KR20120005260A

KR20120005260A - 해당근 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 여성 청결용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR20120005260A
Application number: KR1020100065912A
Authority: KR
Inventors: 최신욱; 김현주; 채은정
Original assignee: 주식회사 래디안
Priority date: 2010-07-08
Filing date: 2010-07-08
Publication date: 2012-01-16

Abstract

본 발명은 특정 미생물에 의한 해당근 발효 추출물의 제조 방법 및 물, 친수성 유기용매 또는 이들의 혼합용매를 첨가하여 추출된 여성 비뇨생식기계 질환 예방 및 개선/완화용 해당근 발효 추출물과 상기 해당근 발효 추출물을 함유하는 여성 청결용 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 의하면 천연 식물인 해당근을 이용한 발효물로 항산화 효능뿐만 아니라, 질염, 가려움증 및 악취 등의 여성 비뇨생식기계 관련 질병을 일으키는 주요 병원균인 프로테우스 미라빌리스, 가드넬라 버지날리스의 생육을 억제함으로써, 기존의 여성 비뇨생식기계 치료방법 및 비누, 바디클렌져에 비하여 부작용이 없고, 지속적 사용이 가능하면서도 안전성이 우수한 여성 청결용 화장료 조성물을 얻을 수 있다.

Description

해당근 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 여성 청결용 화장료 조성물{ cosmetic composition for feminine cleanser containing as active ingredient the fermented extract of rosa rugosa thunb }

본 발명은 특정 미생물에 의한 해당근 발효 추출물의 제조 방법 및 이를 유효성분으로 포함하는 여성 청결용 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 피부에 자극이 없고 안전하여 피부 질환 유발 문제가 없으며, 항산화 효과를 나타낼 뿐만 아니라, 질염, 가려움증 및 악취 등 여성 비뇨생식기계 관련 질환을 일으키는 유발균의 생육을 억제함으로써, 여성 비뇨생식기계 관련 질환 예방 및 개선/완화 효과를 포함하는 여성 청결용 화장료 조성물에 관한 것이다.

여성 비뇨생식기관은 난소, 난관, 자궁, 자궁경부, 질, 외음부로 구성되며, 여성 비뇨생식기계 질환에는 골반염, 자궁내막증, 난소낭종, 다낭성 난소 증후군, 난소암, 자궁근종, 자궁폴립, 후굴자궁, 자궁 및 질 탈출증, 자궁암, 융모상피암, 자궁경부 미란, 자궁경부 이형성증, 자궁경부암, 외음부 질염, 질 진균증, 세균성 질염, 바톨린염, 외음부와 질의 암, 성병 (임질, 클라미디아 골반염, 매독, 트리코모나스증, 음부 포진, 외음부 사마귀, 음부 이) 등이 있으며,(서울대학교병원 의학백과사전) 이 질환은 비교적 흔하고 여성 대부분이 일생 동안 적어도 한 개 이상의 질환을 경험한다고 보고된다.

여성 비뇨생식기계에는 비뇨생식기계 pH를 4.5~6.5의 약산성으로 유지하여 주는 유산간균이 상재하여 유해한 세균의 번식을 막아 주는 역할을 하지만 (Mi Young Park, Microbiologic and Molecular Genetic Analysis of Lactobacillus spp. Isolated from Vagina of Korean Women and A Pilot Clinical Study on the Treatment of Vaginitis using the Best Lactobacillus Strain KLB 46, Vol. 47 No. 6 June 2004), 물리적 손상, 호르몬 불균형 외에도 청결하지 않은 비뇨생식기계 환경, 성관계에 따른 세균성 질환 혹은 성병 등에 의해 여성 비뇨생식기계 관련 질환이 발생되기 쉽다. 즉 질과 외음부는 여성 비뇨생식기계 구조의 기능적 특성상 외부 환경에 직접 노출되어 있으며, 양도, 온도, 습도 등 여러 가지의 세균집단이 배양되는 조건적 환경을 제공하여 세균성 감염 및 세균성 질증을 야기시킨다.

