KR20110044787A

KR20110044787A - 돼지풀 알레르기 치료용 에이엠비 에이 1 펩타이드를 포함하는 백신

Info

Publication number: KR20110044787A
Application number: KR1020117006048A
Authority: KR
Inventors: 마크 라르체; 로데릭 피터 해프너; 파울 레이들러
Original assignee: 서카시아 리미티드
Priority date: 2008-08-15
Filing date: 2009-08-14
Publication date: 2011-04-29
Also published as: AU2009281013B2; EP2153841B1; CN102170897A; US9347937B2; US20130295123A1; EP2153841B2; DK2153841T3; EA201170336A1; US8491910B2; ES2378870T3; PL2153841T5; SI2153841T2; EP2153841A1; HRP20120206T1; EP2433639A3; MX2011001619A; DK2153841T4; WO2010018378A2; WO2010018378A8; US20120108524A1

Abstract

본 발명은 자기내성에 의해 돼지풀 알레르기를 예방 또는 치료하기 위한 조성물에 관한 것이다. 상기 조성물은 돼지풀 꽃가루 Amb a 1에 있는 주요 알레르겐으로부터 유래된 펩타이드 단편의 조합에 근거한다. 또한, 본 발명은 본 발명의 폴리펩타이드를 조합하여 제공하는데 사용될 수 있는 생성물, 벡터 및 배합물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 T 세포가 본 발명의 폴리펩타이드를 인지하는지 여부를 결정하고 개체가 돼지풀 알레르겐에 반응하여 알레르기 증상을 특징으로 하는 증상을 갖거나 그 위험이 있는지 여부를 결정하기 위한 시험관내 방법에 관한 것이다.

Description

돼지풀 알레르기 치료용 에이엠비 에이 1 펩타이드를 포함하는 백신{VACCINE COMPRISING AMB A 1 PEPTIDES FOR USE IN THE TREATMENT OF RAGWEED ALLERGY}

인용문헌의 통합

하기 우선권 출원의 내용은 본원에서 참고문헌으로 인용된다: 2008년 8월 15일 출원된 영국특허출원 제0814986.6호; 2008년 8월 15일 출원된 국제특허출원 PCT/GB08/002781호 및 PCT/GB08/002779호; 2008년 8월 20일 출원된 영국특허출원 제0815218.3호; 및 2009년 5월 1일 출원된 유럽특허출원 제09251252.4호.

본 발명은 돼지풀 알레르기를 예방 또는 치료하기 위한 조성물에 관한 것이다.

T-세포 항원 인식은, 주조직 적합성 복합체(major histocompatibility complex: MHC) 분자와 회합하여 세포 표면에서 항원 단편(펩타이드)을 제공하는 항원 제공 세포(APS:Antigen Presenting Cell)를 필요로 한다. T-세포는 APC에 의해 제공되는 항원 단편을 인식하기 위하여 항원 특이적 T-세포 수용체(TCR: T-cell receptor)를 이용한다. 이러한 인식은 면역 시스템의 유발자(trigger)로 작용하여, 인식된 항원을 제거하는 일정 반응을 발생시킨다.

사람과 같은 유기체의 면역 시스템에 의해 외부 항원이 인식되면, 몇몇 경우에는 아토피 증상으로 알려진 질환을 발생시킬 수 있다. 아토피 증상의 예는 천식, 아토피 피부염 및 알레르기 비염을 비롯한 알레르기 질환이다. 이러한 질환 군에서, B 림프구는 외부에서 유래된 항원과 결합하는 IgE 항체(인간의 경우)를 발생시키고, 이들은 알레르기 반응을 유발하기 때문에 본 명세서에서 알레르겐(alleren)으로 지칭된다. 알레르겐-특이적 IgE의 생성은 알레르겐에 의해 활성화되는(특이적인) T 림프구에 좌우된다. 알레르겐-특이적 IgE 항체는 IgE에 대한 이들 표면 수용체 세포에 의한 발현에 의해 호염기성 세포(basophile) 및 비만세포와 같은 세포의 표면에 결합한다.

알레르겐에 의한 표면-결합된 IgE 분자의 가교결합(crosslinking)은 염증 매개체, 예컨대 히스타민, 5-하이드록스트립타민 및 지질 매개체, 예컨대 설피도류코트리엔(sulphidoleukotriene)의 방출을 야기하는 이들 주효 세포(effector cell)의 탈과립을 발생시킨다. IgE-의존적 현상 이외에, 천식과 같은 특정 알레르기 질환이 IgE-의존적 현상의 특징이다.

현재, 알레르기 IgE-매개된 질환은 징후를 완화 또는 예방하는 제제에 의해 치료되고 있다. 이러한 제제의 예는 항-히스타민, β2 작용제(agonist) 및 글루코코르티코스테로이드이다. 또한, 몇몇 IgE-매개된 질환은 알레르겐 구성성분 또는 추출물을 주기적으로 주사하는 것을 비롯한 탈감작(desensitization) 절차에 의해 치료된다. 탈감작 치료는 알레르겐에 대하여 IgE와 경합하는 IgG 반응을 유도할 수 있거나, 또는 알레르겐에 저항하는 IgE 합성을 차단하는 특이적 억제제 T 세포를 유도할 수 있다. 이러한 치료 형태는 항상 효과적이지는 않으며, 심각한 부작용, 특히 범과민성 쇼크를 유발시킬 위험이 있다. 이는 즉시 인식되어 아드레날린으로 치료되지 않으면 치명적일 수 있다. 다른 외부 항원에 대한 면역 반응성을 변형시키거나 알레르기 반응 자체를 유발시키지 않으면서 특정 알레르겐에 대한 원하지 않는 알레르기-면역 반응을 감소시키거나 없애려는 치료적 처치가 알레르기 개체에게 매우 유익할 것이다.

돼지풀 알레르겐은 천식, 알레르기성 비염 및 알레르기성 피부염을 비롯한 인간 및 동물 알레르기 질환의 주요 원인으로 일반적으로 인식된다. 돼지풀 꽃가루에 존재하는 단백질이 특히 중요하다. 예컨대, 미국에서 건초열을 겪는 사람의 약 75%는 돼지풀 꽃가루에 대한 알레르기이다. 건초열은 재채기, 콧물 및 눈 가려움증을 특징으로 하는 계절성 알레르기 형태에 대한 일반적인 용어이다. “건초열”이란 용어는 이러한 형태의 알레르기 질환이 “건초 시기(haying season)”에 가장 만연하기 때문에 생겨났는데, 상기 시기는 꽃이 가장 많은 양의 꽃가루를 방출하는 많은 식물의 개화 시기에 해당한다. 이는 늦여름부터 초가을, 전형적으로는 6월말부터 9월말까지(북반구)에 특히 만연한다.

미국 성인의 경우, 건초열은 5번째로 많은 만성 질환이며, 직장 장기 결근의 주요 원인이어서 매해 4백만명이 직장을 잃거나 결근하여서 총 생산성 손실이 700만 달러보다 많은 것으로 추산된다. 또한, 알레르기는 가장 빈번하게 보고되는 어린이 만성 질환이고, 이중 40%보다 많은 어린이에게 있어서 활동을 제한한다. 매해, 알레르기로 인해 미국에서 1천7백만명 이상의 외래환자가 발생하고, 건초열과 같은 계절성 알레르기는 이러한 알레르기 외래환자의 반 이상을 차지한다.

그러므로, 치료적 또는 예방적 처치가 돼지풀 알레르기를 겪고 있거나 겪을 위험이 있는 환자에게 매우 유익할 것이다.

발명의 요약

돼지풀 알레르기는 통상적인 돼지풀(암브로시아 아르테미시폴리아 : Ambrosia artemisiifolia)에 의해 전형적으로 야기된다. 돼지풀 꽃가루의 주요 알레르겐은 Amb a 1이다. 상기 단백질은 많은 상이한 아이소형(isoform)인 Amb a 1,1, 1.2, 1.3 및 1.4로 존재한다. 본 발명자들은 Amb a 1 단백질로부터 유래된 펩타이드 단편의 특정 조합이 상기 알레르겐에 대한 환자를 탈감작시키는데 특히 유용함을 밝혀내었다. 본 발명의 폴리펩타이드 조합은, 많은 MHC 클래스 II 분자에 결합할 수 있고 매우 가용성이며 돼지풀 알레르기 개체 패널의 호염기성 세포로부터 히스타민 방출을 유발하지 않으며 돼지풀 알레르기 개체 패널의 많은 비율의 피험자에 있어서의 사이토카인 반응 유도능에 근거하여 선택되었다. 그러므로, 본 발명의 조성물, 생성물, 벡터 및 배합물은 자기내성(tolerisation)에 의해 돼지풀 알레르기를 예방 또는 치료하기 위해 개체에게 제공될 수 있다.

본 발명의 펩타이드는 인 실리코(in silico) 방법을 통해 잠재적 T 세포 에피토프로 선택되었다. 에피토프를 함유한 영역이 동정될 때, 이들은 추가 분석되어서 이들중 어떠한 영역이 4개의 상이한 Amb a 1 아이소형 사이에서 매우 잘 보존되는지를 결정한다. 이어서, 이들 후보 폴리펩타이드는 자기내성화의 사용 가능성을 위해 추가 스크리닝되었다. 보다 구체적으로, 이들은 용해도 특징, 및 돼지풀 알레르기 개체로부터 유래된 PBMC에서의 사이토카인 방출 유도능에 대하여 분석되었다. 몇몇 경우에, 용해도를 향상시키고/시키거나 이합체 형성을 감소시키도록 펩타이드 서열이 가공되었다.

펩타이드 면역화에 근거한 탈감작 방법과 관련한 어려움은 면역화에 사용할 펩타이드 기준(basis)으로 알레르겐의 적절한 크기 및 영역을 어떻게 선택하는가에 있다. 펩타이드 크기의 선택이 중요하다. 펩타이드가 너무 작으면 백신이 면역학적 반응을 유도하는데 효과적이지 않을 수 있다. 펩타이드가 너무 크거나 또는 전체 항원이 개체에게 투입되면, 치명적일 수 있는 과민증과 같은 역반응을 유도할 위험이 있다. 이러한 위험은 펩타이드 용해도가 낮은 경우에 더 클 수 있다.

본 발명의 폴리펩타이드는 전체 분자의 IgE-결합 에피토프의 형태를 유지하도록 하는 유의한 3차원 구조를 갖지 않을 정도로 충분히 작으면서 T 세포 특이성을 갖도록 선택되었다. 따라서, 본 발명의 폴리펩타이드는 비만 세포 및 호염기성 세포와 같은 세포에 인접한 특이적 IgE 분자의 유의한 가교결합을 유도하지 않으며, 인간 호염기성 세포로부터 유의한 히스타민 방출을 일으키지 않는 것으로 나타났다.

본 발명의 이점은 주조직 적합성 복합체(MHC) 분자를 광범위하게 표적으로 하는 펩타이드 능력이다. T 세포 수용체(TCR)는 그 특이성에 있어서 매우 다양하다. 다양성은 세포내의 유전자 재조합 현상을 통해 항체 분자처럼 발생한다. TCR은 주조직 적합성 복합체(MHC) 유전자에 의해 코딩되는 분자에 결합된 짧은 펩타이드 형태의 항원을 인식한다. 이들 유전자 생성물은 이식에서 사용되는 ‘조직 유형’을 발생시키는 동일한 분자이며, 인간 백혈구 항원 분자(HLA)로도 지칭되며, 이 용어와 바꿔 사용될 수 있다. 개체의 MHC 분자는 형성 및 전하로 인해 제한된 펩타이드 군만을 결합할 수 있는 펩타이드 결합 그루브(groove)를 갖는다. 하나의 MHC 분자에 의해 결합된 펩타이드는 다른 MHC 분자에 의해 결합될 필요는 없다.

항원 또는 알레르겐과 같은 단백질 분자가 B 림프구, 수지상(dendritic) 세포, 단핵구 및 마크로파지와 같은 항원 제공 세포에 의해 수용될 때, 상기 분자는 세포 내에서 효소에 의해 분해된다. 분해 과정에 의해, 분자가 적절한 크기, 전하 및 형상을 갖는 경우에 특정 MHC 분자의 펩타이드 결합 그루부 내에 결합되고, 이어서 항원 제공 세포 표면 상에 발현될 수 있는 펩타이드 단편이 발생한다. 펩타이드/MHC 복합체가 항원 제공 세포 표면에 충분한 수로 존재하면, 이들은 적절한 펩타이드/MHC-특이적 T 세포 수용체를 갖는 T 세포를 활성화시킬 수 있다.

MHC의 다형성으로 인해, 사람과 같은 이계교배 개체군의 개체는 세포 표면 상에 MHC 분자의 상이한 조합을 발현한다. 상이한 MHC 분자는 펩타이드의 크기, 전하 및 형상에 근거하여 동일한 분자로부터의 상이한 펩타이드와 결합할 수 있으므로, 다른 개체는 MHC 분자에 결합된 펩타이드의 상이한 양상을 나타낸다. 사람과 같은 이계교배 개체군에서 보편적인 MHC-결합 펩타이드 에피토프의 동정은 동종교배 동물(실험실 마우스의 특정 균주)에서보다 더 어렵다. 개체 간의 상이한 MHC 발현 및 이들이 유발하는 펩타이드 결합 및 제공에 있어서의 내재적 차이에 근거할 때, 사람에 대한 탈감작 요법에 유용한 하나의 펩타이드를 동정할 가능성이 낮다.

본 발명의 다른 이점은 돼지풀 알레르기 개체로부터 새로 단리된 PBM에서 관찰되는 반응에 근거한 펩타이드들 및 펩타이드 조합의 선택이다. T 세포 반응을 시험하기 위해서 알레르기 환자로부터 클론 세포주가 확립된 artefactual 시나리오와는 대조적으로, 새로 단리된 PBMC의 생체외 반응을 측정하면 배양 과정에 의한 왜곡 가능성없이 상이한 펩타이드의 상대적인 개체군 중요성을 대표적으로 나타낼 수 있다.

그러나, 본 발명의 펩타이드 조합은 다수의 상이한 MHC 분자를 표적으로 함으로써 인간 개체군에 대하여 광범위한 효능을 제공할 수 있다. 이러한 광범위함은 개체군 내의 많은 개체에 있어서 양성 사이토카인 반응을 유발시키는 본 발명의 펩타이드 조합물의 능력으로 예시된다. 그러므로, 본 발명의 펩타이드를 이용하여 배합된 백신은 광범위한 유용성을 갖는다.

본 발명은 하기 특징을 갖는 펩타이드 조합물을 제공한다:

- 상기 조합물은 돼지풀 알레르기 개체 패널로부터 피험자의 높은 비율에서 사이토카인 반응을 유도한다

- 상기 조합물의 펩타이드는 가용성이다

- 상기 조합물의 펩타이드는 돼지풀 알레르기 개체 패널에서 유의한 히스타민 방출을 유도하지 않는다.

따라서, 본 발명은 SEQ ID NO. 1 내지 31에서 선택된 하나 이상의 폴리펩타이드를 포함하는, 자기내성에 의해 돼지풀 알레르기를 예방 또는 치료하는데 사용되는 조성물을 제공한다. 전형적으로, 상기 조성물은 4개 이상의 폴리펩타이드를 포함하며, 상기 폴리펩타이드는 임의의 하기로부터 독립적으로 선택되고, 상기 서열은 (i)의 임의의 서열에 대하여 개체를 자기내성화할 수 있고 9개 이상의 아미노산 길이를 가지며, 상기 상동체는 (i)의 임의의 서열에서 임의의 9개의 인접(contiguous) 아미노산에 대해 65% 이상의 상동성을 갖는다:

(i) SEQ IN NO 1 내지 31의 폴리펩타이드; 또는

(ii) 상기 (i)에 따른 폴리펩타이드의 변이체로서, (i)의 임의의 서열 또는 (i)의 임의의 서열에 대해 개체를 자기내성화할 수 있는 (i)의 임의의 서열에 65% 이상의 상동성을 갖는 서열로 이루어진 영역을 포함하는 9 내지 30개 아미노산 길이의 폴리펩타이드; 또는

(iii) 상기 (i)에 따른 폴리펩타이드의 변이체로서, (i)의 임의의 서열의 단편 또는 (i)의 임의의 서열의 단편의 상동체를 나타내는 서열로 이루어진 영역을 포함하는 9 내지 30개 아미노산 길이의 폴리펩타이드.

도 1은 IL-13 또는 IFN-감마의 생성에 의해 측정되는 본 발명의 상이한 펩타이드 조합물에 반응하는 피험자 백분율을 나타낸다.
도 2는 본 발명의 상이한 펩타이드에 의해 자극될 때 돼지풀 알레르기 개체로부터 PBMC에 의한 IL-10 (pg/mL)의 평균 생성량을 나타낸다.
도 3은 상이한 펩타이드 조합에 의해 자극될 때 돼지풀 알레르기 개체로부터의 PBMC에 의해 생성된 IL-10 (pg/mL)의 농도를 나타낸다.

본원 서열의 설명

SEQ ID NO. 1 내지 31은 본 발명의 폴리펩타이드 서열을 제공하고, SEQ ID NO. 32 이후로는 부가적인 서열을 제공한다.

본 발명은 자기내성에 사용될 수 있는 펩타이드들 및 펩타이드 조합에 관한 것이다. 상기 펩타이드는 SEQ ID NO. 1 내지 31의 임의의 서열로 나타나는 서열을 포함하거나 이들로 이루어지거나 또는 실질적으로 이들로 이루어질 수 있다. 이들 특이적 펩타이드의 변이체가 사용될 수도 있다. 상기 변이체는 SEQ ID NO. 1 내지 31의 임의의 단편 또는 SEQ ID NO. 1 내지 31의 임의의 상동체인 서열을 포함하거나 이들로 이루어지거나 또는 실질적으로 이들로 이루어질 수 있다.

한 양태에서, 본 발명은 돼지풀 알레르기의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 조성물에 관한 것이다. 상기 조성물은 전형적으로 적어도 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개 또는 12개의 폴리펩타이드를 최대 13개까지 포함하거나 이들로 이루어진다. 즉, 상기 조성물은 4 내지 13개의 폴리펩타이드를 포함한다. 상기 폴리펩타이드는 임의의 하기로부터 독립적으로 선택되고, (i)의 임의의 서열에 대하여 개체를 자기내성화할 수 있고 9개 이상의 아미노산 길이를 가지며 상기 상동체가 (i)의 임의의 서열에서 임의의 9개의 인접 아미노산에 대하여 65% 이상의 상동성을 갖는다:

(i) SEQ IN NO 1 내지 31의 폴리펩타이드; 또는

본 발명은 또한 본 발명의 폴리펩타이드를 포함하는 생성물 및 배합물, 및 자기내성에 의해 돼지풀 알레르기를 예방 또는 치료하는데 사용하기 위한 본 발명의 폴리펩타이드를 발현할 수 있는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 조성물, 생성물 및 벡터를 제공한다. 이러한 자기내성은 전형적으로 임의의 SEQ ID NO. 1 내지 31에서 제공되는 에피토프(예컨대, MHC 클래스 II 에피토프)이다.

돼지풀 종

돼지풀 종 앰브로시아 아르테미시폴리아(통상 돼지풀) 및 보다 드물게는 앰 브로시아 트리피다( Ambrosia trifida )(자이언트 돼지풀)는 전세계적으로 돼지풀 알레르기, 특히 건초열과 같은 돼지풀 꽃가루와 관련된 알레르기의 주된 원인이다. 통상적인 돼지풀은 북미에서 자생하지만 전세계 대부분의 전세계 대륙에 퍼져있다. 7월초부터 8월중순까지 또는 보다 추운 날씨가 올 때까지 돼지풀은 북반구에서 개화한다. 돼지풀은 새로운 땅(newly disturbed grounds)에 쉽게 적응하는 선구 식물(pioneer plant)이다. 돼지풀은 자연 서식지에서는 다른 식물과의 경쟁에 의해 종종 제한되게 자리잡지만, 인간이 기존 식물을 제거한 곳에서는 널리 공격적으로 신속하게 자리잡는다. 따라서, 돼지풀은 시골 도로변, 울타리, 폐기장, 새로운 개척지, 농작지, 정원 및 방치 잔디밭에 매우 많다. 또한, 다양한 기후에 쉽게 적응하고, 야생토 pH 범위(약 4.5 내지 약 8.5)를 견딜 수 있으며, 고 염도를 견딜 수 있다.

돼지풀 꽃가루 알레르겐의 펩타이드 단편

돼지풀 꽃가루에서 주요 알레르겐은 Amb a 1이다. 상기 단백질은 많은 상이한 아이소형 Amb a 1.1, 1.2, 1.3 및 1.4로 존재한다. 이들 아이소형은 실시예 1에 충분히 기재되어 있다. 본 발명자들은, MHC 클래스 II-결합 T 세포 에피토프를 포함하며 아이소형 사이에서 매우 잘 보존되는 영역을 Amb a 1에서 확인하였다(실시예 1의 분석 참조). 상기 정보에 근거할 때, Amb a 1의 모든 아이소형에 대한 자기내성에 의해 Amb a 1의 해당 영역으로부터 유래된 펩타이드가 돼지풀 알레르기를 예방 또는 치료하는데 적합하다.

본원에서 “펩타이드” 및 “폴리펩타이드”란 용어는 서로 바꿔 사용된다. 상기 단백질은 본원에서 “알레르겐”으로도 지칭된다.

표 3, 4 및 6은 본 발명의 펩타이드 서열을 나타내며, 적절한 경우에는 각 펩타이드가 유래된 모(parent) 단백질을 나타낸다.

펩타이드 조합물

조성물은 전형적으로 본 발명의 상이한 폴리펩타이드 적어도 3개, 최대 13개의 조합을 포함한다. 따라서, 본 발명의 조성물은 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개 또는 13개의 펩타이드로 이루어질 수 있다.

본 발명의 조성물에서 폴리펩타이드 조합물은 가능한 한 인간 개체군을 광범위하게 커버할 수 있도록 선택된다, 즉, 본 발명의 조성물은 돼지풀 알레르기 개체의 높은 비율에서, 바람직하게는 이러한 개체 패널 또는 개체군의 돼지풀 알레르기 개체의 30%, 40%, 45%, 50%, 60% 또는 70% 보다 많은 비율에서 면역 반응을 발생시킨다. 돼지풀 알레르기 개체 개체군에서 개체 인원수는 임의의 적합한 수, 전형적으로는 적어도 20명, 30명, 40명, 50명, 60명, 70명, 80명 또는 적어도 100명일 수 있다. 바람직하게, 상기 개체군은 코카시안 개체군을 대표하는 빈도(frequency) 범위내의 MHC 대립유전자 빈도를 갖는다. 11개의 공통된 DRB1 대립유전자 가계에 대한 기준 개체군 대립유전자 빈도가 표 1에 도시되어 있다(HLA Facts Book으로부터의 데이터, Parham and Barber).

본 발명의 조성물은 전형적으로 하기를 포함한다:

- RGW01, RGW01A 또는 RGW01B 폴리펩타이드 또는 그의 변이체로부터 선택된 하나 이상의 폴리펩타이드;

- RGW03, RGW03A 또는 RGW03B 폴리펩타이드 또는 그의 변이체로부터 선택된 하나 이상의 폴리펩타이드; 및

- RGW04 또는 RGW04A 폴리펩타이드 또는 그의 변이체로부터 선택된 하나 이상의 폴리펩타이드.

선택적으로, 상기 조성물은 RGW02, RGW09, RGW06 또는 RGW06A, RGW10, RGW10A, RGW05 또는 RGW05A의 임의의 폴리펩타이드 또는 그의 변이체로부터 선택된 하나 이상의 부가적인 폴리펩타이드를 추가로 포함할 수 있다.

선택적으로, 상기 조성물은 RGW07, RGW07C, RGW07D의 임의의 폴리펩타이드 또는 그의 변이체로부터 선택된 하나 이상의 부가적인 폴리펩타이드를 추가로 포함할 수 있다. 하나 이상의 부가적인 폴리펩타이드는 바람직하게는 RGW07D 폴리펩타이드 또는 그의 변이체이다.

보다 구체적으로, 한 양태에서, 본 발명은 하기로 이루어진 폴리펩타이드 3 내지 13개를 포함하는 조성물을 제공한다:

a) RGW01, RGW01A 또는 RGW01B 폴리펩타이드 또는 그의 변이체로부터 선택된 폴리펩타이드, 바람직하게는 RGW01 하나 이상;

b) RGW03, RGW03A 또는 RGW03B 폴리펩타이드 또는 그의 변이체로부터 선택된 폴리펩타이드, 바람직하게는 RGW03B 하나 이상;

c) RGW04 또는 RGW04A의 임의의 폴리펩타이드 또는 그의 변이체로부터 선택된 폴리펩타이드, 바람직하게는 RGW04A 하나 이상; 및 선택적으로는

d) RGW02, RGW09, RGW06, RGW06A, RGW10, RGW10A, RGW05 또는 RGW05A의 임의의 폴리펩타이드 또는 그의 변이체로부터 선택된 폴리펩타이드, 바람직하게는 RGW02 및/또는 RGW06A 및/또는 RGW05 하나 이상, 바람직하게는 2개, 가장 바람직하게는 3개; 및 선택적으로는

e) RGW07, RGW07C, RGW07D의 폴리펩타이드 또는 그의 변이체, 바람직하게는 RGW07D 하나 이상.

즉, 본 발명의 하나의 구체적인 양태는 펩타이드 서열 3 내지 13개를 포함하는, 자기내성에 의해 돼지풀 알레르기를 예방 또는 치료하는데 사용하기 위한 조성물을 제공하고, 상기 조성물은 하기로 이루어진다:

a) 하기 서열을 갖는 폴리펩타이드 또는 그의 변이체 하나 이상:

RGW01 GMIKSNDGPPI;

RGW01A GLIKSHDGPPV;

RGW01B GLIKSNDGPAA;

b) 하기 서열을 갖는 폴리펩타이드 또는 그의 변이체 하나 이상:

RGW03 KDLLENGAIFVTSG;

RGW03A DVFENGAIFVPSG;

RGW03B RDLLENGAIFLPSG;

c) 하기 서열을 갖는 폴리펩타이드 또는 그의 변이체 하나 이상:

RGW04 KAGMIPAEPGEA;

RGW4A SAGMIPAEPGEA;

d) 하기 서열을 갖는 폴리펩타이드 또는 그의 변이체 하나 이상:

RGW02 GSSQIWIDHSSLSKS;

RGW04 KAGMIPAEPGEA;

RGW4A SSGMIPAEPGEA;

RGW06 VVNSDKTIDGRGVKVE;

RGW06A AINNDKTIDGRGAKVE;

RGW09 ETRRSLKTSGAYN;

RGW10 FGFFQVVNNNYD;

RGW10A HGFFQVVNNNYD;

RGW05 KEGTLRFAAAQNRP;

RGW05A KEGTLRFGAAQNRP; 선택적으로는

e) 하기 서열을 갖는 폴리펩타이드 또는 그의 변이체 하나 이상:

RGW07 GEAAIKLTSSAGVLS;

RGW07C KGEAAIKLTSSAGVLSK;

RGW04A KGEAAIKLTSSAGVLSKK.

상기 (a) 내지 (e)는 본 발명의 적합한 조합물을 확인하기 위한 엄격하고 매우 선별적인 기준을 나타냄을 이해한다. 예컨대, 본 발명의 서열로부터 무작위로 6개 펩타이드를 선택하려는 경우, 거의 100만개의 선택가능한 조합이 있을 것이다. 그에 반해, 상기 기준이 적용된 6개 폴리펩타이드 조합의 예를 고려하는 것이 유용하다. 예컨대, 하기 폴리펩타이드가 선택된 조합을 고려한다:

i) RGW01, RGW01A 또는 RGW01B 폴리펩타이드중 임의의 하나, 및 RGW03, RGW03A 또는 RGW03B 폴리펩타이드중 임의의 하나 및 RGW04 또는 RGW04A 폴리펩타이드중 임의의 하나; 및

ii) RGW02, RGW09, RGW06, RGW06A, RGW10, RGW10A, RGW05 또는 RGW05A중 임의의 폴리펩타이드로부터 선택된 3개의 추가적인 폴리펩타이드.

상기 선택에 근거하여, 본 발명자들이 결정한 기준이 적용되지 않는 경우, 가능한 조합 개수는 전체 이용가능한 조합의 최소 부분을 나타낸다.

