KR20110138354A - 환자를 모니터링하기 위한 바이오마커 - Google Patents

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KR20110138354A
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브루스 에이커
베랑게레 마리-바스티엥
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트랜스진 에스.에이.
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Abstract

본 발명은 면역요법 분야의 것으로, 특정 면역요법 치료의 효능을 결정하기 위한 방법에 관한 것이다. 본 발명의 방법은 상기 치료의 임상 결과를 평가하기 위해, 면역요법 치료를 개시한 후 몇몇 시점에서 특정 바이오마커를 측정하는 것을 포함한다. 따라서 본 발명은 의약 분야에 적용된다.

Description

환자를 모니터링하기 위한 바이오마커 {BIOMARKER FOR MONITORING PATIENTS}
본 발명은 면역요법 분야의 것으로, 특정 면역요법 치료의 효능을 결정하기 위한 방법에 관한 것이다. 본 발명의 방법은 상기 치료의 임상 결과를 평가하기 위해, 면역요법 치료를 개시한 후 몇몇 시점에서 특정 바이오마커를 측정하는 것을 포함한다. 따라서, 본 발명은 의약 분야에 적용된다.
예를 들어 면역 반응을 유도하고 그에 의해 감염에 대해 동물을 보호할 수 있는 항원 (예를 들어, 펩티드, 단백질)을 동물계 내에 도입하는 것을 수반하는 전통적인 백신접종 기술이 다년간 공지되어 왔다. 이들 기술은 생백신 및 불활성화 백신 둘 모두의 개발을 추가로 포함하였다. 생백신은 전형적으로 감염원의 병원성 버전에 대해 유도된 면역 반응을 프라이밍할 수 있는, 감염원의 약독화 비-병원성 버전이다.
최근 몇 년 동안 재조합 백신, 특히 재조합 생백신의 개발에 있어서 진전이 있었으며, 여기서 관심있는 외래 항원이 벡터에 의해 코딩되어 그로부터 발현된다. 이들 중, 재조합 바이러스를 기반으로 한 벡터는 큰 가망성을 나타내었으며, 새로운 백신의 개발에 있어서 중요한 역할을 한다. 다수의 바이러스는 외래 병원체 또는 종양 조직 유래의 단백질을 발현하는 그의 능력 및 생체내에서 이들 항원에 대해 특이적 면역 반응을 유도하는 그의 능력에 대해 조사되었다. 일반적으로, 이들 유전자-기반 백신은 강력한 체액성 면역 반응 및 세포성 면역 반응을 자극할 수 있으며, 바이러스 벡터는 항원-코딩 유전자의 전달과 항원 제시의 촉진 및 향상 둘 모두에 있어서 효과적인 전략일 수도 있다. 백신 운반체로서 사용하기 위해서는, 이상적인 바이러스 벡터는 필요한 병원체-특이적 항원의 면역계에의 효율적인 제시를 가능하게 하여야 하고 안전해야 한다. 더욱이, 벡터 시스템은 대규모 생산을 기반으로 한 그의 생성을 가능하게 하는 기준을 충족시켜야 한다. 따라서 몇몇 바이러스 벡신 벡터가 현재까지 나왔으며, 이들 모두는 제안된 응용에 따라 상대적인 이점 및 한계를 갖는다 (재조합 바이러스 백신에 대한 개관을 위해서는 예를 들어 문헌 [Harrop and Carroll, 2006, Front Biosci., 11, 804-817]; [Yokoyama et al., 1997, J Vet Med Sci.,59, 311-322] 참조). 상기 재조합 백신의 사용은 흔히 표적화된 면역요법 또는 항원 특이적 및 활성 면역요법이라 불린다.
플라스미드 DNA 벡터는 생체내에서 동물 세포를 직접적으로 형질감염시킬 수 있다는 1990년대 초반의 관찰에 따라, 항원을 코딩하는 DNA의 동물 내로의 직접적인 도입에 의해 면역 반응이 유도되도록 DNA 플라스미드를 사용하는 것을 기반으로 한 면역요법 기술을 개발하기 위하여 상당한 연구 노력이 또한 이루어져 왔다. DNA 백신접종 또는 DNA 면역요법으로 널리 지칭되는 이러한 기술은 다수의 질환 모델에서 보호 면역 반응을 이끌어내기 위하여 현재 사용되고 있다. DNA 백신에 대한 개관을 위해서는 문헌 [Reyes-Sandoval and Ertl, 2001 (Current Molecular Medicine, 1, 217-243)]을 참조한다.
그러나, 면역요법 분야에서의 일반적인 문제점은 치료를 받은 개체에서 감염 및 질환에 대해 보호하기에 충분히 강력한 면역 반응을 유도하는 수단을 확인하는 것이었다.
따라서, 예를 들어 최근 몇년 동안 면역요법에 의해 유도된 면역 반응을 증가시키는 역할을 하는, 면역계의 특정한 핵심 측면을 자극함으로써 작용하는 새로운 약물 화합물을 발견하려는 주요 노력이 있어 왔다. 이들 화합물 중 대부분은 면역 반응 조절제 (IRM) 또는 아주반트로 지칭되는 것으로서, 톨 (Toll)-유사 수용체 (TLR)를 통하여 기본 면역계 메카니즘을 통하여 작용하여 다양한 중요한 시토카인 생합성을 유도하는 것으로 보인다 (예를 들어, 인터페론, 인터류킨, 종양 괴사 인자 등, 예를 들어 문헌 [Schiller et al., 2006, Exp Dermatol., 15, 331-341] 참조). 이러한 화합물은 특정 수지상 세포, 단핵구/대식세포-유래 시토카인의 신속한 방출을 자극하며, 또한 IRM 화합물의 항바이러스 및 항종양 활성에서 중요한 역할을 하는 항체를 분비하도록 B 세포를 자극할 수 있는 것으로 밝혀졌다.
별법적으로, 면역요법 전략이 제안되었으며, 이들 대부분은 프라임-부스트 (prime-boost) 백신접종 계획을 기반으로 한다. 이들 "프라임-부스트" 면역요법 프로토콜에 따르면, 면역계는 처음에 환자에게 프라이밍 조성물을 투여함으로써 유도되며 그 후 부스팅용 제2 조성물의 투여에 의해 부스팅된다 (예를 들어, EP1411974 또는 US20030191076 참조).
더욱이, 보건 관리 문헌은 한 치료법이 특정 그룹의 환자에 대해서만 효과적일 수 있음을 보여주었다. 따라서, 최적으로 개인화된 환자 요법으로 조정가능한, 즉 올바른 시간에 올바른 환자에게 올바른 요법을 처방가능한, 보다 높은 치료 성공율을 제공할 수 있는, 치료에 대한 반응을 모니터링할 수 있는, 약물 효능 및 안전성을 증가시킬 수 있는, 요법이 부적절한 환자에서 불필요한 치료를 제거할 수 있는, 환자가 불필요한 독성 및 부작용을 피할 수 있는, 환자 및 보험업자로 하여금 불필요하거나 위험한 비효과적인 의약에 대한 비용을 절감하게 하는, 그리고 환자의 삶의 질을 개선시켜 결과적으로는 적절한 후속 검정에 의해 암이 관리가능한 질환이도록 하는 의료 장비 및 방법을 제공하는 것이 바람직하다.
이와 관련하여, 문헌은 예를 들어 다음과 같은 다양한 장비 및 방법을 제안한다:
- 유전적 차이의 함수로서 약물에 대한 개체 반응 연구로 이루어진 약리유전학. 이러한 반응은 임의의 주어진 개체에서 약물이 어떻게 기능하는지, 그것이 어떻게 대사되는지, 약물의 독성 및 투여 요구량과 관계가 있다. 인간 게놈 프로젝트에 의해, 약리유전학은 약리유전체학으로 확장되었다. 약리유전체학은 약리유전학을 넘어 약물 발견 및 개발, 표적 발견 및 확인, 및 임상 시험으로부터 용도를 발견할 수 있는 잠재력을 가진다.
- 대사체학이 또한 예측 의학 분야에 적용될 수 있다. 유전 인자로 한정되는 약리유전학과는 달리, 약리-대사체학은 유전 인자 뿐만 아니라 비-유전 인자, 예컨대 환자의 체내 다른 약물, 환자의 현재 건강 상태 등에 기초하여 개체의 약물에 대한 반응을 예상할 수 있다.
- 바이오마커의 역할은 치료제의 임상 개발에 있어서 그 중요성이 점점 커지고 있다. 바이오마커는 치료적 개입에 대한 정상적인 생물학적 과정, 질환 과정, 또는 약리학적 반응의 지표일 수 있다. 이들의 역할 범위는 응답자 대 비응답자를 확인하는데 도움이 되는 환자 집단을 계층화하는 것에서부터 치료제의 효능을 결정하는데 이른다. 바이오마커는 약물 개발에 필요한 비용을 줄이고 요법을 올바른 환자 집단에 더 빨리 이르게 하는데 있어서 더 나은 결정을 하게 하는 가치있는 수단일 수 있다.
본 발명은 목적하는 면역 반응과 관련이 있는 실질적으로 신뢰할 만한 사인인 것으로 결정된 생물학적 마커 (바이오마커)를 이용하여, 환자에게 면역원성 조성물을 투여하는 것을 수반하는 치료 (즉, 면역요법 치료)의 효능을 평가하기 위한 물질 및 방법을 제공한다. 바이오마커는 환자로부터 수득한 생물학적 샘플 내에 존재한다. 치료가 개시된 직후 그의 임상 결과를 예측하는 능력은 임상의 및 환자로 하여금 비효과적인 요법을 확인가능하게 하고, 대체 요법 이행을 유기할 것인지 허용할 것인지를 비롯하여 치료 경과와 관련된 적절한 결정이 이루어지게 할 것이다.
전체 출원에 걸쳐 본원에서 사용된 용어 "a" 및 "an"은 문맥상 달리 나타내지 않는 한 언급된 화합물 또는 단계의 "적어도 하나", "적어도 제1", "하나 이상" 또는 "복수"를 의미하는 것으로 사용된다. 예를 들어, 용어 "세포(a cell)"는 세포의 혼합물을 포함하여 복수개의 세포들을 포함한다. 보다 구체적으로, "적어도 하나" 및 "하나 이상"은 하나 또는 하나 초과인 수를 의미하고, 하나, 둘 또는 셋이 특히 바람직하다.
