KR20110050613A

KR20110050613A - 대두 종자로부터의 휘발성 분획 및 조성물

Info

Publication number: KR20110050613A
Application number: KR1020110040816A
Authority: KR
Inventors: 추 이-헝
Original assignee: 추 이-헝
Priority date: 2003-08-11
Filing date: 2011-04-29
Publication date: 2011-05-16
Also published as: TW200505466A; TWI333420B; KR101284071B1; KR101252023B1; KR20120081046A; KR20050023196A; KR101220124B1

Abstract

본 발명은 조추출물의 증발에 의해 제조되는, 대두(Glycine max(L.) Merr.) 종자로부터의 휘발성 분획 및 그의 약제학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 피부 상해 및 피부 질환의 치료, 세포의 재생 증진 및 체모의 증식 촉진을 위해 상기 휘발성 분획을 이용하는 방법을 제공한다.

Description

대두 종자로부터의 휘발성 분획 및 조성물{VAPOR FRACTION FROM SEEDS OF GLYCINE MAX(L.) MERR. AND COMPOSITION THEREOF}

본 발명은 주로, 피부 상해의 치료, 피부 질환의 치료, 세포 재생의 촉진 및 체모의 증식 촉진에 있어서 유효한 대두[Glycine max(L.) Merr.] 종자로부터의 휘발성 분획에 관한 것이다.

콩 및 검은 콩을 포함하는 대두[Glycine max(L.) Merrill]는 전세계 기름과 단백질의 가장 중요한 공급원이다. 예를 들면, 대두는 가공 처리되어 샐러드 오일로서, 또는 마가린 및 쇼트닝의 제조용으로서 사용되는 식용 반건성유를 얻을 수 있다. 대두유는 또한 도료, 리놀륨, 오일클로스(oil cloth), 인쇄 잉크, 비누, 살충제 및 소독약의 제조에 사용할 수 있다. 그 밖에도, 오일 산업의 부산물로부터 얻어지는 레시틴 인지질은 식품, 화장품, 의약, 피혁, 도료, 플라스틱, 비누 및 세제에서, 습윤제 및 안정화제로서 사용될 수 있다. 콩깻묵(大豆粕)은 단백질이 매우 풍부한 가축용 사료이다. 또한, 대두 단백질은 합성 섬유, 접착제, 직물의 사이징(sizing), 방수 가공, 소화용 포말 등의 제조에 사용될 수 있다.

의학적 이용에 있어서는, 대두는 많은 질병에 효과를 갖는 것으로 보고되어 있다.

대두는 장, 심장, 신장, 간 및 위의 기능을 조절하기 위한 영양 보조 식품으로서 사용될 수 있다. 대두유는 불포화 지방산을 많이 함유하고 있으므로, 높은 콜레스테롤 혈증에 대처하기 위해 사용될 수 있다. 대두로부터의 의약 레시틴은 항지방간 제제로서 기능한다. 또한, 항경직 인자(antistiffness factor)로서 알려져 있는 스티그마스테롤 및 어느 종류의 항고혈압증 약에서의 디오스게닌 대신에 사용되는 시토스테롤은 대두로부터 조제되었다. 대두에서 발견된 이소플라본 및 식물 에스트로겐은 유방암, 전립선암 및 대장암을 포함한 여러 가지 암에 대해 예방 효과를 갖는 것으로 시사되었다(Adlercreutz, H.; 식물 에스트로겐류와 암(Phyto-oestrogens and cancer), The Lancet Oncology, 2002, Vol.3, p.364-373 참조). 식물 스테롤 첨가 마가린의 소비는 또한 중년 이상의 고콜레스테롤 혈증인 사람의 총혈장 콜레스테롤 및 LDL-콜레스테롤 농도를 낮추는 것으로 밝혀졌다(Matvienko, O.A., Lewis, D.S., Swanson, M., Aendt, B., Rainwater, D.L., Stewart, J., and Alekel, D.L.; "다짐육에서의 대두 식물 스테롤의 1일 1회 투여는 경증 고콜레스테롤 혈증의 젊은 남자의 혈청 총콜레스테롤 및 LDL 콜레스테롤을 감소시킨다", Am . J. Clin . Nutr., 2002, 76, p.57-64 참조).

대두로부터의 특정 종류의 추출물은 또한 의약 효과를 갖는 것으로 보고되어 있다. 차대두종(茶大豆種)인 아키타-자이라이(Akita-Zairai)의 씨앗 껍질에서 얻어진 70% 수성 아세톤 추출물의 1,1-디페닐-2-피크릴히드라질(DPPH) 라디칼에 대한 포착 활성이 개시되어 있다(Takahata, Y., O.-Kameyama, M., Furuta, S., Takahashi, M., and Suda, I.; 높은 라디칼 포착활성을 갖는 차대두 종피 중의 고중합 프로시아니딘, J. Agric . Food Chem., 2001, 49, p.5843-5847 참조). 60℃ 미만에서 분말 광석 하에서 서서히 볶아서, Aspergillus oryzae로 3일간에 걸쳐 발효시켜 각 성분을 저분자 물질로 변환한 배아 추출물, 대두, 미강(米糠), 테어 그라스(tear grass), 참깨, 보리, 시트론, 녹차, 녹엽 추출물 및 발아미(發芽米)로부터의 추출물은 항산화 효과를 갖는 것으로 밝혀졌다(Minamiyama, Y., Yoshikawa, T., Tanigawa, T., Takahashi, S., Naito, Y., Ichikawa, H., and Kondo, M.; 가공 처리된 곡류 식품의 항산화 효과, J. Nutr . Sci . Vitaminol., 1994, 40, p.467-477 참조). 인삼, 아브라나의 푸른 잎, 및 검은 콩, 팥, 녹두 및 대두를 포함하는 콩류의 자비(煮沸) 추출물은 높은 항암 촉진 및 라디칼 포착 활성을 갖는 것으로 나타났다(Maeda, H., Katsuki, T., Akaike, T. and Yasutake, R.; 지질 과산화 라디칼과 암 촉진 효과 사이의 높은 상관성: 여러 가지 식물 추출물에 의한 에프스타인-바르(Epstein-Barr) 바이러스/B-임파구계에서의 암 촉진의 억제 및 알킬 과산화 라디칼의 포착, Jpn . J. Cancer Res., 1992, 83, p.923-928 참조). 검은 콩의 수추출물도 또한 래트에서의 혈청 글루탐산-옥살레이트-트랜스아미나아제(sGOT) 및 혈청 글루탐산-피루베이트-트랜스아미나아제(sGPT) 활성을 측정함으로써 아세토아미노펜 유발 간상해에 대한 효과가 보고되어 있다(Wu. S.-J., Wang, J.-S. and Chang, C.-H.; 콩과식물의 간 보호 활성의 평가, Phytomedicine, 2001, Vol.8(3), p.213-219 참조). 저급 지방족 알코올 및 저비점 에스테르의 혼합계로 이루어지는 추출액에서의 대두 종자의 추출물이 갈증을 해소하기 위한 청량 드링크제로서 제시되었다(일본 특허 제1117767호).

대두로부터의 일부 특정 추출물이 몇 가지 피부 질환 치료에서의 화장품 또는 의약에 적용된다는 것이 밝혀졌다.

일정한 비율로 스핀고미엘린 및 인지질을 함유하는 대두 추출물이 건조 피부의 치료용 화장품에 사용되는 것이 개시되었다(미국 특허출원 공개 US2002/0009509 A1호 공보). 그러한 추출물은 숙성된 전립대두(全粒大豆) 및 탈지대두 가루를, 지방족 알코올만을 사용하여, 또는 물과의 혼합물로 추출하고, 이어서 지방족 탄화수소 및 지방족 케톤으로 처리함으로써 제조되었다. 따라서, 상기 추출물은 지질 가용성이다.

유장(whey) 및 황벽나무(Phellodendron amurense Ruprecht) 추출물로부터 선택되는 하나 이상의 식물 추출물, 및 코가네바나(Scutellaria baicalensis Geoegi), 콘프리(Symphytum officinale Linne) 및 대두로부터 선택되는 하나 이상의 추출물을 함유하는 좌창약, 면포(comedon) 산생 저해제 또는 화장료 조성물이 좌창 또는 좌창에 기인하는 염증성 갈라진 피부와 같은 피부 질환의 예방 또는 치료에 효과가 있음이 밝혀졌다(일본 특개 2001-097842호 공보 참조). 조성물은 일반적인 음료, 식품, 등의 제조에 사용될 수 있다.

