단백질을 생산할 수 있도록 유전자가 삽입된 벡터를 제작하였다. 기본 벡터 (Backbone vector)로 pYES 2.0 벡터(Invitogen, Carlsbad, CA, USA) 를 이용하였으며, Cyan Fluorescent Protein (CPF) 유전자가 말단에 삽입된 Vector는 DNA sequencing 과정 (Bioneer) 을 통해 유전 서열이 최종적으로 확인되고, 플라스미드의 대량 생산을 위하여 대장균 내로 삽입하였다 (도 1). S. cerevisiae 로부터 추출된 유전자에서 Glutathione Peroxidase 1 (GPX 1), Glutathione Peroxidase 2 (GPX 2), Glutathione Peroxidase 3 (GPX 3)을 PCR (Polymerase chain reaction)을 수행하여 증폭하고, pECFP-C1 (BD Bioscience Clontech, USA) 벡터로부터 CFP 유전자를 증폭한 뒤, pYES 2.0 벡터에 삽입하였다 (표 1). 상기 제조된 pYES2::GPX1::CFP, pYES2::GPX2::CFP, pYES2::GPX3::CF를 각각 DNA sequencing와 전기영동을 통하여 각 유전자의 사이즈와 서열이 일치함을 확인하였다. 상기 벡터를 MBTL-GC1(GPX1), MBTL-GC2(GPX2), MBTL-GC3(GPX3)으로 각각 명명하였다 (도 2) 상기 벡터를 전기 형질 전환 주입법(electro transformation)을 이용하여 대장균 (Escherichia coli, Strain DH5-alpha) 에 삽입하였다. 벡터가 형질 전환된 대장균은 암피실린을 포함하는 항균배지로 선별하였다 (도 3).
프라이머 서열 | 비고(제한효소) | |
GPX 1-F | 5‘-GGC AAG CTT ATG CAA GAA TTT TA-3' | Hind 3 |
GPX 1-R | 5‘-TGA GGA TCC AAT CTG TTC TTC TGG-3' | BamH 1 |
GPX 2-F | 5‘-GGC AAG CTT ATG ACC ACA TCT TTT TAT G-3' | Hind 3 |
GPX 2-R | 5‘-GCC GGA TCC TTT ACT TAA CAG GCT TTG-3' | BamH 1 |
GPX 3-F | 5‘-GGC AAG CTT ATG TCA GAA TTC TAT AA-3' | Hind 3 |
GPX 3-R | 5‘-ACT GGA TCC TTC CAC CTC TTT CAA-3' | BamH 1 |
CFP-F | 5‘-ATT GGA TCC GTG AGC AAG GGC GAG-3' | BamH 1 |
CFP-R | 5‘-GCC TCT AGA TTA CTT GTA CAG CTC GTC C-3' | Xba 1 |
실시예 2. 글루타티온퍼옥시다아제를 과생산 하도록 형질 전환된 효모의 제조
상기 실시예 1에서 제조된 각각의 벡터를 대장균에 삽입하여 대량으로 제조한 뒤, Saccharomyces cerevisiae 내부로 삽입하였다. 효모 내에서 GPX 1, GPX 2, GPX 3의 과 생산을 유도하였다. 상기 각각의 형질 전환된 효모를 형광 현미경을 이용하여 재조합 효모 내에서 글루타티온 퍼옥시다아제의 생산을 확인하였다. 구체적으로 상기 실시예 1에서 만들어진 벡터를 형질전환한 대장균으로부터 플라스미드를 추출하고, 상기 추출된 플라스미드를 S. cerevisiae (2805)에 Heat shock method를 통해 형질 전환하였다. 형질 전환된 효모는 최소배지를 통해 선별되었다. 상기 효모 내 글루타티온 퍼옥시다아제의 발현은 형광 현미경을 이용하여 확인하였다 (도 4). 최종적으로 상기 실시예 1에서 만들어진 MBTL-GC1, MBTL-GC2, MBTL-GC3 벡터가 각각 삽입된 3가지의 재조합 효모가 제조되었다. 각 재조합 효모는 GPX 1, GPX 2, GPX 3 단백질을 각각 과 생산하는 것을 확인하였다.