이와 같은 원인으로, 성병은 매일 50만 명 또는 20만 명 당 1명꼴로 새로이 환자가 발생하며, 매년 전 세계적으로 1억 5천 만 명 정도의 새로운 환자가 발생하는 것으로 추정되고 있다(UNAIDS. Force for change: World AIDS Campaign with young people. UNAIDS 1998 theme. AIDS Anal Afr 1998;8:8-9). 이 중 클라미디아 의한 비뇨생식기계 감염은 성병 중 가장 흔히 보고되는 질환들이며 (Westrom L, Joesoef R, Reynolds G, Hagdu A, Thompson SE. Pelvic inflammatory disease and fertility. A cohort study of 1,844 women with laparoscopically verified disease and 657 control women with normal laparoscopic results. Sex Transm Dis 1992;19:185-92), 적절한 치료 및 관리를 하지 않은 클라미디아에 의한 감염은 심각한 후유증을 유발할 수 있는데, 남성에서는 요도염으로부터 전립선염, 부고환염 등을 일으킨다 (Ha JS, Kim SW, Cho YH. Detection of cryptic microorganisms by polymerase chain reaction assay in chronic pelvic pain syndrome. Korean J Urol 2002;43:396-401). 여성의 경우 그 후유증은 더욱 심각하여 자궁경부의 감염으로부터 상행 전파된 골반내 감염 및 자궁부속기 감염은 난관 등의 자궁 부속기 및 골반 협착을 유발하여 불임, 자궁외 임신 및 난관 난소 농양의 원인이 되고 드물게는 생명에 위험을 초래할 수도 있다 (Westrom L. Incidence, prevalence, and trends of acute pelvic inflammatory disease and its consequences in industrialized countries. Am J Obstet Gynecol 1980;138:880-92).

클라미디아에 의한 여성 비뇨생식기계 감염은 가장 흔한 성병 중 하나이나, 감염된 약 80%여성에서는 질 분비물 증가나 형태의 변화 등 전형적인 증상이 없어 많은 환자들이 치료를 받지 않거나 받을 필요성을 느끼지 못하고 성상대자와 지속적인 성관계를 가짐으로써 성병 전파, 질병 악화의 원인이 되고 있다.(National guideline for the management of Chlamydia trachomatis genital tract infection. Clinical Effectiveness Group(Association of Genitourinary Medicine and the Medical Society for the Study of Venereal Disease). Sex Transm Infect 1999;75(Suppl 1): S4-8).

여성 비뇨생식기계관의 일차적인 기능은 생식이므로 이들 장기에 영향을 미치는 질환은 불임을 초래할 수 있으며, 또한 우울증과 같은 심리적 문제로 삶의 질을 저하 시킬 수 도 있다. (chun, nami. predictors of sexual desire, arousal, lubrication, orgasam, satisfaction, and pain in women with gynecologic cancer, 대한간호학회지 제 40권, 2010년 2월)

이런 여성 비뇨생식기계 관련 질환을 예방하기 위하여 예로부터 선조들은 무 잎이나 약쑥을 넣고 끓인 물을 식혀서 좌욕을 하는 방법으로 질염을 치료하였으며, 서양 여성들은 장미, 라벤더, 베르가모 등을 첨가한 물로 ‘뒷물’을 했으나, 이 방법은 매번 사용하기 번거로운 단점이 있었다. 또한 기존에 사용하고 있는 비누나 바디클렌져는 합성계면활성제가 포함되어 있으며, pH가 높은 알칼리성 제품으로 세정 효과는 우수하나, 피부 자극 발생 및 질 내 약산성 pH 환경을 알칼리성 환경으로 바꿔 놓아, 유산간균의 생장을 저해하여 유해 세균이 생육할 수 있는 환경을 제공할 수 있다.

그리고 여성 비뇨생식기계 관련 질환 치료 약제의 주성분으로 화학성분 트리클로산(triclosan), 글루콘산클로르헥시딘액(gluconate- chlorhexidine ), 젖산(lactic acid), 부토코나졸(butoconazole), 클로트리마졸(clotrimazole), 미코나졸(miconazole), 테르코나졸(terconazole), 티오코나졸(tioconazole), 플루코나졸(fluconazole), 케토코나졸(ketoconazole), 이트라코나졸(itraconazole)등의 아졸계(azole) 항진균제제들이 사용되나 이러한 약제는 심한 부작용과, 약물 상호작용이 있는 문제점이 있다. (B.Y. Min, one day vaginal suppository treatment of trichomonas vaginitis with 1gm of ornidazole("Tiberal"), Vol. 20. No, 12, December, 1977)

그러므로 여성 비뇨생식기계 관련 질병 예방에 효과적이고 저자극성이며, 사용이 용이한 여성청결제 혹은 질세정제의 사용이 필요하다. 여성 청결제 혹은 질 세정제는 물에 풀어 여성 비뇨생식기계의 표면에 붙은 이물질을 씻어내는 데 쓰는 물질로 정의되며, 여성 질환 예방, 세척, 악취 제거를 위해 사용 되는 제품을 총칭한다. 청결제는 비누 및 바디클렌져에 비하여 합성계명활성제가 아닌 천연계면활성제 성분이 첨가되어 저자극성이며, pH도 약산성에서 중성으로 건강한 여성 비뇨생식기계의 pH와 유사하여 건강한 환경을 제공한다.

