KR20110057126A - 가열처리가 없는 카놀라 단백질 분리물의 생산 - Google Patents

Abstract

개시된 내용은 PMM 형성 및 침전으로부터의 상청액의 열 처리에 의해 생산된 2S가 지배적인 카놀라 단백질 분리물과 동일한 특성을 가지면서 열처리 없이 2S가지배적인 카놀라 단백질 분리물을 생산하는 것에 관한 것이다.

Description

가열처리가 없는 카놀라 단백질 분리물의 생산{PRODUCTION OF CANOLA PROTEIN ISOLATE WITHOUT HEAT TREATMENT}

본 발명은 카놀라 단백질 분리물의 생산에 관한 것이다.

적어도 약 100 wt%(N x 6.25)의 단백질 함량을 갖는 카놀라 오일 씨 단백질 분리물은 오일 씨 가루로부터 본 출원인에게 양도된 2002년 5월 3일 출원된 미국 특허출원 제 10/137,391호(미국특허출원공보 제 2003-0125526 A1 및 WO 02/089597) 및 2004년 6월 9일 출원된 미국 특허출원 제 10/476,230호(미국 특허출원공보 제 2004-0254353 A1)에 기술된 공정에 의해 형성될 수 있다. 이 공정은 수용성 염 용액을 사용하여 카놀라 오일 씨 가루를 추출하는 단계, 잔여 오일 씨 가루로부터 획득된 수용성 단백질 용액을 분리하는 단계, 선택적 막 기술을 사용하여 이온 강도를 실질적으로 일정하게 유지하면서 적어도 약 200 g/L의 수용성 용액의 단백질 농도를 증가하는 단계, 단백질 미셀 형성을 일으키도록 획득된 농축 단백질 용액을 찬 물에 희석하는 단계, 비결정의, 끈적끈적한, 젤리같은, 글루텐-같은 단백질 미셀 덩어리(PMM)를 형성하기 위하여 단백질 미셀을 침전하는 단계, 및 적어도 약 100 wt%(N x 6.25)의 단백질 함량을 갖는 상청액으로부터 단백질 미셀 덩어리를 회수하는 단계를 포함하는 다단계 공정을 포함한다. 여기서 사용된 것으로서, 단백질 함량은 건조 중량 기준에 대하여 결정된다. 회수된 PMM은 건조되어져도 좋다.

공정의 한 실시예에 있어서, PMM 침전단계로부터의 상청액은 상청액으로부터 카놀라 단백질 분리물을 회수하기 위하여 처리된다. 이 처리는 한외 여과 막을 사용하여 초기에 상청액을 농축하고 농축물을 건조함으로서 이루어진다. 획득된 카놀라 단백질 분리물은 적어도 약 90 wt%, 바람직하게는 적어도 약 100 wt%(N x 6.25)의 단백질 함량을 갖는다.

미국 특허출원 제 10/137,391호에 개시된 공정들은 기본적으로 뱃치(batch) 공정들이다. 본 출원인에게 양도된, 2002년 11월 19일에 출원된 미국 특허출원 제 10/298,678호(미국 특허출원공보 제 2004-0039174 A1 및 WO 03/043439) 및 2005년 3월 5일에 출원된 미국 특허출원 제 10/496,071호(미국 특허출원공보 제 2003-0015910 A1)에 있어서, 카놀라 단백질 분리물을 만들기 위한 계속적인 공정이 기술되어 있다. 그것에 따르면, 카놀라 오일 씨 가루는 수용성 염 용액으로 계속하여 혼합되고, 이 혼합물은 수용성 단백질 용액을 형성하기 위하여 카놀라 오일 씨 가루로부터 단백질을 추출하면서 파이프를 통해 전송되며, 이 수용성 단백질 용액은, 이온 강도를 실질적으로 일정하게 유지하면서, 적어도 약 50 g/L 까지 수용성 단백질 용액의 단백질 함량을 증가시키도록 선택적 막 조작을 통해 계속적으로 전송되고, 얻어진 농축 단백질 용액은 단백질 미셀 성형을 일으키도록 계속하여 찬 물로 혼합되며, 그리고 단백질 미셀은 원하는 량의 PMM이 침전용기 내에 축적될 때까지 상청액을 계속 넘치게 하면서 계속하여 침전이 되게 한다. 이 PMM은 침전용기로부터 회수되고 건조되어져도 좋다. 이 PMM은 적어도 약 90 wt%(N x 6.25), 바람직 하게는 적어도 약 100 wt%의 단백질 함량을 갖는다. 넘쳐진 상청액은 상술한 바와 같이 그것으로부터 카놀라 단백질 분리물을 회수하기 위한 처리를 행하여 져도 좋다.

카놀라 씨는 약 10 내지 30 wt%의 단백질을 포함하고 있는 것으로 알려져 있고 여러 다른 단백질 성분들로 구성되고 있음이 확인되어왔다. 이들 단백질은 크루씨페린(cruciferin)으로 알려진 12S 글로불린(globulin), 7S 단백질 및 나핀(napin)으로 알려진 2S 저장 단백질을 포함한다. 본 출원인에게 양도된, 2003년 4월 15일에 출원된 미국 특허출원 제 10/413,371호(미국 특허출원공보 제 2004-0034200 A1 및 WO 03/088760) 및 2005년 4월 29일에 출원된 미국 특허출원 제 10/510,766호(미국 특허출원공보 제 2005-0249828 A1)에 기재된 바와 같이, 기재된 공정들은 PMM 성형을 위한 농축된 수용성 단백질 용액의 희석과 추가적인 단백질의 회수를 위한 상청액의 처리를 포함하고, 서로 다른 단백질 성분의 분리물들을 회수한다.

이와 관련하여, PMM-유래된 카놀라 단백질 분리물은 약 60 내지 약 98 wt%의 7S 단백질, 약 1 내지 약 15 wt%의 12S 단백질 및 0 내지 약 25 wt%의 2S 단백질의 단백질 성분 구성을 갖는다. 상청액-유래된 카놀라 단백질 분리물은 약 60 내지 약 95 wt%의 2S 단백질, 약 5 내지 약 40 wt%의 7S 단백질 및 0 내지 약 5 wt%의 12S 단백질의 단백질 성분 구성을 갖는다. 이처럼, PMM-유래된 카놀라 단백질 분리물은 대부분 7S 단백질이고 상청액-유래된 카놀라 단백질 분리물은 대개 2S 단백질이다. 위에서 언급한 미국 특허출원 제 10/413,371호에 개시된 바와 같이, 2S 단백질은 약 14,000 달톤(dalton)의 분자 덩어리를 가지며, 7S 단백질은 145,000 달톤의 분자 덩어리를 갖고, 그리고 12S 단백질은 290,000 달톤의 분자 덩어리를 갖는다.

본 출원인에게 양도된, 2005년 1월 21일에 출원된 미국 특허출원 제 11/038,086호(미국 특허출원공보 제 2005-0181112 A1 및 WO 2005/067729) 및 2008년 6월 20일에 출원된 미국 특허출원 제 12/213,500호에는, 7S 단백질을 퇴적하고 2S로 강화된 수용성 단백질 용액을 제공하도록 상청액을 열처리하는 공정이 개시되어 있다. 이 수용성 단백질 용액은 2S-강화 카놀라 단백질 분리물을 제공하기 위하여 건조되어져도 좋다. 이 카놀라 단백질 분리물은 광범위한 산성 pH 값에 용해가능하고 수용성 매체에 투명하고, 카놀라 단백질 분리물의 첨가에 의해 투명성이 손상되지 않으면서도, 예를 들면, 단백질 강화 음료, 특히 산성 pH 값의 단백질 강화 음료를 만들 수 있는 등 많은 이점을 갖고 있다.

카놀라는 또한 평지씨 또는 오일 씨 유채로도 알려져 있다.

본 발명의 목적은 2S 단백질 강화 카놀라 단백질 분리물의 것과 동일한 특성의 생산물을 열 처리 단계 없이 생산할 수 있는 카놀라 단백질 분리물의 제조 방법 및 그 생산물에 있다. 열처리단계의 제거는 색상 및 맛을 향상시키고 7S 단백질이 상청액으로부터 제거될 필요가 없기 때문에 전체적인 생산률도 증가시킨다. 획득된 카놀라 단백질 분리물은 완전히 용해 가능하고, 투명하며 낮은 pH의 물에 열적 안정성이 있음은 물론 일반적으로 피드(phytic) 산도 낮다. 낮은 pH의 용액에 열적 안정성은 뜨거운 충진 응용과 같은 열적 처리를 가능하게 한다. 카놀라 단백질 분리물은 단백질의 침전 없이 단백질 보강, 특히 청량음료 및 스포츠 음료는 물론 다른 수용성 시스템의 단백질 보강과 같은 인류 소모품을 위한 제품에 유용하다. 카놀라 단백질 분리물은 또한 애완동물 사료 및 수경재배와 같은 비-인류 사료 응용을 위해서도 유용하다.

본 발명의 하나의 관점에 따르면, 본 발명은 건조중량기준으로 적어도 약 90 wt%(N x 6.25)의 단백질 함량을 갖는 카놀라 단백질 분리물을 제조하는 방법에 있어서,

칼슘 피드산염 침전물을 형성하도록, 약 5 mS 내지 약 30 mS, 바람직하게는 약 8 내지 10 mS의 전도성을 제공하기 위하여 카놀라 단백질 미셀 덩어리의 침전으로부터의 상청액에, 칼슘 염, 바람직하게는 염화칼슘을 첨가하는 단계,

정화 용액을 제공하도록 획득된 용액으로부터 침전된 칼슘 피드산염을 제거하는 단계,

염산의 첨가에 의한 것과 같이, 약 2.0 내지 4.0, 바람직하게는 약 2.9 내지 3.2의 정화 용액의 pH를 선택적으로 조정하는 단계,

정화 농축된 카놀라 단백질 용액을 생산하기 위하여, 선택적으로 pH-조정된 정화 용액을 적어도 약 50 g/L, 바람직하게는 약 50 내지 500 g/L, 더욱 바람직하게는 약 100 내지 250 g/L의 단백질 함량으로 농축하는 단계,

정화 농축된 카놀라 단백질 용액을 pH 3 물의 용량과 같은 것으로서 선택적으로 디아필트레이션(diafilteration)하는 단계,

과립 활성화된 탄소 처리와 같은 것으로서 색상제거단계를 선택적으로 수행하는 단계, 및

농축된 단백질 용액을 건조하는 단계를 포함하는 카놀라 단백질 분리물을 제조하는 방법을 제공하고 있다.

