KR20110016183A - 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러 및 이의 제조방법 - Google Patents

지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러 및 이의 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러 및 이의 제조방법에 관한 것으로 보다 상세하게는 필러의 제조방법에 있어서, 지방조직을 분쇄하여 분쇄단계; 상기 분쇄된 지방조직에서 지질을 제거하는 분리단계; 상기 분리된 지방조직을 멸균하여 지질이 제거된 지방조직을 수득하는 수득단계; 및 상기 수득된 지방조직과 혈액성분을 혼합하여 응고시키는 혈액혼합단계를 포함하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러 및 이의 제조방법을 제공한다.
지질, 지방조직, 혈액성분, 혈소판이 풍부한 혈장(PRP)

Description

지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러 및 이의 제조방법{Filler using adipose tissue and bloodcomponent and preparing thereof}
본 발명은 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러 및 이의 제조방법으로서, 보다 상세하게는 지방조직에 혈액성분을 혼합하여 응고시킨 필러 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
인체의 부피 대체(volume replacement)를 위한 주사용 소재들은 200년 동안 다양한 물질과 방법으로 시도되어 왔다. 예를 들면, 과거에는 실리콘, 파라핀 등이 활용되었으나, 현재는 육아종과 면역문제를 유발할 수 있어 거의 사용되지 않는다.
최근에는 인체나 동물에서 얻은 진피 조직(allogenic dermis)이나 골조직(allogenic bone) 등을 가공하여 이식용 소재로 사용하고 있으나, 가공 단계가 복잡하고 가공 단계에서 면역 단백질(immune protein), 세포 등 항원성(antigenicity)을 없애기 위하여 다양한 화학적인 방법이 추가되므로 허가를 위한 시간이 많이 소요되면, 항원성을 100% 없애지 못하므로 부작용이 발생할 수 있 다. 또한, 가공비가 많이 들고, 원료 재료인 사체(cadaver)의 수급이 제한되어 1cc당 50만원이 넘는 고가의 소비재로서 비용문제가 크다.
국내외 관련 기술을 보면 다양한 인공 피부 상품이 개발되고 있고, 무세포 인공 피부로부터 본인의 표피세포 및 진피세포를 배양한 계층화된 세포성 생인공피부(living skin equivalent; LSE)에 이르기까지 다양한 종류가 개발되어 상품화 단계에 있다. 이들 제품은 타가조직을 이용하여 무세포 처리하거나, 콜라겐과 같은 생체 물질로 제조되어 상당히 고가인 제품들이다. 세포성 생체 유래 인공 피부는 신속하게 상처를 치유함은 물론, 상흔을 감소시키는 등 질적인 면에서도 우수한 상처 회복 효과를 얻고 있으며, 자가세포 또는 가공한 타가조직이 면역 거부 반응이 없는 것으로 보고되고 있다.
국내에서는 키토산, 콜라겐, 키틴(chitin) 등을 이용한 매트릭스형 인공 피부가 상용화되고 있고, 매트릭스에 피부세포를 배양한 배양 피부를 개발하여 임상시험 단계에 있으나, 아직 대량생산하지 못하고 있다.
대한민국 등록특허 제10-0469661호에서는 이식용 무세포 진피층의 제조법을 개발하여 SureDerm이라는 제품명으로 제조 공급함으로써, 수입되고 있는 일부 조직 수복용 생체 재료의 국산화에 성공하였다. 그러나, 인간 피부를 국내에서 확보하는 데 많은 제약이 있기 때문에 재료를 수입하여 제품을 생산하는 실정이다. 일반적으로 "필러(Filler)"로 알려져 있는 이들 제품은 동물 유래 물질과 인공 합성 물질, 인체 유래 조직 등을 원료로 제조되었는데, 대부분 사용의 편리성, 지속성 및 가격에 있어서 많은 단점을 가지고 있다.
또 다른 제품으로는 소의 콜라겐으로 만든 주사용 자이덤(ZydermR), 폴리메틸-메타아크릴레이트 비드(Polymethyl-methacrylate bead)와 콜라겐의 혼합액인 아테콜(ArtecollR), 변형 히일루론산을 이용한 제품인 레스틸렌(RestyleneR), 알로덤(AlloDerm)을 분말가공한 사이메트라(CymetraR) 등을 들 수 있다. 미국 LifeCell사의 알로덤(AlloDermR)은 시신으로부터 기증된 피부를 무세포 진피층(human allogenic acellular dermis)으로 가공·처리하여 이식편 또는 삽입물의 용도로 시판되고 있다. 상기 제품의 경우, 모든 세포를 제거함으로써 면역거부 반응의 가능성을 완전히 차단하였고, 인체 조직을 그대로 이용함으로써 다른 어떤 인공 피부보다도 생체적합성이 뛰어난 장점을 가지고 있어 국내에서도 비슷한 제품이 개발되었으나, 기증자를 구하지 못해 원료를 외국에서 수입하고 있는 실정이다.
또한, 지방조직은 비만 환자에서 제거되어 폐기되거나 일부 보관하여 사용하고 있으나, 조직 내에 특수하게 많은 지방 소적(lipid droplet) 내부의 트리아실글리세롤(triacylglycerol), 스테롤 에스터(sterol esters)와 같은 중성지질(neutral lipids) 등이 산화되거나 부분적으로 산화·가수분해되어 변질되므로 2개월 이상 보관하여 재사용하기 어렵다. 지질 산화는 고도불포화지방산의 산화에 따른 반응 생성물이 단백질 등의 아미노 화합물과 반응하여 변색, 손실 등을 일으킬 뿐만 아니라, 하이드로퍼옥사이드(hydroperoxide)나 불포화 알데히드(aldehyde) 등과 같은 독성 물질을 생성한다. 뿐만 아니라, 돼지나 소 등 인간 이외의 동물 지방조직은 사람에 비해 액체 지질의 비율이 적고(50~70%) 일부 근육(paniculus muscularis)이 혼재되어 있으나, 인간의 지방조직은 진피 조직 또는 근육층과 확연히 구분되어 액체 지질의 양이 월등히 많기 때문에 인간의 지방조직을 가공하여 생체 이식 소재를 개발하기 위한 시도가 있었다.
