KR20100086827A - 프로브 핵산의 서열을 분석하는 방법, 그를 위한 마이크로어레이 및 키트 및 프로브 핵산의 합성 효율을 결정하는 방법 - Google Patents

프로브 핵산의 서열을 분석하는 방법, 그를 위한 마이크로어레이 및 키트 및 프로브 핵산의 합성 효율을 결정하는 방법 Download PDF

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이묘용
이규상
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Abstract

하나이상의 구체예는 제2 프로브 핵산이 고정되어 있는 기판을 이용한 제1 프로브 핵산의 서열을 분석하는 방법, 그를 위한 마이크로어레이, 키트 및 제1 프로브 핵산의 합성 효율을 결정하는 방법을 제공한다.
프로브 핵산, 마이크로어레이

Description

프로브 핵산의 서열을 분석하는 방법, 그를 위한 마이크로어레이 및 키트 및 프로브 핵산의 합성 효율을 결정하는 방법{Method of analyzing probe nucleic acid, microarray and kit for same and method of determining yield for probe synthesis}
하나이상의 구체예는 기판 상에 고정된 프로브 핵산의 서열을 분석하는 방법, 그를 위한 마이크로어레이 및 키트 및 기판 상에 고정된 프로브 핵산의 합성 효율을 결정하는 방법에 관한 것이다.
"마이크로어레이"란 기판 상에 프로브 핵산이 3' 말단 또는 5' 말단을 통하여 고정되어 있는 영역이 배열되어 있는 것을 의미하는 것으로 당업자에게 잘 알려져 있다. 상기 영역은 상기 기판에 고밀도로 배열되어 있는 것으로, 예를 들면 400/cm2 이상, 103/cm2, 104/cm2의 밀도로 배열되어 있는 것일 수 있다. 상기 프로브 핵산은 기판 상에서 포토리소그래피 법에 의하여 인 시튜로 합성되거나, 액상 또는 고상에서 합성된 후 기판 상에 스팟팅에 의하여 고정된 것일 수 있다. 상기 인 시튜 합성이란, 뉴클레오티드 또는 올리고뉴클레오티드가 연속하여 연장됨으로써 합 성되는 것을 의미한다.
마이크로어레이 제작 과정에 있어서, 기판 상에 합성된 또는 고정된 프로브 핵산의 서열 또는 길이를 확인하는 방법의 예로는, 기판 상에 고정된 프로브 핵산을 기판으로부터 분리하고, 이 분리된 핵산에 대하여 서열 또는 길이를 확인하는 방법이 있다. 서열 분석은 서열분석법 및 질량 분석 (mass spectrometry)에 의하여 이루어질 수 있다. 그러나, 마이크로어레이의 기판 상에는 많은 종류의 프로브 핵산이 기판 상에 고정되므로, 많은 종류의 프로브 핵산에 대하여 동시에 서열 및/또는 길이를 확인하는데는 어려움이 있다.
따라서, 기판 상에 고정된 프로브 핵산의 정보를 효율적으로 확인할 수 있는 방법이 여전히 요구되고 있다.
일 구체예는 기판 상에 고정된 프로브 핵산의 서열을 효율적으로 분석하는 방법을 제공하는 것이다.
다른 구체예는 프로브 핵산의 서열을 효율적으로 분석하는 데 사용될 수 있는 마이크로어레이를 제공하는 것이다.
다른 구체예는 마이크로어레이 중의 프로브 핵산의 서열을 효율적으로 분석하는 데 사용될 수 있는 키트를 제공하는 것이다.
일 구체예는,
표면에 제1 프로브 핵산 및 제2 프로브 핵산이 각각 구분된 영역에 고정된 기판으로써, 상기 제2 프로브 핵산은 상기 제1 프로브 핵산과 다른 서열을 가지고 있고 6bp 내지 nbp의 길이를 갖는 핵산으로부터 선택되는 하나이상의 핵산인 것이고, n은 상기 제1 프로브 핵산의 길이인 것인 기판을 제공하는 단계;
검출가능한 신호 물질로 표지되어 있는 상기 제2 프로브 핵산에 상보적인 제2 표적 핵산을 상기 제2 프로브 핵산과 혼성화시키는 단계;
상기 혼성화 산물로부터 신호를 측정하고, 상기 측정된 신호 값을 표준 신호 값과 비교하여, 상기 제2 프로브 핵산과 제2 표적 핵산이 혼성화된 길이를 계산하는 단계; 및
상기 제1 프로브 핵산 중의 상기 계산된 혼성화된 길이에 대응되는 서열은 의도된 상기 제1 프로브 핵산의 서열을 가지고 있는 것으로 결정하는 단계;를 포함하는 기판 상에 고정된 프로브 핵산의 서열을 분석하는 방법을 제공한다.
상기 방법은 표면에 제1 프로브 핵산 및 제2 프로브 핵산이 각각 구분된 영역에 고정된 기판으로써, 상기 제2 프로브 핵산은 상기 제1 프로브 핵산과 다른 서열을 가지고 있고 6bp 내지 nbp의 길이를 갖는 핵산으로부터 선택되는 하나이상의 핵산인 것이고, n은 상기 제1 프로브 핵산의 길이인 것인 기판을 제공하는 단계를 포함한다.