상청액은 칼슘 염의 첨가 전에 중간 농축으로 부분적으로 농축되어져도 좋다. 형성되는 침전물은 제거되고 얻어지는 용액은 상술한 바와 같이 산성화되며, 최종 농축으로 더 농축되고 그 다음 선택적으로 디아필트레이션(diafilteration) 되며 건조된다.

대조적으로, 상청액이 먼저 최종농축으로 농축되어져도 좋으며, 칼슘염은 농축된 상청액에 첨가되고, 얻어진 침전물은 제거되며 용액은 산성화된 후 선택적으로 디아필트레이션(diafilteration)되고 건조된다.

상술한 공정의 다른 변형 예로서, 초기에 작은 량의 칼슘염을 침전물이 형성되지 않은 상청액에 첨가하고, 용액은 산성화되며 중간농축으로 부분적으로 농축되며, 부가적 량의 칼슘염이 부분적으로 농축된 상청액에 첨가되고 침전물이 형성된다.

이 침전물은 제거되고 용액은 최종농축으로 농축되며 선택적으로 디아필트레이션(diafilteration)되고 건조된다.

상술한 공정들에서 침전물의 제거를 생략하는 것도 하나의 선택사항이며, 이것은 생산물에 있어서 더 높은 피드산염 함량을 갖게 한다. 이러한 공정에서, 칼슘염은 상청액, 부분적으로 농축된 상청액 또는 완전히 농축된 상청액에 첨가되고, 침전물은 제거되지 않는다. 산성화는 침전물의 용해화로 인도한다.

또 하나의 선택사항은 산성화 및 천연 pH에서의 용액의 처리를 생략하는 것이다. 이 선택사항에서 칼슘염은 제거되는 침전물을 형성하도록 상청액, 부분적으로 농축된 상청액 또는 완전히 농축된 상청액에 첨가된다. 그리고 획득된 용액은 상술한 바와 같이 산성화단계 없이 처리된다.

상청액이 칼슘염의 첨가 전에 부분적으로 농축되고 침전물의 제거 후에 완전히 농축되면, 이 상청액은 약 50 g/L 이하의 단백질 농도로 먼저 농축되고, 그리고 침전물의 제거 후 적어도 약 50 g/L, 바람직하게는 약 50 내지 500 g/L, 더욱 바람직하게는 약 100 내지 250 g/L의 농도로 농축된다.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 칼슘염은 두 단계에서 첨가되어져도 좋다. 이 실시예에 있어서, 작은 량의 칼슘염이 약 1 mS 내지약 3.5 mS, 바람직하게는 약 1 내지 2 mS의 전도성을 제공하도록 상청액에 첨가되고, 이것은 침전물의 형성을 일으키기에 불충분하다.

획득된 용액은 산성화되고 상술한 조건 하에서 부분적으로 농축된다. 나머지 칼슘염이 침전물의 성형에 충분하도록 약 4 mS 내지 30 mS, 바람직하게는 약 4 내지 약 10 mS의 전도성을 제공하도록 부분적으로 농축된 용액에 첨가된다. 그리고 침전물은 제거된다. 획득된 정화 용액은 상술한 조건들 하에서 농축된다.

여기의 공정에 따라 제조된 카놀라 단백질 분리물은 단백질 분리물들의 종래기술의 응용, 즉 가공 식품 및 음료들의 단백질 보강, 오일의 유제화, 구운 제품들의 몸체 형성체, 및 가스제품들에 있어서의 성형제 등에 사용되어져도 좋다. 부가하여, 카놀라 단백질 분리물은 고기 유사품으로 유용한 단백질 섬유로 형성되어져도 좋고, 계란 흰자 대체품 또는 계란 흰자가 결합되는 식품제품의 증량제로서 사용되어져도 좋다. 이 카놀라 단백질 분리물은 영양 보충제로 사용되어져도 좋다. 또한, 카놀라 단백질 분리물의 다른 용도는 애완동물 사료, 동물 사료, 및 산업 및 화장품 응용, 그리고 개인 취급 제품 등에 사용되어져도 좋다.

본 발명은 2S 단백질 강화 카놀라 단백질 분리물의 것과 동일한 특성의 생산물을 열 처리 단계 없이 생산할 수 있는 카놀라 단백질 분리물의 제조 방법 및 그 생산물을 제공한다. 따라서, 열처리단계의 제거는 색상 및 맛을 향상시키고 7S 단백질이 상청액으로부터 제거될 필요가 없기 때문에 전체적인 생산률도 증가시킨다. 획득된 카놀라 단백질 분리물은 완전히 용해 가능하고, 투명하며 낮은 pH의 물에 열적 안정성이 있음은 물론 일반적으로 피드(phytic) 산도 낮다. 낮은 pH의 용액에 열적 안정성은 뜨거운 충진 응용과 같은 열적 처리를 가능하게 한다.

카놀라 단백질 분리물을 제공하기 위한 공정의 초기 단계는 카놀라 오일 씨 가루로부터 단백질적인 물질을 용해하는 단계를 포함한다. 카놀라 씨 가루로부터 회수된 단백질적 물질은 카놀라 씨에서 자연적으로 발생하는 단백질이어도 좋고, 또는 자연 단백질의 소수성 및 극지 특성을 가지면서 유전적 조작에 의해 변경된 단백질이어도 좋다. 카놀라 가루는 비-변성 단백질의 레벨들을 변경하면서, 예를 들면, 더운 헥산 추출 또는 찬 오일 압출 방법들로부터 얻어지는 카놀라 오일 씨로부터 카놀라 오일을 제거하므로서 얻어지는 어떠한 카놀라 가루이어도 좋다. 카놀라 오일 씨로부터 카놀라 오일의 제거는 통상 여기에 기술될 단백질 분리물 회수 공정으로부터 별개 조작으로 수행된다.

단백질 용해는 염의 존재가 오일 씨 가루로부터 용융 단백질의 제거를 용이하게 하기 때문에 음식등급 염 용액을 사용함에 의해 가장 효과적으로 수행된다. 카놀라 단백질 분리물이 비-식품용으로 사용될 것이라면, 비-식품-등급 화학물질이 사용되어도 무방하다. 이 염은 통상적으로 염화 나트륨이고, 염화 칼륨 같은 다른 염들이 사용되어져도 좋다. 염 용액은 의미 있는 량의 단백질을 효과적으로 용해할 수 있도록 적어도 약 0.05, 바람직하게는 적어도 약 0.10의 이온 강도를 갖는다. 염 용액의 이온 강도가 증가하므로서, 오일 씨 가루에 있는 단백질의 용해 정도가 초기에는 최대값에 도달할 때까지 증가한다. 그 이후의 이온 강도의 증가는 용해된 총 단백질을 증가시키지 못한다. 최대 단백질 용해를 일으키는 식품등급 염 용액의 이온 강도는 사용되는 염 및 선택된 오일 씨 가루에 따라 변화한다.

이온 강도의 증가와 함께 단백질 침전을 위해 요구되는 희석의 더 높은 정도의 관점에서, 통상적으로 약 0.8 이하, 바람직하게는 약 0.1 내지 약 0.15의 이온 강도 값을 사용하는 것이 바람직하다.

뱃치(batch) 공정에 있어서, 단백질의 염 용융은 약 5℃ 내지 약 75℃의 온도로, 용융시간의 단축을 위해 바람직하게는 교반을 수반해서 통상 약 10 내지 약 60분 동안 행하여 진다. 오일 씨 가루로부터 실질적으로 많은 단백질을 추출하도록 용해를 효과적으로 하는 것이 바람직하며, 이것은 높은 전체 제품 생산률을 제공할 수가 있다.

약 5℃의 낮은 온도 한계는 용해가 이 온도 이하에서는 비현실적으로 느리기 때문에 선택되어 지고, 약 75℃의 상부 바람직한 온도 한계는 현존 단백질의 일부의 온도 변성 때문에 선택되어진다.

계속되는 공정으로, 카놀라 오일 씨 가루로부터 단백질의 추출은 카놀라 오일 씨 가루로부터 단백질의 계속적인 추출을 수행하면서 어떤 한결같은 방법으로 수행된다. 하나의 실시예로서, 카놀라 오일 씨 가루는 식품등급 염 용액과 계속적으로 혼합되고 이 혼합물은 여기에 기술될 변수들에 따라 소망하는 추출을 수행하기에 충분한 지체시간의 유동률로 일정 길이를 갖는 파이프 또는 도관을 통해 전송된다. 이러한 계속되는 공정에서, 염 용융단계는 카놀라 오일 씨 가루로부터 실질적으로 많은 단백질을 추출하도록 용융을 바람직하게 수행하기 위하여 약 10분 까지의 시간 내에 빠르게 수행된다. 계속되는 공정에서 용융은 약 10℃ 내지 약 75℃, 바람직하게는 약 15℃ 내지 약 35℃ 사이의 온도에서 효과적으로 수행된다.

수용성 식품등급 염 용액은 일반적으로 약 5 내지 약 6.8, 바람직하게는 5.3 내지 6.2의 pH를 갖는다. 이 염 용액의 pH는 어떤 종래의 산, 일반적으로 염산, 알칼리, 수산화 나트륨 등 요구되어 진 산의 사용에 의해 추출단계에서의 사용을 위하여 약 5 내지 약 6.8의 범위 내에서 원하는 값으로 조정되어져도 좋다.

용융단계 동안 식품등급 염 용액 내에서 오일 씨 가루의 농도는 광범위하게 변화되어져도 좋다. 전형적인 농도 값은 약 5 내지 약 15%w/v 이다.