한편, 인공 기질이란 채취된 조직세포가 이식되어 3차원적인 생체 조직을 만들 수 있는 지지체를 의미하는 것으로, 담체 또는 인공 지지체(scaffold)라 불리며, 다음과 같은 조건을 충족시켜야 한다. 우선 재생하고자 하는 생체 조직의 형태를 유지하여야 하고, 배양하고자 하는 세포의 점착과 증식·분화를 효과적으로 유도하며, 높은 생체 친화성과 지지체로서의 역할을 다한 후 생체 내에서 안전하게 흡수·분해되어야 한다. 생체 조직 재생을 위한 3차원 초정밀 인공 지지체 기술 개발에는 특정 조직세포로의 효과적인 분화를 위한 조직재생용 인공 지지체 제조 기술, 생체 조직과 유사한 생체 적합성 재료 기술이 필수적이다.
예로서, 조직 배양에서 골과연조직을 위한 기질에는 합성 또는 자연 인산칼슘(calcium phosphate), 폴리락타이드(polylactic acid) 또는 폴리글리콜산(polyglycolic acid) 등의 수많은 합성체 및 교원질, 섬유소의 자연중합체 등이 포함된다. 조직의 재생을 용이하게 하기 위한 지지체의 제작을 위해 사용되는 재료는 정상적인 세포 성장과 기능을 위해 필요한 미세구조와 화학적 조성을 가지고 있어야 한다. 골 재생을 위해서는 비슷한 물리적, 화학적, 기계적 성질을 가지는 재료가 바람직한데, 이러한 성질들이 정상적 골 성장과 기능에 영향을 미칠수 있기 때문이다. 최근에는 자연 중합체에 대한 연구가 많이 되고 있는데, 특히 키토산과 생약재를 이용하는 연구가 많이 이루어지고 있다.
그러나, 생체 내에서 분해되는 조직 적합성 생체 재료의 한계와 다양한 생체 조직으로 분화·성장시킬 수 있는 조직공학 기술이 미비하기 때문에 인체 각 장기의 기능 재현에 한계가 있다. 또한, 조직 적합성 미세 분말을 3차원 세포 배양용 미세 분말로 이용하고 있으나, 세포 배양용 미세 분말로 사용되는 폴리락타이드(poly Llactic acid, PLLA), 폴리 유산-글리콜산 공중합체(poly lactic-co-glycolic acid, PLGA) 등 생체 적합성 소재는 1g 당 50만원이 넘는 실정이고, 특히 세포 배양을 위해서는 인체 조직과 유사한 구조를 형성하여야 하는데 이를 위한 조형 정밀도에 문제가 있다.
현재 인공지지체를 제조하기 위하여 사용되고 있는 폴리-락틱산(poly-lactic acid, PLA). 폴리-글리콜산(polyglycolic acid, PGA) 등의 생분해성 미세 분말에서 사용되는 생체 재료는 염발포법(gas foamin/salt leaching), 고압기체팽창법(high pressure gas expansion), 유화동결건조법(emulsion freeze-drying), 염침출법(solvent-castin/particulateleaching technique), 상분리법(phase separation) 등으로 만들어진다. 그러나, 상기 제조방법은 재연성이 떨어지고, 복잡하거나 정밀한 3차원 형태의 구조로 제조하는데 있어서 한계가 있다.
또한, 다공성 구조의 제조에 있어서 공극(pore) 크기 및 공극율(porosity)을 자유롭게 조절할 수 없고, 공극간 상호연결성(interconnectivity)이 떨어져서 세포의 성장, 영양 공급, 인공 지지체 내부로의 확산 및 전달 등의 어려움이 있으며, 제조시간도 오래 걸린다.
그러나, 지방조직도 지질을 제거하고 미세 구조를 어느 정도 유지할 수 있다면 부피가 일부 보존되므로, 실제 충분한 생체 소재의 역할을 할 수 있다. 최근 스폰지와 같은 구조에서 보다 많은 세포가 자라고 분화되는 사실이 발표되고 있기 때문에, 실제로 생체 내 효과나 세포 배양에서는 생체에 이식되는 물질의 무게보다는 부피가 중요하다는 것을 추정할 수 있다. 따라서, 지방조직이 가공 단계에서 결체조직과 세포막의 미세구조를 유지할 수 있는 생체 조직을 본 발명자가 개발하였는 데, 이는 대한민국 등록특허 제771058호에 개시되어 있다.
대한민국 등록특허 제771058호는 지질이 제거된 인체 부피 대체용 또는 세포 배양용 지지체에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 지방조직을 분쇄한 다음, 초음파 처리 또는 가압 노즐 분사하여 지질을 탈리시킨 후, 탈리된 지질과 지질이 탈리되지 않은 지방조직을 제거하여, 멸균함으로써 인체 부피 대체용 또는 세포 배양용 지지체를 제조하는 방법을 제공하고 있다.
이에 추가적으로 지방조직을 이용한 필러를 개발함에 있어서 변형에 대한 지지력이 강하며, 자체적으로 점도가 강해 형태유지능력이 개선된 필러의 개발이 소망되었다.
상기와 같은 문제점을 해결하기 위해 본 발명의 목적은 지방조직을 이용하여 변형에 대한 지지력이 강한 필러를 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적은 점도가 높아 응집력의 강화로 형태유지능력이 우수한 필러를 제공하는 데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 외부물질을 사용하지 않고 자가조직을 이용하되 자가면역이 발생하지 않는 필러를 제공하는 데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 필러를 제조하는 처리과정에서 손상이 적어 수율이 향상된 필러를 제공하는 데 있다.
상기 목적을 달성하기 위해 본 발명은 필러의 제조방법에 있어서, 지방조직을 분쇄하여 상기 지방조직을 수득하는 수득단계; 및 상기 수득된 지방조직과 혈액성분을 혼합하여 응고시키는 혈액혼합단계를 포함하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 제조방법을 제공한다.
또한 본 발명은 상기 수득단계에서 상기 지방조직을 분쇄한 후에 상기 분쇄된 지방조직에서 지질을 제거하는 분리단계; 및 상기 분리된 지방조직을 멸균하여 지질이 제거된 지방조직을 수득하는 수득단계를 더 포함하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 제조방법을 제공한다.