한편, 발효를 통한 천연 추출물의 경우에는 인체에 유해한 유기용매를 사용하지 않고 천연물 내에 존재하는 당 성분을 미생물의 대사과정에서 탄소원으로 사용되어 알코올로 전환시키게 되므로, 천연물 내의 유효성분 특히, 플라보노이드, 폴리페놀, 카테킨 등은 당화되어 안정한 화합물로 존재하게 되어 있어 발효를 통해 유효성분 함량 추출율을 증가시키고 당이 배제되어 활성화된 유효성분에 의해 우수한 피부 효능이 기대되고 있다. 이 중 유기산 발효는 당 또는 알코올 성분을 에너지원으로 사용하여, 다량의 유기산을 생산하는 발효 과정을 말하며, 유기산 발효 천연 추출물은 유기산이 천연물 내의 pH를 낮추어, 여성 비뇨생식기계 pH를 4.5~6.5의 약산성으로 유지하여 주는 유산간균과 유사한 혹은 동일한 작용으로 유해한 세균의 번식을 막아 주고 건강한 환경을 유지하는 역할을 할 것으로 기대되고 있다.

해당근은 해당화의 뿌리 부분으로, 낙엽 활엽 관목으로 해안가나 산기슭에서 자란다. 주요 성분으로는 씨트로넬롤(citronellol), 게라니올(geraniol), 네롤(nerol), 유제놀(eugenol), 페닐에틸 알코올(phenylethyl alcohol), 쿼세틴(quercetin), 고미질, 탄닌(tannin), 지방유, 유기산, 적색소, 황색소, 납질, 베타 카로틴(β-carotene), 비타민C, 포도당, 프록토스(fructose), 자일로스(xylose), 당류, 구연산, 사과산, 키닌(quinin), 카테킨 등이 있다. 해당화의 열매, 꽃잎, 순은 식용가능하며, 뿌리, 꽃, 열매는 약재로 사용한다. 주요 효능으로는 理氣(이기), 解鬱(해울), 和血散瘀(화혈산어), 和血(화혈), 平肝(평간), 養胃(양위), 寬胸(관흉), 解鬱(해울)등이 있으며, 肝胃氣痛(간위기통), 新久風痺(신구풍비-만성, 급성의 遊走性關節風濕痛(유주성관절풍습통)), 吐血(토혈), 喀血(객혈), 월경불순, 赤白帶下(적백대하), 이질, 乳癰(유옹-急性乳腺炎(급성유선염)), 腫毒(종독)을 치료하며, 肝臟(간장)의 氣(기)와 胃(위)의 氣(기)를 다스리는 것으로 보고되었다.

그러나, 해당근 혹은 해당근 유기산 발효물이 여성 비뇨생식기계 질환 유발균에 대해 강한 활성을 나타낸다는 연구나 여성 비뇨생식기계 질환 예방 및 치료에 사용되는 사례가 보고 된 바 없고, 해당근 혹은 해당근 유기산 발효물로부터 여성 비뇨생식기계 질환 예방 및 개선/완화에 유효한 성분을 추출하여 이를 여성 청결용 화장료 조성물로 사용하는 기술은 게시된 바 없었다.

본 발명은 상기와 같은 종래기술의 문제점을 해결하여 저자극성이고 피부질환 유발에 문제가 없으며, 항산화 효과를 나타낼 뿐만 아니라, 질염, 가려움증 및 악취 등 여성 비뇨생식기계 질환을 일으키는 유발균에 관하여 항균 효능이 우수하여 여성 비뇨생식기계 질환 예방 및 개선/완화 효과를 나타내는 여성 청결용 화장료 조성물로 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에서는 해당근에 효모 또는 유산균, 곰팡이 등의 발효 미생물을 첨가 배양하여 수득한 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 여성 비뇨생식기계 질환 개선 유효성분물질의 추출 방법과 이로부터 얻어지는 유효성분물질을 포함하는 저자극성이고 피부질환 유발에 문제가 없으며, 항산화 효과를 나타낼 뿐만 아니라, 질염, 가려움증 및 악취 등 여성 비뇨생식기계 질환을 일으키는 유발균에 관하여 항균 효능이 우수하여 여성 비뇨생식기계 질환 예방 및 개선/완화 효과를 나타내는 여성 청결용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에서는 해당근을 효모 또는 유산균, 곰팡이 등의 미생물을 첨가, 배양하여 발효시켜 수득한 해당근 발효액 추출물을 화장료 조성물에 적용한 결과, 해당근 발효물 내에 존재하는 유기산 함량 추출율이 현저히 높아져 발효하기 전 보다 낮은 pH가 측정 되며, 이에 따른 우수한 항균 효능이 기대되는 한편, 피부 자극을 유발하지 않는 안전성을 확보하여 이를 토대로 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명에 사용되는 해당근 발효 추출물의 제조와 관련하여 해당근 에 효모 또는 유산균, 곰팡이를 첨가, 배양하여 발효시킴으로써 수득할 수 있다.