상기 제1 및 제2 프로브 핵산은 DNA, RNA 또는 PNA일 수 있다. 상기 제1 프로브 핵산과 제2 프로브 핵산은 기판 상에 동일한 과정에 의하여 합성된 것일 수 있다. 기판 상에서 핵산을 합성하는 방법은 알려져 있다. 예를 들면, 상기 방법은 기판 상에서 포토리소그래피에 의하여 뉴클레오티드 또는 올리고뉴클레오티드를 연장하는 것을 반복하여 합성하는 것일 수 있다. 예를 들면, 상기 포토리소그래피에 의한 합성 과정은, 먼저 광에 의하여 제거가능한 기로 표면이 보호된 기판 표면 상에 마스크를 통하여 광을 조사하여 특정한 영역만을 탈보호 및 활성화시키고, 상기 탈보호 및 활성화된 영역에 광에 의하여 제거가능한 기로 보호된 제1 뉴클레오티드 또는 제1 올리고뉴클레오티드를 반응시켜, 상기 기판 상의 특정한 영역에 상기 제1 뉴클레오티드 또는 제1 올리고뉴클레오티드를 연장하고, 제2 뉴클레오티드 또는 제2 올리고뉴클레오티드에 대하여, 상기 노광에 의한 탈보호 및 활성화, 및 연장 반응을 반복함으로써, 원하는 서열의 핵산을 합성할 수 있다.
상기 제1 프로브 핵산은 제1 표적 핵산 중의 서열을 확인하기 위하여 기판 상에 고정된 서열이다. 상기 제1 프로브 핵산은 동일한 뉴클레오티드가 3회 이하로 반복되는 서열일 수 있다. 상기 제1 프로브 핵산은 분석하고자 하는 제1 표적 핵산에 특이적으로 존재하는 서열일 수 있다. 상기 제2 프로브 서열은 상기 제1 프로브 핵산의 서열을 분석하기 위한 서열이다. 상기 제2 프로브 핵산은 상기 제1 프로브 서열과 다른 서열을 가지고 있다. 예를 들면, 상기 제2 프로브 서열은 제1 프로브 서열에 의하여 분석하고자 하는 제1 표적 핵산에 존재하지 않는 서열일 수 있다. 예를 들면, 상기 제1 표적 핵산의 기원과는 속, 과, 목, 강, 문 또는 계가 다른 기원으로부터 유래한 것일 수 있다. 상기 제2 프로브 핵산은 또한 제1 프로브 핵산과는 낮은 상동성을 가지고 있는 것일 수 있다. "낮은 상동성"이란 제2 프로브 핵산과 제2 표적 핵산을 혼성화시키는 조건하에서 제1 프로브 핵산과 혼성화가 일어나지 않을 정도로 상동성을 낮은 것을 의미한다. 이러한 낮은 상동성 서열은 당업자가 적절하게 선택할 수 있다.
상기 제2 프로브 핵산은 6bp 내지 nbp의 길이를 갖는 핵산의 세트로서, 각각의 상기 제2 프로브 핵산은 구분된 영역에 고정되어 있는 것일 수 있다. 즉, 6bp, 7bp, 8bp와 같이 길이가 하나의 뉴클레오티드의 차이이고, n은 제1 프로브 핵산의 길이인, 길이가 최대 nbp인 핵산 서열의 세트가 각각 구분된 영역에 고정된 것일 수 있다.
상기 제1 및 제2 프로브 핵산은 3' 말단을 통하여 기판 상에 고정되어 있고, 5' 말단이 노출되어 있는 것일 수 있다. 또한, 상기 제1 및 제2 프로브 핵산은 5' 말단을 통하여 기판 상에 고정되어 있고, 3' 말단이 노출되어 있는 것일 수 있다. 상기 제1 및 제2 프로브 핵산은 길이가 4 내지 200bp, 4 내지 100bp, 4 내지 50bp, 4 내지 30bp, 4 내지 20bp, 4 내지 15bp, 10 내지 30bp, 10 내지 20bp, 15 내지 30bp의 길이를 갖는 것일 수 있다.
"구분된 영역"이란 모양 및 크기에 상관없이 서로 구분되는 영역을 말한다. 상기 구분되는 영역은 단면의 차원이 1nm 내지 5㎛의 범위, 예를 들면 1nm 내지 4㎛의 범위 내인 것일 수 있다. 상기 단면의 차원이란 원의 경우, 직경을 의미하고, 원이 아닌 모양의 경우, 무게 중심을 관통하는 직선의 길이를 의미한다. 상기 기판은 유리, 실리콘, 및 플라스틱으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있다. 상기 기판은 상기 영역이 복수 개 배열되어 있는 마이크로어레이 일 수 있다. "마이크로어레이"란 기판 상에 프로브 핵산이 3' 말단 또는 5' 말단을 통하여 고정되어 있는 영역이 배열되어 있는 것을 의미하는 것으로 당업자에게 잘 알려져 있다. 상기 영역은 상기 기판에 고밀도로 배열되어 있는 것으로, 예를 들면 400/cm2 이상, 103/cm2, 104/cm2의 밀도로 배열되어 있는 것일 수 있다.
