KR20100077033A

KR20100077033A - 에리스로포이에틴의 용도

Info

Publication number: KR20100077033A
Application number: KR1020107011097A
Authority: KR
Inventors: 페르디난트 헤르만 발만; 헤르만 할러
Original assignee: 이피오플러스 게엠베하 운트 코. 카게
Priority date: 2002-07-26
Filing date: 2003-07-25
Publication date: 2010-07-06
Also published as: US20100247451A1; DK1779862T3; AU2003255290A1; ATE468132T1; HK1081841A1; DK1526867T3; JP2010280670A; PT1526867E; CN101099860B; NO20051002L; AU2009200748A1; CA2710100A1; CY1108052T1; HRP20100187A2; PL395151A1; IS2671B; JP4727988B2; WO2004012759A2; IL166401A0; DE10234192A1

Abstract

본 발명은 내피 전구 세포의 생리적 기동, 증식 및 분화를 자극하고, 혈관형성을 자극하고, 내피 전구 세포의 기능장애와 관련된 질병을 치료하고, 그리고 이러한 질병의 치료용 약제학적 조성물을 생산하기 위한 에리스로포이에틴의 용도, 그리고 에리스로포이에틴과 내피 전구 세포의 자극에 적절한 다른 약제를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.

Description

에리스로포이에틴의 용도{USE OF ERYTHROPOIETIN}

본 발명은 내피 전구 세포의 생리적 기동, 증식 및 분화를 자극하고, 혈관형성(vasculogenesis)을 자극하며, 내피 전구 세포의 기능장애에 관련되는 질병을 치료하고, 그리고 이러한 질병의 치료용 약제학적 조성물을 생산하기 위한 에리스로포이에틴의 용도, 그리고 에리스로포이에틴과 내피 전구 세포를 자극하기 위한 다른 적절한 활성 성분을 포함하는 약제학적 조성물에 관련된다.

혈관 내피는 혈관의 안쪽을 구성하는 세포의 층이다. 내피는 다른 혈관 층으로부터 혈액을 분리하고, 내피는 단지 비활성 장벽을 의미하는 것이 아니라 혈관 긴장(vessel tone)의 조절에 활발하게 관여한다. 따라서 내피-의존적 혈관확장(endothelium-dependent vasodilatation)을 참고한다. 그 위치 때문에 내피는 영구적으로 혈역학적(hemodynamic) 긴장 및 대사적 긴장에 노출된다. 따라서, 발병 조건, 예를 들어 상승된 혈압, 상승된 LDL 레벨, 손상된 신장 기능 또는 상승된 혈당은 동맥경화성 플라크(atherosclerotic plaque)의 형성과 같은 형태학적으로 검출가능한 장애로 이어질 수 있는 기능적 내피 결함과 자주 연관된다. 변경되거나 감소된 내피 기능, 또는 내피 기능장애의 조기 신호는 내피-의존적 혈관확장의 저하이다.

관상동맥 심장질환(CHD: coronary heart disease)에 있어서, 그러나 CHD 없이 위험 요소, 예를 들어 고혈압, 고지단백혈증(hyperlipoproteinemia) 또는 당뇨병이 존재할 때도, 내피 기능의 결함은 NO(=EDRF)의 생산 감소와 엔도텔린(endothelin) 생산 증가에 의해 명백해진다. 엔도텔린의 높은 혈장 레벨은 세포의 비정상적 유착(adhesion), 염증, 혈관 증식 및 심각한 혈관수축을 초래한다. 내피 기능의 교란은 부가적으로 ICAM-1 및 VCAM-1과 같은 유착 분자의 생산 증가를 특징으로 하며, 혈소판과 단핵세포가 내피에 많이 유착되게 한다. 이것의 결과는 혈관 긴장의 증가이다. 이와 같이, 불균형은 다양한 계통에서 유착, 응집, 응고, 동맥경화증 및 동맥혈전증(atherothrombosis)으로 발전한다. 심지어 정신적 긴장은 4 시간 동안까지 지속될 수 있는 측정 가능한 내피 기능장애를 유발한다.

내피 세포는 새로운 혈관의 형성에 관여한다. 혈관의 형성은 다수의 작용, 예를 들어 배발생(embryogenesis), 여성 생식 주기, 상처 치유, 종양 성장 및 허혈성 영역(ischemic area)의 신혈관형성(neovascularization)에서 중요하다. 원래, 혈관의 생후 형성, 즉 출생 이후 혈관의 형성은 주로 혈관형성 유도과정에 귀착된다. 혈관신생(angiogenesis)은 이미 존재하는 혈관계로부터 발아하는(sprouting) 모세혈관을 통한 새로운 혈관의 형성이다. 혈관신생 중에, 먼저 혈관을 감싸는 기저막이 단백질 가수분해 효소에 의해 파괴되고, 혈관주위 공간에서 세포외 기질이 단편화된다. 혈관신생 자극이 방출되어 이에 따라 이미 존재하는 분화된 내피 세포가 화학유도(chemotactic) 자극의 방향으로 이동하도록 하는 동안에, 내피 세포는 동시에 증식 및 변형된다. 그런 다음, 내피 세포의 병치(juxtapositioning)는 모세혈관-형태의 루멘(lumen)과 함께 새로운 혈관 고리(loop)를 형성시킨다. 새로운 기저막의 합성의 개시가 뒤따른다.

그러나, 최근 조사는 성체에서 새로운 혈관의 형성이 혈관신생 뿐만 아니라 혈관형성 메카니즘으로부터도 유래한다는 것을 보여주고 있다. 혈관형성(vasculogenesis)은 원위치에서 분화하고 있는 내피 전구 세포로부터 새로운 혈관의 형성을 의미한다. 혈관형성이 배발생에 한정된다는 믿음이 건강한 인간 및 동물의 말초 혈액에서 내피 전구 세포(EPC: endothelial progenitor cell)의 검출로 인하여 반박되었다. 골수로부터 유래된 내피 전구 세포가 신혈관형성에 활발히 관여함을 동물 모델을 사용하여 입증하는 것이 가능하였다. 또한, 내피-특이적 항원을 발현하는 백혈구의 특이적 CD34-양성 아집단(subgroup)이 허혈성 영역에서 설립된다고 밝혀졌다. 게다가, 성체에서 혈관의 형성에 중요한 기여를 하는 내피 전구 세포(EPC)가 생체외에서 CD133⁺ 및 CD34⁺ 세포로부터 얻어질 수 있다(Asahara et al., Science , 275 (1997), 964-967; Crosby et al ., Circ . Res ., 87 (2000), 728-730; Gehling et al ., Blood , 95 (2000), 3106-3112). 더구나, 분리된 CD34⁺ 세포 또는 배양된 내피 전구 세포의 주사가 당뇨병 쥐에서 혈류의 회복을 촉진하고(Scgatteman et al ., J. Clin . Invest ., 106 (2000), 571-578) 생체내에서 신혈관형성을 개선한다고 밝혀졌다(Asahara et al ., Circ . Res ., 85 (1999), 221-228; Crosby et al ., Circ . Res ., 87 (2000), 728-730; Murohara et al ., J. Clin . Invest., 105 (2000), 1527-1536). 더욱이, CD34⁺ 세포에 의해 유도되는 신혈관형성이 심장 기능을 개선함을 밝히는 것이 가능하였다(Kocher et al ., Nat . Med ., 7 (2001), 430-436).

그러나, 내피 전구 세포의 기동 및 분화의 기초가 되는 메카니즘은 아직 완전히 밝혀지지 않고 있다. 분자생물 및 세포생물학적 조사는 다양한 사이토카인(cytokine) 및 혈관신생 성장 인자가 골수에서 내피 전구 세포의 기동에 대한 자극적인 효과를 가짐을 나타낸다. 따라서, VEGF 및 GM-CSF와 같은 혈관신생전구(proangiogenic) 인자가 내피 전구 세포의 수를 증가시키는 것이 가능하다고 알려졌다(Asahara et al ., EMBO , J., 18 (1999), 3964-3972; Takahashi et al ., Nat . Med., 5 (1999), 434-438). VEGF(혈관 내피 성장 인자: vascular endothelial growth factor)는 다양한 이성체로 존재하고 예를 들어 성장하는 내피 세포의 표면에 존재하는 2개의 티로신 키나제 수용체 VEGF-R1(flt-1) VEGF-R2(flk-1)에 결합하는 단백질이다(Wernert et al ., Angew . Chemie , 21 (1999), 3432-3435). VEGF 수용체의 활성은 Ras-Raf-MAP 키나제 경로를 거쳐 내피 세포 또는 내피 전구 세포의 표면에 단백질 가수분해 효소(proteinase)와 특이적 인테그린(integrin)의 발현 그리고 마침내 혈관신생 자극의 방향으로 이들 세포의 증식과 이동의 개시를 이끌어낸다. GMCSF(과립구-대식세포 콜로니-자극 인자: granulocyte-macrophage colony-stimulating factor)는 특히 호중구, 대식세포 및 호산구를 포함하는 백혈구를 자극하는 것으로 기존에 알려진 사이토카인이다. PIGF(태반 성장 인자: placental growth factor)는 내피 전구 세포의 기동을 자극하나 그 증식은 자극하지 않는 것으로 알려졌다. Llevadot 등(J. Clin . Invest ., 108 (2001), 399-405)은 지질-저하 약제로서 사용되고 관상동맥 질환의 질병률과 사망률을 감소시키는 HMG-CoA 환원효소 억제제, 특히 스타틴(statin)이 내피 전구 세포를 기동시킬 수 있다고 밝혔다. Dimmeler 등(J. Clin . Invest ., 108 (2001), 391-397)은 아토르바스타틴과 심바스타틴과 같은 스타틴이 생체외 및 생체내에서 말초 혈액으로부터 분리된 단핵 세포 및 CD34⁺ 줄기세포에서 내피 전구 세포의 분화를 상당히 개선시킴을 더욱 밝힐 수 있었다. 따라서, 스타틴을 이용한 쥐의 치료는 분화된 내피 전구 세포의 수를 증가시켰고, 스타틴은 VEGF처럼 강한 효과를 나타냈다.

내피 전구 세포의 기동 및/또는 분화의 자극은 생후 신혈관혈성, 특히 혈관형성을 증가시키고, 내피 전구 세포 및/또는 내피 세포의 기능장애와 관련된 질병을 치료하기 위한 중요하고 신규한 치료 전략을 대표한다.

본 발명은 내피 전구 세포의 개선된 자극 그리고 특히 내피 전구 세포의 기능장애와 관련된 병의 치료를 위한 수단과 방법을 제공하는 기술적 과제를 기초로 하고 있다.

본 발명은 인간 및 동물체에서 내피 전구 세포의 생리적 기동, 내피 전구 세포의 증식, 내피 전구 세포의 내피 세포로의 분화 및/또는 내피 전구 세포의 혈관형성 또는 혈관신생 자극 방향으로의 이동을 자극하기 위한 에리스로포이에틴 및/또는 이의 유도체의 용도를 개시함으로써 이 기술적 과제를 해결한다. 또한, 본 발명은 내피 전구 세포 및/또는 내피 세포의 기능장애와 관련된 질병 또는 병적 상태의 치료를 위한 에리스로포이에틴 및/또는 이의 유도체의 용도를 개시함으로써 이 기술적 과제를 해결한다.

놀랍게도, 본 발명에 따라 에리스로포이에틴을 이용한 치료가 특히 상대적으로 낮은 EPO 복용량에서, 순환하는 내피 전구 세포 수의 증가와 그 분화의 유도와 함께 내피 전구 세포의 생리적 기동을 유도한다는 것이 밝혀졌다. 게다가, 특정 생리적 조건에서 일어나는 내피 전구 세포의 기능적 결함이 보상된다. 본 발명에 따라 말기 단계의 만성 신장 질환을 갖는 환자에서 순환하는 줄기세포의 수는 건강한 대상에서만큼 높으나, 이들 환자들은 내피 전구 세포를 거쳐 내피 세포로 분화시키는 능력을 상실하였음을 밝히는 것이 가능하였다. 따라서, 유착할 수 있고 내피 세포 표현형을 보이는 세포의 수는 건강한 대상과 비교하여 만성 신장 질환을 갖는 환자에게서 뚜렷하게 감소된다. 본 발명에 따라 순환하는 줄기세포의 수가 에리스로포이에틴을 이용한 이들 환자의 치료 이후 50 % 이상까지 현저하게 증가함이 밝혀졌다. 더구나, 특히 내피 표현형을 발전시키는 세포의 수에서 격렬한 증가가 있다. 기능성 세포 배양 분석에 의해 증명된 바와 같이, 만성 신장 질환을 갖는 환자에서 에리스로포이에틴 치료로 인하여 내피 전구 세포의 손상된 유착 능력에서 3 배 증가가 있다. 분화하는 내피 전구 세포와 내피 세포의 유착 능력은 새로운 조직 및/또는 혈관의 생성을 위하여 기본적인 필수조건 중 하나이다. 에리스로포이에틴은 이러한 면에서 해당 혈관형성 또는 혈관신생 자극이 방출되는 조직 또는 기관에서 신혈관형성, 특히 혈관형성을 유도할 수 있다.

