KR20160121758A - 유자씨 유래 비당체 플라보노이드 함유 추출물의 제조방법 및 이를 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

유자씨 유래 비당체 플라보노이드 함유 추출물의 제조방법 및 이를 함유하는 화장료 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 국(麴)균을 사용하여 유자씨 유래 플라보노이드부터 글리코시드 잔사를 분리하여 비당체 플라보노이드를 함유하는 추출물을 제조하는 방법과 이를 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 방법에 따르면 효과적으로 유자씨 추출물에 함유된 배당체 플라보노이드로부터 비당체 플라보노이드를 생산할 수 있다. 이렇게 생산된 비당체 플라보노이드 함유 유자씨 추출물은 피부 미백 효과 및 피부 주름 개선 효과가 우수하여 화장료 조성물로 유용하다.

Description

유자씨 유래 비당체 플라보노이드 함유 추출물의 제조방법 및 이를 함유하는 화장료 조성물{PREPARATION METHOD OF EXTRACT COMPRISING FLAVONOID AGLYCONE DERIVED FROM CITRON SEED, AND COSMETIC COMPOSITION COMPRISING THE SAME}
본 발명은 국(麴)균을 사용하여 유자씨 유래 플라보노이드부터 글리코시드 잔사를 분리하여 비당체 플라보노이드를 함유하는 추출물을 제조하는 방법과 이를 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.
유자(Citrus junos SIEB ex TANAKA)는 분류학상 운향과, 감귤속, 후생감귤아속에 속하는 상록관목의 열매로서, 후생감귤아속 중에서도 오래된 과수로 알려져 있다. 일반적으로 황색의 숙성된 유자의 평균 크기는 종경 6~8 cm, 횡경 7~9 cm, 중량 80~150 g 정도로서, 수확시기는 11월에서 12월로 한정되어 있다.
소비형태는 대부분 생과로 이용되고, 저장성이 좋지 않아 대부분 수확 즉시 당절임하여 유자차의 원료로 주로 사용되고 있다. 유자는 비타민 C 및 A가 풍부할 뿐만 아니라, 유자의 주요 향기 성분이며 혈압 강하 및 항산화 작용을 지닌 리모넨(limonene), 유자의 주요 쓴맛 성분이지만 발암 억제 작용을 가진 리모노이드(limonoid) 계통의 화합물(limonin, nomilin), 항동맥 경화, 뇌졸중 예방에 효과가 있는 비타민 P의 활성물질인 헤스페리딘(hesperidin), 항산화 및 항균 작용이 알려진 나린진(naringin) 등 많은 기능성 성분을 함유하고 있다.
유자씨는 유자 중량의 10 내지 20 중량%를 차지하며, 바이오플라보노이드, 리모노이드 등의 유효성분이 풍부하고, 항산화성을 가진 물질도 함유하고 있어 다양한 기능성 소재로서의 개발이 가능하다. 그러나, 유자씨의 플라보노이드는 다량의 지질과 혼재되어 있을 뿐만 아니라 플라보노이드가 배당체 형태로 존재하여 특유한 쓴맛을 나타내어 식품에 사용하기는 어려운 점이 있어, 유자차 제조시 부산물로 대부분 사용되지 못하고 폐기되는 실정이다.
한편 유자씨 추출물을 피부개선용 화장료로 사용하려는 다양한 시도가 있었으나 유자씨 추출물의 배당체 플라보노이드는 비당체 형태인 것보다 분자량이 크고 소수성(hydrophobicity)이 낮아 피부에 스며들기 어려운 구조로 되어 있다. 유자씨의 배당체 플라보노이드로부터 비당체 플라보노이드를 제조하는 방법은 여러 가지가 있으나 산 가수분해는 산 조건하에 제조된 성분들의 변성 문제가 있어 사용하기 어려운 부분이 있다. 대한민국 등록특허 제10-1200716호에 기술한 바와 같이 각종 효소를 사용하는 방법이 있으나, 효소 사용에 따른 비용, 진한 색상, 효소제거의 문제 등 사용하는데에 여러 가지 어려움이 있다. 또 대부분의 상업용 효소는 유전자재조합에 의한 것이 많아 자연친화적인 화장품에 적용하기에 바람직하지 않다는 문제가 있다.