대두 또는 대두의 수출물로부터 얻어진 말로닐이소프라본 글리코사이드 및, 예를 들면, 말로닐다이진 등은 상피 세포 증식 촉진제로서 사용되었다(일본 특허 제9059166호 참조). 글리코사이드는 45∼65℃에서 2∼4시간, 수산화나트륨으로 pH 7.5∼9.0으로 조절한 수중에 껍질을 벗긴 대두를 액에 담그고, 대두를 제거하여 수추출 용액으로서 침지수를 얻고, 한외여과막에 의해 추출 용액으로부터 단백질을 제거하여 여과액을 얻고, 여과액을 흡착제와 접촉시키고, 알코올의 수성 용액 또는 알코올의 알칼리성 수성 용액을 사용함으로써 흡착한 물질로부터 글리코사이드를 용출하여 얻을 수 있다.

미생물에 의한 발효 대두 제품은 또한 항활성산소 작용 조성물, 약제, 식품, 화장품 및 의약품으로서 적용되었다(예; 일본 특허 제4139132호).

그러나, 어느 공지 기술도 대두로부터의 저농도 알코올을 함유하거나 함유하지 않는 휘발성 분획이 피부 상해 및 피부 질환을 치료하기 위해 용이하게 조제된다는 것을 교시 또는 시사하고 있지 않다.

본 발명은 피부 상해의 치료, 피부 질환의 치료, 세포의 재생 증진 및 체모의 증식 촉진의 극적인 효과를 나타내는, 대두의 종자로부터의 휘발성 분획을 제공하는 것이다.

본 발명의 휘발성 분획은,

(a) 약 15중량% 미만의 농도로 알코올을 함유하는 알코올 용액 또는 물에 종자의 조추출물(粗抽出物)을 공급하는 단계; 및

(b) 약 1기압 미만의 기압 및 약 110℃ 미만의 온도에서 상기 조추출물을 휘발시켜 휘발성 분획을 얻는 단계

를 포함하는 프로세스에 의해 조제된다.

상기 휘발성 분획은 고속 액체 크로마토그래피(HPLC)을 통해 독특한 프로파일을 나타내기 때문에 공지된 어느 대두 종자 추출물과도 상이하다. 특히, 내경(I.D.) 4.6mm, 길이(L) 250mm 및 입자경 5㎛의 Waters Sphersorb⁽ ^TM ⁾-ODS2 칼럼을 사용하여 200nm에서 측정한, 휘발성 분획 50㎕의 스펙트럼은, 변동계수 8%로, 머무름 시간(retention time) 2.910, 5.190, 13.190 및 50.815분에 피크를 갖는다. 단, 이 경우의 이동상(移動相)은, 0∼5분에서 95% H₂O/5% CH₃CN의 구배(gradient); 5∼30분에서 95% H₂O/5% CH₃CN의 구배; 30∼80분에서 75% H₂O/25% CH₃CN의 구배; 80∼100분에서 0% H₂O/100% CH₃CN의 구배; 100∼101분에서 0% H₂O/100% CH₃CN의 구배; 및 101분에서 95% H₂O/5% CH₃CN의 구배로 하고, 유속을 1㎖/분으로 한다.

본 발명은 또한 본 발명의 휘발성 분획을 포함하는 조성물을 제공한다. 특히, 상기 조성물은 의약 조성물, 화장품 조성물 또는 피부의 세정용 조성물에 사용될 수 있다.

본 발명에 의하면, 대두[Glycine max(L.) Merr.]의 휘발성 분획은 피부 상해의 치료, 피부 장애의 치료, 세포의 재생 증진, 및 체모의 증식 촉진에 있어서 극적인 효과를 가지는 사실이 예상치 않게 발견되었다.

본 발명에 의하면, 대두 종자로부터의 휘발성 분획은,

(a) 약 15중량% 미만의 농도로 알코올을 함유하는 알코올 용액 또는 물에 종자의 조추출물을 공급하는 단계; 및

를 포함하는 프로세스에 의해 조제된다.

알코올을 약 15% 미만의 농도로 함유하는 알코올 용액 또는 물에서의 종자의 조추출물로부터 얻어지는 휘발성 분획이 피부과학에서의 효과를 가진다는 사실이 예상치 않게 발견되었다. 상기 휘발성 분획은 용이하게 제조할 수 있다. 대두 종자로부터 조제된 의약 또는 화장품의 제품은 (1) 대두가 오래 전부터 소비되어 왔으며 비독성이라고 믿어지는 점, 및 (2) 대두는 비싸지 않다는 점 때문에 유리하다.

본 발명의 실시 양태에 있어서, 대두 종자로부터의 조추출물은 약 15중량% 미만 농도의 알코올 용액 또는 물을 사용한 추출에 의해 얻어진다. 당업자에 의해 통상 사용되는 식물 종자로부터 조추출물을 얻는 임의의 방법도 본 발명의 실시에 사용될 수 있다. 예를 들면, 조추출물은 종자를 분쇄, 교반, 교란, 절단 또는 잘게 자르기 등과 같은 임의의 통상적 수단으로 작은 조각으로 세분화하고, 약 15중량% 미만의 농도로 알코올 용액에 침지함으로써 얻을 수 있다. 바람직한 실시 양태에 있어서, 알코올의 농도는 약 10중량% 미만, 보다 바람직하게는 약 3중량% 또는 약 2중량%이다. 본 발명에 의하면, 조추출물은 또한 물로 추출할 수도 있다. 바람직한 실시 양태에 있어서, 종자편(種子片)은 약 5중량부 내지 약 10중량부 범위의 알코올 또는 물에 침지된다. 당업자에 의해 통상 사용되는, 세분화한 종자로부터 추출하는 임의의 방법도 본 발명의 실시에 사용할 수 있다.

본 발명에 의하면, 조추출물은 약 1기압 미만의 기압 및 약 110℃ 미만의 온도, 바람직하게는 약 60℃ 내지 약 110℃에서 증발된다. 휘발성 분획은 증기를 냉각함으로써 액체 형태로 채취할 수 있다.

본 발명의 바람직한 실시 양태에 있어서, 일정한 기압 및 온도로 조추출물을 증발시키고, 그 증기를 냉각함으로써 상기 휘발성 분획을 채취하는 프로세스는, 회전 증발기로 실시할 수 있고, 여기서 증기는 냉수가 공급되는 응축관에 증발시키고, 증기는 응축관을 통과하면서 냉각되어 휘발성 분획이 액상(液狀)으로 채취된다. 상기 조작은 단순하므로 비용이 낮다.

본 발명에 따른 휘발성 분획은 고속 액체 크로마토그래피(HPLC)로 분석하고, 동정할 수 있다. 예를 들면, 내경(I.D.) 4.6mm, 길이(L) 250mm 및 입자경 5㎛의 Waters Sphersorb⁽ ^TM ⁾-ODS2 칼럼을 사용하여 200nm에서 측정한, 휘발성 분획 50㎕의 스펙트럼은, 변동계수 8%로 머무름 시간 2.910, 5.190, 13.190 및 50.815분에 피크를 가진다. 단, 이경우의 이동상은, 0∼5분에서 95% H₂O/5% CH₃CN의 구배; 5∼30분에서 95% H₂O/5% CH₃CN의 구배; 30∼80분에서 75% H₂O/25% CH₃CN의 구배; 80∼100분에서 0% H₂O/100% CH₃CN의 구배; 100∼101분에서 0% H₂O/100% CH₃CN의 구배; 및 101분에서 95% H₂O/5% CH₃CN의 구배로 하고, 유속을 1㎖/분으로 한다. 스펙트럼에 의하면, 휘발성 분획 중의 물질은 강한 극성을 나타낸다. 그것은 공지 문헌에 개시된 다른 성분과는 크게 상이하다. 예를 들면, 다이제인(daidzein) 및 게니스테인(genistein)은 그 구조 중에 4개의 고리를 가지며, 약한 극성을 갖는다.

본 발명의 하나의 바람직한 실시 양태에서, 피부 상해의 치료, 피부 질환의 치료, 세포의 재생 증진 및 체모의 증식 촉진에서, 대두 종자를 보조하기 위해 몇 가지 종류의 약초가 첨가된다. 본 발명에 의하면, 휘발성 분획은 대두의 종자 및 참깨의 종자, 녹두의 종자 및 항균 약초로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 재료를 포함하는 원료로부터 얻어진다. 상기 원료로부터의 휘발성 분획의 조제 및 휘발성 분획의 분석과 동정은 앞에 기재되어 있다. 바람직하게는, 항균 약초는 장엽대황(掌葉大黃)의 건조 근경(根莖), 대황(大黃)의 건조 근경, 황벽(黃蘗)나무의 건조 수피(樹皮) 및 황백(黃柏; Phellodendri Cortex)의 건조 수피로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 또 다른 양태에 있어서, 원료는, 바람직하게, 약 40% 내지 약 100%의 대두 종자, 0% 내지 약 50%의 참깨 종자, 0% 내지 약 50%의 녹두 종자 및 0% 내지 약 30%의 항균 약초를 포함한다.