본 발명에 따라 에리스로포이에틴(이하 EPO 라고 함)은 인간 및 동물체, 특히 성체에서 내피 전구 세포의 생리적 기동, 내피 전구 세포의 증식, 내피 전구 세포의 내피 세포로의 분화 및/또는 내피 전구 세포의 혈관형성 또는 혈관신생 자극 방향으로의 이동을 자극하는 데 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명에 따라 에리스로포이에틴은 병적 혈관 장애가 존재하는 조직 또는 기관에서 혈관형성에 의한 새로운 혈관의 형성을 자극하는 데 유리하게 이용될 수 있다. 게다가, 내피 조직의 형성은 에리스로포이에틴에 의한 내피 전구 세포의 자극 때문에 또한 유도될 수 있다. 따라서, 본 발명에 따라 에리스로포이에틴은 내피 전구 세포 및/또는 내피 세포의 기능장애와 관련되는 인간 또는 동물체의 질병을 치료하기 위하여 또한 이용될 수 있다.

본 발명과 관련하여, "에리스로포이에틴(erythropoietin)" 또는 "EPO"는 적아세포(erythroblast)를 거쳐 적혈구(erythrocyte)로 줄기세포의 성장 또는 분화 및 성숙을 조절하는 물질을 의미한다. 에리스로포이에틴은 166 아미노산, 3 개의 당화(glycosylation) 사이트, 약 34,000 Da의 분자량을 갖는 당단백질이다. 적혈구 전구 세포의 EPO-유도 분화 중에 글로빈 합성의 유도 및 환원 헤마틴(heme) 복합체의 합성과 페리틴(ferritin) 수용체의 수에서 증가가 있다. 이에 따라 세포는 더 많은 철분을 섭취하고 기능성 헤모글로빈을 합성할 수 있다. 헤모글로빈은 성숙한 적혈구에서 산소와 결합한다. 따라서, 적혈구와 이에 존재하는 헤모글로빈은 신체의 산소 공급에서 핵심 역할을 한다. 이러한 과정은 적혈구 전구 세포의 세포 표면에서 EPO와 적절한 수용체의 상호작용을 통하여 개시된다(Graber and Krantz, Ann . Rev. Med . 29 (1978), 51-56).

에리스로포이에틴은 주로 신장에서 생산되나, 또한 간 및 뇌에서도 적은 비율로 생산된다. 적은 양의 에리스로포이에틴이 혈청에서 또한 발견되며, 생리적 조건 하에서, 적어도 부분적으로는 소변으로 배설된다. 신부전(renal failure) 환자는 단지 불충분한 에리스로포이에틴(이하 EPO 라고 부름) 생산만이 가능하고 따라서 빈혈로 고통받는다. 에리스로포이에틴 투여에 의한 에리스로포이에틴 결핍의 보상은 알려져 있다. 에리스로포이에틴의 다른 임상 적용은 악성 질환 또는 바이러스 감염의 화학 치료 또는 방사선 치료를 병행하여 의원성(iatrogenic) 빈혈에 대한 에리스로포이에틴의 투여에 있다(EP 0 456 153 B1). US 4,732,889는 류머티즘성 관절염과 관련된 빈혈의 치료을 위한 에리스로포이에틴-함유 조성물의 용도를 개시하고 있다. WO 88/03808은 EPO-함유 조성물에 의한 혈색소 침착증(hemochromatosis)의 치료를 개시하고 있다.

여기에 사용되는 "에리스로포이에틴(erythropoietin)" 이라는 용어는 모든 유래의 EPO, 특히 인간 또는 동물 EPO를 포함한다. 여기에 사용되는 용어는 EPO의 자연적으로 존재하는, 즉 야생형 형태 뿐만 아니라, 야생형 에리스로포이에틴의 생물학적 효과를 나타내는 한, 이의 유도체, 동족체, 변형체, 변이 단백질(mutein), 변종체 또는 다른 것들을 포함한다.

본 발명과 관련하여, "유도체(derivatives)"는 기본적인 에리스로포이에틴 구조를 보유한 채, 하나 또는 그 이상의 원자 또는 분자단 또는 라디칼의 치환, 특히 에틸렌 글리콜과 같은 당 사슬의 치환에 의해 얻어지고, 그리고/또는 그 아미노산 서열이 자연적으로 존재하는 인간 또는 동물 에리스로포이에틴 단백질의 것과 적어도 한 위치에서 다르나, 본질적으로 아미노산 레벨 및 유사한 생물학적 활성에서 높은 상동성(homology)을 가지는 에리스로포이에틴의 기능적 동등물 또는 유도체를 의미한다. 예를 들어 본 발명에서 이용될 수 있는 에리스로포이에틴 유도체는 그 중에서도 특히 WO 94/25055, EP 0 148 605 B1 또는 WO 95/05465에 개시되어 있다.

본 발명과 관련하여, “상동(homology)은 특히 적어도 80 %, 바람직하게는 적어도 85 %, 그리고 특히 바람직하게는 적어도 90 %, 95 %, 97 % 및 99 % 이상의 서열 일치를 의미한다. 당업자에게 알려진 ”상동“이라는 용어는 둘 또는 그 이상의 폴리펩티드 분자 사이의 관계도를 의미하는데, 이는 서열 사이의 일치에 의하여 결정된다. 이와 관련하여 일치는 동일한 일치와 보존적 아미노산 교환 양자를 의미할 수도 있다.

“유도체(derivative)"는 본 발명에 따라 다른 단백질의 기능적 영역이 N-말단 부분 또는 C-말단 부분에 존재하는 융합 단백질을 포함하기도 한다. 본 발명의 하나의 태양에서, 이러한 다른 단백질은 예를 들어 GM-CSF, VEGF, PIGF, 스타틴 또는 내피 전구 세포에 대한 자극 효과를 갖는 다른 인자일 수 있다. 본 발명의 또다른 태양에서, 다른 단백질은 분화된 내피 세포에 대한 자극 효과를 갖는 인자, 예를 들어 안지오게닌 또는 bFGF(basic fibroblast growth factor)일 수도 있다. 성장인자 bFGF는 내피 세포에 대한 강력한 세포분열유발성 및 화학주성을 발휘하는 것으로 알려져있다.

에리스로포이에틴 유도체와 천연 에리스로포이에틴 사이의 차이는 예를 들어 에리스로포이에틴 아민산 서열을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열의 결실, 치환, 삽입, 부가, 염기 교환 및/또는 재조합과 같은 돌연변이를 통하여 일어날 수 있다. 이와 관련된 명백한 가능성은 자연적으로 일어나는 서열 변화, 예를 들어 다른 유기물 또는 자연적인 방식으로 돌연변이된 서열로부터의 서열, 또는 예를 들어 화학적 약제 및/또는 물리적 약제와 같은 본 분야에 알려진 통상의 수단의 도움으로 에리스로포이에틴-코딩 핵산 서열로 계획적으로 도입된 돌연변이이다. 따라서, 본 발명과 관련하여, “유도체(derivative)"라는 용어는 돌연변이 에리스로포이에틴 분자, 즉 에리스로포이에틴 돌연변이 단백질을 포함한다.

본 발명에 따르면, 에리스로포이에틴의 펩티드 또는 단백질 상동체를 채용하는 것도 가능하다. 본 발명과 관련하여 “동족체(analogs)"는 에리스로포이에틴 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 갖지 않지만 그 3차원 구조가 에리스로포이에틴과 매우 유사하여 상응하는 생물학적 활성을 갖는 화합물을 포함한다. 에리스로포이에틴 동족체는, 예를 들어 적절한 입체적 배치에서 에리스로포이에틴의 수용체와의 결합에 책임이 있는 아미노산 잔기를 포함하고 이에 따라 에리스로포이에틴 결합 부위의 필수적인 표면 특성을 자극할 수 있는 화합물일 수 있다. 이러한 종류의 화합물은, 예를 들어 Wrighton et al ., Science , 273 (1996), 458에 기술되어 있다.

본 발명에 따라 채용되는 EPO는 여러 가지 방식으로, 예를 들어 인간 요로부터 또는 재생불량성 빈혈 환자의 요 또는 혈장(혈청을 포함하는)으로부터 분리하는 것에 의해 생산될 수 있다(Miyake et al ., J.B.C. 252 (1977), 5558). 인간 EPO는, 예를 들어 인간 신장암세포의 조직 배양으로부터(JA-OS 55790/1979), 인간 EPO를 생산하는 능력을 갖는 림프모세포로부터(JA-OS 40411/1982), 그리고 인간 세포주의 세포 융합에 의해 얻어진 융합세포 배양으로부터 얻어질 수도 있다. EPO는 또한 EPO의 적절한 아미노산 서열을 코딩하는 적절한 DNA 또는 RNA를 사용하여 원하는 단백질을, 예를 들어 세균, 효모, 식물세포주 또는 동물세포주 내에서 재조합 방식으로 생산하는 유전공학방식에 의해 생산될 수도 있다. 이러한 종류의 방법은 예를 들어 EP 0 148 605 B2 또는 EP 0 205 564 B2 및 EP 0 411 678 B1에 기술되어 있다.

본 발명은 특히 내피 전구 세포의 생리적 기동, 내피 전구 세포의 증식, 내피 전구 세포의 내피 세로로의 분화 및/또는 인간 또는 동물 신체 내에서, 특히 성장한 유기체 내에서 혈관형성이나 혈관신생(vasculogenic or angiogenic) 자극 방향으로 내피 전구 세포의 이동을 자극하기 위한 에리스로포이에틴(이하 EPO로 지칭되는) 및/또는 이의 유도체와 관련된다.

본 발명과 관련하여, "내피 전구 세포(endothelial progenitor cells)"(EPC)는 혈류 중에 순환하고 내피 세포로 분화하는 능력을 갖는 세포를 의미한다. 배의 발생 동안 나타나는 내피 전구 세포는 혈관아세포이다. 성체 유기체 중에 나타나는 내피 전구 세포는 말초 혈액으로부터 분리되는 단핵세포, 특히 CD34-CD14+ 단핵구 및/또는 CD34+ 줄기세포로부터 얻을 수 있는 혈관아세포-유사 세포이다.

본 발명과 관련하여, "기동(mobilization)" 또는 "생리적 기동(physiological mobilization)"은 줄기세포 또는 전구 세포의 혈류로의, 특히 말초 혈액으로의 침투와 함께, 성장 인자에 의해 골수로부터 줄기세포 및/또는 전구 세포를 활성화시키는 과정을 의미한다.

본 발명과 관련하여, “증식(proliferation)"은 성장하고 이어서 둘 또는 그 이상의 딸세포로 분할하는 세포의 능력을 의미한다. 따라서 내피 전구 세포의 EPO-중개의 자극은 특히 내피 전구 세포의 수 및 이에 따른 분할 행동과 관련된다.

본 발명과 관련하여, 내피 전구 세포의 “분화(differentiation)"는 내피 전구 세포를 통해 골수로부터 유래된 단핵구의 내피 세포로의 발생을 의미한다. ”내피 세포(endothelial cells)"는 내피, 즉 혈관의 단층 세포층 및 장액성 강(cavity)을 형성하는 세포를 의미한다. 내피 세로는 혈관활성 물질, 예를 들어 EDRF(endothelial derived relaxing factor)와 같은 혈관확장 물질이나 엔도텔린과 같은 혈관수축 물질, 혈액응고의 저해 또는 활성화 인자, 및 혈관 투과성을 조절하는 인자를 유리하는 것을 특징으로 한다. 내피 세포는 또한 내피하 결합조직, 특히 타입 Ⅳ 및 Ⅴ의 콜라겐, 라미닌과 같은 세포 유착 단백질, 피브로넥틴 및 트롬보스폰딘, 성장 인자, 예를 들어 평활근을 위한 성장 인자, 및 새로운 혈관을 형성하기 위한 인자의 성분을 합성한다.

