KR20100101715A - 피부 충전제 조성물 - Google Patents

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KR20100101715A
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Abstract

본발명은 (a) 환자 자신의 혈액으로부터 얻어진 혈관내피 전구세포(Endothelial Progenitor Cells)와 조혈 모세포(hematopoietic stem cells)의 혼합물 및 (b) 콜라겐 및 히알루론산으로부터 선택된 생체-유래 피부 충전제를 유효 성분으로 함유하는 피부 결함을 완화하거나 치료하기 위한 피부 충전제 조성물을 제공한다.
본발명에 따른 피부 충전제 조성물을 피부 결함의 완화 또는 치료에 사용할 경우, 면역반응이나 부작용을 유발하지 않으면서도 생체-유래 피부 충전제의 작용지속시간을 훨씬 연장시킬 수 있다.
피부 충전제 조성물

Description

피부 충전제 조성물{Dermal filler composition}
본 발명은 피부 충전제 조성물, 보다 상세하게는 (a) 환자 자신의 혈액으로부터 얻어진 혈관내피 전구세포(Endothelial Progenitor Cells, EPCs)와 조혈 모세포(hematopoietic stem cells, HSCs)의 혼합물, 및 (b) 콜라겐 및 히알루론산으로부터 선택된 생체 유래 필러를 유효 성분으로 함유하는 피부 결함을 완화하거나 치료하기 위한 피부 충전제 조성물에 관한 것이다.
피부 충전제(dermal filler) 또는 필러(filler)란 일반적으로 피부조직과 유사한 성분으로서 특정부위에 삽입되어 연조직(soft tissue)을 확장시킴으로써 주름개선이나 윤곽교정 등에 사용되는 물질을 말한다. 인체의 연조직은 콜라겐, 엘라스틴 등의 단백질과 글리코스아미노글리칸을 포함하는 세포외기질에 의해 그 구조를 유지하고 있는데, 선천성 요인 또는 외부의 충격이나 병적요인 등에 의한 연조직의 결손이 발생하는 경우 해당 부위에 생체 조직이나 합성 고분자 화학물질을 삽입하여 연조직을 확장함으로써 그 형태를 복원, 교정하여 왔다.
충전제 물질로서는 예를 들면 종전에 소의 콜라겐 단백질 주사를 통하여 주름과 흉터를 치료하였으나, 알레르기 반응이 나타날 뿐만 아니라 조직 흡수가 빨라 서 치료 효과가 단지 몇 개월간만 유지되는 문제점이 있었다. 이러한 문제점을 해결하고자, 환자 자신의 피부를 사용하여 콜라겐 단백질을 제조하고 이를 주사하는 방법이 개발되었으나, 유효량의 콜라겐 단백질을 제조하기 위해서 다량의 피부가 요구되고 주사 후에도 콜라겐 단백질이 여전히 단시간 내에 조직으로 흡수되는 문제점이 있었다.
또한, 과거 몇 년 동안 연조직 충전제로서 크기가 다른 중(中) 콜라겐 단백질이 이용되어 왔으나, 치료 효과가 약 6개월 정도로 짧았고 알레르기 반응도 유발하였다. 중 콜라겐 단백질의 면역반응을 해소하기 위해서 인간의 태반에서 추출하여 제조한 오토로겐(Autologen)을 활용하기도 하였으나, 이것 역시 그 효과가 단지 몇 개월만 유지되었다. 돼지에서 추출한 콜라겐 제품인 피브렐(Fibrel)은 1990년 FDA 승인 후 잔주름 수술에 사용되고 있으나, 지속적인 치료 효과를 기대하기 어렵고 주사부위에 알맹이가 형성되는 부작용을 유발하였다. 또한, 소의 콜라겐과 미세포자(Microspore)를 혼합하여 제조한 아테콜(Artecol)은 시술 후 콜라겐이 흡수되는 것을 막기 위해 국부적인 진피자극을 통하여 자체적으로 콜라겐을 생성함으로써 장기적인 치료 효과라는 목적을 달성할 수는 있지만, 치료 부위에 늘 입자가 돌출된다는 문제점이 있다.