상기에 근거할 때, 본 발명의 특히 바람직한 조합은 RGW01, RGW03B, RGW04A, RGW02, RGW05, RGW06A 및 RGW07D의 폴리펩타이드 또는 그의 변이체를 포함하거나 이들로 이루어진다.

추가적인 바람직한 조합은 RGW01, RGW03B, RGW04A, RGW02, RGW05, RGW06A 및 RGW07D의 폴리펩타이드를 포함하거나 또는 이들로 이루어진다.

상기와 관련하여, 상기 조성물은 총 13개 이하의 독특한 폴리펩타이드를 선택적으로 추가로 포함할 수 있다. 이들 추가적인 폴리펩타이드는 이미 선택된 폴리펩타이드에 있지 않은 다른 서열, 즉, SEQ ID NO. 1 내지 31에 관련된다(전형적으로는 그의 상동체 및/또는 단편). 추가적인 펩타이드는 전형적으로 SEQ ID NO. 1 내지 31의 펩타이드중 하나의 기능 변이체이다. 상기 추가적인 폴리펩타이드는 SEQ ID NO. 1 내지 31의 임의의 것과 동일할 수 있다. 따라서, 상기 조성물은 SEQ ID NO. 1 내지 31의 임의에 제공된 것과 상이한 폴리펩타이드 13개 이하를 포함할 수 있다. 그러나, 상기 선택적인 추가의 폴리펩타이드는 SEQ ID NO. 1 내지 31의 임의의 것과 100% 동일할 필요는 없다. 바람직하게, 이들은 이미 선택된 폴리펩타이드(들) 중에서 이미 선택된 것이 아닌 임의의 SEQ ID NO. 1 내지 31의 연속 아미노산 적어도 9개 또는 그 이상(예컨대, 적어도 10개, 11개, 12개 또는 13개)과 65% 이상 동일하다. 이들 연속 아미노산은 예컨대, 본원에 기재된 임의의 MHC 분자에 결합된 MHC 클래스 II 에피토프를 포함할 수 있다. 환원하면, 상기 조성물은 총 13개 이하의 독특한 폴리펩타이드를 추가로 포함할 수 있으며, 상기 추가적인 폴리펩타이드는 하기와 같고, 각각의 상이한 폴리펩타이드는 자기내성에 의한 돼지풀 알레르기의 예방 또는 치료에서 동시, 별도로 또는 순차 사용된다.

(i) 상기 (a) 내지 (e)에 선택되지 않은 임의의 SEQ ID NO. 1 내지 31에 있는 연속 아미노산 적어도 9개 또는 그 이상과 65% 이상 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하고;

(ii) 9 내지 30개 아미노산 길이를 갖는다.

따라서, 보다 구체적으로, 본 발명은 상기 (a) 내지 (e)에 정의된 바와 같은 3 내지 13개의 폴리펩타이드 및 선택적으로는 하기 폴리펩타이드를 함유하여서 자기내성에 의한 돼지풀 알레르기를 예방 또는 치료에서 동시, 별도 또는 순차 사용하기 위한 생성물을 제공한다:

(f) (i) 상기 a) 내지 d)에서 선택되지 않은 임의의 SEQ ID NO. 1 내지 31에 있는 연속 아미노산 적어도 9개 또는 그 이상과 65% 이상 서열 동일성을 갖는 서열 및 (ii) 9 내지 30개 아미노산 길이를 갖는 폴리펩타이드; 및 선택적으로는

(g) 상기 f)에서 부가적으로 선택되지는 않았으나 f)에 정의된 바와 같은 폴리펩타이드; 및 선택적으로는

(h) 상기 f) 내지 g)에서 부가적으로 선택되지는 않았으나 f)에 정의된 바와 같은 폴리펩타이드; 및 선택적으로는

(i) 상기 f) 내지 h)에서 부가적으로 선택되지는 않았으나 f)에 정의된 바와 같은 폴리펩타이드; 및 선택적으로는

(j) 상기 f) 내지 i)에서 부가적으로 선택되지는 않았으나 f)에 정의된 바와 같은 폴리펩타이드; 및 선택적으로는

(k) 상기 f) 내지 j)에서 부가적으로 선택되지는 않았으나 f)에 정의된 바와 같은 폴리펩타이드; 및 선택적으로는

(l) 상기 f) 내지 k)에서 부가적으로 선택되지는 않았으나 f)에 정의된 바와 같은 폴리펩타이드; 및 선택적으로는

(m) 상기 f) 내지 l)에서 부가적으로 선택되지는 않았으나 f)에 정의된 바와 같은 폴리펩타이드; 및 선택적으로는

(n) 상기 f) 내지 m)에서 부가적으로 선택되지는 않았으나 f)에 정의된 바와 같은 폴리펩타이드; 및 선택적으로는

(o) 상기 f) 내지 n)에서 부가적으로 선택되지는 않았으나 f)에 정의된 바와 같은 폴리펩타이드; 및 선택적으로는

(p) 상기 f) 내지 o)에서 부가적으로 선택되지는 않았으나 f)에 정의된 바와 같은 폴리펩타이드.

본 발명의 또 다른 양태는 하나 이상의 폴리펩타이드를 포함하여 자기내성에 의해 돼지풀 알레르기를 예방 또는 치료하는데 사용하기 위한 조성물이며, 여기서 상기 폴리펩타이드는 임의의 하기로부터 선택되고, 상기 서열은 (i)의 임의의 서열에 대하여 개체를 자기내성화할 수 있고, 9개 이상의 아미노산 길이를 가지며, 상기 상동체는 (i)의 임의의 서열에 있는 임의의 9개 인접 아미노산과 65% 이상의 상동성을 갖는다:

(i) SEQ IN NO 1 내지 31의 임의의 폴리펩타이드; 또는

(ii) (i)에 따른 폴리펩타이드의 변이체로서, (i)의 임의의 서열 또는 (i)의 임의의 서열에 대해 개체를 자기내성화할 수 있으며 (i)의 임의의 서열에 65% 이상의 상동성을 갖는 서열로 이루어진 영역을 포함하는 9 내지 30개 아미노산 길이를 갖는 폴리펩타이드; 또는

(iii) (i)에 따른 폴리펩타이드의 변이체로서, (i)의 임의의 서열의 단편 또는 (i)의 임의의 서열의 단편의 상동체를 나타내는 서열로 이루어진 영역을 포함하는 9 내지 30개 아미노산 길이의 폴리펩타이드.

본 발명의 조성물 또는 생성물은 상기에서 정의된 임의의 서열의 변이체를 포함할 수 있다. 변이체는 전형적으로 SEQ ID NO. 1 내지 31의 상응하는 펩타이드에 존재하는 1, 2, 3개 또는 그 이상의 MHC 클래스 II 에피토프를 포함한다.

기능 변이체가 본원에 기재되어 있다. 상기 변이체는 SEQ ID NO. 1 내지 31의 상응하는 펩타이드에 존재하는 클래스 II MHC 에피토프에 대하여 개체를 자기내성화할 수 있고, 따라서 동일한 MHC 클래스 II 분자에 결합하고/하거나 SEQ ID NO. 1 내지 31의 폴리펩타이드에 있는 상응하는 에피토프를 인식하는 T 세포에 의해 인식되는 서열을 전형적으로 포함한다.

SEQ ID NO. 1 내지 31의 변이체는 단부 절단(truncation)에 의해 유래된 단편일 수 있다. 단부 절단이라 함은 SEQ ID NO. 1 내지 31의 폴리펩타이드의 N 및/또는 C-말단 단부로부터 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 아미노산을 제거하는 것을 의미한다.

T 세포 에피토프를 구성하는 핵심 9개 아미노산이 실질적으로 파괴되지 않는 한, 단편은 하나 이상의 내부 결실에 의해 발생될 수도 있다.

예컨대, SEQ ID NO. 1의 변이체는 SEQ ID NO. 1의 단편, 즉, 보다 짧은 서열을 포함할 수 있다. 이는 SEQ ID NO. 1의 N-말단 단부 또는 SEQ ID NO. 1의 C-말단 단부로부터의 아미노산 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 결실을 포함할 수 있다. 이러한 결실은 SEQ ID NO. 1의 양 단부로부터 이루어질 수 있다. SEQ ID NO. 1의 변이체는 SEQ ID NO. 1의 단부를 지나 연장되는 부가적인 아미노산(예컨대, 펩타이드가 유래된 모 단백질의 서열)을 포함할 수 있다. 변이체는 상기에서 검토된 부가 및 결실의 조합을 포함할 수 있다. 예컨대, SEQ ID NO. 1의 한 단부로부터 아미노산이 결실될 수도 있으나, 전체 길이 모 단백질 서열로부터 부가적인 아미노산이 SEQ ID NO. 1의 다른 단부에 부가될 수 있다. 상기 변이체의 동일한 내용이 SEQ ID NO. 2 내지 31에 적용된다. SEQ ID NO. 2O의 바람직한 변이체는 KKGEAAIKLTSSAGVLSK 펩타이드이다.

변이체 펩타이드는 SEQ ID NO. 1 내지 31의 임의의 아미노산 서열 또는 그의 단편에서 하나 이상의 아미노산이 치환된 것을 포함할 수 있다. 변이체 펩타이드는 SEQ ID NO. 1 내지 31의 임의의 9개 이상의 연속 아미노산과 65% 이상 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. 보다 바람직하게, 적합한 변이체는 임의의 SEQ ID NO. 1 내지 31에 있는 적어도 9개의 연속 아미노산과 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상 또는 98% 이상의 아미노산 동일성을 포함할 수 있다. 이러한 아미노산 동일성 정도는 펩타이드의 임의의 부분에서 볼 수 있으나, 바람직하게는 핵심 영역이다. 아미노산 동일성 정도는 적어도 9개의 연속 아미노산 을 초과하지만, 비교 펩타이드의 크기에 따라 적어도 10, 11, 12, 13, 14, 15개 또는 적어도 16 또는 17개 아미노산일 수 있다. 따라서, 임의의 전술한 동일성 정도는 서열의 전체 길이에 걸쳐 있을 수 있다.

아미노산 서열과 관련하여, ‘서열 동일성’이란 하기 파라미터를 이용하여 ClustalW[Thompson 등, Nucleic Acids Res. 1994 Nov 11; 22(22): 4673-80]을 이용하여 측정될 때에 명시된 값을 갖는 서열을 말한다: 쌍을 맞추는(Pair-wise) 정렬 파라미터-방법: 정확한 매트릭스(Matrix): PAM, 갭 오픈 페널티(Gap open penalty): 10.00, 갭 연장 페널티(gap extension penalty): 0.10; 다수 정렬 파라미터-매트릭스: PAM, 갭 오픈 페널티: 10.00, 지연에 대한 %동일성: 30, 단부 갭에 대한 페널화(penalize): 온, 갭 분리 거리: 0, 네거티브 매트릭스: no, 갭 연장 페널티: 0.20, 잔기-특이적 갭 페널티: 온(on), 친수성 갭 페널티: 온, 친수성 잔기: GPSNDQEKR. 특정 잔기에서의 서열 동일성은 단순하게 유도된 동일 잔기를 포함한다.

펩타이드 변이체는 SEQ ID NO. 1 내지 31의 임의의 것으로부터 1, 2, 3, 4 또는 5개 이상 또는 10개 이하의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 치환 변이체는 바람직하게는 하나 이상의 아미노산을 동일한 개수의 아미노산으로 대체하고 아미노산 치환을 보존적(conservative)으로 만드는 것을 포함한다. 예컨대, 아미노산은 유사한 특성을 갖는 대체 아미노산, 예컨대 또 다른 염기성 아미노산, 또 다른 산성 아미노산, 또 다른 중성 아미노산, 또 다른 하전 아미노산, 또 다른 친수성 아미노산, 또 다른 소수성 아미노산, 또 다른 극성 아미노산, 또 다른 방향족 아미노산 또는 또 다른 지방족 아미노산으로 치환될 수 있다. 적합한 치환기를 선택하기 위해 이용될 수 있는 20개 주요 아미노산의 몇몇 특성은 하기와 같다:

Ala	지방족, 소수성, 중성	Met	소수성, 중성
Cys	극성, 소수성, 중성	Asn	극성, 친수성, 중성
Asp	극성, 친수성, 하전(-)	Pro	소수성, 중성
Glu	극성, 친수성, 하전(-)	Gln	극성, 친수성, 중성
Phe	방향족, 소수성, 중성	Arg	극성, 친수성, 하전(+)
Gly	지방족, 중성	Ser	극성, 친수성, 중성
His	방향족, 극성, 친수성, 하전(+)	Thr	극성, 친수성, 중성
Ile	지방족, 소수성, 중성	Val	지방족, 소수성, 중성
Lys	극성, 친수성, 하전(+)	Trp	방향족, 소수성, 중성
Leu	지방족, 소수성, 중성	Tyr	방향족, 극성, 소수성

또 다른 변이체는 상기 서열에 나타나는 자연 발생(natually ocurring) 아미노산 대신의 구조적 유사체인 것을 포함한다. 서열에 이용되는 아미노산은 펩타이드 기능이 크게 악영향을 받지 않는다면 변형, 예컨대 라벨링될 수도 있다.

상기 펩타이드가 임의의 SEQ ID NO. 1 내지 31의 서열 또는 그의 단편으로부터 변화된 서열을 갖는 경우, 서열 전체 길이에 걸쳐 치환이 발생할 수 있거나, 임의의 Q ID NO. 1 내지 31의 서열 내에서 치환이 발생할 수 있거나 또는 임의의 SEQ ID NO. 1 내지 31의 서열 밖에서 치환이 발생할 수 있다. 예컨대, 부가, 결실, 치환 및 변형과 같은 본원에 기재된 변형은 임의의 SEQ ID NO. 1 내지 31의 서열 내에서 발생할 수 있다. 펩타이드 변이체는 1, 2, 3, 4개 또는 그 이상의 아미노산 치환이 이루어진 임의의 SEQ ID NO. 1 내지 31의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 본질적으로 이들로 이루어질 수 있다. 펩타이드 변이체는 임의의 SEQ ID NO. 1 내지 31보다 큰 모 단백질의 단편을 포함할 수 있다. 이 양태에서, 치환 및 변형과 같은 본원에 기재된 변형은 임의의 SEQ ID NO. 1 내지 31 서열 내의 및/또는 외부에 존재할 수 있다.

본 발명의 펩타이드 변이체는 9 내지 30개 길이의 아미노산을 포함한다. 바람직하게, 이들은 9 내지 20개, 보다 바람직하게는 13 내지 17개 아미노산 길이를 가질 수 있다. 상기 펩타이드는 SEQ ID NO. 1 내지 31의 임의의 하나에 있는 펩타이드 서열과 동일한 길이일 수 있다.

펩타이드는 예컨대 단백질분해 절단에 의해 폴리펩타이드 알레르겐으로부터 화학적으로 유래될 수 있거나 또는 예컨대 폴리펩타이드 알레르겐의 아미노산 서열을 이용하고 서열에 근거한 펩타이드를 합성함으로써 폴리펩타이드 알레르겐으로부터 intellectual sense에서 유래될 수 있다. 펩타이드는 당업계에 널리 알려진 방법을 이용하여 합성될 수 있다.

폴리펩타이드가 제작동안에 전형적으로 보존되기 어려운 잔기를 포함하는 경우, 이들 잔기는 교체될 수 있다. 예컨대, 글루타메이트는 특히 펩타이드의 N 말단에 존재할 때에 용액중에서 파이로글루타메이트를 자발적으로 형성한다. 따라서, 고유 알레르겐 단백질 서열에 있는 글루타메이트 또는 글루타민 잔기에 상응하는 본 발명의 펩타이드 잔기는 이러한 잔기가 펩타이드의 N 말단에 존재할 때에 본 발명의 펩타이드에서 파이로글루타메이트로 교체될 수 있다.

“펩타이드”란 용어는 아미노산 잔기가 펩타이드(-CO-NH-) 결합에 의해 연결된 분자 뿐만 아니라 펩타이드 결합이 역전되어 있는(reversed) 분자도 포함한다. 이러한 retro-inverso 펩티도미메틱(peptidomimetics)은 예컨대, Meziere 등(1997) J. Immunol. 159, 3230-3237에 기재된 것과 같은 당업계에 알려진 방법을 이용하여 제조될 수 있다. 이러한 접근법은 주쇄(backbone) 변화를 갖지만 측쇄 방향 변화는 갖지 않는 유사펩타이드(pseudopeptide)를 제조하는 것을 포함한다. Meziere 등(1997)은 적어도 MHC 클래스 II 및 T 헬퍼 세포 반응의 경우에는 이들 유사펩타이드가 유용하다는 것을 보여준다. CO-NH 펩타이드 결합 대신에 NH-CO 결합을 함유하는 레트로-인버스 펩타이드가 단백질 분해에 훨씬 큰 내성을 갖는다.

마찬가지로, 아미노산 잔기의 탄소 원자 사이에 간격을 갖는 적절한 결합 잔기가 이용된다면 펩타이드 결합이 제공될 수 있다; 결합 잔기가 펩타이드 결합과 실질적으로 동일한 전하 분포 및 실질적으로 동일한 극성을 갖는 것이 특히 바람직하다. 펩타이드는 외부단백질분해(exoproteolytic digesition)에 대한 감수성을 낮추는데 도움이 되도록 N- 또는 C-말단에서 통상적으로 차단될 수 있음을 이해한다. 예컨대, 펩타이드의 N-말단 아미노 기는 카복실산과 반응하여서 보호될 수 있고, 펩타이드의 C-말단 카복실 기는 아민과 반응하여서 보호될 수 있다. 변형의 다른 예는 글리코실화 및 인산화를 포함한다. 다른 가능한 변형은 R 또는 K의 측쇄 아민 상의 수소가 메틸렌기로 대체될 수 있는 것이다( -NH₂ -> -NH(Me) 또는 -N(Me)₂).

본 발명에 따른 펩타이드 유사체는 생체내 펩타이드 반감기를 증가시키거나 감소시키는 펩타이드 변이체를 또한 포함할 수 있다. 본 발명에 따라 사용되는 펩타이드 반감기를 증가시킬 수 있는 유사체의 예는 펩타이드의 펩토이드(peptoid) 유사체, 펩타이드의 D-아미노산 유도체 및 펩타이드-펩토이드 하이브리드(hybrid)를 포함한다. 본 발명에 따라 사용되는 폴리펩타이드 변이체의 또 다른 양태는 폴리펩타이드의 D-아미노산 형태를 포함한다. L-아미노산 보다 D-아미노산을 이용한 폴리펩타이드의 제조가 투여 빈도와 함께 제제 투여량을 감소시켜서 정상적인 대사 과정에 의해 상기 제제가 원하지 않게 분해되는 것을 크게 감소시킨다.

본 발명에 의해 제공되는 펩타이드는 모 단백질 사슬을 코딩하는 일차 전사를 대체 스플라이싱(splicing)하여서 발생되는 mRNA에 의해 코딩된 모 단백질의 스플라이스 변이체로부터 유도될 수 있다. 펩타이드는 또한 아미노산 돌연변이, 글리코실화 변이체, 및 알레르겐 MHC-결합 특성을 적어도 갖는 모 단백질의 다른 공유결합 유도체로부터 유도될 수 있다. 예시적인 유도체는 자연 발생 아미노산이 아닌 잔기에 의해 치환, 화학적, 효소적 또는 다른 적합한 방법에 의해 공유결합 변형된 분자를 포함한다. 다른 진드기(mite)에서 발견되는 모 단백질의 자연 발생 변이체가 또한 포함된다. 이러한 변이체는 대립유전자 변이체에 의해 코딩될 수 있거나 다른 스플라이싱 변이체를 나타낸다.

전술된 바와 같은 변이체는 펩타이드 합성 동안에 또는 생성후 변형에 의해 제조될 수 있거나 또는 펩타이드가 부위-지정(site-directed) 돌연변이, 무작위 돌연변이, 또는 효소적 절단 및/또는 핵산 결찰(ligation)의 공지된 방법을 이용하여 재조합 형태일 때에 제조될 수 있다.

본 발명에 따르면, 조성물이 포함할 수 있는 추가적인 펩타이드는 바람직하게는 SEQ ID NO. 1 내지 31의 임의의 기능 변이체이다. 즉, 펩타이드는 바람직하게는 면역 반응을 유도할 수 있다. 특히, 펩타이드는 바람직하게는 돼지풀 알레르기 개체에게서 사이토카인 생성을 유도할 수 있다. 따라서, 전형적으로, 본 발명의 조성물은 돼지풀 알레르기 개체 개체군에서 45, 50, 55% 보다 많은, 바람직하게는 60% 또는 65% 보다 많은 개체에게서 사이토카인 반응을 발생시키는 하나 이상의 폴리펩타이드 또는 그 변이체를 포함한다. 돼지풀 알레르기 개체 패널에 있는 개체 인원수는 1명보다 많은 임의의 인원일 수 있으며, 예컨대 적어도 20, 30, 40, 50, 80명이거나 또는 적어도 100명 개체일 수 있다. 바람직하게, 상기 조성물은 이러한 펩타이드를 적어도 2, 3개, 또는 가장 바람직하게는 4개를 포함한다. 바람직하게, 사이토카인 반응은 IL-13 또는 IFN-감마의 생성이다. 사이토카인 생성은 임의의 적합한 방법에 의해 측정될 수 있다. 펩타이드 존재하에 생성되는 사이토카인 농도가 자극 부재하에 생성되는 사이토카인 배경 농도(즉, 펩타이드 또는 임의의 다른 자극원 부재하에서 동일 개체에 의해 생성되는 농도)보다 적어도 2, 3, 4 또는 5배 이상이라면 사이토카인의 생성이 전형적으로는 펩타이드에 반응하여 발생한 것으로 간주된다. 다르게는, 사이토카인 생성량이 알려진 한도, 전형적으로는 250μL중 약 1.25 x 10⁶ 세포 샘플로부터 90, 95 또는 바람직하게는 100pg/mL를 넘는다면 사이토카인 생성이 발생한 것으로 간주될 수 있다.

사이토카인 생성을 측정하기에 적합한 방법은 전형적으로는 피험자로부터 취해진 시료로부터 말초혈액 단핵세포(PBMC)로부터의 사이토카인 방출을 측정하는 것을 포함한다. 상기 시료는 전형적으로 혈액 또는 혈청이다. PBMC로부터의 사이토카인 방출은 일정 펩타이드의 존재하에 세포를 배양한 후에 측정된다. 이어서, 배양 혼합물로부터의 상청액을 임의의 적합한 분석법, 예컨대 ELISA, ELISPOT 분석법 또는 흐름 세포측정 분석법을 이용하여 사이토카인 존재에 대하여 시험한다. 특히 바람직한 방법은 예컨대 de Jager 등; Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology, 2003, Vol 10(1) p. 133-139에 기재된 것과 같은 멀티플렉스 비드 어레이 분석법(Multiplex bead array assay)을 포함한다. 전형적으로, 상기 조성물은 이미 선택된 폴리펩타이드에 있지 않은 하나 이상의 부가적인 펩타이드 또는 그의 변이체를 최대 13개의 상이한 펩타이드로 포함할 수 있고, 이들은 돼지풀 알레르기 개체의 개체군에서 30%, 35%, 40% 보다 많은, 바람직하게는 45% 또는 50% 개체에서 사이토카인 반응을 발생시킨다.

상기 조성물은 이미 선택된 폴리펩타이드에 있지 않은 하나 이상의 부가적인 펩타이드 또는 그의 변이체를 최대 13개의 상이한 펩타이드로 추가로 포함할 수 있고, 이들은 돼지풀 알레르기 개체 개체군에서 10%, 15%, 20%, 25% 보다 많은, 바람직하게는 30% 또는 35% 개체에서 사이토카인 반응을 발생시킨다.

상기 조성물은 IL-10의 방출을 유도하는 하나 이상의 부가적인 펩타이드를 추가로 포함할 수 있다. IL-10은 알레르기 유형 반응에 대한 T 세포 반응을 없앨 수 있는 면역 조절자로 알려져 있다. 상당한 IL-10 방출은 조성물의 다른 펩타이드의 존재에 대하여 내성을 일으키거나 내성을 향상시키는 조절성 T 세포를 유도할 수 있다.

바람직하게, 상기 펩타이드는 개체의 적어도 35, 40, 45, 50 또는 55%에서 IL-10 방출을 유도할 수 있다. 따라서, 이 양태에서, 상기 펩타이드는 샘플 개체군의 동일 비율을 나타내는 MHC 대립유전자 서브세트(subset)에 결합할 수 있다. 바람직하게, 상기 펩타이드는 개체군의 55% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상 또는 90% 이상에서 IL-10 방출을 유도한다.

“IL-10 방출의 유도”는 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의해 측정가능한 방출로 본원에서 정의된다. 전형적으로, 상기 반응은 알레르기 개체로부터 수득된 T 세포를 이용하여 시험관내에서 측정된다. “유도”는 T 세포가 펩타이드에 노출되지 않는 대조군 시료에서 관찰되는 것보다 높은 IL-10 농도로 점수매겨진다. 몇몇 양태에서, 자기내성에 적합한 IL-10 방출 유도는 제1 폴리펩타이드를 단편으로 갖는 전체 단백질 알레르겐에 반응하여 방출되는 IL-10의 평균 양의 적어도 35, 40, 45, 50 또는 55%의 IL-10 방출로 정의될 수 있다. 비교를 위해 사용된 단백질 알레르겐이 전체 완전(intact) 폴리펩타이드일 수 있거나 또는 단백질 알레르겐에 반응하는 면역을 조절하는 T 세포 에피토프를 포함하는 단부 절단된 형태일 수 있음을 이해한다. 통상적으로, 단백질 알레르겐으로부터 유도된 각각의 펩타이드는 상기에서 정의된 바와 같은 전체 또는 단부 절단된 단백질 알레르겐에 반응하여 수득된 것보다 훨씬 적은 평균 IL-10 방출을 나타낸다. 그러나, 전체 또는 단부 절단된 단백질 알레르겐에 대하여 IL-10의 적어도 35, 40, 45, 50 또는 55%의 IL-10 방출을 나타내는 각 펩타이드가 특히 적합한 자기내성화 제제일 수 있다. 상기 펩타이드는 또한 전체 또는 단부 절단된 단백질 알레르겐에 반응하여 관찰되는 반응과 동일하거나 또는 이보다 큰 평균 반응을 나타낼 수도 있다.

다르게, 방출된 IL-10의 평균 농도는 절대 단위로 측정될 수 있으며, 이 경우에 약 400, 450, 500 또는 550 pg/mL 이상의 평균 농도가 전형적으로 250μL중 약 1.25 x 10⁶ 세포의 샘플에서 유도로 간주된다.

평균은 개체군에서 관찰되는 개인 IL-10 방출의 중간값, 중앙치 또는 모드(mode)일 수 있음을 이해한다. 개체군의 개체가 개체군의 다른 구성원에 비해 비이상적으로 낮거나 또는 비이상적으로 높은 IL-10 방출을 나타내는 경우에 이들은 평균에서 제외될 수 있음을 이해한다. 이로 인해, 개체군에 나타난 반응을 보다 잘 대표하는 평균을 측정할 수 있다. “비이상적으로 낮은” 또는 “비이상적으로 높은”이란 용어는 비이상적인 IL-10 방출 특징을 나타내는 개체를 제외한 IL-10 방출을 보다 잘 대표하는 평균값에 비해 10배 또는 20배 차이를 의미할 수 있다.

TCR에 결합할 수 있는 적합한 변이체는 알려진 기준에 따라 선택되거나 실험적으로 유래될 수 있다. 단일 펩타이드 내에는 T 세포 수용체의 초가변성(hypervariable) 영역과 상호작용에 기여하는 MHC 항원 결합 그루브 및 다른 잔기 내에 결합하는 특정 잔기가 있다(Allen et al 1987, Nature 327: 713-5).