발효물 제조 시, 아세토박토(Acetobacto spp.), 리조푸스(Rhizopus spp.), 아스로박터(Arthrobacter spp .), 사카로마이세스(Saccharomyces spp .), 스키조사카로마이세스(Schizosacchromyces spp .), 시트로마이세스(Citromyces spp .), 칸디다(Candida spp .), 슈도모나스(Pseudomonas spp), 페디오코쿠스(Pediococcus spp .), 페니실리움(Penicillium spp .), 브레비박테리움( Brevibacterium spp .), 락토바실러스(Lactobacillus spp .), 스트렙토코쿠스 (Streptococcus spp.), 류코노스톡(Leuconostoc spp .), 비피도박테리아 (Bifidobacteria spp .), 한세누라(Hansenula spp .), 글루코노박터(Gluconobacter spp.) 아스퍼질러스(Aspergillus spp .), 세라티아(Serratia spp .), 노카르디아(Nocardia spp.)등의 미생물을 사용할 수 있다.(임억규, 유기산 발효 산업의 현황과 미래, 한국미생물생명공학회 ( 구 한국산업미생물학회 ): 생물산업, 1992년)

본 발명의 해당근 발효 추출물은 해당근 발효물로부터 침출, 전출한 것, 또는 침출액을 다시 일부 또는 전부 농축한 것, 또는 그 농축물을 다시 건조하여 제조한 침제, 전제, 정기, 유동 엑기스 등과, 해당근 그 자체에 함유되어 있고 주 효과를 발휘하는 화학 물질 그 자체도 포함하는 개념이다.

바람직한 본 발명의 해당근 발효 추출물은 해당근 발효물에 소정의 추출용매를 가하여 해당근 발효물로부터 여성 비뇨생식기계 질환 예방 및 개선/완화 효과를 나타내는 성분 또는 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli), 프로테우스 미라빌리스(Proteus mirabilis), 칸디다 알비칸스(Candida albicans), 슈도모나스 에루기노사(Pseudomonas aeruginosa), 클레브시엘라(Klebsiella spp .), 프로비덴시아(Providencia spp.), 스타필로코커스(Staphylococcus spp.), 스트렙토코커스(Streptococcus spp.), 박테로이드(Bacteroide spp .), 모빌런커스(Mobiluncus spp.), 트리코모나스(Trichomonas spp.), 푸조박테리움(Fusobacterium spp.), 엔테로코커스(Enterococcus spp.), 가드네렐라(Gardnerella spp.)등의 여성 비뇨생식기계 병원체중 1종 이상의 생장을 억제하는 성분을 추출(抽出, extraction)하여 얻어진 해당근 발효 1차 추출물이 될 수 있다.

본 발명의 상기 해당근은 완전히 건조한 후 분쇄하여 준비한 것이고,해당근 분말이 함유된 배지에 일정한 농도 (약 10³~ 10⁵ CFU/ml)로 발효 미생물을 접종하여, 온도 25~ 38℃, 배양 일은 1~ 7일의 조건을 유지하면서 배양한 후, 이 발효물을 이용하여 최종 해당근 발효 추출물을 수득할 수 있다.

본 발명의 해당근 발효 추출물은 상기 해당근 발효물에 메탄올, 에탄올 등의 친수성 유기용매, 또는 친수성 유기용매와 물의 혼합 용액을 추출용매로 첨가하여 일정 시간 침적시키면서 적절한 시간 간격으로 교반한 후 얻어진 용액을 여과하여 회수하는 통상의 천연물 추출방법에 따라 얻을 수 있다.

바람직한 추출용매로는 탄소수 1 내지 4인 무수 또는 함수 메탄올, 에탄올, 프로필알코올, 부틸알코올, 글리세린, 프로필렌글리콜 및 부틸렌글리콜, 물을 포함한 용매군 중에서 선택된 하나의 순수용매 또는 둘 이상이 조합된 혼합용매가 이용될 수 있고, 식물 재료에 가해지는 추출용매의 양은 식물 재료 전체 부피 대비 1 내지 50배 정도로 할 수 있다.

보다 바람직하게는, 본 발명의 해당근 발효 추출물의 추출용매로는 무수 메탄올, 함수 메탄올, 무수 에탄올 및 함수 에탄올 중에서 선택된 하나의 순수용매 또는 상기 메탄올의 1종과 상기 에탄올의 1종의 혼합용매를 사용함이 바람직하다.

이때, 상기 추출용매의 첨가량은 해당근 건조 중량 1g당 5~20g으로 함이 바람직하다. 추출은 실온에서 1~7일간 침적 추출하거나 50~95℃의 가온 조건에서 1~5시간 정도 추출하는 방법 등 종래의 일반적인 용매추출방법으로 할 수 있다.