이러한 피부 충전제는 작용기전에 따라 다음과 같이 두 가지 형태로 분류될 수 있다. 첫 번째 형태는 생체 내 자연용해되는 물질로 이루어지는 생체-유래 피부 충전제인데, 이러한 피부 충전제로서는 콜라겐(collagen), 히알루론산(hyaluronic acid) 등이 알려져 있다. 생체-유래 피부 충전제는 현재 주로 사용 되고 있는 피부 충전제로서 콜라겐이나 히알루론산 각각을 주성분으로 하는 제품들이 많다. 하지만, 이러한 생체-유래 피부 충전제는 안전하고 부작용이 없는 반면 효과의 지속기간이 6개월이나 1년 정도로 너무 짧아서 임상에서 실제 사용을 제한하는 요인이 되고 있다.
다른 형태의 피부 충전제로서는 생체 내 자연용해되지 않고 장기간 또는 영구적으로 직접 확대효과를 내는 작용을 하는 물질로 이루어진 피부 충전제가 있다. 이러한 피부 충전제로서는 폴리메틸메타크릴레이트(PMMA, polymethylmethacrylate)가 알려져 있다. 또한, 폴리메틸메타크릴레이트와 콜라겐을 주성분으로 하는 Artefill™(Artes Medical사)이 공지되어 있다. 이러한 타입의 피부 충전제는 인체 안에서 분해 및 흡수되지 않으면서 보다 장기적으로 효과를 내는 반면에, 자기 연조직 내에서 분해되지 않고 남아있어 추후 이물 반응을 일으키거나 알러지 반응을 유발할 수 있는 단점이 있다.
상기한 종래의 피부 충전제의 문제점을 비추어볼 때, 바람직한 피부 충전제는 다음과 같은 몇 가지 조건을 갖출 것이 요구되는데 효과가 신속히 나타나고 가능한 한 장기간 지속될 것, 저비용으로 자연스럽고 편안한 부피확대가 가능할 것, 알러지 반응을 유발하지 않을 것 등이다.
한편, 일반적으로 줄기세포(stem cell)란 미성숙, 미분화된 상태로 계속 증식할 수 있는 자가갱신 능력을 자기고 있고 다른 특이조직으로 분화할 수 있는 원시세포를 말한다. 줄기세포는 분화능(differentiation potency)과 생성시기에 따라 크게 배아줄기세포(embryonic stem cell; ES cell)와 성체줄기세포(adult stem cell)로 나눌 수 있다. 배아줄기세포는 인체 대부분의 특정 조직의 세포로 분화될 수 있는 잠재력을 가지고 있으나, 배아줄기세포를 얻는 데에는 윤리적인 문제가 따를 뿐만 아니라 이들 세포의 분화능을 생체에 적합하도록 조절하는 것 또한 현재로서 쉽지 않은 일이다. 반면, 성체줄기세포는 발생과정이 진행되어 배아의 각 장기가 형성되는 단계 혹은 성체단계에서 나타나는 줄기세포로서, 그 분화능이 일반적으로 특정 조직을 구성하는 세포로만 한정된다. 이러한 성체 줄기세포는 성인이 된 후에도 대부분의 장기에 남아 정상적으로 혹은 병리적으로 발생하는 세포의 손실을 보충하는 역할을 담당한다. 대표적인 성체 줄기세포에는 조혈 모세포(hematopoietic stem cells; HSCs)와 중간엽 줄기세포(mesenchymal stem cells; MSCs)가 있다.
한편, 혈관내피 전구세포는 줄기세포의 분화 단계 중 수임 전구세포 (Committed Progenitor Cell) 단계에 해당하여 분화할 수 있는 세포 형태가 어느 정도 한정된 줄기세포로서, 신생 혈관 형성에 참여하는 일종의 줄기 세포를 의미한다.