T 세포 수용체 상호작용에 기여하는 잔기에서, 일정 펩타이드 잔기 치환시에 T 세포 활성화 의존도와 관련된 종류(hierarchy)가 증명되었다. 하나 이상의 T 세포 수용체 접촉 잔기가 다른 아미노산으로 치환된 펩타이드를 이용하여, 여러 그룹이 T 세포 활성화 과정에 크게 영향을 갖는 것으로 증명되었다. Evavold & Allen (1991) Nature 252: 1308-10은 T 세포 증식의 분해 및 사이토카인 생성을 증명하였다. 이러한 시험관내 모델에서, (I-E^k와 관련하여) 헤모글로빈 64-76 잔기에 특이적인 T 세포 클론이 글루탐산을 아스파르트산으로 보존적 치환한 펩타이드 유사체와 함께 투여되었다. 이러한 치환은 유사체의 I-E^k 결합능을 유의하게 방해하지 않았다.

상기 유사체와 함께 T 세포 클론의 시험관내 투여 이후에, IL-4 분비가 유지되었으나 증식은 검출되지 않았는데, 이는 상기 클론이 B 세포 반응을 도울 수 있기 때문이었다. 후속 연구에서, 동일한 그룹은 사이토카인 생성으로부터 T 세포-매개된 세포용해(cytolysis)의 분리를 증명하였다. 이 경우에, 전자는 변하지 않고 유지되었으나, 후자는 손상되었다. 생체내의 변형 펩타이드 리간드 효능은 McDevitt 등에 의한 쥐 EAE 모델(실험적 알레르기 뇌척수염)에서 초기에 증명되었다(Smilek 등, 1991, Proc Natl Acad Sci USA 88: 9633-9637). 이 모델에서 EAE는 MBP의 뇌척수염 펩타이드 Ac1-11(미엘린 염기성 단백질)으로 면역화하여서 유도된다. 4 위치(라이신)를 알라닌 잔기로 치환하면 제한 요소(Aα^uAβ^u)에 잘 결합되지만 감수성 PL/JxSJLF1 균주에서 비-면역원성이며 뇌척수염 펩타이드에 의한 면역 전 또는 후에 투여시에 EAE 개시를 또한 방지하는 펩타이드를 발생시킨다. 따라서, T 세포의 다양한 기능을 유도할 수 있는 펩타이드 능력에 영향을 주는 잔기가 펩타이드에서 동정될 수 있다.

유리하게도, T-세포 증식 및 탈감작 유도에 유리한 펩타이드가 고안될 수 있다. Metzler 및 Wraith는 펩타이드-MHC 친화도를 증가시키는 치환이 이루어진 펩타이드의 개선된 자기내성능을 증명하였다(Metzler & Wraith (1993) Int Immunol~: 1159~65). 변형 펩타이드 리간드가 클로닝된 T 세포에서 장기간 중증 아네르기(anergy)를 유발할 수 있음이 Sloan-Lancaster et al (1993) Nature 363: 156-9에 의해 증명되었다.

본 발명의 조성물은 알레르겐에 민감한 개체에게서 후기상(late phase) 반응을 유도할 수 있다. “후기상 반응”이라 함은 Allergy and Allergic Diseases (1997) A.B.Kay (Ed.), Blackwell Science, pp 1113-~1130에 기재된 의미를 포함한다. 후기상 반응은 임의의 후기상 반응(LPR)일 수 있다. 바람직하게, 상기 펩타이드는 후기 천식 반응(LAR) 또는 후기 비염 반응, 또는 후기상 피부 반응 또는 후기상 안구 반응(late phase ocular reponse)을 유도할 수 있다. 특정 펩타이드가 LPR을 일으킬 수 있는지 여부는 당업계에 널리 알려진 방법을 이용하여 결정될 수 있다; 특히 바람직한 방법은 Cromwell O, Durham SR, Shaw RJ, Mackay J 및 Kay AB에 기재된 것이다. 천식 및 알레르기 비염에서 비만 세포 및 호염기성 세포로부터 조절자의 자극 시험 및 측정이 Handbook of Experimental Immunology (4) Chapter 127, Editor: Weir DM, Blackwell Scientific Publications, 1986에 기재되어 있다.

따라서, 바람직하게는, 본 발명의 각각의 펩타이드는 알레르겐에 민감한 개체에게서 LPR을 유도할 수 있다. 개체가 알레르겐에 민감한지 여부는 알레르겐 특이적 IgE 측정을 위해 알레르겐 추출물 용액을 이용한 피부 찌르기(prick) 시험, 피부 LPR 유도, 임상 병력, 알레르겐 투여 및 방사선알레르기흡착 시험(RAST)과 같이 널리 알려진 절차에 의해 결정될 수 있다. 특정 개체가 치료로부터 효과를 예상할 수 있는지 여부는 예컨대, 상기 시험에 근거하여 담당의가 결정할 수 있다.

알레르겐에 대한 개체의 탈감작 또는 자기내성화는 적절히 민감한 개체에게서 알레르겐에 의해 유도된 알레르기 조직 반응을 억제 또는 완화시키는 것을 의미한다. T 세포가 선택적으로 활성화될 수 있어서 둔감성으로 될 수 있음이 알려져 있다. 또한, 상기 T 세포를 무력화 또는 제거시키면 환자는 특정 알레르겐에 탈감작하게 된다. 탈감작은 알레르겐 또는 알레르겐-유래된 펩타이드에 대한 반응 감소 그 자체를 의미하거나 또는 바람직하게는 알레르겐 또는 알레르겐-유래된 펩타이드의 2차 또한 추가 투여시에 상기 반응이 없어지는 것을 의미한다. 2차 투여는 적절한 시간이 경과하여 탈감작이 일어나도록 하기 위하여 이루어질 수 있다; 이는 바람직하게는 1일 내지 수 주 사이의 임의의 기간이다. 약 2주 간격이 바람직하다.

본 발명의 조성물이 돼지풀 알레르기 개체에게서 LPR을 유도할 수 있더라도, 상기 조성물이 환자를 치료하기 위해 사용될 때에 조성물이 충분히 낮은 농도로 사용되어서 눈에 띄는 LPR은 발생하지 않지만 상기 반응은 T 세포를 일부 탈감작하기에는 충분하여서 후속(바람직하게는 보다 높은) 투약량이 제공될 수 있어야 함을 이해한다. 이러한 방식으로 상기 투약량은 환자에게서 LRP을 유도하지 않으면서 완전히 탈감작시킬 수 있을 정도로 증가한다. 조성물 또는 펩타이드는 투여보다 높은 농도에서도 상기와 같이 할 수 있다.

본 발명의 조성물은 바람직하게는 개체군으로부터의 돼지풀 알레르기 개체 패널중 50% 보다 많은 패널에서 후기상 반응을 유도할 수 있다. 더욱 바람직하게, 상기 조성물은 패널의 민감한 개체중에서 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상 또는 90% 이상에서 LPR을 유도할 수 있다. 조성물이 피험자 패널의 특정 비율로 LPR을 유도할 수 있는지 여부는 당업계에 널리 알려진 방법에 의해 결정될 수 있다.

본 발명의 펩타이드는 MHC 클래스 IIㅡ 결합에 필요한 최소한의 필수 서열인 핵심 9개 아미노산으로 이루어진 T 세포 에피토프를 포함함을 이해한다. 그러나, 상기 펩타이드는 상기 핵심 9개 아미노산을 측면에 갖는 추가적인 잔기를 포함할 수도 있다. 그러므로, 상기 펩타이드는 T 세포 에피토프 기능에 영향을 주지 않으면서 일부 잔기가 변형될 수 있는 T 세포 에피토프를 함유한 영역을 포함한다. 따라서, 상기 정의된 바와 같은 펩타이드의 기능 변이체는 펩타이드 고유 서열에 비해 용해도가 증가되도록 변형된 펩타이드를 포함한다. 용해도가 불충분한 제제를 피험자에게 투여하면 바람직하지 않은 비-자기내성 염증 반응을 일으키므로, 본 발명의 펩타이드가 유래된 알레르겐에 대한 피험자를 자기내성화시키기 위해서는 증가된 용해도가 유리하다. 펩타이드의 용해도는 T 세포 에피토프를 함유하는 영역을 측면에 갖는 잔기를 변형시킴으로써 향상될 수 있다. 본 발명의 펩타이드는 하기를 포함하여 보다 용해성이도록 가공될 수 있다:

i) T 세포 에피토프를 측면에 갖는 펩타이드의 잔기에 대한 N 말단: 상기 펩타이드가 유래된 단백질 서열에서 상기 잔기에 대한 N 말단 직후에 2 내지 6개 연속 아미노산에 상응하는 1 내지 6개 연속 아미노산; 및/또는

ii) T 세포 에피토프를 측면에 갖는 펩타이드 잔기에 대한 C 말단: 상기 펩타이드가 유래된 단백질 서열에서 상기 잔기에 대한 C 말단 직후에 1 내지 6개 연속 아미노산에 상응하는 1 내지 6개 연속 아미노산; 또는

iii) T 세포 에피토프를 측면에 갖는 펩타이드 잔기에 대한 N 및/또는 C 말단, 아르기닌, 하나 이상이 아미노산이 라이신, 히스티딘, 글루타메이트 및 아스파테이트로부터 선택됨.

선택적으로, 상기 펩타이드는 보다 용해성이도록 추가로 가공될 수 있어서,

i) 펩타이드 고유 서열내의 임의의 시스테인 잔기가 세린 또는 2-아미노부티르산으로 교체되고/되거나;

ii) T 세포 에피토프에 포함되지 않은, 펩타이드 고유 서열의 N 및/또는 C 말단에 있는 임의의 잔기가 결실되고/되거나;

iii) T 세포 에피토프에 포함되지 않은, 펩타이드 고유 서열의 N 및/또는 C 말단에 있는 최대 4개의 아미노산에서 Asp-Gly 서열을 포함하는 임의의 2개 연속 아미노산이 결실된다.

핵산 및 벡터

본 발명의 조성물 및 생성물을 구성하는 각 펩타이드는 직접 투여될 수 있거나 또는 코딩 서열로부터의 발현에 의해 간접 투여될 수 있다. 예컨대, 폴리뉴클레오타이드는 전술한 바와 같은 임의의 펩타이드와 같은 본 발명의 펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드가 제공될 수 있다. 따라서, 본 발명의 펩타이드는 이를 코딩하고 발현시킬 수 있는 폴리뉴클레오타이드 형태로부터 생성되거나 상기 형태로 전달될 수 있다. 본원에서 본 발명의 펩타이드의 이용, 전달 또는 투여라 함은 이를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드로부터의 발현을 통해 상기 펩타이드를 간접적으로 이용, 전달 또는 투여하는 것을 포함하고자 한다.

“핵산 분자” 및 “폴리뉴클레오타이드”란 용어는 본원에서 바꿔 사용되며, 임의의 길이를 가지며 디옥시리보뉴클레오타이드 또는 리보뉴클레오타이드인 뉴클레오타이드의 중합체 형태 또는 그의 유사체를 말한다. 폴리뉴클레오타이드의 비제한적인 예는 유전자, 유전자 단편, 메신저 RNA(mRNA), cDNA, 재조합 폴리뉴클레오타이드, 플라스미드, 벡터, 임의 서열의 단리된 DNA, 임의 서열의 단리된 RNA, 핵산 프로브 및 프라이머를 포함한다. 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 단리된 또는 정제된 형태로 제공될 수 있다. 선택된 폴리펩타이드를 “코딩”하는 핵산 서열은 적절한 조절(regulatory) 서열의 제어하에 놓일 때에 생체내에서 폴리펩타이드로 전사(DNA 경우) 및 해독(mRNA 경우)되는 핵산 분자이다. 코딩 서열의 경계는 5‘ (아미노) 말단에 있는 시작 코돈 및 3’ (카복시) 말단에 있는 해독 정지 코돈에 의해 결정된다. 본 발명의 목적에서, 이러한 핵산 서열은 바이러스성, 원핵세포 또는 진핵세포 mRNA로부터의 cDNA, 바이러스성 또는 원핵세포 DNA 또는 RNA로부터의 게놈 서열, 및 심지어는 합성 DNA 서열을 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 전사 종결 서열은 코딩 서열에 대한 3‘에 위치할 수 있다.

본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 Sambrook et al(1931, Molecular Cloning - a laboratory manual; Cold Spring Harbor Press)의 실시예에 기재된 바와 같이 당업계에 널리 알려진 방법에 따라 합성될 수 있다.

본 발명의 폴리뉴클레오타이드 분자는 삽입된 서열에 따라 조작가능하게(operably) 연결된 대조군 서열을 포함하는 발현 카세트(expression cassette) 형태로 제공될 수 있어서, 본 발명의 펩타이드 발현이 표적 피험자의 생체내에서 이루어질 수 있다. 이어서, 이들 발현 카세트는 핵산 면역화용 시약으로 사용하기에 적합한 벡터(예: 플라스미드 또는 재조합 바이러스 벡터) 내에서 전형적으로 제공된다. 이러한 발현 카세트는 숙주 피험자에게 직접 투여될 수 있다. 또는, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터가 숙주 피험자에게 투여될 수 있다. 바람직하게, 폴리뉴클레오타이드는 유전자 벡터를 이용하여 제조되고/되거나 투여된다. 적합한 벡터는 충분량의 유전자 정보를 운반하여 본 발명의 펩타이드가 발현하도록 하는 임의의 벡터일 수 있다.

따라서, 본 발명은 이러한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는 발현 벡터를 포함한다. 그러므로, 본 발명은 본 발명의 상이한 폴리펩타이드를 코딩하는 4개 이상의 폴리뉴클레오타이드 서열 및 선택적으로는 본원에 정의된 바와 같은 상이한 폴리펩타이드를 코딩하는 1개 이상의 추가적인 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는 자기내성에 의해 돼지풀 알레르기를 예방 또는 치료하는데 사용하기 위한 벡터를 제공한다. 상기 벡터는 본 발명의 상이한 폴리펩타이드를 코딩하는 4, 5, 6 또는 7개 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물 및 생성물은 폴리펩타이드 및 폴리뉴클레오타이드의 혼합물을 포함할 수 있음을 이해한다. 따라서, 본 발명은 임의의 하나의 폴리펩타이드 대신에 상기 폴리펩타이드를 발현할 수 있는 폴리뉴클레오타이드가 포함된 본원에 정의된 바와 같은 조성물 또는 생성물을 제공한다.

발현 벡터는 분자 생물학 분야에서 통상적으로 제작되며, 예컨대 플라스미드 DNA 및 적절한 개시제, 프로모터(promoter), 인헨서(enhancer) 및 다른 구성요소, 예컨대 필요할 수 있고 본 발명의 펩타이드가 발현되도록 하기 위하여 정확한 배향에 위치한 폴리아데닐화 신호의 사용을 포함할 수 있다. 다른 적절한 벡터가 당업자에게 명백할 것이다. 이러한 측면에서 추가적인 실시예에 대하여 Sambrook 등의 문헌을 참고한다.

따라서, 본 발명의 폴리펩타이드는 상기 벡터를 세포에 전달하고 벡터로부터 전사가 발생하도록 함으로써 제공될 수 있다. 바람직하게, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드 또는 본 발명에서 벡터 중에 사용하기 위한 폴리뉴클레오타이드는 숙주 세포에 의한 코딩 서열 발현을 위해 제공될 수 있는 대조군 서열에 조작가능하게 연결된다, 즉, 상기 벡터는 발현 벡터이다.

“조작가능하게 연결된”이란 전술한 바와 같은 구성성분이 그의 통상적인 기능을 수행하도록 하는 배치형태를 갖는 구성요소 배열을 지칭한다. 따라서, 핵산 서열에 조작가능하게 연결된 프로모터와 같은 일정 조절 서열은 적절한 효소가 존재할 때에 상기 서열의 발현을 발생시킬 수 있다. 상기 프로모터는 발현하도록 기능하는 한, 서열과 인접할 필요는 없다. 따라서, 해독되지 않았으나 전사된 중간 서열이 프로모터 서열과 핵산 서열 사이에 존재할 수 있고, 프로모터 서열은 코딩 서열에 “조작가능하게 연결된”것으로 간주될 수 있다.

다수의 발현 시스템이 당업계에 기재되어 있으며, 이들 각각은 발현 대조군 서열에 조작가능하게 연결된 유전자 또는 뉴클레오타이드 서열을 함유하는 벡터로 전형적으로 이루어져 있다. 이들 대조군 서열은 전사 프로모터 서열 및 전사 개시 및 종결 서열을 포함한다. 본 발명의 벡터는 복제 개시와 함께 제공되는 예컨대, 플라스미드, 바이러스 또는 파지 벡터일 수 있으며, 선택적으로는 상기 폴리뉴클레오타이드의 발현을 위한 프로모터 및 선택적으로는 프로모터 조절자일 수 있다. “플라스미드”는 염색체외(extrachromosomal) 유전자 구성요소 형태의 벡터이다. 상기 벡터는 하나 이상의 선택가능한 마커 유전자, 예컨대 박테리아 플라스미드의 경우에는 암피실린 내성 유전자 또는 진균 벡터의 경우에는 내성 유전자를 함유할 수 있다. 벡터는 예컨대 DNA 또는 RNA 생산을 위해 시험관내에서 사용될 수 있거나 또는 숙주 세포, 예컨대 포유류 숙주세포를 트랜스펙션(transfection) 또는 형질전환(transformation)하는데 사용될 수 있다. 상기 벡터는 예컨대 폴리펩타이드가 생체내에서 발현되도록 하기 위하여 생체내에서 이용되도록 변형될 수도 있다.

“프로모터”는 폴리펩타이드-코딩 폴리뉴클레오타이드의 전사를 개시하고 조절하는 뉴클레오타이드 서열이다. 프로모터는 유도성 프로모터(프로모터에 조작가능하게 연결된 폴리뉴클레오타이드 서열 발현이 피분석물(analyte), 보조인자(cofactor), 조절 단백질 등에 의해 유도된다), 억제성(repressible) 프로모터(프로모터에 조작가능하게 연결된 폴리뉴클레오타이드 서열의 발현이 피분석물, 보조인자, 조절 단백질 등에 의해 억제된다) 및 구성 프로모터를 포함할 수 있다. “프로모터” 또는 “대조군 구성요소”란 용어는 전체길이 프로모터 영역 및 상기 영역의 기능성(예컨대, 전사 또는 해독 제어) 구획을 포함한다.

본 발명에 따른 폴리뉴클레오타이드, 발현 카세트 또는 벡터는 신호(signal) 펩타이드 서열을 부가적으로 포함할 수 있다. 신호 펩타이드 서열은 일반적으로 프로모터를 갖는 조작가능하게 연결되어 삽입되어서, 신호 펩타이드가 발현되고 프로모터를 갖는 조작가능하게 연결된 코딩 서열에 의해 코딩되는 폴리펩타이드의 분비를 촉진한다.

전형적으로, 신호 펩타이드 서열은 10 내지 30개 아미노산, 예컨대 15 내지 20개 아미노산의 펩타이드를 코딩한다. 종종 아미노산은 대체로 소수성이다. 전형적인 상황에서, 신호 펩타이드는 발현세포의 내형질(endoplasmic) 망상구조(reticulum)에 대한 신호 펩타이드를 갖는 증식 폴리펩타이드 사슬을 표적으로 한다. 신호 펩타이드는 내형질 망상구조에서 절단되어서, 골지(Golgi) 기관을 통해 폴리펩타이드가 분비될 수 있다. 따라서, 본 발명의 펩타이드는, 개체 내의 세포로부터 발현되고 상기 세포로부터 분비되어서 개체에 제공될 수 있다.

또는, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 항원 제공 세포 표면에 있는 MHC 클래스 II 분자에 의해 본 발명의 펩타이드를 제공할 수 있는 적절한 방식으로 발현될 수 있다. 예컨대, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드, 발현 카세트 또는 벡터는 항원 제공 세포를 표적으로 할 수 있거나, 또는 코딩된 펩타이드의 발현은 바람직하게는 이러한 세포 내에서 자극되거나 유도될 수 있다.

당해 폴리뉴클레오타이드는 본 발명의 펩타이드 생성에 있어서 시험관내, 생체외 또는 생체내에서 이용될 수 있다. 이러한 폴리뉴클레오타이드는 자기내성에 의해 알레르기를 예방 또는 치료하는데 투여 또는 사용될 수 있다.

유전자 전달 방법은 당업계에 알려져 있다. 예컨대, 미국특허 제5,399,346호, 제5,580,859호 및 제5,531,466호를 참고한다. 핵산 분자는 예컨대 표준 근육내 또는 피부내 주사; 경피 입자 전달; 흡입; 국소적 또는 경구, 비강내 또는 점막 투여 방식에 의해 수용 피험자에게 직접 도입될 수 있다. 또는, 상기 분자는 피험자에서 취한 세포내로 생체외 도입될 수 있다. 예컨대, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드, 발현 카세트 또는 벡터는 개체 생체외의 APC에 도입될 수 있다. 당해 핵산 분자를 함유한 세포는 피험자에게 재도입되어서, 핵산 분자에 의해 코딩된 펩타이드에 대한 면역 반응이 일어날 수 있다. 이러한 면역화에 사용된 핵산 분자는 본원에서 일반적으로 “핵산 백신”으로 지칭된다.

본 발명의 세포의 폴리펩타이드, 폴리뉴클레오타이드, 벡터 또는 세포는 실질적으로는 단리된 형태로 존재할 수 있다. 이들은 목적하는 용도를 방해하지 않는 담체 또는 희석제와 혼합될 수 있고, 실질적으로 단리된 것으로 간주될 수 있다. 이들은 실질적으로 정제된 형태일 수도 있고, 이 경우 단백질, 폴리뉴클레오타이드, 세포 또는 제제 건조 중량의 적어도 90%, 예컨대 적어도 95%, 98% 또는 99%를 일반적으로 구성한다.

항원 제공 세포 ( Antigen presenting cell : APC )

본 발명은 치료에서 후속적으로 사용될 수 있는, 본 발명의 펩타이드를 표면에 제공하는 APC 개체군의 생성 방법을 시험관내에서 사용하는 것을 포함한다. 상기 방법은 환자로부터 수득된 세포 샘플에 대하여 생체외 실시할 수 있다. 따라서, 상기 방식으로 생성된 APC는 자기내성에 의해 돼지풀 알레르기를 치료 또는 예방하는데 사용될 수 있는 약학 제제를 형성한다. 상기 세포는 개체로부터 유래되기 때문에 개체의 면역 시스팀에 의해 수용되어야 한다. 본래 수득되어진 개체로부터 상기 방식으로 그 개체에게 생성되는 세포 전달은 본 발명의 치료적 양태를 형성한다.

배합 및 조성

본 발명의 펩타이드, 폴리뉴클레오타이드, 벡터 및 세포는 단독으로 또는 조합되어 개체에게 제공될 수 있다. 본 발명의 각 분자 또는 세포는 단리된, 실질적으로 단리된 형태, 정제된 형태 또는 실질적으로 정제된 형태로 개체에게 제공될 수 있다. 예컨대, 본 발명의 펩타이드는 다른 펩타이드를 실질적으로 갖지 않는 개체에게 제공될 수 있다.

본 발명에 따른 펩타이드, 폴리뉴클레오타이드 또는 조성물이 가공되지 않은 형태(raw form)로 개체에 제공될 수 있으나, 약학적 배합물로 제공되는 것이 바람직하다. 따라서, 본 발명의 다른 측면에 따르면, 본 발명은 본 발명에 따른 조성물, 벡터 또는 생성물을, 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제 및 선택적으로는 하나 이상의 다른 치료 성분과 함께 포함하는, 자기내성에 의해 돼지풀 알레르기를 예방 또는 치료하는데 사용하기 위한 약학적 배합물을 제공한다. 담체(들)는, 배합물의 다른 성분과 양립할 수 있으며 수용자에게 유해하지 않다는 의미에서 “허용가능”해야 한다. 전형적으로, 주사액 및 최종 배합물을 위한 담체는 무균이어야 하고 무발열원성(pyrogen)이어야 한다.

본 발명의 펩타이드, 폴리뉴클레오타이드 또는 세포를 포함하는 조성물의 배합은 당업자가 합리적으로 용이하게 이용가능한 표준 약학 배합법 및 방법을 이용하여 실시될 수 있다.

예컨대, 본 발명의 하나 이상의 분자 또는 세포를 함유하는 조성물은 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제 또는 비히클(vehicle)과 결합될 수 있다. 습윤제, 유화제, pH 완충 물질 등과 같은 보조 물질이 부형제 또는 비히클에 존재할 수 있다. 일반적으로 이들 부형제, 비히클 및 보조 물질은 상기 조성물을 받는 개체에 있어서 면역 반응을 유도하지 않으면서 과도한 독성없이 투여될 수 있는 약학 제제이다. 약학적으로 허용가능한 부형제는 물, 염수, 폴리에틸렌글리콜, 히알루론산 및 에탄올과 같은 액체를 포함하지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 약학적으로 허용가능한 염, 예컨대 하이드로클로라이드, 하이드로브로마이드, 포스페이트, 설페이트 등과 같은 무기산 염; 및 아세테이트, 프로피오네이트, 말로네이트, 벤조에이트 등과 같은 유기산 염이 포함될 수 있다. 약학적으로 허용가능한 부형제, 비히클 및 보조 물질의 전체적인 검토는 Remington's Pharmaceutical Science (Mack Pub. Co., N.J. 1991)에서 가능하다.

상기 조성물은 환약 투여 또는 연속 투여에 적합한 형태로 제조, 포장 또는 판매될 수 있다. 주사가능한 조성물은 단위 투약량 형태, 예컨대 앰플 또는 보존제를 함유하는 복수회 투약량 용기로 제조, 포장 또는 판매될 수 있다. 조성물은 현탁액, 용액, 유성 또는 수성 비히클 중 에멀전, 페이스트, 및 이식가능한 서방성 또는 생체분해성 배합물을 포함하나, 이들에 한정되는 것은 아니다. 이러한 조성물은 현탁화제, 안정화제 또는 분산제를 비롯한 하나 이상의 부가적인 성분을 추가로 포함할 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다. 비경구 투여를 위한 조성물의 한 양태에서, 활성 성분은 재구성(reconstitution) 조성물을 비경구 투여하기 전에 적절한 비히클(예: 무균 무발열성 물)를 사용한 재구성을 위한 무수(예컨대, 분말 또는 과립) 형태로 제공된다. 약학 조성물은 무균 주사용 수성 또는 유성 현탁액 또는 용액의 형태로 제조, 포장 또는 판매될 수 있다. 이러한 현탁액 또는 용액은 당업계에 알려진 방법에 따라 배합될 수 있고, 활성 성분 이외에, 본원에 기재된 바와 같은 분산제, 습윤제 또는 현탁화제와 같은 부가적인 성분을 포함할 수 있다. 이러한 무균 주사용 배합물은 비경구적으로 허용가능한 비독성 희석제 또는 용매, 예컨대, 물 또는 1,3-부탄 다이올을 사용하여 제조될 수 있다. 다른 허용가능한 희석제 및 용매는 링거(Ringer)액, 등장성 염화나트륨 용액 및 고정유(fixed oil), 예컨대 합성 모노- 또는 다이-글리세라이드를 포함하나, 이들에 한정되는 것은 아니다. 비경구적으로 투여가능한 유용한 다른 조성물은 미정질 형태, 리포좀 제제 또는 생분해가능한 중합체 시스템 구성성분인 활성 성분을 포함하는 것을 포함한다. 서방용 또는 이식용 조성물은 에멀젼, 이온 교환 수지, 거의 불용성인(sparingly soluble) 중합체 또는 거의 불용성인 염과 같은 약학적으로 허용가능한 중합체 물질 또는 소수성 물질을 포함할 수 있다.

또는, 본 발명의 펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드는 미립자 담체에 의해 캡슐화되거나, 이에 흡착되거나 또는 이와 회합될 수 있다. 적합한 미립자 담체는 폴리메틸 메타크릴레이트 중합체로부터 유래된 것 뿐만 아니라 폴리(락타이드) 및 폴리(락타이드-코-글리콜라이드)로부터 유래된 PLG 미세입자를 포함한다. 예컨대, Jeffery et al., (1993) Pharm. Res. 10:362-368를 참조한다. 다른 미립자 시스템 및 중합체, 예컨대 폴리라이신, 폴리아르기닌, 폴리오르니틴, 스페르민(spermine), 스페르미딘(spermidine) 및 이들 분자의 결합화합물(conjugate)이 사용될 수도 있다.

