KR20100083100A

KR20100083100A - 미생물과 피토스핑고신 유도체의 미용 조합물

Info

Publication number: KR20100083100A
Application number: KR1020100001563A
Authority: KR
Inventors: 다비드 아마르; 브루노 베르나르; 도미니끄 베르나르; 이사벨르 카스티엘
Original assignee: 로레알
Priority date: 2009-01-12
Filing date: 2010-01-08
Publication date: 2010-07-21
Also published as: US8709454B2; US20100203094A1; KR20130004448A; ATE526010T1; EP2206493A1; CN101810558A; FR2940908A1; JP5744405B2; KR101371189B1; EP2206493B1; BRPI1001814A2; RU2428967C1; RU2009148634A; MX2010000422A; ES2374155T3; FR2940908B1; JP2010168379A; CN101810558B; BRPI1001814B8

Abstract

본 발명은 생리학적으로 허용가능한 매질 중에, 하나 이상의 피토스핑고신 살리실레이트 유도체 및 하나 이상의 비피도박테리움(Bifidobacterium ) 종 미생물의 용해물을 포함하는, 케라틴 물질의 관리 및/또는 보충을 위해 유용한 미용 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 하나 이상의 비피도박테리움 종 미생물의 용해물 및 하나 이상의 피토스핑고신 살리실레이트 유도체를 포함하는 조합물의 상피, 특히, 표피, 특히, 노화된 표피의 복구 및 재생을 강화하기 위한 용도, 즉, 미용 용도에 관한 것이다. 본 발명은 또한 상기 하나 이상의 조합을 피부 노화를 겪고 있는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 미용 방법에 관한 것이다.

Description

미생물과 피토스핑고신 유도체의 미용 조합물{Cosmetic combination of a microorganism and of a phytosphingosine derivative}

본 발명은 피부 노화의 예방 및/또는 치료를 위한 특히 유리한 조합물(combination)을 제공하는 것을 목표로 한다.

표피(epidermis)는 상피(epithelium)이며, 통상적으로 특히 피부 줄기 세포를 포함하고 표피의 배아층(germinative layer)를 구성하는 각질형성세포(keratinocyte)의 기저층(basal layer), 상기 기저층 상에 배치된 다면체(polyhedral) 세포의 여러 층으로 구성된 "유극(spiny)"층, 별개의 세포질내 봉입(cytoplasmic inclusion), 각화유리질(keratohyalin) 과립을 포함하는 편평 세포(flattened cell)의 1개 내지 3개의 층을 포함하는 "과립(granular)"층, 및 마지막으로 각질세포(corneocyte)로 불리는, 분화의 최종 단계에 있는 각질형성세포로 구성된, 각질층(또는 stratum corneum)이라 불리는 일련의 상부 층(upper layer)으로 나뉜다.

각질층(stratum corneum, 또는 horney layer)은 개체와 환경 간의 인터페이스에 위치한 표피의 최상층(superficial layer)이다. 각질층은 표피 각질형성세포의 분화로부터 유래된 무핵 세포(anucleate cell)인 각질세포로 구성된다. 각질세포는 케라틴이 풍부하고 비투과성 지질 매트릭스(impermeable lipid matrix)에 의해 둘러싸여 있다. 단백질과 지질 성분 때문에, 각질층은 필수적인 피부 장벽 역할을 수행한다. 각질층은 미생물 작용제의 침입을 막고 피부의 수화 상태 및 전반적으로 신체의 수화 상태를 보존한다.

피부 노화 동안, 및 피부의 완충(relief)에 대한 노화의 잘 알려진 결과 이외의 다른, 다양한 형태의 불편(discomfort)이 장년층에 의해 보고된다. 이러한 형태의 불편은 장벽 기능의 손상 및 그들의 피부의 표피 항상성의 손상에 의해 유발된다. 따라서, 노화된 피부의 각질층은 젊은 피부에 비해, 특히, 겨울 기간 동안, 감소된 세포간 지질 함량을 갖는다. 이 각질층의 조성의 변화는 그의 물리화학적 피부 장벽 기능을 파괴한다. 마지막으로, 각질층의 손상 후 장벽 기능의 회복 속도는 연령에 따라 둔화되어, 표피의 항상성 기능의 기능장애를 암시한다(Denda, M., 2002; Ghadially, R. et al, 1995; Leveque, J.L., 2001). 본 출원인 회사는 또한, 이 동일한 상황 하에서, 각질층에 대한 물리적 또는 화학적 공격에 반응하여, 특정한 유전자가 개인의 연령에 따라 유의성있게 상이한 조절 역학(modulation kinetics)을 보인다는 것을 발견했다. 보다 구체적으로, 특정한 유전자의 발현의 유도가 젊은 피부 대비, 노화된 피부에서 둔화되는 것으로 발견되었다.

발현이 스트레스에 노출된 장년층에서 특히 둔화되는 이와 같은 유전자들 중에 특히, 케라틴 6B 유전자(KRT6B) 유전자가 있고, 이는 또한 표피 회복 및 재생 과정에의 관여를 고려할 때 특히 유리한 것으로 규명되었다.

또한, 피부, 및 특히, 표피의 항상성은 피부 세포의 증식과 분화 과정 간의 미세하게 조절된 균형으로부터 기인된다. 이 증식 및 분화 과정은 완벽하게 조절된다: 그들은 피부의 회복(renewal) 및/또는 재생에 참여하고 일정한 피부 두께, 및 특히, 일정한 표피 두께의 유지를 가져온다. 피부의 이 항상성은 또한, 피부의 기계적 특성을 유지하는데 관여된다.

그러나, 피부의 이 항상성은 특정한 생리적 인자들(연령, 폐경, 호르몬 등) 또는 환경적 인자들(UV 스트레스, 오염, 산화적 스트레스, 자극(irritant) 스트레스 등)에 의해 손상된다. 표피층의 재생력은 덜 커진다: 기저층(basal layer)의 세포들은 덜 활발하게 분열되고, 이는 특히, 표피 재생의 둔화 및/또는 감소를 초래한다. 결론적으로, 세포 재생은 더 이상 표피에서 제거된 세포의 소실을 보충하지 않아서, 표피의 위축(atrophy) 및/또는 피부의 두께의 감소 및/또는 피부의 탄력(elasticity) 및/또는 견고성(firmness)의 상실을 초래한다.

표피 항상성의 변화는 또한 피부의 안색에 대한 탁하고(dull) 및/또는 경계가 불분명한(poorly defined) 외양에 의해 반영된다.

이 현상은 폐경에 의해 강화될 수 있다: 여성들은 피부 당김(skin tightening) 및 건조함, 또는 건조증(xerosis)의 출현을 호소한다. 폐경과 관련된 호르몬 결핍은 특히, 대사 활성의 저하에 의해 동반되고, 이는 각질 세포의 증식의 감소 및 표피 분화의 증가를 가져올 수 있다.

따라서, 피부의 두께를 유지 및/또는 증가시키고 따라서 피부의 기계적 특성을 유지 및/또는 개선하고 및/또는 안색의 광채(radiance)를 촉진하기 위해 피부의 항상성을 촉진할 수 있는 이용가능한 조성물을 갖는 것이 유리하다.

본 발명은 보다 구체적으로, 특정한 조합물이 이와 같은 요구들을 충족시키는데 효과적이고, 특히, 특정한 유전자들의 발현에 대한 촉진적 작용을 통해 상기 요건들을 충족시키는데 효과적이라는 본 발명자들의 발견으로부터 기인한다. 유리하게는, 상기 조합물은 특정한 유전자들의 발현, 특히, 피부 노화 동안 관찰되는 KRT6B와 같은 유전자들의 발현의 둔화를 보완할 수 있다.