실시예 3. 효모로부터 미백 기능성 소재 추출
미백 기능성 소재는 효모의 세포 외벽을 부수어 리소좀을 추출한 뒤, 리소좀으로부터 효소를 분리하여 만들었다. 상기 실시예 2에서 형질 전환된 3가지 재조합 효모와 상기 기본 벡터 (backbone vector; pYES 2.0)만 삽입된 Mock로 총 4가지 효모에서 멜라닌 분해 효율을 비교하기 위해 각각 미백 기능성 소재를 추출하였다. 상기 효모로부터 리소좀을 추출하는 경우 세포 외벽을 부수어 세포소기관을 추출하는 방법이 사용되었다. 구체적으로 Glass bead와 고속 진탕기(vortexer)를 이용하여 20분내지 30분간 세포 외벽을 파괴한 뒤 500×g로 원심분리하여 파괴된 세포 껍질이 포함된 불순물이 제거된 상층액은 18,000×g 내지 22,000×g로 원심분리를 30분 내지 40분간 수행하였다. 상기 원심 분리 후 침전된 물질(리소좀)을 수득하였다. 실시예에서, 상기 4가지 효모로부터 리소좀의 추출 과정을 통해 추출된 리소좀으로부터 막 제거 과정을 통해 효소를 추출할 수 있다. 구체적으로 계면활성제(detergent)가 포함된 lysis buffer를 이용하여 추출하였다. 보다 더 구체적으로 lysis buffer : 리소좀 의 비율을 1:1 또는 1:2 로 혼합한 뒤 고속 진탕기(vortexer)를 이용하여 20분내지 30분간 강하게 교반 하고 18,000×g 내지 22,000×g로 10분 내지 20분간 원심 분리하였다. 상기 원심분리가 완료된 용액의 하층부에 남아있는 리소좀 막을 포함한 불순물을 제외하고 리소좀 효소가 포함된 상층액을 수득하였다. 상기 상층액을 미백 기능성 소재로 이용하였다 (도 5). 상기 효소 추출방법에 의해 추출된 효소는 Bradford assay를 이용하여 농도를 측정하였다.
실시예 4. 리소좀에 의한 미백활성효능 측정방법
상기 실시 예 3에서 수득한 상기 미백 기능성 소재를 활용한 멜라닌 색소 감소효능을 확인하고 재조합 효모와의 효능 비교를 위하여 합성된 멜라닌 색소를 Sigma Aldrich로부터 구입하여 준비하였다. 상기 멜라닌 색소는 타이로신(tyrosine)을 산화시켜 만든 것으로 검은색과 갈색을 띄는 유멜라닌(eumelanin)으로 이루어져 있다. 멜라닌 색소를 pH 7조건의 Phosphate buffered saline (PBS) 용액에 용해시켜 멜라닌 용액을 제조한 뒤 상기 멜라닌용액과 상기 미백 조성물을 반응시켜 반응 전과 반응 후의 흡광도를 측정하고 상기 멜라닌 용액에 의한 표준곡선을 이용하여 멜라닌 농도 변화 측정했다. 구체적으로, 상기 미백 조성물 1mg/ml 가 포함된 멜라닌 용액 100ppm을 상온에서 10일간 반응시킨 뒤 microplate spectrophotometer를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정, 0, 10, 50, 100ppm의 멜라닌 표준시료를 이용하여 표준곡선을 구성하고 반응 전 후 의 멜라닌 농도를 측정. 멜라닌의 탈색율은 하기 수학식 1로 측정하였다.