"및/또는"이라는 용어는, 본원에 어디에서 사용되든지 "및", "또는" 및 "상기 용어에 의해 연결되는 요소들 전부 또는 그의 임의의 다른 조합"의 의미를 포함한다.
본원에서 사용된 용어 "약" 또는 "대략"은 20％ 이내, 바람직하게는 10％ 이내, 보다 바람직하게는 5％ 이내를 의미한다.
용어 "환자", "대상체"는 척추동물, 특히 포유동물 종의 구성원을 지칭하고, 가축 동물, 스포츠 동물, 영장류 (인간 포함)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
본원에서 사용된 용어 "치료" 또는 "치료하는"는 예방 및/또는 요법을 포함한다. 따라서, 본 발명의 면역원성 조합물 또는 방법은 치료 용도로 한정되는 것은 아니며, 예방 용도로 사용될 수 있다. 이는 본원에서 용어 "예방적 또는 치료적 반응, 바람직하게는 면역 반응의 발생"에 포함된다. "예방"은 당면한 질환 (예를 들어, 감염성 질환)을 방지하는 것에 한정되지 않고, 이러한 감염의 장기간의 결과, 예컨대 경변증 또는 암의 방지를 추가로 포함한다.
활성 화합물의 "유효량" 또는 "충분량"은 임상 결과를 비롯한 유익하거나 목적하는 결과를 초래하기에 충분한 양이다. 유효량은 1회 이상의 투여로 투여될 수 있다. "치료 유효량"은 바이러스 감염과 관련된 하나 이상의 증상의 완화, 뿐만 아니라 질환의 방지 (예를 들어, 하나 이상의 감염 증상의 방지)를 포함하지만 이에 제한되지 않는 이로운 임상 결과를 달성하는 양이다.
제1 실시양태에 따르면, 본 발명은 환자에게 면역원성 조성물을 투여하는 것을 수반하는 치료를 모니터링하거나, 변형시키거나 또는 조정하기 위한 물질 및 방법에 관한 것이다. 이들 물질 및 방법은 환자 내 적어도 하나의 바이오마커의 수치를 기초로 하며, 치료를 개시한 이후 적어도 1회 적어도 하나의 바이오마커의 환자의 생물학적 샘플 (예를 들어 혈청 또는 혈장) 수치를 측정하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시양태에 따르면, 상기 바이오마커는 인터페론 감마 (인터페론 γ 또는 INF γ)이다.
본 발명은 환자에게 면역원성 조성물을 투여하는 것을 수반하는 치료 (즉, 면역요법 치료)의 효능을 평가하기 위한 생체외 방법을 제공한다.
본 발명에 따르면, 용어 "평가하는"은 환자에게 면역원성 조성물을 투여하는 것을 수반하는 치료를 "모니터링하거나, 변형시키거나 또는 조정하는" 것으로 이해되어야 한다.
특정 측면에서, 본 방법은 면역요법 치료 이후에 환자에서 인터페론 γ 수치를 기초로 면역요법 치료의 효능을 평가하는 것을 포함한다.
특정 측면에서, 본 방법은 면역요법 치료 이후에 환자의 인터페론 γ 수치를 측정하는 단계; 및 인터페론 γ 수치를 기초로 면역요법 치료의 효능을 평가하는 단계를 포함한다.
특정 측면에서, 본 방법은 면역요법 치료 이후에 수 주 동안 적어도 1회 환자의 인터페론 γ 수치를 측정하는 단계; 및 인터페론 γ 수치를 기초로 면역요법 치료의 효능을 평가하는 단계를 포함한다.
특정 측면에서, 본 방법은 면역요법 치료 이전에 환자의 인터페론 γ 수치를 측정하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
면역요법 치료 개시 및 인터페론 γ 측정 사이의 시간은 1 일 내지 약 48 주 이상 (예를 들어, 약 1 일 내지 약 1 주, 약 1 주 내지 약 2 주, 약 2 주 내지 약 4 주, 약 4 주 내지 약 8 주, 약 8 주 내지 약 12 주, 약 12 주 내지 약 16 주, 약 16 주 내지 약 24 주, 약 24 주 내지 약 48 주, 또는 그 이상)일 수 있다. 본 발명의 바람직한 실시양태에서, 시간 간격은 약 5 주이다. 유사하게, 추가의 측정 (즉, 제3, 제4, 제5 측정 등)을 제2 측정 이후 유사한 시간 간격으로 행할 수 있다.
본 발명의 특정한 실시양태에 따르면, "면역요법 치료"는 환자에게 면역원성 조성물을 적어도 1 회 투여하는 것으로 이루어진다. 특정한 실시양태에 따르면, "면역요법 치료"는 환자에게 면역원성 조성물을 연속적으로 투여하는 것으로 이루어지며, 보다 구체적으로 이는 적어도 2 주, 바람직하게는 적어도 6 주 동안 매주 투여하는 것으로 이루어진다.
관련 측면에서, 본 방법은 환자에게 면역원성 조성물을 투여한 후 환자에서 인터페론 γ 수치를 결정하는 단계; 상기 수치를 컷-오프(cut-off) 값과 비교하는 단계; 및 컷-오프 값에 비한 인터페론 γ 수치에 기초하여 면역요법 치료의 효능을 평가하는 단계를 포함한다.
본 발명의 특정한 실시양태에 따르면, "인터페론 γ 수치"란 검출가능한 인터페론 γ 수치를 의미하며, "검출가능한"이란 검출 한계, 보다 특히 인터페론 γ 수치를 측정하는데 사용되는 시험/방법 (루미넥스(Luminex), Elisa 등)의 검출 한계 이상인 것으로 정의된다. 하나의 상기 시험/방법의 이러한 검출 한계는 일상적으로 용이하게 결정될 수 있다.
특정한 실시양태에 따르면, 컷-오프 값 및/또는 검출 한계는 약 4 pg/ml (예를 들어 혈장에서 4.6 pg/ml)로, 이는 바람직하게는 루미넥스® 시스템을 이용한 다분석물 혈장 단백질 프로파일링 (실시예 1 참조)에 의해 측정된다. 또 다른 시험/방법 (예를 들어 Elisa)을 이용하는 당업자는 루미넥스® 시스템을 이용한 다분석물 혈장 단백질 프로파일링에 의해 측정된 약 4 pg/ml의 상기 컷-오프 값 및/또는 검출 한계와 하나의 특정한 시험 등가물을 결정하는데 어려움이 없을 것이다. 특정한 실시양태에 따르면, 본 발명에 따른 상기 컷-오프 값은 루미넥스® 시스템을 이용한 다분석물 혈장 단백질 프로파일링에 의해 측정된 컷-오프 값과의 컷-오프 값 등가물로 정의될 수 있다. "루미넥스® 시스템을 이용한 다분석물 혈장 단백질 프로파일링에 의해 측정된 컷-오프 값과의 컷-오프값 등가물"이란 루미넥스® 시스템을 이용한 다분석물 혈장 단백질 프로파일링에 의해 측정된 컷-오프값에 의해 확인되는 것으로서 동일한 환자를 확인시켜주는 컷-오프값을 의미한다.
특정한 실시양태에 따르면, 본 발명은
(i) 대상체에게 면역원성 조성물을 하나 이상의 용량으로 투여하는 단계;
(ii) 적어도 하나의 상기 투여 이후에 상기 대상체의 체내에서 인터페론 γ 수치를 측정하는 단계
를 포함하는, 환자에게 면역원성 조성물을 투여하는 것을 수반하는 치료의 효능을 평가하기 위한 방법에 관한 것이다.
특정한 실시양태에 따르면, 본 발명은
(i) 대상체에게 면역원성 조성물을 하나 이상의 용량으로 투여하는 단계;
(ii) 적어도 하나의 상기 투여(들) 이후에 상기 대상체의 체내에서 인터페론 γ 수치를 측정하는 단계;
를 포함하는 환자에게 면역원성 조성물을 투여하는 것을 수반하는 치료의 효능을 평가하기 위한 방법에 관한 것으로,
(iii) 이때 루미넥스® 시스템을 이용한 다분석물 혈장 단백질 프로파일링에 의해 측정된 약 4 pg/ml를 초과하는 (예를 들어 4.6 pg/ml의) 인터페론 γ 수치는 대상체가 치료에 대해 성공적인 임상 결과를 나타냄, 즉 생존율이 증가되었음을 나타낸다.
본 발명의 별법적 실시양태에 따르면, 본 발명의 방법은 면역원성 조성물을 투여하기 이전에 환자의 체내에서 인터페론 γ 수치를 측정하는 것으로 이루어진 초기 단계를 추가로 포함한다.
본 발명에 따르면, 인터페론 γ 수치는 환자로부터 수득한 생물학적 샘플에서 측정한다. 생물학적 샘플에는 혈액 및 기타 생물학적 기원의 액체 샘플, 고체 조직 샘플, 예컨대 생검 시료가 포함되지만 이들로 한정되는 것은 아니다. 바람직한 실시양태에서, 생물학적 샘플은 혈액, 혈장 또는 혈청이며, 이 경우 환자로부터 샘플을 수득하는 것은 비교적 간단하고 비-외과적인 절차이다. 혈액 또는 혈청을 수득하는 방법은 본 발명의 부분이 아닌 업계에서 널리 공지되어 있다.