최근 말초혈액에 혈관줄기세포 및 다양한 조직줄기세포가 순환하고 있다는 연구 결과가 나오면서, 말초 혈액세포를 혈관 재생이나 조직 재생의 수단으로 사용하고자 하는 노력이 진행되고 있다.
그러나, 환자 자신의 혈액으로부터 얻어진 조혈 모세포와 혈관내피 전구세포의 혼합물을 생체-유래 피부 충전제에 적용시켜 제조한 피부 충전제 조성물은 이제까지 공지된 바 없다.
본발명자들은 환자 자신의 혈액으로부터 얻어진 조혈 모세포와 혈관내피 전구세포의 혼합물을 생체-유래 피부 충전제에 적용시켜 제조한 피부 충전제 조성물을 환자에게 시술할 경우, 면역반응이나 부작용을 유발하지 않으면서도 생체-유래 피부 충전제의 작용지속시간을 훨씬 연장시킬 수 있다는 사실을 발견하였다.
본발명은 면역반응이나 부작용을 유발하지 않으면서도 생체-유래 피부 충전제의 작용지속시간을 훨씬 연장시킬 수 있는 피부 충전제 조성물을 제공하는 것을 그 목적으로 한다.
상기한 바와 같은 목적을 이루기 위하여, 본발명은 (a) 환자 자신의 혈액으로부터 얻어진 혈관내피 전구세포(Endothelial Progenitor Cells)와 조혈 모세포(hematopoietic stem cells)의 혼합물 및 (b) 콜라겐 및 히알루론산으로부터 선택된 생체-유래 피부 충전제를 유효 성분으로 함유하는 피부 결함을 완화하거나 치료하기 위한 피부 충전제 조성물을 제공한다.
본발명에 따른 피부 충전제 조성물에 있어서, 생체-유래 피부 충전제 1 ml 당 혈관내피 전구세포 및 조혈 모세포의 혼합물의 세포 개수가 바람직하게는 1X101 내지 1X108/㎖ 개, 더욱 바람직하게는 1X102 내지 1X104/㎖ 개이다.
본발명에 따른 피부 충전제 조성물에 있어서, 생체-유래 피부 충전제 중의 하나인 히알루론산은 바람직하게는 유전적으로 변형된 미생물의 발효로부터 생성된 개질된 히알루론산, 더욱 바람직하게는 Restylane™이다.
한편, 본발명에 따른 피부 충전제 조성물에 있어서, 생체-유래 피부 충전제 중의 하나인 콜라겐은 바람직하게는 동물 유래, 더욱 바람직하게는 돼지 유래의 천연 콜라겐이다.
또한, 본발명에 따른 피부 충전제 조성물은 바람직하게는 혈관내피 성장인자 (VEGF), 안지오텐신 II (Ang II) 및 SDF-1α (stromal-cell derived factor-1α)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 혈관생성 촉진물질(angiogenic growth factor or chemokine)을 추가로 포함할 수 있다.
또한, 본발명에 따른 피부 충전제 조성물은 바람직하게는 환자 자신의 혈액으로부터 얻은 혈소판풍부 혈장(Platelet Rich Plasma, PRP)를 추가로 포함하는 피부 충전제 조성물을 추가로 포함할 수 있다.
본발명에 따른 피부 충전제 조성물에 있어서, 환자 자신의 혈액은 바람직하게는 환자 자신의 말초혈액, 골수 및 제대혈로 이루어진 군에서 선택되고, 더욱 바람직하게는 환자 자신의 말초혈액이다.
또한, 본발명에 따른 피부 충전제 조성물을 적용할 수 있는 적응증으로서의 피부 결함의 완화 또는 치료는 바람직하게는 주름 개선, 흉터 제거 또는 입술을 풍만하게 하기 위한 시술이고, 여기서 주름 개선은 바람직하게는 얼굴, 목 또는 손의 주름을 개선하는 것을 말한다.
