KR20100038555A

KR20100038555A - 화장료 조성물의 성분으로 사용되는 아멘토플라본을 부처손및 측백나무로부터 추출하는 방법

Info

Publication number: KR20100038555A
Application number: KR1020080097572A
Authority: KR
Inventors: 박진영; 이호영
Original assignee: (주)코스메랩
Priority date: 2008-10-06
Filing date: 2008-10-06
Publication date: 2010-04-15
Also published as: KR101007940B1

Abstract

본 발명은 부처손 및 측백나무를 혼합한 후 분쇄하여 분말을 수득하는 단계; 상기의 수득된 분말 0.8~1.2%(w/v)와 포도당 1~4%(w/v), 펩톤0.1~1%(w/v) 및 NaCl 0.1~1%(w/v)를 포함하는 배양액을 제조하는 단계; 상기 제조된 배양액에 바실러스 서브틸러스(Bacillus subtilis) KCTC 1028 (ATCC 6051)를 접종하여 25~35℃, pH5~7 를 유지하며 1~2일 동안 발효시키는 단계; 발효 후, 원심분리를 이용하여 발효된 배양액으로부터 발효균주를 제거하는 단계; 발효균주를 제거한 후, 발효된 배양액을 0.20~0.30μM 여과기로 1차 여과한 다음, 1차 여과액을 3~5℃ 저온 창고에서 9~11일 동안 숙성시키는 단계; 및, 숙성시킨 여과액을 0.20~0.30μM 여과기로 2차 여과하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 아멘토플라본의 추출방법에 관한 것으로, 부처손 및 측백나무를 혼합한 혼합물에 함유되어 있는 아멘토플라본을 에탄올 추출에 비해 높은 수율로 추출할 수 있다.

아멘토플라본, 에탄올 추출, 발효, 부처손, 측백나무, 화장료

Description

화장료 조성물의 성분으로 사용되는 아멘토플라본을 부처손 및 측백나무로부터 추출하는 방법{Extracting method of amentoflavone used as cosmetic component from Selaginella and Thuja orientali}

본 발명은 화장료 조성물의 성분으로 사용되는 아멘토플라본을 부처손 및 측백나무로부터 추출하는 방법으로, 부처손 및 측백나무로부터 추출되는 아멘토플라본의 양을 증가시킬 수 있는 방법에 관한 것이다.

부처손(Selaginella tamariscina)은 부처손과에 속하는 여러해살이풀로, 5∼20cm 내외로 자라고 밑에서 파생된 근경은 매우 단단하고 짧으며, 많은 수염뿌리가 난다. 줄기는 여러 갈래로 편평하게 갈라지고 앞면은 녹색, 뒷면은 백녹색을 띄며, 대체로 옆으로 퍼져 있으나 건조하면 주먹모양으로 오그라지기 때문에 생약명을 권백(Selaginellae Herba)이라고 한다.

부처손의 생약 성분에 대한 연구로는 오키가와(Okigawa) 등(Okigawa M. et al., Phytoche., 10, p286, 1971)이 아멘토플라본(amentoflavone), 히노키플라본 (hinokiflavone), 이소크리옵토메린(isocryoptomerin)을 분리하였고, 카리욘(Kariyone) 또한 아멘토플라본 및 소테츄플라본(sotetsuflavone)등을 분리한 바 있다. 그 중에서 아멘토플라본은 항산화 작용(Mora A. et al., Biochem. Pharmacol., 40(4), pp793-7, 1990), 림프구 증식(lymphocyte proliferation) 억제 작용(Lee SJ. et al., Life Sci., 57(6), pp551-558, 1995), 포스포리파아제(phospholipase) C-γ1 효소 활성 억제 작용(Lee HS. et al., Planta. Med., 62(4), pp293-296, 1996), 항-HIV 작용, 시클로옥시게나제(cyclooxygenase) 및 리폭시게나아제 (lipoxygenase)의 억제를 통한 항염증 작용(Kim HP. et al., Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids, 58(1), pp17-24, 1998), cAMP-인디에스테라제(cAMP-phosphodiesterase) 억제 작용, 바이러스에 대한 항생 작용, 항균 작용 등에 대해 연구되었다(Kim HK. et al., Arch. Pharm. Res., 21(4), pp406-410, 1998; Lin YM. et al., Planta. Med., 65(2), pp120-125, 1999; Krauze-Baranowska M. et al., Planta. Med., 65(6), pp572-573, 1999).