결과적으로, 본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 생리학적으로 허용가능한 매질(physiologically acceptable medium) 중에 하나 이상의 피토스핑고신 살리실레이트 유도체(phytosphingosine salicylate derivative) 및 비피도박테리움(Bifidobacterium) 종의 하나 이상의 미생물의 용해물을 포함하는, 케라틴 물질의 관리 및/또는 보충을 위해 유용한 미용 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 KRTB6 또는 KRT10 및 인볼루크린(involucrin) 유전자로부터 선택된 하나 이상의 유전자의 발현을 자극하기 위한, 하나 이상의 비피도박테리움 종 미생물의 용해물 및 하나 이상의 피토스핑고신 살리실레이트 유도체를 포함하는 조합물의 용도, 특히, 미용적 용도에 관한 것이다.

보다 구체적으로, 본 발명은 피부 녹화를 겪는 개체에서 KRTB6, KRT10 및 인볼루크린 유전자로부터 선택된 하나 이상의 유전자의 발현을 자극하기 위한, 하나 이상의 비피도박테리움 종 미생물의 용해물 및 하나 이상의 피토스핑고신 살리실레이트 유도체를 포함하는 조합물의 용도, 즉, 미용적 용도에 관한 것이다.

따라서, 본 발명에 따라 고려되는 조합물은 KRT6B 유전자의 연령 증가에 따라 관찰되는 발현의 감소를 예방 및/또는 보충하기 위해 특히 유리한 것으로 확인된다.

Repair Complex CLR 용해물과 같은, 비피도박테리움 종의 미생물의 용해물의 용도는 EP　0　043 128로부터 잘 알려져 있으나, 피부 세포 DNA 재생을 위한 용도에만 해당한다.

그에 관해, 하기의 문헌들은 건성 피부 및/또는 민감성 피부 및 관련된 상태를 치료하기 위한, 용해물과 구별되는 제형의 미생물, 특히, 프로바이오틱(probiotic) 미생물의 용도를 제안한다.

따라서, 문헌 WO　02/28402는 프로바이오틱 미생물은 면역 과정의 결과인 염증 및 알레르기(allergic) 반응과 같은 피부 과민(skin hypersensitivity) 반응의 조절에서 유용한 효과를 가질 수 있다는 것을 나타낸다. 문헌 EP　1　609　463, EP　1　642　570, EP　1　731　137 및 FR　2　876　029는 민감성 피부의 치료를 위한, 하나 이상의 프로파이오틱 미생물과 무기 양이온을 조합한 조성물을 개시한다. 문헌 PCT/FR2006/050768의 경우, 건성 피부와 관련된 민감성 피부의 치료를 위해, 프로바이오틱 미생물과 다중불포화(polyunsaturated) 지방산 및/또는 다중불포화 지방산 에스테르의 조합물을 제안한다. 결론적으로, 상기 문헌들 중 어느 것도 비피도박테리움 종 미생물의 용해물의 용도를 개시하지 않고, 본 발명에 따라 고려되는 조합된 형태는 더욱 개시하지 않는다.

피토스핑고신 및 그의 염, 및 보다 구체적으로 그의 염산염(hydrochloride)의 경우, 그들은 피부학 분야에서 이미 제안되었다. 실제로, 피토스핑고신은 특히 그의 항미생물 활성(antimicrobial activity)에 대해 알려져 있다. 따라서, 피토스핑고신은 이 활성의 측면에서, 여드름의 치료, 및 피부 상의 미생물 성장에 대한 억제 효과의 측면에서 장점을 갖는다(US　5,326,565 및 EP　0　919　226). 보다 최근에, 스핑고지질(sphingolipid) 유도체, 및 특히, 피토스핑고신 살리실레이트 형태의 유도체가 각질형성세포 분화를 조절하는 능력을 보이는 것으로 개시되었다 (G Paragh et al; Exp Dermatol . 2008 Dec;17(12):1004-16). 문헌 US　5,882,665는 신규한 피토스핑고신 살리실레이트 유도체가 항-여드름제, 항세균제, 항주름제(antiwrinkle agent), 및 피부-미백제(skin-lightening agent)로서 유용한 것으로 제안한다.

그러나, 본 발명자들이 알기로는, 피토스핑고신 살리실레이트 유도체와 비피도박테리움 종 미생물의 용해물의 조합에 의한, 특정한 유전자들의 발현에 대한 유용한 효과 또는 상승적 효과는 주목된 바 없었다.

하기의 실시예에 의해 입증된 바와 같이, 본 발명에 따른 조합물은 명확하게 KRT6B 유전자의 발현, 및 또한 KRT10 및 인볼루크린 유전자의 발현을 촉진한다. 이 작용은 특히, Episkin^® 재건 피부 모델(reconstructed skin model)을 이용한 qRT-PCR에 의해 확인되었다.

본 발명을 위해, 상기 조합물에 의해 보여진 효과는 피토스핑고신 살리실레이트 유도체와 비피도박테리움 종 미생물의 용해물의 개별적인 효과의 단순한 중첩(superimposition)으로부터 예상되는 것보다 더 큰 것으로 입증되었기 때문에 상승적인 것으로 정의된다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상피, 특히, 표피, 특히, 노화된 표피의 회복 및 재생 능력을 강화하기 위한, 앞서 고려된 조합물의 용도에 관한 것이다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상피, 특히, 표피, 특히, 노화된 표피의 회복 및 재생 능력을 강화하기 위한 조성물의 제조를 위한, 하나 이상의 피토스핑고신 살리실레이트 유도체와 조합된, 하나 이상의 비피도박테리움 종의 미생물의 용해물의 용도에 관한 것이다.

전술된 바와 같이, 이 효과는 특히, 피부 노화 과정 동안, 자연적으로 둔화되는 유전자 또는 유전자들의 발현의 촉진을 통해, 및 보다 구체적으로 KRT6B의 발현의 촉진을 통해 수득된다.

본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 상피, 특히, 표피, 특히, 노화된 표피의 회복 및 재생 능력을 강화하기 위한 KRTB6, KRT10 및 인볼루크린 유전자로부터 선택된 하나 이상의 유전자의 발현을 자극하기 위한, 하나 이상의 비피도박테리움 종 미생물의 용해물 및 하나 이상의 피토스핑고신 살리실레이트 유도체를 포함하는 조합물의 용도, 즉, 미용적 용도에 관한 것이다.

본 발명의 또 다른 용도에 따르면, 본 발명은, 피부 노화를 겪는 개체에게, 전술된 조합물을 투여하는 단계를 포함하는, 치료 방법, 특히, 미용적 치료 방법에 관한 것이다.

이 투여는 특히, 경구로 또는 국소적으로 수행될 수 있다.

본 발명은 또한 피부의 두께를 증가시키고, 안색의 광채(radiance)를 촉진하고, 피부의 기계적 특성을 촉진 및/또는 개선시키고, 및/또는 피부의 탄력 및/또는 견고함(firmness)를 촉진 및/또는 개선하기 위한, 생리학적으로 허용가능한 매질을 포함하고, 피부로의 국소 투여를 위한 본 발명에 따른 조합물의 미용적 용도에 관한 것이다.

비피도박테리움 종( Bifidobacterium species )의 미생물

전술된 바와 같이, 본 발명에 따라 활성제(active agent)로 이용된 비피도박테리움 종의 미생물은 용해물(lysate)의 형태로 이용된다.

