KR20100133012A

KR20100133012A - 항-ｃｘｃｒ4 항체

Info

Publication number: KR20100133012A
Application number: KR1020107025445A
Authority: KR
Inventors: 신디 타케우치 디커슨; 데이비드 매튜 마르퀴스; 빅터 오붕우; 셍-빈 펭; 피터 에드워드 베일란코트
Original assignee: 일라이 릴리 앤드 캄파니
Priority date: 2008-05-14
Filing date: 2009-05-07
Publication date: 2010-12-20
Also published as: EA201071300A1; CN102027015A; CA2724409A1; MX2010012435A; ZA201007955B; IL208869A0; JP2011520885A; EP2297206A1; WO2009140124A1; AU2009246683A1

Abstract

본 발명은 인간 CXCR4에 결합하고, 고친화성 및 강력한 중화 특성을 갖는 것을 특징으로 하는 항체를 제공한다. 본 발명의 항체는 종양 성장, 침윤, 혈관형성 또는 전이를 비롯한 종양형성의 치료에서 유용하다.

Description

항-ＣＸＣＲ4 항체{ANTI-ＣＸＣＲ4 ANTIBODIES}

본 발명은 CXCR4에 대한 모노클로날 항체, 및 발병기전이 CXCR4 및 SDF-1에 의해 매개되는 질환 치료에 있어서의 상기 모노클로날 항체의 용도에 관한 것이다.

케모카인 수용체인 CXCR4는 G 단백질-커플링된, 7-막횡단 수용체이다. 기타 다른 케모카인 수용체와 같이 CXCR4도 백혈구의 지향성 이동과 활성화를 매개함으로써 면역 및 염증 반응에서 중요한 역할을 한다. CXCR4는 유방암, 전립선암, 폐암, 난소암, 결장암, 췌장암, 신장암 및 뇌암 뿐만 아니라 비-호지킨 림프종 및 만성 림프구성 백혈병을 비롯한 각종의 암 세포주 및 조직에서 발현 또는 과발현된다. CXCR4에 대한 유일의 공지 리간드는 기질 세포-유래 인자-1 (SDF-1, 또는 CXCL12)이다. CXCR4와 SDF-1의 상호작용은 종양 성장, 침윤, 혈관형성 및 전이를 비롯한 다수의 종양형성 단계에서 중요한 역할을 한다.

각종 중증 질환에 CXCR4가 관여하는 것에 비추어, CXCR4는 치료학적 표적으로서 연구되어 왔다. 예를 들면, 비시클람 CXCR4 길항제인 AMD3100은 다발성 골수종 및 비-호지킨 림프종 환자용으로 이용될 수 있다. 펩티드 CXCR4 길항제인 CTCE9908은 현재 암에 대한 것으로서 제Ib/II상 임상 시험 중에 있다. 추가로, CXCR4를 표적하는 항체가 당업계에 개시되어 있다 (WO 06/089141, US 07/0059308, 및 Carnec et al [Carnec X, Quan L, Olson W, Hazan U, Dragic T. (2005) Anti-CXCR4 Monoclonal Antibodies Recognizing Overlapping Epitopes Differ Significantly in Their Ability To Inhibit Entry of Human Immunodeficiency Virus Type I. Journal of Virology. Feb.2005: 1930-1933]).

비록 CXCR4를 표적하는 각종의 제제가 개발 중에 있기는 하지만, CXCR4를 표적하는 추가의 치료제에 대해서는 여전히 요구되고 있다. 본 발명의 항체는 다수의 바람직한 특성을 갖는, 치료학적으로 유용한 CXCR4 길항제이다. 본 발명의 항체는 증가된 물리화학적 안정성과 가용성을 갖는다. 본 발명은 고친화도로 인간 CXCR4에 결합하여 인간 CXCR4가 SDF-1에 결합하는 것을 저해하는 CXCR4 항체를 제공한다. 효능이 높기 때문에 치료학적 요법에서 저용량으로 사용될 수 있다. 추가로, 이러한 항체는 CXCR4에 대한 SDF-1의 상호작용을 간섭함으로써, 종양 성장, 침윤, 혈관형성 및 전이를 비롯한 종양형성을 감소시킨다. 추가로, 본 발명의 항체는 종양 세포의 아폽토시스를 유도한다.

본 발명은 인간 CXCR4에 결합하고,

a. 인간 SDF-1α (서열번호: 33)가 CXCR4에 결합하는 것을 저해하되, 본원에 기술된 바와 같은 인간 CXCR4/¹²⁵I-SDF-1α 결합 저해 측정법에서 인간 CXCR4에 대한 IC₅₀이 10 nM 내지 0.05 nM이고;

b. 세포의 표면 상에 CXCR4를 보유하는 세포의 이동을 저해하되, 본원에 기술된 바와 같은 화학주성 측정법에서 IC₅₀이 30 nM 내지 0.3 nM이며;

c. 본원에 기술된 바와 같은 표면 플라즈몬 공명 (BIA코어(BIAcore)) 측정법에서 15 nM 내지 0.05 nM의 친화도 (K_D)를 나타내는 것인, 공학처리된 인간 항체 또는 그의 결합 단편을 포함한다.

본 발명은 바람직하게는, 인간 CXCR4에 결합하고, 인간 SDF-1α (서열번호: 33)가 CXCR4에 결합하는 것을 저해하되, 본원에 기술된 바와 같은 인간 CXCR4/¹²⁵I-SDF-1α 결합 저해 측정법에서 인간 CXCR4에 대한 IC₅₀이 0.5 nM 내지 0.05 nM인 것인, 공학처리된 인간 항체 또는 그의 결합 단편을 제공한다.

본 발명은 바람직하게는, 인간 CXCR4에 결합하고, 세포의 표면 상에 CXCR4를 보유하는 세포의 이동을 저해하되, 본원에 기술된 바와 같은 화학주성 측정법에서 IC₅₀이 3.0 nM 내지 0.3 nM인 것인, 공학처리된 인간 항체 또는 그의 결합 단편을 제공한다.

본 발명은 바람직하게는, 인간 CXCR4에 결합하고, 본원에 기술된 바와 같은 표면 플라즈몬 공명 (BIA코어) 측정법에서 1.0 nM 내지 0.05 nM의 친화도 (K_D)를 나타내는 것인, 공학처리된 인간 항체 또는 그의 결합 단편을 제공한다.

본 발명은 바람직하게는, 인간 CXCR4에 결합하고, 1 mg/kg으로 투여되었을 때에 본원에 기술된 바와 같은 종양 이종이식 모델에서 종양 성장을 방해함으로써 항-종양형성 활성을 나타내는 것인, 공학처리된 인간 항체 또는 그의 결합 단편을 제공한다.

본 발명은 바람직하게는, 인간 CXCR4에 결합하고, 2 ㎍/mL 내지 10 ㎍/mL의 양으로 투여되었을 때에 본원에 기술된 바와 같은 아폽토시스 측정법에서 종양 세포의 아폽토시스를 유도하는 것인, 공학처리된 인간 항체 또는 그의 결합 단편을 제공한다.

본 발명은 프레임워크 부위, 서열번호: 8의 아미노산 서열을 갖는 CDRL1, 서열번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 CDRL2, 및 서열번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 부위를 포함하는 경쇄, 및 프레임워크 부위, 서열번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 CDRH1, 서열번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 CDRH3, 및 서열번호: 2, 서열번호: 4, 서열번호: 5, 서열번호: 6, 및 서열번호: 7로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 CDRH2를 포함하는 중쇄 가변 부위를 포함하는 중쇄를 포함하되, 여기서, 항체는 인간 CXCR4에 결합하는 것인, 공학처리된 인간 항체 또는 그의 결합 단편을 포함한다.

추가로, 본 발명은 인간 CXCR4에 결합하되, 여기서, 경쇄는 서열번호: 16의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄는 서열번호: 11, 서열번호: 12, 서열번호: 13, 서열번호: 14, 및 서열번호: 15로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체를 포함한다.

추가로, 본 발명은 인간 CXCR4에 결합하되, 여기서, 경쇄는 서열번호: 22의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄는 서열번호: 17, 서열번호: 18, 서열번호: 19, 서열번호: 20, 및 서열번호: 21로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체를 포함한다.

본 발명은 또한 인간 CXCR4에 결합하되, 여기서, 항체가 서열번호: 17 및 서열번호: 22를 포함하는 항체, 서열번호: 18 및 서열번호: 22를 포함하는 항체, 서열번호: 19 및 서열번호: 22를 포함하는 항체, 서열번호: 20 및 서열번호: 22를 포함하는 항체, 및 서열번호: 21 및 서열번호: 22를 포함하는 항체로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 항체를 포함한다.

