KR20110041496A

KR20110041496A - 위치 21에 있는 방향족 링커(ｌｉｎｋｅｒ)를 통해 질산 에스테르에 부착된 당질코르티코이드 및 그들의 안과에의 용도

Info

Publication number: KR20110041496A
Application number: KR20117002369A
Authority: KR
Inventors: 프란체스카 베네디니; 안나리자 본팬티; 발레리오 치롤리; 레베카 스틸; 엔니오 온기니; 스테파노 비온디
Original assignee: 니콕스 에스. 에이.
Priority date: 2008-07-31
Filing date: 2009-07-07
Publication date: 2011-04-21
Also published as: ES2442720T3; PT2318427E; AU2009277381B2; SI2318427T1; RU2011106173A; AR075263A1; US8518920B2; US9012435B2; EP2318427A1; CN102131821A; DK2318427T3; US20110144073A1; HK1160142A1; JP2011529461A; RU2501804C2; CA2731513C; IL210477A0; MX2011001119A; BRPI0916702A2; ZA201100636B

Abstract

개시된 내용은 스테로이드의 니트로옥시(nitrooxy) 유도체, 그들의 제조방법, 이들 화합물들을 포함하는 약제조성물, 및 안구 질병, 특히 당뇨성 망막 부종, 당뇨성 망막병, 망막퇴화, 연령에 관련한 망막퇴화 및 레티나(retina)와 망막 루티아(lutea)의 다른 질병들을 치료하기 위한 이들 화합물 및 조성물의 이용 방법 에 관한 것이다.

Description

위치 21에 있는 방향족 링커(ｌｉｎｋｅｒ)를 통해 질산 에스테르에 부착된 당질코르티코이드 및 그들의 안과에의 용도 {GLUCOCORTICOIDS ATTACHED TO NITRATE ESTERS VIA AN AROMATIC LINKER IN POSITION 21 AND THEIR USE IN OPHTHALMOLOGY}

본 발명은 스테로이드의 니트로옥시(nitrooxy) 유도체, 그들의 제조방법, 이들 화합물들을 포함하는 약제조성물, 및 안구 질병, 특히 당뇨성 망막 부종, 당뇨성 망막병, 망막퇴화, 연령에 관련한 망막퇴화 및 레티나(retina)와 망막 루티아(lutea)의 다른 질병들을 치료하기 위한 이들 화합물 및 조성물의 이용 방법 에 관한 것이다.

레티나는 빛에 민감한 눈의 한 부분이다. 망막 루티아는 사람이 읽고 외관을 인식할 수 있게 하는 레티나의 한 영역이다. 연령에 관련된 망막퇴화나 당뇨성 망막부종과 같은 망막질병들은 눈이 보이지 않게 되는 주된 원인이 된다. 이 질병들과 싸우기 위하여, 다양한 약들이 눈을 멀게 하는 질환을 치료하기 위해 연구되어져 왔다. 현재로, 이들 약들은 인트라바이트리얼(intravitreal) 또는 페리오바이탈(periorbital) 주입과 같은 외과적 절차나 체계적 루트를 통해 망막과 레티나에 전달되어진다. 외과적 방법은 종종 반복된 주입을 요구하고 내안구염, 망막박리, 및 비트리어스(vitreous)출혈을 포함하는 심각한 안구 합병증을 유발할 수도 있다. 마찬가지로, 시스템적 투약은 다양한 잠재적인 시스템적 부작용을 유발할 수가 있고 레티나에 약을 치료레벨로 전달하는데 어려움이 있다.

최근에는, 광범성 망막부종의 치료를 위한 인트라바이트리얼 트리암시놀로네(triamcinolone) 아세토나이드(acetonide)의 효과에 대하여 많은 보고서들이 알려지고 있다. 그러나, 인트라바이트리얼 트리암시놀로네 주입은 많은 안구합병증을 유발한다. 이 인트라바이트리얼 트리암시놀로네 치료의 합병증은 안구내압의 상승에 기인된 스테로이드, 백내장발생증, 수술 후 전염성 및 비전염성 내안구염, 및 유사 내안구염을 포함한다.

현재 화학요법에서, 주 효능으로서 스테로이드 및 카본 탈수효소 억제물질이 대중요법으로 사용되고 있지만, 그들의 효율이 정립되어 있지 않고 오랫동안 투약하면 백내장, 안구 내압의 상승에 기인된 스테로이드, 녹내장, 및 감염과 같은 부작용이 발생될 수 있고, 따라서 이들 약을 계속 사용하면 당뇨증 멜리투스(mellitus)와 같은 만성질병을 초래하며, 그러므로 이러한 환경 아래서의 투약에는 어려움이 있다.

유럽특허공보 EP 0929565호는 일반 화학식 B-X₁-NO₂ 의 화합물을 개시하고 있는데, 여기서 B는 스테로이드 잔기, 특히 하이드로코오티손(hydrocortisone)을 함유하고, X₁은 벤질(benzyl)고리, 알킬(alkyl)사슬 또는 에테르(ether)인 브릿지(bridge)를 연결하는 2가성이다. 이 화합물은 눈 질병의 치료에 사용될 수 있다.

유럽특허공보 EP 1 475 386호는 화학식 A-B-C-NO₂의 화합물을 개시하고 있으며, 여기서 A는 스테로이드 잔기를 포함하고 B-C는 안티옥시던트(antioxidant) 잔기를 포함하는 브릿지를 연결하는 2가성이다. 이 화합물은 산화성 스트레스 및/또는 내피 기능장애의 처방에 사용될 수 있다.

개시된 화합물에 있어서, 산화방지제 링커(linker)가 에스테르 결합을 형성하는 카르복실(carboxylic)그룹을 통해 21-OH의 스테로이드에 결합된다.

국제특허출원공보 WO 03/64443호는 일반 화학식 B-X₁-NO₂의 화합물을 개시하고 있으며, 여기서 B는 스테로이드 잔기를 함유하고 X₁은 벤질고리 또는 이종원자고리형 링커인 브릿지를 연결하는 2가성이다. 이 화합물은 안과질병의 처방에 사용될 수 있다.

국제특허출원공보 WO 07/025632호는 화학식 R-Z-X-ONO₂의 화합물을 개시하고 있으며, 여기서 R-X는 트리암시놀로네(triamcinolone) 아세토나이드(acetonide), 베타메타존(betamethasone) 발레르산염 또는 프레드니솔로네(prednisolone) 에틸카보네이트(ethylcarbonate) 잔기를 함유하고, 그리고 X₁은 방향족 고리, 알킬 사슬, 에테르, 페룰릭(ferulic) 산, 바닐릭(vanillic) 산 또는 이종원자고리인 브릿지를 연결하는 2가성이다. 이 화합물은 피부 또는 점막상피 질병의 처방에, 특히 아토피 피부염, 접촉피부염 및 건선(psoriasis)의 처방에 사용될 수 있다.

F. Galassi 등의 논문 Br J Ophthalmology 2006, 90, 1414-1419에는 코르티코스테로이드(corticosteroid)-유발 녹내장에 대한 토끼 실험 모델에서 덱사메타존(dexamethasone) 21-[(4-니트로옥시메틸)]벤조산염의 효능을 개시하고 있다. NO-해방 덱사메타존은 원칙적으로 하루에 두 번씩 투약되었다. 그 결과는 이 화합물이 안구 내압의 증가, 구 후방 순환 장애, 및 코르티코스테로이드의 처방에 의해 유발된 섬모체에 형태학적 변화를 방지한다는 것을 보여주고 있다.

본 발명의 목적은 염증 질병을 치료하기 위한 스테로이드의 니트로옥시-유도체를 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 안구 질병 특히 당뇨성 망막 퇴화, 당뇨성 망막병, 연령-관련 망막 퇴화 그리고 레티나 및 망막 루티아의 기타 질병들을 치료 또는 방지하기 위한 스테로이드의 니트로옥시-유도체를 제공하는 것이다. 본 발명의 하나의 관점에 있어서, 하나 또는 그 이상의 이들 화합물들은 스테로이드에 대한 표준 치료와 관련한 부작용을 감소하는 것이다. 다른 구성에 있어서, 하나 또는 그 이상의 이들 화합물들은 현존하는 표준 치료와 비교하여 향상된 약리작용을 갖고 있다.

본 발명의 목적은 화학식(I) 또는 염 또는 그들의 입체이성체의 화합물에 의해 달성될 수 있으며,

여기서, R₁은 OH, R₂는 CH₃, 또는 R₁과 R₂가 함께 결합하면 화학식 (II)의

그룹이고, R₃은 수소 원자 또는 F 그리고 R₄는 F 또는 Cl 로서,

단, 다음과 같은 조건으로:

- R₁이 OH이고 R₂가 CH₃일 때, R₃은 수소원자;

- R₁과 R₂의 결합이 화학식 (II)의 그룹일 때, R₄는 F이고;

R₁, R₂, R₃ 및 R₄는 위치 α 또는 β에서 스테로이드 구조의 17, 16, 6 및 9에 있는 탄소원자에 연결되고;

R은:

또는

이고,

여기서,

Y는

1) -R₅-CH(ONO₂)R₆

2) -R₅-CH(ONO₂)-(CR₇R₈)n-CH(ONO₂)R₉

3) -[(CH₂)o-X]p-(CH₂)q-CH(ONO₂)R₉

4) -[(CH₂)o-(X)]p-(CH₂)q-CH(ONO₂)-(CR₇R₈)n-CH(ONO₂)R₉

로 부터 선택되고:

여기서,

R₅는 곧은 또는 분기된 C₁-C₁₀ 알켄(alkylene)이며; 바람직하게는 R₅는 곧은 C₁-C₆ 알켄 이고;

R₆는 H 또는 곧은 또는 분기된 C₁-C₆ 알킬(alkyl)이며; 바람직하게는 R₆는 H 또는 -CH₃ 이고;

R₇ 및 R₈은 독립적으로 H 또는 곧은 또는 분기된 C₁-C₆ 알킬(alkyl)이며; 바람직하게는 R₇ 및 R₈은 독립적으로 H 또는 CH₃ 이고;

R₉는 H 또는 곧은 또는 분기된 C₁-C₆ 알킬(alkyl)이며; 바람직하게는 R₉는 H 또는 -CH₃ 이고;

n은 0에서 6까지의 정수이고; 바람직하게는 n은 0 또는 1이고;

o는 1에서 6까지의 정수이고; 바람직하게는 o는 2부터 4까지의 정수이며; 더욱 바람직하게는 o는 2이고;

p는 1에서 6까지의 정수이고; 바람직하게는 p는 1부터 4까지의 정수이며; 더욱 바람직하게는 p는 1 또는 2이고;

q는 0에서 6까지의 정수이고; 바람직하게는 q는 0부터 4까지의 정수이며; 더욱 바람직하게는 q는 0또는 1이고;

X는 O, S 또는 NR₁₀이고, 여기서 R₁₀은 H 또는 C₁-C₄알킬이며,바람직하게는 X는 O 이며;

단, 본 발명이 화학식(I)의 화합물을 포함하지 않는다는 조건으로서, 여기서 R₁과 R₂의 결합이 화학식(II)의 그룹이고,

R₄는 F이고, R₃은 수소원소이고, 그리고 R은 Y가 -R₅-CH(ONO₂)R₆이고 R₆가 H인 화학식(III)의 화합물이다.

본 발명의 다른 구성에 있어서, 화학식(I)의 화합물이 제공되며,

여기서,

R₄는 F이고, R₃은 F이며, 그리고 R₁과 R₂의 결합은 화학식(II)의 그룹이고,

R₁, R₂, R₃ 및 R₄는 위치 α에서 스테로이드 구조의 17, 16, 6 및 9에 있는 탄소원자에 연결되고;

R은:

또는

이고, 여기서

Y는

1) -R₅-CH(ONO₂)R₆

2) -R₅-CH(ONO₂)-(CR₇R₈)n-CH(ONO₂)R₉

3) -[(CH₂)o-X]p-(CH₂)q-CH(ONO₂)R₉

4) -[(CH₂)o-(X)]p-(CH₂)q-CH(ONO₂)-(CR₇R₈)n-CH(ONO₂)R₉

로 부터 선택되고:

여기서,

R₇ 및 R₈은 독립적으로 H 또는 곧은 또는 분기된 C₁-C₆ 알킬(alkyl)이며; 바람직하게는 R₇ 및 R₈은 독립적 또는 CH₃ 이고;

n은 0에서 6까지의 정수이고; 바람직하게는 n은 0 또는 1이고;

o는 1에서 6까지의 정수이고; 바람직하게는 o는 2부터 4까지의 정수이며; 더욱 바람직하게는 o는 1이고;

q는 0에서 6까지의 정수이고; 바람직하게는 q는 0부터 4까지의 정수이며; 더욱 바람직하게는 q는 0 또는 1이고;

X는 O, S 또는 NR₁₀이고, 여기서 R₁₀은 H 또는 C₁-C₄알킬이며, 바람직하게는 X는 O 이다.

본 발명의 또 다른 관점에서는, 화학식(I)의 화합물이 제공되며,

여기서,

R₁과 R₂의 결합은 화학식(II)의 그룹이고,

R₄는 F이고 R₃은 수소원소이고;

R₁, R₂, 및 R₄는 위치 α에서 스테로이드 구조의 17, 16, 및 9에 있는 탄소원자에 연결되고;

R은:

또는

이고, 여기서

Y는

1) -R₅-CH(ONO₂)R₆

2) -R₅-CH(ONO₂)-(CR₇R₈)n-CH(ONO₂)R₉

3) -[(CH₂)o-X]p-(CH₂)q-CH(ONO₂)R₉

4) -[(CH₂)o-(X)]p-(CH₂)q-CH(ONO₂)-(CR₇R₈)n-CH(ONO₂)R₉

로부터 선택되고:

여기서,

R₆는 곧은 또는 분기된 C₁-C₆ 알킬(alkyl)이며; 바람직하게는 R₆는 -CH₃ 이고;

n은 0에서 6까지의 정수이고; 바람직하게는 n은 0 또는 1이고;

X는 O, S 또는 NR₁₀이고, 여기서 R₁₀은 H 또는 C₁-C₄알킬이며,바람직하게는 X는 O 이다.