또한 본 발명은 상기 분리단계에서 초음파로 처리하여 지질을 제거하는 것을 특징으로 하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 제조방법을 제공한다.
또한 본 발명은 상기 분리단계에서 분쇄한 지방조직을 히알루로니다아제(hyaluronidase)로 처리한 다음, 초음파 처리하는 것을 특징으로 하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 제조방법을 제공한다.
또한 본 발명은 상기 분리단계에서 가압 노즐 분사를 통해 지질을 탈리시키는 것을 특징으로 하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 제조방법을 제공한다.
또한 본 발명은 상기 분리단계에서 에탄올 세척 또는 증류수 세척을 추가하는 것을 특징으로 하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 제조방법을 제공한다.
또한 본 발명은 상기 멸균이 방사선 또는 EO가스를 이용하는 것을 특징으로 하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 제조방법을 제공한다.
또한 본 발명의 상기 혈액성분은 혈소판이 풍부한 혈장(PRP)으로 구성된 것을 특징으로 하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 제조방법을 제공한다.
또한 본 발명은 상기 혈액혼합단계에서 혈액응고를 유도하기 위해 염화칼슘(Cacl2) 또는 트롬빈을 첨가하는 것을 특징으로 하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 제조방법을 제공한다.
또한 본 발명은 필러의 제조방법에 있어서, 제1용기에 수용되고 채취된 지방조직을 일정 압력으로 분쇄부에 공급하여 분쇄하여 분쇄된 지방조직을 제2용기에 즉시 수용하는 분쇄단계; 상기 분쇄되어 제2용기에 수용된 분쇄물질을 원심분리하여 지질을 제거하는 분리단계; 상기 각각 분리된 분쇄물질 중에서 지질이 제거된 지방조직을 수득하는 수득단계; 및 상기 수득된 지질이 제거된 지방조직과 혈액성 분을 혼합하여 응고시키는 단계를 포함하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 제조방법을 제공한다.
또한 본 발명은 분쇄단계에서 제1용기, 분쇄부, 제2용기, 홀더를 포함하는 분쇄장치로 이루어지되, 상기 분쇄부는 동력발생부, 임펠러부를 포함하고, 상기 임펠러부는 블레이드가 형성된 회전체와 필터 및 분쇄된 지방조직을 제2용기에 송출하는 아웃렛을 포함하며, 홀더는 제1용기를 수용할 수 있는 인렛이 일단부에 형성되고 타단부는 분쇄부과 결합되며, 분쇄부는 홀더와 결합구조로 인해 내부에 제1용기에 수용된 지방조직이 인입되는 분쇄공간이 형성된 것을 특징으로 하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 제조방법을 제공한다.
또한 본 발명은 물질이 수용된 제1용기는 인렛에 연결되고, 분쇄된 지방조직을 수용할 제2용기는 아웃렛 연결되어 제1용기에 일정 압력으로 가해지면 제1용기에 수용된 지방조직이 분쇄부의 분쇄공간으로 송출되는 것을 특징으로 하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 제조방법을 제공한다.
또한 본 발명은 상기 분쇄공간에 인입된 지방조직이 필터를 거쳐 회전체의 블레이드에 의한 작용으로 균질크기로 분쇄되는 것을 특징으로 하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 제조방법을 제공한다.
또한 본 발명은 상기 필터에 인입된 지방조직이 필터의 단공를 통하여 인입되어 상기 단공이 지방조직을 파지하고 블레이드가 상기 파지된 물질을 분쇄하는 지지체의 제조방법을 제공한다.
또한 본 발명은 상기 인렛과 아웃렛이 2 이상 형성되되, 선택적으로 사용되 지 않는 인렛과 아웃렛은 밀폐수단으로 의해 차단되는 것을 특징으로 하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 제조방법을 제공한다.
또한 본 발명은 상기 분쇄부에서 임펠러부와 동력발생부 및 베어링부는 이격되어 형성된 것을 특징으로 하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 제조방법.
또한 본 발명은 상기 이격된 사이에 실링부를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 제조방법을 제공한다.
또한 본 발명은 상기 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 제조방법으로 제조된 필러를 제공한다.
또한 본 발명은 분쇄된 지방조직과 혈액성분이 혼합된 필러를 제공한다.
또한 본 발명은 상기 지방조직이 지질이 제거된 것을 특징으로 하는 필러를 제공한다.
또한 본 발명은 상기 필러가 겔(Gel)상인 것을 특징으로 하는 필러를 제공한다.
또한 본 발명은 상기 혈액성분이 혈소판이 풍부한 혈장(PRP)으로 구성된 것을 특징으로 하는 필러를 제공한다.
또한 본 발명은 상기 지방조직에 혈액성분을 혼합하여 응고를 유도하기 위해 염화칼슘(Cacl2) 또는 트롬빈을 첨가하는 것을 특징으로 하는 필러를 제공한다.
상술한 바와 같이 본 발명에 따른 필러는 지방조직을 이용하여 변형에 대한 지지력이 강한 필러를 제공하는 효과가 있다.
또한 본 발명에 따른 지방조직을 이용한 필러는 점도가 높아 응집력의 강화로 형태유지능력이 우수한 효과가 있다.
또한 본 발명에 따른 지방조직을 이용한 필러는 외부물질을 사용하지 않고 자가 지방조직 및 혈액성분을 이용하되 인체에 주입시 자가면역이 발생하지 않는 효과가 있다.
또한 본 발명에 따른 지방조직을 이용한 필러는 필러를 제조하는 처리과정에서 손상이 적어 수율이 향상된 필러를 얻을 수 있는 효과가 있다.
또한 본 발명에 따른 지방조직과 혈액성분이 혼합된 필러는 지방조직의 콜라겐 섬유가 서로를 엮어주는 지지구조 역할을 하고 응고된 혈액성분이 경도를 크게 증가시키게 되어 생체 유래 물질의 특징을 적절히 활용할 수 있는 효과가 있다.
또한 본 발명에 따른 지방조직을 이용한 필러를 실시예에 언급된 장치를 이용하여 제조할 경우 대기중에 노출될 가능성을 차단하여 안정성이 향상된 필러를 제조할 수 있는 효과가 있다.