[수학식 1]
4가지 (GPX1, GPX2, GPX3, Mock) 효모에서 추출한 미백 기능성 소재를 1mg/ml의 농도로 멜라닌 100ppm에 처리했을 때, GPX1, GPX2, GPX3가 과생산 된 효모로부터 추출한, 3개의 미백 기능성 소재는 각각 53, 65, 49%의 멜라닌을 분해했으며 대조군인 Mock은 45%의 멜라닌을 분해했다. 대조군과 비교해봤을 때, GPX1, GPX2, GPX3는 각각 17.8, 44.4, 8.9%의 멜라닌 분해 능력이 증가하는 것을 확인하였다. 이를 통해 글루타치온 퍼옥시다아제가 과생산된 효모의 리소좀 유효 성분은 멜라닌 분해를 증가시켰다. 특히 GPX 2는 다른 GPX 1 및 GPX 3보다 미백 기능에 뛰어난 효과를 보였다 (도 6).
<110> INDUSTRIAL COOPERATION FOUNDATION CHONBUK NATIONAL UNIVERSITY
<120> A whitening composition comprising lysosome
<130> 1067042
<160> 6
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 167
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPX1
<400> 1
Met Gln Glu Phe Tyr Ser Phe Ser Pro Ile Asp Glu Asn Gly Asn Pro
1 5 10 15
Phe Pro Phe Asn Ser Leu Arg Asn Lys Val Val Leu Ile Val Asn Val
20 25 30
Ala Ser His Cys Ala Phe Thr Pro Gln Tyr Lys Glu Leu Glu Tyr Leu
35 40 45
Tyr Glu Lys Tyr Lys Ser His Gly Leu Val Ile Val Ala Phe Pro Cys
50 55 60
Gly Gln Phe Gly Asn Gln Glu Phe Glu Lys Asp Lys Glu Ile Asn Lys
65 70 75 80
Phe Cys Gln Asp Lys Tyr Gly Val Thr Phe Pro Ile Leu His Lys Ile
85 90 95
Arg Cys Asn Gly Gln Lys Gln Asp Pro Val Tyr Lys Phe Leu Lys Asn
100 105 110
Ser Val Ser Gly Lys Ser Gly Ile Lys Met Ile Lys Trp Asn Phe Glu
115 120 125
Lys Phe Val Val Asp Arg Asn Gly Lys Val Val Lys Arg Phe Ser Cys
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Met Thr Thr Ser Phe Tyr Asp Leu Glu Cys Lys Asp Lys Lys Gly Glu
1 5 10 15
Ser Phe Lys Phe Asp Gln Leu Lys Gly Lys Val Val Leu Ile Val Asn
20 25 30
Val Ala Ser Lys Cys Gly Phe Thr Pro Gln Tyr Lys Glu Leu Glu Glu
35 40 45
Leu Tyr Lys Lys Tyr Gln Asp Lys Gly Phe Val Ile Leu Gly Phe Pro
50 55 60
Cys Asn Gln Phe Gly Lys Gln Glu Pro Gly Ser Asp Glu Gln Ile Thr
65 70 75 80
Glu Phe Cys Gln Leu Asn Tyr Gly Val Thr Phe Pro Ile Met Lys Lys
85 90 95
Ile Asp Val Asn Gly Ser Asn Ala Asp Ser Val Tyr Asn Tyr Leu Lys
100 105 110
Ser Gln Lys Ala Gly Leu Leu Gly Phe Lys Gly Ile Lys Trp Asn Phe
115 120 125
Glu Lys Phe Leu Val Asp Ser Asn Gly Lys Val Val Gln Arg Phe Ser
130 135 140
Ser Leu Thr Lys Pro Ser Ser Leu Asp Gln Glu Ile Gln Ser Leu Leu
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Ser Lys
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPX 3
<400> 3
Met Ser Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Pro Val Asp Lys Lys Gly Gln Pro
1 5 10 15
Phe Pro Phe Asp Gln Leu Lys Gly Lys Val Val Leu Ile Val Asn Val
20 25 30
Ala Ser Lys Cys Gly Phe Thr Pro Gln Tyr Lys Glu Leu Glu Ala Leu
35 40 45
Tyr Lys Arg Tyr Lys Asp Glu Gly Phe Thr Ile Ile Gly Phe Pro Cys
50 55 60
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65 70 75 80
Phe Cys Gln Leu Asn Tyr Gly Val Thr Phe Pro Ile Met Lys Lys Ile
85 90 95
Asp Val Asn Gly Gly Asn Glu Asp Pro Val Tyr Lys Phe Leu Lys Ser
100 105 110
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Glu Val Glu
