KR20110100678A - 스피로인돌리논 피리딘 유도체 - Google Patents

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KR20110100678A
KR20110100678A KR1020117018526A KR20117018526A KR20110100678A KR 20110100678 A KR20110100678 A KR 20110100678A KR 1020117018526 A KR1020117018526 A KR 1020117018526A KR 20117018526 A KR20117018526 A KR 20117018526A KR 20110100678 A KR20110100678 A KR 20110100678A
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싱천 한
송 양
주밍 장
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에프. 호프만-라 로슈 아게
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Abstract

하기 화학식 (I) 의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 에스테르 또는 거울상이성질체가 제공된다:
Figure pct00027

[식 중, W, X, Y, V, R1 및 R2 는 본원에서 기술한 바와 같음].
상기 화합물은 항증식제로서, 특히는 항암제로서 사용된다.

Description

스피로인돌리논 피리딘 유도체 {SPIROINDOLINONE PYRIDINE DERIVATIVE}
본 발명은 하기 화학식 I 의 스피로인돌리논의 피리딘 유사체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 에스테르 또는 거울상이성질체에 관한 것이다:
Figure pct00001
[식 중, W, X, Y, V, R1 및 R2 은 본원에서 기술한 바와 같음].
상기 화합물에는 항증식제, 특히 항암제로서의 효용성이 있다.
p53 은 암의 발생에 대항하는 보호에서 중심적인 역할을 하는 종양 억제 단백질이다. 이는 세포 통합성을 보위하며, 성장 중단 또는 아폽토시스의 유도로 세포의 영구적으로 손상된 클론의 전파를 방지한다. 분자적 수준에서, p53 은 세포 주기 및 아폽토시스의 조절에 연루된 유전자의 패널을 활성화할 수 있는 전사 인자이다. p53 은 세포 수준에서 MDM2 에 의해 탄탄하게 조절되는 강력한 세포 주기 억제제이다. MDM2 및 p53 은 피드백 제어 루프를 형성한다. MDM2 는 p53 에 결합하여, p53-조절 유전자들을 전사활성화하는 그의 능력을 억제할 수 있다. 추가로, MDM2 는 p53 의 유비퀴틴-의존적 분해를 중재한다. p53 은 MDM2 유전자의 발현을 활성화할 수 있고, 따라서 MDM2 단백질의 세포적 수준을 상승시킨다. 이러한 피드백 제어 루프는 MDM2 및 p53 의 두가지 모두가 정상 증식 세포에서는 낮은 수준으로 유지되도록 해 준다. MDM2 는 또한 세포 주기 조절에서 중심적인 역할을 하는 E2F 에 대한 보조인자이다.
MDM2 대 p53 (E2F) 의 비율은 많은 암에 있어서 잘못되어 있다. 종종 일어나는 p16INK4/p19ARF 위치에서의 분자적인 결함은, 예를 들어, MDM2 단백질 분해에 영향을 주는 것으로 나타났다. 야생형 p53 가 있는 종양 세포에서의 MDM2-p53 상호작용의 억제는 p53 의 축적, 세포 주기 중단 및/또는 아폽토시스를 유도할 것이다. 따라서, MDM2 안타고니스트는, 단독제제로서 또는 광범위한 스펙트럼의 기타 항암 요법과 병용되어, 암 치료요법에 대한 신규한 접근법을 제공할 수 있다. 이러한 전략의 실행가능성은 MDM2-p53 상호작용의 억제를 위한 상이한 거대분자 도구들 (예를 들어, 항체, 안티센스 올리고뉴클레오티드, 펩티드) 의 이용으로 드러났다. MDM2 은 또한 p53 와 같은 보존성 결합 영역을 통해 E2F 에 결합하고 싸이클린 A 의 E2F-의존성 전사를 활성화시켜, MDM2 안타고니스트가 p53 돌연변이 세포에서 유효하다는 점을 시사했다.
MDM2 의 안타고니스트로서의 일련의 스피로인돌리논이 선행기술에서는 J. Am Chem. Soc., 2005, 127, 10130 및 2007 년 9 월 13 일에 공개된 US-2007-0213341-A1 에서 개시된 바 있다.
본 발명은 MDM2-p53 상호작용의 소분자 억제제인 스피로인돌리논 유도체를 제공한다. 무세포 및 세포기반 검정에서, 본 발명의 화합물은 MDM2 단백질과 p53-유사 펩티드와의 상호작용을 억제하는 것으로 제시된다. 세포기반 검정에서, 상기 화합물은 메카니즘적인 활성을 입증한다. 야생형 p53 이 있는 암 세포의 인큐베이션은 p53 단백질의 축적, p53-조절 p21 유전자의 유도, 및 G1 및 G2 기에서의 세포 주기 정지를 야기하고, 그 결과 시험관 내 야생형 p53 세포에 대항하여 강력한 항증식성 활성을 유도한다. 이와는 대조적으로, 상기 활성은 유사한 화합물 농도에서, 돌연변이 p53 이 있는 암 세포에서는 관찰되지 않았다. 따라서, MDM2 길항제의 활성은 이의 작용의 메카니즘과 관련이 있을 것이다. 이러한 화합물은 강력하고 선택적인 항암제가 될 수 있다.
본 발명의 상세한 설명
본 발명은 하기 화학식 I 의 스피로인돌리논, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 에스테르 또는 거울상이성질체에 관한 것이다:
Figure pct00002
[식 중,
X 는 F, Cl 또는 Br 이고,
Y 는 H 또는 F 이고,
V 는 F 또는 Cl 이고,
R1 은 Me, Et 또는 nPr 이고,
R2 는 OH, OMe 또는 NHSO2Me 이고,
W 는 F, Cl 또는 Br 임].
추가 바람직한 것은,
X 는 F, Cl 또는 Br 이고,
Y 는 H 이고,
V 는 F 또는 Cl 이고,
R1 은 Me 또는 Et 이고,
R2 는 OH 또는 NHSO2Me 이고,
W 는 Cl 인 화학식 I 의 화합물이다.