이하 본 발명에 첨부된 도면을 참조하여 본 발명을 상세히 설명하기로 한다. 우선, 도면들 중, 동일한 구성요소 또는 부품들은 가능한 한 동일한 참조부호를 나타내고 있음에 유의하여야 한다. 본 발명을 설명함에 있어, 관련된 공지기능 혹은 구성에 대한 구체적인 설명은 본 발명의 요지를 모호하지 않게 하기 위하여 생략한다.
본 명세서에서 사용되는 정도의 용어 “약”, “실질적으로” 등은 언급된 의미에 고유한 제조 및 물질 허용오차가 제시될 때 그 수치에서 또는 그 수치에 근접한 의미로 사용되고, 본 발명의 이해를 돕기 위해 정확하거나 절대적인 수치가 언급된 개시 내용을 비양심적인 침해자가 부당하게 이용하는 것을 방지하기 위해 사용된다.
본 발명에서 사용된 "필러(Filler)"란 용어는 노화로 인한 주름 개선, 얼굴 윤곽선 교정 등 신체의 윤곽을 바로 잡아주기 위하여, 또는 암 절제술로 인한 결손, 창상으로 인해 함몰된 부위의 재생, 지형으로 인한 함몰 부위 등 신체 전반에 걸쳐 함몰된 부위의 재생을 위하여 이식하는 물질을 의미한다.
또한, 본 발명에서 사용된 "분쇄"는 조직을 잘게 부스는 것을 의미하는 것 외에 조직에 손상을 가하는 것을 의미하는 데, 이는 조직에서 조직인자(tissue factor)를 방출하게 하기 위한 목적이 있다. 예로서, 지방조직을 분쇄할 경우 조직이 손상되어 조직인자(tissue factor)가 방출된다.
본 발명자들은 지방조직의 부피를 최대한 보존한 3차원 구조의 스폰지 분말을 개발하고자 연구한 결과, 인체로부터 채취된 지방조직을 잘게 분쇄하면 지질은 대부분 제거되고 콜라겐 섬유들의 농도가 높아지면서 잘게 잘리게 되는 데, 여기에 혈액 성분을 혼합하게 되면 지방조직의 분쇄로 인해 유리된 조직인자(tissue factor)가 혈장내의 트롬빈을 활성화 시키게 되며 이는 피브린 폴리머를 형성하면 서 응고하게 되어, 상기 콜라겐 섬유는 지지구조 역할을 하고 폴리머는 고분자로서 기질을 형성하여 응고된 혈액의 경도를 크게 증가시키게 되는 데, 이러한 생체유래 물질의 특성을 적절히 활용한 필러를 개발하였다.
지방조직을 필러 소재로 사용하기 위해서는 인체의 부작용을 줄이기 위해 생체 적합성 소재로 구성되어야 하고, 효소 처리 등의 화학적 처리를 제한하여야 한다. 지방조직에서 지질을 제거할 경우 장기보관이 가능하고 부피와 세포막 등의 미세구조가 그대로 유지되기 때문에 이식용 소재로 이용될 수 있다.
도 1은 및 도 2는 본 발명의 일실시예에 따른 필러의 제조공정도이다.
도 1을 참조하면, 필러의 제조방법에 있어서, 지방조직을 분쇄하여 상기 지방조직을 수득하는 수득단계; 및 상기 수득된 지방조직과 혈액성분을 혼합하여 응고시키는 혈액혼합단계를 포함하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러를 완성할 수 있다.
본 발명의 일실시예에 따라 인체로부터 추출한 지방조직을 분쇄한 뒤에 분쇄된 조직을 수득한다.(분쇄단계 및 수득단계) 인체로부터 채취된 지방조직을 잘게 분쇄하면 지방조직이 손상받아 조직인자(tissue factor)가 방출된다.
상기 분쇄된 지방조직을 세척 및 멸균한 뒤에 혈액성분과 혼합하는 데, 상기 혈액성분은 원심분리 등의 방법을 통해 필요한 성분만 추출할 수 있다.(혈액혼합단계) 상기 분쇄된 지방조직을 혈액성분과 혼합하게 되면 손상된 조직에서 방출된 상기 조직인자(tissue factor)가 전구트롬빈을 트롬빈으로 바꾸는 역할을 하여 혈액을 응고시키는 역할을 하게 된다. 상기 혈액성분은 분리된 성분들 중 혈소판이 적 은 혈장(PPP : platelet poor plasma) 또는 혈소판이 풍부한 혈장(PRP : platelet rich plasma)을 선택적으로 이용할 수 있다. 혈액의 응고 현상이 잘 일어나고 혈소판 속에 존재하는 성장인자를 잘 활용하기 위해서는 혈소판이 풍부한 혈장(PRP)을 이용하는 것이 바람직하다.
도 2를 참조하면, 필러의 제조방법에 있어서, 지방조직을 분쇄하여 분쇄단계; 상기 분쇄된 지방조직에서 지질을 제거하는 분리단계; 상기 분리된 지방조직을 멸균하여 지질이 제거된 지방조직을 수득하는 수득단계; 및 상기 수득된 지방조직과 혈액성분을 혼합하여 응고시키는 혈액혼합단계를 포함하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러를 완성할 수 있다.
본 발명의 일실시예에 따라 인체로부터 추출한 지방조직을 분쇄한 뒤에 지질을 분리시킨다.(분쇄단계 및 분리단계) 지방조직에서 지질을 제거할 수 있는 데, 지질을 제거하는 경우 보관 기간을 증가시킬 수 있으며, 세포막 등의 미세구조를 최대한 보존할 수 있는 장점이 있다. 상기 지방조직은 지방 소적(lipid droplet)인 것을 특징으로 하며, 상기 지질을 분리시키는 방법으로는 초음파로 처리(sonication)하는 방법과 가압 노즐 분사를 이용하는 방법이 있다.
상기 초음파로 처리하는 방법으로 지질을 분리시킬 경우 세포간의 분리를 더욱 잘 이루어지도록 하기 위하여 히알루로니다아제(hyaluronidase)를 넣어 초음파 분해할 수 있다.
상기 분리된 지질은 제거하는 데 상기 분리된 지질을 필터를 이용하여 필터링하거나, 원심분리한 후에 약 70%의 에탄올로 세척한 후, 증류수로 다시 세척하여 세포내에 존재하는 트리아실클리세롤(triacylglycerol), 스테롤 에스터(sterol ester)와 같은 지질을 최대한 제거한다.