본 발명의 더욱 바람직한 실시 양태의 하나에서, 원료는 약 70%의 대두 종자, 약 20%의 참깨 종자, 약 5%의 장엽대황 또는 대황의 건조 근경 및 약 5%의 황벽나무 또는 황백의 건조 수피를 포함한다. 상기 원료는 약 2%의 알코올 중에 침지된다.

본 발명의 또 다른 바람직한 실시 양태에서, 원료는 약 80%의 대두 종자 및 약 20%의 녹두 종자를 포함한다. 상기 원료는 약 2%의 알코올 중에 침지된다.

본 발명의 또 다른 바람직한 실시 양태에서, 원료는 약 80%의 대두 종자 및 약 20%의 참깨 종자를 포함한다. 상기 원료는 약 2%의 알코올 중에 침지된다.

본 발명의 또 다른 바람직한 실시 양태에서, 원료는 약 90%의 대두 종자 및 약 10%의 장엽대황 또는 대황의 건조 근경을 포함한다. 상기 원료는 수 중에 침지된다.

본 발명의 또 다른 바람직한 실시 양태에서, 원료는 약 80%의 대두 종자, 약 10%의 참깨 종자 및 약 10%의 장엽대황 또는 대황의 건조 근경을 포함한다. 상기 원료는 수 중에 침지된다.

본 발명의 가장 바람직한 실시 양태에 있어서, 원료는 약 53%의 대두 종자, 약 20%의 참깨 종자, 약 17%의 녹두 종자, 약 5%의 장엽대황 또는 대황의 건조 근경 및 약 5%의 황벽나무 또는 황백의 건조 수피를 포함한다. 상기 원료는 약 3% 또는 약 2%의 알코올 또는 수 중에 침지된다. 또한, 내경(I.D.) 4.6mm, 길이(L) 250mm 및 입자경 5㎛의 Waters Sphersorb⁽ ^TM ⁾-ODS2 칼럼을 사용하여 200nm에서 측정한, 휘발성 분획 50㎕의 스펙트럼은, 변동계수 8%로, 머무름 시간 2.896, 5.111, 12.944 및 46.603분에 피크를 갖는다. 단, 이 경우의 이동상은, 0∼5분에서 95% H₂O/5% CH₃CN의 구배; 5∼30분에서 95% H₂O/5% CH₃CN의 구배; 30∼80분에서 75% H₂O/25% CH₃CN의 구배; 80∼100분에서 0% H₂O/100% CH₃CN의 구배; 100∼101분에서 0% H₂O/100% CH₃CN의 구배; 및 101분에서 95% H₂O/5% CH₃CN의 구배로 하고, 유속을 1㎖/분으로 한다.

본 발명은 또한, 본 발명에 의한 휘발성 분획을 포함하는 조성물을 제공한다. 바람직하게는, 상기 조성물은 의약 조성물, 화장품 조성물 및 피부의 세정용 조성물로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 본 발명에 따른 바람직한 실시 양태에서, 조성물은 추가로 보르네올 등의 항균제를 포함한다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 휘발성 분획의 양은 전조성물 중량의 약 70% 내지 약 80%의 범위이다.

본 발명의 하나의 실시 양태에 있어서, 조성물은 사람에게 적용이 용이한 연고를 형성하는 보르네올, 스테아르산, 스테아릴알코올, 팔미트산, 세틸알코올, 밀랍 및 폴리옥시에틸렌소르비탄 모노스테아레이트(POE)로부터 선택되는 1종 또는 2종 이상을 추가로 포함한다.

피부 상해 또는 피부 질환을 치료하는 방법은, 피부 상해의 치료, 피부 질환의 치료, 세포의 재생 증진 및 체모의 증식을 촉진하기 위해 유효한 충분량으로 본 발명에 따른 조성물을 적용하는 것을 포함한다.

본 발명의 휘발성 분획은 피부 상해의 치료, 피부 질환의 치료, 세포의 재생 증진, 및 체모의 증식 촉진에 유용하다. 예를 들면, 상기 피부 상해 또는 피부 질환은, 열상해, 햇볕그을림, 조사성(照射性) 상해, 급성 및 만성 외상, 반상 출혈(斑狀出血), 피부염, 반, 구진(丘疹), 소결절(小結節), 소수포(小水疱), 기종성 낭포(氣腫性囊胞), 농포(膿疱), 팽진, 반점, 낭포, 인설(鱗屑), 가피(痂皮), 피부갈라짐, 궤양(潰瘍), 좌창, 건피증, 낙설(落屑), 소양(搔痒), 알러지성 피부염, 피진 및 모낭결손을 포함한다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 조성물은 열상해, 조사성 상해, 급성 또는 만성 외상, 피부염, 괴저(壞疽), 만성 울혈성 궤양, 찰과상, 아토피성 피부염, 봉합창상, 당뇨병 창상 및 모낭결손을 치료하는 데 효과적이다.

이하에 기재되는 동물 모델에 있어서, 본 발명에 따른 휘발성 분획은, 육아(肉芽), 상흔형성성 및 알러지 없이 넓은 영역의 피부 결손을 치유하는 데 효과적임이 증명되었다. 또한, 모낭결손은 치유할 수 있고, 체모는 홍반 또는 딱지(eschar) 없이 다시 증식시킬 수 있었다. 본 발명에 따른 휘발성 분획으로 치료된 창상의 치유율 및 상태는 종래의 의약보다 양호하다. 본 발명에 따른 휘발성 분획으로 치료된 창상은 반흔(瘢痕) 없이 치유되고, 치유된 창상의 피부 색은 정상적인 피부 색과 동일하였다. 또한, 조직학적 시험에 있어서, 본 발명에 따른 휘발성 분획으로 치료된 창상의 피부 조직은 통상, 외관상 큰 장애와 복잡한 재수술을 일으키는 원인이 되는 섬유성 변성(fibrous degeneration)을 나타내지 않았다.

또한, 알러지 반응, 염증, 낭포 또는 홍진은 본 발명에 따른 휘발성 분획으로 치료된 창상에서는 발견되지 않았다. 치료 후, 창상의 부기관(副器官) 및 세포는 정상적 피부와 동일하게 증식되었다. 대조적으로, 종래의 의약으로 치료된 창상은 부기관 및 세포의 수가 더 적고, 창상의 섬유폭은 정상보다 컸다.

또한, 본 발명에 따른 휘발성 분획은 조사 상해의 치료에도 효과적이다. 이제까지, 조사 상해의 치료에 유효한 약물은 없었다. 조사 상해에 걸린 사람에 있어서, 휘발성 분획으로 치료된 후의 창상은 체모에 거의 손상을 나타내지 않고, 알러지가 나타나지 않는다는 사실이 예상치 않게 발견되었다.

또한, 창상 치유에서 통상 나타나는 염증이나 조직의 위축도 본 발명에 따른 휘발성 분획으로 치료된 창상에서는 발견되지 않았다. 회발성 분획은 피부가 손상된 창상의 치유에 효과적이다. 따라서, 본 발명은 넓은 영역과 피부 창상을 치료하는 데에 보다 양호하고 편리하며, 경제적인 방법을 제공하는 것이다.

본 발명에 의하여 제공되는 대두로부터의 휘발성 분획은, 피부 상해의 치료, 피부 장애의 치료, 세포의 재생 증진, 및 체모의 증식 촉진에 있어서 극적인 효과를 갖는다. 또한, 상기 휘발성 분획을 포함하는 조성물은 의약 조성물, 화장품 조성물 또는 피부의 세정용 조성물에 사용될 수 있다.