본발명에 따른 피부 충전제 조성물에 있어서, (a) 성분과 (b) 성분의 비는 생체-유래 피부 충전제 1 ml 당 혈관내피 전구세포(Endothelial Progenitor Cells) 및 조혈 모세포(hematopoietic stem cells)의 혼합물의 세포 개수가 바람직하게는 1X101 내지 1X108/㎖ 개, 더욱 바람직하게는 1X102 내지 1X104/㎖ 개가 되도록 하는 비율이다.
환자로부터 수집하는 혈액의 양은 환자의 건강에 해롭지 않은 양 만큼이다. 바람직하게는 약 10에서 약 500 ml, 더욱 바람직하게는 10-300 ml, 더욱 더 바람직하게는 20-50 ml가 얻어진다.
환자의 혈액으로부터 혈관내피 전구세포 및 조혈 모세포의 혼합물을 제조하는 방법은 널리 공지되어 있다.
환자의 혈액으로부터 혈관내피 전구세포 및 조혈 모세포의 혼합물을 제조하는 방법으로서 간편하면서도 실제의 임상 현장에서 널리 사용되는 방법은 환자의 혈액을 일정 양, 예를 들면 25 ml 내지 50 ml 채취한 다음 이를 원심분리 등의 공지된 방법으로 처리하여 혈관내피 전구세포 및 조혈 모세포를 포함하는 침전물을 얻고, 이를 생리식염수 등의 생체 적합 매체에 부유시켜서 혈관내피 전구세포 및 조혈 모세포의 혼합물을 얻는 방법이다.
또 다른 방법으로서는, 마커를 이용하여 환자의 혈액으로부터 혈관내피 전구세포와 조혈 모세포를 각각 분리하여 이들을 혼합하는 방법이 있다.
혈액으로부터 혈관내피 전구세포를 분리하는 방법은 예를 들면 아사하라 등(Asahara et al.)(Isolation of putative progenitor endothelial cells for angiogenesis, Science 275:964-967, 1997)에 공지되어 있다. 혈액으로부터 조혈 모세포를 분리하는 방법은 예를 들면 A. Hump, C. Beck, R. Schoch, et al., Establishment and optimization of a flow cytometric method for evaluation of viability of CD34+ cells after cryopreservationand comparison with trypan blue exclusion staining, Transfusion 45 (2005) 에 공지되어 있다.
본발명에 따른 피부 충전제 조성물에 있어서, 상기한 바와 같은 방법으로 환자의 혈액으로부터 얻어진 혈관내피 전구세포 및 조혈 모세포의 혼합물은 증식 없이 그대로 사용되거나 또는 증식하여 세포 개수를 증대시킨 후 사용될 수 있다. 그런데, 환자의 혈액으로부터 얻어진 혈관내피 전구세포 및 조혈 모세포는 그 개수가 정상 성인에 있어서 3-10개 세포/ ml와 같이 매우 적다(Takahashi T, et al. Nat Med 1999;5:434-438; Kalka C, et al. Ann Thorac Surg. 2000;70:829-834). 본발명에 따른 피부 충전제 조성물 내의 세포 개수가 많을수록 피부 충전제의 생착율을 높이는데 유리할 것이므로 본발명에 따른 피부 충전제 조성물의 피부 충전의 지속시간이 길어져서 더욱 우수한 효과가 얻어질 것으로 예상되므로, 이론상으로는 세포들을 증식시켜 세포수를 늘여서 사용하는 것이 간편하고 효과도 우수할 것으로 예상된다. 하지만, 현재 상업적 목적의 줄기 세포의 증식은 의료법상 불법이므로 현재로서는 환자의 혈액으로부터 얻어진 혈관내피 전구세포 및 조혈 모세포를 증식 없이 그대로 사용한다.
상기한 바와 같이 얻어진 세포 혼합물은 시간이 지남에 따라 세포가 사멸하 므로 곧바로 사용하거나, 또는 초저온 냉동보관시킨 후 필요시 사용한다.