본 발명의 여성 청결용 화장료 조성물은 상기 해당근 발효 추출물로부터 유래하는 질염, 가려움증 및 악취 등의 여성 비뇨생식기계 질환 예방 및 개선/완화 효과 유효 성분물질을 포함하는 것을 특징으로 하고, 상기 해당근 발효 추출물의 함량은 0.5~10중량%인 것이 바람직하다. 이는 10중량% 이상의 고농도에서는 피부자극 및 독성 등의 부작용을 유발하거나, 제형상의 문제를 야기시킬 수 있으며, 0.5중량% 이하의 저농도에서는 효과가 약하기 때문이다.

본 발명의 여성 청결용 화장료 조성물은 상기의 해당근 발효 추출물 이외에도 필요에 따라, 본 발명의 효과를 저하하지 않는 범위 내에서 화장료에 일반적으로 사용하는 각종 성분, 예를 들면, 수용성 성분, 분말 성분, 유분, 계면활성제, 보습제, 점도 조절제, 방부제, 산화방지제, 향료, 색소, 합성항균소재 등을 배합하는 것이 가능하다.

본 발명의 상기 해당근 발효 추출물을 함유하는 여성 청결용 화장료 조성물은 화장품 업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 더욱 상세하게는 유연 화장수, 수렴 화장수, 영양 화장수, 로션, 영양 크림, 마사지 크림, 유액상 화운데이션, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이, 청결제, 비누 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

또한, 본 발명의 해당근 발효 추출물은 트리클로산(triclosan), 글루콘산클로르헥시딘액(gluconate chlorhexidine), 젖산(lactic acid), 부토코나졸(butoconazole), 클로트리마졸(clotrimazole), 미코나졸(miconazole), 테르코나졸(terconazole), 티오코나졸(tioconazole), 플루코나졸(fluconazole), 케토코나졸(ketoconazole), 이트라코나졸(itraconazole)등의 아졸계(azole) 및 이를 포함하는 항진균제제들로 이루어진 군으로부터 1종 이상 선택 된 화합물을 포함하는 혼합 조성물로 제공할 수 있다.

본 발명의 해당근 발효 추출물은 여성 청결용 화장료 조성물 이외에도 여성 비뇨생식기계 질환 외용제로도 이용될 수 있다. 이하, 보다 구체적인 실시 예를 들어 본 발명에 대해 상세히 설명하지만, 본 발명이 이하 실시예로만 한정되는 것은 아니다.

본 발명은 상기와 같은 종래기술의 문제점을 해결하여 저자극성이고 피부질환 유발에 문제가 없으며, 항산화 효과를 나타낼 뿐만 아니라, 질염, 가려움증 및 악취 등의 여성 비뇨생식기계 질환을 일으키는 유발균에 관하여 항균 효능이 우수하여 여성 비뇨생식기계 질환 예방 및 개선/완화 효과를 나타내는 여성 청결용 화장료 조성물로 제형상의 안정성이 확보된 화장품의 모든 형태로 첨가하여 사용할 수 있다.

이하, 실시 예를 통해 본 발명을 더욱 구체적으로 설명하고자 한다. 단 , 본 발명의 권리범위가 하기 실시 예에만 한정되는 것은 아니며, 이와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다.

본 발명에 사용된 균주는 여성 비뇨생식기계 질환 유발균인 Proteus . mirabilis KCTC 2510, Gardnerella. vaginalis KCTC 5096이고, 이들 균주는 한국유전자은행에서 분양받아 사용하였다. Proteus. mirabilis KCTC 2510, ardnerella . vaginalis KCTC 5096 미생물 2종의 배양 배지는 각각 Nutrient 배지, Casman's 배지(Merck, BD)를 사용하였고, 시험 미생물 2종은 4℃에서 보관하면서 실험 3일 전에 활성화했다. 균을 배양 배지에 접종한 후 호기성 또는 5% CO² 조건으로 하여, 37℃의 인큐베이터에서 1~2일 동안 배양하였다.

항균 활성 측정은 디스크 확산법(paper disk diffusion assay)과 액체배지희석법(broth dilution assay)를 사용하여 평가하였다.

실시예 1. 해당근 초산 발효 추출물 제조

해당근은 시중에 판매되는 건조 상태의 원물을 구입하여 분쇄기를 이용하여 분말로 만들어 준비한 후, 해당근 분말 50g에 증류수 100g를 첨가 하여 상온에서 2~3시간 정치하여 충분히 함습될 수 있도록 한다.

상기 해당근 분말이 함유된 배지에 Acetobactor acti KCTC 1010 (분양처: 한국생명공학연구원 생물자원센터)을 10⁵CFU/ml로 20g 접종하고 온도 20~ 25℃의 조건을 유지하면서 7일 동안 배양하면서 1일 간격으로 발효물을 섞어주었다. 발효에 사용한 미생물인 Acetobactor acti KCTC 1010는 접종 4일전에 35℃에서 액체 배양하여 준비하였으며, 이를 희석하여 발효의 접종균으로 사용하였다.