도 1은 본 발명의 방법에 의해 얻어진 분획 1의 HPLC 스펙트럼을 예시한 것으로, 도 1a는 0∼20분; 도 1b는 20∼40분; 도 1c는 40∼60분이다.
도 2는 본 발명의 방법에 의해 얻어진 분획 3의 HPLC 스펙트럼을 예시한 것으로, 도 2a는 0∼20분; 도 2b는 20∼40분; 도 2c는 40∼60분이다.
도 3은 실시예 3에서의 본 발명에 따른 연고로 치료한 전층(全層) 피부 창상의 사진을 예시한 것이다.
도 4는 실시예 3에서의 본 발명에 따른 연고로 치료한 전층 피부 창상에서의 털의 증식 상태를 나타내는 사진을 예시한 것으로, 도 4a는 분획 1∼3을 포함하는 연고; 도 4b는 분획 4∼6을 포함하는 연고이다.
도 5는 실시예 5에서의 치료하지 않은 심부 중간층 열상(熱傷)의 조직학적 검사 결과에 대한 현미경 사진을 예시한 것이다.
도 6은 실시예 5에서의 설파다이아진 은 약제로 치료한 심부(深部) 중간층 열상의 조직학적 검사 결과에 대한 현미경 사진을 예시한 것이다.
도 7은 실시예 5에서의 본 발명에 따른 연고로 치료한, 심부 중간층 열상의 조직학적 검사 결과에 대한 현미경 사진을 예시한 것이다.
도 8은 실시예 6에서의 설파다이아진 은 약제로 치료한, 대영역 전층 피부 창상의 조직학적 검사 결과에 대한 현미경 사진을 예시한 것이다.
도 9는 실시예 6에서의 본 발명에 따른 연고로 치료한, 대영역 전층 피부 창상의 조직학적 검사 결과에 대한 현미경 사진을 예시한 것이다.
도 10은 실시예 7에서의 본 발명에 따른 연고로 치료한, 조사(照射) 피부 상해의 조직학적 검사 결과에 대한 현미경 사진을 예시한 것이다.
도 11은 실시예 7에서의 치료하지 않은 조사 피부 상해의 조직학적 검사 결과에 대한 현미경 사진을 예시한 것이다.
도 12는 실시예 7에서의 정상 조직의 결과에 대한 현미경 사진을 예시한 것이다.
도 13은 실시예 8에서의 치료 전 토끼 귀의 피부염에 대한 사진을 예시한 것이다.
도 14는 실시예 8에서의 제1일째의, 본 발명에 따른 연고로 치료한 후의 토끼 귀의 피부염의 사진을 예시한 것이다.
도 15는 실시예 8에서의 제2일째의, 본 발명에 따른 연고로 치료한 후의 토끼 귀의 피부염의 사진을 예시한 것이다.
도 16은 실시예 8에서의 제3일째의, 본 발명에 따른 연고로 치료한 후의 토끼 귀의 피부염의 사진을 예시한 것이다.
도 17은 실시예 9에서의 당뇨병성 창상의 사진을 예시한 것이다.
도 18은 실시예 9에서의 당뇨병성 창상의 사진을 예시한 것이다.
도 19는 실시예 9에서의 2개월간 본 발명에 따른 연고로 치료한 당뇨병성 창상의 사진을 예시한 것이다.
도 20은 실시예 9에서의 5개월간 본 발명에 따른 연고로 치료한 당뇨병성 창상의 사진을 예시한 것이다.
도 21은 실시예 9에서의 5개월간 본 발명에 따른 연고로 치료한 당뇨병성 창상의 사진을 예시한 것이다.
도 22는 실시예 10에서의 만성 울혈성 궤양의 사진을 예시한 것이다.
도 23은 실시예 10에서의 2주간 본 발명에 따른 연고로 치료한 만성 울혈성 궤양의 사진을 예시한 것이다.
도 24는 실시예 10에서의 4주간 본 발명에 따른 연고로 치료한 만성 울혈성 궤양의 사진을 예시한 것이다.
도 25는 실시예 11에서의 반상(斑狀) 출혈의 사진을 예시한 것이다.
도 26은 실시예 11에서의 3일간 본 발명에 따른 연고로 치료한 반상 출혈의 사진을 예시한 것이다.
도 27은 실시예 11에서의 7일간 본 발명에 따른 연고로 치료한 반상 출혈의 사진을 예시한 것이다.
도 28은 실시예 12에서의 찰과상의 사진을 예시한 것이다.
도 29는 실시예 12에서의 7일간 본 발명에 따른 연고로 치료한 찰과상의 사진을 예시한 것이다.
도 30은 실시예 13에서의 본 발명에 따른 연고로 치료한 봉합 창상의 사진을 예시한 것이다.
도 31은 실시예 14에서의 아토피성 피부염의 사진을 예시한 것이다.
도 32는 실시예 14에서의 1주간 본 발명에 따른 연고로 치료한 아토피성 피부염의 사진을 예시한 것이다.
도 33은 실시예 14에서의 4주간 본 발명에 따른 연고로 치료한 아토피성 피부염의 사진을 예시한 것이다.
도 34는 실시예 14에서의 6주간 본 발명에 따른 연고로 치료한 아토피성 피부염의 사진을 예시한 것이다.

[실시예]

이하의 실시예는 예시만을 목적으로 하는 것이며, 본 발명의 범위를 한정하는 것을 의도하는 것은 아니다.

실시예 1: 대두[ Glycine max (L.) Merr .] 종자로부터의 휘발성 분획의 조제

대두[Glycine max(L.) Merr.]의 종자, 참깨(Sesamum indicum)의 종자, 녹두(Phaseolus radiatus L.)의 종자, 장엽대황(Rheum palmatum L.) 또는 대황(大黃, Rhei Risoma)의 건조 근경, 황벽나무(Phellodendron amurense Rupr.) 또는 황백(黃柏, Phellodendri Cortex)의 건조 수피를 포함하는 원료를 가루로 만들고, 알코올 또는 증류수 8중량부로 추출하여 조추출물을 얻었다. 함량을 표 1에 나타낸다. 휘발성 분획은 1기압 미만의 압력, 60℃의 온도에서 냉수를 공급한 농축관을 통과시키는 회전 증발기(EYELA N-1000S, 1000S-W)를 이용하여 조추출물을 증발시킴으로써 얻었다.

원료	분획 번호
원료	1	2	3	4	5	6	7	8
대두의 종자(%)	100	70	53	80	0	80	90	80
참깨의 종자(%)	0	20	20	0	0	20	0	10
녹두의 종자(%)	0	0	17	20	0	0	0	0
장엽대황 또는 대두의 건조 근경(%)	0	5	5	0	0	0	10	10
황벽나무 또는 황백의 건조 수피(%)	0	5	5	0	0	0	0	0
용액
증류수(%)	98	98	98	98	100	98	100	100
에탄올(%)	2	2	2	2	0	2	0	0

분획 1의 50㎕에 대한 HPLC의 결과를 표 1에 나타낸다. HPLC는 내경(I.D.) 4.6mm, 길이(L) 250mm 및 입자경 5㎛의 Waters Sphersorb⁽ ^TM ⁾-ODS2 칼럼이고, 이동상은, 0∼5분에서 95% H₂O/5% CH₃CN의 구배; 5∼30분에서 95% H₂O/5% CH₃CN의 구배; 30∼80분에서 75% H₂O/25% CH₃CN의 구배; 80∼100분에서 0% H₂O/100% CH₃CN의 구배; 100∼101분에서 0% H₂O/100% CH₃CN의 구배; 및 101분에서 95% H₂O/5% CH₃CN의 구배로 하고, 유속은 1㎖/분으로 하여 행해졌다. HPLC는 Waters Alliance 2795HT로 행해지고, 스펙트럼 측정은 Waters Photo Diode Array 2996에 의해 190nm 내지 400nm로 행해졌다. 200nm에서 측정된 스펙트럼에 나타난 바와 같이, 변동계수 8%로 머무름 시간 2.910, 5.190, 13.190 및 50.815분에서 예리한 피크가 있었다.

분획 3의 50㎕에 대한 HPLC의 결과를 표 2에 나타낸다. HPLC는 내경(I.D.) 4.6mm, 길이(L) 250mm 및 입자경 5㎛의 Waters Sphersorb⁽ ^TM ⁾-ODS2 칼럼이고, 이동상은, 0∼5분에서 95% H₂O/5% CH₃CN의 구배; 5∼30분에서 95% H₂O/5% CH₃CN의 구배; 30∼80분에서 75% H₂O/25% CH₃CN의 구배; 80∼100분에서 0% H₂O/100% CH₃CN의 구배; 100∼101분에서 0% H₂O/100% CH₃CN의 구배; 및 101분에서 95% H₂O/5% CH₃CN의 구배이며, 유속은 1㎖/분이었다. HPLC는 Waters Alliance 2795HT로 행해지고, 스펙트럼은 Waters Photo Diode Array 2996에 의해 190nm 내지 400nm로 측정되었다. 200nm에서 측정된 스펙트럼에 나타난 바와 같이, 변동계수 8%로 머무름 시간 2.896, 5.111, 12.944 및 46.603분에 예리한 피크가 있었다.

실시예 2: 연고의 조제

본 발명에 따른 연고를 표 2에 예시한다.

	내용 (중량)
분획	77%
보르네올	0.6%
스테아르산	5%
스테아릴알코올	4%
팔미트산	4%
세틸알코올	5%
밀랍	2%
폴리옥시에틸렌소르비탄 모노스테아레이트	2.4%

본 발명의 연고는 당업자에 의해 통상 사용되는 임의의 종래 방법을 이용해도 조제할 수 있다.