환자의 혈액으로부터 상기한 바와 같은 방법에 의해 얻어진 세포 혼합물을 초저온 냉동보관하는 방법은 널리 공지되어 있다. 예를 들면, 상기의 세포 혼합물을 10％ DMSO(dimethyl sulfoxide)를 포함하는 자가 혈청에 부유시킨 후 1.8 ml 냉동 튜브에 2x107 내지 4x107 세포 농도로 분주한다. 상기 튜브를 오염방지 포장한 후 자동조절 냉동기(program-controlled freezer)에서 -100℃까지 온도를 낮추어 냉동시키고 액체 질소가 들어있는 초저온 냉동보관 탱크에 보존한다.
본발명에 따른 피부 충전제 조성물에 사용되는 생체-유래 피부 충전제 중의 하나인 히알루론산은 그 종류에 제한이 없으며, 예를 들면 동물 공급원으로부터 분리된 천연 히알루론산이거나 유전적으로 변형된 미생물의 발효로부터 생성되어 당류 등을 첨가하여 교차결합(cross-link)하도록 개질된 히알루론산일 수 있다. 여기서 당류는 D(-)-리보오스, 디오스, 트리오스, 테트로오스, 펜토오스, 헥소오스, 셉토오스, 옥토오스, 나노오스, 데코오스, 글리세로오스, 트레오스, 에리쓰로오스, 릭소오스, 크실로오스, 아라비노오스, 리보오스, 알로오스, 알트로오스, 글루코오스, 만노스, 글루오스, 아이도오스, 갈락토오스, 탈로오스, 이당류 (말토스, 락토스, 수크로스, 셀로비오스, 젠디오비오스, 멜리비오스, 투라노오스 및 트레할로오스) 등을 포함한다. 본발명에 따른 피부 충전제 조성물에 사용될 수 있는 히알루론산으로서는 예를 들면 Rofilan™(Rofil/Philoderm사), Perlane™, Restylane™(Medicis/Q-Med AB), Teosyal™(Teoxane SA사), Surgiderm™(Corneal Laboratoire사) 등을 들 수 있다. 그러나, 본발명에 따른 피부 충전제 조성물에 있어서, 히알루론산은 바람직하게는 유전적으로 변형된 미생물의 발효로부터 생성된 개질된 히알루론산이고, 더욱 바람직하게는 Restylane™(Medicis/Q-Med AB사)이다.
한편, 본발명에 따른 피부 충전제 조성물에 있어서 사용되는 생체-유래 피부 충전제 중의 하나인 콜라겐은 그 종류에 제한이 없으며, 예를 들면 소, 돼지, 인간 등의 동물에서 분리된 천연 콜라겐이거나 또는 유전적으로 변형된 미생물의 발효로부터 생성되어 당류 등을 첨가하여 교차결합(cross-link)하도록 개질된 콜라겐일 수 있다. 여기서 당류는 D(-)-리보오스, 디오스, 트리오스, 테트로오스, 펜토오스, 헥소오스, 셉토오스, 옥토오스, 나노오스, 데코오스, 글리세로오스, 트레오스, 에리쓰로오스, 릭소오스, 크실로오스, 아라비노오스, 리보오스, 알로오스, 알트로오스, 글루코오스, 만노스, 글루오스, 아이도오스, 갈락토오스, 탈로오스, 이당류 (말토스, 락토스, 수크로스, 셀로비오스, 젠디오비오스, 멜리비오스, 투라노오스 및 트레할로오스) 등을 포함한다. 본발명에 따른 피부 충전제 조성물에 사용될 수 있는 콜라겐으로서는 예를 들면 돼지 콜라겐을 주성분으로 하는 EVOLENCE™(ColBar LifeScience사), 소 콜라겐을 주성분으로 하는 Zyderm™, Zyplast™(Inamed사), 인간 콜라겐을 주성분으로 하는 CosmoDerm™이나 CosmoPlast™(Inamed사) 등을 들 수 있다. 그러나, 본발명에 따른 피부 충전제 조성물에 있어서, 콜라겐은 바람직하게는 동물 유래, 더욱 바람직하게는 돼지 유래의 천연 콜라겐이다.