수용성 염 용액과 함께 단백질 추출단계는 카놀라 가루에 존재할 수도 있는 지방을 용해하는 부가적 효과도 가지며, 이것은 수상에 존재하게 되는 지방으로 된다.

추출단계로부터 얻어진 단백질 용액은 일반적으로 약 5 내지 약 40 g/L, 바람직하게는 약 10 내지 약 30 g/L의 단백질 농도를 갖는다.

수용성 염 용액은 산화방지제를 포함해도 좋다. 이 산화방지제는 어떠한 종래의 산화방지제, 즉 황산 나트륨 또는 아스코르빅(ascorbic) 산이어도 좋다. 채용된 산화방지제의 량은 용액의 약 0.01 내지 1 wt%, 바람직하게는 약 0.05 wt%로 다양할 수 있다. 이 산화방지제는 단백질 용액 내의 석탄산의 산화를 방지하는 역할을 한다.

추출단계로부터 얻어진 수상은 잔여 가루를 제거하기 위하여 원심경사기의 채용, 뒤이어 디스크 원심분리 및/또는 여과와 같은 어떤 편리한 방법으로 잔여 카놀라 가루로부터 분리되어져도 좋다. 분리된 잔여 가루는 처리를 위해 건조되어져도 좋다.

최종 카놀라 단백질 분리물의 색상은 분말 활성화된 탄소 또는 다른 색소흡착제를 분리된 수용성 단백질 용액과 혼합하고, 뒤이어 단백질 용액을 제공하도록 종래방법의 여과에 의해 흡착물질을 제거함에 의해 빛 색깔 및 옅은 노랑으로 향상될 수가 있다. 디아필트레이션(diafilteration)이 또한 색소제거를 위해 사용될 수가 있다.

이러한 색소제거단계는 어떠한 종래의 조건들, 일반적으로 분리된 수용성 단백질 용액의 주변 온도에서, 어떤 적절한 색소흡착제를 사용함에 의해 수행될 수 있다. 분말화된 활성 탄소는 약 0.025% 내지 약 5%, 바람직하게는 약 0.05 내지 약 2% w/v가 채용된다.

카놀라 씨 가루가, 본 출원인에게 양도된 미국 특허 제 5,844,086 호 및 제 6,005,076호에 개시된 바와 같이, 의미 있는 량의 지방을 포함하고 있다면, 그기에 기술된 지방제거단계가 분리된 수용성 단백질 용액에 대하여 그리고 이하에서 기술될 농축된 수용성 단백질 용액에 대하여 시행되는 것이 효과적이다. 색상향상단계가 수행되고, 그러한 단계는 제1 지방제거단계 후에 하는 것이 효과적이다.

수용성 염 용액으로 오일 씨 가루를 추출하는 대안으로서, 그러한 추출은, 비록 물 단독의 이용은 수용성 염 용액보다 오일 씨 가루로부터 단백질을 적게 추출하는 경향이 있긴 하지만, 물 만으로 이루어져도 좋다. 이러한 대안이 채용된다면, 염이, 상기에 언급된 농도로, 다음에 기술할 농축단계 동안 용액 내에 단백질을 유지하기 위하여 잔여 오일 씨 가루로부터 분리 후 단백질 용액에 첨가하여도 좋다. 제 1지방제거단계가 수행될 때, 염은 일반적으로 그러한 조작의 종료 후에 첨가된다.

다른 대안 공정은 약 6.8 이상, 일반적으로 약 9.9 까지의 비교적 높은 pH값의 식품등급 염 용액으로 오일 씨 가루를 추출하는 것이다. 식품등급 염 용액의 pH는 수용성 수산화 나트륨과 같은 종래의 식품등급 알칼리의 사용에 의해 소망하는 알칼리 값으로 조정되어져도 좋다. 한편 대안으로서, 오일 씨 가루는 약 pH 5 이하, 일반적으로 약 pH 3까지 비교적 낮은 pH의 염 용액으로 추출되어져도 좋다. 만약 이러한 대안이 채용된다면, 오일 씨 가루 추출단계로부터 얻어진 수상은 잔여 가루를 제거하기 위하여 원심경사기의 채용, 뒤이어 디스크 원심분리 및/또는 여과와 같은 어떤 편리한 방법으로 잔여 카놀라 가루로부터 분리되어져도 좋다. 분리된 잔여 가루는 처리를 위해 건조되어져도 좋다.

높은 또는 낮은 pH 추출단계로부터 얻어진 수용성 단백질 용액은, 이하에 기술될 추가 공정 전에, 상술한 바와 같이 약 5 내지 6.8, 바람직하게는 약 5.3 내지 약 6.2의 범위로 pH가 조정된다. 이러한 pH 조정은 염산, 알칼리, 수산화 나트륨 등 적절한 것으로서 종래의 산을 사용하여 수행되어져도 좋다.

수용성 단백질 용액은 실질적으로 일정하게 이온 강도를 유지하면서 단백질 농도를 증가시키도록 농축된다. 이러한 농축은 일반적으로 적어도 약 50 g/L, 바람직하게는 적어도 약 200 g/L, 더욱 바람직하게는 적어도 약 250 g/L의 단백질 농도를 제공하도록 수행된다.

농축단계는 동공-섬유 막 또는 나선-권선 막과 같은, 그리고 약 3,000 내지 100,000 달톤, 바람직 하기로는 약 5,000 내지 10,000 달톤과 같은 적절한 분자 질량 차단과 함께, 그리고 막 재질 및 배열이 다른 막들을 사용하여, 한외거르기 또는 디아필트레이션과 같은 어떤 편리한 선택적 막 기술을 채용함에 의해서와 같이, 뱃치 또는 계속적인 조작으로 한결같은 어떤 편리한 방법으로 수행되어 지고, 그리고 계속적인 조작을 위하여, 수용성 단백질 용액이 이들 막을 통과하기 때문에, 소망하는 농도를 허용하도록 치수되어진다.

잘 알려진 바와 같이, 한외거르기 및 유사한 선택적 막 기술은 낮은 분자량 종류는 막의 통과를 허용하는 반면 높은 분자량 종류는 통과를 허용하지 않는다. 낮은 분자량종류는 식품등급 염의 이온성 종류는 물론 탄수화물, 색소 및 반-영양인자와 같은 원재료로부터 추출된 저 분자량 물질은 물론 어떤 저분자량 형태의 단백질도 포함한다. 막의 분자량 차단은 통상적으로, 다른 막 물질 및 구조와 관련하여 오염물질의 통과를 허용하는 한편, 용액 내에 단백질의 의미 있는 비율의 유지를 보장하도록 선택된다.

농축된 단백질 용액은 추출용액으로서 동일한 몰 농도 및 pH의 수용성 염 용액을 사용하여 디아필트레이션(diafiltration) 단계에 놓이게 된다. 이러한 디아필트레이션은 약 2 내지 20 용량, 바람직하게는 약 5 내지 10 용량의 디아필트레이션 용액을 사용하게 된다. 디아필트레이션 조작에 있어서, 불순물의 량이 막 침투를 통해 통과함에 의해 수용성 단백질 용액으로부터 제거된다. 디아필트레이션 조작은 불순물 량이 의미가 없을 때까지 그리고 알아볼 수 있는 색상이 침투에 나타날 때까지 수행된다. 이러한 디아필트레이션은 농축단계까지 동일한 막을 사용하여 수행되어도 좋다. 그러나, 원한다면, 디아필트레이션 단계는 약 3,000 내지 100,000 달톤, 바람직하게는 약 5,000 내지 10,000 달톤의 범위내의 분자량 차단을 가지는 막과 같은, 그리고 재질 및 구조가 서로 다른 막을 갖는, 다른 분자량 차단의 분리된 막을 사용하여 수행되어져도 좋다.

적어도 디아필트레이션 단계의 부분 동안 산화방지제가 디아필트레이션 중간에 나타나도 좋다. 이 산화방지제는 황산 나트륨, 아스코르브 산과 같은 어떤 종래의 산화방지제이어도 좋다. 디아필트레이션 중간에 채용된 산화방지제의 량은 채용된 물질에 의존하고 약 0.01 내지 1 wt%, 바람직하게는 약 0.05 wt%로 다양화될 수 있다. 이 산화방지제는 농축된 카놀라 단백질 분리물 용액에 나타나는 석탄산의 산화를 방지한다.

농축단계 및 디아필트레이션 단계는 어떠한 종래의 온도, 일반적으로 약 20℃ 내지 60℃, 바람직하게는 약 20 내지 30℃의 온도 하에서, 농축의 소망하는 정도를 달성하기 위한 시간 동안 수행된다. 어떤 정도에 도달 까지 사용된 온도 및 다른 조건들은 농축에 사용된 막 장비 및 용액의 소망하는 단백질 농도에 의존한다.

농축된 그리고 선택적으로 디아필트레이션된 단백질 용액은, 만약 필요하다면, 미국 특허 제 5,844,086 호 및 제 6,005,076호에 개시된 바와 같은 탈지 동작을 더 수행해도 좋다.

농축되고 선택적으로 디아필트레이션된 단백질 용액은 상술한 색상제거 조작에 다른 대안으로서 색상제거조작이 수행되어져도 좋다. 낟알로 된 활성화 탄소(GAC)는 물론 분말화된 활성 탄소가 사용되어져도 좋다. 색상 흡착 시약으로서 사용될 수 있는 다른 물질은 폴리비닐 피놀리돈이다.

색상 흡착 시약 취급 단계는 어떤 종래의 조건들, 일반적으로 카놀라 단백질 용액의 주변 온도에서 수행된다. 분말화된 활성화 탄소를 위하여는, 약 0.025% 내지 약 5% w/v, 바람직하게는 약 0.05% 내지 약 2% w/v의 량이 사용된다. 만약 폴리비닐피놀리돈이 색상흡착시약으로 사용된다면, 약 0.5% 내지 약 5% w/v, 바람직하게는 약 2% 내지 약 3% w/v의 량이 사용된다. 색상흡착시약은 여과와 같은 종래의 수단에 의해 카놀라 단백질 용액으로부터 제거되어져도 좋다.