대한민국 등록특허 제10-1200716호
본 발명이 해결하고자 하는 과제는 유자씨에 함유된 배당체 플라보노이드인 헤스페리딘, 나린진으로부터 효과적이고 자연친화적인 방법으로 비당체 플라보노이드인 헤스페레틴, 나린제닌을 제조하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 과제는 유자씨 유래 비당체 플라보노이드인 헤스페레틴, 나린제닌을 함유하는 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
상기한 과제를 달성하기 위해 본 발명은
유자씨 추출물을 준비하는 단계(단계 1); 및
유자씨 추출물에 국균을 접종 및 배양하여 유자씨 추출물에 함유된 배당체 플라보노이드를 비당체 플라보노이드로 생산하는 단계(단계 2)
를 포함하는 유자씨 유래 비당체 플라보노이드 함유 추출물의 제조방법을 제공한다.
또한 본 발명은 유자씨 유래 비당체 플라보노이드 함유하는 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 유자씨 유래 비당체 플라보노이드 함유하는 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 방법에 따르면 효과적으로 유자씨 추출물에 함유된 배당체 플라보노이드로부터 비당체 플라보노이드를 생산할 수 있다. 이렇게 생산된 비당체 플라보노이드 함유 유자씨 추출물은 피부 미백 효과 및 피부 주름 개선 효과가 우수하여 화장료 조성물로 유용하다.
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 청주, 탁주 등을 만드는데 사용되는 한국의 전통 식재료인 국(麴)에 존재하는 균주를 이용하여 유자씨 추출물에 함유된 배당체 플라보노이드를 비당체 플라보노이드로 생산하는 방법을 제시한다.
본 발명의 유자씨 유래 비당체 플라보노이드 함유 추출물의 제조방법은,
유자씨 추출물을 준비하는 단계(단계 1); 및
유자씨 추출물에 국균을 접종 및 배양하여 유자씨 추출물에 함유된 배당체 플라보노이드를 비당체 플라보노이드로 생산하는 단계(단계 2)
를 포함한다.
먼저, 유자씨 추출물을 준비한다.
유자씨 추출물은 유자씨를 분쇄하고 고압으로 압착하는 저온압착(cold press) 방법이나 알코올 등의 유기용매를 이용하여 추출한 후 유기용매를 증류시키는 유기용매 추출법 등 통상의 추출법으로 제조할 수 있다. 유자씨 추출물의 조성은 통상 수분 4-5%. 조단백 3-6%, 조지방 30-35%, 탄수화물 7-10%, 회분 2-3%의 일반 성분으로 구성된다.
바람직하기로, 유자씨 추출물은 유자씨에 유기용매를 첨가하여 지질을 추출하는 단계와 얻어진 잔류물에 알코올을 첨가하여 배당체 플라보노이드를 포함하는 유자씨 추출물을 얻는 단계를 거쳐 얻는다.
유자씨에는 건조중량당 약 30% 이상 지질 성분이 존재하며 유자씨를 이용하기 위해서는 이들의 분리가 필요하다. 이를 위해, 유자씨를 건조, 마쇄한 후 3~5배 중량의 유기용매를 첨가하여, 지질을 추출한다.
이때 유기용매는 지질을 용해시킬 수 있는 것이라면 본 발명에서 제한 없이 사용할 수 있다. 일예로, 헥산, 에틸 아세테이트, 석유 에테르, 클로로포름 등이 가능하다. 이어서, 얻어진 잔류물에 알코올을 첨가하여 플라보노이드를 추출한다.
