KR20110116364A

KR20110116364A - 무라야 패니쿨라타 추출물을 포함하는 피부용 조성물

Info

Publication number: KR20110116364A
Application number: KR1020100035740A
Authority: KR
Inventors: 김형준; 최현; 김광미; 고재영; 박선영; 이명렬; 남개원; 안수미; 노민수; 김한곤
Original assignee: (주)아모레퍼시픽
Priority date: 2010-04-19
Filing date: 2010-04-19
Publication date: 2011-10-26

Abstract

본 발명은 무라야 패니쿨라타 추출물을 유효 성분으로 포함하는 피부 가려움 완화 및 억제, 피부 보습, 피부 염증 완화 및 억제, 피부 면역성 증가, 피부 과민 반응 개선 또는 아토피 피부 개선 및 치료용 조성물을 개시한다.

Description

무라야 패니쿨라타 추출물을 포함하는 피부용 조성물{Composition for skin containing extracts of Murraya paniculata}

본 발명은 무라야 패니쿨라타 추출물을 포함하는 피부용 조성물에 관한 것이다.

사람에게 악영향을 미치는 생활 환경 요인이 점점 증가하고, 노령 인구가 급격히 늘어나면서, 각질층의 생성-탈락속도(turnover rate)가 늦어지고, 각질형성세포의 지질합성능력이 저하되거나, 표피에서 정상적인 세포의 분열, 성숙 및 분화가 원활하지 않음으로써, 각질층의 보습 인자와 지질의 양이 감소되어 정상적인 각질층의 기능을 유지하지 못하는 상태에 있는 사람들이 점점 증가하는 추세에 있다.

또한 과도한 세안이나, 목욕 등의 생활 습관적 요소나, 건조한 대기, 오염물질 등의 환경적인 요인, 그리고 아토피성 피부나 노인성 피부 같은 내인성 질환 등으로 인해 최근에는 건조 피부 증상 및 이로 인한 제반 장해를 호소하는 사람이 점점 증가하고 있는 추세이다.

본 발명은 피부 가려움 완화 및 억제, 피부 보습, 피부 염증 완화 및 억제, 피부 면역성 증가, 피부 과민 반응 개선 또는 아토피 피부 개선 및 치료용 조성물을 제공하고자 한다.

본 발명의 일측면에 따른 피부 가려움 완화 및 억제, 피부 보습, 피부 염증 완화 및 억제, 피부 면역성 증가, 피부 과민 반응 개선 또는 아토피 피부 개선 및 치료용 조성물은 무라야 패니쿨라타(Murraya paniculata, Murraya paniculata (L.) Jack) 추출물을 유효 성분으로 포함한다.

본 발명의 일측면에 따른 조성물은 무라야 패니쿨라타 추출물을 유효 성분으로 포함하여, 우수한 피부 가려움 완화 및 억제, 피부 보습, 피부 염증 완화 및 억제, 피부 면역성 증가, 피부 과민 반응 개선 또는 아토피 피부 개선 및 치료 효과를 가진다.

도 1은 실험예 1의 가려움증 억제 정도 평가 그래프이다.
도 2는 실험예 2의 필라그린 유전자 발현 변화 평가 그래프이다.
도 3은 실험예 3의 HBD-2 유전자 발현 변화 평가 그래프이다.
도 4는 실험예 4의 피부 두께 관찰 결과이다.
도 5는 실험예 5의 경피 수분 상실량 측정 결과 그래프이다.
도 6은 실험예 6의 혈중 IgE 농도 측정 결과 그래프이다.

본 명세서에서 "추출물"이라 함은, 천연물로부터 그 안의 성분을 뽑아냄으로써 얻어진 물질이라면, 뽑아내는 방법이나 성분의 종류와 무관하게 모두 포함한다. 예컨대, 물이나 유기 용매를 이용하여 천연물로부터 용매에 용해되는 성분을 추출해 낸 것, 천연물의 특정 성분, 예컨대 오일과 같은 특정 성분만을 추출하여 얻어진 것 등을 모두 포함하는 광의의 개념이다.

본 명세서에서 "피부"라 함은, 동물의 체표를 덮는 조직을 의미하는 것으로서, 얼굴 또는 바디 등의 체표를 덮는 조직뿐만 아니라, 두피와 모발을 포함하는 최광의의 개념이다.

이하에서, 본 발명을 상세하게 설명한다.