용해물은 일반적으로 세포 용해(cell lysis)라 불리는 현상에 의해 해당 미생물의 세포에 자연적으로 포함된 세포내 생물학적 성분들의 방출을 유발하는, 세포의 파괴 또는 용해시 수득되는 물질을 의미한다.

본 발명에서, 용어 "용해물(lysate)"은 해당 미생물의 용해에 의해 수득된 전체 용해물, 또는 그의 분획을 의미하기 위해 구별 없이 이용된다.

따라서, 본 발명은 비피도박테리움 종의 용해물 및/또는 그의 분획의 용도에 관한 것이다.

따라서, 사용된 용해물은 세포내 생물학적 구성성분 및 세포벽과 세포막의 구성성분으로부터 전적으로 또는 부분적으로 형성된다.

보다 구체적으로, 용해물은 락트산 탈수소효소(lactic acid dehydrogenase), 포스파타아제(phosphatase), 포스포케톨라아제(phosphoketolase) 및 트랜스알돌라아제(transaldolase)와 같은 효소, 및 대사산물을 포함하는 세포질 세포 분획을 포함한다. 예로서, 세포벽 성분들은 특히, 펩티도글리칸, 뮤레인(murein) 또는 뮤코펩티드 및 테이코산(teichoic acid)이고, 세포막 구성성분은 글리세로포스포리피드(glycerophospholipid)로 구성된다.

이 세포 용해는 예를 들면, 삼투압 충격(osmotic shock), 열 충격, 초음파, 또는 원심분리형의 기계적 응력과 같은 다양한 기술 수단에 의해 달성될 수 있다.

보다 구체적으로, 이 용해물은 미국특허 제4,464,362호에 기재된 기술, 및 특히, 하기의 프로토콜에 따라 수득될 수 있다.

해당하는 비피도박테리움 종의 미생물은 적합한 배지에서, 예를 들면, 문헌 미국특허 제4,464,362호 및 EP　0　043　128에 기재된 조건에 따라, 혐기적 조건에서 배양된다. 성장의 정지기(stationary phase)에 도달한 경우, 배양 배지는 저온살균(pasteurization), 예를 들면, 60 내지 65℃의 온도에서 30분 동안의 처리에 의해 불활성화될 수 있다. 그 후, 통상적인 분리 기법, 예를 들면, 막 여과, 원심분리에 의해 회수되고, 생리적 농도의 NaCl 멸균 용액에 재현탁된다. 용해액은 그로부터 세포질 분획, 세포벽 분획 및 대사(metabolism)-유래 산물을 방출시키기 위해 초음파처리에 의한 그와 같은 배지의 붕해(disintegration)에 의해 수득될 수 있다. 그 후, 그들의 자연적인 분포 중의 모든 성분들이 약산성 수용액에서 안정화된다.

따라서, 총 중량 대비, 0.1 중량% 내지 50 중량%, 특히, 1 중량% 내지 20 중량%, 특히, 약 5 중량% 수준의 활성 물질의 농도를 갖는 용해물이 일반적으로 수득된다.

용해물은 다양한 형태, 용액의 형태, 또는 분말(pulverulent) 형태로 이용될 수 있다.

본 발명에 가장 적합한 미생물은 하기 종으로부터 선택된 비피도박테리움 종에 속한다: 비피도박테리움 롱굼(Bifidobacterium longum ), 비피도박테리움 비피둠(Bifidobacterium bifidum ), 비피도박테리움 브레베(Bifidobacterium breve ), 비피도박테리움 애니말리스(Bifidobacterium animalis ), 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis ), 비피도박테리움 인판티스(Bifidobacterium infantis), 비피도박테리움 아돌레센티스(Bifidobacterium adolescentis ) 또는 비피도박테리움 슈도카테눌라툼(Bifidobacterium pseudocatenulatum ), 및 이들의 혼합물.

비피도박테리움 롱굼 종이 본 발명을 위해 가장 적합하다.

용해물은 유리하게는 INCI 명칭 Bifidat ferment Lysate, EINECS 명칭 하에, 비피도박테리움 롱굼, EINECS No.: 306-168-4 및 CAS No.: 96507-89-0 하에 등록된 용해물일 수 있다.

K. Richter GmbH에 의해 명칭 Repair Complex CLR^®에 의해 판매되고, 비피도박테리움 롱굼 종의 불활성화된 용해물로부터 형성된 제품은 본 발명의 범위 내에 속한다.

본 발명에 따른 용해물은 앞서 정의된 바와 같다.

피토스핑고신 살리실레이트 유도체

천연적으로, 각질층에 존재하는 피토스핑고신은 피부에 자연적으로 존재하는 3개의 스핑고이드 염기(sphingoid base) 중 하나에 해당한다.

본 발명에서, 보다 구체적으로 고려되는 피토스핑고신 유도체는 피토스핑고신 살리실레이트 타입의 유도체, 즉, 하나 이상의 피토스핑고신 분자의 하나 이상의 살리실산 분자로의 공유 결합으로부터 유래된 화합물이다. 이 결합은 에르테르 타입 또는 아미드 타입일 수 있고, 바람직하게는 아미드 타입이다.

본 발명의 목적을 위해, 피토스핑고신 살리실레이트 유도체는 상응하는 화합물의 다양한 이온 형태를 포함한다.

그와 같은 유도체는 유리하게 하기의 구조식을 갖는다:

식 중에서:

- R은

수소 원자,

적합한 경우, 히드록시 라디칼로 치환되는, 포화 또는 불포화의 직쇄형 또는 분지형의 C₁ 내지 C₄₉ 지방족 라디칼, 또는

a는 7 내지 50의 정수이고, b는 10 내지 100의 정수이며, m은 0 또는 1이고, Y는 H, 또는 Z는 -OH 또는 에폭시 산소이고, x는 12 내지 20의 정수이며, y는 20 내지 40의 정수이고, z는 0 또는 1 내지 4의 정수인 것인 식 -CO-(C_xH_yZ_z)CH₃을 갖는 C₁₄-C₂₂ 지방산을 나타내는 것인 Y-O(C_aH_b)_m-기이며;

- R¹은 적합한 경우, 히드록시 라디칼에 의해 치환된, 포화 또는 불포화의 직쇄형 또는 분지형 C₈ 내지 C₂₈, 특히, C₁₀ 내지 C₂₀, 특히, C₁₂ 내지 C₁₈, 지방족 라디칼이고, 및

- R²는 H, 포스페이트 라디칼, 술페이트 라디칼, 또는 당이다.

그와 같은 유도체는 문헌 EP　919　226에 보다 구체적으로 개시된다.

R과 R²는 각각 수소 원자이고, R¹은 직쇄형의 포화된, 특히, C₁₄, 알킬 라디칼인 식 I의 유도체가 본 발명을 위해 가장 적합하다.

이 유도체는 하기 식을 갖는다:

그와 같은 유도체는 특히, 명칭 Phytosphingosine SLC 하에 Evonick Goldschmidt 사에 의해 판매된다.

본 발명에 따라 유용한 피토스핑고신 살리실레이트 유도체는 앞서 정의된 바와 같다.

본 발명에 따른 조합물을 형성하는 용해물의 피토스핑고신 살리실레이트 유도체 및 용해물의, "유효량(effective amount)"이라고도 불리는 사용될 수 있는 개별적인 양은 물론, 원하는 효과에 의존적이며 따라서 큰 정도까지 변할 수 있다.

본 발명의 목적을 위해, 표현 "유효량(effective amount)"은 기대되는 효과, 즉, 미용 효과 또는 치료 효과를 관찰하기 위해 필요한 최소량을 의미하도록 의도되고, 미용 효과 또는 치료 효과를 수득하기 위해 필요한 유효량은 경우에 따라 동일하거나 또는 상이할 수 있는 것으로 이해된다.