본 발명의 또 다른 관점에 있어서,화학식(I)의 화합물이 제공되며,

여기서,

R₁은 OH, R₂는 CH₃, R₃은 수소원자 그리고 R₄는 F이고;

R₁ 및 R₄는 위치 α에서 스테로이드 구조의 탄소원자 17 및 9에 연결되며, R₂는 위치 β에서 스테로이드 구조의 탄소원자 16에 연결되고;

R은:

또는

이고, 여기서

Y는

1) -R₅-CH(ONO₂)R₆

2) -R₅-CH(ONO₂)-(CR₇R₈)n-CH(ONO₂)R₉

3) -[(CH₂)o-X]p-(CH₂)q-CH(ONO₂)R₉

4) -[(CH₂)o-(X)]p-(CH₂)q-CH(ONO₂)-(CR₇R₈)n-CH(ONO₂)R₉

로부터 선택되고:

여기서,

n은 0에서 6까지의 정수이고; 바람직하게는 n은 0 또는 1이고;

본 발명의 또 다른 관점에 있어서, 화학식(I)의 화합물이 제공되며,

여기서,

R₁은 OH, R₂는 CH₃, R₃은 수소원자 그리고 R₄는 Cl이고;

R은:

또는

이고, 여기서

Y는

1) -R₅-CH(ONO₂)R₆

2) -R₅-CH(ONO₂)-(CR₇R₈)n-CH(ONO₂)R₉

3) -[(CH₂)o-X]p-(CH₂)q-CH(ONO₂)R₉

4) -[(CH₂)o-(X)]p-(CH₂)q-CH(ONO₂)-(CR₇R₈)n-CH(ONO₂)R₉

로 부터 선택되고:

여기서,

n은 0에서 6까지의 정수이고; 바람직하게는 n은 0 또는 1이고;

바람직한 R은:

이다.

발명의 다른 관점에 있어서, 다음의 그룹들로부터 선택된 화합물이 제공된다:

발명의 또 다른 관점에 에 있어서, 염증 질병을 치료하기 위한 화학식 (I)의 화합물이 제공된다.

발명의 또 다른 관점에 있어서, 안구 질병 특히 당뇨성 망막 부종, 당뇨성 망막병, 망막퇴화, 연령에 관련한 망막퇴화 및 레티나(retina)와 망막 루티아(lutea)의 다른 질병들을 치료하기 위한 화학식 (I)의 화합물이 제공된다. 바람직한 화합물은 상기에 언급된 화학식 (I)의 화합물이다.

발명의 또 다른 관점에 있어서, 당뇨성 망막 부종, 당뇨성 망막병, 망막퇴화, 연령에 관련한 망막퇴화 및 레티나(retina)와 망막 루티아(lutea)의 다른 질병들, 특히 당뇨성 망막 부종을 치료하고 방지하는데 이용하기 위하여, 화학식(I)의 화합물들을 포함하는 화학식(I)의 화합물이 제공되는데, 여기서 R₁과 R₂의 결합은 화학식 (II)의 그룹이고,

R₄는 F 및 R₃는 수소원소이고, 그리고 R은 Y가 -R₅-CH(ONO₂)R₆ 및 R₆가 H인 화학식 (III)의 화합물이다. 바람직한 화합물은 화학식(18)의 화합물이다.

발명의 또 다른 관점에 있어서, 화학식(I)의 조성물 및/또는 염 또는 입체이성체의 약품적 유효량과 인트라바이트리얼(intravitreal) 또는 페리오르바이탈(periorbital) 투여에 적합한 형태의 적어도 안구가 수용할 수 있는 보형약을 포함하는 약품 조성물이 제공된다.

용어 "보형약"은 발명의 화합물(들) 보다는 다른 어떤 성분을 표현하기 위하여 여기서 사용되어 진다. 보형약의 선택은 투약의 특정 형태, 안정성에 대한 보형약의 효능, 및 적정량 형태의 본질과 같은 인자들에 의존하여 광범위하게 선택되어 진다.

발명의 또 다른 관점에 있어서, 발명의 화합물이 안구가 받아들일 수 있는 부형약(vehicle)으로서 현탁액 또는 유탁액으로 투약되어 지는 약품 조성물로 제공된다.

제약용도를 위하여 의도된 본 발명의 화합물들은 크리스탈린(crystalline) 또는 무정형 생성물로 투약되어질 수 있다. 제약용도를 위하여 의도된 본 발명의 화합물들은 단독으로 또는 하나 이상의 본 발명의 다른 화합물들과 조합하여 투약되어질 수 있다.

당뇨성 망막 부종, 당뇨성 망막병, 망막퇴화, 연령에 관련한 망막퇴화 및 레티나(retina)와 망막 루티아(lutea)의 다른 질병들을 치료 또는 방지하기 위한 의료 약물로서 본 발명의 화합물들의 효용은 종래의 효력검증으로 화합물들의 활성도에 의해 증명되어 진다. [발명의 효과]

본 발명에 따른 스테로이드의 니트로옥시(nitrooxy) 유도체와 이들 화합물들을 포함하는 약제조성물은 염증 질병, 안구 질병 특히 당뇨성 망막 퇴화, 당뇨성 망막병, 연령-관련 망막 퇴화 그리고 레티나 및 망막 루티아의 기타 질병들을 치료 또는 방지하는데 탁월한 효능이 있다. 또한, 본 발명의 이들 화합물들은 스테로이드에 대한 표준 치료와 관련한 부작용을 감소시키고, 현존하는 표준 치료와 비교하여 향상된 약리작용을 갖고 있다.

도 1a는 화합물(1) 및 그것에 대응하는 스테로이드 코어, 플루오씨놀론 아세토나이드 (FC)로 처방된 VEGF-유도 쥐들에 있어서의 측정된 망막누설을 나타내는 대조도이고,
도 1b는, 도 1a로부터 획득된, FC 및 화합물 (1)에 의한 누설의 합성 퍼센트 금지에 관한 도표이고,
도 2a는 화합물(18) 및 그것에 대응하는 스테로이드 코어, 트리암씨놀론 아세토나이드 (TAAC)로 처방된 VEGF-유도 쥐들에 있어서의 측정된 망막누설을 나타내는 대조도이고,
도 2b는 도 2a로부터 획득된, 화합물 (18)및 트리암씨놀론 아세토나이드 (TAAC)에 의한 누설의 합성 퍼센트 금지에 관한 도표이고,
도 3은 브라운 노르웨이 쥐들에 있어서 인트라비트리얼리 투약된 플루오씨놀론 아세토나이드 대 화합물 (1)의 IOP 효능 비교도이고,
도 4는 브라운 노르웨이 쥐들에 있어서 인트라비트리얼리 투약된 플루오씨놀론 아세토나이드 (FC), 화합물 (1), 및 화합물 (1)의 데스-니트로(des-nitro) 동족체의 IOP 효능 비교도이다.

합성절차

1) 일반 화학식 (I)의 화합물은, 여기서 R₁, R₂, R₃ 및 R₄는 위에서 정의한 바와 같고, 라디칼(radical) R은 Y가 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (III) 및 (IV)로 정의된 바와 같으며, 다음과 같은 절차에 의해 얻어질 수 있다:

1.1) 화학식 (V)의 화합물을 반응함에 의해,

여기서, R₁, R₂, R₃ 및 R₄는 위에서 정의한 바와 같고, W는 H 또는 화학식 (VII) 또는 화학식 (VIII)의 화합물과 함께 C(O)-Cl이며,

여기서 Y는 위에서 정의된 바와 같고, 그리고

W₁은 W가 -C(O)-Cl일 때 H이고 또는

W₁은 W가 H일 때 -C(O)-Cl 또는 -CO-O-Ra이며, 여기서 Ra는 펜타플루오로페닐(pentafluorophenyl) 또는 4-니트로페닐(nitrophenyl)이고, P₁은 p-메톡시벤질리덴(methoxybenzylidene), 부틸리덴(butylidene), 및 하버드대학 간행물, 1980, 2판에 발표된 T. W. Greene에 의한 논문 "유기합성에 있어서 보호기들"에 기재된 것들과 같은 아세탈(acetal)과 같은 디올(diol) 보호기이다.

1.1.a) W가 H인 화학식 (V)의 화합물의 반응이 W₁ 이 -C(O)-Cl인 화학식 (VII) 또는 (VIII)의 화합물과 함께, 또는

W가 -C(O)-Cl인 화학식 (V)의 화합물의 반응이 W₁이 H인 화학식 (VII) 또는 (VIII)의 화합물과 함께, N,N-디메틸아미노(dimethylamino) 피리딘(pyridine) (DMAP), 트리에틸아민(triethylamine), 피리딘과 같은 유기염기의 존재하에 수행되었다. 이 반응은 N,N'-디메틸포름아미드(dimethylformamide), 테트라히드로푸란(tetrahydrofuran), 벤젠, 톨루엔, 디옥산, 폴리할로겐화 지방족 탄화수소와 같은 비활성 유기 용매에서 -20℃ 및 40℃의 온도로부터 수행되었다. 이 반응은 30분 부터 36시간의 시간 범위 내에서 완료되었다.

1.1.b) W가 H인 화학식 (V)의 화합물의 반응이 W₁ 이 -C(O)-O-Ra이고 Ra는 상기에 언급된 바와 같은 화학식 (VII) 또는 (VIII)의 화합물과 함께 DMAP와 같은 촉매의 존재하에 또는 DMAP 및 Sc(OTf)₃ 또는 Bi(OTf)₃과 같은 Lewis 산의 존재하에 수행되어져도 좋다. 이 반응은 N,N'-디메틸포름아미드(dimethylformamide), 테트라히드로푸란(tetrahydrofuran), 벤젠, 톨루엔, 디옥산, 폴리할로겐화 지방족 탄화수소와 같은 비활성 유기 용매에서 -20℃ 및 40℃의 온도로부터 수행되었다. 이 반응은 30분 부터 36시간의 시간 범위 내에서 완료되었다.

1.2) 하버드대학 간행물, 1980, 2판에 발표된 T. W. Greene에 의한 논문 "유기합성에 있어서 보호기들"에 기재된 방법에따라 단계 1.1.a) 및 1.1.b)에서 얻어진 화합물들을 선택적으로 비보호함에 의해. 테트라히드로푸란(tetrahydrofuran)에 있는 염산이 아세탈 보호기를 제거하는데 바람직한 방법이다.

화학식(V)의 화합물들의 준비

2) 화학식 (V)의 화합물은: 여기서

- W는 H이고 R₁은 OH, R₂는 CH₃, R₃은 수소원소, R₄는 F 또는 Cl이며;

- 또는, W는 H, R₃은 수소원소 또는 F, R₄는 F이고, 그리고 R₁과 R₂의 결합은 화학식(II)의 그룹으로서,

상업적으로 얻을 수 있다.

2.1) W가 -C(O)-Cl 또는 -CO-O-Ra이고 R₁, R₂, R₃ 및 R₄가 상기에 정의된 바와 같은 화학식(V)의 화합물들은 W가 문헌에 알려진 방법을 사용하는 H인 상업적으로 얻을 수 있는 대응하는 화학식 (V)의 화합물들로부터 얻어질 수 있다.

화학식 ( VII ) 또는 ( VIII )의 화합물들의 준비

3) W₁이 H이고, P₁이 상기에 정의된 바와 같으며,

Y가 :

-R₅-CH(ONO₂)R₆

-[(CH₂)o-X]p-(CH₂)q-CH(ONO₂)R₉인,

여기서 R₅, R₆, R₉, o, p, 및 q는 상기에 정의된 바와 같은 것으로서,

화학식 (VII) 또는 (VIII)의 화합물들이 다음과 같이 준비될 수 있다:

3.1.a) 화학식 (IX) 또는 (X)의 화합물이,

여기서, P는 트리메틸시릴(trimethylsilyl), 터트-부틸-디메틸시릴(tert-butyl-dimethylsilyl) 또는 트리틸(trityl)과 같은 시릴 에테르(silyl ethers)와 같은 히드록시(hydroxyl) 보호기 및 하버드대학 간행물, 1980, 2판에 발표된 T. W. Green에 의한 논문 "유기합성에 있어서 보호기들"에 기재된 것들 이고, P₁은 상기에 보고된 바와 같은 것으로서,

화학식 (XI) 또는 (XII)의 화합물과 함께,

HO-R₅-CH(Q)R₆

(XI)

HO-[(CH₂)o-X]p-(CH₂)q-CH(Q)R₉

(XII)

여기서, R₅, R₆, R₉, o, p, q는 상기에 정의된 바와 같고 Q는 ONO₂ 또는 Q₁이며, 여기서 Q₁은 염소 원자, 브롬 원자, 옥소 원자, 메실(mesyl)기 또는 토실(tosyl)기로서,

디싸이클로헥실카르보디이미드(dicyclohexylcarbodiimide)(DCC), N'-[3-디메틸아미노프로필(dimethylaminopropyl)]-N-에틸카르보디이미드(ethylcarbodiimide) 하이드로클로라이드(hydrochloride) (EDAC), N,N'-카르보닐디이미다졸(carbonyldiimidazole) (CDI)과 같은 축합제의 존재하에, 선택적으로 예를 들면 DMAP와 같은 염기의 존재하에 반응함에 의해.

이 반응은 N,N'-디메틸포름아미드(dimethylformamide), 테트라히드로푸란(tetrahydrofuran), 벤젠, 톨루엔(toluene), 디옥산, 폴리할로겐화 지방족 탄화수소와 같은 비활성 유기 용매에서 -20℃ 및 50℃의 온도로부터 수행되었다. 이 반응은 30분 부터 36시간의 시간 범위 내에서 완료되었다.

3.1.b) 상기에 보고된 화학식 (IX) 또는 (X)의 화합물이,

화학식 (XIII) 또는 (XIV)의 화합물과 함께,

W₃-R₅-CH(Q)R₆또는

(XIII)

W₃-[(CH₂)o-X]p-(CH₂)q-CH(Q)R₉

(XIV)

여기서, R₅, R₆, R₉, o, p, q 및 Q는 상기에 정의된 바와 같고 W₃는 Cl, Br, I이며,

1,8-디아자비씨클로(diazabiciclo)[5.4.0]운데크(undec)-7-에네(ene) (DBU), N,N-디이소프로필에틸아민(diisopropylethylamine), 디이소프로필아민(diisopropylamine)과 같은 유기염기 또는 알칼리 토금속 탄산염 또는 수산화물, 칼륨 탄산염, 세슘 탄산염과 같은 무기염기의 존재 하에서, N,N'-디메틸포름아미드(dimethylformamide), 테트라히드로푸란(tetrahydrofuran), 아세톤, 메틸 에틸 케톤, 아세토니트릴, 폴리할로겐화 지방족 탄화수소와 같은 비활성 유기 용매에서, -20℃ 부터 40℃의 온도, 바람직하게는 5℃로 부터 25℃까지의 온도로 반응함에 의해. 이 반응은 1시간 부터 8시간의 시간 범위 내에서 완료되었다. W₃이 염소 또는 브롬 가운데서 선택되어 지면, 이 반응은 KI와 같은 옥소 염의 존재하에 수행된다.