측백나무(Thuja orientalis)는 구과목 측백나무과 상록교목으로, 잎은 도란형 또는 난형이고 양면이 모두 녹색이거나 연한 황록색이다. 열매의 길이는 15∼20㎜으로 난형이고, 탈모방지, 발모촉진의 명약이라고 소개될 만큼 머리카락에 효과적이다. 수피 및 가지는 적갈색(대지) 또는 녹색(소지)이며, 수피는 회갈색으로 세로로 길게 갈라져 있다.

한편, 화장료 조성물 성분으로 부처손 추출물의 제조방법에 관한 내용이 대한민국 등록특허 10-0561036에 기재되어 있으나, 에탄올 추출을 통해 수득된 부처 손 추출물은 아멘토플라본의 함량이 낮은 문제점이 있다.

이에 본 발명은 화장료 조성물의 성분으로 사용되는 아멘토플라본의 추출 수율을 증대시킬 수 있는 방법을 제공하는데 그 목적이 있다.

상기의 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 부처손 및 측백나무를 혼합한 후 분쇄하여 분말을 수득하는 단계; 상기의 수득된 분말 0.8~1.2%(w/v)와 포도당 1~4%(w/v), 펩톤0.1~1%(w/v) 및 NaCl 0.1~1%(w/v)를 포함하는 배양액을 제조하는 단계; 상기 제조된 배양액에 바실러스 서브틸러스(Bacillus subtilis) KCTC 1028 (ATCC 6051)를 접종하여 25~35℃, pH5~7 를 유지하며 1~2일 동안 발효시키는 단계; 발효 후, 원심분리를 이용하여 발효된 배양액으로부터 발효균주를 제거하는 단계; 발효균주를 제거한 후, 발효된 배양액을 0.20~0.30μM 여과기로 1차 여과한 다음, 1차 여과액을 3~5℃ 저온 창고에서 9~11일 동안 숙성시키는 단계; 및, 숙성시킨 여과액을 0.20~0.30μM 여과기로 2차 여과하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 아멘토플라본의 추출방법을 제공한다.

이하 본 발명의 과제 해결 수단을 단계별로 나누어 상세히 설명하고자 한다.

단계 1; 부처손 및 측백나무를 혼합한 후 분쇄하여 분말을 수득하는 단계

본 단계 1은 부처손 및 측백나무를 혼합한 후 분쇄하여 분말을 수득하는 단계이다.

본 발명은 하기에서 부처손 및 측백나무를 혼합한 혼합물을 효율적으로 발효시키기 위해 분쇄하는데, 이때 수득된 분말은 바람직하게 250~350 메쉬도인 것이 좋다.

단계 2; 상기의 수득된 분말 0.8~1.2%(w/v)와 포도당 1~4%(w/v), 펩톤0.1~1%(w/v) 및 NaCl 0.1~1%(w/v)를 포함하는 배양액을 제조하는 단계

본 단계 2는 상기의 수득된 분말 0.8~1.2%(w/v)와 포도당 1~4%(w/v), 펩톤0.1~1%(w/v) 및 NaCl 0.1~1%(w/v)를 포함하는 배양액을 제조하는 단계이다.

본 발명은 부처손 및 측백나무의 혼합 분말을 발효균주를 이용하여 발효시킴으로써 아멘토플라본을 추출하는 것에 특징이 있는데, 발효균주의 원활한 배양을 위해 상기의 수득된 분말 0.8~1.2%(w/v)와 포도당 1~4%(w/v), 펩톤0.1~1%(w/v) 및 NaCl 0.1~1%(w/v)를 포함하는 배양액을 제조한다.

배양액에 상기 단계 1에서 수득된 분말이 0.8%(w/v)미만으로 첨가되는 경우에는 아멘토플라본의 추출량을 증가시키기 어렵고, 1.2%(w/v)을 초과하는 경우에는 재료 투입량 대비 효율성이 낮다.