상기 방법은 또한, 검출가능한 신호 물질로 표지되어 있는 상기 제2 프로브 핵산에 상보적인 제2 표적 핵산을 상기 제2 프로브 핵산과 혼성화시키는 단계를 포함한다.
상기 단계는 알려진 혼성화 방법에 의하여 이루어질 수 있다. 예를 들면, 상기 표적 핵산을 변성시키고, 변성된 표적 핵산을 상기 프로브 핵산과 어닐링시킴으로써 이루어질 수 있다. 상기 변성은 열 변성을 포함한다. 상기 어닐링은 적절한 혼성화 버퍼 (예,SSC, SSPE) 중에 이루어질 수 있다. 예를 들면, DNA 프로브와 표적 DNA의 혼성화는 형광 표지된 표적 DNA를 혼성화 버퍼와 혼합하고, 가열처리하여 표적 DNA를 열변성시킨 후 이 용액을 마이크로어레이에 첨가한 후 커버를 덮고 건조되지 않는 적절한 온도에서 유지함으로써 하이브리드를 형성한다. 반응 후 반응하지 않은 물질은 염농도 및 온도가 제어된 용액으로 세척하여 제거할 수 있다. 상기 제2 표적 핵산은 게놈 DNA, 이들의 단편, cDNA, PCR과 같은 핵산 증폭 방법에 의하여 증폭된 증폭산물일 수 있다.
상기 검출가능한 신호 물질에는 발광 신호를 발생시키는 물질, 방사성 신호를 발생시키는 물질 또는 전기적 신호를 발생시키는 물질일 수 있다. 예를 들면, 상기 표지는 형광신호를 발생시키는 형광물질일 수 있다. 상기 형광물질에는 플루오레세인 (fluorescein), 로다민 (rhodamine), Cy3 및 Cy5를 포함하는 시아닌 (cyanines), 금속 포르피린 복합체가 포함될 수 있다. 플루오레세인 염료의 예에는, 6-카르복실플루오레세인 (6-FAM) 1, 2',4',1,4,-테트라클로로플루오레세인 (TET) 및 2',4',5',7',1,4-헥사클로로플루오레세인 (HEX), 2',7'-디메톡시-4',5'-디클로로-6-카르복시로다민 (JOE), 2'-클로로-5'-플루오로-7',8'-융합된 페닐-1,4-디클로로-6-카르복시플루오레세인, 2'-클로로-7'-페닐-1,4-디클로로-6-카르복시플루오레세인이 포함된다. 플루오레세인과 로다민 염료는 1,4-디클로로 치환기를 가 질 수 있다. 검출가능한 신호 물질은 상기 제2 표적 핵산의 3' 말단 또는 5말단 또는 양 말단에 연결될 수 있다. 상기 검출가능한 신호 물질은 3' 말단 또는 5말단의 -OH 기를 통하여 연결될 수 있으나, 이들 예에 한정되는 것은 아니다.
상기 혼성화 단계에 있어서, 상기 제2 표적 핵산은 상기 제2 프로브 핵산의 기판에 고정된 부분으로부터 원위 말단으로부터 13bp 이상의 서열과 상보적인, n은 제1 표적 핵산의 길이인, 길이가 13bp 내지 nbp인 핵산으로부터 선택되는 것일 수 있다. 상기 제2 표적 핵산은 길이가 10 내지 200bp, 10 내지 100bp, 10 내지 50bp, 10 내지 30bp, 10 내지 20bp, 13 내지 30bp, 13 내지 20bp, 또는 13 내지 30bp의 길이를 갖는 것일 수 있다. 제2 표적 핵산의 길이가 상기 제2 프로브 핵산의 기판에 고정된 부분으로부터 원위 말단으로부터 13bp 이상의 서열과 상보적인 길이를 갖는 것이므로, 상기 표적 핵산과 상기 제2 프로브 핵산과의 혼성화의 결과로부터, 상기 제2 프로브 핵산의 기판에 고정된 부분으로부터 원위 말단으로부터 13bp 이상의 서열에 대하여, 서열을 확인하는 것이 가능하다.
상기 방법은 또한, 상기 혼성화 산물로부터 신호를 측정하고, 상기 측정된 신호 값을 표준 신호 값과 비교하여, 상기 제2 프로브 핵산과 제2 표적 핵산이 혼성화된 길이를 계산하는 단계를 포함한다.
상기 계산하는 단계에 있어서, 상기 표준 신호 값은, 서열이 검증된 상기 제2 프로브 핵산과 제2 표적 핵산을 사용하여 얻어진 신호 값인 것일 수 있다. 상기 표준 신호 값은, 서열이 검증된 상기 제2 프로브 핵산과 제2 표적 핵산을 사용하여 얻어진 신호 값인 것을 제외하고는 동일한 과정에 의하여 얻어지는 것일 수 있다.