양의 수준을 제시하기 위해, 본 발명을 형성하는 두 개의 화합물의 각각은 조성물의 총 중량의 0.0001% 내지 50%의 양, 특히, 조성물의 총 중량의 0.001% 내지 10%를 나타내는 양으로 존재할 수 있다.

보다 구체적으로, 본 발명에 따른 조성물에서, 용해물을 형성하고 비피도박테리움 종에 속하는 활성제는 지지체(support) 또는 이를 포함하는 조성물의 총 중량 대비, (건량 기준) 0.001 중량% 이상, 특히 0.01 중량% 내지 20 중량%, 및 보다 구체적으로 0.01 중량% 내지 15 중량%의 활성 물질 비율로 이용될 수 있다.

본 발명에 따른 조성물 중의 피토스핑고신 살리실레이트 유도체가 지지체 또는 이를 포함하는 조성물의 총 중량 대비, (건량 기준) 0.001 중량% 이상, 특히, 0.001 중량% 내지 20 중량%, 및 보다 구체적으로 0.05 중량% 내지 2 중량%의 활성 물질의 비율로 조성물로 제제화될 수 있다.

본 발명에 따른 조성물

본 발명에 따른 조성물은 미용 조성물, 또는 약제학적 조성물, 특히, 피부용 조성물일 수 있다.

본 발명의 목적을 위해, 표현 "상태의 예방(prevention of a condition)"은 피부 노화, 특히, 앞서 정의된 바와 같은 피부 노화와 연관된 상태의 발생을 둔화시키는 것을 의미하도록 의도된다.

본 발명에 따라 고려되는 모든 조성물은 생리학적으로 허용가능한 매질을 이용하는 것으로 이해된다.

본 발명의 목적을 위해, 용어 "생리학적으로 허용가능한 매질(physiological accepatable medium)"은 케라틴 물질, 특히, 피부에 대한 조성물의 적용을 위해 적합한 매질을 의미하도록 의도된다.

본 발명의 하나의 특정한 구체예에 따르면, 본 발명에 따른 조성물은 또한 피부에 대해 활성인 하나 이상의 보충적 작용제(supplementary agent)를 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 조합물을 보충하는 다양한 성분들의 양은 통상적으로 해당 분야에서 이용되는 양이다.

- 보충적 활성제( supplementary active agent )

본 발명에서 이용될 수 있는 보충적 활성제의 예로서, 피부의 상태를 개선시키는 활성제, 예를 들면, 수화시키거나, 수분을 보충하는(moisturizing) 활성제, 또는 세라미드, 콜레스테롤 술페이트 및/또는 지방산, 및 이들의 혼합물과 같은 천연 지질 장벽을 개선하기 위한 활성제가 언급될 수 있다.

또한, 프로테아제, 리파아제, 세레브로시다아제(cerebrosidase), 아미다아제 및/또는 멜라나아제(melanase), 및 이들의 혼합물과 같은, 피부에 대해 활성을 갖는 효소를 이용할 수 있다.

또한, 출원 WO　2006/000992 및 WO　2006/037922에 개시된 바와 같은 미생물의 활성제, 특히, 프로바이오틱 미생물의 활성제를 이용할 수 있다.

본 발명의 목적을 위해, 용어 "프로바이오틱 미생물(probiotic microorganism)"은 적당량으로 이용되는 경우, "Joint FAO/WHO Expert Consultation on Evaluation of Health and Nutritional Properties of Probiotic in Food Including Powder Milk with Live Lactic Acid Bacteria, 6 October 2001"에 따르면 숙주의 건강에 대해 긍정적 효과를 가지며, 특히, 장내 미생물 균형(intestinal microbial balance)을 개선시킬 수 있는 살아있는 미생물을 의미하도록 의도된다.

본 발명을 위해 적합한 미생물은 특히, 사카로마이세스(Saccharomyces), 야로위아(Yarrowia), 클루이베로마이세스(Kluyveromyces), 토룰라스포라(Torulaspora), 스키조사카로마이세스 폼베(Schizosaccharomyces pombe), 데바로마이세스(Debaromyces), 칸디다(Candida), 피키아(Pichia), 아스퍼길러스(Aspergillus) 및 페니실리움(Penicillium)과 같은 아스코마이세트(ascomycete), 비피도박테리움(Bifidobacterium), 박테로이데스(Bacteroides), 푸소박테리움(Fusobacterium), 멜리소콕코스(Melissococcus), 프로피오니박테리움(Propionibacterium), 엔테로콕코스(Enterococcus), 락토콕코스(Lactococcus), 스태필로콕코스(Staphylococcus), 펩토스트렙토콕코스(Peptostrepococcus), 바실러스(Bacillus), 페디오콕코스(Pediococcus), 미크로콕코스(Micrococcus), 류코노스톡( Leuconostoc), 웨이셀라(Weissella), 에어로콕코스(Aerococcus), 오에노콕코스(Oenococcus) 및 락토바실러스(Lactobacillus) 속의 세균, 및 이들의 혼합물로부터 선택될 수 있다.

본 발명을 위해 가장 적합한 아스코마이세트로서, 특히, 야로위아 리폴리티카(Yarrowia lipolitica) 및 클루이베로마이세스 락티스(Kluyveromyces lactis), 및 동등하게 사카로마이세스 세레비시애(Saccharomyces cereviseae), 토룰라스포라(Torulaspora), 스키조사카로마이세스 폼베(Schizosaccharamyces pombe), 칸디다(Candida) 및 피키아(Pichia)가 언급될 수 있다.

프로바이오틱 미생물의 구체적인 예는 비피도박테리움 비피둠, 비피도박테리움 인판티스, 락토바실러스 액시도필루스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 알리멘타리우스(Lactobacillus alimentarius), 락토바실러스 쿠르바투스(Lactobacillus curvatus), 락토바실러스 델부룩키 아종 락티스(Lactobacillus delbruckii subsp. Lactis), 락토바실러스 가세리(Lactobacillus gasseri), 락토바실러스 존소니(Lactobacillus johnsonii), 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri), 락토바실러스 람노수스(Lactobacillus rhamnosus)(락토바실러스 GG), 락토바실러스 사케(Lactobacillus sake), 락토바실러스 락티스(Lactococcus lactis), 스트렙토콕코스 써모필루스(Streptococcus thermophilus), 스태필로콕코스 카르노수스(Staphylococccus carnosus) 및 스태필로콕코스 질로수스(Staphylococcus xylosus), 및 이들의 혼합물이다.

보다 구체적으로, 그들은 락토바실러스 및/또는 비피도박테리움과 같은 락트산 세균의 군으로부터 유래된 프로바이오틱 미생물이다. 이 락트산 세균의 예로서, 보다 구체적으로, 락토바실러스 존소니, 락토바실러스 루테리, 락토바실러스 람노수스, 비피도박테리움 비피둠, 비피도박테리움 브레베, 비피도박테리움 애니말리스, 비피도박테리움 락티스, 비피도박테리움 롱굼, 비피도박테리움 인판티스, 비피도박테리움 아돌레센티스 또는 비피도박테리움 슈도카테눌라툼, 및 이들의 혼합물이다.

비피도박테리움 락티스 균주는 명칭 Bb 12 하에 Hansen (Chr. Hansen A/S, 10-12 Boege Alle, P.O. Box 407, DK-2970 Hoersholm, Denmark)로부터 수득될 수 있다.

미생물은 본 발명에 따른 조성물에 살아있는 형태, 반-활성(semi-active) 형태, 또는 불활성화된 형태, 사멸된 형태로 포함될 수 있다.