본원에 언급된 펩타이드, 폴리뉴클레오타이드 또는 세포의 임의의 배합물은 물질 특성 및 전달 방법과 같은 요인에 좌우된다. 상기 임의의 물질은 각종 투약 형태로 투여될 수 있다. 이는 경구(예컨대, 정제, 트로키(troche), 로젠지(lozenge), 수성 또는 유성 현탁액, 분산가능한 분말 또는 과립), 비경구, 피부(epicutanesouly), 피하, 흡입에 의해, 정맥내, 근육내, 흉골내, 경피, 피부내, 설하, 비강내, 볼내, 또는 주입법에 의해 투여될 수 있다. 상기 물질은 좌제로 투여될 수도 있다. 담당의가 각각의 특정 개체에 필요한 투여 경로를 결정할 수 있다.

본 발명의 배합물의 조성은 역반응을 일으키지 않으면서 유효한 각 펩타이드/폴리뉴클레오타이드/세포의 적절한 농도를 포함한다. 전형적으로, 조성물 중 각 펩타이드의 농도는 0.03 내지 200 nmol/mL 범위이다. 더욱 바람직하게는 0.3 내지 200 nmol/mL, 3 내지 180 nmol/mL, 10 내지 150 nmol/mL 또는 30 내지 120 nmol/mL 범위이다. 상기 조성물 또는 배합물은 95% 보다 높은 순도, 99% 보다 높은 순도 또는 적어도 98%의 순도를 가져야 한다.

따라서, 한 양태에서, 본 발명의 펩타이드, 폴리뉴클레오타이드, 세포 또는 조성물은 하나 이상의 다른 치료제와 결합하여 치료를 위해 사용된다. 상기 제제는 별도, 동시 또는 순차 투여될 수 있다. 이들은 동일하거나 상이한 조성물로 투여될 수 있다. 따라서, 본 발명의 방법에서, 피험자는 추가적인 치료제를 사용하여 치료될 수도 있다.

따라서, 본 발명의 분자 및/또는 세포 및 하나 이상의 다른 치료 분자도 포함하는 조성물이 배합될 수도 있다. 또는, 본 발명의 조성물은 병용 치료의 일부로서 하나 이상의 다른 치료 조성물과 동시, 순차 또는 별도로 사용될 수 있다.

치료 방법 및 치료 개체

본 발명은 전술한 알레르겐에 대한 인간 개체를 탈감작 또는 자기내성화할 수 있는 펩타이드, 폴리뉴클레오타이드, 벡터 및 세포에 관한 것으로, 돼지풀 알레르기의 예방 또는 치료에 유용하다. 본 발명은 자기내성에 의해 돼지풀 알레르기를 예방 또는 치료하는데 사용하기 위한 조성물, 생성물, 벡터 및 배합물을 제공한다. 또한, 본 발명은 전술한 바와 같은 본 발명의 폴리펩타이드/폴리뉴클레오타이드/세포와 조합하여 또는 단독으로 투여하는 것을 포함하는, 돼지풀 알레르기 개체를 자기내성화 또는 탈감작하는 방법을 제공한다.

본 발명의 조성물 또는 배합물이 제공되거나 이를 사용하여 치료될 개체는 바람직하게는 인간이다. 치료 개체는 알레르기에 민감하다고 알려져 있거나 민감할 위험이 있거나 민감할 것으로 의심될 수 있는 것임을 이해한다. 상기 개체는 당업계에 널리 알려져 있고 본원에 기재된 바와 같은 방법을 이용하여 감작에 대하여 시험될 수 있다. 다르게, 상기 개체는 돼지풀 알레르기의 가족력을 가질 수 있다. 개체는 돼지풀에 노출될 때에 알레르기 징후를 나타낼 수 있으므로, 개체를 돼지풀 알레르기 감작에 대하여 시험할 필요는 없다. 노출이라 함은 돼지풀 식물, 또는 돼지풀 식물로부터 유래된 물질 또는 생성물, 또는 이들중 어느 하나를 함유하거나 포함하는 물질 또는 생성물에 근접하게 되는 것을 의미한다. 돼지풀 식물로부터 유래된 물질 또는 생성물은 전형적으로는 돼지풀 꽃가루이다. 근접이라 함은 전술한 물품으로부터 10미터 이하, 5미터 이하, 2미터 이하, 1미터 이하 또는 0미터인 것을 의미한다. 알레르기 징후는 눈 가려움, 콧물, 호흡 곤란, 피부 발적과 가려움증(red itchy skin) 또는 발진을 포함할 수 있다.

치료 개체는 임의의 연령일 수 있다. 그러나, 바람직하게, 상기 개체는 1 내지 90세 연령군, 5 내지 60세 연령군, 10 내지 40세 연령군, 더욱 바람직하게는 18 내지 35세 연령군일 수 있다.

바람직하게, 치료 개체는 코카시안 개체군을 대표하는 빈도 범위내에서 MHC 대립유전자 빈도를 갖는 개체군으로부터 비롯된다. 11개 공통된 DRB1 대립유전자 가족에 대한 기준 개체군 대립유전자 빈도를 하기 표 2에 나타내었다 (HLA Facts Book으로부터의 Data, Parham and Barber).

DRB1	1	3	4	7	8	11	12	13	14	15	16
%	6.4	14.7	15.7	8.8	3.4	8.3	3.9	14.7	2.9	17.6	2.5
기준개체군%	9.4	11.1	12.8	13.2	3.7	13.4	2.3	10.2	3.2	10.7	3.6

기준 빈도는 빈도를 기록한 복수회 연구를 분석하여 수득되었고, 도시된 수치는 중간값이다. 따라서, 바람직하게, 치료 개체는 예컨대, 상기 수치 ± 1, 2, 3, 5, 10, 15 또는 20% 범위내에 있는, 표 2에 기재된 대립유전자에 대한(예컨대, 적어도 1, 2, 3, 4, 5 또는 전체 대립유전자에 대한) 기준 개체군으로서 동등한 MHC 대립유전자 빈도를 갖는 개체군으로부터 비롯된다.

바람직하게, 상기 개체는 하기 DRB1 대립유전자의 대립유전자 빈도가 하기와 같은 개체군으로부터 비롯된다:

4 - 적어도 9%

7 - 적어도 10%

11 - 적어도 8%

상기 개체는 적어도 2주, 1달, 6달, 1년 또는 5년동안 돼지풀 알레르기를 갖고 있을 수 있다. 상기 개체는 알레르기에 의해 야기되는 발진, 코울혈(nasal congestion), 콧물 및/또는 재채기를 겪을 수 있다. 상기 개체는 돼지풀 알레르기를 치료하는 다른 조성물/화합물과 함께 투여되거나 이들과 함께 투여되지 않을 수 있다.

상기 개체는 전형적으로 온대 습윤 기후 지역에서 생활한다. 상기 개체는 전형적으로 특정 계절에 돼지풀 알레르기를 겪는다. 이러한 계절은 전형적으로 돼지풀 개화기와 일치하며, 전형적으로는 여름부터 가을, 바람직하게는 늦여름(북반구에서는 7월부터 8월)부터 초가을(북반구에서는 9월부터 10월)까지에 해당한다. 돼지풀 알레르기를 갖는 개체는 전형적으로 돼지풀 꽃가루에도 알레르기를 갖는다.

병용 면역요법( combination immunotherapy )

많은 개체가 알레르기를 갖거나 여러 폴리펩타이드 항원에 대한 탈감작을 필요로 할 수 있으므로, 본 발명은 다수의 항원에 대하여 알레르기를 갖는 개체를 탈감작시키는 방법을 제공한다. 첫 번째 폴리펩타이드 항원 또는 알레르겐에 대하여 개체에서 유도된 “내성"은 개체에게 ”내성 환경“을 만들 수 있으며, 이 때 다른 항원에 대한 내성를 제공하기 위해서는 다른 항원에 대한 부적절한 면역 반응이 하향 조절될 수 있다.

이러한 연구결과는 다수의 알레르겐에 대해 알레르기를 갖는 개체가 크게 단축된 기간내에 치료될 수 있고, 일부 알레르겐(예: 땅콩)에 대하여 심하게 알레르기를 갖지만 다른 알레르겐(예: 고양이 비듬)에 대하여는 보다 경미한 알레르기를 갖는 개체가, 보다 경미한 알레르겐에 대한 내성이 생긴 후에 이러한 내성 환경이 이용되어서 보다 극심한 다른 알레르겐에 대한 내성을 제공하는 요법으로부터 효과를 볼 수 있음을 의미한다. 또한, 관련없는 항원 또는 알레르겐에 대하여 추가적으로 민감한(또는 다르게는 면역성인) 자가면역 장애를 갖는 개체가. 관련없는 항원 또는 알레르겐에 대한 내성이 일단 생긴 후에 상기 내성 환경이 사용되어서 자가면역 장애와 관련된 자동항원에 대한 내성을 제공하는 치료 요법으로부터 효과를 볼 수 있다.

따라서, 전술한 바와 같은 돼지풀 알레르겐 및 하나 이상의 추가적인 상이한 폴리펩타이드 항원에 대하여 돼지풀 알레르기 개체를 탈감작시키는 방법이 제공된다. 상기 방법은 제1 단계에서 전술한 바와 같은 본 발명에 따른 조성물/생성물/배합물(주요 조성물)을 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 이 때 상기 투여는 돼지풀 알레르겐에 대하여 저반응성(hyporesponsive) 상태를 발생시키기에 충분한 방식으로 실시된다. 일단 돼지풀 알레르겐에 대하여 저반응성 상태가 생기거나 또는 적어도 탈감작으로의 이동이 발생하면, 상기 방법은 개체가 민감해하는 상이한 제2 폴리펩타이드 항원을 포함하는 이차 조성물의 투여를 수반한다. 이차 조성물의 투여는 일차 조성물을 사용하여 생긴 내성 환경의 이점을 취하는 방식으로 실시되고, 이 때 상이한 제2 폴리펩타이드 항원에 대하여 내성을 발생시킬 수 있다. 이차 조성물은 일차 주요 조성물, 또는 일차 주요 조성물이 유래된 알레르겐의 보다 큰 단편과 함께 공투여된다. “공투여”라 함은 동시 또는 동반 투여를 의미하는데, 예컨대 2개가 동일 조성물에 존재하거나, 별도 조성물로 거의 동시에 다른 부위에 투여되거나, 또는 상이한 시점에 별도 조성물로 폴리펩타이드 항원을 전달하는 것을 의미한다. 예컨대, 이차 조성물은 일차 조성물의 전달 이전에 또는 그 후에 동일한 부위 또는 상이한 부위에 전달될 수 있다. 전달 시차는 대략 수초 내지 수분, 수 시간 또는 심지어는 수일의 범위일 수 있다. 또한, 상이한 전달 방법이 이용될 수 있다.

제2 폴리펩타이드 항원은 바람직하게는 돼지풀 알레르겐과 다른 알레르겐이다. 본 발명의 방법에 사용하기에 적합한 알레르겐은 공지 방법을 이용하여 수득되고/되거나 생성된 것일 수 있다. 적합한 알레르겐류는 다른 돼지풀 알레르겐, 꽃가루, 동물 비듬(특히, 고양이 비듬), 목초, 곰팡이, 먼지, 항생물질, 곤충 독, 각종 환경 물질(화학물질 및 금속물질 포함), 약물 및 식품 알레르겐을 포함하지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 통상적인 나무 알레르겐은 목화(cotton wood), 포폴러, 물푸레나무(ash), 자작나무, 단풍나무, 떡갈나무(oak), 느릅나무, 히코리나무(hickory) 및 땅콩나무로부터의 꽃가루를 포함하고; 통상적인 식물 알레르겐은 산쑥(mugwort), 돼지풀, 영국 질경이, 괭이밥 독(sorrel-dock) 및 명아주로부터의 알레르겐을 포함하며; 식물 접촉 알레르건은 옻나무(poison oak), 덩굴옻나무(poison ivy) 및 쐐기풀(nettle)을 포함하고; 통상적인 잔디 알레르겐은 독보리, 큰조아재비(Timothy), 존슨(Johnson), 버뮤다(Bermuda), 김의털(fescue) 및 새포아풀(bluegrass) 알레르겐을 포함하고; 통상적인 알레르겐으로 알테르나리아(Alternaria), 푸사리움(Fusarium), 호르모덴드룸(Hormodendrum), 아스퍼길러스(Aspergillus), 마이크로폴리스포라(Micropolyspora), 뮤코르(Mucor) 및 고온 방사선균과 같은 곰팡이 또는 진균에서 수득될 수도 있고; 경피 알레르겐은 말 또는 유기물 먼지(전형적으로는 진균 기원) 또는 동물 공급원, 예컨대 깃털 및 개 비듬으로부터 수득될 수 있고; 통상적인 식품 알레르겐은 우유 및 치즈(유제품), 달걀, 밀, 너트(예: 땅콩), 해산물(예: 조개), 완두, 콩 및 글루텐 알레르겐을 포함하며; 통상적인 환경 알레르겐은 금속(니켈 및 금), 화학물질(포름알데하이드, 트리니트로페놀 및 테레빈(turpentine), 라텍스, 고무, 섬유(면 또는 울), 삼베, 모발 염색약, 화장품, 세제 및 향수 알레르겐을 포함하며; 통상적인 약물 알레르겐은 국소 마취 및 살리실레이트 알레르겐을 포함하고; 항생물질 알레르겐은 페니실린, 테트라사이클린 및 설폰아마이드 알레르겐을 포함하고; 통상적인 곤충 알레르겐은 벌, 장수말벌 및 개미 독, 및 바퀴벌레(cockroach calyx) 알레르겐을 포함한다. 특히 널리 특징분석된 알레르겐은 주요 고양이 알레르겐인 Fed d1, 벌침 포스포리파아제 A2 (PLA) (Akdis et al. (1997) J. Clin. Invest. 98: 1676-1683), 자작나무 꽃가루 알레르겐 Bet v1(Bauer et al (1997) Clin. Exp. Immunol. 107. 536-541) 및 다중 에피토프 재조합 잔디 알레르겐 rKBG8.3(Cao et al. (1997) Immunology 90: 46-51)을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 및 다른 적합한 알레르겐은 통상적으로 이용가능하고/하거나 공지 방법에 따라 추출물로 쉽게 제조될 수 있다.

바람직하게, 제2 폴리펩타이드 알레르겐은 하기의 알레르겐 서열 및 데이터베이스 수납 번호(NCBI Entrez accession number) 리스트로부터 선택된다. NCBI는 미국국립생물정보센터(National Center for Biotechnology Information)이고, 미합중국 보건국의 일기관이다. 찾으려는 데이터베이스에 접근할 수 있는 NCBI 웹사이트는 www.ncbi.nlm.nih.gov/.이다. 알레르겐 서열 및 데이터베이스 수납 번호(NCBI Entrez accession number)는 다음과 같다:

세로무늬 먼지진드기(Dermatophagoides pteronyssinus)

Der p 1

MKIVLAIASLLALSAVYARPSSIKTFEEYKKAFNKSYATFEDEEAARKNFLESVKYVQSNGGAINHLSDLSLDEFKNRFLMSAEAFEHLKTQFDLNAETNACSINGNAPAEIDLRQMRTVTPIRMQGGCGSCWAFSGVAATESAYLAYRNQSLDLAEQELVDCASQHGCHGDTIPRGIEYIQHNGVVQESYYRYVAREQSCRRPNAQRFGISNYCQIYPPNVNKIREALAQTHSAIAVIIGIKDLDAFRHYDGRTIIQRDNGYQPNYHAVNIVGYSNAQGVDYWIVRNSWDTNWGDNGYGYFAANIDLMMIEEYPYVVIL

Der p 2

MMYKILCLSLLVAAVARDQVDVKDCANHEIKKVLVPGCHGSEPCIIHRGKPFQLEAVFEANQNTKTAKIEIKASIDGLEVDVPGIDPNACHYMKCPLVKGQQYDIKYTWNVPKIAPKSENVVVTVKVMGDDGVLACAIATHAKIRD

Der p 3

MIIYNILIVLLLAINTLANPILPASPNATIVGGEKALAGECPYQISLQSSSHFCGGTILDEYWILTAAHCVAGQTASKLSIRYNSLKHSLGGEKISVAKIFAHEKYDSYQIDNDIALIKLKSPMKLNQKNAKAVGLPAKGSDVKVGDQVRVSGWGYLEEGSYSLPSELRRVDIAVVSRKECNELYSKANAEVTDNMICGGDVANGGKDSCQGDSGGPVVDVKNNQVVGIVSWGYGCARKGYPGVYTRVGNFIDWIESKRSQ

Der p 4

KYXNPHFIGXRSVITXLME

Der p 5

MKFIIAFFVATLAVMTVSGEDKKHDYQNEFDFLLMERIHEQIKKGELALFYLQEQINHFEEKPTKEMKDKIVAEMDTIIAMIDGVRGVLDRLMQRKDLDIFEQYNLEMAKKSGDILERDLKKEEARVKKIEV

Der p 6

AIGXQPAAEAEAPFQISLMK

Der p 7

MMKLLLIAAAAFVAVSADPIHYDKITEEINKAVDEAVAAIEKSETFDPMKVPDHSDKFERHIGIIDLKGELDMRNIQVRGLKQMKRVGDANVKSEDGVVKAHLLVGVHDDVVSMEYDLAYKLGDLHPNTHVISDIQDFVVELSLEVSEEGNMTLTSFEVRQFANVVNHIGGLSILDPIFAVLSDVLTAIFQDTVRAEMTKVLAPAFKKELERNNQ

Der p9

IVGGSNASPGDAVYQIAL

큰다리 먼지진드기(Dermatophagoides farinae)

Der f 1

MKFVLAIASLLVLTVYARPASIKTFEFKKAFNKNYATVEEEEVARKNFLESLKYVEANKGAINHLSDLSLDEFKNRYLMSAEAFEQLKTQFDLNAETSACRINSVNVPSELDLRSLRTVTPIRMQGGCGSCWAFSGVAATESAYLAYRNTSLDLSEQELVDCASQHGCHGDTIPRGIEYIQQNGVVEERSYPYVAREQRCRRPNSQHYGISNYCQIYPPDVKQIREALTQTHTAIAVIIGIKDLRAFQHYDGRTIIQHDNGYQPNYHAVNIVGYGSTQGDDYWIVRNSWDTTWGDSGYGYFQAGNNLMMIEQYPYVVIM

Der f 2

MISKILCLSLLVAAVVADQVDVKDCANNEIKKVMVDGCHGSDPCIIHRGKPFTLEALFDANQNTKTAKIEIKASLDGLEIDVPGIDTNACHFMKCPLVKGQQYDIKYTWNVPKIAPKSENVVVTVKLIGDNGVLACAIATHGKIRD

Der f 3

MMILTIVVLLAANILATPILPSSPNATIVGGVKAQAGDCPYQISLQSSSHFCGGSILDEYWILTAAHCVNGQSAKKLSIRYNTLKHASGGEKIQVAEIYQHENYDSMTIDNDVALIKLKTPMTLDQTNAKPVPLPAQGSDVKVGDKIRVSGWGYLQEGSYSLPSELQRVDIDVVSREQCDQLYSKAGADVSENMICGGDVANGGVDSCQGDSGGPVVDVATKQIVGIVSWGYGCARKGYPGVYTRVGNFVDWIESKRSQ

Der f 4

AVGGQDADLAEAPFQISLLK

Der f 7

MMKFLLIAAVAFVAVSADPIHYDKITEEINKAIDDAIAAIEQSETIDPMKVPDHADKFERHVGIVDFKGELAMRNIEARGLKQMKRQGDANVKGEEGIVKAHLLIGVHDDIVSMEYDLAYKLGDLHPTTHVISDIQDFVVALSLEISDEGNITMTSFEVRQFANVVNHIGGLSILDPIFGVLSDVLTAIFQDTVRKEMTKVLAPAFKRELEKN

부가적인 진드기 알레르겐 서열 (NCBI entrez accession):

1170095; 1359436; 2440053; 666007; 487661; 1545803; 84702; 84699; 625532; 404370; 1091577; 1460058; 7413; 9072; 387592.

고양이

Felis 서열(NCBI entrez accession):

539716; 539715; 423193; 423192; 423191; 423190; 1364213; 1364212; 395407; 163827; 163823; 163825; 1169665; 232086; 1169666.

라텍스

Hevea 서열:

Hev b 1

MAEDEDNQQGQGEGLKYLGFVQDAATYAVTTFSNVYLFAKDKSGPLQPGVDIIEGPVKNVAVPLYNRFSYIPNGALKFVDSTVVASVTIIDRSLPPIVKDASIQVVSAIRAAPEAARSLASSLPGQTKILAKVFYGEN

Hev b 3

MAEEVEEERLKYLDFVRAAGVYAVDSFSTLYLYAKDISGPLKPGVDTIENVVKTVVTPVYYIPLEAVKFVDKTVDVSVTSLDGVVPPVIKQVSAQTYSVAQDAPRIVLDVASSVFNTGVQEGAKALYANLEPKAEQYAVITWRALNKLPLVPQVANVVVPTAVYFSEKYNDVVRGTTEQGYRVSSYLPLLPTEKITKVFGDEAS

부가적인 Hevea 서열(NCBI entrez accession):

3319923; 3319921; 3087805; 1493836; 1480457; 1223884; 3452147; 3451147; 1916805; 232267; 123335; 2501578; 3319662; 3288200; 1942537; 2392631; 2392630; 1421554; 1311006; 494093; 3183706; 3172534; 283243; 1170248; 1708278; 1706547; 464775; 266312; 231586; 123337; 116359; 123062; 2213877; 542013; 2144920; 1070656; 2129914; 2129913; 2129912; 100135; 82026; 1076559; 82028; 82027; 282933; 280399; 100138; 1086972; 108697; 1086976; 1086978; 1086978; 1086976; 1086974; 1086972; 913758; 913757; 913756; 234388; 1092500; 228691; 1177405; 18839; 18837; 18835; 18833; 18831; 1209317; 1184668; 168217; 168215; 168213; 168211; 168209; 348137.

독보리

Lolium 서열:

126385 Lol p 1

MASSSSVLLVVALFAVFLGSAHGIAKVPPGPNITAEYGDKWLDAKSTWYGKPTGAGPKDNGGACGYKNVDKAPFNGMTGCGNTPIFKDGRGCGSCFEIKCTKPESCSGEAVTVTITDDNEEPIAPYHFDLSGHAFGSMAKKGEEQNVRSAGELELQFRRVKCKYPDDTKPTFHVEKASNPNYLAILVKYVDGDGDVVAVDIKEKGKDKWIELKESWGAVWRIDTPDKLTGPFTVRYTTEGGTKSEFEDVIPEGWKADTSYSAK

126386 Lol p 2a

AAPVEFTVEKGSDEKNLALSIKYNKEGDSMAEVELKEHGSNEWLALKKNGDGVWEIKSDKPLKGPFNFRFVSEKGMRNVFDDVVPADFKVGTTYKPE

126387 Lol p 3

TKVDLTVEKGSDAKTLVLNIKYTRPGDTLAEVELRQHGSEEWEPMTKKGNLWEVKSAKPLTGPMNFRFLSKGGMKNVFDEVIPTAFTVGKTYTPEYN

2498581 Lol p 5a

MAVQKYTVALFLRRGPRGGPGRSYAADAGYTPAAAATPATPAATPAGGWREGDDRRAEAAGGRQRLASRQPWPPLPTPLRRTSSRSSRPPSPSPPRASSPTSAAKAPGLIPKLDTAYDVAYKAAEAHPRGQVRRLRHCPHRSLRVIAGALEVHAVKPATEEVLAAKIPTGELQIVDKIDAAFKIAATAANAAPTNDKFTVFESAFNKALNECTGGAMRPTSSSPPSRPRSSRPTPPPSPAAPEVKYAVFEAALTKAITAMTQAQKAGKPAAAAATAAATVATAAATAAAVLPPPLLVVQSLISLLIYY

2498582 Lol p 5b

MAVQKHTVALFLAVALVAGPAASYAADAGYAPATPATPAAPATAATPATPATPATPAAVPSGKATTEEQKLIEKINAGFKAAVAAAAVVPPADKYKTFVETFGTATNKAFVEGLASGYADQSKNQLTSKLDAALKLAYEAAQGATPEAKYDAYVATLTEALRVIAGTLEVHAVKPAAEEVKVGAIPAAEVQLIDKVDAAYRTAATAANAAPANDKFTVFENTFNNAIKVSLGAAYDSYKFIPTLVAAVKQAYAAKQATAPEVKYTVSETALKKAVTAMSEAEKEATPAAAATATPTPAAATATATPAAAYATATPAAATATATPAAATATPAAAGGYKV

455288 Lol p isoform 9

1582249 Lol p 11

DKGPGFVVTGRVYCDPCRAGFETNVSHNVEGATVAVDCRPFDGGESKLKAEATTDKDGWYKIEIDQDHQEEICEVVLAKSPDKSCSEIEEFRDRARVPLTSNXGIKQQGIRYANPIAFFRKEPLKECGGILQAY

부가적인 Lolium 서열(NCBI entrez accession):

135480; 417103; 687261; 687259; 1771355; 2388662; 631955; 542131; 542130; 542129; 100636; 626029; 542132; 320616; 320615; 320614; 100638; 100634; 82450; 626028; 100639; 283345; 542133; 1771353; 1763163; 310877; 310875; 250525; 55317; 515377; 510911; 939932; 439950; 2718; 168316; 168314; 485371; 2388664; 2832717; 2828273; 548867.

올리브 나무

올리브 서열

416610 Ole e 1

EDIPQPPVSQFHIQGQVYCDTCRAGFITELSEFIPGASLRLQCKDKENGDVTFTEVGYTRAEGLYSMLVERDHKNEFCEITLISSGRKDCNEIPTEGWAKPSLKFKLNTVNGTTRTVNPLGFFKKEALPKCAQVYNKLGMYPPNM

펠리토리( Parietaria )

펠리토리 서열:

2497750 Par j P2

MRTVSMAALVVIAAALAWTSSAEPAPAPAPGEEACGKVVQDIMPCLHFVKGEEKEPSKECCSGTKKLSEEVKTTEQKREACKCIVRATKGISGIKNELVAEVPKKCDIKTTLPPITADFDCSKIQSTIFRGYY

1352506 Par j P5

MVRALMPCLPFVQGKEKEPSKGCCSGAKRLDGETKTGPQRVHACECIQTAMKTYSDIDGKLVSEVPKHCGIVDSKLPPIDVNMDCKTVGVVPRQPQLPVSLRHGPVTGPSDPAHKARLERPQIRVPPPAPEKA

1532056 Par j P8

MRTVSMAALVVIAAALAWTSSAELASAPAPGEGPCGKVVHHIMPCLKFVKGEEKEPSKSCCSGTKKLSEEVKTTEQKREACKCIVAATKGISGIKNELVAEVPKKCGITTTLPPITADFDCSKIESTIFRGYY

1532058 Par j P9 MRTVSAPSAVALVVIVAAGLAWTSLASVAPPAPAPGSEETCGTVVRALMPCLPFVQGKEKEPSKGCCSGAKRLDGETKTGLQRVHACECIQTAMKTYSDIDGKLVSEVPKHCGIVDSKLPPIDVNMDCKTLGVVPRQPQLPVSLRHGPVTGPSDPAHKARLERPQIRVPPPAPEKA

2497749 Par j P9

MRTVSARSSVALVVIVAAVLVWTSSASVAPAPAPGSEETCGTVVGALMPCLPFVQGKEKEPSKGCCSGAKRLDGETKTGPQRVHACECIQTAMKTYSDIDGKLVSEVPKHCGIVDSKLPPIDVNMDCKTLGVLHYKGN

1086003 Par j 1 MVRALMPCLPFVQGKEKEPSKGCCSGAKRLDGETKTGPQRVHACECIQTAMKTYSDIDGKLVSEVPKHCGIVDSKLPPIDVNMDCKTVGVVPRQPQLPVSLRHGPVTGPSRSRPPTKHGWRDPRLEFRPPHRKKPNPAFSTLG

부가적인 펠리토리 서열(NCBI entrez accession):

543659; 1836011; 1836010; 1311513; 1311512; 1311511; 1311510; 1311509; 240971.