상기 계산하는 단계는, 상기 표준 신호 값 중에서 측정된 신호 값 이하에 해당하는 표준 신호 값을 선택하는 단계, 상기 선택된 신호 값에 대응되는 혼성화된 서열의 길이를 서열을 아는 상기 표준 신호 값을 얻기 위하여 사용된 제2 프로브 핵산 및 제2 표적 핵산으로부터 계산하는 단계 및 상기 표준 신호 값으로부터 계산된 혼성화된 길이를 상기 제2 프로브 핵산 및 제2 표적 핵산의 혼성화된 길이로 결정하는 단계를 포함하는 것일 수 있다. 상기 선택된 신호 값에 대응되는 혼성화된 서열의 길이는 혼성화에 사용된 제2 프로브 핵산 및 제2 표적 핵산의 길이와 서열은 알려진 것이므로, 이들을 확인함으로써 그 혼성화된 길이를 확인할 수 있다.
다른 구체예는, 표면에 제1 프로브 핵산 및 제2 프로브 핵산이 각각 구분된 영역에 고정된 기판으로써, 상기 제2 프로브 핵산은 상기 제1 프로브 핵산과 다른 서열을 가지고 있고 6bp 내지 nbp의 길이를 갖는 핵산으로부터 선택되는 하나이상의 핵산인 것이고, n은 상기 제1 프로브 핵산의 길이인 것인 기판을 포함하는 마이크로어레이를 제공한다.
상기 기판에 대하여는, 상기한 방법에서 설명된 바와 같다. 또한, 제1 프로브, 제2 프로브 및 제2 표적 핵산에 대하여는 상기한 바와 같다. 상기 제1 프로브 핵산과 제2 프로브 핵산은 기판 상에서 포토리소그래피에 의하여 뉴클레오티드 또는 올리고뉴클레오티드를 연장하는 것을 반복하여 동시에 합성된 것일 수 있다. 상기 제2 프로브 핵산은 6bp 내지 nbp의 길이를 갖는 핵산의 세트로서, n은 상기 제1 프로브 핵산의 길이이고, 각각의 상기 제2 프로브 핵산은 구분된 영역에 고정되어 있는 것일 수 있다.
다른 구체예는, 상기한 바와 같은 마이크로어레이를 포함하는, 마이크로어레이 중의 프로브 핵산의 서열을 분석하기 위한 키트를 제공한다. 상기 키트에는 검출가능한 표지로 표지된 제2 표적 핵산을 포함할 수 있다. 검출가능한 표지로 표지된 제2 표적 핵산에 대하여는 상기한 바와 같다. 상기 키트는 상기 마이크로어레이가 상기한 기판 상에 고정된 프로브 핵산의 서열을 분석하는 방법에 따라 사용하는 방법이 기재된 사용 설명서를 더 포함할 수 있다.
일 구체예에 따른 방법에 의하면, 기판 상에 고정된 프로브 핵산의 서열을 효율적으로 분석할 수 있다.
다른 구체예에 따른 마이크로어레이에 의하면, 프로브 핵산의 서열을 효율적으로 분석하는 데 사용될수 있다.
다른 구체예에 따른 키트에 의하면, 마이크로어레이 중의 프로브 핵산의 서열을 효율적으로 분석하는데 사용될 수 있다.
이하 하나이상의 구체예를 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 하나이상의 구체예를 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명 의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 제2 프로브 핵산 세트가 고정된 마이크로어레이의 제조
본 실시예에서 기판 상의 구분되는 영역에 합성하고자 하는 제1 프로브 핵산의 길이를 25bp로 설정하고, 상기 제1 프로브 핵산의 서열을 분석하기 위한 제2 프로브 핵산을 설계 및 기판 상에 고정하였다. 상기 제1 및 제2 프로브 핵산의 합성은 포토리소그래피에 의하여 뉴클레오티드를 연장하는 것을 반복함으로써 합성하였다.
(1) 제2 프로브 핵산의 설계
제1 표적 핵산의 기원을 인간으로 설정하였다. 따라서, 제2 표적 핵산은 인간과 서열 상동성이 낮은 1종의 바이러스 즉, 엔테로박테리아 파지 (Enterobacteria phage) P1의 Cre recombinase 유전자 중에서 25bp 서열을 갖는 것을 총 8종 각각 선택하였다. 제2 프로브 핵산은 상기 제2 표적 핵산에 상보적인 6bp 내지 25bp의 서열을 갖는 것을 선택하였다.
선택된 8종의 길이 25bp인 제2 표적 핵산 및 길이 25bp인 제2 프로브 핵산의 서열은 표 1과 같다.
표 1.
번호 제2 표적핵산 제2 프로브 핵산 길이 Tm 기원
1 서열번호 3 서열번호 4 25 82 엔테로박테리아 파지 P1
2 서열번호 5 서열번호 6 25 80 엔테로박테리아 파지 P1
3 서열번호 7 서열번호 8 25 74 엔테로박테리아 파지 P1
4 서열번호 9 서열번호 10 25 78 엔테로박테리아 파지 P1
5 서열번호 11 서열번호 12 25 88 엔테로박테리아 파지 P1
6 서열번호 13 서열번호 14 25 82 엔테로박테리아 파지 P1
7 서열번호 15 서열번호 16 25 80 엔테로박테리아 파지 P1
8 서열번호 17 서열번호 18 25 78 엔테로박테리아 파지 P1
상기 제2 표적 핵산 또는 제2 프로브 핵산은 인간 게놈과 70%이하의 상동성을 갖고, 동일한 뉴클레오티드가 3회 초과하여 반복되지 않고, 염기 서열 내 GC%가 56% 내지 76%인 서열 중에서 선택하였다.