3.1.c) 화학식 (IXa) 또는 (Xa)의 화합물이,

여기서 P 및 P₁은 상기에 정의된 바와 같고, Rb는 펜타플루오로페닐(pentafluorophenyl), 4-니트로페닐(nitrophenyl), 또는 -[N-스씨미딜(succimidyl)]이며,

화학식 (XI) 또는 (XII)의 화합물과 함께,

HO-R₅-CH(Q)R₆또는

(XI)

HO-[(CH₂)o-X]p-(CH₂)q-CH(Q)R₉

(XII)

여기서, R₅, R₆, R₉, o, p, q 및 Q는 상기에 정의된 바와 같고,

DMAP와 같은 촉매의 존재 하에 또는 DMAP 및 Sc(OTf)₃ 또는 Bi(OTf)₃과 같은 Lewis 산의 존재 하에서 반응함에 의해.

이 반응은 N,N'-디메틸포름아미드(dimethylformamide), 테트라히드로푸란(tetrahydrofuran), 벤젠, 톨루엔(toluene), 디옥산, 폴리할로겐화 지방족 탄화수소와 같은 비활성 유기 용매에서, -20℃ 및 40℃의 온도로부터 수행되었다. 이 반응은 30분 부터 36시간의 시간 범위 내에서 완료되었다.

3.1.d) 화학식 (IXb) 또는 (Xb)의 화합물이,

화학식 (XI) 또는 (XII)의 화합물과 함께,

HO-R₅-CH(Q)R₆또는

(XI)

HO-[(CH₂)o-X]p-(CH₂)q-CH(Q)R₉

(XII)

N,N-디메틸아미노(dimethylamino) 피리딘(pyridine) (DMAP), 트리에틸아민(triethylamine), 피리딘과 같은 유기염기의 존재하에 반응함에 의해. 이 반응은 N,N'-디메틸포름아미드(dimethylformamide), 테트라히드로푸란(tetrahydrofuran), 벤젠, 톨루엔, 디옥산, 폴리할로겐화 지방족 탄화수소와 같은 비활성 유기 용매에서 -20℃ 및 40℃의 온도로부터 수행되었다. 이 반응은 30분 부터 36시간의 시간 범위 내에서 완료되었다.

3.2) 단계 3.1.a) 내지 단계 3.1.d)에서 얻어진 화합물을, 질산은, 질산리튬, 질산나트륨, 질산칼륨, 질산마그네슘, 질산칼슘, 질산화 철, 질산화 아연, 질산화 테트라알킬암모늄(여기서, 알킬은 C₁-C₁₀ alkyl이다)과 같은 질산염원과 함께, 아세토니트릴, 테트라히드로푸란(tetrahydrofuran), 메틸 에틸 케톤, 에틸 초산염, DMF와 같은 적절한 유기용매에서 반응함에 의해. 이 반응은 어두운 데서 실온으로부터 용매의 끓는 온도까지의 온도에서 수행되었다. 대조적으로, 이 반응은 AgNO₃와 함께 아세토니트릴, 또는 THF와 같은 용매에서 약 100-180℃ 범위의 온도로 약 1-60분의 시간 범위 동안 초단파 조사에 의해 수행될 수 있다. 바람직한 질산염원은 질산은이다. 그리고,

3.3) 하버드대학 간행물, 1980, 2판에 발표된 T. W. Green에 의한 논문 "유기합성에 있어서 보호기들"에 기재된 방법에 따라 히드록실 보호기를 선택적으로 제거함에 의해. 플루오르화 이온이 실릴 에테르 기를 제거하는데 바람직한 방법이다.

4) W₁이 H이고, P₁이 상기에 정의된 바와 같으며,

Y가 :

-R₅-CH(ONO₂)-(CR₇R₈)n-CH(ONO₂)R₉

-[(CH₂)o-X]p-(CH₂)q-CH(ONO₂)-(CR₇R₈)n-CH(ONO₂)R₉인,

여기서 R₅, R₉, R₇, R₈ o, p, 및 q는 상기에 정의된 바와 같고 n은 0인 것으로서,

4.1.a) 상기에 보고된 바와 같은 화학식 (IX) 또는 (X)의 화합물이,

화학식 (XV) 또는 (XVI)의 화합물과 함께,

HO-R₅-CH=CH-R₉

(XV)

HO-[(CH₂)o-X]p-(CH₂)q-CH=CH-R₉

(XVI)

여기서, R₅, o, p, q, X 및 R₉는 상기에 정의된 바와 같고,

단계 3.1.a)에서 언급한 방법에 따라 반응함에 의해;

4.1.b) 상기에 보고된 바와 같은 화학식 (IX) 또는 (X)의 화합물이,

화학식 (XVII) 또는 (XVIII)의 화합물과 함께,

W₃-R₅-CH=CH-R₉

(XVII)

W₃-[(CH₂)o-X]p-(CH₂)q-CH=CH-R₉

(XVIII)

여기서, R₅, o, p, q, X 및 R₉는 상기에 정의된 바와 같고, W₃은 Cl, Br, I인 것으로서,

단계 3.1.b)에서 언급한 방법에 따라 반응함에 의해;

4.1.c) 상기에 보고된 바와 같은 화학식 (IXa) 또는 (Xa)의 화합물이,

화학식 (XV) 또는 (XVI)의 화합물과 함께,

HO-R₅-CH=CH-R₉

(XV)

HO-[(CH₂)o-X]p-(CH₂)q-CH=CH-R₉

(XVI)

여기서, R₅, o, p, q, X 및 R₉는 상기에 정의된 바와 같고, 3.1.c)에 개시된 방법에 따라 반응함에 의해;

4.1.d) 상기에서 보고된 화학식 (IXb) 또는 (Xb)의 화합물을 화학식 (XV) 또는 (XVI)의 화합물과 함께,

HO-R₅-CH=CH-R₉

(XV)

HO-[(CH₂)o-X]p-(CH₂)q-CH=CH-R₉

(XVI)

여기서, R₅, o, p, q, X 및 R₉는 상기에 정의된 바와 같고,

단계 3.1.d)에 기재된 방법에 따라 반응함에 의해;

4.2.a) 화학식 (VIIA) 또는 (VIIIA)의 화합물을,

여기서 P 및 P₁은 상기에 언급된 바와 같고,

Y'가:

-R₅-CH=CH-R₉

-[(CH₂)o-X]p-(CH₂)q-CH=CH-R₉

여기서, R₅, o, p, q, 및 R₉는 상기에 정의된 바와 같고,

질산은과 같은 질산염원과 함께, 아세토니트릴, 테트라히드로푸란(tetrahydrofuran), 메틸 에틸 케톤, 에틸 초산염, DMF와 같은 적절한 유기용매에서 반응함에 의해. 이 반응은 어두운 데서 -20℃로부터 용매의 끓는 온도까지의 온도에서 수행되었다. 대조적으로, 이 반응은 아세토니트릴, 또는 THF와 같은 용매에서 약 100-180℃ 범위의 온도로 약 1-60분의 시간 범위 동안 초단파 조사에 의해 수행될 수 있다.

4.2.b) 화합물 (VIIB) 또는 (VIIIB)를 얻기 위하여, 화학식 (VIIA) 또는 (VIIIA)의 화합물의 이중결합을 디히드록시화함에 의해,

여기서 P 및 P₁은 상기에 언급된 바와 같고,

Y"는:

-R₅-CH(OH)-CH(OH)-R₉

-[(CH₂)o-X]p-(CH₂)q-CH(OH)-CH(OH)-R₉인

여기서 R₅, o, p, q 및 R₉는 상기에 언급된 바와 같은 것으로서,

물/터어트-부타놀(tert-butanol) 혼합물에 ADmix 알파(alpha) 또는 ADmix 베타(beta)와 같은 샤프레스(Sharpless) 비대칭 디히드록시화 반응을 위한 시약과 함께 -20℃ 부터 30℃ 온도, 바람직하게는 -5℃ 부터 5℃ 까지 온도로,

상기에 언급된 화학식 (VIIA) 또는 (VIIIA)의 화합물의 이중결합의 디히드록시화 반응을 행함에 의해. 이 반응은 1시간 부터 24시간의 시간범위 내에서 완성되었다.

4.3) 단계 4.2.b)에서 얻어진 화합물을 염화메틸렌과 같은 적절한 유기용매에서 질산 및 초산과 함께, 문헌에 잘 알려져 있는 방법에 따라 -50℃로부터 0℃까지의 온도범위 내에서 반응함에 의해.

4.4) 하버드대학 간행물, 1980, 2판에 발표된 T. W. Green에 의한 논문 "유기합성에 있어서 보호기들"에 기재된 바와 같이 단계 4.2.a) 또는 4.3)에서 얻어진 화합물들을 선택적으로 제거함에 의해. 플루오르화 이온이 실릴 에테르 보호기를 제거하는데 바람직한 방법이다.

5) W₁이 H이고, P₁이 상기에 정의된 바와 같으며,

Y가 :

-R₅-CH(ONO₂)-(CR₇R₈)n-CH(ONO₂)R₉

-[(CH₂)o-X]p-(CH₂)q-CH(ONO₂)-(CR₇R₈)n-CH(ONO₂)R₉인,

여기서 R₅, R₉, R₇, R₈ o, p, 및 q는 상기에 정의된 바와 같고 n은 1부터 6까지의 정수인 것으로서,

5.1) 상기에 보고된 바와 같은 화학식 (IX) 또는 (X)의 화합물을,

화학식 (XIX) 또는 (XX)과 함께,

W₃-R₅-CH(Q₂)-(CR₇R₈)n-CH(Q₂)R₉ 또는

(XIX)

W₃-[(CH₂)o-X]p-(CH₂)q-CH(Q₂)-(CR₇R₈)n-CH(Q₂)R₉인,

(XX)

여기서 R₅, R₉, R₇, R₈ _, n, o, p, 및 q는 상기에 정의된 바와 같고 Q₂는 ONO₂ 또는 OH이고 W₃은 Cl, Br, I인 것으로서,

단계 3.1.b)에 개시된 방법에 따라 반응함에 의해;

5.2) 단계 5.1)에서 얻어진 화합물을, 여기서 Q는 OH인 것으로서, 단계 4.3에 개시된 방법에 따라 질산염원과 함께 반응함에 의해;

5.3) 단계 3.3)에 개시된 방법에 따라 히드록실 보호기 P를 선택적으로 제거함에 의해;

화합물들 ( IX ), ( IXa ), ( IXb ), (X), ( Xa ) 및 ( Xb )의 준비

6) 화학식 (IX), (IXa), (IXb), (X), (Xa) 및 (Xb)의 화합물들은, 여기서 P, P₁ 및 Rb는 상기에 언급된 바와 같은 것으로서, 상업적으로 입수가능한 바닐릭(vanillic) 산 또는 갈릭(gallic) 산으로 부터 출발하여 문헌에서 잘 알려진 방법에 따라 준비되어 질 수 있다.

화합물들 ( XI )-( XX )의 준비

6.1) 화학식 (XI)-(XIV)의 화합물들은, 여기서 R₅, R₆, R₉, o, p, q 및 W₃은 상기에 언급된 바와 같고 Q는 Q₁으로 Q₁은 상기에 언급되어 있는 바와 같으며, 상업적으로 입수 가능하고 또는 문헌에 알려진 방법에 따라 얻어질 수 있다.

6.2) 화학식 (XI)-(XIV)의 화합물들은, 여기서 R₅, R₆, R₉, o, p, q 및 W₃은 상기에 언급된 바와 같고 Q는 ONO₂로서, 상술한 질산염원과 함께 반응시킴에 의해, Q가 Q₁인 대응화합물들로부터 얻어질 수 있다.

6.3) 화학식 (XV)-(XX)의 화합물들은, 여기서 W₃, R₅, R₉, R₇, R₈, n, o, p 및 q는 상기에 언급된 바와 같고, 상업적으로 입수 가능하고 또는 문헌에 알려진 방법에 따라 얻어질 수 있다.

예 1 - [화합물 (1)]

4-(니트로옥시)부틸[(nitrooxxy)butyl] 4-((2-((6S,9R,10S,11S,13S,16R,17S)-6,9-디플루오로(difluoro)-11-하이드록시(hydroxy)-16,17-16,17-(1-메틸에틸이데네비스(옥시)[methylethylidenebis(oxy)]-10,13-디메틸(dimethyl)-3-옥소(oxo)-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-도데카히드로(dodecahydro)-3H-싸이클로펜타(cyclopenta)[a]페난트렌(phenanthren)-17-yl)-2-옥소에톡시(oxoethoxy))카르보닐옥시(carbonyloxy)-3-메톡시벤조산염(methoxybenzoate)의 합성

A) 4-(니트로옥시)부틸[(nitrooxxy)butyl] 4-하이드록시(hydroxy)-3-메톡시벤조산염(methoxybenzoate)

N,N-디메틸포름아미드(dimethylformamide)(50ml)에 바닐릭(vanillic)산(5.0g, 29.73 mmol)의 용해액에, 세슘 카보네이트(cesium carbonate)(9.68 g, 29.73 mmol)을 첨가 하였다. 반응은 0℃로 냉각되어 졌고 디클로로메탄(dichloromethane)(29.45 g)에 1-브롬-4-(니트로옥시)부탄의 20% 용액이 첨가 되었다. 반응은 실온에서 69시간 동안 교반되어졌다. 그 혼합물은 5% 수용액의 NaH₂PO₄ 용액속에 따루어 지고 디에틸(diethyl) 에테르(3x70ml)와 함께 추출되어졌다. 유기층들은 물(70 ml)로 세정되었고, 황산나트륨을 통해 건조되고 환산압력하에서 농축되어졌다. 잔기는 속성크로마토그래피에 의해 정제되어졌다(Biotage System, Cartridge column FLASH 65+M^TM KP-Sil, 용리액: 편차 n-헥산/에틸 초산염 95/5(500ml), 4000ml동안 n-헥산/에틸 초산염에 대하여, n-헥산/에틸 초산염 1/1(500ml)). 생산물(5.88g)이 얻어졌다.