큰조아재비

Phleum 서열:

Phl p 1

MASSSSVLLVVVLFAVFLGSAYGIPKVPPGPNITATYGDKWLDAKSTWYGKPTGAGPKDNGGACGYKDVDKPPFSGMTGCGNTPIFKSGRGCGSCFEIKCTKPEACSGEPVVVHITDDNEEPIAPYHFDLSGHAFGAMAKKGDEQKLRSAGELELQFRRVKCKYPEGTKVTFHVEKGSNPNYLALLVKYVNGDGDVVAVDIKEKGKDKWIELKESWGAIWRIDTPDKLTGPFTVRYTTEGGTKTEAEDVIPEGWKADTSYESK

Phl p 1

MASSSSVLLVVALFAVFLGSAHGIPKVPPGPNITATYGDKWLDAKSTWYGKPTAAGPKDNGGACGYKDVDKPPFSGMTGCGNTPIFKSGRGCGSCFEIKCTKPEACSGEPVVVHITDDNEEPIAAYHFDLSGIAFGSMAKKGDEQKLRSAGEVEIQFRRVKCKYPEGTKVTFHVEKGSNPNYLALLVKFSGDGDVVAVDIKEKGKDKWIALKESWGAIWRIDTPEVLKGPFTVRYTTEGGTKARAKDVIPEGWKADTAYESK

Phlp 2

MSMASSSSSSLLAMAVLAALFAGAWCVPKVTFTVEKGSNEKHLAVLVKYEGDTMAEVELREHGSDEWVAMTKGEGGVWTFDSEEPLQGPFNFRFLTEKGMKNVFDDVVPEKYTIGATYAPEE

Phl p 5

ADLGYGGPATPAAPAEAAPAGKATTEEQKLIEKINDGFKAALAAAAGVPPADKYKTFVATFGAASNKAFAEGLSAEPKGAAESSSKAALTSKLDAAYKLAYKTAEGATPEAKYDAYVATLSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEVKVIPAGELQVIEKVDSAFKVAATAANAAPANDKFTVFEAAFNNAIKASTGGAYESYKFIPALEAAVKQAYAATVATAPEVKYTVFETALKKAFTAMSEAQKAAKPATEATATATAAVGAATGAATAATGGYKV

Phl p 5

ADLGYGGPATPAAPAEAAPAGKATTEEQKLIEKINDGFKAALAAAAGVPPADKYKTFVATFGAASNKAFAEGLSAEPKGAAESSSKAALTSKLDAAYKLAYKTAEGATPEAKYDAYVATLSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEVKVIPAGELQVIEKVDSAFKVAATAANAAPANDKFTVFEAAFNNAIKASTGGAYESYKFIPALEAAVKQAYAATVATAPEVKYTVFETALKKAITAMSEAQKAAKPATEATATATAAVGAATGAATAATGGYKV

Phl p 5b

AAAAVPRRGPRGGPGRSYTADAGYAPATPAAAGAAAGKATTEEQKLIEDINVGFKAAVAAAASVPAADKFKTFEAAFTSSSKAAAAKAPGLVPKLDAAYSVAYKAAVGATPEAKFDSFVASLTEALRVIAGALEVHAVKPVTEEPGMAKIPAGELQIIDKIDAAFKVAATAAATAPADDKFTVFEAAFNKAIKESTGGAYDTYKCIPSLEAAVKQAYAATVAAAPQVKYAVFEAALTKAITAMSEVQKVSQPATGAATVAAGAATTAAGAASGAATVAAGGYKV

Phl p 5a

ADLGYGPATPAAPAAGYTPATPAAPAGADAAGKATTEEQKLIEKINAGFKAALAGAGVQPADKYRTFVATFGPASNKAFAEGLSGEPKGAAESSSKAALTSKLDAAYKLAYKTAEGATPEAKYDAYVATLSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEVKVIPAGELQVIEKVDAAFKVAATAANAAPANDKFTVFEAAFNDEIKASTGGAYESYKFIPALEAAVKQAYAATVATAPEVKYTVFETALKKAITAMSEAQKAAKPAAAATATATAAVGAATGAATAATGGYKV

Phl p 5 MAVQKYTVALFLAVALVAGPAASYAADAGYAPATPAAAGAEAGKATTEEQKLIEDINVGFKAAVAAAASVPAADKFKTFEAAFTSSSKAATAKAPGLVPKLDAAYSVSYKAAVGATPEAKFDSFVASLTEALRVIAGALEVHAVKPVTEEPGMAKIPAGELQIIDKIDAAFKVAATAAATAPADTVFEAAFNKAIKESTGGAYDTYKCIPSLEAAVKQAYAATVAAAPQVKYAVFEAALTKAITAMSEVQKVSQPATGAATVAAGAATTAAGAASGAATVAAGGYKV

Phl p 5 MAVQKYTVALFLAVALVAGPAASYAADAGYAPATPAAAGAEAGKATTEEQKLIEDINVGFKAAVAAAASVPAADKFKTFEAAFTSSSKAATAKAPGLVPKLDAAYSVAYKAAVGATPEAKFDSFVASLTEALRVIAGALEVHAVKPVTEDPAWPKIPAGELQIIDKIDAAFKVAATAAATAPADDKFTVFEAAFNKAIKESTGGAYDTYKCIPSLEAAVKQAYAATVAAAPQVKYAVFEAALTKAITAMSEVQKVSQPATGAATVAAGAATTATGAASGAATVAAGGYKV

Phl p 5

ADAGYAPATPAAAGAEAGKATTEEQKLIEDINVGFKAAVAAAASVPAADKFKTFEAAFTSSSKAATAKAPGLVPKLDAAYSVAYKAAVGATPEAKFDSFVASLTEALRVIAGALEVHAVKPVTEEPGMAKIPAGELQIIDKIDAAFKVAATAAATAPADDKFTVFEAAFNKAIKESTGGAYDTYKCIPSLEAAVKQAYAATVAAAPQVKYAVFEAALTKAITAMSEVQKVSQPATGAATVAAGAATTAAGAASGAATVAAGGYKV

Phl p 5

SVKRSNGSAEVHRGAVPRRGPRGGPGRSYAADAGYAPATPAAAGAEAGKATTEEQKLIEDINVGFKAAVAAAASVPAADKFKTFEAAFTSSSKAATAKAPGLVPKLDAAYSVAYKAAVGATPEAKFDSFVASLTEALRVIAGALEVHAVKPVTEEPGMAKIPAGELQIIDKIDAAFKVAATAAATAPADDKFTVFEAAFNKAIKESTGGAYDTYKCIPSLEAAVKQAYAATVAAAPQVKYAVFEAALTKAITAMSEVQKVSQPATGAATVAAGAATTAAGAASGAATVAAGGYKV

Phl p 5

MAVHQYTVALFLAVALVAGPAGSYAADLGYGPATPAAPAAGYTPATPAAPAGAEPAGKATTEEQKLIEKINAGFKAALAAAAGVPPADKYRTFVATFGAASNKAFAEGLSGEPKGAAESSSKAALTSKLDAAYKLAYKTAEGATPEAKYDAYVATVSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEVKVIPAGELQVIEKVDAAFKVAATAANAAPANDKFTVFEAAFNDAIKASTGGAYESYKFIPALEAAVKQAYAATVATAPEVKYTVFETALKKAITAMSEAQKAAKPAAAATATATAAVGAATGAATAATGGYKV

Phl p 5

Phl p5b

Phl p5a

Phl p 5

AVPRRGPRGGPGRSYAADAGYAPATPAAAGAEAGKATTEEQKLIEDINVGFKAAVAAAASVPAGDKFKTFEAAFTSSSKAATAKAPGLVPKLDAAYSVAYKAAVGATPEAKFDSFVASLTEALRVIAGALEVHAVKPVTEEPGMAKIPAGELQIIDKIDAAFKVAATAAATAPADDKFTVFEAAFNKAIKESTGGAYDTYKCIPSLEAAVKQAYAATVAAAPQVKYAVFEAALTKAITAMSEVQKVSQPATGAATVAAGAATTATGAASGAATVAAGGYKV

Phl p 5b

MAVPRRGPRGGPGRSYTADAGYAPATPAAAGAAAGKATTEEQKLIEDINVGFKAAVAARQRPAADKFKTFEAASPRHPRPLRQGAGLVPKLDAAYSVAYKAAVGATPEAKFDSFVASLTEALRVIAGALEVHAVKPVTEEPGMAKIPAGELQIIDKIDAAFKVAATAAATAPADDKFTVFEAAFNKAIKESTGGAYDTYKCIPSLEAAVKQAYAATVAAAAEVKYAVFEAALTKAITAMSEVQKVSQPATGAATVAAGAATTAAGAASGAATVAAGGYKV

Phl p 5

MAVHQYTVALFLAVALVAGPAASYAADLGYGPATPAAPAAGYTPATPAAPAEAAPAGKATTEEQKLIEKINAGFKAALAAAAGVQPADKYRTFVATFGAASNKAFAEGLSGEPKGAAESSSKAALTSKLDAAYKLAYKTAEGATPEAKYDAYVATLSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEVKVIPAGELQVIEKVDAAFKVAATAANAAPANDKFTVFEAAFNDAIKASTGGAYESYKFIPALEAAVKQAYAATVATAPEVKYTVFETALKKAITAMSEAQKAAKPAAAATATATAAVGAATGAATAATGGYKV

Phl p 5

EAPAGKATTEEQKLIEKINAGFKAALARRLQPADKYRTFVATFGPASNKAFAEGLSGEPKGAAESSSKAALTSKLDAAYKLAYKTAEGATPEAKYDAYVATLSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEVKVIPAAELQVIEKVDAAFKVAATAANAAPANDKFTVFEAAFNDEIKASTGGAYESYKFIPALEAAVKQAYAATVATAPEVKYTVFETALKKAITAMSEAQKAAKPPPLPPPPQPPPLAATGAATAATGGYKV

Phl p 5

Phl p 5b MAVPRRGPRGGPGRSYTADAGYAPATPAAAGAAAGKATTEEQKLIEDINVGFKAAVAARQRPAADKFKTFEAASPRHPRPLRQGAGLVPKLDAAYSVAYKAAVGATPEAKFDSFVASLTEALRVIAGALEVHAVKPVTEEPGMAKIPAGELQIIDKIDAAFKVAATAAATAPADDKFTVFEAAFNKAIKESTGGAYDTYKCIPSLEAAVKQAYAATVAAAAEVKYAVFEAALTKAITAMSEVQKVSQPATGAATVAAGAATTAAGAASGAATVAAGGYKV

Phl p 5a ADLGYGPATPAAPAAGYTPATPAAPAGADAAGKATTEEQKLIEKINAGFKAALAGAGVQPADKYRTFVATFGPASNKAFAEGLSGEPKGAAESSSKAALTSKLDAAYKLAYKTAEGATPEAKYDAYVATLSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEVKVIPAGELQVIEKVDAAFKVAATAANAAPANDKFTVFEAAFNDEIKASTGGAYESYKFIPALEAAVKQAYAATVATAPEVKYTVFETALKKAITAMSEAQKAAKPPPLPPPPQPPPLAATGAATAATGGYKV

Phl p 5 MAVHQYTVALFLAVALVAGPAASYAADLGYGPATPAAPAAGYTPATPAAPAEAAPAGKATTEEQKLIEKINAGFKAALAAAAGVQPADKYRTFVATFGAASNKAFAEGLSGEPKGAAESSSKAALTSKLDAAYKLAYKTAEGATPEAKYDAYVATLSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEVKVIPAGELQVIEKVDAAFKVAATAANAAPANDKFTVFEAAFNDAIKASTGGAYESYKFIPALEAAVKQAYAATVATAPEVKYTVFETALKKAITAMSEAQKAAKPAAAATATATAAVGAATGAATAATGGYKV

Phl p 6

MAAHKFMVAMFLAVAVVLGLATSPTAEGGKATTEEQKLIEDVNASFRAAMATTANVPPADKYKTFEAAFTVSSKRNLADAVSKAPQLVPKLDEVYNAAYNAADHAAPEDKYEAFVLHFSEALRIIAGTPEVHAVKPGA

Phl p 6

SKAPQLVPKLDEVYNAAYNAADHAAPEDKYEAFVLHFSEALHIIAGTPEVHAVKPGA

Phl p 6

ADKYKTFEAAFTVSSKRNLADAVSKAPQLVPKLDEVYNAAYNAADHAAPEDKYEAFVLHFSEALHIIAGTPEVHAVKPGA

Phl p 6

TEEQKLIEDVNASFRAAMATTANVPPADKYKTLEAAFTVSSKRNLADAVSKAPQLVPKLDEVYNAAYNAADHAAPEDKYEAFVLHFSEALRIIAGTPEVHAVKPGA

Phl p 6

MAAHKFMVAMFLAVAVVLGLATSPTAEGGKATTEEQKLIEDINASFRAAMATTANVPPADKYKTFEAAFTVSSKRNLADAVSKAPQLVPKLDEVYNAAYNAADHAAPEDKYEAFVLHFSEALHIIAGTPEVHAVKPGA

Phl p 6

MVAMFLAVAVVLGLATSPTAEGGKATTEEQKLIEDVNASFRAAMATTANVPPADKYKTFEAAFTVSSKRNLADAVSKAPQLVPKLDEVYNAAYNAADHAAPEDKYEAFVLHFSEALRIIAGTPEVHAVKPGA

Phl p 7

MADDMERIFKRFDTNGDGKISLSELTDALRTLGSTSADEVQRMMAEIDTDGDGFIDFNEFISFCNANPGLMKDVAKVF

Phl p 11

MSWQTYVDEHLMCEIEGHHLASAAILGHDGTVWAQSADFPQFKPEEITGIMKDFDEPGHLAPTGMFVAGAKYMVIQGEPGRVIRGKKGAGGITIKKTGQALVVGIYDEPMTPGQCNMVVERLGDYLVEQGM

부가적인 Phleum 서열(NCBI entrez accession):

458878; 548863; 2529314; 2529308; 2415702; 2415700; 2415698; 542168; 542167; 626037; 542169; 541814; 542171; 253337; 253336; 453976; 439960 .

장수말벌 (및 관련)

Vespula 서열:

465054 ALLERGEN VES V 5

MEISGLVYLIIIVTIIDLPYGKANNYCKIKCLKGGVHTACKYGSLKPNCGNKVVVSYGLTKQEKQDILKEHNDFRQKIARGLETRGNPGPQPPAKNMKNLVWNDELAYVAQVWANQCQYGHDTCRDVAKYQVGQNVALTGSTAAKYDDPVKLVKMWEDEVKDYNPKKKFSGNDFLKTGHYTQMVWANTKEVGCGSIKYIQEKWHKHYLVCNYGPSGNFMNEELYQTK

1709545 ALLERGEN VES M 1

GPKCPFNSDTVSIIIETRENRNRDLYTLQTLQNHPEFKKKTITRPVVFITHGFTSSASEKNFINLAKALVDKDNYMVISIDWQTAACTNEYPGLKYAYYPTAASNTRLVGQYIATITQKLVKDYKISMANIRLIGHSLGAHVSGFAGKRVQELKLGKYSEIIGLDPARPSFDSNHCSERLCETDAEYVQIIHTSNYLGTEKILGTVDFYMNNGKNNPGCGRFFSEVCSHTRAVIYMAECIKHECCLIGIPRSKSSQPISRCTKQECVCVGLNAKKYPSRGSFYVPVESTAPFCNNKGKII

1352699 ALLERGEN VES V 1

MEENMNLKYLLLFVYFVQVLNCCYGHGDPLSYELDRGPKCPFNSDTVSIIIETRENRNRDLYTLQTLQNHPEFKKKTITRPVVFITHGFTSSASETNFINLAKALVDKDNYMVISIDWQTAACTNEAAGLKYLYYPTAARNTRLVGQYIATITQKLVKHYKISMANIRLIGHSLGAHASGFAGKKVQELKLGKYSEIIGLDPARPSFDSNHCSERLCETDAEYVQIIHTSNYLGTEKTLGTVDFYMNNGKNQPGCGRFFSEVCSHSRAVIYMAECIKHECCLIGIPKSKSSQPISSCTKQECVCVGLNAKKYPSRGSFYVPVESTAPFCNNKGKII

1346323 ALLERGEN VES V 2

SERPKRVFNIYWNVPTFMCHQYDLYFDEVTNFNIKRNSKDDFQGDKIAIFYDPGEFPALLSLKDGKYKKRNGGVPQEGNITIHLQKFIENLDKIYPNRNFSGIGVIDFERWRPIFRQNWGNMKIHKNFSIDLVRNEHPTWNKKMIELEASKRFEKYARFFMEETLKLAKKTRKQADWGYYGYPYCFNMSPNNLVPECDVTAMHENDKMSWLFNNQNVLLPSVYVRQELTPDQRIGLVQGRVKEAVRISNNLKHSPKVLSYWWYVYQDETNTFLTETDVKKTFQEIVINGGDGIIIWGSSSDVNSLSKCKRLQDYLLTVLGPIAINVTEAVN

549194 ALLERGEN VES VI 5KVNYCKIKCLKGGVHTACKYGTSTKPNCGKMVVKAYGLTEAEKQEILKVHNDFRQKVAKGLETRGNPGPQPPAKNMNNLVWNDELANIAQVWASQCNYGHDTCKDTEKYPVGQNIAKRSTTAALFDSPGKLVKMWENEVKDFNPNIEWSKNNLKKTGHYTQMVWAKTKEIGCGSVKYVKDEWYTHYLVCNYGPSGNFRNEKLYEKK

부가적인 vespula 서열(NCBI entrez accession):

549193; 549192; 549191; 549190; 549131; 117414; 126761; 69576; 625255; 627131; 627188; 627187; 482382; 112561; 627186; 627185; 1923233; 317645; 317647; 745570; 225764; 162551.

나무 알레르겐 서열 (주로 자작나무) 서열:

114922 Bet v 1

MGVFNYETETTSVIPAARLFKAFILDGDNLFPKVAPQAISSVENIEGNGGPGTIKKISFPEGFPFKYVKDRVDEVDHTNFKYNYSVIEGGPIGDTLEKISNEIKIVATPDGGSILKISNKYHTKGDHEVKAEQVKASKEMGETLLRAVESYLLAHSDAYN

130975 Bet v 2

MSWQTYVDEHLMCDIDGQASNSLASAIVGHDGSVWAQSSSFPQFKPQEITGIMKDFEEPGHLAPTGLHLGGIKYMVIQGEAGAVIRGKKGSGGITIKKTGQALVFGIYEEPVTPGQCNMVVERLGDYLIDQGL

1168696 Bet v 3

MPCSTEAMEKAGHGHASTPRKRSLSNSSFRLRSESLNTLRLRRIFDLFDKNSDGIITVDELSRALNLLGLETDLSELESTVKSFTREGNIGLQFEDFISLHQSLNDSYFAYGGEDEDDNEEDMRKSILSQEEADSFGGFKVFDEDGDGYISARELQMVLGKLGFSEGSEIDRVEKMIVSVDSNRDGRVDFFEFKDMMRSVLVRSS

809536 Bet v 4

MADDHPQDKAERERIFKRFDANGDGKISAAELGEALKTLGSITPDEVKHMMAEIDTDGDGFISFQEFTDFGRANRGLLKDVAKIF

543675 Que a I - Quercus alba=oak trees (fragment)

GVFTXESQETSVIAPAXLFKALFL

543509 Car b I - Carpinus betulus=hornbeam trees (fragment)

GVFNYEAETPSVIPAARLFKSYVLDGDKLIPKVAPQAIXK

543491 Aln g I - Alnus glutinosa=alder trees (fragment)

GVFNYEAETPSVIPAARLFKAFILDGDKLLPKVAPEAVSSVENI

1204056 Rubisco

VQCMQVWPPLGLKKFETLSYLPPLSSEQLAKEVDYLLRKNLIPCLEFELEHGFVYREHNRSPGYYDGRYWTMWKLPMFGCNDSSQVLKELEECKKAYPSAFIRIIGFDDK

부가적인 나무 알레르겐 서열 (NCBI entrez 수납 번호):

131919; 128193; 585564; 1942360; 2554672; 2392209; 2414158; 1321728; 1321726; 1321724; 1321722; 1321720; 1321718; 1321716; 1321714; 1321712; 3015520; 2935416; 464576; 1705843; 1168701; 1168710; 1168709; 1168708; 1168707; 1168706; 1168705; 1168704; 1168703; 1168702; 1842188; 2564228; 2564226; 2564224; 2564222; 2564220; 2051993; 1813311; 1536831; 534910; 534900; 534318; 1340000; 1339998; 2149808; 66207; 2129477; 1076249; 1076247; 629480; 481805; 81443; 1361968; 1361967; 1361966; 1361965; 1361964; 1361963; 1361962; 1361961; 1361960; 1361959; 320546; 629483 ; 629482; 629481; 541804; 320545; 81444; 541814:; 629484; 474911; 452742; 1834387; 298737; 298736; 1584322; 1584321; 584320; 1542873; 1542871; 1542869; 1542867; 1542865; 1542863; 1542861; 1542859; 1542857; 1483232; 1483230; 1483228; 558561; 551640; 488605; 452746; 452744; 452740; 452738; 452736; 452734; 452732; 452730; 452728; 450885; 17938; 17927; 17925; 17921; 297538; 510951; 231331; 231329; 166953 .

땅콩

땅콩 서열

1168391 Ara h 1

MRGRVSPLMLLLGILVLASVSATHAKSSPYQKKTENPCAQRCLQSCQQEPDDLKQKACESRCTKLEYDPRCVYDPRGHTGTTNQRSPPGERTRGRQPGDYDDDRRQPRREEGGRWGPAGPREREREEDWRQPREDWRRPSHQQPRKIRPEGREGEQEWGTPGSHVREETSRNNPFYFPSRRFSTRYGNQNGRIRVLQRFDQRSRQFQNLQNHRIVQIEAKPNTLVLPKHADADNILVIQQGQATVTVANGNNRKSFNLDEGHALRIPSGFISYILNRHDNQNLRVAKISMPVNTPGQFEDFFPASSRDQSSYLQGFSRNTLEAAFNAEFNEIRRVLLEENAGGEQEERGQRRWSTRSSENNEGVIVKVSKEHVEELTKHAKSVSKKGSEEEGDITNPINLREGEPDLSNNFGKLFEVKPDKKNPQLQDLDMMLTCVEIKEGALMLPHFNSKAMVIVVVNKGTGNLELVAVRKEQQQRGRREEEEDEDEEEEGSNREVRRYTARLKEGDVFIMPAAHPVAINASSELHLLGFGINAENNHRIFLAGDKDNVIDQIEKQAKDLAFPGSGEQVEKLIKNQKESHFVSARPQSQSQSPSSPEKESPEKEDQEEENQGGKGPLLSILKAFN

돼지풀

앰브로시아(Ambrosia) 서열

113478 Amb a 1

MGIKHCCYILYFTLALVTLLQPVRSAEDLQQILPSANETRSLTTCGTYNIIDGCWRGKADWAENRKALADCAQGFAKGTIGGKDGDIYTVTSELDDDVANPKEGTLRFGAAQNRPLWIIFARDMVIRLDRELAINNDKTIDGRGAKVEIINAGFAIYNVKNIIIHNIIMHDIVVNPGGLIKSHDGPPVPRKGSDGDAIGISGGSQIWIDHCSLSKAVDGLIDAKHGSTHFTVSNCLFTQHQYLLLFWDFDERGMLCTVAFNKFTDNVDQRMPNLRHGFVQVVNNNYERWGSYALGGSAGPTILSQGNRFLASDIKKEVVGRYGESAMSESINWNWRSYMDVFENGAIFVPSGVDPVLTPEQNAGMIPAEPGEAVLRLTSSAGVLSCQPGAPC

113479 Amb a 2

MGIKHCCYILYFTLALVTLVQAGRLGEEVDILPSPNDTRRSLQGCEAHNIIDKCWRCKPDWAENRQALGNCAQGFGKATHGGKWGDIYMVTSDQDDDVVNPKEGTLRFGATQDRPLWIIFQRDMIIYLQQEMVVTSDKTIDGRGAKVELVYGGITLMNVKNVIIHNIDIHDVRVLPGGRIKSNGGPAIPRHQSDGDAIHVTGSSDIWIDHCTLSKSFDGLVDVNWGSTGVTISNCKFTHHEKAVLLGASDTHFQDLKMHVTLAYNIFTNTVHERMPRCRFGFFQIVNNFYDRWDKYAIGGSSNPTILSQGNKFVAPDFIYKKNVCLRTGAQEPEWMTWNWRTQNDVLENGAIFVASGSDPVLTAEQNAGMMQAEPGDMVPQLTMNAGVLTCSPGAPC

113477 Amb a 1.3

MGIKQCCYILYFTLALVALLQPVRSAEGVGEILPSVNETRSLQACEALNIIDKCWRGKADWENNRQALADCAQGFAKGTYGGKWGDVYTVTSNLDDDVANPKEGTLRFAAAQNRPLWIIFKNDMVINLNQELVVNSDKTIDGRGVKVEIINGGLTLMNVKNIIIHNINIHDVKVLPGGMIKSNDGPPILRQASDGDTINVAGSSQIWIDHCSLSKSFDGLVDVTLGSTHVTISNCKFTQQSKAILLGADDTHVQDKGMLATVAFNMFTDNVDQRMPRCRFGFFQVVNNNYDRWGTYAIGGSSAPTILCQGNRFLAPDDQIKKNVLARTGTGAAESMAWNWRSDKDLLENGAIFVTSGSDPVLTPVQSAGMIPAEPGEAAIKLTSSAGVFSCHPGAPC

113476 Amb a 1.2

MGIKHCCYILYFTLALVTLLQPVRSAEDVEEFLPSANETRRSLKACEAHNIIDKCWRCKADWANNRQALADCAQGFAKGTYGGKHGDVYTVTSDKDDDVANPKEGTLRFAAAQNRPLWIIFKRNMVIHLNQELVVNSDKTIDGRGVKVNIVNAGLTLMNVKNIIIHNINIHDIKVCPGGMIKSNDGPPILRQQSDGDAINVAGSSQIWIDHCSLSKASDGLLDITLGSSHVTVSNCKFTQHQFVLLLGADDTHYQDKGMLATVAFNMFTDHVDQRMPRCRFGFFQVVNNNYDRWGTYAIGGSSAPTILSQGNRFFAPDDIIKKNVLARTGTGNAESMSWNWRTDRDLLENGAIFLPSGSDPVLTPEQKAGMIPAEPGEAVLRLTSSAGVLSCHQGAPC

113475 Amb a 1.1

MGIKHCCYILYFTLALVTLLQPVRSAEDLQEILPVNETRRLTTSGAYNIIDGCWRGKADWAENRKALADCAQGFGKGTVGGKDGDIYTVTSELDDDVANPKEGTLRFGAAQNRPLWIIFERDMVIRLDKEMVVNSDKTIDGRGAKVEIINAGFTLNGVKNVIIHNINMHDVKVNPGGLIKSNDGPAAPRAGSDGDAISISGSSQIWIDHCSLSKSVDGLVDAKLGTTRLTVSNSLFTQHQFVLLFGAGDENIEDRGMLATVAFNTFTDNVDQRMPRCRHGFFQVVNNNYDKWGSYAIGGSASPTILSQGNRFCAPDERSKKNVLGRHGEAAAESMKWNWRTNKDVLENGAIFVASGVDPVLTPEQSAGMIPAEPGESALSLTSSAGVLSCQPGAPC

삼목 ( Cedar ) 서열

493634 Cry j IB precursor

MDSPCLVALLVFSFVIGSCFSDNPIDSCWRGDSNWAQNRMKLADCAVGFGSSTMGGKGGDLYTVTNSDDDPVNPPGTLRYGATRDRPLWIIFSGNMNIKLKMPMYIAGYKTFDGRGAQVYIGNGGPCVFIKRVSNVIIHGLYLYGCSTSVLGNVLINESFGVEPVHPQDGDALTLRTATNIWIDHNSFSNSSDGLVDVTLTSTGVTISNNLFFNHHKVMSLGHDDAYSDDKSMKVTVAFNQFGPNCGQRMPRARYGLVHVANNNYDPWTIYAIGGSSNPTILSEGNSFTAPNESYKKQVTIRIGCKTSSSCSNWVWQSTQDVFYNGAYFVSSGKYEGGNIYTKKEAFNVENGNATPHLTQNAGVLTCSLSKRC