길이 6bp 내지 24bp의 제2 프로브 핵산은 길이 25bp의 표 1에 기재된 상기 제2 프로브 핵산의 3' 말단으로부터 6bp 내지 24bp의 연속 서열 (contiguous sequence)을 선택하였다. 또한, 제2 표적 핵산은 길이 25bp의 표 1에 기재된 상기 제2 표적 핵산의 5' 말단으로부터 각각 13bp,16bp,19bp,22bp 및 25bp의 연속 서열 (contiguous sequence)을 선택하였다.
그 결과, 제2 표적 핵산 40 종류 (8종 x 5개의 길이)와 제2 프로브 핵산 160종류 (8종 x 20개의 길이)를 설계하였다.
(2) 제2 프로브 핵산의 기판 상에 고정화
설계된 160종류의 제2 프로브 핵산을 기판 상의 구분되는 영역에 각각 60반복으로 고정하였다. 고정은 기판 상에서 프로브 합성에 의하여 이루어졌다. 프로브 합성은 활성화된 모노머로서 데옥시리보뉴클레오시드-3'-포스포아미다이트 (deoxyribonucleoside 3'-phosphoamidites)를 사용하는 알려진 방법에 의하여 합성 하였다. 합성과정을 요약하면, 기판 상에 -OH 기를 도입하고, 상기 -OH기와 5' 산소에 DMT (디메톡시트리틸)기를 갖고, 3'-포스포릴 산소에 β-시아노에틸 보호기 및 디이소프로필아미노 보호기를 갖고, 피리미딘 및 퓨린의 아미노기에 보호기를 갖는 4종류의 단량체 즉, 아데닌, 티민, 구아닌 및 시토신의 데옥시리보뉴클레오시드-3'-포스포아미다이트를 반응시켜, 뉴클레오티드를 하나씩 연장하는 방식으로 합성하였다. 상기 합성과정에는 포토리소그래피를 이용하여 특정한 영역에만 프로브가 합성되도록 하였다. 합성된 프로브는 3'->5' 방향으로 합성되었다.
기판 상에 고정된 제2 프로브 핵산의 배치도의 일부분의 예는 표 2와 같다.
표 2.
6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25
6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25
6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25
6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25
6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25
6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25
6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25
6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25
표 2에서, 각 열 (column)에 기재된 숫자는 프로브의 길이를 나타내며, 각 행 (row)은 8종 프로브 유래의 길이가 다른 즉, 6bp 내지 25bp의 제2 프로브 핵산이 고정된 것을 나타낸다.
도 1은 일 구체예에 따른 기판 상에 고정된 제2 프로브 핵산에 제2 표적 핵산이 혼성화된 예를 나타내는 도면이다. 도 1에서, 제2 프로브 핵산 (서열번호 1) (200)은 기판 (100) 상에 3-OH를 통하여 고정되어 있고 5'-OH가 상기 기판으로부터 원위 말단 (이하 단순히 원위말단이라고도 함)을 이루고 있다. 상기 제2 프로브 핵산은 19bp의 길이를 가지고 있다. 도 1에서는, 19bp의 제2 프로브 핵산이 고정된 예를 나타내고 있으나, 제1 프로브의 길이, 예를 들면, 25bp 이내에 대응되는 길이의 제2 프로브 핵산이 고정될 수 있다. 예를 들면, 제1 프로브 핵산이 25bp의 길이인 경우, 제2 프로브 핵산은 1bp 내지 25bp로 이루어지는 서열로부터 선택된 하나이상의 서열이 고정될 수 있다. 예를 들면, 6bp 내지 25bp의 각 서열이 각각 구분된 영역에 고정될 수 있다. 또는, 13bp, 19bp 및 25bp 핵산이 각각 구분된 영역에 고정될 수 있다. 제2 표적 핵산 (서열번호 2) (300)은 19bp의 길이를 갖는 것으로 3'-OH 말단을 통하여 검출가능한 표지물질이 표지되어 있으며, 5' 말단으로부터 13bp가 제2 프로브 핵산의 5' 말단으로부터 13bp와 혼성화되어 있다. 도 1에 있어서, a는 혼성화되지 않은 기판에 고정된 부분으로부터 근위말단 영역 (6bp)이고, b는 혼성화된 원위 말단 영역 (19bp)이고, c는 제1 프로브 핵산의 길이 (25bp)에 대응되는 서열로부터 제외된 서열의 길이 (6bp)를 나타낸다. 제1 프로브 핵산의 c 영역은 c 영역에 해당하는 길이를 가진 제2 프로브 핵산 (예를 들면, 길이 19bp 내지 25bp의 제2 프로브 핵산)에 의하여 확인될 수 있다.