가압 노즐을 이용하여 지질을 분리시키는 경우에는 상기 가압 노즐 분사후에 증류수만으로 세척하여 단백질 변성을 최소화할 수 있다. 지방조직이 자가 조직이라 하더라도 단백질 변성으로 인해 면역거부반응을 일으킬 수 있기 때문에 단백질 변성을 최소화할 수 있도록 한다.
상기 지질이 제거된 지방조직은 방사선 또는 EO가스를 이용하여 멸균함으로써 지질이 제거된 지방조직을 수득할 수 있다.
또한 본 발명에서는 콜라게나아제, 디파아제, 트립신 등과 같은 단백질 분해 효소를 처리하지 않아 적혈구, 세포 외 매트릭스 등이 제거되지 않음으로서 부피를 갖는 3차원 구조를 유지할 수 있다. 만일 단백질 분해 효소로 처리할 경우 인체 내에서 안정성에 문제가 발생할 수 있는 바, 공정상 세척과정이 더해져야 할 뿐만 아니라, 식양청으로 허가를 얻는데도 어려움이 있다.
다음으로 상기 지질이 제거된 지방조직을 세척 및 멸균한 뒤에 혈액성분과 혼합하는 데, 상기 혈액성분을 원심분리 등을 통해 필요한 성분만 추출하여 혼합할 수 있다.(혈액혼합단계) 상기 혈액성분은 분리된 성분들 중 혈소판이 적은 혈장(PPP : platelet poor plasma) 또는 혈소판이 풍부한 혈장(PRP : platelet rich plasma)을 선택적으로 이용할 수 있다. 혈액의 응고 현상이 잘 일어나고 혈소판 속에 존재하는 성장인자를 잘 활용하기 위해서는 혈소판이 풍부한 혈장(PRP)을 이용하는 것이 바람직하다.
도 3은 혈소판이 풍부한 혈장(PRP)에 대한 사진을 나타낸 것인 데, 상기 혈소판이 풍부한 혈장(PRP)은 항응고제를 첨가하여 채취한 혈액을 원심분리한 후 혈소판이 밀집된 혈액층을 수거하여 얻을 수 있다.
상기 혈소판이 풍부한 혈장(PRP)을 필러로 사용하기 위해서는 지질이 제거된 지방조직과 혼합하였을 때, 혈액응고를 유도해야 하는 데 염화칼슘(Cacl2) 또는 트롬빈이 사용된다. 상기 트롬빈은 간에서 만들어지고 전구트롬빈 상태로 혈액내에 존재하다가 조직이 손상받게 되면 조직안에 분포되어 있던 혈관내막이 잘려지면서 조직인자(tissue factor)를 방출하게 되는 데, 상기 조직인자가 전구트롬빈을 트롬빈으로 바꾸는 역할을 한다. 따라서, 지방조직이 분쇄로 인해 손상을 받게 되면 응고역할을 할 수 있는 조직인자(tissue factor)가 방출되어 혈액의 혼합시에 지질이 제거된 지방조직 및 혈액간에 응집력을 높여주는 장점이 있다.
상기와 같이 제조된 지질이 제거된 지방조직을 이용한 필러는 지방조직을 필러 소재로 사용하는 경우의 단점인 낮은 경도 및 점도로 인한 응집력 부족으로 기인하는 약한 형태유지 능력을 개선시킬 수 있으며 부피 또한 증가된다.
또한, 혈액의 응고에 의해 유발되는 다양한 성장인자들 예를 들면, 혈소판유래성장인자 (Platelet-derived growth factor : PDGF), 표피성장인자(Epidermal Growth Factor : EGF), 신경성장인자 (Nerve Growth Factor : NGF)의 장점을 혼합하며 응고에 필수적 요소인 조직인자의 추출을 지방조직내 혈관내막에서 최대한 추출할 수 있는 지질제거방식을 채택한 후에 혈소판이 풍부한 혈장(PRP)와 혼합함으 로써, 혈소판이 풍부한 혈장(PRP)의 사용시에 첨가하는 동물유래 트롬빈을 자가성분으로 대치하게 할 수 있는 효과가 있다. 이로인해 광우병, 신종 독감, 에이즈(HIV) 등 각종 질병 전달의 위험이 있는 트롬빈 사용을 회피할 수 있게 된다.
한편 본 발명의 다른 일실시예에 따른 필러의 제조방법에 대하여 설명한다.
본 발명의 분쇄단계에 있어서, 지질이 제거된 지방조직의 제조장치를 이용하여 분쇄할 수 있는 데, 주사기로 채취된 지방은 본 발명에 의한 장치에 의해 균질 분쇄된다.(분쇄단계) 우선 주사기를 이용하여 지방조직을 채취하는 데, 이 때 사용될 수 있는 주사기는 지방조직을 채취할 수 있는 모든 유형을 포함하며, 비제한적인 예로서 본 발명자가 기 제안한 대한민국 특허출원 제 2003-5029호, 제2005-61134호, 제2005-34848호, 제2006-64946호, 대한민국 실용신안출원 제2003-21484호, 제2004-10685호, 제2006-26454호에 개시된 주사기일 수 있다.
한편 분쇄된 지방은 다른 용기에 즉시 수용될 수 있다. 여기서 다른 용기란 분쇄된 지방을 수용할 수 있는 모든 형태를 포함하며, 인체에 주입이 필요한 경우에는 주사기일 수 있으며 이 경우 상기 지방채취시 사용될 수 있는 주사기와 동일한 것일 수 있다. 한편 분쇄시 적정한 회전체의 속도는 8,000~12,000rpm이 바람직하고, 더욱 바람직하게는 9,000rpm이다.