493632 Cry j IA precursor

MDSPCLVALLVLSFVIGSCFSDNPIDSCWRGDSNWAQNRMKLADCAVGFGSSTMGGKGGDLYTVTNSDDDPVNPAPGTLRYGATRDRPLWIIFSGNMNIKLKMPMYIAGYKTFDGRGAQVYIGNGGPCVFIKRVSNVIIHGLHLYGCSTSVLGNVLINESFGVEPVHPQDGDALTLRTATNIWIDHNSFSNSSDGLVDVTLSSTGVTISNNLFFNHHKVMLLGHDDAYSDDKSMKVTVAFNQFGPNCGQRMPRARYGLVHVANNNYDPWTIYAIGGSSNPTILSEGNSFTAPNESYKKQVTIRIGCKTSSSCSNWVWQSTQDVFYNGAYFVSSGKYEGGNIYTKKEAFNVENGNATPQLTKNAGVLTCSLSKRC

1076242 Cry j II precursor - Japanese cedar

MAMKLIAPMAFLAMQLIIMAAAEDQSAQIMLDSVVEKYLRSNRSLRKVEHSRHDAINIFNVEKYGAVGDGKHDCTEAFSTAWQAACKNPSAMLLVPGSKKFVVNNLFFNGPCQPHFTFKVDGIIAAYQNPASWKNNRIWLQFAKLTGFTLMGKGVIDGQGKQWWAGQCKWVNGREICNDRDRPTAIKFDFSTGLIIQGLKLMNSPEFHLVFGNCEGVKIIGISITAPRDSPNTDGIDIFASKNFHLQKNTIGTGDDCVAIGTGSSNIVIEDLICGPGHGISIGSLGRENSRAEVSYVHVNGAKFIDTQNGLRIKTWQGGSGMASHIIYENVEMINSENPILINQFYCTSASACQNQRSAVQIQDVTYKNIRGTSATAAAIQLKCSDSMPCKDIKLSDISLKLTSGKIASCLNDNANGYFSGHVIPACKNLSPSAKRKESKSHKHPKTVMVENMRAYDKGNRTRILLGSRPPNCTNKCHGCSPCKAKLVIVHRIMPQEYYPQRWICSCHGKIYHP

1076241 Cry j II protein - Japanese cedar

MAMKFIAPMAFVAMQLIIMAAAEDQSAQIMLDSDIEQYLRSNRSLRKVEHSRHDAINIFNVEKYGAVGDGKHDCTEAFSTAWQAACKKPSAMLLVPGNKKFVVNNLFFNGPCQPHFTFKVDGIIAAYQNPASWKNNRIWLQFAKLTGFTLMGKGVIDGQGKQWWAGQCKWVNGREICNDRDRPTAIKFDFSTGLIIQGLKLMNSPEFHLVFGNCEGVKIIGISITAPRDSPNTDGIDIFASKNFHLQKNTIGTGDDCVAIGTGSSNIVIEDLICGPGHGISIGSLGRENSRAEVSYVHVNGAKFIDTQNGLRIKTWQGGSGMASHIIYENVEMINSENPILINQFYCTSASACQNQRSAVQIQDVTYKNIRGTSATAAAIQLKCSDSMPCKDIKLSDISLKLTSGKIASCLNDNANGYFSGHVIPACKNLSPSAKRKESKSHKHPKTVMVKNMGAYDKGNRTRILLGSRPPNCTNKCHGCSPCKAKLVIVHRIMPQEYYPQRWMCSRHGKIYHP

541803 Cry j I precursor - Japanese cedar

MDSPCLVALLVLSFVIGSCFSDNPIDSCWRGDSNWAQNRMKLADCAVGFGSSTMGGKGGDLYTVTNSDDDPVNPPGTLRYGATRDRPLWIIFSGNMNIKLKMPMYIAGYKTFDGRGAQVYIGNGGPCVFIKRVSNVIIHGLHLYGCSTSVLGNVLINESFGVEPVHPQDGDALTLRTATNIWIDHNSFSNSSDGLVDVTLSSTGVTISNNLFFNHHKVMLLGHDDAYSDDKSMKVTVAFNQFGPNCGQRMPRARYGLVHVANNNYDPWTIYAIGGSSNPTILSEGNSFTAPNESYKKQVTIRIGCKTSSSCSNWVWQSTQDVFYNGAYFVSSGKYEGGNIYTKKEAFNVENGNATPQLTKNAGVLTCSLSKRC

541802 Cry j I precursor- Japanese cedar

MDSPCLVALLVFSFVIGSCFSDNPIDSCWRGDSNWAQNRMKLADCAVGFGSSTMGGKGGDLYTVTNSDDDPVNPAPGTLRYGATRDRPLWIIFSGNMNIKLKMPMYIAGYKTFDGRGAQVYIGNGGPCVFIKRVSNVIIHGLYLYGCSTSVLGNVLINESFGVEPVHPQDGDALTLRTATNIWIDHNSFSNSSDGLVDVTLTSTGVTISNNLFFNHHKVMSLGHDDAYSDDKSMKVTVAFNQFGPNCGQRMPRARYGLVHVANNNYDPWTIYAIGGSSNPTILSEGNSFTAPNESYKKQVTIRIGCKTSSSCSNWVWQSTQDVFYNGAYFVSSGKYEGGNIYTKKEAFNVENGNATPHLTQNAGVLTCSLSKRC

개

개(Canis) 서열:

Can f 1

MKTLLLTIGFSLIAILQAQDTPALGKDTVAVSGKWYLKAMTADQEVPEKPDSVTPMILKAQKGGNLEAKITMLTNGQCQNITVVLHKTSEPGKYTAYEGQRVVFIQPSPVRDHYILYCEGELHGRQIRMAKLLGRDPEQSQEALEDFREFSRAKGLNQEILELAQSETCSPGGQ

혈청 알부민 단편

EAYKSEIAHRYNDLGEEHFRGLVL

혈청 알부민 단편

LSSAKERFKCASLQKFGDRAFKAWSVARLSQRFPKADFAEISKVVTDLTKVHKECCHGDLLECADDRADLAKYMCENQDSISTKLKECCDKPVLEKSQCLAEVERDELPGDLPSLAADFVEDKEVCKNYQEAKDVFLGTFLYEYSRRHPEYSVSLLLRLAKEYEATLEKCCATDDPPTCYAKVLDEFKPLVDEPQNLVKTNCELFEKLGEYGFQNALLVRYTKKAPQVSTPTLVVEVSRKLGKVGTKCCKKPESERMSCADDFLS

Can f 2

MQLLLLTVGLALICGLQAQEGNHEEPQGGLEELSGRWHSVALASNKSDLIKPWGHFRVFIHSMSAKDGNLHGDILIPQDGQCEKVSLTAFKTATSNKFDLEYWGHNDLYLAEVDPKSYLILYMINQYNDDTSLVAHLMVRDLSRQQDFLPAFESVCEDIGLHKDQIVVLSDDDRCQGSRD

부가적인 개 알레르겐 단백질 (NCBI entrez accession):

1731859

말

Equus 서열:

1575778 Equ c1

MKLLLLCLGLILVCAQQEENSDVAIRNFDISKISGEWYSIFLASDVKEKIEENGSMRVFVDVIRALDNSSLYAEYQTKVNGECTEFPMVFDKTEEDGVYSLNYDGYNVFRISEFENDEHIILYLVNFDKDRPFQLFEFYAREPDVSPEIKEEFVKIVQKRGIVKENIIDLTKIDRCFQLRGNGVAQA

3121755 Equ c 2

SQXPQSETDYSQLSGEWNTIYGAASNIXK

유로글리푸스 ( Euroglyphus ) (진드기)

유로글리푸스 서열:

Eur m 1 (변이체)

TYACSINSVSLPSELDLRSLRTVTPIRMQGGCGSCWAFSGVASTESAYLAYRNMSLDLAEQELVDCASQNGCHGDTIPRGIEYIQQNGVVQEHYYPYVAREQSCHRPNAQRYGLKNYCQISPPDSNKIRQALTQTHTAVAVIIGIKDLNAFRHYDGRTIMQHDNGYQPNYHAVNIVGYGNTQGVDYWIVRNSWDTTWGDNGYGYFAANINL

Eur m 1 (변이체)

ETNACSINGNAPAEIDLRQMRTVTPIRMQGGCGSCWAFSGVAATESAYLAYRNQSLDLAEQELVDCASQHGCHGDTIPRGIEYIQHNGVVQESYYRYVAREQSCRRPNAQRFGISNYCQIYPPNANKIREALAQTHSAIAVIIGIKDLDAFRHYDGRTIIQRDNGYQPNYHAVNIVGYSNAQGVDYWIVRNSWDTNWGDNGYGYFAANIDL

Eur m 1 (변이체)

ETSACRINSVNVPSELDLRSLRTVTPIRMQGGCGSCWAFSGVAATESAYLAYRNTSLDLSEQELVDCASQHGCHGDTIPRGIEYIQQNGVVEERSYPYVAREQQCRRPNSQHYGISNYCQIYPPDVKQIREALTQTHTAIAVIIGIKDLRAFQHYDGRTIIQHDNGYQPNYHAVNIVGYGSTQGVDYWIVRNSWDTTWGDSGYGYFQAGNNL

포아 ( Poa )(잔디) 서열

113562 POLLEN ALLERGEN POA P 9

MAVQKYTVALFLVALVVGPAASYAADLSYGAPATPAAPAAGYTPAAPAGAAPKATTDEQKMIEKINVGFKAAVAAAGGVPAANKYKTFVATFGAASNKAFAEALSTEPKGAAVDSSKAALTSKLDAAYKLAYKSAEGATPEAKYDDYVATLSEALRIIAGTLEVHGVKPAAEEVKATPAGELQVIDKVDAAFKVAATAANAAPANDKFTVFEAAFNDAIKASTGGAYQSYKFIPALEAAVKQSYAATVATAPAVKYTVFETALKKAITAMSQAQKAAKPAAAATGTATAAVGAATGAATAAAGGYKV

113561 POA P 9

MAVHQYTVALFLAVALVAGPAASYAADVGYGAPATLATPATPAAPAAGYTPAAPAGAAPKATTDEQKLIEKINAGFKAAVAAAAGVPAVDKYKTFVATFGTASNKAFAEALSTEPKGAAAASSNAVLTSKLDAAYKLAYKSAEGATPEAKYDAYVATLSEALRIIAGTLEVHAVKPAGEEVKAIPAGELQVIDKVDAAFKVAATAANAAPANDKFTVFEAAFNDAIKASTGGAYQSYKFIPALEAAVKQSYAATVATAPAVKYTVFETALKKAITAMSQAQKAAKPAAAVTATATGAVGAATGAVGAATGAATAAAGGYKTGAATPTAGGYKV

113560 POA P 9

MDKANGAYKTALKAASAVAPAEKFPVFQATFDKNLKEGLSGPDAVGFAKKLDAFIQTSYLSTKAAEPKEKFDLFVLSLTEVLRFMAGAVKAPPASKFPAKPAPKVAAYTPAAPAGAAPKATTDEQKLIEKINVGFKAAVAAAAGVPAASKYKTFVATFGAASNKAFAEALSTEPKGAAVASSKAVLTSKLDAAYKLAYKSAEGATPEAKYDAYVATLSEALRIIAGTLEVHGVKPAAEEVKAIPAGELQVIDKVDAAFKVAATAANAAPANDKFTVFEAAFNDAIKASTGGAYQSYKFIPALEAAVKQSYAATVATAPAVKYTVFETALKKAITAMSQAQKAAKPAAAVTGTATSAVGAATGAATAAAGGYKV

바퀴벌레 서열

2833325 Cr p1

MKTALVFAAVVAFVAARFPDHKDYKQLADKQFLAKQRDVLRLFHRVHQHNILNDQVEVGIPMTSKQTSATTVPPSGEAVHGVLQEGHARPRGEPFSVNYEKHREQAIMLYDLLYFANDYDTFYKTACWARDRVNEGMFMYSFSIAVFHRDDMQGVMLPPPYEVYPYLFVDHDVIHMAQKYWMKNAGSGEHHSHVIPVNFTLRTQDHLLAYFTSDVNLNAFNTYYRYYYPSWYNTTLYGHNIDRRGEQFYYTYKQIYARYFLERLSNDLPDVYPFYYSKPVKSAYNPNLRYHNGEEMPVRPSNMYVTNFDLYYIADIKNYEKRVEDAIDFGYAFDEHMKPHSLYHDVHGMEYLADMIEGNMDSPNFYFYGSIYHMYHSMIGHIVDPYHKMGLAPSLEHPETVLRDPVFYQLWKRVDHLFQKYKNRLPRYTHDELAFEGVKVENVDVGKLYTYFEQYDMSLDMAVYVNNVDQISNVDVQLAVRLNHKPFTYNIEVSSDKAQDVYVAVFLGPKYDYLGREYDLNDRRHYFVEMDRFPYHVGAGKTVIERNSHDSNIIAPERDSYRTFYKKVQEAYEGKSQYYVDKGHNYCGYPENLLIPKGKKGGQAYTFYVIVTPYVKQDEHDFEPYNYKAFSYCGVGSERKYPDNKPLGYPFDRKIYSNDFYTPNMYFKDVIIFHKKYDEVGVQGH

2231297 Cr p2

INEIHSIIGLPPFVPPSRRHARRGVGINGLIDDVIAILPVDELKALFQEKLETSPDFKALYDAIRSPEFQSIISTLNAMQRSEHHQNLRDKGVDVDHFIQLIRALFGLSRAARNLQDDLNDFLHSLEPISPRHRHGLPRQRRRSARVSAYLHADDFHKIITTIEALPEFANFYNFLKEHGLDVVDYINEIHSIIGLPPFVPPSRRHARRGVGINGLIDDVIAILPVDELKALFQEKLETSPDFKALYDAIRSPEFQSIISTLNAMPEYQELLQNLRDKGVDVDHFIRVDQGTLRTLSSGQRNLQDDLNDFLALIPTDQILAIAMDYLANDAEVQELVAYLQSDDFHKIITTIEALPEFANFYNFLKEHGLDVVDYINEIHSIIGLPPFVPPSQRHARRGVGINGLIDDVIAILPVDELKALFQEKLETSPDFKALYDAIDLRSSRA

1703445 Bla g 2 MIGLKLVTVLFAVATITHAAELQRVPLYKLVHVFINTQYAGITKIGNQNFLTVFDSTSCNVVVASQECVGGACVCPNLQKYEKLKPKYISDGNVQVKFFDTGSAVGRGIEDSLTISNLTTSQQDIVLADELSQEVCILSADVVVGIAAPGCPNALKGKTVLENFVEENLIAPVFSIHHARFQDGEHFGEIIFGGSDWKYVDGEFTYVPLVGDDSWKFRLDGVKIGDTTVAPAGTQAIIDTSKAIIVGPKAYVNPINEAIGCVVEKTTTRRICKLDCSKIPSLPDVTFVINGRNFNISSQYYIQQNGNLCYSGFQPCGHSDHFFIGDFFVDHYYSEFNWENKTMGFGRSVESV

1705483 Bla g 4 AVLALCATDTLANEDCFRHESLVPNLDYERFRGSWIIAAGTSEALTQYKCWIDRFSYDDALVSKYTDSQGKNRTTIRGRTKFEGNKFTIDYNDKGKAFSAPYSVLATDYENYAIVEGCPAAANGHVIYVQIRFSVRRFHPKLGDKEMIQHYTLDQVNQHKKAIEEDLKHFNLKYEDLHSTCH

2326190 Bla g 5

YKLTYCPVKALGEPIRFLLSYGEKDFEDYRFQEGDWPNLKPSMPFGKTPVLEIDGKQTHQSVAISRYLGKQFGLSGKDDWENLEIDMIVDTISDFRAAIANYHYDADENSKQKKWDPLKKETIPYYTKKFDEVVKANGGYLAAGKLTWADFYFVAILDYLNHMAKEDLVANQPNLKALREKVLGLPAIKAWVAKRPPTDL

부가적인 바퀴벌레 서열 (NCBI Entrez 수납 번호):

2580504; 1580797; 1580794; 1362590; 544619; 544618; 1531531; 1580792; 1166573; 1176397; 2317849.

알레르겐 (일반) 서열

NCBI 수납 번호

2739154; 3719257; 3703107; 3687326; 3643813; 3087805; 1864024; 1493836; 1480457; 2593176; 2593174; 1575778; 763532; 746485; 163827; 163823; 3080761; 163825; 3608493; 3581965; 2253610; 2231297; 2317849; 3409499; 3409498; 3409497; 3409496; 3409495; 3409494; 3409493; 3409492; 3409491; 3409490; 3409431; 3409488; 3409487; 3409486; 3409485; 3409484; 3409483; 3409482; 3409481; 3409480; 3409479; 3409478; 3409477; 3409476; 3409475; 3409474; 3409473; 3409472; 3409471; 3409470; 3409469; 3409468; 3409467; 3409466; 3409465; 3409464; 3409463; 3409462; 3409461; 3409460; 3409459; 3409458; 3409457; 3409456; 3318885; 3396070 ; 3367732; 1916805; 3337403; 2851457; 2851456; 1351295; 549187; 136467; 1173367; 2499810; 2498582; 2498581; 1346478; 1171009; 126608; 114091; 2506771; 1706660; 1169665; 1169531; 232086; 416318; 114922; 2497701; 1703232; 1703233; 1703233; 1703232; 3287877; 3122132; 3182907; 3121758; 3121756; 3121755; 3121746; 3121745; 3319925; 3319923; 3319921; 3319651; 3318731; 3318779; 3309647; 3309047; 3309045; 3309043; 3309041; 3309039; 3288200; 3288068; 2924494; 3256212; 3256210; 3243234; 3210053; 3210052; 3210051; 3210050; 3210049; 3210048; 3210047; 3210046; 3210045; 3210044; 3210043; 3210042; 3210041; 3210040; 3210039; 3210038; 3210037; 3210036; 3210035; 3210034; 3210033; 3210032; 3210031; 3210030; 3210029; 3210028; 3210027; 3210026; 3210025; 3210024; 3210023; 3210022; 3210021; 3210020; 3210019; 3210018; 3210017; 3210016; 3210015; 3210014; 3210013; 3210012; 3210011; 3210010; 3210009; 3210008; 3210007; 3210006; 3210005; 3210004; 3210003; 3210002; 3210001; 3210000; 3209999; 3201547; 2781152; 2392605; 2392604; 2781014; 1942360; 2554672; 2392209; 3114481; 3114480; 2981657; 3183706; 3152922 ; 3135503 ; 3135501; 3135499; 3135497; 2414158; 1321733; 1321731; 1321728; 1321726; 1321724; 1321722; 1321720; 1321718; 1321716; 1321714; 1321712; 3095075; 3062795; 3062793; 3062791; 2266625; 2266623; 2182106; 3044216; 2154736; 3021324; 3004467; 3005841; 3005839; 3004485; 3004473; 3004471; 3004469; 3004465; 2440053; 1805730; 2970629 ; 2959318; 2935527 ; 2935416; 809536; 730091; 585279; 584968; 2498195; 2833325; 2498604; 2498317; 2498299; 2493414; 2498586; 2498585; 2498576; 2497749; 2493446; 2493445; 1513216 ; 729944; 2498099; 548449; 465054; 465053; 465052; 548671; 548670; 548660; 548658; 548657; 2832430; 232084; 2500822; 2498118; 2498119; 2498119; 2498118; 1708296; 1708793; 416607; 416608; 416608; 416607; 2499791; 2498580; 2498579; 2498578; 2498577; 2497750; 1705483; 1703445; 1709542; 1709545; 1710531; 1352699; 1346568; 1346323; 1346322; 2507248; |1352240; 1352239; 1352237; 1352229; 1351935; 1350779; 1346806; 1346804; 1346803; 1170095; 1168701; 1352506; 1171011; 1171008; 1171005; 1171004; 1171002; 1171001; 1168710; 1168709; 1168708; 1168707; 1168706; 1168705; 1168704; 1168703; 1168702; 1168696; 1168391; 1168390; 1168348; 1173075; 1173074; 1173071; 1169290; 1163170; 1168402; 729764; 729320; 729979; 729970; 729315; 730050; 730049; 730048; 549194; 549193; 549192; 549191; 549190; 549131; 549188; 549185; 549184; 549183; 549182; 549181; 549180; 549179; 464471; 585290; 416731; 1169666; 113478; 113479; 113477; 113476; 113475; 130975; 119656; 113562; 113561; 113560; 416610; 126387; 126386; 126385; 132270; 416611; 416612; 416612; 416611; 730035; 127205; 1352238; 125887; 549186; 137395; 730036; 133174; 114090; 131112; 126949; 129293; 124757; 129501; 416636; 2801531; 2796177; 2796175; 2677826; 2735118; 2735116; 2735114; 2735112; 2735110; 2735108; 2735106 ; 273531; 2735102 ; 2735100 ; 2735098 ; 2735096 ; 2707295 ; 2154730; 2154728; 1684720; 2580504 ; 2465137; 2465135; 2465133; 2465131; 2465129; 2465127; 2564228; 2564226; 2564224; 2564222; 2564220; 2051993; 1313972; 1313970; 1313968; 1313966; 2443824 ; 2488684; 2488683; 2488682; 2488681; 2488680; 2488679; 2488678; 2326190 ; 2464905; 2415702; 2415700; 2415698; 2398759; 2398757; 2353266 ; 2338288 ; 1167836; 414703 ; 2276458 ; 1684718 ; 2293571 ; 1580797 ; 1580794 ; 2245508 ; 2245060; 1261972; 2190552 ; 1881574 ; 511953 ; 1532058; 1532056; 1532054; 1359436; 666007; 487661; 217308; 1731859; 217306; 217304; 1545803; 1514943; 577696; 516728; 506858; 493634; 493632; 2154734; 2154732; 543659; 1086046; 1086045; 2147643; 2147642; 1086003; 1086002; 1086001; 543675; 543623; 543509; 543491; 1364099; 2147108; 2147107; 1364001; 1085628; 631913; 631912; 631911; 2147092; 477301; 543482; 345521; 542131; 542130; 542129; 100636; 2146809; 480443; 2114497; 2144915; 72355; 71728; 319828; 1082946; 1082945; 1082944; 539716; 539715; 423193; 423192; 423191; 423190; 1079187; 627190; 627131; 627188; 627187; 482382; 1362656; 627186; 627185; 627182; 482381; 85299; 85298; 2133756; 2133755; 1079186; 627181; 32314; 32313; 112559; 112558; 1362590; 2133564; 1085122; 1073171; 627144; 627143; 627142; 627141; 280576; 102835; 102834; 102833; 102832; 84703; 84702; 84700; 84699; 84698; 84696; 477888; 477505; 102575; 102572; 478272; 2130094; 629813; 629812; 542172; 542168; 542167; 481432; 320620; 280414; 626029; 542132; 320615; 320614; 100638; 100637; 100635; 82449; 320611; 320610; 280409; 320607; 320606; 539051; 539050; 539049; 539048; 322803; 280407; 100501; 100498; 100497; 100496; 1362137; 1362136; 1362135; 1362134; 1362133; 1362132; 1362131; 1362130; 1362129; 1362128; 100478; 2129311; 1076531; 1362049; 1076486; 2129817; 2129816; 2129815; 2129814; 2129813; 2129812; 2129805; 2129804; 2129802; 2129801; 2129800; 2129799; 479902; 479901; 2129477; 1076247; 629480; 1076242; 1076241; 541803; 541802; 280372; 280371; 1361968; 1361967; 1361966; 1361965; 1361964; 1361963; 1361962; 1361961; 1361960; 1361959; 320546; 2119763; 543622; 541804; 478825; 478824; 478823; 421788; 320545; 81444; 626037; 626028; 539056; 483123; 481398; 481397; 100733; 100732; 100639; 625532; 1083651; 322674; 322673; 81719; 81718; 2118430; 2118429; 2118428; 2118427; 419801; 419800; 419799; 419798; 282991; 100691; 322995; 322994; 101824; 626077; 414553 ; 398830 ; 1311457; 1916292 ; 1911819; 1911818; 1911659; 1911582; 467629; 467627; 467619 ; 467617 ; 915347; 1871507; 1322185; 1322183; 317645 ; 317647 ; 1850544 ; 1850542 ; 1850540 ; 283117; 452742; 1842045 ; 1839305; 1836011; 1836010; 1829900; 1829319; 1829318; 1829317; 1829316; 1829315; 1829314; 1825459 ; 1803187 ; 159653 ; 1773369 ; 1769849; 1769847; 608690 ; 310877 ; 310875; 1438761; 1311513; 1311512; 1311511; 1311510; 1311509; 1311631; 1246120; 1246119; 1246118; 1246117; 1246116; 1478293; 1478292; 1311642; 1174278; 1174276; 1086972; 1086974; 1086976; 1086978; 1086978; 1086976; 1086974; 1086972; 999009; 999356; 999355; 994866; 994865; 913758; 913757; 913756; 913285; 913283; 926885; 807138; 632782; 601807; 546852; 633938; 544619; 544618; 453094; 451275; 451274; 407610; 407609; 404371; 409328; 299551; 299550; 264742; 261407; 255657; 250902; 250525; 1613674; 1613673; 1613672; 1613671; 1613670; 1613304; 1613303; 1613302; 1613240; 1613239; 1613238; 1612181; 1612180; 1612179; 1612178; 1612177; 1612176; 1612175; 1612174; 1612173; 1612172; 1612171; 1612170; 1612169; 1612168; 1612167; 1612166; 1612165; 1612164; 1612163; 1612162; 1612161; 1612160; 1612159; 1612158; 1612157; 1612156; 1612155; 1612154; 1612153; 1612152; 1612151; 1612150; 1612149; 1612148; 1612147; 1612146; 1612145; 1612144; 1612143; 1612142; 1612141; 1612140; 1612139; 1093120; 447712; 447711; 447710; 1587177; 158542; 1582223; 1582222; 1531531 ; 1580792 ; 886215; 1545317; 1545315; 1545313; 1545311; 1545831; 1545887; 1545885; 1545883; 1545881; 1545879; 1545877; 1545875; 166486 ; 1498496 ; 1460058; 972513; 1009442 ; 1009440 ; 1009438 ; 1009436 ; 1009434 ; 7413 ; 1421808 ; 551228; 452606 ; 32905; 1377859 ; 1364213; 1364212; 395407; 22690 ; 22688 ; 22686; 22684 ; 488605 ; 17680 ; 1052817 ; 1008445 ; 1008443 ; 992612; 706811 ; 886683; 747852 ; 939932 ; 19003 ; 1247377 ; 1247375; 1247373; 862307 ; 312284 ; 999462; 999460 ; 999458 ; 587450 ; 763064 ; 886209 ; 1176397 ; 1173557 ; 902012; 997915; 997914; 997913; 997912; 997911; 997910; 99790; 997908; 997907; 997906; 997905; 997904; 997903; 997902; 997901; 997900; 997319; 997318; 997317; 997316; 997315; 997314; 997313; 997312; 910984; 910983; 910982; 910981; 511604 ; 169631 ; 169629 ; 169627 ; 168316 ; 168314 ; 607633 ; 555616; 293902 ; 485371 ; 455288 ; 166447 ; 166445 ; 166443 ; 166435 ; 162551 ; 160780; 552080 ; 156719 ; 156715 ; 515957 ; 515956 ; 515955 ; 515954 ; 515953 ; 459163; 166953 ; 386678 ; 169865.

특히 바람직한 알레르겐/항원은 다음을 포함한다: 고양이 비듬 단백질 Fel d1; 돼지풀 단백질 Der P1, Der P2 및 Der P7; 호그위드 단백질 amb a 1.1, a 1.2, a 1.3 또는 a 1.4; 독보리 단백질 1o1 p1 및 1o1 p5; 큰조아재비 단백질 ph1 p1 및 ph1 p5; 버뮤다 잔디 단백질 Cyn d5; 알터나리아 알터네이트 단백질 Alt a 1, Alt a 2 및 에놀라아제(Enolase) (Alt a 6); 자작나무 단백질 Bet v1 및 P14; 독일 바퀴벌레 단백질 Bla g 1, Bla g 2, Bla g 3, Bla g 4, Bla g 5 및 Bla g 6; 산쑥 단백질 Art v 1; 러시아 엉겅퀴 단백질 Sal k 1 및 Sal k 2; 땅콩 Ara h1, Ara h2, Ara h3, Ara h4, Ara h5, Ara h6, 식물 프로필린(profilin) 또는 지질 운반 단백질 또는 인간 백혈구 항원.