실시예2: 제2 프로브 핵산 및 제2 표적 핵산의 혼성화 길이가 혼성화 신호에 미치는 영향
본 실시예에서는 실시예 1에서 얻어진 제2 프로브 핵산의 세트가 고정된 마이크로어레이에 실시예 1에서 설계된 5종류의 제2 표적 핵산 즉, 13bp,16bp,19bp,22bp 및 25bp의 제2 표적 핵산을 대응되는 제2 프로브가 고정된 영역에 혼성화시키고, 혼성화 산물로부터 형광 신호를 측정하였다.
도 2는 프로브 길이에 따른 혼성화 강도를 나타내는 도면이다. 도 2에서 횡축은 프로브 길이를 bp로 표시한 것이고, 종축은 혼성화 강도를 log2 형광 강도로 나타낸 것이다. 도 2에서 있어서, 형광 강도는 측정된 형광강도의 평균 값을 나타낸다. 도 2에 있어서, target 13, target 19 및 target 25는 각각 길이 13bp, 19bp, 및 25bp의 제2 표적 핵산을 혼성화시킨 경우, 프로브 길이에 따른 혼성화 강도를 나타내는 것이다. 도 2에 나타낸 바와 같이, 혼성화된 길이가 길어짐에 따라 측정된 형광강도도 비례하여 높아졌다. 따라서, 제2 프로브 핵산 세트가 고정된 마이크로어레이에 다양한 길이의 제2 표적 핵산을 혼성화시킴으로써, 제2 프로브 핵산의 서열을 확인할 수 있다. 상기 제2 프로브 핵산의 서열 확인 결과로부터, 동일한 과정에 의하여 기판 상에서 합성 또는 고정화된 제1 프로브 핵산의 서열을 추정할 수 있다.
상기 제2 프로브 핵산의 서열의 정확도를 판단하는 기준으로는 예를 들면, 다음을 들 수 있다. 도 2에 따르면, 배경형광강도는 13bp, 19bp, 및 25bp의 제2 표적 핵산과 상보적으로 결합하는 프로브 핵산이 없는 경우의 형광강도의 평균 값으로, 1개 핵산이상 혼성화되는 경우 배경형광강도보다 큰 값을 나타내야 한다. 기준형광강도는 동일한 제조 방식으로 제작된 마이크로어레이에서, 동일한 서열을 갖는 복수개의 길이 25bp인 제1 프로브 핵산이 고정된 영역에 인간 게놈 DNA를 DNaseI으로 절단하고, 3'-OH기를 통하여 Cy3를 표지하여 얻어진 제1 표적핵산을 혼성화한 후, 형광강도를 측정하고, 측정된 형광강도 값 중 하위 25%(1Q)에 해당하는 값을 의미한다. 이러한 기준형광강도 값은 선택되는 제1 프로브 핵산의 길이 및 종류에 따라 실험적으로 선택할 수 있다. 본 실시예에서 상기 기준형광강도는, 상기 제1 표적핵산에 완전 상보적인 제1 프로브 (이하 PM 프로브 (perferct match probe)라고 함)가 고정된 영역에 상기 제1 표적핵산을 혼성화하는 경우, 25%보다 높은 형광강도를 나타내고, 상기 제1 표적핵산에 상보적이지 않은 하나의 뉴클레오티드가 프로브의 중앙 위치, 즉 25bp 제1 프로브 핵산의 경우, 13번 위치에 존재하는 제1 프로브 (이하 MM 프로브 (mismatch match probe)라고 함)가 고정된 영역에 상기 제1 표적핵산을 혼성화하는 경우, 25%보다 낮은 형광강도가 얻어지는 것에 근거하였다. 따라서, 표적핵산을 제2 프로브 핵산에 혼성화시킨 결과, 상기 기준형광강도 값보다 높은 경우에는, 상기 표적핵산과 제2 프로브 핵산의 혼성화된 길이는 13bp보다 긴 것으로 결정할 수 있다. 따라서, 13bp, 19bp, 및 25bp의 제2 표적 핵산을 사용한 혼성화 반응에서 혼성화된 서열의 길이가 13bp 이상일 때 상기 기준형광강도 이상이 얻어지는 경우, 이 혼성화된 서열은 의도된 바와 같은 정확한 서열인 것으로 결정할 수 있다. 예를 들면, 13bp의 제2 표적 핵산을 사용한 혼성화 반응에서, 25bp의 제2 프로브 핵산이 고정된 영역에서 기준형광강도 이상이 얻어진 경우, 또는 19bp의 제2 프로브 핵산을 사용한 혼성화 반응에서, 19bp의 제2 프로브 핵산이 고정된 영역에서 기준형광강도 이상이 얻어진 경우, 기판으로부터 원위 말단으로부터 13bp는 정확한 서열을 가지고 있는 것으로 결정할 수 있다. 또한, 25bp의 제2 표적 핵산을 사용한 혼성화 반응에서, 13bp의 제2 프로브 핵산이 고정된 영역에서 기준형광강도 이상이 얻어지고 6bp의 제2 프로브 핵산이 고정된 영역에서 배경형광강도 이상이 얻어지는 경우, 기판으로부터 근위 말단으로부터 6bp 이상의 서열은 정확한 서열을 가지고 있는 것으로 결정할 수 있다. 근위 말단으로부터 1-5bp의 서열은, 25bp의 제2 표적 핵산을 사용했을 때 20-25bp의 제 2 프로브 핵산이 고정된 영역에서의 형광강도가, 동일한 제조 방식으로 제작된 마이크로어레이에 있어서, 제2 기준형광강도 값보다 크고, 6-12bp의 제2 프로브 핵산이 고정된 영역에서의 형광강도가 배경형광강도보다 높은 경우 정확한 서열을 가지고 있는 것으로 결정할 수 있다. 상기 제2 기준형광강도는 동일한 제조 방식으로 제작된 마이크로어레이에 있어서, 동일한 서열을 갖는 복수개의 길이 25bp인 제1 프로브 핵산이 고정된 영역에 인간 게놈 DNA를 DNaseI으로 절단하고, 3'-OH기를 통하여 Cy3를 표지하여 얻어진 제1 표적핵산을 혼성화한 후, 형광강도를 측정하고, 측정된 형광강도 값 중 상위 25%(3Q)에 해당하는 값을 의미한다. 이러한 제2 기준형광강도 값은 선택되는 제1 프로브 핵산의 길이 및 종류에 따라 실험적으로 선택할 수 있다. 본 실시예에서 상기 제2 기준형광강도는, 상기 제1 표적핵산에 완전 상보적인 제1 프로브 (이하 PM 프로브 (perferct match probe)라고 함)가 고정된 영역에 상기 제1 표적핵산을 혼성화하는 경우, 상위 25%보다 높은 형광강도를 나타내고, 상기 제1 표적핵산에 상보적이지 않은 하나의 뉴클레오티드가 프로브의 중앙 위치, 즉 25bp 제1 프로브 핵산의 경우, 13번 위치에 존재하는 제1 프로브 (이하 MM 프로브 (mismatch match probe)라고 함)가 고정된 영역에 상기 제1 표적핵산을 혼성화하는 경우, 상위 25%보다 낮은 형광강도가 얻어지는 것에 근거하였다.
도 1은 일 구체예에 따른 기판 상에 고정된 제2 프로브 핵산에 제2 표적 핵산이 혼성화된 예를 나타내는 도면이다.
도 2는 프로브 길이에 따른 혼성화 강도를 나타내는 도면이다.