상기 분쇄되어 다른 용기에 수용된 분쇄지방은 원심분리되어 성분별로 분리될 수 있다.(분리단계)
상기 각각 분리된 성분들은 유효성분만을 보존하고 다른 성분들은 제거될 수 있다. 여기서 제거란 분쇄된 지방이 수용된 다른 용기에서 제거됨을 의미하며 폐기 여부는 선택적 사항이다. 한편 본 발명의 일실시예에 의한 경우 보존되는 성분은 지질이 제거된 지방조직 일 수 있다.(수득단계)
상기 지질이 제거된 지방조직을 세척 및 멸균한 뒤에 혈액성분과 혼합하는 데, 상기 혈액성분을 원심분리 등을 통해 필요한 성분만 추출하여 혼합할 수 있다. 상기 혈액성분은 분리된 성분들 중 혈소판이 풍부한 혈장(PRP : platelet rich plasma)를 이용하는 것이 바람직하다.(혈액혼합단계) 상기 혈소판이 풍부한 혈장(PRP)을 필러로 사용하기 위해서는 지질이 제거된 지방조직과 혼합하였을 때, 혈액응고를 유도해야 하는 데 염화칼슘(Cacl2) 또는 트롬빈이 사용된다.
도 4 내지 11은 본 발명의 일실시예에 의한 분쇄단계에서 사용될 수 있는 장치를 나타낸 것이다.
상기 장치는 제1용기 100, 분쇄부 200, 제2용기 300, 제어부 400을 포함할 수 있다. 제1용기 100과 제2용기 300은 전술한 주사기일 수 있다. 일 예로 제1용기 100은 대상체로부터 채취한 지방을 포함하고 있을 수 있고, 제2용기 300은 분쇄된 지방을 수용하는 용기일 수 있다. 제1용기 100과 제2용기 300의 기능이 반대일 수 있음은 물론이다.
한편 분쇄부 200은 도 5에 도시된 바와 같이 동력발생부 210, 베어링부 230, 임펠러부 250, 홀더 270으로 형성될 수 있다. 상기 동력발생부 210은 모터 211과 주샤프트 213으로 형성되고, 베어링부 230은 베어링 231과 부샤프트 233으로 이루어진다. 임펠러부 250은 블레이드 253이 형성된 회전체 251과 필터 255로 형성된 다. 한편 분쇄부 200은 홀더 270과 결합구조로 인해 내부에 지방조직이 인입되는 분쇄공간 220이 형성되고, 분쇄된 지방조직을 제2용기에 송출하는 아웃렛(outlet) 240이 형성될 수 있다. 홀더 270은 제1용기 100을 수용할 수 있는 인렛(inlet) 110이 일단부에 형성되고 타단부는 분쇄부 200과 결합되는 구조로 형성될 수 있다. 결합방식은 다양한 방식이 채택될 수 있으며 비제한적인 예로 나사결합방식일 수 있다. 상기 인렛 110은 분쇄공간 220과 연결되어 있다.
상기 분쇄부 200에 의한 지방조직의 균일 분쇄 작용을 설명하면 우선 대상체로부터 채취한 지방조직이 수용된 제1용기 100을 인렛 110에 연결하고, 분쇄된 지방조직을 수용할 제2용기 300을 아웃렛 240에 연결한다. 이상과 같이 분쇄준비가 완료되면 모터를 작동시킴과 동시에 제1용기 100의 피스톤을 일정 압력으로 작용시켜 제1용기 100에 수용된 지방조직을 분쇄부 200의 분쇄공간 220으로 송출한다. 분쇄공간 220에 인입된 지방조직은 필터 255를 거쳐 회전체 251의 블레이드 253의 작용으로 균질크기로 분쇄되고 상기 분쇄된 지방조직은 아웃렛 240을 통해 제2용기 300으로 수용된다.
상기 인렛 110과 아웃렛 240은 필요에 따라 2이상 형성될 수 있다. 인렛과 아웃렛이 2 이상 형성된 경우 선택적으로 사용되지 않는 인렛과 아웃렛은 밀폐수단으로 의해 차단될 수 있다.
한편 상기 임펠러부 250에서 분쇄작용은 필터 255에 인입된 지방조직이 필터 255의 단공 255a를 통하여 인입되는 것인데, 상기 단공 255a는 도 8에서 보이는 바와 같이 일정크기의 지방조직을 하부로 통과시키는 역할을 하면서 지방조직이 블레 이드 253에 의해 분쇄될 때 파지하는 역할도 수행한다. 이로서 일정크기로 분쇄된 지방조직은 회전체 251의 하부에 형성된 아웃렛 240을 통하여 제2용기 300에 인입되고 결국 제2용기에 수용된 분쇄된 지방조직은 입도가 균일하여 균제도 역시 우수할 수 있는 것이다.
종래 분쇄기는 믹서형 분쇄기로서 일정 압력없이 일정 용기내에 분쇄될 고체 또는 액체가 자유회전에 의해 블레이드와의 충격으로 분쇄되는 방식이다. 이러한 방식은 분쇄물의 입도 균제도 제어가 어렵고 균제도를 일정 수준으로 유지하기 위해서는 장시간이 소요되며 장시간 피분쇄물을 블레이드에 노출시킴으로서 유효조직이 파괴되는 문제점이 있었다. 그러나 본 발명의 일실시예에 의한 분쇄방식에 의한 경우 단시간에 유효조직을 일정크기로 형성할 수 있는 장점이 있는 것이다.
한편 본 발명의 일실시예에서 상기 분쇄부 200은 교체형 또는 1회용으로 사용할 수 있다. 지방조직의 분쇄한 분쇄부는 재사용시 멸균을 하여 재사용하여야 한다. 그러나 통상 멸균실패율이 존재하는 현실에서 보다 안정성을 향상시키기 위해 상기 분쇄부를 탈착식으로 제조함이 바람직하다.
도 9는 본 발명의 따른 아웃렛이 2이상 형성된 예를 나타낸 것이고, 도 10은 동력발생부 210과 베어링부 230이 분리된 형태 또는 일체형으로서 상기 분쇄부 200과 연결될 상부에 실링부 500을 더 포함하는 구조이다. 상기 실링부 500은 멸균 또는 소독시 동력발생부 등을 보호할 수 있으며 전술한 바와 같이 분쇄부를 안정성을 향상시키는 역할을 할 수 있다. 한편 도 11은 분쇄부의 다른 실시예를 나타낸 것으로 동력발생부 210과 베어링부 230을 일체로 형성한 것이다.
상기와 같은 장치를 이용하여 제조된 지질이 제거된 지방조직을 상기 혈액성분을 원심분리 등을 통해 필요한 성분만 추출한 혈액성분과 혼합하여 필러를 완성된다.