본원에서 정의된 바와 같은 본 발명의 항체는 본원에 기술된 바와 같은 인간 CXCR4/¹²⁵I-SDF-1α 결합 저해 측정법에서 10 nM 이하의 IC₅₀을 갖는 것을 특징으로 한다. 바람직한 본 발명의 항체는 인간 CXCR4에 대하여 5.0 nM 이하의 결합 친화도를 갖는다. 가장 바람직한 본 발명의 항체는 인간 CXCR4에 대하여 0.5 nM 이하의 결합 친화도를 갖는다. 추가로 바람직한 본 발명의 항체는 본원에 기술된 바와 같은 인간 CXCR4/¹²⁵I-SDF-1α 결합 저해 측정법에서 인간 CXCR4에 대하여 IC₅₀이 10 nM 내지 0.05 nM이다. 추가로 바람직한 본 발명의 항체는 본원에 기술된 바와 같은 인간 CXCR4/¹²⁵I-SDF-1α 결합 저해 측정법에서 인간 CXCR4에 대하여 IC₅₀이 0.5 nM 내지 0.05 nM이다.

본원에서 정의된 바와 같은 본 발명의 항체는 본원에 기술된 바와 같은 화학주성 측정법에서 30 nM 이하의 IC₅₀을 갖는 것을 특징으로 한다. 바람직한 본 발명의 항체는 화학주성 측정법에서 15 nM 이하의 IC₅₀을 갖는다. 더욱 바람직한 본 발명의 항체는 화학주성 측정법에서 3.0 nM 이하의 IC₅₀을 갖는다. 추가로 바람직한 본 발명의 항체는 본원에 기술된 바와 같은 화학주성 측정법에서 30 nM 내지 0.3 nM의 IC₅₀을 갖는다. 추가로 바람직한 본 발명의 항체는 본원에 기술된 바와 같은 화학주성 측정법에서 3.0 nM 내지 0.3 nM의 IC₅₀을 갖는다.

본원에서 정의된 바와 같은 본 발명의 항체는 본원에 기술된 바와 같은 표면 플라즈몬 공명 (BIA코어)에 의해 항체의 결합 활성을 평가하는 측정법에서 15 nM 이하의 K_D를 갖는 것을 특징으로 한다. 더욱 바람직한 본 발명의 항체는 BIA코어 측정법에서 10 nM 이하의 K_D를 갖는다. 가장 바람직한 본 발명의 항체는 BIA코어 측정법에서 1.0 nM 이하의 K_D를 갖는다. 추가로 바람직한 본 발명의 항체는 본원에 기술된 바와 같은 BIA코어 측정법에서 15 nM 내지 0.05 nM의 K_D를 갖는다. 추가로 바람직한 본 발명의 항체는 본원에 기술된 바와 같은 BIA코어 측정법에서 1.0 nM 내지 0.05 nM의 K_D를 갖는다.

본원에서 정의된 바와 같은 본 발명의 항체는 10 mg/kg으로 투여되었을 때에 NOD/SCID 마우스 및 인간 비-호지킨 림프종 나말와(Namalwa) 세포를 사용하는 종양 이종이식 모델에서 종양 성장을 방해함으로써 항-종양형성 활성을 갖는 것을 특징으로 한다. 더욱 바람직한 본 발명의 항체는 1 mg/kg으로 투여되었을 때에 종양 성장을 방지함으로써 항-종양형성 활성을 갖는다.

본원에서 정의된 바와 같은 본 발명의 항체는 본원에 기술된 바와 같은 아폽토시스 측정법에서 종양 세포의 아폽토시스를 유도하는 것을 특징으로 한다. 더욱 바람직한 본 발명의 항체는 2 ㎍/mL 내지 10 ㎍/mL의 양으로 투여되었을 때에 나말와 및 CEM 세포를 비롯한 다수의 종양 세포에서 아폽토시스의 홀마크인 핵 단편화 및 캐스파제 3의 활성화를 유도한다.

본 발명은 하나 이상의 제약학상 허용가능한 담체, 희석제, 또는 부형제와 함께 본원에 기술된 바와 같은 항체를 포함하는 제약 조성물을 포함한다. 추가로, 본 발명은 하나 이상의 제약학상 허용가능한 담체, 희석제, 또는 부형제와 함께 본원에 다양하게 기술된 항체를 포함하는, 종양 성장, 침윤, 혈관형성 또는 전이를 비롯한 종양형성의 치료를 위한 제약 조성물을 포함한다. 추가로, 본 발명은 하나 이상의 제약학상 허용가능한 담체, 희석제, 또는 부형제와 함께 본원에 다양하게 기술된 항체를 포함하는, 유방암, 췌장암, 흑색종, 전립선암, 신장암, 신경모세포종, 비-호지킨 림프종, 폐암, 난소암, 직장결장암, 다발성 골수종, 다형성 교모세포종, 및 백혈병으로 구성된 군으로부터 선택되는 암의 치료를 위한 제약 조성물을 포함한다.

본 발명은 종양 성장, 침윤, 혈관형성 또는 전이를 비롯한 종양형성 치료용 약제의 제조에서 본원에 기술된 항체의 용도를 포함한다. 추가로, 본 발명은 유방암, 췌장암, 흑색종, 전립선암, 신장암, 신경모세포종, 비-호지킨 림프종, 폐암, 난소암, 직장결장암, 다발성 골수종, 다형성 교모세포종, 및 백혈병으로 구성된 군으로부터 선택되는 암 치료용 약제의 제조에서 본원에 기술된 항체의 용도를 포함한다.

본 발명은 본원에 기술된 항체를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 종양 성장, 침윤, 혈관형성 또는 전이를 비롯한 종양형성을 치료하는 방법을 포함한다. 추가로, 본 발명은 본원에 기술된 항체를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 유방암, 췌장암, 흑색종, 전립선암, 신장암, 신경모세포종, 비-호지킨 림프종, 폐암, 난소암, 직장결장암, 다발성 골수종, 다형성 교모세포종, 및 백혈병으로 구성된 군으로부터 선택되는 암을 치료하는 방법을 포함한다.

"항체"의 일반 구조는 당업계에 매우 잘 알려져 있다. IgG형의 항체의 경우, 쇄내 및 쇄간 디설피드 결합을 통해 공유 결합되어 있는 4개의 아미노산 쇄 (2개의 "중쇄"와 2개의 "경쇄")가 있다. 특정 생물계에서 발현이 될 때에 비변형된 인간 Fc 서열을 갖고 있는 항체는 Fc 부위에서 당화가 일어난다. 항체의 기타 다른 위치에서도 역시 당화가 일어날 수 있다. 항체의 하위유니트 구조 및 3차 형상이 당업계에 주지되어 있다. 각 중쇄는 N-말단 중쇄 가변 부위 ("HCVR") 및 중쇄 불변 부위 ("HCCR")로 구성된다. 중쇄 불변 부위는 IgG, IgD, 및 IgA의 경우에는 3개의 도메인 (CH1, CH2, 및 CH3)으로; 및 IgM 및 IgE의 경우에는 4개의 도메인 (CH1, CH2, CH3, 및 CH4)으로 구성된다. 각 경쇄는 경쇄 가변 부위 (본원에서 "LCVR") 및 경쇄 불변 부위 ("LCCR")로 구성된다.

각 경쇄/중쇄 쌍의 가변 부위는 항체 결합 부위를 형성한다. HCVR 및 LCVR 부위는 추가로 상보성 결정 부위 (CDR)로 명명되는 초가변 부위와, 그 사이에 배치된 프레임워크 부위 ("FR")로 명명되는 더욱 보존성인 부위로 세분될 수 있다. 각 HCVR과 LCVR은 아미노 말단에서부터 카르복시 말단까지 다음 순서로 배열된 3개의 CDR과 4개의 FR로 구성된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 여기서 중쇄의 3개의 CDR은 "CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3"으로 지칭되고, 경쇄의 3개의 CDR은 "CDRL1, CDRL2 및 CDRL3"으로 지칭된다. 이들 CDR은 항원과의 특이적인 상호작용을 형성하는 잔기 대부분을 함유하고 있다. 아미노산을 각 도메인으로 지정하는 것은 주지되어 있는 협정 (예로서, 문헌 [Kabat, "Sequences of Proteins of Immunological Interest," National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)])에 따라 이루어진다.

본 발명의 항체는 면역글로불린 부류 (IgA, IgD, IgG, IgM, 및 IgE) 중 어느 것으로부터 선택되는 중쇄 불변 부위를 가질 수 있다. 추가로, 본 발명의 항체는 기타 다른 IgG 하위유형과 비교하였을 때 그의 보체 인자에 결합할 수 있는 능력이 감소되어 있기 때문에 인간 IgG4 Fc 부위로부터 유래된 Fc 부위를 함유한다.

항체는 예를 들어, 임의의 진핵성, 원핵성 또는 파지 클론을 비롯한, 단일 카피 또는 클론으로부터 유래될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 항체는 균질성인 또는 실질적으로 균질성인 군집에 존재한다. 항체는 Fc 부위를 비롯한 완전한 또는 전장의 불변 부위를 포함하는 온전한 항체이거나, 또는 임의의 단축된 형태가 항원-결합부를 포함하고 항원-결합능을 보유한다면, 상기 항체의 일부 또는 단편일 수 있다. 상기와 같은 단축된 형태로는 예를 들면, 개시된 항-CXCR4 항체의 CDR 또는 가변 부위를 포함하는 Fab 단편, Fab' 단편 또는 F(ab')2 단편을 포함한다. 추가로, 상기와 같은 단축된 항체 형태는 LCVR 및 HCVR을 코딩하는 DNA가 링커 서열로 연결됨으로써 생성될 수 있는 단일 쇄 Fv 단편일 수 있다 (문헌 [Pluckthun, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp 269-315, 1994] 참조). 단편 또는 일부가 명시되었는지 여부와는 상관없이, 본원에서 사용되는 바, "항체"라는 용어는 달리 언급되지 않는 한, 상기 단편 또는 일부 뿐만 아니라, 단일 쇄를 포함한다. 단백질이 CXCR4에 특이적으로 또는 우선적으로 결합할 수 있는 능력을 보유하고, 본원에 개시된 서열 또는 서열들을 보유하는 한, 이들은 "항체"라는 용어 안에 포함된다. 본 발명의 항체는 당업계에 주지된 기법, 예로서, 재조합 기술, 파지 디스플레이 기술, 합성 기술 또는 상기 기술들의 조합 또는 당업계에서 쉽게 알 수 있는 기타 다른 기술을 사용함으로써 생산될 수 있다.