B) 4-(니트로옥시)부틸[(nitrooxxy)butyl]-3-메톡시-4-((4-니트로페녹시)카르보닐옥시)벤조산염

디클로로메탄(dichloromethane)(50ml)에 있는 화합물 A(2.94g, 10.30 mmol)의 용해액에, 0℃로 냉각된, 피리딘(pyridine)(1.01 ml, 10.30 mmol) 및 p-니트로페닐(nitrophenyl) 클로로포름(chloroformate)(2.07 ml, 10.30 mmol)이 첨가되었다. 반응은 실온에서 16시간 동안 교반되어졌다. 그 혼합물은 1M 수용액의 HCl(2x50ml)로 세정되었고, 유기층은 황산나트륨을 통해 건조되고 환산압력하에서 농축되어졌다. 잔기는 속성크로마토그래피에 의해 정제되어졌다(Biotage System, Cartridge column FLASH 65+M^TM KP-Sil, 용리액: 편차 n-헥산/에틸 초산염 93/7(500ml), 4000ml동안 n-헥산/에틸 초산염 1/1에 대하여, n-헥산/에틸 초산염 1/1(500ml)). 생산물(3.50 g)이 얻어졌다.

C) 4-(니트로옥시)부틸[(nitrooxxy)butyl]4-((2-((6S,9R,10S,11S,13S,16R,17S)-6,9-디플루오로(difluoro)-11-히드록시(hydroxy)-16,17-16,17-(1-메틸에틸이데네비스(옥시)[methylethylidenebis(oxy)]-10,13-디메틸(dimethyl)-3-옥소(oxo)-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-도데카히드로(dodecahydro)-3H-싸이클로펜타(cyclopenta)[a]페난트렌(phenanthren)-17-yl)-2-옥소에톡시(oxoethoxy))카르보닐옥시(carbonyloxy)-3-메톡시벤조산염(methoxybenzoate).

클로로포름(chloroform)(30ml)내의 화합물 B(1.00g, 2.28 mmol)의 용해액에, 스칸듐(scandium) 트리플레이트(triflate)(0.10 g, 0.22 mmol) 및 DMAP(0.54 g, 4.56 mmol)을 첨가 하였다. 반응은 0℃로 냉각되어졌고, 플루오씨놀론(fluocinolone) 아세토나이드(acetonide)(0.99 g, 2.28mmol)이 첨가 되었다. 반응은 실온에서 28시간 동안 교반되어졌다. 그 혼합물은 디클로로메탄(dichloromethane)(30 ml)으로 희석되어 졌고, 5% NaH₂PO₄ 로 세정되었고, 그 때 포화된 수용액의 탄산나트륨이 추출되어졌다. 유기층들은 황산나트륨을 통해 건조되고 환산압력하에서 농축되어졌다. 잔기는 속성크로마토그래피에 의해 정제되어졌다(Biotage System, column FLASH 40+M^TM KP-Sil, 용리액: 편차 n-헥산/에틸 초산염 9/1(200ml), 2000ml동안 n-헥산/에틸 초산염 3/7에 대하여, n-헥산/에틸 초산염 3/7(600ml)). 생산물(0.29 g)이 얻어졌다.

이 생산물은 n-헥산/에틸 초산염에 의해 결정화되어졌다

M.p.= 199-200℃

¹H-NMR: (DMSO), δ: 7.65 (2H, d); 7.38 (1H, d); 7.27(1H, d);

5.60 (1H, dm); 5.50 (1H, s); 5.35 (2H, m); 4.60 (2H, t); 4.35

(2H, t); 4.20 (1H, m); 3.89 (3H, s); 2.75-2.50 (2H, m); 2.25

(1H, m); 2.00 (2H, m); 1.90-1.30 (13H, m); 1.15 (3H, s); 0.83

(3H, s).

예 2 - (화합물 (3))

5,6-비스(니트로옥시)헥실[bis(nitrooxxy)hexyl] 4-((2-((6S,9R,10S,11S,13S,16R,17S)-6,9-디플루오로(difluoro)-11-하이드록시(hydroxy)-16,17-((1-메틸에틸이데네)비스(옥시)[(1-methylethylidene)bis(oxy)]-10,13-디메틸(dimethyl)-3-옥소(oxo)-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-도데카히드로(dodecahydro)-3H-싸이클로펜타(cyclopenta)[a]페난트렌(phenanthren)-17-yl)-2-옥소에톡시(oxoethoxy))카르보닐옥시(carbonyloxy)-3-메톡시벤조산염(methoxybenzoate)의 합성

D) 헥스(hex)-5-에닐(enyl) 4-히드록시(hydroxy)-3-메톡시벤조산염 (methoxybenzoate)

N,N-디메틸포름아미드(dimethylformamide)(50ml)에 있는 바닐릭(vanillic)산(0.6 g, 3.56 mmol)의 용해액에, 디이소프로필에틸아민(diisopropylethylamine)(0.93 ml, 5.35 mmol) 및 6-브로모헥스(bromohex)-1-엔(ene) (0.71 ml, 5.35 mmol)을 첨가 하였다. 반응은 50℃로 8시간 동안 교반되어졌다. 용매는 진공하에서 증발되어졌다. 잔기는 속성크로마토그래피에 의해 정제되어졌다(Biotage System, column FLASH 40+M^TM KP-Sil, 용리액: 편차 n-헥산/에틸 초산염 95/5(200ml), 2000ml동안 n-헥산/에틸 초산염 7/3에 대하여, n-헥산/에틸 초산염 3/7(400ml)). 생산물(0.59 g)이 얻어졌다.

E) 헥스(hex)-5-에닐(enyl) 4-(터어트-부틸디메틸실릴옥시 (tert-butyldimethylsilyloxy))-3-메톡시벤조산염(methoxybenzoate)

N,N-디메틸포름아미드(dimethylformamide)(30ml)에 있는 화합물 D (1.16 g, 4.64 mmol)의 용해액에, 이미다졸(imidazole) (1.18 g, 17.40 mmol) 및 터어트-부틸디메틸클로로실란(tert-butyldimethylchlorosilane) (1.31 g, 8.7 mmol)을 첨가 하였다. 반응은 상온에서 12시간 동안 교반되어졌다. 혼합물은 물 (50 ml) 용매에 부어졌고 디에틸(diethyl) 에테르(ether)와 함께 추출되어졌다. 유기층들은 황산나트륨을 통해 건조되고 환산압력하에서 농축되어졌다. 잔기는 속성크로마토그래피에 의해 정제되어졌다(Biotage System, column FLASH 40+M^TM KP-Sil, 용리액: 편차 n-헥산/에틸 초산염 95/5. 생산물(1.56 g)이 얻어졌다.

F) 5,6-비스(니트로옥시)헥실[Bis(nitrooxy)hexyl]-4-(터어트-부틸디메틸실릴옥시(tert-butyldimethylsilyloxy))-3-메톡시벤조산염(methoxybenzoate)

아세토니트릴(acetonitrile) (30ml)에 있는 화합물 E (1.4 g, 3.97 mmol)의 용해액에 질산은 (0.8 g, 4.77 mmol)이 첨가 되였다. 반응은 -15℃에서 냉각되어 졌고 이오딘(iodine) (1.21 g, 4.77 mmol)이 첨가 되었다. 반응은 -15℃에서 20분 동안 교반되어졌다. 온도가 25℃까지 높여 졌고 이오딘(iodine) (2.7 g, 15.9 mmol)이 첨가 되었다. 반응은 초음파 방사 아래서 60분 동안 100℃로 가열되어졌다. 결과 혼합물은 냉각되어 지고, 걸러 지고, 용매는 환산압력하에서 제거되어졌다. 잔기는 속성크로마토그래피에 의해 정제되어졌다(Biotage System, column FLASH 40+M^TM KP-Sil, 용리액: 편차 n-헥산/에틸 초산염 9/1 (400 ml), 2000ml동안 n-헥산/에틸 초산염 7/3에 대하여, n-헥산/에틸 초산염 7/3(400ml)). 생산물(1.19 g)이 얻어졌다.

G) 5,6-비스(니트로옥시)헥실[Bis(nitrooxy)hexyl] 4-히드록시(hydroxy)-3-메톡시벤조산염(methoxybenzoate)

-0℃로 냉각된 테트라히드로푸란(tetrahydrofurane) (40ml)에 있는 화합물 F (1.19 g, 2.43 mmol)의 용해액에, 테트라히드로푸란(tetrahydrofurane) (2.43 ml, 2.43 mmol)의 데트라부틸암모늄(tetrabutylamonium) 플로라이드(floride) 1M의 용해액이 첨가 되였다. 반응은 0℃에서 20분 동안 교반되었다. 그 혼합물은 5% 수용액의 NaH₂PO₄ 용액속에 넣어 지고 에틸(ethyl) 아세테이트(acetate) (3x50ml)와 함께 추출되어졌다. 유기층들은 물(50 ml)로 세정되었고, 황산나트륨을 통해 건조되고 환산압력하에서 농축되어졌다. 잔기는 속성크로마토그래피에 의해 정제되어졌다(Biotage System, column FLASH 40+M^TM KP-Sil, 용리액: 편차 n-헥산/에틸 초산염 9/1(200ml), 1000ml동안 n-헥산/에틸 초산염 1/1에 대하여, n-헥산/에틸 초산염 1/1(200ml)), 200ml동안 n-헥산/에틸 초산염 4/6에 대하여, n-헥산/에틸 초산염 4/6 (400ml)). 생산물(0.9 g)이 얻어졌다.

H) 2-((6S,9R,10S,11S,13S,16R,17S)-6,9-디플루오로(difluoro)-11-하이드록시(hydroxy)-16,17-((1-메틸에틸이데네)비스(옥시)[(methylethylidene)bis(oxy)] -10,13-디메틸(dimethyl)-3-옥소(oxo)-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-도데카히드로(dodecahydro)-3H-싸이클로펜타(cyclopenta)[a]페난트렌(phenanthren)-17-yl)-2-옥소에틸(oxoethyl) 카르보노클로리데이트(carbonochloridate)

N₂하에서 그리고 0℃로 냉각된, 테트라히드로푸란(tetrahydrofurane) (24ml)에 있는 플루오씨놀론(fluocinolone) 아세토나이드(acetonide)(1.2 g, 2.65mmol)의 용해액에, 포스겐(phosgene) (5.58 ml, 10.6 mmol)의 20% 톨루엔 용액을 첨가하였다. 반응은 30분 동안 0℃에서 그리고 실온에서 12시간 동안 교반되어졌다. 포스겐의 과잉분은 40℃에서 45분 동안 가열함에 의해 제거되었다. 그 용매는 진공하에서 증발되어졌다. 그 조제물은 아무런 정제 없이 다음 단계에 사용되어졌다.

I) 5,6-비스(니트로옥시)헥실[bis(nitrooxxy)hexyl] 4-((2-((6S,9R,10S,11S,13S,16R,17S)-6,9-디플루오로(difluoro)-11-하이드록시(hydroxy)-16,17-((1-메틸에틸이데네)비스(옥시)[(1-methylethylidene)bis(oxy)]-10,13-디메틸(dimethyl)-3-옥소(oxo)-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-도데카히드로(dodecahydro)-3H-싸이클로펜타(cyclopenta)[a]페난트렌(phenanthren)-17-yl)-2-옥소에톡시(oxoethoxy))카르보닐옥시(carbonyloxy)-3-메톡시벤조산염(methoxybenzoate)

디클로로메탄(dichloromethane)(24ml)에 있는 화합물 H (0.56 g, 1.09 mmol)의 용해액에, 디이소프로필에틸아민(diisopropylethylamine) (0.21 ml, 1.2 mmol)을 첨가하였다. 반응은 0℃로 냉각되어졌고, 디클로로메탄(dichloromethane)(3 ml)에 있는 화합물 G (0.45 g, 1.2 mmol)의 용해액이 첨가되었다. 반응은 실온에서 12시간 동안 교반되어졌다. 용매는 진공하에서 증발되어졌다. 잔기는 속성크로마토그래피에 의해 정제되어졌다(Biotage System, column FLASH 40+M^TM KP-Sil, 용리액: 편차 n-헥산/에틸 초산염 8/2(200ml), 2400ml동안 n-헥산/에틸 초산염 2/8에 대하여, n-헥산/에틸 초산염 2/8(400ml)). 생산물 (0.67 g)이 얻어졌다.

¹H-NMR: (CDCl₃), δ: 7.70 (2H, d); 7.30 (1H, d); 7.07(1H, d);

6.45 (1H, s); 6.38 (1H, dd); 5.52-5.28 (2H, m); 5.16-4.91 (2H, dd); 5.04

(1H, d); 4.74 (1H, dd); 4.50 (1H, m); 4.43-4.35 (3H, m); 3.95

(3H, s); 2.60-2.10 (4H, m); 1.90-1.47 (16H, m); 1.15 (3H, s); 1.25

(3H, s); 0.95 (3H, s).

예 3 (화합물 (5))

2-(2-(2-(니트로옥시)에톡시)에톡시)에틸 4-((2-((6S,9R,10S,11S,13S,16R,17S)-6,9-디플루오로(difluoro)-11-하이드록시(hydroxy)-16,17-((1-메틸에틸이데네)비스(옥시)[(methylethylidene)bis(oxy)]-10,13-디메틸(dimethyl)-3-옥소(oxo)-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-도데카히드로(dodecahydro)-3H-싸이클로펜타(cyclopenta)[a]페난트렌(phenanthren)-17-yl)-2-옥소에톡시(oxoethoxy))카르보닐옥시(carbonyloxy))-3-메톡시벤조산염(methoxybenzoate)의 합성

J) 4-(터어트-부틸디메틸실릴옥시(tert-butyldimethylsilyloxy))-3-메톡시벤조산염(methoxybenzoate)

N,N-디메틸포름아미드(dimethylformamide)(50ml)에 있는 바닐릭 산(vanillic acid) (2.0 g, 11.89 mmol)의 용해액에, 이미다졸(imidazole) (4.04 g, 59.45 mmol) 및 터어트-부틸디메틸클로로실란(tert-butyldimethylchlorosilane) (4.48 g, 29.72 mmol)을 첨가 하였다. 반응은 실온에서 24시간 동안 교반되어졌다. 혼합물은 물 (70 ml) 용매에 부어졌고 디에틸(diethyl) 에테르(ether) (3x70ml)와 함께 추출되어졌다. 유기층들은 황산나트륨을 통해 건조되고 환산압력하에서 농축되어졌다. 잔기는 속성크로마토그래피에 의해 정제되어졌다(Biotage System, column FLASH 40+M^TM KP-C18 HS, 용리액: 1200 ml 동안 아세토니트릴(acetonitrile)/물 80/20에 대하여, 편차 아세토니트릴(acetonitrile)/물 65/35 (600 ml). 생산물 (0.70 g)이 얻어졌다.