본 발명의 일실시예에 따라 제조된 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러는 혈액성분이 응고한 상태인 겔(Gel)상인 것이 바람직하다.
도 12는 본 발명의 일실시예에 따라 제조된 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 사진을 나타낸 것이다. 지질이 제거된 지방조직에 혈액성분을 원심분리 등을 통해 혈소판이 풍부한 혈장(PRP)을 혼합하여 필러를 제조하였으며 혈액응고를 유도하기 위해 염화칼슘(Cacl2)을 추가하였다. 상기 필러는 주사기를 이용하여 인체내에 주입할 수 있다.
이하, 본 발명의 실시예에 대하여 상세히 설명한다.
실시예 1
환자로부터 추출한 지방조직을 분쇄한 다음, 증류수를 넣고 60~80℃, 110W에서 약 10분 동안 10~15회 초음파로 처리(sonication)하여 지질을 제거하였다. 상기 지질이 제거된 지방조직을 필터를 이용하여 필터링한 후에 70% 에탄올로 세척하고, 증류수로 다시 세척하여 지질을 제거하였다. 이후 방사선을 이용하여 멸균함으로써 지질이 제거된 지방조직을 준비하였다. 또한, 항응고제를 첨가한 혈액을 원심분리하여 혈소판이 풍부한 혈장(PRP)을 얻어 상기 준비된 지질이 제거된 지방조직에 혼 합하고 염화칼슘(Cacl2) 또는 트롬빈을 사용하여 응고를 유도하여 필러를 제조하였다. 상기 제조된 필러를 환자에게 주입하여 관찰하였다.
실시예 2
환자로부터 추출한 지방조직을 분쇄한 다음, 증류수와 히알루로니다아제(hyaluronidase)를 1:1:0.1의 비율로 넣고 60~80℃, 110W에서 약 10분 동안 10~15회 초음파로 처리(sonication)하여 지질을 제거하였다. 상기 지질이 제거된 지방조직을 필터를 이용하여 필터링한 후에 70% 에탄올로 세척하고, 증류수로 다시 세척하여 지질을 제거하였다. 이후 방사선을 이용하여 멸균함으로써 지질이 제거된 지방조직을 준비하였다. 또한, 항응고제를 첨가한 혈액을 원심분리하여 혈소판이 풍부한 혈장(PRP)을 얻어 상기 준비된 지질이 제거된 지방조직에 혼합하고 염화칼슘(Cacl2) 또는 트롬빈을 사용하여 응고를 유도하여 필러를 제조하였다. 상기 제조된 필러를 환자에게 주입하여 관찰하였다.
실시예 3
환자로부터 추출한 지방조직을 분쇄한 다음, 증류수를 넣고 가압 노즐 분사하여 지질을 제거시켰다. 상기 지질이 제거된 지방조직을 필터를 이용하여 필터링한 후에 70% 에탄올로 세척하고, 증류수로 다시 세척하여 지질을 제거하였다. 이후 방사선을 이용하여 멸균함으로써 지질이 제거된 지방조직을 준비하였다. 또한, 항 응고제를 첨가한 혈액을 원심분리하여 혈소판이 풍부한 혈장(PRP)을 얻어 상기 준비된 지질이 제거된 지방조직에 혼합하고 염화칼슘(Cacl2) 또는 트롬빈을 사용하여 응고를 유도하여 필러를 제조하였다. 상기 제조된 필러를 환자에게 주입하여 관찰하였다.
실시예 4
환자로부터 추출한 지방조직을 본 발명의 일실시예에서 언급한 분쇄장치의 제1용기에 담은 후 분쇄부로 형성된 장치를 이용하되 회전체의 속도를 약 8000rpm으로 분쇄하였다. 이후 분쇄된 지방조직을 제2용기에 수용하여 원심분리기(LipokitTM)로 3,500rpm에서 5분간 작동하여 지질이 제거된 지방조직을 수득하였다. 또한, M항응고제를 첨가한 혈액을 원심분리하여 혈소판이 풍부한 혈장(PRP)을 얻어 상기 준비된 지질이 제거된 지방조직에 혼합하고 염화칼슘(Cacl2) 또는 트롬빈을 사용하여 응고를 유도하여 필러를 제조하였다. 상기 제조된 필러를 환자에게 주입하여 관찰하였다.
비교예 1
환자로부터 추출한 지방조직을 분쇄한 다음, 증류수를 넣고 60~80℃, 110W에서 약 10분 동안 10~15회 초음파로 처리(sonication)하여 지질을 탈리시켰다. 상기 탈리된 지질과 지질이 탈리되지 않은 지방조직을 3,500rpm에서 5분간 원심분리한 후에, 70% 에탄올로 세척하고, 증류수로 다시 세척하여 지질을 제거하였다. 상기 지질이 제거된 지방조직을 방사선을 이용하여 멸균함으로써 지질이 제거된 지방조직을 제조하였으며 이를 혈액성분과 혼합하는 과정없이 필러로 하여 환자에게 주입하여 관찰하였다.
※ 실험 결과
실험 결과 실시예 1 내지 4에서 제조된 필러를 환자에게 주입한 결과 필러 자체의 점도가 우수하고 혈액의 응고로 인해 경도가 크게 증가하여 변형에 대한 지지력이 우수한 것을 관찰할 수 있었다.
이에 반해 비교예 1을 보면 지질이 제거된 지방조직의 양은 적고 필러 자체의 점도나 변형에 대한 지지력이 약한 것을 관찰할 수 있었다.
이상에서 설명한 본 발명은 전술한 실시예 및 첨부된 도면에 의해 한정되는 것이 아니고, 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 여러 가지 치환, 변형 및 변경이 가능함은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 명백할 것이다.
도 1 및 도 2는 본 발명의 일실시예에 따른 필러의 제조공정도.
도 3은 혈소판이 풍부한 혈장(PRP)에 대한 사진.
도 4는 본 발명의 바람직한 일실시예에 의한 지질이 제거된 지방조직의 제조장치 개념도.
도 5는 본 발명의 바람직한 일실시예에 의한 지질이 제거된 지방조직의 제조장치 중 분쇄부의 분해사시도.