"공학처리된 인간 항체"라는 용어는 인간 게놈 서열로부터 유래된 프레임워크 및 불변 부위와 동일하거나, 또는 실질적으로 동일한 (실질적으로 인간인 것인) 인간 기원의 프레임워크, 힌지 부위, 및 불변 부위를 갖는 항체를 지칭하는 것이다. 완전한 인간 프레임워크, 힌지 부위, 및 불변 부위는 인간 생식계열 서열 뿐만 아니라, 천연적으로 발생된 체세포 돌연변이인 것이다. 공학처리된 인간 항체는 그 안에 하나 이상의 아미노산 치환, 결실, 또는 부가를 포함하는 완전한 인간 프레임워크, 힌지, 또는 불변 부위로부터 유래된 프레임워크, 힌지, 또는 불변 부위를 포함할 수 있다. 대개, 공학처리된 인간 항체는 인간에서 실질적으로 비-면역원성인 것이 바람직하다.

본 발명의 공학처리된 인간 항체에 대한 기반으로서 각종의 상이한 인간 프레임워크 서열이 단독으로 또는 조합하여 사용될 수 있다. 본 발명의 항체의 프레임워크 부위는 인간 기원이거나, 또는 실질적으로 인간 (인간 기원인 것의 적어도 95%, 97% 또는 99%)인 것이 바람직하다. 인간 기원인 것의 프레임워크 부위의 서열은 문헌 [Immunoglobulin Factsbook, by Marie-Paule Lafranc, Gerard Lefranc, Academic Press 2001, ISBN 012441351]으로부터 수득할 수 있다.

본 발명의 공학처리된 인간 항체에 대한 프레임워크 서열이 "도너" 가변 프레임워크 부위로서의 역할을 하고, 이를 사용함으로써 당업계에 공지된 방법의 이용으로 본원에서 명시된 CDR과 동일한 CDR을 갖는 추가의 공학처리된 인간 항체를생산할 수 있다. 추가로, 본 발명의 공학처리된 인간 항체에 대한 프레임워크 서열은 추가의 공학처리된 인간 항체를 생성하는 데 기타 다른 공지 인간 프레임워크 서열과 비교될 수 있다. 따라서, 이러한 정보는 또하나의 선택된 상동성 인간 프레임워크 부위를 상기 위치에서 공학처리된 인간 도너 아미노산 잔기로 "역-돌연변이화"시키는 데 사용될 수 있다. 추가로, 관련 위치에서 컨센서스 또는 도너 공학처리된 인간 아미노산 잔기가 사용될 수 있도록 추가의 인간 프레임워크에서 임의의 "희귀" 아미노산이 검출될 수 있게 할 수 있다.

"저해하다"라는 용어는 CXCR4 수용체에 결합하는 생물학적 효과를 실질적으로 길항시키거나, 막거나, 방해하거나, 제지하거나, 저속화시키거나, 파괴하거나, 제거하거나, 중단시키거나, 감소시키거나, 또는 역전시킬 수 있는 능력을 의미한다.

"CXCR4" 또는 "인간 CXCR4"는 임의의 인간 CXCR4 뿐만 아니라, 기능적으로 활성을 띠는 그의 돌연변이화된 형태를 지칭한다. 그 예로는 서열번호: 30, 서열번호: 31, 및 서열번호: 32를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

"환자"는 포유동물, 바람직하게는 인간이다.

"치료하는" (또는 "치료하다" 또는 "치료")이라는 용어는 증상, 질병, 병태, 또는 질환의 진행 또는 중증도를 저속화시키거나, 중단시키거나, 감소시키거나, 또는 역전시키는 것을 의미한다.

"예방하는" (또는 "예방하다" 또는 "예방")이라는 용어는 증상, 질병, 병태, 또는 질환의 발병 또는 발생을 막거나, 제지하거나, 또는 저해시키는 것을 의미한다. 급성 사례 및 만성 병태는 치료되고 예방할 수 있다. 급성 사례의 경우, 증상, 질병, 병태, 또는 질환이 발병했을 때에 항체를 투여하고, 상기 급성 사례가 끝나면 상기 투여를 중지하게 되는 반면, 만성 증상, 질병, 병태, 또는 질환은 보다 장기간 동안에 걸쳐 치료를 하게 된다.

"치료학적 유효량"이라는 용어는 단일 용량 또는 다중 용량으로 환자에게 투여되었을 때에 원하는 바대로 치료 또는 예방을 달성할 수 있는 본 발명의 항체의 양 또는 투여량을 지칭한다. 치료학적 유효량은 단일 (예로서, 볼루스), 다중 또는 연속 투여당 약 0.001 내지 20 mg/kg의 양을 포함할 수 있다.

본 발명의 특정 항체로는 서열번호: 1, 2, 3, 8, 9, 및 10의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 서열번호: 1, 4, 3, 8, 9, 및 10의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 서열번호: 1, 5, 3, 8, 9, 및 10의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 서열번호: 1, 6, 3, 8, 9, 및 10의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 서열번호: 1, 7, 3, 8, 9, 및 10의 아미노산 서열을 포함하는 항체를 포함한다. 열거된 서열은 각각 CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3을 나타낸다.

본 발명의 특정 항체로는 서열번호: 16의 아미노산 서열을 갖는 LCVR 및 서열번호: 11의 아미노산 서열을 갖는 HCVR을 포함하는 항체; 서열번호: 16의 아미노산 서열을 갖는 LCVR 및 서열번호: 12의 아미노산 서열을 갖는 HCVR을 포함하는 항체; 서열번호: 16의 아미노산 서열을 갖는 LCVR 및 서열번호: 13의 아미노산 서열을 갖는 HCVR을 포함하는 항체; 서열번호: 16의 아미노산 서열을 갖는 LCVR 및 서열번호: 14의 아미노산 서열을 갖는 HCVR을 포함하는 항체; 서열번호: 16의 아미노산 서열을 갖는 LCVR 및 서열번호: 15의 아미노산 서열을 갖는 HCVR을 포함하는 항체를 포함한다.

본 발명은 CXCR4에 결합하여 CXCR4 활성을 저해하는 항체 5개를 포함한다. 특히, 본 발명은 서열번호: 22의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 및 서열번호: 17의 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하는 항체; 서열번호: 22의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 및 서열번호: 18의 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하는 항체; 서열번호: 22의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 및 서열번호: 19의 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하는 항체; 서열번호: 22의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 및 서열번호: 20의 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하는 항체; 서열번호: 22의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 및 서열번호: 21의 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하는 항체를 포함한다.

바람직하게는, 6개의 CDR 모두, HCVR, LCVR, HCVR 및 LCVR, 전체 중쇄, 전체 경쇄, 또는 전체 중쇄 및 경쇄가 본원에서 서열번호로 제시된 특정의 서열로 한정이 되는 것인 본 발명의 항체는 추가로 본원에 기술된 바와 같은 인간 CXCR4/¹²⁵I-SDF-1α 결합 저해 측정법에서 약 10 nM 이하, 더욱 바람직하게는, 약 5.0 nM 이하, 및 가장 바람직하게는, 0.5 nM 이하의 IC₅₀을 갖는 것을 특징으로 한다. 6개의 CDR 모두, HCVR, LCVR, HCVR 및 LCVR, 전체 중쇄, 전체 경쇄, 또는 전체 중쇄 및 경쇄가 본원에서 서열번호로 제시된 특정의 서열로 한정이 되는 것인 본 발명의 항체가 추가로 본원에 기술된 바와 같은 인간 CXCR4/¹²⁵I-SDF-1α 결합 저해 측정법에서 인간 CXCR4에 대한 IC₅₀이 10 nM 내지 0.05 nM인 것을 특징으로 하는 것이 추가로 바람직하다. 6개의 CDR 모두, HCVR, LCVR, HCVR 및 LCVR, 전체 중쇄, 전체 경쇄, 또는 전체 중쇄 및 경쇄가 본원에서 서열번호로 제시된 특정의 서열로 한정이 되는 것인 본 발명의 항체가 추가로 본원에 기술된 바와 같은 인간 CXCR4/¹²⁵I-SDF-1α 결합 저해 측정법에서 인간 CXCR4에 대한 IC₅₀이 0.5 nM 내지 0.05 nM인 것을 특징으로 하는 것이 추가로 바람직하다.