가장 바람직한 화합물은 하기 식의 것들이다:
라세미 (2'S, 3S, 4'R)-6-클로로-4'-[5-클로로-2-(1-메톡시카르보닐-1-메틸-에톡시)-피리딘-3-일]-2'-(5-플루오로-2-메틸-페닐) 스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온;
라세미 (2'S, 3S, 4'R)-6-클로로-4'-[5-클로로-2-(1-히드록시카르보닐-1-메틸-에톡시)-피리딘-3-일]-2'-(5-플루오로-2-메틸-페닐) 스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온;
키랄 (2'S, 3S, 4'R)-6-클로로-4'-[5-클로로-2-(1-히드록시카르보닐-1-메틸-에톡시)-피리딘-3-일]-2'-(5-플루오로-2-메틸-페닐) 스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온;
라세미 (2'S, 3S, 4'R)- 4'-[5-클로로-2-(2-메탄술포닐아미노-1,1-메틸-2-옥소-에톡시)-피리딘-3-일]-6-클로로-2'-(5-플루오로-2-메틸-페닐) 스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온;
키랄 (2'S, 3S, 4'R)- 4'-[5-클로로-2-(2-메탄술포닐아미노-1,1-메틸-2-옥소-에톡시)-피리딘-3-일]-6-클로로-2'-(5-플루오로-2-메틸-페닐) 스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온;
라세미 (2'S, 3S, 4'R)-6-클로로-4'-[5-클로로-2-(1-메톡시카르보닐-1-메틸-에톡시)-피리딘-3-일]-2'-(5-클로로-2-메틸-페닐) 스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온;
라세미 (2'S, 3S, 4'R)-6-클로로-4'-[5-클로로-2-(1-히드록시카르보닐-1-메틸-에톡시)-피리딘-3-일]-2'-(5-클로로-2-메틸-페닐) 스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온;
키랄 (2'S, 3S, 4'R)-6-클로로-4'-[5-클로로-2-(1-히드록시카르보닐-1-메틸-에톡시)-피리딘-3-일]-2'-(5-클로로-2-메틸-페닐) 스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온;
라세미 (2'S, 3S, 4'R)- 4'-[5-클로로-2-(2-메탄술포닐아미노-1,1-메틸-2-옥소-에톡시)-피리딘-3-일]-6-클로로-2'-(5-클로로-2-메틸-페닐)-스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온 및
키랄 (2'S, 3S, 4'R)- 4'-[5-클로로-2-(2-메탄술포닐아미노-1,1-메틸-2-옥소-에톡시)-피리딘-3-일]-6-클로로-2'-(5-클로로-2-메틸-페닐)-스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온.
본 명세서에서, 다양한 치환기로 표시된 기들은 저급 알킬, 저급-알케닐, 저급-알키닐, 디옥소-저급-알킬렌 (예컨대 벤조디옥실기를 형성), 할로겐, 히드록시, CN, CF3, NH2, N(H, 저급-알킬), N(저급-알킬)2, 아미노카르보닐, 카르복시, NO2, 저급-알콕시, 티오-저급-알콕시, 저급-알킬술포닐, 아미노술포닐, 저급-알킬카르보닐, 저급-알킬카르보닐옥시, 저급-알콕시카르보닐, 저급-알킬-카르보닐-NH, 플루오로-저급-알킬, 플루오로-저급-알콕시, 저급-알콕시-카르보닐-저급-알콕시, 카르복시-저급-알콕시, 카르바모일-저급-알콕시, 히드록시-저급-알콕시, NH2-저급-알콕시, N(H, 저급-알킬)-저급-알콕시, N(저급-알킬)2-저급-알콕시, 벤질옥시-저급-알콕시, 모노- 또는 디-저급 알킬 치환 아미노술포닐 및 할로겐, 히드록시, NH2, N(H, 저급-알킬) 또는 N(저급-알킬)2 로 임의 치환될 수 있는 저급-알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 1-5 개 또는, 바람직하게는, 1-3 개의 치환기로 치환될 수 있다. 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로사이클 환을 위한 바람직한 치환기는 할로겐, 저급 알콕시, 저급 알킬 및 아미노이다.
알킬, 알케닐, 알키닐 또는 유사한 기의 양쪽 말단이 모두 동일한 부분에 연결되는 경우, 시클릭 구조가 형성될 수 있고, 이때 상기 부분의 2 개의 수소가 알킬, 알케닐, 알키닐 또는 유사한 기의 2 개의 말단으로 대체되면, 시클릭 구조, 예컨대, 테트랄린, 마크로사이클 또는 스피로 화합물이 형성된다.
용어 "알킬" 은 탄소수 1 내지 약 20 인 직쇄 또는 분지쇄 포화 탄화수소기를 지칭한다. 특정 구현예에서, 알킬 치환기는 저급 알킬 치환기일 수 있다. 용어 "저급 알킬" 은 탄소수 1 내지 8, 특정 구현예에서는 탄소수 1 내지 4 인 알킬기를 지칭한다. 알킬기의 예로는, 비제한적으로, 메틸, 에틸, n-프로필, i-프로필, n-부틸, s-부틸, t-부틸, n-펜틸, 및 s-펜틸이 포함된다.
본원에서 사용된 바, "시클로알킬" 은 탄소 원자만으로 이루어지고, 어느 환이든 포화된, 임의의 안정한 단환 또는 다환계를 지칭하는 것으로 의도된다. 용어 "시클로알케닐" 은 탄소 원자만으로 이루어지고, 이의 하나 이상의 환이 부분적으로 불포화된, 임의의 안정한 단환 또는 다환계를 지칭하는 것으로 의도된다. 시클로알킬의 예로는, 비제한적으로, 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸, 아다만틸, 시클로옥틸, 비시클로옥탄, 예컨대 [2.2.2]비시클로옥탄 또는 [3.3.0]비시클로옥탄, 비시클로노난, 예컨대 [4.3.0]비시클로노난, 및 비시클로데칸, 예컨대 [4.4.0]비시클로데칸 (데칼린)을 포함하는 비시클로알킬, 또는 스피로 화합물이 포함된다. 시클로알케닐의 예로는, 비제한적으로, 시클로펜테닐 또는 시클로헥세닐이 포함된다.
본원에서 사용된 바, 용어 "알케닐" 은 1 개의 이중 결합을 함유하고, 탄소수 2 내지 8, 바람직하게는 2 내지 6 인 불포화 직쇄 또는 분지 지방족 탄화수소기를 의미한다. 상기 "알케닐기" 의 예는 비닐 (에테닐), 알릴, 이소프로페닐, 1-프로페닐, 2-메틸-1-프로페닐, 1-부테닐, 2-부테닐, 3-부테닐, 2-에틸-1-부테닐, 3-메틸-2-부테닐, 1-펜테닐, 2-펜테닐, 3-펜테닐, 4-펜테닐, 4-메틸-3-펜테닐, 1-헥세닐, 2-헥세닐, 3-헥세닐, 4-헥세닐 및 5-헥세닐이다.
본원에서 사용된 바, 용어 "알키닐" 은 1 개의 삼중 결합을 함유하고, 탄소수 2 내지 6, 바람직하게는 2 내지 4 인 불포화 직쇄 또는 분지 지방족 탄화수소기를 의미한다. "알키닐기" 의 예는 에티닐, 1-프로피닐, 2-프로피닐, 1-부티닐, 2-부티닐, 3-부티닐, 1-펜티닐, 2-펜티닐, 3-펜티닐, 4-펜티닐, 1-헥시닐, 2-헥시닐, 3-헥시닐, 4-헥시닐 및 5-헥시닐이다.
상기 정의에서 사용된 바, 용어 "할로겐" 은 불소, 염소, 요오드 또는 브롬, 바람직하게는 불소 및 염소를 의미한다.
"아릴" 은 1가, 모노시클릭 또는 비(bi)시클릭, 방향족 탄화수소 라디칼, 바람직하게는 6-10 원 방향족 환계를 의미한다. 바람직한 아릴기에는, 비제한적으로, 페닐, 나프틸, 톨릴, 및 자일릴이 포함된다.