상기 발효물에 증류수를 발효물의 중량 대비 5~ 30배로 첨가, 바람직하게는 10~ 20배로 첨가하여 4℃에서 24시간 저온 추출하여 발효물 내의 유효성분을 추출하였다. 그 다음 여과지를 이용하여 추출용액을 여과하여 회수한 후, 1㎛ pore size의 paper filter를 이용하여 고분자 침전물 및 균체를 제거하여 회수된 용액을 냉각콘덴서가 달린 증류장치를 이용하여 47℃에서 감압농축을 수행하였으며, 용매를 완전히 제거함으로써 해당근 초산 발효 추출물을 수득하였다.

실시예 2. 해당근 젖산 발효 추출물 제조

해당근은 시중에 판매되는 건조 상대의 원물을 구입하여 분쇄기를 이용하여 분말로 만들어 준비한 후, 해당근 분말 50g에 증류수 100g를 첨가 하여 상온에서 2~3시간 정치하여 충분히 함습될 수 있도록 한다.

상기 해당근 분말이 함유된 배지에 Lactobacillus . delbruckii KCTC 3635(분양처: 한국생명공학연구원 생물자원센터)을 10⁵CFU/ml로 20g 접종하고 온도 25~ 30℃의 조건을 유지하면서 7일 동안 배양하면서 1일 간격으로 발효물을 섞어주었다. 발효에 사용한 미생물인 Lactobacillus . delbruckii KCTC 3635는 접종 2일전에 35℃에서 액체 배양하여 준비하였으며, 이를 희석하여 발효의 접종균으로 사용하였다.

상기 발효물에 증류수를 발효물의 중량 대비 5~ 30배로 첨가, 바람직하게는 10~ 20배로 첨가하여 4℃에서 24시간 저온 추출하여 발효물 내의 유효성분을 추출하였다. 그 다음 여과지를 이용하여 추출용액을 여과하여 회수한 후, 1㎛ pore size의 paper filter를 이용하여 고분자 침전물 및 균체를 제거하여 회수된 용액을 냉각콘덴서가 달린 증류장치를 이용하여 47℃에서 감압농축을 수행하였으며, 용매를 완전히 제거함으로써 해당근 젖산 발효 추출물을 수득하였다.

시험예 1.디스크 확산법( paper disk diffusion assay )

균주를 각 배양 액체배지에서 1~2일간 배양한 다음, 균 현탁액을 일정한 농도로 조절한 것을 멸균된 면봉을 이용하여 각 배양 한천플레이트(agar plate)에 균일하게 도말하였다. 플레이트를 건조시킨 후, paper disk(Φ 8mm, Adventec. USA)를 균주를 접종한 플레이트 표면 위에 올려놓고 해당근 발효 추출물을 DMSO에 농도별로 희석하여 paper disk에 50㎕/disk씩 흡수시켰다. 시료가 처리된 플레이트를 1~2일간 배양한 후 디스크 주위의 생육 억제환(inhibition zone)의 크기로 항균 활성을 측정하였다.

시료명	처리농도	억제환(mm)
시료명	처리농도	P. mirabilis	G. vaginalis
실시예 1	10mg/ml	ㅡ	13 ± 2
실시예 1	100mg/ml	14 ± 2	33 ± 2
실시예 2	10mg/ml	10.5± 2	20 ± 2
실시예 2	100mg/ml	19 ± 2	36 ± 2

상기 표 1의 결과로부터 실시예 1,2는 P. mirabilis의 실시예 1 10mg/ml 농도에서만 생장억제환이 측정되지 않았고, P. mirabilis , G. vaginalis 미생물 2종에 관하여 10mg/ml 혹은 100mg/ml의 농도에서 모두 생장억제환이 측정되었다. 실시예 1과 비교하여 실시예 2에서 P. mirabilis , G. vaginalis 미생물 2종의 생장을 억제하는 항균 효능이 우수하게 확인되었다. 이에 해당근 초산/젖산 발효 추출물은 여성 비뇨생식기계 관련 질환 유발균인 P. mirabilis , G. vaginalis 미생물 2종의 생장을 억제하는 항균 효능 성분을 함유한 것으로 확인 된다.

시험예 2.액체배지희석법(broth dilution assay)

액체배지희석법은 96-well plate를 이용한 broth-dilution법을 일부 변형하여 수행하였다(K. Yasunaka et al.,Antibacterial activity of crude extracts from mexican medicinal plants and purified coumarins and xanthones, J. Ethnopharmacol., 97, 293 (2005)). 약 1~2일 액체 배양한 시험 균을 액체배지를 이용하여 1x10⁵CFU/ml로 희석하여 배지 100㎕가 들어 있는 각 well에 100㎕씩 접종해 주었다. 실시예 1,2를 DMSO 혹은 증류수에 용해시켜 각 액체 배지를 이용하여 균주와 배지가 들어있는 96-well plate에 100㎕씩 넣어 주고 잘 섞어 주었다. 균 희석액 및 시료를 접종한 96-well plate를 1~2일간 배양한 후 균의 생육이 나타나지 않는 최소 농도를 MIC(minimum inhibitory concentration)로 결정하였다.