더욱 바람직하게는, 6개의 CDR 모두, HCVR, LCVR, HCVR 및 LCVR, 전체 중쇄, 전체 경쇄, 또는 전체 중쇄 및 경쇄가 본원에서 서열번호로 제시된 특정의 서열로 한정이 되는 것인 본 발명의 항체는 본원에 기술된 바와 같은 화학주성 측정법에서 약 30 nM 이하, 더욱 바람직하게는, 약 15 nM 이하, 및 더욱더 바람직하게는, 3.0 nM 이하의 IC₅₀을 갖는 것을 특징으로 한다. 6개의 CDR 모두, HCVR, LCVR, HCVR 및 LCVR, 전체 중쇄, 전체 경쇄, 또는 전체 중쇄 및 경쇄가 본원에서 서열번호로 제시된 특정의 서열로 한정이 되는 것인 본 발명의 항체가 본원에 기술된 바와 같은 화학주성 측정법에서 IC₅₀이 30 nM 내지 0.3 nM인 것을 특징으로 하는 것이 추가로 바람직하다. 6개의 CDR 모두, HCVR, LCVR, HCVR 및 LCVR, 전체 중쇄, 전체 경쇄, 또는 전체 중쇄 및 경쇄가 본원에서 서열번호로 제시된 특정의 서열로 한정이 되는 것인 본 발명의 항체가 본원에 기술된 바와 같은 화학주성 측정법에서 IC₅₀이 3.0 nM 내지 0.3 nM인 것을 특징으로 하는 것이 추가로 바람직하다.

더욱더 바람직하게는, 6개의 CDR 모두, HCVR, LCVR, HCVR 및 LCVR, 전체 중쇄, 전체 경쇄, 또는 전체 중쇄 및 경쇄가 본원에서 서열번호로 제시된 특정의 서열로 한정이 되는 것인 본 발명의 항체는 본원에 기술된 바와 같은 표면 플라즈몬 공명 (BIA코어)에 의해 항체의 결합 활성을 평가하는 측정법에서 약 15 nM 이하, 더욱 바람직하게는, 약 10 nM 이하, 및 가장 바람직하게는, 1.0 nM 이하의 K_D를 갖는 것을 특징으로 한다. 6개의 CDR 모두, HCVR, LCVR, HCVR 및 LCVR, 전체 중쇄, 전체 경쇄, 또는 전체 중쇄 및 경쇄가 본원에서 서열번호로 제시된 특정의 서열로 한정이 되는 것인 본 발명의 항체가 추가로 본원에 기술된 바와 같은 표면 플라즈몬 공명 (BIA코어)에 의해 항체의 결합 활성을 평가하는 측정법에서 본원에 기술된 바와 같은 BIA코어 측정법으로 15 nM 내지 0.05 nM의 K_D를 갖는 것을 특징으로 하는 것이 추가로 바람직하다. 6개의 CDR 모두, HCVR, LCVR, HCVR 및 LCVR, 전체 중쇄, 전체 경쇄, 또는 전체 중쇄 및 경쇄가 본원에서 서열번호로 제시된 특정의 서열로 한정이 되는 것인 본 발명의 항체가 추가로 본원에 기술된 바와 같은 표면 플라즈몬 공명 (BIA코어)에 의해 항체의 결합 활성을 평가하는 측정법에서 본원에 기술된 바와 같은 BIA코어 측정법으로 1.0 nM 내지 0.05 nM의 K_D를 갖는 것을 특징으로 하는 것이 추가로 바람직하다.

더욱 바람직하게는, 6개의 CDR 모두, HCVR, LCVR, HCVR 및 LCVR, 전체 중쇄, 전체 경쇄, 또는 전체 중쇄 및 경쇄가 본원에서 서열번호로 제시된 특정의 서열로 한정이 되는 것인 본 발명의 항체는 추가로 10 mg/kg으로 투여되었을 때에, 및 더욱더 바람직하게는, 1 mg/kg으로 투여되었을 때에 본원에 기술된 바와 같이 NOD/SCID 마우스 및 인간 비-호지킨 림프종 나말와 세포를 사용하는 종양 이종이식 모델에서 종양 성장을 방해함으로써 항-종양형성 활성을 갖는 것을 특징으로 한다.

가장 바람직하게는, 6개의 CDR 모두, HCVR, LCVR, HCVR 및 LCVR, 전체 중쇄, 전체 경쇄, 또는 전체 중쇄 및 경쇄가 본원에서 서열번호로 제시된 특정의 서열로 한정이 되는 것인 본 발명의 항체는 추가로 본원에 기술된 바와 같은 아폽토시스 측정법에서 종양 세포의 아폽토시스를 유도하는 것을 특징으로 한다. 6개의 CDR 모두, HCVR, LCVR, HCVR 및 LCVR, 전체 중쇄, 전체 경쇄, 또는 전체 중쇄 및 경쇄가 본원에서 서열번호로 제시된 특정의 서열로 한정이 되는 것인 본 발명의 항체가 2 ㎍/mL 내지 10 ㎍/mL의 양으로 투여되었을 때에 나말와 및 CEM 세포를 비롯한 다수의 종양 세포에서 아폽토시스의 홀마크인 핵 단편화 및 캐스파제 3의 활성화를 유도하는 것을 특징으로 하는 것이 더욱 바람직하다.

실시예

항체 I, II, III, IV, 및 V는 하기와 같이 제조되고 정제될 수 있다. 미리결정된 최적의 HC:LC 벡터비를 사용하여 항체를 분비하기 위한 발현 시스템으로, 또는 HC, 예를 들면, 서열번호: 23, 서열번호: 24, 서열번호: 25, 서열번호: 26, 또는 서열번호: 27 및 LC, 예를 들면, 서열번호: 28, 둘 모두를 코딩하는 단일 벡터 시스템으로 적절한 숙주 세포, 예를 들면, HEK 293 EBNA 또는 CHO를 일시적으로 또는 안정적으로 형질감염시켰다. 통상 사용되는 다수의 기법 중 어느 것을 사용하여 항체가 분비되어 있는, 정화된 배지를 정제하였다. 예를 들면, 인산염 완충 염수 (pH 7.4)와 같이 화합성인 완충액으로 평형화된 단백질 A 또는 G 세파로스(Sepharose) FF 칼럼에 배지를 알맞게 적용시킬 수 있었다. 칼럼을 세척하여 비특이적 결합 성분을 제거하였다. 결합된 항체는 예를 들면, pH 구배 (예를 들면, 0.1 M 인산나트륨 완충액 (pH 6.8) 내지 0.1 M 시트르산나트륨 완충액 (pH 2.5))에 의해 용리시켰다. 예를 들면, SDS-PAGE에 의해 항체 분획을 검출한 후, 풀링시켰다. 사용 의도에 따라 추가의 정제 단계를 임의적으로 수행하였다. 통상의 기법을 사용하여 항체를 농축시키고/거나 멸균 여과시킬 수 있었다. 크기 배제, 소수성 상호작용, 이온 교환 또는 히드록시아파타이트 크로마토그래피를 비롯한 통상의 기법에 의해 가용성 응집체 및 다합체를 효과적으로 제거할 수 있었다. 상기와 같은 크로마토그래피 단계 후 항체의 순도는 99%를 초과하였다. 생성물을 즉시 -70℃에서 냉동시킬 수 있거나, 동결건조시킬 수 있었다. 상기와 같은 항체의 아미노산 서열을 하기에서 제공한다.

서열번호

인간 CXCR4 / ¹²⁵ I- SDF -1α 결합 저해 측정법

CXCR4에의 SDF-1 결합이 CXCR4 세포내 신호전달 경로를 활성화시키는 데 있어서 제1 단계이다. 항체가 SDF-1와 CXCR4의 상호작용을 차단할 수 있는지 여부를 측정하기 위해 ¹²⁵I-표지된 SDF-1α 결합 측정법에서 내인성 CXCR4를 발현하는 인간 백혈병 CCRF-CEM 세포를 사용하였다. 96-웰의 바닥이 U자형인, 비처리된 폴리스티렌 플레이트에서 상기 측정법을 수행하였다. 10 mM N-2-히드록시에틸피페라진-N'-2-에탄설폰산 (HEPES) (pH 7.5), 및 0.2% 소 혈청 알부민 (BSA)을 함유하는 RPMI 1640 배지를 사용하여 결합 검정 완충액을 제조하였다. 간략하면, 300 pM 리간드 (60 pM ¹²⁵I-SDF-1α 및 240 pM 냉 SDF-1α), 검정 완충액 중 상이한 농도의 시험 항체, 100,000개의 인간 CCRF-CEM 세포, 및 0.5 mg 섬광 근접 측정법 (SPA)용 비드를 함유하는 200 ㎕의 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 인큐베이션시켰다. 이어서, SPA 모드로 액체 섬광 및 발광 계수기에서 플레이트를 계수하였다. 상기 측정법에서 CXCR4 길항제는 용량 의존 방식으로 결합 방사능을 감소시켰다. 결합 방사능의 용량 의존성 감소에 기초하여, 그래프패드 프리즘 소프트웨어 (GraphPad Prism software)를 사용함으로써 시험 항체의 저해능 (IC₅₀)을 산출하였다.