K) 2-(2-(2-클로로에톡시(chloroethoxy)에톡시(ethoxy))에틸(ethyl)-4-(터어트-부틸디메틸실릴옥시(tert-butyldimethylsilyloxy))-3-메톡시벤조산염(methoxybenzoate)

디클로로메탄(dichloromethane) (60 ml)에 있는 화합물 J (1.25 g, 4.42 mmol)의 용해액에, 2-(클로로에톡시(chloroethoxy))-에톡시 에타놀(ethoxy ethanol) (0.83 g, 5.75 mmol) 및 DMAP (cat. amount)를 첨가 하였다. 반응은 0℃로 냉각 되어 졌고 EDAC (1.10 g, 5.75 mmol)이 첨가 되었다. 반응은 실온에서 12시간 동안 교반 되어졌다. 용매는 진공하에서 증발되어졌다. 잔기는 속성크로마토그래피에 의해 정제되어졌다(Biotage System, Cartridge column FLASH 40+M^TM KP-Sil, 용리액: 편차 n-헥산/에틸 초산염 9/1 (40ml), 2000ml동안 n-헥산/에틸 초산염 6/4에 대하여, n-헥산/에틸 초산염 6/4 (400ml)). 생산물 (1.25 g)이 얻어졌다.

L) 2-(2-(2-니트로옥시에톡시(nitrooxyethoxy)에톡시(ethoxy))에틸(ethyl)-4-(터어트-부틸디메틸실릴옥시(tert-butyldimethylsilyloxy))-3-메톡시벤조산염(methoxybenzoate)

아세토니트릴(acetonitrile) (45ml)에 있는 화합물 K (1.53 g, 3.54 mmol)의 용해액에 나트륨 요오드화물(sodium iodide) (3.18 g, 21.24 mmol)이 첨가 되였다. 반응은 초단파 주사하에서 20분 동안 120℃로 가열되어졌다. 결과 혼합물은 냉각되어 지고, 걸러지고, 용매는 환산압력하에서 제거되어졌다. 아세토니트릴(acetonitrile) (45ml)에 있는 잔기의 용해액에 질산은(silver nitrate) (2.04 g, 14.16 mmol)이 첨가되었다. 반응은 초단파 주사하에서 5분 동안 120℃로 가열되어졌다. 결과 혼합물은 냉각되고, 걸러지고, 용매는 환산압력하에서 제거되어졌다. 잔기는 속성크로마토그래피에 의해 정제되어졌다(Biotage System, column FLASH 40+M^TM KP-Sil, 용리액: 편차 n-헥산/에틸 초산염 9/1 (600 ml), 2000ml동안 n-헥산/에틸 초산염 6/4에 대하여, n-헥산/에틸 초산염 6/4 (400ml)). 생산물(1.37 g)이 얻어졌다.

M) 2-(2-(2-니트로옥시에톡시(nitrooxyethoxy)에톡시(ethoxy))에틸(ethyl)-4-히드록시(hydroxy)-3-메톡시벤조산염(methoxybenzoate)

-0℃로 냉각된 테트라히드로푸란(tetrahydrofurane) (40ml)에 있는 화합물 L (1.10 g, 2.4 mmol)의 용해액에, 테트라히드로푸란(tetrahydrofurane) (2.4 ml, 2.4 mmol)의 데트라부틸암모늄(tetrabutylamonium) 플로라이드(floride) 1M의 용해액이 첨가 되였다. 반응은 0℃에서 20분 동안 교반되었다. 그 혼합물은 5% 수용액의 NaH₂PO₄ 용액속에 넣어 지고 에틸(ethyl) 아세테이트(acetate) (3x50ml)와 함께 추출되어졌다. 유기층들은 물 (100 ml)로 세정되었고, 황산나트륨을 통해 건조되고 환산압력하에서 농축되어졌다. 잔기는 속성크로마토그래피에 의해 정제되어졌다(Biotage System, column FLASH 40+M^TM KP-Sil, 용리액: 편차 n-헥산/에틸 초산염 9/1 (600ml), 2000ml동안 n-헥산/에틸 초산염 1/1에 대하여, n-헥산/에틸 초산염 1/1 (200ml)), 200ml동안 n-헥산/에틸 초산염 4/6에 대하여, n-헥산/에틸 초산염 1/1 (400ml)). 생산물(0.76 g)이 얻어졌다.

N) 2-(2-(2-(니트로옥시)(nitrooxy)에톡시(ethoxy))에틸(ethyl) 4-((2-((6S,9R,10S,11S,13S,16R,17S)-6,9-디플루오로(difluoro)-11-하이드록시(hydroxy)-16,17-((1-메틸에틸이데네)비스(옥시)[(1-methylethylidene)bis(oxy)]-10,13-디메틸(dimethyl)-3-옥소(oxo)-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-도데카히드로(dodecahydro)-3H-싸이클로펜타(cyclopenta)[a]페난트렌(phenanthren)-17-yl)-2-옥소에톡시(oxoethoxy))카르보닐옥시(carbonyloxy)-3-메톡시벤조산염(methoxybenzoate)

디클로로메탄(dichloromethane) (15 ml)에 있는 화합물 H (0.508 g, 0.98 mmol)의 용해액에, 디이소프로필에틸아민(diisopropylethylamine) (0.18 ml, 1.06 mmol)을 첨가 하였다. 반응은 0℃로 냉각 되어 졌고 디클로로메탄(dichloromethane)(3 ml)에 있는 화합물 M (0.37 g, 1.08 mmol)의 용해액이 첨가 되었다. 반응은 실온에서 12시간 동안 교반 되어졌다. 용매는 진공하에서 증발되어졌다. 잔기는 속성크로마토그래피에 의해 정제되어졌다(Biotage System, column FLASH 40+M^TM KP-Sil, 용리액: 편차 n-헥산/에틸 초산염 8/2 (200ml), 2400ml동안 에틸 초산염 100%에 대하여, 에틸 초산염 100% (400ml)). 생산물 (0.70 g)이 얻어졌다.

¹H-NMR: (CDCl₃), δ: 7.70 (2H, d); 7.30 (1H, d); 7.07(1H, d);

6.45 (1H, s); 6.38 (1H, dd); 5.52-5.32 (1H, m); 5.15-4.91 (2H, dd); 5.04

(1H, d); 4.57-4.49 (4H, m); 4.41 (1H, m); 3.95 (3H, s); 3.84

(2H, dd); 3.78 (2H, dd); 3.68 (4H, m); 2.60-2.10 (4H, m); 1.90-1.47 (10H, m); 1.25 (3H, s); 0.95 (3H, s).

예 4 (화합물 (6))

4-(니트로옥시)부틸[(nitrooxy)butyl] 3-((2-((6S,9R,10S,11S,13S,16R,17S)-6,9-디플루오로(difluoro)-11-하이드록시(hydroxy)-16,17-((1-메틸에틸이데네)비스(옥시)[(methylethylidene)bis(oxy)]-10,13-디메틸(dimethyl)-3-옥소(oxo)-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-도데카히드로(dodecahydro)-3H-싸이클로펜타(cyclopenta)[a]페난트렌(phenanthren)-17-yl)-2-옥소에톡시(oxoethoxy))카르보닐옥시(carbonyloxy))-4,5-디히드록시벤조산염(dihydroxybenzoate)의 합성

O) 메틸(methyl) 7-히드록시(hydroxy)-2-(4-메톡시페닐(methoxyphenyl))벤조(benzo)[d][1,3]디옥솔(dioxole)-5-카르복실레이트(carboxylate)

톨루엔(toluene) (25 ml)에 있는 메틸 갈산염(methyl gallate) (10 g, 54.3 mmol)의 현탁액에 p-톨루엔슬포닉 산(p-toluensulfonic acid) (29 mg) 및 p-아니살데히데디메틸아세탈(p-anisaldehydedimethylacetal) (11.56 ml, 67.88 mmol)을 첨가 하였다. 반응은 계속적으로 물을 제거하면서 1.5시간 동안 환류되어졌다. 그 혼합물은 디클로로메탄(dichloromethane) (70 ml)로 희석되고 포화된 수용성 NaHCO₃ 용액 (100 ml)로 세정되며 에틸(ethyl) 아세테이트(acetate) (3x50ml)와 함께 추출되어졌다. 유기층들은 물 (100 ml)로 세정 되었고, 소듐 울페이트(sodium ulphate)를 통해 건조되고 환산압력하에서 농축되어졌다. 잔기는 n-헥산(n-hexane)에 의해 결정화되어졌다. 생산물 (8.6 g)이 얻어졌다.

P) 7-히드록시(hydroxy)-2-(4-메톡시페닐(methoxyphenyl))벤조(benzo)[d][1,3]디옥솔(dioxole)-5-카르복실산(carboxylic acid)

물/에타놀(ethanol) 5/95 (260 ml)에 있는 화합물 O (8.6 g, 28.41 mmol)의 현탁액에 수산화나트륨 (2.5 ml, 62.5 mmol)을 첨가 하였다. 반응은 15시간 동안 환류되어졌다. 그 용매는 진공하에서 증발되어졌다. 잔기는 물 (150 ml)에서 용해되어 졌고 에틸(ethyl) 아세테이트(acetate) (100 ml)와 함께 추출되어졌다. 수용액 층은 1N 수용성 HCl과 함께 pH 4 에 산성화되어졌고 에틸(ethyl) 아세테이트(acetate) (6x50 ml)와 함께 추출되어졌다. 유기층들은 소듐 울페이트(sodium ulphate)를 통해 건조되고 환산압력하에서 농축되어졌다. 그 조제물은 아무런 정제 없이 다음 단계에 사용되어졌다.

Q) 4-(니트록시(nitrooxy))부틸(butyl)-7-히드록시(hydroxy)-2-(4-메톡시페닐(methoxyphenyl))벤조(benzo)[d][1,3]디옥솔(dioxole)-5-카르복실레이트(carboxylate)

N,N-디메틸포름아미드(dimethylformamide)(50ml)에 있는 화합물 P (5.78 g, 20.05 mmol)의 용해액에, 세슘(cesium) 탄산염 (6.52 g, 20.05 mmol)을 첨가 하였다. 반응은 0℃로 냉각되어졌고 디클로로메탄(dichloromethane) (19.85 g)에 있는 1-브로모(bromo)-4-(니트로옥시(nitrooxy))부탄(butane)의 20% 용액이 첨가 되었다. 반응은 실온에서 40시간 동안 교반되어졌다. 혼합물은 5% 수용액의 NaH₂PO₄ 용액속에 넣어 지고 디에틸(diethyl) 에테르(ether) (2x70ml)와 함께 추출되어졌다. 유기층들은 물 (50 ml)로 세정되었고, 소듐 울페이트(sodium ulphate)를 통해 건조되고 환산압력하에서 농축되어졌다. 잔기는 속성크로마토그래피에 의해 정제되어졌다(Biotage System, SNAP Cartridge silica 100 g, 용리액: 편차 n-헥산/에틸 초산염 9/1 (200ml), 1200ml동안 n-헥산/에틸 초산염 1/1에 대하여, n-헥산/에틸 초산염 1/1 (400ml)). 생산물(4.36 g)이 얻어졌다.

R) 4-(니트로옥시)부틸[(nitrooxy)butyl] 7-((2-((6S,9R,10S,11S,13S,16R,17S)-6,9-디플루오로(difluoro)-11-하이드록시(hydroxy)-16,17-((1-메틸에틸이데네)비스(옥시)[(methylethylidene)bis(oxy)]-10,13-디메틸(dimethyl)-3-옥소(oxo)-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-도데카히드로(dodecahydro)-3H-싸이클로펜타(cyclopenta)[a]페난트렌(phenanthren)-17-yl)-2-옥소에톡시(oxoethoxy))카르보닐옥시(carbonyloxy))-2-(4-메톡시페닐(methoxyphenyl))벤조(benzo)[d][1,3]디옥솔(dioxole)-5-카르복실레이트(carboxylate)

디클로로메탄(dichloromethane) (13 ml)에 있는 화합물 Q (0.519 g, 1.28 mmol)의 용해액에, 디이소프로필에틸아민(diisopropylethylamine) (0.179 ml, 1.28 mmol)을 첨가 하였다. 반응은 0℃로 냉각되었고 디클로로메탄(dichloromethane)(3 ml)에 있는 화합물 H (0.6 g, 1.16 mmol)의 용해액이 첨가되었다. 반응은 실온에서 16시간 동안 교반 되어졌다. 용매는 진공하에서 증발되어졌다. 잔기는 속성크로마토그래피에 의해 정제되어졌다(Biotage System, SNAP Cartridge silica 100 g, 용리액: 편차 n-헥산/에틸 초산염 9/1 (200ml), 1200ml동안 n-헥산/에틸 초산염 3/7에 대하여, n-헥산/에틸 초산염 3/7 (400ml)). 생산물 (0.979 g)이 얻어졌다.

4-(니트로옥시)부틸[(nitrooxy)butyl] 3-((2-((6S,9R,10S,11S,13S,16R,17S)-6,9-디플루오로(difluoro)-11-하이드록시(hydroxy)-16,17-((1-메틸에틸이데네)비스(옥시)[(methylethylidene)bis(oxy)]-10,13-디메틸(dimethyl)-3-옥소(oxo)-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-도데카히드로(dodecahydro)-3H-싸이클로펜타(cyclopenta)[a]페난트렌(phenanthren)-17-yl)-2-옥소에톡시(oxoethoxy))카르보닐옥시(carbonyloxy))-4,5-디히드록시벤조산염(dihydroxybenzoate)

테트라히드로푸란(tetrahydrofurane) (22.4 ml)에 있는 화합물 R (0.97 g, 1.09 mmol)의 용해액에, 1N 수용액 HCl이 첨가되었다. 반응은 실온에서 17시간 동안 교반되어졌다. 용매는 진공하에서 증발되어졌다. 잔기는 에틸(ethyl) 아세테이트(acetate) (2x30ml)와 함께 추출되어졌다. 유기층들은 황산나트륨을 통해 건조되고 환산압력하에서 농축되어졌다. 잔기는 속성크로마토그래피에 의해 정제되어졌다(Biotage System, SNAP Cartridge silica 100 g, 용리액: 편차 아세톤(acetone)/디클로로메탄(dichloromethane) 5/95 (200 ml), 900 ml 동안 아세톤(acetone)/디클로로메탄(dichloromethane) 2/8에 대하여, 600 ml 동안 아세톤(acetone)/디클로로메탄(dichloromethane) 3/7에 대하여. 생산물 (0.344 g)이 얻어졌다.