또한, 인스턴트 바이오마커를 비롯한 폴리펩티드를 검출 및 정량하기 위한 수많은 방법들이 공지되어 있다. 그러한 방법으로는 항체 기반 방법, 보다 구체적으로는 모노클로날 항체 기반 방법이 포함되지만 이것으로 한정되는 것은 아니다. 바이오마커를 검출 및 정량하는 특정 방법은 본 발명에서 중요하지 않다. 예를 들어, 본 발명의 물질 및 방법은 루미넥스 기술 (루미넥스 코포레이션, 텍사스주 오스틴 소재) 또는 효소-연결된 면역흡착 검정 (ELISA, 수많은 ELISA 키트가 예를 들어 클리니사이언스(CliniScience), 디아클론(Diaclone), 바이오소스(Biosource)에서 시판되고 있음)에 의해 이용될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "면역원성 조성물", "백신 조성물", "백신" 또는 유사 용어는 상호교환가능하게 사용될 수 있으며, 대상체의 면역계가 현재의 상태를 개선시키거나 현재 또는 미래의 위해 또는 감염 (바이러스 감염, 박테리아 감염, 기생충 감염을 포함함)에 대해 보호하거나 그를 감소시키는 것을 자극/유도/증가시키는데 적합한 작용제, 예를 들어 종양 세포의 증식 또는 생존의 감소, 대상체에서의 병원체의 복제 또는 전파의 감소 또는 상태와 관련된 원하지 않는 증상(들)의 검출가능한 감소, 환자 생존의 연장에 적합한 작용제를 의미할 수 있다. 상기 면역원성 조성물은 (i) 적어도 하나의 표적화된 항원의 전부 또는 일부 및/또는 (ii) 적어도 하나의 이종 뉴클레오티드 서열, 특히 적어도 하나의 표적화된 항원의 전부 또는 일부를 코딩하는 이종 뉴클레오티드 서열의 전부 또는 일부를 생체내에서 발현하는 적어도 하나의 재조합 벡터를 포함할 수 있다. 별법적 실시양태에 따르면, 본 발명의 면역원성 조성물은 (iii) 적어도 하나의 면역 반응 조절제를 단독으로 또는 (i) 및/또는 (ii)와 조합하여 포함한다. 이같은 면역 반응 조절제 (IRM)의 예로는 CpG 올리고뉴클레오티드 (예를 들어 US 6,194,388; US2006094683; WO 2004039829 참조), 리포폴리사카라이드, 폴리이노신산:폴리시티딜산 복합체 (문헌 [Kadowaki, et al., 2001, J. Immunol. 166, 2291-2295]), 및 수지상 세포 및/또는 단핵구/포식세포로부터 시토카인 생산을 유도하는 것으로 공지된 폴리펩티드 및 단백질이 포함된다. 이같은 면역 반응 조절제 (IRM)의 또 다른 예는 소형 유기 분자 예컨대 이미다조퀴놀린아민, 이미다조피리딘 아민, 6,7-융합된 시클로알킬이미다조피리딘 아민, 이미다조나프티리딘 아민, 옥사졸로퀴놀린 아민, 티아졸로퀴놀린 아민 및 1,2-가교된 이미다조퀴놀린 아민이다 (예를 들어 US 4,689,338; US 5,389,640; US 6,110,929; 및 US 6,331,539 참조).
본원에서 사용된 용어 "항원"은 면역 반응의 표적일 수 있는 임의의 물질을 지칭하고, 여기에는 복합체 항원 (예를 들어, 종양 세포, 바이러스 감염 세포 등)이 포함된다. 항원은 예를 들어, 환자에 의해 생기는 세포-매개 및/또는 체액성 면역 반응의 표적일 수 있다. 용어 "항원"은 바이러스 항원, 종양-특이적 또는 종양-관련 항원, 박테리아 항원, 기생충 항원 등의 전부 또는 일부를 예를 들어 포함한다:
- 바이러스 항원에는 예를 들어 A형, B형, C형, D형 및 E형 간염 바이러스, HIV, 헤르페스 바이러스, 시토메갈로바이러스, 대상 포진, 유두종 바이러스, 엡스타인 바르 바이러스, 인플루엔자 바이러스, 파라-인플루엔자 바이러스, 아데노바이러스, 콕사키 바이러스, 피코르나 바이러스, 로타바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스, 폭스 바이러스, 리노바이러스, 루벨라 바이러스, 파포바이러스, 볼거리 바이러스, 홍역 바이러스로부터의 항원이 포함되고; 공지된 바이러스 항원의 일부 비제한적인 예로는 하기의 것들이 포함된다: HIV-1로부터 유래된 항원, 예컨대 tat, nef, gp120 또는 gp160, gp40, p24, gag, env, vif, vpr, vpu, rev 또는 그의 일부 및/또는 조합물; 인간 헤르페스 바이러스로부터 유래된 항원, 예컨대 gH, gL gM gB gC gK gE 또는 gD 또는 그의 일부 및/또는 조합물 또는 HSV1 또는 HSV2로부터의 ICP27, ICP47, ICP4, ICP36과 같은 극초기 단백질; 시토메갈로바이러스, 특히 인간 시토메갈로바이러스로부터 유래된 항원, 예컨대 gB 또는 그의 유도체; 엡스타인 바르 바이러스로부터 유래된 항원, 예컨대 gp350 또는 그의 유도체; 대상 포진 바이러스로부터 유래된 항원, 예컨대 gp1, 11, 111 및 IE63; 간염 바이러스로부터 유래된 항원, 예컨대 B형 간염, C형 간염 또는 E형 간염 바이러스 항원 (예를 들어 HCV의 env 단백질 E1 또는 E2, 코어(core) 단백질, NS2, NS3, NS4a, NS4b, NS5a, NS5b, p7, 또는 그의 일부 및/또는 조합물); 인간 유두종 바이러스로부터 유래된 항원 (예를 들어 HPV6, 11, 16, 18, 예를 들어 L1, L2, E1, E2, E3, E4, E5, E6, E7, 또는 그의 일부 및/또는 조합물); 기타 바이러스성 병원체, 예컨대 호흡기 세포융합 바이러스 (예를 들어 F 및 G 단백질 또는 그의 유도체), 파라인플루엔자 바이러스, 홍역 바이러스, 볼거리 바이러스, 플라비바이러스 (예를 들어, 황열병 바이러스, 뎅기 바이러스, 진드기-매개 뇌염 바이러스, 일본 뇌염 바이러스) 또는 인플루엔자 바이러스 세포로부터 유래된 항원 (예를 들어 HA, NP, NA, 또는 M 단백질, 또는 그의 일부 및/또는 조합물);
- 종양-특이적 또는 종양-관련 항원에는 암종, 림프종, 모세포종, 육종, 및 백혈병이 포함되지만 이에 제한되지는 않는다. 이같은 암의 보다 특정한 예로는 유방암, 전립선암, 결장암, 편평세포암, 소세포 폐암, 비소세포 폐암, 위장암, 췌장암, 교모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간세포암, 결장직장암, 자궁내막 암종, 타액선 암종, 신장암, 간암, 외음부암, 갑상선암, 간 암종 및 다양한 유형의 두경부암, 신암, 악성 흑색종, 후두암, 전립선암이 포함된다. 암 항원은 종양-특이적 면역 반응을 명백하게 강력히 자극할 수 있는 항원이다. 이들 항원 중 일부는 정상 세포에 의해 코딩되지만, 정상 세포에 의해 반드시 발현되지는 않는다. 이들 항원은 정상 세포에서 정상적으로는 침묵하는 것 (즉, 발현되지 않음), 낮은 수치로만 또는 분화의 특정 단계에서만 발현되는 것 및 배아 및 태아 항원과 같이 일시적으로 발현되는 것으로 특성화될 수 있다. 다른 암 항원은 종양유전자 (예를 들어, 활성화된 ras 종양유전자), 억제 유전자 (예를 들어, 돌연변이체 p53), 내부 결실 또는 염색체 전좌로부터 생성되는 융합 단백질과 같은 돌연변이체 세포 유전자에 의해 코딩된다. 또 다른 암 항원은 RNA 및 DNA 종양 바이러스에 보유된 것과 같은 바이러스 유전자에 의해 코딩될 수 있다. 종양-특이적 또는 종양-관련 항원의 일부 비제한적인 예로는 MART-1/Melan-A, gp100, 디펩티딜 펩티다제 IV (DPPIV), 아데노신 디아미나제-결합 단백질 (ADAbp), 시클로필린 b, 결장직장 관련 항원 (CRC)-C017-1A/GA733, 암배아 항원 (CEA) 및 그의 면역원성 에피토프 CAP-1 및 CAP-2, etv6, aml1, 전립선 특이적 항원 (PSA) 및 그의 면역원성 에피토프 PSA-1, PSA-2, 및 PSA-3, 전립선-특이적 막 항원 (PSMA), T-세포 수용체/CD3-제타 사슬, MAGE-패밀리의 종양 항원 (예를 들어, MAGE-A1, MAGE-A2, MAGE-A3, MAGE-A4, MAGE-A5, MAGE-A6, MAGE-A7, MAGE-A8, MAGE-A9, MAGE-A10, MAGE-A11, MAGE-A12, MAGE-Xp2 (MAGE-B2), MAGE-Xp3 (MAGE-B3), MAGE-Xp4 (MAGE-B4), MAGE-C1, MAGE-C2, MAGE-C3, MAGE-C4, MAGE-C5), GAGE-패밀리의 종양 항원 (예를 들어, GAGE-1, GAGE-2, GAGE-3, GAGE-4, GAGE-5, GAGE-6, GAGE-7, GAGE-8, GAGE-9), BAGE, RAGE, LAGE-1, NAG, GnT-V, MUM-1, CDK4, 티로시나제, p53, MUC 패밀리 (예를 들어 MUC-1), HER2/neu, p21ras, RCAS1, 알파-태아단백질, E-카드헤린, 알파-카테닌, 베타-카테닌 및 감마-카테닌, p120ctn, gp100.sup.Pmel117, PRAME, NY-ESO-1, cdc27, 선종성 폴립증 코일 단백질 (APC), 포드린, 코넥신 37, Ig-이디오타입, p15, gp75, GM2 및 GD2 강글리오시드, 바이러스 생성물 예컨대 인간 유두종 바이러스 단백질, Smad 패밀리의 종양 항원, lmp-1, P1A, EBV-코딩 핵 항원 (EBNA)-1, 뇌 글리코겐 포스포릴라제, SSX-1, SSX-2 (HOM-MEL-40), SSX-1, SSX-4, SSX-5, SCP-1 및 CT-7, 및 c-erbB-2가 포함되고;
- 박테리아 항원에는 예를 들어, TB 및 나병을 야기하는 미코박테리아 (Mycobacteria), 뉴모코쿠스, 호기성 그람 음성 바실루스, 미코플라스마, 스타필로코쿠스 감염, 스트렙토코쿠스 감염, 살모넬라, 클라미디아, 네이세리아로부터의 항원이 포함되고;
- 다른 항원에는 예를 들어, 말라리아, 리슈마니아증, 트리파노소마증, 톡소플라스마증, 주혈흡충증, 사상충증으로부터의 항원이 포함된다.
한 특정한 실시양태에 따르면, 상기 항원은 이종 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되며 재조합 벡터에 의해 생체내에서 발현된다.