본원에서 예시된 항체는 본 측정법에서 10 nM 이하의 IC₅₀ 값을 나타내었다. 예를 들면, 항체 III은 본 측정법에서 평균 0.45 nM의 IC₅₀ 값을 나타내었다. 본원에서 예시된 항체가 고친화도로 인간 CXCR4에 결합하여 인간 CXCR4가 SDF-1에 결합하는 것을 저해한다는 것이 본 데이타를 통해 입증되었다.

화학주성 측정법

CXCR4/SDF-1의 상호작용이 표면 상에 CXCR4를 보유하는 세포의 이동 (화학주성)을 조절한다. 시험 항체의 길항제 및 세포 활성을 측정하기 위해, 내인성 CXCR4를 발현하는 인간 조직구 림프종 U937 세포를 사용하는 화학주성 측정법을 사용하였다. 간략하면, 10% 우태아 혈청, 1% 최소 필수 배지 (MEM), 피루브산나트륨 용액, 1% MEM 비필수 아미노산, 및 1% L-글루타민을 함유하는 둘베코 변형된 이글 배지(Dulbecco's Modified Eagle Medium: D-MEM)에서 성장시킨 U937 세포를 수거하고, 화학주성 측정법 완충액 (10 mM HEPES (pH 7.5), 및 0.3% BSA를 함유하는 1 x RPMI 배지)으로 1회에 걸쳐 세척하였다. 세척한 후, 5 x 10⁶개의 세포/mL의 농도로 세포를 검정 완충액 중에 재현탁시켰다. 96-웰 세포 이동 플레이트에서 측정법을 수행하였다. 일반적으로, 시험 항체를 포함하지 않거나, 또는 0.5 ㎍/mL 내지 50 ㎍/mL의 범위로 포함하는 세포 혼합물 50 ㎕를 상부 챔버 상에 플레이팅시키고, 1 x 화학주성 검정 완충액 중에서 제조된 SDF-1α (10 ng/mL) 30 ㎕를 하부 챔버에 첨가하였다. 조립 후, 플레이트를 5%의 이산화탄소 하에 2.5시간 동안 37℃에서 인큐베이션시켰다. 인큐베이션시킨 후, 5 ㎕의 세포 증식액을 하부 챔버에 첨가하였다. 이어서, 플레이트를 60분 동안 37℃에서 인큐베이션시키고, 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 492 nm에서 흡광도를 측정함으로써 이동한 세포를 검출하였다. 흡광도 판독치가 감소되었는 바, CXCR4 길항제는 세포 이동을 저해하는 것으로 나타났다. 492 nm에서의 흡광도의 용량 의존성 감소에 기초하여, 그래프패드 프리즘 소프트웨어를 사용함으로써 본 측정법에서의 시험 항체의 저해능 (IC₅₀)을 산출하였다.

본원에서 예시된 항체는 본 측정법에서 평균 30 nM 이하의 IC₅₀ 값을 나타내었다. 항체 III은 본 측정법에서 평균 5.90 nM의 IC₅₀ 값을 나타내었다. 본원에서 예시된 항체가 고친화도로 인간 CXCR4에 결합하여 인간 CXCR4가 SDF-1에 결합하는 것을 저해한다는 것이 본 데이타를 통해 입증되었다.

표면 플라즈몬 공명 ( BIA 코어)에 의한 항- CXCR4 항체의 결합 활성 평가

비아코어(Biacore)® 2000 기기를 사용하여 결합 동력학적 성질 및 친화도를 측정하였다. 비아코어®는 표면 플라즈몬 공명의 광학적 특성을 사용함으로써 덱스트란 바이오센서 매트릭스 내에서의 상호작용하는 단백질 분자의 농도의 변경을 검출한다. 특별히 언급한 것을 제외하면, 모든 시약과 물질은 비아코어® AB (스웨덴 웁살라 소재)로부터 구입하였다. 모든 측정은 4℃에서 수행하였다. 결합 실험은 본질적으로 문헌 ([Stenlund et al (Stenlund P, Babcock GJ, Sodroski J, Myszka DG. (2003) Capture and reconstitution of G protein-coupled receptors on a biosensor surface. Anal Biochem. 316(2):243-50] 및 [Navratilo et al (Navratilova I, Sodroski J, Myszka DG. (2005) Solubilization, stabilization, and purification of chemokine receptors using biosensor technology. Anal Biochem. 339(2):271-81])에 기재된 바와 같이 수행하였다. 전개 완충액은 50 mM HEPES, 5 mM 염화마그네슘, 1 mM 염화칼슘, 150 mM 염화나트륨, 2 mg/mL BSA (pH 7.5)였다. 앞서 문헌 [Mirzabekov et al (Mirzabekov, N. Bannert, M. Farzan, W. Hofmann, P. KolChinsky, L. Wu, R. Wyatt and J. Sodroski-Enhanced expression, native purification, and characterization of CCR5, a principal HIV-1 coreceptor. J. Biol. Chem. 274 (1999), pp. 28745-28750)]에 기재된 것과 동일한 방식으로 개 흉선세포 Cf2Th 세포에서 C-말단 선형 C9 펩티드 태그 (서열번호: 29)를 갖는 인간 CXCR4 수용체를 클로닝하고, 과발현시켰다. C-말단 선형 C9 펩티드 태그는 1D4 모노클로날 항체에 의해 인식되었다 (문헌 [D.D. Oprian, R.S. Molday, RJ. Kaufman and H.G. Khorana, Expression of a synthetic bovine rhodopsin gene in monkey kidney cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84 (1987), pp. 8874- 8878]).

결합은 하기와 같이 다중 분석 사이클을 사용함으로써 평가하였다. 1D4 Mab (모노클로날 클론 1D4 (브리티시 콜럼비아 대학(University of British Columbia)))는 아민 커플링을 통해 CM5 칩에 고정화시켰다 (약 10,000-20,000개의 공명 유니트의 항체). 20 mM 트리스(히드록시메틸)아미노메탄 (pH 7.0), 0.1 M 황산암모늄, 10% 글리세롤, 5 mM 염화마그네슘, 1 mM 염화칼슘 + 완전 에틸렌디아민테트라아세트산 무함유 프로테아제 저해제 정제 중에 세포를 재현탁시켰다. 칩 상에 주사하기 위해서 최종으로는 4 x 10⁶개의 세포/mL (즉, 2.0 x 10⁶개의 세포, 0.5 mL 최종 부피)를 사용하였다. 5:1 (세포 대 완충액의 부피비)의 비로 형질감염된 세포와 전개 완충액 (계면활성제 (2% 콜레스테릴 헤미숙시네이트 에스테르, 10% 도데실 말토시드, 10% 3-[(3-콜아미도프로필)디메틸암모니오]-1-프로판설포네이트)를 포함)을 자동 혼합기로 옮겼다. 상기 혼합물을 10분 동안 인큐베이션시켰다. 인큐베이션시킨 후, 20 ㎕/분의 유속으로 150 ㎕의 가용화된 수용체를 1D4 표면 상에 주사하였다. 이어서, 샘플 루프를 전개 완충액으로 세척하였다. 이어서, 100 ㎕/분의 유속으로 20 ㎕의 항체를 주사하였다. 이어서, 100 ㎕/분으로 10 mM 수산화나트륨 + 1% n-옥틸-β-D-글루코피라노시드의 2회에 걸친 10초 간의 펄스를 통해 칩을 재생시켰다. 각 사이클에 대한 결합 속도 상수 ("k_온") 및 해리 속도 상수 ("k_오프")는 BIA이벨류에이션(BIAevaluation) 소프트웨어로 "1:1의 물질 전달(1:1 with mass transfer)" 결합 모델을 사용하여 평가하였다. "K_D"는 해리 상수이며, 이는 식: k_오프/k_온 = K_D로 산출할 수 있다. 결합 파라미터는 하기에 요약되어 있다. 본원에서 예시된 항체가 고친화도로 인간 CXCR4에 결합하여 인간 CXCR4가 SDF-1에 결합하는 것을 저해한다는 것이 본 데이타를 통해 입증되었다.

SCID / 나말와 이종이식 모델에서의 항- 종양형성 활성

SDF-1/CXCR4의 상호작용이 종양 성장, 침윤, 혈관형성 및 전이를 비롯한 다수의 종양형성 단계에서 중요한 역할을 하는 것으로 보인다. 암에서 시험 항체의 생체내 항-종양형성 활성을 평가하기 위하여, NOD/SCID 마우스 및 인간 비-호지킨 림프종 나말와 세포를 사용하는 종양 이종이식 모델을 이용하였다. 간략하면, (1:1로) 마트리겔(matrigel)과 혼합된 200,000개의 나말와 세포를 동물의 옆구리 뒤쪽에 피하로 이식하였다. 이식된 종양 세포는 고형 종양으로서 성장하였고, 그 크기를 계속하여 모니터링하고, 캘리퍼를 사용함으로써 측정할 수 있었다. 상기 모델에서 시험 항체의 생체내 효능을 측정하기 위하여 종양 세포 이식 후 48시간이 경과하였을 때에 염수 또는 인산염 완충처리된 염수에 용해된, 상이한 용량의 시험 항체를 사용함으로써 동물 (1군당 10마리)을 처리하였다. 마우스 1마리당 1 ㎍, 10 ㎍, 및 100 ㎍의 범위로 항체를 피하로 투여하고, 2일 또는 3일마다 종양 부피 및 체중을 측정하였다. 종양 성장에 따라 일반적으로 3-4주간 상기 연구를 계속하여 수행하였다. 시험 항체의 항-종양형성 활성은 비히클 단독으로만 처리된 대조군의 종양 부피와 비교함으로써 처리군의 종양 부피 감소 비율(%)로서 측정되었다.