선택적 색상 제거 단계로부터 얻어진 농축되고 선택적으로 디아필트레이션된 단백질 용액은 세균 량을 줄이기 위한 저온살균 단계에 놓여져도 좋다. 이러한 저온살균은 어떤 소망의 저온살균 조건 하에서 수행되어져도 좋다. 일반적으로, 농축되고 선택적으로 디아필트레이션된 단백질 용액은 약 55℃ 내지 70℃, 바람직하게는 약 60℃ 내지 65℃의 온도에서 약 10 내지 15분간, 바람직하게는 약 10분간 가열된다. 저온살균된 농축 단백질 용액은 이하에서 개시될 다음 공정을 위하여 바람직하게는 약 25℃ 내지 약 40℃의 온도로 냉각되어져도 좋다.

농축단계 및 디아필트레이션 단계에서 채용된 온도와 저온살균단계의 수행 여부에 의존하여, 농축된 단백질 용액은 뒤이은 희석단계 및 미셀 성형의 수행을 용이하게 하도록 농축된 단백질 용액의 점도를 감소하기 위하여 적어도 약 20℃, 그리고 약 60℃까지, 바람직하게는 약 25℃ 내지 40℃의 온도로 가온 되어져도 좋다. 농축된 단백질 용액은 찬물에 의한 희석에서 미셀 성형이 일어나지 않게 되는 상기의 온도를 초과하여 가열되어서는 안 된다.

농축단계, 그리고 선택적 디아필트레이션 단계, 선택적 색상제거 단계, 선택적 저온살균 단계 및 선택적 탈지 단계로부터 얻어진 농축된 단백질 용액은 소망하는 희석의 정도에 도달하는데 요구되는 량을 갖는 찬 물과 함께 농축된 단백질 용액을 혼합함에 의해 미셀 성형이 되도록 희석된다. 미셀 루트에 의해 얻어지기 위하여 요구되는 카놀라 단백질의 비율 및 상청액으로부터의 비율에 의존하여, 농축된 단백질 용액의 희석의 정도는 다양하게 되어져도 좋다. 일반적으로 더 낮은 희석 레벨에서, 카놀라 단백질의 더 많은 비율이 수상에 남는다.

미셀 루트에 의해 가장 많은 비율의 단백질을 제공하기를 원할 때, 농축된 단백질 용액은 약 5 폴드(fold) 내지 약 25 폴드, 바람직하게는 약 10 폴드 내지 약 20 폴드에 의해 희석된다.

농축된 단백질 용액과 함께 혼합된 찬 물은 약 15℃ 이하, 일반적으로 약 1℃ 내지 약 15℃, 바람직하게는 약 10℃ 이하의 온도를 갖는데, 그 이유는 단백질 미셀 덩어리의 형태에 있는 단백질 분리물의 향상된 생산량이 사용된 희석 인자들에서 더 차가운 온도로 달성되기 때문이다.

뱃치(batch) 조작에 있어서, 농축된 단백질 용액의 뱃치가, 상술한 바와 같이, 소망의 량을 갖는 찬 물의 고정 체에 부가된다. 농축된 단백질 용액의 희석 및 이온 강도의 결과적 감소는 미셀 형태의 별개의 단백질 작은 방울들의 형태로 된 고 결합 단백질 분자들의 구름-같은 덩어리의 형상을 유발한다. 뱃치 공정에서, 단백질 미셀들은 집계된, 합체된, 밀집한, 비결정성 끈적끈적한 글루텐-같은 단백질 미셀 덩어리(PMM)를 형성하도록 찬 물의 바디(body)에 침전되는 것을 허용한다. 이침전은 원심분리에 의해서와 같은 방법으로 수행될 수 있다. 이렇게 유도된 침전은 단백질 미셀 덩어리의 액체 함량을 감소시키고, 따라서 습기를 총 미셀 덩어리의 무게에 비해 일반적으로 약 70% 내지 95%, 바람직하게는 약 50% 내지 80%의 무게로 감소시킨다. 이와 같은 방법으로 미셀 덩어리의 습기 감소는 미셀 덩어리의 내포된 염 함량 및 건조된 분리물의 염 함량을 감소시킨다.

대조적으로, 희석 조작은 T-형 파이프의 일 측 주입구에 농축된 단백질 용액을 계속적으로 통과 시키고 T-형 파이프의 다른 주입구에는 희석 물을 주입하면서 파이프 내에서 혼합을 허용하여 계속적으로 수행된다. 희석 물은 농축된 단백질 용액의 소망하는 희석 정도를 달성하는데 충분한 비율로 T-형 파이프 속으로 공급된다.

파이프 내에서 농축된 단백질 용액 및 희석 물의 혼합은 단백질 미셀의 성형을 시작하고 이 혼합물은 계속적으로 T-형 파이프의 출구로부터 침전 용기 속으로 주입되며, 그것으로부터 가득 찼을 때, 상청액이 넘쳐흐르는 것이 허용된다. 혼합물은 바람직하게 액체의 바디 내에서 난류를 최소화하는 방법으로 침전 용기 내의 액체 바디 속으로 주입된다.

계속되는 공정으로, 단백질 미셀은 집계된, 합체된, 밀집한, 비결정성 끈적끈적한 글루텐-같은 단백질 미셀 덩어리(PMM)를 형성하도록 침전 용기 내에서 침전되고 이 공정은 소망하는 량의 PMM이 침전 용기의 바닥에 축적될 때까지 계속되며, 그 다음 축적된 PMM이 침전용기로부터 제거된다. 퇴적에 의한 침전 대신에, PMM은 원심분리에 의해 계속적으로 분리되어져도 좋다.

적어도 약 200 g/L 의 바람직한 단백질 함량으로 단백질 용액을 농축하는 공정 변수들의 조합 및 약 10 내지 20의 희석 인자의 사용은 원 가루 추출로부터 단백질 미셀 덩어리의 형태로 단백질을 회수하는 관점에서 더 높은 생산률, 종종 의미있게 높은 생산률을 낳고, 단백질 함량의 관점에서 상술한 미국 특허들에서 언급된 어떤 선행기술들의 단백질 분리물 형성 공정들을 사용하여 달성된 것들 보다 더 많은 순수한 분리물을 얻는다.

뱃치공정에 비교되는 것으로서 카놀라 단백질 분리물의 회수를 위한 계속되는 공정의 이용에 의해, 초기 단백질 추출 단계는 동일 레벨의 단백질 추출을 위하여 의미 있게 시간을 감소할 수 있고, 추출단계에서 의미 있게 더 높은 온도를 채용할 수가 있다. 부가하여, 계속되는 공정에서, 더 많은 생산 량을 얻으면서 뱃치공정에서 보다 오염의 기회가 적고 공정이 더 간편한 장비에 의해 수행될 수가 있다.

침전된 PMM은, 침전된 덩어리로부터 잔여 수상의 기우려 따르기 또는 원심분리에 의해서와 같은 방법으로 잔여 수상 또는 상청액으로부터 분리된다. 이 PMM은 젖은 형태로 사용되어져도 좋고, 또는 스프레이 건조 또는 동결건조와 같은 종래기술에 의해 건조형태로 건조되어져도 좋다. 건조 PMM은 약 90 wt% 초과, 바람직하게는 적어도 약 100 wt% 단백질 (N x 6.25 로 계산된)의 높은 단백질 함량을 갖고, 실질적으로 변질 되지 않는다(차동 스캔닝 열량측정에 의해 결정된 바와 같이). 지방 오일 씨 가루로부터 분리된 이 건조 PMM은 또한 낮은 잔여 지방 함량을 갖는 것으로서, 미국특허 제 5,844,086 및 6,005,076호의 공정들이 필요로 채택되었을 때, 약 1 wt% 이하일 수 있다.

상술한 미국 특허 출원 제 10/413,371호에 개시된 바와 같이, 이 PMM은 약 60 내지 98 wt%의 7S 단백질, 약 1 내지 15 wt%의 12S 단백질 및 약 0 내지 25 wt%의 2S 단백질의 단백질 구성 성분을 갖는 대부분 7S 카놀라 단백질로 구성된다.

PMM 성형 및 침전단계로부터의 상청액은 희석단계에서 침전되지 않은 의미 있는 량의 카놀라 단백질을 포함하고, 그것으로부터 카놀라 단백질 분리물을 회수하기 위한 처리가 수행된다. 상기한 미국 특허출원 제 10/413,371호에 개시한 바와 같이, 상청액으로부터 유래된 카놀라 단백질 분리물은 약 60 내지 95 wt%의 2S 단백질, 약 5 내지 40 wt%의 7S 단백질 및 약 0 내지 5 wt%의 12S 단백질의 단백질 구성 성분을 갖는 대부분 2S 카놀라 단백질로 구성된다.

본 발명에 있어서, 칼슘 염, 바람직하게는 염화 칼슘이, 약 5 mS 내지 30 mS, 바람직하게는 8 mS 내지 10 mS의 전도성을 제공하도록, 이하에서 기술될 방법으로 최초로 농축되거나 또는 부분적으로 농축되어져도 좋은 상청액에 첨가된다. 상청액에 첨가된 염화칼슘은 농축된 수용성 용액과 같은 어떠한 원하는 형태로 있어도 좋다.

염화칼슘의 첨가는, 상청액 및 상청액의 글로불린(globulin)과 알부민(albumin) 인자들을 유지하는 것으로부터, 칼슘 피드산 염의 형태로 피드산을 침전시킨다. 침전된 피드산 염은 정화 용액이 남겨지도록 원심분리 및/또는 여과와 같은 것에 의해 상청액으로부터 회수된다. 원한다면, 침전된 피드산 염은 추가공정에 의해 더 높은 피드산 염 함량을 갖는 제품을 얻을 수 있도록 제거되지 않아도 무방하다.