전달 방법

본 발명의 조성물은 일단 배합되면 각종 공지 경로 및 방법을 이용하여 생체내 피험자에게 전달될 수 있다. 예컨대, 조성물은 주사가능한 용액, 현탁액 또는 에멀젼으로 제공될 수 있고, 통상적인 바늘 및 주사기를 이용하거나 또는 액체 분출(jet) 주사 시스템을 이용하여 비경구, 피하, 피부, 피내, 피부내, 근육내, 대동맥내, 복강내, 정맥내 주사를 통해 투여될 수 있다. 조성물은 또한 비강내, 기관삽관(intratracheally), 장관, 직장 또는 질과 같은 피부 또는 점막 조직에 국소 투여될 수 있거나 또는 호흡기 또는 폐 투여에 적합한 미분된 스프레이로 제공될 수 있다. 다른 투여 방식은 경구 투여, 좌제, 설하 투여, 및 적극적 또는 수동적 경피 전달 방법을 포함한다.

본 발명의 펩타이드가 투여되는 경우, 적합한 항원 제공 세포와 접촉할 수 있고 개체의 T 세포와 접촉할 기회가 있는 체내 부위로 펩타이드를 투여하는 것이 바람직하다. APC가 투여되는 경우, 개체의 적합한 T 세포와 접촉하여 활성화시킬 수 있는 체내 부위에 APC를 투여하는 것이 바람직하다.

전달 체계

펩타이드/폴리뉴클레오타이드/세포(예: 복수개의 펩타이드를 함유하는 조성물)의 투여는 전술한 바와 같은 임의의 적합한 방법에 의할 수 있다. 펩타이드의 적정량은 실험에 의해 결정될 수 있으나, 전형적으로는 하기 범위이다. 각 펩타이드의 일회 투여는 환자에게 유익한 효과를 주기에 충분할 수 있으나, 펩타이드가 일회보다 많이 투여되는 경우에 유익할 수 있음을 이해하여야 하며, 이 경우에 전형적인 투여 체계는 예컨대, 6개월 단위로 2 내지 4주동안 일주일에 1회 또는 2회, 또는 4 내지 6개월 단위로 1주일동안 1일 1회일 수 있다. 각 펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드, 또는 펩타이드 및/또는 폴리뉴클레오타이드의 복합물이 환자에게 단독으로 또는 조합되어 투여될 수 있음을 이해한다.

투여를 위한 투약량은 조성물의 특성, 투여 경로, 투여 체계의 스케줄 및 타이밍을 비롯한 여러 요인에 좌우된다. 본 발명의 분자의 적합한 투약량은 투여 1회당 15μg 이하, 20μg 이하, 25μg 이하, 30μg 이하, 50μg 이하, 100μg 이하, 500μg 이하 또는 그 이상일 수 있다. 적합한 투약량은 15μg 미만일 수 있으나, 적어도 1ng, 또는 적어도 2ng, 또는 적어도 5ng, 또는 적어도 50ng, 또는 적어도 100ng, 또는 적어도 500ng, 또는 적어도 1μg 또는 적어도 10μg일 수 있다. 본 발명의 몇몇 분자의 경우에, 사용되는 투약량은 보다 높을 수 있으며, 예컨대 1mg 이하, 2mg 이하, 3mg 이하, 4mg 이하, 5mg 이하 또는 이보다 높을 수 있다. 이러한 투약량은 선택된 경로로 투여하기에 적절한 부피가 되도록 적합한 농도의 액체 배합물로 제공될 수 있다.

키트

본 발명은 또한 용기내의 키트 형태로 포장되어 있는 본 발명 치료에 사용하기에 적합한 본원에 기재된 구성성분의 조합물에 관한 것이다. 이러한 키트는 본 발명의 치료를 가능하게 하는 일련의 구성성분을 포함할 수 있다. 예컨대, 키트는 본 발명의 하나 이상의 상이한 펩타이드, 폴리뉴클레오타이드 및/또는 세포, 또는 본 발명의 하나 이상의 펩타이드, 폴리뉴클레오타이드 또는 세포 및 동시 투여 또는 순차 또는 별도 투여에 적합한 하나 이상의 부가적인 치료제를 포함할 수 있다. 상기 키트는 다른 적합한 시약(들) 또는 설명서 등을 선택적으로 함유할 수 있다.

본 발명은 하기 실시예에 의해 예시된다:

실시예 1

잠재적 T 세포 에피토프

하기에 기재된 Amb a 1의 영역은 하나 이상의 T 세포 에피토프를 잠재적으로 포함하는 것으로 확인되었다:

우선권 출원 GB 0815258.3호에서 G, I 및 J 영역에 제공된 서열은 하기와 같다: GEAAIKLTSSAGVLSCRP (G 영역), HGFFQVVNNNYDRGTYA (I 영역) 및 ETRRLTTSGAYN (J 영역). 이들 서열은 표 2에 보정되어서, 하기에 제공된 바와 같은 Amb a 1 아이소형 1.3 전체 길이로부터의 관련 영역에 해당한다.

이어서, 하기에 기재된 영역은 추가 분석되어서, 이들중 어느 부분이 하기에 기재된 바와 같은 4개의 상이한 Amb a 1 아이소형(1.1, 1.2, 1.3 및 1.4) 사이에서 고도로 보존되는지를 밝힌다. 하기 서열의 경우, 하기 텍스트 스타일이 당해 영역을 나타내기 위해 사용된다:

하기 펩타이드는 고도로 보존된 것으로 간주되며, 따라서 추가 시험을 위해 정방향으로 제공되었다.

펩타이드	당해 영역으로부터 유래	서열	SEQ ID NO:
RGW01	A	GMIKSNDGPPI	1
RGW01A	A	GLIKSHDGPPV	2
RGW01B	A	GLIKSNDGPAA	3
RGW02	B	GSSQIWIDHSSLSKS	4
RGW02A	B	GSSQIWIDHCSLSKS	5
RGW02B	B	GGSQIWIDHCSLSKA	6
RGW03	C	KDLLENGAIFVTSG	7
RGW03A	C	DVFENGAIFVPSG	8
RGW03B	C	RDLLENGAIFLPSG	9
RGW04	D	KAGMIPAEPGEA	10
RGW4A	D	SAGMIPAEPGEA	11
RGW05	E	KEGTLRFAAAQNRP	12
RGW05A	E	KEGTLRFGAAQNRP	13
RGW06	F	VVNSDKTIDGRGVKVE	14
RGW06A	F	AINNDKTIDGRGAKVE	15
RGW07	G	GEAAIKLTSSAGVLS	16
RGW07A	G	GEAVLRLTSSAGVLS	17
RGW07B	G	GESALSLTSSAGVLS	18
RGW07C	G	KGEAAIKLTSSAGVLSK	19
RGW07D	G	KGEAAIKLTSSAGVLSKK	20
RGW08	H	GSTHVTISNSKF	21
RGW08A	H	GSTHVTISNCKF	22
RGW08B	H	GSTHFTVSNCLF	23
RGW08C	H	GSTHFTVSNSLF	24
RGW08D	H	GTTRLTVSNSLF	25
RGW09	J	ETRRSLKTSGAYN	26
RGW10	I	FGFFQVVNNNYD	27
RGW10A	I	HGFFQVVNNNYD	28
RGW11	I	VNNNYDRWGTYA	29
RGW11A	I	VNNNYDKWGSYA	30
RGW11B	I	VNNNYERWGSYA	31

명백한 바와 같이, 상기 서열은 당해 영역의 고유 서열과 동일할 필요는 없다. 특히, 본 발명의 펩타이드는 용해도를 증가시키고/시키거나 이합체 형성을 감소시키고/시키거나 고유 서열에 대한 IgE 가교결합 경향을 감소시키도록 가공될 수 있다. 하기 표(표 4)는 표 3의 펩타이드(SEQ ID NO. 1 내지 31)을 생성하도록 본 발명자가 적용한 상기 원칙의 특정 예를 제공한다.

서열	동정 ⁿ	pI	GRAVY	비고
GMIKSNDGPPIL	A 영역	5.84	-0.083
GMIKSNDGPPI	RGW01 (SEQ ID NO:1)	5.84	-0.436	가공된 펩타이드는 보다 낮은 GRAVY 점수를 갖는다; 보다 높은 용해도
GSSQIWIDHCSLSKS	B 영역	6.73	-0.273
GSSQIWIDH S SLSKS	RGW02 (SEQ ID NO:4)	6.73	-0.493	가공된 펩타이드는 cys 대신에 ser을 갖고(이합체 형성을 피함) 보다 낮은 GRAVY 점수를 갖는다; 보다 높은 용해도
DKDLLENGAIFVTSGSDPVLTPVQ	C 영역
RDLLENGAIFLPSG	RGW03B (SEQ ID NO:9)			가공된 펩타이드는 유의하게 더 짧음; IgE 가교결합 을 통한 히스타민 방출 위험을 방지함
AIKLTSSAGVFSCHP	G 영역
GEAAIKLTSSAGVLS	RGW07 (SEQ ID NO:16)	6.00	0.69	가공된 펩타이드는 마지막 3개 잔기에 cys를 갖지 않고(이합체 형성을 방지) 1.1, 1.2 및 1.4에서 발생하는 F 대신에 L을 가짐

상기 표에서 회색 가로축은 한 영역의 고유 서열(native sequence)을 나타낸다. 본 발명에 따라 변형된 펩타이드가 각 고유 서열 아래에 나타나 있다. 밑줄친 진한색 잔기는 고유 서열에 부가된 부분 또는 치환된 부분을 나타낸다.

사이토카인 분석 및 바람직한 조합의 선택

50명 개체의 PBMC로부터의 사이토카인 분비 프로파일을 SEQ ID NO. 1 내지 31의 펩타이드를 사용하여 펩타이드 자극에 대한 반응에서 분석하였다. 복합 비드 어레이 분석을 이용하여 사이토카인 방출 분석으로부터의 상청액을 IL-13 및 IFN-감마의 존재에 대하여 시험하였다.

전형적인 사이토카인 방출 어레이는 피험자당 40 x 10⁶ PBMC를 필요로 한다. 보다 상세하게, 적절한 항원 또는 펩타이드 농도의 200μg/mL 용액 250μL을 48 웰 플레이트의 적절한 웰에 분배한다. 플레이트를 최대 4시간동안 37℃에서 5% CO₂ 가습 배양기에서 배양하였다. 이어서, 5 x 10⁶ 세포/mL PBMC 현탁액 250μL을 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 5일동안 배양기에 다시 넣었다. 자극 이후에, 기준 프로토콜에 따라 복합 비드 어레이에 의해 시험하기 위하여 배양 상청액 샘플을 수거하였다. 상기 데이터를 인터페론 감마 또는 IL-13>100pg/mL에 대한 반응을 갖는 피험자에 대하여 분석하고, 상기 펩타이드를 하기 표 5에 기재된 반응자%를 기준으로 우선순 기재하였다.

	>100pg/mL 반응자 수	반응자 %
RGW01	34	68
RGW01A	25	50
RGW03	25	50
RGW01B	24	48
RGW04	23	46
RGW03A	22	44
RGW03B	22	44
RGW10	21	42
RGW04A	20	40
RGW10A	20	40
RGW05	19	38
RGW02	18	36
RGW09	18	36
RGW06	17	34
RGW06A	17	34
RGW11A	17	34
RGW05A	16	32
RGW08B	10	20
RGW11B	10	20
RGW02B	9	18
RGW07A	9	18
RGW11	8	16
RGW08A	6	12
RGW08D	6	12
RGW02A	5	10
RGW07B	5	10
RGW08	4	8
RGW07	2	4
RGW08C	2	4

상기에 근거하여, 본 발명의 바람직한 조합은 하기를 함유하도록 선택된다:RGW01(RGW01A 또는 RGW01B로 치환가능함); 및 RGW03, RGW03A 또는 RGW03B중 하나; 및 RGW04 또는 RGW04A중 하나.

나머지 펩타이드로부터, 그 다음 가장 가능한 것은 RGW02, RGW09, RGW06, RGW06A, RGW10 또는 RGW10A, RGW05 또는 RGW05A이다. 바람직한 펩타이드 조합은 전형적으로 상기 군으로부터 선택된 하나 이상의 부가적인 펩타이드를 포함할 수 있다.

용해도는 환자에게 투여될 펩타이드에 대한 핵심 기준이므로, 추가적인 시험관내 용해도 시험을 실시하여서 산성 환경(pH 2.97 0.1mM HCl, 0.5% (w/v), 1-티오글리세롤(약 46mM), 230mM 트레할로오즈)에서 펩타이드 용해도를 측정하였다. 예컨대, RGW03B는 RGW03의 <0.62mg/mL에 비해 3.85mg/mL 용해도롤 갖는 것으로 밝혀졌다. 따라서, 본 발명자들은 RGW03B가 RGW03보다 바람직하다고 결론내렸다.

도 1은 RGW01, RGW03B 및 RGW04A의 코어 혼합물에 반응하는 개체 인원수를 나타낸다. 코어 혼합물에서 대표되는 펩타이드에 대한 양성 IFN감마 또는 IL-13 반응의 복합 분석에 따르면, 상기 3가지 펩타이드는 38/50 돼지풀 알레르기 개체(연구 개체군의 76%)를 커버할 수 있다. 이는, 코어 혼합물의 펩타이드가 대부분의 MHC 클래스 II DR 분자에 결합하고, 이들 복합물이 알레르기 개체의 대부분에 있는 T 세포에 의해 인식됨을 나타낸다. RGW02, RGW05 및 RGW06A을 부가한 점증적인 효과가 또한 도시되어 있다. 제2 펩타이드 군으로부터의 에피토프를 부가하는 효과가 명확히 나타나 있다.

추가적인 사이토카인 분석을 실시하여서, SEQ ID NO. 1 내지 31의 펩타이드에 의해 유도되는, 동일한 개체 패널로부터의 IL-10 방출을 측정하였다. IL-10 반응 분석에 따르면, RGW07 및 RGW07B는 상당량의 IL-10을 유도한다(도 2). RGW07 그 자체는 49/50 개체에서 IL-10을 유도한다. 따라서, 바람직한 펩타이드 조합은 RGW07 군으로부터 선택된 하나 이상의 부가적인 펩타이드를 전형적으로 포함할 수 있다. RGW07와 함께 도 1에서 동정된 6개 펩타이드의 혼합물(RGW01 + RGW03B + RGW04A + RGW02 + RGW05 + RGW06A)로 대표되는 펩타이드에 대한 양성 IFN감마 또는 IL-13 반응의 복합 분석은 49/50 피험자에서 양성 IFN감마 또는 IL-13 반응을 나타내었다. 따라서, 상기 펩타이드 조합은 전체 연구 개체군을 효과적으로 커버하였고, 완전한 커버는 개선된 RGW07 용해도 변이체 사용시에 예상될 것이다(하기 참조). RGW07 또는 그의 변이체와 함께 RGW01 + RGW03B + RGW04A + RGW02 + RGW05 + RGW06A를 포함하는 펩타이드 조합물은 양성 IL-10 반응을 제공하는 이점을 갖는다(하기 및 도 3 참조).

용해도 시험에 따르면, RGW07는 산성 환경에서 불충분한(poor) 용해도를 갖고, 따라서 부가적인 라이신 잔기를 RGW07에 첨가하였다(표 6에 나타남). 변형된 펩타이드를 도 1에 도시된 펩타이드 혼합물(RGW01 + RGW03B + RGW04A + RGW02 + RGW05 + RGW06A)의 존재하에 용해도 및 PBMC로부터 IL-10 유도능에 대하여 시험하였다. 대조군은, RGW07 변이체를 함유하지 않으며 전체 Amb a 1 알레르겐을 갖는 펩타이드 혼합물을 포함하였다. 그 결과를 하기 표 6에 나타내었다.

RGW07 및 변이체의 용해도

펩타이드	서열	Amb a 1의 잔기	등전점(pI)	GRAVY	용해도 mg/mL
RGW07	GEAAIKLTSSAGVLS	376-390	6.00	0.69	0.7
RGW07C	KGEAAIKLTSSAGVLSK	K376-390K	9.70	0.15	1.55
RGW07D	KGEAAIKLTSSAGVLSKK	K376-390KK	10.00	-0.07	4.26

상기 분석에 근거할 때, RGW07D는 다른 6개 펩타이드의 존재하에 IL-10 유도능 및 용해도 둘다에 있어서 바람직한 것으로 밝혀졌다.

실시예 2 - 히스타민 방출 분석

본 분석의 목적은 혈액 호염기성세포를 활성화시켜서(조직 비만세포의 경우에는 대용물(surrogate)) 치료동안에 알르레기 반응을 일으킬 수 있는 히스타민 방출을 초래하는 개체 펩타이드를 확인하는 것이었다. 히스타민 방출을 빈번하게 유도하는 펩타이드 또는 펩타이드 조합은 펩타이드 백신에 포함시키기에는 부적합한 것으로 간주될 수 있다.

히스타민 방출은 호염기성세포 표면에 인접 특이적인 IgE 분자의 가교결합을 필요로 한다. 평가되는 펩타이드는 작으므로(11 내지 18개 아미노산 길이), 전체 분자의 IgE-결합 에피토프 배치형태를 유지하도록 하는 유의한 3차원 구조를 갖지 않아야 한다. 또한, 용액 중의 펩타이드 모노머는 IgE에 결합되어 있더라도 인접 IgE 분자를 가교결합할 수 없어야 한다.

돼지풀 알레르기 피험자의 신선한 말초 전혈에서의 히스타민 방출을 평가하였다. 말초 혈액 호염기성세포를 분석에 사용할 수 없는 조직 비만 세포의 대용물로 사용하였다. 혈액을 실시예 1에서 확인된 개체 펩타이드(RGW01, RGW02, RGW03B, RGW04A, RGW05, RGW06A, RGW07 및 RGW07D)와 함께 시험관내에서 배양하였다. 추가적으로, 실시예 1에서 확인된 바람직한 7개 펩타이드 혼합물에 대한 반응을 분석하였다. 시험한 바람직한 7개 펩타이드 혼합물은 i) RGW01, RGW02, RGW03B, RGW04A, RGW05, RGW06A, RGW07 및 ii) RGW01, RGW02, RGW03B, RGW04A, RGW05, RGW06A 및 RGW07D로 이루어졌다.

전체 돼지풀 알레르겐 추출물에 반응한 히스타민 방출을 각 피험자에서 측정하여서, 호염기성세포 민감도를 확인하였다. 상기 세포를 2회 동결/해동하여서 발생한, 전체 히스타민 방출을 나타내는 양성 대조군을 각 어세이에 포함시켰다. 자발적인 히스타민 방출에 대한 음성 대조군은 완충액만에서 세포를 배양함으로써 발생시켰다.

제조업체 설명서에 따라 Immunotech Histamine Release Immunoassay kit를 사용하여 분석을 실시하였다. 미세적정 플레이트 웰에 있는 펩타이드, 펩타이드 믹스, 전체 알레르겐 또는 완충액에 의한 혈액 호염기성세포의 시험관내 투여 이후에, 상청액을 제거하고, 샘플중 히스타민이 아실 히스타민으로 전환되었다. 아실화된 샘플을 경쟁적 아실 히스타민 ELISA에 의해 시험하였다.

5log10 범위를 넘는 히스타민 방출(1 내지 10,000ng/mL) 유도능에 대하여 펩타이드를 분석하였다. 분석된 농도 범위는 치료동안에 이루어질 수 있는 이론에 의한 생체내 펩타이드 투약량에 근거하여 선택하였다. 예컨대, 5리터 혈액부피에 유입되는 각 펩타이드 31μg 투약량(약 3nmol/펩타이드 당량)은 히스타민 방출 분석 투약량 범위의 하한치에서 6ng/mL의 혈액 농도를 발생시킬 것이다. 전체 돼지풀 알레르겐 추출물은 약간 더 높은 농도 범위(10 내지 100,000ng/mL)에 걸쳐 사용되었다.

각 희석액에 대하여 단일 측정을 실시하였다. ELISA를 완료한 후에, ELISA 분석에서 발생한 기준 곡선으로부터 보간법(interpolation)에 의해 개체 히스타민 농도를 결정하였다. 샘플 결과를 희석에 대하여 조정하였다. 펩타이드/알레르겐 제제의 2회 이상의 연속 희석은 동결 해동된 양성 대조군에서 발견된 전체 히스타민 방출의 >15%를 도출하거나(양성대조군의 >15%) 또는 양성 대조군의 >15% 단일 수치가 시험된 최고 농도에서 이루어지는 경우(펩타이드의 경우 10μg/mL), 이를 “양성 히스타민 방출”로 간주하였다.

49개 히스타민 방출 분석 전부는 연구동안에 완료되었다. 이들 중에서 6개의 분석은 배지에서의 자발적 방출의 허용불가능한 높은 농도(> 15% 양성 대조군) 및 완충 음성 대조군 웰로 인해 거부되었다. 그러므로, 총 43명 피험자가 분석에 포함되었다. 이들 피험자 중 20명은 RGW07D 펩타이드 및 이를 함유하는 믹스로 시험하였다. 연구 결과를 하기 표 7에 요약하였다.

펩타이드 또는 조합	양성대조군 >15% 히스타민 방출을 갖는 피험자	10μg/mL에서 양성 대조군 백분율로서 43 또는 20명 피험자의 히스타민 방출 중간값	히스타민 방출 최대값(10μg/mL에서 양성대조군 백분율)
1) RGW01	0/43	1%	0%
2) RGW03B	0/43	1%	0%
3) RGW04A	0/43	0%	0%
4) RGW05	0/43	0%	0%
5) RGW02	0/43	1%	0%
6) RGW06A	0/43	1%	0%
7) RGW07	0/43	1%	0%
8) 조합 중 펩타이드 1-6 및 RGW07	0/43	1%	0%
9) RGW07D	0/20	3%	0%
10) 조합 중 펩타이드 1-6 및 RGW07D	2/20^*	5%	20%
돼지풀 알레르겐 대조군	28/43	25%	78%
* 조합에서 펩타이드 1-6 및 RGW07D은 10μg/mL에서만 2명 피험자에서 >15%이었다.

분석에서 시험된 펩타이드의 가장 높은 투약량(10μg/mL)에 대하여 결과를 나타내었다. 돼지풀 알레르겐 대조군은 43명 피험자중 65%에서 유의한 히스타민 방출이 유도되었다. 10ng/mL의 가장 낮은 농도에서도 전체 알레르겐 추출물은 개체의 22/43(51%)에서 유의한 히스타민 방출을 유도하였으며, 43명 피험자에서는 양성 대조군의 30%의 방출 중간값을 가졌다. 조질(crude)의 전체 돼지풀 추출물은 주요 알레르겐 Amb a 1 약 0.5%를 함유하며, 이는 10ng/mL의 조질 추출물에서 Amb a 1보다 >10,000배 넘게 존재하는 10ng/mL 펩타이드의 안전도를 측정하는 시험관내 호염기성세포 분석의 예민한 민감도를 강조한다.

상기 데이터는 8명의 개체 펩타이드가 전체 알레르겐에 비해 돼지풀 알레르기 개체의 호염기성 세포로부터 유의한 히스타민 방출을 유도하지 않음을 나타낸다. 펩타이드 RGW01, RGW02, RGW03B, RGW04A, RGW05, RGW06A 및 RGW07D의 조합은 43명피험자에서 유의한 히스타민 방출을 유도하지 못하였다. 펩타이드 RGW01, RGW02, RGW03B, RGW04A, RGW05, RGW06A 및 RGW07D의 조합은 10μg/mL의 가장 높은 펩타이드 농도에서 양성 대조군의 16% 및 20% 수치를 갖는 2명 개체에서 약한 양성 반응을 제공하였다. 시험한 4명의 보다 낮은 농도에서의 방출% 수치는 <15%, 즉, 음성이었다. 임상적인 투약 이후에 펩타이드의 가능한 혈액 농도에 비해 상기 분석에서 시험한 펩타이드 많은 과량이 제공되는 경우, 시험한 최고 농도는 예상된 혈액 농도보다 >1000배 과량을 나타낸다. 이러한 펩타이드 조합은 IgE-매개된 또는 직접 펩타이드-매개된 호염기성세포 또는 비만세포 활성화 및 탈과립에 의해 유의한 히스타민 방출을 유발할 것으로 예상되지는 않는다.

실시예 3: 펩타이드 조합의 임상 시험

펩타이드 RGW01, RGW02, RGW03B, RGW04A, RGW05, RGW06A 및 RGW07D로 이루어진 7개 펩타이드의 바람직한 혼합물을 무작위, 위약-제어된 맹검 임상 시험으로 시험하였다. 상기 혼합물이 알레르기 징후를 감소시키는 효능을 평가하였다. 임상 시험의 연구 디자인은 우수한 임상 실습 지침에 따른다.

돼지풀 알레르겐을 투입한 후에 후기상 피부 반응(LPSR) 및 결막염 유발 시험(CPT) 점수를 확인하기 위하여 돼지풀 알레르기 피험자를 스크리닝하였다. LPSR 및 CPT 분석의 세부내용은 하기와 같다. 적절한 LPSR 및 CPT 점수 발생을 위한 전체 알레르겐의 최소 유효 농도를 확인하기 위하여 적정을 실시하였다. 돼지풀 특이 IgE의 농도를 평가하기 위하여 혈액 샘플을 취하였다.

모든 피험자에 있어서 돼지풀 알레르겐에 대한 피부 및 결막염 반응 기준치는 연구 약물 투여 이전에 1 내지 4주간 발생한 Baseline Challenge를 이용하여 설정하였다. 스크리닝에서 확인된 최소 유효 농도로 돼지풀 알레르겐의 피부내 주사를 선택 팔뚝의 손바닥 면에 투여하였다. 피험자들을 평가하여서, 전체 돼지풀 알레르기에 대한 초기상 피부 반응(EPSR), CPT 및 후기상 피부 반응(LPSR)을 겪는 것을 확실히 하고, 기준 반응 수치를 하기와 같이 기록하였다:

주사 15분(± 3분) 후에, 임의의 EPSR 외곽선을 볼펜으로 피부에 그렸다. 각 반응에 대하여 최장 및 직각(orthogonal) 직경을 측정하여 기록하고, 각 팔에 있는 반응 면적을 계산하였다.

주사후 최소 30분 후에, 스크리닝에서 확인된 최소 유효 농도로 돼지풀 알레르겐을 선택 눈에 주입하였다. 5분(± 2분) 후에, 피험자가 등급매긴 가려움증 및 관찰자가 등급매긴 발적 및 눈곱을 점수매겼다. 점수 시스템은 하기 표 8에 나타내었다.

각 주사 8시간(± 10분) 후에, 임의의 후기상 반응의 외곽선을 볼펜으로 피부에 그렸다. 각 반응에 대하여 최장 및 직각 직경을 측정하고 기록하였으며, 각 팔의 반응 면적을 계산하였다.

적합한 기준 반응을 나타내는 피험자를 투약량 군으로 정하고, 무작위 추출하고, 처리 상으로 넣었다.

징후	점수
결막염 적색도 (관찰자가 등급매김)	0 = 없음 1 = 경증 (인지가능한 정도) 2 = 중간 (현저한 적색도) 3 = 중증 (강하게 성난 적색도)
눈곱 (관찰자가 등급매김)	0 = 없음 1 = 경증 (인지가능한 정도) 2 = 중간 (때때로 눈물흘림) 3 = 중증 (눈물이 뺨을 타고 흘러내림)
가려움증 (자가 평가)	0 = 없음 1 = 경증 (때때로 저린 감각) 2 = 중간 (현저히 가렵지만 눈비빌 필요는 없음) 3 = 중증 (가려워서 눈을 비벼야 함) 4 = 참을 수 없음 (참을 수 없이 가려워서 눈비비려는 욕망을 참을 수 없음)

처리 단계는 각 피험자에 대하여 6주 기간으로 이루어진다. 이 기간동안에, 피험자 1군은 1일째의 Treatment Phase Visit 1에서 바람직한 혼합물(투약 1회당 각 펩타이드 0.03, 0.3, 3, 1, 12nmol) 또는 묽은 위약(diluent placebo)의 피부내 주사를 일회 맞았다. 피부내 주사는 선택 팔뚝의 굴근(flexor) 면에 실시되었다. 이어서, 반복 투여가 각각 2주 간격으로 Treatment Phase Visits 2, 3 및 4에서 실시되었다(14±2일). 10명 피험자중 코호트(cohort)는 각 투약량 농도에서 치료를 받았다(8명은 바람직한 혼합물을 받았고, 2명은 위약을 받았다). 첫 번째 코호트는 혼합물중 각 펩타이드 0.03nmol을 받았고, 군의 각각의 후속 코호트는 그 다음으로 높은 투약량 농도를 받았다.