실시예 3: 토끼에서의 전층 피부 창상에 대한 효과

동물의 처치:

체중 2.9∼3.1kg인 성숙한 뉴질랜드 화이트 래빗 암컷 5마리를 동물 모델로서 이용했다. 각각의 토끼를 단독으로 우리에 넣고, 고형 사료 및 물로 사육했다. 토끼는 염산 케타민(ketamine HCl) 25∼40mg/kg으로 마취시켰다. 각 토끼의 등에 있는 털을 완전히 깎아내고, 전층 피부의 6개 부위(각 영역은 1.5×1.5㎠)를 절제했다. 여기서 전층 피부는 표피, 진피 및 피부 근육층을 포함한다.

투여 및 빈도:

각 토끼의 창상 6개 영역을 분획 1∼6을 각각 포함하는 연고로 1일 2회 치료했다. 연고는 0.35g/㎠의 양으로 국소에 도포했다.

창상의 임상적 평가:

창상을 매일 관찰하고, 창상 치유의 과정을 기록하기 위해, 광, 초점거리 및 구경이 동일한 조건 하에서 1주일에 3회, 참조용 스케일과 함께 사진 촬영했다. 이에 더하여, 창상의 크기도 측정했다. 그 결과를 표 3에 나타낸다.

일	각 번호의 분획을 포함한 연고로 치료한 창상 영역(%)
일	1	2	3	4	5	6
0	100.0	100.0	100.0	100.0	100.0	100.0
2	105.5	103.1	103.8	105.1	120.9	117.3
5	108.9	110.2	105.5	100.4	134.4	130.0
8	80.0	72.9	78.3	75.3	93.0	96.0
11	49.4	47.1	49.4	39.2	54.0	55.1
14	17.9	15.1	17.0	16.5	21.0	20.4
17	7.7	6.2	9.4	9.1	10.2	10.7
19	3.6	4.1	4.1	4.4	7.4	5.0
22	0.5	0.5	0.0	0.5	1.7	0.5
25	0.0	0.0	0.0	0.0	0.0	0.0

상기 결과는, 창상이 전부 치유되었음을 나타낸다(도 3에 나타낸 바와 같음). 본 발명에 따른 부형제(분획 5를 포함하는 연고)도 전층 피부 창상의 치료에 효과를 가지고 있었다.

체모 증식의 평가:

새로운 체모의 길이를 측정했다. 분획 1∼6을 포함하는 연고로 치료한 모든 창상의 체모는 평균 약 1.76cm의 길이이고(도 4에 나타낸 바와 같음), 치료되지 않은 영역의 체모는 평균 0.1∼0.2cm였다.

결과로 나타난 바는, 본 발명에 따른 휘발성 분획이 모낭결손을 회복시키는 능력을 가지며, 체모 증식을 촉진하였다. 이에 더하여, 본 발명에 따른 부형제도 체모 증식의 증강에 효과적이었다.

실시예 4

래트에서의 전층 피부 창상에 대한 효과:

동물의 처치:

성숙한 스프라그-돌리(Sprague-Dawley) 래트 수컷을 대만 국립 쳉쿵대학(Cheng Kung University) 실험동물센터로부터 구입했다. 체중 300∼350g의 래트를 염산 케타민 25∼40mg/kg으로 마취시켰다. 각 래트의 등에 있는 털을 전기 클리퍼(clipper)로 완전히 깎아냈다. 각 래트를 단독으로 우리에 넣고, 고형 사료 및 물로 사육했다. 각 래트에 있어서, 2.5×2.5㎠ 영역의 전층 피부를 절제했다. 여기서, 전층 피부는 표피, 진피 및 피부 근육층을 포함한다(B. Hafemann 외, 진피의 조직공학용 콜라겐/엘라스틴 막의 사용, Burns, 1999; 25:373-384; H.-J. Wang 외, 광범위하게 확장된 메쉬의 자기 유래 중간층 피부 이식편 증식을 증강하는 돼지 진피 주형의 사용, J. Trauma, 1997년 2월; 42(2): 177-182).

투여 및 빈도:

2개의 실험군 래트를 실시예 2에서 사용한 분획 7 및 8을 포함하는 연고로 치료했는데, 각 군은 래트 3마리를 포함했다. 의약 조성물을 0.35g/㎠ 및 높이 0.1∼0.2cm의 양으로 창상에 국소 도포했다. 모든 창상은 멸균 가제 및 탄성 밴드로 드레싱하고, 밴드를 매일 교환했다.

실시예 3과 동등한 평가 방법을 이용하여 창상의 크기를 측정했다. 결과를 표 4에 나타낸다.

일	각 번호의 분획을 포함한 연고로 치료한 창상 영역(%)
일	7	8
0	100	100
2	85.3	102.5
5	64.3	71.4
9	24	34.5
12	18.6	25.2
15	9.3	13.4
17	3.1	8.4
20	0.4	2.5
23	0.0	0.0

분획 7 및 8을 포함하는 연고로 치료한 창상은 치유되었다. 특히, 분획 7을 포함하는 의약 조성물로 치료한 창상 영역이 더 빨리 감소되었다.

실시예 5: 심부 중간층 피부 열상의 치유에 대한 효과

동물의 처치:

성숙한 스프라그-돌리 래트 암컷을 대만 국립 쳉쿵대학 실험동물센터로부터 구입했다. 체중 230∼280g의 래트를 염산 케타민 25∼40mg/kg으로 마취시켰다. 각 래트의 등에서, 중간부의 예정된 창상 영역을 전기 클리퍼로 완전히 털을 깎아냈다. 각 래트를 단독으로 우리에 넣고, 고형 사료 및 물로 사육했다. 래트의 열상은 Walker and Mason[Z-R. Gao 외, 피부 제공 부위 및 심부 중간층 피부 열상용 창상 드레싱 용품으로서의 돼지 진피 콜라겐, Burns. 1992; 18(6): 492-496]에 의해 기재된 방법을 이용하여, 피부 표면을 4×4㎠의 영역으로 심부 중간층 피부 열상을 일으키도록 설계된 주형을 통해 75℃의 물에 15초간 노출시켜 생성시켰다.

투여 및 빈도:

래트의 실험군(G3)에 대해, 알코올 함량을 3%로 한 것 이외에는 실시예 2와 동일한 방법으로, 분획 9를 포함하는 본 발명에 따른 의약 조성물로 치료했다. 래트 중, 무치료인 1개의 대조군(G1)과 설파다이아진 은 약제((SWISS PHARMACEUTICAL CO., LTD.)로 치료한 1개의 비교군(G2)을 이용했다. 각 군은 래트 3마리를 포함했다. 약물은 체모가 증식될 때까지, 1일 2회, 0.35g/㎠의 양을 창상에 국소 도포했다.

창상의 임상적 평가:

실시예 3과 동등한 평가 방법을 이용하여 창상의 크기를 측정했다. 결과를 표 5에 나타낸다.

일	G1		G2		G3
일	창상영역 (㎟)	초기영역의 변화 (%)	창상영역 (㎟)	초기영역의 변화 (%)	창상영역 (㎟)	초기영역의 변화 (%)
1	1260.00	100.00	1140.67	100.00	1776.33	100.00
5	938.67	74.50	1053.33	92.34	744.00	41.88
11	285.33	22.65	428.00	37.52	154.67	8.71
14	188.00	14.92	234.67	30.57	34.67	1.95
18	0.00	0.00	141.33	12.39	0.00	0.00
24	0.00	0.00	64.67	5.67	0.00	0.00
31	0.00	0.00	41.33	3.62	0.00	0.00
37	0.00	0.00	32.37	2.86	0.00	0.00

창상 치유의 진행에 있어서, 본 발명에 따른 연고로 치료한 창상은 반흔 없이 치유되고, 피부의 색은 정상과 동일했다. 그러나, 설파다이아진 은 약제로 치료한 창상에는 반흔이 생겼다. 또한, 래트의 창상은 제37일째에도 창상 영역의 2.86%에 반흔이 잔존하였던 종래의 설파다이아진 은 약제로 치료한 것보다 빠른, 제18일째에 치유되었다.

새로운 체모 증식의 스코어도 평가하고 기록했다. 새로운 체모 증식 스코어는 이하와 같이 정의했다: "-2"는 약간의 가피 및 홍반이 있고, 새로운 체모 증식은 없는 것; "-1"은 약간의 홍반이 있고, 새로운 체모 증식은 없는 것; "0"은 정상적 피부이고, 새로운 체모 증식은 없는 것; "+1"은 약간의 새로운 체모 증식이 있는 것; 및 "+2"는 창상 영역의 약 50%가 새로운 체모 증식이 있는 것.