용액의 pH는 약 2.0 내지 약 4.0, 바람직하게는 약 2.9 내지 약 3.2의 값으로 조정된다. 이 pH 조정은 염산의 첨가와 같은 어떤 종래기술의 방법으로 수행되어져도 좋다. 원한다면, 이 산성화단계는 이하에서 개시될 다양한 선택사항들로부터 생략되어져도 좋다.

pH-조정된 정화 용액은, 만약 이미 농축되지 않았다면, 단백질 농도를 증가시키도록 농축되어진다. 이러한 농축은, 염, 탄수화물, 색소 및 단백질 원 재료로부터 추출된 저 분자량 물질을 포함하는 저 분자량 종류는 막의 통과를 허용하는 적절한 분자량 차단막을 사용하여,용액 내의 카놀라 단백질의 의미 있는 비율을 유지하면서 막을 통해 통과하는 한외거르기와 같은 어떤 편리한 선택적 막 기술을 사용하여 수행된다. 약 3,000 내지 100,000 달톤, 바람직하게는 약 5,000 내지 10,000 달톤의 분자량 차단을 갖고, 그리고 재질 및 구조가 서로 다른 막을 갖는 한외거르기 막들이 사용되어져도 좋다. 이와 같은 방법으로 상청액의 농축은 단백질을 회수하기 위하여 건조되는데 요구되는 액체의 량을 또한 감소시킨다. 상청액은 일반적으로 적어도 약 50 g/L, 바람직하게는 약 50 내지 500 g/L, 더욱 바람직하게는 약 100 내지 250 g/L의 단백질 농도로 건조 전에 농축된다. 이러한 농축조작은, 단백질 용액 농축 단계를 위해 위에서 언급된 바와 같이, 뱃치 모드에서 또는 계속되는 조작에서 수행되어져도 좋다.

상청액이 칼슘염의 첨가 전에 부분적으로 농축되고 침전물의 제거 후 완전히 농축되어진다면, 이 상청액은 우선 약 50 g/L 이하의 단백질 농도로 농축되고, 침전물이 제거된 후 적어도 약 50 g/L, 바람직하게는 약 50 내지 500 g/L, 더욱 바람직하게는 약 100 내지 250 g/L의 농도로 농축된다.

본 발명의 하나의 실시예에 있어서, 칼슘염은 두 단계에서 첨가되어져도 좋다. 이 실시예에 있어서, 작은 량의 칼슘이, 약 1 mS 내지 약 3.5 mS, 바람직하게는 약 1 mS 내지 약 2 mS의 전도성을 제공하도록, 상청액에 첨가되며, 이것은 침전물의 형성을 일으키는데 불충분하다.

얻어진 용액은 상기에 언급한 조건들 하에서 산성화되고 부분적으로 농축된다. 칼슘염의 나머지는, 침전물의 형성이 가능하도록 약 4 mS 내지 약 30 mS, 바람직하게는 약 4 mS 내지 약 10 mS의 전도성을 제공하도록, 부분적으로 농축된 용액에 첨가된다. 다음, 침전물은 제거된다. 획득된 정화 용액은 위에서 언급한 조건들 아래서 농축된다.

농축된 상청액은 물을 사용하여 디아필트레이션(diafiltration) 단계에 놓이게 된다. 이 물은 천연 pH, 디아필트레이션(diafiltration)되는 단백질 용액에 동일한 pH 또는 그 사이의 pH에 있어도 좋다. 이러한 디아필트레이션은 약 2 내지 20 용량, 바람직하게는 약 5 내지 10 용량의 디아필트레이션 용액을 사용하여 수행되어져도 좋다. 디아필트레이션 조작에 있어서, 불순물의 량이 막 침투를 통해 통과함에 의해 수용성 상청액으로부터 제거된다. 디아필트레이션 조작은 불순물 량이 의미가 없을 때까지 그리고 알아볼 수 있는 색상이 침투에 나타날 때까지 수행된다. 이러한 디아필트레이션은 농축단계를 위한 것과 동일한 막을 사용하여 수행되어도 좋다. 그러나, 원한다면, 디아필트레이션 단계는 약 3,000 내지 100,000 달톤, 바람직하게는 약 5,000 내지 10,000 달톤의 범위내의 분자량 차단을 가지며, 서로 다른 막 재질 및 구조를 갖는 막과 같은 분리막을 사용하여 수행되어져도 좋다.

적어도 디아필트레이션 단계의 부분 동안 산화방지제가 디아필트레이션 중간에 나타나도 좋다. 이 산화방지제는 황산 나트륨, 아스코르브 산과 같은 어떤 종래의 산화방지제이어도 좋다. 디아필트레이션 중간에 채용된 산화방지제의 량은 채용된 물질에 의존하고 약 0.01 내지 1 wt%, 바람직하게는 약 0.05 wt%로 다양화될 수 있다. 이 산화방지제는 농축된 카놀라 단백질 분리물 용액에 존재하는 석탄산의 산화를 방지한다.

농축되고 선택적으로 디아필트레이션된 단백질 용액은 상술한 색상제거 조작에 대안으로서 색상제거조작이 수행되어져도 좋다. 낟 알로된 활성화 탄소(GAC)는 물론 분말화된 활성 탄소가 사용되어져도 좋다. 색상 흡착 시약으로서 사용될 수 있는 다른 물질은 폴리비닐 피놀리돈이다.

색상 흡착 시약 취급 단계는 어떤 종래의 조건들, 일반적으로 카놀라 단백질 용액의 주변 온도에서 수행된다. 분말화된 활성화 탄소를 위하여는, 약 0.025% 내지 약 5% w/v, 바람직하게는 약 0.05% 내지 약 2% w/v의 량이 사용된다. 만약 폴리비닐피놀리돈이 색상흡착시약으로 사용된다면, 약 0.5% 내지 약 5% w/v, 바람직하게는 약 2% 내지 약 3% w/v의 량이 사용된다. 색상흡착시약은 여과와 같은 편리한 수단에 의해 카놀라 단백질 용액으로부터 제거되어져도 좋다.

농축되고 선택적으로 디아필트레이션(diafiltration)되고 선택적으로 색상제거 처리된 단백질 용액은 스프레이 건조 또는 동결건조와 같은 종래기술에 의해 건조형태로 건조되어진다. 건조된 카놀라 단백질 분리물은 약 90 wt%(N x 6.25)d.b. 초과, 바람직하게는 적어도 약 100 wt% 의 높은 단백질 함량을 갖고, 실질적으로 변질 되지 않는다(차동 스캔닝 열량측정에 의해 결정된 바와 같이). 이 카놀라 단백질 분리물은 일반적으로 피드 산 함량이 일반적으로 약 1.5 중량%이하로 낮다.

여기서 생산된 카놀라 단백질 분리물은 알부민 및 글로불린 인자들을 포함하고, 단백질 보강을 제공하기 위하여 탄산화 및 비탄산화된 음료속에 합체하기에 적합한 분리물을 만들도록, 산 수용성 환경에 용해 가능하다. 이러한 음료는 약 2.5 내지 약 5의 범위 내에서 광범위한 범위의 산성 pH 값을 갖는다. 여기에 제공된 카놀라 단백질 분리물은 이러한 음료들에 단백질을 보강하도록 어떤 편리한 량으로, 예를 들면, 12 액량온스 량당 적어도 약 5g의 카놀라 단백질 분리물의 량으로 이러한 음료들에 첨가되어져도 좋다. 첨가된 카놀라 단백질 분리물은 음료에 완전히 용해되고 열처리 후에 조차 음료의 선명도를 손상시키지 않는다. 이 카놀라 단백질 분리물은 물에 용해에 의한 음료의 복원 전에 건조된 음료와 함께 혼합되어져도 좋다.

실시예들

실시예 1:

이 예는 칼슘염이 상청액에 첨가되고, 침전물이 제거되었고, 용액이 산성화 되었으며 추가적인 처리가 수행된 본 발명의 일 실시예에 따른 신규의 카놀라 단백질 분리물의 생산을 개시하고 있다.

카놀라 가루의 'a' kg이 주변 온도에서 'c' M NaCl 용액의 'b' L에 첨가되었고 수용성 단백질 용액을 제공하기 위하여 30분 동안 휘저어 졌다. 잔여 카놀라 가루는 제거되어졌다 획득된 단백질 용액은 'e' 중량%의 단백질 함량을 갖는 부분적으로 정화된 단백질 용액의 'd'L을 생산하기 위하여 원심분리에 의해 부분적으로 정화되었다. 이 부분적으로 정화된 단백질 용액은 더욱 정화되도록 여과되어졌다 'g' 중량의 단백질 함량을 갖는 용량 'f' L의 용액을 얻었다.

단백질 추출 용액의 'h'L 약수가 'j' 달톤의 분자 중량 차단을 갖는 폴리에테르슬폰(polyethersulfone)(PES)막 상에서 'i' 로 농축되어졌다. 획득된 농축 단백질 용액은 'k'중량%의 단백질 함량을 가졌다. 이 농축된 단백질 용액은 'n' 중량%의 단백질 함량과 함께 'm' kg의 저온 살균되고 농축된 단백질 용액을 제공하기 위하여 'l' 분 동안 60℃로 저온 살균되어졌다.

'o'℃에서 농축된 용액은 'q'℃의 온도를 갖는 찬 RO 물속에서 'p'로 희석되어졌다. 즉시 흰 구름이 형성되어졌다 침전이 허락되어졌다. 상부 희석 물은 제거되어졌다 침전된, 점성의, 끈적끈적한 덩어리(PMM)가 원심분리에 의해 'r' wt%의 여과된 단백질 용액의 생산율로 회수되어졌다. 단백질로부터 유래된 건조 PMM은 's'%(N x 6.25)d.b.의 단백질 함량을 갖는 것이 발견되었다. 이 제품은 't'C307C로 명명되었다.

세 가지 실행을 위한 변수들 'a' 내지 't'는 다음의 표 1에서 정의되어진다:

본 출원에 개시된 염화칼슘 첨가는 PMM 침전으로부터 상청액에 시행되었다.