본 발명의 일측면은 무라야 패니쿨라타 추출물을 유효 성분으로 포함하는 피부 가려움 완화 및 억제, 피부 보습, 피부 염증 완화 및 억제, 피부 면역성 증가, 피부 과민 반응 개선 또는 아토피 피부 개선 및 치료용 조성물을 제공한다.

무라야 패니쿨라타(Murraya paniculata)의 학명은 Murraya paniculata (L.) Jack이며, 쌍떡잎식물 쥐손이풀목 운향과의 여러해살이풀로서 원산지는 동남 아시아이다. 상록관목(또는 소교목)으로 중국, 아시아 남부, 미국 남부　원산으로 1~7m까지 자란다. 줄기는 회백색으로 오래된 줄기의 수피는 세로로 얇게 갈라지며 털이 없다. 잎은 어긋나기하며 1회기수우상복엽으로 3~7매의 어긋나기하는 소엽을 가진다. 소엽은 혁질의 도란형으로 표면은 진녹색에 광택이 있고, 뒷면은 연녹색이다. 늦봄과 가을에 피는 꽃은 산방화서로 정생 내지 액생하며 백색으로 꽃잎은 5개이고 10개의 수술 중 5개는 길고 5개는 짧으며 꽃 전체에서 진한 향이 난다. 열매는 장과로 장타원형이며 길이 2~3cm 정도이고 8월 또는 6월에 녹색에서 적색으로 익으며 먹을 수 있고 1~2개의 종자가 들어있다. 전통적으로 진통에 효능이 있는 것으로 알려져 있다.

본 발명의 일측면에서, 상기 무라야 패니쿨라타 추출물은 스핑고실포스포릴콜린(sphingosylphosphorylcholine, SPC) 조절 효과를 가진다.

하기 화학식으로 나타내어지는 SPC는 라이소스핑고리피드류 (lysosphingolipids)로서 스핑고미엘린 (sphingomyelin, SM)의 N-탈아실화된 형태로 인산기에 콜린이 결합되어 있는 것을 특징으로 하며, 스핑고미엘린 N-탈아실화 효소에 의해 스핑고미엘린으로부터 생성된다.

상기 SPC는 여러 종류의 세포에 대해 미토겐(mitogen)으로서 작용하고, 특정 사이토카인의 분비를 촉진하는 것으로 알려져 있으며(Meyer 등, Biochim Biophys Acta., 1582: 178-89, 2002), 다양한 세포의 성장 및 증식(Desai 등, Biochem. Biophys. Res. Commun., 181, 361-366, 1991), 혈관 신생(Boguslawski 등, Biochem. Biophys. Res. Commun., 272, 603-609, 2000) 및 세포 사멸(Jeon ES 등, Biochim Biophys Acta., 1734(1); 25-33, 2005) 등에 깊이 관여하는 것으로 알려져 있다. 특히, 각질형성세포 및 섬유아세포의 증식을 촉진하여 상처를 치유하는 역할을 하기도 한다([Wakita 등, J. Invest. Dermatol., 110, 253-258, 1998] 및 [Berger 등, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 92, 5885-5889, 1995] 참조). 한편, SPC는 세포의 소포체로부터 Ca2+를 유리시키고([Desai 등, J. Cell. Biol., 121, 1385-1395, 1993] 및 [Okajima 등, J. Biol. Chem., 270, 26332-26340, 1995] 참조), 다양한 세포에서 세포 골격 재구성 및 세포 이동([Seufferlein 등, J. Biol. Chem., 270, 24343-24351, 1995] 및 [Rumenapp 등, Naunyn-Schmiedeberg’s Arch. Pharmacol., 361, 1-11, 2000] 참조)에 관여한다.

SPC에 관련된 주요 질환의 예로는 니이만-픽 병(Niemann-Pick Dissase; NPD)을 들 수 있는데, 스핑고미엘린을 분해하는 산성 스핑고미엘리나아제(acid sphingomyelinase; ASM)의 결핍으로 많은 양의 지질이 세포에 축적되어 세포가 파괴되고 주요 기관들의 기능 부전을 일으키는 유전성 대사질환이다.

SPC 관련 질환의 또 다른 예는 아토피성 피부염이다. 아토피성 피부염은 각질층의 지질 함량 감소로 인하여 항균력이 감소되고 장벽 기능이 약화 되어 외부 자극 물질에 대한 방어력이 떨어지게 되므로, 염증 반응이 일어나고 이에 따른 가려움증이 나타나게 된다. 또한, 가려움증은 2차 감염을 유발시키므로 과면역 반응으로 악순환하게 된다.