¹H-NMR: (CDCl₃), δ: 7.51 (2H, dd); 7.14 (1H, d); 6.47(1H, s);

6.40 (1H, dd); 5.52-5.32 (1H, m); 5.24-4.93 (2H, dd); 5.03

(1H, d); 4.53 (2H, t); 4.43-4.33 (3H, m); 2.54-2.17 (4H, m); 2.00-1.65 (8H, m); 1.53 (3H, s); 1.47 (3H, s); 1.25 (3H, s) 0.94 (3H, s).

예 5 (화합물 (10))

4-(니트로옥시)부틸[(nitrooxy)butyl] 3-((2-((6S,9R,10S,11S,13S,16R,17S)-9-플루오로(fluoro)-11-하이드록시(hydroxy)-16,17-((1-메틸에틸이데네)비스(옥시)[(methylethylidene)bis(oxy)]-10,13-디메틸(dimethyl)-3-옥소(oxo)-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-도데카히드로(dodecahydro)-3H-싸이클로펜타(cyclopenta)[a]페난트렌(phenanthren)-17-yl)-2-옥소에톡시(oxoethoxy))카르보닐옥시(carbonyloxy))-4,5-디히드록시벤조산염(dihydroxybenzoate)의 합성

S) 2-((9R,10S,11S,13S,16R,17S)-9-플루오로(fluoro)-11-하이드록시(hydroxy)-16,17-((1-메틸에틸이데네)비스(옥시)[(methylethylidene)bis(oxy)])-10,13-디메틸(dimethyl)-3-옥소(oxo)-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-도데카히드로(dodecahydro)-3H-싸이클로펜타(cyclopenta)[a]페난트렌(phenanthren)-17-yl)-2-옥소에틸(oxoethyl)카르보노클로리데이트(carbonochloridate)

테트라히드로푸란(tetrahydrofurane) (33 ml)에 있는 트리암씨놀론(triamcinolone) 아세토나이드(acetonide) (3 g, 6.9 mmol)의 용해액에, 0℃로 냉각되고 N₂하에서, 포스겐(phosgene)의 20% 톨루엔(toluene) 용액 (21.8 ml, 41.4 mmol)을 첨가하였다. 반응은 1시간 동안 0℃로 그리고 실온에서 17시간 동안 교반되어졌다. 포스겐의 잉여분은 30분 동안 40℃로 가열함에 의해 제거되었다. 용매는 진공하에서 증발되어졌다. 그 조제물은 아무런 정제 없이 다음 단계에 사용되어졌다.

T) 4-(니트로옥시)부틸[(nitrooxy)butyl] 7-((2-((9R,10S,11S,13S,16R,17S)-9-플루오로(fluoro)-11-하이드록시(hydroxy)-16,17-((1-메틸에틸이데네)비스(옥시)[(methylethylidene)bis(oxy)]-10,13-디메틸(dimethyl)-3-옥소(oxo)-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-도데카히드로(dodecahydro)-3H-싸이클로펜타(cyclopenta)[a]페난트렌(phenanthren)-17-yl)-2-옥소에톡시(oxoethoxy))카르보닐옥시(carbonyloxy))-2-(4-메톡시페닐(methoxyphenyl))벤조(benzo)[d][1,3]디옥솔(dioxole)-5-카르복실레이트(carboxylate)

디클로로메탄(dichloromethane) (14 ml)에 있는 화합물 Q (0.583 g, 1.32 mmol)의 용해액에, 디이소프로필에틸아민(diisopropylethylamine) (0.231 ml, 1.32 mmol)을 첨가 하였다. 반응은 0℃로 냉각 되어 졌고 디클로로메탄(dichloromethane)(3 ml)에 있는 화합물 S (0.6 g, 1.2 mmol)의 용해액이 첨가 되었다. 반응은 실온에서 16시간 동안 교반 되어졌다. 용매는 진공하에서 증발되어졌다. 잔기는 속성크로마토그래피에 의해 정제되어졌다(Biotage System, SNAP Cartridge silica 100 g, 용리액: 편차 n-헥산/에틸 초산염 9/1 (200ml), 1200ml동안 n-헥산/에틸 초산염 3/7에 대하여, n-헥산/에틸 초산염 3/7 (400ml)). 생산물 (0.819 g)이 얻어졌다.

U) 4-(니트로옥시)부틸[(nitrooxy)butyl] 3-((2-((9R,10S,11S,13S,16R,17S)-9-플루오로(fluoro)-11-하이드록시(hydroxy)-16,17-((1-메틸에틸이데네)비스(옥시)[(methylethylidene)bis(oxy)]-10,13-디메틸(dimethyl)-3-옥소(oxo)-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-도데카히드로(dodecahydro)-3H-싸이클로펜타(cyclopenta)[a]페난트렌(phenanthren)-17-yl)-2-옥소에톡시(oxoethoxy))카르보닐옥시(carbonyloxy))-4,5-디히드록시벤조산염(dihydroxybenzoate)

테트라히드로푸란(tetrahydrofurane) (19.5 ml)에 있는 화합물 T (0.81 g, 0.93 mmol)의 용해액에, 1N 수용액 HCl (19.5 ml)이 첨가되었다. 반응은 실온에서 18시간 동안 교반되어졌다. 용매는 진공하에서 증발되어졌다. 잔기는 에틸(ethyl) 아세테이트(acetate) (2x30ml)와 함께 추출되어졌다. 유기층들은 황산나트륨을 통해 건조되고 환산압력하에서 농축되어졌다. 잔기는 속성크로마토그래피에 의해 정제되어졌다(Biotage System, SNAP Cartridge silica 100 g, 용리액: 편차 아세톤(acetone)/디클로로메탄(dichloromethane) 5/95 (200 ml), 900 ml 동안 아세톤(acetone)/디클로로메탄(dichloromethane) 3/7에 대하여, 아세톤(acetone)/디클로로메탄(dichloromethane) 3/7 (200 ml). 생산물 (0.245 g)이 얻어졌다.

¹H-NMR: (CDCl₃), δ: 7.51 (2H, dd); 7.23 (1H, d); 6.38(1H, s);

6.18 (1H, dd); 5.21-4.90 (2H, dd); 5.03(1H, d); 4.53 (2H, t); 4.41-4.32 (3H, m); 2.69-2.35 (4H, m); 2.00-1.65 (10H, m); 1.53 (3H, s); 1.45 (3H, s); 1.24 (3H, s) 0.94 (3H, s).

예 6 (화합물 (17))

2-(2-(2-(니트로옥시)(nitrooxy)에톡시(ethoxy))에톡시(ethoxy))에틸(ethyl) 4-((2-((9R,10S,11S,13S,16R,17S)-9-플루오로(fluoro)-11-하이드록시(hydroxy)-16,17-((1-메틸에틸이데네)비스(옥시)[(1-methylethylidene)bis(oxy)]-10,13-디메틸(dimethyl)-3-옥소(oxo)-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-도데카히드로(dodecahydro)-3H-싸이클로펜타(cyclopenta)[a]페난트렌(phenanthren)-17-yl)-2-옥소에톡시(oxoethoxy))카르보닐옥시(carbonyloxy)-3-메톡시벤조산염(methoxybenzoate)

이 화합물은 화합물 S 및 화합물 M으로부터 출발하여 예 3에 개시된 공정을 따라 합성되어졌다.

¹H-NMR: (CDCl₃), δ: 7.71 (2H, d); 7.26 (1H, d); 7.15(1H, d);

6.31 (1H, dd); 6.12 (1H, s); 5.12 (1H, d); 4.91 (1H, d); 5.01 (2H, d); 4.56 (2H, m); 4.49 (2H, t); 4.40 (1H, m); 3.95 (3H, s); 3.79 (2H, t); 3.76 (2H, m); 3.67 (4H, m); 2.65-2.35 (4H, m); 2.15-2.00 (1H, m); 1.92-1.84 (1H, m); 1.72-1.55 (2H, m); 1.51 (3H, s); 1.45 (3H, s); 1.25 (5H, m); 0.93 (3H, s).

예 7 (화합물 (18))

4-(니트로옥시)부틸[(nitrooxy)butyl] 4-((2-((9R,10S,11S,13S,16R,17S)-9-플루오로(fluoro)-11-하이드록시(hydroxy)-16,17-(1-메틸에틸이데네비스(옥시))[1-methylethylidenebis(oxy)]-10,13-디메틸(dimethyl)-3-옥소(oxo)-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-도데카히드로(dodecahydro)-3H-싸이클로펜타(cyclopenta)[a]페난트렌(phenanthren)-17-yl)-2-옥소에톡시(oxoethoxy))카르보닐옥시(carbonyloxy)-3-메톡시벤조산염(methoxybenzoate)

이 화합물은 트리암씨놀론(triamcinolone) 아세토나이드(acetonide) 및 화합물 B로부터 출발하여 예 1에 개시된 공정을 사용하여 합성되어졌다.

¹H-NMR: (CDCl₃), δ: 7.65 (2H, m); 7.26 (1H, d); 7.17(1H, d); 6.40 (1H, dd); 6.10 (1H, s); 5.11-4.84 (2H, dd); 4.99 (1H, d); 4.53 (2H, t); 4.37 (2H, t); 4.49 (2H, t); 3.93 (3H, s); 2.71-2.30 (5H, m); 2.00-1.50 (6H, m); 1.87 (4H, m); 1.50 (3H, s); 1.41 (3H, s); 1.22 (3H, s); 0.92 (3H, s).

예 F1: 혈관 장력에 대한 평가분석

테스트 화합물:

- 예 1에 개시된 화합물 (1)

- 예 2에 개시된 화합물 (3)

- 예 3에 개시된 화합물 (5)

- 예 4에 개시된 화합물 (6)

- 예 5에 개시된 화합물 (10)

- 예 7에 개시된 화합물 (18)

기준 화합물:

플루오씨놀론 아세토나이드(fluocinolone acetonide) (FC)

트리암씨놀론 아세토나이드(triamcinolone acetonide) (TAAC)

선구물질 화합물과 비교하여 혈관이완을 유도하기 위한 본 발명의 화합물들의 능력이 고립된 토끼 가슴 대동맥 제제로 테스트되어졌다(Wanstall J. C. 등, Br. J. Pharmacol., 134: 463-472, 2001). 뉴질랜드 수컷 토끼들 (1, 8-2 Kg)이 사용되어졌다. 이 동물들은 소듐 티오펜탈(sodium thiopental) (50 mg/kg, iv)로 마취되어졌고, 사혈에 의해 희생되어 진 후 가슴을 열고 대동맥이 해부되었다. 대동맥들은 즉시 Krebs-HEPES 버퍼(buffer)(pH 7.4; 조성물 mM: NaCl 130.0, KCl 3.7, NaHCO₃ 14.9, KH₂PO₄ 1.2, MgSO₄·7H₂O 1.2, 글루코스(Glucose) 11.0, HEPES 10.0, CaCl₂·2H₂O 1.6)에 놓여졌고 링(ring) 단량체로 잘려졌다(4-5 mm 길이). 각 링은 95% O₂ 및 5% CO₂의 이산화 탄소를 함유한 Krebs-HEPES 버퍼(buffer) (37℃)로 충진된 5 ml 티슈 배스(tissu bath)에 놓여졌고 그리고 등척성 장력의 측정을 위한 BIOPAC MP150 시스템 ² 에 연결된 포스 트랜스듀서(force transducer) (grass FT03)에 부착되어졌다. 이 제제는 매 15분 마다 버퍼의 변경과 함께 2g의 휴지 장력에서 1시간 동안 평형을 잡도록 허락되었고, 간섭 세정으로 90 mM KCl에 노출함(3회)에 의해 자극되어졌다. 평행 후, 링들은 메톡스아민(methoxamine) (3μM)으로 준최대적으로 사전 수축되어졌고, 그리고 그 수축이 안정상태에 도달할 때, 테스트 화합물들에 대한 누적 수축-응답 커버가 얻어졌다. 투여량 사이의 시간 간격은 완전한 안정상태 응답에 도달할 때까지 필요한 시간에 기초되어졌다. 테스트 화합물들에 대한 응답은 잔여 수축의 %로 나타내어 졌고 테스트 화합물의 응력에 대하여 도시되었다. EC₅₀ 값은 (여기서 EC₅₀은 테스트 화합물에 대한 최대 이완의 50%를 만드는 응력이다) 이들 도시들로부터 써 넣어졌다.

표 1에서 볼 수 있는 바와 같이, 테스트 화합물들은 응력-의존 방식으로 이완을 유도할 수 있었다.

혈관 장력에 대한 평가분석
테스트 화합물	EC ₅₀ (μM)
FC	효과 없음
화합물 (1)	2.2
화합물 (3)	0.21 ± 0.07
화합물 (5)	0.83 ± 0.25
화합물 (6)	1.44 ± 0.41
TAAC	효과 없음
화합물 (18)	1.56
화합물 (10)	2.35 ± 0.98

예 F2

생체내 VEGF- 유도 누설 쥐 모델에서 본 발명의 화합물들의 효력 평가.

혈관 내피 성장 인자 (VEGF)는 당뇨성 망막 부종 (DME)을 포함하는 다양한 병리적 시험에 혈관 누설의 공통 경로로 작용한다.