'u' L 의 상청액이 염화칼슘의 첨가에 의해 'v' mS의 전도성으로 조정되어졌다. 이 용액은, 'w' L 의 감소된 피드 산 염 함량이 되도록 침전된 피드 산 여 물질을 제거하기 위하여, 원심분리 및/또는 여과되어졌다, 'x' 중량%의 단백질 농도로 단백질 용액이 정화되어졌다. 감소된 피드 산 염 함량의 정화된 단백질 용액은 HCl의 첨가에 의해 pH 'y'로 조정되어졌다, 'aa'달톤의 분자량 차단을 갖는 폴리에테르슬폰(polyethersulfone)(PES)막을 사용하여 한외거르기에 의해 'z' L 로 용량을 줄였다. 이 농축물은 'ab' 용량의 pH 3 역삼투 정화된 (RO) 물로 동일한 막 상에서 디아필트레이션(diafiltration)되었다. 디아필트레이션(diafiltration)된 농축물은 'ac' 중량% 단백질을 함유하였다. 상청액으로부터 부분적으로 회수된 단백질과 함께, 여과된 단백질 용액의 전체 단백질 회수는 'ad' 중량% 였다. 농축물의 'ae' L 부분이 과립 활성화된 탄소의 'af' L 흡착제 부피(BV)를 통해 pH 3에서 'ag' BV/hr의 률로 통과되게 함으로서 색상감소단계에 놓여졌다. 감소된 색상 및 'ai' 중량% 의 단백질 함량을 갖는 'ah' L 의 GAC 처리된 용액은 스프레이 건조되어졌고 't'C200CaC로 명명되어졌다. 이 C200CaC는 'aj'(N x 6.25)d.b.의 단백질 함량을 가졌다. 나머지 'ak'의 농축물은 'al'%(N x 6.25)d.b.의 단백질 함량을 가진 't'C200Ca로 명명된 최종제품을 형성하기 위하여 더 이상의 정화단계들 없이 스프레이 건조되어졌다. 세 가지 실행을 위한 변수들 't' 내지 'al'는 다음의 표 2에서 정의되어진다:

주의-실행 BW-SA082-F09-08A로부터 디아필트레이션(diafiltration)되고, 농축되되고 처리된 상청액은 탄소 처리 및 건조 전에 여과에 의해 세련되어졌다.

실시예 2:

이 실시예는, 만 약 더 이상의 처리 없이 건조된다면, 상청액에 칼슘 염의 첨가에 의해 형성된 침전물이 산성화 및 추가 처리 전에 제거되지 않은 본 발명의 일 실시예에 따른 분리물을 생산해야만 하는, 농축된 카놀라 단백질 용액의 생산을 기술하고 있다.

카놀라 가루의 'a' kg이 주변 온도에서 'c' M NaCl 용액의 'b' L에 첨가되었고 수용성 단백질 용액을 제공하기 위하여 30분 동안 휘저어졌다. 잔여 카놀라 가루는 제거되어졌다 획득된 단백질 용액은 'e' 중량%의 단백질 함량을 갖는 부분적으로 정화된 단백질 용액의 'd'L을 생산하기 위하여 원심분리에 의해 부분적으로 정화되었다. 이 부분적으로 정화된 단백질 용액은 단백질 용액이 더욱 정화되도록 여과되어졌다 'g' 중량%의 단백질 함량을 갖는 용량 'f' L의 용액을 얻었다.

단백질 추출 용액의 'h'L 약수가 'j' 달톤의 분자 중량 차단을 갖는 폴리에테르슬폰(polyethersulfone)(PES)막 상에서 'i' kg로 농축되어졌다. 획득된 농축 단백질 용액은 'k'중량%의 단백질 함량을 가졌다. 이 농축된 단백질 용액은 'm' 중량%의 단백질 함량을 포함하는 'l' kg의 저온 살균되고 농축된 단백질 용액을 제공하기 위하여 'l' 분 동안 60℃로 저온 살균되어졌다.

'n'℃에서 저온 살균되고 농축된 용액은 'p'℃의 온도를 갖는 찬 RO 물속에서 'o'로 희석되어졌다. 즉시 흰 구름이 형성되어졌다 침전이 허락되어졌다. 상부 희석 물은 제거되어졌다 침전된, 점성의, 끈적끈적한 덩어리(PMM)가 원심분리에 의해 'q' wt%의 여과된 단백질 용액의 생산율로 회수되어졌다. 단백질로부터 유래된 건조 PMM은 'r'%(N x 6.25)d.b.의 단백질 함량을 갖는 것이 발견되었다. 이 제품은 's'C300으로 명명되었다.

하나의 실행을 위한 변수들 'a' 내지 's'는 다음의 표 3에서 정의되어진다:

본 출원에 개시된 염화칼슘 첨가는 PMM 침전으로부터 상청액에 시행되었다.

'u' 중량%의 단백질 용액과 함께 't' L 의 상청액이 염화칼슘의 첨가에 의해 'v' mS의 전도성으로 조정되어졌다, 연무가 형성되었다. 이 단백질 용액은 HCl의 첨가에 의해 pH'w' 로 조정되어졌다, 샘플은 정화되어졌다. 'x'L의 이 용액의 약수는 'z'달톤의 분자량 차단을 갖는 폴리에테르슬폰(polyethersulfone)(PES)막을 사용하여 한외거르기에 의해 'y' L 로 용량을 줄였다. 이 농축물은 'aa' 용량의 pH 3 역삼투 정화된 (RO) 물로 동일한 막 상에서 디아필트레이션(diafiltration)되었다. 'ab' kg의 디아필트레이션(diafiltration)된 농축물은 'ac' 중량% 단백질을 함유하였다. 상청액으로부터 부가적으로 회수된 단백질과 함께, 여과된 단백질 용액의 전체 단백질 회수는 'ad' 중량% 였다. 하나의 실행을 위한 변수들 's' 내지 'ad'는 다음의 표 4에서 정의되어진다:

실시예 3:

이 실시예는, 만 약 더 이상의 처리 없이 건조된다면, 부분적으로 농축된 상청액에 칼슘염이 첨가되고, 침전물이 제거되며 샘플이 산성화된 본 발명의 일 실시예에 따른 분리물을 생산해야만 하는, 농축된 카놀라 단백질 용액의 생산을 기술하고 있다.

카놀라 가루의 'a' kg이 주변 온도에서 'c' M NaCl 용액의 'b' L에 첨가되었고 수용성 단백질 용액을 제공하기 위하여 30분 동안 휘저어졌다. 잔여 카놀라 가루는 제거되어졌다 획득된 단백질 용액은 'e' 중량%의 단백질 함량을 갖는 부분적으로 정화된 단백질 용액의 'd'L을 생산하기 위하여 원심분리에 의해 부분적으로 정화되었다. 이 부분적으로 정화된 단백질 용액은 단백질 용액이 더욱 정화되도록 여과되어졌다 'g' 중량%의 단백질 함량을 갖는 용량 'f' L의 용액을 얻었다.

단백질 추출 용액의 'h'L 약수가 'j' 달톤의 분자 중량 차단을 갖는 폴리에테르슬폰(polyethersulfone)(PES)막 상에서 'i' kg으로 농축되어졌다. 획득된 농축 단백질 용액은 'k'중량%의 단백질 함량을 가졌다.

'l'℃에 있는 이 농축된 용액은 'n'℃의 온도를 갖는 찬 RO 물속에서 'm'로 희석되어졌다. 즉시 흰 구름이 형성되어졌다 침전이 허락되어졌다. 상부 희석 물은 제거되어졌다 침전된, 점성의, 끈적끈적한 덩어리(PMM)가 원심분리에 의해 'o' wt%의 여과된 단백질 용액의 생산율로 회수되어졌다. 단백질로부터 유래된 건조 PMM은 'p'%(N x 6.25)d.b.의 단백질 함량을 갖는 것이 발견되었다. 이 제품은 'q'C302로 명명되었다.

하나의 실행을 위한 변수들 'a' 내지 'q'는 다음의 표 5에서 정의되어진다:

본 출원에 개시된 염화칼슘 첨가는 PMM 침전으로부터 부분적으로 농축된 상청액에 시행되었다.

's' 중량%의 단백질 함량과 함께 'r' L 의 상청액은 't'달톤의 분자량 차단을 갖는 폴리에테르슬폰(polyethersulfone)(PES)막을 사용하여 한외거르기에 의해 7의 용량 감소 인자로 농축되어졌다. 'u'L의 용량을 가지며 'v' 중량%의 단백질 함량을 갖는 부분적으로 농축된 상청액은 단백질 중량의 3.5% 염화칼슘의 첨가에 의해 'w' mS의 전도성으로 조정되어졌다, 연무가 형성되었다. 이 용액은 피드 산 염 함량이 'x' L 로 감소되고 'y'중량%의 단백질 함량의 정화되고, 부분적으로 농축된 단백질 용액을 얻도록 침전된 피드 산 염 물질을 제거하기 위하여, 원심분리 및/또는 여과되어졌다. 다음, 피드 산 염 함량이 감소되고, 정화되었으며, 부분적으로 농축된 단백질 용액은 HCl의 첨가에 의해 pH 'z'로 조정되어졌다, 상청액의 초기 농축을 위해 사용된 막과 동일한 막을 사용하여 한외거르기를 함으로서 'aa'L로더 농축되어졌다. 이 농축된 용액은 'ab' 용량의 pH 3 RO 물로 동일한 막 상에서 디아필트레이션(diafiltration)되었다. 디아필트레이션(diafiltration)된 농축물은 깨끗하였고, 'ac' kg의 무게와 'ad' 중량%의 단백질 함량을 가졌고, 'ae' wt%의 여과된 단백질 용액의 생산률로 얻어졌다.

하나의 실행을 위한 변수들 'r' 내지 'ae'는 다음의 표 6에서 정의되어진다:

실시예 4:

이 실시예는 염화칼슘이 부분적으로 농축된 상청액은 물론 상청액에 첨가되고, 제 2 첨가 후에 형성된 침전물을 제거한 본 발명의 일 실시예에 따른 카놀라 단백질 분리물의 생산을 기술하고 있다.