미생물은 또한 세포 성분 분획의 형태로 또는 대사산물의 형태로 포함될 수 있다. 미생물(들), 대사산물(들), 또는, 분획(들)은 또한 동결건조된 분말, 또는 배양액 상층액, 및/또는, 적합한 경우, 농축된 형태로 도입될 수 있다.

국소 조성물의 특정한 경우에, 이 미생물들을 불활성화된 형태, 또는 사멸된 형태로 이용하는 것이 유리할 수 있다.

프로바이오틱 미생물의 경우, 하기의 세균 및 효모 속이 일반적으로 이용된다:

- 락트산 세균(Lactic acid bacteria): 발효에 의해 락트산으로부터 당을 생산한다. 그들은 형태에 따라 두 개의 그룹으로 분류된다:

락토바실러스 종(Lactobacillus species): 액시도필루스(acidophilus) (LC1, NCFB 1748); 아밀로보루스(amylovorus), 카세이(casei) (Shirota), 람노수스(rhamnosus) (스트레인 GG), 브레비스(brevis), 크리스파투스(crispatus), 델브루키(delbrueckii)(아종 불가리쿠스(bulgaricus), 락티스(lactis)), 퍼멘툼(fermemtum), 헬베티쿠스(helveticus), 갈리나룸(gallinarum), 가세리(gasseri), 론소니(lohnsonii), 파라카세이(paracasei), 플란타룸(plantarum), 루테리(reuteri), 람노수스(rhamnosus), 살리바리우스(salivarius)),

콕시(Gocci): 엔테로코수스(Enterocossus) (파에칼리스(faecalis), 파에시울(faeciul)), 락토콕코스 락티스(아종 락티스 또는 크레모리스(cremoris)), 류코노스톡 메센테로이데스 아종 덱스트라니쿰(Leuconstoc mesenteroides subsp dextranicum), 페디오콕코스 액시딜락티시(Pediococcus acidilactici)(동물 사료), 스포로락토바실러스 이눌리누스(Sporolactobacillus inulinus), 스트렙토콕코스 살바리우스 아종 써모필루스(Streptococcus salvarius subsp. Thermophilus),

- 비피도박테리아 또는 비피도박테리움 종: 비피도박테리움 아돌레센티스; 애니말리스, 비피둠, 브레베, 락티스, 롱굼, 인판티스,

- 효모: 사카로마이세스(세레비시애 또는 보울라디(boulardii)),

- 기타 포자생성 세균(sporulated bacteria): 바실러스(세레우스 변종 토요(cereus var toyo) 또는 서브틸리스(subtilis)), 바실러스 코아굴란스(Bacillus coagulans), 바실러스 리케니포르미스(B licheniformis), 대장균 스트레인 니셀(Escherichia coli strain nissle), 프로피오박테리움 프로이덴라이키(Propionibacterium freudenreichii).

락트산 세균 및 비피도박테리아가 가장 흔하게 이용되는 프로바이오틱이다.

본 발명을 위해 가장 특별히 적합한 프로바이오틱의 구체적 예는 비피도박테리움 비피둠, 비피도박테리움 인판티스, 비피도박테리움 롱굼, 락토바실러스 액시도필루스, 락토바실러스 알리멘타리우스, 락토바실러스 카세이 아종 카세이, 락토바실러스 카세이 쉬로타(Shirota), 락토바실러스 파라카세이, 락토바실러스 쿠르바투스(curvatus), 락토바실러스 델브루키 아종 락티스(delbruckii subsp. Lactis), 락토바실러스 가세리, 락토바실러스 존소니, 락토바실러스 루테리, 락토바실러스 람노수스 (락토바실러스 GG), 락토바실러스 사케, 락토콕코스 락티스, 스트렙토콕코스 써모필루스, 스태필로콕코스 카르노수스(Staphylococccus carnosus) 및 스태필로콕코스 질로수스(Staphylococcus xylosus), 및 이들의 혼합물이다.

보다 구체적으로, 그들은 특히 락토바실러스 및/또는 비피도박테리움과 같은 락트산 세균의 군으로부터 유래된 프로바이오틱 미생물이다. 이 락트산 세균의 예로서, 보다 구체적으로, 락토바실러스 존소니, 락토바실러스 루테리, 락토바실러스 람노수스, 락토바실러스 파라카세이, 락토바실러스 카세이, 또는 비피도박테리움 비피둠, 비피도박테리움 브레베, 비피도박테리움 롱굼, 비피도박테리움 애니말리스, 비피도박테리움 락티스, 비피도박테리움 인판티스, 비피도박테리움 아돌레센티스 또는 비피도박테리움 슈도카테눌라툼, 및 이들의 혼합물로 구성될 수 있다.

가장 특별하게 적합한 종은 부다페스트 조약에 따라 30/06/92, 12/01/99, 15/04/99, 15/04/99 및 07/06/05에 각각 참조 CNCM I-1225, CNCM I-2116, CNCM I-2168 및 CNCM I-2170 및 CNCM I-3446으로 파스퇴르 연구소(Institut Pasteur)(28 rue du Docteur Roux, F-75024 Paris cedex 15)에 기탁된, 락토바실러스 존소니, 락토바실러스 파라카세이, 비피도박테리움 아돌레센티스, 비피도박테리움 롱굼, 및 비피도박테리움 락티스 NCC 2818 (Bb12 ATCC 27536으로도 표시됨), 및 비피도박테리움 롱굼(BB536)이다. 비피도박테리움 락티스 스트레인 CNCM I-3446은 Hansen (Chr. Hansen A/S, 10-12 Boege Alle, P.O. Box 407, DK-2970 Hoersholm, Denmark)으로부터 수득될 수 있다.

본 발명의 용도를 위해 적합한 활성제의 다른 예는 진통 활성제, 항-효모 활성제(anti-yeast active agent), 항세균(antibacterial) 활성제, 구충 활성제(antiparasitic active agent), 항진균(antifungal) 활성제, 항바이러스 활성제, 스테로이드계 항염증 활성제(steroidal anti-inflammatory active agent), 마취 활성제(anaesthetic active agent), 항소양(antipruritic) 활성제, 각질용해 활성제(kerotolytic active agent), 자유-라디칼-제거(free-radical-scavenging) 활성제, 항지루(antiseborrhoeic) 활성제, 비듬제거(antidandruff) 활성제, 여드름 치료(anti-acne) 활성제, 피부 노화 예방 및/또는 피부 상태의 개선을 목적으로 하는 활성제, 항-노화 활성제, 피부염치료(antidermatitis) 활성제, 항-자극(anti-irritant) 활성제, 면역조절(immunomodulatory) 활성제, 건성 피부 치료용 활성제, 항발한성(antiperspirant) 활성제, 항건선(antipsoriatic) 활성제, 항히스타민(antihistamine) 활성제, 치유(healing) 활성제, 셀프-태닝(self-tanning) 활성제, 녹차 또는 그의 활성 분획과 같은 항산화제, 글리세롤, 라포니트(laponite), 카페인, 방향족 에센셜 오일(aromatic essential oil), 탈색(depigmenting) 활성제, 박피(exfoliant) 활성제, 지질조절제(liporegulator), 연화(softening) 활성제, 리프레싱(refreshing) 활성제, 탈취성(deodorizing) 활성제, 탈감작성(desensitizing) 활성제, 표백(bleaching) 활성제 또는 영양 활성제(nourishing active agent), 및 피부 분화 및/또는 증식 및/또는 색소침착을 감소시키는 활성제 및 이들의 혼합물을 포함한다.