항체 I은 마우스 1마리당 10 ㎍ (대략 0.4 mg/kg)으로 투여되었을 때에 본 측정법에서 종양 성장을 저해시켰다. 항체 I은 종양 성장을 방해함으로써 항-종양형성 활성을 갖는다는 것이 본 데이타를 통해 입증되었다.

SCID / 나말와 혈액성 림프종 모델

림프종에서 CXCR4 항체가 갖는 항-종양형성 활성을 추가로 조사하기 위하여 꼬리 정맥을 통해 200,000개의 나말와 세포를 SCID 마우스 내로 주사함으로써 혈액성 림프종 모델을 확립시켰다. 일반적으로, 종양 세포를 주사 맞은 마우스는 5-6주 후에 사망하게 된다. 상기 모델에서 항체의 효능을 시험하기 위하여, 종양 세포를 주사한 후 24시간이 경과하였을 때 마우스 1마리당 30 ㎍ 또는 100 ㎍의 시험 항체를 사용하여 동물 (각 군당 10마리)을 처리하였다. 6주간에 걸쳐 4일에 한번씩 항체를 피하 투여하고, 1일 기준으로 동물의 생존을 기록하였다.

상기 혈액성 림프종 모델에서 항체 I 처리군은 비히클 및 이소형 IgG 대조군과 비교하였을 때 통계학적으로 유의적인 생존 이익을 나타내었다.

SCID / CEM 이종이식 모델에서 항- 종양형성 활성

암에서 시험 항체의 생체내 항-종양형성 활성을 평가하기 위하여, NOD/SCID 마우스 및 CEM 세포를 사용하는 종양 이종이식 모델을 이용하였다. 간략하면, (1:1로) 마트리겔과 혼합된 5.0 x 10⁶개의 CEM 세포를 동물의 옆구리 뒤쪽에 피하로 이식하였다. 이식된 종양 세포는 고형 종양으로서 성장하였고, 이를 계속하여 모니터링하고, 캘리퍼를 사용함으로써 측정할 수 있었다. 상기 모델에서 시험 항체의 효능을 측정하기 위하여, 종양 세포를 이식한 후 24시간이 경과하였을 때 마우스 1마리당 10 ㎍, 30 ㎍, 또는 100 ㎍의 시험 항체를 사용하여 동물 (각 군당 10마리)을 처리하였다. 4일에 한번씩 항체를 피하 투여하고, 2일 또는 3일마다 종양 부피 및 체중을 측정하였다.

비히클 및 이소형 IgG 대조군과 비교하여 항체 I 처리군에서는 용량 의존성 종양 성장 저해가 관찰되었다. 항체 I의 3가지 투여량 모두 종양 성장을 유의적으로 저해하였다.

아폽토시스 측정법

CXCR4 항체가 아폽토시스를 유도하는지 여부를 조사하기 위하여, CXCR4를 고수준으로 발현하는 다수의 종양 세포주를 시험 항체로 처리하였다. 1% 또는 10% FBS를 포함하는 세포 성장 배지 중에서 2-4일 동안 상이한 농도의 시험 항체로 세포를 처리하였다. 처리한 후, 3.7% 포름알데히드를 사용하여 세포를 고정시키고, D-PBS로 세척하였다. D-PBS 중 0.1% 트리톤(Triton) X-100으로 세포를 투과시키고, 1% BSA를 포함하는 D-PBS 중에서 세척하고 차단시켰다. 이어서, 1% BSA를 포함하는 D-PBS 중에서 희석된 토끼 항-활성화된 카스파제 3 폴리클로날 항체 (카탈로그 번호 557135 BD 바이오사이언스즈(BD Biosciences, NC)와 함께 상기 세포를 1시간 동안 인큐베이션시켰다. 세포를 D-PBS로 2회 세척한 후, 1% BSA를 포함하는 D-PBS 중에서 희석된 알렉사 플루오르(Alexa Fluor) 488 염소 항 토끼 IgG (캘리포니아주 칼즈배드 소재의 인비트로겐(Invitrogen)) 및 200 ng/mL의 훽스트(Hoechst) 33342 (캘리포니아주 칼스배드 소재의 인비트로겐)와 함께 1시간 동안 인큐베이션시켰다. 어레이스캔 Vti(ArrayScan Vti) (펜실베니아주 피츠버그 소재의 셀로믹스(Cellomics))를 사용하여 염색된 플레이트를 스캐닝하고, 형광 신호를 측량하기 위하여 표적 활성화 바이오어플리케이션(Target Activation bioapplication)를 사용하였다.

항체 I이 나말와 및 CEM 세포를 비롯한 다수의 종양 세포에서 핵 단편화 및 캐스파제 3의 활성화를 유도한다는 것이 본 결과를 통해 입증되었다. 핵 단편화 및 캐스파제 3의 활성화가 아폽토시스의 홀마크이다. 그러므로, 항체 I이 2 ㎍/mL 내지 10 ㎍/mL의 양으로 투여되었을 때에 종양 세포의 아폽토시스를 유도한다는 것이 본 데이타를 통해 입증되었다.

항체 I이 아폽토시스를 유도하는지 여부를 추가로 확인하기 위하여, 시험 항체 또는 이소형 IgG 대조군으로 처리한 후, 나말와 세포에서의 유식세포 측정법에 의해 아넥신 V 변화를 조사하였다. 항체 I은 용량 의존성 아넥신 V의 증가를 유도한 반면, 이소형 IgG는 어떤 효과도 나타내지 않았다. 추가로, 항체 I은 터넬(TUNEL) 염색에 의해 CEM 이종이식 종양에서도 관찰된 아폽토시스를 유도하였다.