아토피의 병리에서 무엇보다 중요한 사실은 환부 또는 그 인근 부위에서 스핑고미엘린 탈아실화효소(Sphingomyelin deacylase)의 활성이 증가되고, 아토피성 피부염 환자들의 피부에서 SPC가 정상인의 1000배 이상 증가된 양상을 보인다는 점이다([Higuchi K 등, Biochem. J., 350, 747-756, 2000] 및 [Reiko Okamoto 등, Journal of Lipid Research, 44, 93-102, 2003] 참조). 이는 아토피성 피부염 환자의 각질층에서 세포간지질(ceramide) 결핍 현상의 중요한 원인이 된다(Junko Hara 등, J. invest. Dermatol., 115, 406-413, 2000). 또한, SPC는 아토피 질환에서 특징적으로 발생하는 비정상적 각질화 현상에도 중요한 역할을 담당한다(Higuchi 등, J. Lipid Res., 42, 1562-1570, 2001). 이 같은 연구 결과들은 SPC가 아토피성 피부염의 대표적 증상 중 하나인 피부 장벽기능 장애의 직접적인 원인일 뿐만 아니라, 2차적으로 나타나는 염증 반응의 원인이 될 수 있음을 시사한다.

염증 반응에서의 SPC의 작용을 뒷받침하는 연구로서, 각질형성세포에 SPC를 처리하면 TNF-α 및 ICAM-1 등의 염증 매개 인자의 발현이 대폭 증가한다는 보고가 있다([Imokawa 등, J. Invest. Dermatol., 112, 91-96, 1999] 및 [Ito 등, J. Biol. Chem., 270, 24370-24374, 1995] 참조). 또한, 염증 반응이 일어나게 되면 호중구(neutrophil)가 주화성(chemotaxis) 이동을 통해 염증 부위에 몰려들어 병균 등에 대항하게 되는데, 이러한 주화성 이동의 핵심 조절 인자가 rho 키나아제이며(Verena Niggli, The International Journal of Biochemistry & Cell Biology, 35, 1619-1638, 2003), rho 키나아제는 동시에 SPC에 의한 세포내 Ca² ⁺ 농도 변화를 매개하는 물질이기도 하다([Zhu 등, Exp Dermatol., 14, 509-514, 2005] 및 [Todoroki-Ikeda 등, FEBS Lett., 482, 85-90, 2000] 참조). 따라서, SPC에 의해 유발되는 세포 반응의 기전은 염증 반응 기전과 핵심 요소를 공유한다고 볼 수 있다.

한편, 상기 호산구는 천식을 비롯하여 알레르기 비염, 호산구성 폐렴, 호산구성 장염, 혈액성·조직성 호산구 과다증(hypereosinophilic syndrome) 등에서 기도 및 장관, 기타 조직에 염증을 유발하는 염증 세포로, 알러지성 질환과 천식 등의 병인 과정에서 IgE를 포함한 염증성(pro-inflammatory) 사이토카인을 유도하는 역할을 한다고 알려져 있다. 정상적인 상황에서 호산구는 소화기에만 제한되어 존재하고 다른 대부분의 장기에는 존재하지 않는다. 반면 급성과 만성 아토피 환자 모두에서 조직 내 호산구 증가증이 관찰되며, 아토피성 피부염 마우스 모델에서 표피와 진피층의 피부 비대증(skin hypertrophy)은 호산구 주요 염기성 단백질(eosinophil major basic protein) 또는 호산구 양이온 단백질 (eosinophil cationic protein; ECP)의 세포 독성 후 치유의 과정에 기인한 것이다.