추출된 지질을 포함하고 있는 유기용매를 제거한 후, 잔류물에 5~10배 중량의 알코올을 첨가하여 배당체 플라보노이드를 함유하는 유자씨 추출물을 얻는다.
상기 알코올은 알코올은 바람직하기로, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군에서 선택된 1종을 사용한다.
다음으로, 유자씨 추출물에 국균을 접종 및 배양하여 유자씨 추출물에 함유된 배당체 플라보노이드를 비당체 플라보노이드로 생산한다.
청주, 탁주 등을 만드는데 사용되는 한국의 전통 식재료인 국(麴)에 존재하는 국균들로부터 배당체 플라보노이드의 글리코시드 잔사를 분리하여 비당체 플라보노이드를 생산한다.
이때 상기 국균은 아스퍼질러스 오리재(Aspergillus oryzae) 또는 아스퍼질러스 니거(Aspergillus niger)이다.
비당체 플라보노이드를 함유한 유자씨 추출물 제조를 위해서는 유자씨 추출물에 10~100 wt% 양의 물을 첨가하고 멸균한 후 이를 단독 기질로 사용하여 상기 국균을 배양하여 사용할 수 있다. 또한 물이 첨가된 유자씨 추출물에 탄소원을 0.05~5 wt% 첨가하고 무기 질소원 또는 유기질소원을 0.01~1 wt% 첨가한 다음 상기 국균을 배양하여 사용할 수 있다. 이때 탄소원은 포도당, 말토오스, 덱스트린 등 저분자 당이 적당하며 질소원으로서는 무기 질소원인 NaNO3, NH4NO3, (NH4)2SO4 등과 유기 질소원인 효모 추출물(yeast extract), 펩톤, 콩 추출물(soy extract) 등을 단독 또는 혼합하여 사용할 수 있다.
배양 조건은 24~32℃, 바람직하게는 28℃에서 배양하며, 국균의 양은 배양 액량의 0.1~20 wt%에서 적정하게 사용할 수 있다. 액상 발효기(fermentor)에서의 통기, 교반 등 배양조건은 통상의 배양조건을 사용하여 배양할 수 있다.
상기조건에 의해서 배양시에, 2~10일간 배양할 수 있으나 통상 2~4일이면 충분하다.
배양액은 철망(mesh), 여과포 등 침전되는 비당체 플라보노이드가 잘 통과할 수 있는 정도의 여과장치를 통하여 여과함으로써 균사체를 제거한다. 여과액은 다시 원심분리 또는 미세 여과막을 사용하여 침전물인 비당체 플라보노이드를 회수한다. 침전물은 원심분리 또는 미세 여과막을 사용하여 물로 세척하여 비당체 플라보노이드의 순도를 올릴 수 있다.
본 발명의 제조방법에 따르면, 고가의 효소를 다량 사용하는 것에 비해 소량의 종균을 배양하여 증식시킴으로써 효과를 낼 수 있다. 또한 통상 효소반응온도인 50~60℃ 에 비해 낮은 배양온도인 28℃에서 이루어지므로 에너지 소비가 적고, 상용 효소의 진한 색상을 회피할 수 있다. 뿐만 아니라 대부분의 상업용 효소는 유전자재조합에 의한 것이 많아 자연친화적인 화장품에 적용하기에 바람직하지 않는 것과 달리 전통 국균을 사용한 발효법으로 자연친화적인 방법으로 제조할 수 있다는 장점이 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 더욱 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
실시예 1
효소인 나린지나제(naringinase, 일본)과 국균 배양에 의한 비당체 플라보노이드 생성을 비교하였다.
유자씨 1000g을 열풍건조기에서 40℃로 건조하여 시료로 사용하였다. 지질을 제거하기 위하여 4배 중량의 헥산(n-hexane)을 처리하여 상온에서 48시간 동안 침적하고, 헥산층을 제거한 후 잔여물에 7 배 중량의 95% 에탄올(ethanol)을 24시간 동안 처리하여 유자씨 추출물을 얻었다.