서열 목록

중쇄 CDR

경쇄 CDR

중쇄 가변 부위

경쇄 가변 부위

완전한 중쇄

완전한 경쇄

뉴클레오티드 서열 - 중쇄 가변 부위

뉴클레오티드 서열 - 경쇄 가변 부위

인간 CXCR4 수용체에 대한 C-말단 선형 C9 펩티드 태그

인간 CXCR4

인간 CXCR4 이소형 A

인간 CXCR4 이소형 B

인간 SDF -1α

SEQUENCE LISTING <110> Eli Lilly and Company <120> ANTI-CXCR4 ANTIBODIES <130> X17693 <150> 61/053192 <151> 2008-05-14 <160> 33 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 1 Gly Phe Thr Ser Thr Asp Tyr Tyr Phe Ser 1 5 10 <210> 2 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 2 Phe Ile Arg Thr Lys Ser Lys Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Gly Ser 1 5 10 15 Val Lys Gly <210> 3 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 3 Glu Pro Ile Thr Thr Asp Pro Arg Asp Tyr 1 5 10 <210> 4 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 4 Phe Ile Arg Ser Lys Ser Lys Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Gly Ser 1 5 10 15 Val Lys Gly <210> 5 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 5 Phe Ile Arg Tyr Lys Ser Lys Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Gly Ser 1 5 10 15 Val Lys Gly <210> 6 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 6 Phe Ile Arg Asn Lys Arg Lys Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Gly Ser 1 5 10 15 Val Lys Gly <210> 7 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 7 Phe Ile Arg His Lys Ser Lys Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Gly Ser 1 5 10 15 Val Lys Gly <210> 8 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 8 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Phe Asn Ser Arg Thr Arg Lys Lys Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 9 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 9 Trp Ala Ser Lys Arg Lys Ser 1 5 <210> 10 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 10 Lys Gln Ser Arg Phe Leu Arg Ala 1 5 <210> 11 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 11 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ser Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Phe Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Phe Ile Arg Thr Lys Ser Lys Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Gly 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Glu Pro Ile Thr Thr Asp Pro Arg Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 12 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 12 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ser Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Phe Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Phe Ile Arg Ser Lys Ser Lys Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Gly 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Glu Pro Ile Thr Thr Asp Pro Arg Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 13 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 13 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ser Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Phe Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Phe Ile Arg Tyr Lys Ser Lys Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Gly 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Glu Pro Ile Thr Thr Asp Pro Arg Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 14 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 14 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ser Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Phe Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Phe Ile Arg Asn Lys Arg Lys Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Gly 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Glu Pro Ile Thr Thr Asp Pro Arg Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 15 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 15 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ser Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Phe Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Phe Ile Arg His Lys Ser Lys Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Gly 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Glu Pro Ile Thr Thr Asp Pro Arg Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 16 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 16 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Phe Asn Ser 20 25 30 Arg Thr Arg Lys Lys Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Lys Arg Lys Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Arg Phe Leu Arg Ala Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 17 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 17 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ser Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Phe Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Phe Ile Arg Thr Lys Ser Lys Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Gly 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Glu Pro Ile Thr Thr Asp Pro Arg Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440 445 <210> 18 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 18 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ser Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Phe Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Phe Ile Arg Ser Lys Ser Lys Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Gly 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Glu Pro Ile Thr Thr Asp Pro Arg Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440 445 <210> 19 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 19 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ser Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Phe Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Phe Ile Arg Tyr Lys Ser Lys Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Gly 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Glu Pro Ile Thr Thr Asp Pro Arg Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440 445 <210> 20 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 20 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ser Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Phe Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Phe Ile Arg Asn Lys Arg Lys Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Gly 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Glu Pro Ile Thr Thr Asp Pro Arg Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440 445 <210> 21 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 21 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ser Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Phe Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Phe Ile Arg His Lys Ser Lys Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Gly 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Glu Pro Ile Thr Thr Asp Pro Arg Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440 445 <210> 22 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 22 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Phe Asn Ser 20 25 30 Arg Thr Arg Lys Lys Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Lys Arg Lys Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Arg Phe Leu Arg Ala Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 23 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 23 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggagggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggctt caccagtacc gactactact ttagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggttggcttc atccggacga agtcgaaggg ctacaccacc 180 gagtacagcg gcagcgtgaa gggcagattc accatctcaa gagatgattc aaagaactca 240 ctgtacctgc agatgaacag cctgaaaacc gaggacacgg ccgtgtatta ctgtgctaga 300 gagcccatca ccaccgaccc tcgggactac tggggccaag ggaccctggt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 24 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 24 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggagggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggctt caccagtacc gactactact ttagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggttggcttc atccggtcta agtcgaaggg ctacaccacc 180 gagtacagcg gcagcgtgaa gggcagattc accatctcaa gagatgattc aaagaactca 240 ctgtacctgc agatgaacag cctgaaaacc gaggacacgg ccgtgtatta ctgtgctaga 300 gagcccatca ccaccgaccc tcgggactac tggggccaag ggaccctggt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 25 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 25 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggagggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggctt caccagtacc gactactact ttagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggttggcttc atccggtata agtcgaaggg ctacaccacc 180 gagtacagcg gcagcgtgaa gggcagattc accatctcaa gagatgattc aaagaactca 240 ctgtacctgc agatgaacag cctgaaaacc gaggacacgg ccgtgtatta ctgtgctaga 300 gagcccatca ccaccgaccc tcgggactac tggggccaag ggaccctggt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 26 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 26 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggagggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggctt caccagtacc gactactact ttagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggttggcttc atccggaaca agcggaaggg ctacaccacc 180 gagtacagcg gcagcgtgaa gggcagattc accatctcaa gagatgattc aaagaactca 240 ctgtacctgc agatgaacag cctgaaaacc gaggacacgg ccgtgtatta ctgtgctaga 300 gagcccatca ccaccgaccc tcgggactac tggggccaag ggaccctggt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 27 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 27 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggagggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggctt caccagtacc gactactact ttagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggttggcttc atccggcaca agtcgaaggg ctacaccacc 180 gagtacagcg gcagcgtgaa gggcagattc accatctcaa gagatgattc aaagaactca 240 ctgtacctgc agatgaacag cctgaaaacc gaggacacgg ccgtgtatta ctgtgctaga 300 gagcccatca ccaccgaccc tcgggactac tggggccaag ggaccctggt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 28 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 28 gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60 atcaactgca agagcagcca gagcctgttc aacagccgga cccggaagaa gtacctggcc 120 tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc cagcaagaga 180 aagagcgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240 atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtaagcagag ccgttttctg 300 agagcctttg gccaagggac caagctggag atcaaa 336 <210> 29 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 29 Thr Glu Thr Ser Gln Val Ala Pro Ala 1 5 <210> 30 <211> 360 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 30 Met Glu Gly Ile Ser Ser Ile Pro Leu Pro Leu Leu Gln Ile Tyr Thr 1 5 10 15 Ser Asp Asn Tyr Thr Glu Glu Met Gly Ser Gly Asp Tyr Asp Ser Met 20 25 30 Lys Glu Pro Cys Phe Arg Glu Glu Asn Ala Asn Phe Asn Lys Ile Phe 35 40 45 Leu Pro Thr Ile Tyr Ser Ile Ile Phe Leu Thr Gly Ile Val Gly Asn 50 55 60 Gly Leu Val Ile Leu Val Met Gly Tyr Gln Lys Lys Leu Arg Ser Met 65 70 75 80 Thr Asp Lys Tyr Arg Leu His Leu Ser Val Ala Asp Leu Leu Phe Val 85 90 95 Ile Thr Leu Pro Phe Trp Ala Val Asp Ala Val Ala Asn Trp Tyr Phe 100 105 110 Gly Asn Phe Leu Cys Lys Ala Val His Val Ile Tyr Thr Val Asn Leu 115 120 125 Tyr Ser Ser Val Leu Ile Leu Ala Phe Ile Ser Leu Asp Arg Tyr Leu 130 135 140 Ala Ile Val His Ala Thr Asn Ser Gln Arg Pro Arg Lys Leu Leu Ala 145 150 155 160 Glu Lys Val Val Tyr Val Gly Val Trp Ile Pro Ala Leu Leu Leu Thr 165 170 175 Ile Pro Asp Phe Ile Phe Ala Asn Val Ser Glu Ala Asp Asp Arg Tyr 180 185 190 Ile Cys Asp Arg Phe Tyr Pro Asn Asp Leu Trp Val Val Val Phe Gln 195 200 205 Phe Gln His Ile Met Val Gly Leu Ile Leu Pro Gly Ile Val Ile Leu 210 215 220 Ser Cys Tyr Cys Ile Ile Ile Ser Lys Leu Ser His Ser Lys Gly His 225 230 235 240 Gln Lys Arg Lys Ala Leu Lys Thr Thr Val Ile Leu Ile Leu Ala Phe 245 250 255 Phe Ala Cys Trp Leu Pro Tyr Tyr Ile Gly Ile Ser Ile Asp Ser Phe 260 265 270 Ile Leu Leu Glu Ile Ile Lys Gln Gly Cys Glu Phe Glu Asn Thr Val 275 280 285 His Lys Trp Ile Ser Ile Thr Glu Ala Leu Ala Phe Phe His Cys Cys 290 295 300 Leu Asn Pro Ile Leu Tyr Ala Phe Leu Gly Ala Lys Phe Lys Thr Ser 305 310 315 320 Ala Gln His Ala Leu Thr Ser Val Ser Arg Gly Ser Ser Leu Lys Ile 325 330 335 Leu Ser Lys Gly Lys Arg Gly Gly His Ser Ser Val Ser Thr Glu Ser 340 345 350 Glu Ser Ser Ser Phe His Ser Ser 355 360 <210> 31 <211> 356 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 31 Met Ser Ile Pro Leu Pro Leu Leu Gln Ile Tyr Thr Ser Asp Asn Tyr 1 5 10 15 Thr Glu Glu Met Gly Ser Gly Asp Tyr Asp Ser Met Lys Glu Pro Cys 20 25 30 Phe Arg Glu Glu Asn Ala Asn Phe Asn Lys Ile Phe Leu Pro Thr Ile 35 40 45 Tyr Ser Ile Ile Phe Leu Thr Gly Ile Val Gly Asn Gly Leu Val Ile 50 55 60 Leu Val Met Gly Tyr Gln Lys Lys Leu Arg Ser Met Thr Asp Lys Tyr 65 70 75 80 Arg Leu His Leu Ser Val Ala Asp Leu Leu Phe Val Ile Thr Leu Pro 85 90 95 Phe Trp Ala Val Asp Ala Val Ala Asn Trp Tyr Phe Gly Asn Phe Leu 100 105 110 Cys Lys Ala Val His Val Ile Tyr Thr Val Asn Leu Tyr Ser Ser Val 115 120 125 Leu Ile Leu Ala Phe Ile Ser Leu Asp Arg Tyr Leu Ala Ile Val His 130 135 140 Ala Thr Asn Ser Gln Arg Pro Arg Lys Leu Leu Ala Glu Lys Val Val 145 150 155 160 Tyr Val Gly Val Trp Ile Pro Ala Leu Leu Leu Thr Ile Pro Asp Phe 165 170 175 Ile Phe Ala Asn Val Ser Glu Ala Asp Asp Arg Tyr Ile Cys Asp Arg 180 185 190 Phe Tyr Pro Asn Asp Leu Trp Val Val Val Phe Gln Phe Gln His Ile 195 200 205 Met Val Gly Leu Ile Leu Pro Gly Ile Val Ile Leu Ser Cys Tyr Cys 210 215 220 Ile Ile Ile Ser Lys Leu Ser His Ser Lys Gly His Gln Lys Arg Lys 225 230 235 240 Ala Leu Lys Thr Thr Val Ile Leu Ile Leu Ala Phe Phe Ala Cys Trp 245 250 255 Leu Pro Tyr Tyr Ile Gly Ile Ser Ile Asp Ser Phe Ile Leu Leu Glu 260 265 270 Ile Ile Lys Gln Gly Cys Glu Phe Glu Asn Thr Val His Lys Trp Ile 275 280 285 Ser Ile Thr Glu Ala Leu Ala Phe Phe His Cys Cys Leu Asn Pro Ile 290 295 300 Leu Tyr Ala Phe Leu Gly Ala Lys Phe Lys Thr Ser Ala Gln His Ala 305 310 315 320 Leu Thr Ser Val Ser Arg Gly Ser Ser Leu Lys Ile Leu Ser Lys Gly 325 330 335 Lys Arg Gly Gly His Ser Ser Val Ser Thr Glu Ser Glu Ser Ser Ser 340 345 350 Phe His Ser Ser 355 <210> 32 <211> 352 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 32 Met Glu Gly Ile Ser Ile Tyr Thr Ser Asp Asn Tyr Thr Glu Glu Met 1 5 10 15 Gly Ser Gly Asp Tyr Asp Ser Met Lys Glu Pro Cys Phe Arg Glu Glu 20 25 30 Asn Ala Asn Phe Asn Lys Ile Phe Leu Pro Thr Ile Tyr Ser Ile Ile 35 40 45 Phe Leu Thr Gly Ile Val Gly Asn Gly Leu Val Ile Leu Val Met Gly 50 55 60 Tyr Gln Lys Lys Leu Arg Ser Met Thr Asp Lys Tyr Arg Leu His Leu 65 70 75 80 Ser Val Ala Asp Leu Leu Phe Val Ile Thr Leu Pro Phe Trp Ala Val 85 90 95 Asp Ala Val Ala Asn Trp Tyr Phe Gly Asn Phe Leu Cys Lys Ala Val 100 105 110 His Val Ile Tyr Thr Val Asn Leu Tyr Ser Ser Val Leu Ile Leu Ala 115 120 125 Phe Ile Ser Leu Asp Arg Tyr Leu Ala Ile Val His Ala Thr Asn Ser 130 135 140 Gln Arg Pro Arg Lys Leu Leu Ala Glu Lys Val Val Tyr Val Gly Val 145 150 155 160 Trp Ile Pro Ala Leu Leu Leu Thr Ile Pro Asp Phe Ile Phe Ala Asn 165 170 175 Val Ser Glu Ala Asp Asp Arg Tyr Ile Cys Asp Arg Phe Tyr Pro Asn 180 185 190 Asp Leu Trp Val Val Val Phe Gln Phe Gln His Ile Met Val Gly Leu 195 200 205 Ile Leu Pro Gly Ile Val Ile Leu Ser Cys Tyr Cys Ile Ile Ile Ser 210 215 220 Lys Leu Ser His Ser Lys Gly His Gln Lys Arg Lys Ala Leu Lys Thr 225 230 235 240 Thr Val Ile Leu Ile Leu Ala Phe Phe Ala Cys Trp Leu Pro Tyr Tyr 245 250 255 Ile Gly Ile Ser Ile Asp Ser Phe Ile Leu Leu Glu Ile Ile Lys Gln 260 265 270 Gly Cys Glu Phe Glu Asn Thr Val His Lys Trp Ile Ser Ile Thr Glu 275 280 285 Ala Leu Ala Phe Phe His Cys Cys Leu Asn Pro Ile Leu Tyr Ala Phe 290 295 300 Leu Gly Ala Lys Phe Lys Thr Ser Ala Gln His Ala Leu Thr Ser Val 305 310 315 320 Ser Arg Gly Ser Ser Leu Lys Ile Leu Ser Lys Gly Lys Arg Gly Gly 325 330 335 His Ser Ser Val Ser Thr Glu Ser Glu Ser Ser Ser Phe His Ser Ser 340 345 350 <210> 33 <211> 67 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 33 Lys Pro Val Ser Leu Ser Tyr Arg Cys Pro Cys Arg Phe Phe Glu Ser 1 5 10 15 His Val Ala Arg Ala Asn Val Lys His Leu Lys Ile Leu Asn Thr Pro 20 25 30 Asn Cys Ala Leu Gln Ile Val Ala Arg Leu Asn Asn Asn Arg Gln Val 35 40 45 Cys Ile Asp Pro Lys Leu Lys Trp Ile Gln Glu Tyr Leu Glu Lys Ala 50 55 60 Leu Asn Lys 65