배양액에 발효균주의 탄소원으로 사용될 수 있는 포도당을 1%(w/v) 미만으로 첨가하는 경우에는, 발효균주가 에너지원으로 사용할 수 있는 탄소원이 부족하기 때문에 효율적인 발효를 기대하기 어렵고, 4%(w/v)를 초과하여 첨가하는 경우에는, 재료 투입량 대비 효율성이 낮다.

배양액에 발효균주의 질소원으로 사용되는 펩톤을 0.1~1%(w/v) 첨가하는데, 펩톤의 한정된 첨가량 범위내에서 발효균주의 대사가 원활하기 때문에 발효 효율성이 높다. 또한, 배양액에 첨가되는 NaCl 0.1~1%(w/v)는 배양액의 적정 삼투압을 유지하여 발효균주의 원활한 대사를 돕는다.

단계 3; 상기 제조된 배양액에 바실러스 서브틸러스( Bacillus subtilis ) KCTC 1028 (ATCC 6051)를 접종하여 25~35℃, pH5~7를 유지하며 1~2일 동안 발효시키는 단계

본 단계 3은 상기 제조된 배양액에 바실러스 서브틸러스(Bacillus subtilis) KCTC 1028 (ATCC 6051)를 접종하여 25~35℃, pH5~7를 유지하며 1~2일 동안 발효시키는 단계이다.

본 발명은 발효균주로 바실러스 서브틸러스(Bacillus subtilis) KCTC 1028(ATCC 6051)를 이용하여 부처손 및 측백나무가 혼합된 분말을 발효시킴으로써 아멘토플라본을 추출하는데, 미생물의 발효를 통해 부처손 및 측백나무를 혼합한 분말로부터 아멘토플라본의 용출이 용이해져 기존의 에탄올 추출보다 아멘토플라본의 추출량이 약 3배 정도 증가한다.

발효는 1~2일 동안 25~35℃, pH5~7를 유지하며 수행하는데, 미생물의 발효 효율을 높일 수 있어 아멘토플라본의 추출양을 증가시킬 수 있기 때문이다.

단계 4; 발효 후, 원심분리를 이용하여 발효된 배양액으로부터 발효균주를 제거하는 단계

본 단계 4는 발효 후, 원심분리를 이용하여 발효된 배양액으로부터 발효균주를 제거하는 단계이다.

상기 단계 3에서 발효 후, 발효된 배양액으로부터 발효균주를 제거한다. 발효된 배양액으로부터 발효균주를 제거하는 방법으로는 원심분리를 이용하는데, 아멘토플라본의 손실이 적으면서 효과적으로 발효균주를 제거할 수 있기 때문이다

단계 5; 발효균주를 제거한 후, 발효된 배양액을 0.20~0.30μM 여과기로 1차 여과한 다음, 3~5℃ 저온 창고에서 9~11일 동안 숙성시키는 단계

본 단계 5는 발효균주를 제거한 후, 발효된 배양액을 0.20~0.30μM 여과기로 1차 여과한 다음, 3~5℃ 저온 창고에서 9~11일 동안 숙성시키는 단계이다.

본 발명은 0.20~0.30μM 여과기를 사용하여 발효된 배양액을 여과하는데, 발효된 배양액에 함유된 불순물을 효과적으로 제거할 수 있기 때문이다.

1차 여과를 한 다음, 1차 여과액을 3~5℃ 저온 창고에서 9~11일 동안 숙성시키는데, 1차 여과액을 안정화시키기 위함이다.

단계 6; 숙성시킨 여과액을 0.20~0.30μM 여과기로 2차 여과하는 단계

본 단계 6은 숙성시킨 여과액을 0.20~0.30μM 여과기로 2차 여과하는 단계이다.

한편, 2차 여과하는 단계 이후, 추가적으로 2차 여과액을 50~70℃로 유지하면서 감압농축 또는 동결건조를 통해 농축하는 단계;를 포함할 수 있는데, 2차 여과액에 함유된 아멘토플라본의 농도를 높이기 위해서이다.

상기에서 살펴본 바와 같이 본 발명은 부처손 및 측백나무를 혼합한 혼합물에 함유되어 있는 아멘토플라본을 에탄올 추출에 비해 높은 수율로 추출할 수 있다.