카놀라 가루의 'a' kg이 주변 온도에서 'c' M NaCl 용액의 'b' L에 첨가되었고 수용성 단백질 용액을 제공하기 위하여 30분 동안 휘저어 졌다. 잔여 카놀라 가루는 제거되어졌다 획득된 단백질 용액은 'e' 중량%의 단백질 함량을 갖는 부분적으로 정화된 단백질 용액의 'd'L을 생산하기 위하여 원심분리에 의해 부분적으로 정화되었다. 이 부분적으로 정화된 단백질 용액은 단백질 용액이 더욱 정화되도록 여과되어졌다 'g' 중량%의 단백질 함량을 갖는 용량 'f' L의 용액을 얻었다.

단백질 추출 용액의 'h'L 약수가 'j' 달톤의 분자 중량 차단을 갖는 폴리에테르슬폰(polyethersulfone)(PES)막 상에서 'i' kg으로 농축되어졌다. 획득된 농축 단백질 용액은 'k'중량%의 단백질 함량을 가졌다. 이 농축된 단백질 용액은 농축단계에서 사용된 것과 동일한 막 상에서 'c' M NaCl의 'l'용량으로 디아필트레이션(diafiltration)되어졌다. 이 디아필트레이션(diafiltration)된 농축물은 'm'중량%의 단백질을 함유하였다.

'n'℃에 있는 이 농축된 용액은 'p'℃의 온도를 갖는 찬 RO 물속에서 'o'로 희석되어졌다. 즉시 흰 구름이 형성되어졌다 침전이 허락되어졌다. 상부 희석 물은 제거되어졌다 침전된, 점성의, 끈적끈적한 덩어리(PMM)가 원심분리에 의해 'q' wt%의 여과된 단백질 용액의 생산율로 회수되어졌다. 단백질로부터 유래된 건조 PMM은 'r'%(N x 6.25)d.b.의 단백질 함량을 갖는 것이 발견되었다. 이 제품은 's'C307C로 명명되었다.

두 개의 실행을 위한 변수들 'a' 내지 's'는 다음의 표 7에서 정의되어진다:

본 출원에 개시된 염화칼슘 첨가는 PMM 침전으로부터의 상청액 및 부분적으로 농축된 상청액에 시행되었다.

'u' 중량%의 단백질 함량과 함께 't' L 의 상청액은 단백질 중량 당 2.5% 염화칼슘의 첨가에 의해 'v' mS의 전도성으로 조정되어졌다, 연무는 형성되지 않았다. 이 용액은 HCl의 첨가에 의해 pH'w'로 조정되어졌다. 'x'L의 염화칼슘이 처리되고 pH가 조정된 상청액은 'y'달톤의 분자량 차단을 갖는 폴리에테르슬폰(polyethersulfone)(PES)막을 사용하여 한외거르기에 의해 7의 용량 감소 인자로 농축되어졌다. 'z'L의 용량을 가지며 'aa' 중량%의 단백질 함량을 갖는 부분적으로 농축된 상청액은 단백질 중량의 2.5% 염화칼슘의 첨가에 의해 'ab' mS의 전도성으로 조정되어졌다, 연무가 형성되었다. 이 용액은 'ad'중량%의 단백질 함량으로 'ac'L의 정화되고, 부분적으로 농축된 단백질 용액을 얻도록 침전된 물질을 제거하기 위하여, 원심분리 및/또는 여과되어졌다. 다음, 정화되고 부분적으로 농축된 단백질 용액은 상청액의 초기 농축을 위해 사용된 막과 동일한 막을 사용하여 한외거르기를 함으로서 'ae'L로 더 농축되어졌다. 이 농축된 용액은 'af' 용량의 pH 3 RO 물로 동일한 막 상에서 디아필트레이션(diafiltration)되었다. 디아필트레이션(diafiltration)된 농축물은 'ag' 중량%의 단백질을 함유하였다. 상청액으로부터 회수된 부가적 단백질과 함께, 여과된 단백질 용액의 전체 단백질 회수는 'ah' wt% 였다. 'ai' kg의 농축물의 약수는 'aj'L BV 의 과립 활성화된 탄소를 통해 pH 3에서 'ak' BV/hr의 률로 통과시킴으로 인해 색상감소단계에 놓여 졌다. 감소된 색상과 'am' 중량%의 단백질 함량을 갖는 'al' kg의 GAC 처리 용액은 스프레이 건조되어졌다, 's'C200CaC로 명명되었다. 이 C200CaC는 'an' wt%(N x 6.25)d.b.의 단백질 함량을 가졌다. 나머지의 'ao' 농축물은 'ap'%(N x 6.25)d.b.의 단백질 함량을 가진 's'C200Ca로 명명된 최종제품을 형성하기 위하여 더 이상의 정화단계들 없이 스프레이 건조되어졌다.

두 개의 실행을 위한 변수들 'a' 내지 'ap'는 다음의 표 8에서 정의되어진다:

실시예 5

이 실시예는 산성화 단계가 없는 본 발명의 일 실시예에 따른 신규의 카놀라 단백질 분리물의 생산을 개시하고 있다.

카놀라 가루의 'a' 그람이 주변 온도에서 'c' M NaCl 용액의 'b' mL에 첨가되었고 수용성 단백질 용액을 제공하기 위하여 30분 동안 휘저어졌다. 잔여 카놀라 가루는 제거되어졌다 획득된 단백질 용액은 'e' 중량%의 단백질 함량을 갖는 'd'mL의 단백질 용액을 생산하기 위하여 원심분리 및 여과에 의해 정화되었다. 이 단백질 추출 용액의 'f' ml 약수는 'h' 달톤의 분자량 차단을 갖는 셀룰로스(cellulose)막 상에서 농축되어 'g'ml의 용량으로 감소되어졌다. 획득된 농축 단백질 용액은 'i'중량%의 단백질 함량을 가졌다.

'j'℃로 농축된 용액은 'l'℃의 온도를 갖는 찬 RO 물속에서 'k'로 희석되어졌다. 즉시 흰 구름이 형성되어졌고 침전이 허락되어졌다. 상부 희석 물은 제거되어졌다 침전된, 점성의, 끈적끈적한 덩어리(PMM)가 원심분리에 의해 회수되어졌다. 단백질로부터 유래된 건조 PMM은 'm'%(N x 6.25)d.b.의 단백질 함량을 갖는 것이 발견되었다.

실행을 위한 변수들 'a' 내지 'm'은 다음의 표 9에서 정의되어진다:

본 출원에 개시된 염화칼슘 첨가는 상청액에 시행되었다.

'n' ml 의 상청액은 농축된 용액으로부터 염화칼슘의 첨가에 의해 'o' mS의 전도성으로 조정되어졌다. 이 용액은 'p' ml 의 감소된 피드 산 염 함량으로 'q' 중량%의 농도의 정화된 단백질 용액을 얻도록 침전된 피드 산 염 물질을 제거하기 위하여, 원심분리 및/또는 여과되어졌다. 감소된 피드 산 염 함량의 정화된 상청액은 's'달톤의 분자량 차단을 갖는 셀룰로스막을 사용하여 한외거르기에 의해 'r' ml 의 용량으로 줄였다. 이 농축물은 't' 용량의 물로 동일한 막 상에서 디아필트레이션(diafiltration)되었다. 디아필트레이션(diafiltration)된 농축물은 'u' 중량% 단백질을 함유하였고 'v' ml의 용량을 가졌다. 이 용액은 'w'%(N x 6.25)d.b.의 단백질 함량을 갖는 최종제품을 형성하기 위하여 더 이상의 정화단계들 없이 냉동 건조되어졌다. 실행을 위한 변수들 'n' 내지 'w'은 다음의 표 10에서 정의되어진다:

냉동건조된 제품은 천연 pH의 물에 용해되어졌다. 600 nm (A600) 의 빛 흡수력이 정화도의 지표로 결정되어졌다. 다음, 이 용액은 반으로 분리되어, 한 쪽 반은 pH 3으로 조정되어졌다, 다른 쪽 반은 pH 6으로 조정되어졌다. A600 상에서 다시 읽혀졌다. 획득된 결과는 다음의 표 11에 기록되어 있다:

모든 샘플들이 눈에 띄게 깨끗해졌다.

Claims (9)