본 발명과 관련하여, 내피 전구 세포의 “이동(migration)"은 혈류 중에 존재하는 내피 전구 세포가 혈관형성이나 혈관신생 자극 방향으로 이동하고 혈관형성이나 혈관신생 자극의 영역에 집중되는 것을 의미한다. ”혈관형성 자극(vasculogenic stimulus)"은 특히 내피 전구 세포에 작용하고 화학적 자극이 유래된 신체 부위로 이의 이동을 가져오는 인간 또는 동물 신체의 조직 또는 혈관에서의 화학적 자극을 의미한다. 혈관형성 자극은 이러한 방식으로 혈관형성 과정을 유도한다. “혈관신생 자극(angiogenic stimulus)"은 특히 분화된 내피 세포에 작용하고 화학적 자극이 유래된 신체 부위로 이의 이동을 가져오는 인간 또는 동물 신체의 조직 또는 혈관에서의 화학적 자극을 의미한다. 혈관신생 자극은 이러한 방식으로 혈관형성을 유도한다.

본 발명의 다른 태양은 분화하는 내피 전구 세포의 유착력을 증가시키기 위한 에리스로포이에틴 및/또는 이의 유도체의 용도를 제공한다. 에리스로포이에틴은 본 발명에 따라 특히 내피 전구 세포의 유착력, 즉 세포-세포 유착을 증진시키기 위해 사용된다. 분화하는 내피 전구 세포 또는 분화된 내피 세포의 유착은 새로운 혈관 또는 새로운 내피 조직의 형성을 위한 기본적인 선결조건이다. 세포 유착은 단백질 분자에 의해 중개된다.

본 발명은 또한 새로운 혈관의 형성을 자극, 특히 혈관형성 자극을 위한 에리스로포이에틴의 용도와 관련된다. 본 발명과 관련하여, “혈관형성(vasculogenesis)"은 그 자리에서 분화하는 내피 전구 세포로부터의 새로운 혈관의 형성을 의미한다. 따라서, 본 발명에 따라, 에리스로포이에틴의 사용은 손상된 혈관 부위를 회복하기 위한 새로운 혈관의 국소적 형성이나 새로운 혈관의 형성에 있어서 내피 전구 세포의 증가된 참여를 야기한다. 따라서 본 발명은 새로운 혈관의 형성 및/또는 새로운 혈관의 국소적 형성을 통한 손상된 혈관 부위의 교체를 촉진하기 위한 에리스로포이에틴 및/또는 이의 유도체의 용도를 제공한다.

본 발명의 다른 태양은 내피 조직을 형성하기 위해 내피 전구 세포를 자극하기 위한 에리스로포이에틴 및/또는 이의 유도체의 용도를 제공한다.

본 발명의 특히 바람직한 태양은 내피 전구 세포의 기능장애와 관련된 인간 또는 동물 신체의 병리적 상태나 질병, 또는 이의 후유증의 치료를 위한 에리스로포이에틴 및/또는 이의 유도체의 용도를 제공한다.

본 발명과 관련하여, “질병(disease)”, "병리적 상태(pathological states)" 또는 “질환(disorder)”은 기관 또는 전체 신체에서의 생명유지 과정의 교란으로 주관적 경험 또는 객관적 관찰 가능한 물리적, 정신적 또는 지적 변화를 야기하는 것을 의미한다. 본 발명은 특히 내피 전구 세포의 기능장애와 관련된 질병, 즉 이들 세포의 이러한 기능장애의 결과이거나 이들 세포에 의해 중개되는 질병과 관련된다. “후유증(sequelae)”은 2차적 질병, 즉 1차적 병리 상태에 추가되는 2차 질환이다.

본 발명과 관련하여, 내피 전구 세포의 “기능장애(dysfunction)"는 이들 세포의 대사 활성, 자극에 대한 반응, 이동성, 분할 행동 또는 분화 행동과 같은 필수적인 세포 기능의 교란을 의미한다. 내피 전구 세포의 기능장애는, 예를 들어 이들 세포의 증식이 단지 불충분한 정도이거나 전혀 없는 것을 포함할 수 있다. 내피 전구 세포의 증식이 에리스로포이에틴의 사용에 의해 자극되기 때문에, 내피 전구 세포 및 이전에 분화된 내피 세포 양자의 결핍된 분할 행동을 보상하고 내피 전구 세포 또는 내피 세포의 수를 증가시키는 것이 가능하다. 내피 전구 세포의 기능장애는, 예를 들어 이들 세포가 내피 세포로 분화하는 능력이 손상된 것을 포함할 수 있다. 내피 전구 세포의 기능장애는 또한 이들의 손상된 유착력 및/또는 이들이 혈관형성 또는 혈관신생 자극의 방향으로 이동하는 능력의 손상에 의해 야기될 수도 있다. 이러한 내피 전구 세포의 기능장애는, 예를 들어 새로운 내피 조직의 형성 및/또는 혈관형성의 손상 또는 방지를 야기할 수 있다. 내피 전구 세포의 기능장애는, 예를 들어 고혈압, 고지단백질혈증, 요독증 또는 당뇨병으로 인한 병리적 원인을 가질 수도 있다. 내피 전구 세포의 기능장애는, 예를 들어 NO 합성효소(NOS)에 의한 L-알기닌으로부터 NO(=EDRF) 합성의 감소, 증가된 엔도텔린 생산 및/또는 ICAM-1 및 VCAM-1과 같은 유착 분자의 증가된 생산에 의해 나타날 수 있다.

본 발명에 따르면, 내피 전구 세포의 기능장애와 관련된 질병은 고콜레스테롤혈증, 당뇨병, 혈관의 염증과 같은 내피-중개의 만성 염증 질환, 세망내피증식(reticuloendotheliosis)을 포함하는 내피증식(endotheliosis), 동맥경화, 관상동맥 심장질환, 심근 허혈, 협심증, 나이와 관련된 심혈관 질환, 사지의 허혈성 질환, 레이노드씨병, 자간전증(preeclampsia), 임신-유도성 고혈압, 만성 또는 급성 신부전, 특히 말기 신부전, 심부전, 상처 치유 및 이의 후유증이다.

“고콜레스테롤혈증(hypercholesterolemia)”은 혈액중 콜레스테롤의 증가된 농도를 특징으로 한다. 일차적 고콜레스테롤혈증의 가능 흔한 형태는 다인자(polygenic) 고콜레스테롤혈증이다. 이차적 고콜레스테롤혈증은 당뇨병, 신장증후군, 갑상선기능저하 및 간장 장애과 관련하여 종종 발생한다.

“당뇨병(diabetes millitus)”은 병인과 증상이 다양한 포도당 대사 장애의 여러 가지 형태를 포함한다. 혈관-관련된 당뇨병 합병증의 전개에 책임이 있는 것은 특히 AGE-RAGE 시스템이다. AGEs(advanced glycation endproducts)는 당, 예를 들어 포도당 감소를 위해 단백질 또는 지방에 장기간 지속적으로 노출된 이후의 일련의 복합 반응에 의해 생산된다. AGEs의 형성은 정상적인 노화 과정 동안 발생하고 당뇨병 및 알쯔하이머병에서는 그 정도가 증가된다. AGEs의 결합은 산화적 스트레스, NF-κB 전사 인자의 활성화 및 이에 따른 내피 항상성의 교란을 야기한다.

"내피-중개의 만성 염증성 질환(endothelium-mediated chronic inflammatory disorders)"은, 다른 세포 형태의 활성화와 공동으로 백혈구가 내피 세포에 유착을 유지하여 최종적으로 조직에 침투하고 거기에서 염증을 개시하도록 하기 위해 내피 세포의 특성을 변형시키는 어떤 신호 분자를 가지고, 신체 및 그 조직의 유해 자극에 대한 방어 반응으로부터 유래되는 인간 또는 동물 신체의 질환 또는 상태이다. 내피-중개의 만성 염증성 질환의 한 예로는 백혈구성 맥관염이 있다. 중심 부분은 전사 인자 NF-κB에 의한 내피-중개의 염증성 사건의 활성화에 작용한다. 내피 세포-중개의 만성 염증의 전개를 유도하는 다른 시스템은 AGE-RAGE 시스템이다.

"내피증식(endotheliosis)"은 비-혈소판감소성 자반과 관련된 퇴행성 및 증식성 내피 변화를 의미한다. "세망내피증식(reticuloendotheliosis)"은 망상조직, 세망내피증, 세망내피조직구증식 및 핸드-슐러-크리스티안병(Hand-Schuller-Christian disease)과 같은 세망내피조직계의 질병을 의미한다.

"심근 허혈(myocardial ischemia)"은 동맥 혈액 공급의 불충분 또는 부재의 결과로서 심장 근육벽의 무혈 또는 저관류, 즉 혈액 공급의 손상을 의미한다. "심장 경색(cardiac infarct)" 또는 "심근 경색(myocardial infarct)"은 심근의 국소 영역의 괴사로, 보통 만성 관상동맥 심장 질환이 복합된 급성의 경우에 일어난다. "관상동맥 심장 질환(coronary heart disease)" 또는 "허혈성 심장 질환(ischemic heart disease)"은 심장의 관상동맥 혈관의 협착 또는 폐색으로 심근에 혈액 공급 감소를 야기하는 퇴행성 관상동맥 질환이다. "협심증(angina pectoris)"은 관상동맥 심장 질환, 관상동맥 경축, 혈류 손상, 심장 부정맥, 고혈압이나 저혈압과 관련되어 산소 공급 및 산소 요구의 불균형에 의해 유도될 수 있는 급성 관상동맥 기능부전 또는 협심증을 의미한다. "레이노드씨병(Raynaud's disease)"은 혈관수축, 즉 혈관 경축에 의해 야기되고 보통 손가락의 동맥에서 일시적으로 일어나는 허혈 상태를 의미한다. 일차적 레이노드씨병은 사지의 원위 부위에 공급하는 작은 혈관의 순수하게 기능적인 손상인 한편, 이차적 레이노드씨병은 이에 내재된 다른 질병, 예를 들어 혈관의 염증을 갖는다.

"자간전증(preeclampsia)"은 모체의 내피 및 혈관성 질환으로 태반 유래 내피속성 물질의 작용으로 보인다. 자간전증은 많은 기관의 기능 장해를 야기할 수 있고 댜양한 증상이 발현되는 복합계 장애이다. 이러한 장애에 통상적인 혈액 공급 손상은 증가된 혈관 저항의 결과로 중증도의 국소 변화의 가능성을 수반한다. 내피 기능장애는 자간전증 병원의 중심 요소임이 확실한 것으로 여겨진다.

"신부전(renal failure)"는 본 발명과 관련하여, 배설물을 요 중에 정상적으로 배설하는 신장 능력의 제한을 의미하고, 진행된 단계에서는 전해질, 물 및 산-염기 평형을 조절하는 능력의 손상도 있다. 말기 신부전은 신장의 배설 및 내분비 기능의 붕괴를 특징으로 한다.

신부전은 본 발명에 따라, 급성 신부전 또는 쇼크 무뇨증으로 불리우기도 하는 급성 신부전일 수 있다. 급성 신부전은 보통은 가역적인 신장 손상의 결과로 인한 신장 배설 기능의 갑작스러운 부분적 또는 완전 손실을 특징으로 한다. 그 원인은 혈액 손실(다중외상, 위장관 또는 분만후 출혈, 심장, 혈관, 복부 또는 전립선에서의 중요 수술 과정), 쇼크(심근 경색, 색전증), 중증 감염(패혈증, 복막염, 담낭염), 출혈(출혈성-요독증, 발작성 혈색소뇨증, 수혈 반응), 근변성(좌상 증상, 간상 근변성, 근염, 화상), 물 및 전해질 손상(다량의 구토, 설사, 과도 발한, 장폐색증, 췌장염)으로 인한 혈액량 감소, 저혈압 및 탈수로 인한 저관류일 수 있다. 다른 원인은, 예를 들어 아닐린, 글리콜 화합물, 메탄올 등의 외원성 독소, 또는 예를 들어 미오글로빈 및 옥살레이트 등의 내원성 독소와 같은 신장독소일 수 있다. 급성 신부전의 또다른 원인은 신장 질환, 예를 들어 염증성 신장장애 또는 신장 이식 후의 거부 반응이다. 급성 신부전은 또한 요 흐름의 폐색에 따르는 요의 저류에 의해서도 야기될 수 있다. 본 발명에 따른 에리스로포이에틴의 급성 신부전 치료는 본 발명에 따라 급성 신부전의 예방 또는 적어도 진행의 감소를 가져온다.