테스트 화합물:

- 예 1에 개시된 화합물 (1)

- 플루오씨놀론 아세토나이드(fluocinolone acetonide) (FC): 화합물 (1)의 기준 화합물

- 예 7에 개시된 화합물 (18)

- 트리암씨놀론 아세토나이드(triamcinolone acetonide) (TAAC): 화합물 (18)의 기준 화합물

수컷 Sprague Dawley 쥐들 (~250g; Charles River 실험실)이 이소플루란(isoflurane) 흡입으로 마취되어졌고 0.5%의 테트라카인(tetracaine) 방울을 국소적으로 눈에 넣었다. 동공이 인트라비트리얼(intravitreal) 주입을 안내하는 바늘을 보기 위하여 1%의 국소 씨클로펜톨레이트 히드로클로라이드(cyclopentolate hydrochloride)로 팽창되어졌다. 재조합형 쥐 혈관 내피 성장 인자 (VEGF; 100 ng/눈) 또는 VEGF 100 ng/눈 더하기 테스트 화합물들이 무균 식염내에 있는 0.5%의 카르복시메틸 셀루로즈(carboxymethyl cellulose) (CMC)로 제제되어졌고 30-게이지 바늘로 바이트리어스(vitreous) 내로 주입되어졌다(Xu, Q,등 Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 42: 789-794, 2001). 본 발명의 화합물들은 같은 몰(mol)의 투여량에서 대응하는 스테로이드 코어(steroid cores)에 비교되어졌다. 예를 들면, 25 및 50 μg/눈 에서의 플루오씨놀론 아세토나이드(fluocinolone acetonide)에 비교하기 위하여, 화합물 (1)이 각각 42.4 및 84.7 μg/눈으로 투여되었다. 시험 동물들은 부형약을 받았다. 화합물 (18)도 비교를 위하여 트리암씨놀론 아세토나이드(triamcinolone acetonide)와 나란히 유사하게 투여되었다. 망막혈관누설이 앞서 개시된 바와 같이 측정되었다(Xu, Q,등 Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 42: 789-794, 2001). 테스트 화합물의 약 18시간 후 주입 후에, 쥐들은 케트아민(ketamine) (80 mg/kg) 및 질라진(xylazine) (4 mg/kg) IP로 마취되어졌다. 그 때 45 mg/kg 이반스블루(Evans blue) (EB)가 경정맥 속으로 투입되었다. 염료가 2시간 동안 순회되었다. 가슴 공동이 절개되고 쥐들은 좌측 심실을 통해 0.5 M 시트르산염 버퍼 (pH 3.5, 37℃) 내의 1%의 포르말린(formalin)으로 관류되어졌다. 망막들은 제핵된 눈들로부터 주의깊게 해부되어 졌고, 사전-무게측정된 Eppendorf 튜브에 넣어지고 밤새 진공 속에서 건조되고 건도된 무게를 기록하였다. 이반스 블루(Evans blue)가 70℃에서 18시간 동안 120 μl 포름아미드(formamide) 내의 각 망막을 가온함에 의해 추출되어 졌고, 6000 rpm에서 2시간 동안 원심분리되어졌다. 60 μl의 추출물의 흡광도가 620 nm에서 측정되어 졌고 배경 흡광도는 740 nm로 결정되어졌다. 순수 흡광도는 620 nm 에서의 것으로부터 배경 740 nm를 감함에 의해 계산되어졌다. 포름아미드 내의 이반스 블루의 기준곡선의 측정도 또한 행해졌고 누설은 μl/g/h로 나타내고, 다음에 도시된 바와 같이 계산되어졌다.:

[EB (ng/ml)×1000]/건조 무게 망막 (mg)×순회 시간 (h)×플라즈마(plasma) EB (ng/ml)×100]

하기의 도 1a에서 보는 바와 같이, 100 ng VEGF의 인트라비트리얼 주입은 주입 18시간 후 혈관 투과성에 있어서 3.5-폴드(fold) 증가 (n = 17, p<0.05)하는 것으로 나타났다. 25 μg/눈 의 플루오씨놀론 아세토나이드(fluocinolone acetonide) 및 42.4 μg/눈 의 화합물 (1)의 치료는 각각 86.1% 및 77.1%에 의해 VEGF-유도 누설을 억제하였다(도 1a 및 1b, n=9, p<0.05). 유사하게, 10 μg/눈 투여량의 트리암씨놀론 아세토나이드(triamcinolone acetonide) 및 등가의 투여량의 화합물 (18)은 각각 67.5% 및 54.3%의 감소를 가져왔다(도 2a 및 2b). 모든 경우에 있어서, 누설의 억제는 본 발명의 두 화합물들 (화합물 (1)및 화합물 (18))과 그것에 대응하는 스테로이드 코어를 위한 진폭에 있어서는 유사하였다.

예 F3

본 발명의 화합물에 의한 쥐들에 있어서 스테로이드-유도 안내압(IOP) 상승의 개선에 대한 평가.

테스트 화합물들:

- 예 1에 개시된 화합물 (1)

- 플루오씨놀론 아세토나이드(fluocinolone acetonide) (FC): 기준 화합물

- 화합물 (1)의 니트로-분리(des-nitro) 동족체: 부틸(butyl) 4-((2-((6S,9R,10S,11S,13S,16R,17S)-6,9-디플루오로(difluoro)-11-하이드록시(hydroxy)-16,17-16,17-(1-메틸에틸이데네비스(옥시))[1-methylethylidenebis(oxy)]-10,13-디메틸(dimethyl)-3-옥소(oxo)-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-도데카히드로(dodecahydro)-3H-싸이클로펜타(cyclopenta)[a]페난트렌(phenanthren)-17-yl)-2-옥소에톡시(oxoethoxy))카르보닐옥시(carbonyloxy)-3-메톡시벤조산염(methoxybenzoate).

수컷 브라운 노르웨이 쥐들(250-275g Charles River 실험실)이 IOP 측정 전 일주일 동안 새 환경에 적응되어졌다. 토노랩 토노미터(Tonolab Tonometer) (Tiolat Inc)로 기초 IOP 측정이 테스트 화합물의 인트라비트리얼 주입 전에 의식이 있는 쥐들 (Pease, M. E., 등 J. Glaucoma, 15: 512-519)에 행하여졌다. 그리고, 이 쥐들은 이소플루란(isoflurane) 흡입으로 마취되어졌고 0.5%의 테트라카인(tetracaine) 방울을 국소적으로 눈에 넣었다. 동공이 인트라비트리얼(intravitreal) 주입을 안내하는 바늘을 보기 위하여 1%의 국소 씨클로펜톨레이트 히드로클로라이드(cyclopentolate hydrochloride) 및 2.5%의 페닐레프린(phenylephrine)로 팽창되어졌다. 화합물 (1)은 동일 몰의 투여량으로 대응하는 스테로이드 코어 및 데스-니트로(des-nitro) 동족체에 비교되어졌다. 예를 들면, 25 및 50 μg/눈 의 플루오씨놀론 아세토나이드(fluocinolone acetonide)에 비교하기 위하여, 화합물 (1)을 각각 42.4 및 84.7 μg/눈으로 투여하였다. 화합물 (1)의 데스-니트로 동족체가 39.1 μg/눈 (25 μg/눈 FC와 등가) 투여되었다. 제어동물들은 부형제를 받았다.

다섯 번의 측정이 매 시점에서 평균 되어졌다. IOP 측정은 테스트 화합물의 인트라비트리얼 주입 후 일 및 이주에 시행되었다.

브라운 노르웨이 쥐들에 기초 IOP는 18 mm Hg 였다. 하기의 도 3에서 알 수 있는 바와 같이, 플루오씨놀론 아세토나이드(fluocinolone acetonide)의 주입 후 일주만에 각각 25 μg/눈으로 4 mm Hg 및 50 μg/눈으로 3 mm Hg 씩 증가하였다. 이것은 이 주 후에도 유지되었다 (p<0.05). 그러나, 25 또는 50 μg/눈 (42.4 및 84.7 μg/눈에 각각 등가)의 화합물 (1)의 주입은 일 및 이 주일의 시점에서 IOP의 아무른 변화가 없었다(도 3). 도 4의 또 다른 실험에서 알 수 있듯이, 25 μg/눈 의 화합물 (1)의 데스-니트로 동족체(39.1 μg/눈에 등가) 및 25 μg/눈의 플루오씨놀론 아세토나이드 (FC)는 25 μg/눈 (42.4 μg/눈에 등가)의 화합물 (1)에 비교하여 IOP에 증가를 유발했다.

예 F4

안구내압, 안구 혈액동태, 및 망막보호에 대한 화합물들의 효능 평가 및 뉴질랜드 흰색 토끼들에 국소빈혈이 유도된 생체내 엔도텔린-1(endothelin-1) (ET-1)내의 수용성 체액에서 염증 세포질분열 내용의 평가.

테스트 화합물들

- 예 1의 화합물 (1)

테스트 시스템 및 방법

무게가 2-2.25 Kg 나가는 수컷 어른 뉴질랜드 Abino 토끼 20마리가 실험을 위하여 사용되었다. 이 동물들은 특정치료선택을 위하여 두 그룹으로 나누어졌다. 실험 절차는 동물사용에 대한 Association for Research in Vision & Ophthalmology Resolution 의 규정과 동물 사용을 위한 Good Laboratory Practice 협약에 있는 규정에 따라 이루어졌고, 그리고 실험 및 다른 과학적 목적(DM 116/1992)을 위하여 사용되는 동물의 보호에 대한 이탈리아 규정은 물론 유럽연합 규정(ECL 358/1의 OJ, 12/12/1986)의 준수하에 실행되었다. 이 토끼들은 개별 우리속에 보관되었고, 음식과 물이 제공되었다. 이 동물들은 (22℃-23℃)의 온도제어룸에서 12-12 시간 밝음/어두움 주기로 유지되었다.

틸렛아민(tiletamine) 플러스(plus) 졸라제팜(zolazepam) (Zoletil 100, 0.05 mg/kg) 플러스 질라진(xilazine) (Xilor 2%, 0.05 ml/kg)에 의해 제공된 일반 마취법 아래서, 라치리말 카눌라(lachrymal cannula)를 사용하여, 두 눈의 후부 초자체 속으로, 6 주 동안 일 주일에 두 번씩, 무균 식염인 엔도텔린-1(endothelin-1) (ET-1) 250nM, 500 μl 를 주입함에 의해 시신경 상해의 국소빈혈 모델이 얻어졌다.

플루오씨놀론 아세토나이드(fluocinolone acetonide) (FC) (부형약 100 μl에 0.5 mg/눈) 또는 화합물 (1) (부형약 100 μl에 0.5 mg 등가/눈)이, ET-1 처방 (T2)의 시작 2 주일 후에, 한쪽 눈에 인트라비트리얼리(intravitreally)(IVT) 주입되었고, 동일한 량의 부형약이 다른 쪽 눈에 주입되어졌다.

- 안구 내압

안구내압(IOP)이 Maren's 그룹(Exp. Eye Res. (1992) 55: 73-79; Exp. Eye Res. (1993) 57: 67-78)에 의해 개시된 바와 같이 토노펜(tonopen) XL (Medtronic Solan. USA)을 사용하여 두-점 기준 압력 측정과 함께 두 번 측정되었다. 두 사람의 돌립된 관찰자들(C. U. 및 R. M.)이 동일한 토노메타(tonometer)를 사용하여 IOP 측정을 수행하였다.

표 2에 보고된 데이타는 ET-1 처방이 뉴질랜드 백색 토끼들의 IOP를 변경하지 않았다는 것을 보여주고 있다. 플루오씨놀론 아세토나이드(fluocinolone acetonide)는 ET-1 유도 국소빈혈에 뒤따르는 안구내압을 증가시킨 반면, 화합물 (1)로는 ET-1 유도 국소빈혈에 뒤따르는 안구내압에 변화를 일으키지 못했다.

IOP에 대한 부형약 대 플루오씨놀론 아세토나이드(fluocinolone acetonide) (FC) 또는 화합물(1)의 효력. IOP는 매일 약처방 전에 측정되어졌다.
	IOP( mmHG )
	부형약	FC ^*	부형약	화합물(1)
기초	13.00±2.83	13.50±0.17	12.60±2.01	12.70±1.89
ET -1	13.50±0.71	13.00±2.83	12.80±1.55	13.30±1.49
일 주	14.00±2.83	15.50±0.71	13.30±1.49	15.30±0.95
이 주	14.40±0.71	19.00±0.00	13.60±1.96	15.00±1.33
삼 주	15.00±1.41	19.00±1.41	13.40±1.51	13.50±1.08
사 주	13.50±1.27	20.80±0.71	14.20±2.15	13.20±1.23
오 주	13.30±1.77	22.20±0.00	14.10±2.64	15.00±2.45
육 주	13.00±1.56	21.10±0.00	14.80±2.90	15.22±1.09

^* p<0,001 대 부형약 (N = 10)

- 일렉트로레티노그람 ( electroretinogram ) ( ERG )

일렉트로레티노그람 (ERG)이 약처방 시작 전(T2)에 그리고 약처방 종료시점(T6)에서 기초조건에서 수행되었다. 세극 등 및 간접 안저검사경 시험이 검사 전에 모든 눈에 수행되었다. 검사 전에 각막 또는 수정체 불투명도 또는 망막손상이 나타나는 동물들은 배제되어졌다. 국소적 마취가 0.2% 옥시부프로카인 히드로클로라이드(oxybuprocaine hydrochloride) (Novesine, Sandoz) 한 방울을 사용하여 이루어 졌다. 눈들은 트로픽아미드(tropicamide) (1%)의 국소적 적용에 의해 평창되어 졌고, 적어도 2시간 동안은 어둠에 적응되었으며, 기준 ERGs가 각막전극을 사용하여 양쪽 눈에 기록되어졌다. 기준 및 접지 전극들은 스테인레스 외과 바늘로 만들어 졌고, 귀 속으로 삽입되었다. ERG 신호는 Retimax (CSO, Florence, 이태리)를 사용하여 기록되어졌다. 어둠-적응 암시소 응답 (로드(rod)응답) 및 암시소 플래시(flash) 응답 (photopic erg cone)이 기록되었다. 플래쉬들은 휘도에 있어서 -2.50 부터 +0.4 log scot cd s/m²로 다양화 시켰다. 세 개의 분리된 ERG의 평균값을 각 눈을 위하여 결정되었다. a- 및 b- 파형의 진폭 (uV)이각 단계에서 계산 되었다. 기선 값들이 T2에서 그리고 처방종료시점(T6)에서 얻어진 응답과 비교되어졌다.

ET-1 처방은 photopic erg cone의 진폭을 의미있게 감소 시켰다(T0에 대하여 T2, p<0.05 및 T0에 대하여 T6 p<0.05).

표 3에 보고된 결과들은 플루오씨놀론 아세토나이드(fluocinolone acetonide) (FC) 또는 화합물 (1)로 처방된 눈들은 부형약으로 처방된 것들 보다 ERG 파형 진폭에 있어서 의미있게 (부형약에 대하여 p<0.05) 덜 감소된 것을 나타내고 있음을 보여준다. 더우기, 화합물 (1)은 플루오씨놀론 아세토나이드 보다 약간 더 효과적이었다.