<110> Samsung Electronics Co. Ltd. <120> Method of analyzing probe nucleic acid, microarray and kit for same and method of determining yield for probe synthesis <130> PN081869 <160> 18 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 2nd probe nucleic acid <400> 1 cagctatcaa ctcgcgccc 19 <210> 2 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 2nd target nucleic acid <400> 2 gagttgatag ctggctggt 19 <210> 3 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 2nd target nucleic acid <400> 3 gggcgcgagt tgatagctgg ctggt 25 <210> 4 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 2nd probe nucleic acid <400> 4 accagccagc tatcaactcg cgccc 25 <210> 5 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 2nd target nucleic acid <400> 5 tctacacctg cggtgctaac cagcg 25 <210> 6 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 2nd probe nucleic acid <400> 6 cgctggttag caccgcaggt gtaga 25 <210> 7 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 2nd target nucleic acid <400> 7 cgccgtaaat caatcgatga gttgc 25 <210> 8 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 2nd probe nucleic acid <400> 8 gcaactcatc gattgattta cggcg 25 <210> 9 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 2nd target nucleic acid <400> 9 gagacggaaa tccatcgctc gacca 25 <210> 10 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 2nd probe nucleic acid <400> 10 tggtcgagcg atggatttcc gtctc 25 <210> 11 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 2nd target nucleic acid <400> 11 tctcgcgcgg ctccgacacg ggcac 25 <210> 12 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 2nd probe nucleic acid <400> 12 gtgcccgtgt cggagccgcg cgaga 25 <210> 13 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 2nd target nucleic acid <400> 13 gacacgggca ctgtgtccag accag 25 <210> 14 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 2nd probe nucleic acid <400> 14 ctggtctgga cacagtgccc gtgtc 25 <210> 15 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 2nd target nucleic acid <400> 15 ccagccacca gcttgcatga tctcc 25 <210> 16 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 2nd probe nucleic acid <400> 16 ggagatcatg caagctggtg gctgg 25 <210> 17 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 2nd target nucleic acid <400> 17 agaccaggcc aggtatctct gacca 25 <210> 18 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 2nd probe nucleic acid <400> 18 tggtcagaga tacctggcct ggtct 25

Claims (12)

  1. 표면에 제1 프로브 핵산 및 제2 프로브 핵산이 각각 구분된 영역에 고정된 기판으로써, 상기 제2 프로브 핵산은 상기 제1 프로브 핵산과 다른 서열을 가지고 있고 6bp 내지 nbp의 길이를 갖는 핵산으로부터 선택되는 하나이상의 핵산인 것이고, n은 상기 제1 프로브 핵산의 길이인 것인 기판을 제공하는 단계;
    검출가능한 신호 물질로 표지되어 있는 상기 제2 프로브 핵산에 상보적인 제2 표적 핵산을 상기 제2 프로브 핵산과 혼성화시키는 단계;
    상기 혼성화 산물로부터 신호를 측정하고, 상기 측정된 신호 값을 표준 신호 값과 비교하여, 상기 제2 프로브 핵산과 제2 표적 핵산이 혼성화된 길이를 계산하는 단계; 및
    상기 제1 프로브 핵산 중의 상기 계산된 혼성화된 길이에 대응되는 서열은 상기 제1 프로브 핵산의 서열을 가지고 있는 것으로 결정하는 단계;를 포함하는 기판 상에 고정된 프로브 핵산의 서열을 분석하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 제1 프로브 핵산과 제2 프로브 핵산은 기판 상에 동일한 과정에 의하여 합성된 것인 방법.