신부전은 본 발명에 따라 만성 신부전일 수도 있다. 만성 신부전의 원인은 혈관성, 사구체성 및 세관간질성 신장 기능장애, 감염 및 선천성이거나 후천성 구조적 결함이다. 만성 신부전의 원인은, 그 중에서도 만성 사구체증, 만성 신우신염, 무통성 신장장애, 폐색성 요증 및 동맥성- 및 동맥경화증이다. 만성 신부전의 말기 단계는 요독증이다. 본 발명에 따른 만성 신부전의 에리스로포이에틴 치료는 본 발명에 따라 만성 신부전 진행의 감소를 가져온다.

본 발명과 관련하여, "심부전(heart failure)"은 심근 기능부전 또는 심장 근육의 약화로도 불리우는 병리적 단계를 의미한다. 심부전은 심장의 부적절한 기능을 특징으로 하여, 심장이 더이상 요구에 부응하는 효율적인 전달을 할 수 없는 것이다. 심부전은 여러가지 양상에 따라 분류될 수 있다. 예를 들어, 심장의 손상된 부위에 따라, 우측 심부전, 좌측 심부전 및 양측 부전(전체적 부전)으로 분류된다. 생리적 및 치료적 메카니즘에 의해 영향을 받는 평형의 안정성에 따라, 보상되고 보상되지 않는 심부전 사이에 구분이 있다. 시간 경과에 따라서는 급성 및 만성 심부전으로 분류된다. 심부전의 원인은, 그 중에서도 심근 경색, 심근증, 선천성이거나 후천성 심장 결함, 본태성 또는 폐성 고혈압, 심장 부정맥, 관상동맥 심장 질환 또는 심근염이다.

본 발명과 관련하여, "상처 치유(wound healing)"는 손상된 조직을 재생하고 상처를 봉합하는, 특히 새로운 결합 조직과 모세혈관을 형성하는 생리적 과정을 의미한다. 상처 치유는 일차적 상처 치유(1차 치유)일 수 있는데, 이는 양호한 혈액 공급을 갖고 적절하게는 청결한 상처에 근접하여, 상처의 가장자리 사이에서 새로운 결합 조직의 최소 형성의 결과로 인한, 신속하고 합병증 없는 봉합 및 실질적으로 완전한 회복을 특징으로 한다. 상처의 가장자리가 더욱 벌어지고, 특히 눌리거나 괴사되고, 감염된 상처는 지연된 이차적 상처 치유(2차 치유)를 겪게 되는데, 여기에서 (비)세균성 염증의 결과로, 조직 결함을 과립화 조직 및 흉터 조직의 과도한 형성으로 채우게 된다. 가장자리로부터 개시되는 내피화는 상처 치유를 종결시킨다. 상처 치유는 3 단계, 즉 잠복 단계, 증식 단계 및 복구 단계로 나누어진다. 잠복 단계는 다시, 특히 상처가 나고 처음 몇 시간인 딱지 형성을 수반하는 삼출성 단계, 및 상처가 난 후 하루 내지 3 일의 기간에 걸쳐 일어나는 이화적 자기분해가 일어나는 흡수적 단계로 나누어진다. 증식 단계는 섬유모세포에 의한 콜라겐의 생산을 수반하는 동화적 복구를 특징으로 하고 상처가 난 후 4 일 내지 7 일째에 일어난다. 복구 단계는 상처가 나고 8 일 이후에 일어나고 과립화 조직의 흉터로의 변형을 특징으로 한다.

"상처(wound)"는 본 발명과 관련하여 물질의 손실을 수반하거나 수반하지 않는 신체 조직의 연계의 중단을 의미하고, 기계적 손상 또는 물리적으로 야기되는 세포 손상에 의해 야기된다. 상처의 형태에는 기계적 상처, 열적 상처, 화학적 상처, 방사성 상처 및 질병-관련된 상처가 있다. 기계적 상처는 외상성 폭행을 통해 일어나고 특히 자상 및 천자상, 좌상, 열상, 찢어지고 쓸린 상처, 긁히고 물린 상처 및 관통상으로 일어난다. 열적 상처는 열 또는 냉기에 대한 노출을 통해 일어난다. 화학적 상처는 특히 산 또는 알칼리의 작용을 통해 일어난다. 방사성 상처는 예를 들어 화학선 및 이온화 방사에 대한 노출을 통해 일어난다. 질병과 관련하여 일어나는 상처는 특히 울혈-관련된 상처, 외상성 상처, 당뇨적 상처 등이 있다. 본 발명은 특히 상처 치유를 위하여 바람직하게는 국소적으로 또는 정맥내 투여되는 에리스로포이에틴을 제공한다.

본 발명은 따라서 고콜레스테롤혈증, 당뇨병, 내피-중개의 만성 염증 질환, 세망내피증식(reticuloendotheliosis)을 포함하는 내피증식(endotheliosis), 동맥경화, 관상동맥 심장질환, 심근 허혈, 협심증, 나이와 관련된 심혈관 질환, 사지의 허혈성 질환, 자간전증(preeclampsia), 레이노드씨병, 임신-유도성 고혈압, 만성 또는 급성 신부전, 특히 말기 신부전, 심부전, 상처 치유 및 이의 후유증의 치료를 위한 에리스로포이에틴의 용도와 관련된다.

본 발명은 상기 질병, 특히 내피 전구 세포의 기능장애와 관련되는 질병의 상태를 치료, 또는 이 상태를 예방, 이러한 질병의 진행을 중단 및/또는 이러한 질병의 증상을 완화시키는 데 충분한 치료적으로 유효한 용량으로 환자에게 투여되는 에리스로포이에틴을 제공한다. 환자에게 투여되는 용량은, 예를 들어 환자의 연령, 체중 및 성별, 질환의 정도 등 많은 인자에 의존한다.

본 발명에 따라, 본 명세서의 모든 용도, 방법 및 조성물에서 에리스로포이에틴이 알려진 양보다 낮은 매우 적은 양으로 사용되어, 질환의 정도 및 신장 기능에 따라, 특히 생체내 투여, 즉 환자당 200 내지 2,000 단위(IU; 국제단위)/주(week)의 EPO 용량, 바람직하게는 500 내지 2,000 IU/주(week)의 용량으로 투여되는 것이 특히 바람직하다. 본 발명에 따라 제공되는, 환자당 200 내지 2,000 단위(IU)/주의 용량, 특히 500 내지 2,000 IU/주의 용량은 적혈구 증가 아래 용량, 즉 헤마토크리트 값 50 % 이상의 적혈구증가증을 야기하지 않는 용량이다. 본 발명에 따라 제공되는 적혈구 증가 아래 용량은 체중 ㎏ 당 약 1 내지 90 단위(IU) EPO/㎏, 특히 체중 ㎏ 당 1 내지 45 IU EPO/㎏의 주간 용량, 또는 체중 ㎏ 당 0.005 내지 0.45 ㎍/㎏, 특히 체중 ㎏ 당 0.005 내지 0.225 ㎍/㎏ Aranesp의 상응하는 주간 용량에 해당한다. Aranesp는 이중 PEG화된 EPO이다. 내피 전구 세포의 기능장애와 관련된 질병 또는 병리적 상태의 치료를 위해 본 발명에 따라 제공되는 환자당 200 내지 2,000 단위/주, 특히 환자당 500 내지 2,000 IU/주의 용량은 신장 빈혈의 치료를 위해 통상적으로 채용되는 50-150 IU/체중 ㎏/주의 초기 용량(보통 4,000-8,000 IU/주로 시작하지만 치료 결과가 불만족스러우면 더 높다)에 비해 매우 낮다.

본 발명의 특히 바람직한 태양은 내피 전구 세포의 기능장애와 관련된 병리적 상태 또는 질병의 치료를 위한 약제학적 조성물 또는 약물을 생산하기 위한 활성 성분으로서의 에리스로포이에틴 및/또는 이의 유도체의 용도와 관련된다.

"활성 성분(active ingredient)"은 본 발명에 따라, 표적 분자나 표적 세포 또는 표적 조직에 접촉하면 조직, 기관 또는 유기물의 특정 기능에 분화된 방식으로 영향을 미치는 내원성 또는 외원성 물질을 의미한다. 본 발명은 따라서, 내피 전구 세포의 기능장애가 보상될 수 있고 이러한 기능장애의 결과로서 일어나는 질병이 효과적으로 제어, 완화 또는 제거되거나, 또는 이들 질병이 효과적으로 예방되는 방식으로, 인간 또는 동물 유기체 내에서 접촉에 의해 내피 전구 세포의 증식, 분화 및/또는 이동에 영향을 주는 본 발명의 약제학적 조성물의 활성 성분으로서의 에리스로포이에틴을 제공한다.

본 발명과 관련하여, "약제학적 조성물(pharmaceutical composition)" 또는 "약물(medicament)"은 진단, 치료 및/또는 예방 목적, 즉 인간 또는 동물 신체의 건강을 촉진 또는 회복하기 위해 사용되고, 치료적 효과를 가져오는 적어도 하나의 천연 또는 합성적으로 생산된 활성 성분을 포함하는 혼합물을 의미한다. 약제학적 조성물은 고형 또는 액체 혼합물 중 어느 하나일 수 있다. 예를 들어, 활성 성분을 포함하는 약제학적 조성물은 하나 또는 그 이상의 약제학적으로 허용되는 성분을 포함할 수 있다. 약제학적 조성물은 본 분야에서 통상적으로 사용되는 첨가제, 예를 들어 안정화제, 제조 물질, 이형제, 붕해제, 유화제 또는 약제학적 조성물 생산에 통상적으로 사용되는 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다.

본 발명은 특히 고콜레스테롤혈증, 당뇨병, 혈관의 염증과 같은 내피-중개의 만성 염증 질환, 세망내피증식(reticuloendotheliosis)을 포함하는 내피증식(endotheliosis), 동맥경화, 관상동맥 심장질환, 심근 허혈, 협심증, 나이와 관련된 심혈관 질환, 사지의 허혈성 질환, 레이노드씨병, 자간전증(preeclampsia), 임신-유도성 고혈압, 만성 또는 급성 신부전, 특히 말기 신부전, 심부전, 상처 치유 및 이의 후유증의 치료를 위한 약물을 생산하기 위한 활성 성분으로서의 에리스로포이에틴 및/또는 이의 유도체의 용도를 제공한다.

본 발명의 약제학적 조성물은 국소적 및 전신적 투여 양쪽에 적합할 수 있다.

본 발명의 바람직한 태양은 비경구, 특히 정맥, 근육, 피부내 또는 피하 투여에 사용되는 약제학적 조성물을 제공한다. 본 에리스로포이에틴-함유 약물은 바람직하게는 주사 또는 주입의 형태를 갖는다.

다른 용도는 경구 투여되는 에리스로포이에틴-함유 약제학적 조성물을 제공한다. 예를 들어, 본 에리스로포이에틴-함유 약물은 용액, 현탁액이나 유액과 같은 액체 제형, 또는 정제와 같은 고형 제형으로 투여된다.

또 다른 용도는 폐 투여 또는 흡입에 적합한 약제학적 조성물을 제공한다. 따라서, 본 발명은 치료적으로 유효한 방식으로 환자의 폐에 직접 투여되는 에리스로포이에틴을 제공한다. 이러한 에리스로포이에틴의 투여 방식은 주사를 실시할 필요 없이 에리스로포이에틴 용량을 신속하게 환자에 전달하는 것을 가능하게 한다. 에리스로포이에틴이 폐를 통해 흡수될 때는 상당한 양의 에리스로포이에틴이 폐를 통해 혈류로 전달되는 것이 가능한데, 이는 혈류 내 에리스로포이에틴의 증가된 양을 유도한다. 본 발명의 바람직한 태양에서, 폐를 통해 흡수되는 약제학적 조성물은 수용액이나 비수용액 또는 건조 분말이다. 폐 경로에 의해 투여되는 본 에리스로포이에틴-함유 약물이 건조 분말의 형태일 때, 건조 분말은 바람직하게는 에리스로포이에틴-함유 입자를 포함하는데, 여기에서 이 입자는 10 ㎛ 미만의 직경을 가져 약물이 환자 폐의 원위 영역에 도달할 수 있다. 본 발명의 특히 바람직한 태양은 에어졸의 형태인 폐 경로로 투여되는 약물을 제공한다.