보충적 활성제는 또한 장벽 기능 개선제, 피부이완제(dermodecontracting agent), 항-당화(anti-glycation)제, 피부 및/또는 표피 거대분자(macromolecule)의 합성 자극제 및/또는 그들의 분해 예방제, 섬유모세포 또는 각질형성세포 증식 및/또는 각질형성세포 분화 자극제, 각질 외피(horny envelope)의 성숙 촉진제, NO-신타아제(synthase) 억제제, PBR(peripheral benzodiazepine receptor) 길항제, 피지샘의 활성 증가제, 세포의 에너지 대사 자극제, 인장제(tensioning agent), 지방-재구성제(fat-restructuring agent), 슬리밍제(slimming agent), 피부 모세관 순환 촉진제(agent for promoting cutaneous capillary circulation), 진정제(calmative), 피지-조절제(sebum-regulating agent) 또는 항지루성 작용제(antiseborrhoeic agent), 아스트린젠트( astringent), 항-염증제 및 항-여드름제로부터 선택될 수 있다.

활성제 및 특히, 본 발명에서 이용될 수 있는 항-노화 활성제 중에, 비한정적인 예로서, Raffermine^®의 상품명 하에 Silab 사에 의해 판매되는 제품과 같은 대두 단백질 추출물, Pharma Waldoff에 의해 판매되는 제품과 같은 아데노신 또는 합성 아데노신, 프로-자일란(pro-xylane), 상품명 Coheliss 하에 Silab에 의해 판매되는 것과 같은 호밀 종자 추출물(rye seed extract), 상품명 Vitanol 하에 Silab에 의해 판매되는 것과 같은 알팔파(luzerne)의 추출물, 참조 Dermican LS 9745 하에 Cognis에 의해 판매되는 제품과 같은 테트라펩티드 (N-아세틸-Gln-ASP-VAL-HIS), 참조 Nutriskin 하에 Silab 사로부터 구입가능한 것과 같은 쌀 트리펩티드 및 디펩티드, 참조 Vitoptine LS 9529 및 Vit-A-Like LS9737에 의해 Cognis 사에 의해 판매되는 것과 같은 비그나 아코니티폴리아(Vigna aconitifolia) 종자 추출물, 참조 Chronodyn 하에 Sederma로부터 구입가능한 것과 같은 유글레나 그라실리스(Euglena gracilis)의 추출물, 참조 Deepline PVB (Lipacide PVB) 하에 Seppic에 의해 판매되는, 팔미트산에 결합된 밀 아미노산, Cosmetochem 사에 의해 판매되는 Herbasol Myrtille Extract와 같은 블루베리 추출물, 생강 추출물, Silab의 Fermiskin과 같은 표고버섯(렌티누스 에도데스(Lentinus edodes))의 수성 추출물 및 Lipotec에 의해 판매되는 안타티신(antarcticine), 푸니카 그라나툼(Punica granatum)의 추출물, Lipotec 사의 아르기렐린(argireline) SC36 (헥사펩티드 (아세틸-Glu-Glu-Meth-Glu-Arg-Arg-아미드)), 참조 Reductine 하에 Silab에 의해 판매되는 제품과 같은 귀리 추출물, Oryza 사로부터의 자도(purple rice) 추출물과 같은 자도 추출물, Naolys사로부터의 Fiber Booster Sequoia vitis 꽃과 같은 넝쿨화 세포 분산액(vine flower cell dispersion), Oryza Oil and Fat로부터의 Oryzaferulix와 같은 페룰산(ferullic acid), Cognis사로부터의 Filadyn LS 9397과 같은 보안드제이아 서브테라네아(Voandzeia subterranea)(밤바라) 추출물, Pentapharm 사에 의해 판매된 제품 Elhibin과 같은 대두 추출물, Ichimaru Pharco사로부터의 Clairju와 같은 가수분해된 프루누스 도메스티카(Prunus domestica) 열매 추출물이 언급될 수 있다.

특히, 피부에 대해 활성이고 본 발명을 위해 적합한 다른 작용제 중에, 글리콜과 같은 수화제 및/또는 박리용해제(desquamating active agent), 우레아 또는 그의 유도체, HEPES, 킬레이팅제, 디터전트(detergent), 및 자스몬산 유도체, 및 이들의 혼합물이 언급될 수 있다.

본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자는 케라틴 물질에 대한 원하는 효과에 따라 상기 활성제(들)를 선택할 것이다.

- 생약 형태(Galenical form)

경구 투여를 위해, 본 발명의 조성물은 임의의 적합한 제형, 특히, 경구 용액, 시럽, 정제, 당의정(sugar-coated tablet), 겔 캡슐, 캡슐 또는 영양 식품(nutritional food) 또는 영양 보충제(nutritional supplement)의 제형일 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은 또한 경구 투여를 위해 적합한 하나 이상의 부형제를 포함할 수 있다.

본 발명에 따라 고려되는 조합물은 이를 포함하는 조성물과 동일한 방식으로, 유리하게 국소로 투여될 수 있다.

국소 투여용 조성물은 특히, 수용액, 수성 알코올 용액 또는 유성 용액(oily solution), 용액형의 분산액, 또는 로션 또는 세럼형의 분산액, 수성상 중 유성상(O/W) 또는 유성상 중 수성상(W/O)의 분산에 의해 수득된, 유제(milk) 형태의 액체 또는 반-액체 경도(semi-liquid consistency)의 에멀젼, 또는 크림 형태의 부드러운 경도, 반-고체 또는 고체 경도의 현탁액 또는 에멀젼, 수성겔 또는 무수겔(anhydrous gel), 또는 마이크로에멀젼(microemulsion), 미세캡슐, 미세입자(microcapsule), 또는 이온 및/또는 비이온형의 소포형 분산액(vesicular dispersion)의 제형일 수 있다.

본 발명에 따른 조성물이 하나 이상의 수성상(예를 들면, 수용액, 에멀젼, 등)을 포함하는 경우, 본 발명에 따른 조성물의 pH는 바람직하게는 4 내지 9, 바람직하게는 4 내지 7, 유리하게는 5 내지 6, 및 특히, pH 5.5이다.

본 발명에 따른 조성물은 거의 유체(fluid)일 수 있고, 백색 또는 유색 크림, 연고, 유제(milk), 로션, 세럼, 페이스트 또는 폼의 외형을 가질 수 있다. 본 발명에 따른 조성물은 선택적으로 에어로졸의 형태로 피부에 적용될 수 있다. 본 발명에 따른 조성물은 고체 형태일 수 있고, 예를 들면, 스틱의 형태일 수 있다. 본 발명의 조성물은 관리 제품(care product)로 이용될 수 있으나, 또한, 화장품(toiletry) 및/또는 메이크업(makeup) 제품으로도 이용될 수 있다.

이 조성물은 얼굴, 손, 발, 또는 신체를 위한 마스크, 클렌징, 보호, 치료, 또는 관리 크림(예를 들면, 데이 크림, 나이크 크림, 메이크업-제거 크림, 파운데이션 크림(foundation cream), 일광차단(antisun) 크림), 메이크업-제거용 유제(milk), 또는 클렌징 로션과 같은 스킨 케어 로션, 겔, 또는 폼을 구성할 수 있다.

일반적으로, 본 발명의 조성물은 피부(신체의 피부 상의 부위) 또는 점막(구강, 관골(jugal), 잇몸, 생식기, 결막 등)에 적용될 수 있다.