유자씨 추출물 1kg에 1000ml의 물을 첨가한 것을 기질로 사용하여 효소인 나린지나제를 기질과 동량으로 55℃ 및 28℃에서 각각 반응하여 배당체 플라보노이드의 변화를 확인하였다. 별도로 국균인 아스퍼질러스 오지재(Aspergillus oryzae)를 접종하여 28℃에서 배양한 후 배당체 플라보노이드의 변화를 확인하였다.
반응 및 배양은 5L 발효조를 이용하여 진행하였으며, 효소반응에는 200rpm으로 교반하였고, 균 배양시에는 교반 300rpm, 통기 0.5 vvm의 조건으로 배양하였다. 비당체 플라보노이드 생성율은 초기 배당체 플라보노이드(나린진, 헤스페리딘)의 변화를 백분율(%)로 나타내었으며, 변화된 배당체 플라보노이드는 비당체 플라보노이드(나린제닌, 헤스페레틴)로 전환되었음은 별도로 확인하였다. 플라보노이드의 측정은 다음과 같은 HPLC 조건으로 분석하였다. 그 결과는 아래 표 2 및 표 3에 나타내었다.
* HPLC 조건
HPLC : Water 510 칼럼 : Optimapak C18(4.6*250mm, 5um)
Detector : UV(210nm) 온도 : 30℃ 유속 및 이동상 : Gradient
시간
(분)		 유속
(ml/min)		 이동상(A)
40% MeOH(3mM 인산)		 이동상(B)
48% MeOH(3mM 인산)
0 1.2 100 0
20 1.2 100 0
25 1.2 30 70
30 0.9 0 100
60 0.8 0 100
처리군 조건
(효소농도:
wt%)		 온도
(℃)		 반응시간 (hr)에 따른 나린진 성분변화(%)
0 6 12 24 48
효소처리
(naringinase)		 0.01% 55 100 76.5 36.4 21.8 15.9
0.1% 55 100 40.1 8.5 3.2 2.5
0.1% 28 100 66.4 21.3 8.5 3.9
균 발효 - 28 100 79.2 37.6 3.9 1.3
처리군 조건
(효소농도:
wt%)		 온도
(℃)		 반응시간 (hr)에 따른 헤스페리딘 성분변화(%)
0 6 12 24 48
효소처리
(naringinase)		 0.01% 55 100 77.6 38.0 23.8 18.2
0.1% 55 100 40.0 9.3 3.8 2.7
0.1% 28 100 68.9 25.3 8.9 4.3
균 발효 - 28 100 80.7 39.8 4.1 2.0
상기 표 2 및 표 3에 나타난 바와 같이, 효소반응에 의한 배당체 플라보노이드(나린진, 헤스페리딘)의 변화는 고온에서 빨리 진행되며 저온에서는 속도가 늦었지만 농도에 따른 최종 반응률을 나타내었다. 반면 균주배양에 의한 배당체 플라보노이드(나린진, 헤스페리딘)의 변화는 균주의 성장조건인 저온에서 효소반응에 비해 높은 생성률을 나타내었으며 최종 반응률은 효소처리시의 동등 이상이었다.
실시예 2
효소인 나린지나제(naringinase, 일본)와 싸이톨라제(cytolase, 네덜란드)를 동량 혼합한 효소와 국균 배양에 의한 비당체 플라보노이드 생성을 비교 하였다. 유자씨 추출물 1kg에 1000ml의 물을 첨가한 것을 기질로 사용하여 효소인 나린지나제를 기질과 동량으로 55℃ 및 28℃에서 각각 반응하여 배당체 플라보노이드의 변화를 확인하였다.