"헤테로아릴" 은 2 개 이하의 환을 함유하는 방향족 헤테로시클릭 환계를 의미한다. 바람직한 헤테로아릴기에는, 비제한적으로, 티에닐, 푸릴, 인돌릴, 피롤릴, 피리디닐, 피라지닐, 옥사졸릴, 티아졸릴, 퀴놀리닐, 피리미디닐, 이미다졸릴 및 테트라졸릴이 포함된다.
아릴 또는 헤테로아릴이 비시클릭인 경우, 환 하나는 아릴일 수 있는 반면, 다른 하나는 헤테로아릴이고, 둘 모두는 치환 또는 비치환된다고 이해되어야 한다.
"헤테로사이클" 은 1 내지 3 개의 탄소 원자가 질소, 산소 또는 황 우너자로부터 선택된 헤테로 원자로 대체되는, 치환 또는 비치환 5 내지 8 원, 모노- 또는 비시클릭, 비(非)방향족 탄화수소를 의미한다. 예로는 피롤리딘-2-일; 피롤리딘-3-일; 피페리디닐; 모르폴린-4-일 등이 포함된다.
"헤테로 원자" 는 N, O 및 S 로부터 선택되는 원자를 의미한다.
"알콕시, 알콕실 또는 저급 알콕시" 는 산소 원자에 부착된 임의의 상기 저급 알킬기를 지칭한다. 통상적인 저급 알콕시기에는 메톡시, 에톡시, 이소프로폭시 또는 프로폭시, 부틸옥시 등이 포함된다. 나아가 알콕시의 의미에는 다중 알콕시 측쇄, 예컨대 에톡시 에톡시, 메톡시 에톡시, 메톡시 에톡시 에톡시 등 및 치환 알콕시 측쇄, 예컨대, 디메틸아미노 에톡시, 디에틸아미노 에톡시, 디메톡시-포스포릴 메톡시 등이 포함된다.
"약학적으로 허용가능한", 예컨대 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 등은 대상체에게 투여되는 특별한 화합물이 약리학적으로 허용가능하고 실질적으로 무독성인 것을 의미한다.
"약학적으로 허용가능한 염" 은 생물학적 유효성 및 본 발명의 화합물의 특성을 유지하고, 적합한 무독성 유기 또는 무기 산 또는 유기 또는 무기 염기로부터 형성되는, 통상적인 산-부가 염 또는 염기-부가 염을 지칭한다. 표본적인 산-부가 염에는 무기산, 예컨대 염산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 황산, 술팜산, 인산 및 질산으로부터 유래한 것들, 및 유기산, 예컨대 p-톨루엔술폰산, 살리실산, 메탄술폰산, 옥살산, 숙신산, 시트르산, 말산, 락트산, 푸마르산, 트리플루오로아세트산 등으로부터 유래한 것들이 포함된다. 표본적인 염기-부가 염에는 암모늄, 칼륨, 나트륨 및, 4차 수산화암모늄, 예컨대 예를 들어, 테트라메틸수산화암모늄으로부터 유래한 것들이 포함된다. 약학적 화합물 (즉 약물)의 염으로의 화학적 변형은 화합물의 향상된 물리적 및 화학적 안정성, 흡수성, 유동성 및 용해성을 수득하기 위해 약학화학자에게 널리 공지된 기술이다. 예컨대, [Ansel 외, Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery systems (6th Ed. 1995), pp. 196 및 1456-1457]를 참조한다.
식 I 의 화합물 및 이의 염은 하나 이상의 비대칭 탄소 원자를 갖기 때문에, 라세미 혼합물 또는 상이한 입체이성질체로서 존재할 수 있다. 다양한 이성질체는 공지된 분리 방법, 예컨대, 크로마토그래피에 의해 단리될 수 있다. 본 발명은 모든 입체이성질체를 포함한다.
본 발명의 화합물은 세포 증식성 장애, 특히는 종양학적 장애의 치료 또는 제어에서 유용하다. 이러한 화합물 및 상기 화합물을 함유하는 제형물은 고형 종양, 예컨대, 예를 들어, 유방, 결장, 폐 및 전립선 종양의 치료 또는 제어에 유용할 수 있다.
본 발명에 따른 화합물의 치료적 유효량은 질환의 증상을 예방, 경감 또는 개선하거나 치료되는 대상체의 생존을 연장시키는데 효과적인 화합물의 양을 의미한다. 치료적 유효량의 결정은 당업자의 재량이다.
본 발명에 따른 화합물의 치료적 유효량 또는 투여량은 넓은 범위 내에서 다양화될 수 있고, 당업계에 공지된 방식으로 결정될 수 있다. 상기 투여량은 투여되는 특정한 화합물(들), 투여 경로, 치료되는 상태, 및 치료되는 환자를 포함하는, 각각의 특별한 경우에 있어서의 개별적인 요구량에 따라 조정될 것이다. 지시되는 경우, 상한이 초과될 수 있지만, 일반적으로는, 체중이 대략 70 Kg 인 성인에 대한 경구 또는 비경구 투여의 경우, 약 10 mg 내지 약 10,000 mg, 바람직하게는 약 200 mg 내지 약 1,000 mg 의 1일 투여량이 적당할 것이다. 상기 1일 투여량은 단일 용량 또는 분할된 용량으로서 투여될 수 있고, 또는 비경구 투여를 위해, 이는 연속 주입으로서 제공될 수 있다.
본 발명의 제형물에는 경구, 비강, 국소적 (구강 및 설하 포함), 직장, 질 및/또는 비경구 투여를 위해 적합한 것들이 포함된다. 상기 제형물은 용이하게는 단위 투여량 형태로 제시될 수 있고, 약학 업계에 널리 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 단일 투여량 형태를 제조하기 위해 담체 물질과 조합될 수 있는 활성 성분의 양은 치료되는 숙주, 및 특별한 투여 방식에 따라 달라질 것이다. 단일 투여량 형태를 제조하기 위해 담체 물질과 조합될 수 있는 활성 성분의 양은 일반적으로 치료적 효과를 생성하는 식 I 또는 II 또는 III 의 화합물의 양일 것이다. 일반적으로는, 상기 양은 100 % 중에서, 활성 성분이 약 1 % 내지 약 99 %, 바람직하게는 약 5 % 내지 약 70 %, 가장 바람직하게는 약 10 % 내지 약 30 % 범위일 것이다.
상기 제형물 또는 조성물의 제조 방법에는 본 발명의 화합물을 담체 및, 임의로는, 하나 이상의 보조 성분과 조합하는 단계가 포함된다. 일반적으로는, 상기 제형물은 본 발명의 화합물을 액체 담체, 또는 미분된 고체 담체, 또는 둘 모두와 균일하게 및 철저하게 조합한 후, 필요한 경우, 상기 생성물을 성형하여 제조된다.