Claims

인간 CXCR4에 결합하고,
a. 인간 SDF-1α (서열번호: 33)가 CXCR4에 결합하는 것을 저해하되, 본원에 기술된 바와 같은 인간 CXCR4/¹²⁵I-SDF-1α 결합 저해 측정법에서 인간 CXCR4에 대한 IC₅₀이 10 nM 내지 0.05 nM이고;
b. 세포의 표면 상에 CXCR4를 보유하는 세포의 이동을 저해하되, 본원에 기술된 바와 같은 화학주성 측정법에서 IC₅₀이 30 nM 내지 0.3 nM이며;
c. 본원에 기술된 바와 같은 표면 플라즈몬 공명 (BIA코어) 측정법에서 15 nM 내지 0.05 nM의 친화도 (K_D)를 나타내는,
공학처리된 인간 항체 또는 그의 결합 단편.
제1항에 있어서, 인간 SDF-1α (서열번호: 33)가 CXCR4에 결합하는 것을 저해하되, 인간 CXCR4에 대한 IC₅₀이 0.5 nM 내지 0.05 nM인 항체.
제1항 또는 제2항에 있어서, 세포의 표면 상에 CXCR4를 보유하는 세포의 이동을 저해하되, IC₅₀이 3.0 nM 내지 0.3 nM인 항체.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 1.0 nM 내지 0.05 nM의 친화도 (K_D)를 나타내는 항체.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 1 mg/kg으로 투여되었을 때에 본원에 기술된 바와 같은 종양 이종이식 모델에서 종양 성장을 방해함으로써 항-종양형성 활성을 나타내는 항체.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 2 ㎍/mL 내지 10 ㎍/mL의 양으로 투여되었을 때에 본원에 기술된 바와 같은 아폽토시스 측정법에서 종양 세포의 아폽토시스를 유도하는 항체.
프레임워크 부위, 서열번호: 8의 아미노산 서열을 갖는 CDRL1, 서열번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 CDRL2, 및 서열번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 부위를 포함하는 경쇄, 및 프레임워크 부위, 서열번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 CDRH1, 서열번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 CDRH3, 및 서열번호: 2, 서열번호: 4, 서열번호: 5, 서열번호: 6, 및 서열번호: 7로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 CDRH2를 포함하는 중쇄 가변 부위를 포함하는 중쇄를 포함하되, 여기서, 항체는 인간 CXCR4에 결합하는 것인, 공학처리된 인간 항체 또는 그의 결합 단편.
제7항에 있어서, 경쇄가 서열번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
제7항 또는 제8항에 있어서, 중쇄가 서열번호: 11, 서열번호: 12, 서열번호: 13, 서열번호: 14, 및 서열번호: 15로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
제7항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 경쇄가 서열번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄가 서열번호: 17, 서열번호: 18, 서열번호: 19, 서열번호: 20, 및 서열번호: 21로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
제7항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호: 17 및 서열번호: 22를 포함하는 항체, 서열번호: 18 및 서열번호: 22를 포함하는 항체, 서열번호: 19 및 서열번호: 22를 포함하는 항체, 서열번호: 20 및 서열번호: 22를 포함하는 항체, 및 서열번호: 21 및 서열번호: 22를 포함하는 항체로 구성된 군으로부터 선택되는 항체.
제7항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호: 22의 경쇄 2개 및 서열번호: 17의 중쇄 2개를 포함하는 항체.
하나 이상의 제약학상 허용가능한 담체, 희석제, 또는 부형제와 함께 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 항체를 포함하는 제약 조성물.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 요법에서 사용하기 위한 항체.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 종양 성장, 침윤, 혈관형성 또는 전이를 비롯한 종양형성의 치료법에서 사용하기 위한 항체.
종양 성장, 침윤, 혈관형성 또는 전이를 비롯한 종양형성 치료용 약제의 제조에서의 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 항체의 용도.
치료학적 유효량의 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 항체를, 종양 성장, 침윤, 혈관형성 또는 전이를 비롯한 종양형성의 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 종양 성장, 침윤, 혈관형성 또는 전이를 비롯한 종양형성을 치료하는 방법.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 유방암, 췌장암, 흑색종, 전립선암, 신장암, 신경모세포종, 비-호지킨 림프종, 폐암, 난소암, 직장결장암, 다발성 골수종, 다형성 교모세포종, 및 백혈병으로 구성된 군으로부터 선택되는 암의 치료에서 사용하기 위한 항체.
유방암, 췌장암, 흑색종, 전립선암, 신장암, 신경모세포종, 비-호지킨 림프종, 폐암, 난소암, 직장결장암, 다발성 골수종, 다형성 교모세포종, 및 백혈병으로 구성된 군으로부터 선택되는 암 치료용 약제의 제조에서의 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 항체의 용도.
치료학적 유효량의 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 항체를, 유방암, 췌장암, 흑색종, 전립선암, 신장암, 신경모세포종, 비-호지킨 림프종, 폐암, 난소암, 직장결장암, 다발성 골수종, 다형성 교모세포종, 및 백혈병으로 구성된 군으로부터 선택되는 암의 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 유방암, 췌장암, 흑색종, 전립선암, 신장암, 신경모세포종, 비-호지킨 림프종, 폐암, 난소암, 직장결장암, 다발성 골수종, 다형성 교모세포종, 및 백혈병으로 구성된 군으로부터 선택되는 암을 치료하는 방법.