별도로 상기 기질에 포도당 0.2 wt%와 NaNO3 0.05 wt%를 투여하고 국균인 아스퍼질러스 니거(Aspergillus niger)를 접종하여 28℃에서 배양한 후 배당체 플라보노이드의 변화를 확인하였다. 배양한 후 80 메쉬의 여과망을 통해 균사체를 제거하고 여과액을 회수한 후, 다시 원심분리하여 침전물을 회수하였다. 침전물은 물로 세척하고 동결건조하였다. 회수한 건조물의 비당체 플라보노이드 함량 80.5% 이었다. 그 결과는 아래 표 4 및 표 5에 나타내었다.
처리군 조건
(효소농도:
wt%)		 온도
(℃)		 반응시간 (hr)에 따른 나린진 성분변화(%)
0 6 12 24 48
효소처리
(naringinase)		 0.01% 55 100 70.7 31.4 15.2 9.6
0.1% 55 100 36.1 7.8 3.0 2.0
0.1% 28 100 60.9 18.7 8.0 3.8
균 발효 - 28 100 76.8 30.2 3.2 0.4
처리군 조건
(효소농도:
wt%)		 온도
(℃)		 반응시간 (hr)에 따른 헤스페리딘 성분변화(%)
0 6 12 24 48
효소처리
(naringinase)		 0.01% 55 100 71.2 31.5 16.3 9.9
0.1% 55 100 37.9 9.9 3.5 1.9
0.1% 28 100 63.0 19.0 8.5 3.9
균 발효 - 28 100 77.4 29.3 3.3 0.4
표 4 및 표 5에서 보듯이, 실시예 1과 같이 효소반응에 의한 배당체 플라보노이드(나린진, 헤스페리딘)의 변화는 고온에서 빨리 진행되며 저온에서는 속도가 늦은 반면 농도에 따른 최종 반응률을 나타내었다. 반면 균주배양에 의한 배당체 플라보노이드(나린진, 헤스페리딘)의 변화는 균주의 성장조건인 저온에서 효소반응에 비해 높은 생성률을 나타내었으며 최종 반응률은 효소처리시보다 우수하였다. 이는 반응시간에 따라 효소는 실활되는 반면 균배양시 균체증가에 따라 활성이 증가하기 때문으로 판단되었다.
시험예 1: 시료의 미백 효능 측정
악성흑색종 세포(B16 melanoma) 1 X 105을 10cm 접시에 분주한 후, 세포가 바닥에 부착될 때까지 37 ℃ 배양기에서 배양하였다. 10% 우태아혈청(FBS), 2uM 알파-멜라신 세포 자극 호르몬(alpha-melanocyte stimulating hormone), 2mM 테오필린이 함유된 DMEM 배양액과 실시예 2에서 회수한 건조물을 1, 5, 10mg/ml의 농도로 혼합하여 세포가 접시에 80% 정도 차지할 때까지 배양하였다. 세포를 PBS로 5회 세척한 후 트립신을 이용하여 세포를 수거하였다. 수거된 세포는 PBS로 3회 세척한 후 0.1% 트리톤 X-100 세제를 이용하여 세포 용해물(cell lysate)을 확보하였다. 티로시나아제가 함유된 세포 용해물 20ul에 0.1M 포스페이트 완충액 220ul와 1.5mM 티로신 용액 40ul를 첨가한 후, UV 흡광도 490nm에서 티로시나아제 억제 효능을 기존 미백 효능 물질인 비타민 C를 양성 대조군으로 사용하여 측정하였다. 그 결과는 표 6에 나타내었다.
시료농도(w/v%) 실시예 2 대조군(비타민 C) 무처리
1×10-5 0.9 0.5 0
1×10-4 5.5 2.1 0
1×10-3 14.5 11.4 0
1×10-2 40.2 39.0 0
1×10-1 40.1 28.2 0
상기 표 6에서 알 수 있는 바와 같이, 무처리군과 비교하여 유자씨 유래 비당체 플라보노이드를 함유한 추출물을 처리한 세포는 최고 약 40.2% 정도의 티로시나아제 저해효과를 보이였으며, 양성 대조군인 비타민C 보다 다소 높은 결과를 나타내었다.