경구 투여에 적합한 본 발명의 제형물은 캡슐, 카세제, 샤세(sachet), 환약, 정제, 로젠지 (통상적으로는 수크로오스 및 아카시아 또는 트래거캔스인 풍미 베이스를 사용), 분말, 과립, 또는 수성 또는 비-수성 액체 중의 용액 또는 현탁액, 또는 수중유 또는 유중수 액체 에멀젼, 또는 엘릭시르 또는 시럽, 또는 향정 (pastille) (젤라틴 및 글리세린, 또는 수크로오스 및 아카시아와 같은 불활성 베이스 사용) 및/또는 구강세정제 등의 형태일 수 있고, 이들은 각각 활성 성분으로서 소정량의 본 발명의 화합물을 함유한다. 본 발명의 화합물은 또한 볼루스, 연약(electuary) 또는 페이스트로서 투여될 수 있다.
"유효량" 은 질환의 증상을 예방, 경감 또는 개선하거나 치료되는 대상체의 생존을 연장시키는데 효과적인 양을 의미한다.
"IC50" 은 측정되는 특정 활성의 50% 를 억제하는데 요구되는 특정 화합물의 농도를 지칭한다. IC50 은, 특히, 이후에 기술되는 바와 같이 측정될 수 있다.
"약학적으로 허용가능한 에스테르" 는 카르복실기 또는 히드록시기를 갖는 통상적으로 에스테르화된 식 I 의 화합물을 지칭하고, 이때 에스테르는 생물학적 유효성 및 식 I 의 화합물의 특성을 유지하고, 생체 내 (유기체 내)에서 해당 활성 카르복실산 또는 알코올로 각각 절단된다.
합성
화학식 I 의 본 발명의 화합물을 하기 일반 반응식에 따라 합성할 수 있다. 화학식 I 의 화합물이 일반적인 합성 경로에서의 시약 또는 제제의 대체에 의해 제조될 수 있다는 것은 당업계의 통상의 기술자에게 이의 없이 명백할 것이다. 키랄 크로마토그래피에 의한 정제를 사용하여, 화학식 I 의 화합물을 광학적으로 순수한 또는 강화된 거울상이성질체로서 수득할 수 있다.
반응식 1
Figure pct00003
일반적으로는, 적절하게 선택된 알데히드 I 을 원-팟(one-pot), 다단계 방식으로, 리튬 헥사메틸디실라미드, 클로로트리알킬실란 및 아세틸 클로라이드와 반응시켜, 2-아자-1,3-부타디엔 II (반응식 I) 를 생성하고, 미정제 생성물로서 사용할 수 있다. Ghosez, L. 등은 아자(aza) Diels-Alder 반응을 사용하여 헤테로사이클을 형성하는, 2-아자-1,3-부타디엔의 제조 및 이의 용도를 보고하였다 (참고문헌: [Tetrahedron 1995, 11021; J. Am. Chem. Soc. 1999, 2617]; 및 여기에 참조된 문헌). 상기 적절하게 선택된 알데히드 I 은 시판되거나 다수의 확립된 문헌 방법에 의해 합성될 수 있다.
반응식 2
Figure pct00004
옥신돌 III 을 염기 존재 하에서, 가열 조건 하에서, 양성자성 용매, 예컨대 메탄올, 에탄올 또는 비(非)양성자성 용매, 예컨대 톨루엔, o-자일렌 중에서, 적절하게 치환된 알데히드와 반응시켜, 중간체 IV 를 수득할 수 있다. 통상적으로 사용되는 염기는 피롤리딘 또는 피페리딘이다. 중간체 IV 를 보호화하여, 중간체 V 를 수득할 수 있다. 보호기 (Pg) 를, 확립된 문헌 절차에 따라, 에틸 클로로포르메이트, 디-tert-부틸 디카르보네이트, SEM-Cl, 벤질 브로마이드, 및 염기, 예컨대 4-(디메틸아민)피리딘 (DMAP), 트리에틸아민, NaH, 또는 LiH 를 사용하여 부착할 수 있다. 보호기 형성 및 이의 탈보호화의 예는 [Greene, T.W. 외 "Protective Groups in Organic Synthesis, 2nd Edition. John Wiley & Sons Inc]에 기술 및 철저히 검토되어 있다.
반응식 3
Figure pct00005
중간체 V 를 톨루엔 또는 o-자일렌 중에서, 110 ℃ 내지 160 ℃ 로 가열, 및 무수 조건 하에서, 반응식 1 에서 제조된, 선택된 2-아자-부타디엔 II 와 반응시켜, 중간체 VII 및 VII' 를 2 가지 거울상체의 라세미 혼합물로서 나타나는 주 생성물로서 형성할 수 있다. 보호기 (Pg)를 제거하기 위한 다음 반응을 수행하여, 각종 R2 유도체화된 화합물 VIII 및 VIII' 를 수득한다 (반응식 3). Pg 가 Boc 기인 경우, Boc 기를 트리플루오로아세트산에 의해 또는 트리플루오로아세트산 없이 V 와 II 간 아자 Diels-Alder 반응 동안 110 내지 116 ℃ 의 온도에서 지속적인 가열을 통해 제거할 수 있다. VII 및 VII' 또는 VIII 및 VIII' 의 라세미 혼합물을 키랄 수퍼 플루이드 크로마토그래피(Super Fluid Chromatography (SFC)) 또는 키랄 HPLC 또는 키랄 컬럼 크로마토그래피에 의해 2 가지 키랄 거울상체로 용이하게 분리할 수 있다.
반응식 4
Figure pct00006
반응식 2 에서의 중간체 VI 를, 알데히드 X, 및 시약 IX, K2CO3 또는 Cs2CO3 와 같은 염기를 무수 N,N-디메틸포름아미드 중 가열 조건 하에서 처리하여 제조할 수 있다 (반응식 4). 알데히드 X 및 시약 IX 은 시중에서 입수가능하거나, 또는 문헌 절차에서 성립된 방법에 따라 제조할 수 있다. 유사체 XI 및 XII 를 반응식 5 에 예시된 방법에 따라 제조한다.
화합물 VIII 를 산 XI 로 가수분해 한 다음 익히 공지되어 있는 방법을 이용하는 커플링 반응시켜 유사체 XII 를 수득한다. R3 이 메틸기가 아닌 경우, XI 는 유사체 XIII 로 전환할 수 있다.
반응식 5
Figure pct00007
본 발명의 추가 구현은, 일반 반응식 1 내지 5 에 따르는 화학식 (I) 의 화합물의 합성 방법과 관련된다.
하기 실시예 및 참조는 본 발명의 이해를 돕기 위해 제공하는 것으로, 이의 참 범위는 첨부된 청구항에 따른다.
실시예 1
중간체 3-브로모-5-클로로-피리딘-2-올의 제조
Figure pct00008
M.W. 208.44 C5H3BrClNO
실온에서, 브롬 (1.2 mL, 24 mmol) 을 5-클로로-2-피리디놀 (2.9 g, 20 mmol) 의 빙초산 (25 mL) 중 용액에 적가하였다. 실온에서 하룻밤 교반한 후, 에틸 아세테이트 및 물을 첨가했다. 유기층을 물로 세정하고, 건조 및 농축하였다. 잔류물을 디에틸 에테르로 분쇄하고 (trituration), 침전물을 여과하고 건조시켜 표제 화합물을 수득했다 (1.5 g).