본 발명의 특히 바람직한 태양은 내피 전구 세포의 기능 장애와 관련되는 질병의 치료를 위한 약제학적 조성물을 생산하기 위한 에리스로포이에틴의 용도와 관련되는데, 이 약제학적 조성물은 에리스로포이에틴 이외에 활성 성분으로서 내피 전구 세포를 자극하는 적어도 하나의 다른 추가 활성 성분을 포함한다.

다른 활성 성분은 바람직하게는 특히 골수로부터 내피 전구 세포의 생리학적 기동을 자극하는 활성 성분이다. 그러나, 다른 활성 성분은 본 발명에 따라 특히 내피 전구 세포의 분할 행동, 즉 증식을 자극하는 활성 성분일 수 있다. 그러나, 본 발명에 따라 특히 내피 전구 세포의 분화 행동 및/또는 이동 행동을 자극하는 다른 활성 성분일 가능성도 있다. 내피 전구 세포의 행동을 자극하는 다른 활성 성분은 특히 바람직하게는 VEGF, PIGF, GM-CSF, HMG-CoA 리덕타제 저해제, 특히 심바스타틴, 메바스타틴 또는 아토르바스타틴과 같은 스타틴, 및/또는 NO 공여제, 특히 L-알기닌이다.

본 발명은 또한, 특히 분화된 내피 세포, 즉 이의 증식 및/또는 이동을 자극하지만 내피 전구 세포는 아닌 적어도 하나의 활성 성분을 제공한다. 특히 바람직한 것은 bFGF(basic fibroblast growth factor) 또는 안지오게닌과 관련되어 주어진다.

본 발명의 다른 태양은 내피 전구 세포를 자극하는, 특히 기동, 증식, 내피 세포로의 분화 및/또는 혈관형성이나 혈관신생(vasculogenic or angiogenic) 자극의 방향으로의 이동을 자극하는 약제학적 조성물을 생산하기 위한 활성 성분으로서의 에리스로포이에틴 및/또는 이의 유도체의 용도와 관련된다. 본 발명은 또한, 특히 성인 또는 성체 동물 기관에서의 혈관형성 및/또는 내피 형성을 자극하는 약제학적 조성물을 생산하기 위한 활성 성분으로서의 에리스로포이에틴 및/또는 이의 유도체의 용도를 제공한다.

따라서, 본 발명은 내피 전구 세포를 자극하는, 특히 이의 기동, 증식, 내피 세포로의 분화 및/또는 혈관형성이나 혈관신생 자극의 방향으로의 이동을 자극하고, 혈관형성 및/또는 내피 형성을 자극하고, 내피 전구 세포 및/또는 내피 세포의 기능 장애와 관련된 인간 또는 동물 신체의 질병을 치료하기 위한 약제학적 조성물과도 관련된다. 본 발명은 특히 활성 성분으로서 에리스로포이에틴과, 내피 전구 세포 및/또는 분화된 내피 세포를 자극하기 위한 적어도 하나의 다른 활성 성분을 포함하는 약제학적 조성물 또는 약물과 관련된다. 바람직한 태양에서, 본 발명은 에리스로포이에틴과, VEGF, PIGF, GM-CSF, HMG-CoA 리덕타제 저해제, 특히 심바스타틴, 메바스타틴 또는 아토르바스타틴과 같은 스타틴, NO 공여제, 특히 L-알기닌, bFGF 및 안지오게닌으로 구성된 군으로부터의 적어도 하나의 다른 활성 성분을 포함하는 약제학적 조성물과 관련된다.

본 발명의 다른 바람직한 태양은 이식 가능한 내피 세포 제제를 생산하기 위한 에리스로포이에틴의 용도와 관련된다. 본 발명은 이와 관련하여 에리스로포이에틴의 존재 중에 내피 전구 세포를 배양하는 것에 의해 특히 생체외에서 생산되고 이어서 수용체 기관, 특히 내피 전구 세포의 기능 장애와 관련된 질병이 있는 기관으로 이식되는 내피 세포를 제공한다. 예를 들어, 단핵세포(MNC; mononuclear cells)는 밀도 구배 원심분리에 의해 혈액으로부터 분리되고 적절한 배지에서 생체외 배양될 수 있다. 단핵세포의 분리 및 생체외 배양 방법은, 예를 들어 Asahara, Science, 275 (1997), 964-967; Dimmeler et al ., J. Clin . Invest ., 108 (2001), 391-397 및 Llevadot et al ., J. Clin . Invest ., 108 (2001), 399-405에 기술되어 있다. 다음에 단핵세포는 MNCs에 존재하는 내피 전구 세포의 증식 및 분화 행동을 자극하기 위해, 그리고 특히 분화된 착생 내피 세포의 수를 증가시키기 위해 에리스로포이에틴의 존재 중에 더욱 배양된다. 본 발명은 또한 에리스로포이에틴 및 내피 전구 세포의 증식 및 분화를 자극하는 적어도 하나의 다른 성분의 존재 중에 일어나는 MNCs의 배양을 제공한다. 특히 바람직하게 채용되는 다른 성분은 VEGF, PIGF, GM-CSF, L-알기닌과 같은 NO 공여제 또는 스타틴, 특히 심바스타틴, 메바스타틴이나 아토르바스타틴과 같은 HMG-CoA 리덕타제 저해제이다.

본 발명의 다른 바람직한 태양은 이식되는 조직 또는 기관의 전처리 및/또는 처리를 위한 에리스로포이에틴의 용도를 제공한다. 이 경우, 이식물은 이식 전, 바람직하게는 직전에, 아직 공여체 기관에 있는 동안 에리스로포이에틴으로 처리된다. 수용체 기관도 마찬가지로 이식 시간부터 에리스로포이에틴으로 처리될 수 있다. 양자 모두 이식 직전과 직후에 있어서 이식되는 기관 또는 조직의 이러한 에리스로포이에틴 처리는, 본 발명에 따라, 유도된 혈관형성으로 인해 신체로의 이식이 일어난 후 이식물에서 새로운 혈관의 신속한 형성 및 이렇게 새로 형성된 혈관의 수용체 기관 혈관계와의 신속한 연결을 달성한다. 마찬가지로 내피의 형성도 이러한 방식으로 신속하게 달성된다. 따라서, 기관 또는 조직 이식물의 에리스로포이에틴 처리는 신체 내에서 이들 시스템의 보다 빠른 도입을 가져오고, 이에 따라 거부 위험을 상당히 감소시킨다.

본 발명의 다른 전개는, 이식 전에 내피 전구 세포를 자극하는 적어도 하나의 다른 인자와 조합하여 에리스로포이에틴으로 처리되는 기관 또는 조직 이식물을 제공한다. 이 인자는 바람직하게는 VEGF, PIGF, GM-CSF, HMG-CoA 리덕타제 저해제, 예를 들어 스타틴, 특히 심바스타틴, 메바스타틴 또는 아토르바스타틴, 또는 NO 공여제, 특히 L-알기닌으로 구성되는 그룹으로부터의 물질이다. 다른 전개는, 이식 전에 분화된 내피 세포의 증식 및 이동을 자극하는 다른 물질과 함께 에리스로포이에틴으로 처리되는 기관 또는 조직 이식물을 제공한다. 이 물질은 특히 바람직하게는 안지오게닌 또는 bFGF이다. 다른 전개는, 분리되고 적절하게는 생체외 확장된 내피 전구 세포를 사용하여 일어나는, 기관 또는 조직 이식물의 에리스로포이에틴 전처리를 제공한다.

본 발명의 다른 특히 바람직한 태양은 주입 가능하거나 이식 가능한(implantable or transplantable) 세포-함유 생체외 기관 또는 조직을 생산하는 데 사용되는 에리스로포이에틴을 제공한다. 본 발명은 특히 수용체 기관의 체내에 존재하는 내피 전구 세포를 자극하기 위해, 특히 이의 생리적 기동, 이동, 증식 및 분화를 자극하기 위해 이식 또는 주입 전에 생체외에서 에리스로포이에틴으로 처리되는 생체외 생산되는 기관 또는 조직을 제공한다. 수용체 기관은 바람직하게는 생체외 기관 또는 조직의 이식 또는 주입 후에, 본 발명 용량의 에리스로포이에틴으로 더욱 처리된다. 이식 또는 주입 전의 기관 또는 조직의 생체외 에리스로포이에틴 처리 및, 적절하게는 수용체 기관의 에리스로포이에틴 후속 처리는, 본 발명에 따라, 유도된 혈관형성으로 인해 신체로의 이식 또는 주입이 일어난 후 생체외 기관계 또는 조직계에서 새로운 혈관의 신속한 형성 및 이렇게 새로 형성된 혈관의 수용체 기관 혈관계와의 신속한 연결을 달성한다. 마찬가지로 내피의 형성 및 이에 따른 재내피화(reendothelialization)도 이러한 방식으로 신속하게 달성된다. 따라서, 생체외 기관계 또는 조직계의 에리스로포이에틴 처리는 신체 내에서 이들 시스템의 보다 빠른 도입을 가져오고, 이에 따라 거부 위험을 상당히 감소시키고, 이식을 보호하도록 작용한다.

“생체외 기관계 또는 조직계(in vitro organ or tissue system)”는 정의된 세포 및/또는 정의된 조직을 사용하여 정의된 배양 조건 하에서 생체외 생산되는, 이식 가능하거나 주입 가능한 세포-함유 조직 또는 기관을 의미한다. “주입 가능한 생체외 기관계 또는 조직계(implantable in vitro organ or issue system)"는 세포 외에 외원성 물질을 포함하는 시스템을 의미한다. “이식 가능한 생체외 기관계 또는 조직계(transplantable in vitro organ or issue system)"는 동일 또는 다른 개체의 세포, 조직 또는 기관 외에 외원성 물질을 포함하는, 특히 세포-함유 시스템을 의미한다. 생체외 기관 또는 조직은 특히 구조상 교체되고 따라서 교체된 원래의 기관 또는 조직의 생체내 기능을 수행할 수 있는 원래의 기관 또는 조직에 실질적으로 상응하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 하나의 전개는 이식 또는 주입 전에 내피 전구 세포를 자극하는 적어도 하나의 다른 인자와 조합하여 에리스로포이에틴으로 처리되는 생체외 기관계 또는 조직계를 제공한다. 이 인자는 바람직하게는 VEGF, PIGF, GM-CSF, HMG-CoA 리덕타제 저해제, 특히 심바스타틴, 메바스타틴 또는 아토르바스타틴, 및 NO 공여제로 구성되는 그룹으로부터의 물질이다. 다른 전개는, 이식 또는 주입 전에 에리스로포이에틴 외에 분화된 내피 세포의 증식 및 이동을 자극하는 다른 물질로 처리되는 생체외 기관계 또는 조직계를 제공한다. 이 물질은 특히 바람직하게는 안지오게닌 또는 bFGF이다. 다른 전개는, 분리되고 적절하게는 생체외 확장된 내피 전구 세포를 추가로 포함하는 생체외 기관계 또는 조직계를 제공한다.

본 발명의 다른 바람직한 태양은 혈관내 인공삽입물 또는 심장판막을 생산하기 위한 에리스로포이에틴의 용도와 관련되는데, 여기에서 혈관내 인공삽입물 또는 심장판막은 신체, 특히 인체 내로 삽입되기 전에 에리스로포이에틴으로 코팅된다. 혈관내 인공삽입물 또는 심장판막의 에리스로포이에틴 코팅은 수용체 기관의 체내 내피 전구 세포의 자극을 달성하여, 특히 이들의 골수로부터의 기동, 이들의 증식, 이들의 내피 세포로의 분화 및 채용된 혈관내 인공삽입물 또는 심장판막으로의 이들의 이동을 자극한다. 이러한 방식으로 생산된 혈관내 인공삽입물 또는 심장판막의 체내 도입 이후, 이들은 본 발명의 용량에 따라 에리스로포이에틴으로 더욱 처리될 수 있다. 이는 채용된 혈관내 인공삽입물에서 내피층의 보다 빠른 생성을 야기하고, 따라서 신체의 관련 영역으로의 보다 빠른 도입을 야기한다. 바람직한 전개는, 혈관내 인공삽입물 및 심장 판막을 코팅하기 위하여 추가로 채용되는 분리되고, 적절하게는 생체외 확장된 내피 전구 세포를 제공한다.