시험예 2: 섬유아세포의 콜라겐 합성정도의 측정
인체 섬유아세포를 24공 평판배양기에 배양한 후, 시험예 1과 동일한 시료를 사용하여 배양배지에 1/10씩 순차적으로 희석하여 첨가하였다. 배양 3일째 10%의 우태아 혈청이 함유된 DMEM배지를 각 웰당 0.5㎖씩 첨가한 후 L[2, 3, 4, 5-3H]-프롤린 10μCi를 첨가하였다. 24시간 후 각 웰에 들어있는 배지와 세포들을 긁어모아 5% 트리클로로아세틱엑씨드(TCA; Trichloroacetic acid) 용액에 넣어 수세한 후 2개의 시험관에 분주하고, 1개의 시험관에는 타입 I 콜라게나제(type I collagenase) 1unit/㎕를 넣고 37℃ 온도에서 90분간 배양하였으며, 다른 시험관은 4℃에서 보관하였다. 그 후 모든 시험관에 50% TCA를 0.05㎖씩 첨가하고 4℃에서 20분간 방치한 후 각각 12,000rpm에서 10분간 원심분리하여 각각의 상등액과 침전물을 액체 신틸레이션 계수기(LSC; Liquid Scintillation Counter)로 디피엠(dpm; decay per minute) 값을 얻어 하기 수학식 1에 의거하여 콜라겐 생합성 값(RCB; Relative Collagen Biosynthesis)을 구하고, 그 결과를 하기 표 7에 나타내었다.
Figure pat00001
시료농도(w/v%) 시료 대조군(비타민 C) 무처리
1× 10-5 1.0 0.8 0
1 × 10-4 8.2 8.3 0
1 × 10-3 20.8 22.5 0
1 × 10-2 33.2 32.0 0
1×10-1 32.5 24.8 0
상기 표 7에서 알 수 있는 바와 같이, 무처리군과 비교하여 유자씨 유래 비당체 플라보노이드를 함유한 추출물을 처리한 섬유아세포는 최고 약 33.2% 정도의 콜라겐 합성증가를 보이였으며, 양성 대조군인 비타민C 보다 다소 높은 결과를 나타내었다.
이하, 본 발명의 제형예로서 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 및 팩을 예시하고 있으나, 본 발명의 화장료 조성물의 제형은 이에 제한되는 것은 아니다.
제형예 1: 유연화장수(스킨로션)
하기의 표 8과 같이 실시예 2의 유자씨 유래 비당체 플로보노이드 함유 추출물을 함유하는 영양화장수를 통상의 방법에 따라 제조하였다.
배합성분 중량%
실시예 2의 유자씨 유래 비당체 플로보노이드 함유 추출물 1.0
글리세린 3.0
부틸렌글리콜 2.0
프로필렌글리콜 2.0
카르복시비닐폴리머 0.1
피이지-12 노닐페닐에테르 0.2
폴리솔베이트 80 0.4
에탄올 10.0
트리에탄올아민 0.1
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 to 100
제형예 2: 영양화장수( 밀크로션 )
하기의 표 9와 같이 실시예 2의 유자씨 유래 비당체 플로보노이드 함유 추출물을 함유하는 유연화장수를 통상의 방법에 따라 제조하였다.
배합성분 중량%
실시예 2의 유자씨 유래 비당체 플로보노이드 함유 추출물 1.0
스쿠알란 4.0
밀납 4.0
폴리솔베이트 60 1.5
솔비탄세스퀴올레이트 1.5
유동파라핀 0.5
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 5.0
글리세린 3.0
부틸렌글리콜 3.0
프로필렌글리콜 3.0
카르복시비닐폴리머 0.1
트리에탄올아민 0.2
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 to 100
제형예 3: 영양크림
하기의 표 10과 같이 실시예 2의 유자씨 유래 비당체 플로보노이드 함유 추출물을 함유하는 영양크림을 통상의 방법에 따라 제조하였다.