특히 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 이종 뉴클레오티드 서열은 하기 항원 HBV-PreS1 PreS2 및 표면 env 단백질, 코어 및 polHIV-gp120 gp40, gp160, p24, gag, pol, env, vif, vpr, vpu, tat, rev, nef; HPV-E1, E2, E3, E4, E5, E6, E7, E8, L1, L2 (예를 들어, WO 90/10459, WO 98/04705, WO 99/03885 참조); HCV env 단백질 E1 또는 E2, 코어 단백질, NS2, NS3, NS4a, NS4b, NS5a, NS5b, p7 (예를 들어, WO2004111082, WO2005051420 참조); Muc-1 (예를 들어, US 5,861,381; US 6,054,438; WO98/04727; WO98/37095 참조)의 전부 또는 일부 중 하나 이상을 코딩한다.
본 발명의 변형에 따르면, 면역원성 조성물은 적어도 2종의 항원, 또는 적어도 2종의 항원을 코딩하는 이종 뉴클레오티드 서열, 또는 적어도 2종의 항원을 코딩하는 적어도 2종의 이종 뉴클레오티드 서열, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
또 다른 특정한 실시양태에 따르면, 본 발명의 상기 이종 뉴클레오티드 서열은 HPV의 E6 초기 코딩 영역, HPV의 E7 초기 코딩 영역 및 이들의 유도체 또는 조합물로 이루어진 군으로부터 선택된 HPV 항원(들)의 전부 또는 일부를 코딩한다.
본 발명에 따른 재조합 벡터에 의해 코딩되는 HPV 항원은 HPV E6 폴리펩티드, HPV E7 폴리펩티드 또는 HPV E6 폴리펩티드와 HPV E7 폴리펩티드 둘 모두로 이루어진 군으로부터 선택된다. 본 발명은 p53에 대한 결합이 변경되거나 적어도 유의하게 감소된 임의의 HPV E6 폴리펩티드의 용도 및/또는 Rb에 대한 결합이 변경되거나 적어도 유의하게 감소된 임의의 HPV E7 폴리펩티드의 용도를 포함한다 (문헌 [Munger et al., 1989, EMBO J. 8, 4099-4105]; [Crook et al., 1991, Cell 67, 547-556]; [Heck et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89, 4442-4446]; [Phelps et al., 1992, J. Virol. 66, 2148-2427]). 본 발명의 목적에 적합한 비-종양유전자성 HPV-16 E6 변이체는 대략 위치 118 내지 대략 위치 122에 위치된 하나 이상의 아미노산 잔기가 결실되며 (+1은 천연 HPV-16 E6 폴리펩티드의 첫번째 메티오닌 잔기를 나타냄), 잔기 118 내지 122 (CPEEK)의 완전한 결실이 특히 바람직하다. 본 발명의 목적에 적합한 비-종양유전자성 HPV-16 E7 변이체는 대략 위치 21 내지 대략 위치 26에 위치한 하나 이상의 아미노산 잔기가 결실되며 (+1은 천연 HPV-16 E7 폴리펩티드의 첫번째 아미노산 잔기를 나타냄), 잔기 21 내지 26 (DLYCYE)의 완전한 결실이 특히 바람직하다. 바람직한 실시양태에 따르면, 본 발명에서 사용되는 하나 이상의 HPV-16 초기 폴리펩티드(들)은 MHC 클래스 I 및/또는 MHC 클래스 II 제시가 개선되도록, 및/또는 항-HPV 면역성이 자극되도록 추가로 변형된다. HPV E6 및 E7 폴리펩티드는 핵 단백질이고, 막 제시는 이들의 치료 효능이 개선되도록 하는 것으로 기존에 밝혀졌다 (예를 들어, WO99/03885 참조). 따라서, 세포 막에 고정되도록 HPV 초기 폴리펩티드(들) 중 적어도 하나를 변형하는 것이 권고될 수 있다. 막 고정은 HPV 초기 폴리펩티드에 막-고정 서열을 혼입시키고, 만일 천연 폴리펩티드가 분비 서열이 없으면 분비 서열 (즉, 신호 펩티드)을 혼입시킴으로써 쉽게 달성될 수 있다. 막-고정 및 분비 서열은 당업계에 공지되어 있다. 간략하게, 분비 서열은 막 제시되거나 분비된 폴리펩티드의 N-말단에 존재하며 소포체 (ER) 내로의 통과를 개시시킨다. 이는 보통 15 내지 35개의 본질적으로 소수성인 아미노산을 포함하며 이후에 특정 ER-위치된 엔도펩티다제에 의해 제거되어 성숙한 폴리펩티드를 제공한다. 막-고정 서열은 보통 그 속성이 매우 소수성이며 세포막에 폴리펩티드를 고정하도록 작용한다 (예를 들어, 문헌 [Branden and Tooze, 1991, in Introduction to Protein Structure p. 202-214, NY Garland] 참조).
본 발명의 맥락에서 사용될 수 있는 막-고정 및 분비 서열의 선택은 방대하다. 이는 광견병 당단백질, HIV 바이러스 외피 당단백질 또는 홍역 바이러스 F 단백질과 같은, 그것을 포함하는 임의의 막-고정 및/또는 분비 폴리펩티드 (예를 들어, 세포 또는 바이러스 폴리펩티드)로부터 얻어지거나 합성될 수 있다. 본 발명에 따라 사용되는 초기 HPV-16 폴리펩티드의 각각에 삽입된 막 고정 및/또는 분비 서열은 공통의 또는 상이한 기원을 가질 수 있다. 분비 서열의 바람직한 삽입 부위는 번역 개시를 위한 코돈의 N-말단 하류이며, 막-고정 서열의 바람직한 삽입 부위는 C-말단, 예를 들어 정지 코돈의 바로 상류이다.
본 발명에 사용하는 HPV E6 폴리펩티드는 바람직하게는 홍역 F 단백질의 분비 및 막-고정 신호의 삽입에 의해 변형된다. 임의로 또는 조합되어, 본 발명에 사용되는 HPV E7 폴리펩티드는 바람직하게는 광견병 당단백질의 분비 및 막-고정 신호의 삽입에 의해 변형된다.
면역강화제 폴리펩티드(들)을 코딩하는 하나 이상의 핵산을 사용함으로써 재조합 벡터의 치료 효능이 또한 개선될 수 있다. 예를 들어, HPV 초기 폴리펩티드(들)을 칼레티쿨린 (문헌 [Cheng et al., 2001, J. Clin. Invest. 108, 669-678]), 미코박테리움 투베르쿨로시스(Mycobacterium tuberculosis) 열 충격 단백질 70 (HSP70) (문헌 [Chen et al., 2000, Cancer Res. 60, 1035-1042]), 유비퀴틴 (문헌 [Rodriguez et al., 1997, J. Virol. 71, 8497-8503]) 또는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 외독소 A와 같은 박테리아 독소의 전위 도메인 (ETA(dIII)) (문헌 [Hung et al., 2001 Cancer Res. 61, 3698-3703])과 같은 폴리펩티드에 연결시키는 것이 유리할 수 있다.
또 다른 실시양태에 따르면, 본 발명에 따른 재조합 벡터는 상기 정의된 바와 같은 하나 이상의 초기 폴리펩티드(들), 보다 특히 HPV-16 및/또는 HPV-18 초기 E6 및/또는 E7 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 포함한다.
또 다른 특정한 및 바람직한 실시양태에 따르면, 본 발명의 상기 이종 뉴클레오티드 서열은 MUC 1 항원 또는 그의 유도체의 전부 또는 일부를 코딩한다.
또 다른 특정한 실시양태에 따르면, 본 발명의 상기 이종 뉴클레오티드 서열은 하기의 전부 또는 일부 중 하나 이상을 코딩한다: HCV env 단백질 E1 또는 E2, 코어 단백질, NS2, NS3, NS4a, NS4b, NS5a, NS5b, p7 또는 이들의 유도체. 또 다른 특정한 실시양태에 따르면, 본 발명의 상기 이종 뉴클레오티드 서열은 하나 이상의 융합 단백질을 코딩하며, 여기서 형태는 NS 폴리펩티드 중 적어도 하나가 천연 형태의 순서와 구별되는 순서로 나타난다는 의미에서 천연이 아니다. 따라서, 만일 융합 단백질이 NS3 폴리펩티드, NS4A 폴리펩티드 및 NS5B 폴리펩티드를 포함하면, 천연 형태는 N-말단에 NS3을, 그리고 C-말단에 NS5B를 갖는 NS3-NS4A-NS5B일 것이다. 대조적으로, 비천연 형태는 NS5B-NS3-NS4A, NS5B-NS4A-NS3, NS4A-NS3-NS5B, NS4A-NS5B-NS3 또는 NS3-NS5B-NS4A일 수 있다. 특히, 본 발명에 따른 융합 단백질은 하기 중 적어도 하나를 포함한다:
o NS3 폴리펩티드의 N-말단에 직접적으로 또는 링커를 통해 융합된 NS4A 폴리펩티드;
o NS5B 폴리펩티드의 N-말단에 직접적으로 또는 링커를 통해 융합된 NS3 폴리펩티드;
o NS5B 폴리펩티드의 N-말단에 직접적으로 또는 링커를 통해 융합된 NS4B 폴리펩티드;
o NS4B 폴리펩티드의 N-말단에 직접적으로 또는 링커를 통해 융합된 NS3 폴리펩티드의 N-말단에 직접적으로 또는 링커를 통해 융합된 NS4A 폴리펩티드; 및/또는
o NS5B 폴리펩티드의 N-말단에 직접적으로 또는 링커를 통해 융합된 NS4B 폴리펩티드의 N-말단에 직접적으로 또는 링커를 통해 융합된 NS3 폴리펩티드.
본 발명의 융합 단백질의 이러한 특정한 부분에서, NS 폴리펩티드의 각각은 독립적으로 천연이거나 변형될 수 있다. 예를 들어, NS4A-NS3 부분에 포함된 NS4A 폴리펩티드는 천연인 한편 NS3 폴리펩티드는 이하에서 개시하는 변형 중 적어도 하나를 포함할 수 있다.