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MBTL-GC1
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acggattaga agccgccgag cgggtgacag ccctccgaag gaagactctc ctccgtgcgt 60
cctcgtcttc accggtcgcg ttcctgaaac gcagatgtgc ctcgcgccgc actgctccga 120
acaataaaga ttctacaata ctagctttta tggttatgaa gaggaaaaat tggcagtaac 180
ctggccccac aaaccttcaa atgaacgaat caaattaaca accataggat gataatgcga 240
ttagtttttt agccttattt ctggggtaat taatcagcga agcgatgatt tttgatctat 300
taacagatat ataaatgcaa aaactgcata accactttaa ctaatacttt caacattttc 360
ggtttgtatt acttcttatt caaatgtaat aaaagtatca acaaaaaatt gttaatatac 420
ctctatactt taacgtcaag gagaaaaaac cccggatcgg actactagca gctgtaatac 480
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aaaacggaaa tccattcccc ttcaactccc tgcgtaacaa agtggttttg atagtcaatg 600
tagcatctca ttgtgcgttc acacctcaat acaaggaatt agagtacttg tacgaaaaat 660
acaaatcaca tggtctagtg attgtggcct ttccctgtgg tcaattcgga aatcaagagt 720
tcgagaagga taaagagatt aataagttct gtcaagataa atatggtgta accttcccta 780
ttctacataa gatccgttgc aacgggcaaa agcaagatcc cgtctacaag ttcttaaaga 840
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gtccaataat cgaagaatta ctgaatcaac caccagaaga acagattgga tccgtgagca 1020
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ccctgaccta cggcgtgcag tgcttcagcc gctaccccga ccacatgaag cagcacgact 1260
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acggcaacta caagacccgc gccgaggtga agttcgaggg cgacaccctg gtgaaccgca 1380
tcgagctgaa gggcatcgac ttcaaggagg acggcaacat cctggggcac aagctggagt 1440
acaactacaa cagccacaac gtctatatca tggccgacaa gcagaagaac ggcatcaagg 1500
tgaacttcaa gatccgccac aacatcgagg acggcagcgt gcagctcgcc gaccactacc 1560
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cccagtccgc cctgagcaaa gaccccaacg agaagcgcga tcacatggtc ctgctggagt 1680
tcgtgaccgc cgccgggatc actctcggca tggacgagct gtacaagtaa tctagagggc 1740
cgcatcatgt aattagttat gtcacgctta cattcacgcc ctccccccac atccgctcta 1800
accgaaaagg aaggagttag acaacctgaa gtctaggtcc ctatttattt ttttatagtt 1860
atgttagtat taagaacgtt atttatattt caaatttttc ttttttttct gtacagacgc 1920
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gctttaattt gcggccctgc attaatgaat cggccaacgc gcggggagag gcggtttgcg 2040
tattgggcgc tcttccgctt cctcgctcac tgactcgctg cgctcggtcg ttcggctgcg 2100
gcgagcggta tcagctcact caaaggcggt aatacggtta tccacagaat caggggataa 2160
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gttgctggcg tttttccata ggctccgccc ccctgacgag catcacaaaa atcgacgctc 2280
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cttatccggt aactatcgtc ttgagtccaa cccggtaaga cacgacttat cgccactggc 2580
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cttcggtcct ccgatcgttg tcagaagtaa gttggccgca gtgttatcac tcatggttat 3480