배합성분 중량%
실시예 2의 유자씨 유래 비당체 플로보노이드 함유 추출물 1.0
밀납 10.0
폴리솔베이트 60 1.5
피이지 60 경화피마자유 2.0
솔비탄세스퀴올레이트 0.5
유동파라핀 10.0
스쿠알란 5.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 4.0
글리세린 5.0
부틸렌글리콜 3.0
프로필렌글리콜 3.0
트리에탄올아민 0.2
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 to 100
제형예 4: 팩
하기의 표 11과 같이 실시예 2의 유자씨 유래 비당체 플로보노이드 함유 추출물을 함유하는 팩을 통상의 방법에 따라 제조하였다.
배합성분 중량%
실시예 2의 유자씨 유래 비당체 플로보노이드 함유 추출물 1.0
폴리비닐알콜 12.0
소듐카르복시메틸셀룰로오스 0.2
글리세린 5.0
알란토인 0.1
에탄올 6.0
핑지-12 노닐페닐에테르 0.3
폴리솔베이트 60 0.3
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 to 100

Claims (8)

  1. 유자씨 추출물을 준비하는 단계(단계 1); 및
    유자씨 추출물에 국균을 접종 및 배양하여 유자씨 추출물에 함유된 배당체 플라보노이드를 비당체 플라보노이드로 생산하는 단계(단계 2)
    를 포함하는 유자씨 유래 비당체 플라보노이드 함유 추출물의 제조방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 유자씨 추출물은
    유자씨에 유기용매를 첨가하여 지질을 추출하는 단계와
    얻어진 잔류물에 알코올을 첨가하여 배당체 플라보노이드를 포함하는 유자씨 추출물을 얻는 단계를 거쳐 제조되는 것을 특징으로 하는 제조방법.
  3. 제1항에 있어서, 상기 국균은
    아스퍼질러스 오리재(Aspergillus oryzae) 또는 아스퍼질러스 니거(Aspergillus niger)인 것을 특징으로 하는 제조방법.
  4. 제1항에 있어서, 상기 비당체 플라보노이드는
    헤스페레틴 또는 나린제닌을 포함하는 것을 특징으로 하는 제조방법.
  5. 제1항에 있어서, 상기 단계 2에서 얻은 배양액을 여과하여 여과액을 회수하고, 회수한 여과액 중 침전물을 회수하는 단계(단계 3)을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 제조방법.
  6. 유자씨 유래 비당체 플라보노이드 함유하는 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물.
  7. 유자씨 유래 비당체 플라보노이드 함유하는 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
  8. 제6항 또는 제7항에 있어서, 상기 비당체 플라보노이드는
    헤스페레틴 또는 나린제닌을 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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KR20190112879A (ko) * 2018-03-26 2019-10-08 (주) 비에스티 유자 씨앗 배아 발효 성분에 기초하는 천연미백제의 제조방법
KR102411718B1 (ko) 2022-04-12 2022-06-22 주식회사 서울화장품 유자씨 추출물의 제조방법 및 이를 함유하는 화장료 조성물

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101200716B1 (ko) 2010-07-06 2012-11-15 한양대학교 에리카산학협력단 유자씨 유래 플라보노이드 포접체, 이의 제조방법 및 이의 용도

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101200716B1 (ko) 2010-07-06 2012-11-15 한양대학교 에리카산학협력단 유자씨 유래 플라보노이드 포접체, 이의 제조방법 및 이의 용도

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20190112879A (ko) * 2018-03-26 2019-10-08 (주) 비에스티 유자 씨앗 배아 발효 성분에 기초하는 천연미백제의 제조방법
KR102411718B1 (ko) 2022-04-12 2022-06-22 주식회사 서울화장품 유자씨 추출물의 제조방법 및 이를 함유하는 화장료 조성물

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