새로운 체모 증식 스코어를 표 6에 열거한다.

일	스코어
일	G1	G2	G3
15	-2	-2	0
18	-2	-2	1
21	-1	-1	1
24	-1	-1	1
27	-1	-1	1
30	-1	-1	1
33	-1	-1	1
35	-1	-1	1

표 6에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 연고는 종래의 설파다이아진 은보다 새로운 체모 증식에 더 효과적이었다. 새로운 체모 증식은, 본 발명에 따른 의약 조성물로 치료한 제18일째에 관찰되고, 새로운 체모 증식의 50%는 제35일째에 관찰되었다. 본 발명에 따른 의약 조성물로 치료한 창상에는 홍반이나 가피도 발견되지 않았다. 그러나, 종래의 약물로 치료한 경우는 새로운 체모 증식이 관찰되지 않았다.

피부의 조직학적 평가:

창상이 완전히 치유된 후에, 래트를 마취시키고, 각 래트의 피부 조직을 채위하여, B. Hafemann 외(B. Hafmann 외, 진피의 조직공학용 콜라겐/엘라스틴 막의 사용, Burns, 1999; 25:373-384)에 의해 기재된 평가 방법을 사용하여 조직학적 시험을 행했다. 시료를 채취하고, 포름알데히드 중에 저장했다. 각 검체는 파라핀 블록에 포장하고, 얇은 절편을 만들어 헤마톡실린-에오신법을 이용하여 염색했다. 검체는 광학현미경 및 투과 전자현미경으로 관찰했다.

조직학적 시험의 결과는, 무치료의 래트 상피 조직의 두께가 평탄하지 않고(도 5에 나타낸 바와 같음), 과립층이 두꺼워진 것을 나타냈다. 심부 피부에서 섬유층이 관찰되었다. 종래의 설파다이아진 은 약제로 치료한 래트군에서도(도 6에 나타난 바와 같이), 또한 불균일한 두께의 상피 조직을 가진 것으로 나타났다. 섬유층은 심부 피부에서 관찰되고, 모낭은 붕괴되어 있었다. 한편, 본 발명에 따른 연고로 치료한 창상은(도 7에 나타난 바와 같이), 정상적인 것으로 나타났고, 다수의 모낭이 재생되어 있었다. 섬유층은 진피의 표면 영역에서 관찰되었다.

실시예 6: 래트에서의 큰 영역의 전층 피부 상해에 대한 효과

동물의 처치:

성숙한 스프라그-돌리 래트 암컷을 대만 국립 쳉쿵대학 실험동물센터로부터 구입했다. 체중 300∼350g의 래트를 염산 케타민 25∼40mg/kg으로 마취시켰다. 각 래트의 등을 전기 클리퍼로 완전히 털을 깎아냈다. 각 래트를 단독으로 우리에 넣고, 고형 사료 및 물로 사육했다. 각 래트에 대해 4.0×4.0㎠ 영역의 전층 피부를 절제했다. 여기서, 전층 피부는 표피, 진피 및 피부 근육층을 포함한다

투여 및 빈도:

래트의 실험군은 실시예 5의 분획 9를 포함하는 연고로 치료되었다. 설파다이아진 은 약제(SWISS PHARMACEUTICAL CO., LTD.)로 치료한 래트의 1개의 비교군(G2)도 사용되었다. 각 군에는 래트 5마리가 포함되었다. 연고는 0.75g/㎠ 및 높이 0.1∼0.2cm의 양으로 창상에 국소 도포했다. 모든 창상은 멸균 가제 및 탄성 밴드에 의해 드레싱되고 밴드를 매일 교체했다.

실시예 3과 동등한 평가 방법을 이용하여 창상의 크기를 측정했다. 결과를 표 7에 나타낸다.

일	설파다이아진 은 약제		분획 3을 포함하는 연고
일	창상영역 (㎟)	초기영역의 변화 (%)	창상영역 (㎟)	초기영역의 변화 (%)
1	1977.60	100.00	1957.60	100.00
3	1763.20	89.16	1784.80	91.17
5	1444.80	73.06	1506.40	76.95
7	990.40	50.08	1265.60	64.65
9	556.00	28.11	768.80	39.27
11	429.60	21.72	456.80	23.33
13	368.80	18.65	385.60	19.70
15	283.20	14.32	299.20	15.28
17	208.80	10.56	236.80	12.10
19	166.00	8.39	238.40	12.18
21	131.00	6.62	161.60	8.26
23	119.00	6.02	123.20	6.29
25	87.00	4.40	88.00	4.50
27	45.00	2.28	76.00	3.88
29	40.00	2.02	56.00	2.86
31	35.00	1.77	34.40	1.76
33	18.00	0.91	20.00	1.02
35	16.00	0.81	8.00	0.41
37	0.00	0.00	0.00	0.00

창상 치유의 진행에 있어서, 본 발명에 따른 연고로 치료한 창상은 알러지 없이 치유되었다. 그러나, 설파다이아진 은 약제로 치료한 창상에는 반흔이 생겼다. 또한, 설파다이아진 은 약제로 치료한 창상에는 심한 알러지가 관찰되었다. 본 발명에 따른 의약 조성물로 치료한 래트의 치유율(약 25일∼31일)은 설파다이아진 은 약제로 치료한 것(약 37일)보다 빨랐다.

피부의 조직학적 평가:

조직학적 평가 방법은 실시예 5에 기재된 바와 같다.

제45일째에 행한 조직학적 시험의 결과는 종래의 설파다이아진 은 약제로 치료한 창상은 심부 진피에 섬유층을 가지는 것으로 관찰되었음을 나타냈다. 일부 표피 세포는 사망하고, 변지(callus)를 형성했다. 만성 염증 및 호산구(好酸球) 침윤이 진피에 관찰되었다. 일부 섬유도 창상으로부터 0.5cm 떨어진 위치에 형성되어 있었다.

본 발명에 따른 연고로 치료한 래트의 군에서는 신생한 상피는 균일하고 다수의 모낭이 생성되었다. 단지 적은 섬유만이 형성되어 있었다.

제95일째에 행한 조직학적 시험의 결과는 종래의 설파다이아진 은 약제로 치료한 창상은 불균일한 상피층을 가지는 것으로 관찰되었다(도 8에 도시된 바와 같음). 섬유층이 심부 진피에 형성되었다. 소량의 모낭이 생성되었다.

도 9에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 연고로 치료한 래트의 군에서는 신생된 상피는 균일하며 다수의 모낭이 생성되었다.

실시예 7: 국소 전자 조사 피부 상해에 대한 효과

동물의 처치:

성숙한 스프라그-돌리 래트 암컷을 대만 국립 쳉쿵대학 실험동물센터로부터 구입했다. 체중 300∼350g의 래트를 단독으로 우리에 넣고, 고형 사료 및 물로 사육했다.

래트의 조사는 John E. Moulder and James J. Fisher[래트 피부의 방사선에 대한 반응: 각 번호 분획의 역할과 총처리시간, Cancer, 1976년 6월, 37(6): 2762-2767]에 의해 기재된 것과 유사한 방법을 이용하여 실행되었다. 래트는 조사 전에 40∼50mg/kg의 펜토바비탈 나트륨염(TCI, 도쿄)의 복강 내 투여에 의해 마취시켰다. 둔근 영역(gluteus area)에 걸친 피부는 완전히 체모를 완전히 깎아내고, 조사 전에 좌우의 둔근 상에 원하는 2×2㎠의 조사 영역에 표시했다. 선형 가속기(미국 캘리포니아주 소재 Varian Associates, Inc.)에 의해 발생시킨 6MeV의 전자 빔을 조사에 사용했다.

분할 조사 및 단일 조사를 시험했다. 분할 조사에서는 래트 3마리에 대해 좌우의 둔근에 조사했다. 조사는 매주 2회, 5주일간 행하고, 총 조사량은 각 영역당 37.5Gy였다.

투여 및 빈도:

분할 조사에서의 조사 상해는 조사 후에 1일 1회, 투여량 0.25g/㎠의 실시예 5에서 사용된 분획 9를 포함하는 연고로 치료하고, 단회 조사에서의 조사 상해는 1일 2회 치료했다. 치료하지 않은 래트는 대조(G2)로서 사용되었다. 조사되지 않은 래트의 1개 블랭크 군(G3)은 블랭크로 했다.