본 발명은 마찬가지로, 다음을 포함하는 생체외 내피 세포 형성을 자극하는 방법과 관련된다:

a) 밀도 구배 원심분리에 의해 혈액으로부터 내피 전구 세포를 포함하는 세포 군집의 분리;

b) 세포 배양 배지에서 내피 전구 세포를 포함하는 분리된 세포 군집의 배양; 및

c) 에리스로포이에틴의 존재 중에 세포 군집의 배양.

세포 군집의 배양은 본 발명에 따라 내피 전구 세포를 자극하는 다른 물질의 존재 중에 시행될 수 있다.

본 발명은 또한 내피 전구 세포의 기능장애와 관련된 질병이 있는 환자에게 200 내지 2,000 IU/주의 용량, 특히 500 내지 2,000 IU/주의 용량으로 에리스로포이에틴을 투여하는 것에 의해 이러한 질병을 치료하는 방법과 관련된다. 본 발명의 방법은 특히 고콜레스테롤혈증, 당뇨병, 혈관 염증과 같은 내피-중개의 만성 염증 질환, 세망내피증식(reticuloendotheliosis)을 포함하는 내피증식(endotheliosis), 동맥경화, 관상동맥 심장질환, 심근 허혈, 협심증, 나이와 관련된 심혈관 질환, 사지의 허혈성 질환, 레이노드씨병, 자간전증(preeclampsia), 임신-유도성 고혈압, 급성 또는 만성 신부전, 특히 말기 신부전, 심부전, 상처 치유 및 후유증과 같은 인체의 질환을 치료하는 데 적합하다.

내피 전구 세포의 기능장애와 관련된 질환을 치료하기 위한 본 발명의 바람직한 태양은 환자에게 에리스로포이에틴 외에, VEGF, PIGF, GM-CSF, HMG-CoA 리덕타제 저해제 및 NO 공여제로 구성되는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 활성 성분의 투여를 제공한다. 투여되는 HMG-CoA 리덕타제 저해제는 바람직하게는 심바스타틴, 메바스타틴 또는 아토르바스타틴과 같은 스타틴이다. 투여되는 NO 공여제는 바람직하게는 L-알기닌이다.

내피 전구 세포의 기능장애와 관련된 질병을 치료하기 위한 본 발명의 방법의 다른 바람직한 태양은, 인간 기관의 혈액으로부터 분리되어, 에리스로포이에틴을 사용하여 생체외 확장되고 내피 세포로 분화된 내피 전구 세포를 제공하는데, 분화된 내피 세포 또는 분화되는 내피 전구 세포의 분리 후, 후자는 내피 전구 세포 및/또는 내피 세포의 기능 장애로 손상된 환자의 신체, 조직 또는 기관 부위로 표적 방식으로 이식되어, 그곳에서 새로운 내피의 국소적 형성을 유도한다. 이러한 방식으로 환자의 신체, 조직 및/또는 기관의 손상 부위의 보다 표적화되고 신속한 치료가 가능하다. 내피 전구 세포의 기능장애와 관련된 질환을 치료하기 위한 본 발명의 방법의 태양은 다음 단계를 포함한다:

b) 세포 배양 배지에서 내피 전구 세포를 포함하는 세포 군집의 배양;

c) 내피 전구 세포의 증식 및/또는 이의 내피 세포로의 분화를 자극하기 위해 에리스로포이에틴의 존재 중에 내피 전구 세포를 포함하는 세포 군집의 배양;

d) 분화된 내피 세포의 분리 및 정제; 및

e) 내피 전구 세포의 기능 장애와 관련된 질병을 갖는 신체로 분화된 내피 세포의 이식.

분화된 내피 세포를 신체에 이식한 후, 후자는 에리스로포이에틴으로, 특히 본 발명에 따라 제공된 200 내지 2,000 IU/주의 용량으로, 더욱 처리될 수 있다.

본 발명에 따라 내피 전구 세포를 포함하는 세포 군집은 VEGF, PIGF, GM-CSF, HMG-CoA 리덕타제 저해제 및 NO 공여제로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 다른 활성 성분의 존재 중에 생체외에서 배양될 수 있다. 배양에 사용되는 HMG-CoA 리덕타제 저해제는 바람직하게는 심바스타틴, 메바스타틴 또는 아토르바스타틴과 같은 스타틴이다.

본 발명의 다른 바람직한 태양은 다음 단계를 포함하는 혈관 질환의 치료 방법과 관련된다:

d) 분화된 내피 세포의 분리 및 정제; 및

e) 혈관 질환이 있는 신체로 내피 세포의 이식.

내피 세포를 혈관 질환이 있는 신체에 이식한 후, 후자는 에리스로포이에틴으로, 특히 본 발명의 200 내지 2,000 IU/주의 용량으로, 더욱 처리될 수 있다.

본 발명에 따라 내피 전구 세포를 포함하는 세포 군집은 VEGF, PIGF, GM-CSF 및/또는 HMG-CoA 리덕타제 저해제로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 다른 활성 성분의 존재 중에 배양될 수 있다. 배양에 사용되는 HMG-CoA 리덕타제 저해제는 바람직하게는 심바스타틴, 메바스타틴 또는 아토르바스타틴과 같은 스타틴이다.

따라서, 본 발명의 혈관 질환의 치료 방법은 인간 기관의 혈액으로부터 분리되어, 에리스로포이에틴을 사용하여 생체외 확장되고 내피 세포로 분화된 내피 전구 세포를 제공하는데, 분화된 내피 세포 또는 분화되는 내피 전구 세포의 분리 후, 후자는 그곳에서 국소적 혈관신생을 유도하기 위해 손상된 혈관 또는 허혈 부위로 표적 방식으로 이식된다. 이러한 방식으로 손상된 혈관 또는 허혈 조직의 보다 표적화되고 신속한 치료가 가능하다. 본 발명의 혈관 질환 치료 방법은 허혈, 특히 뇌허혈, 사지의 허혈성 질환, 심근 허혈, 심근 경색, 뇌졸중, 관상동맥 심장 질환, 협심증, 급성 동맥 폐색, 동맥 폐색 질환, 레이노드씨병 및 맥각중독과 같은 혈관 질환을 치료하는 데 특히 적합하다.

본 발명의 다른 이점의 전개는 종속 청구항으로부터 명백하다.

본 발명은 다음 도면 및 실시예에 의해 더욱 구체적으로 설명된다.

본 발명은 내피 전구 세포의 생리적 기동, 증식 및 분화를 자극하고, 혈관형성을 자극하고, 내피 전구 세포의 기능장애와 관련된 질병을 치료하고, 그리고 이러한 질병의 치료용 약제학적 조성물을 생산하기 위한 에리스로포이에틴의 용도, 그리고 에리스로포이에틴과 내피 전구 세포의 자극에 적절한 다른 약제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