호산구가 골수로부터 타 조직으로 이동하는 현상은 스핑고리피드 계열이 밀접하게 관여하고 있는데, 예를 들어, S1P(Sphingosine-1-Phosphate)에 의해 사람 호산구의 주화성(chemotaxis)과 유도(recruitment)가 일어난다는 연구 결과가 최근에 발표되었다(Fiorentina Roviezzo 등, Proc Natl Acad Sci., 101, 11170-11175, 2004). 랫트 발바닥 조직(paw tissue)에 S1P를 국소적으로 주입시킨 실험에서, 발바닥 조직에 호산구 증가증이 관찰되었으며, 세포 실험에서는 S1P가 호산구의 세포 이동을 야기하고, S1P 수용체 mRNA, 케모카인 CCR3 및 사이토카인 RANTES(regulated on activation, normal T cell-expressed and secreted)를 증가시켰다(Fiorentina Roviezzo 등, Proc Natl Acad Sci., 101, 11170-11175, 2004). 상기 연구 결과와 함께 SPC과 S1P의 구조적 유사성에 근거하여, 생체 내에서 SPC 작용을 조절하는 물질은 아토피성 피부염 등 호산구가 병인으로 작용하는 여러 질환에 효과를 보일 것으로 추측할 수 있다.

본 발명의 일측면에서, 무라야 패니쿨라타 추출물을 유효 성분으로 포함하는 조성물은 SPC에 의해 야기되는 피부 가려움증을 억제하고, 각질세포가 보유하고 있는 천연보습인자들의 생성에 중요한 원천이 되는 단백질인 필라그린을 발현을 촉진시키며, 자연면역인자인 피부 항균 펩타이드 HBD2 발현을 촉진시켜 피부 가려움 완화 및 억제, 피부 보습, 피부 염증 완화 및 억제, 피부 면역성 증가, 피부 과민 반응 개선 효과를 가진다. 이는 피부염으로 야기된 비정상적인 피부의 표피 및 진피 비대증, 표피의 경피 손실율을 감소시키며, 혈중 IgE의 농도를 낮추는 효과로도 설명될 수 있다. 나아가, 피부 가려움증과 염증을 억제 및 완화하고 피부 보습 효과를 가지므로 아토피 피부의 개선 및 치료 효과를 가질 수 있다.

본 명세서에서 "피부 과민 반응"은 피부 가려움증, 발진, 두드러기, 건조, 홍반, 알러지 등의 증상을 포함하는 반응을 의미할 수 있다.

본 발명의 일측면에서, 상기 추출물은 무라야 패니쿨라타를 통상적인 방법으로 추출하여 얻을 수 있다. 본 발명의 다른 일측면에서, 상기 추출물은 무라야 패니쿨라타를 물 또는 주정을 포함하는 유기 용매에서 가열하고 추출한 후, 여과 및 감압 농축하는 공정을 통해 수득되는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 또 다른 일측면에서, 상기 유기 용매는, 특별히 제한되는 것은 아니며, C₁~C₅의 저급 알코올, 에테르, 에틸아세테이트 또는 클로로포름일 수 있다. 상기 C₁~C₅의 저급 알코올은, 예를 들어, 메탄올, 에탄올, 이소프로필알코올, n-프로필알코올, n-부탄올 및 이소부탄올로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 또는 둘 이상의 혼합 용매일 수 있다.

본 발명의 일측면에서, 상기 조성물은 무라야 패니쿨라타 추출물을 조성물 전체 중량을 기준으로 1 내지 80 중량%로 포함할 수 있다. 본 발명의 다른 일측면에서, 상기 조성물은 무라야 패니쿨라타 추출물을 조성물 전체 중량을 기준으로 1 내지 50 중량%로 포함할 수 있다. 본 발명의 또 다른 일측면에서, 상기 조성물은 무라야 패니쿨라타 추출물을 조성물 전체 중량을 기준으로 1 내지 30 중량%로 포함할 수 있다. 본 발명의 또 다른 일측면에서, 상기 조성물은 무라야 패니쿨라타 추출물을 조성물 전체 중량을 기준으로 1 내지 10 중량%로 포함할 수 있다. 본 발명의 또 다른 일측면에서, 상기 조성물은 무라야 패니쿨라타 추출물을 조성물 전체 중량을 기준으로 1 내지 5 중량%로 포함할 수 있다. 상기 범위로 사용할 경우 본 발명의 의도한 효과를 나타내기에 적절할 뿐만 아니라, 조성물의 안정성 및 안전성을 모두 만족할 수 있으며, 비용 대비 효과의 측면에서도 상기 범위로 사용하는 것이 적절할 수 있다.

본 발명의 일측면은 무라야 패니쿨라타 추출물을 유효 성분으로 포함하는 조성물을 포함하는 미용 조성물을 제공한다.