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gcatcccttc cctttgcaaa tagtcctctt ccaacaataa taatgtcaga tcctgtagag 4080
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tacttggcgg ataatgcctt tagcggctta actgtgccct ccatggaaaa atcagtcaag 4560
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ttgataactt tttgcactgt aggtccgtta aggttagaag aaggctactt tggtgtctat 6000
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<213> Artificial Sequence
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cgtggtgtca ctctcgtcgt ttggtatggc ttcattcagc tccggttccc aacgatcaag 3360
gcgagttaca tgatccccca tgttgtgcaa aaaagcggtt agctccttcg gtcctccgat 3420
cgttgtcaga agtaagttgg ccgcagtgtt atcactcatg gttatggcag cactgcataa 3480
ttctcttact gtcatgccat ccgtaagatg cttttctgtg actggtgagt actcaaccaa 3540
gtcattctga gaatagtgta tgcggcgacc gagttgctct tgcccggcgt caatacggga 3600
taatagtgta tcacatagca gaactttaaa agtgctcatc attggaaaac gttcttcggg 3660
gcgaaaactc tcaaggatct taccgctgtt gagatccagt tcgatgtaac ccactcgtgc 3720
acccaactga tcttcagcat cttttacttt caccagcgtt tctgggtgag caaaaacagg 3780
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ttaccaatgt cagcaaattt tctgtcttcg aagagtaaaa aattgtactt ggcggataat 4500
gcctttagcg gcttaactgt gccctccatg gaaaaatcag tcaagatatc cacatgtgtt 4560
tttagtaaac aaattttggg acctaatgct tcaactaact ccagtaattc cttggtggta 4620
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tatcttcgtt tcctgcaggt ttttgttctg tgcagttggg ttaagaatac tgggcaattt 4800
catgtttctt caacactaca tatgcgtata tataccaatc taagtctgtg ctccttcctt 4860
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acgatacact tccgctcagg tccttgtcct ttaacgaggc cttaccactc ttttgttact 5100
ctattgatcc agctcagcaa aggcagtgtg atctaagatt ctatcttcgc gatgtagtaa 5160
aactagctag accgagaaag agactagaaa tgcaaaaggc acttctacaa tggctgccat 5220
cattattatc cgatgtgacg ctgcagcttc tcaatgatat tcgaatacgc tttgaggaga 5280
tacagcctaa tatccgacaa actgttttac agatttacga tcgtacttgt tacccatcat 5340
tgaattttga acatccgaac ctgggagttt tccctgaaac agatagtata tttgaacctg 5400
tataataata tatagtctag cgctttacgg aagacaatgt atgtatttcg gttcctggag 5460
aaactattgc atctattgca taggtaatct tgcacgtcgc atccccggtt cattttctgc 5520
gtttccatct tgcacttcaa tagcatatct ttgttaacga agcatctgtg cttcattttg 5580
tagaacaaaa atgcaacgcg agagcgctaa tttttcaaac aaagaatctg agctgcattt 5640
ttacagaaca gaaatgcaac gcgaaagcgc tattttacca acgaagaatc tgtgcttcat 5700
ttttgtaaaa caaaaatgca acgcgacgag agcgctaatt tttcaaacaa agaatctgag 5760
ctgcattttt acagaacaga aatgcaacgc gagagcgcta ttttaccaac aaagaatcta 5820
tacttctttt ttgttctaca aaaatgcatc ccgagagcgc tatttttcta acaaagcatc 5880
ttagattact ttttttctcc tttgtgcgct ctataatgca gtctcttgat aactttttgc 5940
actgtaggtc cgttaaggtt agaagaaggc tactttggtg tctattttct cttccataaa 6000
aaaagcctga ctccacttcc cgcgtttact gattactagc gaagctgcgg gtgcattttt 6060
tcaagataaa ggcatccccg attatattct ataccgatgt ggattgcgca tactttgtga 6120