도 1은 순환하는 CD34⁺ 줄기세포(cSC)의 FACS 분석 결과를 보여준다. (A-D): 환자의 샘플; (E-F): 아이소타이프 대조군(isotype controls). cSC는 CD34 표지의 추가적인 발현에 의해(B 및 F), 특징적인 저급 내지 중급의 CD45 항원 발현에 의해(C 및 G), 그리고 특징적인 광 산란 특성에 의해(D 및 H) 확인되었다. cSC 절대수는 100,000 단핵구 및 림프구당 계산되었다.
도 2는 순환하는 줄기세포의 유세포분석기(flow cytometry)에 의한 정량분석을 보여준다. 이 도면은 rhEPO(재조합 인간 에리스로포이에틴)를 사용한 에리스로포이에틴 치료의 0, 2, 4, 6 및 8 주 후의 시간-의존 효과를 보여준다. n=11, 값은 평균 +/- 표준 편차에 상응한다. 중앙값(median)은 선으로 나타내었다.
*: p<0.01 2 주와 비교하여; □.□.p<0.05 4 주와 비교하여, #: p<0.05 8 주와 비교하여.
도 3은 배양된 내피 전구 세포(EPC)의 정량적 측정을 보여준다. 이 도면은 rhEPO 치료가 EPCs의 상대적 수를 증가시키는 것을 보여준다. EPCs는 신장 환자의 rhEPO 치료 전 및 환자의 rhEPO 치료 2, 4, 6 및 8 주 후에 분리되고, 이들의 유착력과 두 개의 표지 acLDL-Dil 및 UEA-1 FITC에 의해 특징지어졌다. n=11, 값은 평균 +/- 표준 편차에 상응한다. 중앙값(median)은 선으로 나타내었다.
*: p<0.01 치료 전 시기와 비교하여; #: p<0.001 치료 전 시기와 비교하여.
도 4는 배양된 내피 전구 세포(EPC)의 정량적 측정을 보여준다. 이 도면은 rhEPO 요법의 개시 전 EPCs의 절대수가 건강한 연령- 및 성- 맞춤 대상과 비교하여 상대적 수를 증가시키는 것을 보여준다. 신장 빈혈 환자는 이에 따라 대조군 대상과 비교하여 특징적인 EPC 기능장애를 보여준다. 이러한 기능적인 EPC 수의 감소는 신장 빈혈의 rhEPO 치료 개시 8 주 후에 보상되었다. EPCs는 신장 환자의 rhEPO 치료 전 및 환자의 rhEPO 치료 2, 4, 6 및 8 주 후에 분리되고, 이들의 유착력과 두 개의 표지 acLDL-Dil 및 UEA-1 FITC에 의해 특징지어졌다. n=11. 나타낸 실시예는 8 주 및 모든 대조군에서의 상태이다. 절대수는 각각의 값으로서 한쪽에 나타낸다. 또한, 박스 플롯이 보여진다(90/75/50/25번째 및 10번째 백분위수 및 평균) EPCs가 분리되고 유사하게 특징화된 연령- 및 성- 맞춤 대상(n=11)이 건강한 대조군으로 작용하였다.
도 5는 에리스로포이에틴의 상처 치료 효과를 보여준다. 이 도면은 조직 펀치(tissue punch)로 만든 마우스의 표준화된 피부 상처에 대한 에리스로포이에틴의 치료를 보여주는데, 상처는 단 7 내지 8 일만에 완전히 봉합된 반면, 생리적 염화나트륨 용액(생리식염수)으로 상처 치료시에는 상처가 13 내지 14일 후까지 완전히 봉합되지 않았다. 에리스로포이에틴 또는 생리식염수 치료는 피부 상처를 만들기 7 일 전에 시작되었다. 재조합 인간 에리스로포이에틴은 일주일에 한번 s.c.(피하) 주사로 투여되었다(0.1 ㎍/㎏ Aranesp)(n=그룹당 5).
도 6은 에리스로포이에틴이 급성 신부전 후 신장 기능의 손상을 감소시키는 것을 보여준다. 스프라그-돌리(Sprague Dawley) 래트(250-300 g)가 이 실험에 포함되었다. 래트는 케타민(120 ㎎/㎏)과 롬펀(Rompun)(10 ㎎/㎏)으로 마취시켰다. 실험 그룹의 하나는 급성 신부전의 유도 전날 체중 ㎏당 Aranesp 0.1 ㎍을 한번 맞았다. 비교 그룹은 각각 같은 시간에 염화나트륨 피하 주사를 맞은 실험 동물을 포함한다. 우측 신장 동맥에 동맥 클램프를 장착시켜 신장으로 가는 혈류를 45 분간 차단하였다. 이 시기에 좌측 신장적출을 시행하였다. 다른 대조 그룹에 가짜 수술(sham operation)을 시행하였다. 이는 복부의 개방을 수반하여, 좌측 신장 동맥은 노출하지만 혈액 공급을 차단하지 않고 반대쪽 우측 신장을 제거하였다. 모든 동물은 60 분간 마취시키고 수술 24 시간 후에 희생시켰다. 남아있는 우측 신장의 45-분 허혈에 후속되는 재관류는 염화나트륨으로 처리된 동물에서 광범위한 급성 신장 기능 손실을 가져왔다. 이는 허혈-재관류 24 시간 후 혈청 크레아티닌 농도에 의해 반영되는데, 허혈-재관류 전의 농도 보다 7 배 높다(p<0.05). 대조적으로, 에리스로포이에틴 동족체 Aranesp를 처리한 동물은 허혈-재관류 손상의 유도 1 일 후에 혈청 크레아티닌 농도에서 4-배 증가만을 보여주었다. 좌측 신장적출과 우측 신장에서 가짜 수술을 받은 동물에서는 저류 농도에서 증가가 없었다. 이 도면은 허혈-재관류(IR) 손상 및 그후 24 시간에 EPO-처리 동물(IR+EPO), NaCl-처리 동물(IR) 및 가짜-수술 받은 동물(sham OP)의 혈청에서 크레아티닌 농도를 보여준다. 이 도면으로부터 Aranesp-처리된 동물에서 혈청 크레아티닌 농도는 허혈-재관류 손상 24 시간 후 (NaCl 처리) 없는 대조군에 비하여 약 절반이었다.
도 7은 만성 신부전의 유도 후에 Aranesp 또는 NaCl 중 하나로 처리된 두 개의 실험 그룹의 Kaplan-Mayer 생존 플롯을 보여준다. 8-주령의 스프라그 돌리 래트가 이 실험에 포함되었다. 래트는 케타민(120 ㎎/㎏)과 롬펀(Rompun)(10 ㎎/㎏)으로 마취시켰다. 우측 신장을 0 일에 이들로부터 제거하고, 제거 직후 조직 검사를 위해 포르말린에 고정시켰다. 좌측 신장의 상부 및 하부 신장 극(pole)에 공급하는 단편 동맥을 결찰하였다. 이는 신장의 대응하는 영역의 신장 경색을 야기하고, 신장의 중앙 삼분의 일만 그 기능을 유지한다. 래트는 일주일에 한번 Aranesp(0.1 ㎍/㎏ 체중) 또는 NaCl의 피하주사를 맞았다. 에리스로포이에틴 동족체 Aranesp로 처리한 동물은 염화나트륨으로 처리한 동물에 비하여 유의적인 생존 강점을 보여준다(p=0.027; log rank 시험).
도 8 내지 15는 Aranesp 또는 NaCl 중 하나를 투여한 두 개의 실험 그룹에서 만성 신부전의 유도 6 주 후의 광학 현미경 신장 단면을 보여주고, 이의 Kaplan-Mayer 생존 플롯은 도 7에 나타낸다.
도 8은 6 주의 기간 동안 만성 신부전의 유도 직후 개시한 1 주에 한번의 NaCl 처리 후 만성 신부전을 갖는 스프라그-돌리 래트에서의 조직학적 변화를 보여준다. 만성 신부전은 우측 신장의 제거와 좌측 신장의 상부 및 하부 신장 극에 공급하는 단편 동맥의 결찰로부터 야기된다. 이 도면은 동맥내막염을 갖는 Fahr의 악성 신경화증으로 불리우는 중증의 고혈압 손상과 관련된 특징적인 양파 링-타입 혈관벽 증식을 갖는 중간-크기의 전사구체 동맥을 보여준다.
도 9는 6 주의 기간 동안 만성 신부전의 유도 직후 개시한 1 주에 한번의 NaCl 처리 후 만성 신부전을 갖는 스프라그-돌리 래트에서의 조직학적 변화를 보여준다. 만성 신부전은 우측 신장의 제거와 좌측 신장의 상부 및 하부 신장 극에 공급하는 단편 동맥의 결찰로부터 야기된다. 이 도면은 증식성 FSGS(우측 사구체)로 불리우는 개화성 병소-단편 사구체경화증(florid focal-segmental glomerulosclerosis)을 보여준다. 다른 사구체(좌측)는 루프 굴곡의 허혈성 붕괴를 보여준다. 심한 내피 손상을 갖는 작은 혈관이 그림의 하부에 보여진다. 관찰된 조직학적 변화는 5/6 신장 적출에 따르는 과부하 신장염과 관련된 고혈압성 기관 손상 또는 변화에 상응한다.
도 10은 6 주의 기간 동안 만성 신부전의 유도 직후 개시한 1 주에 한번의 NaCl 처리 후 만성 신부전을 갖는 스프라그-돌리 래트에서의 조직학적 변화를 보여준다. 만성 신부전은 우측 신장의 제거와 좌측 신장의 상부 및 하부 신장 극에 공급하는 단편 동맥의 결찰로부터 야기된다. 이 도면은 관련된 구심성 소동맥의 섬유상 괴사 또는 보상성 확장 및 선언된 초자질변성을 갖는 사구체의 거의 완전한 경화 또는 파괴를 보여준다.
도 11은 6 주의 기간 동안 만성 신부전의 유도 직후 개시한 1 주에 한번의 NaCl 처리 후 만성 신부전을 갖는 스프라그-돌리 래트에서의 조직학적 변화를 보여준다. 만성 신부전은 우측 신장의 제거와 좌측 신장의 상부 및 하부 신장 극에 공급하는 단편 동맥의 결찰로부터 야기된다. 이 도면은 악성 신경화증으로 불리우는 중증의 고혈압 손상과 관련된 특징적인 양파 링-타입 혈관벽 증식과 벽 괴사를 갖는 작은 전사구체 동맥을 보여준다(그림의 우측과 비교). 정상적인(아직까지) 손상되지 않은 소동맥이 우측에 보여진다.
도 12는 6 주의 기간 동안 만성 신부전의 유도 직후 개시한 1 주에 한번의 Aranesp(EPO) 처리(0.1 ㎍/㎏ Aranesp)후 만성 신부전을 갖는 스프라그-돌리 래트에서의 조직학적 변화를 보여준다. 만성 신부전은 우측 신장의 제거와 좌측 신장의 상부 및 하부 신장 극에 공급하는 단편 동맥의 결찰로부터 야기된다. 이 도면은 섬세한 구심성 혈관을 갖는 정상적인 사구체를 보여준다. 세관-간극에서 병리적인 발견이 없다.
도 13은 6 주의 기간 동안 만성 신부전의 유도 직후 개시한 1 주에 한번의 Aranesp(EPO) 처리(0.1 ㎍/㎏ Aranesp)후 만성 신부전을 갖는 스프라그-돌리 래트에서의 조직학적 변화를 보여준다. 만성 신부전은 우측 신장의 제거와 좌측 신장의 상부 및 하부 신장 극에 공급하는 단편 동맥의 결찰로부터 야기된다. 이 도면은 섬세한 구심성 혈관을 갖는 정상적인 사구체를 보여준다(630X 배율). 세관-간극에서 병리적인 발견이 없다.
도 14는 6 주의 기간 동안 만성 신부전의 유도 직후 개시한 1 주에 한번의 Aranesp(EPO) 처리(0.1 ㎍/㎏ Aranesp)후 만성 신부전을 갖는 스프라그-돌리 래트에서의 조직학적 변화를 보여준다. 만성 신부전은 우측 신장의 제거와 좌측 신장의 상부 및 하부 신장 극에 공급하는 단편 동맥의 결찰로부터 야기된다. 이 도면은 섬세한 구심성 혈관을 갖는 정상적인 사구체를 보여준다. 세관-간극에서 병리적인 발견이 없다.
도 15는 6 주의 기간 동안 만성 신부전의 유도 직후 개시한 1 주에 한번의 Aranesp(EPO) 처리(0.1 ㎍/㎏ Aranesp)후 만성 신부전을 갖는 스프라그-돌리 래트에서의 조직학적 변화를 보여준다. 만성 신부전은 우측 신장의 제거와 좌측 신장의 상부 및 하부 신장 극에 공급하는 단편 동맥의 결찰로부터 야기된다. 이 도면은 섬세한 구심성 혈관을 갖는 정상적인 사구체를 보여준다(630X 배율). 세관-간극에서 병리적인 발견이 없다.

실시예 1: 신장 빈혈 환자에서 EPO의 효과

신장 질환 말기(말기전 신부전; 크레아티닌 클리어런스<35 ㎖/분)의 결과로 신장 빈혈(Hb<10.5 g/㎗)이 있는 환자에서 에리스로포이에틴의 효과를 검사하였다. 11 인의 환자에게 적어도 8 주의 기간 동안 주간 평균 용량 5,000 IU의 rhEPO(재조합 인간 에리스로포이에틴)를 정맥내 또는 피하 투여하였다. 에리스로포이에틴 처리후, 환자의 혈액 내 내피 전구 세포를 20 주의 기간에 걸쳐 검사하여, 내피 전구 세포의 수와 분화 상태를 유세포분석에 의해 분석하고, 0, 2, 4, 6 및 8 주 후에 배양 평가하였다.

순환하는 말초 혈액 줄기세포(CPBSC)는 CD34 항원 및 CD45 항원 양자를 발현하는 세포의 작은 군집을 포함한다. ISHAGE 안내(Sutherland et al ., J. Hematother., 5 (1996), 213-226)에 근거한 유세포분석에 의해 CPBSC의 수를 측정하기 위한 분석을 전개하였다. 이 분석은 CD34 및 CD45 세포의 발현 패턴과 줄기세포의 형태를 결정하기 위해 사용되었다. ㎕ 당 CPBSC의 절대수 및 백혈구 총수의 백분율로서의 CPBSC의 비율 양자를 이 방법으로 측정하였다.

도 1은 ISHAGE 안내에 근거한 순환하는 CD34⁺ 줄기세포(cSC)의 FACS 분석 결과를 보여준다.

도 2는 8 주의 기간에 걸쳐 FACS 분석에 의해 측정된 CD34⁺ 줄기세포의 수를 보여준다.

세포 배양 분석

Asahara, Science , 275 (1997), 964-967에 기술된 방법에 따라 인간 혈액 샘플로부터 Ficoll 밀도 원심분리에 의해 말초 혈액 단핵 세포(PBMCs)를 분리하였다. 이 세포를 피브로넥틴으로 배양 플레이트 상에 놓고 EC 기본 배지에 유지하였다. EC 기본 배지는 EBM-2 기본 배지(Clonetics로부터 입수) 및 EGM-2 Quots(hEGF; GA-100 (겐타마이신, 암포테리신-B), FBS, VEGF, hFGF-B(w/헤파린), R³-IGF-1, 아스코르빈산, 헤파린)으로 구성된다. 4 일간 배양한 후, 플레이트를 세척하여 부착되지 않은 세포를 제거하였다. 남은 부착 세포를 트립신으로 처리하고 새로운 플레이트로 교체하였다. 다음에 3 일간 더 배양하였다. 분리 7 일 후 두 개의 다른 내피 표지에서의 양성 염색에 의해 내피 표현형을 갖는 세포를 확인하였다. 이들은 DiI-표지된 아세틸화된 저밀도 리포프로테인(acLDL-DiI) 및 Ulex europaeus 아글루티닌-1(UEA-1)이다. 이러한 분석의 결과를 도 3에 나타낸다.

이 결과는 에리스로포이에틴이 내피 전구 세포를 기동하고 순환하는 내피 전구 세포의 수를 증가시킬 수 있다는 것을 보여준다. 더우기, 신장 빈혈과 같이 어떤 생리적 상태에서 일어나는 기능적 결함이 보상된다. 이러한 결과는 도 4에 나타낸다.

말기 신장 질환 환자에서 순환하는 CD34⁺ 줄기세포의 수는 건강한 대상의 혈액 내 순환하는 CD34⁺ 줄기세포의 수와 일치한다는 것이 유세포분석에 의해 발견되었다. 에리스로포이에틴 치료가 시작된 후, 혈류 내의 CD34⁺ 줄기세포는 50 % 이상으로 유의성 있게 증가한다. 세포 배양 분석을 사용함으로써, 에리스로포이에틴 치료후 내피 표현형을 나타내는 세포의 수에 대단한 증가가 있음이 측정되었다. 기능적 세포 배양 분석에서는, 내피 전구 세포의 크게 손상된 능력에서 3-배 이상의 증가가 있었다.