필요하다면, 본 발명에서 사용되는 핵산 분자는 표적화된 항원 (예를 들어 HPV 초기 폴리펩티드(들))의 특정 숙주 세포 또는 유기체, 예를 들어 인간 숙주 세포 또는 유기체에서의 고수준 발현을 제공하도록 최적화될 수 있다. 전형적으로, 포유동물 숙주 세포에서 드물게 사용되는 코돈에 상응하는 하나 이상의 "천연" (예를 들어 HPV) 코돈을 더욱 빈번하게 사용되는 동일한 아미노산을 코딩하는 하나 이상의 코돈으로 교체함으로써 코돈 최적화가 수행된다. 이것은 통상적인 돌연변이유발에 의해 또는 화학 합성 기술에 의해 (예를 들어, 합성 핵산을 생성함) 달성될 수 있다. 부분적인 치환으로도 발현 증가가 달성될 수 있기 때문에 드물게 사용되는 코돈에 상응하는 모든 천연 코돈을 교체할 필요는 없다. 또한, 제한 부위(들)의 도입을 수용하기 위해 최적화된 코돈 사용을 엄격히 지키는 것으로부터 일부 벗어날 수도 있다.
본원에 사용된 용어 "재조합 벡터"는 바이러스 뿐만 아니라 비바이러스 벡터를 지칭하며, 염색체외 (예를 들어, 에피좀), 다중카피 및 통합 벡터 (즉, 숙주 염색체 내로 혼입된 것)를 포함한다. 본 발명의 맥락에서 특히 중요한 것은 다양한 발현 시스템에서의 사용을 위한 발현 벡터뿐만 아니라 유전자 요법에 사용하기 위한 벡터이다 (즉, 숙주 유기체에 핵산을 전달할 수 있는 것). 적합한 비바이러스 벡터는 플라스미드, 예컨대 pREP4, pCEP4 (인비트로겐 (Invitrogene)), pCI (프로메가 (Promega)), pCDM8 (문헌 [Seed, 1987, Nature 329, 840]), pVAX 및 pgWiz (진 테라피 시스템 인크 (Gene Therapy System Inc); 문헌 [Himoudi et al., 2002, J. Virol. 76, 12735-12746])를 포함한다. 적합한 바이러스 벡터는 다양한 상이한 바이러스 (예를 들어, 레트로바이러스, 아데노바이러스, AAV, 폭스바이러스, 헤르페스 바이러스, 홍역 바이러스, 포미 바이러스 등)로부터 유래될 수 있다. 본원에 사용된 용어 "바이러스 벡터"는 벡터 DNA/RNA 뿐만 아니라 그로 생성되는 바이러스 입자를 포함한다. 바이러스 벡터는 복제-가능일 수 있거나, 또는 복제-불능 또는 복제-손상되도록 유전적으로 불구일 수 있다. 본원에서 사용된 용어 "복제-가능"은 특정 숙주 세포 (예를 들어, 종양 세포)에서 더 잘 또는 선택적으로 복제되도록 조작된 복제-선택적 및 조건적-복제성 바이러스 벡터를 포함한다.
한 측면에서, 본 발명에서 사용하기 위한 재조합 벡터는 재조합 아데노바이러스 벡터이다 (개관을 위해, 문헌 ["Adenoviral vectors for gene therapy", 2002, Ed D. Curiel and J. Douglas, Academic Press] 참조). 이는 다양한 인간 또는 동물 공급원으로부터 유래될 수 있고, 아데노바이러스 혈청형 1 내지 51까지의 임의의 혈청형이 사용될 수 있다. 인간 아데노바이러스 2 (Ad2), 5 (Ad5), 6 (Ad6), 11 (Ad11), 24 (Ad24) 및 35 (Ad35)가 특히 바람직하다. 이러한 아데노바이러스는 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 (American Type Culture Collection) (ATCC, 메릴랜드주 록빌 소재)으로부터 입수가능하며, 그의 서열, 조직 및 생성 방법을 개시하는 많은 문헌의 대상이어서, 당업자가 그를 적용하는 것이 가능하다 (예를 들어, US 6,133,028; US 6,110,735; WO 02/40665; WO 00/50573; EP 1016711; 문헌 [Vogels et al., 2003, J. Virol. 77, 8263-8271] 참조).
본 발명에 사용되는 아데노바이러스 벡터는 복제-가능할 수 있다. 복제-가능 아데노바이러스 벡터의 수많은 예가 당업자에게 쉽게 입수가능하다 (예를 들어, 문헌 [Hernandez-Alcoceba et al., 2000, Human Gene Ther. 11, 2009-2024]; [Nemunaitis et al., 2001, Gene Ther. 8, 746-759]; [Alemany et al., 2000, Nature Biotechnology 18, 723-727] 참조). 예를 들어, E1A CR2 도메인에서의 결실 (예를 들어 WO00/24408 참조)에 의해 및/또는 천연 E1 및/또는 E4 프로모터를 조직, 종양 또는 세포 상태-특이적 프로모터로 교체하는 것 (예를 들어 US 5,998,205, WO99/25860, US 5,698,443, WO00/46355, WO00/15820 및 WO01/36650 참조)에 의해 이는 야생형 아데노바이러스 게놈으로부터 조작될 수 있다.
별법적으로, 본 발명에서 사용되는 아데노바이러스 벡터는 복제-불능이다 (예를 들어, WO94/28152; 문헌 [Lusky et al., 1998, J. Virol 72, 2022-2032] 참조). 바람직한 복제-불능 아데노바이러스 벡터는 E1-결손된 것으로 (예를 들어 US 6,136,594 및 US 6,013,638 참조), 이때 E1 결실은 대략적으로 위치 459 내지 3328 또는 대략적으로 위치 459 내지 3510에 이른다 (등록 번호 M 73260 하에 진뱅크(GeneBank)에 개시되고 문헌 [Chroboczek et al., 1992, Virol. 186, 280-285]에 개시된 제5형 인간 아데노바이러스의 서열 참조). 아데노바이러스 게놈의 추가적인 부분(들) (비-필수적 E3 영역 또는 다른 필수적인 E2, E4 영역의 전부 또는 일부)을 결실시킴으로써 클로닝 능력이 추가로 개선될 수 있다. 아데노바이러스 벡터의 임의의 위치 내로의 핵산의 삽입은 문헌 [Chartier et al., (1996, J. Virol. 70, 4805-4810)]에 기술된 바와 같이 상동 재조합을 통하여 수행될 수 있다. 예를 들어, HPV-16 E6 폴리펩티드를 코딩하는 핵산이 E1 영역을 교체하고 HPV-16 E7 폴리펩티드를 코딩하는 핵산이 E3 영역을 교체하여 삽입될 수 있거나, 또는 그 반대로 삽입될 수 있다.
또 다른 바람직한 측면에서, 본 발명에서 사용되는 벡터는 폭스바이러스 벡터이다 (예를 들어 [Cox et al., in "Viruses in Human Gene Therapy" Ed J. M. Hos, Carolina Academic Press] 참조). 또 다른 바람직한 실시양태에 따르면, 이것은 백시니아 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택되며, 적합한 백시니아 바이러스는 제한 없이 코펜하겐 (Copenhagen) 균주 (문헌 [Goebel et al., 1990, Virol. 179, 247-266 and 517-563]; [Johnson et al., 1993, Virol. 196, 381-401]), 와이어스 (Wyeth) 균주 및 고도로 약독화된, 그로부터 유래된 약독화 바이러스 (MVA를 포함함) (개관을 위해서는 문헌 [Mayr, A., et al., 1975, Infection 3, 6-14] 참조) 및 그의 유도체 (예컨대, MVA 백시니아 균주 575 (ECACC V00120707 - US 6,913,752), NYVAC (WO 92/15672 - 문헌 [Tartaglia et al., 1992, Virology, 188, 217-232] 참조)를 포함한다. MVA 게놈의 완전한 서열의 결정 및 코펜하겐 VV 게놈과의 비교에 의해 MVA 게놈에서 일어난 7개의 결실 (I 내지 VII)이 정확하게 확인되었으며 (문헌 [Antoine et al., 1998, Virology 244, 365-396]), 이 중 임의의 것을 사용하여 항원-코딩 핵산을 삽입할 수 있다. 또한 벡터는 폭스바이러스과의 임의의 다른 구성원, 특히 조류폭스 바이러스 (예를 들어, TROVAC, 문헌 [Paoletti et al., 1995, Dev Biol Stand., 84, 159-163] 참조); 카나리폭스 (예를 들어, ALVAC, WO 95/27780, 문헌 [Paoletti et al., 1995, Dev Biol Stand., 84, 159-163]); 구두 바이러스; 돈두 바이러스 등으로부터 수득될 수 있다. 예로서, 당업계의 숙련자라면 이러한 이종 뉴클레오티드 서열, 특히 항원을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 발현할 수 있는, 폭스바이러스를 기반으로 한 발현 벡터의 생성이 기술되어 있는 WO 92 15672 (참고로 포함됨)를 참조할 수 있다.
폭스바이러스 게놈 내로 핵산 및 발현에 필요한 관련 조절 요소를 삽입하는 기본적인 기술은 당업계의 숙련자가 접근가능한 다수의 문헌 ([Paul et al., 2002, Cancer gene Ther. 9, 470-477]; [Piccini et al., 1987, Methods of Enzymology 153, 545-563]; US 4,769,330; US 4,772,848; US 4,603,112; US 5,100,587 및 US 5,179,993])에 기술되어 있다. 일반적으로, 바이러스 게놈 및 삽입할 핵산을 지닌 플라스미드 둘 모두에 존재하는 중복 서열들 (즉, 요망되는 삽입 부위) 사이의 상동 재조합을 통하여 진행된다.
본 발명의 항원을 코딩하는 핵산은 바람직하게는 재조합 폭스바이러스가 여전히 생육가능하고 감염성인 채 남아있도록 하기 위하여 폭스바이러스 게놈의 비필수 유전자좌 내에 삽입된다. 비필수 영역은 비코딩 유전자간 영역 또는 불활성화 또는 결실이 바이러스의 성장, 복제 또는 감염을 유의하게 손상시키지 않는 임의의 유전자이다. 또한 필수 바이러스 유전자좌 내에 삽입하는 것이 구상될 수 있되, 단, 기능 결함은 예를 들어 폭스바이러스 게놈에서 결실된 것에 상응하는 상보적 서열을 지닌 헬퍼 세포주를 사용함으로써 바이러스 입자의 생성 동안 트랜스로 공급된다.