상기 미용 조성물은 예를 들어 화장품일 수 있으며, 화장품의 외형은 화장품학 또는 피부과학적으로 허용 가능한 매질 또는 기제를 함유한다. 이는 국소 적용에 적합한 모든 제형으로, 예를 들면, 용액, 겔, 고체, 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 유상에 수상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 멀티에멀젼, 현탁액, 마이크로 에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는, 이온형(리포좀) 및 비이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이, 클렌져 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한 포말(foam)의 형태로 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제공될 수 있다. 이들 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다.

미용 조성물은 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면 활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 상기 보조제는 화장품학 또는 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입된다.

상기 미용 조성물은 제형이 특별히 한정되지 않으며, 목적하는 바에 따라 제형을 적절히 선택할 수 있다.　 예를 들어, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 아이에센스, 클렌징크림, 클렌징로션, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 파우더, 바디로션, 바디크림, 바디오일, 바디에센스, 바디세정제, 염모제, 헤어토닉, 모발영양화장수, 헤어에센스, 헤어세럼, 스칼프트리트먼트, 헤어트리트먼트, 헤어컨디셔너, 헤어샴푸, 헤어로션, 치약, 구강청정제, 정발제, 양모제, 로션, 연고, 젤, 크림, 패취 및 분무제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 제형으로 제조될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 다른 일측면은 무라야 패니쿨라타 추출물을 유효 성분으로 포함하는 조성물을 포함하는 약학 조성물을 제공한다.

상기 약학 조성물은 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 약제학적 보조제 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 추가로 함유할 수 있으며, 통상적인 방법에 따라 다양한 경구 투여제 또는 비경구 투여제 형태로 제형화할 수 있다. 구체적으로 상기 약학 조성물은 피부 외용제로 사용될 수 있다.

상기 경구 투여제는 예를 들면, 정제, 환제, 경질 및 연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 분제, 산제, 세립제, 과립제, 펠렛제 등이 있으며, 이들 제형은 유효 성분 이외에 계면 활성제, 희석제(예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로오스 및 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및 폴리에틸렌 글리콜)를 함유할 수 있다. 정제는 또한 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 트라가칸스, 메틸셀룰로오스, 나트륨 카복시메틸셀룰로오스 및 폴리비닐피롤리딘과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염과 같은 붕해제, 흡수제, 착색제, 향미제, 및 감미제 등의 약제학적 첨가제를 함유할 수 있다. 상기 정제는 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 의해 제조될 수 있다.

또한, 상기 비경구 투여제는 예를 들어, 주사제, 점적제, 연고, 로션, 겔, 크림, 스프레이, 현탁제, 유제, 좌제(坐劑), 패취 등의 제형일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 일실시예에 따른 상기 약학 조성물은 경구, 비경구, 직장, 국소, 경피, 정맥 내, 근육 내, 복강 내, 피하 등으로 투여될 수 있다.

또한, 상기 유효 성분의 약제학적으로 허용 가능한 용량, 즉 투여량은 치료 받을 대상의 연령, 성별, 체중과, 치료할 특정 질환 또는 병리 상태, 질환 또는 병리 상태의 심각도, 투여 경로 및 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있다. 일반적인 투여량은 0.01 mg/kg/일 내지 2000 mg/kg/일이 될 수 있고 1 mg/kg/일 내지 100 mg/kg/일이 될 수 있으나, 상기 투여량은 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것이 아니다.

이하, 실시예 및 실험예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 이들 실시예 및 실험예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 하기 실시예 및 실험예에 의해 제한되는 것은 아니다.

[실시예]

한국식물추출물은행에서 구입한 무라야 패니쿨라타 추출물을 실시예로 하였다.

[실험예 1] 가려움증 억제 평가

SPC 투여시 유발되는 가려움증에 대해 무라야 패니쿨라타(Murraya paniculata) 추출물이 미치는 영향을 시험하였다. 6주령의 ICR 마우스 수컷 30마리를 준비하여 실험 24시간 전에 등과 목 부위를 제모하여 절식시켰으며, 각 군당 10 마리씩 3개 군으로 나누었다. 실험 당일에 Murraya paniculata 추출물을 1,3 B.G에 녹인 후, 1ppm 용량으로 국소 도포하였다. 대조군에는 동량의 생리 식염수를 투여하였다. 약물 투여 후 1시간이 경과했을 때 SPC를 50 nmol/부위 용량으로 제모 부위에 피내 주사하였다. SPC 투여 직후 곧바로 관찰용 우리에 옮긴 다음 40분간 비디오 촬영을 실시하였으며, 촬영이 끝나고 실험이 종료된 마우스는 다시 사육용 우리에 옮겨 24시간 경과 시점에 주사 부위에 병리적 현상이 관찰되지 않는 것을 확인한 후 안락사시켰다. 만약 주사 부위에 화농이나 혈종 등의 병리적 현상이 관찰되면 시험 결과는 무효로 하였다. 촬영된 영상은 2명 이상의 관찰자가 동시에 관찰하는 것을 원칙으로 하고 2회 이상 반복 관찰하여 구한 값을 평균하여 표시하였다. 도 1은 마우스가 30분간 보인 긁기 동작 횟수를 그래프로 나타낸 것이다.