acagaaagtg atagcgttga tgattcttca ttggtcagaa aattatgaac ggtttcttct 6180
attttgtctc tatatactac gtataggaaa tgtttacatt ttcgtattgt tttcgattca 6240
ctctatgaat agttcttact acaatttttt tgtctaaaga gtaatactag agataaacat 6300
aaaaaatgta gaggtcgagt ttagatgcaa gttcaaggag cgaaaggtgg atgggtaggt 6360
tatataggga tatagcacag agatatatag caaagagata cttttgagca atgtttgtgg 6420
aagcggtatt cgcaatggga agctccaccc cggttgataa tcagaaaagc cccaaaaaca 6480
ggaagattgt ataagcaaat atttaaattg taaacgttaa tattttgtta aaattcgcgt 6540
taaatttttg ttaaatcagc tcatttttta acgaatagcc cgaaatcggc aaaatccctt 6600
ataaatcaaa agaatagacc gagatagggt tgagtgttgt tccagtttcc aacaagagtc 6660
cactattaaa gaacgtggac tccaacgtca aagggcgaaa aagggtctat cagggcgatg 6720
gcccactacg tgaaccatca ccctaatcaa gttttttggg gtcgaggtgc cgtaaagcag 6780
taaatcggaa gggtaaacgg atgcccccat ttagagcttg acggggaaag ccggcgaacg 6840
tggcgagaaa ggaagggaag aaagcgaaag gagcgggggc tagggcggtg ggaagtgtag 6900
gggtcacgct gggcgtaacc accacacccg ccgcgcttaa tggggcgcta cagggcgcgt 6960
ggggatgatc cactagt 6977
<210> 6
<211> 6980
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MBTL-GC3
<400> 6
acggattaga agccgccgag cgggtgacag ccctccgaag gaagactctc ctccgtgcgt 60
cctcgtcttc accggtcgcg ttcctgaaac gcagatgtgc ctcgcgccgc actgctccga 120
acaataaaga ttctacaata ctagctttta tggttatgaa gaggaaaaat tggcagtaac 180
ctggccccac aaaccttcaa atgaacgaat caaattaaca accataggat gataatgcga 240
ttagtttttt agccttattt ctggggtaat taatcagcga agcgatgatt tttgatctat 300
taacagatat ataaatgcaa aaactgcata accactttaa ctaatacttt caacattttc 360
ggtttgtatt acttcttatt caaatgtaat aaaagtatca acaaaaaatt gttaatatac 420
ctctatactt taacgtcaag gagaaaaaac cccggatcgg actactagca gctgtaatac 480
gactcactat agggaatatt aagcttatgt cagaattcta taagctagca cctgttgaca 540
agaaaggcca accattcccc ttcgaccaat taaagggaaa agtggtgctt atcgttaatg 600
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ctggctctga tgaagaaatt gcccagttct gccaactgaa ctatggcgtg actttcccca 780
ttatgaaaaa aattgacgtt aatggtggca atgaggaccc tgtttacaag tttttgaaga 840
gccaaaaatc cggtatgttg ggcttgagag gtatcaaatg gaattttgaa aaattcttag 900
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ccgaaaccat cgaagaactt ttgaaagagg tggaaggatc cgtgagcaag ggcgaggagc 1020
tgttcaccgg ggtggtgccc atcctggtcg agctggacgg cgacgtaaac ggccacaagt 1080
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tctgcaccac cggcaagctg cccgtgccct ggcccaccct cgtgaccacc ctgacctacg 1200
gcgtgcagtg cttcagccgc taccccgacc acatgaagca gcacgacttc ttcaagtccg 1260
ccatgcccga aggctacgtc caggagcgca ccatcttctt caaggacgac ggcaactaca 1320
agacccgcgc cgaggtgaag ttcgagggcg acaccctggt gaaccgcatc gagctgaagg 1380
gcatcgactt caaggaggac ggcaacatcc tggggcacaa gctggagtac aactacaaca 1440
gccacaacgt ctatatcatg gccgacaagc agaagaacgg catcaaggtg aacttcaaga 1500