코펜하겐 백시니아 바이러스를 사용하는 경우, 항원-코딩 핵산은 바람직하게는 티미딘 키나제 유전자 (tk) 내에 삽입된다 (문헌 [Hruby et al., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci USA 80, 3411-3415]; [Weir et al., 1983, J. Virol. 46, 530-537]). 그러나, 그 밖의 삽입 부위, 예를 들어 헤마글루티닌 유전자 (문헌 [Guo et al., 1989, J. Virol. 63, 4189-4198]) 내, K1L 유전자좌 내, u 유전자 (문헌 [Zhou et al., 1990, J. Gen. Virol. 71, 2185-2190]) 내, 또는 다양한 자발적 또는 조작된 결실이 문헌 ([Altenburger et al., 1989, Archives Virol. 105, 15-27]; [Moss et al., 1981, J. Virol. 40, 387-395]; [Panicali et al., 1981, J. Virol. 37, 1000-1010]; [Perkus et al., 1989, J. Virol. 63, 3829-3836]; [Perkus et al., 1990, Virol. 179, 276-286]; [Perkus et al., 1991, Virol. 180, 406-410])에 보고되어 있는 백시니아 바이러스 게놈의 왼쪽 끝부분도 또한 적절하다.
MVA를 사용할 때, 항원-코딩 핵산은 확인된 결실 I 내지 VII 중 임의의 하나 내로 삽입될 수 있으며, 그 외에도 D4R 유전자좌 내로 삽입될 수 있지만, 결실 II 또는 III 내로의 삽입이 바람직하다 (문헌 [Meyer et al., 1991, J. Gen. Virol. 72, 1031-1038]; [Sutter et al., 1994, Vaccine 12, 1032-1040]).
조류폭스 바이러스를 사용하는 경우, 티미딘 키나제 유전자 내에서의 삽입이 고려될 수 있지만, 바람직하게는 항원-코딩 핵산은 ORF 7 및 9 사이에 위치한 유전자간 영역 내에 도입된다 (예를 들어 EP 314 569 및 US 5,180,675 참조).
한 특정한 실시양태에 따르면, 상기 재조합 벡터는 재조합 플라스미드 DNA 또는 재조합 바이러스 벡터이다.
또 다른 특정한 실시양태에 따르면, 상기 재조합 바이러스 벡터는 재조합 아데노바이러스 벡터이다.
또 다른 특정한 실시양태에 따르면, 상기 재조합 바이러스 벡터는 재조합 백시니아 벡터이다.
바람직한 한 실시양태에 따르면, 상기 재조합 백시니아 벡터는 재조합 MVA 벡터이다.
바람직하게는, 본 발명에서 사용되는 항원-코딩 핵산은 숙주 세포 또는 유기체에서 그의 발현에 적합한 형태로 있으며, 이는 항원을 코딩하는 핵산 서열은 숙주 세포 또는 유기체에서 그의 발현에 필요한 하나 이상의 조절 서열의 제어 하에 두어진다. 본원에서 사용된 용어 "조절 서열"은 핵산 또는 그의 유도체 중 하나 (즉, mRNA)의 숙주 세포 내로의 복제, 중복, 전사, 스플라이싱, 번역, 안정성 및/또는 운반이 포함되는, 소정의 숙주 세포에서의 핵산의 발현을 허용하거나, 이에 기여하거나 또는 이를 조정하는 임의의 서열을 지칭한다. 당업게의 숙련자라면 조절 서열의 선택은 숙주 세포, 벡터 및 목적하는 발현 수준과 같은 인자에 의존적일 수 있음을 인식할 것이다. 항원을 코딩하는 핵산은 진핵 세포 내에서 항원 핵산의 발현을 유도하는 유전자 발현 서열에 작동적으로 연결된다. 유전자 발현 서열은 임의의 조절 뉴클레오티드 서열, 예컨대 프로모터 서열 또는 프로모터-인핸서 조합이며, 이는 작동적으로 연결된 항원 핵산의 효율적인 전사 및 번역을 용이하게 한다. 유전자 발현 서열은 예를 들어 포유동물 또는 바이러스 프로모터, 예컨대 구성적 또는 유도성 프로모터일 수 있다. 구성적 포유동물 프로모터는 하기 유전자의 프로모터를 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다: 히포크산틴 포스포리보실 트랜스퍼라제 (HPRT), 아데노신 데아미나제, 피루베이트 키나제, b-액틴 프로모터 및 기타 구성적 프로모터. 진핵 세포에서 구성적으로 기능하는 예시적인 바이러스 프로모터는 예를 들어 시토메갈로바이러스 (CMV), 시미안 바이러스 (예를 들어, SV40), 파필로마 바이러스, 아데노바이러스, 인간 면역결핍 바이러스 (HIV), 라우스 육종 바이러스, 시토메갈로바이러스, 몰로니 백혈병 바이러스 및 기타 레트로바이러스의 긴 말단 반복체 (LTR) 유래의 프로모터, 및 헤르페스 심플렉스 바이러스의 티미딘 키나제 프로모터를 포함한다. 다른 구성적 프로모터가 당업계의 숙련자에게 공지되어 있다. 본 발명의 유전자 발현 서열로서 유용한 프로모터는 유도성 프로모터를 또한 포함한다. 유도성 프로모터는 유도제의 존재 하에 발현된다. 예를 들어, 메탈로티오네인 프로모터는 특정한 금속 이온의 존재 하에 전사 및 번역이 촉진되도록 유도된다. 다른 유도성 프로모터가 당업계의 숙련자에게 공지되어 있다. 일반적으로, 유전자 발현 서열은, 필요하다면, 전사 및 번역의 개시에 각각 수반되는 5' 비-전사 및 5' 비-번역 서열, 예컨대 TATA 박스, 캡핑(capping) 서열, CAAT 서열 등을 포함할 것이다. 특히, 이러한 5' 비-전사 서열은 작동가능하게 연결된 항원 핵산의 전사 제어를 위한 프로모터 서열을 포함하는 프로모터 영역을 포함할 것이다. 유전자 발현 서열은 요망될 경우 인핸서 서열 또는 상류 활성자 서열을 임의로 포함한다. 폭스바이러스 벡터에서 사용하기 위한 바람직한 프로모터 (하기 참조)에는 백시니아 프로모터 7.5K, H5R, TK, p28, p11 및 K1L, 초기 및 후기 폭스바이러스 프로모터들 간의 키메라 프로모터, 뿐만 아니라 합성 프로모터 예컨대 문헌 [Chakrabarti et al., (1997, Biotechniques 23, 1094-1097)], [Hammond et al., (1997, J. Virological Methods 66, 135-138)] 및 [Kumar and Boyle (1990, Virology 179, 151-158)]에 기술된 것들이 비제한적으로 포함된다.
프로모터는 특히 중요하며, 본 발명은 다수의 유형의 숙주 세포에서 핵산의 발현을 유도하는 구성적 프로모터 및 단지 특정한 숙주 세포에서 또는 특정 이벤트 또는 외인성 인자 (예를 들어, 온도, 영양 첨가물, 호르몬 또는 기타 리간드에 의함)에 반응하여 발현을 유도하는 구성적 프로모터의 사용을 포함한다. 적합한 프로모터는 문헌에 널리 기술되어 있으며, 보다 구체적으로는 RSV, SV40, CMV 및 MLP 프로모터와 같은 바이러스 프로모터가 언급될 수 있다. 폭스바이러스 벡터에서 사용하기 위한 바람직한 프로모터에는 백시니아 프로모터 7.5K, H5R, TK, p28, p11 및 K1L, 초기 및 후기 폭스바이러스 프로모터들 간의 키메라 프로모터, 뿐만 아니라 합성 프로모터 예컨대 문헌 [Chakrabarti et al., (1997, Biotechniques 23, 1094-1097)], [Hammond et al., (1997, J. Virological Methods 66, 135-138)] 및 [Kumar and Boyle (1990, Virology 179, 151-158)]에 기술된 것들이 비제한적으로 포함된다.
당업계의 숙련자라면 본 발명의 핵산 분자의 발현을 제어하는 조절 요소가 숙주 세포 또는 유기체에서의 전사의 적당한 개시, 조절 및/또는 종결 (예를 들어, 폴리A 전사 종결 서열), mRNA 수송 (예를 들어, 핵 국소화 신호 서열), 프로세싱 (예를 들어, 스플라이싱 신호), 및 안정성 (예를 들어, 인트론 및 비-코딩 5' 및 3' 서열), 번역 (예를 들어, 펩티드 신호, 프로펩티드, 3부분 리더 서열, 리보좀 결합 부위, 샤인-달가모 (Shine-Dalgamo) 서열 등)을 위한 추가의 요소를 추가로 포함할 수 있음을 인식할 것이다.
별법적으로, 본 발명에서 사용되는 재조합 벡터는 적어도 하나의 시토카인을 코딩하는 적어도 하나의 핵산을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 시토카인은 제한 없이 인터류킨 (예를 들어, IL-2, IL-7, IL-15, IL-18, IL-21) 및 인터페론 (예를 들어, IFNγ, INFα)을 포함하며, 이때 특히 바람직한 것은 인터류킨 IL-2이다. 본 발명의 재조합 백신이 시토카인-발현 핵산을 포함하는 경우, 하나 이상의 항원(들)을 코딩하는 재조합 벡터 또는 독립적인 재조합 벡터 (기원이 동일하거나 상이할 수 있음)가 상기 핵산을 보유할 수 있다.
한 바람직한 실시양태에 따르면, 본 발명에서 사용되는 재조합체는 MUC1 항원 또는 그의 유도체의 전부 또는 일부, 및 상기 열거된 적어도 하나의 시토카인, 및 바람직하게는 인터류킨, 특히 IL2를 코딩한다.
상기에 기술된 재조합 바이러스 벡터를 포함하는 감염성 바이러스 입자는 통상적인 방법에 의해 생성될 수 있다. 예시적인 방법은 하기 단계를 포함한다:
a. 바이러스 벡터를 적합한 세포주 내로 도입하는 단계,
b. 상기 세포주를 적합한 조건 하에 배양하여 상기 감염성 바이러스 입자가 생성되게 하는 단계,
c. 생성된 감염성 바이러스 입자를 상기 세포주의 배양물로부터 회수하는 단계, 및
d. 임의로 상기 회수된 감염성 바이러스 입자를 정제하는 단계.
아데노바이러스 벡터의 증식에 적절한 세포는 예를 들어 293 세포, PERC6 세포, HER96 세포, 또는 WO 94/28152, WO 97/00326, US 6,127,175에 개시된 세포이다.
폭스바이러스 벡터 증식에 적절한 세포는 조류 세포, 가장 바람직하게는 수정된 난자로부터 수득된 닭 배아로부터 제조된 일차 닭 배아 섬유모세포 (CEF)이다.