ET-1 처방 후 photopic erg cone에 대한 부형약 대 화합물(1) 또는 플루오씨놀론 아세토나이드(FC)의 효능
photopic erg cone (진폭(μV)
기초	부형약	FC	화합물(1)
147.41±7.43	68.85±6.41	136.34±11.98	140.94±6.22

^* p<0,001 대 부형약 (N = 10)

눈 혈액동태학

혈액동태 평가가 eco-color-doppler DynaView TM II SSD-1700 (Aloka Holding Europe AG, Milan, Italy)를 사용하여 수행되었다. 모든 동물들은, 약처방(T2)의 출발 전에 그리고 약 처방의 종료시점 (T6)에서, ET-1 주입 전에 Color Doppler Imaging (CDI) 검사를 받았다. 특별히 눈의 그리고 섬모 동맥 순환의 평가에 주의를 기울였다. 혈액 유속들이 각 혈관에서 측정되어 졌고 Pourcelot Resistance Index (RI)가 계산되어졌다(Galassi F. 등, Acta Opht. Scand Suppl. (2000) 37-38).

표 4에 보고된 데이터는 플루오씨놀론 아세토나이드(fluocinolone acetonide)가 혈액 환류에 있어서의 감소를 나타내는 눈 동맥에 있어서의 저항지수(resistance index)를 의미있게 증가 시켰다는 것(부형약에 대하여 p<0.001)을 보여준다; 이 효능은 화합물 (1)의 처방에는 뚜렷하지 않다.

저항지수로 평가된 눈 혈액동태에 대한 부형약 대 화합물(1) 및 플루오씨놀론 아세토나이드 (FC)의 효능
	저항지수(Resistence Index)
	기초	2 주일 후	6 주일 후
부형약	0.46±0.07	0.44±0.06	0.48±0.05
FC	0.45±0.06	0.45±0.06	0.60±0.04
화합물(1)	0.43±0.06	0.43±0.08	0.41±0.03

^* p<0,001 대 부형약 (N = 10).

안방수(aqueous humor)에 있어서 염증 세포질분열

안방수 샘플들(samples)은, 화합물 (1) 또는 플루오씨놀론 아세토나이드의 투여 전 (T2) 그리고 처방의 종료 시점에서 (T6), ET-1 투여 전 각 눈의 앞 및 뒷방 체액으로부터 제거되어졌다. 동일 량의 살린(saline)이 매 번 재 투입되어졌다. 안방수는 즉시 사용 때까지 -80℃로 냉동되어졌다. 종양괴사인자 (TNFα) 및인터루킨(interleukin) 6 (IL-6)가 ELISA 방법(Amersham Pharmacia Biotech)을 사용하는 상업적 키트(kit)로 안방수 내에서 결정되어졌다. 최소 감지가능한 농도는 IL-6 및 TNFα를 위해 0.10 pg/ml이 였다. 효력검정 간의 변화계수는 모든 효력검정에 대하여 0.7% 였다. 표 5에 보고된 데이타는 ET-1 처방이 의미있게 TNFα, IL-6 및 안방수 샘플 내의 VEGF 함량을 증가시켰다는 것을, 그리고 화합물 (1)이 플루오씨놀론 아세토나이드 (FC) 보다 더 유효하게 이들 효과를 방해했다는 것을 보여 준다.

TNFα, IL-6 및 안방수 내의 VEGF 함량에 대한 화합물 (1) 및 플루오씨놀론 아세토나이드 (FC)의 효능
	TNFα(pg/ml)	VEGF(pg/ml)	IL6(pg/ml)
기초	0.55±0.44	-	0.67±0.43
부형약	27.00±4.30	166.76±4.54	20.47±2.97
FC	20.76±1.74	114.58±5.61	16.82±0.98
화합물 (1)	18.93±0.98	105.79±1.98	15.70±1.73

^* p<0,001 대 부형약 (N = 10).

-망막 보호: 형태학적 분석

각 동물의 눈들은 적출되어 졌고, 각막 및 크리스탈린(crystalline)이제거되어 졌으며 그리고 이 눈들은 파라포름알데히드(paraformaldehyde)-고정으로 고정되어졌다. 그 다음 샘플들은 알코올 농도를 증가시키면서 탈수되어졌다(50°-75°-95°-100°). 95° 알코올 처방 후, 이 눈들은 각막으로부터 광 신경의 삽입에 이르는 세로 평면을 따라 두 부분으로 나누어 졌다. 절편 8 ㎛ 두께가 Haematoxylin-Eosin으로 착색되어졌다. 현미경 시야들은 20x 및 40x 대물렌즈를 갖는 광현미경에 적용된 카메라를 디지털화함에 의해 등록되어졌다. 디지털화된 영상에 대하여 망막 조직의 형태학적 분석이 수행되었다.

망막 조직의 분석은 오랜 기간 ET-1 처방이 뿌리깊은 형태학적 변화를 유도했다는 것을 보여주었으며, 그것에 의해 ERG 측정에서 관찰된 기능적 장애를 확인할 수 있다.이 형태학적 변화는, 플루오씨놀론 아세토나이드가 효능이 없었던 한편, 화합물 (1)로 처방된 동물들에 있어서 동일하게 나타나지는 않았다.

Claims

화학식(I) 또는 염 또는 그들의 입체이성체의 화합물,

여기서, R₁은 OH, R₂는 CH₃, 또는 R₁과 R₂가 함께 결합하면 화학식 (II)의

그룹이고, R₃은 수소 원자 또는 F 그리고 R₄는 F 또는 Cl 로서,
단, 다음과 같은 조건으로:
- R₁이 OH이고 R₂가 CH₃일 때, R₃은 수소원자;
- R₁과 R₂의 결합이 화학식 (II)의 그룹일 때, R₄는 F이고;
R₁, R₂, R₃ 및 R₄는 위치 α 또는 β에서 스테로이드 구조의 17, 16, 6 및 9에 있는 탄소원자에 연결되고;
R은:

또는

이고,
여기서,
Y는
1) -R₅-CH(ONO₂)R₆
2) -R₅-CH(ONO₂)-(CR₇R₈)n-CH(ONO₂)R₉
3) -[(CH₂)o-X]p-(CH₂)q-CH(ONO₂)R₉
4) -[(CH₂)o-(X)]p-(CH₂)q-CH(ONO₂)-(CR₇R₈)n-CH(ONO₂)R₉
로 부터 선택되고:
여기서,
R₅는 곧은 또는 분기된 C₁-C₁₀ 알켄(alkylene)이며;
R₆는 H 또는 곧은 또는 분기된 C₁-C₆ 알킬(alkyl)이며;
각 어커런스(occurrence)에서의 R₇ 및 R₈은 독립적으로 H 또는 곧은 또는 분기된 C₁-C₆ 알킬(alkyl)이며;
R₉는 H 또는 곧은 또는 분기된 C₁-C₆ 알킬(alkyl)이며;
n은 0에서 6까지의 정수이고;
o는 1에서 6까지의 정수이고;
p는 1에서 6까지의 정수이고;
q는 0에서 6까지의 정수이고;
X는 O, S 또는 NR₁₀이고, 여기서 R₁₀은 H 또는 C₁-C₄알킬이며,바람직하게는 X는 O 이며;
단, 본 발명이 화학식(I)의 화합물을 포함하지 않는다는 조건으로서, 여기서 R₁과 R₂의 결합이 화학식(II)의 그룹이고,

R₄는 F이고, R₃은 수소원소이고, 그리고 R은 Y가 -R₅-CH(ONO₂)R₆이고 R₆가 H인 화학식(III)의 화합물이다.
제 1항에 있어서, R₄는 F, R₃는 F, R₁과 R₂의 결합이 화학식 (II)의 그룹이고, R₁, R₂, R₃ 및 R₄는 위치 α에서 스테로이드 구조의 17, 16, 6 및 9에 있는 탄소원자들에 연결되어 있는 화합물.
제 2항에 있어서, Y는:
1) -R₅-CH(ONO₂)R₆
여기서 R₅는 곧은 C₁-C₅ 알켄(alkylene)이며 그리고 R₆는 H 또는 -CH₃이고;
또는
2) -R₅-CH(ONO₂)-(CR₇R₈)n-CH(ONO₂)R₉
여기서 R₅는 곧은 C₁-C₆ 알켄(alkylene), R₉은 H, 각 어커런스(occurrence)에서의 R₇ 및 R₈은 독립적으로 H 또는 CH₃이며 그리고 n은 0 또는 1이고;
또는
3) -[(CH₂)o-X]p-(CH₂)q-CH(ONO₂)R₉
여기서 R₉는 H,
o는 2에서 4까지의 정수이고;
p는 1에서 4까지의 정수이고;
q는 0에서 4까지이고 X는 O인 화합물.
제 1항에 있어서, R₁과 R₂의 결합이 화학식 (II)의 그룹이고,
R4는 F 이며 R3은 수소 원자이며
R₁, R₂, R₃ 및 R₄는 위치 α에서 스테로이드 구조의 17, 16, 6 및 9에 있는 탄소원자들에 연결되어 있는 화합물.
제 4항에 있어서, Y는:
1) -R₅-CH(ONO₂)R₆
여기서 R₅는 곧은 C₁-C₆ 알켄(alkylene)이며 그리고 R₆는 -CH₃이고;
또는
2) -R₅-CH(ONO₂)-(CR₇R₈)n-CH(ONO₂)R₉
여기서 R₅는 곧은 C₁-C₆ 알켄(alkylene), R₉은 H, 각 어커런스(occurrence)에서의 R₇ 및 R₈은 독립적으로 H 또는 CH₃이며 그리고 n은 0 또는 1이고;
또는
3) -[(CH₂)o-X]p-(CH₂)q-CH(ONO₂)R₉
여기서 R₉는 H,
o는 2에서 4까지의 정수이고;
p는 1에서 4까지의 정수이고;
q는 0에서 4까지이고 X는 O인 화합물.
제 1항에 있어서, R₁는 OH, R₂는 CH₃, R₃은 수소 원자, R₄는 F 이고, 그리고 R₁과 R₄는 위치 α에서 스테로이드 구조의 17 및 9 의 탄소원자들에 연결되고 R₂는 위치 β에서 스테로이드 구조의 탄소원자 16에 연결어 있는 화합물.
제 6항에 있어서, Y는:
1) -R₅-CH(ONO₂)R₆
여기서 R₅는 곧은 C₁-C₆ 알켄(alkylene)이며 그리고 R₆는 H 또는 -CH₃이고;
또는
2) -R₅-CH(ONO₂)-(CR₇R₈)n-CH(ONO₂)R₉
여기서 R₅는 곧은 C₁-C₆ 알켄(alkylene), R₉은 H, 각 어커런스(occurrence)에서의 R₇ 및 R₈은 독립적으로 H 또는 CH₃이며 그리고 n은 0 또는 1이고;
또는
3) -[(CH₂)o-X]p-(CH₂)q-CH(ONO₂)R₉
여기서 R₉는 H,
o는 2에서 4까지의 정수이고;
p는 1에서 4까지의 정수이고;
q는 0에서 4까지이고 X는 O인 화합물.
제 1항에 있어서, R₁는 OH, R₂는 CH₃, R₃은 수소 원자, R₄는 Cl 이고, 그리고 R₁과 R₄는 위치 α에서 스테로이드 구조의 17 및 9 의 탄소원자들에 연결되고, R₂는 위치 β에서 스테로이드 구조의 탄소원자 16에 연결되어 있는 화합물.
제8항에 있어서, Y는:
1) -R₅-CH(ONO₂)R₆
여기서 R₅는 곧은 C₁-C₆ 알켄(alkylene)이며 그리고 R₆는 H 또는 -CH₃이고;
또는
2) -R₅-CH(ONO₂)-(CR₇R₈)n-CH(ONO₂)R₉
여기서 R₅는 곧은 C₁-C₆ 알켄(alkylene), R₉은 H, 각 어커런스(occurrence)에서의 R₇ 및 R₈은 독립적으로 H 또는 CH₃이며 그리고 n은 0 또는 1이고;
또는
3) -[(CH₂)o-X]p-(CH₂)q-CH(ONO₂)R₉
여기서 R₉는 H,
o는 2에서 4까지의 정수이고;
p는 1에서 4까지의 정수이고;
q는 0에서 4까지이고 X는 O인 화합물.
제 1항에 있어서, 다음의 화학식 (1) 내지 (17) 중 어느 하나로부터 선택되어 진 화합물.
제 1항 내지 제 10항 중 어느 한 항에 있어서, 약물로서 이용하기 위한 화합물.
제 1항 내지 제 10항 중 어느 한 항에 있어서, 염증 질병의 처방에 사용하기 위한 화합물.
제 1항 내지 제 10항 중 어느 한 항에 있어서, 안구 질병의 처방에 사용하기 위한 화합물.
제 13항에 있어서, 상기 안구 질병은 당뇨성 망막 부종, 당뇨성 망막병, 망막퇴화, 연령에 관련한 망막퇴화 및 레티나(retina)와 망막 루티아(lutea)의 다른 질병을 포함하는 화합물.
염증 질병의 처방을 위하여 약물의 조제약을 위한 제 1항 내지 제 10항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 용도.
안구 질병의 처방을 위하여 약물의 조제약을 위한 제 1항 내지 제 10항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 용도.
적어도 제 1항 내지 제 10항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 약품적 효능이 있는 량을 포함하고 인트라비트리얼(intravitreal) 또는 페리오비탈(periorbital) 처방을 위한 적합한 형태의 안과적으로 수용가능한 부형제를 포함하는 제제 조성물.
염증 질병 처방에 이용을 위한 제 17항에 따른 제제 조성물.
안구 질병 처방에 이용을 위한 제 17항에 따른 제제 조성물.
안구질병의 처방에 사용을 위한 화학식(I) 또는 염 또는 그들의 입체이성체의 화합물,

여기서, 화학식 (I)에 있어
함께 결합된 R₁과 R₂ _는 화학식 (II)의 그룹이고,

R₃은 수소 원자, R₄는 F이고,
R₁,R₂ 및 R₄는 위치 α에서 스테로이드 구조의 17, 16 및 9 의 탄소원자들에 연결되고,
R은:

이고, 여기서,
Y는 -R₅-CH(ONO₂)R₆이고 R₆는 H 이다.
제 20항에 있어서, 상기 안구 질병은 당뇨성 망막 부종, 당뇨성 망막병, 망막퇴화, 연령에 관련한 망막퇴화 및 레티나(retina)와 망막 루티아(lutea)의 다른 질병을 포함하는 화합물.
제 20항 또는 제 21항에 있어서, 화학식 (18)의 화합물.
적어도 제 20항 또는 제 22항에 따른 화합물의 약품적 효능이 있는 량을 포함하고 인트라비트리얼(intravitreal) 또는 페리오비탈(periorbital) 처방을 위한 적합한 형태의 안과적으로 수용가능한 부형제를 포함하는 제제 조성물.
안구 질병 처방에 이용을 위한 제 23항에 따른 제제 조성물.