상기 실험을 통해 Murraya paniculata 추출물이 SPC에 의해 유도된 가려움증을 억제함을 확인할 수 있었다. 1ppm 용량에서 Murraya paniculata는 SPC에 의해 유발된 긁기 행동을 약 60% 가량 감소시켰다.

[실험예 2] 필라그린 유전자 발현 변화 평가

사람 각질형성세포에서 필라그린 유전자 발현변화 평가 실험으로 사람 각질세포를 배양한 무처리군(control)에는 실험군인 Murraya paniculata 추출물의 용매인 70% EtOH을 동량 처리하고, 대조군의 경우 사람 각질세포 배양액에 SPC(Matreya,USA)를 처리하였으며, 실험군의 경우 사람 각질세포 배양액에 SPC와 Murraya paniculata 추출물을 처리하여 24시간 세포와 함께 배양하였다. 물질 처리 24시간 후, 10ml의 인산염 완충액으로 세포를 두 번 세척하고, 트라이졸(인비트로젠사)을 이용하여 세포 내의 전체 RNA(total RNA)를 분리하였다. 분리된 RNA를 키아젠사의 RNA 키트를 사용하여, 한번 더 정제한 후, 애질런트사의 바이오어낼라이저 2100 모델 기기를 이용하여, RNA의 질(quality)을 확인하였다. 인비트로젠사의 역전사키트(Superscript Reverse Transcriptase (RT) II kit)를 이용하여 상기 분리된 RNA로부터 cDNA를 합성하였고, 이를 실시간역전사중합효소연쇄반응(real time-reverse transcription polymerase chain reaction, Q-RT-PCR)으로 정량적으로 분석하였다. Filaggrin(Hs00856927_g1)의 발현 패턴 변화는 어플라이드 바이오시스템사의 택맨 유전자발현시스템(Taqman^®gene expressionassay kit)을 이용하여 평가하여, 도 2에 나타내었다.

도 2에서 볼 수 있는 바와 같이, 사람정상각질피부세포에서 보습의 주요인자인 Filaggrin의 유전자 발현량이 Murraya paniculata 추출물 처리할 경우에 SPC 처리 군에 비해 약 4배 가량 증가함을 알 수 있다.

[실험예 3] HBD-2 유전자 발현변화 평가

본 실험은 사람 각질형성세포에서 HBD-2 유전자 발현변화 평가 실험으로, 사람 각질세포를 배양하여 평가한 실험군은 5개의 군으로 이루어졌다. 무처리군(control)에는 실험군의 Murraya paniculata 추출물 용매인 70% EtOH을 동량 처리하고, 대조군의 경우 사람 각질세포 배양액에 TNF-alpha만 처리하거나 TNF-alpha와 SPC(Matreya,USA)를 처리하였으며, 양성 대조군(Positive control)에는 Y-27632((R)-(+)-trans-N-(4-Pyridyl)-4-(1-aminoethyl)-cyclohexanecarboxamide, 2HCl, Calbiochem-Novabiochem, Darmstadt, Germany)을 처리하였고, 실험군의 경우, 사람 각질세포 배양액에 TNF-alpha와 SPC 및 Murraya paniculata 추출물 처리하여, 총 5개의 군을 24시간 세포와 함께 배양하였다. 물질 처리 24시간 후, 10ml의 인산염 완충액으로 세포를 두 번 세척하고, 트라이졸(인비트로젠사)을 이용하여 세포 내의 전체 RNA(total RNA)를 분리하였다. 분리된 RNA를 키아젠사의 RNA 키트를 사용하여, 한번 더 정제한 후, 애질런트사의 바이오어낼라이저 2100 모델 기기를 이용하여, RNA의 질(quality)을 확인하였다. 인비트로젠사의 역전사키트(Superscript Reverse Transcriptase (RT) II kit)를 이용하여 상기 분리된 RNA로부터 cDNA를 합성하였고, 이를 실시간역전사중합효소연쇄반응(real time-reverse transcription polymerase chain reaction, Q-RT-PCR)으로 정량적으로 분석하였다. hBD2(Hs00175474_m1))의 발현 패턴 변화는 어플라이드 바이오시스템사의 택맨 유전자발현시스템(TaqMan^®geneexpressionassaykit)을 이용하여 평가하여 도 3에 나타내었다.