1. 건조중량기준으로 적어도 약 90 wt%(N x 6.25)의 단백질 함량을 갖는 카놀라 단백질 분리물을 제조하는 방법에 있어서,
   칼슘 피드산염 침전물을 형성하기 위하여, 약 5 mS 내지 약 30 mS, 바람직하게는 약 8 내지 10 mS의 전도성을 제공하도록 카놀라 단백질 미셀 덩어리의 침전으로부터의 상청액에, 칼슘 염, 바람직하게는 염화칼슘을 첨가하는 단계,
   정화 용액을 제공하도록 획득된 용액으로부터 침전된 칼슘 피드산염을 제거하는 단계,
   염산의 첨가에 의한 것과 같이, 약 2.0 내지 4.0, 바람직하게는 약 2.9 내지 3.2로 정화 용액의 pH를 선택적으로 조정하는 단계,
   정화 농축된 카놀라 단백질 용액을 생산하기 위하여, 선택적으로 pH-조정된 정화 용액을 적어도 약 50 g/L, 바람직하게는 약 50 내지 500 g/L, 더욱 바람직하게는 약 100 내지 250 g/L의 단백질 함량으로 농축하는 단계,
   정화 농축된 카놀라 단백질 용액을 pH 3 물의 용량으로와 같이 선택적으로 디아필트레이션(diafilteration)하는 단계,
   과립 활성화된 탄소 처리와 같은 것으로서 색상제거단계를 선택적으로 수행하는 단계, 및
   농축된 단백질 용액을 건조하는 단계를 포함하는 카놀라 단백질 분리물을 제조하는 방법.
2. 건조중량기준으로 적어도 약 90 wt%(N x 6.25)의 단백질 함량을 갖는 카놀라 단백질 분리물을 제조하는 방법에 있어서,
   카놀라 단백질 미셀 덩어리의 침전으로부터의 상청액을 약 50 g/L 이하의 농도로 부분적으로 농축하는 단계,
   부분적으로 농축된 상청액으로부터 칼슘 피드산염을 침전시키기 위하여, 약 2 mS 내지 약 30 mS, 바람직하게는 약 4 내지 10 mS의 전도성을 제공하도록 부분적으로 농축된 상청액에, 칼슘 염, 바람직하게는 염화칼슘을 첨가하는 단계,
   정화 용액을 제공하도록 획득된 용액으로부터 침전된 칼슘 피드산염을 제거하는 단계,
   염산의 첨가에 의한 것과 같이, 약 2.0 내지 4.0, 바람직하게는 약 2.9 내지 3.2로 정화 용액의 pH를 선택적으로 조정하는 단계,
   정화 농축된 카놀라 단백질 용액을 생산하기 위하여, 선택적으로 pH-조정된 정화 용액을 적어도 약 50 g/L, 바람직하게는 약 50 내지 500 g/L, 더욱 바람직하게는 약 100 내지 250 g/L의 단백질 함량으로 농축하는 단계,
   정화 농축된 카놀라 단백질 용액을 pH 3 물의 용량으로와 같이 선택적으로 디아필트레이션(diafilteration)하는 단계,
   과립 활성화된 탄소 처리와 같은 것으로서 색상제거단계를 선택적으로 수행하는 단계, 및
   농축된 단백질 용액을 건조하는 단계를 포함하는 카놀라 단백질 분리물을 제조하는 방법.
3. 건조중량기준으로 적어도 약 90 wt%(N x 6.25)의 단백질 함량을 갖는 카놀라 단백질 분리물을 제조하는 방법에 있어서,
   농축된 상청액을 생산하기 위하여, 카놀라 단백질 미셀 덩어리의 침전으로부터의 상청액을 적어도 약 50 g/L, 바람직하게는 약 50 내지 500 g/L, 더욱 바람직하게는 약 100 내지 250 g/L의 단백질 함량으로 농축하는 단계,
   칼슘 피드산염의 침전을 일으키도록, 약 2 mS 내지 약 30 mS, 바람직하게는 약 4 내지 10 mS의 전도성을 제공하기 위하여 농축된 상청액에, 칼슘 염, 바람직하게는 염화칼슘을 첨가하는 단계,
   정화 용액을 제공하도록 획득된 용액으로부터 침전된 칼슘 피드산염을 제거하는 단계,
   염산의 첨가에 의한 것과 같이, 약 2.0 내지 4.0, 바람직하게는 약 2.9 내지 3.2로 정화 용액의 pH를 선택적으로 조정하는 단계,
   정화되고 선택적으로 pH-조정된 용액을 pH 3 물의 용량으로와 같이 선택적으로 디아필트레이션(diafilteration)하는 단계,
   과립 활성화된 탄소 처리와 같은 것으로서 색상제거단계를 선택적으로 수행하는 단계, 및
   정화되고 선택적으로 pH-조정된 단백질 용액을 건조하는 단계를 포함하는 카놀라 단백질 분리물을 제조하는 방법.
4. 건조중량기준으로 적어도 약 90 wt%(N x 6.25)의 단백질 함량을 갖는 카놀라 단백질 분리물을 제조하는 방법에 있어서,
   칼슘 피드 산 염의 침전을 일으키기에 충분하고 약 1 mS 내지약 3.5 mS, 바람직하게는 약 1 내지 2 mS의 전도성을 제공하도록 카놀라 단백질 미셀 덩어리의 침전으로부터의 상청액에 초기 량의 칼슘염, 바람직하게는 염화칼슘을 첨가하는 단계,
   산성화된 용액을 형성하기 위하여, 염산의 첨가에 의한 것과 같이, 약 2.0 내지 4.0, 바람직하게는 약 2.9 내지 3.2로 획득된 용액의 pH를 조정하는 단계,
   산성화된 용액을 약 50 g/L 이하의 단백질 농도로 부분적으로 농축하는 단계,
   형성하기 위한 침전을 일으키도록, 약 4 mS 내지 약 30 mS, 바람직하게는 약 4 내지 10 mS의 전도성을 제공하기 위하여, 추가 량의 칼슘염, 바람직하게는 염화칼슘을 첨가하는 단계,
   정화되고 pH-조정된 용액을 제공하도록 획득된 용액으로부터 침전물을 제거하는 단계,
   정화 농축된 카놀라 단백질 용액을 생산하기 위하여, 정화되고 pH-조정된 용액을 적어도 약 50 g/L, 바람직하게는 약 50 내지 500 g/L, 더욱 바람직하게는 약 100 내지 250 g/L의 단백질 함량으로 농축하는 단계,
   정화된 카놀라 단백질 용액을 pH 3 물의 용량으로와 같이 선택적으로 디아필트레이션(diafilteration)하는 단계,
   과립 활성화된 탄소 처리와 같은 것으로서 색상제거단계를 선택적으로 수행하는 단계, 및
   농축된 단백질 용액을 건조하는 단계를 포함하는 카놀라 단백질 분리물을 제조하는 방법.
5. 건조중량기준으로 적어도 약 90 wt%(N x 6.25)의 단백질 함량을 갖는 카놀라 단백질 분리물을 제조하는 방법에 있어서,
   상청액으로부터 칼슘 피드산염의 침전을 일으키도록, 약 5 mS 내지 약 30 mS, 바람직하게는 약 8 내지 10 mS의 전도성을 제공하기 위하여 카놀라 단백질 미셀 덩어리의 침전으로부터의 상청액에, 칼슘 염, 바람직하게는 염화칼슘을 첨가하는 단계,
   침전물을 용해하고 정화된 pH-조정된 용액을 형성하기 위하여, 칼슘 피드산염 침전물의 제거 없이 염산의 첨가에 의한 것과 같이, 약 2.0 내지 4.0, 바람직하게는 약 2.9 내지 3.2로 획득된 용액의 pH를 조정하는 단계,
   정화 농축된 카놀라 단백질 용액을 생산하기 위하여, 정화 pH-조정된 용액을 적어도 약 50 g/L, 바람직하게는 약 50 내지 500 g/L, 더욱 바람직하게는 약 100 내지 250 g/L의 단백질 함량으로 농축하는 단계,
   정화 농축된 카놀라 단백질 용액을 pH 3 물의 용량으로와 같이 선택적으로 디아필트레이션(diafilteration)하는 단계,
   과립 활성화된 탄소 처리와 같은 것으로서 색상제거단계를 선택적으로 수행하는 단계, 및
   농축된 단백질 용액을 건조하는 단계를 포함하는 카놀라 단백질 분리물을 제조하는 방법.
6. 건조중량기준으로 적어도 약 90 wt%(N x 6.25)의 단백질 함량을 갖는 카놀라 단백질 분리물을 제조하는 방법에 있어서,
   카놀라 단백질 미셀 덩어리의 침전물로부터의 상청액을 약 50 g/L 이하의 농도로 부분적으로 농축하는 단계,
   부분적으로 농축된 상청액으로부터 칼슘 피드 산 염을 침전시키도록, 약 2 mS 내지 약 30 mS, 바람직하게는 약 4 내지 10 mS의 전도성을 제공하기 위하여, 부분적으로 농축된 상청액에 칼슘염, 바람직하게는 염화칼슘을 첨가하는 단계,
   침전물을 용해하고 정화된 pH-조정된 용액을 형성하기 위하여, 칼슘 피드산염 침전물의 제거 없이 염산의 첨가에 의한 것과 같이, 약 2.0 내지 4.0, 바람직하게는 약 2.9 내지 3.2로 획득된 용액의 pH를 조정하는 단계,
   정화 농축된 카놀라 단백질 용액을 생산하기 위하여, pH-조정된 정화용액을 적어도 약 50 g/L, 바람직하게는 약 50 내지 500 g/L, 더욱 바람직하게는 약 100 내지 250 g/L의 단백질 함량으로 농축하는 단계,
   정화된 카놀라 단백질 용액을 pH 3 물의 용량으로와 같이 선택적으로 디아필트레이션(diafilteration)하는 단계,
   과립 활성화된 탄소 처리와 같은 것으로서 색상제거단계를 선택적으로 수행하는 단계, 및
   농축된 단백질 용액을 건조하는 단계를 포함하는 카놀라 단백질 분리물을 제조하는 방법.
7. 건조중량기준으로 적어도 약 90 wt%(N x 6.25)의 단백질 함량을 갖는 카놀라 단백질 분리물을 제조하는 방법에 있어서,
   농축된 상청액을 생산하기 위하여, 카놀라 단백질 미셀 덩어리의 침전으로부터의 상청액을 적어도 약 50 g/L, 바람직하게는 약 50 내지 500 g/L, 더욱 바람직하게는 약 100 내지 250 g/L의 단백질 함량으로 농축하는 단계,
   칼슘 피드산염의 침전을 일으키도록, 약 2 mS 내지 약 30 mS, 바람직하게는 약 4 내지 10 mS의 전도성을 제공하기 위하여 농축된 상청액에, 칼슘 염, 바람직하게는 염화칼슘을 첨가하는 단계,
   침전물을 용해하고 정화된 pH-조정된 용액을 형성하기 위하여, 칼슘 피드산염 침전물의 제거 없이 염산의 첨가에 의한 것과 같이, 약 2.0 내지 4.0, 바람직하게는 약 2.9 내지 3.2로 획득된 용액의 pH를 조정하는 단계,
   정화되고 pH-조정된 용액을 pH 3 물의 용량으로와 같이 선택적으로 디아필트레이션(diafilteration)하는 단계,
   과립 활성화된 탄소 처리와 같은 것으로서 색상제거단계를 선택적으로 수행하는 단계, 및
   정화되고 pH-조정된 단백질 용액을 건조하는 단계를 포함하는 카놀라 단백질 분리물을 제조하는 방법.
8. 제 1항 내지 제 7항 중 어느 한 항의 제조방법에 의해 제조된 카놀라 단백질 분리물.
9. 제 8항의 카놀라 단백질 분리물에 용해된 산성 용액.