실시예 2
중간체 5-클로로-2-히드록시-피리딘-3-카르브알데히드의 제조
Figure pct00009
M.W. 157.56 C6H4ClNO2
아르곤 분위기 하 NaH (0.22 g, 오일 중 60% 분산, 5.5 mmol) 의 무수 THF (20 mL) 중 현탁액에, 3-브로모-5-클로로-피리딘-2-올 (1.03 g, 5 mmol) 를 분할하여 첨가했다. 수소 발생이 멈춘 후, 혼합물을 -78℃ 로 냉각하고, tert-부틸 리튬 (10 mmol) 을, 온도가 -65℃ 를 넘게 상승하지 않는 비율로 첨가했다. 혼합물을 5 분 동안 교반한 다음 DMF (15 mmol) 를 -50℃ 미만의 온도를 유지하면서 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 가온되게 하고, 에틸 아세테이트와 1N HCl 로 분배하였다 (partition). 유기층을 분리하고, 포화 NaCl 로 세정, 무수 Na2SO4로 건조, 여과 및 농축하여 표제 화합물을 수득했다 (300 mg).
실시예 3
중간체 2-(5-클로로-3-포르밀-피리딘-2-일옥시)-2-메틸-프로피온산메틸 에스테르의 제조
Figure pct00010
M.W. 257.68 C11H12ClNO4
5-클로로-2-히드록시-피리딘-3-카르브알데히드 (8 g, 51 mmol), 2-브로모-2-메틸-프로피온산메틸 에스테르 (27.6 g, 153 mol), Cs2CO3 (28 g, 86.7 mol) 의 DMF (80 mL) 중 혼합물을, 126℃ 에서 3 시간 동안 가열했다. 실온으로 냉각한 후, 혼합물을 물에 붓고 EtOAc 로 추출했다. 유기층을 물 및 염수 (brine) 으로 세정하고, 건조 및 농축했다. 잔류물을 플래시 컬럼으로 정제하여, 표제 화합물을 수득했다 (6.2 g).
실시예 4
중간체 E/Z-2-[5-클로로-3-(6-클로로-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-3-일리덴메틸)-피리딘-2-일옥시]-2-메틸-프로피온산메틸 에스테르의 제조
Figure pct00011
M.W. 407.26 C19H16Cl2N2O4
6-클로로옥신돌 (4.9 g, 29.3 mmol) 및 2-(5-클로로-3-포르밀-피리딘-2-일옥시)-2-메틸-프로피온산메틸 에스테르 (7.2 g, 28 mmol) 의 메탄올 (50 mL) 중 혼합물에, 피롤리딘 (2.3 mL, 28 mmol) 을 적가했다. 이후, 혼합물을 70 ℃ 에서 1 시간 동안 가열했다. 실온으로 냉각시킨 후, 혼합물을 여과하고 침전물을 수집하고, 건조시켜 표제 화합물을 황색 고체로서 수득했다 (9 g).
실시예 5
중간체 E/Z-6-클로로-3-[5-클로로-2-(1-메톡시카르보닐-1-메틸-에톡시)-피리딘-3-일메틸렌]-2-옥소-2,3-디히드로-인돌-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르의 제조
Figure pct00012
M.W. 507.37 C24H24Cl2N2O6
실온에서, E/Z-2-[5-클로로-3-(6-클로로-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-3-일리덴메틸)-피리딘-2-일옥시]-2-메틸-프로피온산메틸 에스테르 (9 g, 0.022 mol) 의 디클로로메탄 (100 mL) 중 용액에, 디-tert-부틸-디카르보네이트 (5.3 g, 0.024 mol) 를 첨가한 후, 4-디메틸아미노피리딘 (1 g, 0.008 mol) 을 첨가했다. 실온에서 0.5 시간 동안 교반한 후, 혼합물을 농축했다. 잔류물을 플래시 컬럼으로 정제하여 표제 화합물을 수득했다 (11 g).
실시예 6
중간체 1-(5-플루오로-2-메틸페닐)-3-트리메틸실리옥시-2-아자-1,3-부타디엔의 제조
Figure pct00013
M.W. 251.38 C13H18FNOSi
질소 하 실온에서 1,1,1,3,3,3-헥사메틸디실라잔 (2.18 mL, 10.5 mmol) (Aldrich) 에, n-부틸리튬 (2.5 M, 4.2 mL, 10.5 mmol) (Aldrich) 을 첨가했다. 반응 혼합물을 실온에서 10 분 동안 교반했다. 이어서, 건조 테트라히드로푸란 (30 mL) 을 첨가한 후, 5-플루오로-2-메틸-벤즈알데히드 (1.38 g, 10 mmol) (Platte) 를 첨가했다. 혼합물을 실온에서 0.5 시간 동안 교반한 후, 트리메틸실릴 클로라이드 (1.33 mL, 10.5 mmol) (Aldrich) 를 적가했다. 이어서, 혼합물의 온도를 냉각 얼음 조 (bath) 상에서 0℃ 로 낮췄다. 상기 혼합물에, 트리에틸아민 (1.9 mL, 13.6 mmol) 을 1 분량으로 첨가한 다음, 아세틸 클로라이드 (0.97 mL, 13.6 mmol) 의 디에틸 에테르 (50 mL) 중 용액을 적가했다. 냉각조를 제거하고, 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반했다. 혼합물을 재빨리 셀라이트 상 질소 하에서 여과하고, 여과물을 감압하에서 농축하여 미정제 1-(5-플루오로-2-메틸페닐)-3-트리메틸실리옥시-2-아자-1,3-부타디엔을 황색 검 (gum) 으로서 수득하고, 이를 추가 정제하지 않고 다음 단계에 사용했다.