본발명에 따른 피부 충전제 조성물에 있어서, 환자 자신의 혈액은 바람직하 게는 환자 자신의 말초혈액, 골수 및 제대혈로 이루어진 군에서 선택되고, 더욱 바람직하게는 환자 자신의 말초혈액이다.
또한, 본발명에 따른 피부 충전제 조성물을 적용할 수 있는 적응증으로서의 피부 결함의 완화 또는 치료는 바람직하게는 주름 개선, 흉터 제거 또는 입술을 풍만하게 하기 위한 시술이고, 여기서 주름 개선은 바람직하게는 얼굴, 목 또는 손의 주름을 개선하는 것을 말한다.
본발명에 따른 피부 충전제 조성물이 종래의 피부 충전제와 비교하여 작용지속시간이 훨씬 연장되는 효과가 얻어지는 작용 메카니즘은 명확히 규명된 것은 아니지만, 본발명에 따른 피부 충전제 조성물 내의 혈관내피 전구세포와 조혈 모세포의 혼합물이 혈관신생 등을 통해 생체-유래 피부 충전제의 생착율을 증가시키고, 또한 생체-유래 피부 충전제는 이러한 세포들이 다른 곳으로 이동하여 제거되는 것을 방해하는 인공 지지체(scaffold)의 역할을 함으로써, (a) 성분 및 (b) 성분의 상호작용에 의해 서로의 지속시간을 증가시키기 때문인 것으로 추정된다.
본발명에 따른 피부 충전제 조성물은 피부 결함의 완화 또는 치료를 목적으로 하므로 통상 주사제의 형태로 제형화되어, 요망되는 피부 부위에 주사에 의해 투여된다. 본발명에 따른 피부 충전제 조성물의 투여량 및 투여 횟수는 환자의 피부 결함 정도, 성별, 나이, 체중, 병력 등을 고려하여 담당 의사가 적절히 판단할 수 있다. 본발명에 따른 피부 충전제 조성물의 투여량 및 투여 횟수에 있어서, 다량을 일회에 투여하거나 또는 소량을 자주 투여하는 방법을 생각해 볼 수 있다. 그런데, 다량 일회 투여의 경우, 환자로부터 한번에 채혈해야할 혈액의 양이 과다 해져서 환자에게 부담을 줄 수 있기 때문에 기피된다. 따라서, 소량씩 채혈하여 본발명에 따른 피부 충전제 조성물을 제조한 후 여러 번에 걸쳐 투여하는 것이 바람직하다. 구체적으로는, 예를 들면 약 1X102 내지 1X104 개의 세포를 포함하는 환자의 혈액으로부터의 EPCs/HSCs 혼합물 1 ml와 콜라겐 1 ml를 포함하는 조성물을 환자의 치료 요망 부위에 1 내지 2주 간격으로 2 내지 5회 주사투여하여 시술한다.
본 발명의 조성물은 주로 사람 피부로의 주사용 제품으로 제제화될 수 있는데, 이는 당분야의 숙련자에게 공지된 통상적인 방법에 따라 수행된다. 일례로, 본 발명의 조성물은 용액, 진한 용액, 현탁액 또는 겔의 형태이고, 피부로 주사하기 위해 적합화시킨 적절한 부형제를 추가로 포함할 수 있다. 여기에서, 적절한 부형제는 내성이 좋고, 안정되며, 용이하고, 양호한 사용을 할 수 있도록 하는 농도를 제공해야 한다. 이러한 부형제의 예로는 포스페이트 완충용액, 정균(bacteriostatic) 염수, 프로필렌글라이콜, 전분, 수크로오스 및 소르비톨이 포함된다.