감염성 바이러스 입자는 배양물 상청액으로부터 또는 용해 (예를 들어, 화학적 수단, 냉동/해동, 삼투압 충격, 기계적 충격, 초음파 처리 등에 의함) 후 세포로부터 회수될 수 있다. 바이러스 입자는 연속적인 플라크 정제 라운드에 의해 단리되고 이어서 당업계의 기술 (크로마토그래피 방법, 염화세슘 또는 수크로스 구배에서의 초원심분리)을 사용하여 정제될 수 있다.
또 다른 실시양태에 따르면, 본 발명의 방법은 치료의 효능을 예상하는 다른 방법, 보다 구체적으로는 면역요법 치료의 효능을 예상하는 다른 방법과 조합될 수 있다. 예를 들어, 바이오마커의 수치, 예컨대 활성화된 NK 세포의 수치 (EP 08305876.8의 우선권을 주장하는 특허 출원서 참조) 또는 sICAM-1의 수치 (EP 09305032.6의 우선권을 주장하는 특허 출원서 참조).
원하는 경우, 본 발명에 따른 면역원성 조성물의 투여는 하나 이상의 통상적인 치료 양식 (예를 들어 방사선, 화학요법 및/또는 수술)과 함께 이루어질 수 있다. 다수의 치료적 접근법의 사용은 선택된 환자에게 더욱 광범위한 기반의 개입을 제공한다. 한 실시양태에서, 본 발명에 따른 면역원성 조성물의 투여는 수술적 개입에 선행하거나 또는 뒤따를 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 이것은 방사선요법 (예를 들어, 감마 방사선)에 선행하거나 또는 뒤따를 수 있다. 당업계의 숙련자라면 사용될 수 있는 적절한 방사선 요법 프로토콜 및 파라미터를 쉽게 고안해낼 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Perez and Brady, 1992, Principles and Practice of Radiation Oncology, 2nd Ed. JB Lippincott Co] 참조; 당업계의 숙련자에게 쉽게 명백해지는 바와 같이 적절한 수정 및 변경을 이용함). 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 면역원성 조성물의 투여는 하나 이상의 약물 (예를 들어 바이러스성 감염, 바이러스 관련 병리 상태, 암 등을 치료 또는 예방하기 위해 통상적으로 사용되는 약물)을 이용하는 화학요법과 관련된다.
따라서 본 발명은 화학요법제를 사용한 화학요법 치료를 받고 있는 암 환자의 치료를 개선시키는 방법에 관한 것이며, 상기 방법은
- 환자에게 하나 이상 용량의 본 발명에 따른 면역원성 조성물 및 하나 이상 용량의 화학요법제를 투여하는 단계,
- 적어도 하나의 상기 면역원성 조성물 투여 이후에 대상체의 체내에서 인터페론 γ 수치를 측정하는 단계를 포함하고;
- 이때 약 4 pg/ml를 초과하는 (예를 들어 4.6 pg/ml의) 인터페론 γ 수치는 대상체가 치료에 대해 성공적인 임상 결과를 나타냄, 즉 생존율이 증가되었음을 나타낸다.
한 실시양태에 따르면, 상기 화학요법제의 투여는 상기 면역원성 조성물의 투여 이전에 행해진다.
또 다른 실시양태에 따르면, 상기 화학요법제의 투여는 상기 면역원성 조성물의 투여 이후에 행해진다.
또 다른 실시양태에 따르면, 상기 화학요법제의 투여는 상기 면역원성 조성물의 투여와 함께 행해진다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 방법 또는 용도는 하나 이상의 프라이머 조성물(들) 및 하나 이상의 부스터 조성물(들)의 순차적인 투여를 포함하는 프라임 부스트 치료 양식에 따라 수행된다. 전형적으로, 프라이밍 및 부스팅 조성물은 적어도 하나의 항원 도메인을 공통으로 포함하거나 코딩하는 상이한 비히클을 사용한다. 프라이밍 조성물이 처음에 숙주 유기체에 투여되며, 부스팅 조성물이 1일로부터 12개월까지 다양한 기간 후에 동일 숙주 유기체에 후속적으로 투여된다. 본 발명의 방법은 1회 내지 10회의 프라이밍 조성물의 순차적 투여, 이어서 1회 내지 10회의 부스팅 조성물의 순차적 투여를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 주사 간격은 대략 1주일 내지 6개월이다. 또한, 프라이밍 및 부스팅 조성물은 동일한 경로에 의해 또는 상이한 투여 경로에 의해 동일 부위에 또는 대안적인 부위들에 투여될 수 있다.
한 특정한 실시양태에 따르면, 본 발명은 상기 인간 질환이 암인 상기에 기술된 방법에 관한 것이다.
특정한 실시양태에 따르면, 상기 암은 예를 들어 유방암, 결장암, 신장암, 직장암, 폐암, 두경부암, 신암, 악성 흑색종, 후두암, 난소암, 자궁경부암, 전립선암, 비소세포 폐암 (NSCLC), 혈액암, 위암, 골수종이다.
바람직한 실시양태에 따르면, 상기 암은 비소세포 폐암 (NSCLC)이다.
한 특정한 실시양태에 따르면, 본 발명은 상기 인간 질환이 감염성 질환인 상기에 기술된 방법에 관한 것이다.
바람직한 실시양태에 따르면, 상기 감염성 질환은 예를 들어 HIV, HCV, HBV, HPV 등에 의해 유도되는 질환과 같은 바이러스 유도성 질환이다.
한 특정한 실시양태에 따르면, 치료를 받은 환자 집단에서 관찰되는 면역 반응은 종양-특이적 또는 종양-관련 항원 및/또는 바이러스 항원에 대한 것이다. 한 실시양태에 따르면, 상기 환자 집단에서의 상기 "면역 반응"은 특징적 항원에 대한 것이다. 한 특정한 실시양태에 따르면, 상기 환자 집단에서의 상기 "면역 반응"은 MUC1 항원에 대한 것이다. 또 다른 특정한 실시양태에 따르면, 상기 환자 집단에서의 상기 "면역 반응"은 T 세포 면역 반응이며, 바람직하게는 CD8+ (세포독성 T 림프구) 면역 반응이다. 또 다른 특정한 실시양태에 따르면, 상기 환자 집단에서의 상기 "면역 반응"은 비특이적 면역 반응이다. 또 다른 특정한 실시양태에 따르면, 상기 환자 집단에서의 상기 "면역 반응"은 선천적인 면역 반응의 자극이다.
동물 또는 인간 유기체에 있어서 투여시에 면역 반응을 유도하거나 자극하는 능력은 당업계에서 표준인 다양한 검정을 이용하여 시험관내에서 또는 생체내에서 평가될 수 있다. 면역 반응의 개시 및 활성화를 평가하는데 이용가능한 기술에 대한 일반적인 설명에 대해서는, 예를 들어 문헌 [Coligan et al., (1992 and 1994, Current Protocols in Immunology; ed J Wiley & Sons Inc, National Institute of Health)]을 참조한다. 세포 면역성의 측정은, 면역 이펙터 세포의 활성화 상태의 결정에 의해 (예를 들어, 고전적인 [3H] 티미딘 흡수에 의한 T 세포 증식 검정), 감작된 대상체에서 항원-특이적 T 림프구에 대한 검정에 의해 (예를 들어, 세포독성 검정에서 펩티드-특이적 용해), 또는 형광 MHC 및/또는 펩티드 다량체 (예를 들어, 사량체)에 의한 항원 특이적 T 세포의 검출에 의해, CD4+ 및 CD8+ T-세포로부터 유래되는 것을 포함하는 활성화된 이펙터 세포에 의해 분비되는 시토카인의 프로파일을 측정함으로써 수행될 수 있다 (예를 들어, ELIspot에 의한 IL-10 또는 IFN 감마-생산 세포의 정량화). 체액성 반응을 자극하는 능력은 항체 결합 및/또는 결합에 있어서의 경쟁에 의해 결정될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Harlow, 1989, Antibodies, Cold Spring Harbor Press] 참조). 본 발명의 방법은 항-항원 면역 반응의 유도 또는 강화를 반영하는, 항-종양 활성을 결정하기 위해 적합한 종양-유도제 (예를 들어, MUC1-발현 RMA 세포)가 챌린지된 동물 모델에서 또한 추가로 확인될 수 있다.
따라서 본 발명은 추가로 면역원성 조성물을 투여함으로써 인간 질환에 대해 치료받은 환자의 생존을 연장시키는 방법에 관한 것이며, 상기 방법은
- 환자에게 본 발명에 따른 면역원성 조성물을 하나 이상의 용량으로 투여하는 단계,
- 본 발명에 따른 적어도 하나의 상기 면역원성 조성물의 투여 이후에 대상체의 체내에서 인터페론 γ 수치를 측정하는 단계 (상기 참조)
를 포함한다.
또 다른 실시양태에 따르면, 본 발명은 면역원성 조성물의 투여에 의해 치료를 받은 대상체가 상기 면역원성 조성물의 투여에 대한 후속 반응으로서 예방적 또는 치료적 반응, 바람직하게는 예방적 또는 치료적 면역 반응을 발생시키는 것에 대해 영향을 받기 쉬운지 여부를 예상하기 위한 바이오마커로서 인터페론 γ의 용도에 관한 것이다.
또 다른 실시양태에 따르면, 본 발명은 환자에게 면역원성 조성물을 투여하는 것을 수반하는 치료를 모니터링하거나, 변형시키거나 또는 조정하기 위한 바이오마커로서 인터페론 γ의 용도에 관한 것이다.
보다 구체적으로, 본 발명은 환자에게 면역원성 조성물을 투여하는 것을 수반하는 치료를 모니터링하거나, 변형시키거나 또는 조정하기 위한 바이오마커로서 인터페론 γ 수치의 용도에 관한 것으로, 상기 투여 이후에 측정된 인터페론 γ 수치가 약 4 pg/ml를 초과 (예를 들어 4.6 pg/ml)한다는 것은 대상체가 치료에 대해 성공적인 임상 결과를 나타냄, 즉 생존율이 증가되었음을 나타낸다.
본 발명은 또한 본원에 개시된 방법을 실행하기 위한 파트를 포함하며 본원에 제공된 실시예로부터 명백할 키트를 제공한다. 키트의 일부, 또는 키트는 인터페론 감마의 혈청 수치를 수집 및/또는 측정하기 위한 시약을 포함할 수 있다. 이러한 시약은 항체를 포함할 수 있다. 키트는 추가로 생물학적 샘플을 수집하고/하거나 처리하기 위한 장비를 포함할 수 있다. 키트는 또한 사용 설명서, 컷오프 값 및/또는 그의 결정에 대한 설명서, 및 키트 사용으로부터 얻은 데이터를 해석하는 설명서를 포함할 가능성이 있다.