공지된 방식으로, 미용 조성물은 친수성 겔화제 또는 친지성 겔화제, 친수성 첨가제 또는 친지성 첨가제, 보존제, 항산화제, 용매, 향료, 충진제, UV(일광) 차단제, 탈취제(odour absorber) 및 염료와 같은 미용 분야에서 일반적인 아쥬반트(adjuvant)를 또한 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물에서 이용되는 성분들의 함량 및 속성은 본 발명에 따라 고려되는 조합물의 효과에 실질적으로 영향을 미치지 않도록 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자에 의해 조정된다.

본 발명에 따른 조합물은 피부, 및 특히 표피의 보습(moistruization), 항상성, 피부 장벽 기능을 개선하고, 노화의 표피 징후, 예를 들면, 주름, 미세 선(fine line), 표피의 견고성(firmness), 탄력, 밀도 및/또는 장력(tonicity) 상실을 예방 및/또는 치료하는데 특히 유용한 것으로 입증될 수 있다.

본 발명에 의해 보다 구체적으로 표적화되는 피부 상태는 따라서 건성 피부 및 악건성 피부(very dry skin)일 수 있고, 피부가 노화된 외양을 갖는 개인, 특히, 45세 이상 및/또는 폐경기 후 여성 또는 훨씬 더 장년층의 여성에서의 상태일 수 있다.

전술된 바와 같이, 본 발명은 또한 피부 노화를 겪는 개체에게 본 발명에 따른 하나 이상의 조합물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법, 특히, 미용적 방법에 관한 것이다.

그와 같은 치료 방법은 특히, 본 발명에 따른 조합물의 국소 투여 또는 경구 투여에 의해, 예를 들면, 매일 수행될 수 있다.

본 발명에 따른 방법은 단일 투여를 포함할 수 있다. 또 다른 구체예에 따르면, 투여는 예를 들면, 1일 이상 동안 1일 2회 내지 3회 반복되고, 일반적으로 4주 이상의 지속적 기간 동안, 또는 적합한 경우 4주 내지 15주 지속적 기간 동안 반복되고, 적합한 경우, 하나 이상의 중단 기간을 포함한다.

달리 표시되지 않으면, 발명의 설명 및 하기의 실시예에서, 백분율(percentage)은 중량 %이고, "... 내지 ...(between... and...)"의 형태로 기재된 값들의 범위는 특정된 하한 및 상한을 포함한다.

하기의 실시예 및 도면은 본 발명의 분야의 비한정적인 예로서 주어진다.

실시예 1

본 실시예에서, 사용된 용해물은 K. RICHTER GmbH 사에 의해 명칭 Repair Complex CLR^® 하에 판매되고, 비피도박테리움 롱굼의 불활성화된 용해물로부터 제조된 제품이고, 피토스핑고신 살리실레이트 유도체는 명칭 Phytosphingosine SLC 하에 Evonick Goldschmidt 사에 의해 판매되는 제품이다.

하기의 4개의 조성물의 효과를 Episkin^® 재건 표피의 분화에 대한 효과에 대해 테스트하였다.

- A: 제제 지지체(formulation support) (에틸 알코올 (3%) 및 물 (97%)),

- B: 용해물 (에틸 알코올 (3%), 물 (87%), 용해물 (10%)),

- C: 피토스핑고신 살리실레이트 (에틸 알코올 (3%), 물 (96.998%), 피토스핑고신 살리실레이트 (0.002%)), 및

- D: 본 발명에 따른 조합 = (0.002% 피토스핑고신 살리실레이트 + 10% 용해물 + 에틸 알코올 (3%) + 물 (86.998%)).

J6 Episkin^®재건 표피를 2 ml의 유지 배지(maintenance media)를 함유한 12-웰 플레이트에 넣고 37℃ 및 5% CO₂에서 24시간 동안 배양하였다. 인큐베이션 후에, 표피를 테스트 조성물(50 ㎕/재구성 표피)에 의해 국소 처리하고, 6시간 동안 인큐베이션하였다.

이 효과들을 처리 6시간 후 실시간 PCR 방법(정량적 PCR, qPCR)을 이용하여 시토케라틴 6B (K6B), 시토케라틴 10 (K10) 및 인볼루크린(INV) 유전자의 발현량을 분석하는 것에 의해 규명하였다.

1- 이용된 프로토콜

a) 차등적 발현( differential expression )의 분석

선택된 마커의 발현을 처리 후 6시간, 24시간 및 48시간에 각 처리의 Episkin^®재건 표피로부터 추출된 메신저 RNA에 대한 RT-qPCR에 의해 평가하였다(RNA 추출 전에 중복 실험결과물(duplicate)을 모았다).

b) 역전사

- tri-reagent를 이용하여 각 시료로부터 총 RNA를 추출하였다.

- DNA-불포함(DNA-free) 시스템(Ambion ref. 1906)에 의한 처리에 의해 잠재적으로 오염시킬 수 있는 DNA 미량(potentially contaminating DNA trace)을 제거하였다. Nanovue (Amersham)를 이용하여 RNA를 정량하였다.

- 올리고(dT) 프라이머 및 Superscript II 효소(Gibco)의 존재 하에 mRNA 역전사 반응을 수행하였다.

- 결과물인 cDNA를 Nanovue (Amersham)를 이용하여 정량하고 cDNA를 10　ng/㎕로 조정했다.

c) 정량적 PCR

"Light Cycler" 시스템 (Roche Molecular Systems Inc.)에 의한 정량적 PCR에 의해 중합효소 연쇄반응(PCR)을 수행하였다. 이 분석 시스템은 다양한 프라이머를 위한 분석 조건의 사전 설정 대신, 신속하고 효과적인 PCR 반응을 수행할 수 있게 한다. 상기 시스템은 두 개의 주요한 성분으로 구성된다:

- 최적화된 써모사이클러(optimized thermocycler ): 매우 신속한 열 전달을 가능하게 한다;

- 형광 강도 측정기(fluorimeter ): DNA에 내포된 형광 강도의 연속적인 측정을 가능하게 한다(521 nm에서의 검출). .

연구된 유전자에 대해 특이적인 프로브의 쌍들을 이용하여, 하기의 특정한 단편의 증폭을 가능하게 하였다:

유전자 명칭 (코딩된 단백질)	약어	Gene Bank	cDNA bp
간 글리세르알데히드 3-포스페이트 데히드로게나아제	G3PDH	NM 002046 _	269
시토케라틴(Cytokeratin) 6B	K6B	NM 005555 _	277
시토케라틴 10	K10	NM 000421 _	236
인볼루크린(Involucrin)	INV	NM 005547 _	251

각 시료에 대한 반응 혼합물(최종 10　㎕)이 하기와 같다:

- 2.5 ㎍의 cDNA.

- 사용된 다양한 마커에 대한 프라이머.

- taq DNA 중합효소, SR Green I 표지(신장 단계 동안 이중-가닥 DNA 내에 인터칼레이션하는 형광단) 및 MgCl₂를 포함하는 반응 혼합물(Roche).

d) 정량적 PCR 데이터의 가공

PCR 사이클 동안 증폭된 DNA로의 형광의 내포를 연속적으로 측정하였다. 이 시스템은 PCR 사이클의 함수로서 형광 측정값의 곡선을 수득하고, 따라서, 각 마커에 대한 상대적 발현량 값을 평가할 수 있게 한다.

사이클의 횟수는 형광 곡선의 "출구(exit)" 점에 기반하여 결정하였다. 분석된 단일 마커에 대해, 시료가 나중에 나올 수록(사이클의 수가 많을수록), mRNA의 최초 카피수는 더 낮다.