또한, 본 발명의 조성물 및 이로부터 유도된 주사제는 각각 불활성의 약학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제, 증점제, 유화제, 방부제 및 이들의 혼합물과 같은 첨가제를 추가로 포함한다. 상기 첨가제의 적절한 예로는 통상적으로 약제학적 및 피부 보호용 제제에 일반적으로 사용되는 제제가 포함된다. 더욱 바람직하게는, 불활성의 약학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제의 예로는 염수 및 정제수가 포함된다. 적절한 증점제에는 아크릴 아마이드 공중합체, 카보머, 하이드록시에 틸셀룰로오스, 폴리아크릴산, 폴리메타크릴산 및 폴리비닐알콜이 포함된다.
적절한 유화제에는 카프릴/카프르산 트라이글라이세라이드, 스테아레이트-7, 세틸알콜, 세틸포스페이트, 아이소스테아레이트-11 및 나트륨 아이소스테아레이트가 포함된다. 방부제는 본 발명의 조성물에 미생물의 공격 및 독성에 대한 내성을 부여한다. 적절한 예로는, 알콜, 임의의 파라벤, 디아졸리디닐 우레아, DMDM 히단토인, 펜옥시에탄올 및 요오도프로비닐 뷰틸카바메이트가 포함된다. 상기에 제시된 것 이외의 첨가제도 또한 당분야의 숙련자에게 통상적으로 알려진 바와 같이 본 발명에서도 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 혈관의 생성을 촉진시키기 위하여 혈관 성장인자인 혈관내피 성장인자 (VEGF), 안지오텐신 II (Ang II), SDF-1α (stromal-cell derived factor-1α) 등으로 이루어진 군 중에서 선택된 1종 이상의 혈관생성 촉진물질(angiogenic growth factor or chemokine)을 추가로 포함할 수 있다. 충전물 1 ml 당 혈관내피 성장인자의 경우에는 1 내지 100 ng/ ml, 보다 바람직하게는 5 내지 50 ng/ ml, 안지오텐신 II의 경우에는 10 내지 500 nM, 보다 바람직하게는 50 내지 200 nM을 첨가한다. 이와 같은 혈관 생성 촉진 물질의 첨가에 의하여 형성된 혈관수가 증가되고 더욱 발달된 형태의 혈관이 형성된 피부 충전제를 얻을 수 있다.
본 발명의 조성물은 또한 바람직하게는 환자 자신의 혈액으로부터 얻은 혈소판 풍부 혈장(PRP)을 포함하는데, PRP에는 PDGF같은 성장인자들이 들어 있어서 본 발명의 조성물 내의 줄기세포가 잘 자라도록 하는데 도움을 줄 수 있다. 환자 자 신의 혈액으로부터 얻은 혈소판 풍부 혈장(PRP)을 얻는 방법은 널리 공지되어 있고, 예를 들면 Wu W, Zhang J, Dong Q, Liu Y, Mao T, Chen F. Med Hypotheses. 2009 Apr;72(4):455-7. Epub 2009 Jan 12에 기재되어 있다.
[실시예]
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐 본 발명이 하기의 실시예에 한정되는 것은 아니다.
1. 환자의 혈액으로부터 EPCs/HSCs 혼합물의 제조
환자의 상완정맥으로부터 말초혈액 25 ml를 50 ml 헤파린 튜브에 수집하였다. 말초혈액으로부터 단핵세포를 분리하기 위하여, 얻어진 말초혈액을 50 ml 코니칼 튜브 2개에 각각 25 ml씩 분주하여 코니칼 튜브의 하단에 Ficoll (Sigma) 25 ml을 천천히 중첩시킨 후 (혈액 25 ml + Ficoll 25 ml = 50 ml) 3,000 rpm의 속도로 상온에서 20-30분간 원심분리하여 하단에 적혈구 층, 중간에 단핵세포 층 및 상단에 혈청 층의 순서로 분리하였다. 이 중, "버피 코트"로 알려진 중간층은 문제의 EPCs/HSCs 혼합물을 포함하고 혈액의 다른 부분들은 필요하지 아니하다. 중간층인 단핵세포층(2-3 ml)만을 파스퇴르 피펫이나 10 ml 주사기를 이용하여 새로운 튜브로 옮기고 생리식염수 30 ml를 첨가하여 잘 혼합한 후 2,500 rpm의 속도로 상온에서 5분간 원심분리하여 세척하였다. 그 후 상층액을 제거하고, 단핵세포 침전물을 얻었다. 얻어진 단핵세포 침전물에 다시 30 ml의 생리식염수를 중첩시켜 혼합시킨 뒤 상온에서 2,500 rpm으로 5분간 원심분리하여 본발명에 따른 피부 충전제 조성물 에 사용되는 EPCs/HSCs 혼합물을 준비하였다.