도 3에서 볼 수 있는 바와 같이, 사람정상각질피부세포에서 자연면역인자인 피부항균펩타이드 hBD2의 유전자 발현양이 Murraya paniculata 추출물 처리할 경우에 SPC 처리 군에 비해 약 3배 가량 증가함을 알 수 있다.

[실험예 4] 조직 병리학적 평가

먼저 피부염의 발증을 위하여 NC/Nga 마우스(중앙실험동물, 5 주령)를 실험 동물 모델로서 사용하였다. NC/Nga 마우스는 일반 설치류의 동물과는 달리 면역 부전에 의한 아토피 피부염 발증에 유효한 동물로서 관련 실험에 최근 많이 이용되고 있는 실험동물이다.

NC/Nga 마우스의 피부염 유발을 위하여 제모기를 이용하여 등부를 제모한 후, 항원 DNCB(1-클로로 2,4-디니트로벤젠)를 올리브유 및 아세톤의 혼합물(3:1)로 녹인 후 0.2 ㎖를 등부에 골고루 도포하여 피부 염증을 유발하였다. DNCB는 4 주간에 걸쳐 1 주당 3 회 유도하였으며, 제모 후 익일에는 1 % DNCB 농도로 도포하고, 실험 종료까지는 0.4 % DNCB 농도로 도포하였다. 1,3 B.G에 녹인 Murraya paniculata 시료(실시예)는 DNCB 도포 1 일 전부터 실험 종료 4 주 간에 걸쳐 매일 3회씩 국소도포 하였다.

실험 종료 후 해부도구를 이용하여 등부 중 피부염이 유발된 부위를 절제하여 10 % 포르말린 조직 고정액에 침적시키고, 24 시간 동안 고정 후 파라핀을 도포하고, 박절기(microtome)를 이용하여 조직을 4 ㎛ 두께로 절개하고 슬라이드 글라스 상에 부착시켰다. 알콜 및 증류수를 이용하여 슬라이드 상의 조직에서 단계별로 수분을 제거하고 헤마톡실린-에오신(hematoxylin-eosin)액으로 염색하여 표피 및 진피층을 구분하였다. 그 결과는 도 4에 나타내었다. 이를 통해 피부염 유발군에서 비정상적인 표피의 두께보다 Murraya paniculata 추출물을 처리한 군의 두께가 현저히 감소되는 현상을 관찰할 수 있었다.

[실험예 5] 경피 수분상실량(TEWL) 측정 실험

NC/Nga 마우스(중앙실험동물, 5 주령)를 실험에 사용하였다. 피부염 유발을 위하여 항원 DNCB(1-클로로 2,4-디니트로벤젠)을 유도하기 전에 제모기를 이용하여 등부를 제모한 후, DNCB를 올리브유 및 아세톤의 혼합물(3:1)로 녹인 후 0.2 ㎖ 를 등부에 골고루 도포하여 피부염증을 유발하였다. DNCB는 4 주간에 걸쳐 1 주당 3 회 유도하였으며, 제모 후 익일에는 1 % DNCB 농도로 도포하고, 실험 종료까지는 0.4 % DNCB 농도로 도포하였다. 1,3 B.G에 녹인 Murraya paniculata 시료(실시예)는 DNCB 도포 1 일 전부터 실험 종료 4 주 간에 걸쳐 매일 3회씩 국소도포 하였다

DNCB의 항원 노출 전에 각 군간의 표피에서의 수분 상실량과 실험 종료 전까지 1주일 간격으로 수분상실량을 피부기능측정시스템인 MPA5(Corage+Khazaka electronic GmbH, German)에 TM300 탐침을 연결하여 센서를 표피에 접지 후 10 번 반복치의 평균값을 기준으로 채택하였다. 1 개체 당 3 부위를 측정한 후 개체의 수치로 이용하였다. 그 결과를 도 5에 나타내었다.