실시예 7
라세미 (2'S, 3S, 4'R)-6-클로로-4'-[5-클로로-2-(1-메톡시카르보닐-1-메틸-에톡시)-피리딘-3-일]-2'-(5-플루오로-2-메틸-페닐) 스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온의 제조
Figure pct00014
M.W. 586.45 C29H26Cl2FN3O5
1-(5-플루오로-2-메틸-페닐)-3-트리메틸실리옥시-2-아자-1,3-부타디엔 (18 mmol) 의 톨루엔 용액 (50 mL) 에, E/Z-6-클로로-3-[5-클로로-2-(1-메톡시카르보닐-1-메틸-에톡시)-피리딘-3-일메틸렌]-2-옥소-2,3-디히드로-인돌-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (3 g, 6 mmol) 를 첨가했다. 이어서, 반응 혼합물을 130℃ 에서 2 시간 동안 가열했다. 용액을 실온으로 냉각시킨 후, 메탄올을 첨가한 다음 혼합물을 농축했다. 이어서, 트리플루오로아세트산 (10 mL) 및 디클로로메탄 (30 mL) 의 혼합물을 첨가했다. 반응 혼합물을 실온에서 10 분 동안 교반했다. 용액을 농축하고, 잔류물을 Prep-HPLC 로 정제하여, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득했다 (170 mg).
m/z (M+H)+: 586
실시예 8
라세미 (2'S, 3S, 4'R)-6-클로로-4'-[5-클로로-2-(1-히드록시카르보닐-1-메틸-에톡시)-피리딘-3-일]-2'-(5-플루오로-2-메틸-페닐) 스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온의 제조
Figure pct00015
M.W. 572.418 C28H24Cl2FN3O5
라세미 (2'S, 3S, 4'R)-6-클로로-4'-[5-클로로-2-(1-메톡시카르보닐-1-메틸-에톡시)-피리딘-3-일]-2'-(5-플루오로-2-메틸-페닐) 스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온 (160 mg, 0.27 mmol), LiOH.H2O (250 mg, 5.94 mol), H2O (5 mL) 및 메탄올 (15 mL) 의 혼합물을 80℃ 에서 40 분 동안 가열했다. 실온으로 냉각시킨 후, 용액을 1N HCl 용액을 첨가하여 "pH" 1 로 산성화하였다. 수성층을 EtOAc 로 추출했다. 유기층을 물, 염수로 세정하고, 무수 Na2SO4 로 건조하고, 농축하여 표제 화합물을 담황색 고체로서 수득했다 (140 mg).
m/z (M+H)+: 572
실시예 9
키랄 (2'S, 3S, 4'R)-6-클로로-4'-[5-클로로-2-(1-히드록시카르보닐-1-메틸-에톡시)-피리딘-3-일]-2'-(5-플루오로-2-메틸-페닐) 스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온의 제조
Figure pct00016
M.W. 572.418 C28H24Cl2FN3O5
라세미 (2'S, 3S, 4'R)-6-클로로-4'-[5-클로로-2-(1-히드록시카르보닐-1-메틸-에톡시)-피리딘-3-일]-2'-(5-플루오로-2-메틸-페닐) 스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온 (50 mg) 로부터의 두 거울상이성질체의 분리를, 키랄 SFC 로 수행하여, 키랄 (2'S, 3S, 4'R)-6-클로로-4'-[5-클로로-2-(1-히드록시카르보닐-1-메틸-에톡시)-피리딘-3-일]-2'-(5-플루오로-2-메틸-페닐) 스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온을 백색 고체 (11 mg) 및 키랄 (2'R, 3R, 4'S)-6-클로로-4'-[5-클로로-2-(1-히드록시카르보닐-1-메틸-에톡시)-피리딘-3-일]-2'-(5-플루오로-2-메틸-페닐) 스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온을 백색 고체 (10 mg) 로서 수득했다.
m/z (M+H)+: 572
실시예 10
라세미 (2'S, 3S, 4'R)- 4'-[5-클로로-2-(2-메탄술포닐아미노-1,1-메틸-2-옥소-에톡시)-피리딘-3-일]-6-클로로-2'-(5-플루오로-2-메틸-페닐) 스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온의 제조
Figure pct00017
M.W 649.52 C29H27Cl2FN4O6S
실시예 8 에서 제조한 라세미 (2'S, 3S, 4'R)-6-클로로-4'-[5-클로로-2-(1-히드록시카르보닐-1-메틸-에톡시)-피리딘-3-일]-2'-(5-플루오로-2-메틸-페닐) 스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온 (100 mg, 0.17 mmol) 및 CDI (57 mg, 0.35 mmol) 의 DMF (1 mL) 중 용액을 60℃ 에서 2 시간 동안 가열했다. 이어서, 상기 용액에, 실온에서 2 시간 동안 교반했던, 메탄술폰아미드 (129.2 mg, 1.36 mmol) 및 NaH (54.4 mg, 60%, 1.36 mmol) 의 DMF (2 mL) 중 혼합물을 첨가하였다. 수득한 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반한 후, 이를 물에 붓고 수성 용액을, 진한 염산을 첨가하여 "pH" 1-2 로 산성화하였다. 수성 상을 EtOAc 로 2 회 추출한 후, 조합된 유기상을 무수 Na2SO4 로 건조, 농축하고, 잔류물을 플래시 컬럼으로 정제하여 표제 화합물을 백색 고체로서 수득했다 (80 mg).
m/z (M+H)+: 649
실시예 11
키랄 (2'S, 3S, 4'R)- 4'-[5-클로로-2-(2-메탄술포닐아미노-1,1-메틸-2-옥소-에톡시)-피리딘-3-일]-6-클로로-2'-(5-플루오로-2-메틸-페닐) 스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온의 제조
Figure pct00018

M.W 649.52 C29H27Cl2FN4O6S
라세미 (2'S, 3S, 4'R)- 4'-[5-클로로-2-(2-메탄술포닐아미노-1,1-메틸-2-옥소-에톡시)-피리딘-3-일]-6-클로로-2'-(5-플루오로-2-메틸-페닐)-스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온 (50 mg) 로부터 두 거울상이성질체를 분리하는 것을 키랄 SFC 를 통해 수행하여, 키랄 (2'S, 3S, 4'R)- 4'-[5-클로로-2-(2-메탄술포닐아미노-1,1-메틸-2-옥소-에톡시)-피리딘-3-일]-6-클로로-2'-(5-플루오로-2-메틸-페닐)-스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온을 백색 고체로서 (19 mg) 및 키랄 (2'R, 3R, 4'S)- 4'-[5-클로로-2-(2-메탄술포닐아미노-1,1-메틸-2-옥소-에톡시)-피리딘-3-일]-6-클로로-2'-(5-플루오로-2-메틸-페닐)-스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온을 백색 고체로서 (18 mg) 수득했다.
m/z (M+H)+: 649
실시예 12
중간체 1-(5-클로로-2-메틸-페닐)-3-트리메틸실리옥시-2-아자-1,3-부타디엔의 제조
Figure pct00019
M.W. 281.86 C14H20ClNOSi
건조 테트라히드로푸란 (100 mL) 에, LiHMDS (97 mmol, 97 mL) 의 1M THF 용액을 Ar 하 실온에서 첨가한 후, 5-클로로-2-메틸-벤즈알데히드 (15 g, 97 mmol) 를 첨가했다. 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반한 후, 트리메틸실릴 클로라이드 (12.3 mL, 97 mmol) 를 적가했다. 이어서, 혼합물의 온도를 냉각 얼음 조 상에서 0℃ 로 낮췄다. 상기 혼합물에, 트리에틸아민 (17.6 mL, 126 mmol) 을 1 회 분할로 첨가한 후, 아세틸 클로라이드 (9 mL, 126 mmol) 의 디에틸 에테르 (200 mL) 중 용액을 적가했다. 냉각 조를 제거하고, 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반했다. 혼합물을 셀라이트 상 질소 하에서 재빨리 여과하고, 여과물을 감압하에서 농축하여, 미정제 1-(5-클로로-2-메틸-페닐)-3-트리메틸실리옥시-2-아자-1,3-부타디엔을 황색 검으로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에 사용했다.