시료명	최소억제농도(MIC)
시료명	P. mirabilis	G. vaginalis
실시예 1	3.648 ±0.166 mg/ml	5mg/ml 이상
실시예 2	1.423 ±0.028 mg/ml	5mg/ml 이상

이상의 결과에서 보는 바와 같이 broth dilution assay 결과는 P. mirabilis 미생물에 관하여 실시예 1,2는 모두 최소억제농도가 측정되었으며, 실시예 1보다는 실시예 2에서 MIC 90 측정치가 우수하게 측정되어 Paper disk diffusion assay 결과와 일치 하는 일관성 있는 항균 효능이 확인 되었다. G. vaginalis 의 경우 MIC 90은 측정되지 않았으나 최고 농도인 5mg/ml 농도에서 실시예 1,2 모두 G. vaginalis 생장을 약 30% 저해하는 것으로 확인되었다. 이에 해당근 초산/젖산 발효 추출물은 여성 비뇨생식기계 관련 질환 유발균인 P. mirabilis , G. vaginalis 미생물 2종의 생장을 억제하는 항균 효능 성분을 함유한 것으로 확인 되었다.

본 발명의 해당근 발효 추출물로부터 유래하는 여성 비뇨생식기계 질환 예방 및 개선/완화 유효 성분물질을 포함하는 것을 특징으로 하는 여성 청결용 화장료 조성물은 해당근 발효 추출물의 함량을 0.01~20중량%으로 할 수 있다. 더욱 바람직하게는, 0.5~10중량%로 해당근 발효 추출물을 함유해야 한다.

시험예 3. 자유라디칼 소거능

실시예 1,2에서 제조한 해당근 발효 추출물에 대한 자유라디칼 소거능을 1,1-디페닐-2-피크릴-히드라질 (DPPH) 방법을 변형하여 측정하였다. (Blois, M. S. nature 181, 1190, 1958). 보통의 라디칼은 반응성이 강하여 불안정한 반면, DPPH 라디칼은 비교적 안정한 자유라디칼로, 라디칼 상태로 존재시 517nm에서 흡광을 통해 측정이 가능하다. DPPH는 0.1mM의 농도로 메틸 알코올에 녹여 사용하였다.

실시예 1에서 제조한 해당근 초산 발효 추출물, 실시에 2에서 제조한 해당근 젖산 발효 추출물 및 Quercetin을 24 웰 플레이트의 각 웰에 500㎕씩 넣은 후, DPPH 용액을 1000㎕씩 첨가하여 상온에서 15분간 방치한 후 ELISA reader (VICTOR3, Perkin Elmer)를 이용하여 570nm에서 흡광을 측정하였다. 이때 대조군으로는 추출물 대신 증류수 또는 DMSO를 사용하였다.

상기 실험군과 대조군에 대한 흡광을 측정 후, 자유라디칼 소거효능을 환산하여 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.

자유라디칼 소거능 (%) = (1-실험군 흡광도/대조군 흡광도)X100

농도(㎍/ml)	자유라디칼 소거능 (%)
농도(㎍/ml)	Quercetin	실시예 1	실시예 2
20	72.590 ±2.100	52.144 ±3.587	23.023 ±4.677
50	85.760 ±3.002	91.561 ±1.092	55.594 ±4.678
100	97.530 ±4.023	95.875 ±0.477	88.821 ±3.066
200	99.700 ±3.120	94.495 ±0.079	99.500 ±2.529

위 표 3에서 보는 바와 같이, 실시 예 1은 양성 대조군인 Quercetin과 비교하여 유사한 혹은 보다 우수한 자유라디칼 소거능이 확인된다. 실시예 2는 실시 예 1보다 고 농도인 100㎍/ml 농도에서 50㎍/ml의 Quercetin과 비교하여 유사한 혹은 보다 우수한 자유라디칼 소거능이 확인된다. 실시 예 2에 비하여 실시 예 1에서 우수한 자유라디칼 소거능이 관찰된다. 이에 해당근 초산/젖산 발효 추출물은 자유라디칼 소거능이 우수한 성분을 함유한 것으로 확인되었다.

시험예 4.피부 자극 유발 여부 평가

실시예 1,2에서 제조한 해당근 발효 추출물의 피부 자극 유발 여부를 평가하기 위하여 인체 첩포 시험 (Human patch test)을 통하여 인체에 대한 1차 자극 시험 및 누적 자극 시험을 수행하였다.