실시예 2: rhEPO의 전신적 사용을 통해 개선된 상처 치료

FVB/N 마우스를 이소플로란으로 흡입마취시켰다. 두 뒷다리 모피를 탈모 로션을 사용하여 제거하고 70 % 알콜로 소독하였다. 멸균 4 ㎜ 일회용 생검 조직 펀치를 사용하여 각 마우스의 우측 옆구리에 상처를 만들었다. 반대쪽은 내부 대조로 작용하였다. 페니실린 G(20,000 단위/㎏)를 함유하는 수술후 항균 커버를 1 회 시행하였다. 조사 기간에 걸쳐, 재조합 인간 에리스로포이에틴 동족체 Aranesp(0.1 ㎍/㎏ 체중)의 피하주사를 연구 기간에 걸쳐 일주일에 1 회 시행하였다. 처리는 조티슈 펀치의 제거 7 일 전에 개시되었다. 결과는 도 5에 나타낸다. 이들은 EPO 의 투여가 상처 치유 과정을 상당히 촉진하는 것을 보여준다.

실시예 3: 에리스로포이에틴 처리를 통한 만성 신부전 진행의 감소

8-주령의 스프라그-돌리 래트를 케타민(120 ㎎/㎏)과 롬펀(Rompun)(10 ㎎/㎏)으로 마취시켰다. 우측 신장을 0 일째에 래트로부터 제거하고 조직학적 검사를 위해 제거 직후 포르말린에 고정시켰다. 좌측 신장의 상부 및 하부 신장 극에 공급하는 단편 동맥을 결찰하였다. 이는 신장의 해당 부위의 신장 경색을 야기하여, 신장의 중간 삼분의 일만이 기능하도록 남긴다. 래트는 체중 ㎏당 0.1 ㎍ 용량으로 에리스로포이에틴 동족체 Aranesp 또는 대조로서 NaCl을 피하주사로 일주일에 한번 맞았다.

도 7은 양 실험 그룹에서의 Kaplan-Mayer 생존 플롯을 보여준다. Aranesp-처리 동물은 염화나트륨으로 처리된 대조 동물에 비해 명백히 개선된 생존을 갖는다.

도 12 내지 15는 NaCl 로 처리후 중증의 병리적 변화가 눈에 보이는 반면, 에리스로포이에틴 처리후에는 신장 조직에 어떠한 병리적 변화도 보이지 않는다는 것을 보여준다(도 8 내지 11 참조). 다른 조직학적 검사는 염화나트륨 처리 동물 보다 Aranesp-처리 동물에서 명백히 더 큰 혈관 밀도(CD31)가 관찰된다는 것을 보여준다(데이터는 보이지 않음).

실시예 4: 급성 신부전 진행의 감소

체중 250 내지 300 g의 스프라그-돌리 래트가 이 검사에 채용되었다. 실험 그룹의 하나는 급성 신부전의 유도 전날에 한번 체중 ㎏당 0.1 ㎍ 용량의 Aranesp를 맞았다. 래트를 케타민(120 ㎎/㎏)과 롬펀(Rompun)(10 ㎎/㎏)으로 마취시켰다. 동시에 염화나트륨의 피하주사를 맞은 실험동물 그룹이 비교로서 작용하였다. 이 경우, 복부를 개방하여, 좌측 신장 동맥은 노출하지만 혈액 공급을 차단하지 않고 반대쪽 우측 신장을 제거하였다. 모든 동물은 60 분간 마취시키고 수술 24 시간 후에 희생시켰다.

남아있는 우측 신장의 45-분 허혈에 후속되는 재관류는 염화나트륨으로 처리된 동물에서 광범위한 급성 신장 기능 손실을 가져왔다. 이는 혈청 크레아티닌 농도에서 7 배수만큼의 증가에 의해 입증되었다(p<0.05). 대조적으로, 에리스로포이에틴 동족체 Aranesp를 처리한 동물은 허혈-재관류 손상의 유도 1 일 후에 혈청 크레아티닌 농도에서 4-배 증가만을 보여주었다. 좌측 신장적출과 우측 신장에서 가짜 수술을 받은 동물에서는 저류 농도에서 증가가 없었다. 이러한 결과는 도 6에 나타낸다.

Claims

적혈구 증가 용량 이하의 1 내지 90 단위(IU) EPO/체중 ㎏의 주간 용량으로 에리스로포이에틴을 포함하는, 고콜레스테롤혈증, 당뇨병, 내피-중개의 만성 염증 질환, 세망내피증식(reticuloendotheliosis)을 포함하는 내피증식(endotheliosis), 동맥경화, 사지의 허혈성 질환, 자간전증(preeclampsia), 레이노드씨병(Raynaud's disease) 또는 임신-유도성 고혈압의 치료를 위한 약제학적 조성물.
제 1 항에 있어서, 약제학적 조성물이 정맥내, 근육내, 피부내 또는 피하 투여되는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제 2 항에 있어서, 약제학적 조성물이 주사 또는 주입 형태인 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제 1 항에 있어서, 약제학적 조성물이 폐 투여되는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제 4 항에 있어서, 약제학적 조성물이 수용액, 비수용액 또는 분말 형태인 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제 4 항에 있어서, 약제학적 조성물이 에어졸 제품 형태인 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제 1 항에 있어서, 약제학적 조성물이 경구 투여되는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제 7 항에 있어서, 약제학적 조성물이 액제, 현탁제, 유제 또는 정제 형태인 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제 1 항에 있어서, 약제학적 조성물이 내피 전구 세포를 자극하기 위한 적어도 하나의 다른 활성성분을 포함하는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제 9 항에 있어서, 다른 활성성분이 VEGF, PIGF, GM-CSF, HMG-CoA 리덕타제 저해제 또는 NO 공여제인 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제 10 항에 있어서, HMG-CoA 리덕타제 저해제가 심바스타틴, 메바스타틴 또는 아토르바스타틴인 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
에리스로포이에틴을 이용하여 이식 가능한 내피 세포 제제를 생산하는 방법.
제 12 항에 있어서, 내피 세포가 내피 전구 세포를 에리스로포이에틴의 존재 중에 배양하는 것에 의해 생체외에서 생산되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 12 항 또는 제 13 항에 있어서, 내피 전구 세포의 배양이 VEGF, PIGF, GM-CSF, HMG-CoA 리덕타제 저해제, 및 NO 공여제로 구성되는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 다른 활성성분의 존재 중에 일어나는 것을 특징으로 하는 방법.
에리스로포이에틴을 이용하여 조직 또는 기관 이식물의 전처리 또는 후처리를 하는 방법.
제 15 항에 있어서, 조직 또는 기관 이식물의 전처리가 분리된 내피 전구 세포의 사용과 함께 일어나는 것을 특징으로 하는 방법.
혈관형성 및/또는 내피 세포 형성을 유도하기 위해 생체외 기관계 또는 조직계를 이식 또는 주입 전에 에리스로포이에틴으로 처리하는 것을 특징으로 하는, 주입 가능하거나 이식 가능한(implantable or transplantable) 세포-함유 생체외 기관계 또는 조직계를 생산하는 방법.
제 17 항에 있어서, 생체외 기관계 또는 조직계는 내피 전구 세포를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
혈관내 인공삽입물 또는 심장 판막을 에리스로포이에틴으로 코팅하는 것을 특징으로 하는, 혈관내 인공삽입물 또는 심장 판막을 생산하는 방법.
제 19 항에 있어서, 혈관내 인공삽입물 또는 심장 판막이 내피 전구 세포를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
적혈구 증가 용량 이하의 1 내지 90 단위(IU) EPO/체중 ㎏의 주간 용량으로 에리스로포이에틴 또는 이의 유도체를 포함하는, 내피 전구 세포의 생리적 기동, 내피 전구 세포의 증식, 내피 전구 세포의 내피 세포로의 분화 또는 내피 전구 세포의 혈관신생 또는 혈관형성 자극 방향으로의 이동을 자극하기 위한 약제학적 조성물.
제 21 항에 있어서, 분화하는 내피 전구 세포의 유착 능력이 증가되는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제 21 항 또는 제 22 항에 있어서, 내피 전구 세포의 자극이 내피 조직의 형성을 야기하는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제 21 항 또는 제 22 항에 있어서, 내피 전구 세포의 자극이 새로운 혈관의 형성을 야기하는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
적혈구 증가 용량 이하의 1 내지 90 단위(IU) EPO/체중 ㎏의 주간 용량으로 에리스로포이에틴을 포함하는, 내피 조직의 형성을 자극하기 위한 약제학적 조성물.
제 1 항, 제 21 항 및 제 25 항의 어느 한 항에 있어서, 에리스로포이에틴이 인간 또는 동물 에리스로포이에틴인 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제 26 항에 있어서, 에리스로포이에틴이 에리스로포이에틴의 유도체, 동족체, 변형체 또는 돌연변이 단백질인 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제 26 항에 있어서, 에리스로포이에틴이 인간 요, 재생불량성 빈혈 환자의 요 또는 혈장, 인간 신장암세포의 조직 배양, 인간 에리스로포이에틴을 생산하는 능력을 갖는 인간 림프모세포, 또는 인간 세포주의 세포 융합에 의해 얻어진 융합세포 배양으로부터 분리되는 것임을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제 26 항에 있어서, 에리스로포이에틴이 DNA 재조합 기술에 의해 생산된 에리스로포이에틴인 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
활성성분으로서 적혈구 증가 용량 이하의 1 내지 90 단위(IU) EPO/체중 ㎏의 주간 용량으로 에리스로포이에틴 또는 이의 유도체, 동족체, 변형체 또는 돌연변이 단백질과, VEGF, PIGF, GM-CSF, HMG-CoA 리덕타제 저해제 및 NO 공여제로 구성되는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 다른 활성성분을 포함하는, 내피 전구 세포를 자극하고, 내피 조직의 형성을 자극하고, 혈관형성을 자극하고, 또는 내피 전구 세포의 기능장애와 관련된 질병 또는 병리적 상태를 치료하기 위한 약제학적 조성물.
활성성분으로서 적혈구 증가 용량 이하의 1 내지 90 단위(IU) EPO/체중 ㎏의 주간 용량으로 에리스로포이에틴 또는 이의 유도체, 동족체, 변형체 또는 돌연변이 단백질을 포함하는, 고콜레스테롤혈증, 당뇨병, 내피-중개의 만성 염증 질환, 세망내피증식(reticuloendotheliosis)을 포함하는 내피증식(endotheliosis), 동맥경화, 사지의 허혈성 질환, 자간전증(preeclampsia), 레이노드씨병(Raynaud's disease), 임신-유도성 고혈압 및 이의 후유증의 예방 또는 치료를 위한 약제학적 조성물.
제 31 항에 있어서, VEGF, PIGF, GM-CSF, HMG-CoA 리덕타제 저해제 및 NO 공여제로 구성되는 군으로부터 선택된 다른 활성성분을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제 30 항 또는 제 32 항에 있어서, HMG-CoA 리덕타제 저해제가 심바스타틴, 메바스타틴 또는 아토르바스타틴인 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제 30 항 또는 제 32 항에 있어서, NO 공여제가 L-알기닌인 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
적혈구 증가 용량 이하의 1 내지 90 단위(IU) EPO/체중 ㎏의 주간 용량으로 에리스로포이에틴 또는 이의 유도체를 포함하는, 혈관형성을 자극하기 위한 약제학적 조성물.
적혈구 증가 용량 이하의 1 내지 90 단위(IU) EPO/체중 ㎏의 주간 용량으로 에리스로포이에틴을 포함하는, 내피 전구 세포의 기능장애와 관련된 인간 또는 동물 신체의 병리적 상태 또는 질병의 치료를 위한 약제학적 조성물.
제 36 항에 있어서, 내피 전구 세포의 기능장애가 이들의 증식 능력의 손상, 이들의 내피 세포로의 분화 능력의 손상, 이들의 유착 능력의 손상 또는 이들의 혈관형성 또는 혈관신생 자극 방향으로의 이동 능력의 손상으로 이루어지는 것임을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제 36 항 또는 제 37 항에 있어서, 내피 전구 세포의 기능장애가 내피 조직 또는 혈관의 형성을 손상 또는 저해하는 것임을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제 36 항 또는 제 37 항에 있어서, 내피 전구 세포의 기능장애가 병원성 원인을 갖는 것임을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제 36 항 또는 제 37 항에 있어서, 내피 전구 세포의 기능장애와 관련된 병리적 상태 또는 질병이 고콜레스테롤혈증, 당뇨병, 내피-중개의 만성 염증 질환, 세망내피증식(reticuloendotheliosis)을 포함하는 내피증식(endotheliosis), 동맥경화, 사지의 허혈성 질환, 자간전증(preeclampsia), 레이노드씨병(Raynaud's disease), 임신-유도성 고혈압 및 이의 후유증인 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.