본 발명은 추가로 임상 시험 및 인터페론 감마 수치를 모니터링하고/하거나, 이러한 수치가 역치 수치보다 높거나 낮은지를 결정하고/하거나, 면역요법 치료에 대한 환자의 반응을 개선시키기 위하여 치료 요법에 대한 변형을 권고하기 위한 컴퓨터 프로그램 및/또는 알고리즘을 제공한다. 컴퓨터 프로그램 또는 알고리즘은 예를 들어, 키트 또는 장치의 형태의 필요한 하드웨어와 함께 제공될 수 있으며, 키트 또는 장치는 또한 생물학적 샘플을 수용하고 그 안에 존재하는 인터페론 감마의 상대적 수치를 측정할 수 있다. 상기에 개시한 컴퓨터 프로그램 및/또는 장치는 적절한 설명서 및 항체를 비롯한 시약과 함께 의사 또는 임상 실험실에 제공될 가능성이 있다.
본 발명은 예시적인 방식으로 개시되었으며, 사용된 용어는 제한보다는 설명하는 단어의 속성인 것으로 의도됨이 이해되어야 한다. 명백하게, 본 발명의 많은 변형 및 변경이 상기 교시 관점에서 가능하다. 따라서 하기하는 특허청구범위의 범주 내에서 본 발명이 본원에 구체적으로 개시된 것과 상이한 방식으로 실행될 수 있음이 이해되어야 한다.
특허, 간행물 및 데이터베이스 엔트리의 상기 인용된 개시 내용 모두는 마치 각각의 이러한 개별 특허, 간행물 또는 엔트리가 구체적으로 및 개별적으로 참고로 포함되는 것으로 나타내어진 것처럼 동일한 정도로 그들 전체가 참고로 구체적으로 본원에 포함된다.
도 1: 폐암에서의 백신 면역요법을 설명하는 생존 곡선: 제43일에 검출가능한 인터페론 γ를 갖거나 또는 갖지 않는 환자
- 그룹 1: 제43일에 검출가능한 인터페론 γ를 갖는 환자에서의 치료 백신 (즉 면역원성 조성물) + 화학요법. 검출가능한 이란 4.6 pg/ml의 검출 한계 이상인 것으로 정의됨. 22 명의 환자. 중앙 생존기간 25.4 개월.
- 그룹 2: 검출불가능한 인터페론 γ를 갖는 환자에서의 치료 백신 (즉 면역원성 조성물) + 화학요법. 검출불가능한 이란 말초 혈액내 sCD54가 4.6 pg/ml 미만인 것으로 정의됨. 29 명의 환자. 중앙 생존기간 10.14 개월
로그 순위에 의한 유의차: p = 0.019
Ｏ 완결 + 검열
도 2: 폐암에서의 화학요법을 설명하는 생존 곡선: 검출가능한 (4.6 pg/ml 이상) 인터페론 γ를 갖거나 또는 갖지 않는 환자
- 그룹 1: 제43일에 검출가능한 인터페론 γ를 갖는 환자에서의 화학요법 단독 (치료 백신 무처리). 검출가능한 이란 말초 혈액에서 4.6 pg/ml 이상인 것으로 정의됨. 25 명의 환자. 중앙 생존기간 8.5 개월.
- 그룹 2: 제43일에 검출불가능한 인터페론 γ를 갖는 환자에서의 화학요법 단독 (치료 백신 무처리). 검출불가능한 이란 말초 혈액내 IFNg가 4.6 pg/ml 미만인 것으로 정의됨. 34 명의 환자. 중앙 생존기간 12.8 개월.
로그 순위에 의한 유의차: p = 0.047
Ｏ 완결 + 검열
도 3: 폐암에서의 화학요법을 설명하는 생존 곡선: 인터페론 γ를 갖는 (4.6 pg/ml 이상) 환자
- 그룹 1: 검출가능한 수치의 인터페론 γ를 갖는 환자에서의 치료 백신 (즉 면역원성 조성물) + 화학요법. 검출가능한 수치란 말초 혈액에서 4.6 pg/ml 이상인 것으로 정의됨. 22 명의 환자. 중앙 생존기간 25.4 개월.
- 그룹 2: 검출가능한 수치의 인터페론 γ를 갖는 환자에서의 화학요법 단독 (TG4010 백신 무처리). 검출가능한 수치란 말초 혈액내 인터페론 γ가 4.6 pg/ml 이상인 것으로 정의됨. 25 명의 환자. 중앙 생존기간 8.5 개월.
로그 순위에 의한 유의차: p = 0.002
Ｏ 완결 + 검열
실시예 1:
백신 TG4010으로 표시된 면역원성 조성물을 사용하여 표준 화학요법과 함께 비소세포 폐암 (NSCLC) 환자를 치료하였다.
TG4010은 IL2 및 종양-관련 항원 MUC1 둘 모두를 발현하는 재조합 변형 바이러스 앙카라 (MVA)이다.
148명의 환자를 랜덤화하여 하기를 제공받도록 하였다:
- 화학요법 (6회의 사이클까지 3주마다 d1에 시스플라틴 75 ㎎/㎡ 및 제1일 및 제8일에 젬시타빈 1250 ㎎/㎡) 단독 (연구 부문 2) 또는
- TG4010과 함께 화학요법 (연구 부문 1).
종양을 6주마다 평가하였다 (WHO 기준). 종점은 6개월에서의 무진행 생존율 (PFS) 및 전체 생존기간 (치료 분석을 하고자 함)이었다.
제43일 (6th 매주 주사 1 주 후)에 혈액 샘플을 채취하여 중앙 면역학 실험실에 즉시 보냈으며, 여기서는 혈장 샘플을 분취하여 동결시켰다. 혈장의 동결 분취액을 배치로, 드라이아이스에서, 두 번째 중앙 실험실로 보내 여기서 인터페론 감마 수치를 평가하였다.
혈장 샘플을 루미넥스® 시스템을 이용하는 다분석물 혈장 단백질 프로파일링에 의해 인터페론 감마 (인터페론 γ)의 함량에 대해 평가하였다. 검출 한계는 4.6 pg/ml으로 확립되었다.
도 1은 TG4010 백신 및 화학요법 둘 다로 치료한 경우에, 제43일에 검출가능한 인터페론 γ를 갖는 환자 [부문 1 (TG4010) + 화학요법]가 검출불가능한 인터페론 γ를 갖는 환자 (중앙 생존기간 10.14 개월)에 비해 더 오래 생존함 (중앙 생존기간 = 25.4 개월)을 보여준다.
도 2의 데이터는 검출가능한 혈장 인터페론 γ과 전체 생존기간 사이에 양의 관련성이 치료 백신을 수여받은 환자에 국한됨을 보여준다. 제43일에 검출가능한 혈장 인터페론 γ를 갖는 화학요법 만을 수여받은 부문 2에서의 환자는 제43일에 검출불가능한 인터페론 γ를 갖는 환자 (12.8 개월)에 비해 생존이 불량하였다 (8.5 개월).
도 3의 데이터는 제43일째 혈장에서 인터페론 γ가 검출되는 것에 기초하여 환자를 선별하는 것의 효과는 치료 백신을 수여받은 환자에 국한됨을 보여준다. 도 3은 제43일에 검출가능한 인터페론 γ를 갖는 환자가 치료 백신을 수여받은 경우에만 우수한 기대 생존을 가짐을 보여준다.

Claims (16)

  1. (a) 환자에게 면역원성 조성물을 투여한 후 상기 환자로부터 생물학적 샘플을 수득하는 단계;
    (b) 상기 생물학적 샘플에서 인터페론 γ 수치를 측정하는 단계
    를 포함하는 시험 방법이며, 약 4 pg/ml를 초과하는 (예를 들어 4.6 pg/ml의) 인터페론 γ 수치는 환자가 치료에 대해 성공적인 임상 결과를 나타냄을 나타내는 것인, 환자에서 상기 면역원성 조성물을 투여하는 것을 포함하는 한 치료의 효능을 평가하기 위한 생체외 방법.
  2. 제1항에 있어서, 면역원성 조성물을 투여하는 것을 포함하는 상기 치료의 개시 및 인터페론 γ 측정 사이의 시간이 약 4 내지 약 8 주인 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 면역원성 조성물을 투여하는 것을 포함하는 상기 치료의 개시 및 인터페론 γ 측정 사이의 시간이 약 5 주인 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 방법이 암 치료 방법인 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인터페론 γ 수치가 루미넥스(Luminex)® 시스템을 이용한 다분석물 혈장 단백질 프로파일링에 의해 측정되는 것인 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 생물학적 샘플이 혈액, 혈장 또는 혈청 샘플로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 하나 이상의 표적화된 항원을 전부 또는 일부 함유하는 것인 방법.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 하나 이상의 이종 뉴클레오티드 서열의 전부 또는 일부를 생체내에서 발현하는 재조합 벡터를 하나 이상 함유하는 것인 방법.
  9. 제8항에 있어서, 상기 재조합 벡터가 바이러스 벡터인 방법.
  10. 제9항에 있어서, 상기 바이러스 벡터가 복제 가능한 것인 방법.
  11. 제9항에 있어서, 상기 바이러스 벡터가 복제 불능인 것인 방법.
  12. 제9항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 바이러스 벡터가 재조합 아데노바이러스 벡터인 방법.
  13. 제9항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 바이러스 벡터가 재조합 백시니아 바이러스 벡터인 방법.
  14. 제13항에 있어서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 벡터가 재조합 MVA 벡터인 방법.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자가 화학요법제로 치료받은 환자인 방법.
  16. (a) 환자로부터의 혈액 샘플에서 인터페론 γ 수치를 결정하기 위한 항체; 및
    (b) 약 4 pg/ml를 초과하는 (예를 들어 4.6 pg/ml의) 인터페론 γ 수치는 대상체가 치료에 대해 성공적인 임상 결과를 나타냄을 나타내는 것임을 설명하는, 수득된 데이터 풀이용 설명서
    를 포함하는, 면역원성 조성물을 투여하는 것을 포함하는 치료 방법에 대해 환자가 치료상 반응을 보이는지 여부를 시험하기 위한 키트.
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