  3. 제2항에 있어서, 상기 제1 프로브 핵산과 제2 프로브 핵산은 기판 상에서 포토리소그래피에 의하여 뉴클레오티드 또는 올리고뉴클레오티드를 연장하는 것을 반 복하여 합성된 것인 방법.
  4. 제1항에 있어서, 상기 제1 프로브 핵산은 길이가 10 내지 100bp인 것인 방법.
  5. 제1항에 있어서, 상기 제2 프로브 핵산은 6bp 내지 nbp의 길이를 갖는 핵산의 세트로서, n은 상기 제1 프로브 핵산의 길이이고, 각각의 상기 제2 프로브 핵산은 구분된 영역에 고정되어 있는 것인 방법.
  6. 제1항에 있어서, 상기 혼성화 단계에 있어서, 상기 제2 표적 핵산은 상기 제2 프로브 핵산의 기판에 고정된 부분으로부터 원위 말단으로부터 13bp 이상의 서열과 상보적인, n은 상기 제1 프로브 핵산의 길이인 길이가 13bp 내지 nbp인 핵산으로부터 선택되는 것인 방법.
  7. 제1항에 있어서, 상기 계산하는 단계에 있어서, 상기 표준 신호 값은, 서열이 검증된 상기 제2 프로브 핵산과 제2 표적 핵산을 사용하여 얻어진 신호 값인 것인 방법.
  8. 제1항에 있어서, 상기 계산하는 단계는, 상기 표준 신호 값 중에서 측정된 신호 값 이하에 해당하는 표준 신호 값을 선택하는 단계, 상기 선택된 신호 값에 대응되는 혼성화된 서열의 길이를 서열을 아는 상기 표준 신호 값을 얻기 위하여 사용된 제2 프로브 핵산 및 제2 표적 핵산으로부터 계산하는 단계 및 상기 표준 신호 값으로부터 계산된 혼성화된 길이를 상기 제2 프로브 핵산 및 제2 표적 핵산의 혼성화된 길이로 결정하는 단계를 포함하는 것인 방법.
  9. 표면에 제1 프로브 핵산 및 제2 프로브 핵산이 각각 구분된 영역에 고정된 기판으로써, 상기 제2 프로브 핵산은 상기 제1 프로브 핵산과 다른 서열을 가지고 있고 6bp 내지 nbp의 길이를 갖는 핵산으로부터 선택되는 하나이상의 핵산인 것이고, n은 상기 제1 프로브 핵산의 길이인 것인 기판을 포함하는 마이크로어레이.
  10. 제9항에 있어서, 상기 제1 프로브 핵산과 제2 프로브 핵산은 기판 상에서 포토리소그래피에 의하여 뉴클레오티드 또는 올리고뉴클레오티드를 연장하는 것을 반복하여 동시에 합성된 것인 마이크로어레이.
  11. 제9항에 있어서, 상기 제2 프로브 핵산은 6bp 내지 nbp의 길이를 갖는 핵산의 세트로서, n은 상기 제1 프로브 핵산의 길이이고, 각각의 상기 제2 프로브 핵산은 구분된 영역에 고정되어 있는 것인 마이크로어레이.
  12. 제9항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 마이크로어레이를 포함하는, 마이크로어레이 중의 프로브 핵산의 서열을 분석하기 위한 키트.
KR1020090006261A 2009-01-23 2009-01-23 프로브 핵산의 서열을 분석하는 방법, 그를 위한 마이크로어레이 및 키트 및 프로브 핵산의 합성 효율을 결정하는 방법 KR20100086827A (ko)

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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US5143854A (en) 1989-06-07 1992-09-01 Affymax Technologies N.V. Large scale photolithographic solid phase synthesis of polypeptides and receptor binding screening thereof
KR100794698B1 (ko) 2001-06-28 2008-01-14 (주)바이오니아 생화학 물질 미세 배열 칩의 품질 검사 방법
KR100450817B1 (ko) 2002-03-07 2004-10-01 삼성전자주식회사 Ｄｎａ 마이크로어레이 스팟의 품질관리방법
AU2003247827A1 (en) 2002-06-28 2004-01-19 Rosetta Inpharmactis Llc Methods to assess quality of microarrays
KR100590901B1 (ko) 2003-02-24 2006-06-19 김철민 Ｑｃ 프로브를 포함하는 마이크로어레이 및 그 제조방법
US20060008833A1 (en) * 2004-07-12 2006-01-12 Jacobson Joseph M Method for long, error-reduced DNA synthesis

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