건강한 성인 남녀 20명을 대상으로 CTFA 가이드라인 (The Cosmetic, Toiletry and Fragrance Association. Inc. Washington, D.C., 20036, 1991)에 따라 실시하였다. 핀 쳄버 (Finn chamber)에 시료 20㎕를 적하시킨 후, 이를 시험 부위인 인체의 팔 한쪽에 첩포하고 테이프로 고정시켰다.

1차 피부 자극시험은 24시간 동안 첩포한 후, 첩포를 제거하고 다시 4시간, 24시간 경과 한 후의 시험부위의 피부 반응을 하기 표 4의 기준에 따라 판정하였으며, 그 결과를 표5에 나타내었다.

피부 누적 자극 시험(Repeated Insult Patch Test, RIPT)은 3주간 정기적인 피부에 시료 노출을 수행한 다음 2주 후 새로운 부위에 2차 폐쇄 첩포 (challenge test)를 행하여 피부에 나타난 자극 및 알러지 유발 유무를 관찰하는 시험으로 피부 질환 병력이 없는 성인 10명을 대상으로 하여 Finn Chamber에 실시예 1을 10mg/ml의 농도로 20㎕를 적하시킨 후, 이것을 시험 부위인 양쪽 팔 안쪽에 Scanpor tape로 고정시켰다. 24시간 적용 후 patch를 제거시키고, 24시간 동안의 간격을 두고 같은 일정으로 동일한 부위에 동일한 방법으로 총 9번의 반복적인 적용을 수행하였다. 피부자극 정도는 1차 피부자극 평가기준에 의거하여 육안으로 평가하여 scoring scale list를 작성하였다.

시료	피시험자수	판정결과				자극도
시료	피시험자수	++	+	±	-	자극도
실시예1	20	-	-	-	20	0
실시예2	20	-	-	-	20	0
대조군	20	-	-	-	20	0
(판정기준) - : 홍반이나 특이한 현상 없음 ±: 주위보다 약간 붉어짐 +: 주위보다 현저히 붉어짐 ++: 주위보다 심하게 붉어지고 부풀어 오름 (자극도 계산식) 자극도 = [{(±) 수 × 1}+{(+)수 × 2}+{(++)수 × 3}]/피시험자 수

시료	피시험자수	유도단계									도전단계			자극도
시료	20	1	2	3	4	5	6	7	8	9	24hr	48hr	72hr	자극도
실시예1	20	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	0
실시예2	20	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	0
대조군	20	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	0
(계산식) 자극도 = [{(±)수 × 1}+{(+)수 × 2}+ {(++)수 × 3}]/피시험자 수

상기 표 4과 표 5의 결과에서 알 수 있듯이, 인체에 대한 피부 자극 시험을 평가한 결과, 단회 및 누적 첩포 시, 본 발명의 실시 예 1,2에서 제조한 해당근 발효 추출물은 자극을 유발하지 않으며 피부에 적용하기에 안전한 소재임을 확인할 수 있었다.

본 발명에 의하면 해당근 혹은 해당근 발효 추출물을 이용하여 여성 비뇨생식기계 질환 예방 및 개선/완화 효과를 볼 수 있으며, 여성 비뇨생식기계 질환 예방 및 개선/완화 효과를 나타내는 유효 성분물질의 활성을 최대화할 수 있는 추출분리가 가능하고, 본 발명에 의한 해당근 발효 추출물을 포함하는 여성 청결용 화장료 조성물은 항산화 효능뿐만 아니라, 질염, 가려움증 및 악취 등의 여성 비뇨생식기계 질환을 일으키는 여성 비뇨생식기계 질환 유발균인 프로테우스 미라빌리스, 가드넬라 버지날리스의 생장, 증식을 효과적으로 억제하여 여성 비뇨생식기계 질환 예방 및 개선/완화 할 수 있다. 그리고, 해당근은 오랜 시간에 약용되어왔던 안전한 식물이므로, 본 발명에 의하면 기존의 여성 비뇨생식기계 치료방법에 비하여 부작용이 없고, 지속적 사용이 가능하면서도 안전성이 우수한 여성 청결용 화장료 조성물을 얻을 수 있다.

Claims

해당근에 발효 미생물을 접종하여 발효된 발효물에 물, 친수성 유기용매 또는 이들의 혼합 용매를 첨가하여 추출된 여성 비뇨생식계 관련 질환 예방 및 개선/완화 효능을 갖는 해당근 발효 추출물
제 1 항에 있어서, 상기 해당근 발효 추출물은, 해당근을 효모, 유산균 및 곰팡이로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상에 의한 발효 과정을 포함하여 제조된 것을 특징으로 해당근 발효 추출물 또는 상기 추출물 내의 유효 성분을 함유하는 하는 화장료 조성물
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 해당근 발효 추출물은 프로테우스 미라빌리스, 가드넬라 버지날리스의 생장을 억제하는 것을 특징으로 하는 해당근 발효 추출물