이하, 본 발명의 구성 및 작용에 대해 하기 실시예에서 더욱 상세히 설명하지만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에만 한정되는 것은 아니고, 이와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다.

실시예 1; 발효를 통해 부처손 및 측백나무 혼합물로부터 아멘토플라본 추출

물로 깨끗이 세척한 부처손 500g과 측백나무 500g을 브렌더(Blender)를 이용하여 수회 세절한 후, 300메쉬를 이용하여 분말화하였다. 수득된 분말 1%(w/v)와 포도당 3%(w/v), 펩톤 1%(w/v) 및 NaCl 1%(w/v)를 포함하는 배양액을 제조한 다음, 제조된 배양액에 바실러스 서브틸러스(Bacillus subtilis) KCTC 1028 (ATCC 6051)를 접종하여 2일 동안 30℃, pH 7을 유지하며 발효시켰다. 발효 후, 발효된 배양액 으로부터 발효균주를 원심분리를 통해 제거하였고, 발효된 배양액을 0.25μM 여과기로 1차 여과한 다음, 4℃ 저온 창고에서 10일 동안 숙성시켰다. 숙성시킨 여과액을 0.25μM 여과기로 2차 여과한 후, 농축조로 이송하여 60℃에서 감압농축한 다음 아멘토플라본을 함유하는 추출액을 수득하였다.

비교예 1; 에탄올 추출을 통해 아멘토플라본 추출

물로 깨끗이 세척한 부처손 500g과 측백나무 500g을 브렌더(Blender)를 이용하여 수회 세절한 후, 95%(v/v) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후 와트만(Whatman) #5 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압농축하여 아멘토플라본을 함유하는 추출액을 수득하였다.

실험예 1; 추출액에 함유된 아멘토플라본의 양 측정

상기 실시예 1 및 비교예 1에서 수득된 추출액을 HPLC를 이용하여 추출액에 함유된 아멘토플라본의 양을 측정하였다.

	실시예 1	비교예 1
아멘토플라본의 양(㎍/mL)	179.25421	68.64720

추출액에 함유된 아멘토플라본의 양을 측정한 결과(표 1), 실시예 1의 추출액에 함유된 아멘토플라본의 양은 179.25421㎍/mL, 비교예 1의 추출액에 함유된 아멘토플라본의 양은 68.64720㎍/mL로 실시예 1의 추출액에 함유된 아멘토플라본의 양이 비교예 1보다 약 3배 정도 많은 것으로 나타났다.

상기 결과로부터 본 발명의 아멘토플라본의 추출방법은 아멘토플라본의 추출량을 증가시킬 수 있다는 사실을 확인할 수 있었다.

Claims

부처손 및 측백나무를 혼합한 후 분쇄하여 분말을 수득하는 단계;

상기의 수득된 분말 0.8~1.2%(w/v)와 포도당 1~4%(w/v), 펩톤0.1~1%(w/v) 및 NaCl 0.1~1%(w/v)를 포함하는 배양액을 제조하는 단계;

상기 제조된 배양액에 바실러스 서브틸러스(Bacillus subtilis) KCTC 1028 (ATCC 6051)를 접종하여 25~35℃, pH5~7 를 유지하며 1~2일 동안 발효시키는 단계;

발효 후, 원심분리를 이용하여 발효된 배양액으로부터 발효균주를 제거하는 단계;

발효균주를 제거한 후, 발효된 배양액을 0.20~0.30μM 여과기로 1차 여과한 다음, 1차 여과액을 3~5℃ 저온 창고에서 9~11일 동안 숙성시키는 단계; 및,

숙성시킨 여과액을 0.20~0.30μM 여과기로 2차 여과하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 아멘토플라본의 추출방법
제1항에 있어서,

분말은,

250~350 메쉬도인 것을 특징으로 하는 아멘토플라본의 추출방법
제1항에 있어서,

2차 여과하는 단계 이후 추가적으로,

2차 여과액을 50~70℃로 유지하면서 감압농축 또는 동결건조를 통해 농축하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 아멘토플라본의 추출방법