치료 개시후 19 내지 28주후에 치료후 투입(PTC: post-treatment h challenge)에서 전체 알레르겐에 대한 피부 및 결막염 반응을 피험자 대상으재시험하였다. 돼지풀 알레르겐에 대한 피부 반응을 전술한 바와 같은 EPSR 및 LPSR을 측정하여 평가하였다. 평균 반응 면적을 전술한 바와 같이 계산하였다. 돼지풀 알레르겐에 대한 결막염 반응을 전술한 바와 같은 CPT 측정에 의해 평가하였다. 돼지풀 특이 IgE 측정을 위해 혈액 샘플을 채취하였다.

치료 이후의 평균 EPSR 면적을 각 피험자의 기준 EPSR 면적과 비교하였다. 이어서, 각 코호트의 모든 10명 환자의 EPSR 면적의 전체 변화를 평가하였다. 치료 이후의 평균 LPSR 면적을 각 피험자의 기준 LPSR 면적과 비교하였다. 이어서, 각 코호트의 10명 환자 전체에 대한 LPSR 면적의 전체 변화를 평가하였다. 치료 이후의 CPT 점수를 각 피험자의 기준 CPT 점수와 비교하였다. 이어서, 각 코호트의 10명 환자 전체에 대한 CPT 점수의 전체 변화를 평가하였다.

본 발명의 추가 양태

I. 3개 이상의 폴리펩타이드를 포함하며, 상기 폴리펩타이드가 임의의 하기로부터 독립적으로 선택되고, 상기 서열이 (i)의 임의의 서열에 대해 개체를 자기내성화할 수 있고 9개 이상의 아미노산 길이를 가지며 상기 동족체가 (i)의 임의의 서열에 있는 임의의 9개 인접 아미노산에 대하여 적어도 65% 상동성을 갖는, 자기내성에 의해 돼지풀 알레르기를 예방 또는 치료하는데 사용하기 위한 조성물:

(i) SEQ IN NO 1 내지 31의 임의의 폴리펩타이드; 또는

(ii) 상기 (i)에 따른 폴리펩타이드의 변이체로서, 상기 변이체가 (i)의 임의의 서열 또는 (i)의 임의의 서열에 대해 개체를 자기내성화할 수 있는 (i)의 임의의 서열에 대해 65% 이상의 상동성을 갖는 서열로 이루어진 영역을 포함하는 9 내지 30개 아미노산 길이의 폴리펩타이드; 또는

(iii) (i)에 따른 폴리펩타이드의 변이체로서, 상기 변이체는 (i)의 임의의 서열의 단편 또는 (i)의 임의의 서열의 단편의 동족체를 대표하는 서열로 이루어진 영역을 포함하는 9 내지 30개 아미노산 길이의 폴리펩타이드이다.

II. I항에 있어서, 하기와 같은 조성물:

a) 개체군에 있는 돼지풀 알레르기 개체 패널의 적어도 50% 또는 적어도 60%를 자기내성화할 수 있고;

b) I(i) 항으로부터 선택된 적어도 3개의 폴리펩타이드 또는 I(ii) 또는 I(iii) 항에 정의된 바와 같은 변이체를 포함하고/하거나;

c) 적어도 하나의 추가적인 폴리펩타이드를 최대 13개까지 독특한/상이한 폴리펩타이드로 포함하고, 상기 추가적인 폴리펩타이드는 상기 (a)에서 선택되지 않은 임의의 SEQ ID NO. 1 내지 31의 적어도 9개 또는 그 이상의 인접 아미노산과 적어도 65% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하고, 9 내지 30개 아미노산 길이를 가지며/갖거나;

d) 최대 13개의 폴리펩타이드를 포함한다.

III. I 또는 II 항에 있어서, 아미노산 길이가 9 내지 20개 또는 13 내지 17개이고/이거나 상기 폴리펩타이드가 임의의 SEQ ID NO. 1 내지 31의 적어도 9개 또는 그 이상의 인접 아미노산과 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 II(c) 항에 따른 폴리펩타이드 하나 이상을 포함하는 조성물.

IV. 전술한 어느 한 항에 있어서, RGW01, RGW01A 또는 RGW01B 폴리펩타이드 (SEQ ID NO: 1, 2 또는 3) 또는 I(ii) 또는 (iii)항에 정의된 바와 같은 변이체로부터 선택된 적어도 하나의 폴리펩타이드를 포함하는 조성물.

V. IV 항에 있어서, 하나 이상의 폴리펩타이드가 폴리펩타이드 RGW01 또는 그의 변이체인 조성물.

VI. IV 또는 V 항에 있어서, RGW03B, RGW03A 또는 RGW03 폴리펩타이드 (SEQ ID NO: 9, 8 또는 7) 또는 I(ii) 또는 (iii)항에 정의된 바와 같은 변이체로부터 선택된 적어도 하나의 폴리펩타이드를 포함하는 조성물.

VII. VI 항에 있어서, 적어도 하나의 폴리펩타이드가 폴리펩타이드 RGW03B 또는 그의 변이체인 조성물.

VIII. IV 또는 VII중 어느 한 항에 있어서, RGW04 또는 RGW04A 폴리펩타이드 (SEQ ID NO: 10 또는 11) 또는 I(ii) 또는 (iii)항에 정의된 바와 같은 변이체로부터 선택된 적어도 하나의 폴리펩타이드를 포함하는 조성물.

IX. IV 내지 VIII 항중 어느 한 항에 있어서, RGW02, RGW09, RGW06, RGW06A, RGW10 또는 RGW10A, RGW05 또는 RGW05A 폴리펩타이드 (SEQ ID NO: 4, 26, 14, 15, 27, 12 또는 13) 또는 I(ii) 또는 (iii) 항에 정의된 바와 같은 변이체로부터 선택된 적어도 하나의 폴리펩타이드를 포함하는 조성물.

X. IV 내지 IX항중 어느 한 항에 있어서, RGW07, RGW07C 또는 RGW07D 폴리펩타이드 (SEQ ID NO: 16, 19 또는 20) 또는 I(ii) 또는 (iii) 항에 정의된 바와 같은 변이체로부터 선택된 적어도 하나의 폴리펩타이드를 포함하는 조성물.

XI. X 항에 있어서, 적어도 하나의 폴리펩타이드가 RGW07D (SEQ ID NO:20)인조성물.

XII. 전술한 항중 어느 한 항에 있어서, 하기로 이루어진 조성물:

a) RGW01, RGW01A 또는 RGW01B 폴리펩타이드 (SEQ ID NO: 1, 2 또는 3) 또는 I(ii) 또는 (iii) 항에 정의된 바와 같은 변이체 하나 이상; 및

b) RGW03B, RGW03A 또는 RGW03 폴리펩타이드 (SEQ ID NO: 9, 8 또는 7) 또는 I(ii) 또는 (iii) 항에 정의된 바와 같은 변이체 하나 이상; 및

c) RGW04 또는 RGW04A 폴리펩타이드 (SEQ ID NO: 10 또는 11) 또는 I(ii) 또는 (iii) 항에 정의된 바와 같은 변이체 하나 이상; 및 선택적으로는

d) RGW02, RGW09, RGW06, RGW06A, RGW10 또는 RGW10A, RGW05 또는 RGW05A 폴리펩타이드 (SEQ ID NO: 4, 26, 14, 15, 27, 12 또는 13) 또는 I(ii) 또는 (iii) 항에 정의된 바와 같은 변이체 하나 이상; 및 선택적으로는

e) RGW07, RGW07C 또는 RGW07D 폴리펩타이드 (SEQ ID NO: 16, 19 또는 20) 또는 I(ii) 또는 (iii) 항에 정의된 바와 같은 변이체 하나 이상.

XIII. 전술한 항중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 폴리펩타이드가 하기로부터 선택된 하나 이상의 변형을 갖는 조성물:

(i) N 말단 아세틸화;

(ii) C 말단 아미드화;

(iii) 아르기닌 및/또는 라이신 측쇄 아민 상의 하나 이상의 수소가 메틸렌 기로 대체;

(iv) 글리코실화; 및

(v) 인산화.

XIV. 전술한 항중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 펩타이드가 하기를 포함하여 가용성이도록 가공되고, 폴리펩타이드는 적어도 3.5mg/mL의 용해도를 갖고, T 세포 에피토프는 3.5mg/mL 미만의 용해도를 갖는 조성물:

i) T 세포 에피토프를 측면에 갖는 펩타이드 잔기에 대한 N 말단: 상기 펩타이드가 유래된 단백질 서열의 상기 잔기에 대한 N 말단 직후에 2 내지 6개 인접 아미노산에 상응하는 1 내지 6개 인접 아미노산; 및/또는

ii) T 세포 에피토프를 측면에 갖는 펩타이드 잔기에 대한 C 말단: 상기 펩타이드가 유래된 단백질 서열의 상기 잔기에 대한 C 말단 직후에 1 내지 6개 연속 아미노산에 상응하는 1 내지 6개 인접 아미노산; 또는

iii) T 세포 에피토프를 측면으로 갖는 펩타이드 잔기에 대한 N 및/또는 C 말단, 아르기닌, 라이신, 히스티딘, 글루타메이트 및 아스파테이트로부터 선택된 하나 이상의 아미노산.

XV. 전술한 항중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 펩타이드가 용해성이도록 가공되어서, 부가적으로는,

i) 펩타이드 고유 서열에 있는 임의의 시스테인 잔기가 세린 또는 2-아미노부티르산으로 교체되고/되거나;

ii) T 세포 에피토프에 포함되지 않은, 펩타이드 고유 서열의 N 및/또는 C 말단에 있는 최대 3개의 아미노산의 임의의 소수성 잔기가 결실되고/되거나;

iii) T 세포 에피토프에 포함되지 않은, 펩타이드 고유 서열의 N 및/또는 C 말단에 있는 최대 4개의 아미노산에 Asp-Gly 서열을 포함하는 임의의 2개 연속 아미노산이 결실된다.

XVI. 전술한 항중 어느 한 항에 있어서, 각각의 폴리펩타이드가 0.03 내지 200nmol/mL, 0.3 내지 200nmol/mL 또는 30 내지 120nmol/mL 범위의 농도를 갖는 조성물.

XVII. 발현시에 I 내지 XVI항중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 조성물의 생성을 야기하는 적어도 3개의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 자기내성에 의해 돼지풀 알레르기를 예방 또는 치료하는데 사용하기 위한 조성물.

XVIII. XVII 항에 있어서, 상이한 폴리펩타이드를 발현할 수 있는 각각의 폴리뉴클레오타이드 서열이 동일하거나 상이한 폴리뉴클레오타이드 벡터에 존재하는 조성물.

XIX. I 항에 정의된 바와 같은 상이한 폴리펩타이드를 각각 코딩하는 적어도 3개의 폴리뉴클레오타이드 서열 및 선택적으로는, II 항에 정의된 바와 같은 상이한 폴리펩타이드를 코딩하는 하나 이상의 추가적인 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 자기내성에 의해 돼지풀 알레르기를 예방 또는 치료하는데 사용하기 위한 벡터.

XX. I 또는 II 항에 정의된 바와 같은 상이한 폴리펩타이드를 각각 코딩하는 3 내지 13개의 상이한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하고, 여기서 적어도 하나의 폴리뉴클레오타이드는 하기 폴리펩타이드 군 각각으로부터 선택된 폴리펩타이드를 코딩하는 것인, 자기내성에 의해 돼지풀 알레르기를 예방 또는 치료하는데 사용되는 벡터:

a) RGW01, RGW01A 또는 RGW01B (SEQ ID NO: 1, 2 또는 3);

b) RGW03B, RGW03A 또는 RGW03 (SEQ ID NO: 9, 8 또는 7); 및

c) RGW04 또는 RGW04A (SEQ ID NO: 10 또는 11).

XXI. 3 내지 13개의 폴리펩타이드를 함유하고, 하나 이상의 폴리펩타이드가 하기 폴리펩타이드 군 각각으로부터 선택되며, 각각의 상이한 폴리펩타이드는 자기 내성에 의해 돼지풀 알레르기를 예방 또는 치료하는데 있어서 동시, 별도 또는 순차 사용되는 생성물:

a) RGW01, RGW01A 또는 RGW01B (SEQ ID NO: 1, 2 또는 3) 또는 I(ii) 또는 (iii) 항에 정의된 바와 같은 변이체;

b) RGW03B, RGW03A 또는 RGW03 (SEQ ID NO: 9, 8 또는 7) 또는 I(ii) 또는 (iii) 항에 정의된 바와 같은 변이체; 및

c) RGW04 또는 RGW04A (SEQ ID NO: 10 또는 11) 또는 I(ii) 또는 (iii) 항에 정의된 바와 같은 변이체.

XXII. 3 내지 13개 폴리뉴클레오타이드 서열을 함유하고, 각각이 I 또는 II항에 정의된 바와 같은 상이한 폴리펩타이드를 코딩하며, 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드가 하기 폴리펩타이드 군 각각으로부터 선택된 폴리펩타이드를 코딩하고, 각각의 상이한 폴리펩타이드가 인간의 돼지풀 알레르기의 예방 또는 치료에 있어서 동시, 별도 또는 순차 사용되는 생성물:

a) RGW01, RGW01A 또는 RGW01B (SEQ ID NO: 1, 2 또는 3);

b) RGW03B, RGW03A 또는 RGW03 (SEQ ID NO: 9, 8 또는 7); 및

c) RGW04 또는 RGW04A (SEQ ID NO: 10 또는 11).

XXIII. I 내지 XVIII항중 어느 한 항에 따른 조성물; XIX 또는 XX항중 어느 한 항에 따른 벡터; 또는 XXI 또는 XXII항중 어느 한 항에 따른 생성물; 및 약학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함하는, 자기내성에 의해 돼지풀 알레르기를 예방 또는 치료하는데 있어서 사용하기 위한 약학 배합물.

XXIV, XXIII 항에 있어서, 경구 투여, 비강 투여, 피부(epicutaneous) 투여, 피하 투여, 설하 투여, 피부내 투여, 볼내 투여 또는 흡입이나 주사 투여용으로 배합되는 조성물, 벡터 또는 생성물.

XXV. 추가적인 폴리펩타이드 알레르겐에 대하여 개체를 자기내성화하는데 사용하기 위한 추가 폴리펩타이드 알레르겐을 추가로 포함하는, I 내지 XVIII항중 어느 한 항에 따라 정의된 조성물 또는 XXI 또는 XXII항중 어느 한 항에 정의된 생성물.

XXVI. T 세포를 폴리펩타이드와 접촉시키고 상기 T 세포가 상기 폴리펩타이드에 의해 자극되는지 여부를 검출하는 것을 포함하는, I 항에 정의된 바와 같은 폴리펩타이드를 T 세포가 인지하는지 여부를 결정하는 시험관내 방법.

XXVII. 개체가 I 내지 XVIII항중 어느 한 항에 정의된 조성물에 반응하는 T 세포를 갖는지 여부를 시험하고 상기 개체가 상기 증상을 갖거나 가질 위험이 있는지 여부를 결정하는 것을 포함하는, 돼지풀 알레르겐에 반응하여 알레르기 징후를 특징으로 하는 증상을 갖거나 가질 위험이 있는지 여부를 결정하는 시험관내 방법.

XXVIII. XXVII 항에 있어서, 상기 조성물에 대한 T-세포 면역 반응이 조성물 및 T-세포가 상호작용할 수 있는 조건하에 피험자로부터 채취된 샘플중 T-세포와 조성물을 접촉시키고, 임의의 T-세포가 자극받는지 여부를 결정하고, 그에 의해 T-세포 면역 반응의 존부를 결정하여서 측정되는 방법.

Claims

(i) RGW03B, RGW03A 또는 RGW03으로부터 선택된 본래 폴리펩타이드(original polypeptide)(SEQ ID NO:9, 8 또는 7) 또는 그의 변이체 하나 이상;
(ii) RGW01, RGW01A 또는 RGW01B로부터 선택된 본래 폴리펩타이드(SEQ ID NO: 1, 2 또는 3) 또는 그의 변이체 하나 이상;
(iii) RGW04 또는 RGW04A로부터 선택된 본래 폴리펩타이드(SEQ ID NO: 10 또는 11) 또는 그의 변이체 하나 이상; 및
(iv) 선택적으로는, SEQ ID NO. 4 내지 6 및 12 내지 31중 임의의 것으로부터 독립적으로 선택된 본래 폴리펩타이드 또는 그의 변이체 하나 이상을 포함하고,
상기 변이체가 (a) 상응하는(equivalent) 본래 펩타이드 서열 또는 그 서열에 대하여 개체를 자기내성화(tolerising)할 수 있으며 그 서열에 대해 65% 이상 상동성을 갖는 상동 서열로 이루어진 영역을 포함하는 9 내지 20개 아미노산 길이의 폴리펩타이드, 또는 (b) 상응하는 본래 펩타이드 서열 단편 또는 그의 상동체를 나타내는 서열로 이루어진 영역을 포함하는 9 내지 20개 아미노산 길이의 폴리펩타이드이고,
상기 서열은 상응하는 본래 펩타이드 서열에 대해 개체를 자기내성화할 수 있고 9개 이상의 아미노산 길이를 가지며 상기 상동체가 상응하는 본래 펩타이드 서열에 있는 임의의 9개 인접 아미노산에 대하여 65% 이상의 상동성을 갖는 것인
돼지풀(ragweed) 알레르기의 자기내성에 의한 치료 또는 예방용 조성물.
제 1항에 있어서,
a) 개체군의 돼지풀 알레르기 개체 패널의 50% 이상 또는 60% 이상을 자기내성화할 수 있고/있거나;
b) 1 내지 13개의 독특한/상이한 추가적인 폴리펩타이드를 포함하며, 상기 추가적인 폴리펩타이드가 상기 (i) 내지 (iv)에서 선택되지 않은 상기 임의의 SEQ ID NO 1 내지 31에 있는 9개 이상의 인접 아미노산과 65% 이상의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하고, 9 내지 30개 아미노산 길이를 가지며/가지거나;
c) 13개 이하의 폴리펩타이드를 포함하는 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서,
9 내지 20개 또는 13 내지 17개 아미노산 길이를 갖고/갖거나 상기 폴리펩타이드가 임의의 SEQ ID NO. 1 내지 31에 있는 9개 이상의 인접 아미노산과 70% 이상의 서열 동일성을 갖는 제2항(b)에 따른 하나 이상의 폴리펩타이드를 포함하는 조성물.
제1항 내지 제3항중 어느 한 항에 있어서,
폴리펩타이드 RGW01 또는 제1항(a) 또는 (b)에 정의된 바와 같은 그의 변이체;
폴리펩타이드 RGW03B 또는 제1항(a) 또는 (b)에 정의된 바와 같은 그의 변이체; 및
폴리펩타이드 RGW04A 또는 제1항(a) 또는 (b)에 정의된 바와 같은 그의 변이체를 포함하는 조성물.
제1항 내지 제4항중 어느 한 항에 있어서,
RGW02, RGW09, RGW06, RGW06A, RGW10 또는 RGW10A, RGW05 또는 RGW05A 폴리펩타이드 (SEQ ID NO. 4, 26, 14, 15, 27, 12 또는 13) 또는 제1항(a) 또는 (b)에 정의된 바와 같은 그의 변이체로부터 선택된 하나 이상의 폴리펩타이드를 포함하고; 선택적으로는, RGW07, RGW07C 또는 RGW07D 폴리펩타이드 (SEQ ID NO. 16, 19 또는 20) 또는 제1항(a) 또는 (b)에 정의된 바와 같은 그의 변이체를 추가로 포함하는 조성물.
제1항 내지 제5항중 어느 한 항에 있어서,
RGW01 또는 제1항(a) 또는 (b)에 정의된 바와 같은 그의 변이체;
RGW03B 또는 제1항(a) 또는 (b)에 정의된 바와 같은 그의 변이체;
RGW04A 또는 제1항(a) 또는 (b)에 정의된 바와 같은 그의 변이체;
RGW02 또는 제1항(a) 또는 (b)에 정의된 바와 같은 그의 변이체;
RGW05 또는 제1항(a) 또는 (b)에 정의된 바와 같은 그의 변이체;
RGW06A 또는 제1항(a) 또는 (b)에 정의된 바와 같은 그의 변이체; 및
RGW07D 또는 제1항(a) 또는 (b)에 정의된 바와 같은 그의 변이체를 포함하는 조성물.
제1항 내지 제6항중 어느 한 항에 있어서,
(i) 하나 이상의 폴리펩타이드가 (a) N 말단 아세틸화; (b) C 말단 아미드화;
(c) 아르기닌 및/또는 라이신 측쇄 아민 상의 하나 이상의 수소가 메틸렌 기로 대체; (d) 글리코실화; 및 (e) 인산화로부터 선택된 하나 이상의 변형을 갖고/갖거나
(ii) 하나 이상의 펩타이드가 용해성이도록 가공되어, (a) T 세포 에피토프를 측면에 갖는 펩타이드 잔기에 대한 N 말단: 상기 펩타이드가 유래된 단백질 서열의 상기 잔기에 대한 N 말단 직후에 2 내지 6개 인접 아미노산에 상응하는 1 내지 6개 인접 아미노산; 및/또는 (b) T 세포 에피토프를 측면에 갖는 펩타이드 잔기에 대한 C 말단: 상기 펩타이드가 유래된 단백질 서열의 상기 잔기에 대한 C 말단 직후에 1 내지 6개 인접 아미노산에 상응하는 1 내지 6개 인접 아미노산; 또는 (c) T 세포 에피토프를 측면에 갖는 펩타이드 잔기에 대한 N 및/또는 C 말단, 아르기닌, 라이신, 히스티딘, 글루타메이트 및 아스파테이트로부터 선택된 하나 이상의 아미노산을 포함하고,
상기 폴리펩타이드는 적어도 3.5mg/mL의 용해도를 갖고, T 세포 에피토프는 3.5mg/mL 미만의 용해도를 가지며/가지거나,
(iii) 하나 이상의 펩타이드가 용해성이도록 가공되어, 부가적으로는 (a) 펩타이드 고유 서열에 있는 임의의 시스테인 잔기가 세린 또는 2-아미노부티르산으로 교체되고/되거나; (b) T 세포 에피토프에 포함되지 않은, 펩타이드 고유 서열의 N 및/또는 C 말단에 있는 3개 이하의 아미노산의 임의의 소수성 잔기가 결실되고/되거나; (c) T 세포 에피토프에 포함되지 않은, 펩타이드 고유 서열의 N 및/또는 C 말단에 있는 4개 이하의 아미노산에 있는 Asp-Gly 서열을 포함하는 임의의 2개 인접 아미노산이 결실되고/되거나;
(iv) 각각의 폴리펩타이드가 0.03 내지 200nmol/mL, 0.3 내지 200nmol/mL 또는 30 내지 120nmol/mL 범위의 농도를 갖는
조성물.
발현시에 제1항 내지 제7항중 어느 한 항에 정의된 조성물 생성을 야기시키는 3개 이상의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하고, 선택적으로는, 상이한 폴리펩타이드를 발현시킬 수 있는 각각의 폴리뉴클레오타이드 서열이 동일하거나 상이한 폴리뉴클레오타이드 벡터에 존재하는,
돼지풀 알레르기의 자기내성에 의한 예방 또는 치료용 조성물.
3 내지 13개의 상이한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하고, 각각이 제1항 또는 제2항에 정의된 바와 같은 상이한 폴리펩타이드를 코딩하며, 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드가 하기 폴리펩타이드 군 각각으로부터 선택된 폴리펩타이드를 코딩하는, 돼지풀 알레르기의 자기내성에 의한 예방 또는 치료용 벡터:
a) RGW01, RGW01A 또는 RGW01B (SEQ ID NO: 1, 2 또는 3) 또는 제1항(a) 또는 (b)에 정의된 바와 같은 그의 변이체;
b) RGW03B, RGW03A 또는 RGW03 (SEQ ID NO: 9, 8 또는 7) 또는 제1항(a) 또는 (b)에 정의된 바와 같은 그의 변이체; 및
c) RGW04 또는 RGW04A (SEQ ID NO: 10 또는 11) 또는 제1항(a) 또는 (b)에 정의된 바와 같은 그의 변이체.
3 내지 13개 폴리펩타이드를 함유하고, 하나 이상의 폴리펩타이드가 하기 폴리펩타이드 군 각각으로부터 선택되며, 각각의 상이한 폴리펩타이드가 자기내성에 의해 돼지풀 알레르기를 예방 또는 치료하는데 있어서 동시, 별도 또는 순차 사용되는 생성물:
a) RGW01, RGW01A 또는 RGW01B (SEQ ID NO: 1, 2 또는 3) 또는 제1항(a) 또는 (b)에 정의된 바와 같은 그의 변이체;
b) RGW03B, RGW03A 또는 RGW03 (SEQ ID NO: 9, 8 또는 7) 또는 제1항(a) 또는 (b)에 정의된 바와 같은 그의 변이체; 및
c) RGW04 또는 RGW04A (SEQ ID NO: 10 또는 11) 또는 제1항(a) 또는 (b)에 정의된 바와 같은 그의 변이체.
3 내지 13개 폴리뉴클레오타이드 서열을 함유하고, 각각이 제1항 또는 제2항에 정의된 상이한 폴리펩타이드를 코딩하며, 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드가 하기 폴리펩타이드 군 각각으로부터 선택된 폴리펩타이드를 코딩하고, 각각의 상이한 폴리펩타이드가 인간의 돼지풀 알레르기를 예방 또는 치료하는데 있어서 동시, 별도 또는 순차 사용되는 생성물:
a) RGW01, RGW01A 또는 RGW01B (SEQ ID NO: 1, 2 또는 3) 또는 제1항(a) 또는 (b)에 정의된 바와 같은 그의 변이체;
b) RGW03B, RGW03A 또는 RGW03 (SEQ ID NO: 9, 8 또는 7) 또는 제1항(a) 또는 (b)에 정의된 바와 같은 그의 변이체; 및
c) RGW04 또는 RGW04A (SEQ ID NO: 10 또는 11) 또는 제1항(a) 또는 (b)에 정의된 바와 같은 그의 변이체.
제1항 내지 제8항중 어느 한 항에 따른 조성물; 제9항에 따른 벡터; 또는 제10항 또는 제11항에 따른 생성물; 및 약학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함하고,
선택적으로, 상기 조성물, 벡터 또는 생성물이 경구 투여, 비강 투여, 피부(epicutaneous) 투여, 피하 투여, 설하 투여, 피부내(intradermal) 투여, 볼내 투여 또는 흡입이나 주사 투여용으로 배합되는
돼지풀 알레르기의 자기내성에 의한 예방 또는 치료용 약학 배합물.
추가적인 폴리펩타이드 알레르겐에 대하여 개체를 자기내성화하는데 사용하기 위한 추가적인 폴리펩타이드 알레르겐을 추가로 포함하는,
제1항 내지 제8항중 어느 한 항에 따른 조성물 또는 제10항 또는 제11항에 따른 생성물.
T 세포를 제1항에 정의된 조성물과 접촉시키고 상기 T 세포가 상기 조성물에 의해 자극받는지 여부를 검출하는 것을 포함하는,
상기 T 세포가 상기 조성물을 인지하는지 여부를 결정하는 시험관내 방법.
개체가 제1항 내지 제18항중 어느 한 항에 정의된 조성물에 반응하는 T 세포를 갖는지 여부를 시험하여서 상기 개체가 돼지풀 알레르겐에 반응하는 알레르기 징후를 특징으로 하는 증상을 갖거나 가질 위험이 있는지 여부를 결정하는 것을 포함하고,
선택적으로는, 상기 조성물에 대한 T-세포 면역 반응이, 상기 조성물과 T 세포가 상호작용할 수 있는 조건하에 피험자로부터 채취된 시료중 T 세포와 상기 조성물을 접촉시키고, 임의의 상기 T 세포가 자극받는지 여부를 결정하고, 그에 의해 T 세포 면역 반응의 존부를 결정하여서 측정되는 것인
개체가 돼지풀 알레르겐에 반응하는 알레르기 징후를 특징으로 하는 증상을 갖거나 가질 위험이 있는지 여부를 결정하는 시험관내 방법.