실시예 13
라세미 (2'S, 3S, 4'R)-6-클로로-4'-[5-클로로-2-(1-메톡시카르보닐-1-메틸-에톡시)-피리딘-3-일]-2'-(5-클로로-2-메틸-페닐) 스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온의 제조
Figure pct00020
M.W. 602.91 C29H26Cl3N3O5
실시예 8 에 기술된 방법과 유사한 방식으로, 실시예 5 에서 제조한 E/Z-6-클로로-3-[5-클로로-2-(1-메톡시카르보닐-1-메틸-에톡시)-피리딘-3-일메틸렌]-2-옥소-2,3-디히드로-인돌-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (3 g, 6 mmol) 를, 톨루엔 중 1-(5-클로로-2-메틸페닐)-3-트리메틸실리옥시-2-아자-1,3-부타디엔 (17 mmol) 다음 디클로로메탄 중 트리플루오로아세트산과 반응시켜 표제 화합물을 백색 고체로서 수득했다 (200 mg).
m/z (M+H)+: 602
실시예 14
라세미 (2'S, 3S, 4'R)-6-클로로-4'-[5-클로로-2-(1-히드록시카르보닐-1-메틸-에톡시)-피리딘-3-일]-2'-(5-클로로-2-메틸-페닐) 스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온의 제조
Figure pct00021
M.W. 588.88 C28H24Cl3N3O5
라세미 (2'S, 3S, 4'R)-6-클로로-4'-[5-클로로-2-(1-메톡시카르보닐-1-메틸-에톡시)-피리딘-3-일]-2'-(5-클로로-2-메틸-페닐) 스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온 (200 mg, 0.33 mmol), LiOH.H2O (280 mg, 6.6 mmol), H2O (5 mL) 및 메탄올 (15 mL) 의 혼합물을, 80℃ 에서 40 분 동안 가열했다. 실온으로 냉각시킨 후, 용액을 1N HCl 용액을 첨가하여 "pH" 1 로 산성화하였다. 수성층을 EtOAc 로 추출했다. 유기층을 물, 염수로 세정하고, 무수 Na2SO4 로 건조하고, 농축하여, 표제 화합물을 담황색 고체로서 수득했다 (200 mg).
m/z (M+H)+: 588
실시예 15
키랄 (2'S, 3S, 4'R)-6-클로로-4'-[5-클로로-2-(1-히드록시카르보닐-1-메틸-에톡시)-피리딘-3-일]-2'-(5-클로로-2-메틸-페닐) 스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온의 제조
Figure pct00022
M.W. 588.88 C28H24Cl3N3O5
라세미 (2'S, 3S, 4'R)-6-클로로-4'-[5-클로로-2-(1-히드록시카르보닐-1-메틸-에톡시)-피리딘-3-일]-2'-(5-클로로-2-메틸-페닐) 스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온 (60 mg) 으로부터 두 거울상이성질체를 분리하는 것을, 키랄 SFC 로서 수행하여, 키랄 (2'S, 3S, 4'R)-6-클로로-4'-[5-클로로-2-(1-히드록시카르보닐-1-메틸-에톡시)-피리딘-3-일]-2'-(5-클로로-2-메틸-페닐) 스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온을 백색 고체로서 (20 mg) 및 키랄 (2'R, 3R, 4'S)-6-클로로-4'-[5-클로로-2-(1-히드록시카르보닐-1-메틸-에톡시)-피리딘-3-일]-2'-(5-클로로-2-메틸-페닐) 스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온을 백색 고체로서 (21 mg) 수득했다.
m/z (M+H)+: 588
실시예 16
라세미 (2'S, 3S, 4'R)- 4'-[5-클로로-2-(2-메탄술포닐아미노-1,1-메틸-2-옥소-에톡시)-피리딘-3-일]-6-클로로-2'-(5-클로로-2-메틸-페닐)-스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온의 제조
Figure pct00023
M.W 665.98 C29H27Cl3N4O6S
실시예 14 에서 제조한 라세미 (2'S, 3S, 4'R)-6-클로로-4'-[5-클로로-2-(1-히드록시카르보닐-1-메틸-에톡시)-피리딘-3-일]-2'-(5-클로로-2-메틸-페닐) 스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온 (100 mg, 0.17 mmol) 및 CDI (57 mg, 0.35 mmol) 의 DMF (1 mL) 중 용액을 60℃ 에서 2 시간 동안 가열했다. 이어서, 상기 용액에, 실온에서 2 시간 동안 교반한, 메탄술폰아미드 (129.2 mg, 1.36 mmol) 및 NaH (54.4 mg, 60%, 1.36 mmol) 의 DMF (2 mL) 중 혼합물을 첨가했다. 수득한 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반한 후, 이것을 물에 부어, 수성 용액을 진한 염산을 첨가함으로써 "pH" 1-2 로 산성화하였다. 수성 상을 EtOAc 로 2 회 추출하고, 조합된 유기 상을 무수 Na2SO4 로 건조, 농축하고, 잔류물을 플래시 컬럼으로 정제하여, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득했다 (80 mg).
m/z (M+H)+: 665
실시예 17
키랄 (2'S, 3S, 4'R)- 4'-[5-클로로-2-(2-메탄술포닐아미노-1,1-메틸-2-옥소-에톡시)-피리딘-3-일]-6-클로로-2'-(5-클로로-2-메틸-페닐)-스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온의 제조
Figure pct00024
M.W 665.98 C29H27Cl3N4O6S
라세미 (2'S, 3S, 4'R)- 4'-[5-클로로-2-(2-메탄술포닐아미노-1,1-메틸-2-옥소-에톡시)-피리딘-3-일]-6-클로로-2'-(5-클로로-2-메틸-페닐)-스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온 (50 mg) 으로부터 두 거울상이성질체를 분리하는 것을, 키랄 SFC 로써 수행하여, 키랄 (2'S, 3S, 4'R)- 4'-[5-클로로-2-(2-메탄술포닐아미노-1,1-메틸-2-옥소-에톡시)-피리딘-3-일]-6-클로로-2'-(5-클로로-2-메틸-페닐)-스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온을 백색 고체 (19 mg) 로서, 및 키랄 (2'R, 3R, 4'S)- 4'-[5-클로로-2-(2-메탄술포닐아미노-1,1-메틸-2-옥소-에톡시)-피리딘-3-일]-6-클로로-2'-(5-클로로-2-메틸-페닐)-스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온을 백색 고체로서 (18 mg) 수득하였다.
m/z (M+H)+: 665
실시예 18
시험관 내 활성 검정
p53 및 MDM2 단백질 사이의 상호작용을 억제하는 화합물의 능력을 재조합 GST-태그 MDM2 가 p53 의 MDM2-상호작용 부위와 유사한 펩티드와 결합하는, HTRF (균일 시간-분해 형광(homogeneous time-resolved fluorescence)) 검정으로 측정하였다 (Lane 외). GST-MDM2 단백질과 p53-펩티드 (이의 N-말단 끝이 비오티닐화됨)의 결합을 유로퓸 (Eu)-라벨 항-GST 항체와 스트렙타비딘(streptavidin)-공액 알로피코시아닌(Allophycocyanin) (APC) 사이에서의 FRET (형광 공명 에너지 전이) 로 기록하였다.