임상 평가:

피부 반응 스코어(Yoshiao Abe and Muneyasu Urano, 다중회, 1일 2회 조사 후의 마우스의 분할 조사측에 의존한 급성 피부 반응, J. Radiation Oncology Biol. Phys. 1990년 2월: 18(2): 359-364; Yu-Jen Chen 외, 래트에서의 급성 방사선 피부염에 대한 테트란드린 및 센텔라 아시아티카의 효과, Biol . Pharm . Bull. 1999년 7월; 22(7): 703-706)를 평가하고, 조사 후 30일간 기록했다. 피부 반응 스코어는 이하와 같이 정의했다: "0"은 정상 피부를 나타내고; "0.5"는 조사된 영역의 50% 미만에 경미한 탈모가 일어나거나, 또는 체모의 탈색이 일어난 것을 나타내고; "1.0"은 조사된 영역의 약 50%에 탈모가 일어난 것을 나타내고; "1.5"는 조사된 영역의 50% 이상에 탈모가 일어나고, 일부의 체모는 홍피(紅皮)를 수반하는 것을 나타내고; "2.0"은 완전 탈모 및 조사된 영역의 50% 미만에서 건조된 낙석이 일어나는 것을 나타내고; "2.5"는 조사된 영역의 50% 이상에서 건조된 낙설이 일어나는 것을 나타내고; "3.0"은 약간의 습윤된 낙설이 일어나는 것을 나타내고; "3.5"는 영역의 대부분에 습윤된 낙설이 일어나는 것을 나타낸다.

피부 반응 스코어를 평가하고 표 8에 나타낸다.

일	피부 반응 스코어
일	G1	G2	G3
0	0.00	0.00	0.00
3	0.00	0.50	0.00
6	0.00	0.50	0.00
9	0.00	0.83	0.00
12	0.00	0.83	0.00
15	0.00	0.83	0.00
18	0.00	0.83	0.00
21	0.10	0.83	0.00
24	0.00	0.83	0.00
29	0.00	1.00	0.00

G1에서는 창상에서 열상 초기와 체모 손상이 거의 발견되지 않았고, 피부는 알러지를 나타내지 않았다.

결과는 분할 조사 시험의 경우와 마찬가지였다.

피부 조직학적 평가:

실시예 5에서와 동일한 평가 방법을 사용했다.

도 10에 나타난 바와 같이, G1에서 표피 세포는 다층의 상피 세포를 덮고 있는 것으로 나타났다. 또한 다수의 모낭이 재생되었다.

도 11에 나타난 바와 같이, G2에서 단지 소량의 모낭이 관찰되었다.

도 12에 나타난 바와 같이, G3에서 조직은 대조로서 사용되었다.

치료된 창상의 조직은 조밀하였으나, 무치료인 것은 성글었다.

실시예 8: 토끼 귀에서의 피부염에 대한 효과

토끼 귀에서의 피부염은, 도 13에 나타난 바와 같이, 발적, 부기, 염증, 궤양 및 출혈을 갖는 것으로 발견되었다.

알코올 함량을 0%로 하고, 분획 3과 유사한 분획 10을 사용한 것 이외에는 실시예 2와 동일한 방법으로 본 발명에 따른 연고를 창상에 3일간 도포했다.

제1일째는 궤양이 소실되고 발적이 경감되었다. 모낭이 도 14에 나타난 바와 같이 드러났다.

제2일째는 피부 조직이 회복되고, 단지 가벼운 발적이 관찰되었다. 모낭은 도 15에 나타난 바와 같이 뚜렷했다.

제3일째는 피부 조직 및 색채는 정상이었다. 체모가 도 16에 나타난 바와 같이 모낭에 생겨났다.

실시예 9: 당뇨병성 창상에 대한 효과

68세의 남성이 당뇨병에 20년간 걸려 있었다. 그의 왼쪽 다리의 발가락은 절단되었다. 창상은, 도 17에 나타난 바와 같이, 심한 괴저 변성을 나타냈다. 그의 오른쪽 다리의 발가락은 절단되었으나, 도 18에 나타난 바와 같이, 창상 치유는 양호하지 않았다.

분획 9를 포함하는 연고를 창상에 1일 2회∼3회 도포했다.

도 19에 나타난 바와 같이, 2개월간 왼쪽 다리의 치료 후, 몇 개인가의 육아 조직이 관찰되고, 창상은 그 이상 괴사의 진행이 없이 치유되기 시작했다.

5개월간 왼쪽 다리의 치료 후, 도 20에 나타난 바와 같이, 창상은 반흔 없이 완전히 치유되었다. 도 21에 나타난 바와 같이, 오른쪽 다리도 반흔 없이 완전히 치유되었다.

실시예 10: 만성 울혈성 궤양에 대한 효과

80세 남성의 양측 종아리는, 도 22에 나타난 바와 같이, 색소과잉증 및 울혈성 궤양에 20년간 걸려 있었다.

분획 9를 포함하는 연고를 창상에 1일 2회∼3회 도포했다.

도 23에 나타난 바와 같이, 2주간 다리의 치료가 행해진 후, 창상은 치유되기 시작했다.

도 24에 나타난 바와 같이, 4주간 다리의 치료가 행해진 후, 창상은 반흔 없이 완전히 치유되었다.

실시예 11: 반상 출혈에 대한 효과

여성 환자는, 도 25에 나타난 바와 같이, 사고에 기인하는 반상 출혈을 가지고 있었다.

창상 후, 3일 동안 1일 1회, 냉습포로 예비 치료하고, 그 후 분획 9를 포함하는 연고를 1일 2회∼3회 도포했다.

반상 출혈은 소실되고 창상은 도 26에 나타난 바와 같이, 치료 후 3일째에 치유되었다. 자동차 사고 전부터 이미 존재하였던 반흔의 색도, 도 27에 나타난 바와 같이, 7일간의 치료 후, 진정되어 경미해졌다.

실시예 12: 찰과상에 대한 효과

여성 환자는, 도 28에 나타난 바와 같이, 사고에 기인하는 찰과상을 가지고 있었다.

분획 9를 포함하는 연고를 창상에 1일 2회∼3회 도포했다.

창상은, 도 29에 나타난 바와 같이, 7일간의 치료 후 치유되었다.

실시예 13: 봉합창상에 대한 효과

남성 환자는 3cm의 열상과 20바늘 봉합된 인중(人中)에 심한 열상, 0.8cm의 열상과 4바늘 봉합된 비량(鼻粱), 1cm의 열상과 6바늘 봉합 및 1.5cm의 열상과 8바늘 봉합의 윗입술(上脣)을 가지고 있었다.

분획 9를 포함하는 연고를 창상에 1일 2회∼3회 도포했다.

창상은, 도 30에 나타난 바와 같이, 반흔 없이 완전히 치유되었다.

실시예 14: 아토피성 피부염에 대한 효과

4.5세의 여자 아이는 만성 아토피성 피부염을 가지고 있었다. 목과 상측 흉부의 피부는, 도 31에 나타난 바와 같이, 장기간의 국소 코르티코스테로이드 요법 후에, 가려움증, 발적, 부기, 꺼칠해진 상태, 습윤 상태, 가피 상태 및 부스럼 상태였다.

분획 10을 포함하는 연고를 창상에 1일 2회∼3회 도포했다.

도 32에 나타난 바와 같이, 1주간의 치료가 행해진 후, 가려움증, 발적, 부기, 꺼칠해진 상태, 습윤 상태, 가피 상태 및 부스럼 상태는 경감되고 감소되었다.

도 33에 나타난 바와 같이, 4주간의 치료가 행해진 후, 피부 병변은 거의 가라 앉았다.

도 34에 나타난 바와 같이, 6주간의 치료가 행해진 후, 피부 병변은 사후의 리바운드(rebound) 효과도 나타나지 않고 완전히 치유되었다.

이상과 같이 본 발명의 실시 양태가 예시되고 기재되었지만, 당업자에 의해 여러 가지 변형 및 개량이 이루어질 수 있다. 따라서, 본 발명의 실시 양태는 예시적으로 기재된 것이며, 한정적 의미로 기재된 것은 아니다. 본 발명은 예시된 바와 같은 특정 형태에 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 정신 및 범위로부터 일탈함이 없는 모든 변형은 부속하는 특허청구의 범위에 정의된 범위 내에 있다.