tccgccacaa catcgaggac ggcagcgtgc agctcgccga ccactaccag cagaacaccc 1560
ccatcggcga cggccccgtg ctgctgcccg acaaccacta cctgagcacc cagtccgccc 1620
tgagcaaaga ccccaacgag aagcgcgatc acatggtcct gctggagttc gtgaccgccg 1680
ccgggatcac tctcggcatg gacgagctgt acaagtaatc tagagggccg catcatgtaa 1740
ttagttatgt cacgcttaca ttcacgccct ccccccacat ccgctctaac cgaaaaggaa 1800
ggagttagac aacctgaagt ctaggtccct atttattttt ttatagttat gttagtatta 1860
agaacgttat ttatatttca aatttttctt ttttttctgt acagacgcgt gtacgcatgt 1920
aacattatac tgaaaacctt gcttgagaag gttttgggac gctcgaaggc tttaatttgc 1980
ggccctgcat taatgaatcg gccaacgcgc ggggagaggc ggtttgcgta ttgggcgctc 2040
ttccgcttcc tcgctcactg actcgctgcg ctcggtcgtt cggctgcggc gagcggtatc 2100
agctcactca aaggcggtaa tacggttatc cacagaatca ggggataacg caggaaagaa 2160
catgtgagca aaaggccagc aaaagcccag gaaccgtaaa aaggccgcgt tgctggcgtt 2220
tttccatagg ctccgccccc ctgacgagca tcacaaaaat cgacgctcaa gtcagaggtg 2280
gcgaaacccg acaggactat aaagatacca ggcgtttccc cctggaagct ccctcgtgcg 2340
ctctcctgtt ccgaccctgc cgcttaccgg atacctgtcc gcctttctcc cttcgggaag 2400
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catgagatta tcaaaaagga tcttcaccta gatcctttta aattaaaaat gaagttttaa 2940
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gtagataact acgatacggg agcgcttacc atctggcccc agtgctgcaa tgataccgcg 3120
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catcgtggtg tcactctcgt cgtttggtat ggcttcattc agctccggtt cccaacgatc 3360
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gatcgttgtc agaagtaagt tggccgcagt gttatcactc atggttatgg cagcactgca 3480
taattctctt actgtcatgc catccgtaag atgcttttct gtgactggtg agtactcaac 3540
caagtcattc tgagaatagt gtatgcggcg accgagttgc tcttgcccgg cgtcaatacg 3600
ggataatagt gtatcacata gcagaacttt aaaagtgctc atcattggaa aacgttcttc 3660
ggggcgaaaa ctctcaagga tcttaccgct gttgagatcc agttcgatgt aacccactcg 3720
tgcacccaac tgatcttcag catcttttac tttcaccagc gtttctgggt gagcaaaaac 3780
aggaaggcaa aatgccgcaa aaaagggaat aagggcgaca cggaaatgtt gaatactcat 3840
actcttcctt tttcaatggg taataactga tataattaaa ttgaagctct aatttgtgag 3900
tttagtatac atgcatttac ttataataca gttttttagt tttgctggcc gcatcttctc 3960
aaatatgctt cccagcctgc ttttctgtaa cgttcaccct ctaccttagc atcccttccc 4020
tttgcaaata gtcctcttcc aacaataata atgtcagatc ctgtagagac cacatcatcc 4080
acggttctat actgttgacc caatgcgtct cccttgtcat ctaaacccac accgggtgtc 4140
ataatcaacc aatcgtaacc ttcatctctt ccacccatgt ctctttgagc aataaagccg 4200
ataacaaaat ctttgtcgct cttcgcaatg tcaacagtac ccttagtata ttctccagta 4260
gatagggagc ccttgcatga caattctgct aacatcaaaa ggcctctagg ttcctttgtt 4320
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ttcgtaatgt ctgcccattc tgctattctg tatacacccg cagagtactg caatttgact 4440
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tttcatgttt cttcaacact acatatgcgt atatatacca atctaagtct gtgctccttc 4860