이를 통해 피부염 유발군에서 비정상적인 표피의 경피손실율이 Murraya paniculata 추출물을 처리한 군에서 약 54% 감소한 현상을 관찰할 수 있었다.

[실험예 6] 혈중 IgE의 농도 측정

NC/Nga 마우스 (중앙실험동물, 5 주령)을 실험에 사용하였다. 피부염 유발을 위하여 항원 DNCB(1-클로로 2,4-디니트로벤젠)을 유도하기 전에 제모기를 이용하여 등부를 제모한 후, DNCB를 올리브유 및 아세톤의 혼합물(3:1)로 녹인 후 0.2 ㎖ 를 등부에 골고루 도포하여 피부염증을 유발하였다. DNCB는 4 주간에 걸쳐 1 주당 3 회 유도하였으며, 제모 후 익일에는 1 % DNCB 농도로 도포하고, 실험 종료까지는 0.4 % DNCB 농도로 도포하였다. 1,3 B.G에 녹인 Murraya paniculata 시료(실시예)는 DNCB 도포 1 일 전부터 실험 종료 4 주 간에 걸쳐 매일 3회씩 국소도포 하였다. 실험 종료 후, 심장으로부터 채혈하여, IgE의 농도를 측정하여 피부염의 개선 여부를 검토하였다. ELISA 법에 의하여 IgE 농도를 측정한 후 그 결과를 도 6에 나타내었다. 도 6에서 볼 수 있듯이, DNCB 처리군에서는 IgE 농도의 급격한 증가를 관찰할 수 있었고 Murraya paniculata 의 도포에 의해 IgE 농도가 p < 0.05 수준에서 유의하게 억제된 결과를 나타냈다.

하기에 본 발명에 따른 조성물의 제형예를 설명하나, 다른 여러 가지 제형으로도 응용 가능하며, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

[제형예 1] 화장수

배합 성분	함량 (중량 %)
실시예	1.0
글리세린	3.0
부틸렌글리콜	2.0
프로필렌글리콜	2.0
카르복시비닐폴리머	0.1
피이지-12 노닐페닐에테르	0.2
폴리솔베이트 80	0.4
에탄올	10.0
트리에탄올아민	0.1
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	잔량

[제형예 2] 로션

성분	중량%
실시예	5.0
밀납	4.0
폴리솔베이트 60	1.5
솔비탄세스퀴올레이트	1.5
유동파라핀	0.5
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	5.0
글리세린	3.0
부틸렌글리콜	3.0
프로필렌글리콜	3.0

[제형예 3] 크림

배합 성분	함량 (중량 %)
실시예	1.0
글리세린	3.0
부틸렌글리콜	3.0
유동파라핀	7.0
베타글루칸	7.0
카보머	0.1
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드	3.0
스쿠알란	5.0
세테아릴 글루코사이드	1.5
소르비탄 스테아레이트	0.4
폴리솔베이트 60	1.2
트리에탄올아민	0.1
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	잔량

[제형예 4] 연고

성분	중량%
카프린/카프릴 트리글리세리드	10
액상파라핀	10
솔비탄세스퀴올리에이트	6
옥틸도데세스-25	9
세칠에칠헥사노에이트	10
스쿠알란	1
살리실산	1
글리세린	15
솔비톨	1
실시예	2
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	잔량

Claims

무라야 패니쿨라타(Murraya paniculata) 추출물을 유효 성분으로 포함하는 피부 가려움증 완화 및 억제용 조성물.
무라야 패니쿨라타(Murraya paniculata) 추출물을 유효 성분으로 포함하는 피부 보습용 조성물.
무라야 패니쿨라타(Murraya paniculata) 추출물을 유효 성분으로 포함하는 피부 염증 완화 및 억제용 조성물.
무라야 패니쿨라타(Murraya paniculata) 추출물을 유효 성분으로 포함하는 피부 면역성 강화용 조성물.
무라야 패니쿨라타(Murraya paniculata) 추출물을 유효 성분으로 포함하는 피부 과민 반응 개선용 조성물.
무라야 패니쿨라타(Murraya paniculata) 추출물을 유효 성분으로 포함하는 아토피 피부 개선 및 치료용 조성물.
제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 무라야 패니쿨라타 추출물은 조성물 전체 중량을 기준으로 1 내지 30 중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 포함하는 화장품 조성물.