Claims

피부 창상, 열상해(熱傷害), 조사성(照射性) 상해, 피부염, 아토피성 피부염, 당뇨병 창상, 색소과잉증, 궤양(潰瘍), 울혈성 궤양, 반상출혈(斑狀出血), 찰과상, 및 봉합 창상으로 구성되는 군으로부터 선택되는 피부 상해(skin injuries) 또는 피부 질환(dermatological disorders)의 치료, 체모 증식 촉진, 모낭 결손 회복, 또는 모낭 재생 효과를 갖는, 대두[Glycine max(L.) Merr.] 종자, 및 참깨(Sesamum indicum) 종자, 녹두(Phaseolus radiatus L.) 종자, 및 항균 약초로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상을 포함하는 원료로부터의 휘발성 분획으로서,
상기 휘발성 분획은,
(a) 15중량% 미만의 농도로 알코올을 함유하는 알코올 용액 또는 물에 상기 원료의 조추출물을 공급하는 단계; 및
(b) 1 기압 미만의 기압 및 110℃ 미만의 온도에서, 상기 조추출물을 휘발시켜 휘발성 분획을 얻는 단계
를 포함하는 프로세스에 의해 조제되고,
내경(I.D.) 4.6 mm, 길이(L) 250 mm 및 입자경 5 ㎛의 Waters Sphersorb⁽ ^TM ⁾-ODS2 칼럼을 사용한 고속 액체 크로마토그래피(HPLC)를 통과시켜 200 nm에서 측정한 상기 휘발성 분획 50㎕의 스펙트럼은, 변동계수 8%로, 머무름 시간 2.910 분, 5.190 분, 13.190 분 및 50.815 분에 피크를 가지며, 이때 이동상으로는, 0∼5 분에서 95% H₂O/5% CH₃CN의 구배; 5∼30 분에서 95% H₂O/5% CH₃CN의 구배; 30∼80 분에서 75% H₂O/25% CH₃CN의 구배; 80∼100 분에서 0% H₂O/100% CH₃CN의 구배; 100∼101 분에서 0% H₂O/100% CH₃CN의 구배; 및 101 분에서 95% H₂O/5% CH₃CN의 구배를 사용하고, 유속은 1㎖/분으로 한 것인,
휘발성 분획.
제1항에 있어서, 상기 항균 약초가 장엽대황(Rheum palmatum L.)의 건조 근경(根莖), 대황(Rhei Risoma)의 건조 근경, 황벽나무(Phellodendron amurense Rupr.)의 건조 수피(樹皮), 및 황백(黃柏, Phellodendri Cortex)의 건조 수피로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 휘발성 분획.
제1항에 있어서, 상기 원료가 40% 내지 100%의 대두 종자, 0% 내지 50%의 참깨 종자, 0% 내지 50%의 녹두 종자, 및 0% 내지 30%의 항균 약초를 포함하는 것을 특징으로 하는 휘발성 분획.
제1항에 있어서, 상기 휘발성 분획은 증기를 냉각함으로써 액상으로 수집되는 것을 특징으로 하는 휘발성 분획.
제1항에 있어서, 알코올의 농도가 5 중량% 미만인 것을 특징으로 하는 휘발성 분획.
제1항에 있어서, 단계 (a)에서의 조추출물이 수(水) 중에 있는 것을 특징으로 하는 휘발성 분획.
제1항에 있어서, 단계 (b)에서의 온도가 60℃ 이상 및 110℃ 미만인 것을 특징으로 하는 휘발성 분획.
제1항에 있어서, 상기 원료가 70%의 대두 종자, 20%의 참깨 종자, 5%의 장엽대황(Rheum palmatum L.) 또는 대황(Rhei Risoma)의 건조 근경, 및 5%의 황벽나무(Phellodendron amurense Rupr.) 또는 황백(黃柏, Phellodendri Cortex)의 건조 수피를 포함하며,
상기 휘발성 분획은,
(a) 2%의 알코올 용액에 상기 원료의 조추출물을 공급하는 단계; 및
(b) 1 기압 미만의 기압 및 110℃ 미만의 온도에서, 상기 조추출물을 휘발시켜 휘발성 분획을 얻는 단계
를 포함하는 프로세스에 의해 조제되는 것을 특징으로 하는 휘발성 분획.
제1항에 있어서, 상기 원료가 53%의 대두 종자, 20%의 참깨 종자, 17%의 녹두 종자, 5%의 장엽대황(Rheum palmatum L.)의 또는 대황(Rhei Risoma)의 건조 근경, 및 5%의 황벽나무(Phellodendron amurense Rupr.) 또는 황백(黃柏, Phellodendri Cortex)의 건조 수피를 포함하며,
상기 휘발성 분획은,
(a) 2%의 알코올 용액에 상기 원료의 조추출물을 공급하는 단계; 및
(b) 1 기압 미만의 기압 및 110℃ 미만의 온도에서, 상기 조추출물을 휘발시켜 휘발성 분획을 얻는 단계
를 포함하는 프로세스에 의해 조제되고,
내경(I.D.) 4.6 mm, 길이(L) 250 mm 및 입자경 5 ㎛의 Waters Sphersorb⁽ ^TM ⁾-ODS2 칼럼을 사용한 고속 액체 크로마토그래피(HPLC)를 통과시켜 200 nm에서 측정한 상기 휘발성 분획 50㎕의 스펙트럼은, 변동계수 8%로, 머무름 시간 2.896 분, 5.111 분, 12.944 분, 및 46.603 분에 피크를 가지며, 이때 이동상으로는, 0∼5 분에서 95% H₂O/5% CH₃CN의 구배; 5∼30 분에서 95% H₂O/5% CH₃CN의 구배; 30∼80 분에서 75% H₂O/25% CH₃CN의 구배; 80∼100 분에서 0% H₂O/100% CH₃CN의 구배; 100∼101 분에서 0% H₂O/100% CH₃CN의 구배; 및 101 분에서 95% H₂O/5% CH₃CN의 구배를 사용하고, 유속은 1㎖/분으로 한 것인,
휘발성 분획.
제1항에 있어서, 상기 원료가 80%의 대두 종자, 및 20%의 녹두(Phaseolus radiatus L.) 종자를 포함하며,
상기 휘발성 분획은,
(a) 2%의 알코올 용액에 상기 원료의 조추출물을 공급하는 단계; 및
(b) 1 기압 미만의 기압 및 110℃ 미만의 온도에서, 상기 조추출물을 휘발시켜 휘발성 분획을 얻는 단계
를 포함하는 프로세스에 의해 조제되는 것을 특징으로 하는 휘발성 분획.
제1항에 있어서, 상기 원료가 80%의 대두 종자, 및 20%의 참깨(Sesamum indicum) 종자를 포함하며,
상기 휘발성 분획은,
(a) 2%의 알코올 용액 내에 상기 원료의 조추출물을 공급하는 단계; 및
(b) 1 기압 미만의 기압 및 110℃ 미만의 온도에서, 상기 조추출물을 휘발시켜 휘발성 분획을 얻는 단계
를 포함하는 프로세스에 의해 조제되는 것을 특징으로 하는 휘발성 분획.
제1항에 있어서, 상기 원료가 90%의 대두 종자, 및 10%의 장엽대황 또는 대황의 건조 근경을 포함하며,
상기 휘발성 분획은,
(a) 2%의 알코올 용액에 상기 원료의 조추출물을 공급하는 단계; 및
(b) 1 기압 미만의 기압 및 110℃ 미만의 온도에서, 상기 조추출물을 휘발시켜 휘발성 분획을 얻는 단계
를 포함하는 프로세스에 의해 조제되는 것을 특징으로 하는 휘발성 분획.
제1항에 있어서, 상기 원료가 80%의 대두 종자, 10%의 참깨 종자, 및 10%의 장엽대황 또는 대황의 건조 근경을 포함하며,
상기 휘발성 분획은,
(a) 2%의 알코올 용액에 상기 원료의 조추출물을 공급하는 단계; 및
(b) 1 기압 미만의 기압 및 110℃ 미만의 온도에서, 상기 조추출물을 휘발시켜 휘발성 분획을 얻는 단계
를 포함하는 프로세스에 의해 조제되는 것을 특징으로 하는 휘발성 분획.
피부 창상, 열상해(熱傷害), 조사성(照射性) 상해, 피부염, 아토피성 피부염, 당뇨병 창상, 색소과잉증, 궤양(潰瘍), 울혈성 궤양, 반상출혈(斑狀出血), 찰과상, 및 봉합 창상으로 구성되는 군으로부터 선택되는 피부 상해(skin injuries) 또는 피부 질환(dermatological disorders)의 치료, 체모 증식 촉진, 모낭 결손 회복, 또는 모낭 재생을 위한, 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 휘발성 분획을 포함하는 조성물.
제14항에 있어서, 상기 조성물을 의약 조성물, 화장품 조성물, 또는 피부 세정용 조성물을 제조하기 위해 사용하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제14항에 있어서, 보르네올, 스테아르산, 스테아릴 알코올, 팔미트산, 세틸 알코올, 밀랍, 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노스테아레이트로 구성되는 군으로부터 선택되는 1종 이상을 추가로 포함하는 조성물.