도 6 및 도 7은 도 4 실시예의 단면도.
도 8는 임펠러부의 부분 확대도.
도 9 내지 도 11은 본 발명의 다른 실시예에 의한 분쇄부의 단면도.
도 12는 본 발명의 일실시예에 따라 제조된 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러 사진.
<도면의 주요 부호에 대한 설명>
100 : 제1용기 110 : 인렛
200 : 분쇄부 210 : 동력발생부
211 : 모터 213 : 주샤프트
220 : 분쇄공간 230 : 베어링부
231 : 베어링 233 : 부샤프트
240 : 아웃렛 250 : 임펠러부
251 : 회전체 253 : 블레이드
255 : 필터 270 : 홀더
300 : 제2용기 400 : 제어부
500 : 실링부

Claims (23)

  1. 필러의 제조방법에 있어서,
    지방조직을 분쇄하여 상기 지방조직을 수득하는 수득단계; 및
    상기 수득된 지방조직과 혈액성분을 혼합하여 응고시키는 혈액혼합단계를 포함하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 제조방법.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 수득단계에서 상기 지방조직을 분쇄한 후에
    상기 분쇄된 지방조직에서 지질을 제거하는 분리단계; 및
    상기 분리된 지방조직을 멸균하여 지질이 제거된 지방조직을 수득하는 수득단계를 더 포함하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 제조방법.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 분리단계는 초음파로 처리하여 지질을 제거하는 것을 특징으로 하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 제조방법.
  4. 제2항에 있어서,
    상기 분리단계는 분쇄한 지방조직을 히알루로니다아제(hyaluronidase)로 처리한 다음, 초음파 처리하는 것을 특징으로 하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 제조방법.
  5. 제2항에 있어서,
    상기 분리단계는 가압 노즐 분사를 통해 지질을 탈리시키는 것을 특징으로 하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 제조방법.
  6. 제2항에 있어서,
    상기 분리단계에서 에탄올 세척 또는 증류수 세척을 추가하는 것을 특징으로 하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 제조방법.
  7. 제2항에 있어서,
    상기 멸균은 방사선 또는 EO가스를 이용하는 것을 특징으로 하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 제조방법.
  8. 제1항에 있어서,
    상기 혈액성분은 혈소판이 풍부한 혈장(PRP)으로 구성된 것을 특징으로 하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 제조방법.
  9. 제1항에 있어서,
    상기 혈액혼합단계에서는 혈액응고를 유도하기 위해 염화칼슘(Cacl2) 또는 트롬빈을 첨가하는 것을 특징으로 하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 제조방법.
  10. 필러의 제조방법에 있어서,
    제1용기에 수용되고 채취된 지방조직을 일정 압력으로 분쇄부에 공급하여 분쇄하여 분쇄된 지방조직을 제2용기에 즉시 수용하는 분쇄단계;
    상기 분쇄되어 제2용기에 수용된 분쇄물질을 원심분리하여 지질을 제거하는 분리단계;
    상기 각각 분리된 분쇄물질 중에서 지질이 제거된 지방조직을 수득하는 수득단계; 및
    상기 수득된 지질이 제거된 지방조직과 혈액성분을 혼합하여 응고시키는 단계를 포함하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 제조방법.
  11. 제10항에 있어서,
    상기 분쇄단계는 제1용기, 분쇄부, 제2용기, 홀더를 포함하는 분쇄장치로 이루어지되,
    상기 분쇄부는 동력발생부, 임펠러부를 포함하고
    상기 임펠러부는 블레이드가 형성된 회전체와 필터 및 분쇄된 지방조직을 제 2용기에 송출하는 아웃렛을 포함하며,
    홀더는 제1용기를 수용할 수 있는 인렛이 일단부에 형성되고 타단부는 분쇄부과 결합되며,
    분쇄부는 홀더와 결합구조로 인해 내부에 제1용기에 수용된 지방조직이 인입되는 분쇄공간이 형성된 것을 특징으로 하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 제조방법.
  12. 제11항에 있어서,
    물질이 수용된 제1용기는 인렛에 연결되고, 분쇄된 지방조직을 수용할 제2용기는 아웃렛 연결되어 제1용기에 일정 압력으로 가해지면 제1용기에 수용된 지방조직이 분쇄부의 분쇄공간으로 송출되는 것을 특징으로 하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 제조방법.
  13. 제12항에 있어서,
    상기 분쇄공간에 인입된 지방조직은 필터를 거쳐 회전체의 블레이드에 의한 작용으로 균질크기로 분쇄되는 것을 특징으로 하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 제조방법.
  14. 제12항에 있어서,
    상기 필터에 인입된 지방조직은 필터의 단공를 통하여 인입되어 상기 단공이 지방조직을 파지하고 블레이드가 상기 파지된 물질을 분쇄하는 지지체의 제조방법.
  15. 제11항에 있어서,
    상기 인렛과 아웃렛은 2 이상 형성되되, 선택적으로 사용되지 않는 인렛과 아웃렛은 밀폐수단으로 의해 차단되는 것을 특징으로 하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 제조방법.
  16. 제11항에 있어서,
    상기 분쇄부에서 임펠러부와 동력발생부 및 베어링부는 이격되어 형성된 것을 특징으로 하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 제조방법.
  17. 제16항에 있어서,
    상기 이격된 사이에 실링부를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 제조방법.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 의한 지방조직 및 혈액성분을 이용한 필러의 제조방법으로 제조된 필러.
  19. 분쇄된 지방조직과 혈액성분이 혼합된 필러.
  20. 제19항에 있어서,
    상기 지방조직은 지질이 제거된 것을 특징으로 하는 필러.
  21. 제19항 또는 제20항에 있어서,
    상기 필러는 겔(Gel)상인 것을 특징으로 하는 필러.
  22. 제19항 또는 제20항에 있어서,
    상기 혈액성분은 혈소판이 풍부한 혈장(PRP)으로 구성된 것을 특징으로 하는 필러.
  23. 제19항 또는 제20항에 있어서,
    상기 지방조직에 혈액성분을 혼합하여 응고를 유도하기 위해 염화칼슘(Cacl2) 또는 트롬빈을 첨가하는 것을 특징으로 하는 필러.
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