시험은 흑색 평면바닥 384-웰 플레이트 (Costar) 내에서, 90 nM 비오티닐화 펩티드, 160 ng/ml GST-MDM2, 20 nM 스트렙타비딘-APC (PerkinElmerWallac), 2 nM Eu-라벨 항-GST-항체 (PerkinElmerWallac), 0.2% 소혈청 알부민 (BSA), 1 mM 디티오트레이톨 (DTT) 및 20 mM 트리스-보레이트 식염수 (TBS) 완충액을 함유하는, 총 부피 40 μL 로 하기와 같이 수행하였다: 반응 완충액 중의 10 μL 의 GST-MDM2 (640 ng/ml 작동 용액)를 각각의 웰에 첨가하였다. 10 μL 희석 화합물 (반응 완충액 중에 1:5 로 희석)을 각각의 웰에 첨가하고, 진탕하여 혼합하였다. 반응 완충액 중의 20 μL 비오티닐화 p53 펩티드 (180 nM 작동 용액)를 각각의 웰에 첨가하고, 진탕기 상에서 혼합하였다. 37 ℃ 에서 1 시간 동안 인큐베이션하였다. 0.2% BSA 가 함유된 TBS 완충액 중의, 20 μL 의 스트렙타비딘-APC 및 Eu-항-GST 항체 혼합물 (6 nM Eu-항-GST 및 60 nM 스트렙타비딘-APC 작동 용액)을 첨가하고, 실온에서 30 분 동안 진탕하고, TRF-가능 플레이트 판독기를 사용하여 665 및 615 nm 에서 판독하였다 (Victor 5, Perkin ElmerWallac). 달리 명시되지 않는 한, 시약들은 Sigma Chemical Co. 에서 구입하였다.
본 발명의 생물학적 활성을 나타내는 IC50 은 약 10 μM 미만의 활성을 나타냈다.
생물학적 값의 예는 하기와 같다:
실시예 IC 50 (μM, 0.02%BSA)
8 0.145
9 0.108
11 0.135
15 0.056

Claims (8)

  1. 하기 화학식 I 의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 에스테르 또는 거울상이성질체:
    Figure pct00025

    [식 중,
    X 는 F, Cl 또는 Br 이고,
    Y 는 H 또는 F 이고,
    V 는 F 또는 Cl 이고,
    R1 은 Me, Et 또는 nPr 이고,
    R2 는 OH, OMe 또는 NHSO2Me 이고,
    W 는 F, Cl 또는 Br 임].
  2. 제 1 항에 있어서,
    X 는 F, Cl 또는 Br 이고,
    Y 는 H 이고,
    V 는 F 또는 Cl 이고,
    R1 는 Me 또는 Et 이고,
    R2 는 OH 또는 NHSO2Me 이고,
    W 는 Cl 인 화합물.
  3. 제 1 항에 있어서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물:
    라세미 (2'S, 3S, 4'R)-6-클로로-4'-[5-클로로-2-(1-메톡시카르보닐-1-메틸-에톡시)-피리딘-3-일]-2'-(5-플루오로-2-메틸-페닐) 스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온;
    라세미 (2'S, 3S, 4'R)-6-클로로-4'-[5-클로로-2-(1-히드록시카르보닐-1-메틸-에톡시)-피리딘-3-일]-2'-(5-플루오로-2-메틸-페닐) 스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온;
    키랄 (2'S, 3S, 4'R)-6-클로로-4'-[5-클로로-2-(1-히드록시카르보닐-1-메틸-에톡시)-피리딘-3-일]-2'-(5-플루오로-2-메틸-페닐) 스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온;
    라세미 (2'S, 3S, 4'R)- 4'-[5-클로로-2-(2-메탄술포닐아미노-1,1-메틸-2-옥소-에톡시)-피리딘-3-일]-6-클로로-2'-(5-플루오로-2-메틸-페닐) 스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온;
    키랄 (2'S, 3S, 4'R)- 4'-[5-클로로-2-(2-메탄술포닐아미노-1,1-메틸-2-옥소-에톡시)-피리딘-3-일]-6-클로로-2'-(5-플루오로-2-메틸-페닐) 스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온;
    라세미 (2'S, 3S, 4'R)-6-클로로-4'-[5-클로로-2-(1-메톡시카르보닐-1-메틸-에톡시)-피리딘-3-일]-2'-(5-클로로-2-메틸-페닐) 스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온;
    라세미 (2'S, 3S, 4'R)-6-클로로-4'-[5-클로로-2-(1-히드록시카르보닐-1-메틸-에톡시)-피리딘-3-일]-2'-(5-클로로-2-메틸-페닐) 스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온;
    키랄 (2'S, 3S, 4'R)-6-클로로-4'-[5-클로로-2-(1-히드록시카르보닐-1-메틸-에톡시)-피리딘-3-일]-2'-(5-클로로-2-메틸-페닐) 스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온;
    라세미 (2'S, 3S, 4'R)- 4'-[5-클로로-2-(2-메탄술포닐아미노-1,1-메틸-2-옥소-에톡시)-피리딘-3-일]-6-클로로-2'-(5-클로로-2-메틸-페닐)-스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온 및
    키랄 (2'S, 3S, 4'R)- 4'-[5-클로로-2-(2-메탄술포닐아미노-1,1-메틸-2-옥소-에톡시)-피리딘-3-일]-6-클로로-2'-(5-클로로-2-메틸-페닐)-스피로[3H-인돌-3,3'-피페리딘]-2,6'(1H)-디온.
  4. 하기 화학식 I 의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 에스테르 또는 거울상이성질체를 약학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제와 함께 포함하는 약학적 조성물:
    Figure pct00026

    [식 중,
    X 는 F, Cl 또는 Br 이고,
    Y 는 H 또는 F 이고,
    V 는 F 또는 Cl 이고,
    R1 는 Me, Et 또는 nPr 이고,
    R2 는 OH, OMe 또는 NHSO2Me 이고,
    W 는 F, Cl 또는 Br 임].
  5. 제 4 항에 있어서, 암, 특히 고형 종양, 더욱 특히 유방, 결장, 폐 및 전립선 종양의 치료 또는 제어를 위한 약학적 조성물.
  6. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 약제로서 사용되기 위한 화합물.
  7. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 암, 특히 고형 종양, 더욱 특히 유방, 결장, 폐 및 전립선 종양의 치료 또는 제어를 위한 화합물.
  8. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항의 화합물의, 암, 특히 고형 종양, 더욱 특히 유방, 결장, 폐 및 전립선 종양의 치료 또는 제어용 약제 제조를 위한 용도.
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