2. 본발명에 따른 피부 충전제 조성물의 제조
상기 1에서 얻은 EPCs/HSCs 혼합물을 곧바로 생리식염수 1 ml에 부유시켜 주사기에 담았다. 이후 1 ml의 EVOLENCE™(ColBar LifeScience사)인 콜라겐을 이 주사기에 넣고 혼합하여 본발명에 따른 피부 충전제 조성물을 제조하였다.
3. 피부 이식의 실시예
상기 2에서 얻은 본발명에 따른 피부 충전제 조성물 2 ml을 환자의 요망되는 피부에 일시에 주사로 투여하였다. 1주일 간격으로 총 3회 주사투여를 반복하였다.
수십 명의 환자에 대해 얼굴, 목 또는 손 등의 피부의 주름 개선을 위해 이와 같은 시술을 해본 결과, 콜라겐 단독 주사투여와 비교하여, 본발명에 따른 피부 충전제 조성물 투여시 피부 충전 효과가 2배 이상 오래 지속됨을 확인할 수 있었다.

Claims (13)

  1. (a) 환자 자신의 혈액으로부터 얻어진 혈관내피 전구세포(Endothelial Progenitor Cells)와 조혈 모세포(Hematopoietic stem cells)의 혼합물 및
    (b) 콜라겐 및 히알루론산으로부터 선택된 생체-유래 피부 충전제
    를 유효 성분으로 함유하는 피부 결함을 완화하거나 치료하기 위한 피부 충전제 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 생체-유래 피부 충전제 1 ml 당 혈관내피 전구세포및 조혈 모세포의 혼합물의 세포 개수가 1X101 내지 1X108/㎖ 개인 피부 충전제 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 생체-유래 피부 충전제 1 ml 당 혈관내피 전구세포 및 조혈 모세포의 혼합물의 세포 개수가 1X102 내지 1X104/㎖ 개인 피부 충전제 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 히알루론산이 유전적으로 변형된 미생물의 발효로부터 생성된 개질된 히알루론산인 피부 충전제 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 히알루론산이 Restylane™인 피부 충전제 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 콜라겐이 동물 유래의 천연 콜라겐인 피부 충전제 조성물.
  7. 제6항에 있어서, 콜라겐이 돼지 유래의 천연 콜라겐인 피부 충전제 조성물.
  8. 제1항에 있어서, 혈관내피 성장인자 (VEGF), 안지오텐신 II (Ang II) 및 SDF-1α (stromal-cell derived factor-1α)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 혈관생성 촉진물질(angiogenic growth factor or chemokine)을 추가로 포함하는 피부 충전제 조성물.
  9. 제1항에 있어서, 환자 자신의 혈액으로부터 얻은 혈소판풍부 혈장(Platelet Rich Plasma, PRP)를 추가로 포함하는 피부 충전제 조성물.
  10. 제1항에 있어서, 환자 자신의 혈액은 환자 자신의 말초혈액, 골수 및 제대혈로 이루어진 군에서 선택되는 피부 충전제 조성물.
  11. 제10항에 있어서, 환자 자신의 혈액은 환자 자신의 말초혈액인 피부 충전제 조성물.
  12. 제1항에 있어서, 피부 결함의 완화 또는 치료가 주름 개선, 흉터 제거 또는 입술을 풍만하게 하기 위한 것인 피부 충전제 조성물.
  13. 제12항에 있어서, 상기 주름 개선이 얼굴, 목 또는 손의 주름 개선인 피부 충전제 조성물.
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