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caaaaaaaag aataaaaaaa aaatgatgaa ttgaattgaa aagctagctt atcgatgata 4980
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catcattatt atccgatgtg acgctgcagc ttctcaatga tattcgaata cgctttgagg 5280
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tctattttgt ctctatatac tacgtatagg aaatgtttac attttcgtat tgttttcgat 6240
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taggggtcac gctgggcgta accaccacac ccgccgcgct taatggggcg ctacagggcg 6960
cgtggggatg atccactagt 6980
Claims (5)
- i) 서열번호 1, 서열번호 2 및 서열번호 3으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 서열번호의 아미노산 서열로 이루어진 글루타치온 퍼옥시다아제(Glutathione PeroXidase; GPX)를 코딩하는 염기서열을 벡터에 재조합하는 단계;
ii) 상기 재조합된 벡터를 효모 세포에 형질 전환하는 단계; 및
iii) 상기 효모 형질 전환체에서 리소좀을 추출하는 단계;
를 포함하는 미백용 리소좀을 제조하는 방법. - 제 1항에 있어서 상기, 벡터는 pYES 2인, 미백용 리소좀을 제조하는 방법.
- 제 1항에 있어서, 상기 효모 세포는 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae), 사카로마이세스 바야누스(S. bayanus), 사카로마이세스 파라독서스 (S. paradoxus), 사카로마이세스 미카테(S.mikatae), 및 사카로마이세스 쿠드리아브제비(S. kudriavzevii)로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상인, 미백용 리소좀을 제조하는 방법.
- 제 1항에 있어서, 상기 재조합 된 벡터를 효모에 형질 도입하는 단계 다음에 상기 효모 형질전환체를 배양하는 단계를 추가하는, 미백용 리소좀을 제조하는 방법.
- 제 1항의 리소좀을 포함하는 미백용 조성물.
Priority Applications (1)
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---|---|---|---|
KR1020200054036A KR102226252B1 (ko) | 2020-05-06 | 2020-05-06 | 리소좀을 포함하는 미백용 조성물 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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KR1020200054036A KR102226252B1 (ko) | 2020-05-06 | 2020-05-06 | 리소좀을 포함하는 미백용 조성물 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
KR102226252B1 true KR102226252B1 (ko) | 2021-03-09 |
Family
ID=75179657
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020200054036A KR102226252B1 (ko) | 2020-05-06 | 2020-05-06 | 리소좀을 포함하는 미백용 조성물 |
Country Status (1)
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---|---|
KR (1) | KR102226252B1 (ko) |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20060012436A (ko) * | 2004-08-03 | 2006-02-08 | 인하대학교 산학협력단 | 효모 자가효소분해에 의한 셀레늄 펩타이드의 생산방법 |
KR20120011697A (ko) * | 2010-07-30 | 2012-02-08 | 전북대학교산학협력단 | 리소좀을 유효성분으로 하는 미백 조성물 |
KR20170022223A (ko) * | 2015-08-19 | 2017-03-02 | 전북대학교산학협력단 | 리소좀을 유효성분으로 하는 미백 조성물 |
-
2020
- 2020-05-06 KR KR1020200054036A patent/KR102226252B1/ko active IP Right Grant
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20060012436A (ko) * | 2004-08-03 | 2006-02-08 | 인하대학교 산학협력단 | 효모 자가효소분해에 의한 셀레늄 펩타이드의 생산방법 |
KR20120011697A (ko) * | 2010-07-30 | 2012-02-08 | 전북대학교산학협력단 | 리소좀을 유효성분으로 하는 미백 조성물 |
KR20170022223A (ko) * | 2015-08-19 | 2017-03-02 | 전북대학교산학협력단 | 리소좀을 유효성분으로 하는 미백 조성물 |
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GRNT | Written decision to grant |