상대적 발현량 값이 하기 식에 따라 임의 단위(arbitrary unit)로 표현된다:

(1/2^사이클의 ^횟수) x 10⁶

e) 유전자 발현에 대해 관찰된 효과의 표준화

표준화된 해석을 위해, 하기의 분류표가 적용되었다:

대조군 대비 상대적 발현량 %	관찰된 효과의 분류
> 150% 및 < 200%	중간(moderate) 촉진, 확인대상
> 200%	명확한(clear) 촉진
> 300%	강한(strong) 촉진
< 65% 및 > 50%	중간 억제
< 50% 및 > 30%	명확한 억제
< 30%	강한 억제

2- 결과

마커에 대한 3개의 연구의 발현 동태(expression kinetics)가 하기의 표 1에 표시되고 도 1에 예시된다.

결과는 G3PDH 메신저(기준 유전자)의 양에 관한 것이고, 미처리(untreated) 대조군 대비 %로 표현된다.

처리		K6B	K10	INV
6 시간	대조군	100	100	100
	조성물 A	117	121	176
	조성물 B ( 용해물 )	176	102	153
	조성물 C ( 피토스핑고신 )	158	122	146
	조성물 D ( 조합물 )	207	147	265

이 테스트의 실험 조건 하에서, 본 발명에 따른 조합물만이 6시간 후에 시토케라틴 6B, 시토케라틴 10 및 인볼루크린을 코딩하는 유전자의 발현을 증가시키는 것으로 나타났다.

실시예 2

화합물은 케이스에 따라, 화합물 명칭, 또는 CTFA (International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook) 명칭으로 인용된다.

수성 겔 제형의 얼굴 관리 조성물

중량%

피토스핑고신-SLC^® 0.002%

Repair Complex CLR^® 10%

소디움 히알루로네이트 0.4%

산탄 검 0.1%

1,2-옥탄디올 0.3%

에틸렌디아민테트라아세트산, 디소디움 염 0.099%

글리세롤 5%

시트르산 0.015%

에틸 알코올 4.6%

4-(2-히드록시에틸)피페라진-1-에탄술폰산 1%

지방 물질(Fatty substance) 0.016%

유화제(Emulsifier) 0.099%

충진제 0.2%

보존제 0.55%

용매 1%

향료(Fragrance) 0.005%

물 100%로 만드는 양

Claims

생리학적으로 허용가능한 매질 중에 하나 이상의 피토스핑고신 살리실레이트 유도체 및 비피도박테리움(Bifidobacterium) 종의 하나 이상의 미생물의 용해물을 포함하는, 케라틴 물질을 관리하고 및/또는 보충하기 위해 유용한 미용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 비피도박테리움 종의 미생물은 비피도박테리움 롱굼(Bifidobacterium longum ), 비피도박테리움 비피둠(Bifidobacterium bifidum ), 비피도박테리움 브레베(Bifidobacterium breve ), 비피도박테리움 애니말리스(Bifidobacterium animalis ), 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis ), 비피도박테리움 인판티스(Bifidobacterium infantis ), 비피도박테리움 아돌레센티스(Bifidobacterium adolescentis ) 및 비피도박테리움 슈도카테눌라툼(Bifidobacterium pseudocatenulatum ), 및 이들의 혼합물로부터 선택되는 것인 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 비피도박테리움 종의 미생물은 비피도박테리움 롱굼인 것인 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 용해물은 상기 조성물의 총중량 대비, 건량 기준, 0.001 중량% 이상, 특히 0.01 중량% 내지 20 중량%의 비율, 보다 구체적으로 0.1 중량% 내지 15 중량%의 활성 물질의 비율로 사용되는 것인 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 피토스핑고신 살리실레이트 유도체는 하기의 식을 가지며:

상기에서:
- R은
수소 원자,
적합한 경우, 히드록시 라디칼로 치환되는, 포화 또는 불포화의 직쇄형 또는 분지형의 C₁ 내지 C₄₉ 지방족 라디칼, 또는
a는 7 내지 50의 정수이고, b는 10 내지 100의 정수이며, m은 0 또는 1이고, Y는 H, 또는 Z는 -OH 또는 에폭시 산소이고, x는 12 내지 20의 정수이며, y는 20 내지 40의 정수이고, z는 0 또는 1 내지 4의 정수인 것인 식 -CO-(C_xH_yZ_z)CH₃을 갖는 C₁₄-C₂₂ 지방산을 나타내는 것인 Y-O(C_aH_b)_m-기이며;
- R¹은 적합한 경우, 히드록시 라디칼에 의해 치환된, 포화 또는 불포화의 직쇄형 또는 분지형 C₈ 내지 C₂₈ 지방족 라디칼이고, 및
- R²는 H, 포스페이트 라디칼, 술페이트 라디칼, 또는 당인 것인 조성물.
제5항에 있어서, 상기 R 및 R²는 각각 수소 원자이고, 상기 R¹은 포화, 직쇄형 알킬 라디칼인 것인 조성물.
제5항에 있어서, 상기 피토스핑고신 살리실레이트 유도체는

또는 그의 염인 것인 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 피토스핑고신 살리실레이트 유도체는 상기 조성물의 총 중량 대비, 건량 기준 0.0001 중량% 이상, 특히, 0.001 중량% 내지 20 중량%, 및 보다 구체적으로 0.05 중량% 내지 2 중량%의 활성 물질의 비율로 사용되는 것인 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 조성물은 국소 투여를 위한 것인 조성물.
제9항에 있어서, 상기 조성물은 수용액, 수성 알코올 용액 또는 유성 용액(oily solution), 용액형의 분산액, 또는 로션 또는 세럼형의 분산액, 수성상 중 유성상(O/W) 또는 유성상 중 수성상(W/O)의 분산에 의해 수득된, 유제(milk) 형태의 액체 또는 반-액체 경도(semi-liquid consistency)의 에멀젼, 또는 크림 형태의 부드러운 경도, 반-고체 또는 고체 경도의 현탁액 또는 에멀젼, 수성겔 또는 무수겔(anhydrous gel), 또는 마이크로에멀젼(microemulsion), 미세캡슐, 미세입자(microcapsule), 또는 이온 및/또는 비이온형의 소포형 분산액(vesicular dispersion)의 제형인 것을 특징으로 하는 조성물.
피부 녹화를 겪는 개체에서 KRTB6, KRT10 및 인볼루크린(involucrin) 유전자로부터 선택된 하나 이상의 유전자의 발현을 자극하기 위한, 하나 이상의 비피도박테리움 종 미생물의 용해물 및 하나 이상의 피토스핑고신 살리실레이트 유도체를 포함하는 미용 조합물.
상피, 특히, 표피, 특히, 노화된 표피의 회복 및 재생 능력을 강화하기 위한, 하나 이상의 비피도박테리움 종 미생물의 용해물 및 하나 이상의 피토스핑고신 살리실레이트 유도체를 포함하는 미용 조합물.
상피, 특히, 표피, 특히, 노화된 표피의 회복 및 재생 능력을 강화하기 위한, 하나 이상의 피토스핑고신 살리실레이트 유도체 및 하나 이상의 비피도박테리움 종 미생물의 용해물을 포함하는 약제학적 조성물.
제11항 또는 제12항에 있어서, 상기 용해물은 제2항 내지 제4항에 정의된 것인 조합물.
제11항 또는 제12항에 있어서, 상기 피토스핑고신 살리실레이트 유도체는 제5항 내지 제8항에 정의된 것인 조합물.
하나 이상의 비피도박테리움 종 미생물의 용해물 및 하나 이상의 피토스핑고신 살리실레이트 유도체를 포함하는 하나 이상의 조합을 피부 노화를 겪는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 미용적 처리 방법.